JP4829609B2 - ヒト抗体酵素およびその生産方法 - Google Patents
ヒト抗体酵素およびその生産方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4829609B2 JP4829609B2 JP2005370880A JP2005370880A JP4829609B2 JP 4829609 B2 JP4829609 B2 JP 4829609B2 JP 2005370880 A JP2005370880 A JP 2005370880A JP 2005370880 A JP2005370880 A JP 2005370880A JP 4829609 B2 JP4829609 B2 JP 4829609B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- human
- antibody
- residue
- amino acid
- germline
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明はヒト抗体酵素を提供するものである。抗体酵素とは、目的の抗原に対して特異的に抗原抗体反応し、かつ酵素活性を有する免疫グロブリンである。なお、抗体は完全な抗体分子に限定されるものではなく、抗原に特異的に結合することができ、かつ酵素活性を有する抗体フラグメント(例えば、軽鎖、重鎖、軽鎖可変領域、重鎖可変領域、Fabフラグメント、F(ab’)2フラグメントなど)でもよい。また、酵素活性は特に限定されるものではないが、プロテアーゼ活性またはペプチダーゼ活性であることが好ましい。
上記本発明のヒト抗体酵素は、例えば以下のようにして作製することができる。ただし以下に例示する方法に限定されるものではない。なお、核酸の抽出、切断、連結、大腸菌の形質転換、遺伝子の塩基配列決定等、一般の遺伝子組換えに必要な方法は、公知の実験書(例えば「Molecular Cloning, a Laboratory Manual, 3rd Ed(Sambrookら(2001), Cold Spring Harbor Laboratory Press)」)に記載されている方法を適宜選択して用いることができる。
(a)ヒト生殖細胞系列抗体V遺伝子のリーダー配列中に存在するサブグループ特異的配列に基づくプライマーを用いて、ヒトリンパ球由来のcDNAを鋳型とする核酸増幅反応を行う工程(以下「核酸増幅工程」と称する。)
(b)上記核酸増幅工程で増幅されたcDNAの塩基配列を決定し、塩基配列に基づいて酵素活性を有するポリペプチドをコードするcDNAを選択する工程(以下「選択工程」と称する。)
(c)上記選択工程で選択されたcDNAがコードするポリペプチドを発現させる工程(以下「発現工程」と称する。)
上記(a)核酸増幅工程において用いるプライマーの設計は、ヒト生殖細胞系列抗体V遺伝子のリーダー配列を比較してサブグループ特異的配列を見出し、当該サブグループ特異的配列を有するようにプライマーを設計すればよい。具体的には、例えばヒトgermlinekappa鎖V遺伝子のリーダー配列を図17に示すように比較する。サブグループVkappa1(VK1)の012(最上列)の塩基配列を基準に比較すると、サブグループVkappa2(VK2)では−31位〜−25位および−18位〜−12位の範囲にサブグループ特異的配列が見出される。また、サブグループVkappa3(VK3)では−57位〜−46位および−40位〜−34位の範囲にサブグループ特異的配列が見出される。サブグループVkappa4(VK4)、Vkappa5(VK5)およびVkappa6(VK6)では、比較した全範囲に広く特異的配列が見出される。
上記本発明のヒト抗体酵素は、抗体の特異性の高い基質認識能と酵素活性とを併せ持つものである。また、ヒト由来であるため、ヒトに投与した場合でも異種タンパク質として免疫系により排除されず、安全かつ有効にヒトに適用できる。このため、例えば、細菌やウイルスが生体内に侵入し引き起こされる感染症等に対して、これらの原因となる細菌やウイルスに特異的なヒト抗体酵素を取得又は作製することにより、当該ヒト抗体酵素を診断や治療に用いることができると考えられる。また、例えば、癌に対しても、癌細胞に特異的に発現するタンパク質やポリペプチド等を特異的に認識するヒト抗体酵素を取得又は作製することにより、当該ヒト抗体酵素を用いて癌を診断、治療することが可能である。
(1)方法
抗体V領域germlineにコードされているS−H−D三つ組み残基様構造を探索するため、コンピューター上で擬似抗体を作製した。
NCBI IgBLASTに登録されているヒトgermline計126種のアミノ酸配列に基づき、そのうちHisをコードするgermline64種についてAbMおよびInsightII/Discover3により疑似抗体の立体構造を予測した。その結果、56種の疑似抗体立体構造を予測出来た(表1参照)。残り8種は全てlambda鎖germlineのV4−2、V4−3、V4−4、V4−6、V5−1、V5−2、V5−4およびV5−6の疑似抗体であり、全てでFWR3領域が長いためAbMでの立体構造予測計算が不能であった。
NCBI IgBLASTに登録されているVlambda鎖germlineの総数は36種であった。これらの予測立体構造でのS−H−D三つ組み残基様構造の有無について分類した(表1参照)。その結果、Vlambda鎖germline36種中、予測立体構造でS−H−D三つ組み残基様構造が見られたgermlineはV1−9、V1−13、V1−18、V1−22、V2−6、V2−7、V2−8、V2−13、V2−14およびV3−3の10種であった。これらの予測立体構造を図1(a)〜(j)に示した。
NCBI IgBLASTに登録されているVkappa鎖germlineの総数は46種であった。これらの予測立体構造でのS−H−D三つ組み残基様構造の有無について分類した(表1参照)。その結果、Vkappa鎖germline46種中、予測立体構造でS−H−D三つ組み残基様構造が見られたgermlineはA1、A2、A3、A5、A7、A10、A17、A18、A19、A23、A26、A30、L14およびL22の14種であった。なお、A3とA19、A10とA26はそれぞれ同じアミノ酸配列をコードする重複遺伝子であった。これらの予測立体構造を図2(a)〜(l)に示した。
NCBI IgBLASTに登録されているVH鎖germlineの総数は44種であった。これらの予測立体構造でのS−H−D三つ組み残基様構造の有無について分類した(表1参照)。その結果、VH鎖germline44種中、予測立体構造でS−H−D三つ組み残基様構造が見られたgermlineはVH1−24、VH3−9、VH3−13、VH3−16、VH3−20、VH3−30、VH3−33、VH3−35、VH3−43、VH3−64、VH3−72、VH3−73、VH3−74、VH4−34およびVH7−81の15種であった。これらの予測立体構造を図3(a)〜(o)に示した。
上述のように、NCBI IgBLASTに登録されているVlambda鎖germline36種中、予測立体構造でS−H−D三つ組み残基様構造が見られたgermlineは10種であった。これら10種での共通配列を見出すため、S−H−D三つ組み残基様構造を持つVlambda鎖germlineのアミノ酸配列を比較した。
S−H−D三つ組み残基様構造をコードするgermlineの1つであるV1−13はサブグループVL1に属しており、またサブグループVL1に属するgermlineのなかでは、V1−13およびV1−18がS−H−D三つ組み残基様構造をコードしていた。そこで、サブグループVL1に属するgermlineを比較した。
S−H−D三つ組み残基様構造をコードするV2−6、V2−7、V2−8、V2−13およびV2−14はサブグループVL3に属している。変異によりサブグループVL3がS−H−D三つ組み残基様構造を獲得するかを推測するため、サブグループVL3に属するgermlineを比較した。
上述のように、NCBI IgBLASTに登録されているVkappa鎖germline46種中、予測立体構造でS−H−D三つ組み残基様構造が見られたgermlineは14種であった。これら14種での共通配列を見出すため、S−H−D三つ組み残基様構造を持つVlambda鎖germlineのアミノ酸配列を比較した。
S−H−D三つ組み残基様構造をコードするgermlineであるA30、L22およびL14はサブグループVK1に属している。変異によりサブグループVK1がS−H−D三つ組み残基様構造を獲得するかを推測するため、サブグループVK1に属するgermlineを比較した。
VKgermlineでS−H−D三つ組み残基様構造を持つgermlineの多くがサブグループVK2に属していた。変異によりサブグループVK2がS−H−D三つ組み残基様構造を獲得するかを推測するため、サブグループVK2に属するgermlineを比較した。
上述のように、NCBI IgBLASTに登録されているVH鎖germline44種中、予測立体構造でS−H−D三つ組み残基様構造が見られたgermlineは15種であった。これら15種での共通配列を見出すため、S−H−D三つ組み残基様構造を持つVH鎖germlineのアミノ酸配列を比較した。
S−H−D三つ組み残基様構造を持つVH鎖germlineの15種中12種がサブグループVH3に属していた。変異によりサブグループVH3がS−H−D三つ組み残基様構造を獲得するかを推測するため、サブグループVH3に属するgermlineを比較した。
(1)方法
(i)ヒト末梢血由来白血球サンプルの調製
白血球サンプルは健常被験者の末梢血より調製した。1mg/mlのEDTA-2Na(WAKO社)を加えて抗凝固処理した全血サンプル20mlに等量の緩衝溶液(0.1% D-glucose, 50μM CaCl2, 980μM MgCl2, 5.4mM KCl, 145mM Tris, pH=7.6 by 10N HClおよび140mM NaCl(いずれもWAKO社)を混合したもの)を加えた。あらかじめ分注しておいた3ml Ficoll-Paque Reagent(Amersham Biosciences社)の上部にこのサンプル溶液4mlを重層し、400×g、18〜20℃で30分〜40分間遠心した。リンパ球層のみを取り出し、前述の緩衝溶液で2回洗浄したペレットを白血球サンプルとして用いた。
RNA抽出はISOGEN kit(ISOGEN社)を用いてすべてRNase-freeの条件下で行った。得られた白血球サンプルに対して1mlのISOGEN solutionを添加し、シリンジを用いたピペッティングにより細胞を破砕した。室温に5分間放置後、0.2mlのクロロフォルム溶液(WAKO社)を加え12000×g、4℃で15分間遠心分離を行った。得られた水層に対し0.5ml Isopropanol(WAKO社)を添加し、12000×g、4℃で10分間遠心後、得られたペレットをtotal RNAサンプルとして用いた。
末梢血リンパ球由来λ鎖cDNAライブラリーの作成はReverTra DashTM (TOYOBO社)を用いてRNase-freeの条件下で行った。白血球由来total RNAサンプル1μgに対して5×RT buffer 4μl、10pmol/μl Oligo(dT)20 primer 1.0μl、10mM each dNTP mixture 2.0μl、10U/μl RNase inhibitor 1.0μl、Rever Tra AceTM1.0μlを混合し、TaKaRa社のサーマルサイクラーを用いて42℃で20分間逆転写反応を行いcDNAを合成した。つぎにこのcDNAサンプル全量に対してNovagen社のHuman Igλ VL 5’-A primer(5’-GGGAATTCATCATGRCCTGSWCYCCTCTCYTYCTSWYC-3’、配列番号11)、Igλ VL 3’-1 primer(5’-CCCCAAGCTTGAAGCTCCTCAGAGGAGGG-3’、 配列番号12)およびNovaTaqTMHot Start DNA Polymeraseを用いたPCR反応を行った。反応条件は次のとおりである;94℃/10分間の活性化に引き続いて94℃/15秒、69℃/2分間を40サイクルで行った。増幅産物はInvitrogen社のTOPO-TA cloning kitを用いてpCR4-TOPO vectorにcloningし、ライブラリーとした。
はじめにgermline V1-13のアミノ酸配列とこの系列に属する他の抗体の配列を比較し、V1-13 抗体において比較的有意に存在する箇所を検索した(図12参照)。次にこの箇所に由来するcDNAに基づくプライマーをsense鎖(5’-GSITMYGAYGTICAYTGGTA-3’、配列番号13)、anti-sense鎖(5’-IYGRTACCARTGIACRTCRKA-3’、配列番号14)の2通り合成した。続いて上記Novagen社のIgλ VL 5’-A primerとanti-sense鎖primer間、sense鎖primerと上記Novagen社のIgλ VL 3’-1 primer間でそれぞれPlatinum Taq Pfx Taq polymerase(Invotrogen社)を用いたPCR反応を行い目的とするgerm line cDNA領域の一部を合成した。最後にこれら2つのDNAフラグメントを混合した状態でPlatinum Taq Pfx Taq polymerase(Invotrogen社)を用いたPCR反応を行い、cDNA全長を得た。反応条件は次のとおりである。94℃/2分間の活性化に引き続いて94℃/20秒、57℃/30秒、68℃/1分を30サイクル行い、最後に72℃/5分間の反応を行った。増幅産物は2% agarose電気泳動でバンドを確認後、Zero Blunt TOPO PCR cloning kit(Invotrogen社)を用いてpCR-BluntII-TOPO vectorにcloningした。
得られたPCR産物の塩基配列解析はLong-Read Tower(Amersham Bioscience社)を用いて行った。Thermo Sequenase Cy5.5 Dye Terminator Sequencing kitを用いて得られたplasmid DNA 1.0μgに対してM13 primerを用いた反応を行った。反応条件は次のとおりである;94℃/20秒、52℃/30秒、72℃/1分を30サイクル行った。反応後はエタノール沈殿より増幅産物を回収し、このペレットをFormamide loading dye溶液6μlに溶解後2μlシークエンスゲルにアプライした。
得られたcDNAに由来するタンパク質の合成はPURESYSTEM classicII(Postgenome社)を用いて行った。まず、全長として得られたcDNAには非翻訳領域が含まれているため、このcDNAの再構成を行った。抗体分子の5’側(N末端側)に翻訳領域の一部と開始コドン(Met)とRBS配列を含んだprimer(5’-AAGGAGATATACCAATGCAGTCTGTGCTGACG-3’、配列番号15)を、さらに3’側(C末側)に翻訳領域の一部と終止コドンを含んだprimer(5’-TATTCATTAGGGCTGACCTAGGACGGTGACCT-3’、配列番号16)を設計し、Platinum Taq Pfx Taq polymerase(Invotrogen社)を用いたPCR反応を行った。次にこのPCR産物 20pmol分をPURESYSTEM Solution A 500μl、PURESYSTEM Solution B 200μlと混合し、RNase-free waterで全量を1000μlとした後、37℃で4時間反応した。
発現したタンパク質の活性判定にはペプチド研究所のMCA基質を用いた。終濃度0.1μMに調製した発現タンパク質と終濃度200μMに調製したMCA基質溶液とを10mM PB (pH=6.5)中で混合し、このうちの200μlを96well fluoro plate (Nunc社)に移した。25℃、遮光条件下でインキュベーション後、経過時間ごとの蛍光強度をWAKO社製 LS-Plate manager2000を用いて[Ex;360nm、Em;465nm]の条件で測定した。
(i)germline cDNAの単離
得られたPCR産物の塩基配列をNCBIのIgBlastにより相同性解析した結果を図13に示した。図13から明らかなように、このPCR産物はV1-13 cDNAと99.9%の相同性を有していた。2箇所の変異部分に関しては、異なる複数のクローンを解析したが同じ結果であった。このため、この部位ついてはサンプル由来の配列であると考えられる。なお、図示していないが、アミノ酸配列においては100%の一致が確認された。
上記方法に記載のプライマーにより、タンパク質発現のために再構成したcDNAの5’上流側および3’下流側の塩基配列を図14に示した。このcDNAを鋳型として発現させたタンパク質をSDS-PAGEに供した結果を図15に示した。図15から明らかなように、予想される分子量(11.7kD)の位置にバンドが出現した。
MCA基質を用いて測定した発現タンパク質のペプチド分解活性を図16に示した。なお、各反応は独立に3回行い、その平均値を示した。図16から明らかなように、用いた5種類のペプチドのうち3種類に対して発現タンパク質は分解活性を有していた。以上の結果から、ヒト抗体を構成する当該発現タンパク質はペプチド分解能を有していることが明らかとなった。
(1)方法
(i)ヒトリンパ球の単離
健常人から採取した末梢血20mlに20mlのbalanced solutionを加え、3ml Ficoll-Paque Plus(Amersham Biosciences社)に重層して400×g、室温で40分間遠心した。分離したリンパ球層を分取し、3倍量のbalanced solutionを加えて60×g、室温10分間遠心した。上清を除き、沈澱を6mlのbalanced solution で洗浄し、60×g、室温10分間遠心した。以上の操作により4.0×107のリンパ球を単離した。
total RNAの抽出のためにISOGEN(ニッポンジーン社)を用いた。上記単離したリンパ球に0.8mlのISOGENを加え、攪拌し室温で5分間静置してリンパ球を溶解した。0.2mlのchloroformを加え、攪拌して室温で3分間静置した。12000×g、4℃で15分間遠心し、水層を抽出した。0.5ml isopropanolを加え、攪拌して-20℃で1時間静置した。12000×g、4℃で10分間遠心し、上清を捨て1mlの70% ethanolを加えて沈澱を洗浄した。7500×g、4℃で5分間遠心し、上清を捨て10分間真空乾燥した。沈澱にDEPC処理水を加えて溶解した。以上の操作により6.98μgのtotal RNAが得られた。
cDNA合成には、First Strand cDNA Synthesis Kit(Novagen)を用いた。すなわち、上記total RNAからOligo(dT)プライマーを用いてcDNAを合成した。次に、このcDNAを鋳型とし、上流プライマーとしてサブグループVkappa2リーダー配列に対するKAP2L primer(5’-TCAGCTCCTGGGGCTGCTAATGCT-3’、配列番号17)を、下流プライマーとしてヒトκ鎖定常領域に対するHuIgLVk3-1primer(5’-TTCCCAAGCTTCATCAGATGGCGGGAAGAT-3’、配列番号18、Novagen社)を用い、変性94℃10分間に続き、94℃20秒、60℃20秒、72℃40秒を30サイクル行った後、最終伸長反応72℃4分間のPCRによりDNAを増幅した。なお、PCRにはNovaTaq PCR Kit(Novagen社)を用いた。
PCR産物のクローニングのためpGEM-T Easy Vector System(Promega社)を用い、pGEM-T Easy VectorにPCR産物を挿入した。構築したベクターを大腸菌(E.coli)DH5α株に形質転換した。定法に従い、形質転換した大腸菌を培養し、PCR産物がクローニングされたプラスミドを回収、精製した。塩基配列解析のため、Thermo Sequenase Cy5Dye Terminator Cycle Sequence Kit(Amersham社)を用いた。T7primerを用い、40サイクルで94℃20秒、52℃30秒、72℃80秒で反応させた。シーケンサーはLong-Read Tower(Amersham社)を用いた。
上記解析により得られた塩基配列から推測されるアミノ酸配列の一次構造に基づき、AbM (Oxford Molecular、 Oxford、UK)により目的抗体CDR領域のループ構造とFR領域の立体構造を予測した。AbMで予測された立体構造をもとに、InsightII/Discover3 (Molecular Simulatoin、USA)により分子間力計算を行い、熱力学的に安定となる立体構造を予測した。
(i)サブグループVkappa2(VK2)特異配列の探索
ヒトκ鎖各germlineリーダー配列の塩基配列を比較した結果を図17に示した。図17からわかるように、germline毎での特異配列は見られなかったが、各サブグループ毎での特異配列が見られた。サブグループVK2ではサブグループVkappa1(VK1)に対して下流で、サブグループVkappa3(VK3)はVK1に対して上流で、それ以外のサブグループではVK1に対して全体的に非相同領域が見られた。このことから、リーダー配列に対するプライマーを用いることで、サブグループ選択的にヒト抗体遺伝子を増幅できると考えられた。
上記方法に記載のKAP2L primerおよびHuIgkVL3-1primerで増幅したサブグループVK2由来抗体可変領域遺伝子が3クローン得られた。以下、これら3クローンをpHVK-1、pHVK-3、pHVK-4と表記する。図18にpHVK-1の塩基配列(配列番号3)およびアミノ酸配列(配列番号4)を示した。図19にpHVK-3の塩基配列(配列番号5)およびアミノ酸配列(配列番号6)を示した。図20にpHVK-4の塩基配列(配列番号7)およびアミノ酸配列(配列番号8)を示した。NCBIのigBLASTによる相同性比較の結果、pHVK-1はgermline A3/A19由来、pHVK-3およびpHVK-4はgermline A18由来と推定された(図21、図22および図23参照)。
pVHK-1、pVHK-3およびpVHK-4の可変領域のアミノ酸配列と、マウス由来抗体酵素として公知のVIPaseおよびi41SL1-2-Lの軽鎖可変領域のアミノ酸配列との相同性を比較した。結果を図24に示した。
pVHK-1、pVHK-3およびpVHK-4のアミノ酸配列に基づいて予測立体構造を構築し、三つ組み残基様構造を探索した。その結果、pHVK-1およびpHVK-4で三つ組み残基様構造が見られた。図25にpVHK-1のアミノ酸配列に基づく予測立体構造を示した。図26にpVHK-4のアミノ酸配列に基づく予測立体構造を示した。
Claims (2)
- ヒト抗体酵素の生産方法であって、
ヒト生殖細胞系列抗体V遺伝子のリーダー配列中に存在するVkappa2特異的配列に基づくプライマーを用いて、ヒトリンパ球由来のcDNAを鋳型とする核酸増幅反応を行う工程、
増幅されたcDNAの塩基配列を決定し、塩基配列に基づいて酵素活性を有するポリペプチドをコードするcDNAを選択する工程、および
選択されたcDNAがコードするポリペプチドを発現させる工程
を包含することを特徴とするヒト抗体酵素生産方法。 - 上記プライマーが配列番号17に示される塩基配列からなるポリヌクレオチドであることを特徴とする請求項1に記載のヒト抗体酵素生産方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2005370880A JP4829609B2 (ja) | 2004-12-22 | 2005-12-22 | ヒト抗体酵素およびその生産方法 |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2004372206 | 2004-12-22 | ||
JP2004372206 | 2004-12-22 | ||
JP2005370880A JP4829609B2 (ja) | 2004-12-22 | 2005-12-22 | ヒト抗体酵素およびその生産方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2006197930A JP2006197930A (ja) | 2006-08-03 |
JP4829609B2 true JP4829609B2 (ja) | 2011-12-07 |
Family
ID=36956458
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2005370880A Active JP4829609B2 (ja) | 2004-12-22 | 2005-12-22 | ヒト抗体酵素およびその生産方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP4829609B2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9593166B2 (en) | 2013-03-14 | 2017-03-14 | Bayer Healthcare Llc | Monoclonal antibodies against antithrombin β |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101805202B1 (ko) * | 2009-05-29 | 2017-12-07 | 모르포시스 아게 | 집합 및 집합의 사용 방법 |
US9365637B2 (en) * | 2010-02-19 | 2016-06-14 | Japan Science And Technology Agency | Antiviral agent, abzyme, primer set, method for producing polynucleotide, and method for producing polypeptide |
UY34317A (es) * | 2011-09-12 | 2013-02-28 | Genzyme Corp | Anticuerpo antireceptor de célula T (alfa)/ß |
US20150064203A1 (en) | 2012-03-08 | 2015-03-05 | Japan Science And Technology Agency | Anticancer agent |
EP2925360A4 (en) | 2012-11-29 | 2016-07-13 | Bayer Healthcare Llc | MONOCLONAL ANTIBODIES HUMANIZED AGAINST ACTIVATED PROTEIN C AND USES THEREOF |
KR102494631B1 (ko) | 2013-03-11 | 2023-02-06 | 젠자임 코포레이션 | 당조작을 통한 부위-특이적 항체-약물 접합 |
EP3037434B1 (en) | 2013-08-20 | 2018-07-18 | Japan Science and Technology Agency | Human antibody kappa type light chain complex-containing composition and method for producing same |
ES2940903T3 (es) | 2014-03-19 | 2023-05-12 | Genzyme Corp | Glucomanipulación específica del sitio de restos orientadores |
WO2017087391A1 (en) | 2015-11-17 | 2017-05-26 | Bayer Healthcare, Llc | Epitope of optimized humanized monoclonal antibodies against activated protein c and uses thereof |
US11505599B2 (en) | 2016-01-14 | 2022-11-22 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | T cell receptor-like antibodies specific for Foxp3-derived peptides |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP4334931B2 (ja) * | 2002-07-19 | 2009-09-30 | 独立行政法人科学技術振興機構 | 新規抗体酵素生産方法および新規抗体酵素 |
-
2005
- 2005-12-22 JP JP2005370880A patent/JP4829609B2/ja active Active
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9593166B2 (en) | 2013-03-14 | 2017-03-14 | Bayer Healthcare Llc | Monoclonal antibodies against antithrombin β |
US9908942B2 (en) | 2013-03-14 | 2018-03-06 | Bayer Healthcare, Llc | Monoclonal antibodies against antithrombin β |
US10144784B2 (en) | 2013-03-14 | 2018-12-04 | Bayer Healthcare Llc | Monoclonal antibodies against antithrombin beta |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2006197930A (ja) | 2006-08-03 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4829609B2 (ja) | ヒト抗体酵素およびその生産方法 | |
US20210380723A1 (en) | Method for mass humanization of non-human antibodies | |
JP7012044B2 (ja) | イオン濃度依存性結合分子ライブラリ | |
US8404445B2 (en) | Antibody libraries | |
KR102159272B1 (ko) | 항체 라이브러리 | |
EP1664343B1 (en) | Methods and compositions for generation of germline human antibody genes | |
KR101323827B1 (ko) | 강직성척추염 진단용 프라이머 및 이를 이용한 강직성 척추염 진단 방법 | |
KR20060034650A (ko) | 룩-스루 돌연변이 | |
JP2005514927A5 (ja) | ||
JP2008505642A (ja) | 強化された特性を持つ変性ポリペプチドを発生させるためのルックスルー変異誘発 | |
KR101815105B1 (ko) | 멀티플렉스 pcr-기반된 차세대 시퀀싱을 이용한 한타바이러스 전장 유전체 서열 획득 방법 및 이의 용도 | |
AU2002254773B2 (en) | Novel methods of directed evolution | |
EP2658971A1 (en) | Cell surface display using pdz domains | |
JP7029138B2 (ja) | 連結核酸断片の製造方法、連結核酸断片、及び連結核酸断片から構成されるライブラリ | |
CN108884450A (zh) | Mini-III RNA酶、改变Mini-III RNA酶切割RNA序列的特异性的方法及其用途 | |
CN108530541A (zh) | 一种针对cd22的嵌合抗原受体的重组基因构建及其应用 | |
US20240132876A1 (en) | Self-priming and replicating hairpin adaptor for constructing ngs library, and method for constructing ngs library using same | |
TW202229332A (zh) | SARS-CoV-2結合肽 | |
KR20190049091A (ko) | 오리엔티아 쯔쯔가무시 균주의 표면 단백질 tst56에 대해 특이적으로 결합하는 변형된 rna 압타머 | |
KR20190049083A (ko) | 오리엔티아 쯔쯔가무시 균주의 표면 단백질 tsg56에 대해 특이적으로 결합하는 변형된 rna 압타머 | |
WO2013024867A1 (ja) | 抗体とその利用 | |
JPH07115978A (ja) | 抗体遺伝子の検出及びクローニング法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A625 | Written request for application examination (by other person) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A625 Effective date: 20081217 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20090217 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20090217 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20110628 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110826 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20110913 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20110916 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140922 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4829609 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |