JP2016028571A - プロテアーゼ変異体を含む組成物及び方法 - Google Patents

プロテアーゼ変異体を含む組成物及び方法 Download PDF

Info

Publication number
JP2016028571A
JP2016028571A JP2015147895A JP2015147895A JP2016028571A JP 2016028571 A JP2016028571 A JP 2016028571A JP 2015147895 A JP2015147895 A JP 2015147895A JP 2015147895 A JP2015147895 A JP 2015147895A JP 2016028571 A JP2016028571 A JP 2016028571A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
amino acid
variant
protease
acid sequence
seq
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2015147895A
Other languages
English (en)
Inventor
バスラー、ジョシュア・ロイ
Roy Basler Joshua
カスカオ−ペレイラ、ルイス・グスタホ
Gustavo Cascao-Pereira Luis
エステル、デイビッド・エー
David A Estell
ケリーズ、ジェームス・ティー
T Kellis James
ピサーチック、アレキサンダー
Pisarchik Alexander
ポウルズ、アウルーカラン・ジェイ
J Poulose Ayrookaran
トレース−パズミノ・ダニエル
Torres-Pazmino Daniel
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Danisco US Inc
Original Assignee
Danisco US Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Danisco US Inc filed Critical Danisco US Inc
Publication of JP2016028571A publication Critical patent/JP2016028571A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/52—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea
    • C12N9/54—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea bacteria being Bacillus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
    • C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/52—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21062—Subtilisin (3.4.21.62)

Abstract

【課題】プロテアーゼ変異体、プロテアーゼ変異体を含む組成物、並びに、このようなプロテアーゼ変異体及び組成物を使用する方法の提供。
【解決手段】親プロテアーゼの単離されたプロテアーゼ変異体であって、前記変異体が、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ、Ｘ０７８Ｎ、Ｘ１０１Ｎ、Ｘ１２８Ａ／Ｓ又はＸ２１７Ｌ／Ｑから選択される３つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含み、タンパク質分解活性を有し、前記変異体の各アミノ酸位置が、特定のアミノ酸配列と前記変異体のアミノ酸配列とのアラインメントによって決定され番号付けされ、前記変異体が、前記親プロテアーゼと比較して向上したタンパク質分解活性及び／又はクリーニング活性を有する変異体。
【選択図】なし

Description

（関連出願の相互参照）
本出願は、米国特許仮出願番号６１／２８５，１２７（２００９年１２月９日出願）及び同６１／３９２，３７３（２０１０年１０月１２日出願）の優先権及び利益を主張し、これら各々の開示は全ての目的に関してその全体が参照により本明細書に組み込まれるものとする。
（発明の分野）
本発明は、プロテアーゼ変異体、プロテアーゼ変異体を含む組成物、並びに、このようなプロテアーゼ変異体及びこれらの組成物を使用する方法を提供する。
プロテアーゼは工業用酵素の技術分野において長きにわたって周知であるが、特定の条件及び使用に好適である改変プロテアーゼ（engineered proteases）が依然として必要とされている。本発明は、これらのニーズ及び他のニーズを満たす。
第一態様では、本発明は、親プロテアーゼ酵素の単離されたプロテアーゼ変異体を提供し、このプロテアーゼ変異体はタンパク質分解活性を有し、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される配列番号２のアミノ酸位置に対応する１つ以上のアミノ酸位置において変異を含むアミノ酸配列を含み、ここで、変異の少なくとも１つは独立して、（ｉ）この位置を占めるアミノ酸残基の上流又は下流における１つ以上のアミノ酸残基の挿入、（ｉｉ）この位置を占めるアミノ酸残基の欠失、又は（ｉｉｉ）異なるアミノ酸残基による、この位置を占めるアミノ酸残基の置換、であり、ここで、各アミノ酸位置は、配列番号２のアミノ酸配列と変異体のアミノ酸配列とのアラインメントによって決定される配列番号２に記載のバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンプロテアーゼＢＰＮ’のアミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。
第二態様では、本発明は、親プロテアーゼの単離されたプロテアーゼ変異体を提供し、この変異体は、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ１０１Ｎ，Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｌ／Ｑからなる群から選択される３つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含み、ここで、この変異体はタンパク質分解活性を有し、この変異体の各アミノ酸位置は、配列番号２のアミノ酸配列と変異体のアミノ酸配列とのアラインメントによって決定される配列番号２のアミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。
第三態様では、本発明は、タンパク質分解活性を有する単離されたポリペプチドを提供し、上記ポリペプチドは、
ａ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｌ２５７Ｇ、
ｂ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ、
ｃ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ００９Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ１４１Ｒ＋Ｎ２４３Ｖ、
ｄ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ１６２Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｅ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ、
ｆ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ、
ｇ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ１６２Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ、
ｈ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ０６１Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
ｉ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ａ、
ｊ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｋ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｌ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ、
ｍ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ、
ｎ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
ｏ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ、
ｐ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ０６１Ｓ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
ｑ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｐ０４０Ａ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｒ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ００９Ｔ＋Ｓ０１８Ｔ＋Ｙ０２１Ｎ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ１４１Ｒ、
ｓ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｔ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ、
ｕ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｖ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｗ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ０６３Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｘ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ、
ｙ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ０６３Ｇ、
ｚ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ０７６Ｄ、
ａａ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓ、
ｂｂ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓ、及び
ｃｃ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択されるポリペプチド配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、この変異体の各アミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。
第四態様では、本発明は、（ａ）配列番号６のポリペプチド配列に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド、（ｂ）少なくとも厳密度の高い条件下で（ｉ）配列番号５のポリヌクレオチド配列と、又は（ｉｉ）（ｉ）の相補的ポリヌクレオチド配列と、ハイブリッド形成するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド、並びに（ｃ）配列番号５のポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド、からなる群から選択されるプロテアーゼ活性を有する単離されたポリペプチドを提供する。
第五態様では、本発明は、親プロテアーゼの単離されたプロテアーゼ変異体を提供し、ここで、（ａ）この変異体は親プロテアーゼと比較して２０以下、１５以下又は１０以下の変異を有するアミノ酸配列を含み、ここで、（ｉ）これらの変異は、挿入、欠失又は置換から独立して選択され、（ｉｉ）これらの変異は、位置２４及び５３におけるグリシンの置換、位置７８及び１０１におけるアスパラギンの置換、位置１２８におけるアラニン又はセリンの置換、及び位置２１７におけるグルタミンの置換を包含し、（ｂ）親プロテアーゼは、配列番号２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、（ｃ）配列番号２のアミノ酸配列は、位置番号付けを決定するために使用され、並びに（ｄ）この変異体は、親プロテアーゼと比較してタンパク質分解活性が増大しており、ここで、各アミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。
第六態様では、本発明は、親プロテアーゼの単離されたプロテアーゼ変異体を提供し、ここで、（ａ）この変異体は、（ｉ）配列番号２の配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列であって、（ｉｉ）位置２４及び５３におけるグリシンの置換、位置７８及び１０１におけるアスパラギンの置換、位置１２８におけるアラニン又はセリンの置換、及び位置２１７におけるグルタミンの置換を含む、アミノ酸配列を含み、（ｂ）この親プロテアーゼは、配列番号２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有し、（ｃ）この変異体の各アミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされ、並びに（ｄ）この変異体は、親プロテアーゼと比較してタンパク質分解活性が増大している。
別の態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのポリペプチド変異体（例えば、プロテアーゼ変異体）をコードするポリヌクレオチド配列又はその相補的ポリヌクレオチド配列を含む、単離された又は組み換え核酸を提供する。
別の態様では、本発明は、配列番号３若しくは配列番号５に記載のポリヌクレオチド又はその相補的ポリヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む、単離された又は組み換え核酸を提供する。
別の態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つの核酸を含む発現ベクターを提供する。本発明の少なくとも１つの核酸又は発現ベクターを含む組み換え宿主細胞又は細胞培養物も提供される。
別の態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのポリペプチド（例えば、プロテアーゼ変異体）の製造方法を提供し、この方法は、（ａ）本発明のポリペプチド（例えば、プロテアーゼ変異体）をコードする本発明の組み換え発現ベクターを細胞集団に導入することと、（ｂ）この発現ベクターによりコードされるポリペプチド（例えば、プロテアーゼ変異体）の生産を促進する条件下で培地内でこの細胞を培養することと、選択的に（ｃ）細胞又は培地から変異体を単離又は回収することと、を含む。
別の態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体又はポリペプチドを、選択的に別の酵素と組み合わせて含む組成物を提供する。このような組成物は、界面活性剤及び／又はビルダー又は担体などの添加剤成分を含んでもよい。このような組成物は、クリーニング組成物又は洗剤組成物であってもよく、本明細書の他の箇所に記載のクリーニング方法において有用であり得る。このような組成物は布地ケア製品及びホームケア製品であってもよく、又は、このような組成物は、布地ケア製品及びホームケア製品でなくてもよい。
別の態様では、本発明は、クリーニングする必要のある物品、対象又は表面をクリーニングするための方法を提供し、この方法は、物品、対象又は表面を、本発明のポリペプチド若しくはプロテアーゼ変異体又は本発明の組成物と接触させることと、選択的にこの物品、対象又は表面を水ですすぐことと、を含む。
別の態様では、本発明は、物品又は表面（例えば、硬質表面）をクリーニングするための方法を提供し、この方法は、物品又は表面（例えば、硬質表面）を充分な時間にわたって又は所望される程度までクリーニング若しくは洗浄するのに十分な若しくは有効な条件下で本発明のポリペプチド又はプロテアーゼ変異体又は本発明の組成物に、クリーニングすべき物品又は表面（例えば、硬質表面）の少なくとも一部を接触させることを含み、選択的にこの物品又は表面（例えば、硬質表面）を水ですすぐことを含む。
本発明の他の態様は、下記に記載される。
ｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’−ｖ３のプラスミドマップ。 ｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’−ｖ３＋Ｓ７８Ｎのプラスミドマップ。 ｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’ｐａｒｔｉａｌ ｏｐｔのプラスミドマップ。 ｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’−ｖ３６のプラスミドマップ。 ＢＰＮ’（配列番号２）及びＧＧ３６（配列番号７５５）を含む成熟参照スブチリシンプロテアーゼのアラインメント。各冷水プロテアーゼ（cold water protease）変異体を含む本明細書に記載の各プロテアーゼ変異体の各アミノ酸位置は、バチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンプロテアーゼＢＰＮ’アミノ酸配列とプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列のアラインメントにより決定される図５に示すようなバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンプロテアーゼＢＰＮ’（配列番号２）のアミノ酸配列内の対応するアミノ酸位置の番号付けに従って番号付けされる。したがって、本明細書において特に指定しない限り、置換位置は、ＢＰＮ’に対する関係で与えられる。 ｐＨＰＬＴ−ＧＧ３６のマップ。 ｐＲＡ６８のマップ。 ｐＲＡ９６のマップ。
定義
特に指定しない限り、本発明の実施は、当該技術分野内の分子生物学、タンパク質工学、微生物学及び組み換えＤＮＡにおいて通常使用される従来技術を伴う。このような技術は、当業者に既知であり、当業者に周知の数多くのテキスト及び参考文献に記載されている。上記及び下記の両方で本明細書で言及される全ての特許、特許出願、論文及び刊行物は、これによって本明細書に参照により明示的に組み込まれるものとする。
本明細書で特に規定のない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する分野の当業者に一般的に理解されるのと同じ意味を有する。多くの技術用語辞書が当業者に既知である。本明細書に記載されているものと類似した又は等価な任意の方法及び部材の使用が発明の実施において見出されるが、一部の好適な方法及び部材を本明細書に記載するものとする。したがって、すぐ下に定義される用語は、概して本明細書を参照することにより、より完全に説明される。数的範囲は、範囲を画定する数を包含するものとする。特に示さない限り、それぞれ、核酸は左から右に５’→３’の向きで記述され、アミノ酸は左から右にアミノ→カルボキシの向きで記述される。本発明は、記載される特定の方法、プロトコル及び試薬に限定されるものではなく、当業者によりこれらが使用される文脈に依存して変更されてもよいことが理解されよう。
本発明の実施は、特に示さない限り、タンパク質精製、分子生物学、微生物学、組み換えＤＮＡ技術及びタンパク質配列決定の従来技術を採用し、これらの全ては、当該技術分野内のものである。
更に、本明細書で提供される見出しは、概して本明細書を参照することにより有することができる本発明の様々な態様を限定するものではない。したがって、すぐ下に定義される用語は、概して本明細書を参照することにより、より完全に定義される。しかしながら、本発明の理解を促進するために、多くの用語を以下に定義する。
本明細書で使用するとき、用語、「プロテアーゼ」及び「プロテイナーゼ」は、他のタンパク質を分解する能力を有する酵素タンパク質を指す。プロテアーゼは、「タンパク質分解」を行う能力を有し、タンパク質を形成するペプチド又はポリペプチド鎖内でアミノ酸を一緒に連結するペプチド結合を加水分解することによりタンパク質異化反応を開始する。タンパク質消化酵素としてのプロテアーゼのこの活性は、「タンパク質活性」と呼ばれる。タンパク質分解活性を測定するための多くの周知の手順が存在する（例えば、ＫａｌｉｓＺ，「Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ，」Ｉｎ：Ｆｉｅｃｈｔｅｒ（ｅｄ．），Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ／Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１９８８）を参照されたい）。例えば、タンパク質分解活性は、それぞれのプロテアーゼが市販の基質を加水分解する能力を解析する比較アッセイにより確定され得る。プロテアーゼ又はタンパク質分解活性の解析に有用な代表的な基質としては、ジメチルカゼイン（Ｓｉｇｍａ Ｃ−９８０１）、ウシのコラーゲン（Ｓｉｇｍａ Ｃ−９８７９）、ウシのエラスチン（Ｓｉｇｍａ Ｅ−１６２５）及びウシのケラチン（ＩＣＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ９０２１１１）が挙げられるが、これらに限定されない。これらの基質を利用する比色分析アッセイが当該技術分野において周知である（例えば、国際公開第９９／３４０１１号及び米国特許第６，３７６，４５０号、これらはどちらも参照により本明細書に組み込まれる）。ｐＮＡアッセイ（例えば、Ｄｅｌ Ｍａｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．９９：３１６〜３２０［１９７９］を参照されたい）もまた、勾配溶出時に回収される画分の活性酵素濃度を定量するのに使用され得る。このアッセイは、酵素が可溶性合成基質、スクシニル−アラニン−アラニン−プロリン−フェニルアラニン−ｐ−ニトロアニリド（ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ）を加水分解する際にｐ−ニトロアニリンが放出される速度を判定する。加水分解反応により黄色味が生成される速度は、分光光度計で４１０ｎｍにて測定され、この速度は活性酵素濃度に比例する。加えて、２８０ナノメートル（ｎｍ）での吸光度測定を使用して、総タンパク質濃度を定量することができる。活性濃度／総タンパク質比は、酵素純度を与える。
本明細書で使用するとき、用語、「スブチリシン」は、ＭＥＲＯＰＳ−ぺプチダーゼデータベースに記載のＳ８セリンプロテアーゼファミリーの任意のメンバーを指す（Ｒａｗｌｉｎｇｓ ｅｔ ａｌ．，ＭＥＲＯＰＳ：ｔｈｅ ｐｅｐｔｉｄａｓｅ ｄａｔａｂａｓｅ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，３４ Ｄａｔａｂａｓｅ ｉｓｓｕｅ，Ｄ２７０−２７２［２００６］を参照されたい）。そこに記載のように、ぺプチダーゼファミリーＳ８は、セリンエンドペプチダーゼスブチリシン及びその相同体を含有する（Ｒａｗｌｉｎｇｓ ａｎｄ Ｂａｒｒｅｔｔ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２９０：２０５〜２１８，［１９９３］）。ファミリーＳ８は、サブチラーゼファミリーとしても知られ、セリンペプチダーゼの二番目に大きなファミリーである。ファミリーＳ８の第三の構造は、今回判定された。典型的なＳ８タンパク質構造は三層からなり、七本鎖βシートが二層のへリックスの間に挟まれている。スブチリシン（Ｓ０８．００１）は、クランＳＢ（ＳＢ）の類型構造である。異なる構造であるにもかかわらず、スブチリシンの活性部位とキモトリプシン（Ｓ０１．００１）の活性部位は重ね合わせることができ、これは、類似性が分岐進化よりも収斂の結果であることを示唆する。
「プロテアーゼ変異体」（又は「変異プロテアーゼ」）は、そのアミノ酸配列において、少なくとも１つのアミノ酸残基が参照プロテアーゼ又は親プロテアーゼのアミノ酸配列とは異なるプロテアーゼを指し得る。親プロテアーゼ又は参照プロテアーゼは、野生型プロテアーゼである必要はなく、しかしながらそれ自体が野生型プロテアーゼの変異体であってもよい。参照又は親プロテアーゼがいずれかの特定のアミノ酸配列に限定されることは意図しない。参照又は親プロテアーゼのプロテアーゼ変異体は、親プロテアーゼ又は参照プロテアーゼのアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよく、親プロテアーゼ又は参照プロテアーゼのアミノ酸配列と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換、挿入又は欠失を含んでもよい。一態様では、本発明は、セリンプロテアーゼの変異体を含み、ここで、この変異体は、セリンプロテアーゼと比較して少なくとも１つの変異を有する。一態様では、本発明は、配列番号２の成熟ＢＰＮ’配列と比較して１つ以上の変異を含むアミノ酸配列を含む「ＢＰＮ’変異体」（又は「ＢＰＮ’スブチリシン変異体」）を含む。
親プロテアーゼ又は参照プロテアーゼは、例えば、既知のプロテアーゼ（例えば、ＢＰＮ’が挙げられるがこれに限定されない）又は市販のプロテアーゼ又は市販のプロテアーゼの変異体であり得るが、これに限定されない。親プロテアーゼ又は参照プロテアーゼは、それ自体が既知又は市販のプロテアーゼの変異体であってもよい。プロテアーゼ変異体は、市販されている親プロテアーゼから、又は、このような市販の親プロテアーゼの変異体から、誘導することができる。市販のプロテアーゼとしては、例えば、商品名ＳＡＶＩＮＡＳＥ（登録商標）、ＰＯＬＡＲＺＹＭＥ（登録商標）、ＫＡＮＮＡＳＥ（登録商標）、ＬＩＱＵＡＮＡＳＥ（登録商標）、ＬＩＱＵＡＮＡＳＥ ＵＬＴＲＡ（登録商標）、ＳＡＶＩＮＡＳＥ ＵＬＴＲＡ（登録商標）、ＯＶＯＺＹＭＥ（登録商標）（ＮｏｖｏＺｙｍｅｓ Ａ／Ｓによる）、ＭＡＸＡＣＡＬ（登録商標）、ＰＲＯＰＥＲＡＳＥ（登録商標）、ＰＵＲＡＦＥＣＴ（登録商標）、ＦＮ３（登録商標）、ＦＮ４（登録商標）及びＰＵＲＡＦＥＣＴ ＯＸＰ（登録商標）、ＰＵＲＡＦＡＳＴ（商標）、ＰＵＲＡＦＥＣＴ（登録商標）ＰＲＩＭＥ、ＰＵＲＡＭＡＸ（登録商標）（Ｄａｎｉｓｃｏ ＵＳ Ｉｎｃ．（元Ｇｅｎｅｎｃｏｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）による）で販売されているプロテアーゼ、並びにＨｅｎｋｅｌ／Ｋｅｍｉｒａから入手可能なもの、すなわちＢＬＡＰ（以下の変異Ｓ９９Ｄ＋Ｓ１０１Ｒ＋Ｓ１０３Ａ＋Ｖ１０４Ｉ＋Ｇ１５９Ｓ，を有する米国特許第５，３５２，６０４号の表２９に示されているアミノ酸配列、以降ではＢＬＡＰと呼ぶ）及びＢＬＡＰ Ｘ（Ｓ３Ｔ＋Ｖ４Ｉ＋Ｖ２０５Ｉを有するＢＬＡＰ）が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用するとき、「冷水プロテアーゼ」は、以下の四つの基準のうちの１つ以上を呈する酵素である：（ａ）本明細書のパートＩ実施例１に記載の「試験方法」に定義したようにＰＵＲＡＦＥＣＴ（登録商標）Ｐｒｉｍｅ（アミノ酸置換Ｙ２１７Ｌを有する配列番号２）と比較したときにｐＨ ８及び１６℃（６０°Ｆ）におけるＢＭＩで、性能指数が少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．１〜約１０、１．１〜約８、又は更には１．１〜約５、（ｂ）本明細書のパートＩ実施例１に記載の「試験方法」に定義したようにＢＰＮ’（配列番号２）と比較したときにｐＨ ８及び１６℃（６０°Ｆ）におけるＢＭＩで、性能指数が少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．３〜約８、又は更には１．３〜約５、（ｃ）本明細書のパートＩ実施例１に記載の「試験方法」に定義したようにＢＰＮ’−ｖ３（配列番号４）と比較したときにｐＨ ８及び１６℃（６０°Ｆ）におけるＢＭＩで、性能指数が少なくとも０．９、少なくとも１．０、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、０．９〜約１０、０．９〜約８、又は更には０．９〜約５、並びに／あるいは（ｄ）本明細書のパートＩ実施例１に記載の「試験方法」に定義したようにＢＰＮ’−ｖ３６（配列番号６）と比較したときにｐＨ ８及び１６℃（６０°Ｆ）におけるＢＭＩで、性能指数が少なくとも０．９、少なくとも１．０、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、０．９〜約１０、０．９〜約８、０．９〜約５、１．０〜約１０、１．０〜約８、又は更には１．０〜約５。
一部の好適な冷水プロテアーゼはスブチリシンから誘導され、特にスブチリシンＢＰＮ’（配列番号２）から誘導される。冷水プロテアーゼは、配列番号２のアミノ酸配列を有するＢＰＮ’の変異体であり得る（例えば、「ＢＰＮ’変異体」又は「ＢＰＮ’スブチリシン変異体」）。一部のこのような冷水プロテアーゼは、本明細書に記載のアミノ酸置換を１つ以上含む。
本明細書で使用するとき、バチルス属は、当業者に既知であるように、バチルス属内の全ての種を含み、例えば、枯草菌（B. subtilis）、バチルス・リケニホルミス（B. licheniformis）、バチルス・レンタス（B. lentus）、バチルス・ブレビス（B. brevis）、バチルス・ステアロサーモフィラス（B. stearothermophilus）、バチルス・アルカロフィラス（B. alkalophilus）、バチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）、バチルス・クラウジイ（B. clausii）、バチルス・ハロデュランス（B. halodurans）、バチルス・メガテリウム（B. megaterium）、バチルス・コアグランス（B. coagulans）、バチルス・サーキュランス（B. circulans）、バチルス・ロータス（B. lautus）及びバチルス・チューリンゲンシス（B. thuringiensis）が挙げられるが、これらに限定されない。バチルス属が引き続き分類再編中であることが認識される。したがって、この属が、例えば、現在では「ゲオバチルス・ステアロサーモフィラス（Geobacillus stearothermophilus）」という名称であるバチルス・ステアロサーモフィラス（B. stearothermophilus）などの生物が挙げられるがこれに限定されない、再分類された種を含むことが意図される。酸素の存在下での耐性内生胞子の形成は、バチルス属を定義する特徴と考えられるが、この特徴は、近年名付けられたアリシクロバチルス（Alicyclobacillus）、アンフィバチルス（Amphibacillus）、アネウリニバチルス（Aneurinibacillus）、アノキシバチルス（Anoxybacillus）、ブレビバチルス（Brevibacillus）、フィロバチルス（Filobacillus）、グラシリバチルス（Gracilibacillus）、ハロバチルス（Halobacillus）、パエニバチルス（Paenibacillus）、サリバチルス（Salibacillus）、サーモバチルス（Thermobacillus）、ウレイバチルス（Ureibacillus）及びバージバチルス（Virgibacillus）にも当てはまる。
用語、「ポリヌクレオチド」及び「核酸」は、本明細書において互換的に使用され、鎖中で任意の長さのヌクレオチドモノマーが共有結合しているポリマーを指す。ＤＮＡ（デオキシリボ核酸）、デオキシリボヌクレオチドを含むポリヌクレオチド、ＲＮＡ（リボ核酸）、リボ核酸のポリマーは、互いに異なる生物学的機能を有するポリヌクレオチド又は核酸の例である。ポリヌクレオチド又は核酸としては、一本鎖、二本鎖若しくは三本鎖ＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド、あるいは、プリン塩基及びピリミジン塩基を含むポリマー、天然ヌクレオチド塩基、化学的に修飾されたヌクレオチド塩基、生化学的に修飾されたヌクレオチド塩基、非天然のヌクレオチド塩基、又は誘導されたヌクレオチド塩基が挙げられるが、これらに限定されない。以下は、ポリヌクレオチドの非限定例である：遺伝子、遺伝子断片、染色体断片、発現配列標識（ＥＳＴ）、エキソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、運搬ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、リボザイム、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、組み換えポリヌクレオチド、分枝状ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離されたＤＮＡ、任意の配列の単離されたＲＮＡ、核酸プローブ及びプライマー。一部のポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びヌクレオチド類似体などの修飾されたヌクレオチド、ウラシル、他の糖、並びに、フルオロリボース及びチオアートなどの連結基、並びにヌクレオチド分枝を含む。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分により割り込まれてもよい。
本明細書で使用するとき、用語、「ベクター」は、核酸又はポリヌクレオチドを標的細胞又は組織の中に導入又は運搬するために使用される核酸コンストラクト又はポリヌクレオチドコンストラクトを指す。ベクターは、典型的には、外来ＤＮＡを別の細胞又は組織の中に導入するために使用される。ベクターは、一般に、導入遺伝子であるＤＮＡ配列と、ベクターの「骨格鎖」として働くより大きなポリヌクレオチド配列と、を含む。このベクターは、典型的には、挿入された導入遺伝子などの遺伝子情報を標的細胞又は組織に運搬するよう働き、それにより、標的細胞又は組織において挿入遺伝子を単離、複製又は発現する。ベクターとしては、プラスミド、クローニングベクター、バクテリオファージ、ウイルス（例えば、ウイルスベクター）、コスミド、発現ベクター、シャトルベクター、カセット及びこれらに類するものが挙げられる。ベクターは、典型的には、複製起点、マルチクローニングサイト及び選択マーカーを含む。ベクターを標的細胞の中に挿入するプロセスは、典型的には、細菌及び酵母菌における形質転換として、並びに、哺乳類細胞におけるトランスフェクションとして、示される。本発明は、好適な宿主においてＤＮＡ配列が発現されるよう機能し得る好適なプロ配列（例えば、分泌配列、シグナルペプチド配列など）に作用可能に連結されているプロテアーゼ変異体（例えば、前駆体又は成熟プロテアーゼ変異体）をコードするＤＮＡ配列を含むベクターを含む。
本明細書で使用するとき、用語、「発現カセット」又は「発現ベクター」は、標的細胞において所望の核酸（例えば、外来核酸又は導入遺伝子）を発現させるために組み換えにより又は合成により調製された核酸コンストラクト又はベクターを指す。この所望の核酸は、典型的には、所望のタンパク質を発現する。発現ベクター又は発現カセットは、典型的には、外来核酸の発現を駆動する又は促進するプロモーターヌクレオチド配列を含む。この発現ベクター又はカセットはまた、典型的には、標的細胞において特定の核酸の転写を可能にする任意の他の特定の核酸要素を含む。組み換え発現カセットは、プラスミド、染色体、ミトコンドリアＤＮＡ、色素体ＤＮＡ、ウイルス、又は核酸断片の中に組み込むことができる。一部の発現ベクターは、宿主細胞において非相同なＤＮＡ断片を組み込み発現させる能力を有する。多くの原核細胞及び真核細胞発現ベクターは、市販されている。適切な発現ベクターの選択は、当業者であれば既知である。発現ベクターの中に組み込まれた核酸配列からタンパク質を発現させるための適切な発現ベクターの選択は、当業者であれば既知である。
ＤＮＡコンストラクトは、標的細胞又は組織の中に導入され得る核酸の人工的に構築された断片である。ＤＮＡコンストラクトは、典型的には、ベクターの中にサブクローニングされた所望のタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むＤＮＡ挿入断片を含む。このベクターは、細菌を増殖させるための細菌耐性遺伝子、並びに、生物で所望のタンパク質を発現させるためのプロモーターを含有してもよい。このＤＮＡは、ＰＣＲ又は当業者に既知の任意の他の技術によりインビトロで生産され得る。このＤＮＡコンストラクトは、所望の核酸配列を含み得る。一態様では、この配列は、選択的に、対照配列（例えば、プロモーターなど）などの追加の配列に作用可能に連結される。このＤＮＡコンストラクトは、好適な選択マーカーを更に含んでもよく、ホモロジーボックスに隣接した組み込み配列（incoming sequence）を更に含んでもよい。このコンストラクトは、末端部に加えられた他の非相同配列を含んでもよい（例えば、スタッファー配列又は隣接配列）。配列の末端部は、ＤＮＡコンストラクトが閉環構造を形成するように閉じられてもよい。当該技術分野において周知の技術を用いてＤＮＡコンストラクトの中に組み込まれる、この所望の核酸配列は、野生型、変異又は修飾された核酸であり得る。このＤＮＡコンストラクトは、宿主細胞染色体と相同な核酸配列を１つ以上含んでもよい。このＤＮＡコンストラクトは、１つ以上の非相同ヌクレオチド配列を含んでもよい。このＤＮＡコンストラクトは、一度インビトロで組み立てられると、例えば、１）宿主細胞の所望の標的配列の中に非相同的な配列を挿入するために、及び／又は２）宿主細胞染色体の一領域に変異を誘導する（すなわち、内在性配列を非相同性配列で置換する）ために、３）標的遺伝子を欠失させるために、４）複製プラスミドを宿主の中に導入するために、使用され得る。「ＤＮＡコンストラクト」は、本明細書では「発現カセット」と互換的に使用される。
本明細書で使用するとき、「プラスミド」は、染色体ＤＮＡとは独立して複製可能である染色体外のＤＮＡ分子を指す。プラスミドは、二本鎖（ｄｓ）であり、環状であってもよく、典型的にはクローニングベクターとして使用される。
本明細書において、細胞の中に核酸配列を導入する文脈で使用するとき、用語、「導入された」は、細胞の中に核酸配列を運搬するのに好適な任意の方法を指す。このような導入のための方法としては、原形質融合、トランスフェクション、形質転換、エレクトロポレーション、接合及び形質導入が挙げられるが、これらに限定されない（例えば、Ｆｅｒｒａｒｉ ｅｔ ａｌ．，「Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，」ｉｎ Ｈａｒｄｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｂａｃｉｌｌｕｓ，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｒｐ．，ｐｐ．５７〜７２［１９８９］を参照されたい）。
形質転換は、細胞の遺伝的な変更を指し、遺伝子材料（例えば、ＤＮＡ）の取り込み、遺伝子組み込み及び発現により生じる。
本明細書で使用するとき、核酸は、別の核酸配列と機能的に関連を持つよう配置された場合に、別の核酸配列と「作用可能に連結」される。例えば、プロモーター又はエンハンサーは、このプロモーターがヌクレオチドコーディング配列の転写に影響する場合、ヌクレオチドコーディング配列に作用可能に連結される。リボソーム結合部位は、コーディング配列の翻訳を促進するように配置された場合に、コーディング配列に作用可能に連結され得る。典型的には、「作用可能に連結されている」ＤＮＡ配列は、隣接している。しかしながら、エンハンサーは隣接している必要はない。連結は、都合のよい制限部位で連結することにより達成される。このような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプター又はリンカーを従来の実践方法に従って使用してもよい。
本明細書で使用するとき、細胞を参照して使用する場合の「組み換え」は、典型的には、その細胞が非相同な核酸配列の導入により改変されていること、あるいは、その細胞がそのように改変された細胞から誘導されていることを指す。例えば、組み換え細胞は、ネイティブ（非組み換え）な形態の細胞内では同一形態で見られない遺伝子を含み得、あるいは、組み換え細胞は、ネイティブな形態の細胞で見られるものの改変されて細胞の中に再導入されたネイティブな遺伝子を含み得る。組み換え細胞は、細胞から核酸を除去することなく改変された、細胞にとって内在性の核酸を含んでもよく、このような改変としては、遺伝子置換、部位特異的変異、及び当業者に既知の関連技術により得られるものが挙げられる。組み換えＤＮＡ（ｒＤＮＡ）は、遺伝子スプライシングのプロセスにより、通常同時に生じ得ない２つ以上のヌクレオチド配列を組み合わせることにより作られる、人工ＤＮＡの一形態である。組み換えＤＮＡ技術としては、インビトロでの組み換えＤＮＡの製造及び細胞の中への組み換えＤＮＡの運搬についての技術が挙げられ、組み換えＤＮＡは細胞中で発現又は増殖させることができ、これにより組み換えポリペプチドが製造される。
本明細書で使用するとき、用語、核酸又は遺伝子の「増幅」は、特異的なＤＮＡ配列が偏って複製されるプロセスを指し、その結果、増幅された核酸又は遺伝子は、遺伝子中に元々存在していたものよりも多い複製数で存在するようになる。薬剤（例えば、抑制され得る酵素に関する阻害物質）の存在下で増殖させることによる細胞の選別は、薬剤の存在下での増殖に必要とされる遺伝子産物をコードする内在性遺伝子の増幅、あるいは、この核酸又は遺伝子産物又はその両方をコードする外来性（すなわち、投与された）配列の増幅のいずれかにより得られ得る。
本明細書で使用するとき、用語、「プライマー」は、制限酵素による消化物の精製物（a purified restriction digest）として自然に生じるか又は合成により調製されるかのいずれかのオリゴヌクレオチドを指し、これは、核酸鎖に対して相補的であるプライマー伸長産物の合成が誘導される条件下（すなわち、ヌクレオチド及び、ＤＮＡポリメラーゼなどの誘導剤の存在下、並びに好適な温度及びｐＨ下）に置かれると合成の開始点として機能し得る。プライマーは増幅における最大効率のために一本鎖であることが好ましいが、代わりに二本鎖であってもよい。二本鎖の場合、プライマーは、伸長産物を調製するために使用される前に、その鎖を単離するように最初に処理される。このプライマーは、オリゴデオキシリボヌクレオチドを含み得る。このプライマーは、導入剤の存在下において、伸長産物の合成を開始するのに十分に長くなくてはならない。プライマーの正確な長さは、温度、プライマーの供給源、及びどの方法をどのように使用するかなどの様々な要因に依存する。
本明細書で使用するとき、用語、「プローブ」は、制限酵素による消化物の精製物として自然に生じるか又は合成により、組み換えにより若しくはＰＣＲ増幅により製造されるかのいずれかのオリゴヌクレオチドを指し、これは、典型的には、別の所望のオリゴヌクレオチドに対してハイブリッド形成することができる。プローブは、一本鎖又は二本鎖であり得る。プローブは、特定の遺伝子配列の検出、同定及び単離に有用である。本発明で使用される任意のプローブは、任意の「リポーター分子」で標識されることが想到され、その結果、酵素（例えば、ＥＬＩＳＡ並びに酵素に基づく組織化学的アッセイ）、蛍光、放射活性及び発光システムが挙げられるがこれらに限定されない任意の検出システムで検出可能である。本発明が任意の特定の検出システム又は標識に限定されることは、意図されていない。
本明細書で使用するとき、用語、「ポリメラーゼ連鎖反応」（ＰＣＲ）は、米国特許第４，６８３，１９５号、同第４，６８３，２０２号及び同第４，９６５，１８８号（参照により本明細書に組み込まれる）の方法を指し、これらは、クローニング又は精製を行わずに遺伝子ＤＮＡの混合物中で標的配列の断片濃度を増加させる方法を含む。標的配列を増幅するためのこのプロセスは、当該技術分野において周知である。
本明細書で使用するとき、用語、「増幅試薬」は、プライマー、核酸テンプレート及び増幅酵素を除いて、増幅に必要とされる試薬（例えば、デオキシリボヌクレオチド三リン酸、緩衝剤など）を指す。典型的には、増幅試薬は、他の反応成分と共に、反応槽（試験管、マイクロウェルなど）内に配置及び収容する。
本明細書で使用するとき、用語、「制限エンドヌクレアーゼ」又は「制限酵素」は、制限部位として既知のヌクレオチドの特異的部位にて又はその近傍にて二本鎖又は一本鎖ＤＮＡを切断できる酵素（例えば、細菌由来の酵素）を指す。この制限部位を含むヌクレオチド配列は、所与の制限エンドヌクレアーゼ又は制限酵素により認識及び切断され、多くの場合、ＤＮＡ断片を挿入される部位になる。制限部位は、発現ベクター又はＤＮＡコンストラクトの中に設計することができる。
当該技術分野において、ＤＮＡ配列をＲＮＡポリメラーゼにより転写することでＲＮＡ配列を製造することができる一方、ＲＮＡ配列を逆転写酵素により逆転写することでＤＮＡ配列を製造することができる。
「宿主株」又は「宿主細胞」は、所望のＤＮＡ配列を含む発現ベクターのために好適な宿主を指す。所望のＤＮＡ配列は、宿主株又は宿主細胞において所望のタンパク質を発現し得る。
「タンパク質」又は「ポリペプチド」又は「ペプチド」は、アミノ酸残基の高分子配列である。１つのアミノ酸のカルボキシル基は、別のアミノ酸のアミノ基に連結される。用語、「タンパク質」及び「ポリペプチド」及び「ペプチド」は、本明細書では互換的に使用され得る。ペプチドは、２つ以上のアミノ酸を含む。ペプチドは、典型的には、ポリペプチド又はタンパク質が含有するアミノ酸よりも少ないアミノ酸を含有する。ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ Ｊｏｉｎｔ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ ｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ（ＪＣＢＮ）に従って定義されるアミノ酸についての一文字コード及び三文字コードは、本開示全体にわたって使用される。一文字のＸは、２０種のアミノ酸のうちのいずれかを指す。ポリペプチドは、遺伝子コードの縮重に起因して、１を超えるヌクレオチド配列によりコードされ得る。
酵素変異体を説明する際、参照を容易にするために典型的には以下の命名法を使用する：元のアミノ酸（１つ又は複数）：位置（１つ又は複数）：置換されたアミノ酸（１つ又は複数）。公認のＩＵＰＡＣ一文字又は三文字アミノ酸略記を採用する。一文字「Ｘ」は、任意のアミノ酸残基を指す。しかしながら、アミノ酸置換の文脈の場合（例えば、「Ｘ００３Ｃ」）、「Ｘ」は、置換から生じるアミノ酸残基以外のアミノ酸残基を指す（例えば、Ｘは、Ｃ以外のアミノ酸残基である）。変異は、典型的には、親アミノ酸についての一文字コード、続いて、アミノ酸配列における３又は２又は１桁のアミノ酸位置番号、次に、置換アミノ酸についての一文字コードにより名付けられる。例えば、グリシン（Ｇ）をアミノ酸セリン（Ｓ）に置換することによりアミノ酸位置８７においてアミノ酸グリシン（Ｇ）を変異させることは、「Ｇ０８７Ｓ」又は「Ｇ８７Ｓ」と表される。典型的には、トレオニンによる位置２におけるグリシンの置換はＧ００２Ｔと表されるが、このような置換はＧ０２Ｔ又はＧ２Ｔとも表され得る。１又は２個のゼロ（「０」）は、単に各アミノ酸位置に対して便宜上三つの数での表記を提供するために含まれ得る。アミノ酸位置「００１」は「１」と同じであり、したがって、「Ａ００１Ｃ」は「Ａ１Ｃ」と同じである。「Ｘ００１Ｇ」はアミノ酸配列中のアミノ酸位置１におけるグリシン（Ｇ）による置換を表し、ここで、グリシンにより置換されることになるアミノ酸は任意のアミノ酸である。複数の変異は、変異間に「−」を挿入することにより、あるいは、変異間にプラス（＋）記号を用いることにより、示される。例えば、アミノ酸配列中のアミノ酸残基位置８７及び９０におけるアミノ酸置換は、「Ｇ０８７Ｓ−Ａ０９０Ｙ」若しくは「Ｇ８７Ｓ−Ａ９０Ｙ」又は「Ｇ８７Ｓ＋Ａ９０Ｙ」若しくは「Ｇ０８７Ｓ＋Ａ０９０Ｙ」のいずれかで表される。欠失については、一文字コード「Ｚ」を使用する。親配列に対する挿入については、一文字コード「Ｚ」は位置番号の左側にある。欠失については、一文字コード「Ｚ」は位置番号の右側にある。挿入については、位置番号は、挿入されるアミノ酸の前の位置番号であり、各アミノ酸に対して０．０１を加える。例えば、位置８７と８８の間に三つのアミノ酸、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）及びチロシン（Ｙ）を挿入することは、「Ｚ０８７．０１Ａ−Ｚ０８７．０２Ｓ−Ｚ０８７．０３Ｙ」と表される。したがって、上記全ての変異に位置１００における欠失を加えると、「Ｇ０８７Ｓ−Ｚ０８７．０１Ａ−Ｚ０８７．０２Ｓ−Ｚ０８７．０３Ｙ−Ａ０９０Ｙ−Ａ１００Ｚ」となる。
「プロ配列」又は「プロペプチド配列」は、プロテアーゼの分泌に必要とされる、シグナルペプチド配列と成熟型プロテアーゼ配列の間のアミノ酸配列を指す。プロ配列又はプロペプチド配列が切断されると、成熟型の活性プロテアーゼが生じる。
用語、「シグナル配列」又は「シグナルペプチド」は、成熟型若しくは前駆体形態のタンパク質の分泌又は直接輸送に関与し得るアミノ酸残基の配列を指す。
シグナル配列は、典型的には、前駆体又は成熟タンパク質の配列に対してＮ末端に位置する。このシグナル配列は、リーダー配列とも示され得る。このシグナル配列は、内在性又は外来性であり得る。一つの代表的な外来性シグナル配列は、枯草菌（Bacillus subtilis）スブチリシンのシグナル配列の最初の七個のアミノ酸残基を、バチルス・レンタス（Bacillus lentus）のシグナル配列（ＡＴＣＣ ２１５３６）の最初の七個以外の部分に融合したものを含む。シグナル配列は、通常、成熟タンパク質には存在しない。シグナル配列は、典型的には、タンパク質の輸送後にシグナルペプチダーゼによりタンパク質から切断される。
用語、「ハイブリッドシグナル配列」は、配列の一部が、発現されることになる遺伝子のシグナル配列に融合した発現宿主から得られる、配列を指す。合成配列を利用することができる。
用語、タンパク質、ポリペプチド又はペプチドの「成熟型」形態は、シグナルペプチド配列及びプロぺプチド配列を持たないタンパク質、ポリペプチド又はペプチドの機能的形態を指す。
用語、タンパク質又はペプチドの「前駆体」形態は、タンパク質のアミノ又はカルボニル末端に作用可能に連結したプロ配列を有する成熟型タンパク質を指す。この前駆体はまた、プロ配列のアミノ末端に作用可能に連結した「シグナル」配列を有し得る。この前駆体はまた、翻訳後の活性に関与する追加のポリヌクレオチドを有し得る（例えば、成熟型タンパク質、ポリペプチド又はペプチドを残してそこから切断されるポリヌクレオチド）。
アミノ酸配列又は核酸配列に関する用語、「野生型」は、そのアミノ酸配列又は核酸配列がネイティブの又は自然発生の配列であることを示す。本明細書で使用するとき、用語、「自然発生」は、自然に見られる（例えば、組み換え法又は化学的方法により操作されていない）任意のもの（例えば、タンパク質、アミノ酸又は核酸配列）を指す。本明細書で使用するとき、用語、「非自然発生」は、自然には見られない任意のものを指す（例えば、実験室で作製された、組み換え又は化学合成された核酸）。
特定のアミノ酸配列中のアミノ酸残基は、参照アミノ酸配列の位置におけるアミノ酸残基と対応させることにより番号付けされ得る。参照アミノ酸配列のアミノ酸残基の位置「と対応する」又は「と対応している」又は「と対応した」位置にある所望のアミノ酸配列のアミノ酸残基は、所望の配列のアミノ酸残基が、参照アミノ酸配列中のアミノ酸残基の位置と等しい又は相同である位置に配置されていることを示す。当業者は、ポリペプチド中の特定の残基位置が相同な参照配列の位置に対応するかどうかを判定することができる。例えば、プロテアーゼ変異体は、既知の技術を用いて参照配列のもの（例えば、配列番号２のＢＰＮ’配列）とアラインメントされ得る。参照配列中のアミノ酸残基の位置は、所望の配列中のアミノ酸残基の番号付けに使用される。したがって、プロテアーゼ変異体のアミノ酸残基は、参照配列の対応するアミノ酸残基位置の番号付けに従って番号付けされ得る。例えば、配列番号２の参照配列中のアミノ酸残基は、所望のプロテアーゼ変異体の各アミノ酸残基のアミノ酸残基位置番号付けを決定するために使用され得る。
本明細書で使用するとき、「相同性」は、配列類似性又は同一性を指し、同一性が好ましい。相同性は、当該技術分野において既知の標準技術を用いて判定され得る（例えば、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２［１９８１］、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３［１９７０］；Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４［１９８８］、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ＰａｃｋａｇｅにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ及びＴＦＡＳＴＡなどのソフトウェアプログラム（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ））、並びにＤｅｖｅｒｅｕｘ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１２：３８７〜３９５［１９８４］を参照されたい）。有用なアルゴリズムの一例は、ＰＩＬＥＵＰである。ＰＩＬＥＵＰは、ペアワイズアラインメントのプログレッシブ法を用いて、一群の関連する配列から複数の配列のアラインメントを行う。ＰＩＬＥＵＰは、アラインメントを行うのに使用されるクラスタリング関係を示す系統樹をプロットすることもできる。ＰＩＬＥＵＰは、Ｆｅｎｇ及びＤｏｏｌｉｔｔｌｅのプログレッシブアラインメントを単純化させて用いる（Ｆｅｎｇ ａｎｄ Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．３５：３５１〜３６０［１９８７］を参照されたい）。この方法は、Ｈｉｇｇｉｎｓ及びＳｈａｒｐにより説明されるものと同様である（Ｈｉｇｇｉｎｓ ａｎｄ Ｓｈａｒｐ，ＣＡＢＩＯＳ ５：１５１〜１５３［１９８９］を参照されたい）。有用なＰＩＬＥＵＰパラメーターとしては、３．００のデフォルトギャップ重みづけ（default gap weight）、０．１０のデフォルトギャップ伸長重みづけ（default gap length weight）及び重みつき末端ギャップ（weighted end gaps）が挙げられる。有用なアルゴリズムの別の例は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．により説明されているＢＬＡＳＴアルゴリズムである（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３〜４１０［１９９０］；及びＫａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３〜５７８７［１９９３］を参照されたい）。特に有用なＢＬＡＳＴプログラムはＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２プログラムである（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．ＥｎＺｙｍｏｌ．２６６：４６０〜４８０［１９９６］を参照されたい）。ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２は、複数の検索パラメーターを使用し、これらのうちのほとんどはデフォルト値に設定される。調製可能なパラメーターは以下の値に設定される：ｏｖｅｒｌａｐ ｓｐａｎ＝１、ｏｖｅｒｌａｐ ｆｒａｃｔｉｏｎ＝０．１２５、ｗｏｒｄ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ（Ｔ）＝１１。ＨＳＰ Ｓ及びＨＳＰ Ｓ２パラメーターは動的な値であり、特定の配列の構成及び、所望の配列を検索する特定のデータベースの構成に依存してプログラム自体により確立される。しかしながら、これらの値は、感度を上昇させるように調整することができる。
対象ポリペプチド配列と参照ポリペプチド配列の間の配列同一性パーセント（配列同一性％又は単に同一性％）は、対象アミノ酸配列が、例えば、アミノ酸配列比較アルゴリズム又は目視点検により、これらの配列が最適にアラインメントされたときの比較長さにわたる参照ポリペプチド配列に対する特定の百分率の分だけ、アミノ酸残基同士の比較に基づいて同一であることを意味する。対象核酸配列と参照核酸配列の間の配列同一性パーセントは同様に、対象ヌクレオチド配列が、これらの配列が最適にアラインメントされたときの比較長さにわたる参照ヌクレオチドに対する特定の百分率の分だけ、核酸残基同士の比較に基づいて同一であることを意味する。
参照配列と所望の対象配列の間の配列同一性パーセント（同一性パーセント又は配列同一性％又は同一性％）は、当業者により容易に判定され得る。２つのポリペプチド配列が共有する同一性パーセントは、例えば、類似性が最大限になるようそれぞれの配列の残基のアラインメントを行い、当該技術分野において既知の配列比較アルゴリズムを用いることにより又は目視点検により配列間の同一のアミノ酸残基の数を判定することにより、各配列中のアミノ酸残基を直接比較することによって、判定することができる。２つの最適にアラインメントされたポリペプチド配列は比較長さにわたって比較することができ、両方のポリペプチド鎖中に同一のアミノ酸残基が生じる最適アラインメントの位置の数を判定することができ、これにより、一致した位置の数を提供することができ、次に、一致した位置の数は比較長さにわたって含まれる位置の合計数で除算される。得られた数に１００を乗じて、参照（又はクエリー）ポリペプチド配列に対する対象ポリペプチド配列の同一性パーセントを得る。２つの核酸配列が共有する同一性パーセントは、最大限の類似性に対してそれぞれの配列の残基のアラインメントを行い、配列比較アルゴリズムを用いることにより又は目視点検により核酸配列間の同一の核酸残基の数を判定することにより、核酸配列中のヌクレオチド残基を直接比較することによって、判定することができる。２つ以上の配列間の同一性パーセントはまた、これらの配列が特定の同一性パーセントであるというように記載されてもよい。
配列同一性を判定するのに好適であるアルゴリズムの例は、ＢＬＡＳＴアルゴリズムである（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３〜４１０［１９９０］を参照されたい）。ＢＬＡＳＴ分析を行うためのソフトウェアは、米国国立生物工学情報センター（National Center for Biotechnology Information）を通じて公に入手可能である。このアルゴリズムは、まず、データベース配列中の同じ長さのワードとアラインメントを行ったときに一致するか又はある程度ポジティブであると評価された（positive-valued）閾値スコアＴを満たすかのいずれかである問い合わせ配列中の長さＷの短いワードを同定することにより、高スコアの配列ペア（ＨＳＰ）を同定する。これらの最初にヒットした隣接ワードは、これらを含有するより長いＨＳＰを見つけるための開始点として働く。ワードのヒットは、累積アラインメントスコアが増加し得る限り比較されている２つの配列の各々に沿って両方向に拡張される。ワードのヒットの拡張は、次の場合に止まる：累積アラインメントスコアが最大達成値から量Ｘだけ減少する、累積スコアがゼロ以下になる、又は、いずれかの配列の末端に到達する。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメーターＷ、Ｔ及びＸは、感度及びアラインメントの速度を決定する。ＢＬＡＳＴプログラムは、デフォルトとして、１１のワード長さ（Ｗ）、５０のＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ａｎｄ Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５［１９９２］を参照されたい）アラインメント（Ｂ）、１０の期待値（expectation）（Ｅ）、Ｍ’５、Ｎ’−４及び両方の鎖の比較を用いる。
次に、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、２つの配列間の類似性の統計分析を行う（例えば、上記Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌを参照されたい）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムにより提供される類似性の一つの尺度は、最小和確率（smallest sum probability）（Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌクレオチド又はアミノ酸配列間の一致が偶然により生じ得る確率の指標を提供する。例えば、プロテアーゼをコードする核酸に対する試験核酸の比較において最小和確率が約０．１未満、より好ましくは約０．０１未満、最も好ましくは約０．００１未満である場合、核酸は、本発明のプロテアーゼをコードする核酸と同様であると考えられる。試験核酸がプロテアーゼポリペプチドをコードする状況では、比較が約０．５未満、より好ましくは約０．２未満の最小和確率をもたらす場合、試験核酸は特定のプロテアーゼをコードする核酸と同様であると考えられる。
「最適アラインメント」又は「最適アラインメントを行った」は、最高の同一性パーセントスコアを与える２つ（以上）の配列のアラインメントを指す。例えば、２つのポリペプチド配列の最適アラインメントは、各配列中の同一のアミノ酸残基の最大数が共にアラインメントされているように手動で配列のアラインメントを行うことにより、あるいは、本明細書に記載の又は当該技術分野において既知の、ソフトウェアプログラム又は手順を用いることにより、達成することができる。２つの核酸配列の最適アラインメントは、各配列中の同一のヌクレオチド残基の最大数が共にアラインメントされているように手動で配列のアラインメントを行うことにより、あるいは、本明細書に記載の又は当該技術分野において既知の、ソフトウェアプログラム又は手順を用いることにより、達成することができる。
２つの配列（例えば、ポリペプチド配列）が、規定のアミノ酸置換マトリックス、ギャップ存在ペナルティ（ギャップオープンペナルティとも呼ばれる）及びギャップ伸張ペナルティなどの規定パラメーターを用い、このペアの配列について最高の同一性スコアが得られるようアラインメントされた場合、「最適アラインメントが行われた」とみなされ得る。ＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（上記Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ａｎｄ Ｈｅｎｉｋｏｆｆを参照されたい）は、多くの場合、ポリペプチド配列アラインメントアルゴリズム（例えば、ＢＬＡＳＴＰ）においてデフォルトのスコアリング置換マトリックスとして使用される。ギャップ存在ペナルティはアラインメントされた配列の１つにアミノ酸ギャップが１つ導入された際に課せられ、ギャップ伸張ペナルティはギャップ中の各残基位置に対して課される。用いられる代表的なアラインメントは以下のものである：ＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス、ギャップ存在ペナルティ＝１１、及びギャップ伸張ペナルティ＝１。アラインメントスコアは、アラインメントが開始及び終了する各配列のアミノ酸位置により（例えば、アラインメントウィンドウ）、並びに、場合によっては可能な限り最高の類似性スコアを達成するように一方若しくは両方の配列の中に１つ若しくは複数のギャップを挿入することにより、決定される。
２つ以上の配列間の最適アラインメントは、目視点検により手動で、あるいは、コンピュータ（例えば、アミノ酸配列に対するＢＬＡＳＴＰプログラム及び核酸に対するＢＬＡＳＴＮプログラム（例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９〜３４０２（１９９７）を参照されたい。米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）のウェブサイトも参照されたい。）又はＣＬＵＳＴＡＬＷプログラムが挙げられるがこれらに限定されない）を使用することにより、判定することができる。
所望のポリペプチドが参照ポリペプチドのアミノ酸配列に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は９９．５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む場合、所望のポリペプチドは参照ポリペプチドに対して「実質的に同一」であると言われてもよい。２つのこのようなポリペプチドの間の同一性パーセントは、最適アラインメントを行われた２つのポリペプチド配列の検査により手動で、又は、標準的なパラメーターを用いるソフトウェアプログラム若しくはアルゴリズム（例えば、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、ＣＬＵＳＴＡＬ）を使用することにより、判定することができる。２つのポリペプチドが実質的に同一であることの一指標は、第一ポリペプチドが第二ポリペプチドと免疫交差反応性であることである。典型的には、保存的なアミノ酸置換により異なるポリペプチドは、免疫交叉反応性である。したがって、ポリペプチドは、例えば、２つのペプチドが１つの保存的アミノ酸置換又は１つ以上の保存的アミノ酸置換のみで異なる場合、第二ポリペプチドに対して実質的に同一である。
所望の核酸が参照核酸のヌクレオチド配列と少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は９９．５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む場合、所望の核酸は、参照核酸に対して「実質的に同一」であると言われてもよい。２つのこのような核酸の間の同一性パーセントは、２つの最適アラインメントを行った核酸配列の検査により手動で、又は、標準的なパラメーターを用いるソフトウェアプログラム若しくはアルゴリズム（例えば、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、ＣＬＵＳＴＡＬ）を使用することにより、判定することができる。２つの核酸配列が実質的に同一であることの一指標は、２つの核酸分子が厳密な条件下で（例えば、中度〜高度に厳密な範囲内で）互いにハイブリッド形成することである。
本明細書で使用するとき、所望の特定成分に関する「単離された」は、成分が他の成分を本質的に又は実質的に含まないことを意味する。例えば、「単離された」ポリペプチドは、例えば、他のポリペプチド及び細胞成分が挙げられるがこれらに限定されない他の成分を本質的に又は実質的に含まないことを意味する。「単離された」核酸は、核酸が、例えば他の核酸又は細胞成分が挙げられるがこれらに限定されない他の成分を本質的に又は実質的に含まないことを意味する。この用法の目的のために、「単離された」は、ライブラリ（例えば、スクリーニングライブラリ）の一部ではない核酸又はポリペプチドを指す。
純度及び均一性は、典型的には、ポリアクリルアミドゲル電気泳動又は高速液体クロマトグラフィーなどの分析化学技術を用いて判定される。調製液中に存在する主要なタンパク質又は核酸が実質的に精製される。用語、「精製された」は、核酸又はタンパク質が、電気泳動ゲル、クロマトグラフ溶出液、及び／又は密度勾配遠心分離にかけた媒質において、本質的に１つのバンドを生じることを示す。具体的には、「精製された」は、単離された場合に、単離体が、単離体の少なくとも８５重量％、９０重量％、９１重量％、９２重量％、９３重量％、９４重量％、９５重量％、９６重量％、９７重量％、９８重量％、９９重量％、９９．５重量％又はそれ以上の核酸又はタンパク質を含有することを意味する。精製されたポリぺプチドは、例えば、実験室合成、クロマトグラフィー（例えば、高速液体クロマトグラフィー）調製電気泳動、ポリアクリルアミドゲル電気泳動後に着色しながらの視覚化、遠心分離、沈殿、親和性精製などが挙げられるがこれらに限定されない多くの方法により入手され得る（一般的には、Ｒ Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎ．Ｙ．（１９８２），Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ ＥｎＺｙｍｏｌ．，Ｖｏｌ．１８２：Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．Ｎ．Ｙ．（１９９０）を参照されたい）。本発明は、単離又は精製されたポリペプチド（例えば、本発明の単離されたプロテアーゼ変異体又はスブチリシン変異体）及び単離又は精製された核酸（例えば、本発明のプロテアーゼ変異体又はスブチリシン変異体をコードする核酸）を含む。
関連する意味において、本発明は、本発明の１つ以上のポリペプチド（例えば、本発明の１つ以上のプロテアーゼ変異体）又は本発明の１つ以上の核酸（例えば、本発明の１つ以上のプロテアーゼ変異体をコードする１つ以上の核酸）などの本発明の１つ以上の分子について組成物を濃縮する方法を提供する。組成物は、精製又は濃縮技術の適用後に分子の濃度が実質的に増加するとき、分子について濃縮される。実質的に純粋なポリペプチド又は核酸は、典型的には、特定の組成物中で全ての分子種の少なくとも約６０重量％、７０重量％、８０重量％、８５重量％、９０重量％、９１重量％、９２重量％、９３重量％、９４重量％、９５重量％、９６重量％、９７重量％、９８重量％、９９重量％、９９．５重量％又はそれ以上を構成する。
本明細書で使用するとき、用語、「コンビナトリアル変異誘発」は、参照核酸配列の核酸変異体のライブラリが作製される方法を指す。これらのライブラリでは、変異体は、予め確定された変異セットから選択される１つ又は複数の変異を含有する。この方法はまた、予め確定された変異セットのメンバーではないランダム変異を導入するための手段も提供する。一部のこのような方法としては、米国特許第６，５８２，９１４号に記載のものが挙げられ、本明細書に参照により組み込まれる。一部のこのようなコンビナトリアル変異誘発方法は、市販のキット（例えば、ＱＵＩＫＣＨＡＮＧＥ（登録商標）Ｍｕｌｔｉ Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ Ｋｉｔ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ））に実体化された方法を含む及び／又は包含する。
本明細書で使用するとき、プロテアーゼ変異体に関連して使用される「改善された特性」を有するとは、プロテアーゼ変異体が参照又は親プロテアーゼと比較して改善された特性を有することを指す。本発明のプロテアーゼ変異体は、以下の特性のうちの１つ以上を呈し得る：向上した又は改善されたタンパク質分解活性、向上した又は改善された安定性、向上した又は改善された表面若しくは物品のクリーニング性能、向上した又は改善されたクリーニング性能、向上した又は改善された布地若しくは洗濯物クリーニング性能又は洗浄性能、向上した又は改善された手洗い性能、向上した又は改善された手若しくは手動での食器洗浄性能、向上した又は改善された自動食器洗浄性能、参照プロテアーゼ又は所望の親プロテアーゼと比較して向上した又は改善された洗濯性能。
本明細書で使用するとき、用語、「機能アッセイ」は、タンパク質の活性の指標を提供するアッセイである。この用語は、典型的には、タンパク質がその通常の能力で機能し得るかについて解析されるアッセイシステムを指す。例えば、酵素の場合、機能アッセイは、反応を触媒することにおける酵素の有効性を判定することを含む。
分子に関する文脈における用語、「特性」又はその文法的に等価な表現は、選択又は検出され得る分子の任意の特徴若しくは特質を指し得る。例えば、ポリペプチドの文脈では、特性は、酵素活性（例えば、タンパク質分解活性）、安定性又は他の特性であり得る。
「変異」核酸配列は、典型的には、宿主細胞の野生型配列に生じる少なくとも１つのコドンにおける変異を有し、その結果、変異核酸配列の発現産物が、野生型タンパク質と比較して改変されたアミノ酸配列を有するタンパク質になる、核酸配列を指す。発現産物は、改変された機能的能力（例えば、向上した酵素活性）を有し得る。
本明細書で使用するとき、用語、「正味電荷」は、分子内に存在する全ての電荷の和として定義される。「正味電荷の変化」は、親タンパク質分子の正味電荷とは異なる正味電荷を有するタンパク質変異体を得るために親タンパク質分子に対して生じさせることができる（すなわち、この変異体は、親分子の正味電荷と同じではない正味電荷を有する）。例えば、タンパク質の中性アミノ酸を負に帯電しているアミノ酸で置換すること、又は、タンパク質の正に帯電しているアミノ酸を中性アミノ酸で置換することにより、非改変タンパク質に対して−１の正味電荷が生じる。タンパク質の正に帯電したアミノ酸を負に帯電したアミノ酸に置換することにより、非改変タンパク質に対して−２の正味電荷が生じる。タンパク質の中性アミノ酸を正に帯電しているアミノ酸で置換すること、又は、タンパク質の負に帯電しているアミノ酸を中性アミノ酸で置換することにより、親タンパク質に対して＋１の正味電荷が生じる。タンパク質の負に帯電したアミノ酸を正に帯電したアミノ酸に置換することにより、非改変タンパク質に対して＋２の正味電荷が生じる。親タンパク質の正味電荷はまた、１つ以上の帯電したアミノ酸の欠失及び／又は挿入により変えることができる。
ポリペプチドに関する用語、「熱的に安定」及び「熱安定」及び「熱安定性」は、そのポリペプチドが例えば、高温への曝露を介するといった、熱のみにより引き起こされるその活性における恒久的変化に対して耐性であることを示す。例えば、熱的に安定な酵素は、その酵素が高温への曝露によるものなどの、熱のみにより引き起こされる、酵素活性の恒久的な変化に対して耐性であることを意味する。典型的には、熱的に安定であるプロテアーゼは、例えば、少なくとも約６０分、１２０分、１８０分、２４０分、３００分などといった所与の時間にわたって高温に曝露された後でも、そのタンパク質分解活性の少なくとも約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％を保持することができる。
ポリペプチド又はプロテアーゼのクリーニング活性は、プロテアーゼにより達成されるクリーニング性能を指し得る。クリーニング活性は、対象、物品又は表面における様々な酵素反応性のシミ（例えば、食品、植物、血液、インク、血液／ミルク／インク、ミルク／油／色素、卵黄、ミルク、油、及び／又は卵タンパク質）のうちの１つ以上のクリーニングについての様々なアッセイを使用することにより、判定され得る。ポリペプチド（例えば、本発明のポリペプチド（プロテアーゼ変異体など）又は参照ポリペプチド（例えば、参照プロテアーゼ））のクリーニング性能は、対象、物品又は表面にあるシミを標準的な洗浄条件にかけ、様々なクロマトグラフィー、分光光度法又は他の定量的方法を用いることによりシミが除去された程度を評価することによって、判定され得る。代表的なクリーニングアッセイ及び方法は当該技術分野において既知である、例えば、国際公開第９９／３４０１１号及び米国特許第６，６０５，４５８号に記載のものが挙げられるがこれらに限定されず、これらの特許はどちらも参照により本明細書に組み込まれ、並びに、これらのクリーニングアッセイ及び方法は、下記に提供されるパートＩの実施例及びパートＩＩの実施例に含まれる。
用語、プロテアーゼ変異体又は参照プロテアーゼの「クリーニング有効量」は、特定のクリーニング組成物において所望されるレベルの酵素活性を達成するプロテアーゼの量を指す。このような有効量は、使用される具体的なプロテアーゼ、クリーニング用途、クリーニング組成物の特定の組成、液体又は乾燥（例えば、顆粒、タブレット、バー）組成物のいずれが必要とされるか、などのような多くの要因に基づき、当業者により容易に確かめられる。
用語、「クリーニング添加材料」は、クリーニング組成物中に含まれる本発明のプロテアーゼ変異体以外の任意の液体、固体、ガス状材料を指す。本発明のクリーニング組成物は、１つ以上のクリーニング添加材料を含み得る。各クリーニング添加材料は、典型的には、クリーニング組成物の具体的な型及び形態（例えば、液体、顆粒、粉末、バー、ペースト、スプレー、タブレット、ゲル、フォーム又は他の組成）に基づいて選択される。好ましくは、各クリーニング添加材料は、本組成物中で使用されるプロテアーゼ酵素と混合可能である。
クリーニング活性の文脈における用語、「向上した性能」は、標準的な洗浄サイクル及び／又は複数の洗浄サイクル後の通常の評価により判定されるような、卵、ミルク、植物、インク、油及び／又は血液などの特定の酵素反応性シミにおける酵素による、上昇した又はより大きなクリーニング活性を指す。
クリーニング活性の文脈における用語、「減少した性能」は、標準的な洗浄サイクル後の通常の評価により判定されるような、卵、ミルク、植物又は血液などの特定の酵素反応性シミにおける酵素による、低下した又はより小さなクリーニング活性を指す。
本明細書で使用するとき、用語、「施設用クリーニング組成物」は、学校、病院、工場、商店、企業、ビル、レストラン、オフィス複合施設及びビル、加工及び／又は製造工場、動物病院、ファクトリー農場、ファクトリー牧場が挙げられるがこれらに限定されない施設における使用に好適な製品を指す。
本明細書で使用するとき、「布地ケア製品及びホームケア製品」は、それが販売されている形態で使用又は消費されることが通常意図され、布地、硬質表面並びに布地ケア及びホームケアの領域内の任意の他の表面を処理するためのものである製品又はデバイスを指し、例えば、エアフレッシュナー及び香料送達系などの空気ケア、自動車ケア、食器洗浄、布地コンディショニング（柔軟化及び／又はフレッシュニング）、洗濯洗浄性、洗濯及びすすぎ添加剤及び／又はケア、床及び便器クリーナーなどの硬質表面クリーニング及び／又は処理、並びに消費者及び施設用途のための他のクリーニング製品が挙げられる。
本明細書で使用するとき、用語、「クリーニング組成物」及び「クリーニング配合物」は、例えば、布地、洗濯、食器、食卓食器、コンタクトレンズ、他の固体基材、毛髪（ヒト又は動物の毛髪を含む）（シャンプー）、皮膚（石鹸、化粧品及びクリーム）、歯（マウスウォッシュ、練り歯磨き）、非布地及びホームケア対象物、フィルター、膜（例えば、限外濾過膜が挙げられるがこれに限定されない濾過膜）、硬質表面、並びに、例えば、机（机の上又は脚）、壁、別の家具物品又は対象、床、天井などの硬質表面が挙げられるがこれらに限定されない他の表面、が挙げられるがこれらに限定されない、クリーニングすべき物品から、望まれない化合物を除去するのに使用が見出される組成物を指す。クリーニング組成物又はクリーニング配合物は、例えば、シャンプー（ヒト又は動物の毛髪のクリーニング用）、石鹸、クリーム又は化粧品（皮膚クリーニング及び／又はスキンケア用）、マウスウォッシュ（口腔ケア用）、練り歯磨き（歯クリーニング及び／又は口腔ケア用）が挙げられるがこれらに限定されないパーソナルケア用途及び／又はパーソナルケア物品に有用であり得る。これらの用語は、この組成物又は配合物が、組成物又は配合物において使用されるプロテアーゼ及び／又は他の酵素と混合可能である限り、所望される特定のタイプのクリーニング組成物又は配合物及び製品の形態（例えば、液体、ゲル、顆粒又はスプレー組成物）について選択される任意の材料／化合物を包含する。クリーニング組成物又は配合物材料の具体的な選択は、クリーニングすべき表面、対象又は物品（例えば、布地）及び使用中のクリーニング条件のために所望される組成物又は配合物の形態を考慮することにより、容易に行われる。一態様では、クリーニング組成物又は配合物は、布地ケア製品及びホームケア製品（例えば、洗濯物をクリーニングするためのクリーニング組成物）であり得る。別の態様では、クリーニング組成物又は配合物は、布地ケア製品及びホームケア製品ではない（例えば、コンタクトレンズ、毛髪、歯又は皮膚をクリーニングするための、あるいは、パーソナルケア用途及び／又はパーソナルケア物品に有用な、クリーニング組成物）。
クリーニング組成物及びクリーニング配合物は、任意の対象、物品及び／又は表面を、クリーニング、漂白、消毒及び／又は殺菌するのに好適である任意の組成物を含む。このような組成物及び配合物としては、例えば、クリーニング又は洗剤組成物（例えば、液体、タブレット、ゲル、バー、顆粒及び／又は固体の、洗濯物クリーニング又は洗剤組成物、並びに微細布地洗剤組成物）、硬質表面クリーニング組成物及び配合物（例えば、ガラス、木、セラミック及び金属の、カウンタートップ及び窓、カーペットクリーナー、オーブンクリーナー、布地フレッシュナー、布地柔軟剤）、並びに、繊維、洗濯促進クリーニング又は洗剤組成物、洗濯時添加クリーニング組成物、及び洗濯シミ抜きクリーニング組成物、食器洗浄組成物、例えば、手又は手動での食器洗浄組成物（例えば、「手」又は「手動」食器洗浄洗剤）及び自動食器洗浄組成物（例えば、「自動食器洗浄洗剤」）が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用するとき、特に示さない限り、クリーニング組成物又はクリーニング配合物は、顆粒又は粉末形態の汎用又は強力洗浄剤、特にクリーニング洗剤、液体、顆粒、ゲル、固体、タブレット又はペースト形態の汎用洗浄剤、特にいわゆる強力液体（ＨＤＬ）洗剤又は強力粉末洗剤（ＨＤＤ）タイプ、液体微細布地洗剤、手又は手動の食器洗浄剤（高発泡タイプのものなど）、手又は手動の食器洗浄、自動食器洗浄又は食卓食器若しくは食卓用器具洗浄剤、例えば、家庭用途及び施設用途のための様々なタブレット、粉末、固体、顆粒、液体、ゲル及びすすぎ補助タイプの剤、液体クリーニング及び消毒剤、例えば、抗菌手洗いタイプ、クリーニングバー、マウスウォッシュ、義歯クリーナー、自動車用シャンプー、カーペットシャンプー、浴室クリーナー、パーソナルケア物品（例えば、ヒト（及び他の動物）用毛髪シャンプー及び／又は毛髪リンス、シャワージェル及び発泡入浴剤、スキンケア物品、化粧品、クリーム、浴用及びパーソナルのヒト向け石鹸）、金属クリーナー、並びに、漂白添加剤及び「ステインスティック（stain-stick）」又は前処理タイプなどのクリーニング補助剤を含む。一部の顆粒組成物は「コンパクト」形態であり、一部の液体組成物は「濃縮」形態である。
一態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体又はポリペプチドを含む、クリーニング組成物又は洗剤組成物を提供し、ここで、このクリーニング組成物又は洗剤組成物は、コンタクトレンズのクリーニングに有用である。別の態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体又はポリペプチドを含む、クリーニング組成物又は洗剤組成物を提供し、ここで、このクリーニング組成物又は洗剤組成物は、パーソナルケア用途に有用である。別の態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体又はポリペプチドを含む、クリーニング組成物又は洗剤組成物を提供し、ここで、このクリーニング組成物又は洗剤組成物は、ヒトの毛髪及び／又は動物の毛髪などの、毛髪のクリーニング又はすすぎに有用である（例えば、毛髪シャンプー及び／又は毛髪リンス）。別の態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体又はポリペプチドを含む、クリーニング組成物又は洗剤組成物を提供し、ここで、このクリーニング組成物又は洗剤組成物は、皮膚（例えば、ヒト及び／又は動物の皮膚）のクリーニング又は処理に有用である（例えば、シャワージェル、発泡入浴剤、スキンケアクリーナー、化粧品、クリーム及び／又は浴用石鹸）。別の態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体又はポリペプチドを含む、クリーニング組成物又は洗剤組成物を提供し、ここで、このクリーニング組成物又は洗剤組成物は、歯及び／若しくは義歯のクリーニングに、並びに／又は口腔ケアに、有用である。このようなクリーニング組成物又は洗剤組成物は、少なくとも１つの添加剤成分又は担体、少なくとも１つの追加酵素、少なくとも１つのビルダー、及び／又は少なくとも１つの界面活性剤を含み得、並びに、これらの使用に適した形態で配合され得る。このようなクリーニング又は洗剤組成物はリン酸塩を含有してもよく、あるいは、リン酸塩を含まなくてもよい。本発明の組成物に関する更なる詳細は、本明細書において他箇所で提供される。
本明細書で使用するとき、「布地クリーニング組成物」は、洗濯添加組成物、並びに、シミの付いた布地（例えば、衣類、リネン、及び他の織物材料）の浸漬及び／又は前処理での使用に好適な組成物などの、手及び機械での洗濯洗剤組成物を含む。
本明細書で使用するとき、「非布地クリーニング組成物」は、例えば、手による又は手動又は自動食器洗浄洗剤組成物、口腔クリーニング組成物、義歯クリーニング組成物及びパーソナルクレンジング組成物が挙げられるがこれらに限定されない非繊維（すなわち、非布地）表面クリーニング組成物を含む。
本明細書で使用するとき、用語、「洗剤組成物」又は「洗剤配合物」は、特定の布地及び／又は非布地対象又は物品などの、汚れた若しくは汚い対象のクリーニングのために洗浄媒質中で使用することを意図された組成物に関して、使用される。本発明のこのような組成物は、任意の特定の洗剤組成物又は配合物に限定されない。実際、本発明の洗剤は、本発明のプロテアーゼ変異体を少なくとも１つ含み得、加えて、１つ以上の界面活性剤、トランスフェラーゼ、加水分解酵素、ペルヒドロラーゼ、オキシドレダクターゼ、ビルダー（例えば、ビルダー塩）、漂白剤、漂白活性剤、青味剤、蛍光染料、凝固阻害剤、マスキング剤、酵素活性剤、抗酸化剤及び／又は安定化剤を含み得る。場合によっては、ビルダー塩は、シリケート塩とホスフェート塩の混合物であり、好ましくはケイ酸塩（例えば、メタケイ酸ナトリウム）がリン酸塩（例えば、トリポリリン酸ナトリウム）よりも多い。クリーニング組成物又は洗剤組成物が挙げられるがこれらに限定されない本発明の一部の組成物は、リン酸塩（例えば、リン酸塩又はリン酸塩ビルダー）を全く含有しない。
本明細書で使用するとき、「食器洗浄組成物」は、カトラリーなどの食卓食器をクリーニングするためのすべての形態の組成物を指し、顆粒及び液体形態が挙げられるがこれらに限定されない。一部の態様では、食器洗浄組成物は、自動食器洗浄機において使用を見出される「自動食器洗浄」組成物である。本発明が任意の特定のタイプの食卓食器組成物に限定されることは意図されない。実際、本発明は、セラミックス、プラスチック、金属、陶器、ガラス、アクリルなどが挙げられるがこれらに限定されない任意の材料の食卓食器（例えば、皿、コップ、グラス、ボウルなどが挙げられるがこれらに限定されない食器）及びカトラリー（例えば、スプーン、ナイフ、フォーク、給仕用器具などが挙げられるがこれらに限定され得ない器具）のクリーニングにおいて使用を見出される。用語、「食卓食器」は、本明細書では食器及びカトラリーの両方に関して使用される。
本明細書で使用するとき、用語、「漂白」は、十分な長さの時間にわたって及び／又は適切なｐＨで及び／又は増白をもたらす（すなわち、白くする）温度条件で、材料（例えば、布地、洗濯物、パルプなど）又は表面を処理すること、並びに／あるいは、材料をクリーニングすることを指す。漂白に好適な化学物質の例としては、例えば、ＣｌＯ２、Ｈ２Ｏ２、過酸、ＮＯ２などが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用するとき、プロテアーゼ（例えば、本発明のプロテアーゼ変異体）の「洗浄性能」は、組成物にプロテアーゼ変異体を添加しない洗剤と比較して洗剤に追加のクリーニング性能をもたらす、洗浄に対するプロテアーゼ変異体の寄与を指す。洗浄性能は、関連する洗浄条件下で比較される。一部の試験システムでは、洗剤組成、泡濃度、水硬度、洗浄機構、時間、ｐＨ及び／又は温度などの他の関連する要因は、特定の市場区分（例えば、手による又は手動食器洗浄、自動食器洗浄、食卓食器クリーニング、食卓用器具クリーニング、布地クリーニングなど）における家庭向け用途に典型的な条件を模倣するようなやり方で制御することができる。
用語、「関連する洗浄条件」は、本明細書では、特に洗浄温度、時間、洗浄機構、泡濃度、洗剤のタイプ及び水硬度といった、手による食器洗浄、自動食器洗浄又は洗濯洗剤市場区分において実際に家庭で使用される条件を示すために使用される。
用語、「改善された洗浄性能」は、関連する洗浄条件下でシミ除去においてより良好な仕上がりが得られることを示すために、あるいは、対応する野生型又は出発親プロテアーゼと比較して同じ仕上がりを得るために必要とされるプロテアーゼ変異体が重量に基づいてより少量であることを示すために、使用される。
本明細書で使用するとき、用語、「消毒」は、汚染物質を表面から除去すること、並びに、物品の表面上の細菌を阻害又は殺すことを指す。本発明は、任意の特定の表面、物品又は、除去されるべき汚染物質若しくは細菌に限定されることを意図しない。
本明細書のクリーニング組成物の「コンパクト」形態は、密度により最も反映され、組成の点では、無機充填剤塩の量により最もよく反映される。無機充填剤塩は、粉末形態の洗剤組成物の従来成分である。従来の洗剤組成物では、充填剤塩は、典型的には組成物全体の約１７〜約３５重量％の実質量で存在する。対照的に、コンパクト組成物では、充填剤塩は、組成物全体の約１５％を超えない量で存在する。充填剤塩は、組成物の約１０重量％又はより好ましくは約５重量％を超えない量で存在し得る。無機充填剤塩は、硫酸塩及び塩化物のアルカリ及びアルカリ土類金属塩から選択することができる。この充填剤塩は、硫酸ナトリウムであってもよい。
所与のアミノ酸配列中のアミノ酸残基の位置は、典型的には、配列番号２に示されるバチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’アミノ酸配列の対応するアミノ酸残基の位置の番号付けを用いて、番号付けされる。したがって、配列番号２のバチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’アミノ酸配列は、参照配列として機能する。本明細書に記載のプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列などの所与のアミノ酸配列は、本明細書に記載のようにアラインメントアルゴリズムを用いてＢＰＮ’配列（配列番号２）とアラインメントを行うことができ、ＢＰＮ’配列中のアミノ酸残基とアラインメントする（好ましくは最適にアライメントする）所与のアミノ酸配列中のアミノ酸残基は、スブチリシンＢＰＮ’配列中の対応するアミノ酸残基を参照することにより、便宜上番号付けすることができる。
一般に、本明細書で使用される命名法、並びに、下記の細胞培養、分子遺伝学、分子生物学、核酸化学及びタンパク質化学における実験室手順の多くは周知であり、当業者により一般的に採用されている。組み換え核酸の製造及び操作方法、核酸合成方法、細胞培養方法及び導入遺伝子組み込み（例えば、トランスフェクション、電気穿孔）方法は、当業者に既知であり、数多くの標準テキストに記載されている。オリゴヌクレオチドの合成及び精製工程は、典型的には、仕様に従って実行される。技術及び手順は、一般に、当該技術分野で周知の従来方法に従って、並びに、この文書全体にわたって提供される様々な一般的参照文献に従って、実行される。文献中の手順は、当業者に周知であると考えられ、読み手の便宜のために提供される。
本発明の１つ以上のプロテアーゼ変異体などのプロテアーゼ（プロテアーゼ変異体を含む）、並びに、香料を含む封入体、色調剤、両親媒性クリーニングポリマー及びこれらの混合物からなる群から選択される物質を含んでもよく、上記組成物の任意の態様の残部が１つ以上の添加剤物質からなる布地ケア製品及びホームケア製品が開示される。上記布地ケア製品及びホームケア製品の一態様では、上記布地ケア製品及びホームケア製品は、布地ケア製品及びホームケア製品の総重量に基づいて、約０．００５重量パーセント（０．０００５重量％）〜約０．１重量％、約０．００１重量％〜約０．０５重量％、又は更には約０．００２重量％〜約０．０３重量％の上記プロテアーゼを含んでもよい。上記布地ケア製品及びホームケア製品の一態様では、上記布地ケア製品及びホームケア製品は、布地ケア製品及びホームケア製品の総重量に基づいて、約０．００００３重量％〜約０．１重量％、約０．００００８重量％〜約０．０５重量％、又は更には約０．０００１重量％〜約０．０４重量％の布地色調剤を含んでもよい。上記布地ケア製品及びホームケア製品の一態様では、上記布地ケア製品及びホームケア製品は、布地ケア製品及びホームケア製品の総重量に基づいて、約０．００１重量％〜約５重量％、約０．０１重量％〜約２重量％、又は更には約０．０３重量％〜約０．５重量％の香料カプセルを含んでもよい。上記布地ケア製品及びホームケア製品の一態様では、上記布地ケア製品及びホームケア製品は、布地ケア製品及びホームケア製品の総重量に基づいて、約０．１重量％〜約５重量％、約０．２５重量％〜約２．５重量％、又は更には約０．３重量％〜約１．５重量％の両親媒性クリーニングポリマーを含んでもよい。
本発明のポリぺプチド
本発明は、新規ポリペプチドを提供し、これは「本発明のポリペプチド」と集合的に呼ばれ得る。本発明のポリぺプチドは、単離された、組み換え体である、実質的に純粋な又は非自然発生型のプロテアーゼ変異体を含み、例えば、スブチリシンプロテアーゼ変異体ポリペプチドが挙げられ、これは酵素活性（例えば、タンパク質分解活性）及び／又は本明細書の他箇所でより詳細に説明されている追加の特性（例えば、クリーニング活性、安定性など）を有する。本発明のポリペプチドは、単離された、組み換え体である、実質的に純粋な又は自然発生した冷水プロテアーゼを含み、タンパク質分解活性、クリーニング活性、安定性、本明細書の他箇所で説明されている他の特性を有する。冷水プロテアーゼなどの本発明のこのようなポリペプチドは、既知のプロテアーゼと比較して向上した性能（例えば、向上したタンパク質分解活性、向上したクリーニング性能又は活性、向上した安定性など）を有し得る。本発明のポリぺプチドは、クリーニング用途に有用であり、クリーニングする必要のある（例えば、物品の表面の）物品又は表面をクリーニングする方法において有用であるクリーニング組成物中に組み込まれ得る。タンパク質分解活性を有する本発明のポリぺプチドは、例えば、布地ケアクリーニング組成物及びホームケアクリーニング組成物などの布地ケア製品及びホームケア製品で有用である。タンパク質活性を有する本発明の一部のポリペプチドは、パーソナルケア組成物で有用である。タンパク質活性を有する本発明のポリぺプチドはまた、非布地ケア製品及び非ホームケア製品で有用である（すなわち、布地ケア製品でもホームケア製品でもない製品が本明細書に記載される）。本発明のプロテアーゼ変異体は、スブチリシンプロテアーゼ変異体であり得る。本発明は、バチルス種プロテアーゼ変異体及びバチルス種スブチリシンプロテアーゼ変異体を含む。
本発明のポリぺプチドは、本明細書全体にわたって開示され、これには下記に提供されるパートＩ実施例及びパートＩＩ実施例が挙げられるがこれらに限定されない。本発明は、タンパク質分解活性を有する単離された、組み換え体である、実質的に純粋な又は非自然発生型のプロテアーゼ変異体（例えば、スブチリシン変異体）を含み、このポリペプチドは、下記のパートＩ及びパートＩＩ実施例のいずれかに記載の特定のプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列に対して少なくとも約６０％、７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一態様では、本発明は、タンパク質分解活性を有する単離された、組み換え体である、実質的に純粋な又は非自然発生型のスブチリシンポリペプチドを含み、このポリペプチドは、配列番号２のＢＰＮ’配列のプロテアーゼ変異体であり、上記ポリペプチドは、配列番号２に対して少なくとも約６０％、７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の配列同一性及びパートＩ実施例のいずれかに記載のアミノ酸置換の組を有するアミノ酸配列を含む。一態様では、本発明は、タンパク質分解活性を有する単離された、組み換え体である、実質的に純粋な又は非自然発生型のスブチリシンポリペプチドを含み、このポリペプチドは、配列番号７５５のＧＧ３６配列のプロテアーゼ変異体であり、上記ポリペプチドは、配列番号７５５に対して少なくとも約６０％、７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の配列同一性及びパートＩＩ実施例のいずれかに記載のアミノ酸置換の組を有するアミノ酸配列を含む。
第一態様では、本発明は、親プロテアーゼ酵素の単離された又は非自然発生型のポリペプチドプロテアーゼ変異体を提供し、この変異体はタンパク質分解活性を有し、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される配列番号２のアミノ酸位置に対応する１つ以上のアミノ酸位置において変異を含むアミノ酸配列を含み、ここで、変異の少なくとも１つは独立して、（ｉ）この位置を占めるアミノ酸残基の上流又は下流における１つ以上のアミノ酸残基の挿入、（ｉｉ）この位置を占めるアミノ酸残基の欠失、又は（ｉｉｉ）異なるアミノ酸残基による、この位置を占めるアミノ酸残基の置換、であり、ここで、各アミノ酸位置は、配列番号２のアミノ酸配列と変異体のアミノ酸配列とのアラインメントによって決定される配列番号２に記載のバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンプロテアーゼＢＰＮ’のアミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。本発明の第一態様によるプロテアーゼ酵素の変異体は、プロテアーゼ変異体と呼ばれ得る。本発明の第一態様による変異体は、非自然発生型プロテアーゼであり得る。本発明の第一態様による変異体は、単離又は精製され得る。本発明の第一態様による変異体は、スブチリシン変異体であり得る。本発明の第一態様による変異体は、タンパク質分解活性を有し得る。本発明の第一態様による変異体は、配列番号２に記載のＢＰＮ’アミノ酸配列のタンパク質分解活性と比較して向上したタンパク質分解活性を有し得る。
本発明の第一態様による変異体は、スブチリシンプロテアーゼである親プロテアーゼの変異体であり得、スブチリシンプロテアーゼは、バチルス種プロテアーゼであり得る。本発明の第一態様による親バチルスプロテアーゼは、バチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシンプロテアーゼＢＰＮ’（配列番号２）、バチルス・ステアロサーモフィラス（B. stearothermophilus）、枯草菌（B. subtilis）、バチルス・リケニホルミス（B. licheniformis）、バチルス・レンタス（B. lentus）、バチルス・ブレビス（B. brevis）、バチルス・ステアロサーモフィラス（B. stearothermophilus）、バチルス・アルカロフィラス（B. alkalophilus）、バチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）、バチルス・クラウジイ（B. clausii）、バチルス・ハロデュランス（B. halodurans）、バチルス・メガテリウム（B. megaterium）、バチルス・コアグランス（B. coagulans）、バチルス・サーキュランス（B. circulans）、バチルス・ロータス（B. lautus）、Ｂ．ｓｐｅｃｉｅｓ ＴＳ−２３、バチルス・チューリンゲンシス（B. thuringiensis）、ＢＰＮ’−ｖ３（配列番号４）及びＢＰＮ’−ｖ３６（配列番号６）からなる群から選択され得る。本発明の第一態様による親プロテアーゼは、配列番号２、配列番号４又は配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
本発明の第一態様による変異体は、成熟型を有するプロテアーゼ変異体であり得る。本発明の第一態様による変異体は、成熟型を有するプロテアーゼ変異体であり得る。
本発明の第一態様による変異体は、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される２つのアミノ酸位置における変異を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異体は、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される３つのアミノ酸位置における変異を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異体は、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される４つのアミノ酸位置における変異を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異体は、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される５つのアミノ酸位置における変異を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異体は、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される６つのアミノ酸位置における変異を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異体は、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される配列番号２の位置に対応するアミノ酸位置のそれぞれにおける変異を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異は、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される位置における異なるアミノ酸残基によるアミノ酸残基の置換を含むアミノ酸配列を含み得る。
本発明の第一態様による変異は、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される２つ又は３つの位置のそれぞれにおける異なるアミノ酸残基によるアミノ酸残基の置換を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異は、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される４つの位置のそれぞれにおける異なるアミノ酸残基によるアミノ酸残基の置換を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異は、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される５つの位置のそれぞれにおける異なるアミノ酸残基によるアミノ酸残基の置換を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異は、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される６つ又は７つの位置のそれぞれにおける異なるアミノ酸残基によるアミノ酸残基の置換を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異体は、位置２４、５３、７８、１０１、１２８及び２１７のそれぞれにおける異なるアミノ酸残基によるアミノ酸残基の置換を含むアミノ酸配列を含み得、ここで、各位置は配列番号２における位置と対応させることにより番号付けされる。
本発明の第一態様による変異体は、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ０９７Ａ，Ｘ１０１Ｎ，Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｑ／Ｌからなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異体は、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ０９７Ａ，Ｘ１０１Ｎ，Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｑ／Ｌからなる群から選択される少なくとも２つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異体は、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ０９７Ａ，Ｘ１０１Ｎ，Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｑ／Ｌからなる群から選択される少なくとも３つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異体は、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ０９７Ａ，Ｘ１０１Ｎ，Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｑ／Ｌからなる群から選択される少なくとも４つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異体は、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ０９７Ａ，Ｘ１０１Ｎ，Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｑ／Ｌからなる群から選択される少なくとも５つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異体は、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ０９７Ａ，Ｘ１０１Ｎ，Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｑ／Ｌからなる群から選択される少なくとも６つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異体は、（ａ）Ｘ１２８Ａ／Ｓ及び／又はＸ２１７Ｌ／Ｑ、（ｂ）Ｇ１２８Ａ／Ｓ及び／又はＹ２１７Ｌ／Ｑ、並びに（ｃ）Ｇ０９７Ａ，Ｇ１２８Ａ／Ｓ及び／又はＹ２１７Ｌ／Ｑからなる群から選択される置換の組を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異体は、アミノ酸置換Ｘ０２４Ｇ／Ｒ＋Ｘ０５３Ｇ＋Ｘ０７８Ｎ＋Ｘ１０１Ｎ＋Ｘ１２８Ａ／Ｓ＋Ｘ２１７Ｑ／Ｌを含むアミノ酸配列を含み得、ここで、この変異体はタンパク質分解活性を有し、選択的にこの変異体は、配列番号２、配列番号４又は配列番号６に記載のプロテアーゼと比較して向上したタンパク質分解活性又は向上したクリーニング活性を有し、あるいは、配列番号２、配列番号４又は配列番号６に記載のプロテアーゼのものを超えるタンパク質分解アッセイ（例えば、ＡＡＰＦアッセイ）又はクリーニングアッセイ（例えば、ＢＭＩ、植物又は卵の微小標本（microswatch）アッセイ）の性能指数を有する。
本発明の第一態様による変異体は、Ｓ０２４Ｇ，Ｓ０５３Ｇ，Ｓ０７８Ｎ，Ｓ１０１Ｎ，Ｇ１２８Ａ／Ｓ及びＹ２１７Ｑからなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含み得る。本発明の第一態様による変異体は、アミノ酸置換Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑを含むアミノ酸配列を含み得る。
本発明の第一態様による変異体は、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、８０％又は８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異体は、配列番号２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異体は、配列番号２に対して少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。本発明の第一態様による変異体は、配列番号２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
本発明の第一態様による変異体は、配列番号２に記載のプロテアーゼのタンパク質分解活性と比較して向上したタンパク質分解活性を有し得る。本発明の第一態様による変異体は、配列番号４に記載のプロテアーゼのタンパク質分解活性と比較して向上したタンパク質分解活性を有し得る。本発明の第一態様による変異体は、配列番号６に記載のプロテアーゼのタンパク質分解活性と比較して向上したタンパク質分解活性を有し得る。本発明の第一態様による変異体は、配列番号２、配列番号４又は配列番号６に記載のプロテアーゼのクリーニング活性と比較して向上したクリーニング活性を有し得る。本発明の第一態様による変異体は、配列番号２、配列番号４又は配列番号６に記載のプロテアーゼのものを超える、タンパク質分解活性（例えば、ＡＡＰＦアッセイ）又はクリーニングアッセイ（例えば、ＢＭＩ、植物又は卵の微小標本アッセイ）における性能指数を有し得る。
第二態様では、本発明は、親プロテアーゼの単離された又は非自然発生のポリペプチドプロテアーゼ変異体を提供し、この変異体は、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ１０１Ｎ，Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｌ／Ｑからなる群から選択される３つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含み、ここで、この変異体はタンパク質分解活性を有し、この変異体の各アミノ酸位置は、配列番号２のアミノ酸配列と変異体のアミノ酸配列とのアラインメントによって決定される配列番号２のアミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。本発明の第一態様による変異体は、配列番号２、配列番号４又は配列番号６に記載のプロテアーゼと比較して向上したタンパク質分解活性又は向上したクリーニング活性を有し得る。本発明の第一態様による変異体は、配列番号２、配列番号４又は配列番号６に記載のプロテアーゼのものを超える、タンパク質分解活性（例えば、ＡＡＰＦアッセイ）又はクリーニングアッセイ（例えば、ＢＭＩ、植物又は卵の微小標本アッセイ）における性能指数を有し得る。
本発明の第二態様による変異体は、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ１０１Ｎ，Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｌ／Ｑからなる群から選択される３つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含み、ここで、この変異体はタンパク質分解活性を有し、この変異体の各アミノ酸位置は、配列番号２のアミノ酸配列と変異体のアミノ酸配列とのアラインメントによって決定される配列番号２のアミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。本発明の第二態様による変異体は、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ１０１Ｎ，Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｌ／Ｑからなる群から選択される少なくとも４つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第二態様による変異体は、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ１０１Ｎ，Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｌ／Ｑからなる群から選択される少なくとも５つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第二態様による変異体は、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ１０１Ｎ，Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｌ／Ｑからなる群から選択される少なくとも６つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第二態様による変異体は、アミノ酸置換Ｘ０９７Ａを更に含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第二態様による変異体は、アミノ酸置換Ｘ０２４Ｇ／Ｒ＋Ｘ０５３Ｇ＋Ｘ０７８Ｎ＋Ｘ１０１Ｎ＋Ｘ１２８Ａ／Ｓ＋Ｘ２１７Ｌ／Ｑ又はＸ０９７Ａ＋Ｘ１２８Ａ／Ｓ＋Ｘ２１７Ｌ／Ｑを含むアミノ酸配列を含み得る。
本発明の第二態様による変異体は、アミノ酸置換Ｓ０２４Ｇ／Ｒ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ／Ｓ＋Ｙ２１７Ｌ／Ｑ又はＧ０９７Ａ＋Ｇ１２８Ａ／Ｓ＋Ｙ２１７Ｌ／Ｑを含むアミノ酸配列を含み得る。本発明の第二態様による変異体は、アミノ酸置換Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ又はＳ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑを含むアミノ酸配列を含み得る。
本発明の第二態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｎ１０９Ｇを更に含み得る。本発明の第二態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｎ０７６Ｄを更に含み得る。本発明の第二態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｓ０３３Ｔを更に含み得る。本発明の第二態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｎ２４３Ｖを更に含み得る。本発明の第二態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｓ２４８Ａを更に含み得る。本発明の第二態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ａ０８８Ｔを更に含み得る。本発明の第二態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｓ０６３Ｇを更に含み得る。本発明の第二態様による変異体のアミノ酸配列は、Ｎ１０９Ｇ，Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ，Ｎ２４３Ｖ，Ｓ２４８Ａ，Ａ０８８Ｔ，及びＳ０６３Ｇからなる群から選択される２つ以上の置換を更に含み得る。
本発明の第二態様による変異体のアミノ酸配列は、アミノ酸置換Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ又はＳ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑを含むアミノ酸配列を含み得、Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ，Ｓ００９Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ１４１Ｒ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｓ１６２Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１６２Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０６１Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ａ，Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｔ１５８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０６１Ｓ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｐ０４０Ａ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００９Ｔ＋Ｓ０１８Ｔ＋Ｙ０２１Ｎ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ１４１Ｒ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓ，及びＮ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓからなる群から選択されるアミノ酸置換の組を更に含み得る。
本発明の第二態様による変異体は、アミノ酸置換Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑを含むアミノ酸配列を含み得、Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ，Ｓ００９Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｋ１４１Ｒ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｓ１６２Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１６２Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０６１Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ａ，Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｔ１５８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０６１Ｓ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｐ０４０Ａ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００９Ｔ＋Ｓ０１８Ｔ＋Ｙ０２１Ｎ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｋ１４１Ｒ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０６３Ｇ＋Ａ１２８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ，及びＮ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓ，からなる群から選択されるアミノ酸置換の組を更に含み得、ここで、この変異体はタンパク質分解活性を有し、この変異体の各アミノ酸位置は、配列番号２のアミノ酸配列と変異体のアミノ酸配列とのアラインメントによって決定される配列番号２のアミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。特に、例えば、置換Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ，を含む配列を含み、並びに置換の組Ｓ００９Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｋ１４１Ｒ＋Ｎ２４３Ｖ，を更に含む、本発明の第二態様による変異体は、位置１２８のアラニン（すなわち、Ｇ１２８Ａ置換）がＳで置換される（Ａ１２８Ｓ置換）ことから位置１２８においてセリン（Ｓ）を有する。
本発明の第二態様による変異体のアミノ酸配列は、配列番号２、配列番号４又は配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％又は７０％の配列同一性を有し得る。本発明の第二態様による変異体のアミノ酸配列は、配列番号２、配列番号４又は配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％又は８５％の配列同一性を有し得る。本発明の第二態様による変異体のアミノ酸配列は、配列番号２、配列番号４又は配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の配列同一性を有し得る。
本発明の第二態様による特許プロテアーゼは、スブチリシンプロテアーゼであり得る。本発明の第二態様による親プロテアーゼは、配列番号２、配列番号４又は配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。本発明の第二態様による変異体は、成熟型を有するプロテアーゼ変異体であり得る。本発明の第一態様による変異体は、成熟型を有するプロテアーゼ変異体であり得る。
本発明はまた、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸を含み、並びに、以下のもの：
Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｌ２５７Ｇ，
Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ，
Ｓ００９Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｋ１４１Ｒ＋Ｎ２４３Ｖ，
Ｓ１６２Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ，
Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ，
Ｎ１０９Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ，
Ｓ１６２Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ，
Ｎ０６１Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ，
Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ａ，
Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ，
Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ，
Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ，
Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ，
Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ，
Ｔ１５８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ，
Ｎ０６１Ｓ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ，
Ｐ０４０Ａ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ，
Ｓ００９Ｔ＋Ｓ０１８Ｔ＋Ｙ０２１Ｎ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｋ１４１Ｒ，
Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ，
Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ，
Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ，
Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ，
Ｓ０６３Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ，
Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ，
Ｓ０６３Ｇ＋Ａ１２８Ｓ，
Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ０７６Ｄ，
Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ，及び
Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓ，からなる群から選択されるアミノ酸置換の組を含む、本発明の第二態様による単離されたポリペプチド（例えば、プロテアーゼ変異体）を提供し、
ここで、この変異体は、タンパク質分解活性を有し、変異体の各アミノ酸位置は、配列番号２のアミノ酸配列と変異体のアミノ酸配列とのアラインメントによって決定される配列番号２のアミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。このようなポリぺプチドは、配列番号２、配列番号４又は配列番号６に記載のプロテアーゼと比較して向上したタンパク質分解活性又は向上したクリーニング活性を有し得る。このようなポリぺプチドは、配列番号２、配列番号４又は配列番号６に記載のプロテアーゼのものを超える、タンパク質分解活性（例えば、ＡＡＰＦアッセイ）又はクリーニングアッセイ（例えば、ＢＭＩ、植物又は卵の微小標本アッセイ）における性能指数を有し得る。本発明の第二態様による変異体は、配列番号２の配列を有するＢＰＮ’プロテアーゼのタンパク質分解活性と比較して向上したタンパク質分解活性を有し得る。本発明の第二態様による変異体は、配列番号４又は配列番号６の配列を有するプロテアーゼのタンパク質分解活性と比較して向上したタンパク質分解活性を有し得る。本発明の第二態様による変異体の親プロテアーゼは、スブチリシンプロテアーゼであり得、選択的にスブチリシンプロテアーゼはバチルス種であり得る。本発明の第二態様による変異体の親スブチリシンプロテアーゼは、バチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシンプロテアーゼＢＰＮ’（配列番号２）、バチルス・ステアロサーモフィラス（B. stearothermophilus）、枯草菌（B. subtilis）、バチルス・リケニホルミス（B. licheniformis）、バチルス・レンタス（B. lentus）、バチルス・ブレビス（B. brevis）、バチルス・ステアロサーモフィラス（B. stearothermophilus）、バチルス・アルカロフィラス（B. alkalophilus）、バチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）、バチルス・クラウジイ（B. clausii）、バチルス・ハロデュランス（B. halodurans）、バチルス・メガテリウム（B. megaterium）、バチルス・コアグランス（B. coagulans）、バチルス・サーキュランス（B. circulans）、バチルス・ロータス（B. lautus）、Ｂ．ｓｐｅｃｉｅｓ ＴＳ−２３、バチルス・チューリンゲンシス（B. thuringiensis）、ＢＰＮ’−ｖ３（配列番号４）及びＢＰＮ’−ｖ３６（配列番号６）からなる群から選択され得る。本発明の第二態様による親プロテアーゼは、配列番号２、配列番号４又は配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
本発明の第二態様による変異体は、成熟型を有するプロテアーゼ変異体であり得る。本発明の第二態様による親プロテアーゼは、成熟型を有するプロテアーゼであり得る。
本発明の第二態様による変異体は配列番号２、配列番号６又は配列番号４に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
第三態様では、本発明は、プロテアーゼ活性を有する単離された又は非自然発生型ポリペプチドを提供し、上記ポリペプチドは、
ａ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｌ２５７Ｇ、
ｂ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ、
ｃ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ００９Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ１４１Ｒ＋Ｎ２４３Ｖ、
ｄ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ１６２Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｅ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ、
ｆ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ、
ｇ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ１６２Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ、
ｈ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ０６１Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
ｉ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ａ、
ｊ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｋ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｌ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ、
ｍ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ、
ｎ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
ｏ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ、
ｐ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ０６１Ｓ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
ｑ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｐ０４０Ａ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｒ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ００９Ｔ＋Ｓ０１８Ｔ＋Ｙ０２１Ｎ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ１４１Ｒ、
ｓ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｔ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ、
ｕ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｖ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｗ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ０６３Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
ｘ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ、
ｙ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ０６３Ｇ、
ｚ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ０７６Ｄ、
ａａ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓ、
ｂｂ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓ、及び
ｃｃ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択されるポリペプチド配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、この変異体の各アミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。本発明の第三態様による変異体は、配列番号２、配列番号４又は配列番号６に記載のプロテアーゼと比較して向上したタンパク質分解活性又は向上したクリーニング活性を有し得る。本発明の第三態様による変異体は、配列番号２、配列番号４又は配列番号６に記載のプロテアーゼのものを超える、タンパク質分解活性（例えば、ＡＡＰＦアッセイ）又はクリーニングアッセイ（例えば、ＢＭＩ、植物又は卵の微小標本アッセイ）における性能指数を有し得る。
本発明の第三態様によるポリペプチドは、上記ａ）〜ｃｃ）のいずれか又はタンパク質分解活性を有するこれらのいずれかの断片を含み得る、あるいは、これらからなり得る。本発明の第三態様による変異体又は親プロテアーゼは、成熟型であり得る。
第四態様では、本発明は、（ａ）配列番号６のポリペプチド配列に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド、（ｂ）少なくとも厳密度の高い条件下で（ｉ）配列番号５のポリヌクレオチド配列と、又は（ｉｉ）（ｉ）の相補的ポリヌクレオチド配列と、ハイブリッド形成するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド、並びに（ｃ）配列番号５のポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド、からなる群から選択されるプロテアーゼ活性を有する単離された又は非自然発生型のポリペプチドを提供する。本発明の第四態様によるポリペプチドは、配列番号６のアミノ酸配列又はタンパク質分解活性を有するこれらの断片を含み得る、あるいは、これらからなり得る。本発明の第四態様による変異体は、成熟ＢＰＮ’（配列番号２）のものと比較して増大したタンパク質分解活性及び／又はクリーニング性能若しくは活性を有し得る。本発明の第四態様による変異体は、配列番号４若しくは配列番号６のものと比較して増大したタンパク質分解活性及び／又はクリーニング性能若しくは活性を有し得る。本発明の第四態様による変異体又は親プロテアーゼは、成熟型であり得る。
第五態様では、本発明は、親プロテアーゼの単離された又は非自然発生型のプロテアーゼ変異体を提供し、ここで、（ａ）この変異体は親プロテアーゼと比較して２５以下、２０以下、１５以下又は１０以下の変異を有するアミノ酸配列を含み、ここで、（ｉ）これらの変異は、挿入、欠失又は置換から独立して選択され、（ｉｉ）これらの変異は、位置２４及び５３におけるグリシンの置換、位置７８及び１０１におけるアスパラギンの置換、位置１２８におけるアラニン又はセリンの置換、及び位置２１７におけるグルタミンの置換を包含し、（ｂ）親プロテアーゼは、配列番号２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、（ｃ）配列番号２のアミノ酸配列は、位置番号付けを決定するために使用され、並びに（ｄ）この変異体は、親プロテアーゼと比較してタンパク質分解活性が増大しており、ここで、各アミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。本発明の第五態様による変異体のアミノ酸配列は、配列番号２、配列番号４又は配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の配列同一性を有し得る。
本発明の第五態様による親プロテアーゼは、配列番号２、配列番号４又は配列番号６の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有し得る。本発明の第五態様による親プロテアーゼは、配列番号２のアミノ酸配列を有するプロテアーゼであり得る。本発明の第五態様による変異体又は親プロテアーゼは、成熟型であり得る。
本発明の第五態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｎ１０９Ｇを更に含み得る。本発明の第五態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｎ０７６Ｄを更に含み得る。本発明の第五態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｓ０３３Ｔを更に含み得る。本発明の第五態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｎ２４３Ｖを更に含み得る。本発明の第五態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｓ２４８Ａを更に含み得る。本発明の第五態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ａ０８８Ｔを更に含み得る。本発明の第五態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｓ０６３Ｇを更に含み得る。
本発明の第五態様による変異体のアミノ酸配列は、Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ，Ｓ００９Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ１４１Ｒ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｓ１６２Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１６２Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０６１Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ａ，Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｔ１５８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０６１Ｓ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｐ０４０Ａ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００９Ｔ＋Ｓ０１８Ｔ＋Ｙ０２１Ｎ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ１４１Ｒ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓ，及びＮ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓからなる群から選択されるアミノ酸置換の組を更に含み得る。
本発明の第五態様による親プロテアーゼは、スブチリシンプロテアーゼであり得る。本発明の第五態様による親プロテアーゼは、配列番号２に記載のＢＰＮ’であり得る。本発明の第五態様による変異体は、配列番号４若しくは配列番号６のものと比較して増大したタンパク質分解活性及び／又はクリーニング性能若しくは活性を有し得る。
第六態様では、本発明は、親プロテアーゼの単離された又は非自然発生プロテアーゼ変異体を提供し、ここで、（ａ）この変異体は、（ｉ）配列番号２の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％又は９７％の同一性を有し、並びに、（ｉｉ）位置２４及び５３におけるグリシンの置換、位置７８及び１０１におけるアスパラギンの置換、位置１２８におけるアラニン又はセリンの置換、及び位置２１７におけるグルタミンの置換を含む、アミノ酸配列を含み、（ｂ）親プロテアーゼは、配列番号２に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有し、（ｃ）この変異体の各アミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされ、並びに（ｄ）この変異体は、親プロテアーゼと比較してタンパク質分解活性が増大している。本発明の第六態様による親プロテアーゼ（protase）は、スブチリシンプロテアーゼであり得る。本発明の第六態様による親プロテアーゼは、配列番号２のアミノ酸配列を有するプロテアーゼであり得る。本発明の第六態様による変異体は、親プロテアーゼのタンパク質分解活性及び／又はクリーニング活性とそれぞれ比較して増大したタンパク質分解活性及び／又はクリーニング活性を有し得る。
本発明の第六態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｎ１０９Ｇを更に含み得る。本発明の第六態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｎ０７６Ｄを更に含み得る。本発明の第六態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｓ０３３Ｔを更に含み得る。本発明の第六態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｎ２４３Ｖを更に含み得る。本発明の第六態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｓ２４８Ａを更に含み得る。本発明の第六態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ａ０８８Ｔを更に含み得る。本発明の第六態様による変異体のアミノ酸配列は、置換Ｓ０６３Ｇを更に含み得る。
本発明の第六態様による変異体のアミノ酸配列は、Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ，Ｓ００９Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ１４１Ｒ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｓ１６２Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１６２Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０６１Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ａ，Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｔ１５８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０６１Ｓ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ，Ｐ０４０Ａ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００９Ｔ＋Ｓ０１８Ｔ＋Ｙ０２１Ｎ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ１４１Ｒ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓ，及びＮ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓからなる群から選択されるアミノ酸置換の組を更に含み得る。
本発明の第六態様による変異体は、配列番号２、配列番号４若しくは配列番号６のものと比較して増大したタンパク質分解活性及び／又はクリーニング性能若しくは活性を有し得る。本発明の第六態様による変異体は、配列番号２、配列番号４又は配列番号６に記載のプロテアーゼのものを超える、タンパク質分解活性（例えば、ＡＡＰＦアッセイ）又はクリーニングアッセイ（例えば、ＢＭＩ、植物又は卵の微小標本アッセイ）における性能指数を有し得る。本発明の第六態様による変異体又は親プロテアーゼは、成熟型であり得る。
第七態様では、本発明は、配列番号２に示されるアミノ酸配列を有するＢＰＮ’スブチリシンプロテアーゼの単離された又は非自然発生型のプロテアーゼ変異体を提供し、上記プロテアーゼは以下のもの：
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むプロテアーゼ変異体であって、上記変異体は、配列番号２及び／又は配列番号４のプロテアーゼと比較して増大したタンパク質分解活性及び／又は増大したクリーニング活性を有し、ここで、この変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列に対応させることにより番号付けされ、上記変異体は群（ｉ）〜（ｘ）から選択される配列番号２に対する少なくとも１組のアミノ酸置換を含む、プロテアーゼ変異体：
（ｉ）Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２１８Ａ及びＧ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ、
（ｉｉ）Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１８３Ｔ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ２４４Ｎ，Ｎ０６１Ａ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２２４Ａ，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ１２９Ｔ−Ｑ１８５Ｔ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１８３Ｔ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ２４４Ｉ，及びＳ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ１２９Ｔ−Ｙ２１７Ｑ、
（ｉｉｉ）Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１８３Ｔ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１８３Ｔ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ２４４Ｎ，Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ２４４Ｉ、
（ｉｖ）Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ２０３Ｙ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ｓ−Ｖ２０３Ｙ−Ｙ２１７Ｑ，及びＶ０６８Ａ−Ａ０９２Ｇ−Ｙ２１７Ｑ、
（ｖ）Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ、
（ｖｉ）Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ、
（ｖｉｉ）Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０３８Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４９Ｎ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，及びＴ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ、
（ｖｉｉｉ）Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，及びＴ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ、
（ｉｘ）Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ、並びに
（ｘ）Ｓ０２４Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０３８Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４９Ｎ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ａ１１６Ｓ−Ｇ１２８Ａ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０３８Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１３０Ｇ−Ｙ２１７Ｑ、並びに
（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むプロテアーゼ変異体であって、上記変異体は、配列番号２、配列番号４及び／又は配列番号６のプロテアーゼと比較して増大したタンパク質分解活性及び／又は増大したクリーニング活性を有し、ここで、この変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列に対応させることにより番号付けされ、上記変異体は群（ｉ）〜（ｘｖ）から選択される配列番号６に対する少なくとも１組のアミノ酸置換を含む、プロテアーゼ変異体：
（ｉ）Ａ１１６Ｖ，Ｇ１６０Ｓ，Ｉ１１１Ｌ，Ｉ１１５Ｖ，Ｎ１０９Ｓ，Ｎ１１７Ｍ，Ｐ００５Ｇ，Ｑ０５９Ｖ，Ｔ１６４Ｓ，Ｙ２６２Ｍ，Ａ０１５Ｑ，Ａ０１５Ｓ，Ａ０９８Ｅ，Ａ０９８Ｎ，Ａ０９８Ｓ，Ａ０９８Ｔ，Ａ０９８Ｖ，Ａ０９８Ｙ，Ａ１１４Ｓ，Ａ１１４Ｔ，Ａ１１６Ｇ，Ａ１１６Ｌ，Ａ１１６Ｓ，Ａ１１６Ｔ，Ａ１１６Ｗ，Ａ１３３Ｇ，Ａ１３３Ｈ，Ａ１３３Ｔ，Ａ１３３Ｖ，Ａ１３７Ｇ，Ａ１３７Ｉ，Ａ１３７Ｌ，Ａ１３７Ｓ，Ａ１３７Ｔ，Ａ１３８Ｓ，Ａ２１６Ｅ，Ａ２１６Ｆ，Ａ２１６Ｖ，Ｄ０９９Ｓ，Ｄ１８１Ｅ，Ｆ２６１Ａ，Ｆ２６１Ｑ，Ｇ０２４Ｆ，Ｇ０２４Ｉ，Ｇ０２４Ｑ，Ｇ０２４Ｙ，Ｇ０９７Ｓ，Ｇ１６０Ｔ，Ｇ２１１Ｌ，Ｇ２１１Ｖ，Ｈ０１７Ｆ，Ｈ０１７Ｗ，Ｈ０３９Ｖ，Ｈ２２６Ａ，Ｉ０３１Ｖ，Ｉ１１１Ｖ，Ｉ２６８Ｖ，Ｋ１７０Ｒ，Ｋ２６５Ｒ，Ｌ０１６Ｑ，Ｌ０１６Ｔ，Ｌ１３５Ｍ，Ｌ２０９Ｔ，Ｌ２０９Ｖ，Ｌ２３３Ｍ，Ｌ２５７Ｔ，Ｌ２５７Ｖ，Ｌ２６７Ａ，Ｌ２６７Ｖ，Ｎ０２５Ａ，Ｎ０２５Ｉ，Ｎ０２５Ｑ，Ｎ０２５Ｒ，Ｎ０２５Ｔ，Ｎ０２５Ｖ，Ｎ１０１Ｉ，Ｎ１０１Ｑ，Ｎ１０１Ｓ，Ｎ１０９Ａ，Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｈ，Ｎ１０９Ｌ，Ｎ１０９Ｍ，Ｎ１０９Ｑ，Ｎ１０９Ｔ，Ｎ１１７Ｑ，Ｎ１８４Ａ，Ｎ１８４Ｌ，Ｎ１８４Ｔ，Ｎ１８４Ｗ，Ｎ２１２Ｇ，Ｎ２１２Ｌ，Ｎ２１２Ｖ，Ｎ２４３Ｐ，Ｎ２５２Ｇ，Ｎ２５２Ｍ，Ｐ００５Ｔ，Ｐ０１４Ｓ，Ｐ０４０Ｇ，Ｐ０４０Ｌ，Ｐ０４０Ｑ，Ｐ１２９Ａ，Ｐ１２９Ｓ，Ｐ１７２Ｇ，Ｐ１７２Ｓ，Ｐ１９４Ｑ，Ｐ２１０Ａ，Ｐ２１０Ｓ，Ｑ１８５Ｆ，Ｑ１８５Ｇ，Ｑ１８５Ｉ，Ｑ１８５Ｍ，Ｑ１８５Ｎ，Ｑ１８５Ｓ，Ｑ２７５Ｈ，Ｒ１８６Ｋ，Ｓ００９Ａ，Ｓ００９Ｇ，Ｓ００９Ｈ，Ｓ００９Ｍ，Ｓ０１８Ｔ，Ｓ１３０Ｔ，Ｓ１３２Ｎ，Ｓ１４５Ｋ，Ｓ１５９Ｔ，Ｓ１６１Ｉ，Ｓ１６１Ｋ，Ｓ１６１Ｎ，Ｓ１６１Ｔ，Ｓ１６２Ｉ，Ｓ１６２Ｍ，Ｓ１６２Ｙ，Ｓ１６３Ｇ，Ｓ１８２Ｆ，Ｓ１８２Ｇ，Ｓ１８２Ｖ，Ｓ１８２Ｗ，Ｓ１８３Ｆ，Ｓ１８３Ｌ，Ｓ１８３Ｍ，Ｓ１８３Ｔ，Ｓ１８３Ｖ，Ｓ１８３Ｗ，Ｓ２２４Ａ，Ｓ２３６Ｔ，Ｓ２４９Ｖ，Ｔ０２２Ａ，Ｔ０２２Ｇ，Ｔ０２２Ｑ，Ｔ０２２Ｖ，Ｔ２０８Ｖ，Ｔ２４２Ｓ，Ｔ２５３Ｎ，Ｔ２５３Ｓ，Ｔ２５４Ａ，Ｔ２５４Ｓ，Ｔ２５５Ｌ，Ｔ２５５Ｓ，Ｔ２５５Ｖ，Ｖ００４Ａ，Ｖ００４Ｐ，Ｖ００４Ｗ，Ｖ０８４Ｃ，Ｖ１３９Ｃ，Ｖ１６５Ｍ，Ｖ２０３Ｆ，Ｙ０２１Ｋ，Ｙ０２１Ｎ，Ｙ０２１Ｔ，Ｙ０２１Ｖ，Ｙ１６７Ｆ，Ｙ１７１Ｆ，Ｙ２１４Ｆ，Ｙ２６２Ｆ，及びＹ２６２Ｔからなる群から選択される配列番号６に対する少なくとも１つの置換、
（ｉｉ）Ａ２１６Ｅ，Ｌ０９０Ｉ，Ａ０９８Ｒ，Ａ０９８Ｗ，Ａ０９８Ｙ，Ａ１１６Ｇ，Ａ１１６Ｒ，Ａ１１６Ｓ，Ａ１３３Ｍ，Ｉ１０７Ｌ，Ｉ１１５Ｖ，Ｍ１２４Ｌ，Ｎ１０１Ｉ，Ｎ１０９Ｈ，Ｎ１０９Ｓ，Ｎ１０９Ｔ，Ｎ１１７Ｒ，Ｐ００５Ｇ，Ｑ１８５Ｌ，Ｓ０８９Ｖ，Ｖ０９５Ａ，Ａ０１５Ｙ，Ａ０２９Ｇ，Ａ０９８Ｄ，Ａ０９８Ｅ，Ａ０９８Ｇ，Ａ０９８Ｎ，Ａ０９８Ｓ，Ａ０９８Ｔ，Ａ０９８Ｖ，Ａ１１４Ｓ，Ａ１１４Ｔ，Ａ１１６Ｅ，Ａ１１６Ｌ，Ａ１１６Ｔ，Ａ１１６Ｖ，Ａ１３３Ｈ，Ａ１３３Ｌ，Ａ１３３Ｓ，Ａ１３７Ｇ，Ａ１３７Ｉ，Ａ１３７Ｌ，Ａ１３７Ｓ，Ａ１３７Ｖ，Ａ１３８Ｓ，Ａ１４４Ｓ，Ａ１４４Ｖ，Ａ１７６Ｓ，Ａ１７６Ｔ，Ａ１８７Ｔ，Ａ２１６Ｆ，Ａ２１６Ｐ，Ａ２１６Ｑ，Ａ２１６Ｒ，Ａ２１６Ｓ，Ａ２１６Ｔ，Ａ２１６Ｖ，Ａ２１６Ｙ，Ｄ０４１Ｅ，Ｄ１２０Ａ，Ｄ１２０Ｅ，Ｄ１２０Ｑ，Ｄ１２０Ｒ，Ｄ１２０Ｓ，Ｄ１８１Ｓ，Ｇ０２０Ａ，Ｇ０２０Ｓ，Ｇ０２４Ａ，Ｇ０９７Ａ，Ｇ０９７Ｄ，Ｇ０９７Ｓ，Ｇ１３１Ｑ，Ｇ１６０Ｓ，Ｇ１６６Ｉ，Ｇ２１１Ｌ，Ｇ２１５Ｎ，Ｈ０３９Ｎ，Ｈ２３８Ｎ，Ｉ１１１Ｌ，Ｉ１１１Ｖ，Ｉ１２２Ａ，Ｌ０７５Ｉ，Ｌ０７５Ｑ，Ｌ１３５Ｍ，Ｌ２０９Ｔ，Ｌ２０９Ｖ，Ｌ２３３Ｖ，Ｌ２３５Ｍ，Ｌ２３５Ｒ，Ｌ２５７Ａ，Ｍ１１９Ｉ，Ｎ０２５Ａ，Ｎ０２５Ｇ，Ｎ０２５Ｔ，Ｎ０６１Ｋ，Ｎ１０１Ｆ，Ｎ１０１Ｈ，Ｎ１０１Ｌ，Ｎ１０１Ｑ，Ｎ１０１Ｒ，Ｎ１０１Ｓ，Ｎ１０１Ｔ，Ｎ１０９Ａ，Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｋ，Ｎ１０９Ｌ，Ｎ１１７Ｅ，Ｎ１１７Ｈ，Ｎ１１７Ｋ，Ｎ１１７Ｓ，Ｎ２１２Ｇ，Ｎ２１２Ｓ，Ｎ２１８Ｆ，Ｎ２１８Ｇ，Ｎ２１８Ｈ，Ｎ２１８Ｌ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２１８Ｗ，Ｎ２４０Ｑ，Ｎ２５２Ｍ，Ｎ２５２Ｒ，Ｎ２５２Ｓ，Ｐ００５Ｔ，Ｐ０４０Ａ，Ｐ０４０Ｇ，Ｐ０４０Ｔ，Ｐ１２９Ｄ，Ｐ１２９Ｓ，Ｐ１９４Ｓ，Ｐ２１０Ｒ，Ｑ０１９Ｒ，Ｑ０１９Ｗ，Ｑ１０３Ｌ，Ｑ１０３Ｗ，Ｑ１８５Ａ，Ｑ１８５Ｇ，Ｑ１８５Ｍ，Ｑ１８５Ｒ，Ｑ１８５Ｔ，Ｑ２０６Ｇ，Ｑ２０６Ｙ，Ｑ２１７Ａ，Ｑ２１７Ｅ，Ｑ２１７Ｒ，Ｑ２１７Ｓ，Ｑ２１７Ｔ，Ｓ００３Ｑ，Ｓ００９Ｈ，Ｓ０１８Ｍ，Ｓ０３３Ｔ，Ｓ１３０Ａ，Ｓ１３０Ｆ，Ｓ１３０Ｇ，Ｓ１３０Ｔ，Ｓ１３０Ｖ，Ｓ１４５Ｔ，Ｓ１５９Ａ，Ｓ１６１Ｎ，Ｓ１６１Ｔ，Ｓ１６２Ｖ，Ｓ１６２Ｙ，Ｓ１８２Ｌ，Ｓ１８２Ｗ，Ｓ１８３Ｆ，Ｓ１８３Ｌ，Ｓ１８３Ｖ，Ｓ１８３Ｗ，Ｓ１８８Ｋ，Ｓ１８８Ｗ，Ｓ２３６Ｑ，Ｓ２３６Ｔ，Ｓ２４８Ｌ，Ｔ０２２Ｈ，Ｔ０２２Ｋ，Ｔ２０８Ｃ，Ｔ２５３Ｈ，Ｔ２５５Ｖ，Ｖ０４４Ｉ，Ｖ１２１Ｉ，Ｖ１３９Ｃ，Ｖ１４３Ｈ，Ｖ１４３Ｑ，Ｖ１４３Ｔ，Ｖ１４３Ｗ，Ｖ１４３Ｙ，Ｙ００６Ｋ，Ｙ０２１Ａ，Ｙ１０４Ｗ，Ａ００１Ｆ，Ａ００１Ｇ，Ａ００１Ｈ，Ａ００１Ｋ，Ａ００１Ｌ，Ａ００１Ｑ，Ａ００１Ｓ，Ａ００１Ｙ，Ａ０１３Ｖ，Ａ０１５Ｇ，Ａ０１５Ｋ，Ａ０１５Ｒ，Ａ０１５Ｓ，Ａ０１５Ｔ，Ａ０１５Ｗ，Ａ０４８Ｓ，Ａ０７３Ｎ，Ａ０７３Ｓ，Ａ０９２Ｓ，Ａ０９８Ｋ，Ａ０９８Ｐ，Ａ１１６Ｄ，Ａ１１６Ｗ，Ａ１２８Ｓ，Ａ１３３Ｐ，Ａ１３３Ｔ，Ａ１３３Ｖ，Ａ１３４Ｇ，Ａ１３４Ｓ，Ａ１３７Ｈ，Ａ１３７Ｎ，Ａ１３７Ｔ，Ａ１４４Ｄ，Ａ１４４Ｋ，Ａ１４４Ｌ，Ａ１４４Ｍ，Ａ１４４Ｎ，Ａ１４４Ｒ，Ａ１７９Ｇ，Ａ１７９Ｓ，Ａ１８７Ｖ，Ａ２１６Ｇ，Ａ２１６Ｌ，Ａ２１６Ｗ，Ａ２２３Ｓ，Ａ２３０Ｃ，Ａ２７２Ｋ，Ａ２７２Ｌ，Ａ２７２Ｐ，Ａ２７２Ｓ，Ａ２７２Ｔ，Ａ２７２Ｗ，Ａ２７３Ｇ，Ａ２７３Ｓ，Ａ２７４Ｇ，Ａ２７４Ｍ，Ａ２７４Ｔ，Ｄ１２０Ｋ，Ｄ１４０Ｅ，Ｄ１８１Ａ，Ｄ１８１Ｅ，Ｄ１８１Ｇ，Ｄ１８１Ｈ，Ｄ１８１Ｔ，Ｄ２５９Ｅ，Ｄ２５９Ｎ，Ｄ２５９Ｑ，Ｅ０５４Ｄ，Ｅ１５６Ｄ，Ｅ１５６Ｔ，Ｅ２５１Ｌ，Ｅ２５１Ｔ，Ｅ２５１Ｖ，Ｆ０５８Ｙ，Ｆ１８９Ｗ，Ｆ２６１Ｋ，Ｆ２６１Ｑ，Ｆ２６１Ｒ，Ｇ００７Ａ，Ｇ００７Ｓ，Ｇ０２０Ｆ，Ｇ０２０Ｈ，Ｇ０２０Ｎ，Ｇ０２０Ｑ，Ｇ０２０Ｔ，Ｇ０２０Ｙ，Ｇ０２４Ｆ，Ｇ０２４Ｑ，Ｇ０２４Ｒ，Ｇ０２４Ｔ，Ｇ０２４Ｖ，Ｇ０２４Ｗ，Ｇ０２４Ｙ，Ｇ０５３Ｔ，Ｇ０９７Ｋ，Ｇ０９７Ｍ，Ｇ０９７Ｒ，Ｇ０９７Ｔ，Ｇ１３１Ａ，Ｇ１３１Ｈ，Ｇ１３１Ｐ，Ｇ１３１Ｒ，Ｇ１３１Ｔ，Ｇ１３１Ｖ，Ｇ１６０Ｈ，Ｇ１６０Ｔ，Ｇ１６６Ｃ，Ｇ１６６Ｑ，Ｇ１６６Ｓ，Ｇ１６６Ｔ，Ｇ２１１Ａ，Ｇ２１１Ｄ，Ｇ２１１Ｋ，Ｇ２１１Ｍ，Ｇ２１１Ｎ，Ｇ２１１Ｑ，Ｇ２１１Ｒ，Ｇ２１１Ｖ，Ｇ２１１Ｗ，Ｇ２１５Ｓ，Ｇ２１５Ｔ，Ｇ２１５Ｗ，Ｈ０１７Ｔ，Ｈ０１７Ｗ，Ｈ０１７Ｙ，Ｈ０３９Ｖ，Ｈ２２６Ａ，Ｈ２２６Ｆ，Ｈ２２６Ｉ，Ｈ２２６Ｌ，Ｈ２２６Ｍ，Ｈ２２６Ｖ，Ｉ０３５Ｖ，Ｉ０７９Ａ，Ｉ０７９Ｓ，Ｉ１０８Ｖ，Ｉ２０５Ｖ，Ｉ２３４Ｌ，Ｉ２３４Ｖ，Ｉ２６８Ｖ，Ｋ０１２Ｓ，Ｋ０４３Ｐ，Ｋ１３６Ｈ，Ｋ１３６Ｒ，Ｋ１４１Ａ，Ｋ１４１Ｆ，Ｋ１４１Ｔ，Ｋ１４１Ｗ，Ｋ１７０Ａ，Ｋ１７０Ｇ，Ｋ１７０Ｒ，Ｋ２１３Ａ，Ｋ２１３Ｒ，Ｋ２１３Ｓ，Ｋ２３７Ａ，Ｋ２３７Ｈ，Ｋ２３７Ｌ，Ｋ２３７Ｓ，Ｋ２３７Ｖ，Ｋ２５６Ａ，Ｋ２５６Ｇ，Ｋ２５６Ｈ，Ｋ２５６Ｍ，Ｋ２５６Ｐ，Ｋ２５６Ｑ，Ｋ２５６Ｒ，Ｌ０１６Ａ，Ｌ０１６Ｑ，Ｌ０１６Ｔ，Ｌ０１６Ｖ，Ｌ０４２Ｖ，Ｌ０７５Ｍ，Ｌ０７５Ｔ，Ｌ０８２Ｍ，Ｌ０８２Ｖ，Ｌ１３５Ｆ，Ｌ１９６Ｉ，Ｌ２０９Ｈ，Ｌ２０９Ｑ，Ｌ２０９Ｒ，Ｌ２０９Ｓ，Ｌ２０９Ｗ，Ｌ２３３Ａ，Ｌ２３３Ｍ，Ｌ２３３Ｑ，Ｌ２３５Ｉ，Ｌ２３５Ｋ，Ｌ２５０Ｉ，Ｌ２５７Ｓ，Ｌ２５７Ｔ，Ｌ２５７Ｖ，Ｌ２６７Ａ，Ｌ２６７Ｑ，Ｌ２６７Ｔ，Ｌ２６７Ｖ，Ｍ１１９Ｃ，Ｍ１９９Ｖ，Ｎ０２５Ｃ，Ｎ０２５Ｅ，Ｎ０２５Ｆ，Ｎ０２５Ｉ，Ｎ０２５Ｋ，Ｎ０２５Ｌ，Ｎ０２５Ｍ，Ｎ０２５Ｑ，Ｎ０２５Ｖ，Ｎ０２５Ｙ，Ｎ０６１Ｆ，Ｎ０６１Ｐ，Ｎ０６１Ｓ，Ｎ０６１Ｔ，Ｎ０７６Ｇ，Ｎ０７８Ｓ，Ｎ１０１Ａ，Ｎ１０９Ｍ，Ｎ１０９Ｑ，Ｎ１０９Ｒ，Ｎ１１７Ａ，Ｎ１１７Ｍ，Ｎ１１７Ｑ，Ｎ１１８Ｄ，Ｎ１１８Ｇ，Ｎ１１８Ｈ，Ｎ１１８Ｑ，Ｎ１１８Ｒ，Ｎ１１８Ｓ，Ｎ１８４Ａ，Ｎ１８４Ｃ，Ｎ１８４Ｇ，Ｎ１８４Ｌ，Ｎ１８４Ｒ，Ｎ１８４Ｓ，Ｎ１８４Ｔ，Ｎ１８４Ｖ，Ｎ１８４Ｗ，Ｎ２１２Ｃ，Ｎ２１２Ｆ，Ｎ２１２Ｉ，Ｎ２１２Ｋ，Ｎ２１２Ｌ，Ｎ２１２Ｐ，Ｎ２１２Ｑ，Ｎ２１２Ｒ，Ｎ２１２Ｖ，Ｎ２１２Ｗ，Ｎ２１２Ｙ，Ｎ２１８Ａ，Ｎ２１８Ｐ，Ｎ２１８Ｔ，Ｎ２４０Ａ，Ｎ２４０Ｅ，Ｎ２４０Ｇ，Ｎ２４０Ｈ，Ｎ２４０Ｌ，Ｎ２４０Ｒ，Ｎ２４０Ｓ，Ｎ２４０Ｔ，Ｎ２４３Ｃ，Ｎ２４３Ｑ，Ｎ２４３Ｔ，Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２５２Ａ，Ｎ２５２Ｇ，Ｎ２５２Ｋ，Ｎ２５２Ｑ，Ｐ０１４Ｇ，Ｐ０１４Ｑ，Ｐ０１４Ｒ，Ｐ０１４Ｓ，Ｐ０１４Ｔ，Ｐ０４０Ｆ，Ｐ０４０Ｌ，Ｐ０４０Ｑ，Ｐ０４０Ｓ，Ｐ０４０Ｖ，Ｐ０８６Ｃ，Ｐ０８６Ｈ，Ｐ０８６Ｓ，Ｐ１２９Ａ，Ｐ１２９Ｅ，Ｐ１２９Ｇ，Ｐ１２９Ｋ，Ｐ１２９Ｒ，Ｐ１７２Ａ，Ｐ１７２Ｋ，Ｐ１７２Ｑ，Ｐ１７２Ｓ，Ｐ１９４Ａ，Ｐ１９４Ｇ，Ｐ１９４Ｈ，Ｐ１９４Ｌ，Ｐ１９４Ｍ，Ｐ１９４Ｑ，Ｐ１９４Ｒ，Ｐ１９４Ｖ，Ｐ１９４Ｗ，Ｐ１９４Ｙ，Ｐ２１０Ａ，Ｐ２１０Ｇ，Ｐ２１０Ｌ，Ｐ２１０Ｓ，Ｐ２３９Ｋ，Ｐ２３９Ｒ，Ｑ００２Ａ，Ｑ００２Ｓ，Ｑ０１０Ａ，Ｑ０１０Ｎ，Ｑ０１０Ｒ，Ｑ０１０Ｔ，Ｑ０１９Ａ，Ｑ０１９Ｃ，Ｑ０１９Ｄ，Ｑ０１９Ｇ，Ｑ０１９Ｓ，Ｑ０１９Ｔ，Ｑ０１９Ｖ，Ｑ０５９Ｉ，Ｑ０５９Ｖ，Ｑ１０３Ｓ，Ｑ１８５Ｆ，Ｑ１８５Ｈ，Ｑ１８５Ｉ，Ｑ１８５Ｋ，Ｑ１８５Ｎ，Ｑ１８５Ｓ，Ｑ１８５Ｙ，Ｑ２０６Ｈ，Ｑ２０６Ｌ，Ｑ２０６Ｐ，Ｑ２０６Ｗ，Ｑ２１７Ｆ，Ｑ２１７Ｈ，Ｑ２１７Ｉ，Ｑ２１７Ｋ，Ｑ２１７Ｌ，Ｑ２１７Ｎ，Ｑ２１７Ｖ，Ｑ２７１Ｇ，Ｑ２７１Ｒ，Ｑ２７１Ｔ，Ｑ２７５Ｆ，Ｑ２７５Ｐ，Ｑ２７５Ｒ，Ｒ１８６Ａ，Ｒ１８６Ｉ，Ｒ１８６Ｋ，Ｓ００３Ａ，Ｓ００３Ｆ，Ｓ００３Ｇ，Ｓ００３Ｈ，Ｓ００３Ｋ，Ｓ００３Ｒ，Ｓ００３Ｔ，Ｓ００９Ｔ，Ｓ０１８Ｎ，Ｓ０１８Ｔ，Ｓ０３７Ｇ，Ｓ０３７Ｔ，Ｓ０３７Ｖ，Ｓ０３８Ｇ，Ｓ０３８Ｑ，Ｓ０６３Ｎ，Ｓ０６３Ｑ，Ｓ０６３Ｔ，Ｓ０８９Ｍ，Ｓ０８９Ｎ，Ｓ１３０Ｋ，Ｓ１３０Ｌ，Ｓ１３０Ｒ，Ｓ１３０Ｗ，Ｓ１３２Ｎ，Ｓ１４５Ｇ，Ｓ１４５Ｋ，Ｓ１４５Ｍ，Ｓ１４５Ｒ，Ｓ１４５Ｖ，Ｓ１５９Ｃ，Ｓ１５９Ｈ，Ｓ１５９Ｌ，Ｓ１５９Ｑ，Ｓ１５９Ｒ，Ｓ１５９Ｔ，Ｓ１５９Ｗ，Ｓ１６１Ａ，Ｓ１６１Ｃ，Ｓ１６１Ｇ，Ｓ１６１Ｈ，Ｓ１６１Ｉ，Ｓ１６１Ｋ，Ｓ１６１Ｐ，Ｓ１６１Ｑ，Ｓ１６１Ｒ，Ｓ１６２Ｆ，Ｓ１６２Ｇ，Ｓ１６２Ｉ，Ｓ１６２Ｌ，Ｓ１６２Ｍ，Ｓ１６２Ｎ，Ｓ１６２Ｐ，Ｓ１６２Ｒ，Ｓ１６３Ｇ，Ｓ１７３Ａ，Ｓ１７３Ｇ，Ｓ１８２Ｆ，Ｓ１８２Ｇ，Ｓ１８２Ｋ，Ｓ１８２Ｎ，Ｓ１８２Ｑ，Ｓ１８２Ｖ，Ｓ１８３Ａ，Ｓ１８３Ｍ，Ｓ１８３Ｑ，Ｓ１８３Ｒ，Ｓ１８３Ｔ，Ｓ１８８Ａ，Ｓ１８８Ｆ，Ｓ１８８Ｇ，Ｓ１８８Ｐ，Ｓ１８８Ｒ，Ｓ１８８Ｔ，Ｓ１８８Ｖ，Ｓ１９０Ｃ，Ｓ２０４Ａ，Ｓ２０４Ｇ，Ｓ２０４Ｉ，Ｓ２０４Ｌ，Ｓ２０４Ｑ，Ｓ２０４Ｒ，Ｓ２０４Ｖ，Ｓ２０７Ｇ，Ｓ２２４Ａ，Ｓ２２４Ｔ，Ｓ２３６Ｃ，Ｓ２３６Ｄ，Ｓ２３６Ｅ，Ｓ２３６Ｇ，Ｓ２３６Ｎ，Ｓ２４８Ａ，Ｓ２４８Ｆ，Ｓ２４８Ｋ，Ｓ２４８Ｍ，Ｓ２４８Ｔ，Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４９Ｒ，Ｓ２４９Ｔ，Ｓ２４９Ｖ，Ｓ２４９Ｗ，Ｓ２４９Ｙ，Ｓ２６０Ｇ，Ｓ２６０Ｈ，Ｓ２６０Ｋ，Ｓ２６０Ｎ，Ｔ０２２Ａ，Ｔ０２２Ｇ，Ｔ０２２Ｑ，Ｔ０２２Ｓ，Ｔ０２２Ｖ，Ｔ０２２Ｙ，Ｔ０５５Ａ，Ｔ０５５Ｋ，Ｔ１５８Ａ，Ｔ１５８Ｓ，Ｔ２０８Ｌ，Ｔ２０８Ｓ，Ｔ２０８Ｖ，Ｔ２２０Ｓ，Ｔ２４２Ｄ，Ｔ２４２Ｎ，Ｔ２４２Ｓ，Ｔ２４４Ｅ，Ｔ２４４Ｇ，Ｔ２４４Ｉ，Ｔ２４４Ｒ，Ｔ２４４Ｖ，Ｔ２４４Ｗ，Ｔ２５３Ａ，Ｔ２５３Ｇ，Ｔ２５３Ｎ，Ｔ２５３Ｓ，Ｔ２５４Ｓ，Ｔ２５４Ｖ，Ｔ２５５Ｈ，Ｔ２５５Ｉ，Ｔ２５５Ｋ，Ｔ２５５Ｌ，Ｔ２５５Ｑ，Ｔ２５５Ｒ，Ｔ２５５Ｓ，Ｔ２５５Ｙ，Ｖ００４Ａ，Ｖ００４Ｎ，Ｖ００４Ｐ，Ｖ００４Ｗ，Ｖ００８Ａ，Ｖ００８Ｍ，Ｖ０２６Ｉ，Ｖ０４５Ｓ，Ｖ０４５Ｗ，Ｖ０５１Ｉ，Ｖ０８１Ｑ，Ｖ０８１Ｔ，Ｖ０８４Ｃ，Ｖ０９３Ｉ，Ｖ０９５Ｃ，Ｖ１４３Ａ，Ｖ１４３Ｅ，Ｖ１４３Ｆ，Ｖ１４３Ｎ，Ｖ１４３Ｓ，Ｖ１４７Ｉ，Ｖ１４７Ｌ，Ｖ１４７Ｓ，Ｖ１４７Ｔ，Ｖ１４８Ｉ，Ｖ１４９Ｃ，Ｖ１４９Ｉ，Ｖ１６５Ｍ，Ｖ１８０Ａ，Ｖ１８０Ｃ，Ｖ１８０Ｉ，Ｖ１８０Ｌ，Ｖ１８０Ｔ，Ｖ１９２Ａ，Ｖ１９２Ｃ，Ｖ１９２Ｉ，Ｖ１９２Ｓ，Ｖ１９２Ｔ，Ｖ１９２Ｙ，Ｖ１９８Ｌ，Ｖ２０３Ａ，Ｖ２０３Ｆ，Ｖ２０３Ｋ，Ｖ２０３Ｌ，Ｖ２０３Ｍ，Ｖ２０３Ｎ，Ｖ２０３Ｙ，Ｗ２４１Ｙ，Ｙ００６Ａ，Ｙ００６Ｇ，Ｙ００６Ｈ，Ｙ００６Ｌ，Ｙ００６Ｎ，Ｙ００６Ｐ，Ｙ００６Ｑ，Ｙ００６Ｔ，Ｙ０２１Ｅ，Ｙ０２１Ｋ，Ｙ０２１Ｌ，Ｙ０２１Ｎ，Ｙ０２１Ｑ，Ｙ０２１Ｒ，Ｙ０２１Ｓ，Ｙ０２１Ｔ，Ｙ１０４Ｆ，Ｙ１０４Ｉ，Ｙ１０４Ｖ，Ｙ１７１Ｆ，Ｙ２１４Ｆ，Ｙ２１４Ｌ，Ｙ２１４Ｗ，Ｙ２６２Ｆ，及びＹ２６２Ｓからなる群から選択される配列番号６に対する少なくとも１つの置換、
（ｉｉｉ）Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ００９Ｔ−Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ，及びＳ１６２Ｇ−Ｋ２５６Ｒからなる群から選択される配列番号６に対する少なくとも１組のアミノ酸置換、
（ｉｖ）Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１１６Ｔ，Ｋ０４３Ｙ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ，Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１２８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１２８Ｓ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ０２４Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ０２４Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ，Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ０８８Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１１６Ｔ，Ｋ２５６Ｒ，Ｎ０７６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ａ，Ｑ１０３Ｈ−Ａ１２８Ｓ，Ｑ１０３Ｈ−Ｇ１３１Ｈ，Ｑ１０３Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ１０３Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ２４９Ａ，Ｑ１０３Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０３３Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ１６２Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ１６２Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ２４９Ａ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，及びＴ１５８Ｓ−Ｓ２４９Ａからなる群から選択される配列番号６に対する少なくとも１組のアミノ酸置換、
（ｖ）Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ０２４Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ１０９Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ａ０８８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ１１６Ｔ，Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ，Ａ１２８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１２８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０６３Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ０２４Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ，Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ，Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ１６９Ａ，Ｇ１６９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ０８８Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ１０９Ｇ，Ｋ２５６Ｒ，Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ａ，Ｐ０４０Ａ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ１０３Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ１０３Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ００９Ｔ−Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ０４３Ｙ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ１６２Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４８Ｎ，Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，及びＴ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖからなる群から選択される配列番号６に対する少なくとも１組のアミノ酸置換、
（ｖｉ）Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｋ２５６Ｒ，Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ１６２Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ０２４Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｔ１５８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ａ０８８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１１６Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ０２４Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４８Ｎ，Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｇ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０３３Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１６２Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ２４８Ｎ，Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ２４９Ａ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ，及びＴ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎからなる群から選択される配列番号６に対する少なくとも１組のアミノ酸置換、
（ｖｉｉ）Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｐ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｐ，Ｐ０４０Ｅ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｇ１６９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１６９Ａ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ｇ１６９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１６９Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１６９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４８Ｎ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１６９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ｇ１６９Ａ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２１８Ｓ，Ｐ０４０Ａ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ０４３Ｙ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｇ１６９Ａ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ，Ｓ００９Ｔ−Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０３３Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ａ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ１０９Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１２８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００９Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ００９Ｔ−Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０６１Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ１２８Ｓ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ０６１Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２０４Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ１０９Ｇ，Ｎ０６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ａ１１６Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１１６Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ０２４Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ｇ０２４Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１１６Ｔ，Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ０８８Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１１６Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ｌ２５７Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２４３Ｖ，Ｋ０４３Ｙ−Ｑ２０６Ｄ，Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ０７６Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０６３Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ００１Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ａ００１Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ａ１１６Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ０２４Ｅ，Ｇ０２４Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ０２４Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ，Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｋ２５６Ｒ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ０７６Ｄ，Ｋ２５６Ｒ，Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ０８８Ｔ，Ｎ０７６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ，Ｑ２０６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｐ０４０Ｅ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ１６２Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ１６２Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ１６２Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ２４８Ｎ，Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，及びＴ１５８Ｓ−Ｑ２０６Ｄからなる群から選択される配列番号６に対する少なくとも１組のアミノ酸置換、
（ｖｉｉｉ）Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１５３Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１４Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｙ００６Ｈ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１２Ｄ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４８Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ−Ｎ２６９Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ００３Ｐ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４７Ａ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ａ２７４Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｉ２３４Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｗ２４１Ｌ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１３７Ｖ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１５１Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ａ２７４Ｔ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｐ０１４Ｌ−Ａ０１５Ｌ−Ｌ０１６Ｃ−Ｈ０１７Ｔ−Ｓ０１８Ｌ−Ｑ０１９Ｋ−Ｇ０２０Ａ−Ｙ０２１Ｔ−Ｔ０２２Ｌ−Ｇ０２３Ｅ，Ｓ００３Ｆ−Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｖ００４Ａ−Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｖ００４Ａ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｖ００４Ｌ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｙ００６Ｈ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ００１Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ａ２７３Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｎ２６９Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｖ１４３Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｖ１４７Ｉ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｉ１０７Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｎ２６９Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ１４５Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｖ１４３Ａ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｉ２３４Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４３Ｆ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｖ１４９Ｉ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｑ２７１Ｈ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｉ２６８Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｇ２１１Ｖ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ
−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｑ２７５Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１３７Ｖ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２３７Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ１４５Ｆ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｑ２７１Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｉ２６８Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１０５Ｐ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ２４８Ｎ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，及びＴ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇからなる群から選択される配列番号６に対する少なくとも１組のアミノ酸置換、
（ｉｘ）Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ−Ｎ２６９Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ａ２７３Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ００３Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ａ２１６Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｎ２６９Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｖ１４７Ｉ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｉ１０７Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｉ１０７Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１５３Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｎ２６９Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１３８Ｖ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４９Ａ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｖ１４３Ａ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｖ１４７Ｉ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１４Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｉ２３４Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｉ１０７Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１３７Ｖ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１５１Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４
３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｇ２１１Ｖ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２３７Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ００３Ｆ−Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２３３Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｖ００４Ａ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｙ００６Ｈ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ａ２７２Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ０９８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｌ２６７Ｍ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ａ２７４Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ａ２７４Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｄ１４０Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｔ−
Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４８Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１５４Ａ−Ｎ１５５Ｐ−Ｅ１５６Ｔ−Ｇ１５７Ｌ−Ｔ１５８Ｍ−Ｓ１５９Ｅ−Ｇ１６０Ｅ−Ｓ１６１Ｌ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｖ１４７Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｎ２６９Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｖ１４７Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ａ２３１Ｖ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４３Ｆ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５
６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｋ１４１Ｒ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｉ２３４Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１４４Ｖ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４９Ａ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｉ２６８Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｑ２７５Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ１４５Ｆ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ａ２７４Ｔ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｓ２６０Ｆ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ１８２Ｆ−Ｓ２０４Ｆ−Ｓ２０７Ｌ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２３６Ｆ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｒ，Ｓ００３Ｐ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ２４８Ｎ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ａ２７２Ｖ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｖ００４Ａ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，及びＹ００６Ｈ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎからなる群から選択される配列番号６に対する少なくとも１組のアミノ酸置換、
（ｘ）Ｓ０１８Ｆ−Ｓ１６２Ｌ，Ｓ０１８Ｐ−Ｄ１２０Ｎ，Ｐ０１４Ｔ−Ｓ０３７Ｔ，Ｓ００９Ｔ−Ｋ１４１Ｒ，及びＳ１６１Ｐ−Ｓ１６２Ｌからなる群から選択される配列番号６に対する少なくとも１組のアミノ酸置換、
（ｘｉ）Ｉ０３１Ｖ−Ｓ０３８Ｗ，Ｐ０１４Ｔ−Ｓ０３７Ｔ，Ｓ０１８Ｆ−Ｓ１６２Ｌ，Ｓ０１８Ｐ−Ｄ１２０Ｎ，及びＳ１６２Ｌ−Ｄ１８１Ｈからなる群から選択される配列番号６に対する少なくとも１組のアミノ酸置換、
（ｘｉｉ）Ｙ２１Ｈ−Ｄ２５９Ｇ，Ｓ１８３Ｔ−Ｓ２４９Ｒ，Ｎ６１Ｄ−Ｑ２０６Ｒ，Ｙ２６２Ｎ−Ｑ２７５Ｒ，Ｋ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｓ，Ａ１３３Ｖ−Ｄ２５９Ｎ，及びＩ０７９Ｖ−Ｑ２１７Ｈからなる群から選択される配列番号６に対する少なくとも１組のアミノ酸置換、
（ｘｉｉｉ）Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｍ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｍ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０１Ｑ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｓ−Ｓ１３０Ｔ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，及びＡ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖからなる群から選択される配列番号６に対する少なくとも１組のアミノ酸置換、
（ｘｉｖ）Ｓ３３Ｔ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１Ｇ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ｑ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ｑ，Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｍ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｍ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ６３Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０１Ｑ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｓ−Ｓ１３０Ｔ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，及びＡ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖからなる群から選択される配列番号６に対する少なくとも１組のアミノ酸置換、並びに、
（ｘｖ）Ｇ２４Ｓ−Ｇ５３Ｓ−Ｎ７８Ｓ−Ｇ９７Ａ−Ｎ１０１Ｓ−Ａ１２８Ｓ，Ｉ３１Ｌ−Ｓ３３Ｔ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１Ｇ−Ｉ３１Ｌ−Ｓ３３Ｔ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ｑ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１Ｇ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ｑ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１Ｇ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ｑ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ｑ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｍ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ７６Ｄ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｍ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０１Ｑ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｓ−Ｓ１３０Ｔ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｍ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ６３Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０１Ｑ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｓ−Ｓ１３０Ｔ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，及びＡ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖからなる群から選択される配列番号６に対する少なくとも１組のアミノ酸置換；からなる群から選択される。
第八態様では、本発明は、配列番号２のアミノ酸配列を有するＢＰＮ’スブチリシンプロテアーゼの単離された又は非自然発生型のプロテアーゼ変異体を提供し、上記変異体は、タンパク質分解活性を有し、Ｓ１８２Ｅ，Ｎ１０９Ｉ，Ｎ１０９Ｄ−Ｙ２１７Ｌ−Ｓ２４８Ｒ，Ｎ１０９Ｄ−Ｓ１８８Ｒ−Ｙ２１７Ｌ，Ｓ８７Ｄ−Ｙ２１７Ｌ−Ｓ２４８Ｒ，Ｓ８７Ｒ−Ｎ１０９Ｄ−Ｙ２１７Ｌ−Ｓ２４８Ｒ，Ｓ８７Ｒ−Ｎ１０９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｙ２１７Ｌ−Ｓ２４８Ｒ，Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ，Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ６２Ｑ−Ｇ９７Ａ，Ｓ８９Ｙ−Ｍ１２４Ｖ，Ｖ６８Ａ，Ｖ６８Ａ−Ａ９２Ｇ，Ｖ６８Ａ−Ｇ９７Ａ，Ｖ６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ，Ｖ６８Ａ−Ｓ８９Ｙ，Ｖ６８Ａ−Ｖ２２７Ｔ，Ｖ６８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｗ１０６Ｆ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｌ１２６Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｍ１２４Ｖ−Ｌ１２６Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｎ１２３Ｇ−Ｙ２１７Ｑ，Ｌ９６Ｔ−Ｇ９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｍ１２４Ｖ−Ｌ１２６Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ６２Ｑ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ６２Ｑ−Ｇ９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｍ，Ｇ９７Ｇ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｍ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｄ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｍ−Ｇ１２８Ｇ−Ｙ２１７Ｍ，Ｇ９７Ｇ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｇ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｌ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｎ，Ｇ９７Ｑ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｌ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｍ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｓ，Ｇ９７Ｄ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｍ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｑ−Ｇ１２８Ｇ−Ｙ２１７Ｄ−Ｓ８７Ｙ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｔ，Ｇ９７Ｄ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｅ，Ｇ９７Ｄ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｌ，Ｇ９７Ｇ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｅ−Ｓ７８Ｐ−Ａ２７２Ｔ，Ｇ９７Ｔ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｄ，Ｇ９７Ｄ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｉ，Ｇ９７Ｑ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｇ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｄ，Ｇ９７Ｑ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｎ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｍ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｎ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｍ，Ｇ９７Ｅ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｍ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ｐ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｔ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｄ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ７３Ｔ，Ｇ９７Ｅ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｎ，Ｇ９７Ｇ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｉ，Ｇ９７Ｑ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｄ，Ｇ９７Ｑ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｍ，Ｇ９７Ｒ−Ｇ１２８Ｔ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１６２Ｐ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｄ，Ｇ９７Ｔ−Ｇ１２８Ｐ−Ｙ２１７Ｉ，Ｇ９７Ｑ−Ｇ１２８Ｇ−Ｙ２１７Ｅ，Ｇ９７Ｃ−Ｇ１２８Ｇ−Ｙ２１７Ｎ，Ｇ９７Ｄ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｈ，Ｇ９７Ｍ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｌ，Ｇ９７Ｍ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｎ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｅ，Ｇ９７Ｍ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｉ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ｐ−Ｙ２１７Ａ，Ｇ９７Ｒ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｄ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１４５Ｄ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ２３９Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｅ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１６２Ｋ−Ｋ２１３Ｌ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ４０Ｅ−Ａ１４４Ｋ−Ｋ２１３Ｌ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｅ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１５９Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｋ２１３Ｌ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｄ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ２０６Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｐ４０Ｅ−Ｓ１４５Ｄ−Ｓ１５９Ｋ−Ｋ２１３Ｌ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｋ２６５Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ４０Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ２７５Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１４５Ｄ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１４４Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１５９Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１６２Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ７８Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｉ１１１Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ１１７Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ１３２Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｙ１０４Ｎ−Ｓ１３２Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｉ１１１Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｎ１１７Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１３２Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｙ１０４Ｎ−Ｓ１３２Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ７８Ｎ−Ｙ１０４Ｎ−Ｓ１３２Ｎ，Ｙ２１７Ｌ−Ｖ０６８Ｃ−Ａ０６９Ｇ，Ｙ２１７Ｌ−Ｉ０７９Ｆ−Ａ０９８Ｇ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ０８６Ｔ−Ｓ１０１Ｄ−Ｑ１０３Ｓ−Ｖ１４７Ｉ，Ｙ２１７Ｌ−Ａ０８８Ｔ−Ｐ１２９Ｓ−Ｇ１４６Ｄ，Ｙ２１７Ｌ−Ｖ０９３Ｉ−Ｇ１２８Ｄ−Ｐ１２９Ｒ，Ｙ２１７Ｌ−Ｚ０９６．０１Ｄ−Ａ０９８Ｒ，Ｙ２１７Ｌ−Ｚ０９６．０１Ｈ−Ａ０９８Ｇ，Ｙ２１７Ｌ−Ｇ０９７Ｓ−Ｚ０９７．０１Ｓ−Ａ０９８Ｇ−Ａ２７３Ｔ，Ｙ２１７Ｌ−Ａ０９８Ｓ−Ｄ０９９Ｇ−Ｇ１００Ｄ，Ｙ２１７Ｌ−Ｚ０９８．０１Ｎ、Ｙ２１７Ｌ−Ｄ０９９Ｇ−Ｚ０９９．０１Ｎ、Ｙ２１７Ｌ−Ｄ０９９Ｇ−Ｚ０９９．０１Ｓ、Ｙ２１７Ｌ−Ｄ０９９Ｖ−Ｓ１０１Ｄ，Ｙ２１７Ｌ−Ｚ０９９．０１Ｓ、Ｙ２１７Ｌ−Ｇ１００Ｄ，Ｙ２１７Ｌ−Ｓ１０１Ｄ−Ｑ１０３Ｈ，Ｙ２１７Ｌ−Ｓ１０１Ｇ−Ａ１５１Ｖ，Ｙ２１７Ｌ−Ｓ１０１Ｈ−Ｇ１０２Ｓ，Ｙ２１７Ｌ−Ｓ１０１Ｈ−Ｑ１０３Ｄ，Ｙ２１７Ｌ−Ｇ１０２Ｒ−Ｑ１０３Ｃ−Ｙ１０４Ｃ−Ｖ１９２Ｉ，Ｙ２１７Ｌ−Ｑ１０３Ｄ，Ｙ２１７Ｌ−Ｖ１２１Ｉ−Ｉ１２２Ｓ−Ｎ１２３Ｃ，Ｙ２１７Ｌ−Ｖ１２１Ｌ−Ｎ１２３Ｃ，Ｙ２１７Ｌ−Ｉ１２２Ｓ−Ｎ１２３Ｓ，Ｙ２１７Ｌ−Ｍ１２４Ｉ，Ｙ２１７Ｌ−Ｍ１２４Ｖ，Ｙ２１７Ｌ−Ｌ１２６Ｆ−Ｐ１２９Ｚ−Ｓ１８２Ｎ，Ｙ２１７Ｌ−Ｌ１２６Ｙ，Ｙ２１７Ｌ−Ｇ１２７Ｓ−Ｐ１２９Ｄ，Ｙ２１７Ｌ−Ｚ１２７．０１Ｎ−Ｇ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｓ，Ｙ２１７Ｌ−Ｇ１２８Ｈ−Ｐ１２９Ｙ，Ｙ２１７Ｌ−Ｇ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｄ，Ｙ２１７Ｌ−Ｇ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｄ−Ｓ２４８Ｒ，Ｙ２１７Ｌ−Ｇ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｇ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｇ−Ｇ１３１Ｚ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｇ−Ｓ１３０Ｈ−Ｓ１３２Ｚ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｈ−Ｇ１３１Ｚ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｌ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｓ−Ｓ１３０Ｈ−Ｓ１３２Ｚ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｚ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｚ−Ｓ１３０Ｇ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｚ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ１３２Ｈ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｚ−Ｓ１３０Ｈ，Ｙ２１７Ｌ−Ｓ１３０Ｖ−Ｇ１３１Ｄ−Ｓ１３２Ｉ，Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ６１Ｐ−Ｎ６２Ｓ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｌ７５Ｓ−Ｎ７６Ｙ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ２０３Ｙ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ５５Ｐ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ａ８８Ｖ−Ｌ９０Ｉ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｇ２１１Ｒ−Ｎ２１２Ｓ−Ｋ２１３Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ２２Ｎ−Ｓ２４Ａ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ２４Ｒ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ａ９８Ｓ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｔ１５８Ｇ−Ｓ１５９Ｇ−Ｙ２１７Ｑ，Ｑ５９Ｅ−Ｎ６１Ｐ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ａ９８Ｅ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ６３Ｔ−Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｐ２３９Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｎ６２Ｓ−Ｐ１９４Ｌ−Ａ２３２Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ａ１３３Ｖ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１３４Ｔ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｐ４０Ｅ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１５９Ｋ−Ｋ２６５Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１３４Ｔ−Ｇ２１１Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｐ１２９Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１１Ｖ−Ｓ１６１Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｐ１２９Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１５Ｖ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ａ１１６Ｓ−Ｎ１１７Ｇ−Ｎ１１８Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｖ２０３Ｙ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ５２Ｓ−Ｔ５５Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ａ１１６Ｓ−Ｎ１１７Ｇ−Ｎ１１８Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｔ２４２Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ４０Ｅ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ２６９Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｖ８Ｌ−Ｎ２５Ｙ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２１１Ｔ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５Ｙ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ａ１３４Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｐ１２９Ｖ−Ｐ１９４Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｐ１２９Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１
Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｉ１１５Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５Ｙ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１３４Ｔ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｐ２３９Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ａ１１６Ｓ−Ｎ１１７Ｇ−Ｎ１１８Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１３４Ｔ−Ｓ１６１Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５Ｙ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５Ｙ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ａ１３７Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ａ１３４Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５Ｙ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｐ１２９Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｌ７５Ｈ−Ｎ７６Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｉ１１５Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｇ２１１Ｒ−Ｎ２１２Ｓ−Ｋ２１３Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１５Ｖ−Ａ２７３Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５Ｙ−Ｔ５５Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１６１Ｐ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８９Ｙ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１５Ｖ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１６１Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｐ２３９Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｉ１１５Ｖ−Ａ１３４Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｙ６Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８９Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ａ８８Ｖ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ｓ７８Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ａ１３４Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２４０Ｋ−Ａ２７３Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１６１Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ｓ７８Ｎ−Ｉ１１１Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｅ−Ａ１４４Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１３４Ｔ−Ｐ２３９Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｐ２３９Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１１Ｖ−Ｐ１２９Ｑ−Ｇ２１１Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｓ１６２Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１１Ｖ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１１Ｖ−Ａ２７３Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ２２Ｎ−Ｓ２４Ａ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｐ１２９Ｓ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１５９Ｋ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ４０Ｅ−Ｓ５３Ｙ−Ｓ７８Ｙ−Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｓ１４５Ｄ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１１Ｖ−Ｓ１５９Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｐ１２９Ｌ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８９Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｐ１２９Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ−Ｐ１７２Ｈ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１１Ｖ−Ａ１３４Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ５Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ａ１１６Ｇ−Ｎ１１７Ｒ，Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ａ９７Ｇ−Ｇ１０２Ａ−Ａ１２８Ｇ−Ｐ１２９Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１４５Ｄ−Ｓ１５９Ｋ−Ｎ２４０Ｋ−Ｑ２７５Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｄ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｄ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１１Ｖ−Ｐ２３９Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ｓ１６２Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｉ１１５Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ａ９２Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ２２Ｎ−Ｓ２４Ａ−Ｔ５５Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｓ１５９Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｎ６２Ｑ−Ｇ１００Ｎ−Ａ１２８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１８２Ｐ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ２３９Ｒ−Ａ２７３Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｔ２４２Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ３Ｆ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｇ２１１Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｌ７５Ｈ−Ｎ７６Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ
−Ｓ８９Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ａ１４４Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｉ１１１Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｓ１４５Ｄ−Ｐ２３９Ｒ−Ｑ２７５Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１４５Ｄ−Ａ２７３Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｋ１４１Ｅ−Ｔ２４２Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８９Ｙ−Ｇ２１１Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ−Ａ１４４Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｐ１２９Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ａ１２８Ｇ−Ｐ１２９Ｓ−Ｓ１３０Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｇ１１０Ｃ−Ｓ１３０Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ１２３Ｇ−Ａ１２８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｎ６２Ｑ−Ｇ１００Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｍ１２４Ｉ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ａ１３７Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ６１Ｐ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１３０Ｐ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｑ１０３Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ６３Ｔ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１０２Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｎ１０９Ｄ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４８Ｒ，Ｓ８７Ｒ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１８８Ｄ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ８７Ｄ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４８Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１８８Ｄ−Ｓ２４８Ｒ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ２４８Ｄ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｌ２６７Ｖ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１６１Ｐ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１５Ｖ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ２７３Ｓ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２１１Ｔ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１１Ｖ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｖ１４７Ｌ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１０８Ｖ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８９Ｙ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１３８Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１３４Ｔ−Ｋ２１３Ｌ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｐ１２９Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｐ２３９Ｒ，及びＧ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、この変異体のアミノ酸位置は、配列番号２のアミノ酸配列に対応させることにより番号付けされる。
本発明の第八態様による変異体は、配列番号２及び／又は配列番号４の配列を有するプロテアーゼと比較して、増大したタンパク質分解活性及び／又は増大したクリーニング活性を有し得、並びに、成熟型であり得る。本発明の第八態様による変異体は、配列番号２又は配列番号４に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み得、ここで、この変異体は、タンパク質分解活性を有し、選択的に、配列番号２又は配列番号４の配列を有するプロテアーゼと比較して、向上したタンパク質分解活性及び／又は向上したクリーニング活性を有する。
本発明の第八態様による変異体は、位置２４、２５、４０、５２、５３、５５、５８、５９、６１、６２、６３、６８、７８、８６、８７、８８、８９、９２、９６、９７、１００、１０１、１０３、１０４、１０６、１１１、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１２３、１２４、１２５、１２６、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１４４、１４５、１５９、１６１、１６２、１６７、１９４、２０３、２０６、２１３、２１７、２２７、２３２、２３９、２４０、２４２、２６５、２６７及び２７５からなる群から選択される位置において３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を含み得る。第八態様による変異体は、群（ａ）及び（ｂ）から選択される合計で３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を含み得る：（ａ）Ｎ６１Ｅ，Ａ１４４Ｋ，Ｐ１２９Ｅ、Ｐ２３９Ｒ，Ｐ４０Ｅ，Ｑ１０３Ｅ，Ｑ２０６Ｅ，Ｑ７２７５Ｅ，Ｓ１４５Ｄ，Ｓ１５９Ｋ，Ｓ１６２Ｋ，Ｓ２４Ｒ，Ｓ６３Ｈ，Ｓ８７Ｄ及びＴ２４２Ｒからなる群から選択される帯電アミノ酸置換、並びに（ｂ）Ａ１１４Ｇ，Ａ１１６Ｎ，Ａ１３３Ｖ，Ａ１３４Ｔ，Ａ２３２Ｔ，Ａ８８Ｖ，Ａ９２Ｇ，Ｆ５８Ｇ，Ｇ１００Ｔ，Ｇ１２８Ａ，Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ，Ｉ１１１Ｖ，Ｉ１１５Ｖ，Ｋ２１３Ｌ，Ｋ２６５Ｎ，Ｌ１２６Ａ，Ｌ２６７Ｖ，Ｌ９６Ｔ，Ｍ１２４Ｖ，Ｎ１１７Ｓ，Ｎ１１８Ｇ，Ｎ１２３Ｇ，Ｎ２４０Ｋ，Ｎ２５Ｇ，Ｎ６１Ｐ，Ｎ６２Ｑ，Ｎ６２Ｒ，Ｎ６２Ｓ，Ｐ１２９Ｑ，Ｐ１２９Ｖ，Ｐ１９４Ｌ，Ｐ２３９Ｖ，Ｐ５２Ｌ，Ｐ８６Ｓ，Ｑ５９Ｓ，Ｓ１０１Ｎ，Ｓ１２５Ａ，Ｓ１３０Ｇ，Ｓ１３２Ｎ，Ｓ１６１Ｐ，Ｓ２４Ｇ，Ｓ５３Ｇ，Ｓ７８Ｎ，Ｓ８７Ｇ，Ｓ８９Ｙ，Ｔ５５Ｐ，Ｖ２０３Ｙ，Ｖ２２７Ｔ，Ｖ６８Ａ，Ｗ１０６Ｆ，Ｙ１０４Ｎ，Ｙ１６７Ａ，及びＹ２１７Ｑからなる群から選択される中性アミノ酸置換。第八態様による変異体は、配列番号２に対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
第九態様では、本発明は、以下の群から選択される単離された又は非自然発生型のプロテアーゼ変異体を提供する：
（ａ）タンパク質分解活性を有するプロテアーゼ変異体であって、この変異体は、配列番号２に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、群（ｉ）〜（Ｖｉｉ）から選択される配列番号２と比較して少なくとも１組のアミノ酸置換を含む、プロテアーゼ変異体：
（ｉ）Ｑ０５９Ｖ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５２Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ／−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５２Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５２Ｑ，及びＳ０７８Ｎ−Ｓ０８７Ｅ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｉ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２２４Ａ、
（ｉｉ）Ｑ０５９Ｖ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５２Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５２Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５２Ｑ，及びＳ０７８Ｎ−Ｓ０８７Ｅ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｉ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２２４Ａ、
（ｉｉｉ）Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｖ０６８Ａ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ，Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｖ０６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，及びＰ０５２Ｌ−Ｖ０６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ、
（ｉｖ）Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，及びＧ１０２Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ、
（ｖ）Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｄ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，及びＧ１０２Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ、
（ｖｉ）Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ１０２Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｑ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ１００Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｑ−Ｓ１０１Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｄ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６２Ｑ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ａ−Ｙ２１７Ｑ及びＹ２１７Ｑ、並びに、
（ｖｉｉ）Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４９Ｎ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０３８Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１３０Ｇ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ、並びに、
（ｂ）タンパク質分解活性を有するプロテアーゼ変異体であって、この変異体は、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、群（ｉ）〜（ｘｉｉ）から選択される配列番号６と比較して少なくとも１組のアミノ酸置換を含む、プロテアーゼ変異体：
（ｉ）Ａ００１Ｃ，Ａ００１Ｄ，Ａ００１Ｅ，Ａ００１Ｆ，Ａ００１Ｈ，Ａ００１Ｋ，Ａ００１Ｌ，Ａ００１Ｍ，Ａ００１Ｎ，Ａ００１Ｐ，Ａ００１Ｑ，Ａ００１Ｒ，Ａ００１Ｓ，Ａ００１Ｔ，Ａ００１Ｖ，Ａ０１３Ｃ，Ａ０１３Ｓ，Ａ０１５Ｃ，Ａ０１５Ｄ，Ａ０１５Ｅ，Ａ０１５Ｌ，Ａ０１５Ｒ，Ａ０４８Ｃ，Ａ０４８Ｅ，Ａ０４８Ｓ，Ａ０７３Ｎ，Ａ０７３Ｔ，Ａ０７４Ｇ，Ａ０７４Ｓ，Ａ０８５Ｃ，Ａ０８５Ｇ，Ａ０８５Ｓ，Ａ０８５Ｔ，Ａ０８５Ｖ，Ａ０８８Ｍ，Ａ０８８Ｓ，Ａ０９２Ｓ，Ａ０９８Ｇ，Ａ１１４Ｇ，Ａ１３３Ｅ，Ａ１３３Ｐ，Ａ１３３Ｒ，Ａ１３７Ｅ，Ａ１３７Ｈ，Ａ１３７Ｒ，Ａ１４２Ｃ，Ａ１４４Ｄ，Ａ１４４Ｇ，Ａ１４４Ｈ，Ａ１４４Ｋ，Ａ１４４Ｌ，Ａ１４４Ｎ，Ａ１４４Ｒ，Ａ１５２Ｓ，Ａ１５３Ｇ，Ａ１５３Ｓ，Ａ１５３Ｖ，Ａ１７６Ｃ，Ａ１７９Ｇ，Ａ１８７Ｃ，Ａ１８７Ｆ，Ａ１８７Ｇ，Ａ１８７Ｌ，Ａ１８７Ｎ，Ａ１８７Ｐ，Ａ１８７Ｑ，Ａ１８７Ｓ，Ａ１８７Ｔ，Ａ１８７Ｖ，Ａ１８７Ｗ，Ａ２００Ｇ，Ａ２１６Ｃ，Ａ２１６Ｈ，Ａ２１６Ｒ，Ａ２１６Ｗ，Ａ２２３Ｓ，Ａ２２８Ｓ，Ａ２３０Ｇ，Ａ２３０Ｓ，Ａ２３０Ｔ，Ａ２３０Ｖ，Ａ２３１Ｖ，Ａ２３２Ｃ，Ａ２３２Ｖ，Ａ２７２Ｅ，Ａ２７２Ｇ，Ａ２７２Ｋ，Ａ２７２Ｐ，Ａ２７２Ｒ，Ａ２７３Ｄ，Ａ２７３Ｇ，Ａ２７３Ｈ，Ａ２７３Ｌ，Ａ２７３Ｐ，Ａ２７３Ｑ，Ａ２７３Ｒ，Ａ２７３Ｔ，Ａ２７３Ｖ，Ａ２７４Ｈ，Ａ２７４Ｍ，Ａ２７４Ｒ，Ｄ０３６Ｅ，Ｄ０３６Ｎ，Ｄ０３６Ｑ，Ｄ０３６Ｓ，Ｄ０４１Ｃ，Ｄ０６０Ｇ，Ｄ０９９Ａ，Ｄ０９９Ｈ，Ｄ０９９Ｑ，Ｄ１２０Ｅ，Ｄ１８１Ａ，Ｄ１８１Ｇ，Ｄ１８１Ｈ，Ｄ１８１Ｔ，Ｄ１９７Ｔ，Ｄ２５９Ａ，Ｄ２５９Ｇ，Ｄ２５９Ｈ，Ｄ２５９Ｎ，Ｄ２５９Ｐ，Ｄ２５９Ｑ，Ｄ２５９Ｓ，Ｄ２５９Ｔ，Ｅ１５６Ａ，Ｅ１５６Ｃ，Ｅ１５６Ｇ，Ｅ１５６Ｈ，Ｅ１５６Ｌ，Ｅ１５６Ｑ，Ｅ１５６Ｓ，Ｅ１５６Ｖ，Ｅ１９５Ｇ，Ｅ２５１Ｃ，Ｅ２５１Ｉ，Ｅ２５１Ｌ，Ｅ２５１Ｑ，Ｅ２５１Ｔ，Ｆ０５８Ｙ，Ｆ１８９Ａ，Ｆ１８９Ｇ，Ｆ１８９Ｈ，Ｆ１８９Ｌ，Ｆ１８９Ｒ，Ｆ１８９Ｓ，Ｆ１８９Ｔ，Ｆ１８９Ｗ，Ｆ１８９Ｙ，Ｆ２６１Ｃ，Ｆ２６１Ｄ，Ｆ２６１Ｅ，Ｆ２６１Ｋ，Ｆ２６１Ｐ，Ｇ０２０Ｃ，Ｇ０２０Ｅ，Ｇ０２０Ｆ，Ｇ０２０Ｈ，Ｇ０２０Ｌ，Ｇ０２０Ｎ，Ｇ０２０Ｑ，Ｇ０２０Ｒ，Ｇ０２０Ｔ，Ｇ０２０Ｙ，Ｇ０２４Ａ，Ｇ０２４Ｄ，Ｇ０２４Ｐ，Ｇ０４６Ｄ，Ｇ０５３Ａ，Ｇ０５３Ｄ，Ｇ０５３Ｅ，Ｇ０５３Ｆ，Ｇ０５３Ｌ，Ｇ０５３Ｍ，Ｇ０５３Ｑ，Ｇ０５３Ｒ，Ｇ０５３Ｓ，Ｇ０５３Ｙ，Ｇ０９７Ｋ，Ｇ０９７Ｍ，Ｇ０９７Ｒ，Ｇ１３１Ｃ，Ｇ１３１Ｄ，Ｇ１３１Ｒ，Ｇ１４６Ａ，Ｇ１５７Ａ，Ｇ１５７Ｎ，Ｇ１５７Ｐ，Ｇ１５７Ｓ，Ｇ１５７Ｔ，Ｇ１６０Ａ，Ｇ１６０Ｌ，Ｇ１６０Ｒ，Ｇ１６０Ｖ，Ｇ１６６Ｃ，Ｇ１６６Ｉ，Ｇ１６６Ｌ，Ｇ１６６Ｑ，Ｇ１６６Ｖ，Ｇ１６６Ｗ，Ｇ１６９Ａ，Ｇ１７８Ａ，Ｇ２１１Ｅ，Ｇ２１１Ｋ，Ｇ２１５Ｃ，Ｇ２１５Ｄ，Ｇ２１５Ｅ，Ｇ２１５Ｈ，Ｇ２１５Ｌ，Ｇ２１５Ｓ，Ｇ２１５Ｔ，Ｇ２１５Ｗ，Ｇ２５８Ａ，Ｇ２５８Ｄ，Ｇ２５８Ｐ，Ｇ２５８Ｓ，Ｈ０１７Ｉ，Ｈ０３９Ｓ，Ｈ２２６Ｌ，Ｈ２３８Ｎ，Ｈ２３８Ｙ，Ｉ０１１Ｌ，Ｉ０１１Ｔ，Ｉ０１１Ｖ，Ｉ０３１Ｃ，Ｉ０３１Ｆ，Ｉ０３１Ｌ，Ｉ０７９Ｅ，Ｉ０７９Ｆ，Ｉ０７９Ｋ，Ｉ０７９Ｌ，Ｉ０７９Ｍ，Ｉ０７９Ｑ，Ｉ０７９Ｒ，Ｉ１０７Ｌ，Ｉ１１１Ｍ，Ｉ１７５Ｌ，Ｉ２０５Ａ，Ｉ２０５Ｃ，Ｉ２０５Ｖ，Ｉ２６８Ｌ，Ｉ２６８Ｍ，Ｋ０１２Ａ，Ｋ０１２Ｃ，Ｋ０１２Ｅ，Ｋ０１２Ｆ，Ｋ０１２Ｇ，Ｋ０１２Ｈ，Ｋ０１２Ｌ，Ｋ０１２Ｎ，Ｋ０１２Ｓ，Ｋ０１２Ｔ，Ｋ０１２Ｗ，Ｋ０２７Ａ，Ｋ０２７Ｎ，Ｋ０２７Ｓ，Ｋ０２７Ｔ，Ｋ０４３Ａ，Ｋ０４３Ｃ，Ｋ０４３Ｄ，Ｋ０４３Ｅ，Ｋ０４３Ｆ，Ｋ０４３Ｇ，Ｋ０４３Ｈ，Ｋ０４３Ｉ，Ｋ０４３Ｌ，Ｋ０４３Ｍ，Ｋ０４３Ｎ，Ｋ０４３Ｐ，Ｋ０４３Ｑ，Ｋ０４３Ｒ，Ｋ０４３Ｔ，Ｋ０４３Ｖ，Ｋ０４３Ｗ，Ｋ０４３Ｙ，Ｋ１３６Ｇ，Ｋ１３６Ｈ，Ｋ１４１Ａ，Ｋ１４１Ｇ，Ｋ１４１Ｈ，Ｋ１４１Ｌ，Ｋ１４１Ｍ，Ｋ１４１Ｎ，Ｋ１４１Ｑ，Ｋ１４１Ｒ，Ｋ１４１Ｔ，Ｋ１４１Ｖ，Ｋ１４１Ｗ，Ｋ１７０Ａ，Ｋ１７０Ｃ，Ｋ１７０Ｇ，Ｋ１７０Ｑ，Ｋ１７０Ｓ，Ｋ２１３Ａ，Ｋ２１３Ｇ，Ｋ２１３Ｈ，Ｋ２１３Ｉ，Ｋ２１３Ｌ，Ｋ２１３Ｎ，Ｋ２１３Ｑ，Ｋ２１３Ｒ，Ｋ２１３Ｓ，Ｋ２１３Ｔ，Ｋ２１３Ｖ，Ｋ２３７Ａ，Ｋ２３７Ｈ，Ｋ２３７Ｉ，Ｋ２３７Ｌ，Ｋ２３７Ｎ，Ｋ２３７Ｓ，Ｋ２３７Ｔ，Ｋ２３７Ｖ，Ｋ２５６Ａ，Ｋ２５６Ｃ，Ｋ２５６Ｄ，Ｋ２５６Ｅ，Ｋ２５６Ｇ，Ｋ２５６Ｈ，Ｋ２５６Ｍ，Ｋ２５６Ｐ，Ｋ２５６Ｑ，Ｋ２５６Ｓ，Ｋ２５６Ｔ，Ｋ２５６Ｖ，Ｋ２５６Ｗ，Ｋ２６５Ｇ，Ｋ２６５Ｈ，Ｋ２６５Ｎ，Ｋ２６５Ｓ，Ｋ２６５Ｙ，Ｌ０１６Ｅ，Ｌ０４２Ｃ，Ｌ０４２Ｆ，Ｌ０４２Ｍ，Ｌ０４２Ｖ，Ｌ０７５Ｇ，Ｌ０７５Ｈ，Ｌ０７５Ｉ，Ｌ０７５Ｔ，Ｌ０８２Ａ，Ｌ０８２Ｅ，Ｌ０８２Ｆ，Ｌ０８２Ｈ，Ｌ０８２Ｒ，Ｌ０８２Ｓ，Ｌ０８２Ｔ，Ｌ０９０Ｍ，Ｌ１３５Ｆ，Ｌ１９６Ｍ，Ｌ２０９Ａ，Ｌ２０９Ｃ，Ｌ２０９Ｅ，Ｌ２０９Ｇ，Ｌ２０９Ｈ，Ｌ２０９Ｒ，Ｌ２０９Ｓ，Ｌ２３３Ｅ，Ｌ２３３Ｇ，Ｌ２３３Ｓ，Ｌ２３５Ｍ，Ｌ２３５Ｒ，Ｌ２３５Ｖ，Ｌ２３５Ｗ，Ｌ２５７Ｃ，Ｌ２５７Ｄ，Ｌ２５７Ｅ，Ｌ２５７Ｇ，Ｌ２５７Ｐ，Ｌ２５７Ｒ，Ｌ２５７Ｗ，Ｌ２６７Ｅ，Ｌ２６７Ｆ，Ｍ０５０Ｌ，Ｍ０５０Ｙ，Ｍ１１９Ｃ，Ｍ１１９Ｉ，Ｍ１２４Ｌ，Ｍ２２２Ａ，Ｍ２２２Ｆ，Ｍ２２２Ｌ，Ｍ２２２Ｓ，Ｍ２２２Ｔ，Ｎ０２５Ｃ，Ｎ０２５Ｅ，Ｎ０２５Ｐ，Ｎ０５６Ｄ，Ｎ０５６Ｓ，Ｎ０６１Ａ，Ｎ０６１Ｃ，Ｎ０６１Ｄ，Ｎ０６１Ｇ，Ｎ０６１Ｉ，Ｎ０６１Ｋ，Ｎ０６１Ｌ，Ｎ０６１Ｑ，Ｎ０６１Ｒ，Ｎ０６２Ａ，Ｎ０６２Ｃ，Ｎ０６２Ｈ，Ｎ０６２Ｌ，Ｎ０６２Ｑ，Ｎ０６２Ｒ，Ｎ０６２Ｓ，Ｎ０６２Ｔ，Ｎ０６２Ｖ，Ｎ０６２Ｙ，Ｎ０７６Ａ，Ｎ０７６Ｄ，Ｎ０７６Ｅ，Ｎ０７６Ｌ，Ｎ０７６Ｍ，Ｎ０７６Ｐ，Ｎ０７６Ｑ，Ｎ０７６Ｓ，Ｎ０７６Ｔ，Ｎ０７６Ｖ，Ｎ０７８Ｄ，Ｎ０７８Ｅ，Ｎ０７８Ｆ，Ｎ０７８Ｇ，Ｎ０７８Ｈ，Ｎ０７８Ｋ，Ｎ０７８Ｐ，Ｎ０７８Ｑ，Ｎ０７８Ｒ，Ｎ１０１Ｄ，Ｎ１０１Ｆ，Ｎ１０１Ｒ，Ｎ１１７Ｇ，Ｎ１１７Ｒ，Ｎ１１７Ｓ，Ｎ１１８Ａ，Ｎ１１８Ｄ，Ｎ１１８Ｈ，Ｎ１１８Ｑ，Ｎ１１８Ｒ，Ｎ１１８Ｓ，Ｎ１１８Ｔ，Ｎ１８４Ｃ，Ｎ１８４Ｅ，Ｎ１８４Ｐ，Ｎ１８４Ｒ，Ｎ２１２Ｃ，Ｎ２１２Ｄ，Ｎ２１２Ｅ，Ｎ２１２Ｒ，Ｎ２１２Ｗ，Ｎ２１８Ｃ，Ｎ２１８Ｄ，Ｎ２１８Ｅ，Ｎ２１８Ｆ，Ｎ２１８Ｇ，Ｎ２１８Ｍ，Ｎ２１８Ｐ，Ｎ２１８Ｒ，Ｎ２１８Ｔ，Ｎ２１８Ｖ，Ｎ２１８Ｗ，Ｎ２４０Ａ，Ｎ２４０Ｇ，Ｎ２４０Ｑ，Ｎ２４０Ｓ，Ｎ２４０Ｗ，Ｎ２４３Ｃ，Ｎ２４３Ｇ，Ｎ２４３Ｓ，Ｎ２５２Ｄ，Ｎ２５２Ｅ，Ｎ２５２Ｖ，Ｎ２６９Ｃ，Ｎ２６９Ｈ，Ｐ００５Ａ，Ｐ００５Ｄ，Ｐ００５Ｍ，Ｐ００５Ｑ，Ｐ００５Ｖ，Ｐ００５Ｗ，Ｐ０１４Ａ，Ｐ０１４Ｄ，Ｐ０１４Ｆ，Ｐ０１４Ｋ，Ｐ０１４Ｍ，Ｐ０１４Ｒ，Ｐ０１４Ｖ，Ｐ０４０Ｆ，Ｐ０４０Ｒ，Ｐ０４０Ｗ，Ｐ０５７Ａ，Ｐ０５７Ｗ，Ｐ１２９Ｅ，Ｐ１２９Ｒ，Ｐ１２９Ｖ，Ｐ１７２Ｅ，Ｐ１７２Ｋ，Ｐ１７２Ｒ，Ｐ１９４Ｅ，Ｐ１９４Ｈ，Ｐ１９４Ｒ，Ｐ１９４Ｗ，Ｐ２０１Ａ，Ｐ２０１Ｇ，Ｐ２０１Ｔ，Ｐ２１０Ｅ，Ｐ２１０Ｌ，Ｐ２３９Ａ，Ｐ２３９Ｇ，Ｐ２３９Ｈ，Ｐ２３９Ｋ，Ｐ２３９Ｎ，Ｐ２３９Ｒ，Ｐ２３９Ｔ，Ｑ００２Ｄ，Ｑ００２Ｅ，Ｑ００２Ｇ，Ｑ００２Ｉ，Ｑ００２Ｋ，Ｑ００２Ｌ，Ｑ００２Ｐ，Ｑ００２Ｒ，Ｑ００２Ｖ，Ｑ０１０Ｄ，Ｑ０１０Ｒ，Ｑ０１０Ｗ，Ｑ０１９Ｃ，Ｑ０１９Ｄ，Ｑ０１９Ｅ，Ｑ０１９Ｈ，Ｑ０１９Ｌ，Ｑ０１９Ｐ，Ｑ０１９Ｒ，Ｑ０５９Ａ，Ｑ０５９Ｃ，Ｑ０５９Ｄ，Ｑ０５９Ｅ，Ｑ０５９Ｌ，Ｑ０５９Ｒ，Ｑ０５９Ｓ，Ｑ０５９Ｔ，Ｑ０５９Ｗ，Ｑ１０３Ｗ，Ｑ１８５Ｄ，Ｑ１８５Ｅ，Ｑ１８５Ｋ，Ｑ１８５Ｒ，Ｑ１８５Ｗ，Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｇ，Ｑ２０６Ｈ，Ｑ２０６Ｌ，Ｑ２０６Ｖ，Ｑ２０６Ｗ，Ｑ２１７Ａ，Ｑ２１７Ｃ，Ｑ２１７Ｅ，Ｑ２１７Ｆ，Ｑ２１７Ｇ，Ｑ２１７Ｈ，Ｑ２１７Ｋ，Ｑ２１７Ｌ，Ｑ２１７Ｒ，Ｑ２１７Ｖ，Ｑ２４５Ａ，Ｑ２４５Ｄ，Ｑ２４５Ｅ，Ｑ２４５Ｈ，Ｑ２４５Ｍ，Ｑ２４５Ｒ，Ｑ２７１Ａ，Ｑ２７１Ｃ，Ｑ２７１Ｄ，Ｑ２７１Ｅ，Ｑ２７１Ｆ，Ｑ２７１Ｇ，Ｑ２７１Ｌ，Ｑ２７１Ｐ，Ｑ２７１Ｒ，Ｑ２７１Ｔ，Ｑ２７１Ｗ，Ｑ２７１Ｙ，Ｑ２７５Ａ，Ｑ２７５Ｆ，Ｑ２７５Ｇ，Ｑ２７５Ｉ，Ｑ２７５Ｌ，Ｑ２７５Ｐ，Ｑ２７５Ｒ，Ｒ１８６Ａ，Ｒ１８６Ｈ，Ｒ１８６Ｉ，Ｒ１８６Ｌ，Ｒ１８６Ｍ，Ｒ１８６Ｖ，Ｒ１８６Ｗ，Ｓ００３Ｄ，Ｓ００３Ｅ，Ｓ００３Ｆ，Ｓ００３Ｋ，Ｓ００３Ｒ，Ｓ００９Ｃ，Ｓ００９Ｅ，Ｓ００９Ｋ，Ｓ０１８Ｃ，Ｓ０１８Ｄ，Ｓ０１８Ｒ，Ｓ０３７Ａ，Ｓ０３７Ｄ，Ｓ０３７Ｅ，Ｓ０３７Ｇ，Ｓ０３７Ｈ，Ｓ０３７Ｋ，Ｓ０３７Ｌ，Ｓ０３７Ｐ，Ｓ０３７Ｒ，Ｓ０３７Ｙ，Ｓ０３８Ｄ，Ｓ０３８Ｍ，Ｓ０３８Ｐ，Ｓ０３８Ｒ，Ｓ０３８Ｙ，Ｓ０４９Ｃ，Ｓ０４９Ｔ，Ｓ０６３Ａ，Ｓ０６３Ｃ，Ｓ０６３Ｄ，Ｓ０６３Ｆ，Ｓ０６３Ｌ，Ｓ０６３Ｍ，Ｓ０６３Ｒ，Ｓ０６３Ｙ，Ｓ０８７Ｃ，Ｓ０８７Ｄ，Ｓ０８７Ｋ，Ｓ０８７Ｌ，Ｓ０８７Ｍ，Ｓ０８７Ｎ，Ｓ０８７Ｒ，Ｓ０８７Ｙ，Ｓ０８９Ａ，Ｓ０８９Ｃ，Ｓ０８９Ｄ，Ｓ０８９Ｅ，Ｓ０８９Ｆ，Ｓ０８９Ｇ，Ｓ０８９Ｈ，Ｓ０８９Ｉ，Ｓ０８９Ｋ，Ｓ０８９Ｐ，Ｓ０８９Ｒ，Ｓ０８９Ｖ，Ｓ０８９Ｙ，Ｓ１０５Ｔ，Ｓ１２５Ａ，Ｓ１３０Ｃ，Ｓ１３０Ｄ，Ｓ１３０Ｅ，Ｓ１３０Ｋ，Ｓ１３０Ｒ，Ｓ１３０Ｗ，Ｓ１４５Ｄ，Ｓ１４５Ｇ，Ｓ１４５Ｌ，Ｓ１４５Ｒ，Ｓ１４５Ｔ，Ｓ１５９Ｃ，Ｓ１５９Ｄ，Ｓ１５９Ｌ，Ｓ１５９Ｐ，Ｓ１５９Ｗ，Ｓ１６１Ｃ，Ｓ１６１Ｅ，Ｓ１６１Ｒ，Ｓ１６２Ｃ，Ｓ１６２Ｅ，Ｓ１６２Ｗ，Ｓ１６３Ａ，Ｓ１７３Ｔ，Ｓ１７３Ｖ，Ｓ１８２Ｃ，Ｓ１８２Ｅ，Ｓ１８２Ｒ，Ｓ１８３Ｃ，Ｓ１８３Ｄ，Ｓ１８３Ｐ，Ｓ１８３Ｒ，Ｓ１８８Ｃ，Ｓ１８８Ｄ，Ｓ１８８Ｅ，Ｓ１８８Ｆ，Ｓ１８８Ｋ，Ｓ１８８Ｌ，Ｓ１８８Ｐ，Ｓ１８８Ｒ，Ｓ１８８Ｗ，Ｓ１９０Ａ，Ｓ１９０Ｃ，Ｓ１９０Ｇ，Ｓ１９０Ｔ，Ｓ１９１Ｇ，Ｓ２０４Ｅ，Ｓ２０４Ｇ，Ｓ２０４Ｒ，Ｓ２０４Ｙ，Ｓ２０７Ｇ，Ｓ２２４Ｇ，Ｓ２２４Ｔ，Ｓ２３６Ｃ，Ｓ２３６Ｄ，Ｓ２３６Ｅ，Ｓ２３６Ｇ，Ｓ２４８Ｃ，Ｓ２４８Ｄ，Ｓ２４８Ｅ，Ｓ２４８Ｈ，Ｓ２４８Ｒ，Ｓ２４９Ｅ，Ｓ２４９Ｌ，Ｓ２４９Ｒ，Ｓ２６０Ａ，Ｓ２６０Ｃ，Ｓ２６０Ｅ，Ｓ２６０Ｇ，Ｓ２６０Ｋ，Ｓ２６０Ｑ，Ｓ２６０Ｒ，Ｓ２６０Ｖ，Ｓ２６０Ｙ，Ｔ０２２Ｌ，Ｔ０２２Ｐ，Ｔ０５５Ｃ，Ｔ０５５Ｄ，Ｔ０５５Ｅ，Ｔ０５５Ｉ，Ｔ０５５Ｋ，Ｔ０５５Ｍ，Ｔ０５５Ｒ，Ｔ０５５Ｓ，Ｔ０５５Ｖ，Ｔ０５５Ｗ，Ｔ０５５Ｙ，Ｔ０７１Ａ，Ｔ１５８Ａ，Ｔ１５８Ｄ，Ｔ１５８Ｅ，Ｔ１５８Ｇ，Ｔ１５８Ｌ，Ｔ１５８Ｐ，Ｔ１５８Ｑ，Ｔ１５８Ｒ，Ｔ１５８Ｖ，Ｔ１５８Ｙ，Ｔ１６４Ａ，Ｔ１６４Ｇ，Ｔ１６４Ｋ，Ｔ１６４Ｑ，Ｔ１６４Ｒ，Ｔ２０８Ｓ，Ｔ２２０Ａ，Ｔ２４２Ｄ，Ｔ２４２Ｇ，Ｔ２４４Ｄ，Ｔ２４４Ｅ，Ｔ２４４Ｒ，Ｔ２５３Ｅ，Ｔ２５３Ｒ，Ｔ２５３Ｙ，Ｔ２５４Ｇ，Ｔ２５５Ｃ，Ｔ２５５Ｄ，Ｔ２５５Ｅ，Ｔ２５５Ｋ，Ｔ２５５Ｒ，Ｖ００４Ｄ，Ｖ００４Ｅ，Ｖ００４Ｔ，Ｖ０２６Ａ，Ｖ０２８Ｉ，Ｖ０２８Ｌ，Ｖ０３０Ｉ，Ｖ０４４Ａ，Ｖ０４４Ｃ，Ｖ０４４Ｐ，Ｖ０４４Ｔ，Ｖ０４５Ｃ，Ｖ０４５Ｄ，Ｖ０４５Ｅ，Ｖ０４５Ｇ，Ｖ０４５Ｉ，Ｖ０４５Ｎ，Ｖ０４５Ｒ，Ｖ０４５Ｔ，Ｖ０５１Ｈ，Ｖ０７２Ｌ，Ｖ０８１Ａ，Ｖ０８１Ｇ，Ｖ０８１Ｈ，Ｖ０８１Ｒ，Ｖ０８１Ｓ，Ｖ０８４Ｉ，Ｖ０８４Ｍ，Ｖ０９５Ａ，Ｖ０９５Ｃ，Ｖ１４３Ａ，Ｖ１４３Ｃ，Ｖ１４３Ｅ，Ｖ１４３Ｆ，Ｖ１４３Ｇ，Ｖ１４３Ｈ，Ｖ１４３Ｑ，Ｖ１４３Ｔ，Ｖ１４３Ｗ，Ｖ１４７Ａ，Ｖ１４７Ｑ，Ｖ１４７Ｓ，Ｖ１４８Ｉ，Ｖ１４８Ｌ，Ｖ１４９Ｃ，Ｖ１４９Ｉ，Ｖ１４９Ｌ，Ｖ１６５Ｃ，Ｖ１６５Ｌ，Ｖ１８０Ａ，Ｖ１８０Ｃ，Ｖ１８０Ｍ，Ｖ１８０Ｓ，Ｖ１９２Ｃ，Ｖ１９２Ｆ，Ｖ１９２Ｇ，Ｖ１９２Ｉ，Ｖ１９２Ｑ，Ｖ１９２Ｙ，Ｖ２０３Ａ，Ｖ２０３Ｃ，Ｖ２０３Ｄ，Ｖ２０３Ｅ，Ｖ２０３Ｇ，Ｖ２０３Ｋ，Ｖ２０３Ｍ，Ｖ２０３Ｒ，Ｖ２０３Ｓ，Ｖ２７０Ｃ，Ｖ２７０Ｇ，Ｖ２７０Ｌ，Ｖ２７０Ｐ，Ｗ２４１Ｆ，Ｗ２４１Ｌ，Ｙ００６Ａ，Ｙ００６Ｃ，Ｙ００６Ｄ，Ｙ００６Ｅ，Ｙ００６Ｍ，Ｙ００６Ｎ，Ｙ００６Ｒ，Ｙ００６Ｓ，Ｙ０２１
Ｃ，Ｙ０９１Ｗ，Ｙ１０４Ｔ，Ｙ１０４Ｖ，Ｙ１０４Ｗ，Ｙ２１４Ｈ，Ｙ２１４Ｑ，Ｙ２６２Ｃ，Ｙ２６２Ｄ，Ｙ２６２Ｅ，Ｙ２６２Ｈ，Ｙ２６２Ｉ，Ｙ２６２Ｒ，及びＹ２６２Ｖ、
（ｉｉ）Ａ００１Ｃ，Ａ００１Ｅ，Ａ００１Ｐ，Ａ０１５Ｃ，Ａ０１５Ｅ，Ａ０４８Ｃ，Ａ０４８Ｅ，Ａ０７３Ｔ，Ａ０８５Ｃ，Ａ０８５Ｇ，Ａ０８８Ｉ，Ａ０８８Ｍ，Ａ１１４Ｇ，Ａ１２８Ｈ，Ａ１３７Ｒ，Ａ１４２Ｃ，Ａ１８７Ｃ，Ａ１８７Ｆ，Ａ１８７Ｌ，Ａ１８７Ｎ，Ａ１８７Ｐ，Ａ１８７Ｗ，Ａ２１６Ｃ，Ａ２１６Ｈ，Ａ２３０Ｇ，Ａ２３０Ｓ，Ａ２７３Ｄ，Ａ２７３Ｈ，Ａ２７３Ｐ，Ａ２７３Ｑ，Ａ２７３Ｒ，Ａ２７３Ｔ，Ａ２７４Ｈ，Ｄ０３６Ｎ，Ｄ０３６Ｑ，Ｄ０３６Ｓ，Ｄ０４１Ｃ，Ｄ０４１Ｎ，Ｄ０９９Ａ，Ｄ０９９Ｈ，Ｄ０９９Ｎ，Ｄ０９９Ｑ，Ｄ０９９Ｓ，Ｄ１９７Ｔ，Ｄ２５９Ｈ，Ｅ１５６Ｃ，Ｅ１５６Ｇ，Ｅ１５６Ｈ，Ｅ１５６Ｌ，Ｅ１５６Ｑ，Ｆ０５８Ｇ，Ｆ１８９Ａ，Ｆ１８９Ｇ，Ｆ１８９Ｈ，Ｆ１８９Ｌ，Ｆ１８９Ｒ，Ｆ１８９Ｓ，Ｆ１８９Ｔ，Ｆ２６１Ｃ，Ｆ２６１Ｄ，Ｆ２６１Ｅ，Ｇ０４６Ｄ，Ｇ０５３Ｅ，Ｇ０５３Ｌ，Ｇ０５３Ｍ，Ｇ０５３Ｑ，Ｇ０５３Ｒ，Ｇ１３１Ｃ，Ｇ１３１Ｄ，Ｇ１４６Ａ，Ｇ１５７Ｎ，Ｇ１５７Ｐ，Ｇ１５７Ｔ，Ｇ１６０Ｖ，Ｇ１７８Ａ，Ｇ２１５Ｃ，Ｇ２１５Ｌ，Ｇ２５８Ａ，Ｇ２５８Ｐ，Ｈ０３９Ａ，Ｈ０３９Ｓ，Ｈ０６７Ｔ，Ｈ２３８Ｙ，Ｉ０１１Ｌ，Ｉ０３１Ｆ，Ｉ０７９Ｅ，Ｉ１１１Ｍ，Ｉ１７５Ｌ，Ｉ２６８Ｍ，Ｋ０１２Ａ，Ｋ０１２Ｃ，Ｋ０１２Ｅ，Ｋ０１２Ｆ，Ｋ０１２Ｇ，Ｋ０１２Ｈ，Ｋ０１２Ｌ，Ｋ０１２Ｎ，Ｋ０１２Ｗ，Ｋ０２７Ｎ，Ｋ０２７Ｓ，Ｋ０２７Ｔ，Ｋ０４３Ｃ，Ｋ０４３Ｄ，Ｋ０４３Ｇ，Ｋ０４３Ｌ，Ｋ０４３Ｒ，Ｋ０４３Ｗ，Ｋ１３６Ｅ，Ｋ１３６Ｇ，Ｋ１４１Ｇ，Ｋ１４１Ｌ，Ｋ１４１Ｍ，Ｋ１４１Ｎ，Ｋ１４１Ｒ，Ｋ１７０Ｃ，Ｋ１７０Ｑ，Ｋ２１３Ｖ，Ｋ２５６Ｄ，Ｋ２６５Ｇ，Ｋ２６５Ｎ，Ｋ２６５Ｑ，Ｋ２６５Ｓ，Ｋ２６５Ｙ，Ｌ０４２Ｃ，Ｌ０４２Ｆ，Ｌ０７５Ｇ，Ｌ０７５Ｖ，Ｌ０８２Ａ，Ｌ０８２Ｅ，Ｌ０８２Ｆ，Ｌ０８２Ｈ，Ｌ０８２Ｒ，Ｌ０８２Ｓ，Ｌ０９０Ｍ，Ｌ０９０Ｔ，Ｌ１２６Ｗ，Ｌ２３３Ｅ，Ｌ２３３Ｇ，Ｌ２３３Ｓ，Ｌ２３５Ｖ，Ｌ２５７Ｄ，Ｌ２５７Ｅ，Ｌ２５７Ｇ，Ｌ２５７Ｐ，Ｌ２５７Ｒ，Ｌ２５７Ｗ，Ｍ０５０Ｌ，Ｍ２２２Ａ，Ｍ２２２Ｆ，Ｍ２２２Ｌ，Ｍ２２２Ｓ，Ｍ２２２Ｔ，Ｎ０２５Ｒ，Ｎ０５６Ｓ，Ｎ０６２Ｃ，Ｎ０６２Ｈ，Ｎ０６２Ｌ，Ｎ０６２Ｑ，Ｎ０６２Ｒ，Ｎ０６２Ｔ，Ｎ０６２Ｙ，Ｎ０７６Ｄ，Ｎ０７６Ｐ，Ｎ０７８Ｄ，Ｎ０７８Ｅ，Ｎ０７８Ｆ，Ｎ０７８Ｒ，Ｎ０７８Ｖ，Ｎ１１７Ｇ，Ｎ１１８Ｌ，Ｎ１８４Ｐ，Ｎ２６９Ｃ，Ｎ２６９Ｈ，Ｎ２６９Ｑ，Ｐ００５Ｖ，Ｐ００５Ｗ，Ｐ０１４Ｋ，Ｐ０５７Ａ，Ｐ０５７Ｗ，Ｐ０８６Ｆ，Ｐ１２９Ｖ，Ｐ２０１Ｔ，Ｐ２２５Ｇ，Ｐ２２５Ｓ，Ｐ２３９Ａ，Ｐ２３９Ｇ，Ｐ２３９Ｈ，Ｐ２３９Ｎ，Ｐ２３９Ｔ，Ｑ００２Ｄ，Ｑ００２Ｉ，Ｑ００２Ｋ，Ｑ００２Ｌ，Ｑ００２Ｐ，Ｑ００２Ｒ，Ｑ００２Ｖ，Ｑ０１０Ｗ，Ｑ０１９Ｌ，Ｑ０１９Ｐ，Ｑ０５９Ｃ，Ｑ０５９Ｄ，Ｑ０５９Ｅ，Ｑ０５９Ｗ，Ｑ１８５Ｗ，Ｑ２１７Ｃ，Ｑ２４５Ａ，Ｑ２４５Ｈ，Ｑ２７１Ｃ，Ｑ２７１Ｄ，Ｑ２７１Ｅ，Ｑ２７１Ｌ，Ｑ２７１Ｗ，Ｑ２７５Ａ，Ｑ２７５Ｇ，Ｒ１８６Ｍ，Ｓ００９Ｃ，Ｓ００９Ｌ，Ｓ０１８Ｃ，Ｓ０１８Ｄ，Ｓ０３７Ｅ，Ｓ０３７Ｈ，Ｓ０３７Ｋ，Ｓ０３７Ｌ，Ｓ０３７Ｐ，Ｓ０３８Ｐ，Ｓ０３８Ｙ，Ｓ０４９Ｃ，Ｓ０４９Ｎ，Ｓ０６３Ｃ，Ｓ０６３Ｄ，Ｓ０６３Ｆ，Ｓ０６３Ｌ，Ｓ０６３Ｙ，Ｓ０８７Ｃ，Ｓ０８７Ｋ，Ｓ０８７Ｌ，Ｓ０８７Ｎ，Ｓ０８７Ｒ，Ｓ０８７Ｙ，Ｓ０８９Ｄ，Ｓ０８９Ｅ，Ｓ０８９Ｆ，Ｓ０８９Ｇ，Ｓ０８９Ｐ，Ｓ０８９Ｗ，Ｓ１０５Ｔ，Ｓ１２５Ａ，Ｓ１３０Ｃ，Ｓ１４５Ｄ，Ｓ１５９Ｄ，Ｓ１５９Ｐ，Ｓ１６３Ａ，Ｓ１７３Ｖ，Ｓ１８２Ｐ，Ｓ１８３Ｐ，Ｓ１９０Ａ，Ｓ１９０Ｇ，Ｓ１９１Ｇ，Ｓ２０４Ｅ，Ｓ２２４Ｇ，Ｓ２４８Ｅ，Ｓ２４８Ｈ，Ｓ２４９Ｅ，Ｓ２６０Ｖ，Ｓ２６０Ｙ，Ｔ０２２Ｐ，Ｔ０５５Ｅ，Ｔ０５５Ｍ，Ｔ０５５Ｒ，Ｔ０５５Ｗ，Ｔ１５８Ｄ，Ｔ１５８Ｅ，Ｔ１６４Ａ，Ｔ１６４Ｇ，Ｔ１６４Ｋ，Ｔ１６４Ｑ，Ｔ１６４Ｒ，Ｔ２２０Ａ，Ｔ２４２Ｇ，Ｔ２４２Ｐ，Ｔ２５３Ｅ，Ｔ２５５Ｃ，Ｔ２５５Ｇ，Ｖ００４Ｄ，Ｖ００４Ｔ，Ｖ０４４Ａ，Ｖ０４４Ｌ，Ｖ０４４Ｐ，Ｖ０４４Ｔ，Ｖ０４５Ｃ，Ｖ０４５Ｇ，Ｖ０４５Ｉ，Ｖ０４５Ｋ，Ｖ０４５Ｌ，Ｖ０４５Ｎ，Ｖ０４５Ｒ，Ｖ０４５Ｔ，Ｖ０４５Ｖ，Ｖ０５１Ｈ，Ｖ０８１Ａ，Ｖ０８１Ｇ，Ｖ０８１Ｈ，Ｖ０８１Ｒ，Ｖ０８４Ｓ，Ｖ１４３Ｇ，Ｖ１４７Ａ，Ｖ１４８Ｌ，Ｖ１６５Ｃ，Ｖ１８０Ｓ，Ｖ２０３Ｄ，Ｖ２０３Ｇ，Ｖ２０３Ｓ，Ｖ２７０Ｃ，Ｖ２７０Ｇ，Ｖ２７０Ｐ，Ｖ２７０Ｓ，Ｗ２４１Ｌ，Ｙ１０４Ｔ，Ｙ２１４Ｈ，Ｙ２１４Ｑ，Ｙ２６２Ｄ，Ｙ２６２Ｅ，Ｙ２６２Ｇ，Ｙ２６２Ｈ，Ｙ２６２Ｌ，Ｙ２６２Ｎ，Ｙ２６３Ｇ，及びＹ２６３Ｗ、
（ｉｉｉ）Ａ００１Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ａ１１６Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｇ０２４Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１６９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ａ００１Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ００１Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｑ１０３Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０６３Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ０２４Ｅ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｑ１０３Ｈ，Ｇ０２４Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０６３Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１３１Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１６９Ａ，Ｇ１６９Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１６９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１６９Ａ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４９Ａ，Ｋ０４３Ｙ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１１６Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１２８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１３１Ｈ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１６９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｌ２５７Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ０７６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ１０９Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２１８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−Ｑ１０３Ｈ，Ｋ０４３Ｙ−Ｑ２０６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ０６３Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ１６２Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ２４８Ｎ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ２４９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ０８８Ｔ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１６９Ａ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ１０３Ｈ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，Ｐ０４０Ｅ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｑ１０３Ｈ，Ｑ１０３Ｈ−Ｇ１６９Ａ，Ｑ１０３Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ２０６Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｐ，Ｓ０３３Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０３３Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ０４３Ｙ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｐ０４０Ｅ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｐ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ１６２Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ１６２Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ２４８Ｎ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４９Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ２４９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｇ１６９Ａ，Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，及びＴ１５８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ、
（ｉｖ）Ａ００１Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ａ１１６Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｇ０２４Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１６９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ａ００１Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｑ１０３Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ００１Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ａ０８８Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１２８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ｇ０２４Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１６９Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１６９Ａ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１６９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ０７６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２１８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ０７６Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ１０３Ｈ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｐ０４０Ｅ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｑ１０３Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ２０６Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００９Ｔ−Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ０６１Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｐ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０３３Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｐ０４０Ｅ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｐ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ１６２Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｔ１５８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，及びＴ１５８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ、
（ｖ）Ａ００１Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｇ０２４Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２０４Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｑ１０３Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１２８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ０２４Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１３１Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１３１Ｈ，Ｋ０４３Ｙ−Ｑ１０３Ｈ，Ｋ０４３Ｙ−Ｑ２０６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｐ０４０Ｅ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｑ１０３Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ０６１Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｐ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｐ０４０Ｅ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｐ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ１６２Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，及びＴ１５８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ、
（ｖｉ）Ａ００１Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｇ０２４Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１６９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ａ００１Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ００１Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｑ１０３Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０６３Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ１１６Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ１２８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ０２４Ｅ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１３１Ｈ，Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１６９Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１６９Ａ−Ｑ２０６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ０８８Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１１６Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１２８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１３１Ｈ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１６９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｋ２５６Ｒ，Ｋ０４３Ｙ−Ｌ２５７Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ０７６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ１０９Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２１８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２４３Ｖ，Ｋ０４３Ｙ−Ｑ１０３Ｈ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ０６３Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ１６２Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ２４８Ｎ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ２４９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ０８８Ｔ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１６９Ａ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ１０３Ｈ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ０７６Ｄ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ１０３Ｈ，Ｑ１０３Ｈ−Ａ１２８Ｓ，Ｑ１０３Ｈ−Ｇ１３１Ｈ，Ｑ１０３Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ２４９Ａ，Ｑ１０３Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ２０６Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０３３Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ１６２Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４８Ｎ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４９Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，及びＴ１５８Ｓ−Ｓ２４９Ａ、
（ｖｉｉ）Ｇ１３１Ｈ−Ｓ１６２Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１３１Ｈ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ１６２Ｇ，Ｑ１０３Ｈ−Ａ１２８Ｓ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，及びＴ１５８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ、
（ｖｉｉｉ）Ａ０１５Ｓ−Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ０９８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ０９８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１４６Ｃ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｌ２６７Ｍ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｑ２７１Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｅ２５１Ｋ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１３８Ｅ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ１４１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２３７Ｒ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｉ２３４Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４９Ｌ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｉ１０７Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ａ２２３Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｉ１０７Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｉ１０８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｋ２１３Ｎ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ２３２Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｄ１４０Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｄ１４０Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ１４１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｎ２６９Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｆ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｗ２４１Ｌ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｍ１２４Ｉ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ
１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｖ１４８Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｄ１４０Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１３８Ｖ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｄ１４０Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ１４１Ｅ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｑ２７１Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２３３Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４９Ａ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４９Ｌ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｔ２５５Ｋ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｋ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｗ２４１Ｒ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｑ２４５Ｋ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７５Ｋ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｖ２０３Ｉ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｖ１４７Ｉ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｙ１０４Ｈ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｄ１４０Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ１４１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｎ２６９Ｄ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｑ２７１Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１３９Ｉ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１５０Ａ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１５７Ｅ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｋ１４１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０２４Ｓ−Ｇ０５３Ｓ−Ｎ０７８Ｓ−Ｇ０９７Ａ−Ｎ１０１Ｓ，Ｇ０５３Ｓ−Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｇ１６９Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０６５Ｄ−Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｋ１４１Ｒ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４０Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｉ２６８Ｖ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｎ２６９Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｉ１０７Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｉ１０７Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｋ２５６Ｒ，Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｌ０９０Ｉ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９
Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｉ２３４Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ１４１Ｅ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２３７Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ１４１Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ００３Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ００３Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００３Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ００３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１０５Ｈ−Ｗ１０６Ｇ−Ｉ１０７Ｌ−Ｉ１０８Ｓ−Ｎ１０９Ａ−Ｇ１１０Ａ−Ｉ１１１Ｓ−Ｅ１１２Ｎ−Ｗ１１３Ｇ−Ａ１１４Ｐ，Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２３３Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｖ００４Ａ−Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｖ００４Ｌ−Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｙ００６Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，及びＹ１０４Ｈ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ、
（ｉｘ）Ａ０８８Ｔ−Ａ０９８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１５０Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｑ２７１Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１３８Ｅ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｄ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２３７Ｒ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｉ２３４Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４９Ｌ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｉ１０８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｋ２１３Ｎ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｄ１４０Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ１４１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４９Ａ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｗ２４１Ｌ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｍ１２４Ｉ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１２Ｄ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｐ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｖ１４８Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１３７Ｅ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｄ１４０Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１５２Ｓ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｄ１４０Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２３３Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｔ２５５Ｋ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｗ２４１Ｒ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｑ２４５Ｋ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７５Ｋ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５
８Ｓ−Ｖ２０３Ｉ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｙ１０４Ｈ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｙ１０４Ｈ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１５３Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｎ２６９Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ｙ１０４Ｈ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１３７Ｅ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０９８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｄ１４０Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ１４１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１３９Ｉ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１５７Ｅ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０５３Ｓ−Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｇ１６９Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０６５Ｄ−Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｋ２５６Ｒ，Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｌ０９０Ｉ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｉ２３４Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２３７Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１３７Ｖ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ１４１Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｑ２７１Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ，Ｐ０１４Ｌ−Ａ０１５Ｌ−Ｌ０１６Ｃ−Ｈ０１７Ｔ−Ｓ０１８Ｌ−Ｑ０１９Ｋ−Ｇ０２０Ａ−Ｙ０２１Ｔ−Ｔ０２２Ｌ−Ｇ０２３Ｅ，Ｓ００３Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００３Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ００３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１０５Ｈ−Ｗ１０６Ｇ−Ｉ１０７Ｌ−Ｉ１０８Ｓ−Ｎ１０９Ａ−Ｇ１１０Ａ−Ｉ１１１Ｓ−Ｅ１１２Ｎ−Ｗ１１３Ｇ−Ａ１１４Ｐ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｖ００４Ａ−Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｖ００４Ａ−Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｖ００４Ｍ−Ａ１１６Ｔ−Ｖ１４８Ａ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｙ００６Ｈ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｙ１０４Ｈ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｙ１０４Ｈ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，及びＹ１０４Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ、
（ｘ）Ａ０４５Ｓ−Ｓ２３６Ｇ，Ａ０４５Ｓ−Ｓ２３６Ｙ，Ａ１３４Ｔ−Ｓ２６０Ｇ，Ｇ０２４Ａ−Ｓ０３７Ｗ，Ｉ０３１Ｖ−Ｓ０３８Ｗ，Ｉ１１５Ｔ−Ｓ１８３Ｔ，Ｉ１１５Ｖ−Ｎ１８４Ｙ，Ｎ０２５Ｋ−Ｐ１２９Ｋ，Ｎ０２５Ｋ−Ｐ１２９Ｒ，Ｎ０２５Ｋ−Ｓ０３７Ｐ，Ｎ０６１Ｄ−Ｓ２６０Ｉ，Ｑ０１０Ｌ−Ｓ０３７Ｐ，Ｑ０１０Ｒ−Ｓ０３７Ｔ，Ｑ０１９Ｌ−Ｓ２６０Ｎ，Ｑ０１９Ｌ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ０３７Ｐ−Ｔ２５４Ｓ，Ｓ１６１Ｐ−Ｔ２５３Ａ，及びＳ１６２Ｌ−Ｄ１８１Ｈ、
（ｘｉ）Ａ０４５Ｓ−Ｓ２３６Ｇ，Ａ０４５Ｓ−Ｓ２３６Ｙ，Ａ１３３Ｖ−Ｓ２６０Ｎ，Ａ１３４Ｔ−Ｓ２６０Ｇ，Ｇ０２４Ａ−Ｓ０３７Ｗ，Ｉ０３１Ｖ−Ｓ０３８Ｗ，Ｉ１１５Ｔ−Ｓ１８３Ｔ，Ｉ１１５Ｖ−Ｎ１８４Ｙ，Ｎ０２５Ｋ−Ｐ１２９Ｒ，Ｎ０２５Ｋ−Ｓ０３７Ｐ，Ｎ０６１Ｄ−Ｓ２６０Ｉ，Ｑ０１０Ｒ−Ｓ０３７Ｔ，Ｑ０１９Ｌ−Ｓ２６０Ｎ，Ｑ０１９Ｌ−Ｓ２６０Ｐ，及びＳ１６２Ｌ−Ｄ１８１Ｈ、並びに、
（ｘｉｉ）Ａ０４５Ｓ−Ｓ２３６Ｇ，Ａ０４５Ｓ−Ｓ２３６Ｙ，Ｉ１１５Ｔ−Ｓ１８３Ｔ，Ｎ０２５Ｋ−Ｓ０３７Ｐ，Ｎ０６１Ｓ−Ｓ２６０Ｐ，Ｑ０１０Ｌ−Ｓ０３７Ｐ，Ｑ０１０Ｒ−Ｓ０３７Ｔ，Ｑ０１９Ｌ−Ｓ２６０Ｎ，Ｓ０３７Ｐ−Ｔ２５４Ｓ，及びＳ１６１Ｐ−Ｓ２６０Ｐ。ここで、この変異体の各アミノ酸位置は、配列番号２のアミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。
本発明の第九態様による変異体は、配列番号２、配列番号４又は配列番号６に記載のプロテアーゼとそれぞれ比較して向上したタンパク質分解活性及び／又は向上したクリーニング活性を有し得る。本発明の第九態様による変異体は、配列番号２、配列番号４又は配列番号６に記載のプロテアーゼのものを超える、タンパク質分解活性（例えば、ＡＡＰＦアッセイ）又はクリーニングアッセイ（例えば、ＢＭＩ、植物又は卵の微小標本アッセイ）における性能指数を有し得る。本発明の第九態様による変異体は、ＢＰＮ’スブチリシンプロテアーゼ（配列番号２）のプロテアーゼ変異体であり得る。
第二十一態様では、本発明は、親プロテアーゼの変異体である単離された又は非自然発生型の冷水プロテアーゼを提供し、上記冷水プロテアーゼは、下記の群（ａ）及び（ｂ）から選択される合計で３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個の変異を含み、ここで、少なくとも１つの変異は群（ａ）から選択される：
（ａ）１、９、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、３３、４３、７６、１０２、１０９、１３７、１４１、１５８、１６９、２０４、２１０、２１８、２４３、２４８、２４９、２５６、２５７、２６０及び２６９、並びに、
（ｂ）２４、２５、４０、５２、５３、５５、５８、５９、６１、６２、６３、６８、７８、８６、８７、８８、８９、９２、９６、９７、１００、１０１、１０３、１０４、１０６、１１１、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１２３、１２４、１２５、１２６、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１４４、１４５、１５９、１６１、１６２、１６７、１９４、２０３、２０６、２１３、２１７、２２７、２３２、２３９、２４０、２４２、２６５、２６７及び２７５。ここで、アミノ酸位置は、配列番号２に対応させることにより番号付けされる。本発明の第二十一態様による親プロテアーゼは、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み得、本発明の第二十一態様による変異体は、下記の群（ａ）及び（ｂ）から選択される合計で３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個の変異を含み、ここで、少なくとも１つの変異は群（ａ）から選択される：
（ａ）Ａ１Ｅ／Ｔ、Ｓ９／Ｔ、Ｐ１４Ｌ，Ａ１５Ｌ，Ｌ１６Ｃ，Ｈ１７Ｔ，Ｓ１８Ｌ／Ｔ、Ｑ１９Ｋ，Ｇ２０Ａ，Ｙ２１Ｎ／Ｔ、Ｔ２２Ｌ，Ｇ２３Ｅ，Ｓ３３Ｔ，Ｋ４３Ｙ，Ｎ７６Ｄ，Ｇ１０２Ａ，Ｎ１０９Ａ／Ｓ／Ｇ、Ａ１３７Ｖ，Ｋ１４１Ｒ，Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１６９Ａ，Ｓ２０４Ｅ，Ｐ２１０Ｓ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２４３Ｐ／Ｖ、Ｓ２４８Ｎ／Ａ、Ｓ２４９Ａ，Ｋ２５６Ｒ，Ｌ２５７Ｇ，Ｓ２６０Ｐ，及びＮ２６９Ｄ、並びに、
（ｂ）Ｓ２４Ｇ／Ｒ／Ｅ、Ｎ２５Ｇ，Ｐ４０Ａ／Ｅ、Ｐ５２Ｌ，Ｓ５３Ｇ，Ｔ５５Ｐ，Ｆ５８Ｇ，Ｑ５９Ｓ，Ｎ６１Ｅ／Ｐ／Ｇ／Ｓ、Ｎ６２Ｑ／Ｒ／Ｓ、Ｓ６３Ｇ／Ｈ、Ｖ６８Ａ，Ｓ７８Ｎ，Ｐ８６Ｓ，Ｓ８７Ｄ／Ｇ、Ａ８８Ｔ／Ｖ、Ｓ８９Ｙ，Ａ９２Ｇ，Ｌ９６Ｔ，Ｇ９７Ａ，Ｇ１００Ｎ／Ｑ／Ｔ、Ｓ１０１Ｎ，Ｑ１０３Ｅ／Ｈ、Ｙ１０４Ｎ，Ｗ１０６Ｆ，Ｉ１１１Ｖ，Ａ１１４Ｇ，Ｉ１１５Ｖ，Ａ１１６Ｎ／Ｔ、Ｎ１１７Ｓ，Ｎ１１８Ｇ，Ｎ１２３Ａ／Ｇ／Ｑ／Ｖ、Ｍ１２４Ｉ／Ｖ、Ｓ１２５Ａ，Ｌ１２６Ａ，Ｇ１２８Ａ／Ｓ、Ｐ１２９Ｅ／Ｑ／Ｓ／Ｖ、Ｓ１３０Ｇ，Ｇ１３１Ｓ／Ｈ、Ｓ１３２Ｎ，Ａ１３３Ｖ，Ａ１３４Ｔ，Ａ１４４Ｋ，Ｓ１４５Ｄ，Ｓ１５９Ｋ，Ｓ１６１Ｐ，Ｓ１６２Ｇ／Ｋ、Ｙ１６７Ａ，Ｐ１９４Ｌ，Ｖ２０３Ｙ，Ｑ２０６Ｄ／Ｅ、Ｋ２１３Ｌ，Ｙ２１７Ｑ／Ｌ／Ｄ、Ｖ２２７Ｔ，Ａ２３２Ｔ，Ｐ２３９Ｒ／Ｖ、Ｎ２４０Ｋ，Ｔ２４２Ｒ，Ｋ２６５Ｎ，Ｌ２６７Ｖ，及びＱ２７５Ｅ。本発明の第二態様による変異体及び親プロテアーゼは、成熟型であり得る。
本発明の第二十一態様による変異体は、ＢＰＮ’野生型と比較して−１、０又は＋１の合計正味電荷を有し得る。
本発明の第一、第二、第四、第五、第六、第七、第八、第九又は第二十一態様では、この変異体は、親スブチリシンプロテアーゼと比較したときに洗剤において改善された洗浄性能又はクリーニング性能を有するスブチリシンプロテアーゼ変異体であり得、これはスブチリシンプロテアーゼであってもよい。本発明の第三態様では、ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４又は配列番号６のプロテアーゼのものと比較したとき、洗剤において改善された洗浄性能及びクリーニング性能を有し得る。このような態様の代表的な洗剤は、パートＩ実施例及びパートＩＩ実施例に示す。
本発明の第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九又は第二十一態様によるプロテアーゼ変異体は、冷水プロテアーゼであり得る。一態様では、本発明の第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九又は第二十一態様によるプロテアーゼ変異体は、（ｉ）本明細書のパートＩ実施例１に記載の「試験方法」に定義したように配列番号４のアミノ酸配列を有する酵素と比較したときにｐＨ ８及び６０°Ｆ（１６℃）におけるＢＭＩで、１を超える、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、少なくとも１〜約１０、少なくとも１〜約８、又は少なくとも１〜約５の性能指数、あるいは、（ｉｉ）本明細書のパートＩ実施例１に記載の「試験方法」に定義したように配列番号６のアミノ酸配列を有する酵素と比較したときにｐＨ ８及び６０°Ｆ（１６℃）におけるＢＭＩで、少なくとも１、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、少なくとも１〜約１０、少なくとも１〜約８、又は少なくとも１〜約５の性能指数、を有する冷水プロテアーゼであり得る。
上記のように、本発明のプロテアーゼ変異体ポリペプチドは、酵素活性（例えば、タンパク質分解活性）を有し、したがって、例えば、食卓食器物品、食卓用器具物品、布地、硬質表面（例えば、机、机の上、壁、家具物品、床、天井など）を有する物品をクリーニングするための方法が挙げられるがこれらに限定されないクリーニング用途に有用である。本発明の１つ以上のプロテアーゼ変異体ポリペプチドを含む代表的なクリーニング組成物は、以下に記載される。本発明のプロテアーゼ変異体の酵素活性（例えば、プロテアーゼ活性）は、当業者に周知の手順を使用して容易に判定することができる。下記に提示される実施例は、酵素活性、クリーニング性能及び／又は洗浄性能を評価するための方法を記載する。シミ（例えば、タンパク質性シミ）の除去、硬質表面のクリーニング、又は洗濯物、食卓食器若しくは食卓用器具物品のクリーニングにおけるプロテアーゼ変異体の性能は、当該技術分野において周知の手順を用いて、並びに／あるいは、パートＩ実施例及び／又はパートＩＩ実施例に記載の手順を用いることにより、容易に判定することができる。
本発明のポリペプチドは、保存型又は非保存型のいずれかで、１つ以上のアミノ酸挿入、欠失及び／又は置換などの様々な変化にさらすことができ、このような変化がポリペプチドの酵素活性を実質的には変化させない場合を包含する。同様に、本発明の核酸はまた、非表現変異（例えば、ヌクレオチド配列中の変異は、例えば、コードされているアミノ酸が核酸変異により変化しない場合に、アミノ酸配列中に非表現変異を生じる）又は表現変異のいずれかを生じる、特定のコドンが同一又は異なるアミノ酸をコードするような１つ以上のコドンにおける１つ以上の核酸の１つ以上の置換、配列における１つ以上の核酸（又はコドン）の１つ以上の欠失、配列における１つ以上の核酸（又はコドン）の１つ以上の追加又は挿入、並びに／あるいは、配列における１つ以上の核酸（又はコドン）の１つ以上の分断などの、様々な変化にかけることもできる。核酸配列における多くのこのような変化は、元々の核酸配列によりコードされているプロテアーゼ変異体と比較して、得られたコードされているプロテアーゼ変異体の酵素活性を実質的に変化させなくてもよい。本発明の核酸はまた、発現系（例えば、細菌発現系）に最適な発現を提供する１つ以上のコドンを含むように改変することができ、一方で、所望される場合には上記１つ以上のコドンは依然として同じアミノ酸をコードする。
本発明は、本明細書に記載のアミノ酸置換を有し、また、保存的及び非保存的置換などの１つ以上の追加のアミノ酸置換を含む、配列を含む所望の酵素活性（例えば、プロテアーゼ活性又はクリーニング性能活性）を有するプロテアーゼ変異体ポリペプチドを含むポリペプチド属を含み、ここで、ポリペプチドは、所望の酵素活性（例えば、プロテアーゼ変異体のクリーニング活性又は性能に反映されるような、プロテアーゼ活性又はスブチリシン活性）を呈し、維持し、又は大体維持する。本発明によるアミノ酸置換としては、１つ以上の非保存的置換及び／又は１つ以上の保存的アミノ酸置換を挙げてもよいが、これらに限定されない。保存的なアミノ酸残基置換は、典型的には、アミノ酸残基の一官能種類内の一員を同じ官能種類に属する残基（同一のアミノ酸残基は、機能的に相同であるか又は機能相同性パーセントの算出において保存されたものであると考えられる）と交換することを伴う。保存的なアミノ酸置換は、典型的には、アミノ酸配列中のアミノ酸を機能的に同様のアミノ酸と置換することを伴う。例えば、アラニン、グリシン、セリン及びトレオニンは機能的に同様であり、したがって、互いに保存的なアミノ酸置換基として機能し得る。アスパラギン酸及びグルタミン酸は、互いに保存的な置換基として機能し得る。アスパラギン及びグルタミンは、互いに保存的な置換基として機能し得る。アルギニン、リシン及びヒスチジンは、互いに保存的な置換基として機能し得る。イソロイシン、ロイシン、メチオニン及びバリンは、互いに保存的な置換基として機能し得る。フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンは、互いに保存的な置換基として機能し得る。
他の保存的なアミノ酸置換基を想定することができる。例えば、アミノ酸は、同様の機能又は化学構造又は組成により分類することができる（例えば、酸性、塩基性、脂肪族、芳香族、イオウ含有）。例えば、脂肪族グループは、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）を含み得る。互いに保存的な置換基であると考えられるアミノ酸を含有する他のグループとしては、以下のものが挙げられる：芳香族：フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）；イオウ含有：メチオニン（Ｍ）、システイン（Ｃ）；塩基性：アルギニン（Ｒ）、リシン（Ｋ）、ヒスチジン（Ｈ）；酸性：アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；無極性非帯電残基：システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）及びプロリン（Ｐ）；親水性非帯電残基：セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、アスパラギン（Ｎ）及びグルタミン（Ｑ）。アミノ酸の追加的な分類は、当業者に周知であり、様々な標準的テキストに記載されている。本明細書におけるポリペプチド配列のリストは、上記置換基と共に、全ての保存的に置換されたポリペプチド配列の発現リストを提供する。
より保存的な置換は、上記アミノ酸残基分類内で存在し、これはまた若しくは代替的に好適であり得る。より保存的である置換のための保存グループとしては、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リシン−アルギニン、アラニン−バリン及びアスパラギン−グルタミンが挙げられる。したがって、例えば、本発明は、タンパク質分解活性を有する単離された又は組み換えプロテアーゼ変異体ポリペプチド（例えば、スブチリシン変異体）を含み、上記プロテアーゼ変異体ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は９９．５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。本発明のプロテアーゼ変異体において１つのアミノ酸を別のアミノ酸に保存的に置換することは、プロテアーゼ変異体の酵素活性又はクリーニング性能活性を有意に変化させることを期待するものではない。得られたプロテアーゼの酵素活性又はクリーニング性能活性は、標準的アッセイ及び本明細書に記載のアッセイを用いて容易に判定することができる。
本発明のポリペプチド配列の保存的に置換された変異体（例えば、本発明のプロテアーゼ変異体）は、ポリペプチド配列のアミノ酸の低百分率、場合によっては約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１４％未満、約１３％未満、約１２％未満、約１１％未満、約１０％未満、約９％未満、約８％未満、約７％未満又は約６％未満、あるいは、ポリペプチド配列のアミノ酸の約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満又は約１％未満の、保存的アミノ酸での置換を含む。
本明細書において他箇所でより詳細に並びに本明細書において実施例で記載しているように、本発明のポリペプチドは、既知のスブチリシンなどの既知のプロテアーゼと比較され得るクリーニング能力を有し得る。代表的な既知のスブチリシンプロテアーゼとしては、例えば、バチルス・レンタス（B. lentus）スブチリシンＧＧ３６、バチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’、バチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’−Ｙ２１７Ｌ，及びバチルス・クラウジイ（B. clausii）ＰＢ９２が挙げられるがこれらに限定されない。
本発明の多数のポリぺプチドとしては、例えば、実施例が挙げられるがこれに限定されない本明細書全体にわたって説明及び記載されている、例えば、スブチリシンプロテアーゼ変異体などのプロテアーゼ変異体が挙げられる。パートＩ実施例は、例えば、ＢＰＮ’プロテアーゼ変異体が挙げられるがこれに限定されない本発明のプロテアーゼ変異体を説明する。パートＩＩ実施例は、例えば、ＧＧ３６プロテアーゼ変異体が挙げられるがこれに限定されない本発明の追加のプロテアーゼ変異体を説明する。
本発明は、参照セリンプロテアーゼと比較したときに１つ以上の置換を有するセリンプロテアーゼ変異体などのプロテアーゼ変異体を提供する。一態様では、本発明は冷水プロテアーゼを提供する。加えて、本発明は、例えば、セリンプロテアーゼといった１つ以上のプロテアーゼ変異体を含む組成物を提供する。組成物は、本明細書の他箇所に記載のように、本発明の少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体と添加剤成分とを含み得る。一態様では、本発明は、例えば、セリンプロテアーゼ変異体といった、少なくとも１つのこれらのプロテアーゼ変異体を含むクリーニング組成物を提供する。クリーニング組成物は、洗剤組成物であってもよい。クリーニングのトレンドは、エネルギーを節約するためにより低い洗浄温度を使用することである。酵素は、温度が低くなるほど活性が低くなり、クリーニング性能の低下が生じる。当該技術分野において現在周知のものよりも冷水洗浄条件で向上した性能を有する酵素が、当該技術分野において必要とされている。本発明はこのニーズに対処する。
本発明は、スブチリシンプロテアーゼ変異体などの本明細書に記載の少なくとも１つのセリンプロテアーゼ変異体を含むクリーニング組成物を提供する。このスブチリシンプロテアーゼ変異体は、ＢＰＮ’プロテアーゼ変異体であってもよい。上記において更に詳細に述べられているように、本発明は、ＢＰＮ’プロテアーゼ変異体及びＧＧ３６プロテアーゼ変異体を含む組成物を含む。例えば、本発明のスブチリシン変異体が挙げられるがこれらに限定されない一部のプロテアーゼ変異体は、冷水プロテアーゼである。このクリーニング組成物は、洗濯洗剤であってもよい。この洗濯洗剤は、３〜１１のｐＨを有する洗剤（例えば、ｐＨ ４、ｐＨ ５、ｐＨ ６、ｐＨ ７、ｐＨ ７．５、ｐＨ ８、ｐＨ ９、ｐＨ １０、ｐＨ １０．５などの間）、冷水洗剤、低ｐＨ洗剤（例えば、ｐＨ ３〜６）、中性ｐＨ洗剤（例えば、ｐＨ ６．５〜７．５）、アルカリｐＨ洗剤（例えば、ｐＨ ９〜１１）又はコンパクト洗剤であり得る。洗剤は、リン酸塩を含んでもよく、又は、リン酸塩を含まなくてもよい。このクリーニング組成物は、食器洗浄洗剤であってもよい。一態様ではこの食器洗浄洗剤はリン酸塩を含まない洗剤であり、別の態様ではこの食器洗浄洗剤はリン酸塩含有洗剤である。一態様では、本発明のクリーニング組成物は、少なくとも１つの追加の酵素を更に含み、これは選択的に、中性メタロプロテアーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、アミラーゼ、カルボヒドラーゼ、セルラーゼ、ぺクチナーゼ、マンナナーゼ、アラビナーゼ、ガラクタナーゼ、キシラナーゼ、ペルヒドロラーゼ、オキシダーゼ及びペルオキシダーゼの群から選択され得る。本発明のセリンプロテアーゼ変異体をコードする単離された核酸、本発明の１つ以上のこのような核酸を含む発現ベクター及び本発明の少なくとも１つのこのような発現ベクターを含む宿主細胞もまた提供される。
本明細書全体にわたって、参照を容易にするため、「アミノ酸置換の組」又は「置換の組」は、複数のアミノ酸置換の組（すなわち、Ｇ０９７Ａ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ）又は単一のアミノ酸置換の組（すなわち、Ｙ２１７Ｑ）を指し得る。したがって、Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ及びＹ２１７Ｑからなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’配列（配列番号２）を含むＢＰＮ’変異体は、このＢＰＮ’変異体がＢＰＮ’−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ又はＢＰＮ’−Ｙ２１７Ｑを含むアミノ酸配列を含むことを示す。
配列番号４に記載されている成熟ＢＰＮ’−ｖ３スブチリシンプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列は、ＢＰＮ’−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，と表すことができ、これは３つの置換Ｇ０９７Ａ，Ｇ１２８Ａ，及びＹ２１７Ｑを有する配列番号２のＢＰＮ’アミノ酸配列を意味する。このフォーマットでは、各ダッシュ（−）は、プラスサイン（＋）を用いるのと等価である。したがって、ＢＰＮ’−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑは、互換的にＢＰＮ’＋Ｇ０９７Ａ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑと書くことができる。配列番号６に記載されている成熟ＢＰＮ’−ｖ３６スブチリシンプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列は、ＢＰＮ’−Ｓ２４Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ又はＢＰＮ’＋Ｓ２４Ｇ＋Ｓ５３Ｇ＋Ｓ７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑと書くことができる。本発明のＢＰＮ’変異体は、これらのフォーマットを用いて書くことできる。
加えて、本発明はスブチリシン変異体を提供し、ここで、このような変異体は各々タンパク質分解活性を有する成熟型であり、Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ，Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ，Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ，Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ，Ｎ６１Ｐ−Ｎ６２Ｓ，Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｌ７５Ｓ−Ｎ７６Ｙ，Ｖ２０３Ｙ，Ｔ５５Ｐ，Ａ８８Ｖ−Ｌ９０Ｉ，Ｇ２１１Ｒ−Ｎ２１２Ｓ−Ｋ２１３Ｖ，Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ，Ｔ２２Ｎ−Ｓ２４Ａ，Ｓ２４Ｒ，Ａ９８Ｓ，Ｔ１５８Ｇ−Ｓ１５９Ｇ，Ｑ５９Ｅ−Ｎ６１Ｐ，及びＡ９８Ｅ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−ｖ３アミノ酸配列（配列番号４）を含み、ここで、アミノ酸位置は、配列番号２として記載されているバチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列に対応させることにより番号付けされる。
配列番号４として記載されているＢＰＮ’−ｖ３アミノ酸配列は、Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑと書いてもよいことに留意されたい。本発明は、タンパク質分解活性を有するプロテアーゼ変異体を含み、ここで、上記変異体は、配列番号４中にアミノ酸置換Ａ１２８Ｓを有する配列番号４のアミノ酸配列を含む。したがって、本発明は、アミノ酸配列ＢＰＮ’−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑを含む。本明細書全体にわたって、本発明のポリペプチド変異体は、それぞれ参照ポリペプチド配列中の１つ以上の具体化された位置での１つ以上の特定のアミノ酸置換を含む参照ポリペプチドの変異体として記載され得る。
本発明はスブチリシン変異体も提供し、ここで、このような変異体はそれぞれ、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｖ２０３Ｙ−Ｌ２６７Ｖ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ１０１Ｎ，Ａ１３４Ｔ−Ｌ２６７Ｖ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｎ２５Ｙ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ，Ｉ１１１Ｖ−Ｓ１６１Ｐ，Ｉ１１５Ｖ−Ｌ２６７Ｖ，Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｎ２５Ｙ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ａ１３７Ｔ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｑ，Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｎ２５Ｙ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ，Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，Ｖ８Ｌ−Ｎ２５Ｙ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｐ２３９Ｒ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｎ２４０Ｋ，Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｇ２１１Ｒ−Ｎ２１２Ｓ−Ｋ２１３Ｖ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ｓ７８Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ａ１３４Ｔ，Ｓ６３Ｔ−Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ，Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｔ５５Ｐ−Ｎ２４０Ｋ，Ｔ５５Ｐ−Ｐ１２９Ｖ−Ｐ１９４Ｓ，Ｎ２５Ｙ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｖ２０３Ｙ，Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｎ２４０Ｋ，Ｓ２４Ｒ−Ｐ４０Ｅ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１５９Ｋ−Ｋ２６５Ｒ，Ｐ５２Ｓ−Ｔ５５Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，Ｓ２４Ｒ−Ｐ１２９Ｅ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ，Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ａ１１６Ｓ−Ｎ１１７Ｇ−Ｎ１１８Ｒ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ，Ｓ２４Ｒ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ，Ｎ６１Ｐ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ａ１３３Ｖ−Ｌ２６７Ｖ，Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｐ２３９Ｒ，Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ａ１１６Ｓ−Ｎ１１７Ｇ−Ｎ１１８Ｒ，Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｖ２０３Ｙ，Ａ１３４Ｔ−Ｇ２１１Ｔ，Ｔ５５Ｐ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｑ，Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｔ２４２Ｒ，Ｓ１６１Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ２１１Ｔ−Ｌ２６７Ｖ，Ｐ４０Ｅ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ２６９Ｋ，Ｓ２４Ｒ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｇ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｎ６２Ｓ−Ｐ１９４Ｌ−Ａ２３２Ｔ，Ｔ５５Ｐ−Ａ１１６Ｓ−Ｎ１１７Ｇ−Ｎ１１８Ｒ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｎ２４０Ｋ，Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｎ２５Ｙ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｔ５５Ｐ−Ｉ１１５Ｖ，Ｎ２５Ｙ−Ｔ５５Ｐ，Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｄ，Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｐ１２９Ｓ−Ｖ２０３Ｙ，Ｔ５５Ｐ−Ａ１３４Ｔ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ｓ７８Ｎ−Ｉ１１１Ｖ，Ｎ６１Ｐ−Ａ９７Ｇ−Ｇ１０２Ａ−Ａ１２８Ｇ−Ｐ１２９Ｓ，Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ，Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ，Ｓ５３Ｇ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｐ１２９Ｓ，Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｔ５５Ｐ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ａ１３４Ｔ−Ｐ２３９Ｒ，Ｔ５５Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８９Ｙ，Ｔ２２Ｎ−Ｓ２４Ａ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ，Ｓ１６１Ｐ−Ｌ２６７Ｖ，Ｔ５５Ｐ−Ｌ７５Ｈ−Ｎ７６Ｇ，Ａ１３４Ｔ−Ｓ１６１Ｐ，Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ａ１３４Ｔ，Ｔ５５Ｐ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ａ１２８Ｓ，Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｉ１１５Ｖ，Ｙ６Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｓ２４Ｒ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ，Ｔ５５Ｐ−Ｐ１２９Ｖ，Ｎ６１Ｐ−Ｎ６２Ｑ−Ｇ１００Ｎ−Ａ１２８Ｇ，Ｔ５５Ｐ−Ｐ１２９Ｑ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｎ２４０Ｋ，Ａ１３４Ｔ−Ｎ２４０Ｋ，Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｐ２３９Ｒ，Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｌ２６７Ｖ，Ｐ１２９Ｑ−Ｎ２４０Ｋ，Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｖ２０３Ｙ，Ｉ１１１Ｖ−Ａ２７３Ｓ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ａ８８Ｖ−Ｓ１０１Ｎ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｖ２０３Ｙ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１６１Ｐ，Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｉ１１１Ｖ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｔ２２Ｎ−Ｓ２４Ａ−Ｔ５５Ｐ，Ｉ１１５Ｖ−Ｎ２４０Ｋ，Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ−Ｐ１７２Ｈ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｉ１１５Ｖ−Ａ１３４Ｔ，Ｔ５５Ｐ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｄ，Ｉ１１１Ｖ−Ｓ１５９Ｋ，Ｎ２４０Ｋ−Ａ２７３Ｓ，Ｓ１５９Ｋ−Ｌ２６７Ｖ，Ｉ１１１Ｖ−Ｐ１２９Ｑ−Ｇ２１１Ｔ，Ｉ１１５Ｖ−Ａ２７３Ｓ，Ｓ８９Ｙ，Ｓ２４Ｒ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｎ６１Ｅ−Ａ１４４Ｋ，Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｐ２３９Ｒ，Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｉ１１５Ｖ，Ｔ５５Ｐ−Ａ９２Ｇ，Ｓ１４５Ｄ−Ｓ１５９Ｋ−Ｎ２４０Ｋ−Ｑ２７５Ｅ，Ｓ８９Ｙ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｓ１６２Ｋ，Ｉ１１１Ｖ−Ａ１３４Ｔ，Ｐ４０Ｅ−Ｓ５３Ｙ−Ｓ７８Ｙ−Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｌ７５Ｈ−Ｎ７６Ｇ，Ｎ６１Ｐ−Ａ１２８Ｇ−Ｐ１２９Ｓ−Ｓ１３０Ｐ，Ｓ２４Ｒ−Ｓ１４５Ｄ，Ｓ２４Ｒ−Ｓ１４５Ｄ−Ｐ２３９Ｒ−Ｑ２７５Ｅ，Ｓ２４Ｒ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１８２Ｐ−Ｌ２６７Ｖ，Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｐ５Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ａ１１６Ｇ−Ｎ１１７Ｒ，Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｐ２３９Ｒ−Ａ２７３Ｓ，Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｓ２４Ｒ−Ｐ１２９Ｖ，Ｉ１１１Ｖ−Ｐ２３９Ｒ，Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｔ５５Ｐ−Ｐ１２９Ｌ，Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｉ１１１Ｖ，Ｓ１４５Ｄ−Ａ２７３Ｓ，Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｔ２４２Ｒ，Ｓ３Ｆ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｇ２１１Ｔ，Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ｓ１６２Ｋ，Ｓ８９Ｙ−Ｇ２１１Ｔ，Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ａ１４４Ｋ，Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｓ１５９Ｋ，Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｐ１２９Ｖ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｎ１２３Ｇ−Ａ１２８Ｇ，Ｎ６１Ｐ−Ｎ６２Ｑ−Ｇ１００Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｍ１２４Ｉ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｋ１４１Ｅ−Ｔ２４２Ｒ，Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ−Ａ１４４Ｔ，Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｇ１１０Ｃ−Ｓ１３０Ｐ，Ｌ７５Ｓ−Ｎ７６Ｙ−Ａ１１６Ｓ−Ｎ１１７Ｇ−Ｎ１１８Ｒ，Ｓ１４５Ｄ−Ｓ１５９Ｋ−Ｋ２１３Ｌ−Ｐ２３９Ｒ−Ｎ２４０Ｋ，Ｓ２４Ｒ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｐ１２９Ｖ，Ａ１３４Ｔ−Ｋ２１３Ｌ，Ｓ８９Ｙ−Ａ２７３Ｓ，Ｓ２４Ｒ−Ｐ２３９Ｒ，Ｎ１２３Ｇ−Ａ１２８Ｇ−Ｐ１２９Ｓ，Ｓ８９Ｙ−Ｐ２３９Ｒ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ａ９２Ｇ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ｉ１１５Ｖ−Ａ２２８Ｖ，Ａ９７Ｇ−Ａ１２８Ｇ−Ｑ２１７Ｌ，Ｌ７５Ｓ−Ｎ７６Ｙ−Ｐ１２９Ｖ，Ｓ２４Ｒ−Ｐ１２９Ｌ，Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１８２Ｙ−Ｓ２０４Ｙ−Ｐ２３９Ｑ，Ｓ２４Ｒ−Ａ９２Ｇ，Ｓ２４Ｒ−Ａ１１６Ｓ−Ｎ１１７Ｇ−Ｎ１１８Ｒ，Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ａ１１６Ｇ−Ｎ１１７Ｒ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｐ１２９Ｌ，Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｇ，Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｐ１２９Ｌ，Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｖ２０３Ｙ，Ｔ５５Ｐ−Ｖ１４７Ｐ，Ｙ６Ｑ−Ｌ７５Ｓ−Ｎ７６Ｙ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ｖ１４７Ｐ，Ｓ２４Ｒ−Ｖ１４７Ｐ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｖ６８Ｃ−Ａ６９Ｇ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｌ７５Ｓ−Ｎ７６Ｙ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｌ７５Ｓ−Ｎ７６Ｙ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｌ７５Ｓ−Ｎ７６Ｙ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｓ１３０Ｐ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｓ１３０Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ４７Ｅ−Ｍ５０Ｉ−Ｌ７５Ｓ−Ｎ７６Ｙ−Ｓ１６２Ｋ，Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｓ１３０Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｌ７５Ｓ−Ｎ７６Ｙ−Ａ１２８Ｔ−Ｐ１２９Ｔ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｑ−Ｓ１３２Ｃ−Ａ１３３Ｇ−Ａ１３４Ｔ，Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｖ１４７Ｐ，Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｌ７５Ｓ−Ｎ７６Ｙ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｇ１０２Ａ−Ｓ１３０Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，及びＳ５
３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｌ７５Ｓ−Ｎ７６Ｙ−Ｓ１０１Ｎ−Ｓ１３０Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−ｖ３アミノ酸配列（配列番号４）を含み、ここで、アミノ酸位置は、配列番号２として記載されているバチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列に対応させることにより番号付けされている。
本発明はスブチリシン変異体も提供し、ここで、この変異体はタンパク質分解活性を有する成熟型であり、Ｐ４０Ｅ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｄ−Ｙ２１７Ｌ，Ｐ４０Ｅ−Ｙ２１７Ｌ，Ｔ２２Ｖ−Ｓ７８Ｎ−Ｑ２０６Ｅ−Ｋ２１３Ｎ−Ｙ２１７Ｌ，Ｔ２２Ｖ−Ｓ７８Ｎ−Ｋ２１３Ｎ−Ｙ２１７Ｌ，Ｓ８７Ｄ−Ｙ２１７Ｌ，Ｓ７８Ｎ−Ｙ２１７Ｌ，Ｋ２１３Ｎ−Ｙ２１７Ｌ，Ｑ２０６Ｅ−Ｙ２１７Ｌ，及びＴ２２Ｖ−Ｙ２１７Ｌ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−ｖ３アミノ酸配列（配列番号４）を含み、ここで、アミノ酸位置は、配列番号２のバチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列に対応させることにより番号付けされている。
本発明はスブチリシン変異体も提供し、ここで、このような変異体はそれぞれ、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、この変異体は、Ｓ８７Ｄ−Ｎ７６Ｄ−Ｓ７８Ｎ，Ｐ４０Ｅ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｄ，Ｐ４０Ｅ−Ｓ８７Ｄ，Ｓ７８Ｎ−Ｐ４０Ｅ，Ｓ８７Ｄ−Ｎ７６Ｄ，Ｐ４０Ｅ，Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｄ，Ｓ８７Ｄ，及びＳ７８Ｎ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−ｖ３アミノ酸配列（配列番号４）を含み、ここで、アミノ酸位置は、配列番号２のバチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列に対応させることにより番号付けされている。一態様では、これらの置換は、改善された酵素安定性を付与する。
本発明はスブチリシン変異体も提供し、ここで、このような変異体はそれぞれ、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、Ｓ１０１Ｎ，Ａ１３７Ｖ，Ｎ６１Ｐ，Ｓ１３０Ｐ，Ｑ１０３Ｎ，Ｓ６３Ｔ，Ｇ１０２Ａ，Ｎ１０９Ｄ−Ｓ２４８Ｒ，Ｓ８７Ｒ，Ｓ１８８Ｄ，Ｓ８７Ｄ−Ｓ２４８Ｒ，Ｓ１８８Ｄ−Ｓ２４８Ｒ，Ｓ２４８Ｄ，Ｎ１０９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｓ２４８Ｒ，Ｎ１０９Ｄ，Ｓ８７Ｒ−Ｓ２４８Ｒ，Ｎ１０９Ｄ−Ｓ１８８Ｒ，Ｎ７６Ｄ，Ｓ８７Ｄ−Ｎ１０９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｓ２４８Ｒ，Ｓ８７Ｒ−Ｎ１０９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｓ２４８Ｒ，Ｓ８７Ｒ−Ｓ１８８Ｒ−Ｓ２４８Ｒ，Ａ１８７Ｄ，Ｎ１０９Ｄ−Ｓ２４８Ｄ，Ｓ８７Ｒ−Ｎ１０９Ｒ−Ｓ１８８Ｒ−Ｓ２４８Ｒ，Ｆ１８９Ｄ，Ｇ１００Ｎ，Ｓ８７Ｒ−Ｎ１０９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ，Ｓ８７Ｄ−Ｎ１０９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ，Ｓ８７Ｒ−Ｓ１８８Ｄ−Ｓ２４８Ｄ，Ｎ６２Ｄ，及びＳ８７Ｄ−Ｎ１０９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｓ２４８Ｄ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−ｖ３アミノ酸配列（配列番号４）を含み、ここで、アミノ酸位置は、配列番号２のバチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列のアミノ酸残基位置に対応させることにより番号付けされている。
本発明はスブチリシン変異体も提供し、ここで、このような変異体はそれぞれ、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、Ｓ７８Ｎ−Ｌ２６７Ｖ，Ｓ７８Ｎ−Ｓ１６１Ｐ，Ｓ７８Ｎ−Ｉ１１５Ｖ，Ｓ７８Ｎ−Ａ２７３Ｓ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ２１１Ｔ、Ｓ７８Ｎ，Ｓ７８Ｎ−Ｉ１１１Ｖ，Ｓ７８Ｎ−Ｖ１４７Ｌ，Ｓ７８Ｎ−Ｉ１０８Ｖ，Ｓ７８Ｎ−Ｓ８９Ｙ，Ｓ７８Ｎ−Ａ１３８Ｔ，Ｓ７８Ｎ−Ｐ１７２Ｖ，Ｓ７８Ｎ−Ｑ５９Ｇ，Ｐ１２９Ｔ−Ｖ１４７Ｑ−Ｓ１５９Ｄ−Ｓ１６１Ｐ−Ｓ１８３Ｔ−Ｑ１８５Ｔ−Ｇ２１１Ａ−Ｓ２２４Ａ，Ｑ０５９Ｖ−Ｉ１０８Ｖ−Ｖ１４７Ｑ−Ｇ２１１Ａ−Ｎ２５２Ｑ，Ｓ７８Ｎ−Ｙ１６７Ａ，Ｓ７８Ｎ−Ａ９２Ｇ，Ｓ７８Ｎ−Ｐ１２９Ｌ，Ｎ０６１Ａ−Ｓ０８７Ｅ−Ｍ１２４Ｉ−Ｓ１６１Ｐ−Ｓ２２４Ａ，Ｓ７８Ｎ−Ｎ６２Ｑ，Ｓ７８Ｎ−Ｖ６８Ａ，Ｓ０６３Ｔ−Ｓ１０１Ａ−Ｌ１２６Ｖ−Ｓ１８３Ｔ−Ｔ２４４Ｎ，Ｓ７８Ｎ−Ｍ１２４Ｔ，Ｐ０４０Ｌ−Ｓ０５３Ｇ−Ｑ０５９Ｖ−Ｎ０６１Ａ−Ｎ０６２Ｑ−Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０８７Ｅ−Ｇ１００Ｎ，Ｎ０６２Ｑ−Ｇ１００Ｎ−Ｓ１２５Ａ−Ｓ１５９Ｄ−Ｎ２４０Ｓ，Ｖ６８Ａ−Ｇ１０２Ａ−Ｇ２１１Ａ−Ｓ１２５Ａ，及びＳ０５３Ｇ−Ｖ０６８Ａ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｔ−Ｑ１８５Ｔ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−ｖ３アミノ酸配列（配列番号４）を含み、ここで、アミノ酸位置は、配列番号２として記載されているバチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列のアミノ酸残基位置に対応させることにより番号付けされている。
本発明はスブチリシン変異体も提供し、ここで、このような変異体はそれぞれ、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｐ５２Ｌ−Ｖ６８Ａ−Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ，Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｙ１０４Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｐ５２Ｌ−Ｖ６８Ａ−Ｇ９７Ａ，Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ，Ｖ６８Ａ−Ａ９２Ｇ−Ｇ９７Ａ，Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｐ５２Ｌ−Ｖ６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｐ５２Ｌ−Ｖ６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ，Ｖ６８Ａ−Ａ９２Ｇ−Ｉ１１１Ｖ，Ｐ５２Ｌ−Ｖ６８Ａ−Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｖ６８Ａ−Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ，Ｓ８９Ｙ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ，Ｖ６８Ａ−Ｓ８９Ｙ−Ｉ１１１Ｖ，Ｖ６８Ａ−Ａ９２Ｇ−Ｙ２１７Ｑ，Ｉ１１１Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｖ６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｉ１１１Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｖ６８Ａ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ，Ｎ６２Ｑ−Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｌ１２６Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｖ６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ８９Ｙ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，及びＬ９６Ｔ−Ｇ９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含み、ここで、位置は、配列番号２として記載されているバチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列のアミノ酸残基位置に対応させることにより番号付けされている。一部のこのような変異体は、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）を含む。
本発明はスブチリシン変異体も提供し、ここで、このような変異体はそれぞれ、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、Ｓ１８２Ｅ，Ｎ１０９Ｉ，Ｎ１１７Ｈ，Ｋ２３７Ｄ，Ｌ２５７Ｑ，Ｐ２２５Ｎ，Ｓ１０５Ｈ，Ｓ２３６Ｉ，Ｌ２３５Ｈ，Ｓ２４９Ｅ，Ｎ７６Ｅ，Ｓ１４５Ｎ，Ｎ２４３Ｄ，Ｒ２４７Ｎ，Ｅ１９５Ｎ，Ａ９８Ｋ，Ｓ１８２Ｎ，Ｓ１６１Ｈ，Ｇ８３Ｈ，Ｇ１３１Ｄ，Ｔ７１Ｃ，Ｋ１３６Ｑ，Ｐ４０Ｄ，Ａ１８７Ｈ，Ｌ２５０Ｋ，Ｓ９Ｉ，Ｎ７６Ｍ，Ｓ１３２Ｄ，Ｑ１９Ｆ，Ｅ１１２Ｈ，Ｓ２４９Ｐ，Ｓ５３Ｄ，Ｖ６８Ｅ，Ｄ４１Ｉ，Ｋ４３Ｈ，Ｖ４Ｈ，Ａ１３Ｙ，Ｎ６２Ｐ，Ｌ１９６Ｅ，及びＶ４４Ｄ，からなる群から選択される少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１又はそれ以上のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−ｖ３アミノ酸配列を含み、ここで、位置は、配列番号２として記載されているバチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列のアミノ酸残基位置に対応させることにより番号付けされている。
本発明はまた、これらのスブチリシン変異体を含む食器洗浄組成物、並びに、これらのスブチリシン変異体を含む布地クリーニング組成物を提供する。一部の好ましい態様では、食器洗浄及び布地クリーニング組成物は少なくとも１つの追加の酵素を更に含む。一部の好ましい態様では、この追加の酵素は以下から選択される：プロテアーゼ（例えば、中性メタロプロテアーゼ、野生型セリンプロテアーゼ又は第二変異体セリンプロテアーゼ）、リパーゼ、クチナーゼ、アミラーゼ、カルボヒドラーゼ、セルラーゼ、ぺクチナーゼ、マンナナーゼ、アラビナーゼ、ガラクタナーゼ、キシラナーゼ、ペルヒドラーゼ、オキシダーゼ及びペルオキシダーゼ。更に、本発明は、ｉ）スブチリシン変異体を含む食器洗浄組成物及びｉｉ）クリーニングする必要がある食卓食器を供給する工程と、食卓食器のクリーニングをもたらすのに有効な条件下で食卓食器を食器洗浄組成物と接触させる工程とを含む、食器洗浄方法を提供する。同様に、本発明は、ｉ）スブチリシン変異体を含む布地クリーニング組成物及びｉｉ）クリーニングする必要がある洗濯物を供給する工程と、洗濯物のクリーニングをもたらすのに有効な条件下で洗濯物を布地洗浄組成物と接触させる工程とを含む、布地クリーニング方法を提供する。更なる態様では、本発明は、この変異体をコードする単離された核酸、この単離された核酸をプロモーターと作用可能に組み合わせて含む発現ベクターを提供し、並びに／又は、この発現ベクターを含む宿主細胞が提供される。
本発明はまた、本明細書に提供されているスブチリシン変異体を含むクリーニング組成物を提供する。一態様では、クリーニング組成物は、液体、ゲル、タブレット、粉末及び／又は顆粒洗剤を含む。一部の更なる態様では、クリーニング組成物は洗濯洗剤及び食器洗剤から選択される。一部の好ましい態様では、クリーニング組成物は洗濯洗剤を含む。一部の特に好ましい態様では、クリーニング組成物は強力洗剤である。一部の追加的態様では、クリーニング組成物は、手による食器洗浄洗剤及び自動食器洗浄洗剤から選択される食器洗剤を含む。一部の更に好ましい態様では、本明細書に提供されているクリーニング組成物は、少なくとも１つの漂白剤を更に含む。一部の追加的態様では本明細書に提供されているクリーニング組成物はリン酸塩を含まず、一方、一部の代替的態様では本明細書に提供されているクリーニング組成物はリン酸塩含有洗剤である。一部の更なる態様では、本明細書に提供されているクリーニング組成物は、冷水洗剤である。更に一部の追加的態様では、本明細書に提供されているクリーニング組成物は、少なくとも１つの追加の酵素を更に含む。一態様では、クリーニング組成物は、へミセルラーゼ、セルラーゼ、ペルオキシダーゼ、プロテアーゼ、メタロプロテアーゼ、キシラナーゼ、リパーゼ、ホスホリパーゼ、エステラーゼ、ペルヒドラーゼ、クチナーゼ、ぺクチナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、マンナナーゼ、ケラチナーゼ、レダクターゼ、オキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、リグニナーゼ、プルラナーゼ、タンナーゼ、ペントサナーゼ、マラナーゼ（malanase）、β−グルカナーゼ、アラビノシターゼ、ヒアルロニダーゼ、コンドロイチナーゼ、ラッカーゼ及びアミラーゼからなる群から選択される少なくとも１つの追加の酵素又はこれらのいずれかの混合物を含む。
本発明はまた、クリーニングすべき物品及び本明細書に提供されている少なくとも１つのクリーニング組成物を含む組成物を供給することと、物品のクリーニングをもたらすのに有効な条件下で物品を組成物と接触させることと、を含む、クリーニング方法を提供する。一態様では、この方法は、物品をクリーニング組成物と接触させた後で物品をすすぐ工程を更に含む。一部の好ましい態様では、クリーニングすべき物品は食卓食器を含む。一部の代替的態様では、クリーニングすべき物品は布地を含む。
一部の更なる態様では、上記変異、欠失、挿入又はこれらの組み合わせのいずれかは、変異Ｙ２１７Ｌを含有する配列番号２の酵素又は変異Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑを含有する配列番号２の酵素のいずれかに適用することができる。
一態様では、本発明は、スブチリシン、特にスブチリシンＢＰＮ’（配列番号２）（すなわち、ＢＰＮ’スブチリシン変異体）、から誘導される好適な冷水プロテアーゼを提供する。一態様では、冷水プロテアーゼは、配列番号２と比較して以下のアミノ酸置換：Ｑ００２Ｗ，Ｐ００５Ｋ，Ｐ００５Ｌ，Ｐ００５Ｙ，Ｇ００７Ｔ，Ｖ００８Ｇ，Ｖ００８Ｋ，Ｖ００８Ｐ，Ｉ０１１Ｇ，Ｉ０１１Ｈ，Ｉ０１１Ｓ，Ｋ０１２Ｌ，Ａ０１３Ｍ，Ｌ０１６Ｗ，Ｇ０２３Ｓ，Ｖ０２６Ｈ，Ｖ０２６Ｗ，Ｖ０２６Ｙ，Ｋ０２７Ｐ，Ｖ０２８Ｑ，Ｖ０２８Ｓ，Ｖ０２８Ｔ，Ａ０２９Ｃ，Ａ０２９Ｄ，Ａ０２９Ｓ，Ａ０２９Ｔ，Ａ０２９Ｖ，Ｖ０３０Ｄ，Ｖ０３０Ｅ，Ｖ０３０Ｇ，Ｖ０３０Ｔ，Ｉ０３１Ｅ，Ｉ０３１Ｇ，Ｉ０３１Ｈ，Ｉ０３１Ｋ，Ｉ０３１Ｎ，Ｉ０３１Ｑ，Ｉ０３１Ｓ，Ｉ０３１Ｙ，Ｓ０３３Ｆ，Ｓ０３３Ｈ，Ｄ０３６Ｌ，Ｓ０３７Ｐ，Ｄ０４１Ａ，Ｄ０４１Ｃ，Ｄ０４１Ｍ，Ｄ０４１Ｎ，Ｄ０４１Ｓ，Ｌ０４２Ｓ，Ｌ０４２Ｙ，Ｖ０４４Ｈ，Ｖ０４４Ｑ，Ｖ０４４Ｔ，Ｇ０４６Ｆ，Ｇ０４６Ｌ，Ｇ０４６Ｍ，Ｇ０４６Ｖ，Ｇ０４７Ｔ，Ｇ０４７Ｗ，Ｓ０４９Ｉ，Ｓ０４９Ｖ，Ｍ０５０Ｄ，Ｍ０５０Ｉ，Ｍ０５０Ｒ，Ｖ０５１Ａ，Ｖ０５１Ｇ，Ｖ０５１Ｓ，Ｐ０５２Ｃ，Ｐ０５２Ｉ，Ｐ０５２Ｌ，Ｐ０５２Ｍ，Ｐ０５２Ｖ，Ｐ０５２Ｗ，Ｐ０５２Ｙ，Ｅ０５４Ｒ，Ｎ０５６Ｇ，Ｎ０５６Ｉ，Ｎ０５６Ｋ，Ｎ０５６Ｍ，Ｎ０５６Ｑ，Ｎ０５６Ｒ，Ｎ０５６Ｖ，Ｎ０５６Ｙ，Ｐ０５７Ｉ，Ｐ０５７Ｋ，Ｐ０５７Ｌ，Ｐ０５７Ｒ，Ｐ０５７Ｔ，Ｐ０５７Ｖ，Ｆ０５８Ｔ，Ｑ０５９Ｐ，Ｑ０５９Ｗ，Ｎ０６１Ｐ，Ｎ０６２Ｄ，Ｎ０６２Ｍ，Ｎ０６２Ｑ，Ｓ０６３Ｃ，Ｓ０６３Ｑ，Ｓ０６３Ｔ，Ｇ０６５Ｑ，Ｖ０６８Ａ，Ｖ０６８Ｇ，Ｖ０６８Ｍ，Ｖ０６８Ｓ，Ａ０６９Ｃ，Ａ０６９Ｄ，Ａ０６９Ｆ，Ａ０６９Ｈ，Ａ０６９Ｍ，Ａ０６９Ｎ，Ａ０６９Ｐ，Ａ０６９Ｑ，Ａ０６９Ｒ，Ａ０６９Ｔ，Ｔ０７１Ｄ，Ｔ０７１Ｅ，Ｔ０７１Ｇ，Ｔ０７１Ｋ，Ｔ０７１Ｍ，Ｖ０７２Ｄ，Ｖ０７２Ｇ，Ｖ０７２Ｋ，Ｖ０７２Ｑ，Ｖ０７２Ｓ，Ｖ０７２Ｔ，Ａ０７３Ｅ，Ａ０７３Ｉ，Ａ０７３Ｋ，Ａ０７３Ｍ，Ａ０７３Ｑ，Ａ０７３Ｓ，Ａ０７３Ｖ，Ａ０７４Ｅ，Ａ０７４Ｆ，Ａ０７４Ｈ，Ａ０７４Ｉ，Ａ０７４Ｌ，Ａ０７４Ｍ，Ａ０７４Ｑ，Ａ０７４Ｒ，Ａ０７４Ｖ，Ａ０７４Ｗ，Ａ０７４Ｙ，Ｌ０７５Ａ，Ｎ０７６Ａ，Ｎ０７７Ｇ，Ｎ０７７Ｌ，Ｎ０７７Ｐ，Ｎ０７７Ｑ，Ｎ０７７Ｒ，Ｎ０７７Ｓ，Ｎ０７７Ｔ，Ｓ０７８Ｗ，Ｇ０８０Ｈ，Ｖ０８１Ｄ，Ｖ０８１Ｆ，Ｖ０８１Ｈ，Ｖ０８１Ｎ，Ｖ０８１Ｑ，Ｖ０８１Ｒ，Ｖ０８１Ｗ，Ｌ０８２Ｇ，Ｌ０８２Ｎ，Ｌ０８２Ｗ，Ａ０８５Ｉ，Ａ０８５Ｔ，Ａ０８５Ｖ，Ｐ０８６Ａ，Ｐ０８６Ｇ，Ｐ０８６Ｍ，Ｐ０８６Ｑ，Ｐ０８６Ｒ，Ｐ０８６Ｔ，Ｐ０８６Ｗ，Ｐ０８６Ｙ，Ｓ０８７Ｆ，Ｓ０８７Ｉ，Ｓ０８７Ｌ，Ｓ０８７Ｍ，Ｓ０８７Ｑ，Ｓ０８７Ｖ，Ｓ０８７Ｗ，Ａ０８８Ｄ，Ａ０８８Ｅ，Ａ０８８Ｋ，Ａ０８８Ｐ，Ａ０８８Ｑ，Ｓ０８９Ｄ，Ｓ０８９Ｑ，Ｓ０８９Ｖ，Ｌ０９０Ｄ，Ｌ０９０Ｅ，Ｌ０９０Ｆ，Ｌ０９０Ｈ，Ｌ０９０Ｐ，Ｌ０９０Ｓ，Ｌ０９０Ｔ，Ｙ０９１Ｌ，Ｙ０９１Ｑ，Ｙ０９１Ｔ，Ａ０９２Ｃ，Ａ０９２Ｉ，Ａ０９２Ｍ，Ａ０９２Ｎ，Ａ０９２Ｐ，Ａ０９２Ｖ，Ｖ０９３Ｄ，Ｖ０９３Ｆ，Ｖ０９３Ｌ，Ｖ０９３Ｔ，Ｋ０９４Ｃ，Ｋ０９４Ｒ，Ｋ０９４Ｓ，Ｖ０９５Ｉ，Ｌ０９６Ｆ，Ｌ０９６Ｈ，Ｌ０９６Ｉ，Ｌ０９６Ｍ，Ｌ０９６Ｎ，Ｌ０９６Ｑ，Ｌ０９６Ｓ，Ｌ０９６Ｔ，Ｌ０９６Ｖ，Ｌ０９６Ｗ，Ｌ０９６Ｙ，Ｇ０９７Ａ，Ｇ０９７Ｃ，Ｇ０９７Ｄ，Ｇ０９７Ｅ，Ｇ０９７Ｆ，Ｇ０９７Ｌ，Ｇ０９７Ｍ，Ｇ０９７Ｐ，Ｇ０９７Ｑ，Ｇ０９７Ｓ，Ｇ０９７Ｖ，Ｇ０９７Ｗ，Ｇ０９７Ｙ，Ｄ０９９Ｃ，Ｄ０９９Ｅ，Ｄ０９９Ｉ，Ｄ０９９Ｍ，Ｄ０９９Ｐ，Ｄ０９９Ｖ，Ｄ０９９Ｙ，Ｇ１００Ｄ，Ｇ１００Ｅ，Ｇ１００Ｈ，Ｇ１００Ｉ，Ｇ１００Ｋ，Ｇ１００Ｍ，Ｇ１００Ｑ，Ｇ１００Ｔ，Ｇ１００Ｖ，Ｇ１００Ｙ，Ｓ１０１Ａ，Ｓ１０１Ｅ，Ｓ１０１Ｇ，Ｓ１０１Ｎ，Ｓ１０１Ｐ，Ｓ１０１Ｑ，Ｓ１０１Ｔ，Ｓ１０１Ｖ，Ｇ１０２Ａ，Ｇ１０２Ｓ，Ｑ１０３Ｅ，Ｑ１０３Ｇ，Ｑ１０３Ｈ，Ｑ１０３Ｋ，Ｑ１０３Ｎ，Ｙ１０４Ｌ，Ｙ１０４Ｍ，Ｙ１０４Ｎ，Ｙ１０４Ｔ，Ｙ１０４Ｖ，Ｓ１０５Ｄ，Ｓ１０５Ｉ，Ｓ１０５Ｒ，Ｓ１０５Ｖ，Ｗ１０６Ａ，Ｗ１０６Ｃ，Ｗ１０６Ｅ，Ｗ１０６Ｆ，Ｗ１０６Ｇ，Ｗ１０６Ｉ，Ｗ１０６Ｌ，Ｗ１０６Ｍ，Ｗ１０６Ｓ，Ｗ１０６Ｔ，Ｗ１０６Ｖ，Ｉ１０７Ｒ，Ｉ１０７Ｓ，Ｉ１０７Ｔ，Ｉ１０８Ｓ，Ｉ１０８Ｔ，Ｇ１１０Ｓ，Ｇ１１０Ｔ，Ｉ１１１Ａ，Ｉ１１１Ｃ，Ｉ１１１Ｆ，Ｉ１１１Ｌ，Ｉ１１１Ｍ，Ｉ１１１Ｔ，Ｉ１１１Ｖ，Ｅ１１２Ｉ，Ｅ１１２Ｌ，Ｅ１１２Ｔ，Ｗ１１３Ｈ，Ａ１１４Ｉ，Ａ１１４Ｖ，Ｉ１１５Ａ，Ｉ１１５Ｅ，Ｉ１１５Ｆ，Ｉ１１５Ｈ，Ｉ１１５Ｍ，Ｉ１１５Ｎ，Ｉ１１５Ｐ，Ｉ１１５Ｑ，Ｉ１１５Ｒ，Ｉ１１５Ｓ，Ｉ１１５Ｔ，Ｉ１１５Ｖ，Ｉ１１５Ｙ，Ｎ１１７Ｋ，Ｎ１１７Ｖ，Ｎ１１７Ｗ，Ｎ１１８Ｉ，Ｎ１１８Ｌ，Ｎ１１８Ｖ，Ｍ１１９Ｆ，Ｍ１１９Ｎ，Ｄ１２０Ｙ，Ｉ１２２Ｒ，Ｉ１２２Ｓ，Ｉ１２２Ｔ，Ｎ１２３Ａ，Ｎ１２３Ｃ，Ｎ１２３Ｇ，Ｎ１２３Ｓ，Ｍ１２４Ａ，Ｍ１２４Ｈ，Ｍ１２４Ｎ，Ｍ１２４Ｑ，Ｍ１２４Ｓ，Ｍ１２４Ｔ，Ｍ１２４Ｖ，Ｓ１２５Ａ，Ｌ１２６Ａ，Ｌ１２６Ｑ，Ｌ１２６Ｓ，Ｌ１２６Ｔ，Ｌ１２６Ｙ，Ｇ１２８Ｅ，Ｇ１２８Ｎ，Ｇ１２８Ｔ，Ｐ１２９Ｖ，Ｓ１３０Ｐ，Ｓ１３２Ｉ，Ｓ１３２Ｎ，Ｓ１３２Ｐ，Ｓ１３２Ｑ，Ｓ１３２Ｖ，Ａ１３４Ｉ，Ａ１３４Ｌ，Ａ１３４Ｍ，Ｌ１３５Ｉ，Ｌ１３５Ｔ，Ｌ１３５Ｖ，Ｌ１３５Ｗ，Ｌ１３５Ｙ，Ｋ１３６Ｄ，Ｋ１３６Ｆ，Ｋ１３６Ｉ，Ｋ１３６Ｖ，Ｋ１３６Ｙ，Ａ１３７Ｐ，Ａ１３８Ｄ，Ａ１３８Ｅ，Ａ１３８Ｆ，Ａ１３８Ｈ，Ａ１３８Ｑ，Ａ１３８Ｙ，Ａ１４２Ｇ，Ａ１４２Ｉ，Ａ１４２Ｔ，Ａ１４２Ｖ，Ｖ１４３Ｗ，Ａ１４４Ｐ，Ｇ１４６Ｌ，Ｇ１４６Ｔ，Ｇ１４６Ｙ，Ｖ１４７Ｄ，Ｖ１４７Ｐ，Ｖ１４７Ｗ，Ｖ１４７Ｙ，Ｖ１４８Ｎ，Ｖ１４８Ｙ，Ｖ１４９Ｅ，Ａ１５１Ｔ，Ａ１５３Ｔ，Ａ１５３Ｖ，Ｓ１５９Ｋ，Ｔ１６４Ｗ，Ｖ１６５Ｔ，Ｙ１６７Ａ，Ｙ１６７Ｄ，Ｙ１６７Ｅ，Ｙ１６７Ｍ，Ｙ１６７Ｐ，Ｙ１６７Ｓ，Ｙ１６７Ｔ，Ｐ１６８Ｌ，Ｐ１６８Ｔ，Ｇ１６９Ｃ，Ｋ１７０Ｅ，Ｋ１７０Ｎ，Ｋ１７０Ｐ，Ｋ１７０Ｑ，Ｋ１７０Ｓ，Ｋ１７０Ｔ，Ｋ１７０Ｙ，Ｙ１７１Ｃ，Ｙ１７１Ｄ，Ｙ１７１Ｌ，Ｙ１７１Ｎ，Ｙ１７１Ｗ，Ｐ１７２Ｅ，Ｐ１７２Ｇ，Ｐ１７２Ｉ，Ｐ１７２Ｌ，Ｐ１７２Ｖ，Ｐ１７２Ｙ，Ｓ１７３Ｈ，Ｓ１７３Ｗ，Ｓ１７３Ｙ，Ｖ１７４Ａ，Ｖ１７４Ｉ，Ｖ１７４Ｌ，Ｖ１７４Ｓ，Ｉ１７５Ａ，Ｉ１７５Ｆ，Ｉ１７５Ｒ，Ｉ１７５Ｔ，Ｉ１７５Ｖ，Ａ１７６Ｖ，Ｖ１７７Ｗ，Ｖ１８０Ｆ，Ｖ１８０Ｈ，Ｖ１８０Ｑ，Ｓ１８２Ｗ，Ｎ１８４Ａ，Ｎ１８４Ｌ，Ｎ１８４Ｖ，Ｑ１８５Ｄ，Ｑ１８５Ｅ，Ｑ１８５Ｉ，Ｑ１８５Ｓ，Ｑ１８５Ｔ，Ｒ１８６Ｃ，Ｒ１８６Ｄ，Ｒ１８６Ｅ，Ｒ１８６Ｆ，Ｒ１８６Ｇ，Ｒ１８６Ｉ，Ｒ１８６Ｌ，Ｒ１８６Ｎ，Ｒ１８６Ｐ，Ｒ１８６Ｑ，Ｒ１８６Ｓ，Ｒ１８６Ｔ，Ｒ１８６Ｖ，Ｒ１８６Ｗ，Ｒ１８６Ｙ，Ａ１８７Ｄ，Ａ１８７Ｅ，Ａ１８７Ｑ，Ｓ１９０Ｇ，Ｓ１９０Ｎ，Ｙ１９２Ｄ，Ｙ１９２Ｅ，Ｙ１９２Ｌ，Ｙ１９２Ｑ，Ｇ１９３Ｈ，Ｇ１９３Ｑ，Ｇ１９３Ｔ，Ｇ１９３Ｖ，Ｐ１９４Ｅ，Ｐ１９４Ｉ，Ｐ１９４Ｌ，Ｐ１９４Ｍ，Ｐ１９４Ｎ，Ｐ１９４Ｔ，Ｐ１９４Ｖ，Ｅ１９５Ｃ，Ｅ１９５Ｋ，Ｅ１９５Ｗ，Ｌ１９６Ｉ，Ｌ１９６Ｍ，Ｌ１９６Ｔ，Ｌ１９６Ｖ，Ｄ１９７Ｉ，Ｄ１９７Ｍ，Ｍ１９９Ｆ，Ｍ１９９Ｑ，Ａ２００Ｃ，Ａ２００Ｈ，Ａ２００Ｎ，Ａ２００Ｔ，Ａ２００Ｖ，Ａ２００Ｙ，Ｐ２０１Ｌ，Ｐ２０１Ｔ，Ｐ２０１Ｖ，Ｖ２０３Ｇ，Ｉ２０５Ｌ，Ｉ２０５Ｔ，Ｔ２０８Ｃ，Ｔ２０８Ｌ，Ｔ２０８Ｍ，Ｔ２０８Ｐ，Ｔ２０８Ｖ，Ｌ２０９Ｃ，Ｌ２０９Ｗ，Ｐ２１０Ｃ，Ｐ２１０Ｄ，Ｐ２１０Ｅ，Ｐ２１０Ｆ，Ｐ２１０Ｇ，Ｐ２１０Ｑ，Ｐ２１０Ｒ，Ｐ２１０Ｓ，Ｐ２１０Ｖ，Ｇ２１１Ａ，Ｇ２１１Ｄ，Ｇ２１１Ｅ，Ｇ２１１Ｐ，Ｇ２１１Ｔ，Ｇ２１１Ｖ，Ｇ２１１Ｗ，Ｎ２１２Ｅ，Ｎ２１２Ｔ，Ｋ２１３Ｑ，Ｋ２１３Ｔ，Ｙ２１４Ａ，Ｙ２１４Ｄ，Ｙ２１４Ｎ，Ｙ２１４Ｐ，Ｙ２１４Ｓ，Ｇ２１５Ｄ，Ｇ２１５Ｑ，Ｇ２１５Ｖ，Ａ２１６Ｅ，Ｙ２１７Ｅ，Ｙ２１７Ｌ，Ｙ２１７Ｍ，Ｎ２１８Ｐ，Ａ２２３Ｗ，Ｓ２２４Ｄ，Ｓ２２４Ｎ，Ｓ２２４Ｑ，Ｈ２２６Ｅ，Ｈ２２６Ｔ，Ｖ２２７Ｇ，Ｖ２２７Ｌ，Ｖ２２７Ｓ，Ａ２３０Ｈ，Ａ２３０Ｎ，Ａ２３１Ｗ，Ａ２３１Ｙ，Ａ２３２Ｎ，Ｉ２３４Ｗ，Ｌ２３５Ｎ，Ｓ２３６Ｗ，Ｈ２３８Ａ，Ｈ２３８Ｇ，Ｈ２３８Ｉ，Ｐ２３９Ｈ，Ｐ２３９Ｓ，Ｗ２４１Ｇ，Ｗ２４１Ｑ，Ｒ２４７Ｈ，Ｒ２４７Ｌ，Ｒ２４７Ｗ，Ｒ２４７Ｙ，Ｌ２５０Ｅ，Ｌ２５０Ｔ，Ｎ２５２Ｑ，Ｔ２５３Ｙ，Ｔ２５４Ｄ，Ｔ２５４Ｑ，Ｔ２５４Ｒ，Ｔ２５５Ｌ，Ｔ２５５Ｐ，Ｋ２５６Ｇ，Ｋ２５６Ｒ，Ｇ２５８Ｐ，Ｙ２６３Ｄ，Ｙ２６３Ｋ，Ｙ２６３Ｒ，Ｋ２６５Ｐ，Ｉ２６８Ｓ，Ｉ２６８Ｔ，Ｉ２６８Ｗ，Ｖ２７０Ｆ，Ａ２７３Ｋ，Ａ２７３Ｐ，Ａ２７３Ｒ，Ａ２７３Ｖ，Ａ２７３Ｗ，Ａ２７４Ｗ，Ｓ１８２Ｅ，及びＮ１０９Ｉ，のうちの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１又はそれ以上を含み、ここで、変異体配列の位置は、配列番号２の位置に対応させることにより番号付けされる。
別の態様では、本発明は、配列番号２と比較して以下の変異の組：Ｎ１０９Ｄ−Ｙ２１７Ｌ−Ｓ２４８Ｒ，Ｎ１０９Ｄ−Ｓ１８８Ｒ−Ｙ２１７Ｌ，Ｓ８７Ｄ−Ｙ２１７Ｌ−Ｓ２４８Ｒ，Ｓ８７Ｒ−Ｎ１０９Ｄ−Ｙ２１７Ｌ−Ｓ２４８Ｒ，Ｓ８７Ｒ−Ｎ１０９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｙ２１７Ｌ−Ｓ２４８Ｒ，Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ，Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ６２Ｑ−Ｇ９７Ａ，Ｓ８９Ｙ−Ｍ１２４Ｖ，Ｖ６８Ａ，Ｖ６８Ａ−Ａ９２Ｇ，Ｖ６８Ａ−Ｇ９７Ａ，Ｖ６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ，Ｖ６８Ａ−Ｓ８９Ｙ，Ｖ６８Ａ−Ｖ２２７Ｔ，Ｖ６８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｗ１０６Ｆ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｌ１２６Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｍ１２４Ｖ−Ｌ１２６Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｎ１２３Ｇ−Ｙ２１７Ｑ，Ｌ９６Ｔ−Ｇ９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｍ１２４Ｖ−Ｌ１２６Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ６２Ｑ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ６２Ｑ−Ｇ９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｍ，Ｇ９７Ｇ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｍ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｄ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｍ−Ｇ１２８Ｇ−Ｙ２１７Ｍ，Ｇ９７Ｇ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｇ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｌ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｎ，Ｇ９７Ｑ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｌ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｍ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｓ，Ｇ９７Ｄ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｍ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｑ−Ｇ１２８Ｇ−Ｙ２１７Ｄ−Ｓ８７Ｙ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｔ，Ｇ９７Ｄ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｅ，Ｇ９７Ｄ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｌ，Ｇ９７Ｇ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｅ−Ｓ７８Ｐ−Ａ２７２Ｔ，Ｇ９７Ｔ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｄ，Ｇ９７Ｄ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｉ，Ｇ９７Ｑ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｇ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｄ，Ｇ９７Ｑ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｎ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｍ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｎ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｍ，Ｇ９７Ｅ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｍ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ｐ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｔ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ｄ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ７３Ｔ，Ｇ９７Ｅ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｎ，Ｇ９７Ｇ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｉ，Ｇ９７Ｑ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｄ，Ｇ９７Ｑ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｍ，Ｇ９７Ｒ−Ｇ１２８Ｔ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１６２Ｐ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｄ，Ｇ９７Ｔ−Ｇ１２８Ｐ−Ｙ２１７Ｉ，Ｇ９７Ｑ−Ｇ１２８Ｇ−Ｙ２１７Ｅ，Ｇ９７Ｃ−Ｇ１２８Ｇ−Ｙ２１７Ｎ，Ｇ９７Ｄ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｈ，Ｇ９７Ｍ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｌ，Ｇ９７Ｍ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｎ，Ｇ９７Ｓ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｅ，Ｇ９７Ｍ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｉ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ｐ−Ｙ２１７Ａ，Ｇ９７Ｒ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｄ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１４５Ｄ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ２３９Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｅ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１６２Ｋ−Ｋ２１３Ｌ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ４０Ｅ−Ａ１４４Ｋ−Ｋ２１３Ｌ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｅ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１５９Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｋ２１３Ｌ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｄ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ２０６Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｐ４０Ｅ−Ｓ１４５Ｄ−Ｓ１５９Ｋ−Ｋ２１３Ｌ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｋ２６５Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ４０Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ２７５Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１４５Ｄ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１４４Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１５９Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１６２Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ７８Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｉ１１１Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ１１７Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ１３２Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｙ１０４Ｎ−Ｓ１３２Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｉ１１１Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｎ１１７Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１３２Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｙ１０４Ｎ−Ｓ１３２Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ７８Ｎ−Ｙ１０４Ｎ−Ｓ１３２Ｎ，Ｙ２１７Ｌ−Ｖ０６８Ｃ−Ａ０６９Ｇ，Ｙ２１７Ｌ−Ｉ０７９Ｆ−Ａ０９８Ｇ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ０８６Ｔ−Ｓ１０１Ｄ−Ｑ１０３Ｓ−Ｖ１４７Ｉ，Ｙ２１７Ｌ−Ａ０８８Ｔ−Ｐ１２９Ｓ−Ｇ１４６Ｄ，Ｙ２１７Ｌ−Ｖ０９３Ｉ−Ｇ１２８Ｄ−Ｐ１２９Ｒ，Ｙ２１７Ｌ−Ｚ０９６．０１Ｄ−Ａ０９８Ｒ，Ｙ２１７Ｌ−Ｚ０９６．０１Ｈ−Ａ０９８Ｇ，Ｙ２１７Ｌ−Ｇ０９７Ｓ−Ｚ０９７．０１Ｓ−Ａ０９８Ｇ−Ａ２７３Ｔ，Ｙ２１７Ｌ−Ａ０９８Ｓ−Ｄ０９９Ｇ−Ｇ１００Ｄ，Ｙ２１７Ｌ−Ｚ０９８．０１Ｎ、Ｙ２１７Ｌ−Ｄ０９９Ｇ−Ｚ０９９．０１Ｎ、Ｙ２１７Ｌ−Ｄ０９９Ｇ−Ｚ０９９．０１Ｓ、Ｙ２１７Ｌ−Ｄ０９９Ｖ−Ｓ１０１Ｄ，Ｙ２１７Ｌ−Ｚ０９９．０１Ｓ、Ｙ２１７Ｌ−Ｇ１００Ｄ，Ｙ２１７Ｌ−Ｓ１０１Ｄ−Ｑ１０３Ｈ，Ｙ２１７Ｌ−Ｓ１０１Ｇ−Ａ１５１Ｖ，Ｙ２１７Ｌ−Ｓ１０１Ｈ−Ｇ１０２Ｓ，Ｙ２１７Ｌ−Ｓ１０１Ｈ−Ｑ１０３Ｄ，Ｙ２１７Ｌ−Ｇ１０２Ｒ−Ｑ１０３Ｃ−Ｙ１０４Ｃ−Ｖ１９２Ｉ，Ｙ２１７Ｌ−Ｑ１０３Ｄ，Ｙ２１７Ｌ−Ｖ１２１Ｉ−Ｉ１２２Ｓ−Ｎ１２３Ｃ，Ｙ２１７Ｌ−Ｖ１２１Ｌ−Ｎ１２３Ｃ，Ｙ２１７Ｌ−Ｉ１２２Ｓ−Ｎ１２３Ｓ，Ｙ２１７Ｌ−Ｍ１２４Ｉ，Ｙ２１７Ｌ−Ｍ１２４Ｖ，Ｙ２１７Ｌ−Ｌ１２６Ｆ−Ｐ１２９Ｚ−Ｓ１８２Ｎ，Ｙ２１７Ｌ−Ｌ１２６Ｙ，Ｙ２１７Ｌ−Ｇ１２７Ｓ−Ｐ１２９Ｄ，Ｙ２１７Ｌ−Ｚ１２７．０１Ｎ−Ｇ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｓ，Ｙ２１７Ｌ−Ｇ１２８Ｈ−Ｐ１２９Ｙ，Ｙ２１７Ｌ−Ｇ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｄ，Ｙ２１７Ｌ−Ｇ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｄ−Ｓ２４８Ｒ，Ｙ２１７Ｌ−Ｇ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｇ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｇ−Ｇ１３１Ｚ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｇ−Ｓ１３０Ｈ−Ｓ１３２Ｚ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｈ−Ｇ１３１Ｚ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｌ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｓ−Ｓ１３０Ｈ−Ｓ１３２Ｚ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｚ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｚ−Ｓ１３０Ｇ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｚ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ１３２Ｈ，Ｙ２１７Ｌ−Ｐ１２９Ｚ−Ｓ１３０Ｈ，Ｙ２１７Ｌ−Ｓ１３０Ｖ−Ｇ１３１Ｄ−Ｓ１３２Ｉ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１３４Ｔ−Ｋ２１３Ｌ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｐ１２９Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｐ２３９Ｒ，及びＧ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，のうちの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１又はそれ以上を含む、スブチリシン変異体、特に成熟ＢＰＮ’（配列番号２）の変異体などの好適な冷水プロテアーゼを提供し、ここで、変異体配列の位置は、配列番号２の位置に対応させることにより番号付けされる。
別の態様では、本発明は、配列番号２と比較して以下の変異の組：Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ６１Ｐ−Ｎ６２Ｓ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｌ７５Ｓ−Ｎ７６Ｙ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ２０３Ｙ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ５５Ｐ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ａ８８Ｖ−Ｌ９０Ｉ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｇ２１１Ｒ−Ｎ２１２Ｓ−Ｋ２１３Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ２２Ｎ−Ｓ２４Ａ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ２４Ｒ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ａ９８Ｓ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｔ１５８Ｇ−Ｓ１５９Ｇ−Ｙ２１７Ｑ，Ｑ５９Ｅ−Ｎ６１Ｐ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ａ９８Ｅ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ６３Ｔ−Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｐ２３９Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｎ６２Ｓ−Ｐ１９４Ｌ−Ａ２３２Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ａ１３３Ｖ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１３４Ｔ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｐ４０Ｅ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１５９Ｋ−Ｋ２６５Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１３４Ｔ−Ｇ２１１Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｐ１２９Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１１Ｖ−Ｓ１６１Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｐ１２９Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１５Ｖ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ａ１１６Ｓ−Ｎ１１７Ｇ−Ｎ１１８Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｖ２０３Ｙ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ５２Ｓ−Ｔ５５Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ａ１１６Ｓ−Ｎ１１７Ｇ−Ｎ１１８Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｔ２４２Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ４０Ｅ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ２６９Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｖ８Ｌ−Ｎ２５Ｙ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２１１Ｔ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５Ｙ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ａ１３４Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｐ１２９Ｖ−Ｐ１９４Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｐ１２９Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｉ１１５Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５Ｙ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１３４Ｔ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｐ２３９Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ａ１１６Ｓ−Ｎ１１７Ｇ−Ｎ１１８Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１３４Ｔ−Ｓ１６１Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５Ｙ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５Ｙ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ａ１３７Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ａ１３４Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５Ｙ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｐ１２９Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｌ７５Ｈ−Ｎ７６Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｉ１１５Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｇ２１１Ｒ−Ｎ２１２Ｓ−Ｋ２１３Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１５Ｖ−Ａ２７３Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５Ｙ−Ｔ５５Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１６１Ｐ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８９Ｙ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１５Ｖ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１６１Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｐ２３９Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｉ１１５Ｖ−Ａ１３４Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｙ６Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８９Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ａ８８Ｖ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ｓ７８Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ａ１３４Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２４０Ｋ−Ａ２７３Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１６１Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ−Ｓ７８Ｎ−Ｉ１１１Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｅ−Ａ１４４Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１３４Ｔ−Ｐ２３９Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ２４０Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｐ２３９Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１１Ｖ−Ｐ１２９Ｑ−Ｇ２１１Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ
，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｓ１６２Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１１Ｖ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１１Ｖ−Ａ２７３Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ２２Ｎ−Ｓ２４Ａ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｈ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｐ１２９Ｓ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１５９Ｋ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ４０Ｅ−Ｓ５３Ｙ−Ｓ７８Ｙ−Ｐ８６Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｓ１４５Ｄ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１１Ｖ−Ｓ１５９Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｐ１２９Ｌ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８９Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｐ１２９Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ−Ｐ１７２Ｈ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１１Ｖ−Ａ１３４Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ５Ｓ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ａ１１６Ｇ−Ｎ１１７Ｒ，Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ａ９７Ｇ−Ｇ１０２Ａ−Ａ１２８Ｇ−Ｐ１２９Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１４５Ｄ−Ｓ１５９Ｋ−Ｎ２４０Ｋ−Ｑ２７５Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｄ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２３Ａ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｄ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１１Ｖ−Ｐ２３９Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ｓ１６２Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｉ１１５Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ａ９２Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ２２Ｎ−Ｓ２４Ａ−Ｔ５５Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｓ１５９Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｎ６２Ｑ−Ｇ１００Ｎ−Ａ１２８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１８２Ｐ−Ｌ２６７Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ２３９Ｒ−Ａ２７３Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ−Ｔ２４２Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ３Ｆ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｇ２１１Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｌ７５Ｈ−Ｎ７６Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ５３Ｇ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ａ１４４Ｋ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｑ５９Ｓ−Ｎ６１Ｐ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｉ１１１Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｒ−Ｓ１４５Ｄ−Ｐ２３９Ｒ−Ｑ２７５Ｅ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１４５Ｄ−Ａ２７３Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｋ１４１Ｅ−Ｔ２４２Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ｇ−Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８９Ｙ−Ｇ２１１Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｇ−Ａ８８Ｖ−Ｓ８９Ａ−Ａ１１６Ｎ−Ｎ１１７Ｓ−Ｎ１１８Ｇ−Ａ１４４Ｔ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｓ１０１Ｎ−Ｖ２０３Ｙ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４Ｇ−Ｎ２５Ｇ−Ｐ１２９Ｖ，Ｇ９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ａ１２８Ｇ−Ｐ１２９Ｓ−Ｓ１３０Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ８７Ｔ−Ａ８８Ｌ−Ｓ８９Ｇ−Ｇ１１０Ｃ−Ｓ１３０Ｐ，Ｇ９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ１２３Ｇ−Ａ１２８Ｇ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ６１Ｐ−Ｎ６２Ｑ−Ｇ１００Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｍ１２４Ｉ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ａ１３７Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ６１Ｐ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１３０Ｐ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｑ１０３Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ６３Ｔ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１０２Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｎ１０９Ｄ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４８Ｒ，Ｓ８７Ｒ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１８８Ｄ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ８７Ｄ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４８Ｒ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１８８Ｄ−Ｓ２４８Ｒ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ２４８Ｄ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｌ２６７Ｖ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ１６１Ｐ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１５Ｖ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ２７３Ｓ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｇ２１１Ｔ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１１１Ｖ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｖ１４７Ｌ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｉ１０８Ｖ，Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８９Ｙ，及びＳ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ａ１３８Ｔ，のうちの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１又はそれ以上を含む、スブチリシン変異体、特に成熟ＢＰＮ’（配列番号２）の変異体などの好適な冷水プロテアーゼを提供し、ここで、変異体配列の位置は、配列番号２の位置に対応させることにより番号付けされる。
別の態様では、この冷水プロテアーゼは、配列番号２を有するスブチリシンＢＰＮ’の変異体であり、ここで、この変異体は、アミノ酸位置２４、２５、４０、５２、５３、５５、５８、５９、６１、６２、６３、６８、７８、８６、８７、８８、８９、９２、９６、９７、１００、１０１、１０３、１０４、１０６、１１１、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１２３、１２４、１２５、１２６、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１４４、１４５、１５９、１６１、１６２、１６７、１９４、２０３、２０６、２１３、２１７、２２７、２３２、２３９、２４０、２４２、２６５、２６７及び２７５から選択される３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又はそれ以上の変異を含み、ここで、変異体配列の位置は、配列番号２のアミノ酸配列における位置に対応させることにより番号付けされる。
別の態様では、この冷水プロテアーゼは、配列番号２を含むスブチリシンＢＰＮ’の変異体（すなわち、ＢＰＮ’スブチリシン変異体）であり、ここで、この変異体は、群（ａ）及び（ｂ）；（ａ）Ｎ６１Ｅ，Ａ１４４Ｋ，Ｐ１２９Ｅ，Ｐ２３９Ｒ，Ｐ４０Ｅ，Ｑ１０３Ｅ，Ｑ２０６Ｅ，Ｑ７２７５Ｅ，Ｓ１４５Ｄ，Ｓ１５９Ｋ，Ｓ１６２Ｋ，Ｓ２４Ｒ，Ｓ６３Ｈ，Ｓ８７Ｄ及びＴ２４２Ｒからなる群から選択される、帯電している変異、並びに（ｂ）Ａ１１４Ｇ，Ａ１１６Ｎ，Ａ１３３Ｖ，Ａ１３４Ｔ，Ａ２３２Ｔ，Ａ８８Ｖ，Ａ９２Ｇ，Ｆ５８Ｇ，Ｇ１００Ｔ，Ｇ１２８Ａ，Ｇ１３１Ｓ，Ｇ９７Ａ，Ｉ１１１Ｖ，Ｉ１１５Ｖ，Ｋ２１３Ｌ，Ｋ２６５Ｎ，Ｌ１２６Ａ，Ｌ２６７Ｖ，Ｌ９６Ｔ，Ｍ１２４Ｖ，Ｎ１１７Ｓ，Ｎ１１８Ｇ，Ｎ１２３Ｇ，Ｎ２４０Ｋ，Ｎ２５Ｇ，Ｎ６１Ｐ，Ｎ６２Ｑ，Ｎ６２Ｒ，Ｎ６２Ｓ，Ｐ１２９Ｑ，Ｐ１２９Ｖ，Ｐ１９４Ｌ，Ｐ２３９Ｖ，Ｐ５２Ｌ，Ｐ８６Ｓ，Ｑ５９Ｓ，Ｓ１０１Ｎ，Ｓ１２５Ａ，Ｓ１３０Ｇ，Ｓ１３２Ｎ，Ｓ１６１Ｐ，Ｓ２４Ｇ，Ｓ５３Ｇ，Ｓ７８Ｎ，Ｓ８７Ｇ，Ｓ８９Ｙ，Ｔ５５Ｐ，Ｖ２０３Ｙ，Ｖ２２７Ｔ，Ｖ６８Ａ，Ｗ１０６Ｆ，Ｙ１０４Ｎ，Ｙ１６７Ａ，及びＹ２１７Ｑ，からなる群から選択される、中性の変異；から選択される合計で３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又はそれ以上の変異を含み、ここで、変異体配列の位置は、配列番号２のアミノ酸配列における位置に対応させることにより番号付けされる。
本発明の核酸
本発明は、単離された、非自然発生の又は組み換え核酸（本明細書では「ポリヌクレオチド」とも呼ぶ）を提供し、これは集合的に「本発明の核酸」又は「本発明のポリヌクレオチド」とも呼ばれ得、これは本発明のポリペプチド（例えば、プロテアーゼ変異体）をコードする。下記全てを含む本発明の核酸は、本発明のポリペプチドの組み換え体生産（例えば、発現）に有用であり、典型的には、この生産には所望のポリペプチドをコードする配列又はその断片を含むプラスミド発現ベクターの発現を介する。上述のように、ポリペプチドとしては、クリーニングする必要のある物品又は表面（例えば、物品の表面）を洗浄するためのクリーニング用途及びクリーニング組成物に有用である酵素活性（例えば、タンパク質分解活性）を有するスブチリシン変異体ポリペプチドなどのプロテアーゼ変異体ポリペプチドが挙げられる。
本発明は、「本発明のポリペプチド」と題された節に上述した、並びに、パートＩ実施例及びパートＩＩ実施例などの実施例が挙げられるがこれに限定されない本明細書の他箇所の、本発明の任意のタンパク質、ポリヌクレオチド又はプロテアーゼ変異体（任意の融合タンパク質などが挙げられる）をコードするポリヌクレオチド配列あるいはこれらの相補的ポリヌクレオチド配列を含む、単離された、組み換え、実質的に純粋な又は非自然発生の核酸を含む。本発明はまた、上記、並びに、パートＩ実施例及びパートＩＩ実施例などの実施例が挙げられるがこれに限定されない本明細書の他箇所の、本発明の任意のポリヌクレオチド、タンパク質又はプロテアーゼ変異体（任意の融合タンパク質が挙げられる）の２つ以上の組み合わせをコードするポリヌクレオチド配列を含む、単離された、組み換え、実質的に純粋な又は非自然発生の核酸を提供する。
第十態様では、本発明は、本発明の第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八若しくは第九態様の変異体（又は第三態様にあるようなポリペプチド）をコードするポリヌクレオチド配列又はこれらの相補的ポリヌクレオチド配列を含む、単離された、非自然発生型の又は組み換え核酸を提供する。
第十一態様では、本発明は、配列番号３又は配列番号５に記載のポリヌクレオチド配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチド配列あるいはこれらの相補的ポリヌクレオチド配列を含む、単離された、非自然発生型の又は組み換え核酸を提供する。
本発明は、配列番号２のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含むプロテアーゼ変異体をコードする核酸を更に提供し、ここで、このプロテアーゼ変異体の合計正味電荷は、バチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）ＢＰＮ’スブチリシンプロテアーゼの合計正味電荷と比較して＋１、＋２、＋３、＋４、＋５、０、−１、−２、−３、−４又は−５であり、ここで、このプロテアーゼ変異体のアミノ酸位置は、バチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’アミノ酸配列とこのプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列のアラインメントを行うことにより判定される配列番号２に示されるバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列中の対応するアミノ酸位置の番号付けに従って、番号付けされる。
本発明は、バチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）ＢＰＮ’スブチリシンプロテアーゼのスブチリシン変異体をコードする核酸を提供し、ここで、このＢＰＮ’スブチリシンプロテアーゼは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、ここで、このプロテアーゼ変異体は、アミノ酸位置１〜２７５から選択されるアミノ酸位置において２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５以下の変異で配列番号２のアミノ酸配列と異なるアミノ酸配列を含み、ここで、このスブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号２として記載されているバチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列に対応させることにより番号付けされ、ここで、このプロテアーゼ変異体のアミノ酸位置は、このプロテアーゼ変異体とのアライメントにより判定される配列番号２に示されるバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列中の対応するアミノ酸位置の番号付けに従って、番号付けされる。
本発明は、配列番号２のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含むスブチリシン変異体をコードする核酸を提供し、ここで、このプロテアーゼ変異体の合計正味電荷は、バチルス・レンタス（Bacillus lentus）スブチリシンＢＰＮ’プロテアーゼの合計正味電荷と比較して＋１、＋２、＋３、＋４、＋５、０、−１、−２、−３、−４又は−５であり、ここで、このプロテアーゼ変異体のアミノ酸位置は、バチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’アミノ酸配列とこのプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列のアラインメントを行うことにより判定される配列番号２に示されるバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列中の対応するアミノ酸位置の番号付けに従って、番号付けされる。
上記低イオン強度プロテアーゼ変異体は、典型的には洗濯洗浄機内で、水に希釈されて洗濯洗剤洗浄液を形成する洗剤組成物の部分を形成し得、その伝導率は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約３ｍＳ／ｃｍ、約０．３ｍＳ／ｃｍ〜約２．５ｍＳ／ｃｍ、又は更には約０．５ｍＳ／ｃｍ〜約２ｍＳ／ｃｍである。このプロテアーゼ変異体は、高イオン強度のプロテアーゼ変異体であってもよい。このような高イオン強度のプロテアーゼ変異体は、２つ以上の変異を含み、配列番号２に示される野生型ＢＰＮ’スブチリシンプロテアーゼと比較して＋５、＋４、＋３、＋２、＋１又は０の合計正味電荷を有する。
上記高イオン強度のプロテアーゼ変異体は、典型的には洗濯洗浄機内で、水に希釈されて洗濯洗剤洗浄液を形成する洗剤組成物の部分を形成し得、その伝導率は、約３ｍＳ／ｃｍ〜約３０ｍＳ／ｃｍ、約３．５ｍＳ／ｃｍ〜約２０ｍＳ／ｃｍ、又は更には約４ｍＳ／ｃｍ〜約１０ｍＳ／ｃｍである。
このプロテアーゼ変異体の電荷は、配列番号２のアミノ酸配列を有するＢＰＮ’と比較して表される。単一負電荷を付与するアミノ酸はＤ及びＥであり、単一正電荷を付与するアミノ酸はＲ、Ｈ及びＫである。電荷を変化させる配列番号２に対するアミノ酸変化は、プロテアーゼ変異体の電荷を計算するために使用される。例えば、野生型の中性位置に負電荷変異を導入することはプロテアーゼ変異体に−１の正味電荷を加えることになり、一方、野生型正アミノ酸残基（Ｒ、Ｈ又はＫ）に負電荷変異（Ｄ及びＥ）を導入することは−２の正味電荷を加えることになる。配列番号２のアミノ酸配列を有するＢＰＮ’に対してプロテアーゼ変異体について異なるアミノ酸残基全ての電荷変化を合計すると、プロテアーゼ変異体の電荷変化が得られる。理論に束縛されるものではないが、低伝導率の洗濯洗剤溶液中で使用されるべき冷水プロテアーゼについて好ましい電荷範囲は−５、−４、−３、−２、−１、０、好ましくは−２、−１であり、高伝導率洗濯洗剤溶液中で使用されるべき冷水プロテアーゼについて好ましい電荷範囲は＋５、＋４、＋３、＋２、＋１、０、好ましくは＋２、＋１である。電荷を正しく選択することにより、予想外にレベルの改善された冷水クリーニング性能を得ることができる。「低伝導率の洗濯洗剤溶液」は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約３ｍＳ／ｃｍ、約０．３ｍＳ／ｃｍ〜約２．５ｍＳ／ｃｍ、又は更には約０．５ｍＳ／ｃｍ〜約２ｍＳ／ｃｍの伝導率を有するものとして定義される。「高伝導率の洗濯洗剤溶液」は、約３ｍＳ／ｃｍ〜約３０ｍＳ／ｃｍ、約３．５ｍＳ／ｃｍ〜約２０ｍＳ／ｃｍ、又は更には約４ｍＳ／ｃｍ〜約１０ｍＳ／ｃｍの伝導率を有するものとして定義される。上記の例は非限定的であることが意図されている。冷水性能を最適化するために変異が組み合わされる場合にも、酵素電荷は更なる位置における変異により均衡が得られ得る。
本発明は、冷水プロテアーゼ及び少なくとも１つの冷水プロテアーゼを含む製品を含む。一態様では、この冷水プロテアーゼは配列番号２を有するスブチリシンＢＰＮ’の変異体であり、上記変異体は１つ以上の変異を有するアミノ酸配列を含み、野生型ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して−１、０又は＋１の合計正味電荷を有する。負電荷を付与するアミノ酸は典型的にはＤ及びＥであり、正電荷を付与するアミノ酸は典型的にはＲ、Ｈ及びＫである。理論に束縛されるものではないが、この電荷範囲（−１、０、＋１）は、冷水性能をもたらすのに最適な電荷であると考えられる。しかしながら、これらの例は、非限定的として見るべきである。一態様では、冷水性能を最適化するために変異が組み合わされた場合、酵素電荷は、更なる位置における変異により均衡が得られる。
本発明は、タンパク質分解活性を有する、単離された、組み換え型の、実質的に純粋な又は非自然発生型のプロテアーゼ変異体（例えば、スブチリシン変異体）を提供し、上記プロテアーゼ変異体は、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９又は８のアミノ酸残基により配列番号２に示されるアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含み、ここで、アミノ酸位置は、バチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’アミノ酸配列とプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列のアライメントを行うことにより判定される配列番号２に示すバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’アミノ酸配列のアミノ酸配列中の対応するアミノ酸位置の番号付けに従って番号付けされ、スブチリシン変異体はＢＰＮ’−ｖ３（配列番号４）又はＢＰＮ’−ｖ３６（配列番号６）のアミノ酸配列を包含する。
一態様では、本発明は、タンパク質分解活性を有する、単離された、組み換え型の、実質的に純粋な又は非自然発生型のプロテアーゼ変異体（例えば、スブチリシン変異体）を提供し、上記プロテアーゼ変異体は、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、６、５、４、３、２のアミノ酸残基により配列番号２に示されるアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含み、ここで、アミノ酸位置は、本明細書で上述されているように、バチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’アミノ酸配列とプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列のアライメントを行うことにより判定される配列番号２に示すバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列中の対応するアミノ酸位置の番号付けに従って番号付けされる。
本発明は、（ａ）パートＩ実施例に記載のプロテアーゼ変異体が挙げられるがこれらに限定されない本明細書に記載の任意のプロテアーゼ変異体などの本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体、（ｂ）本発明の少なくとも１つの冷水プロテアーゼ、又は（ｃ）パートＩＩ実施例に記載のシリーズＩ ＧＧ３６変異体が挙げられるがこれらに限定されない本明細書に記載の任意のプロテアーゼ変異体などの本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体、をコードするポリヌクレオチド配列又はこれらのいずれかの相補的ポリヌクレオチド配列を含む、単離された、組み換え型の又は非自然発生型の核酸を含む。別の態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つの核酸を含む発現ベクターを提供する。この発現ベクターは、プロモーターに作用可能に連結され得る。
別の態様では、本発明は、配列番号３又は配列番号５に記載のポリヌクレオチド配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチド配列あるいはこれらの相補的ポリヌクレオチド配列を含む、核酸を提供する。
本発明の核酸は、任意の好適な合成、操作及び／又は単離技術あるいはこれらの組み合わせを使用することにより、生じさせることができる。例えば、本発明のポリヌクレオチドは、当業者に周知である固相合成技術などの標準的核酸合成技術を用いて、製造することができる。このような技術では、最大５０個又はそれ以上のヌクレオチド塩基の断片が典型的には合成され、その後、（例えば、酵素又は化学的連結方法、あるいは、ポリメラーゼを介した組み換え方法により）連結され、任意の所望の連続的な核酸配列が本質的に形成される。本発明の核酸の合成はまた、古典的なホスホルアミダイト方法を用いる化学合成が挙げられるがこれに限定されない当該技術分野において既知の任意の好適な方法により、促進（又は代替的に達成）することができる（例えば、Ｂｅａｕｃａｇｅ ｅｔ ａｌ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２２：１８５９〜６９（１９８１））；又は自動化合成方法において典型的に実践されているものとしてＭａｔｔｈｅｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．３：８０１〜８０５（１９８４）により記載の方法を参照されたい）。本発明の核酸はまた、自動ＤＮＡ合成装置を用いることにより、製造することができる。注文に応じ合成される核酸は、様々な商業的供給元に発注することができる（例えば、Ｔｈｅ Ｍｉｄｌａｎｄ Ｃｅｒｔｉｆｉｅｄ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｃｏｍｐａｎｙ、ｔｈｅ Ｇｒｅａｔ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｇｅｎｅ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｏｐｅｒｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．及びＤＮＡ２．０）。核酸を合成するための他の技術及び関連する原理は、当該技術分野で既知である（例えば、Ｉｔａｋｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５３：３２３（１９８４）；及びＩｔａｋｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８：１０５６（１９８４）を参照されたい）。
上記に示しているように、核酸の修飾に有用なＤＮＡ組み換え技術は、当該技術分野において周知である。例えば、制限エンドヌクレアーゼ消化、連結、逆転写及びｃＤＮＡ生産並びにポリメラーゼ連鎖反応（例えば、ＰＣＲ）などの技術は、既知であり、当業者により容易に採用される。本発明のヌクレオチドはまた、本発明のプロテアーゼ変異体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに対してハイブリッド形成できる又はそのポリヌクレオチドをＰＣＲ増幅できる１つ以上のオリゴヌクレオチドプローブを使用して、ｃＤＮＡライブラリ（例えば、本明細書に記載のものなどの当該技術分野で一般に使用される変異誘発技術を用いて生じさせたｃＤＮＡライブラリ）をスクリーニングすることにより得てもよい。ｃＤＮＡをスクリーニング及び単離するための手順並びにＰＣＲ増幅手順は、当業者に周知であり、当業者に既知の標準的な参照文献に記載されている。本発明の一部の核酸は、例えば、既知の変異誘発手順（例えば、部位特異的変異誘発、部位飽和変位誘発及びインビトロ組み換え）によって（例えば、酵素又は親プロテアーゼをコードする）自然発生的にポリヌクレオチド主鎖を変更することにより、得ることができる。
本発明は、本発明の標的核酸（例えば、配列番号３又は５）又はその相補的ポリヌクレオチド配列に対してハイブリッド形成する核酸を含み、ここで、ハイブリッド形成は実質的に標的核酸の全長にわたる。ハイブリッド形成する核酸は、少なくとも厳密な条件下で又は少なくとも厳密度の高い条件下で本発明のヌクレオチド配列に対してハイブリッド形成し得る。核酸ハイブリッド形成実験に関する、現密度が中程度の条件、厳密な条件及び厳密度の高い条件は既知である。このような厳密度のレベルを達成するために組み合わせることができる因子の例は、本明細書に簡潔に議論される。
水素結合、溶媒排除、塩基スタッキング及びこれらに類するものなどの様々な明確な特徴を持つ物理化学的な力により、核酸はハイブリッド形成する。核酸のハイブリッド形成についての広範なガイドは、Ｐ．Ｔｉｊｓｓｅｎ（１９９３）Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ−ＨｙｂｒｉｄｉＺａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｐｒｏｂｅｓ，ｖｏｌ．２４，ｐａｒｔ Ｉ，ｃｈａｐｔｅｒ ２，「Ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ ｈｙｂｒｉｄｉＺａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｔｒａｔｅｇｙ ｏｆ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｐｒｏｂｅ ａｓｓａｙｓ，」（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．）（本明細書では以降「Ｔｉｊｓｓｅｎ」）に見られる。Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ（１９９５）Ｇｅｎｅ Ｐｒｏｂｅｓ１及び２も参照されたい。２つの核酸配列が実質的に同一であることの指標としては、２つの分子が少なくとも厳密な条件下で互いにハイブリッド形成することが挙げられる。サザン及びノザンハイブリッド形成などの核酸ハイブリッド形成実験の文脈での厳密なハイブリッド形成条件は配列に依存し、異なる環境パラメーター下では異なる。厳密度の高い条件は典型的には、ハイブリッド形成が、約５℃で、又は、定義されたイオン強度及びｐＨでの特定の配列についての熱的な融解温度（Ｔｍ）未満で、生じるように選択される。Ｔｍは、（定義されたイオン強度及びｐＨ下で）完全に適合するプローブに対して試験配列の５０％がハイブリッド形成する温度である。Ｔｍは所与の条件下で核酸二重鎖が５０％変性する温度を示し、核酸ハイブリッドの安定性の直接の尺度を表す。したがって、Ｔｍは、へリックスからランダムコイルへの移行における中間点に対応する温度に対応し、長さ、ヌクレオチド組成、及びヌクレオチドの長い伸張に対するイオン強度に依存する。厳密な条件下では、プローブは、典型的には、その標的配列に対してハイブリッド形成するが、他の配列に対しては全くハイブリッド形成しない。「非常に厳密な条件」が選択されると、特定のプローブについてのＴｍと等しいものになる。
ＤＮＡ−ＤＮＡ二重鎖のＴｍは、等式（１）を用いて概算することができる：Ｔｍ（℃）＝８１．５℃＋１６．６（ｌｏｇ１０Ｍ）＋０．４１（％ Ｇ＋Ｃ）−０．７２（％ ｆ）−５００／ｎ、式中、Ｍは一価カチオン（通常はＮａ＋）の容量モル濃度であり、（％ Ｇ＋Ｃ）はグアノシン（Ｇ）及びシトシン（Ｃ）ヌクレオチドの百分率であり、（％ ｆ）はホルムアミド（formalize）の百分率であり、ｎはハイブリッドのヌクレオチド塩基の数（すなわち、長さ）である。ＲＮＡ−ＤＮＡ二重鎖のＴｍは、等式（２）を用いて概算することができる：Ｔｍ（℃）＝７９．８℃＋１８．５（ｌｏｇ１０Ｍ）＋０．５８（％ Ｇ＋Ｃ）−１１．８（％ Ｇ＋Ｃ）２−０．５６（％ ｆ）−８２０／ｎ、式中、Ｍは一価カチオン（通常はＮａ＋）の容量モル濃度であり、（％ Ｇ＋Ｃ）はグアノシン（Ｇ）及びシトシン（Ｃ）ヌクレオチドの百分率であり、（％ ｆ）はホルムアミドの百分率であり、ｎはハイブリッドのヌクレオチド塩基の数（すなわち、長さ）である。上記等式１及び２は、典型的には、約１００〜２００ヌクレオチドよりも長いハイブリッド二重鎖についてのみ正確である。５０ヌクレオチドよりも短い核酸配列のＴｍは、次のように計算することができる：Ｔｍ（℃）＝４Ｇ＋Ｃ）＋２（Ａ＋Ｔ）、式中、Ａ（アデニン）、Ｃ、Ｔ（チミン）及びＧは、対応するヌクレオチドの数である。
ハイブリッド形成をしない核酸物質は典型的には一連の洗浄により除去され、ハイブリッド形成分析を行う際にその厳密度は所望される結果に応じて調整することができる。（例えば、より高い塩濃度及びより低い温度を用いる）厳密度の低い洗浄条件は、感度を上昇させるが、不特定のハイブリッド形成シグナル及び高いバックグラウンドシグナルを生産し得る。（例えば、より低濃度の塩及びハイブリッド形成温度により近いより高い温度を用いる）厳密のより高い条件は、典型的には特定のシグナルを維持したまま、バックグラウンドシグナルを低下させる。更なるガイドとしては、上記Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓを参照されたい。
少なくとも１００ヌクレオチドを含む少なくとも２つの核酸の分析のための代表的な厳密な条件としては、５０％ホルマリン（すなわちホルムアミド）を４２℃の１ミリグラム（ｍｇ）のヘパリンと共に含むサザン又はノザンブロットにおける溶液中又はフィルター上でのインキュベーションが挙げられ、この場合、ハイブリッド形成は一晩行われる。標準的な厳密度での洗浄は、０．２ｘ ＳＳＣ緩衝洗浄液を含む溶液を用いて約６５℃にて約１５分にわたって行うことができる（ＳＳＣ緩衝液の説明についてはＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ及びその第三版（２００１）を参照されたい）。標準的な厳密度で洗浄する前に、厳密度の低い洗浄を行なってバックグラウンドプローブシグナルを除去してもよい。厳密度の低い洗浄は、例えば、２ｘ ＳＳＣ緩衝液を含む溶液中で約４０℃にて約１５分にわたって行うことができる。厳密度の高い洗浄は、０．１５ＭのＮａＣｌを含む溶液を用いて約７２℃にて約１５分にわたって行うことができる。代表的な厳密度が中程度の条件としては、２０％ホルマリン（すなわちホルムアミド）、０．５ｘ ＳＳＣ、５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ ７．６）、５ｘデンハルト溶液、１０％硫酸デキストラン及び２０ｍｇ／ｍＬの変性剪断サケ精子ＤＮＡを含む溶液中で３７℃にて一晩インキュベーションした後に１ｘ ＳＳＣ中で約３７〜５０℃にてフィルターを洗浄することが挙げられる。厳密度の高い条件は、（ａ）例えば、５０℃にて０．０１５Ｍの塩化ナトリウム／０．００１５Ｍのクエン酸ナトリウム／０．１％のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）といった、洗浄に低イオン強度及び高温を使用する条件、（ｂ）例えば、５０％（ｖ／ｖ）ホルムアミドを０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）／０．１％ Ｆｉｃｏｌｌ／０．１％ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）／５０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液と共にｐＨ ６．５にて７５０ｍＭの塩化ナトリウム、７５ｍＭのクエン酸ナトリウムを４２℃にて、といった、ハイブリッド形成中に変性剤を採用する条件あるいは、（ｃ）５０％ホルムアミド、５ｘ ＳＳＣ（０．７５ＭのＮａＣｌｍ０．０７５Ｍのクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ ６．８）、０．１％のピロリン酸ナトリウム、５ｘデンハルト溶液、音波処理したサケ精子ＤＮＡ（５０μｇ／ｍＬ）、０．１％ ＳＤＳ及び１０％硫酸デキストランを４２℃にて、（１）０．２ｘ ＳＳＣ中で４２℃、（２）５０％ホルムアミド中で５５℃、及び（３）０．１ｘ ＳＳＣ中で５５℃（好ましくはＥＤＴＡと共に）、における洗浄と共に、採用する条件である。特定のハイブリッド形成アッセイにおいて関連しないプローブについて観察される２ｘ又は２．５ｘ〜５ｘのシグナル対ノイズ比は、特定のハイブリッド形成の検出を示す。本発明の文脈における、少なくとも厳密なハイブリッド形成の検出は、本発明の核酸に対して配列類似性又は相同性が高いことを指す。
ベクター、細胞及び本発明のプロテアーゼ変異体ポリペプチドの製造方法
例えば、部位特異的飽和変異誘発、走査変異誘発、挿入変異誘発、欠失変異誘発、無作為変異誘発、部位特異的変異誘発及び指向進化、並びに、様々な他の組み換え方法が挙げられるがこれらに限定されない、本発明のプロテアーゼ変異体をコードする本発明の改変されたポリヌクレオチドを生産するのに好適である様々な方法が当該技術分野で既知である。改変されたポリヌクレオチド及びタンパク質（例えば、プロテアーゼ変異体）の製造方法としては、ＤＮＡシャッフリング法（例えば、Ｓｔｅｍｍｅｒ ＷＰ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１（２２）：１０７４７〜５１（１９９４）を参照されたい）、遺伝子の非相同組み換えに基づく方法、例えば、ＩＴＣＨＹ（Ｏｓｔｅｒｍｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．７：２１３９〜４４［１９９９］）、ＳＣＲＡＴＣＨＹ（ＬｕｔＺ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９８：１１２４８〜５３［２００１］）、ＳＨＩＰＲＥＣ（Ｓｉｅｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９：４５６〜６０［２００１］）、ＮＲＲ（Ｂｉｔｔｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：１０２４〜９［２００１］、Ｂｉｔｔｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１：７０１１〜６［２００４］）、オリゴヌクレオチドの使用に依拠してランダム及び標的変異、欠失及び／又は挿入を行なう方法（Ｎｅｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：１２５１〜５［２００２］；Ｃｏｃｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：１２４６〜５０［２００２］；Ｚｈａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍｂｉｏｃｈｅｍ．４：３４〜９［２００３］；Ｇｌａｓｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：３９０３〜１３［１９９２］）が挙げられ、Ａｒｋｉｎ ａｎｄ Ｙｏｕｖａｎ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：２９７〜３００（１９９２）；Ｒｅｉｄｈａａｒ−Ｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ＥｎＺｙｍｏｌ．２０８：５６４〜８６（１９９１）も参照されたい。
一態様では、親ポリヌクレオチドの全長を適切な発現プラスミドに連結し、以下の変異誘発方法を使用して本発明の改変プロテアーゼの構築を促進するが、他の方法を使用してもよい。この方法は、Ｐｉｓａｒｃｈｉｋ ｅｔ ａｌ．に記載のものに基づく（Ｐｉｓａｒｃｈｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌｅｃｔ．２０：２５７〜２６５［２００７］）。一態様では、制限酵素がその認識配列の外側を切断する点において付加的な利点がもたらされ、これにより、任意のヌクレオチド配列の消化が実践的に可能になり、制限部位の痕の形成を防止する。
一手法では、プロテアーゼの全長をコードする自然に生じる遺伝子を得、配列決定し、１つ以上のアミノ酸にて変異（例えば、欠失、挿入、置換）を作製することが所望される１つ以上の点について調査する。所望の配列にぴったり一致するように配列を変化させるための遺伝子の変異は、一般に既知の方法に従うプライマー伸長により達成される。変異の所望される点の左側までの断片及び右側までの断片はＰＣＲにより増幅され、かつＥａｍ１１０４Ｉ制限部位を包含することになる。この左側断片及び右側断片は、Ｅａｍ１１０４Ｉにより消化されて、相補的な３塩基突出部を有する複数の断片を生じ、これは次にプールされ、連結されて、１つ以上の変異を含有する改変配列のライブラリを生じる。この方法は、フレームシフト変異の発生を回避する。また、すべてのオリゴヌクレオチドは同一の制限部位を有するように合成でき、かつ一部の他の方法により必要とされるような、制限部位を作る合成リンカーを必要としないことから、この方法は変異誘発プロセスを単純化する。
一態様では、本発明は、冷水プロテアーゼの作製方法を含み、この方法は、（ａ）親プロテアーゼをコードするＤＮＡ基質分子の核酸変異体のライブラリをもたらすこと、（ｂ）核酸変異体のライブラリを宿主細胞に形質転換させること、（ｃ）ライブラリを発現させてポリペプチド発現産物をもたらすこと、（ｄ）ポリペプチド発現産物をスクリーニングして、（ｉ）パートＩ実施例１に記載の「試験方法」に定義されるようにＰＵＲＡＦＥＣＴ（登録商標）Ｐｒｉｍｅ（アミノ酸置換Ｙ２１７Ｌを有する配列番号２）と比較してｐＨ ８及び１６℃にて血液／ミルク／インク（ＢＭＩ）のシミに対して１．１〜１０の性能指数を有する、（ｉｉ）本明細書のパートＩ実施例１に記載の「試験方法」に定義されるようにＢＰＮ’（配列番号２）と比較してｐＨ ８及び１６℃にてＢＭＩのシミに対して１．３〜１０の性能指数を有する、（ｉｉｉ）本明細書のパートＩ実施例１に記載の「試験方法」に定義されるようにＢＰＮ’−ｖ３（配列番号４）と比較してｐＨ ８及び１６℃にてＢＭＩのシミに対して０．９〜約１０の性能指数を有する、並びに（ｉｖ）本明細書のパートＩ実施例１に記載の「試験方法」に定義されるようにＢＰＮ’−ｖ３６（配列番号６）と比較してｐＨ ８及び１６℃にてＢＭＩのシミに対して１．０〜約１０の性能指数を有する、からなる群から選択される少なくとも１つの特性を有する変異体プロテアーゼを同定することを含み、ここで、冷水プロテアーゼが同定される。
別の態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つの核酸を含む発現ベクターを提供する。このような核酸は、（ａ）パートＩ実施例に記載のプロテアーゼ変異体が挙げられるがこれらに限定されない本明細書に記載の任意のプロテアーゼ変異体などの本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体、（ｂ）本発明の少なくとも１つの冷水プロテアーゼ、又は（ｃ）パートＩＩ実施例に記載のシリーズＩ ＧＧ３６変異体が挙げられるがこれらに限定されない本明細書に記載の任意のプロテアーゼ変異体などの本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体、をコードするポリヌクレオチド配列又はこれらのいずれかの相補的ポリヌクレオチド配列を含み得る。このような発現ベクターは、プロモーターに作用可能に連結され得る。
別の態様では、本発明は、（ａ）本発明の核酸、（ｂ）本発明の核酸を含む発現ベクター、（ｃ）例えば、本発明の冷水プロテアーゼが挙げられるがこれに限定されない本発明のプロテアーゼ変異体、を含む組み換え宿主細胞を提供する。この組み換え宿主細胞は、例えば、バチルス細胞が挙げられるがこれに限定されない細菌細胞であり得る。代表的なバチルス細胞は、枯草菌（Bacillus subtilis）細胞である。
別の態様では、本発明は、（ａ）本発明の核酸、（ｂ）本発明の核酸を含む発現ベクター、（ｃ）例えば、本発明の変異体の冷水プロテアーゼが挙げられるがこれに限定されない本発明のプロテアーゼ変異体、を含む細胞培養物を提供する。
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の本発明の少なくとも１つのポリヌクレオチド（例えば、本明細書に記載の本発明のプロテアーゼ変異体をコードするポリヌクレオチド）を含む単離されたベクター又は組み換えベクター、本発明の少なくとも１つの核酸又はポリヌクレオチドを含む単離された又は組み換え発現ベクター又は発現カセット、本発明の少なくとも１つの核酸又はポリヌクレオチドを含む単離された、実質的に純粋な又は組み換えＤＮＡコンストラクト、本発明の少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む単離された又は組み換え細胞、本発明の少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む細胞を含む細胞培養物、本発明の少なくとも１つの核酸又はポリヌクレオチドを含む細胞培養物、並びに、このようなベクター、核酸、発現ベクター、発現カセット、ＤＮＡコンストラクト、細胞、細胞培養物又はこれらの任意の組み合わせ若しくは混合物を含む組成物を提供する。
別の態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つの核酸又はポリヌクレオチドを含む本発明の少なくとも１つのベクター（例えば、発現ベクター又はＤＮＡコンストラクト）を含む組み換え細胞を提供する。一部のこのような組み換え細胞は、このような少なくとも１つのベクターにより形質転換又はトランスフェクションが行われる。このような細胞は、典型的には、宿主細胞と呼ばれる。一部のこのような細胞は、例えば、枯草菌（Bacillus subtilis）細胞などのバチルス種細胞が挙げられるがこれらに限定されない細菌細胞を含む。本発明はまた、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を含む組み換え細胞（例えば、組み換え宿主細胞）を提供する。
別の態様では、本発明は、本発明の核酸又はポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。このベクターは、本発明のプロテアーゼ変異体をコードする本発明のポリヌクレオチド配列が、効率的な遺伝子発現に必要とされる１つ若しくは追加の核酸断片に作用可能に連結される発現ベクター又は発現カセットである（例えば、本発明のプロテアーゼ変異体をコードする本発明のポリヌクレオチドに作用可能に連結されるプロモーター）。ベクターは、抗菌剤含有培地での増殖により、プラスミドが感染した宿主細胞の連続培養の維持を可能にする、転写ターミネーター及び／又は抗生物質耐性遺伝子などの選択遺伝子を含み得る。
発現ベクターはプラスミド又はウイルスＤＮＡに由来してもよく、代替的態様では両方の要素を含有する。代表的なベクターとしては、ｐＸＸ、ｐＣ１９４、ｐＪＨ１０１、ｐＥ１９４、ｐＨＰ１３が挙げられるがこれらに限定されない（Ｈａｒｗｏｏｄ ａｎｄ Ｃｕｔｔｉｎｇ ｅｄｓ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｂａｃｉｌｌｕｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（１９９０）の例えば第３章を参照されたい；枯草菌（B.subtilis）に好適な複製プラスミドとしては、ｐ９２に列挙されているものが挙げられる（Ｐｅｒｅｇｏ，Ｍ．（１９９３）Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎａｌ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｐｐ．６１５〜６２４；Ａ．Ｌ．Ｓｏｎｅｎｓｈｅｉｎ，Ｊ．Ａ．Ｈｏｃｈ，ａｎｄ Ｒ．Ｌｏｓｉｃｋ（ｅｄ．），Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ Ｇｒａｍ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｂａｃｔｅｒｉａ：ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）。
細胞内での所望のタンパク質（例えば、プロテアーゼ変異体）の発現及び生産のために、改変プロテアーゼをコードするポリヌクレオチドの少なくとも１つのコピーを含む、好ましくは複数のコピーを含む、少なくとも１つの発現ベクターは、プロテアーゼの発現に好適な条件下で細胞に形質転換される。一態様ではプロテアーゼ変異体をコードするポリヌクレオチド配列（並びにベクター内に含まれる他の配列）は宿主細胞のゲノムの中に組み込まれる一方、別の態様ではプロテアーゼ変異体をコードするポリヌクレオチド配列を含むプラスミドベクターは、細胞内に自律的な染色体要素としてとどまる。本発明は、染色体外の核酸配列、並びに、宿主細胞ゲノムの中に組み込まれる組み込みヌクレオチド配列の両方を提供する。本明細書に記載のベクターは、本発明のプロテアーゼ変異体の製造に有用である。一態様では、このプロテアーゼ変異体をコードするポリヌクレオチドコンストラクトは、このプロテアーゼ変異体をコードするポリヌクレオチドの、細菌染色体への組み込み、及び場合によっては増幅を可能にする、組み込みベクター上に存在する。組み込みのための部位の例は、当業者に周知である。一態様では、本発明のプロテアーゼ変異体をコードするポリヌクレオチドの転写は、選択された前駆体プロテアーゼのための野生型プロモーターであるプロモーターによりもたらされる。一部の他の態様では、このプロモーターは、前駆体プロテアーゼとは非相同的なものであるが、宿主細胞において機能性である。具体的には、細菌宿主細胞での使用に好適なプロモーターの例としては、例えば、ａｍｙＥ、ａｍｙＱ、ａｍｙＬ、ｐｓｔＳ、ｓａｃＢ、ｐＳＰＡＣ、ｐＡｐｒＥ、ｐｖｅｇ、ｐＨｐａＩＩプロモーター、バチルス・ステアロサーモフィラス（B. stearothermophilus）マルトース生成アミラーゼ遺伝子、バチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）（ＢＡＮ）アミラーゼ遺伝子、枯草菌（B. subtilis）アルカリプロテアーゼ遺伝子、バチルス・クラウジイ（B. clausii）アルカリプロテアーゼ遺伝子、バチルス・プミリス（B. pumilis）キシロダーゼ遺伝子、バチルス・チューリンゲンシス（B. thuringiensis）ｃｒｙＩＩＩＡ及びバチルス・リケニホルミス（B. licheniformis）α−アミラーゼ遺伝子のプロモーターが挙げられるがこれらに限定されない。追加のプロモーターとしては、Ａ４プロモーター、並びに、ファージラムダＰＲ又はＰＬプロモーター、及び、大腸菌ｌａｃ、ｔｒｐ又はｔａｃプロモーターが挙げられるがこれらに限定されない。
本発明のプロテアーゼ変異体は、細菌及び真菌を含む任意の好適なグラム陽性微生物の宿主細胞で製造することができる。例えば、一態様では、このプロテアーゼ変異体は、真菌及び／又は細菌由来の宿主細胞で製造することができる。一態様では、宿主細胞は、バチルス種、ストレプトマイセス種、エシェリヒア種又はアスペルギルス種である。一態様では、このプロテアーゼ変異体は、バチルス種（Bacillus sp.）宿主細胞により生産される。本発明のプロテアーゼ変異体の生産に使用が見出されるバチルス種（Bacillus sp.）宿主細胞の例としては、バチルス・リケニホルミス（B. licheniformis）、バチルス・レンタス（B. lentus）、枯草菌（B. subtilis）、バチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）、バチルス・レンタス（B. lentus）、バチルス・ブレビス（B. brevis）、バチルス・ステアロサーモフィラス（B. stearothermophilus）、バチルス・アルカロフィラス（B. alkalophilus）、バチルス・コアグランス（B. coagulans）、バチルス・サーキュランス（B. circulans）、バチルス・プミリス（B. pumilis）、バチルス・チューリンゲンシス（B. thuringiensis）、バチルス・クラウジイ（B. clausii）及びバチルス・メガテリウム（B. megaterium）並びにバチルス属内の他の生物が挙げられるがこれらに限定されない。一態様では、枯草菌（B. subtilis）宿主細胞内は、プロテアーゼ変異体の生産のために使用される。米国特許第５，２６４，３６６号及び同第４，７６０，０２５号（再発行特許第３４，６０６号）は、本発明のプロテアーゼ変異体を生産するために使用できる様々なバチルス宿主株を記載しているが、他の好適な株を使用することもできる。
本発明のプロテアーゼ変異体を生産するために使用できるいくつかの工業用細菌株としては、非組み換え（即ち、野生型）バチルス種株、並びに、自然に生じる株の変異体及び／又は組み換え株が挙げられる。一態様では、宿主株は組み換え株であり、ここで、所望のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは宿主に導入される。一態様では、宿主株は、枯草菌（B. subtilis）宿主株であり、特に組み換え枯草菌（Bacillus subtilis）宿主株である。例えば、１Ａ６（ＡＴＣＣ ３９０８５）、１６８（１Ａ０１）、ＳＢ１９、Ｗ２３、Ｔｓ８５、Ｂ６３７、ＰＢ１７５３〜ＰＢ１７５８、ＰＢ３３６０、ＪＨ６４２、１Ａ２４３（ＡＴＣＣ ３９、０８７）、ＡＴＣＣ ２１３３２、ＡＴＣＣ ６０５１、ＭＩ１１３、ＤＥ１００（ＡＴＣＣ ３９、０９４）、ＧＸ４９３１、ＰＢＴ １１０及びＰＥＰ ２１１株が挙げられるがこれらに限定されない数多くの枯草菌（B. subtilis）株が既知である（例えば、Ｈｏｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ７３：２１５〜２２８（１９７３）を参照されたい）（米国特許第４，４５０，２３５号及び同第４，３０２，５４４号、並びに欧州特許第０１３４０４８号（これらはそれぞれその全体が参照により組み込まれる）も参照されたい）。発現宿主細胞としての枯草菌（B. subtilis）の使用は当該技術分野において周知である（例えば、Ｐａｌｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ １９：８１〜８７（１９８２）；Ｆａｈｎｅｓｔｏｃｋ ａｎｄ Ｆｉｓｃｈｅｒ，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１６５：７９６〜８０４（１９８６）；及びＷａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ ６９：３９〜４７（１９８８）を参照されたい）。
一態様では、バチルス宿主細胞は、次の遺伝子ｄｅｇＵ、ｄｅｇＳ、ｄｅｇＲ及びｄｅｇＱのうちの少なくとも１つにおいて変異又は欠失を含むバチルス種である。この変異はｄｅｇＵ遺伝子の中にあってもよく、場合によってはこの変異はｄｅｇＵ（Ｈｙ）３２であってもよい。例えば、Ｍｓａｄｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１７２：８２４〜８３４（１９９０）及びＯｌｍｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．２５３：５６２〜５６７（１９９７）を参照されたい。典型的な宿主株は、ｄｅｇＵ３２（Ｈｙ）変異を保有する枯草菌（Bacillus subtilis）である。このバチルス宿主は、ｓｃｏＣ４（例えば、Ｃａｌｄｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１８３：７３２９〜７３４０（２００１）を参照されたい）；ｓｐｏＩＩＥ（例えば、Ａｒｉｇｏｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３１：１４０７〜１４１５（１９９９）を参照されたい）；及び／又はｏｐｐＡあるいはｏｐｐオペロンの他の遺伝子（例えば、Ｐｅｒｅｇｏ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５：１７３〜１８５（１９９１）を参照されたい）におけるアミノ酸変異（例えば、置換）又は欠失を含み得る。実際、ｏｐｐＡ遺伝子における変異と同じ表現型を生じるｏｐｐオペロンにおける任意の変異は、本発明の改変されたバチルス株の一態様において使用を見出される。このような変異は単独で生じてもよく、又は、変異の組み合わせが存在してもよい。一態様では、本発明のプロテアーゼ変異体を生産するために使用できる改変されたバチルス宿主細胞株は、上記遺伝子の１つ以上における変異を既に含むバチルス宿主株である。加えて、内因性プロテアーゼ遺伝子の変異及び／又は欠失を含むバチルス種宿主細胞は使用を見出される。バチルス宿主細胞は、ａｐｒＥ及びｎｐｒＥ遺伝子の欠失を含み得る。バチルス種宿主細胞は５プロテアーゼ遺伝子の欠失を含んでもよく、バチルス種宿主細胞は９プロテアーゼ遺伝子の欠失を含んでもよい（例えば、米国特許出願公開第２００５／０２０２５３５号を参照されたい）。
宿主細胞は、当該技術分野において既知の任意の好適な方法を使用して、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体をコードする少なくとも１つの核酸で形質転換される。核酸がベクターの中に組み込まれるか又はプラスミドＤＮＡを存在させずに使用されるかのいずれにしろ、核酸は典型的には微生物の中に、一態様では好ましくは大腸菌細胞又はコンピテントなバチルス細胞の中に、導入される。プラスミドＤＮＡコンストラクト又はベクターを利用してバチルス細胞又は大腸菌細胞の中に核酸（例えば、ＤＮＡ）を導入し、このような細胞をこのようなプラスミドＤＮＡコンストラクト又はベクターにより形質転換させるための方法は、周知である。一態様では、これらのプラスミドは、その後、大腸菌細胞から単離され、バチルス細胞に形質転換される。しかしながら、大腸菌などの介在微生物を使用することは本質的ではなく、一態様では、ＤＮＡコンストラクト又はベクターはバチルス宿主の中に直接導入される。
当業者は、バチルス細胞の中に本発明の核酸又はポリヌクレオチド配列を導入するのに好適な方法を十分に承知している（例えば、Ｆｅｒｒａｒｉ ｅｔ ａｌ．，「Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，」ｉｎ Ｈａｒｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．（ｅｄ．），Ｂａｃｉｌｌｕｓ，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｒｐ．（１９８９），ｐｐ．５７〜７２；Ｓａｕｎｄｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１５７：７１８〜７２６（１９８４）；Ｈｏｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．９３：１９２５〜１９３７（１９６７）；Ｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１３：１３１〜１３５（１９８６）；及びＨｏｌｕｂｏｖａ，Ｆｏｌｉａ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３０：９７（１９８５）；Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．１６８：１１〜１１５（１９７９）；Ｖｏｒｏｂｊｅｖａ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔ．７：２６１〜２６３（１９８０）；Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ａｐｐｌ．Ｅｎｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５１：６３４（１９８６）；Ｆｉｓｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１３９：２１３〜２１７（１９８１）；及びＭｃＤｏｎａｌｄ，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１３０：２０３（１９８４）を参照されたい）。実際、プロトプラスト形質転換などの形質転換、会合、形質導入及びプロトプラスト融合のような方法は、周知であり、本発明での使用に適している。形質転換の方法は、本発明のプロテアーゼ変異体をコードする核酸を含むＤＮＡコンストラクト又はベクターを宿主細胞の中に導入するために使用される。バチルス細胞を形質転換するための当該技術分野において既知の方法としては、部分的に相同性の常在性プラスミドを保有するコンピテント細胞によりドナープラスミドを取り込むことを伴うプラスミドマーカーレスキュー形質転換のような方法が挙げられる（Ｃｏｎｔｅｎｔｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｓｍｉｄ ２：５５５〜５７１（１９７９）；Ｈａｉｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．２２３：１８５〜１９１（１９９０）；Ｗｅｉｎｒａｕｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１５４：１０７７〜１０８７（１９８３）；及びＷｅｉｎｒａｕｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１６９：１２０５〜１２１１（１９８７））。この方法では、組み込みドナープラスミドは、染色体性形質転換を模倣するプロセスにおいて常在「ヘルパー」プラスミドの相同領域と組み換えを行う。
一般に使用される方法に加えて、一態様では、宿主細胞は、本発明のプロテアーゼ変異体をコードする核酸を含むＤＮＡコンストラクト又はベクターで直接形質転換される（すなわち、中間体細胞は、宿主細胞の中への導入に先立ってＤＮＡコンストラクト又はベクターを増幅するために又は他のプロセスのために使用されない）。本発明のＤＮＡコンストラクト又はベクターを宿主細胞に導入することは、プラスミド又はベクターに挿入せずに核酸配列（例えば、ＤＮＡ配列）を宿主細胞の中に導入するための当該技術分野で既知の物理的及び化学的方法を含む。このような方法としては、塩化カルシウム沈殿、電気穿孔法、ネイキッドＤＮＡ、リポソーム及びこれらに類するものが挙げられるがこれらに限定されない。追加の態様では、ＤＮＡコンストラクト又はベクターは、プラスミドに挿入されず、プラスミドと同時形質転換される。更なる態様では、選択マーカーは、当該技術分野において既知の方法により改変されたバチルス株から除去される（Ｓｔａｈｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１５８：４１１〜４１８（１９８４）；及びＰａｌｍｅｒｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ ２４７：２５５〜２６４（２０００）を参照されたい）。
一態様では、本発明の形質転換された細胞は、従来の栄養培地で培養される。温度、ｐＨ及びこれらに類するものなどの好適な特定の培養条件は、当業者に既知である。加えて、一部の培養条件は、Ｈｏｐｗｏｏｄ（２０００）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｊｏｈｎ Ｉｎｎｅｓ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｎｏｒｗｉｃｈ ＵＫ；Ｈａｒｄｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｂａｃｉｌｌｕｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙなどの科学文献及びＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）からの科学文献に見出され得る。一態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体又は本発明の少なくとも１つの核酸を含む培養物（例えば、細胞培養物）を提供する。本発明の少なくとも１つの核酸、ベクター又はＤＮＡコンストラクトを含む組成物も提供される。
本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド配列で形質転換された宿主細胞は、親プロテアーゼの発現を許容する条件下で好適な栄養培地内で培養され得、その後、得られたプロテアーゼは培養物から回収される。これらの細胞を培養するために使用される培地は、適切なサプリメントを含有する最少培地又は複合培地などの宿主細胞の増殖に好適な任意の従来の培地を含む。好適な培地は、商業的供給業者から入手可能であり、あるいは、公表されている処方（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎのカタログ）に従って調製してもよい。細胞により生産されたプロテアーゼは、例えば、遠心分離又は濾過による培地からの宿主細胞の分離、塩析（例えば、硫酸アンモニウム）手法による上清又は濾液のタンパク質性成分の沈殿、クロマトグラフィー精製（例えば、イオン交換、ゲル濾過、親和性など）が挙げられるがこれらに限定されない従来手順により培養培地から回収され得る。本発明のプロテアーゼ変異体を回収又は精製するのに好適な任意の方法を使用することができる。
一態様では、組み換え宿主細胞により生産されるプロテアーゼ変異体は、培養培地中に分泌される。精製を容易にするドメインをコードする核酸配列は、可溶性タンパク質の精製を容易にするために使用され得る。プロテアーゼ変異体をコードするポリヌクレオチド配列を含むベクター又はＤＮＡコンストラクトは、プロテアーゼ変異体の生産を容易にするために精製を容易にするドメインをコードする核酸配列を更に含んでもよい（例えば、Ｋｒｏｌｌ，Ｄ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，ＤＮＡ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１２：４４１〜５３（１９９３）を参照されたい）。このような精製を容易にするドメインとしては、例えば、固定化金属上での精製を可能にするヒスチジン−トリプトファンモジュールなどの金属キレート化ペプチド（Ｐｏｒａｔｈ Ｊ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ．Ｐｕｒｉｆ．３：２６３〜２８１（１９９２））、固定化免疫グロブリン上での精製を可能にするプロテインＡドメイン、及びＦＬＡＧＳ伸長／親和性精製システムにおいて利用されるドメイン（Ｉｍｍｕｎｅｘ Ｃｏｒｐ．（Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ））が挙げられるがこれらに限定されない。精製ドメイン非相同タンパク質との間にＦａｃｔｏｒ ＸＡ又はエンテロキナーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ））などの切断可能なリンカー配列を含ませることも、精製を容易にするために使用を見出される。
本発明のプロテアーゼ変異体などの酵素の酵素活性を検出及び測定するためのアッセイは、周知である。例えば、本発明のプロテアーゼ変異体などのプロテアーゼの活性を検出及び測定するための様々なアッセイも、当業者に既知である。特に、２８０ｎｍでの吸光度として又はフォーリン法を用いて比色的に測定される、カゼイン又はヘモグロビンからの酸に可溶なペプチドの放出に基づくアッセイは、プロテアーゼ活性を測定するために利用可能である（例えば、Ｂｅｒｇｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ＥｎＺｙｍａｔｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ」 Ｖｏｌ．５，Ｐｅｐｔｉｄａｓｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，Ｖｅｒｌａｇ Ｃｈｅｍｉｅ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ（１９８４）を参照されたい）。他の代表的アッセイは、発色基質の可溶化を伴う（例えば、Ｗａｒｄ，「Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ，」ｉｎ Ｆｏｇａｒｔｙ（ｅｄ．）．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ＥｎＺｙｍｅｓ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｌｏｎｄｏｎ，（１９８３），ｐｐ．２５１〜３１７を参照されたい）。他の代表的アッセイとしては、スクシニル−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−パラニトロアニリドアッセイ（ＳＡＡＰＦｐＮＡ）及び２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸ナトリウム塩アッセイ（ＴＮＢＳ アッセイ）が挙げられるがこれらに限定されない。当業者に既知の数多くの追加の参照文献は、好適な方法を提供する（例えば、Ｗｅｌｌｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１１：７９１１〜７９２５（１９８３）；Ｃｈｒｉｓｔｉａｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２３：１１９〜１２９（１９９４）；及びＨｓｉａ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．２４２：２２１〜２２７（１９９９）を参照されたい）。
様々な方法が、宿主細胞内の成熟型プロテアーゼ（例えば、本発明の成熟型プロテアーゼ変異体）の生産レベルを測定するために使用することができる。このような方法としては、例えば、プロテアーゼに特異的なポリクローナル又はモノクローナル抗体を利用する方法が挙げられるがこれに限定されない。代表的な方法としては、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、蛍光免疫アッセイ（ＦＩＡ）及び蛍光活性化細胞選別法（ＦＡＣＳ）が挙げられるがこれらに限定されない。これら及び他のアッセイは、当該技術分野において周知である（例えば、Ｍａｄｄｏｘ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５８：１２１１（１９８３）を参照されたい）。
別の態様では、本発明は、本発明の成熟型プロテアーゼ変異体を製造又は生産するための方法を提供する。成熟型プロテアーゼ変異体は、シグナルペプチドもプロペプチド配列も含まない。一部のこのような方法は、例えば、枯草菌（Bacillus subtilis）細胞などの例えば、バチルス種細胞のような組み換え細菌宿主細胞において本発明のプロテアーゼ変異体を作製又は製造することを含む。一態様では、本発明は、本発明のプロテアーゼ変異体の製造方法を提供し、この方法は、プロテアーゼ変異体の生産を促進する条件下で本発明のプロテアーゼ変異体をコードする核酸を含む組み換え発現ベクターを含む組み換え宿主細胞を培養することを含む。一部のこのような方法は、培養物からプロテアーゼ変異体を回収することを更に含む。
一態様では、本発明は、本発明のプロテアーゼ変異体の生産方法を提供し、この方法は、（ａ）本発明のプロテアーゼ変異体をコードする核酸を含む組み換え発現ベクターを細胞（例えば、枯草菌（Bacillus subtilis）などの細菌細胞）集団に導入すること、及び（ｂ）発現ベクターによりコードされるプロテアーゼ変異体の生産を促進する条件下で培養培地において細胞を培養すること、を含む。一部のこのような方法は、（ｃ）細胞から又は培養培地からプロテアーゼ変異体を単離すること、を更に含む。
組み換え体の生産に加え、本発明のプロテアーゼ変異体ポリペプチドは、固相技術を用いる直接ペプチド合成により製造してもよい（例えば、Ｓｔｅｗａｒｔ ｅｔ ａｌ．（１９６９）Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ Ｃｏ，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９６３）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ ８５：２１４９〜２１５４を参照されたい）。ペプチド合成は、手動又は自動技術を用いて行われ得る。自動合成は、例えば、製造者により提供される指示に従ってＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ４３１Ａ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉＺｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆ．））を使用して達成され得る。例えば、サブ配列は、別個に化学合成され、化学的方法を用いて連結されて、プロテアーゼ変異体又はその機能性断片をもたらしてもよい。別の方法としては、このような変異体ポリペプチド配列は、ポリペプチドの製造に特化している任意の数の企業に発注してもよい。最も一般的には、本発明のポリペプチドは、例えば、上記及び実施例に記載のように、コードしている核酸を発現させ、ポリペプチドを回収することにより製造される。
別の態様では、本発明は、プロテアーゼ変異体の生産方法を提供し、この方法は、変異体の生産を促進する条件下で本発明の組み換え宿主細胞を培養することを含み、上記宿主細胞は、本発明の少なくとも１つの核酸を含む発現ベクターを含む。この方法は、培養物から変異体を回収することを更に含んでもよい。
別の態様では、本発明は、プロテアーゼ変異体の製造方法を含み、この方法は、（ａ）本発明の組み換え発現ベクターを細胞集団に導入すること、及び（ｂ）発現ベクターによりコードされるスブチリシン変異体の生産を促進する条件下で培養培地において細胞を培養すること、を含む。この方法は、（ｃ）細胞から又は培養培地から変異体を単離すること、を更に含む。
別の態様では、本発明は、セリンプロテアーゼ変異体をコードする核酸を含む発現ベクターで宿主細胞を形質転換すること、及び、セリンプロテアーゼ変異体の生産に好適な条件下で形質転換した宿主細胞を培養すること、を含む、バチルスセリンプロテアーゼのセリンプロテアーゼ変異体の製造方法を提供する。一態様では、この方法は、生産されたセリンプロテアーゼ変異体を回収する工程を更に含む。一態様では宿主細胞はバチルス細胞であり、これらの態様の部分集合ではバチルス細胞は枯草菌（B. subtilis）細胞である。更に、本発明は、布地を含む表面及び／又は物品をセリンプロテアーゼ変異体を含むクリーニング組成物と接触させる工程を含む、クリーニング方法を提供する。一部の代替的方法では、本発明は、食卓食器を含む表面及び／又は物品をセリンプロテアーゼ変異体を含むクリーニング組成物と接触させる工程を含む、クリーニング方法を提供する。
別の態様では、本発明は、野生型スブチリシンプロテアーゼを同定するための方法を提供し、上記スブチリシンプロテアーゼは、次のアミノ酸：アミノ酸位置２４におけるグリシン若しくはアルギニン、アミノ酸位置５３におけるグリシン、アミノ酸位置７８におけるアスパラギン、アミノ酸位置９７におけるアラニン、アミノ酸位置１０１におけるアスパラギン、アミノ酸位置１２８におけるアラニン若しくはセリン、及び／又はアミノ酸位置２１７におけるロイシン若しくはグルタミン、を含むアミノ酸配列を含み、ここで、上記アミノ酸位置は、配列番号２に記載ＢＰＮ’のアミノ酸配列におけるアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされ、上記方法は、ａ）少なくとも１つの野生型スブチリシンプロテアーゼ若しくは野生型スブチリシンプロテアーゼのライブラリを含むサンプルを供給すること又は野生型スブチリシンプロテアーゼをコードする１つ以上のＤＮＡ配列を含むＤＮＡサンプルを提供すること、及びｂ）野生型プロテアーゼをコードする野生型スブチリシンプロテアーゼ又はＤＮＡ配列を同定すること、を含む。
第十二態様では、本発明は、本発明の第十又は第十一態様の核酸を少なくとも１つ含む発現ベクターを提供する。本発明の第十二態様による発現ベクターは、プロモーターに作用可能に連結され得る。このような発現ベクターは、単離又は精製された形態である。
第十三態様では、本発明は、（ａ）本発明の第十若しくは第十一態様の核酸、又は、本発明の第十二態様の発現ベクター、を含む、組み換え宿主細胞を提供する。本発明の第十三態様の組み換え宿主細胞は細菌細胞であってもよく、選択的にバチルス細胞であってもよい。本発明の第十三態様の組み換え宿主細胞は、枯草菌（Bacillus subtilis）細胞であってもよい。
第十四態様では、本発明は、（ａ）本発明の第十若しくは第十一態様の核酸、又は、本発明の第十二態様の発現ベクター、を含む、細胞培養物を提供する。
第十五態様では、本発明は、プロテアーゼ変異体の製造方法を提供し、この方法は、変異体の生産を促進する条件下で本発明の第十三態様の組み換え宿主細胞を培養することを含む。本発明の第十五態様による方法は、培養物から変異体を単離又は回収することを更に含んでもよい。
第十六態様では、本発明は、プロテアーゼ変異体の製造方法を提供し、この方法は、（ａ）本発明の第十二態様の組み換え発現ベクターを細胞集団に導入すること、及び（ｂ）発現ベクターによりコードされるプロテアーゼ変異体の生産を促進する条件下で培養培地において細胞を培養すること、を含む。本発明の第十六態様による方法は、（ｃ）細胞から又は培養培地から変異体を単離又は回収すること、を更に含んでもよい。
本発明の組成物
本発明は、本発明の少なくとも１つのポリペプチド（例えば、少なくとも１つのプロテアーゼ変異体）を含む組成物を含む。本発明のポリペプチドは、パートＩ実施例及びパートＩＩ実施例を含む下記及び上記に説明されている。このような組成物は、少なくとも１つの賦形剤、担体、添加剤成分、又は他の置換基、構成成分又は物質を含んでもよい。
例えば、一態様では、本発明は、少なくとも１つのプロテアーゼ変異体と少なくとも１つの賦形剤、担体、添加剤成分又は他の置換基、構成成分又は物質とを含む組成物を含む。このような少なくとも１つのプロテアーゼ変異体は、パートＩ実施例において挙げられるがこれらに限定されない本明細書に記載のもののうちのいずれか１つであってもよい。このような少なくとも１つのプロテアーゼ変異体は、ＢＰＮ’プロテアーゼ変異体であってもよい。例えば、本発明の組成物は、ＢＰＮ’−ｖ３６（配列番号６）若しくはＢＰＮ’−ｖ３（配列番号４）などのＢＰＮ’プロテアーゼ変異体、又は、本明細書若しくはパートＩ実施例２〜２３に記載の任意のプロテアーゼ変異体であってもよい。このような組成物は布地ケア製品及びホームケア製品であってもよく、又は、布地ケア組成物及びホームケア組成物であってもよい。別の方法としては、このような組成物は布地ケア製品及びホームケア製品であってもよく、又は、布地ケア組成物及びホームケア組成物であってもよい。
このような組成物は、（ＢＰＮ’プロテアーゼ変異体に加えて）少なくとも１つのパートＩＩ実施例に記載のシリーズＩ ＧＧ３６プロテアーゼ変異体などの少なくとも１つのＧＧ３６プロテアーゼ変異体を更に含んでもよい。このような組成物は、本明細書の他箇所に記載のような様々な用途に有用である。
第十七態様では、本発明は、本発明の第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八又は第九態様の変異体（又は第三態様にあるようなポリペプチド）を含む組成物を提供する。本発明の第十七態様による組成物は、本明細書の他箇所により詳細に記載されているように添加剤成分又は担体を含んでもよい。本発明の第十七態様による組成物は、少なくとも１つのビルダ−及び／又は少なくとも１つの界面活性剤を含んでもよい。本発明の第十七態様による組成物は、リン酸塩を含んでもよく、又は、リン酸塩を含まなくてもよい。
本発明の第十七態様による組成物は、クリーニング組成物又は洗剤組成物であり得る。本発明の第十七態様による組成物は、布地ケア製品又はホームケア製品であり得る。本発明の第十七態様による組成物は、布地ケア製品又はホームケア製品でなくてもよい。本発明の第十七態様による組成物は、布地ケア製品又はホームケア製品である、クリーニング組成物又は洗剤組成物であり得る。本発明の第十七態様による組成物は、布地ケア製品又はホームケア製品ではない、クリーニング組成物又は洗剤組成物であり得る。
本発明の第十七態様による組成物は、１、２、３、４、５又はそれ以上の追加の酵素を更に含んでもよい。このような追加の酵素は、ヘミセルラーゼ、セルラーゼ、アミラーゼ、ペルオキシダーゼ、プロテアーゼ、キシラナーゼ、リパーゼ、ホスホリパーゼ、エステラーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、マンナナーゼ、ケラチナーゼ、レダクターゼ、オキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、リグニナーゼ、プルラナーゼ、タンナーゼ、ペントサナーゼ、マラナーゼ、β−グルカナーゼ、アラビノシターゼ、ヒアルロニダーゼ、コンドロイチナーゼ及びラッカーゼからなる群から選択される追加の酵素からなる群から選択され得る。
本発明の第十七態様による追加の酵素は、例えば、シリーズＩ ＧＧ３６プロテアーゼ変異体などの、タンパク質分解活性を有するＧＧ３６プロテアーゼ変異体であってもよく、このシリーズＩ ＧＧ３６プロテアーゼ変異体は、配列番号７５５のスブチリシンバチルス・レンタス（Bacillus lentus）ＧＧ３６に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列と、Ａ１Ｒ，Ｑ２Ｓ，Ｖ４Ｒ，Ｖ４Ｓ，Ｓ９Ａ，Ｒ１０Ｓ，Ｐ１４Ｋ，Ａ１６Ｓ，Ｈ１７Ｒ，Ｎ１８Ｒ，Ｇ２０Ｒ，Ｔ２２Ａ，Ｔ２２Ｒ，Ｓ２４Ｒ，Ｓ２４Ｗ，Ｇ２５Ｒ，Ｇ２５Ｖ，Ｖ２６Ｆ，Ｌ４２Ｉ，Ｎ４３Ｒ，Ｎ４３Ａ，Ｇ４６Ｒ，Ｐ５２Ｆ，Ｐ５２Ｅ，Ｐ５２Ｎ，Ｔ５７Ｒ，Ｑ５９Ａ，Ｎ６２Ｅ，Ｎ６２Ｑ，Ｖ６８Ａ，Ｖ６８Ｃ，Ｔ７１Ｇ，Ｉ７２Ｃ，Ａ７４Ｃ，Ｌ７５Ａ，Ｌ７５Ｆ，Ｌ７５Ｒ，Ｎ７６Ｄ，Ｓ７８Ｒ，Ｌ８２Ｒ，Ｐ８６Ｗ，Ｅ８９Ｐ，Ｅ８９Ｔ，Ｅ８９Ｇ，Ｅ８９Ｈ，Ｅ８９Ｉ，Ｅ８９Ｖ，Ｅ８９Ｗ，Ｙ９１Ｎ，Ｋ９４Ｎ，Ｇ１００Ｓ，Ｓ１０１Ａ，Ｓ１０１Ｎ，Ｓ１０１Ｇ，Ｓ１０１Ｄ，Ｓ１０３Ｇ，Ｓ１０３Ｎ，Ｖ１０４Ｌ，Ｖ１０４Ｉ，Ｓ１０６Ｖ，Ｓ１０６Ｇ，Ａ１０８Ｉ，Ｌ１１１Ｖ，Ｅ１１２Ｖ，Ｇ１１５Ｋ，Ｇ１１５Ｒ，Ｎ１１７Ｆ，Ｇ１１８Ｉ，Ｖ１２１Ｆ，Ｓ１２８Ｄ，Ｓ１２８Ｆ，Ｓ１２８Ｌ，Ｓ１２８Ｎ，Ｐ１２９Ｅ，Ｓ１４４Ｒ，Ｌ１４８Ｉ，Ａ１５８Ｅ、Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１６０Ｄ，Ｓ１６６Ｄ，Ｎ１８５Ｅ，Ｎ１８５Ｉ，Ｒ１８６Ｈ，Ｓ１８８Ｅ，Ｓ１８８Ｄ，Ｄ１９７Ｆ，Ｖ２０３Ｅ，Ｙ２０９Ｓ，Ｙ２０９Ｎ，Ｙ２０９Ｆ，Ｙ２０９Ｔ，Ｙ２０９Ｅ，Ｙ２０９Ｈ，Ｙ２０９Ｇ，Ｐ２１０Ｒ，Ｓ２１２Ｉ，Ｓ２１２Ｆ，Ｙ２１４Ｆ，Ａ２１５Ｎ，Ａ２１５Ｄ，Ａ２１５Ｅ，Ｌ２１７Ｅ，Ｌ２１７Ｎ，Ｔ２２４Ａ，Ａ２３０Ｅ，Ａ２３１Ｉ，Ｑ２３６Ｆ，Ｎ２３８Ｒ，Ｎ２３８Ｋ，Ｐ２３９Ｋ，Ｐ２３９Ｇ，Ｐ２３９Ｒ，Ｐ２３９Ｓ，Ｗ２４１Ｒ，Ｓ２４２Ｒ，Ｓ２４２Ｌ，Ｎ２４３Ｒ，Ｖ２４４Ｒ，Ｎ２４８Ｉ，Ｎ２４８Ｖ，Ｈ２４９Ｒ，Ｌ２５０Ｉ，Ｎ２５２Ｒ，Ｔ２５３Ｒ，Ｌ２６２Ｄ，Ｙ２６３Ｆ，Ｓ２６５Ｆ，Ｌ２６７Ｖ，Ｌ２６７Ｎ、Ｎ２６９Ｉ，Ｎ２６９Ｒ，Ｅ２７１Ｆ，Ｅ２７１Ｉ，Ｅ２７１Ｈ，Ｅ２７１Ｐ，Ｅ２７１Ｔ，Ｅ２７１Ｖ，Ｅ２７１Ｌ，及びＡ２７２Ｆ，からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換と、を含み得、ここで、変異体の各アミノ酸位置は、配列番号２に記載のバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’プロテアーゼのアミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。追加の酵素（例えば、本明細書に記載されるようなシリーズＩ Ｇ３６プロテアーゼ変異体のようなプロテアーゼなど）を含む本発明の第十七態様による組成物は、布地ケア製品及びホームケア製品であってもよい。別の方法としては、このような組成物は、布地ケア製品及びホームケア製品でなくてもよい。
本発明の第十七態様による組成物は、配列番号７５５のスブチリシンバチルス・レンタス（Bacillus lentus）ＧＧ３６に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列と、Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｓ００９Ａ−Ｅ２７１Ｌ，Ｎ０１８Ｒ−Ｗ２４１Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｇ１１５Ｒ，Ｎ０４３Ｒ−Ｈ２４９Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｈ２４９Ｒ，Ｖ００４Ｒ−Ｈ２４９Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ００９Ａ−Ｇ０２０Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｗ２４１Ｒ，Ｓ００９Ａ−Ｓ０７８Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｇ１１５Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｓ０２４Ｒ−Ｓ２４２Ｒ，Ｔ０２２Ｒ−Ｇ１１５Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｓ２４２Ｒ，Ｓ２４２Ｒ−Ｎ２６９Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｖ２４４Ｒ，Ｓ０２４Ｒ−Ｎ２６９Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｅ２７１Ｌ，Ｓ０２４Ｒ−Ｅ２７１Ｌ，Ｖ００４Ｒ−Ｓ００９Ａ，Ｇ０２０Ｒ−Ｎ２６９Ｒ，Ａ００１Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｖ２４４Ｒ−Ｅ２７１Ｌ，Ｓ００９Ａ−Ｎ０１８Ｒ，Ｗ２４１Ｒ−Ｅ２７１Ｌ，Ｖ００４Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｓ００９Ａ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ００９Ａ−Ｔ０２２Ｒ，Ｎ０６２Ｅ−Ｐ１２９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１５９Ｅ，Ａ０１６Ｓ−Ｌ１４８Ｉ，Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ，Ａ０１６Ｓ−Ｎ０６２Ｅ，Ｌ１１１Ｖ−Ｓ１８８Ｄ，Ｔ０２２Ａ−Ｎ０６２Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｌ１４８Ｉ，Ｔ０２２Ａ−Ｐ１２９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｅ２７１Ｆ，Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ，Ａ０１６Ｓ−Ｇ１５９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｒ１８６Ｈ，Ｓ１２８Ｎ−Ｇ１５９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ，Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１２８Ｎ，Ｌ１４８Ｉ−Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１０３Ｇ−Ａ１５８Ｅ，Ｌ１１１Ｖ−Ｇ１５９Ｅ，Ａ１５８Ｅ−Ｅ２７１Ｆ，Ａ０１６Ｓ−Ｓ１８８Ｄ，Ｔ０２２Ａ−Ｌ１１１Ｖ，Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ，Ａ０１６Ｓ−Ａ１５８Ｅ，Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ，Ｓ１２８Ｎ−Ｒ１８６Ｈ，Ｇ１５９Ｅ−Ｙ２０９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ，Ｌ１１１Ｖ−Ｙ２０９Ｅ，Ｌ１４８Ｉ−Ｓ１８８Ｄ，Ｓ１０１Ａ−Ｙ２０９Ｅ，Ｔ０２２Ａ−Ｓ１８８Ｄ，Ａ０１６Ｓ−Ｔ０２２Ａ，Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ，Ａ０１６Ｓ−Ｙ２０９Ｅ，Ａ０１６Ｓ−Ｓ１２８Ｎ，Ｔ０２２Ａ−Ｅ０８９Ｐ，Ｓ１２８Ｎ−Ｙ２０９Ｅ，Ｅ０８９Ｐ−Ａ１５８Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０３Ｇ，Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ，Ａ０１６Ｓ−Ｐ１２９Ｅ，Ｅ０８９Ｐ−Ｇ１５９Ｅ，Ｌ１１１Ｖ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ１０１Ａ−Ｐ１２９Ｅ，Ｌ１４８Ｉ−Ｙ２０９Ｅ，Ｔ０２２Ａ−Ｇ１５９Ｅ，Ｐ１２９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ，Ｐ１２９Ｅ−Ｙ２０９Ｅ，Ｖ１０４Ｌ−Ｐ１２９Ｅ，Ｓ１２８Ｎ−Ｓ１８８Ｄ，Ｌ１１１Ｖ−Ａ１５８Ｅ，Ｔ０２２Ａ−Ａ１５８Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｙ２０９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ１０１Ａ−Ｒ１８６Ｈ，Ｅ０８９Ｐ−Ｐ１２９Ｅ，Ｐ１２９Ｅ−Ｅ２７１、Ｔ２２Ａ−Ｌ１１１Ｖ−Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ−Ｙ２０９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１８８Ｄ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｇ１５９Ｅ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ｅ２７１Ｆ−Ｙ２０９Ｅ，Ｔ２２Ａ−Ｙ２０９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｙ２０９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｙ２０９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ，Ｔ２２Ａ−Ｌ１１１Ｖ−Ｓ１２８Ｎ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ，Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ，Ｎ６２Ｅ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｎ６２Ｅ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｓ２４Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｔ２５３Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２３８Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ７６Ｄ，及びＳ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換と、を含むシリーズＩ ＧＧ３６プロテアーゼ変異体を含み得、ここで、変異体の各アミノ酸位置は、配列番号２に記載のバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’プロテアーゼのアミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。このような組成物は布地ケア製品及びホームケア製品であってもよく、又は、布地ケア組成物及びホームケア組成物であってもよい。別の態様では、このような組成物は、布地ケア製品及びホームケア製品又は布地ケア組成物及びホームケア組成物でなくてもよい。
本発明の第十七態様による組成物は、配列番号７５５のスブチリシンバチルス・レンタス（Bacillus lentus）ＧＧ３６に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、Ａ１Ｒ，Ｑ２Ｓ，Ｖ４Ｒ，Ｖ４Ｓ，Ｓ９Ａ，Ｒ１０Ｓ，Ｐ１４Ｋ，Ａ１６Ｓ，Ｈ１７Ｒ，Ｎ１８Ｒ，Ｇ２０Ｒ，Ｔ２２Ａ，Ｔ２２Ｒ，Ｓ２４Ｒ，Ｓ２４Ｗ，Ｇ２５Ｒ，Ｇ２５Ｖ，Ｖ２６Ｆ，Ｌ４２Ｉ，Ｎ４３Ｒ，Ｎ４３Ａ，Ｇ４６Ｒ，Ｐ５２Ｆ，Ｐ５２Ｅ，Ｐ５２Ｎ，Ｔ５７Ｒ，Ｑ５９Ａ，Ｎ６２Ｅ，Ｎ６２Ｑ，Ｖ６８Ａ，Ｖ６８Ｃ，Ｔ７１Ｇ，Ｉ７２Ｃ，Ａ７４Ｃ、Ｌ７５Ａ，Ｌ７５Ｆ，Ｌ７５Ｒ，Ｎ７６Ｄ，Ｓ７８Ｒ，Ｌ８２Ｒ，Ｐ８６Ｗ，Ｅ８９Ｐ，Ｅ８９Ｔ，Ｅ８９Ｇ，Ｅ８９Ｈ，Ｅ８９Ｉ，Ｅ８９Ｖ，Ｅ８９Ｗ，Ｙ９１Ｎ，Ｋ９４Ｎ，Ｇ１００Ｓ，Ｓ１０１Ａ，Ｓ１０１Ｎ，Ｓ１０１Ｇ，Ｓ１０１Ｄ，Ｓ１０３Ｇ，Ｓ１０３Ｎ，Ｖ１０４Ｌ，Ｖ１０４Ｉ，Ｓ１０６Ｖ，Ｓ１０６Ｇ，Ａ１０８Ｉ，Ｌ１１１Ｖ，Ｅ１１２Ｖ，Ｇ１１５Ｋ，Ｇ１１５Ｒ，Ｎ１１７Ｆ，Ｇ１１８Ｉ，Ｖ１２１Ｆ，Ｓ１２８Ｄ，Ｓ１２８Ｆ，Ｓ１２８Ｌ，Ｓ１２８Ｎ，Ｐ１２９Ｅ，Ｓ１４４Ｒ，Ｌ１４８Ｉ，Ａ１５８Ｅ、Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１６０Ｄ，Ｓ１６６Ｄ，Ｎ１８５Ｅ，Ｎ１８５Ｉ，Ｒ１８６Ｈ，Ｓ１８８Ｅ，Ｓ１８８Ｄ，Ｄ１９７Ｆ，Ｖ２０３Ｅ，Ｙ２０９Ｓ，Ｙ２０９Ｎ，Ｙ２０９Ｆ，Ｙ２０９Ｔ，Ｙ２０９Ｅ，Ｙ２０９Ｈ，Ｙ２０９Ｇ，Ｐ２１０Ｒ，Ｓ２１２Ｉ，Ｓ２１２Ｆ，Ｙ２１４Ｆ，Ａ２１５Ｎ，Ａ２１５Ｄ，Ａ２１５Ｅ，Ｌ２１７Ｅ，Ｌ２１７Ｎ，Ｔ２２４Ａ，Ａ２３０Ｅ，Ａ２３１Ｉ，Ｑ２３６Ｆ，Ｎ２３８Ｒ，Ｎ２３８Ｋ，Ｐ２３９Ｋ，Ｐ２３９Ｇ，Ｐ２３９Ｒ，Ｐ２３９Ｓ，Ｗ２４１Ｒ，Ｓ２４２Ｒ，Ｓ２４２Ｌ，Ｎ２４３Ｒ，Ｖ２４４Ｒ，Ｎ２４８Ｉ，Ｎ２４８Ｖ，Ｈ２４９Ｒ，Ｌ２５０Ｉ，Ｎ２５２Ｒ，Ｔ２５３Ｒ，Ｌ２６２Ｄ，Ｙ２６３Ｆ，Ｓ２６５Ｆ，Ｌ２６７Ｖ，Ｌ２６７Ｎ，Ｎ２６９Ｉ，Ｎ２６９Ｒ，Ｅ２７１Ｆ，Ｅ２７１Ｉ，Ｅ２７１Ｈ，Ｅ２７１Ｐ，Ｅ２７１Ｔ，Ｅ２７１Ｖ，Ｅ２７１Ｌ，及びＡ２７２Ｆからなる群から選択される３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は更には２５個のアミノ酸置換、選択的にＳ１０３Ａ，Ｇ１５９Ｄ，Ｑ２３６Ｈ，Ｑ２４５Ｒ，Ｎ２４８Ｄ，及びＮ２５２Ｋ，からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換、を含む、シリーズＩ ＧＧ３６プロテアーゼ変異体を含み得、ここで、変異体の各アミノ酸位置は、配列番号２に記載のバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’プロテアーゼのアミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。このような組成物は布地ケア製品及びホームケア製品であってもよく、又は、布地ケア組成物及びホームケア組成物であってもよい。別の態様では、このような組成物は、布地ケア製品及びホームケア製品又は布地ケア組成物及びホームケア組成物でなくてもよい。
本発明の第十七態様による組成物は、配列番号７５５のスブチリシンバチルス・レンタス（Bacillus lentus）ＧＧ３６に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の配列同一性を有するアミノ酸、並びに（ａ）Ａ１Ｒ，Ｑ２Ｓ，Ｖ４Ｒ，Ｖ４Ｓ，Ｓ９Ａ，Ｒ１０Ｓ，Ｐ１４Ｋ，Ａ１６Ｓ，Ｔ２２Ａ，Ｔ２２Ｒ，Ｓ２４Ｒ，Ｇ２５Ｖ，Ｖ２６Ｆ，Ｌ４２Ｉ，Ｐ５２Ｆ，Ｐ５２Ｅ，Ｐ５２Ｎ，Ｎ６２Ｅ，Ｎ６２Ｑ，Ｖ６８Ａ，Ｖ６８Ｃ，Ｔ７１Ｇ，Ｉ７２Ｃ，Ａ７４Ｃ、Ｌ７５Ａ，Ｌ７５Ｆ，Ｓ７８Ｒ，Ｅ８９Ｐ，Ｅ８９Ｔ，Ｅ８９Ｇ，Ｅ８９Ｈ，Ｅ８９Ｗ，Ｙ９１Ｎ，Ｋ９４Ｎ，Ｇ１００Ｓ，Ｓ１０１Ａ，Ｓ１０１Ｎ，Ｓ１０１Ｇ，Ｓ１０１Ｄ，Ｓ１０３Ｇ，Ｓ１０３Ｎ，Ｖ１０４Ｌ，Ｖ１０４Ｉ，Ａ１０８Ｉ，Ｌ１１１Ｖ，Ｅ１１２Ｖ，Ｇ１１５Ｋ，Ｎ１１７Ｆ，Ｖ１２１Ｆ，Ｓ１２８Ｄ，Ｓ１２８Ｆ，Ｓ１２８Ｌ，Ｓ１２８Ｎ，Ｐ１２９Ｅ，Ｌ１４８Ｉ，Ａ１５８Ｅ、Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１６０Ｄ，Ｓ１６６Ｄ，Ｎ１８５Ｅ，Ｒ１８６Ｈ，Ｓ１８８Ｅ，Ｓ１８８Ｄ，Ｖ２０３Ｅ，Ｙ２０９Ｓ，Ｙ２０９Ｎ，Ｙ２０９Ｆ，Ｙ２０９Ｔ，Ｙ２０９Ｅ，Ｙ２０９Ｈ，Ｙ２０９Ｇ，Ｐ２１０Ｒ，Ｓ２１２Ｉ，Ｓ２１２Ｆ，Ｙ２１４Ｆ，Ａ２１５Ｎ，Ａ２１５Ｄ，Ａ２１５Ｅ，Ｌ２１７Ｅ，Ｌ２１７Ｎ，Ｔ２２４Ａ，Ａ２３０Ｅ，Ａ２３１Ｉ，Ｑ２３６Ｆ，Ｎ２３８Ｒ，Ｎ２３８Ｋ，Ｐ２３９Ｋ，Ｐ２３９Ｇ，Ｐ２３９Ｒ，Ｎ２４８Ｖ，Ｈ２４９Ｒ，Ｌ２５０Ｉ，Ｌ２６２Ｄ，Ｙ２６３Ｆ，Ｓ２６５Ｆ，Ｌ２６７Ｖ，Ｌ２６７Ｎ、Ｎ２６９Ｉ，Ｎ２６９Ｒ，Ｅ２７１Ｆ，Ｅ２７１Ｉ，Ｅ２７１Ｈ及びＡ２７２Ｆ，からなる群から選択される２つ以上の置換、並びに／又は（ｂ）Ｎ０６２Ｅ−Ｐ１２９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１５９Ｅ，Ａ０１６Ｓ−Ｌ１４８Ｉ，Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ，Ａ０１６Ｓ−Ｎ０６２Ｅ，Ｌ１１１Ｖ−Ｓ１８８Ｄ，Ｔ０２２Ａ−Ｎ０６２Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｌ１４８Ｉ，Ｔ０２２Ａ−Ｐ１２９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｅ２７１Ｆ，Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ，Ａ０１６Ｓ−Ｇ１５９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｒ１８６Ｈ，Ｓ１２８Ｎ−Ｇ１５９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ，Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１２８Ｎ，Ｌ１４８Ｉ−Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１０３Ｇ−Ａ１５８Ｅ，Ｌ１１１Ｖ−Ｇ１５９Ｅ，Ａ１５８Ｅ−Ｅ２７１Ｆ，Ａ０１６Ｓ−Ｓ１８８Ｄ，Ｔ０２２Ａ−Ｌ１１１Ｖ，Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ，Ａ０１６Ｓ−Ａ１５８Ｅ，Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ，Ｓ１２８Ｎ−Ｒ１８６Ｈ，Ｇ１５９Ｅ−Ｙ２０９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ，Ｌ１１１Ｖ−Ｙ２０９Ｅ，Ｌ１４８Ｉ−Ｓ１８８Ｄ，Ｓ１０１Ａ−Ｙ２０９Ｅ，Ｔ０２２Ａ−Ｓ１８８Ｄ，Ａ０１６Ｓ−Ｔ０２２Ａ，Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ，Ａ０１６Ｓ−Ｙ２０９Ｅ，Ａ０１６Ｓ−Ｓ１２８Ｎ，Ｔ０２２Ａ−Ｅ０８９Ｐ，Ｓ１２８Ｎ−Ｙ２０９Ｅ，Ｅ０８９Ｐ−Ａ１５８Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０３Ｇ，Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ，Ａ０１６Ｓ−Ｐ１２９Ｅ，Ｅ０８９Ｐ−Ｇ１５９Ｅ，Ｌ１１１Ｖ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ１０１Ａ−Ｐ１２９Ｅ，Ｌ１４８Ｉ−Ｙ２０９Ｅ，Ｔ０２２Ａ−Ｇ１５９Ｅ，Ｐ１２９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ，Ｐ１２９Ｅ−Ｙ２０９Ｅ，Ｖ１０４Ｌ−Ｐ１２９Ｅ，Ｓ１２８Ｎ−Ｓ１８８Ｄ，Ｌ１１１Ｖ−Ａ１５８Ｅ，Ｔ０２２Ａ−Ａ１５８Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｙ２０９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ１０１Ａ−Ｒ１８６Ｈ，Ｅ０８９Ｐ−Ｐ１２９Ｅ，Ｐ１２９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ，Ｔ２２Ａ−Ｌ１１１Ｖ−Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ−Ｙ２０９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１８８Ｄ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｇ１５９Ｅ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ｅ２７１Ｆ−Ｙ２０９Ｅ，Ｔ２２Ａ−Ｙ２０９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｙ２０９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｙ２０９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ，Ｔ２２Ａ−Ｌ１１１Ｖ−Ｓ１２８Ｎ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ，Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ，Ｎ６２Ｅ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｎ６２Ｅ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｓ２４Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｔ２５３Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２３８Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ７６Ｄ，及びＳ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，からなる群から選択される１組以上の置換、を含むシリーズＩ ＧＧ３６プロテアーゼ変異体を含み得、ここで、変異体の各アミノ酸位置は、配列番号２に記載のバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’プロテアーゼのアミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。このような組成物は布地ケア製品及びホームケア製品であってもよく、又は、布地ケア組成物及びホームケア組成物であってもよい。別の態様では、このような組成物は、布地ケア製品及びホームケア製品又は布地ケア組成物及びホームケア組成物でなくてもよい。
本発明の第十七態様による組成物は、配列番号７５５のスブチリシンバチルス・レンタス（Bacillus lentus）ＧＧ３６に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の配列同一性を有するアミノ酸、並びに（ａ）Ｖ４Ｒ，Ｈ１７Ｒ，Ｎ１８Ｒ，Ｇ２０Ｒ，Ｔ２２Ｒ，Ｓ２４Ｒ，Ｓ２４Ｗ，Ｇ２５Ｒ，Ｎ４３Ｒ，Ｎ４３Ａ，Ｇ４６Ｒ，Ｐ５２Ｆ，Ｐ５２Ｎ，Ｔ５７Ｒ，Ｑ５９Ａ，Ｎ６２Ｑ，Ｔ７１Ｇ，Ｌ７５Ｒ，Ｎ７６Ｄ，Ｓ７８Ｒ，Ｌ８２Ｒ，Ｐ８６Ｗ，Ｅ８９Ｐ，Ｅ８９Ｗ，Ｅ８９Ｔ，Ｅ８９Ｉ，Ｅ８９Ｈ，Ｅ８９Ｖ，Ｖ１０４Ｌ，Ｓ１０６Ｖ，Ｓ１０６Ｇ，Ｇ１１５Ｒ，Ｇ１１８Ｉ，Ｖ１２１Ｆ，Ｓ１４４Ｒ，Ｎ１８５Ｉ，Ｄ１９７Ｆ，Ｙ２０９Ｎ，Ｙ２０９Ｓ，Ｌ２１７Ｅ，Ａ２３１Ｉ，Ｐ２３９Ｒ，Ｐ２３９Ｓ，Ｗ２４１Ｒ，Ｓ２４２Ｒ，Ｓ２４２Ｌ，Ｎ２４３Ｒ，Ｖ２４４Ｒ，Ｎ２４８Ｉ，Ｈ２４９Ｒ，Ｎ２５２Ｒ，Ｔ２５３Ｒ，Ｅ２７１Ｔ，Ｅ２７１Ｖ，Ｅ２７１Ｌ，Ｅ２７１Ｈ，Ｅ２７１Ｆ，Ｅ２７１Ｐ，Ａ１Ｒ，Ｓ９Ａ，Ｓ２１２Ｆ，及びＮ２６９Ｒからなる群から選択される２つ以上の置換、並びに／又は（ｂ）Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｓ００９Ａ−Ｅ２７１Ｌ，Ｎ０１８Ｒ−Ｗ２４１Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｇ１１５Ｒ，Ｎ０４３Ｒ−Ｈ２４９Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｈ２４９Ｒ，Ｖ００４Ｒ−Ｈ２４９Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ００９Ａ−Ｇ０２０Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｗ２４１Ｒ，Ｓ００９Ａ−Ｓ０７８Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｇ１１５Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｓ０２４Ｒ−Ｓ２４２Ｒ，Ｔ０２２Ｒ−Ｇ１１５Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｓ２４２Ｒ，Ｓ２４２Ｒ−Ｎ２６９Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｖ２４４Ｒ，Ｓ０２４Ｒ−Ｎ２６９Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｅ２７１Ｌ，Ｓ０２４Ｒ−Ｅ２７１Ｌ，Ｖ００４Ｒ−Ｓ００９Ａ，Ｇ０２０Ｒ−Ｎ２６９Ｒ，Ａ００１Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｖ２４４Ｒ−Ｅ２７１Ｌ，Ｓ００９Ａ−Ｎ０１８Ｒ，Ｗ２４１Ｒ−Ｅ２７１Ｌ，Ｖ００４Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｓ００９Ａ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ００９Ａ−Ｔ０２２Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｓ２４Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２５２Ｋ，及びＳ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，からなる群から選択される１組以上の置換を含むシリーズＩ ＧＧ３６プロテアーゼ変異体を含み得、ここで、変異体の各アミノ酸位置は、配列番号２に記載のバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’プロテアーゼのアミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。このような組成物は布地ケア製品及びホームケア製品であってもよく、又は、布地ケア組成物及びホームケア組成物であってもよい。別の態様では、このような組成物は、布地ケア製品及びホームケア製品又は布地ケア組成物及びホームケア組成物でなくてもよい。
本発明の第十七態様による組成物は、ヘミセルラーゼ、セルラーゼ、アミラーゼ、ペルオキシダーゼ、プロテアーゼ、キシラナーゼ、リパーゼ、ホスホリパーゼ、エステラーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、マンナナーゼ、ケラチナーゼ、レダクターゼ、オキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、リグニナーゼ、プルラナーゼ、タンナーゼ、ペントサナーゼ、マラナーゼ、β−グルカナーゼ、アラビノシターゼ、ヒアルロニダーゼ、コンドロイチナーゼ及びラッカーゼからなる群から選択される少なくとも１つの追加の酵素を含んでもよい。本発明の第十七態様による組成物は、ヘミセルラーゼ、セルラーゼ、アミラーゼ、ペルオキシダーゼ、プロテアーゼ、キシラナーゼ、リパーゼ、ホスホリパーゼ、エステラーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、マンナナーゼ、ケラチナーゼ、レダクターゼ、オキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、リグニナーゼ、プルラナーゼ、タンナーゼ、ペントサナーゼ、マラナーゼ、β−グルカナーゼ、アラビノシターゼ、ヒアルロニダーゼ、コンドロイチナーゼ及びラッカーゼからなる群から選択される２つ以上の追加の酵素を含んでもよい。
本発明の第十七態様による組成物は、リン酸塩を含んでもよく、又は、リン酸塩を含有しなくてもよい。本発明の第十七態様による組成物は、少なくとも１つのビルダ−及び／又は少なくとも１つの界面活性剤を含んでもよい。
本明細書の更に他箇所にあるように、本発明のプロテアーゼ変異体などの本発明のポリペプチドは、洗濯クリーニング洗浄用途、自動食器洗浄用途、手による食器洗浄用途、硬質表面クリーニング用途、パーソナルケア用途及び本明細書に記載の他の用途などの様々なクリーニング用途において、有用である。したがって、例えば、一態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのポリペプチド（例えば、プロテアーゼ変異体）を含むクリーニング組成物を提供する。上記のように、このようなクリーニング組成物としては、例えば、自動及び手による食器洗浄洗剤組成物、洗濯洗剤組成物（例えば、液体及び粉末洗濯洗剤組成物など）、布地クリーニング組成物、硬質表面クリーニング組成物（例えば、食卓食器ではない物品、食卓用器具ではない物品、机、机の上、家具物品、壁、床、天井などが挙げられるがこれらに限定されない）が挙げられるがこれらに限定されない。このようなクリーニング組成物は、クリーニングする必要のある物品又は表面のクリーニング方法において有用であり、例えば、少なくとも１つの賦形剤、担体及び／又は他の置換基、構成成分若しくは物質が挙げられるがこれに限定されないものを含んでもよい。
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の任意の本発明のポリペプチド（例えば、任意の本発明のプロテアーゼ変異体又はスブチリシン変異体）を含む組成物を提供し、ここで、上記組成物は、布地ケア組成物及びホームケア組成物、又は、布地ケア製品及びホームケア製品である。
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の任意の本発明のポリペプチド（例えば、任意の本発明のプロテアーゼ変異体又はスブチリシン変異体）を含む組成物を提供し、ここで、上記組成物は、布地ケア組成物及びホームケア組成物ではなく、又は、布地ケア製品及びホームケア製品ではない。本発明のプロテアーゼ変異体を含む本発明の組成物は、香料封入体；布地色調剤；冷水に可溶な増白剤；イミニウムカチオン、イミニウムポリイオン、イミニウム双極性イオン、修飾されたアミン、修飾されたアミンオキシド、Ｎ−スルホニルイミン、Ｎ−ホスホニルイミン、Ｎ−アシルイミン、チアジアゾール二酸化物、ペルフルオロイミン、環式糖ケトンから選択される物質を含み得る漂白触媒；一回目洗浄リパーゼ（first wash lipase）；細菌クリーニングセルラーゼ；Ｇｕｅｒｂｅｔ非イオン性界面活性剤；及びこれらの任意のものの組み合わせから選択される少なくとも１つの添加剤物質を更に含んでもよい。本発明の組成物は、スブチリシン（ＥＣ ３．４．２１．６２）、トリプシン様又はキモトリプシン様プロテアーゼ、メタロプロテアーゼ及びこれらの混合物から選択される少なくとも１つの追加の免疫等価ではない（non-immunoequivalent）プロテアーゼを更に含んでもよい。
枯草菌（B. subtilis）、バチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）、バチルス・プミルス（B. pumilus）及びバチルス・ギブソニ（B. gibsonii）由来のスブチリシン（ＥＣ ３．４．２１．６２）；セルロモナス（Cellulomonas）由来のトリプシンプロテアーゼ及び／又はキモトリプシンプロテアーゼ；バチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）由来のメタロプロテアーゼ；並びにこれらの混合物から選択される少なくとも１つの追加の免疫等価ではないプロテアーゼを更に含んでもよい。
本発明の組成物は、一回目洗浄リパーゼ、α−アミラーゼ、細菌クリーニングセルラーゼ及びこれらの混合物から選択される少なくとも１つの追加の酵素を更に含む。
本発明の組成物は、以下のうちの少なくとも１つを更に含んでもよい：香料マイクロカプセルを含む香料を含む封入体；塩基、酸、疎水性、直接及び高分子染料、５５０ｎｍ〜６５０ｎｍのピ−ク吸収波長を有する染料結合体及びこれらの混合物から選択される物質を含む色調剤；アニオン性洗浄性界面活性剤、非イオン性洗浄性界面活性剤、カチオン性洗浄性界面活性剤、双極性イオン性洗浄性界面活性剤及び両性洗浄性界面活性剤及びこれらの混合物から選択される物質を含む洗浄性界面活性剤；ゼオライト、リン酸塩及びこれらの混合物から選択される物質を含むビルダー；ケイ酸ナトリウム、ケイ酸カリウム及びこれらの混合物から選択される物質を含むシリケート塩；冷水に可溶な増白剤及びこれらの混合物から選択される増白剤；マレエート／アクリレートランダムコポリマー又はポリアクリレートホモポリマー及びこれらの混合物から選択される物質を含むカルボン酸塩ポリマー；テレフタレートコポリマー及びその混合物から選択される物質を含む汚れ放出ポリマー；アルキルセルロース、アルキルアルコキシアルキルセルロース、カルボキシアルキルセルロース、アルキルカルボキシアルキルセルロース及びこれらの混合物から選択される物質を含むセルロースポリマー；イミニウムカチオン、イミニウムポリイオン、イミニウム双極性イオン、修飾されたアミン、修飾されたアミンオキシド、Ｎ−スルホニルイミン、Ｎ−ホスホニルイミン、Ｎ−アシルイミン、チアジアゾール二酸化物、ペルフルオロイミン、環式糖ケトン及びこれらの任意の混合物から選択される物質を含む漂白触媒；ドデカノイルオキシベンゼンスルホネート、デカノイルオキシベンゼンスルホネート、デカノイルオキシ安息香酸又はその塩、３，５，５−トリメチルヘキサノイルオキシベンゼンスルホネート、テトラアセチルエチレンジアミン（ＴＡＥＤ）、ノナノイルオキシベンゼンスルホネート（ＮＯＢＳ）及びこれらの混合物から選択される物質を含む漂白活性化剤；過ホウ酸塩（通常一水和物又は四水和物）、過炭酸塩、過硫酸塩、過リン酸塩、ペルシリケート塩のナトリウム塩などのアルカリ金属塩が挙げられる無機過水和物塩及びその任意の混合物から選択される物質を含む過酸化水素供給源；ＤＴＰＡ（ジエチレントリアミン五酢酸）、ＨＥＤＰ（ヒドロキシエタンジホスホン酸）、ＤＴＰＭＰ（ジエチレントリアミンペンタ（メチレンホスホン酸））、エチレンジアミン二コハク酸（ＥＤＤＳ）、１，２−ジヒドロキシベンゼン−３，５−ジスルホン酸二ナトリウム塩水和物から選択される物質を含むキレート、上記キレートの誘導体；並びにこれらの任意の混合物。
本発明の組成物は、染料；少なくとも１つのカチオン性−塩基性染料及びスメクタイト粘土を含む染料−粘土複合体；並びにこれらの任意の組み合わせ、からなる群から選択される布地色調剤を含んでもよい。
本発明の組成物は、小分子染料、高分子染料及びこれらの任意の組み合わせ；少なくとも１つのカチオン性−塩基性染料及びスメクタイト粘土を含む染料−粘土複合体；並びにこれらの任意の組み合わせ、からなる群から選択される布地色調剤を少なくとも含んでもよい。
本発明のプロテアーゼを含む組成物は、単一又は複数区画単位用量で提供されてもよい。この組成物は、多区画単位用量であってもよく、ここで、プロテアーゼ変異体は、過酸化水素及び／又はキレート及び／又は追加の酵素の任意の供給源とは異なる区画にある。本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体又はポリペプチドを含む組成物は、洗浄液を含んでもよい。
本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を含む組成物は、（組成物合計重量に基づいて）以下の成分のうちの１つ以上を含んでもよい：約０．０００５重量％〜約０．１重量％、約０．００１重量％〜約０．０５重量％、又は更には約０．００２ｗｔ％重量％〜約０．０３重量％の上記プロテアーゼ変異体；並びに、以下のうちの１つ以上を含んでもよい：約０．００００３重量％〜約０．１重量％の布地色調剤；約０．００１重量％〜約５重量％の香料カプセル；約０．００１重量％〜約１重量％の冷水に可溶な増白剤；約０．００００３重量％〜約０．１重量％の漂白触媒；約０．００００３重量％〜約０．１重量％の一回目洗浄リパーゼ；約０．００００３重量％〜約０．１重量％の細菌クリーニングセルラーゼ；及び／又は約０．０５重量％〜約２０重量％のＧｕｅｒｂｅｔ非イオン性界面活性剤。
組成物は、冷水プロテアーゼを含む又は冷水プロテアーゼではないプロテアーゼを含む、顆粒又は洗濯洗剤であってもよい。
本発明の組成物は、流体又は固体などの任意の好適な形態で提供され得る。この組成物は特に液体の形態である場合に単位用量パウチの形態であってもよく、この組成物は水溶性パウチにより少なくとも部分的に又は更には完全に封入されてもよい。加えて、本組成物は、上記に詳細を説明したパラメーター及び／又は特徴の任意の組み合わせを有してもよい。
特に記載しない限り、本明細書に提供されるすべての構成成分又は組成物濃度は、その構成成分又は組成物の活性濃度を参照して作製され、不純物、例えば、残留溶媒又は副生成物といった不純物は除かれるが、不純物は市販の供給物中に存在する場合がある。酵素構成成分重量は、総活性タンパク質に基づく。すべての百分率及び比率は、特に示さない限り、重量に基づき計算される。すべての百分率及び比率は、特に示さない限り、総組成物に基づいて計算される。例示された洗剤組成物では、酵素濃度は、総組成物の重量に基づき純粋な酵素により表され、特に指定しない限り、洗剤成分は総組成物の重量に基づき表される。
本明細書に示すように、一態様では、本発明のクリーニング組成物は、例えば、１つ以上の界面活性剤、ビルダー、漂白剤、漂白活性化剤、漂白触媒、他の酵素、酵素安定化系、キレート、蛍光増白剤、汚れ除去ポリマー、転色剤、分散剤、発泡抑制剤、染料、香料、香料カプセル、着色剤、充填剤塩、ヒドロトロープ、光活性化剤、蛍光剤、布地コンディショナー、布地柔軟剤、加水分解性界面活性剤、防腐剤、酸化防止剤、収縮低減剤、しわ低減剤、殺菌剤、抗かび剤、カラー粒子、シルバーケア剤、耐変色剤及び／又は防腐剤、アルカリ供給源、可溶化剤、担体、賦形剤、加工助剤、顔料、すすぎ補助剤（例えば、液滴を形成するよりもむしろ薄いシートにおいてクリーニングされる物品の表面から排水を行うことにより液滴形成を防止するために少なくとも１つの表面活性剤を含有するすすぎ補助剤）、溶媒、及び／又はｐＨ調整剤が挙げられるがこれらに限定されない１つ以上の添加剤物質を更に含んでもよい（例えば、米国特許第６，６１０，６４２号、同第６，６０５，４５８号、同第５，７０５，４６４号、同第５，７１０，１１５号、同第５，６９８，５０４号、同第５，６９５，６７９号、同第５，６８６，０１４号及び同第５，６４６，１０１号を参照されたい。これらのすべては参照により本明細書に組み込まれる）。具体的なクリーニング組成物材料の態様は、下記に詳細に例示される。クリーニング添加剤物質が所望のクリーニング組成物中で本発明のプロテアーゼ変異体と混合可能でない場合、２つの構成成分を組み合わせることが適切になるまで、クリーニング添加剤物質とプロテアーゼ変異体を分離したまま維持する（すなわち、互いに接触させない）好適な方法が使用される。このような分離方法としては、当該技術分野において既知の好適な方法が挙げられる（例えば、ゲルキャップ、封入、タブレット、物理的分離など）。
本発明のクリーニング組成物は、例えば、洗濯用途、硬質表面クリーニング用途、手による若しくは手動食器洗浄用途、自動食器洗浄用途、眼鏡クリーニング用途、並びに、義歯、歯、毛髪及び皮膚のクリーニングなどの美容用途において、有利に採用される。低温溶液中での有効性が増大しているという独特な利点に起因して、本発明のプロテアーゼ変異体酵素は、洗濯用途、並びに、手による及び自動食器洗浄用途などの食器洗浄用途に適している。更に、本発明のプロテアーゼ変異体酵素は、固体、ゲル及び／又は液体の、洗剤組成物及び／又は配合物などの、固体、ゲル、顆粒及び／又は液体組成物において使用を見出される。
本発明のプロテアーゼ変異体はまた、クリーニング添加剤製品組成物において使用を見出される。一態様では、本発明のプロテアーゼ変異体は、低温溶液クリーニングの用途及び方法において有用である。一態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体酵素を含み、追加の漂白有効性が所望される場合の洗浄プロセスに含むことに理想的に適している、クリーニング添加剤製品組成物を提供する。このような例としては、例えば、低温溶液クリーニング用途が挙げられるが、これに限定されない。一態様では、添加剤製品組成物は、その最も単純な形態である−すなわち、１つ以上の本発明のプロテアーゼである。一態様では、添加剤製品組成物は、クリーニングプロセスへ添加するための投与形態でパッケージ化される。一態様では、添加剤製品組成物は、過酸素の供給源が採用され、増大した漂白有効性が所望されるクリーニングプロセスへ添加するための投与形態でパッケージ化される。例えば、予め測定された粉末又は液体などの、ピル、タブレット、ゲルキャップ又は他の一回用量単位が挙げられるがこれらに限定されない任意の好適な一回用量単位形態が使用され得る。したがって、一態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を含むクリーニング製品組成物を提供し、ここで、この製品は、一回用量のプロテアーゼ変異体が提供されるように好適な一回用量単位で好適な形態（例えば、液体、粉末固体、ピル、タブレット、ゲルキャップ又は他の好適な形態）において配合される。このようなクリーニング製品は、例えば、機械又は手による洗濯方法及び用途、自動食器洗浄又は手による食器洗浄方法及び用途などが挙げられるがこれらに限定されない様々なクリーニング方法及び用途において有用である。このようなクリーニング方法及び用途は、低温又は低ｐＨ条件にて行われ得る。一態様では、このような組成物の体積を増加するために、少なくとも１つの充填剤及び／又は少なくとも１つの担体物質が含まれる。好適な充填剤又は担体物質としては、例えば、硫酸塩、炭酸塩、ケイ酸塩の様々な塩、並びに、タルク、粘土及びこれらに類するものが挙げられるが、これらに限定されない。液体組成物に好適な充填剤又は担体物質としては、例えば、水、又は、ポリオール及びジオールなどの低分子量第一級及び第二級アルコールが挙げられるがこれらに限定されない。このようなアルコールの例としては、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール及びイソプロパノールが挙げられるがこれらに限定されない。一態様では、この組成物は、約５％〜約９０％のこのような充填剤又は担体物質を含有する。酸性充填剤は、クリーニング方法又は用途において得られる溶液のｐＨを低下させるために、このような組成物中に含まれ得る。別の方法としては、一態様では、このクリーニング添加物は、下記により十分に説明するように、１つ以上の添加剤成分を含む。
本クリーニング組成物及びクリーニング添加物は、有効量の本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を単独で必要とし、又は有効量の本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体と他のプロテアーゼ及び／若しくは追加の酵素の組み合わせを必要とする。必要とされる酵素濃度は、本発明の１つ以上のプロテアーゼ変異体の添加により達成される。典型的には、クリーニング組成物は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を少なくとも約０．０００１重量パーセント〜約２０重量パーセント、約０．０００１〜約１０重量パーセント、約０．０００１〜約１重量パーセント、約０．００１〜約１重量パーセント、又は約０．０１〜約０．１重量パーセント含む。一態様では、本発明の組成物（例えば、本発明のクリーニング組成物）は、組成物１グラム当たり本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を約０．０１ミリグラム（ｍｇ）〜約１０ｍｇ、約０．０１〜約５ｍｇ、約０．０１ｍｇ〜約２ｍｇ、約０．０１〜約１ｍｇ、約０．５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約０．５〜約５ｍｇ、約０．５〜約４ｍｇ、約０．５〜約４ｍｇ、約０．５〜約３ｍｇ、約０．５〜約２ｍｇ、約０．５〜約１ｍｇ、約０．１〜約１０ｍｇ、約０．１〜約５ｍｇ、約０．１〜約４ｍｇ、約０．１〜約３ｍｇ、約０．１〜約２ｍｇ、約０．１〜約２ｍｇ、約０．１〜約１ｍｇ、約０．１〜約０．５ｍｇ含む。
本発明は、クリーニング組成物が洗浄水に添加される場合に得られる洗浄液中のプロテアーゼ濃度が例えば、０．１ｐｐｍ〜１ｐｐｍ、０．１〜５ｐｐｍ、１〜５ｐｐｍ、１ｐｐｍ〜１０ｐｐｍ、５ｐｐｍ〜１０ｐｐｍ、５ｐｐｍ〜７ｐｐｍといった０．０１ｐｐｍ〜１０ｐｐｍであるように、一定量の本発明のプロテアーゼ変異体を含むクリーニング組成物を含む（上記組成物は選択的に１つ以上の添加剤成分を含む）。
本発明のクリーニング組成物は、典型的には、水性クリーニング操作での使用中、洗浄水が約５．０〜約１１．５、又は更には約７．５〜約１０．５のｐＨを有するように配合される。液体製品組成物又は配合物は、典型的には、約３．０〜約９．０、又は約３．０〜約５．０の正味ｐＨを有するように配合される。顆粒洗濯製品組成物は、典型的には、約９〜１１のｐＨを有するように配合される。手による食器洗浄及び自動食器洗浄洗剤組成物は、典型的には、例えば、方法及び具体的な用途に依存して約８〜約１０、約９〜約１１．５、及び約９．５〜約１１．５のｐＨ範囲が挙げられるがこれらに限定されない約８〜約１１．５のｐＨを有するように、配合される。推奨される使用レベルにｐＨを制御するための技術としては、緩衝剤、アルカリ、酸などの使用が挙げられ、これらは当業者には周知である。
好適な低ｐＨクリーニング組成物は、典型的には約３〜約５の正味ｐＨを有し、典型的にはこのようなｐＨ環境において加水分解される界面活性剤を有さない。このような界面活性剤としては、少なくとも１つのエチレンオキシド部分又は更には約１〜約１６モルのエチレンオキシドを含むアルキル硫酸ナトリウムが挙げられる。このようなクリーニング組成物は、典型的には、約３〜約５の正味ｐＨを有するこのようなクリーニング組成物を提供するために、水酸化ナトリウム、モノエタノールアミン又は塩化水素酸などのｐＨ緩衝剤を十分な量含む。このような組成物は、典型的には、少なくとも１つの酸安定性酵素を含む。一態様ではこの組成物は液体であり、他の態様ではこれらは固体である。このような液体組成物のｐＨは、典型的には、正味ｐＨとして測定される。このような固体組成物のｐＨは、上記組成物の１０％固形分溶液として測定され、ここで、溶媒は蒸留水である。これらの態様では、すべてのｐＨ測定は、特に示されない限り、２０℃にて行われる。
一態様では、本発明のプロテアーゼ変異体が顆粒組成物又は液体で採用される場合、プロテアーゼ変異体は、保存中に顆粒組成物の他の構成成分からプロテアーゼ変異体を保護するために、封入された粒子の形態であることが望ましい。加えて、封入はまた、クリーニングプロセス中のプロテアーゼ変異体の有効性を制御する方法でもある。一態様では、封入は、プロテアーゼ変異体及び／又は追加の酵素の性能を増強する。この点で、本発明のプロテアーゼ変異体は、当該技術分野において既知の任意の好適な封入材で封入される。一態様では、封入材は、典型的には、本発明のプロテアーゼ変異体のために少なくとも一部の触媒を封入する。典型的には、封入材は、水溶性及び／又は水分散性である。一態様では、封入材は、０℃以上のガラス転移温度（Ｔｇ）を有する。ガラス転移温度は、国際公開第９７／１１１５１号により詳細に説明されている。封入材は、典型的には、炭水化物、天然若しくは合成ゴム、キチン、キトサン、セルロース及びセルロース誘導体、ケイ酸塩、リン酸塩、ホウ酸塩、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、パラフィンワックス並びにこれらの組み合わせからなるものから選択される。封入材が炭水化物である場合、これは、典型的には、単糖、オリゴ糖、多糖及びこれらの組み合わせから選択される。一部の典型的態様では、封入材はデンプンである（例えば、欧州特許第０９２２４９９号、米国特許第４，９７７，２５２号、同第５，３５４，５５９号及び同第５，９３５，８２６号を参照されたい）。一態様では、封入材は、熱可塑性樹脂、アクリロニトリル、メタクリロニトリル、ポリアクリロニトリル、ポリメタクリロニトリル及びこれらの混合物などのプラスチックから製造される微小球；ＥＸＰＡＮＣＥＬ（登録商標）（Ｓｔｏｃｋｖｉｋｓｖｅｒｋｅｎ，Ｓｗｅｄｅｎ）、並びに、ＰＭ ６５４５、ＰＭ ６５５０、ＰＭ ７２２０、ＰＭ ７２２８、ＥＸＴＥＮＤＯＳＰＨＥＲＥＳ（登録商標）、ＬＵＸＳＩＬ（登録商標）、Ｑ−ＣＥＬ（登録商標）及びＳＰＨＥＲＩＣＥＬ（登録商標）（ＰＱ Ｃｏｒｐ．（Ｖａｌｌｅｙ Ｆｏｒｇｅ，ＰＡ））により供給されるものが挙げられるがこれらに限定されない使用が見出される市販の微小球である。
本明細書に記載のように、本発明のプロテアーゼ変異体は、例えば、クリーニング、洗濯、手による食器洗浄及び自動食器洗浄洗剤組成物が挙げられるがこれらに限定されないクリーニング方法及び用途において特定の使用が見出される。これらの用途は、様々な環境圧力下に酵素を置く。本発明のプロテアーゼ変異体は、様々な条件下でのこれらのタンパク質分解活性及び安定性に起因して、このようなクリーニング用途において、現在使用されている多くの酵素を上回る利点をもたらす。
様々な洗剤配合、洗浄水体積、洗浄水温度及び洗浄時間の長さなどの様々な洗浄条件が存在し、洗浄に関与するプロテアーゼはこれらの条件に曝露される。加えて、異なる地域で使用される洗剤配合は、洗浄水中に存在するこれらの関連構成成分の異なる濃度を有する。例えば、欧州の洗剤は典型的には洗浄水中に約４５００〜５０００百万分率（ｐｐｍ）の洗剤構成成分を有し、一方、日本の洗剤は典型的には洗浄水中に約６６７ｐｐｍの洗剤構成成分を有する。北米では、特に米合衆国では、洗剤は典型的には洗浄水中に存在する約９７５ｐｐｍの洗剤構成成分を有する。
低濃度洗剤系は、洗浄水中に約８００ｐｐｍ未満の洗剤構成成分が存在するように洗剤を含む。洗浄水中に約６６７ｐｐｍの洗剤構成成分が存在することから、日本の洗剤は典型的には低濃度洗剤系と見なされる。
中濃度洗剤は、洗浄水中に約８００ｐｐｍ〜約２０００ｐｐｍの洗剤構成成分が存在するように洗剤を含む。洗浄水中に約９７５ｐｐｍの洗剤構成成分が存在することから、北米の洗剤は一般に中濃度洗剤系と見なされる。ブラジルは、典型的には、洗浄水中に約１５００ｐｐｍの洗剤構成成分が存在する。
高濃度洗剤系は、洗浄水中に約２０００ｐｐｍを超える洗剤構成成分が存在するように洗剤を含む。洗浄水中に約４５００〜５０００ｐｐｍの洗剤構成成分が存在することから、欧州の洗剤は一般に高度濃度洗剤系と考えられる。
南米の洗剤は一般に高発泡リン酸ビルダー洗剤であり、南米で使用される洗剤の範囲は、洗浄水中の洗剤構成成分が１５００ｐｐｍ〜６０００ｐｐｍの範囲であることから、中濃度度及び高濃度洗剤の両方に当てはまり得る。上記のように、ブラジルは、典型的には、洗浄水中に約１５００ｐｐｍの洗剤構成成分が存在する。しかしながら、他の南米諸国に限定するものではないが、他の地域の高発泡リン酸ビルダー洗剤は、洗浄水中に最大約６０００ｐｐｍの洗剤構成成分が存在する高濃度洗剤系を有し得る。
以上の見地から、世界中の典型的な洗浄溶液中の洗剤組成物の濃度は、例えば、日本における約６６７ｐｐｍのような約８００ｐｐｍ未満の洗剤組成物（「低濃度洗剤地域」）から、例えば、米国における約９７５ｐｐｍ及びブラジルにおける約１５００ｐｐｍのような約８００ｐｐｍ〜約２０００ｐｐｍ（「中濃度洗剤地域」）に、例えば、欧州における約４５００ｐｐｍ〜約５０００ｐｐｍ及び高発泡リン酸ビルダー地域における約６０００ｐｐｍのような約２０００ｐｐｍ超まで（「高濃度洗剤地域」）、様々であることが明らかである。
典型的な洗浄溶液の濃度は、経験的に測定される。例えば、米国では、典型的な洗濯機は、約６４．４Ｌの洗浄溶液の容量を持つ。したがって、洗浄溶液中に約９７５ｐｐｍの濃度を得るためには、約６２．７９ｇの洗剤組成物が６４．４Ｌの洗浄溶液に添加されなければならない。この量は、洗剤と共に提供される計量カップを用いて消費者により洗浄水に入れるべく計量される典型的な量である。
更なる例として、異なる地域は、異なる洗浄温度を使用する。日本における洗浄水の温度は、典型的には、欧州において使用される温度よりも低い。例えば、北米及び日本における洗浄水の温度は典型的には約１０〜約３０℃（例えば２０℃）であり、一方、欧州における洗浄水の温度は典型的には約３０〜約６０℃（例えば、約４０℃）である。しかしながら、エネルギー節約に対する関心から、多くの消費者は、冷水洗浄の使用に切り換えている。加えて、一部の更なる領域では、冷水は典型的には洗濯並びに食器洗浄用途に使用される。一態様では、本発明の「冷水洗浄」は、約４℃〜約１０℃、約１０℃〜約４０℃、又は約２０℃〜約３０℃、約１５℃〜約２５℃、約１０℃〜約２０℃、約１４℃〜約１８℃、並びに、約１５℃〜約３５℃の範囲内のすべての他の組み合わせ及び１０℃〜４０℃内の全範囲及び約１６℃の温度で洗浄を行う。
更なる例として、異なる地域条件は、典型的には、異なる水硬度を有する。水硬度は通常、Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋を組み合わせてガロン当たりのグレインで説明される。硬度は、水中のカルシウム（Ｃａ２＋）とマグネシウム（Ｍｇ２＋）の量の尺度である。米国のほとんどの水は硬質であるが、硬度の程度は様々である。中硬水（６０〜１２０ｐｐｍ）〜硬水（１２１〜１８１ｐｐｍ）は、６０〜１８１百万分率（百万分率をＵＳガロン当たりのグレインに換算するには、ｐｐｍ数を１７．１で除算するとガロン当たりのグレインの値になる）の硬度のミネラルを有する。
Figure 2016028571
欧州の水硬度は、典型的には、Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋を組み合わせて、ガロン当たり約１０．５（例えば、約１０．５〜約２０．０）グレインを超える（例えば、Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋を組み合わせてガロン当たり約１５グレイン）。北米の水硬度は、典型的には、日本の水硬度を超えるが、欧州の水硬度未満である。例えば、北米の水硬度は、約３〜約１０グレイン、約３〜約８グレイン、又は約６グレインであり得る。日本の水硬度は、典型的には、北米の水硬度よりも低く、通常約４未満であり、例えば、Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋を組み合わせてガロン当たり３グレインである。
したがって、一態様では、本発明は、少なくとも１組の洗浄条件（例えば、洗浄温度、水硬度及び／又は洗剤濃度）において驚くべき洗浄性能示すプロテアーゼ変異体を提供する。一態様では、本発明のプロテアーゼ変異体は、他のスブチリシンプロテアーゼに対して洗浄性能で匹敵する。一態様では、本発明のプロテアーゼ変異体は、現在市販されているスブチリシンプロテアーゼと比較したときに向上した洗浄性能を呈する。したがって、本発明の一態様では、本明細書に提供されるプロテアーゼ変異体は、様々な条件下で、向上した酸化安定性、向上した熱安定性、向上したクリーニング能力、及び／又は向上したキレート化剤安定性を呈する。加えて、本発明のプロテアーゼ変異体は、先と同様に単独で又はビルダー及び安定剤と組み合わせてのいずれかで洗剤を含まないクリーニング組成物における使用を見出される。
一態様では、本発明は、組成物の約０．００００１重量％〜約１０重量％の濃度で存在する本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を含み、残部（例えば、組成物の約９９．９９９重量％〜約９０．０重量％）が１つ以上のクリーニング添加剤物質を含む、クリーニング組成物を提供する。別の態様では、本発明は、組成物の約０．０００１重量％〜約１０重量％、約０．００１重量％〜約５重量％、約０．００１重量％〜２重量％、又は約０．００５重量％〜約０．５重量％の濃度で存在する本発明の少なくとも１つのプロテアーゼを含み、クリーニング組成物の残部（例えば、約９９．９９９９重量％〜約９０．０重量％、約９９．９９９重量％〜約９８重量％、約９９．９９５重量％〜約９９．５重量％）が１つ以上のクリーニング添加剤物質を含む、クリーニング組成物を提供する。
一態様では、本発明のクリーニング組成物は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体に加えて１つ以上の追加の酵素を含み、この追加の酵素は、クリーニング性能及び／又は布地ケア及び／又は手若しくは手動での食器洗浄及び／又は自動食器洗浄の利益をもたらす。好適な酵素の例としては、例えば、ヘミセルラーゼ、セルラーゼ、ぺルオキシダーゼ、プロテアーゼ、キシラナーゼ、リパーゼ、ホスホリパーゼ、エステラーゼ、ペルヒドロラーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、マンナナーゼ、ケラチナーゼ、レダクターゼ、オキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、リグニナーゼ、プルラナーゼ、タンナーゼ、ペントサナーゼ、マラナーゼ、β−グルカナーゼ、アラビノシターゼ、ヒアルロニダーゼ、コンドロイチナーゼ、ラッカーゼ及び／又はアミラーゼ、中性メタロプロテアーゼ酵素（「ｎｐｒＥ」と略される）、あるいはこれらの任意の混合物が挙げられるが、これらに限定されない。一態様では、クリーニング組成物は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体に加えて、例えば、少なくとも１つの追加のプロテアーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、セルロース及び／又はアミラーゼなどの従来の適用可能な酵素を含む追加の酵素の組み合わせ（すなわち、「カクテル」）を含む。
本明細書に提供されるプロテアーゼ変異体に加えて、任意の他の好適なプロテアーゼは、本発明の組成物に使用を見出され得、含まれ得る。一態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体と少なくとも１つの追加のプロテアーゼとを含む組成物（例えば、クリーニング組成物）を提供する。好適なプロテアーゼとしては、動物、植物又は微生物由来のものが挙げられる。一態様では、微生物プロテアーゼが含まれてもよい。プロテアーゼの化学的又は遺伝学的に改変された変異体が含まれてもよい。一態様では、少なくとも１つの追加のプロテアーゼは、セリンプロテアーゼ、好ましくは好アルカリ菌プロテアーゼ又はトリプシン様プロテアーゼである。アルカリプロテアーゼの例としては、スブチリシン、特にバチルス由来のもの（例えば、スブチリシン、バチルス・レンタス（B. lentus）スブチリシン（すなわち、ＧＧ３６）、バチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシン（すなわち、ＢＰＮ’）、スブチリシンＣａｒｌｓｂｅｒｇ、スブチリシン３０９、スブチリシン１４７、ＰＢ９２及びスブチリシン１６８）が挙げられる。追加の例としては、米国再発行特許第３４，６０６号、米国特許第５，９５５，３４０号、同第５，７００，６７６号、同第６，３１２，９３６号及び同第６，４８２，６２８号（これらはすべて参照により本明細書に組み込まれる）に記載の変異体プロテアーゼ（すなわち、プロテアーゼ変異体）が挙げられる。追加のプロテアーゼとしては、（例えば、ブタ又はウシ由来の）トリプシン及び国際公開第８９／０６２７０号に記載のフザリウムプロテアーゼが挙げられるがこれらに限定されない。本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を含む本発明の組成物はまた、少なくとも１つの市販のプロテアーゼ酵素を含んでもよい。本発明の組成物における使用を見出される市販のプロテアーゼ酵素としては、例えば、ＭＡＸＡＴＡＳＥ（登録商標）、ＭＡＸＡＣＡＬ（商標）、ＭＡＸＡＰＥＭ（商標）、ＯＰＴＩＣＬＥＡＮ（登録商標）、ＯＰＴＩＭＡＳＥ（登録商標）、ＰＲＯＰＥＲＡＳＥ（登録商標）、ＰＵＲＡＦＥＣＴ（登録商標）、ＰＵＲＡＦＥＣＴ（登録商標）ＯＸＰ、ＰＵＲＡＭＡＸ（商標）、ＥＸＣＥＬＬＡＳＥ（商標）及びＰＵＲＡＦＡＳＴ（商標）（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ）；ＡＬＣＡＬＡＳＥ（登録商標）、ＳＡＶＩＮＡＳＥ（登録商標）、ＰＲＩＭＡＳＥ（登録商標）、ＤＵＲＡＺＹＭ（商標）、ＰＯＬＡＲＺＹＭＥ（登録商標）、ＯＶＯＺＹＭＥ（登録商標）、ＫＡＮＮＡＳＥ（登録商標）、ＬＩＱＵＡＮＡＳＥ（登録商標）、ＮＥＵＴＲＡＳＥ（登録商標）、ＲＥＬＡＳＥ（登録商標）及びＥＳＰＥＲＡＳＥ（登録商標）（ＮｏｖｏＺｙｍｅｓ）；Ａ２３０Ｖ+Ｓ２５６Ｇ+Ｓ２５９Ｎを有するＫＡＰバチルス・アルカロフィラス（Bacillus alkalophilus）スブチリシン（花王）；並びにＢＬＡＰ（商標）バチルス・レンタス（B. lentus）プロテアーゼ、ＢＬＡＰ Ｘ及びＢＬＡＰ Ｓ（Ｈｅｎｋｅｌ Ｋｏｍｍａｎｄｉｔｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ａｕｆ Ａｋｔｉｅｎ（Ｄｕｅｓｓｅｌｄｏｒｆ，Ｇｅｒｍａｎｙ））が挙げられるがこれらに限定されない。本発明の組成物に含まれ得る追加のプロテアーゼとしては、国際公開第９５／２３２２１号、同第９２／２１７６０号、米国特許出願公開第２００８／００９０７４７号、並びに、米国特許第５，８０１，０３９号、同第５，３４０，７３５号、同第５，５００，３６４号、同第５，８５５，６２５号、米国再発行特許第ＲＥ ３４，６０６号、米国特許第５，９５５，３４０号、同第５，７００，６７６号、同第６，３１２，９３６号及び同第６，４８２，６２８号、並びに様々な他の特許に記載のものが挙げられる。メタロプロテアーゼは、本発明の組成物中に含まれ得る。このようなメタロプロテアーゼとしては、例えば、国際公開第０７／０４４９９３号に記載の中性メタロプロテアーゼ酵素（ｎｐｒＥ）が挙げられるがこれに限定されない。
一態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体と少なくとも１つのリパーゼとを含む組成物（例えば、クリーニング組成物）を提供する。好適なリパーゼとしては、例えば、細菌又は真菌由来のものが挙げられるがこれらに限定されない。リパーゼの化学的又は遺伝学的に改変された変異体が、組成物中に含まれてもよい。有用なリパーゼの例としては、フミコラ・ラヌギノサ（Humicola lanuginosa）リパーゼ（例えば、欧州特許第２５８ ０６８号及び同第３０５ ２１６号を参照されたい）、リゾムコール・ミエヘイ（RhiZomucor miehei）リパーゼ（例えば、欧州特許第２３８ ０２３号を参照されたい）、カンジダ・アンタルクチカ（C. antarctica）リパーゼなどのカンジダリパーゼ（例えば、カンジダ・アンタルクチカ（C. antarctica）リパーゼＡ又はＢ、例えば、欧州特許第２１４ ７６１号を参照されたい）、シュードモナス・アルカリゲネス（P. alcaligenes）リパーゼ及びシュードモナス・シュードアルカリゲネス（P. pseudoalcaligenes）リパーゼ（例えば、欧州特許第２１８ ２７２号を参照されたい）、シュードモナス・セパシア（P. cepacia）リパーゼ（例えば、欧州特許第３３１ ３７６号を参照されたい）、シュードモナス・スツッツェリ（P. stutZeri）リパーゼ（例えば、英国特許第１，３７２，０３４号を参照されたい）、シュードモナス・フルオレセンス（P.fluorescens）リパーゼなどのシュードモナスリパーゼ、バチルスリパーゼ（例えば、枯草菌（B. subtilis）リパーゼ（Ｄａｒｔｏｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １１３１：２５３〜２６０（１９９３））、バチルス・ステアロサーモフィラス（B. stearothermophilus）リパーゼ（例えば、日本特許第６４／７４４９９２号を参照されたい）、並びにＢ．ｐｕｍｉｌｕｓリパーゼ（例えば、国際公開第９１／１６４２２号を参照されたい））が挙げられる。
更に、例えば、ペニシリウム・カメンベルティ（Penicillium camembertii）リパーゼ（Ｙａｍａｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ １０３：６１〜６７（１９９１））、ゲオトリクム・カンジドゥム（Geotricum candidum）リパーゼ（Ｓｃｈｉｍａｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０６：３８３〜３８８（１９８９））、並びに、リゾープス・デレマ（R. delemar）リパーゼ（Ｈａｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ １０９：１１７〜１１３（１９９１））、リゾープス・ニベウス（Ｒ．ｎｉｖｅｕｓ）リパーゼ（Ｋｕｇｉｍｉｙａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５６：７１６〜７１９（１９９２））及びリゾープス・オリザエ（R. oryzae）リパーゼなどの様々なリゾープスリパーゼが挙げられるがこれらに限定されない数多くのクローン化されたリパーゼが本発明の組成物（例えば、クリーニング組成物）において使用を見出される。
例えば、シュードモナス・メンドシナ（Pseudomonas mendocina）由来のクチナーゼ（国際公開第８８／０９３６７号を参照されたい）及びフザリウム・ソラニ・ピシ（Fusarium solani pisi）由来のクチナーゼ（国際公開第９０／０９４４６号を参照されたい）が挙げられるがこれらに限定さないクチナーゼなどの他のタイプの脂肪分解酵素も本発明の一態様において使用を見出される。
追加の好適なリパーゼとしては、Ｍ１ ＬＩＰＡＳＥ（商標）、ＬＵＭＡ ＦＡＳＴ（商標）及びＬＩＰＯＭＡＸ（商標）（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ）；ＬＩＰＯＬＡＳＥ（登録商標）及びＬＩＰＯＬＡＳＥ（登録商標）ＵＬＴＲＡ（ＮｏｖｏＺｙｍｅｓ）；並びにリパーゼＰ（商標）「アマノ」（天野製薬株式会社（日本））などの市販のリパーゼが挙げられる。
一態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体と、組成物の約０．００００１重量％〜約１０重量％の追加のリパーゼの濃度で存在する少なくとも１つのリパーゼと、組成物の重量残部の１つ以上のクリーニング添加剤物質と、を含む、組成物（例えば、クリーニング組成物）を提供する。一態様では、本発明のクリーニング組成物は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体に加えて、組成物の約０．０００１重量％〜約１０重量％、約０．００１重量％〜約５重量％、約０．００１重量％〜約２重量％、又は約０．００５重量％〜約０．５重量％のリパーゼ濃度で少なくとも１つのリパーゼを含む。
本発明の少なくとも１つの変異体と少なくとも１つのアミラーゼとを含む組成物（例えば、クリーニング組成物）も含まれる。アルカリ溶液中での使用に好適な任意のアミラーゼ（例えば、α及び／又はβ）は、このような組成物中に含有させるのに有用であり得る。好適なアミラーゼとしては、例えば、細菌又は真菌由来のものが挙げられるがこれらに限定されない。アミラーゼの化学的又は遺伝学的に改変された変異体が含まれてもよい。本発明の組成物において使用が見出されるアミラーゼとしては、例えば、バチルス・リケニホルミス（B. licheniformis）から得られるα−アミラーゼが挙げられるがこれに限定されない（例えば、英国特許第１，２９６，８３９号を参照されたい）。本発明の組成物において使用が見出される市販のアミラーゼとしては、例えば、ＤＵＲＡＭＹＬ（登録商標）、ＴＥＲＭＡＭＹＬ（登録商標）、ＦＵＮＧＡＭＹＬ（登録商標）、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ（登録商標）、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ ＰＬＵＳ（登録商標）、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ ＵＬＴＲＡ（登録商標）及びＢＡＮ（商標）（ＮｏｖｏＺｙｍｅｓ）、並びに、ＰＯＷＥＲＡＳＥ（商標）、ＲＡＰＩＤＡＳＥ（登録商標）及びＭＡＸＡＭＹＬ（登録商標）Ｐ（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ）が挙げられるがこれらに限定されない。
一態様では、本発明は、少なくとも１つのプロテアーゼ変異体又は少なくとも１つのアミラーゼを含むクリーニング組成物を提供し、ここで、アミラーゼは、組成物の約０．００００１重量％〜約１０重量％の追加のアミラーゼの濃度で存在し、組成物の重量残部は１つ以上のクリーニング添加剤物質である。別の態様では、本発明は、少なくとも１つのプロテアーゼ変異体と、組成物の約０．０００１重量％〜約１０重量％、約０．００１重量％〜約５重量％、約０．００１重量％〜約２重量％、約０．００５重量％〜約０．５重量％のアミラーゼ濃度で存在する少なくとも１つのアミラーゼと、を含むクリーニング組成物を提供する。
任意の好適なセルラーゼが、本発明のクリーニング組成物において使用を見出され得る。一態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体と１つ又は少なくとも１つのセルラーゼとを含むクリーニング組成物を提供する。好適なセルラーゼとしては、例えば、細菌又は真菌由来のものが挙げられるがこれらに限定されない。セルラーゼの化学的又は遺伝学的に改変された変異体は、本発明の組成物中に含まれ得る。好適なセルラーゼとしては、例えば、フミコラ・インソレンス（Humicola insolens）セルラーゼ（例えば、米国特許第４，４３５，３０７号を参照されたい）及び色ケア効果を有するセルラーゼ（例えば、欧州特許第０ ４９５ ２５７号を参照されたい）が挙げられるがこれらに限定されない。追加の好適なセルラーぜが当該技術分野において既知である。本明細書の組成物において使用を見出され、含まれ得る市販のセルラーゼとしては、例えば、ＣＥＬＬＵＺＹＭＥ（登録商標）、ＣＡＲＥＺＹＭＥ（登録商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）及びＫＡＣ−５００（Ｂ）（商標）（花王株式会社）、Ｐｕｒａｄａｘ ７０００Ｌ、Ｐｕｒａｄａｘ ＨＡ ４０００Ｇ（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ）が挙げられるがこれらに限定されない。一態様では、セルラーゼは、成熟野生型又は変異型セルラーゼの、部分又は断片として組み込まれ、Ｎ末端の部分は除去される（例えば、米国特許第５，８７４，２７６号を参照されたい）。一態様では、本発明のクリーニング組成物は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体と、組成物の約０．００００１重量％〜約１０重量％の追加のセルラーゼ濃度で存在する少なくとも１つのセルラーゼと、組成物の重量残部の１つ以上のクリーニング添加剤物質と、を含む。別の態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体と、組成物の約０．０００１重量％〜約１０重量％、約０．００１重量％〜約５重量％、約０．００１重量％〜約２重量％、約０．００５重量％〜約０．５重量％のセルラーゼの濃度で存在する少なくとも１つのアミラーゼと、を含むクリーニング組成物を提供する。
洗剤組成物での使用に好適なマンナナーゼもまた使用を見出され、したがって、本発明のクリーニング組成物中に含まれ得る。一態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体と少なくとも１つのマンナナーゼとを含むクリーニング組成物を提供する。好適なマンナナーゼとしては、例えば、細菌又は真菌由来のものが挙げられるがこれらに限定されない。マンナナーゼの化学的又は遺伝学的に改変された変異体は、本発明の組成物中に含まれ得る。有用であり、本発明の組成物中に含まれ得る様々なマンナナーゼが既知である（例えば、米国特許第６，５６６，１１４号、同第６，６０２，８４２号及び同第６，４４０，９９１号（これらは全て参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。一態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体と、組成物の約０．００００１重量％〜約１０重量％の追加のマンナーゼ濃度の少なくとも１つのマンナナーゼと、組成物の重量残部の１つ以上のクリーニング添加剤物質と、を含むクリーニング組成物を提供する。一部のこのようなクリーニング組成物では、各マンナナーゼは、組成物の約０．０００１重量％〜約１０重量％、約０．００１重量％〜約５重量％、約０．００１重量％〜約２重量％、又は約０．００５重量％〜約０．５重量％のマンナナーゼの濃度で存在する。
ペルオキシダーゼは、本発明の組成物中で過酸化水素又その供給源（例えば、過炭酸塩、過ホウ酸塩又は過硫酸塩）と組み合わせて使用され得る。オキシダーゼは、本発明の組成物中で酸素と組み合わせて使用され得る。このようなタイプの酵素はどちらも、「溶液漂白」のために（すなわち、複数の布地を洗浄液中で一緒に洗浄する場合に染色された布地から別の布地に布地染料が移るのを防止するために）使用され、好ましくは、増強剤（例えば、国際公開第９４／１２６２１号及び同第９５／０１４２６号を参照されたい）と共に使用される。本発明の組成物中に含まれ得る好適なぺルオキシダーゼ／オキシダーゼとしては、例えば、植物、細菌又は真菌由来のものが挙げられるが、これらに限定されない。ペルオキシダーゼ又はオキシダーゼの、化学的又は遺伝学的に改変された変異体は、本発明の組成物中に含まれ得る。一態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体と少なくとも１つのペルオキシダーゼ又は少なくとも１つのオキシダーゼ酵素とを含む、クリーニング組成物を提供する。このようなペルオキシダーゼ又はオキシダーゼはそれぞれ、組成物中に、組成物の約０．００００１重量％〜約１０重量％のペルオキシダーゼ又はオキシダーゼの濃度で存在し、組成物の重量残部は１つ以上のクリーニング添加剤物質である。別の態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体と、少なくとも１つのペルオキシダーゼ及び／又は少なくとも１つのオキシダーゼと、を含むクリーニング組成物を提供し、ここで、このようなペルオキシダーゼ又はオキシダーゼはそれぞれ、組成物中の約０．０００１重量％〜約１０重量％、約０．００１重量％〜約５重量％、約０．００１重量％〜約２重量％、又は約０．００５重量％〜約０．５重量％のペルオキシダーゼ又はオキシダーゼ酵素の濃度で各々存在する。
一態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体と、例えば、１つ以上のペルヒドロラーゼ（例えば、国際公開第０５／０５６７８２号を参照されたい）が挙げられるがこれに限定されない、使用が見出される１つ以上の追加の酵素と、を含む組成物（例えば、クリーニング組成物）を提供する。
別の態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を含む組成物（例えば、クリーニング組成物）を提供し、例えば、１つ以上の追加のプロテアーゼ、アミラーゼ、リパーゼ、マンナナーゼ及び／又はセルラーゼのような上記酵素の１つ以上の混合物が包含される。実際、これらの酵素の様々な混合物は本発明の組成物において使用が見出されることが想到される。様々な濃度のプロテアーゼ変異体及び１つ以上の追加の酵素は、どちらも独立して約１０％までの範囲であってもよく、クリーニング組成物の残部は１つ以上のクリーニング添加剤物質である。クリーニング添加剤物質の具体的選択は、クリーニングすべき表面又は物品（例えば、食卓食器物品、食卓用器具物品又は布地物品）又は布地、並びに、使用時のクリーニング条件（例えば、手による又は自動食器洗浄洗剤用途時の条件）に関する組成物の所望される形態を考慮することにより、容易に行われる。
一態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体と（選択的に所望される場合には少なくとも１つの追加の酵素と）１つ以上のクリーニング添加物質とを含む組成物（例えば、クリーニング組成物）を提供する。好適なクリーニング添加剤物質の例としては、例えば、界面活性剤、ビルダー、漂白剤、漂白剤、漂白活性化剤、漂白触媒、他の酵素、酵素安定化剤、キレート剤、蛍光増白剤、汚れ除去ポリマー、転色剤、転染防止剤、触媒物質、過酸化水素、過酸化水素供給源、高分子分散剤、粘土汚れ除去剤、構造弾性化剤、分散剤、発泡抑制剤、染料、香料、着色剤、充填剤塩、ヒドロトロープ、香料、香料カプセル、光活性化剤、蛍光剤、布地コンディショナー、布地柔軟剤、担体、ヒドロトロープ、加工助剤、溶媒、色素、加水分解性界面活性剤、防腐剤、酸化防止剤、収縮低減剤、しわ低減剤、殺菌剤、抗かび剤、カラー粒子、シルバーケア、耐変色剤及び／又は防腐剤、アルカリ性供給源、可溶化剤、担体、加工助剤、色素及びｐＨ調整剤が挙げられるが、これらに限定されない（例えば、米国特許第６，６１０，６４２号、同第６，６０５，４５８号、同第５，７０５，４６４号、同第５，７１０，１１５号、同第５，６９８，５０４号、同第５，６９５，６７９号、同第５，６８６，０１４号及び同第５，６４６，１０１号（これらの全ては参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。具体的なクリーニング組成物物質の態様は、下記に詳細に例示される。上記のように、クリーニング添加剤物質が、所望のクリーニング組成物中に含まれる本発明のプロテアーゼ変異体と混合可能でない場合、構成成分を組み合わせることが適切になるまで、クリーニング添加剤物質とプロテアーゼを分離したまま維持する（すなわち、互いに接触させない）好適な方法が使用される。このような分離方法としては、当該技術分野において既知の好適な方法が挙げられる（例えば、ゲルキャップ、封入、タブレット、物理的分離など）。
一態様では、本発明の組成物（例えば、クリーニング組成物）は、タンパク質性のシミを除去する必要のある表面をクリーニングするのに有用又は有効である本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を有効量含む。このようなクリーニング組成物としては、硬質表面、洗濯物、布地、食器、食卓用器具又は食卓食器をクリーニング（例えば、手による若しくは手動の食器洗浄又は自動食器洗浄）するような用途のためのクリーニング組成物が挙げられる。実際、一態様では本発明は布地クリーニング組成物を提供し、一方、別の態様では本発明は非布地クリーニング組成物を提供する。注目すべきことに、本発明はまた、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を含むクリーニング組成物を提供し、ここで、このようなクリーニング組成物は、口腔ケア（歯磨き、練り歯磨き、マウスウォッシュなど並びに義歯クリーニング組成物が挙げられる）などの、パーソナルケアに好適であり、皮膚及び毛髪のクリーニングに好適であり、並びに眼鏡のクリーニングに好適である。本発明は、任意の形態（すなわち、液体、顆粒、バー、固形、半固形、ゲル、エマルション、タブレット、カプセルなど）の洗剤組成物を包含することが意図される。
例示目的で、本発明のプロテアーゼ変異体が使用を見出される複数のクリーニング組成物は下記により詳細に説明される。本発明のクリーニング組成物が洗濯機洗浄方法における使用に好適な組成物として配合される一態様では、本発明の組成物は、好ましくは、少なくとも１つの界面活性剤及び少なくとも１つのビルダー化合物、並びに、有機高分子化合物、漂白剤、追加の酵素、発泡抑制剤、分散剤、石灰石鹸分散剤、汚れ懸濁剤及び再付着防止剤及び腐食防止剤からなる群から選択される１つ以上のクリーニング添加剤物質といった１つ以上のクリーニング添加物質を含有する。一態様では、洗濯組成物はまた、１つ以上の柔軟剤も（すなわち、追加のクリーニング添加剤物質として）含有する。本発明の１つ以上のプロテアーゼ変異体を添加できる追加の代表的洗濯又は布地クリーニング組成物及び配合物は、下記実施例において示される。
本発明の組成物はまた、固体又は液体形態での洗剤添加剤製品として使用を見出される。このような添加剤製品は、従来の洗剤組成物の性能を補助及び／又は増強することが意図されており、クリーニングプロセスの任意の段階で添加され得る。一態様では洗濯洗剤組成物の密度は約４００〜約１２００ｇ／リットルの範囲であり、別の態様では２０℃にて測定したときに約５００〜約９５０ｇ／リットルの組成物の範囲である。
一態様では、本発明は、少なくとも本発明のプロテアーゼ変異体を含む米国特許第６，６０５，４５８号に記載されているものなどのクリーニング組成物を提供する。一態様では本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を含む組成物はコンパク卜顆粒布地クリーニング組成物であり、一方、他の態様ではこの組成物は着色布地の選択において有用な顆粒布地クリーニング組成物であり、別の態様ではこの組成物は洗浄能力を通して柔軟化をもたらす顆粒布地クリーニング組成物である。別の態様では、この組成物は、強力液体布地クリーニング組成物である。別の態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を含む組成物を提供し、ここで、この組成物は、米国特許第６，６１０，６４２号及び同第６，３７６，４５０号に記載のもののような布地クリーニング組成物である。本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を含む欧州又は日本の洗浄条件下での特別な有用性（例えば、米国特許第６，６１０，６４２号）を有する顆粒洗濯洗剤組成物も提供される。
一態様では、本発明は、本明細書に提供される少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を含む硬質表面クリーニング組成物を提供する。一部のこのような組成物は、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を含む米国特許第６，６１０，６４２号、同第６，３７６，４５０号及び同第６，３７６，４５０号に記載のものなどの硬質表面クリーニング組成物を含む。
本発明は、本明細書に提供される少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を含む手による食器洗浄又は自動での食器洗浄用の洗剤組成物を含む。一部のこのような組成物は、米国特許第６，６１０，６４２号及び同第６，３７６，４５０号に記載のものなどの硬質表面クリーニング組成物を含む。
一態様では、本発明は、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体並びに／又は少なくとも１つの界面活性剤並びに／又は、有機高分子化合物、発泡促進剤、ＩＩ族金属イオン、溶媒、ヒドロトロープ及び追加の酵素からなる群から選択される少なくとも１つの追加のクリーニング添加剤物質を含む、手動若しくは手による食器洗浄又は自動食器洗浄方法においてクリーニング組成物を提供する。
本発明のクリーニング組成物が自動食器洗浄機方法における使用に好適な組成物として配合される一態様では、本発明の組成物は、典型的には、少なくとも１つの界面活性剤及び／又は少なくとも１つのビルダー化合物を含有し、有機高分子化合物、漂白剤、追加の酵素、発泡抑制剤、分散剤、石灰石鹸分散剤、汚れ懸濁剤及び再付着防止剤及び腐食防止剤から好ましくは選択される１つ以上のクリーニング添加物質を含有し得る。本発明の１つ以上のプロテアーゼ変異体を添加できる追加の代表的食器洗浄組成物及び配合物は、下記実施例において示される。
別の態様では、本発明は、口腔ケア（例えば、歯及び義歯のクリーニング）に有用である本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を含む口腔ケア組成物を提供し、このような組成物中で有用でありかつ含まれ得る口腔ケア組成物の構成成分としては、米国特許第６，３７６，４５０号に記載のものが挙げられる。本発明の組成物は、米国特許第６，３７６，４５０号、同第６，６０５，４５８号及び同第６，６１０，６４２号（これらのすべては参照により本明細書に組み込まれる）に記載のクリーニング添加物質及び化合物を更に含み得る。
本発明のクリーニング組成物は、任意の好適な形態に配合され、配合者により任意のプロセスにより調製され、その非限定例は、米国特許第５，８７９，５８４号、同第５，６９１，２９７号、同第５，５７４，００５号、同第５，５６９，６４５号、同第５，５６５，４２２号、同第５，５１６，４４８号、同第５，４８９，３９２号及び同第５，４８６，３０３号に記載され、これらのすべては参照により本明細書に組み込まれる。低ｐＨのクリーニング組成物が所望される場合、このような組成物のｐＨは、モノエタノールアミンなどの物質又は塩酸（ＨＣｌ）などの酸性物質の添加を介して調整される。
本発明の目的にとって本質的なものではないが、以降に示される添加剤の非限定リストは、本クリーニング組成物における使用に好適である。一態様では、これらの添加剤は、例えば、クリーニングすべき基材の処理に関しクリーニング性能を補助又は増強するために、あるいは、香料、着色剤、染料又はこれらに類するものと同様にクリーニング組成物の美観を改質するために、組み込まれる。このような添加剤は本発明のプロテアーゼ変異体に加えられることが理解される。これらの添加構成成分の正確な性質及びその組み込み濃度は、組成物の物理的形態、並びに、それが使用されるクリーニング操作の性質に依存する。好適な添加剤物質としては、例えば、界面活性剤、ビルダー、キレート剤、移染防止剤、付着助剤、分散剤、追加の酵素及び酵素安定剤、触媒物質、漂白活性化剤、漂白増進剤、過酸化水素、過酸化水素供給源、予備成形過酸、高分子分散剤、粘土汚れ除去剤／再付着防止剤、増白剤、発泡抑制剤、染料、香料、構造弾性化剤、布地柔軟剤、担体、ヒドロトロープ、加工助剤及び／又は色素が挙げられるがこれらに限定されない。下記の開示に加えて、このような他の添加剤の好適な例及び使用濃度は、米国特許第５，５７６，２８２号、同第６，３０６，８１２号及び同第６，３２６，３４８号に見られ、これらは参照により組み込まれる。上記添加剤成分は、本発明のクリーニング組成物の残部を構成し得る。
一態様では、本発明のクリーニング組成物は、少なくとも１つの界面活性剤及び／又は界面活性剤系を含み、ここで、この界面活性剤は、非イオン性界面活性剤、アニオン界面活性剤、カチオン性界面活性剤、両性界面活性剤、双極性イオン性界面活性剤、半極非イオン性界面活性剤及びこれらの混合物から選択される。一部の低ｐＨのクリーニング組成物（例えば、約３〜約５の正味ｐＨを有する組成物）の態様では、アルキルエトキシル化硫酸塩は組成物の酸性含有物により加水分解され得ると考えられることから、組成物は典型的にはこのような界面活性剤を含有しない。一態様では、この界面活性剤は、クリーニング組成物の約０．１重量％〜約６０重量％の濃度で存在し、一方代替的態様では濃度は洗浄組成物の約１重量％〜約５０重量％であり、一方代替的態様では約５重量％〜約４０重量％である。
一態様では、本発明のクリーニング組成物は、１つ以上の洗剤ビルダー又はビルダー系を含む。少なくとも１つのビルダーを含む一部のこのような組成物では、クリーニング組成物は、クリーニング組成物の少なくとも約１重量％、約３重量％〜約６０重量％、又は更には約５重量％〜約４０重量％のビルダーを含む。ビルダーとしては、例えば、ポリリン酸塩のアルカリ金属、アンモニウム及びアルカノールアンモニウム塩、アルカリ金属ケイ酸塩、アルカリ土類及びアルカリ金属炭酸塩、アルミノケイ酸塩、ポリカルボキシレート化合物、エーテルヒドロキシポリカルボキシレート、無水マレイン酸とエチレン又はビニルメチルエーテルのコポリマー、１，３，５−トリヒドロキシベンゼン−２，４，６−トリスルホン酸及びカルボキメチルオキシコハク酸、エチレンジアミン四酢酸及びニトリロ三酢酸などのポリ酢酸並びにメリト酸、コハク酸、クエン酸、オキシジコハク酸、ポリマレイン酸、ベンゼン１，３，５−トリカルボン酸、カルボキシメチルオキシコハク酸などのポリカルボキシレートの様々なアルカリ金属、アンモニウム及び置換アンモニウム塩、並びにこれらの可溶性塩が挙げられるがこれらに限定されない。任意の好適なビルダーが本発明の様々な組成物において使用を見出されることが想到される。
一部のこのような組成物では、ビルダーは、クエン酸塩及びポリリン酸塩（例えば、トリポリリン酸ナトリウム及びトリポリリン酸ナトリウム六水和物、トリポリリン酸カリウム、並びに、トリポリリン酸ナトリウム及びトリポリリン酸カリウムの混合物など）などの水溶性の硬度イオン錯体（例えば、捕捉ビルダー）を形成する。本発明での使用が見出され得る、当該技術分野において既知のもの（例えば、欧州特許第２ １００ ９４９号を参照されたい）を含む任意の好適なビルダーが想到される。
本発明の一部のクリーニング組成物は、少なくとも１つのプロテアーゼ変異体に加えて少なくとも１つのキレート化剤を含む。好適なキレート化剤としては、例えば、銅、鉄及び／又はマンガンキレート化剤及びこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。少なくとも１つのキレート化剤が使用される態様では、本発明のクリーニング組成物は、主題のクリーニング組成物の約０．１重量％〜約１５重量％、又は更には約３重量％〜約１０重量％のキレート化剤を含む。
本明細書に提供される一部のクリーニング組成物は、少なくとも１つのプロテアーゼ変異体に加えて少なくとも１つの付着助剤を含む。好適な付着助剤としては、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリカルボキシレート、ポリテレフタル酸などの汚れ除去ポリマー、カオリナイト、モンモリロナイト、アタパルジャイト、イライト、ベントナイト、ハロイサイトなどの粘土、及びこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書に示すように、一態様では、再付着防止剤は、本発明の一態様における使用を見出される。一態様では、非イオン性界面活性剤が使用を見出される。これらの非イオン性界面活性剤もまた、汚れの再付着防止において使用を見出される。一態様では、再付着防止剤は、当該技術分野において既知であるような非イオン性界面活性剤である（例えば、欧州特許第２ １００ ９４９号を参照されたい）。
一態様では、本発明のクリーニング組成物は、１つ以上の移染防止剤を含む。好適な高分子移染防止剤としては、ポリビニルピロリドンポリマー、ポリアミンＮ−酸化物ポリマー、Ｎ−ビニルピロリドン及びＮ−ビニルイミダゾールのコポリマー、ポリビニルオキサゾリドン、並びにポリビニルイミダゾール又はこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。少なくとも１つの移染防止剤が使用される態様では、本発明のクリーニング組成物は、クリーニング組成物の約０．０００１重量％〜約１０重量％、約０．０１重量％〜約５重量％、又は更には約０．１重量％〜約３重量％を含む。
一態様では、ケイ酸塩は、本発明の組成物中に含まれる。一部のこのような態様では、ケイ酸ナトリウム（例えば、二ケイ酸ナトリウム、メタケイ酸ナトリウム及び結晶質フィロケイ酸塩）は、使用を見出される。一態様では、ケイ酸塩は、約１％〜約２０％の濃度で存在する。一態様では、ケイ酸塩は、組成物の約５重量％〜約１５重量％の濃度で存在する。
一態様では、本発明のクリーニング組成物はまた、分散剤を含む。好適な水溶性有機物質としては、例えば、ポリカルボン酸が２個以下の炭素原子により互いに分離された少なくとも２個のカルボキシルラジカルを含むホモポリマー又はコポリマー酸若しくはこれらの塩が挙げられるがこれらに限定されない。
一態様では、クリーニング組成物において使用される酵素（例えば、本発明のプロテアーゼ変異体又は他の追加の酵素）は、任意の好適な技術により安定化される。一態様では、本明細書で採用される酵素は、最終組成物中に、カルシウム及び／又はマグネシウムイオンを酵素に供給する、このようなイオンの水溶性供給源が存在することにより、安定化される。一態様では、酵素安定剤としては、オリゴ糖、多糖、並びに、カルシウム塩のようなアルカリ土類金属などの無機二価金属塩が挙げられる。酵素安定化に関する様々な技術が本発明において使用を見出されることが想到される。例えば、一態様では、本明細書で採用される酵素は、最終組成物中に、亜鉛（ＩＩ）、カルシウム（ＩＩ）及びマグネシウム（ＩＩ）イオン並びに他の金属イオン（例えば、バリウム（ＩＩＩ）、スカンジウム（ＩＩ）、鉄（ＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、アルミニウム（ＩＩＩ）、スズ（ＩＩ）、コバルト（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）及びオキソバナジウム（ＩＶ））を酵素に供給する、このようなイオンの水溶性供給源が存在することにより安定化される。塩化物及び硫酸塩もまた本発明の一態様において使用を見出される。好適なオリゴ糖及び多糖（例えば、デキストリン）は当該技術分野において既知である（例えば、国際公開第０７／１４５９６４号を参照されたい）。一態様では、可逆性プロテアーゼ阻害剤もまた使用を見出され、例えば、ホウ素含有化合物（例えば、ホウ酸塩、フェニルボロン酸、４−ホルミルフェニルボロン酸、他のフェニルボロン酸誘導体、ペプチド阻害剤及びこれらに類するもの）及び／又はトリペプチドアルデヒドは、所望されるように安定性を更に改善するために本発明の組成物において使用を見出される。
一態様では、１つ以上の漂白剤、漂白活性化剤及び／又は漂白触媒が本発明の組成物に含まれる。一態様では、本発明のクリーニング組成物は、無機及び／又は有機漂白化合物を含む。無機漂白剤としては、過水和物塩（例えば、過ホウ酸塩、過炭酸塩、過リン酸塩、過硫酸塩、過ケイ酸塩）が挙げられるが、これらに限定されない。一態様では、無機過水和物塩は、アルカリ金属塩である。一態様では、無機過水和物塩は追加で保護せずに結晶質固体として含まれるが、一部の他の態様では塩はコーティングされる。当該技術分野において既知である任意の好適な塩は、本発明の組成物における使用を見出される（例えば、欧州特許第２ １００ ９４９号を参照されたい）。
一態様では、漂白活性化剤は、本発明の組成物において使用される。漂白活性化剤は、典型的には、６０℃以下の温度でのクリーニング過程での漂白作用を向上させる有機過酸前駆体である。本明細書での使用に好適な漂白活性化剤としては、過加水分解条件下で、好ましくは約１〜約１０個の炭素原子、特に約２〜約４個の炭素原子を有する脂肪族ペルオキシカルボン酸及び／又は選択的に置換された過安息香酸を生じる化合物が挙げられる。追加の漂白活性化剤は、当該技術分野において既知であり、本発明の組成物において使用を見出される（例えば、欧州特許第２ １００ ９４９号を参照されたい）。
一態様では及び本明細書に更に記載するように、本発明のクリーニング組成物は、少なくとも１つの漂白触媒を更に含む。一態様では、マンガントリアザシクロノナン及び関連する錯体並びにコバルト、銅、マンガン及び鉄錯体が使用を見出される。追加の漂白触媒は、本発明において使用が見出される（例えば、米国特許第４，２４６，６１２号、同第５，２２７，０８４号及び同第４，８１０４１０号、国際公開第９９／０６５２１号並びに欧州特許第２ １００ ９４９号を参照されたい）。
一態様では、本発明のクリーニング組成物は、１つ以上の金属錯体触媒を含む。一態様では、金属含有漂白触媒が使用を見出される。一部の態様では、金属漂白触媒は、漂白触媒活性が規定された遷移金属カチオン（例えば、銅、鉄、チタン、ルテニウム、タングステン、モリブデン又はマンガンカチオン）、ほとんど又は全く触媒活性を有さない補助金属カチオン（例えば、亜鉛又はアルミニウムカチオン）、並びに、触媒及び補助金属カチオンについて規定された安定度定数を有する分画（sequestrate）を含む触媒系を含み、特にエチレンジアミン四酢酸、エチレンジアミン四（メチレンホスホン酸）及びこれらの水溶性塩が使用される（例えば、米国特許第４，４３０，２４３号を参照されたい）。一態様では、本発明のクリーニング組成物は、マンガン化合物により触媒される。このような化合物及び使用濃度は、当該技術分野において周知である（例えば、米国特許第５，５７６，２８２号を参照されたい）。追加の態様では、コバルト漂白触媒が使用を見出され、本発明のクリーニング組成物中に含まれる。様々なコバルト漂白触媒が当該技術分野において既知であり（例えば、米国特許第５，５９７，９３６号及び同第５，５９５，９６７号を参照されたい）、既知の手順により容易に調製される。
一態様では、本発明のクリーニング組成物は、巨大多環固定配位子（macropolycyclic rigid ligand）（ＭＲＬ）の遷移金属錯体を含む。実際には、制限目的ではないが、一態様では、本発明により提供される組成物及びクリーニングプロセスは、水性洗浄溶媒中の少なくとも約１億分率の活性ＭＲＬ種を供給するように、一態様では洗浄液中の約０．００５ｐｐｍ〜約２５ｐｐｍ、約０．０５ｐｐｍ〜約１０ｐｐｍ、及び約０．１ｐｐｍ〜約５ｐｐｍのＭＲＬを提供するように、調整される。
一態様では、この遷移金属漂白触媒中の遷移金属としては、例えば、マンガン、鉄及びクロムが挙げられるが、これらに限定されない。好ましいＭＲＬとしては、例えば、交差架橋している超硬配位子（special ultra-rigid ligands）（例えば、５，１２−ジエチル−１，５，８，１２−テトラアザビシクロ（６．６．２）ヘキサデカン）も挙げられるがこれに限定されない。好適な遷移金属ＭＲＬは、既知の手順により容易に調製される（例えば、国際公開第２０００／３２６０１号及び米国特許第６，２２５，４６４号を参照されたい）。
一態様では、本発明は、洗剤タブレットとして配合された自動食器洗浄洗剤組成物を提供する。このようなタブレットは、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体と、例えば、ビルダー塩などのビルダーを含む。一部のこのようなタブレットは、タブレット組成物１００グラム当たり３グラム（ｇ）の水酸化ナトリウムに少なくとも等価であるアルカリ度と、少なくとも１．４グラム／立方センチメートルの密度と、を有する。ビルダー塩は、シリケート塩とホスフェート塩の混合物を含むことができ、好ましくはケイ酸塩（例えば、メタケイ酸ナトリウム）がリン酸塩（例えば、トリポリリン酸ナトリウム）よりも多い。一部のこのようなタブレットは、界面活性剤物質を含まず、自動食器洗浄機での使用に特に適合している。
一態様では、本発明のクリーニング組成物は、金属ケア剤を含む。金属ケア剤は、アルミニウム、ステンレス鋼及び非第一鉄金属（例えば、銀及び銅）などの金属の変色、腐食及び／又は酸化を、防止及び／又は低減するのに有用である。好適な金属ケア剤としては、欧州特許第２ １００ ９４９号、国際公開第９４２６８６０号及び同第９４／２６８５９号に記載のものが挙げられる。一部のこのようなクリーニング組成物では、金属ケア剤は、亜鉛塩である。一部のこのようなクリーニング組成物は、約０．１重量％〜約５重量％の１つ以上の金属ケア剤を含む。
上記に示しているように、本発明のクリーニング組成物は、任意の好適な形態に配合され、配合者により任意のプロセスにより調製され、その非限定例は、米国特許第５，８７９，５８４号、同第５，６９１，２９７号、同第５，５７４，００５号、同第５，５６９，６４５号、同第５，５１６，４４８号、同第５，４８９，３９２号及び同第５，４８６，３０３号に記載され、これらのすべては参照により本明細書に組み込まれる。低ｐＨのクリーニング組成物が所望される一態様では、このような組成物のｐＨは、塩酸（ＨＣｌ）などの酸性物質の添加を介して調整される。
本明細書に開示されているクリーニング組成物は、部位（例えば、表面、食卓食器、食卓用器具又は布地）のクリーニングにおいて使用を見出される。典型的には、部位の少なくとも一部分は、未希釈形態の又は洗浄液に希釈された本発明のクリーニング組成物に接触し、次に、この部位は選択的に洗浄され及び／又はすすがれる。本発明の目的のために、「洗浄」としては、例えば、擦ること及び機械的撹拌が挙げられるがこれらに限定されない。一態様では、クリーニング組成物は、溶液中に約５００ｐｐｍ〜約１５，０００ｐｐｍの濃度で採用される。洗浄溶媒が水である場合、水温は典型的には約５℃〜約９０℃の範囲であり、部位が布地を含む場合、水と布地の質量比は典型的には約１：１〜約３０：１である。
組成物の作製及び使用プロセス
例えば、クリーニング組成物などの本明細書に及び全体にわたって記載の本発明の組成物は、任意の好適な形態に配合することができ、配合者により選択される任意の好適なプロセスにより調製することができる（例えば、米国特許第５，８７９，５８４号、同第５，６９１，２９７号、同第５，５７４，００５号、同第５，５６９，６４５号、同第５，５６５，４２２号、同第５，５１６，４４８号、同第５，４８９，３９２号、同第５，４８６，３０３号、同第４，５１５，７０５号、同第４，５３７，７０６号、同第４，５１５，７０７号、同第４，５５０，８６２号、同第４，５６１，９９８号、同第４，５９７，８９８号、同第４，９６８，４５１号、同第５，５６５，１４５号、同第５，９２９，０２２号、同第６，２９４，５１４号及び同第６，３７６，４４５号を参照されたい）。
一態様では、本発明のクリーニング組成物は、タブレット、カプセル、サッシェ、パウチ及び多区画パウチなどの単位用量形態で提供される。一態様では、単位用量フォーマットは、多区画パウチ（又は他の単位用量フォーマット）内の成分の制御放出をもたらすために設計される。好適な単位用量及び制御放出フォーマットは当該技術分野において既知である（例えば、単位用量及び制御放出フォーマットでの使用に好適な物質について、欧州特許第２ １００ ９４９号、国際公開第０２／１０２９５５号、米国特許第４，７６５，９１６号及び同第４，９７２，０１７号、並びに国際公開第０４／１１１１７８号を参照されたい）。一態様では、単位用量形態は、水溶性フィルム又は水溶性パウチで包まれたタブレットにより提供される。単位用量のための様々なフォーマットが欧州特許第２ １００ ９４７号に提供され、当該技術分野において既知である。
本発明の組成物の作製及び使用プロセスに関する本発明の追加の態様は、本明細書に他箇所に記載されている。
本発明の方法
本発明は、例えば、食卓食器物品、食卓用器具物品、布地物品、洗濯物品、パーソナルケア物品、メガネなど又はこれらに類するものをクリーニング又は洗浄する方法、並びに、例えば、物品の硬質表面などの硬質又は軟質表面をクリーニング又は洗浄するための方法が挙げられるがこれらに限定されない、洗浄の必要のある物品又は表面（例えば、硬質表面）をクリーニング又は洗浄するための方法を提供する。
一態様では、本発明は、クリーニングする必要のある物品、対象又は表面をクリーニングするための方法を提供し、この方法は、物品又は表面（あるいはクリーニングすることが望ましい物品又は表面の部分）を、充分な時間にわたって及び／又は、これらの物品、対象若しくは表面を所望の程度までクリーニングするのに好適な若しくは有効な条件下で、本発明の任意のプロテアーゼ変異体又は本発明の組成物と接触させることを含む。一部のこのような方法は、物品、対象又は表面を水ですすぐことを更に含む。一部のこのような方法では、クリーニング組成物は食器洗浄洗剤組成物であり、クリーニングすべき物品又は対象は、食卓食器物品又は食卓用器具物品である。食卓食器物品は、食物を給仕する又は食べるのに通常使用される食器物品である。食卓食器物品は、例えば、皿、平皿、カップ、ボウルなど及びこれらに類するものであり得るがこれらに限定されない。食卓用器具は、例えば、皿、カトラリー、ナイフ、フォーク、スプーン、箸、ガラス製品、ピッチャー、ソース入れ、飲料容器など及びこれらに類するものが挙げられるがこれらに限定されない、より広い用語であり、食卓用器具物品は、食物を給仕する又は食べるためのこれらの又は同様の物品のいずれも含む。一部のこのような方法では、クリーニング組成物は、自動食器洗浄組成物又は手による食器洗浄洗剤組成物であり、クリーニングすべき物品又は対象は、食卓食器又は食卓用器具物品である。一部のこのような方法では、クリーニング組成物は、例えば、電動式洗濯洗剤組成物又は液体洗濯洗剤組成物などの洗濯洗剤組成物であり、クリーニングすべき物品は布地物品である。
一態様では、本発明は、選択的にそれぞれクリーニング又は洗浄の必要のある布地物品の、クリーニング又は洗浄のための方法を提供する。一部のこのような方法は、プロテアーゼ変異体を含む組成物（例えば、布地又は洗濯クリーニング組成物が挙げられるがこれらに限定されない）とクリーニングする必要のある布地物品又は洗濯物品とを供給することと、布地若しくは洗濯物品を所望の程度までクリーニング又は洗浄するのに充分な若しくは有効な条件下で、この布地物品又は洗濯物品（又はクリーニングすることが所望される物品の部分）を組成物と接触させることと、を含む。
一態様では、本発明は、選択的にクリーニングする必要のある物品若しくは表面（例えば、硬質表面）をクリーニング又は洗浄するための方法を提供し、この方法は、クリーニング若しくは洗浄すべき物品又は表面を供給することと、物品若しくは表面を所望の程度までクリーニング又は洗浄するのに、充分な時間にわたって並びに／又は充分な若しくは有効な条件下で、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体又は少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を含む本発明の組成物と物品若しくは表面（又はクリーニング若しくは洗浄されることが所望される物品若しくは表面の部分）を接触させることと、を含む。このような組成物としては、例えば、本発明のクリーニング組成物又は洗剤組成物（例えば、手による食器洗浄洗剤組成物、手による食器洗浄クリーニング組成物、洗濯洗剤若しくは布地洗剤若しくは洗濯若しくは布地クリーニング組成物、液体洗濯洗剤、液体洗濯クリーニング組成物、粉末洗濯洗剤組成物、粉末洗濯クリーニング組成物、自動食器洗浄洗剤組成物、洗濯促進クリーニング若しくは洗剤組成物、洗濯クリーニング添加剤及び洗濯シミ抜き組成物などが挙げられるがこれらに限定されない）が挙げられるがこれらに限定されない。一部の例では、所望される場合、特に追加のクリーニング又は洗浄が所望される場合、この方法は一回以上繰り返すことができる。例えば、一部の例では、この方法は、選択的に、物品若しくは表面を所望の程度までクリーニング又は洗浄するのに十分若しくは有効な時間にわたって、物品又は表面を少なくとも１つのプロテアーゼ変異体又は組成物と接触させたままにしておくことを更に含む。一部のこのような方法は、物品又は表面を水ですすぐことを更に含む。一部のこのような方法は、物品又は表面を、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体又は本発明の組成物と再び接触させることと、物品若しくは表面を所望の程度までクリーニング又は洗浄するのに、充分な時間にわたって、物品又は表面を少なくとも１つのプロテアーゼ変異体又は組成物と接触させたままにしておくことと、を更に含む。一部のこのような方法では、クリーニング組成物は食器洗浄洗剤組成物であり、クリーニングすべき物品は、食卓食器又は食卓用器具物品である。一部のこのような方法では、クリーニング組成物は、自動食器洗浄組成物又は手による食器洗浄洗剤組成物であり、クリーニングすべき物品は、食卓食器又は食卓用器具物品である。一部のこのような方法では、クリーニング組成物は洗濯洗剤組成物であり、クリーニングすべき物品は、布地物品である。
一態様では、本発明は、自動食器洗浄機で食卓用器具又は食卓食器物品をクリーニングする方法を提供し、この方法は、自動食器洗浄機を用意することと、（例えば、機械の中の適切な又は用意されている洗剤区画若しくはディスペンサーに組成物を配置することにより）機械の中に食卓用器具又は食卓食器をクリーニングするのに十分な本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体又は本発明の組成物を含む一定量の自動食器洗浄組成物を配置することと、機械の中に食卓食器又は食卓用器具を入れることと、食卓用器具又は食卓食器物品をクリーニングするように（例えば、製造者の指示に従って）機械を操作することと、を含む。このような方法は、例えば、本明細書に記載の任意のプロテアーゼ変異体を含むがこれらに限定されない、本明細書に記載の任意の自動食器洗浄組成物を含むことができる。使用すべき自動食器洗浄組成物の量は、製造者の指示又は提案に従って容易に判定することができ、本明細書に記載の任意のものを含む本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を含む任意の形態の自動食器洗浄組成物（例えば、液体、粉末、固体、ゲル、タブレット（table）など）が採用され得る。
一態様では、本発明は、選択的にクリーニングする必要のある表面、物品又は対象をクリーニングするための方法を提供し、この方法は、物品若しくは表面を所望の程度までクリーニング又は洗浄するのに、充分な時間にわたって並びに／又は充分な若しくは有効な条件下で、本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体又は未希釈形態の若しくは洗浄溶液で希釈した本発明のクリーニング組成物と、物品若しくは表面（又はクリーニングされることが所望される物品若しくは表面の部分）とを接触させることを含む。表面、物品又は対象は、次に（選択的に）所望される場合、洗浄及び／又はすすがれる。本発明の目的のために、「洗浄」としては、例えば、擦ること及び機械的撹拌が挙げられるがこれらに限定されない。一態様では、クリーニング組成物は、溶液（例えば、水溶液）中に約５００ｐｐｍ〜約１５，０００ｐｐｍの濃度で採用される。洗浄溶媒が水である場合、水温は典型的には約５℃〜約９０℃の範囲であり、部位が布地を含む場合、水と布地の質量比は典型的には約１：１〜約３０：１である。
一態様では、本発明は、洗濯機で洗濯物又は布地物品をクリーニングする方法を提供し、この方法は、洗濯機を用意することと、（例えば、機械の中の適切な又は用意されている洗剤区画若しくはディスペンサーに組成物を配置することにより）機械の中に洗濯物又は布地物品をクリーニングするのに十分な本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を含む一定量の洗濯洗剤組成物を配置することと、機械の中に洗濯物又は布地物品を入れることと、食卓用器具又は食卓食器物品をクリーニングするように（例えば、製造者の指示に従って）機械を操作することと、を含む。このような方法は、例えば、本明細書に記載の任意のプロテアーゼ変異体を含むがこれらに限定されない、本明細書に記載の任意の洗濯洗浄洗剤組成物を含むことができる。使用すべき自動洗濯洗剤組成物の量は、製造者の指示又は提案に従って容易に計量することができ、本明細書に記載の任意のものを含む本発明の少なくとも１つのプロテアーゼ変異体を含む任意の形態の洗濯洗剤組成物（例えば、固体、粉末、液体、タブレット、ゲルなど）が採用され得る。
第十八態様では、本発明は、クリーニングする必要のある物品、対象又は表面をクリーニングするための方法を提供し、この方法は、物品、対象又は表面を、（ｉ）本発明の第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八若しくは第九態様の変異体（又は第三態様にあるようなポリぺプチド）と、又は（ｉｉ）本発明の第十七態様の組成物と、接触させることを含む。本発明の第十八態様の方法は、物品、対象又は表面を水ですすぐことを更に含み得る。
第十九態様では、本発明は、物品又は硬質表面をクリーニングするための方法を提供し、この方法は、物品若しくは硬質表面を所望の程度までクリーニング又は洗浄するのに、充分な時間にわたって並びに／又は充分な若しくは有効な条件下で、クリーニングすべき物品又は硬質表面の少なくとも一部分を、（ｉ）本発明の第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八若しくは第九態様の変異体（又は第三態様にあるようなポリぺプチド）と、又は（ｉｉ）本発明の第十七態様の組成物と、接触させることを含み、選択的に物品又は硬質表面を水ですすぐことを含む。
第二十態様では、本発明は、表面若しくは布地を処理及び／又はクリーニングする方法を提供し、この方法は、選択的に上記表面若しくは布地を洗浄及び／又はすすぐこと、上記表面若しくは布地を（ｉ）本発明の第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八若しくは第九態様の変異体（又は第三態様にあるようなポリぺプチド）と、又は（ｉｉ）本発明の第十七態様の組成物と、接触させること、次に選択的に上記表面若しくは布地を洗浄及び／又はすすぐことを含む。
洗濯及び／又は食器洗浄洗剤組成物中に含まれるがこれらに限定されない洗剤組成物中での本発明のプロテアーゼ変異体又はポリペプチドの使用が含まれる。
追加の代表的クリーニング方法は、全体にわたって及び下記実施例にて提供される。
実験
以降のパートＩ実施例及びパートＩＩ実施例の実験についての開示では、以下の略記が適用される：ＰＩ（性能指数）、ｐｐｍ（百万分率）、Ｍ（モル濃度）、ｍＭ（ミリモル濃度）、μＭ（マイクロモル濃度）、ｎＭ（ナノモル濃度）、ｍｏｌ（モル）、ｍｍｏｌ（ミリモル）、μｍｏｌ（マイクロモル）、ｎｍｏｌ（ナノモル）、ｇｍ（グラム）、ｍｇ（ミリグラム）、μｇ（マイクログラム）、ｐｇ（ピコグラム）、Ｌ（リットル）、ｍｌ及びｍＬ（ミリリットル）、μｌ及びμＬ（マイクロリットル）、ｃｍ（センチメートル）、ｍｍ（ミリメートル）、μｍ（マイクロメートル）、ｎｍ（ナノメートル）、Ｕ（ユニット）、Ｖ（ボルト）、ＭＷ（分子量）、ｓｅｃ（秒）、ｍｉｎ（分）、ｈ及びｈｒ（時間）、℃（セルシウス度）、ＱＳ（十分量）、ＮＤ（実施せず）、ｒｐｍ（毎分回転数）、ＧＨ（ドイツ硬度）、Ｈ２Ｏ（水）、ｄＨ２Ｏ（脱イオン水）、ＨＣｌ（塩酸）、ａａ（アミノ酸）、ｂｐ（塩基対）、ｋｂ（キロ塩基対）、ｋＤ（キロダルトン）、ｃＤＮＡ（コピー又は相補的ＤＮＡ）、ＤＮＡ（デオキシリボ核酸）、ｓｓＤＮＡ（単鎖ＤＮＡ）、ｄｓＤＮＡ（２本鎖ＤＮＡ）、ｄＮＴＰ（デオキシリボヌクレオチド三リン酸）、ＲＮＡ（リボ核酸）、ＭｇＣｌ２（塩化マグネシウム）、ＮａＣｌ（塩化ナトリウム）、ｗ／ｖ（体積対重量）、ｖ／ｖ（体積対体積）、ｗ／ｗ（重量対重量）、ｇ（重さ）、ＯＤ（光学密度）、ｐｐｍ（百万分率）、ダルベッコリン酸緩衝溶液（ＤＰＢＳ）、ＳＯＣ（２％バクトトリプトン、０．５％バクト酵母抽出物、１０ｍＭのＮａＣｌ、２．５ｍＭのＫＣｌ）、テリフィック培地（ＴＢ、１２ｇ／Ｌバクトトリプトン、２４ｇ／Ｌグリセロール、２．３１ｇ／Ｌ ＫＨ２ＰＯ４、及び１２．５４ｇ／Ｌ Ｋ２ＨＰＯ４）、ＯＤ２８０（２８０ｎｍでの光学密度）、ＯＤ６００（６００ｎｍでの光学密度）、Ａ４０５（４０５ｎｍでの吸光度）、Ｖｍａｘ（酵素触媒反応の飽和最大速度）、ＰＡＧＥ（ポリアクリルアミドゲル電気泳動）、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水［１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのナトリウムリン酸緩衝液、ｐＨ ７．２］）、ＰＢＳＴ（ＰＢＳ＋０．２５％ ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０）、ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）、ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）、ＲＴ−ＰＣＲ（逆転写ＰＣＲ）、ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）、トリス（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、ＨＥＰＥＳ（Ｎ−［２−ヒドロキシエチル］ピペラジン−Ｎ−［２−エタンスルホン酸］）、ＨＢＳ（ＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水）、トリス−ＨＣｌ（トリス［ヒドロキシメチル］アミノメタン−塩酸塩）、トリシン（Ｎ−［トリス−（ヒドロキシメチル）−メチル］−グリシン）、ＣＨＥＳ（２−（Ｎ−シクロ−ヘキシルアミノ）エタン−スルホン酸）、ＴＡＰＳ（３−｛［トリス−（ヒドロキシメチル）−メチル］−アミノ｝−プロパンスルホン酸）、ＣＡＰＳ（３−（シクロ−ヘキシルアミノ）−プロパン−スルホン酸、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、ＤＴＴ（１，４−ジチオ−ＤＬ−トレイトール）、ＳＡ（シナピン酸（ｓ，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシケイ皮酸）、ＴＣＡ（トリクロロ酢酸）、Ｇｌｕｔ及びＧＳＨ（還元グルタチオン）、ＧＳＳＧ（酸化グルタチオン）、ＴＣＥＰ（トリス［２−カルボキシエチル］ホスフィン）、Ｃｉ（キュリー）、ｍＣｉ（ミリキュリー）、μＣｉ（マイクロキュリー）、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）、ＲＰ−ＨＰＬＣ（逆相高速液体クロマトグラフィー）、ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ（マトリックス支援レーザー脱離／イオン化法−飛空時間型）、Ｔｓ（トシル）、Ｂｎ（ベンジル）、Ｐｈ（フェニル）、Ｍｓ（メシル）、Ｅｔ（エチル）、Ｍｅ（メチル）、Ｔａｑ（好熱菌（Thermus aquaticus）ＤＮＡポリメラーゼ）、クレノウ（ＤＮＡポリメラーゼＩラージ（クレノウ）フラグメント））、ＥＧＴＡ（エチレングリコール−ビス（β−アミノエチルエーテル）Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸）、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）、ｂｌａ（β−ラクタマーゼ又はアンピシリン耐性遺伝子）、ＨＤＬ（強力液体）、ＨＤＤ（強力粉末洗剤）、ＨＳＧ（高起泡顆粒洗剤）、ＣＥＥ（中央及び東ヨーロッパ）、ＷＥ（西ヨーロッパ）、洗剤を参照する際に使用する場合のＮＡ（北アメリカ）、洗剤を参照する際に使用する場合の日本及びＪＰＮ（日本）、ＭＴＰ（マイクロタイタープレート）、ＭＪ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ＭＪ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｒｅｎｏ，ＮＶ）、Ｂａｓｅｃｌｅａｒ（Ｂａｓｅｃｌｅａｒ ＢＶ，Ｉｎｃ．，Ｌｅｉｄｅｎ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）、ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ（ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ，ＭＡ）、ＴｈｅｒｍｏＦｉｎｎｉｇａｎ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｎｎｉｇａｎ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）、Ａｒｇｏ（Ａｒｇｏ ＢｉｏＡｎａｌｙｔｉｃａ，Ｍｏｒｒｉｓ Ｐｌａｉｎｓ，ＮＪ）、ＳｅｉｔＺ ＥＫＳ（ＳｅｉｔＺＳｃｈｅｎｋ Ｆｉｌｔｅｒｓｙｓｔｅｍｓ ＧｍｂＨ，Ｂａｄ ＫｒｅｕＺｎａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｐａｌｌ（Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐ．）（Ｅａｓｔ Ｈｉｌｌｓ，ＮＹ及びＢａｄ ＫｒｅｕＺｎａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ＤｏｍｉｎｇｕｅＺ Ｒａｎｃｈｏ，ＣＡ）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｃｏｒｐ．，Ｗｏｏｄｌａｎｄｓ，ＴＸ）、Ａｃｃｅｌｒｙｓ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｃｏｒｐ．，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，Ｃａｎａｄａ）、Ｎｅｗ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ（Ｎｅｗ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃｏ．，Ｅｄｉｓｏｎ，ＮＪ）、ＣＦＴ（Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｅｓｔ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ，Ｖｌａａｒｄｉｎｇｅｎ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）、Ｐ＆Ｇ及びＰｒｏｃｔｅｒ ＆ Ｇａｍｂｌｅ（Ｐｒｏｃｔｅｒ ＆ Ｇａｍｂｌｅ，Ｉｎｃ．，Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ，ＯＨ）、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｃｈａｌｆｏｎｔ Ｓｔ．Ｇｉｌｅｓ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）、ＤＮＡ２．０（ＤＮＡ２．０，Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＣＡ）、ＯＸＯＩＤ（Ｏｘｏｉｄ，Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ，Ｈａｍｐｓｈｉｒｅ，ＵＫ）、ＭｅｇａＺｙｍｅ（ＭｅｇａＺｙｍｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｒｅｌａｎｄ Ｌｔｄ．，Ｂｒａｙ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ Ｐａｒｋ，Ｂｒａｙ，Ｃｏ．，Ｗｉｃｋｌｏｗ，Ｉｒｅｌａｎｄ）、ＦｉｎｎＺｙｍｅｓ（ＦｉｎｎＺｙｍｅｓ Ｏｙ，Ｅｓｐｏｏ，Ｆｉｎｌａｎｄ）、Ｋｅｌｃｏ（ＣＰ Ｋｅｌｃｏ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ）、Ｃｏｒｎｉｎｇ（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）、ＮＥＮ（ＮＥＮ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）、Ｐｈａｒｍａ ＡＳ（Ｐｈａｒｍａ ＡＳ，Ｏｓｌｏ，Ｎｏｒｗａｙ）、Ｄｙｎａｌ（Ｄｙｎａｌ，Ｏｓｌｏ，Ｎｏｒｗａｙ）、Ｂｉｏ−Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｂｉｏ−Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｌｅｗｉｓｖｉｌｌｅ，ＴＸ）、ＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）、Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）、Ｓｉｇｍａ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、Ｐｈａｒｍａｃｉａ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）、ＮＣＢＩ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ及び／又はＣｌｏｎｔｅｃｈ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＣＬＯＮＴＥＣＨ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）、Ｏｐｅｒｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｏｐｅｒｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ）、ＭＷＧ Ｂｉｏｔｅｃｈ（ＭＷＧ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｈｉｇｈ Ｐｏｉｎｔ，ＮＣ）、Ｏｌｉｇｏｓ Ｅｔｃ（Ｏｌｉｇｏｓ Ｅｔｃ．Ｉｎｃ，Ｗｉｌｓｏｎｖｉｌｌｅ，ＯＲ）、Ｂａｃｈｅｍ（Ｂａｃｈｅｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．，Ｋｉｎｇ ｏｆ Ｐｒｕｓｓｉａ，ＰＡ）、Ｄｉｆｃｏ（Ｄｉｆｃｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ）、Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ，Ｈｅｒｎｄｏｎ，ＶＡ、Ｓａｎｔａ ＣｒｕＺ（Ｓａｎｔａ ＣｒｕＺ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎｔａ ＣｒｕＺ，ＣＡ）、Ｏｘｏｉｄ（Ｏｘｏｉｄ Ｉｎｃ．，Ｏｇｄｅｎｓｂｕｒｇ，ＮＹ）、Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐ．，Ｆｒｅｅｈｏｌｄ，ＮＪ）、ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ又はＧｉｂｃｏ ＢＲＬ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）、Ｂｉｏ−Ｒａｄ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ＮＥＢ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）、Ｓｉｇｍａ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、Ｐｉｅｒｃｅ（Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）、タカラ（タカラバイオ株式会社、大津、日本）、Ｒｏｃｈｅ（Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ，Ｂａｓｅｌ，ＳｗｉｔＺｅｒｌａｎｄ）、Ｇｅｎｅ Ｏｒａｃｌｅ（Ｇｅｎｅ Ｏｒａｃｌｅ，Ｉｎｃ．，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）、ＥＭ Ｓｃｉｅｎｃｅ（ＥＭ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ，ＮＪ）、Ｑｉａｇｅｎ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）、Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ（Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ Ｉｎｔｌ．，Ｓａｃｏ，Ｍａｉｎｅ）、Ａｐｔａｇｅｎ（Ａｐｔａｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｈｅｒｎｄｏｎ，ＶＡ）、Ｓｏｒｖａｌｌ（Ｓｏｒｖａｌｌ ｂｒａｎｄ，ｆｒｏｍ Ｋｅｎｄｒｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ａｓｈｅｖｉｌｌｅ，ＮＣ）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｃｏｒｐ．，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）、Ｓｉｅｇｆｒｉｅｄ Ｈａｎｄｅｌ（Ｓｉｅｇｆｒｉｅｄ Ｈａｎｄｅｌ ＡＧ，Ｚｏｆｉｎｇｅｎ，ＳｗｉｔＺｅｒｌａｎｄ）、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）、Ｍａｒｓｈ（Ｍａｒｓｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）、Ｇｅｎｅａｒｔ（Ｇｅｎｅａｒｔ ＧｍｂＨ，Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｂｉｏ−Ｔｅｋ（Ｂｉｏ−Ｔｅｋ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）、（Ｂｉａｃｏｒｅ（Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）、ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ，Ｒｏｃｋｙ Ｈｉｌｌ，ＮＪ）、ＳｙｎＰｅｐ（ＳｙｎＰｅｐ，Ｄｕｂｌｉｎ，ＣＡ）、Ｎｅｗ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ（Ｎｅｗ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ ｂｒａｎｄ、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｒｉｎｇｏｅｓ，ＮＪ）、Ｗａｔｅｒｓ（Ｗａｔｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）、Ｍａｔｒｉｘ Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｍａｔｒｉｘ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）、Ｄｉｏｎｅｘ（Ｄｉｏｎｅｘ，Ｃｏｒｐ．，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）、Ｍｏｎｓａｎｔｏ（Ｍｏｎｓａｎｔｏ Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕ
ｉｓ，ＭＯ）、Ｗｉｎｔｅｒｓｈａｌｌ（Ｗｉｎｔｅｒｓｈａｌｌ ＡＧ，Ｋａｓｓｅｌ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＢＡＳＦ（ＢＡＳＦ Ｃｏ．，Ｆｌｏｒｈａｍ Ｐａｒｋ，ＮＪ）、Ｈｕｎｔｓｍａｎ（Ｈｕｎｔｓｍａｎ Ｐｅｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐ．，Ｓａｌｔ Ｌａｋｅ Ｃｉｔｙ，ＵＴ）、Ｓｈｅｌｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｓｈｅｌｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ）、Ｓｔｅｐａｎ（Ｓｔｅｐａｎ，Ｎｏｒｔｈｆｉｅｌｄ，ＩＬ）、Ｃｌａｒｉａｎｔ（Ｃｌａｒｉａｎｔ，ＳｕｌＺｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｚｅｏｌｉｔｅ（Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｚｅｏｌｉｔｅ Ｌｔｄ．，Ｇｒａｙｓ，Ｅｓｓｅｘ，ＵＫ）、ＪｕｎｇｂｕｎＺｌａｕｅｒ（ＪｕｎｇｂｕｎＺｌａｕｅｒ，Ｂａｓｅｌ，ＳｗｉｔＺｅｒｌａｎｄ）、Ｓｏｌｖａｙ（Ｓｏｌｖａｙ，Ｂｒｕｓｓｅｌｓ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）、３Ｖ Ｓｉｇｍａ（３Ｖ Ｓｉｇｍａ，Ｂｅｒｇａｍｏ，Ｉｔａｌｙ）、Ｉｎｎｏｓｐｅｃ（Ｉｎｎｏｓｐｅｃ，Ｅｌｌｅｓｍｅｒｅ Ｐｏｒｔ，ＵＫ）、Ｔｈｅｒｍｐｈｏｓ（Ｔｈｅｒｍｐｈｏｓ，Ｖｌｉｓｓｉｇｇｅｎ−Ｏｓｔ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）、Ｃｉｂａ Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ（Ｃｉｂａ Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｂａｓｅｌ，ＳｗｉｔＺｅｒｌａｎｄ）、Ｄｏｗ Ｃｏｒｎｉｎｇ（Ｄｏｗ Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｂａｒｒｙ，ＵＫ）、Ｅｎｉｃｈｅｍ（Ｅｎｉｃｈｅｍ Ｉｂｅｒｉｃａ，Ｂａｒｃｅｌｏｎａ，Ｓｐａｉｎ）、Ｆｌｕｋａ Ｃｈｅｍｉｅ ＡＧ（Ｆｌｕｋａ Ｃｈｅｍｉｅ ＡＧ，Ｂｕｃｈｓ，ＳｗｉｔＺｅｒｌａｎｄ）、Ｇｉｓｔ−Ｂｒｏｃａｄｅｓ（Ｇｉｓｔ−Ｂｒｏｃａｄｅｓ，ＮＶ，Ｄｅｌｆｔ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）、Ｄｏｗ Ｃｏｒｎｉｎｇ（Ｄｏｗ Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃｏｒｐ．，Ｍｉｄｌａｎｄ，ＭＩ）、Ｍｅｔｔｌｅｒ−Ｔｏｌｅｄｏ（Ｍｅｔｔｌｅｒ−Ｔｏｌｅｄｏ Ｉｎｃ，Ｃｏｌｕｍｂｕｓ，ＯＨ）、ＲＢ（Ｒｅｃｋｉｔｔ−Ｂｅｎｃｋｉｓｅｒ，Ｓｌｏｕｇｈ，ＵＫ）、及びＭｉｃｒｏｓｏｆｔ（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ，Ｉｎｃ．，Ｒｅｄｍｏｎｄ，ＷＡ）。
本明細書に適用されている例示の洗剤組成物では、酵素濃度は、総組成物の重量に基づいて純粋な酵素により表され、特に指定しない限り、洗剤成分は総組成物の重量に基づいて表される。ここで略された構成成分の名称は、以下の意味を有する：

Figure 2016028571
Figure 2016028571
（上記表の続き）

北アメリカ（ＮＡ）及び西ヨーロッパ（ＷＥ）の強力液体洗濯（ＨＤＬ）洗剤に関しては、予め計量した液体洗剤（ガラス瓶内）を、９５℃のウォーターバスに２時間にわたって配置することで、市販の洗剤中に存在する酵素の加熱不活性化を実施する。ＮＡ及びＷＥの自動食器洗浄（ＡＤＷ：auto dish washing）洗剤を加熱不活性化するためのインキュベート時間は８時間である。不活性化率を正確に測定するために、未加熱及び加熱洗剤のどちらも、洗剤を溶解させて５分以内にアッセイにする。酵素活性はＡＡＰＦアッセイにより試験する。
加熱不活性化した洗剤の酵素活性の試験に関しては、洗剤の希釈標準溶液は加熱不活性化母液から調製した。所望の条件に一致するよう、適切な水硬度（例えば、６ｇｐｇ又は１２ｇｐｇ）及び緩衝剤を洗剤溶液に加える。瓶をボルテックスにかけるか反転させるかして溶液を混合する。以下の表は本明細書で使用される市販の洗剤及び試験条件の一部についての情報を提供する。一部の実験では、追加の及び／又は他の市販の洗剤が以下の実施例で使用されることが見出される。
Figure 2016028571
一部の更なる態様では、以下の溶液の使用が見出される：
Figure 2016028571
実施例は純粋に本発明の例示を目的とするものであり、したがって、決して本発明を限定することを意図するものではなく、また、本発明の上記の態様及び実施形態を記載し、詳述するものである。前述の実施例及び発明を実施するための形態は、実例として提供されるものであり、制限を目的とするものではない。
パートＩ
洗剤の表
パートＩ実施例のアッセイで使用される洗剤の組成を表１−３に示す。ＢＰＮ’変異体タンパク質サンプルを、パートＩ実施例１に記載のような洗剤組成物に添加して、様々な試験特性についてアッセイした。
以下は、タテ型（top-loading）自動洗濯機に好適な液体洗濯洗剤組成物（１、２及び４）並びにドラム式（front loading）洗濯機に好適な液体洗濯洗剤組成物（３）である。

Figure 2016028571

１ ランダムグラフトコポリマーは、ポリエチレンオキシド主鎖と複数のポリビニルアセテート側鎖とを有する、ポリビニルアセテートグラフト化ポリエチレンオキシドコポリマーである。ポリエチレンオキシド主鎖の分子量は約６０００であり、ポリエチレンオキシドとポリビニルアセテートとの重量比は約４０：６０であり、５０個のエチレンオキシド単位当たりのグラフト点は１以下である。
２ −ＮＨにつき２０個のエトキシル基を有するポリエチレンイミン（ＭＷ＝６００）。
３ 両親媒性アルコキシル化グリースクリーニングポリマーは、−ＮＨにつき２４個のエトキシル基、及び−ＮＨにつき１６個のプロポキシル基を有するポリエチレンイミン（ＭＷ＝６００）である。
パートＩ実施例
（実施例１）
アッセイ
以下に示されるような様々なアッセイを用いた。以下に提供されるプロトコルからの任意の派生が、続く実施例に示される。
Ａ．９６ウェルマイクロタイタープレートでタンパク質含量を測定するためのＴＣＡアッセイ。
ＢＰＮ’及びＢＰＮ’変異体に関し、このアッセイは、３３〜３７℃にて、加湿エアレーション下で、２３０〜２５０ｒｐｍで振盪させながら３〜４日増殖させた、マイクロタイタープレートの、枯草菌（B. subtilis）細菌培養上清の濾過物を用いて開始した。新しい９６ウェルの平底マイクロタイタープレート（ＭＴＰ）をアッセイに使用した。最初に、１００μＬ／ウェルの０．２５Ｎ ＨＣｌを各ウェルに配置した。次いで、培養ブロス濾過物２５μＬを加えた。次いで、「ブランク」読み取り値を得るために、４０５ｎｍで光散乱／吸光度（プレートリーダーの５秒混合モードを使用）を測定した。試験のため、１００μＬ／ウェルの３０％（ｗ／ｖ）トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）をプレートに配置し、室温で１０分にわたってインキュベートした。次いで、４０５ｎｍでの光散乱／吸光度（プレートリーダーの５秒混合モードを使用）を測定した。装置はＢｉｏｍｅｋ ＦＸロボット（Beckman Coulter）及びＳｐｅｃｔｒａＭＡＸ（３４０型、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）ＭＴＰリーダーを使用した。ＭＴＰはＣｏｓｔａｒから得た（９０１７型）。
計算は、ＴＣＡを用いる試験読み取り値から、ブランク（ＴＣＡ不使用）を減算することで実施され、サンプル中のタンパク質含量が相対的に測定された。必要に応じて、既知の変換係数を用い、クローンのＡＡＰＦアッセイにより、ＴＣＡ読み取り値を較正することで、検量線を生成することができる。しかしながら、ＴＣＡ結果は１ｍＬあたり２５０〜２５００マイクログラムのタンパク質濃度（ｐｐｍ）に対して直線であることから、良好に機能する変異体を選択するために、酵素性能に対して直接プロットすることができる。サンプルの濁度／光散乱は、培養上清中の沈殿し得る合計タンパク質の量に相関して増加する。
Ｂ．９６ウェルマイクロタイタープレートでのＡＡＰＦプロテアーゼアッセイ
本発明のプロテアーゼ及び変異体のプロテアーゼ活性を測定するために、Ｎ−スクシニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−フェニル−ｐ−ニトロアニリド（ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ）の加水分解を計測した。使用した試薬溶液は、以下のものであった：０．００５％のＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０を含有している１００ｍＭのトリス／ＨＣｌ（ｐＨ ８．６）（トリス希釈緩衝液）、１０ｍＭのＣａＣｌ２及び０．００５％のＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０を含有している１００ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ ８．６）（トリス／Ｃａ緩衝液）、並びに１６０ｍＭのｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ／ＤＭＳＯ（ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ保存溶液）（Ｓｉｇｍａ：Ｓ−７３８８）。ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ希釈標準溶液を調製するために、１ｍＬのｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ原液を１００ｍＬのトリス／Ｃａ緩衝液に加え、少なくとも１０秒にわたってウェルをよく混合した。１０μＬの希釈プロテアーゼ溶液を各ウェルに加え、直ちに１ｍｇ／ｍＬのｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ希釈標準溶液１９０μＬを加えてアッセイを実施した。溶液を５秒にわたって混合し、吸光度の変化を、２５℃にて、４０５ｎｍで、ＭＴＰリーダーの動的解析モードにより読み取りした（５分毎に２５回読み取り）。プロテアーゼ活性はＡＵとして表記される（活性＝ΔＯＤ・ｍｉｎ−１ｍｌ−１）。
Ｃ．ＢＭＩ微小標本アッセイ
血液、ミルク及びインク（ＢＭＩ）のシミをつけた、直径５．５ミリメートルの円形微小標本をＣＦＴから得た。標本を切りだす前に、布地（ＥＭＰＡ １１６）を水で洗浄した。９６ウェル非結合マイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ ３６４１）の各ウェルに微小標本を１つずつ配置した。アッセイに使用した洗剤には、洗剤組成物１、洗剤組成物２及び洗剤組成物４が含まれた。洗剤をミリＱ（脱イオン）水で濃度０．７８８ｇ／Ｌの使用強度に希釈した。５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ ８．２又はｐＨ ７．２）を洗剤に加えることで、これらの洗剤をそれぞれｐＨ ８又はｐＨ ７に緩衝化させた。更に、ガロンあたり６グレイン（ｇｐｇ）の硬度の水（３：１のＣａ：Ｍｇ−ＣａＣｌ２：ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ）を添加した。洗剤溶液を、１６℃でのアッセイのためにアイスウォーターバスで（３２℃でのアッセイのためには室温で）予め平衡化し、循環リザーバ（Ｂｅｃｋｍａｎ ＦＸ）に注入した。次いで、微小標本を含有しているＭＴＰの各ウェルに所望の洗剤溶液１９０μＬを加えた。この混合物に、酵素を希釈した１０μＬのマスター希釈溶液を加え、酵素濃度をおよそ０．４〜０．５μｇ／ｍＬにした。マスター希釈物は培養上清から８μｇ／ｍＬで調製されており、ここで、培養上清及びＢＰＮ’−ｖ３又はＢＰＮ’−ｖ３６親対照の、およその酵素濃度は、既知の濃度の精製ＢＰＮ’−ｖ３又はＢＰＮ’−ｖ３６標準の濃度に基づいて、ＡＡＰＦプロテアーゼ活性アッセイを用いて判定した。ＭＴＰをテープでシールし、冷蔵保管されるサンプルの場合１６℃に予め設定した、又は卓上のサンプルの場合３２℃に予め設定したｉＥＭＳ恒温器／振盪機（Ｔｈｅｒｍｏ／Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ）内に、１４００ｒｐｍで撹拌しながら２０分間定置した。適切な条件下でのインキュベーション後、各プレートからシーリングテープを取り外し、各ウェルから１２５μＬの溶液（より少量を選別するため手作業によりピペット操作を行う場合には１５０μＬ）を新しいＭＴＰ（Ｃｏｒｎｉｎｇ ９０１７）に移した。１２５μＬ〜１５０μＬの溶液／ウェルを含有させた新しいＭＴＰを、ＭＴＰ ＳｐｅｃｔｒａＭａｘリーダー（３４０型、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用い、６００ｎｍで（５秒混合モードのプレートリーダーにより）読み取りした。ブランク対照には微小標本及び洗剤は含有させたが、酵素は含有させなかった。得られた吸光度値をブランク値（酵素を除く基質）について補正し、加水分解活性を測定した。各サンプル（変異体）に関し、性能指数を以下に記載するように算出した。６０°Ｆ（１６℃）及びｐＨ ８にて実施するこのＢＭＩ微小標本アッセイを、本明細書では「試験方法」として参照する。
Ｄ．卵微小標本アッセイ
色素含むＣＳ３８時効処理卵黄でシミを付けた直径５．５ミリメートルの円形綿微小標本をＣＦＴから得た。これらの標本は、水で予めすすがなかった。９６ウェル非結合マイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ ３６４１）の各ウェルに微小標本を１つずつ配置した。洗剤組成物４をミリＱ（脱イオン）水で濃度０．７８８ｇ／Ｌの使用強度に希釈した。５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ ８．２）を洗剤に加えることで、この洗剤をｐＨ ８に緩衝化させた。更に、ガロンあたり６グレイン（ｇｐｇ）の硬度の水（３：１のＣａ：Ｍｇ−ＣａＣｌ２：ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ）を添加した。洗剤溶液を、１６℃でのアッセイのためにアイスウォーターバスで（３２℃でのアッセイのためには室温で）予め平衡化し、循環リザーバ（Ｂｅｃｋｍａｎ ＦＸ）に注入した。次いで、微小標本を含有しているＭＴＰの各ウェルに１８５μＬの所望の洗剤溶液を添加した。この混合物に、酵素を希釈した１５μＬのマスター希釈溶液を加え、反応液中の酵素濃度をおよそ０．６μｇ／ｍＬにした。マスター希釈物は培養上清から８μｇ／ｍＬで調製されており、ここで、培養上清及びＢＰＮ’−ｖ３又はＢＰＮ’−ｖ３６親対照の、およその酵素濃度は、既知の濃度の精製ＢＰＮ’−ｖ３又はＢＰＮ’−ｖ３６標準の濃度に基づいて、ＡＡＰＦプロテアーゼ活性アッセイを用いて判定した。ＭＴＰをテープでシールし、冷蔵保管されるサンプルの場合１６℃に予め設定した、又は卓上のサンプルの場合３２℃に予め設定したｉＥＭＳ恒温器／振盪機（Ｔｈｅｒｍｏ／Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ）内に、１４００ｒｐｍで撹拌しながら３０分間定置した。適切な条件下でのインキュベーション後、各プレートからシーリングテープを取り外し、各ウェルから１２５μＬの溶液（より少量を選別するため手作業によりピペット操作を行う場合には１５０μＬ）を新しいＭＴＰ（Ｃｏｒｎｉｎｇ ９０１７）に移した。１２５μＬ〜１５０μＬの溶液／ウェルを含有させた新しいＭＴＰを、ＭＴＰ ＳｐｅｃｔｒａＭａｘリーダー（３４０型、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用い、４０５ｎｍで（５秒混合モードのプレートリーダーにより）読み取りした。ブランク対照には微小標本及び洗剤は含有させたが、酵素は含有させなかった。得られた吸光度値をブランク値（酵素を除く基質）について補正し、加水分解活性を測定した。各サンプル（変異体）に関し、性能指数を以下に記載するように算出した。
Ｅ．植物微小標本アッセイ
ＷａｒｗｉｃｋからＷａｒｗｉｃｋ Ｅｑｕｅｓｔの植物を擦りつけた織布綿標本を得た。これらの標本は、９６ウェル非結合マイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ ３６４１）の各ウェルに１つの微小標本を配置する特注９６ウェル押し抜き機を用いて、５．５ミリメートル直径の円形微小標本に切断された。標本の切断後、この布地を、水で希釈した５０％使用強度の洗剤組成物４をウェルあたり１００μＬ用いてウェルの中で洗浄した（予洗いした）。１００μＬの５０％の洗剤予洗い液により２０分間予洗いした後、予洗い液を手操作により注意深くピペッティングして除去した。洗剤組成物４をミリＱ（脱イオン）水で濃度０．７８８ｇ／Ｌの使用強度に希釈した。５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ ８．２）を洗剤に加えることで、これらの洗剤をｐＨ ８に緩衝化させた。更に、ガロンあたり６グレイン（ｇｐｇ）の硬度の水（３：１のＣａ：Ｍｇ−ＣａＣｌ２：ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ）を添加した。洗剤溶液を、１６℃でのアッセイのためにアイスウォーターバスで（３２℃でのアッセイのためには室温で）予め平衡化した。次に、予洗いの完了後、直ちに１８０μＬの所望の洗剤溶液を、微小標本を含有するＭＴＰの各ウェルに添加した。この混合物に、希釈した酵素のマスター希釈液を２０μＬ加え、反応時酵素濃度をおよそ０．８μｇ／ｍＬにした。マスター希釈物は培養上清から８μｇ／ｍＬで調製されており、ここで、培養上清及びＢＰＮ’−ｖ３６親対照の、およその酵素濃度は、既知の濃度の精製ＢＰＮ’−ｖ３６標準の濃度に基づいて、ＡＡＰＦプロテアーゼ活性アッセイを用いて判定した。ＭＴＰをテープでシールし、冷蔵保管されるサンプルの場合１６℃に予め設定した、又は卓上のサンプルの場合３２℃に予め設定したｉＥＭＳ恒温器／振盪機（Ｔｈｅｒｍｏ／Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ）内に、１４００ｒｐｍで撹拌しながら３０分間定置した。適切な条件下でのインキュベーション後、各プレートからシーリングテープを取り外し、各ウェルから１２５μＬの溶液（より少量を選別するため手作業によりピペット操作を行う場合には１５０μＬ）を新しいＭＴＰ（Ｃｏｒｎｉｎｇ ９０１７）に移した。１２５μＬ〜１５０μＬの溶液／ウェルを含有させた新しいＭＴＰを、ＭＴＰ ＳｐｅｃｔｒａＭａｘリーダー（３４０型、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用い、４３０ｎｍ及び６７０ｎｍの両方で（５秒混合モードのプレートリーダーにより）読み取りした。ブランク対照には微小標本及び洗剤は含有させたが、酵素は含有させなかった。得られた吸光度値をブランク値（酵素を除く基質）について補正し、加水分解活性を測定した。各サンプル（変異体）に関し、性能指数を以下に記載するように算出した。
Ｆ．安定性アッセイ
水に希釈した４０％の濃洗剤組成物３の存在下で、プロテアーゼ変異体の安定性を測定した。試薬は、ミリＱ水で５０％に希釈した洗剤組成物３、１０ｍＭのＭＥＳ ０．０１％ ＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０（ｐＨ ５．８）マスター希釈緩衝液、ＡＡＰＦ試薬を使用した：ＡＡＰＦアッセイのプロトコルを参照されたい。装置は、希釈酵素を洗剤に希釈するための平底ＭＴＰ（Ｃｏｒｎｉｎｇ ９０１７）、並びにｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡプレート、Ｂｉｏｍｅｋ ＦＸ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ Ｐｌｕｓ３８４ ＭＴＰリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）、ｉＥＭＳ恒温器／振盪機（１ｍｍ振幅）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、シーリングテープ：Ｎｕｎｃ（２３６３６６）、循環リザーバ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｆｘ）を使用した。
まず始めに洗剤組成物３を水で５０％に希釈する。この洗剤を室温に維持し、循環リザーバを循環させた。ｉＥＭＳ恒温器／振盪機（Ｔｈｅｒｍｏ／Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ）を予め４３℃に設定した。マスター希釈緩衝液を含有させたプレートで、培養上清を約２０ｐｐｍの濃度に希釈した（マスター希釈プレート）。次いで、５０％洗剤組成物３を１６０μＬ含有しているプレートに、マスター希釈プレートから４０μＬのサンプルを加え、最終インキュベーション濃度４ｐｐｍを得た。含有物を混合し、室温で維持し、これらのプレートで三組ＡＡＰＦアッセイを直ちに実施して、ストレス負荷していない読み取り値として記録した。上記工程のサンプル２０μＬを１９０μＬのｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ希釈標準溶液に加えるようＡＡＰＦアッセイを改変した。プレートを直ちにシーリングテープで覆い、４３℃のｉＥＭＳ震盪機に、６５０ｒｐｍにて３０分の間配置した。３０分間インキュベーションした後、これらのストレス負荷プレートで三組ＡＡＰＦアッセイを実施し、ストレス負荷した場合の読み取り値を記録した。次のように残留及び開始ＡＡＰＦ比を算出することにより、サンプルの安定性を測定した：残効性（％）＝［ｍＯＤ．ｍｉｎ−１ストレス負荷］＊１００／［ｍＯＤ．ｍｉｎ−１ストレス未負荷］各サンプル（変異体）に関し、性能指数を以下に記載するように算出した。
Ｇ．ＬＡＳ／ＥＤＴＡ安定性アッセイ
代表的なアニオン性界面活性剤（ＬＡＳ＝直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、具体的には、ドデシルベンゼン硫酸ナトリウムＤＯＢＳ）及びＥＤＴＡ二ナトリウムの存在下でのプロテアーゼ変異体の安定性を、所定の条件下でのインキュベーション後に測定し、ＡＡＰＦアッセイを用いて残効性を測定した。試薬は、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム塩（ＤＯＢＳ，Ｓｉｇｍａ Ｎｏ．Ｄ−２５２５）、ＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０（Ｓｉｇｍａ Ｎｏ．Ｐ−８０７４）、ＥＤＴＡ二ナトリウム（Ｓｉｅｇｆｒｉｅｄ Ｈａｎｄｅｌ Ｎｏ．１６４５９９−０２）、ＨＥＰＥＳ（Ｓｉｇｍａ Ｎｏ．Ｈ−７５２３）、未負荷緩衝液：５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（１１．９ｇ／Ｌ）＋０．００５％ ＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０（ｐＨ ８．０）、負荷緩衝液：５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（１１．９ｇ／Ｌ）、０．１％（ｗ／ｖ）ＤＯＢＳ（１ｇ／Ｌ）、１０ｍＭのＥＤＴＡ（３．３６ｇ／Ｌ）（ｐＨ ８．０）、参照プロテアーゼ及びプロテアーゼ変異体培養上清（２００〜４００μｇ／ｍＬのタンパク質を含有）を使用した。装置は、希釈プレートとしてＶ又はＵ底ＭＴＰ（それぞれＧｒｅｉｎｅｒ ６５１１０１及び６５０１６１）、未負荷及びＬＡＳ／ＥＤＴＡ緩衝液用平底ＭＴＰ（Ｃｏｒｎｉｎｇ ９０１７）、並びにｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡプレート、Ｂｉｏｍｅｋ ＦＸ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ Ｐｌｕｓ ３８４ ＭＴＰリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）、ｉＥＭＳ恒温器／振盪機（１ｍｍ振幅）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、及びＮｕｎｃシーリングテープ（２３６３６６）を使用した。
ｉＥＭＳ恒温器／振盪機（Ｔｈｅｒｍｏ／Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ）は２９℃に設定した。培養上清を、未負荷緩衝液を含有しているプレートで約２５ｐｐｍ濃度に希釈した（マスター希釈プレート）。次いで、マスター希釈プレートから、２０μＬのサンプルを、未負荷緩衝液を１８０μＬ含有しているプレートに加え、最終インキュベーション濃度２．５ｐｐｍを得た。含有物を混合し、室温で維持し、このプレートでＡＡＰＦアッセイを実施した。次いで、マスター希釈プレートから、２０μＬのサンプルを、１８０μＬ負荷緩衝液（５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（１１．９ｇ／Ｌ）、０．１％（ｗ／ｖ）ＤＯＢＳ（１ｇ／Ｌ）、１０ｍＭのＥＤＴＡ（３．３６ｇ／Ｌ）（ｐＨ ８．０））を含有しているプレートに加えた。溶液を混合し、直ちに、２９℃のｉＥＭＳ震盪機に４００ｒｐｍで３０分間配置した。３０分インキュベーションした後、ＡＡＰＦアッセイを負荷プレートで実施した。次のように残留及び開始ＡＡＰＦ比を算出することにより、サンプルの安定性を測定した：残効性（％）＝［ｍＯＤ．ｍｉｎ−１ストレス負荷］＊１００／［ｍＯＤ．ｍｉｎ−１ストレス未負荷］各サンプル（変異体）に関し、性能指数を以下に記載するように算出した。
性能指数
性能指数により、同じタンパク質濃度下での変異体の性能（実測値）と標準又は参照プロテアーゼ酵素の性能（理論値）との比較が得られる。理論値は、標準／参照プロテアーゼの性能−用量応答曲線（performance dose response curve）のパラメーターを用いて（すなわちラングミュア等式を用いて性能曲線を生成することで）算出することができる。性能指数（ＰＩ）が１超（ＰＩ＞１）の場合は、標準又は参照プロテアーゼ（例えば、野生型プロテアーゼ又はその他のプロテアーゼ変異体であり得る）と比較したときに、変異体がより良好なものであることが特定され、一方でＰＩが１（ＰＩ＝１）である場合は、変異体が標準又は参照プロテアーゼと同様に機能することが特定され、及びＰＩが１未満（ＰＩ＜１）の場合は、変異体の機能性が標準又は参照プロテアーゼよりも悪いことが特定される。したがって、ＰＩは、優れた変異体（例えば、標準／参照プロテアーゼと比較してタンパク質分解活性がより強い変異体）、並びに特定の状況下での使用が望ましくない変異体（例えば、標準／参照プロテアーゼよりもタンパク質分解活性が低い変異体）を特定する。
参照又は標準プロテアーゼよりも性能指数の値が小さい本発明のプロテアーゼ変異体は、値の小ささにも関わらず本明細書に記載の用途及び方法で有用であることに留意することが重要である。例えば、タンパク質分解活性を有する参照又は標準プロテアーゼよりも性能指数が低い本発明のプロテアーゼ変異体は、本発明の組成物、例えば限定するものではないが、例えば、様々な表面及び物品（例えば、洗濯物、布地、及び食卓用食器類、及びパーソナルケア用品及び組成物が含まれるが挙げられるがこれらに限定されない）などをクリーニングするためのクリーニング組成物（限定するものではないが、例えば、洗剤クリーニング組成物が挙げられる）並びにパーソナルケア用適用物及び本明細書に記載されるような組成物に使用するのに有用であり、このようなプロテアーゼ変異体は、同様に本明細書に記載される布地ケア製品及びホームケア製品及び組成物、並びに布地ケア及びホームケア用ではない製品及び組成物、並びに本発明の方法（限定するものではないが、例えば、本明細書に記載されるクリーニング方法、パーソナルケアの方法など）にも有用である。
以下に示される様々な用語は変異体を記載するために使用される：有害でない変異体はＰＩ＞０．０５であり、有害な変異体はＰＩが０．０５以下であり、組み合わせ可能な変異体は少なくとも１つの特性について性能指数が０．２以上であり、すべての特性について＞０．０５である。組み合わせ可能な変異体は、１つ以上の所望の特性について適切な性能指数を有する送達タンパク質と組み合わせることができる。これらのデータは、任意のスブチリシン／サブチラーゼ又はプロテアーゼを設計するために使用される。サブチラーゼ又はプロテアーゼが、１つ以上の特定の位置でスブチリシンＢＰＮ’と異なるアミノ酸を有するように設計された場合でさえも、これらのデータは、ＢＰＮ’野生型アミノ酸の置換を含む最良の置換の選択を特定することにより、所望の特性を変更するアミノ酸置換を特定するのに使用される。
（実施例２）
ＢＰＮ’ライブラリの構築及びＢＰＮ’変異体のクリーニング性能
ａ）ライブラリ構築に使用されるＢＰＮ’−ｖ３発現カセットの説明
コンビナトリアルライブラリの構築に使用されるＢＰＮ’−ｖ３（Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ置換を含有するＢＰＮ’プロテアーゼ）発現カセットは、ａｐｒＥ−ＢＰＮ’ハイブリッドリーダー配列（すなわち、シグナル配列）、バチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）由来のＢＰＮ’プロ及びＢＰＮ’成熟配列を含む、ＢＰＮ’発現カセットを用いて作成された。ＤＮＡ配列を以下に配列番号１として示し、ＢＰＮ’前駆タンパク質をコードしている配列を以下に配列番号１６８として示す。
配列表１
Figure 2016028571
配列番号１のヌクレオチド配列において、成熟型プロテアーゼをコードしているＤＮＡ配列を太字で示し、リーダー配列（ａｐｒＥ−ＢＰＮ’ハイブリッドリーダー配列）をコードしているヌクレオチド配列は標準テキスト（下線なし）で示し、及びプロ配列（ＢＰＮ’）をコードしているヌクレオチド配列には下線を付する。配列番号１６８にＢＰＮ’前駆タンパク質のアミノ酸配列（ａｐｒＥ−ＢＰＮ’ハイブリッドリーダー配列、ＢＰＮ’プロ配列、及びＢＰＮ’成熟タンパク質の配列）を示す。太字の箇所は成熟スブチリシンＢＰＮ’プロテアーゼを示す。
配列表２
Figure 2016028571
したがって、成熟スブチリシンＢＰＮ’プロテアーゼのアミノ酸配列は、以下である：
ＡＱＳＶＰＹＧＶＳＱＩＫＡＰＡＬＨＳＱＧＹＴＧＳＮＶＫＶＡＶＩＤＳＧＩＤＳＳＨＰＤＬＫＶＡＧＧＡＳＭＶＰＳＥＴＮＰＦＱＤＮＮＳＨＧＴＨＶＡＧＴＶＡＡＬＮＮＳＩＧＶＬＧＶＡＰＳＡＳＬＹＡＶＫＶＬＧＡＤＧＳＧＱＹＳＷＩＩＮＧＩＥＷＡＩＡＮＮＭＤＶＩＮＭＳＬＧＧＰＳＧＳＡＡＬＫＡＡＶＤＫＡＶＡＳＧＶＶＶＶＡＡＡＧＮＥＧＴＳＧＳＳＳＴＶＧＹＰＧＫＹＰＳＶＩＡＶＧＡＶＤＳＳＮＱＲＡＳＦＳＳＶＧＰＥＬＤＶＭＡＰＧＶＳＩＱＳＴＬＰＧＮＫＹＧＡＹＮＧＴＳＭＡＳＰＨＶＡＧＡＡＡＬＩＬＳＫＨＰＮＷＴＮＴＱＶＲＳＳＬＥＮＴＴＴＫＬＧＤＳＦＹＹＧＫＧＬＩＮＶＱＡＡＡＱ（配列番号２）
成熟ＢＰＮ’−ｖ３遺伝子のヌクレオチド配列は、以下に示される（ＢＰＮ’−ｖ３発現カセットで使用されるシグナル配列及びプロペプチド配列は、配列番号１に示されるＢＰＮ’と同様である）：
ＧＣＧＣＡＧＴＣＣＧＴＧＣＣＴＴＡＣＧＧＣＧＴＡＴＣＡＣＡＡＡＴＴＡＡＡＧＣＣＣＣＴＧＣＴＣＴＧＣＡＣＴＣＴＣＡＡＧＧＣＴＡＣＡＣＴＧＧＡＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡＡＡＧＴＡＧＣＧＧＴＴＡＴＣＧＡＣＡＧＣＧＧＴＡＴＣＧＡＣＴＣＧＡＧＣＣＡＴＣＣＡＧＡＴＣＴＴＡＡＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＣＧＴＣＣＧＡＡＡＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＴＣＡＡＧＡＴＡＡＣＡＡＴＴＣＴＣＡＴＧＧＣＡＣＡＣＡＣＧＴＣＧＣＡＧＧＡＡＣＧＧＴＴＧＣＧＧＣＧＴＴＡＡＡＣＡＡＴＴＣＴＡＴＴＧＧＣＧＴＧＣＴＴＧＧＴＧＴＡＧＣＣＣＣＧＴＣＴＧＣＴＴＣＧＣＴＣＴＡＣＧＣＣＧＴＴＡＡＡＧＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＡＧＡＣＧＧＡＴＣＡＧＧＣＣＡＡＴＡＣＴＣＡＴＧＧＡＴＴＡＴＣＡＡＣＧＧＣＡＴＣＧＡＡＴＧＧＧＣＣＡＴＣＧＣＧＡＡＴＡＡＣＡＴＧＧＡＴＧＴＡＡＴＣＡＡＣＡＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＣＧＧＣＡＣＴＴＡＡＡＧＣＡＧＣＡＧＴＴＧＡＴＡＡＡＧＣＴＧＴＴＧＣＡＴＣＴＧＧＴＧＴＣＧＴＣＧＴＡＧＴＡＧＣＧＧＣＡＧＣＴＧＧＧＡＡＴＧＡＧＧＧＡＡＣＡＴＣＣＧＧＡＴＣＡＴＣＧＡＧＴＡＣＣＧＴＣＧＧＴＴＡＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＴＡＣＣＣＴＴＣＡＧＴＧＡＴＴＧＣＡＧＴＧＧＧＣＧＣＴＧＴＡＧＡＣＴＣＴＴＣＡＡＡＴＣＡＡＣＧＴＧＣＣＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＣＣＧＴＧＧＧＡＣＣＧＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＴＣＡＴＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＧＴＴＴＣＴＡＴＴＣＡＡＴＣＧＡＣＧＣＴＴＣＣＡＧＧＧＡＡＣＡＡＧＴＡＴＧＧＴＧＣＧＣＡＡＡＡＣＧＧＧＡＣＴＴＣＣＡＴＧＧＣＣＴＣＧＣＣＧＣＡＴＧＴＡＧＣＴＧＧＧＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＡＧＣＡＣＣＣＧＡＡＣＴＧＧＡＣＡＡＡＣＡＣＴＣＡＡＧＴＣＣＧＣＡＧＣＡＧＴＴＴＡＧＡＡＡＡＣＡＣＣＡＣＴＡＣＡＡＡＡＣＴＴＧＧＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＣＴＡＴＧＧＡＡＡＡＧＧＧＣＴＧＡＴＣＡＡＣＧＴＡＣＡＧＧＣＧＧＣＡＧＣＴＣＡＧ（配列番号３）
成熟ＢＰＮ’−ｖ３プロテアーゼ変異体のタンパク質配列は、以下に示される（ＢＰＮ’−ｖ３発現カセットで使用されるシグナル配列及びプロペプチド配列は、配列番号１６８に示されるＢＰＮ’と同じである）：
ＡＱＳＶＰＹＧＶＳＱＩＫＡＰＡＬＨＳＱＧＹＴＧＳＮＶＫＶＡＶＩＤＳＧＩＤＳＳＨＰＤＬＫＶＡＧＧＡＳＭＶＰＳＥＴＮＰＦＱＤＮＮＳＨＧＴＨＶＡＧＴＶＡＡＬＮＮＳＩＧＶＬＧＶＡＰＳＡＳＬＹＡＶＫＶＬＡＡＤＧＳＧＱＹＳＷＩＩＮＧＩＥＷＡＩＡＮＮＭＤＶＩＮＭＳＬＧＡＰＳＧＳＡＡＬＫＡＡＶＤＫＡＶＡＳＧＶＶＶＶＡＡＡＧＮＥＧＴＳＧＳＳＳＴＶＧＹＰＧＫＹＰＳＶＩＡＶＧＡＶＤＳＳＮＱＲＡＳＦＳＳＶＧＰＥＬＤＶＭＡＰＧＶＳＩＱＳＴＬＰＧＮＫＹＧＡＱＮＧＴＳＭＡＳＰＨＶＡＧＡＡＡＬＩＬＳＫＨＰＮＷＴＮＴＱＶＲＳＳＬＥＮＴＴＴＫＬＧＤＳＦＹＹＧＫＧＬＩＮＶＱＡＡＡＱ（配列番号４）
ｂ）ｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’−ｖ３プラスミドを用いるコンビナトリアルライブラリの構築
上記のＢＰＮ’−ｖ３発現カセットを含有しているｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’−ｖ３プラスミド（図１を参照されたい）を、クローニング用のテンプレートＤＮＡとして使用して、ＢＰＮ’−ｖ３から誘導された変異体を得た。ベクターｐＨＰＬＴ（米国特許第６，５６６，１１２号、図４）は、バチルス・リケニホルミス（B. licheniformis）ＬＡＴプロモーター（「Ｐｌａｔ」）と、ＬＡＴシグナルペプチドをコードしている配列（「プレＬＡＴ」）を含有する。プラスミドｐＵＢ１１０に由来する更なるプラスミド成分はＭｃＫｅｎＺｉｅ ｅｔ ａｌ．、Ｐｌａｓｍｉｄ １５（２）：９３〜１０３（１９８６）に開示されている：「ｏｒｉ−ｐＵＢ」はｐＵＢ１１０の複製起点であり「ｎｅｏ」はｐＵＢ１１０に由来するネオマイシン／カナマイシン耐性遺伝子であり、「終結領域」はバチルス・リケニホルミス（B. licheniformis）のアミラーゼの転写終結領域である。
コンビナトリアルなＤＮＡライブラリはＤＮＡ ２．０で合成され、個々のライゲーション反応物として供給された。枯草菌（B. subtilis）の効率的な形質転換については、場合によっては、Ｉｌｌｕｓｔｒａ Ｔｅｍｐｌｉｐｈｉキット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いるローリング・サークル型増幅（ＲＣＡ）により、ライゲーション反応混合物からＤＮＡを増幅させた。反応は製造元のプロトコルに従って実施した。１マイクロリットルの、１０倍希釈した増幅ＤＮＡを使用して、コンピテントな枯草菌（B. subtilis）細胞（ΔａｐｒＥ，ΔｎｐｒＥ，ａｍｙＥ：：ｘｙｌＲＰｘｙｌＡｃｏｍＫ−ｐｈｌｅｏ）５０μＬを形質転換させた。形質転換混合物を３７℃にて１時間にわたって振盪した。形質転換混合物の１０マイクロリットルアリコートを、１０μｇ／ｍＬのネオマイシン（Ｔｅｋｎｏｖａ）を添加したスキムミルク（１．６％）Ｌｕｒｉａ寒天プレートに蒔いた。
スキムミルクプレート上でハローを形成した形質転換体をつつき、１０μｇ／ｍＬのネオマイシンを添加した１５０μＬのルリアブロス（ＬＢ）培地を含有しているマイクロタイタープレートに植菌した。マイクロタイタープレートにＥｎｚｙｓｃｒｅｅｎ ｌｉｄ（Ｅｎｚｙｓｃｒｅｅｎ）を用い、プレートを３７℃、７０〜８０％湿度にて、２５０〜３００ｒｐｍで振盪させながら一晩増殖させた。一晩培養したプレートを使用し、９６ピンの複製ツール（Ｅｎｚｙｓｃｒｅｅｎ）を用いて、２．５μｇ／ｍＬのネオマイシンを添加した１８０μＬのＭＢＤ培地（ＭＯＰＳ系合成培地）を含有している新しいマイクロタイタープレートに接種した。ＮＨ４Ｃｌ２、ＦｅＳＯ４、及びＣａＣｌ２を基本培地から除外したこと、３ｍＭのＫ２ＨＰＯ４を用いたこと、並びに、６０ｍＭの尿素、及び、２１０ｇ／Ｌのグルコースと３５０ｇ／Ｌのマルトデキストリンとから作製した１００ｍＬの溶液を含有させたこと、を除き、ＭＢＤ培地は本質的に当該技術分野において既知であるように調製した１ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１１９：７３６〜７４７［１９７４］を参照されたい）。１ｇ／ＬのＢＤバクト酵母抽出物を添加し、ＫＯＨでｐＨを７．４に調整した。微量栄養素は、４００ｍｇのＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、１００ｍｇのＭｎＳＯ４・Ｈ２Ｏ、１００ｍｇのＺｎＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、５０ｍｇのＣｕＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、１００ｍｇのＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、１００ｍｇのＮａＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ、１００ｍｇのＮａ２Ｂ４Ｏ７・１０Ｈ２Ｏ、１０ｍＬの１Ｍ ＣａＣｌ２及び１０ｍＬの０．５Ｍの０．５Ｍのクエン酸ナトリウムを１リットル中に含有している、１００Ｘ原液として調製した。プロテアーゼ変異体を発現させるために、Ｅｎｚｙｓｃｒｅｅｎ ｌｉｄｓ（Ｅｎｚｙｓｃｒｅｅｎ）を用いて、ＭＢＤ培地を含有しているマイクロタイタープレートで、３７℃、７０〜８０％湿度にて、２５０〜３００ｒｐｍで、６４時間にわたって増殖させた。翌日、培養物をマイクロフィルタプレート（０．２２ｕｍ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で濾過し、プロテアーゼ変異体を含有している得られた濾液を生化学的解析に使用した。
１６℃及びｐＨ ８での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本アッセイ、並びに１６℃及びｐＨ ８での洗剤組成物２のＢＭＩ微小標本アッセイを用いて、プロテアーゼ変異体をクリーニング性能について試験した。タンパク質含量はＴＣＡアッセイを用いて測定した。実施例１に記載のようにアッセイを実施し、ＢＰＮ’−ｖ３（ＰＩ値１．０を有する）と比較して性能指数を算出した。
以下のスブチリシンＢＰＮ’プロテアーゼ変異体（：アミノ酸置換Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，の組を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２））は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３（配列番号４）と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２〜約５、又は、１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、このＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいてＢＰＮ’−ｖ３に対し１．１であるＰＩ値を有し、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’のＰＩ値よりも大きいＰＩ値を有する。本発明には、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有するプロテアーゼ変異体を含み、この変異体はアミノ酸置換Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，を含むアミノ酸配列を有し、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。本アッセイにおいて、配列番号２と比較して向上したタンパク質分解活性を有するプロテアーゼ変異体も包含され、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸置換Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいはＢＰＮ’（配列番号２）及び／又はＢＰＮ’−ｖ３のＰＩ値を超えるＰＩ値を有する、スブチリシンプロテアーゼ変異体も提供され、この変異体は配列番号２と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、この変異体は、置換Ｘ０９７Ａ−Ｘ１２８Ａ−Ｘ２１０Ｓ−Ｘ２１７Ｑ，を含み、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされ、選択的に、この変異体はＧ０９７Ａ，Ｇ１２８Ａ，Ｐ２１０Ｓ，及びＹ２１７Ｑの群から選択される少なくとも１つの置換を含む。このようなプロテアーゼ変異体は、単離物、組み換え体、実質的な純品、又は天然に生じたものではないプロテアーゼ変異体であり得る。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、このようなプロテアーゼ変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、このような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｅ１５６Ｓ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２１８Ａ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２１８Ｓ，及びＧ０９７Ａ−Ｙ１０４Ｆ−Ｇ１２８Ａ−Ｅ１５６Ｓ−Ｐ２１０Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、スブチリシンプロテアーゼ変異体も提供され、この変異体は配列番号２に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、この変異体はＸ０９７Ａ，Ｘ１０４Ｆ，Ｘ１２８Ａ，Ｘ１５６Ａ／Ｓ、Ｘ２１０Ｉ／Ｓ、Ｘ２１７Ｑ，Ｘ２１８Ａ／Ｓの群から選択される少なくとも１つの置換を含み、選択的に、Ｇ０９７Ａ，Ｙ１０４Ｆ，Ｇ１２８Ａ，Ｅ１５６Ａ／Ｓ、Ｐ２１０Ｉ／Ｓ、Ｙ２１７Ｑ，及びＮ２１８Ａ／Ｓの群から選択される少なくとも１つの置換を含み、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｅ１５６Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２１８Ｓ及びＧ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２１８Ａ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有する、並びに／又はＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並びに上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２１８Ａ及びＧ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物２のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．８、少なくとも１．９〜約５のＰＩ値を有する、スブチリシンプロテアーゼ変異体も提供され、この変異体は配列番号２に対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、この変異体は、Ｘ０９７Ａ，Ｘ１０４Ｆ，Ｘ１２８Ａ，Ｘ１５６Ａ／Ｓ、Ｘ２１０Ｉ／Ｓ、Ｘ２１７Ｑ，Ｘ２１８Ａ／Ｓの群から選択される少なくとも１つの置換を含み、選択的に、Ｇ０９７Ａ，Ｙ１０４Ｆ，Ｇ１２８Ａ，Ｅ１５６Ａ／Ｓ、Ｐ２１０Ｉ／Ｓ、Ｙ２１７Ｑ，及びＮ２１８Ａ／Ｓの群から選択される少なくとも１つの置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ（すなわち、ＢＰＮ’−ｖ３）、Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｅ１５６Ｓ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，及びＧ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２１８Ｓ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物２のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並びに上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｅ１５６Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２１８Ａ，及びＧ０９７Ａ−Ｙ１０４Ｆ−Ｇ１２８Ａ−Ｅ１５６Ｓ−Ｐ２１０Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物２のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並びに、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
（実施例３）
コンビナトリアルライブラリの作成及び変異体ＢＰＮ’−ｖ３＋Ｓ７８Ｎのクリーニング性能
ａ）ＢＰＮ’−ｖ３＋Ｓ７８Ｎ変異体及びこの変異体から誘導される合成遺伝子配列の説明
Ｇｅｎｅ Ｏｒａｃｌｅは、８つの遺伝子を合成し、ｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’−ｖ３＋Ｓ７８Ｎ（ＢＰＮ’−Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ）親プラスミド（図２を参照されたい）にクローン化した。これらの遺伝子のうちいくつかをテンプレート（親）として使用し、コンビナトリアルライブラリを作成した。当該技術分野において既知の標準的な分子生物学的手法を用いてＢＰＮ’−ｖ３＋Ｓ７８Ｎ変異体を生成した。ＢＰＮ’−ｖ３＋Ｓ７８Ｎ変異体をコードするヌクレオチド配列を以下に示す。
ＧＣＧＣＡＧＴＣＣＧＴＧＣＣＴＴＡＣＧＧＣＧＴＡＴＣＡＣＡＡＡＴＴＡＡＡＧＣＣＣＣＴＧＣＴＣＴＧＣＡＣＴＣＴＣＡＡＧＧＣＴＡＣＡＣＴＧＧＡＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡＡＡＧＴＡＧＣＧＧＴＴＡＴＣＧＡＣＡＧＣＧＧＴＡＴＴＧＡＴＴＣＧＡＧＣＣＡＴＣＣＡＧＡＴＣＴＴＡＡＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＣＧＴＣＣＧＡＡＡＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＴＣＡＡＧＡＴＡＡＣＡＡＴＴＣＴＣＡＴＧＧＣＡＣＡＣＡＣＧＴＣＧＣＡＧＧＡＡＣＧＧＴＴＧＣＧＧＣＧＴＴＡＡＡＣＡＡＴＡＡＴＡＴＴＧＧＣＧＴＧＣＴＴＧＧＴＧＴＡＧＣＣＣＣＧＴＣＴＧＣＴＴＣＧＣＴＣＴＡＣＧＣＣＧＴＴＡＡＡＧＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＡＧＡＣＧＧＡＴＣＡＧＧＣＣＡＡＴＡＣＴＣＡＴＧＧＡＴＴＡＴＣＡＡＣＧＧＣＡＴＣＧＡＡＴＧＧＧＣＣＡＴＣＧＣＧＡＡＴＡＡＣＡＴＧＧＡＴＧＴＡＡＴＣＡＡＣＡＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＣＧＧＣＡＣＴＴＡＡＡＧＣＡＧＣＡＧＴＴＧＡＴＡＡＡＧＣＴＧＴＴＧＣＡＴＣＴＧＧＴＧＴＣＧＴＣＧＴＡＧＴＡＧＣＧＧＣＡＧＣＴＧＧＧＡＡＴＧＡＧＧＧＡＡＣＡＴＣＣＧＧＡＴＣＡＴＣＧＡＧＴＡＣＣＧＴＣＧＧＴＴＡＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＴＡＣＣＣＴＴＣＡＧＴＧＡＴＴＧＣＡＧＴＧＧＧＣＧＣＴＧＴＡＧＡＣＴＣＴＴＣＡＡＡＴＣＡＡＣＧＴＧＣＣＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＣＣＧＴＧＧＧＡＣＣＧＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＴＣＡＴＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＧＴＴＴＣＴＡＴＴＣＡＡＴＣＧＡＣＧＣＴＴＣＣＡＧＧＧＡＡＣＡＡＧＴＡＴＧＧＴＧＣＧＣＡＡＡＡＣＧＧＧＡＣＴＴＣＣＡＴＧＧＣＣＴＣＧＣＣＧＣＡＴＧＴＡＧＣＴＧＧＧＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＡＧＣＡＣＣＣＧＡＡＣＴＧＧＡＣＡＡＡＣＡＣＴＣＡＡＧＴＣＣＧＣＡＧＣＡＧＴＴＴＡＧＡＡＡＡＣＡＣＣＡＣＴＡＣＡＡＡＡＣＴＴＧＧＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＣＴＡＴＧＧＡＡＡＡＧＧＧＣＴＧＡＴＣＡＡＣＧＴＡＣＡＧＧＣＧＧＣＡＧＣＴＣＡＧ（配列番号７）
ＢＰＮ’−ｖ３＋Ｓ７８Ｎ変異体のアミノ酸配列を以下に示す。
ＡＱＳＶＰＹＧＶＳＱＩＫＡＰＡＬＨＳＱＧＹＴＧＳＮＶＫＶＡＶＩＤＳＧＩＤＳＳＨＰＤＬＫＶＡＧＧＡＳＭＶＰＳＥＴＮＰＦＱＤＮＮＳＨＧＴＨＶＡＧＴＶＡＡＬＮＮＮＩＧＶＬＧＶＡＰＳＡＳＬＹＡＶＫＶＬＡＡＤＧＳＧＱＹＳＷＩＩＮＧＩＥＷＡＩＡＮＮＭＤＶＩＮＭＳＬＧＡＰＳＧＳＡＡＬＫＡＡＶＤＫＡＶＡＳＧＶＶＶＶＡＡＡＧＮＥＧＴＳＧＳＳＳＴＶＧＹＰＧＫＹＰＳＶＩＡＶＧＡＶＤＳＳＮＱＲＡＳＦＳＳＶＧＰＥＬＤＶＭＡＰＧＶＳＩＱＳＴＬＰＧＮＫＹＧＡＱＮＧＴＳＭＡＳＰＨＶＡＧＡＡＡＬＩＬＳＫＨＰＮＷＴＮＴＱＶＲＳＳＬＥＮＴＴＴＫＬＧＤＳＦＹＹＧＫＧＬＩＮＶＱＡＡＡＱ（配列番号８）
遺伝子ＧｃＭ９０−９６及びＧｃＭ１００の、ヌクレオチド配列及びタンパク質配列を以下に示す。合成された遺伝子ＧｃＭ９０のヌクレオチド配列は、以下の通りである。
ＧＣＧＣＡＧＴＣＣＧＴＧＣＣＴＴＡＣＧＧＣＧＴＡＴＣＡＣＡＡＡＴＴＡＡＡＧＣＣＣＣＴＧＣＴＣＴＧＣＡＣＴＣＴＣＡＡＧＧＣＴＡＣＡＣＴＧＧＡＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡＡＡＧＴＡＧＣＧＧＴＴＡＴＣＧＡＣＡＧＣＧＧＴＡＴＣＧＡＣＴＣＧＡＧＣＣＡＴＣＣＡＧＡＴＣＴＴＡＡＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＣＧＧＧＡＧＡＡＡＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＴＣＡＡＧＡＴＡＡＣＡＡＴＴＣＴＣＡＴＧＧＣＡＣＡＣＡＣＧＣＡＧＣＡＧＧＡＡＣＧＧＴＴＧＣＧＧＣＧＴＴＡＡＡＣＡＡＴＡＡＴＡＴＴＧＧＣＧＴＧＣＴＴＧＧＴＧＴＡＧＣＣＣＣＧＴＣＴＧＣＴＴＣＧＣＴＣＴＡＣＧＣＣＧＴＴＡＡＡＧＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＡＧＡＣＧＧＡＴＣＡＧＣＡＣＡＡＴＡＣＴＣＡＴＧＧＡＴＴＡＴＣＡＡＣＧＧＣＡＴＣＧＡＡＴＧＧＧＣＣＡＴＣＧＣＧＡＡＴＡＡＣＡＴＧＧＡＴＧＴＡＡＴＣＡＡＣＡＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＣＡＡＣＡＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＣＧＧＣＡＣＴＴＡＡＡＧＣＡＧＣＡＧＴＴＧＡＴＡＡＡＧＣＴＧＴＴＧＣＡＴＣＴＧＧＴＧＴＣＧＴＣＧＴＡＧＴＡＧＣＧＧＣＡＧＣＴＧＧＧＡＡＴＧＡＧＧＧＡＡＣＡＴＣＣＧＧＡＴＣＡＴＣＧＡＧＴＡＣＣＧＴＣＧＧＴＴＡＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＴＡＣＣＣＴＴＣＡＧＴＧＡＴＴＧＣＡＧＴＧＧＧＣＧＣＴＧＴＡＧＡＣＴＣＴＴＣＡＡＡＴＡＣＡＣＧＴＧＣＣＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＣＣＧＴＧＧＧＡＣＣＧＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＴＣＡＴＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＧＴＴＴＣＴＡＴＴＣＡＡＴＣＧＡＣＧＣＴＴＣＣＡＧＧＧＡＡＣＡＡＧＴＡＴＧＧＴＧＣＧＣＡＡＡＡＣＧＧＧＡＣＴＴＣＣＡＴＧＧＣＣＴＣＧＣＣＧＣＡＴＧＴＡＧＣＴＧＧＧＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＡＧＣＡＣＣＣＧＡＡＣＴＧＧＡＣＡＡＡＣＡＣＴＣＡＡＧＴＣＣＧＣＡＧＣＡＧＴＴＴＡＧＡＡＡＡＣＡＣＣＡＣＴＡＣＡＡＡＡＣＴＴＧＧＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＣＴＡＴＧＧＡＡＡＡＧＧＧＣＴＧＡＴＣＡＡＣＧＴＡＣＡＧＧＣＧＧＣＡＧＣＴＣＡＧＴＡＡ（配列番号９）
ＧｃＭ９０のアミノ酸配列は以下に提供される。
ＡＱＳＶＰＹＧＶＳＱＩＫＡＰＡＬＨＳＱＧＹＴＧＳＮＶＫＶＡＶＩＤＳＧＩＤＳＳＨＰＤＬＫＶＡＧＧＡＳＭＶＰＧＥＴＮＰＦＱＤＮＮＳＨＧＴＨＡＡＧＴＶＡＡＬＮＮＮＩＧＶＬＧＶＡＰＳＡＳＬＹＡＶＫＶＬＡＡＤＧＳＡＱＹＳＷＩＩＮＧＩＥＷＡＩＡＮＮＭＤＶＩＮＭＳＬＧＡＴＳＧＳＡＡＬＫＡＡＶＤＫＡＶＡＳＧＶＶＶＶＡＡＡＧＮＥＧＴＳＧＳＳＳＴＶＧＹＰＧＫＹＰＳＶＩＡＶＧＡＶＤＳＳＮＴＲＡＳＦＳＳＶＧＰＥＬＤＶＭＡＰＧＶＳＩＱＳＴＬＰＧＮＫＹＧＡＱＮＧＴＳＭＡＳＰＨＶＡＧＡＡＡＬＩＬＳＫＨＰＮＷＴＮＴＱＶＲＳＳＬＥＮＴＴＴＫＬＧＤＳＦＹＹＧＫＧＬＩＮＶＱＡＡＡＱ（配列番号１０）
合成された遺伝子ＧｃＭ９１のヌクレオチド配列は以下に提供される。
ＧＣＧＣＡＧＴＣＣＧＴＧＣＣＴＴＡＣＧＧＣＧＴＡＴＣＡＣＡＡＡＴＴＡＡＡＧＣＣＣＣＴＧＣＴＣＴＧＣＡＣＴＣＴＣＡＡＧＧＣＴＡＣＡＣＴＧＧＡＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡＡＡＧＴＡＧＣＧＧＴＴＡＴＣＧＡＣＡＧＣＧＧＴＡＴＣＧＡＣＴＣＧＡＧＣＣＡＴＣＣＡＧＡＴＣＴＴＡＡＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＣＧＴＣＣＧＡＡＡＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＴＧＴＣＧＡＴＡＡＣＡＡＴＴＣＴＣＡＴＧＧＣＡＣＡＣＡＣＧＴＣＧＣＡＧＧＡＡＣＧＧＴＴＧＣＧＧＣＧＴＴＡＡＡＣＡＡＴＡＡＴＡＴＴＧＧＣＧＴＧＣＴＴＧＧＴＧＴＡＧＣＣＣＣＧＴＣＴＧＣＴＴＣＧＣＴＣＴＡＣＧＣＣＧＴＴＡＡＡＧＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＡＧＡＣＧＧＡＴＣＡＧＧＣＣＡＡＴＡＣＴＣＡＴＧＧＡＴＴＧＴＣＡＡＣＧＧＣＡＴＣＧＡＡＴＧＧＧＣＣＡＴＣＧＣＧＡＡＴＡＡＣＡＴＧＧＡＴＧＴＡＡＴＣＡＡＣＡＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＣＧＧＣＡＣＴＴＡＡＡＧＣＡＧＣＡＧＴＴＧＡＴＡＡＡＧＣＴＧＴＴＧＣＡＴＣＴＧＧＴＣＡＡＧＴＣＧＴＡＧＴＡＧＣＧＧＣＡＧＣＴＧＧＧＡＡＴＧＡＧＧＧＡＡＣＡＴＣＣＧＧＡＴＣＡＴＣＧＡＧＴＡＣＣＧＴＣＧＧＴＴＡＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＴＡＣＣＣＴＴＣＡＧＴＧＡＴＴＧＣＡＧＴＧＧＧＣＧＣＴＧＴＡＧＡＣＴＣＴＴＣＡＡＡＴＣＡＡＣＧＴＧＣＣＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＣＣＧＴＧＧＧＡＣＣＧＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＴＣＡＴＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＧＴＴＴＣＴＡＴＴＣＡＡＴＣＧＡＣＧＣＴＴＣＣＡＧＣＡＡＡＣＡＡＧＴＡＴＧＧＴＧＣＧＣＡＡＡＡＣＧＧＧＡＣＴＴＣＣＡＴＧＧＣＣＴＣＧＣＣＧＣＡＴＧＴＡＧＣＴＧＧＧＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＡＧＣＡＣＣＣＧＡＡＣＴＧＧＡＣＡＡＡＣＡＣＴＣＡＡＧＴＣＣＧＣＡＧＣＡＧＴＴＴＡＧＡＡＣＡＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＡＡＡＣＴＴＧＧＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＣＴＡＴＧＧＡＡＡＡＧＧＧＣＴＧＡＴＣＡＡＣＧＴＡＣＡＧＧＣＧＧＣＡＧＣＴＣＡＧＴＡＡ（配列番号１１）
ＧｃＭ９１のアミノ酸配列は以下に提供される。
ＡＱＳＶＰＹＧＶＳＱＩＫＡＰＡＬＨＳＱＧＹＴＧＳＮＶＫＶＡＶＩＤＳＧＩＤＳＳＨＰＤＬＫＶＡＧＧＡＳＭＶＰＳＥＴＮＰＦＶＤＮＮＳＨＧＴＨＶＡＧＴＶＡＡＬＮＮＮＩＧＶＬＧＶＡＰＳＡＳＬＹＡＶＫＶＬＡＡＤＧＳＧＱＹＳＷＩＶＮＧＩＥＷＡＩＡＮＮＭＤＶＩＮＭＳＬＧＡＰＳＧＳＡＡＬＫＡＡＶＤＫＡＶＡＳＧＱＶＶＶＡＡＡＧＮＥＧＴＳＧＳＳＳＴＶＧＹＰＧＫＹＰＳＶＩＡＶＧＡＶＤＳＳＮＱＲＡＳＦＳＳＶＧＰＥＬＤＶＭＡＰＧＶＳＩＱＳＴＬＰＡＮＫＹＧＡＱＮＧＴＳＭＡＳＰＨＶＡＧＡＡＡＬＩＬＳＫＨＰＮＷＴＮＴＱＶＲＳＳＬＥＱＴＴＴＫＬＧＤＳＦＹＹＧＫＧＬＩＮＶＱＡＡＡＱ（配列番号１２）
合成された遺伝子ＧｃＭ９２のヌクレオチド配列は以下に提供される。
ＧＣＧＣＡＧＴＣＣＧＴＧＣＣＴＴＡＣＧＧＣＧＴＡＴＣＡＣＡＡＡＴＴＡＡＡＧＣＣＣＣＴＧＣＴＣＴＧＣＡＣＴＣＴＣＡＡＧＧＣＴＡＣＡＣＴＧＧＡＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡＡＡＧＴＡＧＣＧＧＴＴＡＴＣＧＡＣＡＧＣＧＧＴＡＴＣＧＡＣＴＣＧＡＧＣＣＡＴＣＣＡＧＡＴＣＴＴＡＡＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＣＧＴＣＣＧＡＡＡＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＴＣＡＡＧＡＴＧＣＡＡＡＴＴＣＴＣＡＴＧＧＣＡＣＡＣＡＣＧＴＣＧＣＡＧＧＡＡＣＧＧＴＴＧＣＧＧＣＧＴＴＡＡＡＣＡＡＴＡＡＴＡＴＴＧＧＣＧＴＧＣＴＴＧＧＴＧＴＡＧＣＣＣＣＧＧＡＡＧＣＴＴＣＧＣＴＣＴＡＣＧＣＣＧＴＴＡＡＡＧＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＡＧＡＣＧＧＡＴＣＡＧＧＣＣＡＡＴＡＣＴＣＡＴＧＧＡＴＴＡＴＣＡＡＣＧＧＣＡＴＣＧＡＡＴＧＧＧＣＣＡＴＣＧＣＧＡＡＴＡＡＣＡＴＧＧＡＴＧＴＡＡＴＣＡＡＣＡＴＣＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＣＧＧＣＡＣＴＴＡＡＡＧＣＡＧＣＡＧＴＴＧＡＴＡＡＡＧＣＴＧＴＴＧＣＡＴＣＴＧＧＴＧＴＣＧＴＣＧＴＡＧＴＡＧＣＧＧＣＡＧＣＴＧＧＧＡＡＴＧＡＧＧＧＡＡＣＡＴＣＣＧＧＡＣＣＴＴＣＧＡＧＴＡＣＣＧＴＣＧＧＴＴＡＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＴＡＣＣＣＴＴＣＡＧＴＧＡＴＴＧＣＡＧＴＧＧＧＣＧＣＴＧＴＡＧＡＣＴＣＴＴＣＡＡＡＴＣＡＡＣＧＴＧＣＣＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＣＣＧＴＧＧＧＡＣＣＧＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＴＣＡＴＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＧＴＴＴＣＴＡＴＴＣＡＡＴＣＧＡＣＧＣＴＴＣＣＡＧＧＧＡＡＣＡＡＧＴＡＴＧＧＴＧＣＧＣＡＡＡＡＣＧＧＧＡＣＴＴＣＣＡＴＧＧＣＣＧＣＡＣＣＧＣＡＴＧＴＡＧＣＴＧＧＧＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＡＧＣＡＣＣＣＧＡＡＣＴＧＧＡＣＡＡＡＣＡＣＴＣＡＡＧＴＣＣＧＣＡＧＣＡＧＴＴＴＡＧＡＡＡＡＣＡＣＣＡＣＴＡＣＡＡＡＡＣＴＴＧＧＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＣＴＡＴＧＧＡＡＡＡＧＧＧＣＴＧＡＴＣＡＡＣＧＴＡＣＡＧＧＣＧＧＣＡＧＣＴＣＡＧＴＡＡ（配列番号１３）
ＧｃＭ９２のアミノ酸配列は以下に提供される。
ＡＱＳＶＰＹＧＶＳＱＩＫＡＰＡＬＨＳＱＧＹＴＧＳＮＶＫＶＡＶＩＤＳＧＩＤＳＳＨＰＤＬＫＶＡＧＧＡＳＭＶＰＳＥＴＮＰＦＱＤＡＮＳＨＧＴＨＶＡＧＴＶＡＡＬＮＮＮＩＧＶＬＧＶＡＰＥＡＳＬＹＡＶＫＶＬＡＡＤＧＳＧＱＹＳＷＩＩＮＧＩＥＷＡＩＡＮＮＭＤＶＩＮＩＳＬＧＡＰＳＧＳＡＡＬＫＡＡＶＤＫＡＶＡＳＧＶＶＶＶＡＡＡＧＮＥＧＴＳＧＰＳＳＴＶＧＹＰＧＫＹＰＳＶＩＡＶＧＡＶＤＳＳＮＱＲＡＳＦＳＳＶＧＰＥＬＤＶＭＡＰＧＶＳＩＱＳＴＬＰＧＮＫＹＧＡＱＮＧＴＳＭＡＡＰＨＶＡＧＡＡＡＬＩＬＳＫＨＰＮＷＴＮＴＱＶＲＳＳＬＥＮＴＴＴＫＬＧＤＳＦＹＹＧＫＧＬＩＮＶＱＡＡＡＱ（配列番号１４）
合成された遺伝子ＧｃＭ９３のヌクレオチド配列は以下に提供される。
ＧＣＧＣＡＧＴＣＣＧＴＧＣＣＴＴＡＣＧＧＣＧＴＡＴＣＡＣＡＡＡＴＴＡＡＡＧＣＣＣＣＴＧＣＴＣＴＧＣＡＣＴＣＴＣＡＡＧＧＣＴＡＣＡＣＴＧＧＡＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡＡＡＧＴＡＧＣＧＧＴＴＡＴＣＧＡＣＡＧＣＧＧＴＡＴＣＧＡＣＴＣＧＡＧＣＣＡＴＣＣＡＧＡＴＣＴＴＡＡＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＣＧＴＣＣＧＡＡＡＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＴＣＡＡＧＡＴＡＡＣＣＡＡＴＣＴＣＡＴＧＧＣＡＣＡＣＡＣＧＴＣＧＣＡＧＧＡＡＣＧＧＴＴＧＣＧＧＣＧＴＴＡＡＡＣＡＡＴＡＡＴＡＴＴＧＧＣＧＴＧＣＴＴＧＧＴＧＴＡＧＣＣＣＣＧＴＣＴＧＣＴＴＣＧＣＴＣＴＡＣＧＣＣＧＴＴＡＡＡＧＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＡＧＡＣＡＡＣＴＣＡＧＧＣＣＡＡＴＡＣＴＣＡＴＧＧＡＴＴＡＴＣＡＡＣＧＧＣＡＴＣＧＡＡＴＧＧＧＣＣＡＴＣＧＣＧＡＡＴＡＡＣＡＴＧＧＡＴＧＴＡＡＴＣＡＡＣＡＴＧＧＣＡＣＴＧＧＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＣＧＧＣＡＣＴＴＡＡＡＧＣＡＧＣＡＧＴＴＧＡＴＡＡＡＧＣＴＧＴＴＧＣＡＴＣＴＧＧＴＧＴＣＧＴＣＧＴＡＧＴＡＧＣＧＧＣＡＧＣＴＧＧＧＡＡＴＧＡＧＧＧＡＡＣＡＧＡＴＧＧＡＴＣＡＴＣＧＡＧＴＡＣＣＧＴＣＧＧＴＴＡＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＴＡＣＣＣＴＴＣＡＧＴＧＡＴＴＧＣＡＧＴＧＧＧＣＧＣＴＧＴＡＧＡＣＴＣＴＴＣＡＡＡＴＣＡＡＣＧＴＧＣＣＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＣＣＧＴＧＧＧＡＣＣＧＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＴＣＡＴＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＧＴＴＴＣＴＡＴＴＣＡＡＴＣＧＡＣＧＣＴＴＣＣＡＧＧＧＡＡＣＡＡＧＴＡＴＧＧＴＧＣＧＣＡＡＡＡＣＧＧＧＡＣＴＴＣＣＡＴＧＧＣＣＴＣＧＣＣＧＣＡＴＧＴＡＧＣＴＧＧＧＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＡＧＣＡＣＣＣＧＴＣＡＴＧＧＡＣＡＡＡＣＡＣＴＣＡＡＧＴＣＣＧＣＡＧＣＡＧＴＴＴＡＧＡＡＡＡＣＡＣＣＡＣＴＡＣＡＡＡＡＣＴＴＧＧＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＣＴＡＴＧＧＡＡＡＡＧＧＧＣＴＧＡＴＣＡＡＣＧＴＡＣＡＧＧＣＧＧＣＡＧＣＴＣＡＧＴＡＡ（配列番号１５）
ＧｃＭ９３のアミノ酸配列は以下に提供される。
ＡＱＳＶＰＹＧＶＳＱＩＫＡＰＡＬＨＳＱＧＹＴＧＳＮＶＫＶＡＶＩＤＳＧＩＤＳＳＨＰＤＬＫＶＡＧＧＡＳＭＶＰＳＥＴＮＰＦＱＤＮＱＳＨＧＴＨＶＡＧＴＶＡＡＬＮＮＮＩＧＶＬＧＶＡＰＳＡＳＬＹＡＶＫＶＬＡＡＤＮＳＧＱＹＳＷＩＩＮＧＩＥＷＡＩＡＮＮＭＤＶＩＮＭＡＬＧＡＰＳＧＳＡＡＬＫＡＡＶＤＫＡＶＡＳＧＶＶＶＶＡＡＡＧＮＥＧＴＤＧＳＳＳＴＶＧＹＰＧＫＹＰＳＶＩＡＶＧＡＶＤＳＳＮＱＲＡＳＦＳＳＶＧＰＥＬＤＶＭＡＰＧＶＳＩＱＳＴＬＰＧＮＫＹＧＡＱＮＧＴＳＭＡＳＰＨＶＡＧＡＡＡＬＩＬＳＫＨＰＳＷＴＮＴＱＶＲＳＳＬＥＮＴＴＴＫＬＧＤＳＦＹＹＧＫＧＬＩＮＶＱＡＡＡＱ（配列番号１６）
合成された遺伝子ＧｃＭ９４のヌクレオチド配列は以下に提供される。
ＧＣＧＣＡＧＴＣＣＧＴＧＣＣＴＴＡＣＧＧＣＧＴＡＴＣＡＣＡＡＡＴＴＡＡＡＧＣＣＣＣＴＧＣＴＣＴＧＣＡＣＴＣＴＣＡＡＧＧＣＴＡＣＡＣＴＧＧＡＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡＡＡＧＴＡＧＣＧＧＴＴＡＴＣＧＡＣＡＧＣＧＧＴＡＴＣＧＡＣＴＣＧＡＧＣＣＡＴＣＣＡＧＡＴＣＴＴＡＡＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＣＧＴＣＣＧＡＡＡＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＴＣＡＡＧＡＴＡＡＣＡＡＴＡＣＡＣＡＴＧＧＣＡＣＡＣＡＣＧＴＣＧＣＡＧＧＡＡＣＧＧＴＴＧＣＧＧＣＧＴＴＡＡＡＣＡＡＴＡＡＴＡＴＴＧＧＣＧＴＧＣＴＴＧＧＴＧＴＡＧＣＣＣＣＧＴＣＴＧＣＴＴＣＧＣＴＣＴＡＣＧＣＣＧＴＴＡＡＡＧＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＡＧＡＣＧＧＡＧＣＡＧＧＣＣＡＡＴＡＣＴＣＡＴＧＧＡＴＴＡＴＣＡＡＣＧＧＣＡＴＣＧＡＡＴＧＧＧＣＣＡＴＣＧＣＧＡＡＴＡＡＣＡＴＧＧＡＴＧＴＡＡＴＣＡＡＣＡＴＧＡＧＣＧＴＣＧＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＣＧＧＣＡＣＴＴＡＡＡＧＣＡＧＣＡＧＴＴＧＡＴＡＡＡＧＣＴＧＴＴＧＣＡＴＣＴＧＧＴＧＴＣＧＴＣＧＴＡＧＴＡＧＣＧＧＣＡＧＣＴＧＧＧＡＡＴＧＡＧＧＧＡＡＣＡＴＣＣＧＧＡＴＣＡＴＣＧＡＧＴＡＣＣＧＴＣＧＧＴＴＡＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＴＡＣＣＣＴＴＣＡＧＴＧＡＴＴＧＣＡＧＴＧＧＧＣＧＣＴＧＴＡＧＡＣＴＣＴＡＣＡＡＡＴＣＡＡＣＧＴＧＣＣＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＣＣＧＴＧＧＧＡＣＣＧＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＴＣＡＴＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＧＴＴＴＣＴＡＴＴＣＡＡＴＣＧＡＣＧＣＴＴＣＣＡＧＧＧＡＡＣＡＡＧＴＡＴＧＧＴＧＣＧＣＡＡＡＡＣＧＧＧＡＣＴＴＣＣＡＴＧＧＣＣＴＣＧＣＣＧＣＡＴＧＴＡＧＣＴＧＧＧＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＡＧＣＡＣＣＣＧＡＡＣＴＧＧＡＣＡＡＡＣＡＡＣＣＡＡＧＴＣＣＧＣＡＧＣＡＧＴＴＴＡＧＡＡＡＡＣＡＣＣＡＣＴＡＣＡＡＡＡＣＴＴＧＧＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＣＴＡＴＧＧＡＡＡＡＧＧＧＣＴＧＡＴＣＡＡＣＧＴＡＣＡＧＧＣＧＧＣＡＧＣＴＣＡＧＴＡＡ（配列番号１７）
ＧｃＭ９４のアミノ酸配列は以下に提供される。
ＡＱＳＶＰＹＧＶＳＱＩＫＡＰＡＬＨＳＱＧＹＴＧＳＮＶＫＶＡＶＩＤＳＧＩＤＳＳＨＰＤＬＫＶＡＧＧＡＳＭＶＰＳＥＴＮＰＦＱＤＮＮＴＨＧＴＨＶＡＧＴＶＡＡＬＮＮＮＩＧＶＬＧＶＡＰＳＡＳＬＹＡＶＫＶＬＡＡＤＧＡＧＱＹＳＷＩＩＮＧＩＥＷＡＩＡＮＮＭＤＶＩＮＭＳＶＧＡＰＳＧＳＡＡＬＫＡＡＶＤＫＡＶＡＳＧＶＶＶＶＡＡＡＧＮＥＧＴＳＧＳＳＳＴＶＧＹＰＧＫＹＰＳＶＩＡＶＧＡＶＤＳＴＮＱＲＡＳＦＳＳＶＧＰＥＬＤＶＭＡＰＧＶＳＩＱＳＴＬＰＧＮＫＹＧＡＱＮＧＴＳＭＡＳＰＨＶＡＧＡＡＡＬＩＬＳＫＨＰＮＷＴＮＮＱＶＲＳＳＬＥＮＴＴＴＫＬＧＤＳＦＹＹＧＫＧＬＩＮＶＱＡＡＡＱ（配列番号１８）
合成された遺伝子ＧｃＭ９５のヌクレオチド配列は以下に提供される。
ＧＣＧＣＡＧＴＣＣＧＴＧＣＣＴＴＡＣＧＧＣＧＴＡＴＣＡＣＡＡＡＴＴＡＡＡＧＣＣＣＣＴＧＣＴＣＴＧＣＡＣＴＣＴＣＡＡＧＧＣＴＡＣＡＣＴＧＧＡＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡＡＡＧＴＡＧＣＧＧＴＴＡＴＣＧＡＣＡＧＣＧＧＴＡＴＣＧＡＣＴＣＧＡＧＣＣＡＴＣＴＧＧＡＴＣＴＴＡＡＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＣＧＧＧＡＧＡＡＡＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＴＧＴＣＧＡＴＧＣＡＣＡＡＡＣＡＣＡＴＧＧＣＡＣＡＣＡＣＧＴＣＧＣＡＧＧＡＡＣＧＧＴＴＧＣＧＧＣＧＴＴＡＡＡＣＡＡＴＡＡＴＡＴＴＧＧＣＧＴＧＣＴＴＧＧＴＧＴＡＧＣＣＣＣＧＧＡＡＧＣＴＴＣＧＣＴＣＴＡＣＧＣＣＧＴＴＡＡＡＧＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＡＧＡＣＡＡＣＧＣＡＧＣＡＣＡＡＴＡＣＴＣＡＴＧＧＡＴＴＧＴＣＡＡＣＧＧＣＡＴＣＧＡＡＴＧＧＧＣＣＡＴＣＧＣＧＡＡＴＡＡＣＡＴＧＧＡＴＧＴＡＡＴＣＡＡＣＡＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＣＧＧＣＡＣＴＴＡＡＡＧＣＡＧＣＡＧＴＴＧＡＴＡＡＡＧＣＴＧＴＴＧＣＡＴＣＴＧＧＴＧＴＣＧＴＣＧＴＡＧＴＡＧＣＧＧＣＡＧＣＴＧＧＧＡＡＴＧＡＧＧＧＡＡＣＡＴＣＣＧＧＡＴＣＡＴＣＧＡＧＴＡＣＣＧＴＣＧＧＴＴＡＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＴＡＣＣＣＴＴＣＡＧＴＧＡＴＴＧＣＡＧＴＧＧＧＣＧＣＴＧＴＡＧＡＣＴＣＴＴＣＡＡＡＴＣＡＡＣＧＴＧＣＣＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＣＣＧＴＧＧＧＡＣＣＧＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＴＣＡＴＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＧＴＴＴＣＴＡＴＴＣＡＡＴＣＧＡＣＧＣＴＴＣＣＡＧＧＧＡＡＣＡＡＧＴＡＴＧＧＴＧＣＧＣＡＡＡＡＣＧＧＧＡＣＴＴＣＣＡＴＧＧＣＣＴＣＧＣＣＧＣＡＴＧＴＡＧＣＴＧＧＧＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＡＧＣＡＣＣＣＧＡＡＣＴＧＧＡＣＡＡＡＣＡＣＴＣＡＡＧＴＣＣＧＣＡＧＣＡＧＴＴＴＡＧＡＡＡＡＣＡＣＣＡＣＴＡＣＡＡＡＡＣＴＴＧＧＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＣＴＡＴＧＧＡＡＡＡＧＧＧＣＴＧＡＴＣＡＡＣＧＴＡＣＡＧＧＣＧＧＣＡＧＣＴＣＡＧＴＡＡ（配列番号１９）
ＧｃＭ９５のアミノ酸配列は以下に提供される。
ＡＱＳＶＰＹＧＶＳＱＩＫＡＰＡＬＨＳＱＧＹＴＧＳＮＶＫＶＡＶＩＤＳＧＩＤＳＳＨＬＤＬＫＶＡＧＧＡＳＭＶＰＧＥＴＮＰＦＶＤＡＱＴＨＧＴＨＶＡＧＴＶＡＡＬＮＮＮＩＧＶＬＧＶＡＰＥＡＳＬＹＡＶＫＶＬＡＡＤＮＡＡＱＹＳＷＩＶＮＧＩＥＷＡＩＡＮＮＭＤＶＩＮＭＳＬＧＡＰＳＧＳＡＡＬＫＡＡＶＤＫＡＶＡＳＧＶＶＶＶＡＡＡＧＮＥＧＴＳＧＳＳＳＴＶＧＹＰＧＫＹＰＳＶＩＡＶＧＡＶＤＳＳＮＱＲＡＳＦＳＳＶＧＰＥＬＤＶＭＡＰＧＶＳＩＱＳＴＬＰＧＮＫＹＧＡＱＮＧＴＳＭＡＳＰＨＶＡＧＡＡＡＬＩＬＳＫＨＰＮＷＴＮＴＱＶＲＳＳＬＥＮＴＴＴＫＬＧＤＳＦＹＹＧＫＧＬＩＮＶＱＡＡＡＱ（配列番号２０）
合成された遺伝子ＧｃＭ９６のヌクレオチド配列は以下に提供される。
ＧＣＧＣＡＧＴＣＣＧＴＧＣＣＴＴＡＣＧＧＣＧＴＡＴＣＡＣＡＡＡＴＴＡＡＡＧＣＣＣＣＴＧＣＴＣＴＧＣＡＣＴＣＴＣＡＡＧＧＣＴＡＣＡＣＴＧＧＡＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡＡＡＧＴＡＧＣＧＧＴＴＡＴＣＧＡＣＡＧＣＧＧＴＡＴＣＧＡＣＴＣＧＡＧＣＣＡＴＣＣＡＧＡＴＣＴＴＡＡＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＣＧＴＣＣＧＡＡＡＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＴＣＡＡＧＡＴＡＡＣＡＡＴＴＣＴＣＡＴＧＧＣＡＣＡＣＡＣＧＴＣＧＣＡＧＧＡＡＣＧＧＴＴＧＣＧＧＣＧＴＴＡＡＡＣＡＡＴＡＡＴＡＴＴＧＧＣＧＴＧＣＴＴＧＧＴＧＴＡＧＣＣＣＣＧＴＣＴＧＣＴＴＣＧＣＴＣＴＡＣＧＣＣＧＴＴＡＡＡＧＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＡＧＡＣＧＧＡＴＣＡＧＧＣＣＡＡＴＡＣＴＣＡＴＧＧＡＴＴＡＴＣＡＡＣＧＧＣＡＴＣＧＡＡＴＧＧＧＣＣＡＴＣＧＣＧＡＡＴＡＡＣＡＴＧＧＡＴＧＴＡＡＴＣＡＡＣＡＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＣＡＡＣＡＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＣＧＧＣＡＣＴＴＡＡＡＧＣＡＧＣＡＧＴＴＧＡＴＡＡＡＧＣＴＧＴＴＧＣＡＴＣＴＧＧＴＣＡＡＧＴＣＧＴＡＧＴＡＧＣＧＧＣＡＧＣＴＧＧＧＡＡＴＧＡＧＧＧＡＡＣＡＧＡＴＧＧＡＣＣＴＴＣＧＡＧＴＡＣＣＧＴＣＧＧＴＴＡＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＴＡＣＣＣＴＴＣＡＧＴＧＡＴＴＧＣＡＧＴＧＧＧＣＧＣＴＧＴＡＧＡＣＴＣＴＡＣＡＡＡＴＡＣＡＣＧＴＧＣＣＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＣＣＧＴＧＧＧＡＣＣＧＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＴＣＡＴＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＧＴＴＴＣＴＡＴＴＣＡＡＴＣＧＡＣＧＣＴＴＣＣＡＧＣＡＡＡＣＡＡＧＴＡＴＧＧＴＧＣＧＣＡＡＡＡＣＧＧＧＡＣＴＴＣＣＡＴＧＧＣＣＧＣＡＣＣＧＣＡＴＧＴＡＧＣＴＧＧＧＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＡＧＣＡＣＣＣＧＴＣＡＴＧＧＡＣＡＡＡＣＡＡＣＣＡＡＧＴＣＣＧＣＡＧＣＡＧＴＴＴＡＧＡＡＣＡＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＡＡＡＣＴＴＧＧＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＣＴＡＴＧＧＡＡＡＡＧＧＧＣＴＧＡＴＣＡＡＣＧＴＡＣＡＧＧＣＧＧＣＡＧＣＴＣＡＧＴＡＡ（配列番号２１）
ＧｃＭ９６のアミノ酸配列は以下に提供される。
ＡＱＳＶＰＹＧＶＳＱＩＫＡＰＡＬＨＳＱＧＹＴＧＳＮＶＫＶＡＶＩＤＳＧＩＤＳＳＨＰＤＬＫＶＡＧＧＡＳＭＶＰＳＥＴＮＰＦＱＤＮＮＳＨＧＴＨＶＡＧＴＶＡＡＬＮＮＮＩＧＶＬＧＶＡＰＳＡＳＬＹＡＶＫＶＬＡＡＤＧＳＧＱＹＳＷＩＩＮＧＩＥＷＡＩＡＮＮＭＤＶＩＮＭＳＬＧＡＴＳＧＳＡＡＬＫＡＡＶＤＫＡＶＡＳＧＱＶＶＶＡＡＡＧＮＥＧＴＤＧＰＳＳＴＶＧＹＰＧＫＹＰＳＶＩＡＶＧＡＶＤＳＴＮＴＲＡＳＦＳＳＶＧＰＥＬＤＶＭＡＰＧＶＳＩＱＳＴＬＰＡＮＫＹＧＡＱＮＧＴＳＭＡＡＰＨＶＡＧＡＡＡＬＩＬＳＫＨＰＳＷＴＮＮＱＶＲＳＳＬＥＱＴＴＴＫＬＧＤＳＦＹＹＧＫＧＬＩＮＶＱＡＡＡＱ（配列番号２２）
合成された遺伝子ＧｃＭ１００のヌクレオチド配列は以下に提供される。
ＧＣＧＣＡＧＴＣＣＧＴＧＣＣＴＴＡＣＧＧＣＧＴＡＴＣＡＣＡＡＡＴＴＡＡＡＧＣＣＣＣＴＧＣＴＣＴＧＣＡＣＴＣＴＣＡＡＧＧＣＴＡＣＡＣＴＧＧＡＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡＡＡＧＴＡＧＣＧＧＴＴＡＴＣＧＡＣＡＧＣＧＧＴＡＴＣＧＡＣＴＣＧＡＧＣＣＡＴＣＣＡＧＡＴＣＴＴＡＡＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＣＧＴＣＣＧＡＡＡＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＴＣＡＡＧＡＴＡＡＣＡＡＴＴＣＴＣＡＴＧＧＣＡＣＡＣＡＣＧＣＡＧＣＡＧＧＡＡＣＧＧＴＴＧＣＧＧＣＧＴＴＡＡＡＣＡＡＴＡＡＴＡＴＴＧＧＣＧＴＧＣＴＴＧＧＴＧＴＡＧＣＣＣＣＧＴＣＴＧＣＴＴＣＧＣＴＣＴＡＣＧＣＣＧＴＴＡＡＡＧＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＡＧＡＣＧＧＡＴＣＡＧＣＡＣＡＡＴＡＣＴＣＡＴＧＧＡＴＴＡＴＣＡＡＣＧＧＣＡＴＣＧＡＡＴＧＧＧＣＣＡＴＣＧＣＧＡＡＴＡＡＣＡＴＧＧＡＴＧＴＡＡＴＣＡＡＣＡＴＧＧＣＡＣＴＧＧＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＣＧＧＣＡＣＴＴＡＡＡＧＣＡＧＣＡＧＴＴＧＡＴＡＡＡＧＣＴＧＴＴＧＣＡＴＣＴＧＧＴＧＴＣＧＴＣＧＴＡＧＴＡＧＣＧＧＣＡＧＣＴＧＧＧＡＡＴＧＡＧＧＧＡＡＣＡＴＣＣＧＧＡＴＣＡＴＣＧＡＧＴＡＣＣＧＴＣＧＧＴＴＡＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＴＡＣＣＣＴＴＣＡＧＴＧＡＴＴＧＣＡＧＴＧＧＧＣＧＣＴＧＴＡＧＡＣＴＣＴＴＣＡＡＡＴＣＡＡＣＧＴＧＣＣＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＣＣＧＴＧＧＧＡＣＣＧＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＴＣＡＴＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＧＴＴＴＣＴＡＴＴＣＡＡＴＣＧＡＣＧＣＴＴＣＣＡＧＣＡＡＡＣＡＡＧＴＡＴＧＧＴＧＣＧＣＡＡＡＡＣＧＧＧＡＣＴＴＣＣＡＴＧＧＣＣＴＣＧＣＣＧＣＡＴＧＴＡＧＣＴＧＧＧＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＡＧＣＡＣＣＣＧＡＡＣＴＧＧＡＣＡＡＡＣＡＣＴＣＡＡＧＴＣＣＧＣＡＧＣＡＧＴＴＴＡＧＡＡＡＡＣＡＣＣＡＣＴＡＣＡＡＡＡＣＴＴＧＧＴＧＡＴＴＣＴＴＴＣＴＡＣＴＡＴＧＧＡＡＡＡＧＧＧＣＴＧＡＴＣＡＡＣＧＴＡＣＡＧＧＣＧＧＣＡＧＣＴＣＡＧＴＡＡ（配列番号２３）
ＧｃＭ１００のアミノ酸配列は以下に提供される。
ＡＱＳＶＰＹＧＶＳＱＩＫＡＰＡＬＨＳＱＧＹＴＧＳＮＶＫＶＡＶＩＤＳＧＩＤＳＳＨＰＤＬＫＶＡＧＧＡＳＭＶＰＳＥＴＮＰＦＱＤＮＮＳＨＧＴＨＡＡＧＴＶＡＡＬＮＮＮＩＧＶＬＧＶＡＰＳＡＳＬＹＡＶＫＶＬＡＡＤＧＳＡＱＹＳＷＩＩＮＧＩＥＷＡＩＡＮＮＭＤＶＩＮＭＡＬＧＡＰＳＧＳＡＡＬＫＡＡＶＤＫＡＶＡＳＧＶＶＶＶＡＡＡＧＮＥＧＴＳＧＳＳＳＴＶＧＹＰＧＫＹＰＳＶＩＡＶＧＡＶＤＳＳＮＱＲＡＳＦＳＳＶＧＰＥＬＤＶＭＡＰＧＶＳＩＱＳＴＬＰＡＮＫＹＧＡＱＮＧＴＳＭＡＳＰＨＶＡＧＡＡＡＬＩＬＳＫＨＰＮＷＴＮＴＱＶＲＳＳＬＥＮＴＴＴＫＬＧＤＳＦＹＹＧＫＧＬＩＮＶＱＡＡＡＱ（配列番号２４）
ｂ）合成遺伝子ＧｃＭ９０〜９４及びＧｃＭ１００を用いるコンビナトリアルライブラリＣＧ１〜ＣＧ５及びＣＧ８の構築

Figure 2016028571

各合成遺伝子をｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’−Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ親分子に組み込んだ。６つの合成遺伝子ＧｃＭ９０−９４を含有しているプラスミドを得て、ＧｃＭ１００をテンプレートとして用いて各位置でコンビナトリアルライブラリを作成した（表３−１）。２つの更なる遺伝子、ＧｃＭ９５及びＧｃＭ９６も解析のため同様に合成したが、ライブラリのための親ＤＮＡとしては使用しなかった。これらの遺伝子は、ｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’−Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ親分子上に９つの変異を有する。
合成遺伝子ＧｃＭ９０−９４及びＧｃＭ１００を含有している親プラスミド（テンプレートＤＮＡ）は、２マイクログラムのＤＮＡ及びメチラーゼ（ＮＥＢ）を用い、ＮＥＢプロトコルに従ってメチル化した。次いでＤＮＡ Ｃｌｅａｎ ａｎｄ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒキット（Ｚｙｍｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）を用いてメチル化ＤＮＡを精製した。ＱＵＩＫＣＨＡＮＧＥ（登録商標）Ｍｕｌｔｉ Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ Ｋｉｔ（「ＱＣＭＳキット」、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を用いて、製造元のプロトコルに従って（各プライマーをプロトコルに示されている５０ｎｇの代わりに８６．５ｎｇ使用したライブラリＣＧ３及びＣＧ４は除く）、コンビナトリアルライブラリＣＧ１〜５及びＣＧ８を作成した（それぞれのテンプレート及びプライマーの組み合わせについては表３−１を参照されたい）。各ライブラリに、所望の置換を導入するために使用されたすべてのプライマーを表３−１に列挙する。Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓによりこれらが合成され、提供された。各ライブラリのＱＣＭＳ反応の完了後、０．５〜１μＬのＤｐｎＩ（ＱＣＭＳキット）を加え３７℃で１〜４時間インキュベートし、続いて更に０．５〜１μＬのＤｐｎＩを加え、更に３７℃で１〜４時間インキュベートすることでテンプレートＤＮＡを消化した。枯草菌（B. subtilis）を効率的に形質転換させるため、形質転換前にＱＣＭＳ反応混合物のＤＮＡを増幅させ、形質転換体を実施例２に記載のように増殖させた。
更なる変異体ＢＰＮ’−ｖ３＋Ｓ７８ＮをＤＮＡ２．０により合成した。以下の置換をそれぞれＢＰＮ’−ｖ３＋Ｓ７８Ｎ親分子の中に導入した：Ｑ５９Ｇ，Ｎ６２Ｑ，Ｖ６８Ａ，Ｓ８９Ｙ，Ａ９２Ｇ，Ｉ１０８Ｖ，Ｉ１１５Ｖ，Ｍ１２４Ｔ，Ｐ１２９Ｌ，Ａ１３８Ｔ，Ｖ１４７Ｌ，Ｓ１６１Ｐ，Ｙ１６７Ａ，Ｐ１７２Ｖ，Ｇ２１１Ｔ，Ｌ２６７Ｖ，及びＡ２７３Ｓ。
上記のすべてのコンビナトリアルライブラリ変異体及びＤＮＡ２．０で合成した変異体を、１６℃及びｐＨ ８での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本アッセイ、並びに１６℃及びｐＨ ８での洗剤組成物２のＢＭＩ微小標本アッセイを用いて、クリーニング性能について試験した。タンパク質含量はＴＣＡアッセイを用いて測定した。実施例１に記載のようにアッセイを実施し、ＢＰＮ’−ｖ３（ＰＩ値１．０を有する）と比較して性能指数を算出した。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１８３Ｔ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ２４４Ｎ，Ｎ０６１Ａ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２２４Ａ，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ１２９Ｔ−Ｑ１８５Ｔ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１８３Ｔ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ２４４Ｉ，及びＳ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ１２９Ｔ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’及びＢＰＮ’−ｖ３よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、スブチリシンプロテアーゼ変異体も提供され、この変異体は配列番号２に対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、この変異体は、Ｘ０４０Ｅ，Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０５９Ｖ，Ｘ０６１Ａ，Ｘ０６２Ｈ／Ｑ、Ｘ０６８Ａ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ０８７Ｅ，Ｘ１０１Ａ，Ｘ１０２Ａ，Ｘ１０８Ｖ，Ｘ１２４Ｉ，Ｘ１２５Ａ，Ｘ１２６Ｖ，Ｘ１２９Ｔ，Ｘ１４７Ｑ，Ｘ１５９Ｄ，Ｘ１８３Ｔ，Ｘ１８５Ｔ，Ｘ２１１Ａ，Ｘ２２４Ａ，Ｘ２４４Ｉ／Ｎ、Ｘ２５２Ｑ，及びＸ２７４Ｄ，の群から選択される少なくとも１つの置換を含み、選択的にＸ０４０Ｅ，Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０５９Ｖ，Ｘ０６１Ａ，Ｘ０６２Ｈ／Ｑ、Ｘ０６８Ａ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ０８７Ｅ，Ｘ１０１Ａ，Ｘ１０２Ａ，Ｘ１０８Ｖ，Ｍ１２４Ｉ，Ｓ１２５Ａ，Ｌ１２６Ｖ，Ｐ１２９Ｔ，Ｖ１４７Ｑ，Ｓ１５９Ｄ，Ｓ１８３Ｔ，Ｑ１８５Ｔ，Ｇ２１１Ａ，Ｓ２２４Ａ，Ｔ２４４Ｉ／Ｎ、Ｎ２５２Ｑ，及びＡ２７４Ｄ，の群から選択される少なくとも１つの置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ａ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ０８７Ｅ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２２４Ａ，Ｑ０５９Ｖ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｑ０５９Ｖ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｑ０５９Ｖ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｑ０５９Ｖ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５２Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ１２９Ｔ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｑ１８５Ｔ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２２４Ａ，及びＳ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２２４Ａ−Ａ２７４Ｄ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：１組のアミノ酸置換Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，を含むアミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいてＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有すると判定され、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して０．９のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並びに上記アミノ酸置換の組を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｑ０５９Ｖ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５２Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５２Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５２Ｑ，及びＳ０７８Ｎ−Ｓ０８７Ｅ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｉ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２２４Ａ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、タンパク質分解活性を有するプロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並びに上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１８３Ｔ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１８３Ｔ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ２４４Ｎ，Ｓ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０６３Ｔ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｔ２４４Ｉ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物２のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ａ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ０６１Ａ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ０８７Ｅ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２２４Ａ，Ｑ０５９Ｖ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｑ０５９Ｖ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｑ０５９Ｖ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｑ０５９Ｖ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５２Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ１２９Ｔ−Ｑ１８５Ｔ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ１２９Ｔ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ１２９Ｔ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｑ１８５Ｔ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２２４Ａ，及びＳ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２２４Ａ−Ａ２７４Ｄ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物２のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｙ２１７Ｑ及びＳ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物２のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並びに上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所に更に詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのような変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられる）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いてクリーニングの必要な物品又は表面をクリーニングするための方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｑ０５９Ｖ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５２Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｇ２１１Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５２Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１０８Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ１４７Ｑ−Ｙ２１７Ｑ−Ｎ２５２Ｑ，及びＳ０７８Ｎ−Ｓ０８７Ｅ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｉ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２２４Ａ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物２のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、タンパク質分解活性を有するプロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並びに上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所に更に詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのような変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられる）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いてクリーニングの必要な物品又は表面をクリーニングするための方法も含まれる。
（実施例４）
ＢＰＮ’変異体の生産及びクリーニング性能
ＱＵＩＫＣＨＡＮＧＥ（登録商標）Ｍｕｌｔｉ Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ ＭｕｔａｇｅｎｅｓｉｓによるＢＰＮ’変異体ＬＣ１〜ＬＣ４の作製
ＱＵＩＫＣＨＡＮＧＥ（登録商標）Ｍｕｌｔｉ Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ Ｋｉｔを用い、異なる親プラスミドからＢＰＮ’変異体を構築した。ＮＥＢ Ｄａｍメチラーゼキットを用いて、親プラスミド（表４−１）を、７７．５μＬのＨ２０＋１０μＬの１０Ｘ緩衝液＋０．２５μＬのＳＡＭ＋２ｕＬのＤＡＭメチラーゼ＋１０μＬのミニプレップＤＮＡ（約１５０ｎｇ／μＬ）を含有させた反応液中で、３７℃で一晩メチル化した。メチル化したプラスミドＤＮＡを、ＱＩＡＧＥＮ（登録商標）ＰＣＲ精製キットを用い精製した。２．５μＬの５Ｘ緩衝液＋０．５μＬのプライマー１（２５μＭ）＋０．５μＬのプライマー２（２５μＭ）＋１μＬのｄＮＴＰ’ｓ＋１μＬの酵素ブレンド＋１８μＬのＨ２Ｏ＋１．５μＬのＤＮＡを含有させた反応混合液で、各ＤＮＡテンプレートに対してＱＵＩＫＣＨＡＮＧＥ（登録商標）Ｍｕｌｔｉ Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ反応を行った。使用したＰＣＲプログラムは以下の通りであった：９５℃で１分、（９５℃で１分、５３℃で１分、６５℃で９：３９分）×２９サイクル、６５℃で１０分、４℃で保持。プライマー配列は表４−２に示される。すべての反応で、ＭＪ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＰＴＣ−２００ Ｐｅｌｔｉｅｒ ｔｈｅｒｍａｌ ｃｙｃｌｅｒを用いてＰＣＲを実施した。１μＬのＤｐｎＩをＱＵＩＫＣＨＡＮＧＥ（登録商標）Ｍｕｌｔｉ Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ反応物に加え、３７℃で一晩置くことでＰＣＲサンプルから親ＤＮＡを除去した。形質転換頻度を増加させるために、製造元のプロトコルに従ってＩｌｌｕｓｔｒａ ＴｅｍｐｌｉＰｈｉキットを用い、ローリング・サークル型増幅（ＲＣＡ）させることで、ＤｐｎＩ消化した反応物を増幅させた。枯草菌（B. subtilis）細胞（ΔａｐｒＥ，ΔｎｐｒＥ，ａｍｙＥ：：ｘｙｌＲＰｘｙｌＡｃｏｍＫ−ｐｈｌｅｏ）を、各１μＬのＲＣＡ反応物で形質転換し、形質転換させた細胞を、１０ｐｐｍのネオマイシンを含有しているＬＡ＋１．６％スキムミルクプレートに蒔き、３７℃で一晩インキュベートした。一晩増殖物からコロニーを選択し、「ｐｕＲｅＴａｑ Ｒｅａｄｙ−Ｔｏ−Ｇｏ ＰＣＲ Ｂｅａｄｓ」（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を用いて配列決定するためにコロニーＰＣＲを実施した。ＰＣＲ及び配列決定に使用したプライマーは、ｐＨＰＬＴ Ｆ１（／５ＰＨＯＳ／ＴＡＣＡＴＡＴＧＡＧＴＴＡＴＧＣＡＧＴＴＴＧ（配列番号５４））及びｐＨＰＬＴ ｓｅｑ Ｒ１（／５ＰＨＯＳ／ＴＴＡＴＣＣＴＴＴＡＣＣＴＴＧＴＣＴＣ（配列番号５５））であった。適切な配列を有するコロニーを凍結した。実施例２に記載のように、尿素を含有しているＭＯＰＳ系培地中で、３７℃で６８時間にわたり、９６ウェルマイクロタイタープレートで枯草菌（B. subtilis）形質転換体を増殖させることで、ＢＰＮ’変異体タンパク質を生産させた。
Figure 2016028571
Figure 2016028571
更なるＢＰＮ’変異体ＬＣ５〜ＬＣ３７の生成
ＢＰＮ’核酸を親遺伝子として含有させた発現プラスミドｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’ｐａｒｔｉａｌ ｏｐｔ（図３を参照されたい）を用いて、連続的にＬＣ５〜ＬＣ３７と名付けられた更に３３種のＢＰＮ’変異体をＤＮＡ２．０により作成した。ＬＣ５〜ＬＣ３７のＢＰＮ’変異体は、それぞれ以下の通りである：ＢＰＮ’−Ｐ５２Ｌ−Ｖ６８Ａ−Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ，ＢＰＮ’−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｙ１０４Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｐ５２Ｌ−Ｖ６８Ａ−Ｇ９７Ａ，ＢＰＮ’−Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ，ＢＰＮ’−Ｖ６８Ａ−Ａ９２Ｇ−Ｇ９７Ａ，ＢＰＮ’−Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｐ５２Ｌ−Ｖ６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｐ５２Ｌ−Ｖ６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ，ＢＰＮ’−Ｖ６８Ａ−Ａ９２Ｇ−Ｉ１１１Ｖ，ＢＰＮ’−Ｐ５２Ｌ−Ｖ６８Ａ−Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｖ６８Ａ−Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ，ＢＰＮ’−Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ，ＢＰＮ’−Ｓ８９Ｙ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ，ＢＰＮ’−Ｖ６８Ａ−Ｓ８９Ｙ−Ｉ１１１Ｖ，ＢＰＮ’−Ｖ６８Ａ−Ａ９２Ｇ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｖ６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｉ１１１Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｇ９７Ａ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｖ６８Ａ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ，ＢＰＮ’−Ｎ６２Ｑ−Ｇ９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ，ＢＰＮ’−Ｇ９７Ａ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｇ９７Ａ−Ｌ１２６Ａ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｖ６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，ＢＰＮ’−Ｓ８９Ｙ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，及びＢＰＮ’−Ｌ９６Ｔ−Ｇ９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ。同様に、プラスミドｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’ｐａｒｔｉａｌ ｏｐｔもＤＮＡ２．０により作成した。
実施例２に記載のように、形質転換体をつつき、マイクロタイタープレートに植菌し、増殖させた。１６℃及びｐＨ ８での洗剤組成物２のＢＭＩ微小標本アッセイを用いて、変異体をクリーニング性能についてアッセイした。タンパク質含量はＴＣＡアッセイを用いて測定した。実施例１に記載のようにアッセイを実施し、ＢＰＮ’−ｖ３（ＰＩ値１．０を有する）と比較して性能指数を算出した。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｖ２０３Ｙ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ｓ−Ｖ２０３Ｙ−Ｙ２１７Ｑ，及びＶ０６８Ａ−Ａ０９２Ｇ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物２のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、スブチリシンプロテアーゼ変異体も提供され、この変異体は配列番号２に対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、この変異体は、Ｘ０２４Ｇ，Ｘ０２５Ｇ，Ｘ０５２Ｌ，Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０５５Ｐ，Ｘ０６１Ｐ，Ｘ０６２Ｑ，Ｘ０６８Ａ，Ｘ０８９Ｙ，Ｘ０９２Ｇ，Ｘ０９６Ｔ，Ｘ０９７Ａ，Ｘ１０１Ｎ，Ｘ１０４Ｎ，Ｘ１１１Ｖ，Ｘ１２４Ｖ，Ｘ１２６Ａ，Ｘ１２８Ａ／Ｓ、Ｘ１６７Ａ，Ｘ２０３Ｙ，及びＸ２１７Ｑ，の群から選択される少なくとも１つの置換を含み、選択的に、Ｓ０２４Ｇ，Ｎ０２５Ｇ，Ｐ０５２Ｌ，Ｓ０５３Ｇ，Ｔ０５５Ｐ，Ｎ０６１Ｐ，Ｎ０６２Ｑ，Ｖ０６８Ａ，Ｓ０８９Ｙ，Ａ０９２Ｇ，Ｌ０９６Ｔ，Ｇ０９７Ａ，Ｓ１０１Ｎ，Ｙ１０４Ｎ，Ｉ１１１Ｖ，Ｍ１２４Ｖ，Ｌ１２６Ａ，Ｇ１２８Ａ／Ｓ、Ｙ１６７Ａ，Ｖ２０３Ｙ，及びＹ２１７Ｑ，の群から選択される少なくとも１つの置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｉ１１１Ｖ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ，Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｌ０９６Ｔ−Ｇ０９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ｓ−Ｖ２０３Ｙ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０８９Ｙ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，及びＶ０６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物２のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きく、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ，Ｇ０９７Ａ−Ｌ１２６Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｉ１１１Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｐ０５２Ｌ−Ｖ０６８Ａ−Ｇ０９７Ａ，Ｓ０８９Ｙ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ，Ｖ０６８Ａ−Ａ０９２Ｇ−Ｇ０９７Ａ，Ｖ０６８Ａ−Ａ０９２Ｇ−Ｉ１１１Ｖ，Ｖ０６８Ａ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ，Ｖ０６８Ａ−Ｓ０８９Ｙ−Ｉ１１１Ｖ，及びＹ１０４Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物２のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並びに上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｖ０６８Ａ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ，Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｖ０６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ１６７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，及びＰ０５２Ｌ−Ｖ０６８Ａ−Ｉ１１１Ｖ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物２のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、タンパク質分解活性を有するプロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並びに上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
（実施例５）
ＢＰＮ’変異体のクリーニング性能
親ＢＰＮ’に基づく変異体をＤＮＡ２．０により作成した。実施例２に記載のように変異体を増殖させ、１６℃及びｐＨ ８での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本アッセイ、１６℃及びｐＨ ８での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本アッセイ、並びに１６℃及びｐＨ ８での洗剤組成物４の卵微小標本アッセイで、クリーニング性能について試験した。タンパク質含量はＴＣＡアッセイを用いて測定した。実施例１に記載のようにアッセイを実施し、ＢＰＮ’−ｖ３（ＰＩ値１．０を有する）と比較して性能指数を算出した。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｑ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６２Ｑ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｄ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｑ−Ｓ１０１Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ１００Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並びに上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物１又は４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、スブチリシンプロテアーゼ変異体も提供され、この変異体は配列番号２に対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、この変異体は、Ｘ０２４Ｇ，Ｘ０２５Ｇ，Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０６１Ｐ，Ｘ０６２Ｑ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ０９７Ａ，Ｘ１００Ｄ／Ｎ／Ｑ、Ｘ１０１Ｎ，Ｘ１０２Ａ，Ｘ１１１Ｖ，Ｘ１２３Ａ／Ｑ／Ｖ、Ｘ１２４Ｉ／Ｖ、Ｘ１２８Ａ／Ｓ、Ｘ１２９Ｓ，Ｘ２１０Ｓ，Ｘ２１７Ｑ，の群から選択される少なくとも１つの置換を含み、選択的に、Ｓ０２４Ｇ，Ｎ０２５Ｇ，Ｓ０５３Ｇ，Ｎ０６１Ｐ，Ｎ０６２Ｑ，Ｓ０７８Ｎ，Ｇ０９７Ａ，Ｇ１００Ｄ／Ｎ／Ｑ、Ｓ１０１Ｎ，Ｇ１０２Ａ，Ｉ１１１Ｖ，Ｎ１２３Ａ／Ｑ／Ｖ、Ｍ１２４Ｉ／Ｖ、Ｇ１２８Ａ／Ｓ、Ｐ１２９Ｓ，Ｐ２１０Ｓ，及びＹ２１７Ｑ，の群から選択される少なくとも１つの置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，及びＧ１０２Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、タンパク質分解活性を有するプロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並びに上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６２Ｑ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたがここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｑ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｑ−Ｓ１０１Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ１００Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並びに上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｄ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，及びＧ１０２Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、タンパク質分解活性を有するプロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並びに上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：アミノ酸置換Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，の組を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩを有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸置換Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，及びＧ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｑ−Ｐ２１０Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｐ１２９Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６２Ｑ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｍ１２４Ｉ−Ｙ２１７Ｑ，Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ１００Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｎ−Ｉ１１１Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ｖ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｎ１２３Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ１０２Ａ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｑ−Ｓ１０１Ｎ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｉ１１１Ｖ−Ｎ１２３Ｑ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ０６２Ｑ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１００Ｄ−Ｙ２１７Ｑ，及びＮ０６１Ｐ−Ｇ１０２Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して０．５以上０．９以下のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、タンパク質分解活性を有し、及び／又は本卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して０．５以上０．９以下のＰＩ値を有するプロテアーゼ変異体を含み、変異体は配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並びに上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、スブチリシンプロテアーゼ変異体も提供され、この変異体は配列番号２に対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、この変異体は、Ｘ０２４Ｇ，Ｘ０２５Ｇ，Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０６１Ｐ，Ｘ０６２Ｑ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ０９７Ａ，Ｘ１００Ｄ／Ｎ／Ｑ、Ｘ１０１Ｎ，Ｘ１０２Ａ，Ｘ１１１Ｖ，Ｘ１２３Ａ／Ｑ／Ｖ、Ｘ１２４Ｉ／Ｖ、Ｘ１２８Ａ／Ｓ、Ｘ１２９Ｓ，Ｘ２１０Ｓ，及びＸ２１７Ｑ，の群から選択される少なくとも１つの置換を含み、選択的に、Ｓ０２４Ｇ，Ｎ０２５Ｇ，Ｓ０５３Ｇ，Ｎ０６１Ｐ，Ｎ０６２Ｑ，Ｓ０７８Ｎ，Ｇ０９７Ａ，Ｇ１００Ｄ／Ｎ／Ｑ、Ｓ１０１Ｎ，Ｇ１０２Ａ，Ｉ１１１Ｖ，Ｎ１２３Ａ／Ｑ／Ｖ、Ｍ１２４Ｉ／Ｖ、Ｇ１２８Ａ／Ｓ、Ｐ１２９Ｓ，Ｐ２１０Ｓ，及びＹ２１７Ｑ，の群から選択される少なくとも１つの置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
（実施例６）
ＢＰＮ’変異体の構築及びクリーニング性能
親ＢＰＮ’に基づくＢＰＮ’コンビナトリアルライブラリはＤＮＡ２．０により作成されたものであり、ライゲーション反応物として供給された。枯草菌（B. subtilis）を効率的に形質転換させるため、形質転換前にライゲーション反応混合物中のＤＮＡを増幅させ、形質転換体を実施例２に記載のように増殖させた。これらの変異体を、１６℃及びｐＨ ８での洗剤組成物１及び洗剤組成物４の、ＢＭＩ微小標本アッセイ、並びに１６℃及びｐＨ ８での洗剤組成物４の卵微小標本アッセイを用いて、クリーニング性能について試験した。ＴＣＡアッセイを用いてタンパク質含量を測定し、ＡＡＰＦアッセイを用いてプロテアーゼ活性についてアッセイした。実施例１に記載のようにアッセイを実施し、ＢＰＮ’−ｖ３（ＰＩ値１．０を有する）と比較して性能指数を算出した。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０３８Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４９Ｎ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，及びＴ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｉ０３５Ｖ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１３０Ｇ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０３８Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ａ１１６Ｓ−Ｇ１２８Ａ，及びＴ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、スブチリシンプロテアーゼ変異体も提供され、この変異体は配列番号２に対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、この変異体は、Ｘ０２４Ｇ，Ｘ０２５Ｇ，Ｘ０３５Ｖ，Ｘ０３８Ｇ，Ｘ０５３Ｇ，Ｘ０５５Ｐ，Ｘ０６１Ｐ，Ｘ０７８Ｎ，Ｘ０９７Ａ，Ｘ１０１Ｎ，Ｘ１１６Ｓ，Ｘ１２８Ａ／Ｓ、Ｘ１３０Ｇ，Ｘ２１６Ｑ，Ｘ２１７Ｑ，及びＸ２４９Ｎ，の群から選択される少なくとも１つの置換を含み、選択的に、Ｓ０２４Ｇ，Ｎ０２５Ｇ，Ｉ０３５Ｖ，Ｓ０３８Ｇ，Ｓ０５３Ｇ，Ｔ０５５Ｐ，Ｎ０６１Ｐ，Ｓ０７８Ｎ，Ｇ０９７Ａ，Ｓ１０１Ｎ，Ａ１１６Ｓ，Ｇ１２８Ａ／Ｓ、Ｓ１３０Ｇ，Ｙ２１６Ｑ，Ｙ２１７Ｑ，及びＳ２４９Ｎ，の群から選択される少なくとも１つの置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，及びＴ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０３８Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｉ０３５Ｖ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１３０Ｇ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０３８Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４９Ｎ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，及びＴ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ａ１１６Ｓ−Ｇ１２８Ａ及びＳ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較してタンパク質分解活性が向上し得る。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並びに上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０３８Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ａ１１６Ｓ−Ｇ１２８Ａ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０２４Ｇ−Ｉ０３５Ｖ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所に更に詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのような変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４９Ｎ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０３８Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１３０Ｇ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並びに上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：アミノ酸置換Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．８のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して０．８のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、並びに、アミノ酸置換Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ｓ０２４Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ，Ｎ０６１Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０３８Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４９Ｎ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ａ１１６Ｓ−Ｇ１２８Ａ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０３８Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｔ０５５Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，及びＳ０２４Ｇ−Ｎ０２５Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｎ０６１Ｐ−Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１３０Ｇ−Ｙ２１７Ｑ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ＡＡＰＦタンパク質分解アッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約１２、４超〜約１２、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’プロテアーゼ（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＡＡＰＦアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。
以下のＢＰＮ’変異体：アミノ酸置換Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ＡＡＰＦタンパク質分解アッセイにおいてＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’プロテアーゼ（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＡＡＰＦアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸置換Ｇ０９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ，を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
（実施例７）
ＢＰＮ’−ｖ３６の部位評価ライブラリの構築及び
ＢＰＮ’−ｖ３６変異体のクリーニング性能
ＢＰＮ’−ｖ３６の部位評価ライブラリの構築
ＢＰＮ’−ｖ３６のアミノ酸配列は、以下の配列番号６に記載のものである。
ＡＱＳＶＰＹＧＶＳＱＩＫＡＰＡＬＨＳＱＧＹＴＧＧＮＶＫＶＡＶＩＤＳＧＩＤＳＳＨＰＤＬＫＶＡＧＧＡＳＭＶＰＧＥＴＮＰＦＱＤＮＮＳＨＧＴＨＶＡＧＴＶＡＡＬＮＮＮＩＧＶＬＧＶＡＰＳＡＳＬＹＡＶＫＶＬＧＡＤＧＮＧＱＹＳＷＩＩＮＧＩＥＷＡＩＡＮＮＭＤＶＩＮＭＳＬＧＡＰＳＧＳＡＡＬＫＡＡＶＤＫＡＶＡＳＧＶＶＶＶＡＡＡＧＮＥＧＴＳＧＳＳＳＴＶＧＹＰＧＫＹＰＳＶＩＡＶＧＡＶＤＳＳＮＱＲＡＳＦＳＳＶＧＰＥＬＤＶＭＡＰＧＶＳＩＱＳＴＬＰＧＮＫＹＧＡＱＮＧＴＳＭＡＳＰＨＶＡＧＡＡＡＬＩＬＳＫＨＰＮＷＴＮＴＱＶＲＳＳＬＥＮＴＴＴＫＬＧＤＳＦＹＹＧＫＧＬＩＮＶＱＡＡＡＱ（配列番号６）
ＢＰＮ’−ｖ３６プロテアーゼ変異型をコードする核酸配列は以下のものである。
Ｇｃｇｃａｇｔｃｃｇｔｇｃｃｔｔａｃｇｇｃｇｔａｔｃａｃａａａｔｔａａａｇｃｃｃｃｔｇｃｔｃｔｇｃａｃｔｃｔｃａａｇｇｃｔａｃａｃｔｇｇａｇｇｃａａｔｇｔｔａａａｇｔａｇｃｇｇｔｔａｔｃｇａｃａｇｃｇｇｔａｔｃｇａｃｔｃｇａｇｃｃａｔｃｃａｇａｔｃｔｔａａａｇｔｃｇｃｔｇｇａｇｇｇｇｃｔｔｃｔａｔｇｇｔｇｃｃｇｇｇｃｇａａａｃａａａｃｃｃｇｔｔｔｃａａｇａｔａａｃａａｔｔｃｔｃａｔｇｇｃａｃａｃａｃｇｔｃｇｃａｇｇａａｃｇｇｔｔｇｃｇｇｃｇｔｔａａａｃａａｔａａｔａｔｔｇｇｃｇｔｇｃｔｔｇｇｔｇｔａｇｃｃｃｃｇｔｃｔｇｃｔｔｃｇｃｔｃｔａｃｇｃｃｇｔｔａａａｇｔｔｃｔｔｇｇｃｇｃａｇａｃｇｇａａａｔｇｇｃｃａａｔａｃｔｃａｔｇｇａｔｔａｔｃａａｃｇｇｃａｔｃｇａａｔｇｇｇｃｃａｔｃｇｃｇａａｔａａｃａｔｇｇａｔｇｔａａｔｃａａｃａｔｇａｇｃｃｔｇｇｇａｇｃａｃｃａａｇｃｇｇｃａｇｔｇｃｇｇｃａｃｔｔａａａｇｃａｇｃａｇｔｔｇａｔａａａｇｃｔｇｔｔｇｃａｔｃｔｇｇｔｇｔｃｇｔｃｇｔａｇｔａｇｃｇｇｃａｇｃｔｇｇｇａａｔｇａｇｇｇａａｃａｔｃｃｇｇａｔｃａｔｃｇａｇｔａｃｃｇｔｃｇｇｔｔａｔｃｃａｇｇｃａａｇｔａｃｃｃｔｔｃａｇｔｇａｔｔｇｃａｇｔｇｇｇｃｇｃｔｇｔａｇａｃｔｃｔｔｃａａａｔｃａａｃｇｔｇｃｃｔｃｔｔｔｔｔｃｃｔｃｃｇｔｇｇｇａｃｃｇｇａｇｃｔｇｇａｔｇｔｃａｔｇｇｃｃｃｃｔｇｇｃｇｔｔｔｃｔａｔｔｃａａｔｃｇａｃｇｃｔｔｃｃａｇｇｇａａｃａａｇｔａｔｇｇｔｇｃｇｃａａａａｃｇｇｇａｃｔｔｃｃａｔｇｇｃｃｔｃｇｃｃｇｃａｔｇｔａｇｃｔｇｇｇｇｃｇｇｃｃｇｃａｔｔｇａｔｔｃｔｔｔｃｔａａｇｃａｃｃｃｇａａｃｔｇｇａｃａａａｃａｃｔｃａａｇｔｃｃｇｃａｇｃａｇｔｔｔａｇａａａａｃａｃｃａｃｔａｃａａａａｃｔｔｇｇｔｇａｔｔｃｔｔｔｃｔａｃｔａｔｇｇａａａａｇｇｇｃｔｇａｔｃａａｃｇｔａｃａｇｇｃｇｇｃａｇｃｔｃａｇ（配列番号５）
ＢＰＮ’−ｖ３６のアミノ酸配列は、配列番号２のスブチリシンＢＰＮ’アミノ酸配列を参照することにより表わすことができる。すなわち、ＢＰＮ’−ｖ３６は、６つのアミノ酸置換Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑを有する、配列番号２のスブチリシンＢＰＮ’配列として表すことができる。アミノ酸配列ＢＰＮ’−ｖ３６は、便宜上ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ又はＢＰＮ’＋Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑとして表記することもできる。本明細書を通して、特に指定のない限り、アミノ酸配列の各アミノ酸位置は、変異体のアミノ酸配列をバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’アミノ酸配列とアラインメントすることによって決定される、配列番号２に示されるバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列における対応するアミノ酸位置の番号付けに従って番号付けされる。
融合ＰＣＲにより、成熟型ＢＰＮ’−ｖ３６（すなわち、ＢＰＮ’−Ｓ２４Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ）タンパク質における単独アミノ酸位置各々にて部位評価ライブラリ（ＳＥＬ）を作成した。
各コドンがＢＰＮ’−ｖ３６プロテアーゼ中で変異するように、部分的に重複している相補的な（変異原性の、順方向及び逆方向）プライマー対を設計した。各変異原性プライマーには、両側に少なくとも１５ヌクレオチド隣接させた中央にＮＮＳ（Ｎ＝Ａ、Ｃ、Ｇ、又はＴ、及びＳ＝Ｇ又はＣ）変異原性コドンを含有させた。所定の位置のライブラリを作成するために、共通の順方向遺伝子に隣接するプライマー（Ｐ４９７４、ＧＣＣＴＣＡＣＡＴＴＴＧＴＧＣＣＡＣＣＴＡ；配列番号６０）及び変異原性ＮＮＳ逆方向プライマー、あるいは共通の逆方向遺伝子に隣接するプライマー（Ｐ４９７６、ＣＣＴＣＴＣＧＧＴＴＡＴＧＡＧＴＴＡＧＴＴＣ；配列番号６１）及び変異原性ＮＮＳ順方向プライマーのいずれかを用いて、２つのＰＣＲ反応を実施した。これらのＰＣＲ反応は、２種のＰＣＲ断片を生成したが、一方は変異ＢＰＮ’−ｖ３６遺伝子の５’側半分（５’遺伝子断片）をコードするものであり、他方は変異ＢＰＮ’−ｖ３６遺伝子の３’側半分（３’遺伝子断片）をコードするものである。
各ＰＣＲ増幅反応には、３０ｐｍｏｌの各プライマー及び１００ｎｇのＢＰＮ’−ｖ３６親テンプレートＤＮＡ（ｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’−ｖ３６プラスミド、図４を参照されたい）を含有させた。増幅はＶｅｎｔ ＤＮＡポリメラーゼ（ＮＥＢ）を用いて実施した。ＰＣＲ反応（２０μＬ）は、まず始めに９５℃で２．５分加熱した後、続いて９４℃で１５秒の変性、５５℃で１５秒のアニーリング、及び７２℃で４０秒の伸長を３０サイクル行った。増幅させた後、５’及び３’遺伝子断片を、ＱＩＡＧＥＮ（登録商標）ゲルバンド精製用キットによりゲル精製し、混合して（各断片につき５０ｎｇ）、プライマーＰ４９７３（ＡＡＡＧＧＡＴＣＣＴＡＡＴＣＧＧＣＧＣＴＴＴＴＣ、配列番号６２）及びＰ４９５０（ＣＴＴＧＴＣＴＣＣＡＡＧＣＴＴＡＡＡＡＴＡＡＡＡ、配列番号６３）を用いて再度ＰＣＲで混合及び増幅させて、完全長の遺伝子断片を生成した。伸長工程を７２℃で２分にわたって実施したことを除き、ＰＣＲ条件は上記の条件と同様のものであった。完全長のＤＮＡ断片をＱＩＡＧＥＮ（登録商標）ゲルバンド精製用キットによりゲル精製し、制限酵素ＢａｍＨＩ及びＨｉｎｄＩＩＩで消化し、同様の制限酵素で消化したｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’ｐａｒｔｉａｌ ｏｐｔベクターとライゲーションさせた。Ｉｌｌｕｓｔｒａ Ｔｅｍｐｌｉｐｈｉキットでローリング・サークル型増幅法を用い、ライゲーション混合物を製造元（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の推奨に従って増幅させることで、枯草菌（Bacillus subtilis）に形質転換させるための多量体ＤＮＡを生成した。この目的のため、１μＬのライゲーション混合物と５μＬのサンプル緩衝液を混合し、９５℃で３分間加熱し、氷中で冷却した。次に、５μＬの反応緩衝液及び０．２μＬの酵素を各チューブに加え、続いて３０℃で１０時間にわたってインキュベートした。ローリング・サークル型増幅産物を１００倍希釈し、枯草菌（B. subtilis）細胞の形質転換に用いた（ΔａｐｒＥ，ΔｎｐｒＥ，ａｍｙＥ：：ｘｙｌＲＰｘｙｌＡｃｏｍＫ−ｐｈｌｅｏ）。形質転換混合物のアリコートを、１．６％のスキムミルク及び１０μｇ／ｍＬのネオマイシンを含有しているＬＢプレートに蒔き、３７℃で一晩インキュベートした。続いて、ハローを有するコロニーを、１０μｇ／ｍＬのネオマイシンを含有している１５０μＬのＬＢ培地に接種した。翌日、培養物は１５％のグリセロールと共に凍結させるか、あるいは実施例２に記載されるような生化学的解析のためにＭＤＢ培地で増殖させた。
ＢＰＮ’−ｖ３６変異体のクリーニング性能
１６℃及びｐＨ ８での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本アッセイ、並びに１６℃及びｐＨ ８での洗剤組成物４の卵微小標本アッセイを用いて、ＢＰＮ’−ｖ３６ＳＥＬ由来のタンパク質変異体をクリーニング性能について試験した。タンパク質含量はＴＣＡアッセイを用いて測定した。実施例１に記載のようにアッセイを実施し、ＢＰＮ’−ｖ３６（すなわち、ＢＰＮ’−Ｓ２４Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ）（ＰＩ値１．０を有する）と比較して性能指数を算出した。
以下のＢＰＮ’変異体：Ａ１１６Ｖ，Ｇ１６０Ｓ，Ｉ１１１Ｌ，Ｉ１１５Ｖ，Ｎ１０９Ｓ，Ｎ１１７Ｍ，Ｐ００５Ｇ，Ｑ０５９Ｖ，Ｔ１６４Ｓ，Ｙ２６２Ｍ，Ａ０１５Ｑ，Ａ０１５Ｓ，Ａ０９８Ｅ，Ａ０９８Ｎ，Ａ０９８Ｓ，Ａ０９８Ｔ，Ａ０９８Ｖ，Ａ０９８Ｙ，Ａ１１４Ｓ，Ａ１１４Ｔ，Ａ１１６Ｇ，Ａ１１６Ｌ，Ａ１１６Ｓ，Ａ１１６Ｔ，Ａ１１６Ｗ，Ａ１３３Ｇ，Ａ１３３Ｈ，Ａ１３３Ｔ，Ａ１３３Ｖ，Ａ１３７Ｇ，Ａ１３７Ｉ，Ａ１３７Ｌ，Ａ１３７Ｓ，Ａ１３７Ｔ，Ａ１３８Ｓ，Ａ２１６Ｅ，Ａ２１６Ｆ，Ａ２１６Ｖ，Ｄ０９９Ｓ，Ｄ１８１Ｅ，Ｆ２６１Ａ，Ｆ２６１Ｑ，Ｇ０２４Ｆ，Ｇ０２４Ｉ，Ｇ０２４Ｑ，Ｇ０２４Ｙ，Ｇ０９７Ｓ，Ｇ１６０Ｔ，Ｇ２１１Ｌ，Ｇ２１１Ｖ，Ｈ０１７Ｆ，Ｈ０１７Ｗ，Ｈ０３９Ｖ，Ｈ２２６Ａ，Ｉ０３１Ｖ，Ｉ１１１Ｖ，Ｉ２６８Ｖ，Ｋ１７０Ｒ，Ｋ２６５Ｒ，Ｌ０１６Ｑ，Ｌ０１６Ｔ，Ｌ１３５Ｍ，Ｌ２０９Ｔ，Ｌ２０９Ｖ，Ｌ２３３Ｍ，Ｌ２５７Ｔ，Ｌ２５７Ｖ，Ｌ２６７Ａ，Ｌ２６７Ｖ，Ｎ０２５Ａ，Ｎ０２５Ｉ，Ｎ０２５Ｑ，Ｎ０２５Ｒ，Ｎ０２５Ｔ，Ｎ０２５Ｖ，Ｎ１０１Ｉ，Ｎ１０１Ｑ，Ｎ１０１Ｓ，Ｎ１０９Ａ，Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｈ，Ｎ１０９Ｌ，Ｎ１０９Ｍ，Ｎ１０９Ｑ，Ｎ１０９Ｔ，Ｎ１１７Ｑ，Ｎ１８４Ａ，Ｎ１８４Ｌ，Ｎ１８４Ｔ，Ｎ１８４Ｗ，Ｎ２１２Ｇ，Ｎ２１２Ｌ，Ｎ２１２Ｖ，Ｎ２４３Ｐ，Ｎ２５２Ｇ，Ｎ２５２Ｍ，Ｐ００５Ｔ，Ｐ０１４Ｓ，Ｐ０４０Ｇ，Ｐ０４０Ｌ，Ｐ０４０Ｑ，Ｐ１２９Ａ，Ｐ１２９Ｓ，Ｐ１７２Ｇ，Ｐ１７２Ｓ，Ｐ１９４Ｑ，Ｐ２１０Ａ，Ｐ２１０Ｓ，Ｑ１８５Ｆ，Ｑ１８５Ｇ，Ｑ１８５Ｉ，Ｑ１８５Ｍ，Ｑ１８５Ｎ，Ｑ１８５Ｓ，Ｑ２７５Ｈ，Ｒ１８６Ｋ，Ｓ００９Ａ，Ｓ００９Ｇ，Ｓ００９Ｈ，Ｓ００９Ｍ，Ｓ０１８Ｔ，Ｓ１３０Ｔ，Ｓ１３２Ｎ，Ｓ１４５Ｋ，Ｓ１５９Ｔ，Ｓ１６１Ｉ，Ｓ１６１Ｋ，Ｓ１６１Ｎ，Ｓ１６１Ｔ，Ｓ１６２Ｉ，Ｓ１６２Ｍ，Ｓ１６２Ｙ，Ｓ１６３Ｇ，Ｓ１８２Ｆ，Ｓ１８２Ｇ，Ｓ１８２Ｖ，Ｓ１８２Ｗ，Ｓ１８３Ｆ，Ｓ１８３Ｌ，Ｓ１８３Ｍ，Ｓ１８３Ｔ，Ｓ１８３Ｖ，Ｓ１８３Ｗ，Ｓ２２４Ａ，Ｓ２３６Ｔ，Ｓ２４９Ｖ，Ｔ０２２Ａ，Ｔ０２２Ｇ，Ｔ０２２Ｑ，Ｔ０２２Ｖ，Ｔ２０８Ｖ，Ｔ２４２Ｓ，Ｔ２５３Ｎ，Ｔ２５３Ｓ，Ｔ２５４Ａ，Ｔ２５４Ｓ，Ｔ２５５Ｌ，Ｔ２５５Ｓ，Ｔ２５５Ｖ，Ｖ００４Ａ，Ｖ００４Ｐ，Ｖ００４Ｗ，Ｖ０８４Ｃ，Ｖ１３９Ｃ，Ｖ１６５Ｍ，Ｖ２０３Ｆ，Ｙ０２１Ｋ，Ｙ０２１Ｎ，Ｙ０２１Ｔ，Ｙ０２１Ｖ，Ｙ１６７Ｆ，Ｙ１７１Ｆ，Ｙ２１４Ｆ，Ｙ２６２Ｆ，及びＹ２６２Ｔ，からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ（配列番号６）（すなわち、ＢＰＮ’−ｖ３６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３のＰＩ値を超えるＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１、２、３、４、５、６又はそれ以上のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｇ，Ａ００１Ｙ，Ａ０１３Ｇ，Ａ０１３Ｖ，Ａ０１５Ｆ，Ａ０１５Ｇ，Ａ０１５Ｋ，Ａ０１５Ｍ，Ａ０１５Ｐ，Ａ０１５Ｔ，Ａ０１５Ｗ，Ａ０１５Ｙ，Ａ０２９Ｇ，Ａ０７３Ｓ，Ａ０８８Ｃ，Ａ０８８Ｉ，Ａ０８８Ｌ，Ａ０８８Ｔ，Ａ０８８Ｖ，Ａ０９８Ｄ，Ａ０９８Ｋ，Ａ０９８Ｐ，Ａ０９８Ｒ，Ａ０９８Ｗ，Ａ１１６Ｄ，Ａ１１６Ｅ，Ａ１１６Ｒ，Ａ１２８Ｓ，Ａ１３３Ｌ，Ａ１３３Ｍ，Ａ１３３Ｓ，Ａ１３４Ｇ，Ａ１３４Ｓ，Ａ１３７Ｎ，Ａ１３７Ｖ，Ａ１４４Ｍ，Ａ１４４Ｑ，Ａ１４４Ｓ，Ａ１４４Ｔ，Ａ１４４Ｖ，Ａ１５１Ｃ，Ａ１７６Ｓ，Ａ１７６Ｔ，Ａ１７９Ｓ，Ａ２１６Ｇ，Ａ２１６Ｌ，Ａ２１６Ｐ，Ａ２１６Ｑ，Ａ２１６Ｓ，Ａ２１６Ｔ，Ａ２１６Ｙ，Ａ２２８Ｔ，Ａ２３０Ｃ，Ａ２３１Ｃ，Ａ２７２Ｉ，Ａ２７２Ｌ，Ａ２７２Ｑ，Ａ２７２Ｓ，Ａ２７２Ｔ，Ａ２７２Ｗ，Ａ２７３Ｓ，Ａ２７４Ｇ，Ａ２７４Ｌ，Ａ２７４Ｑ，Ａ２７４Ｔ，Ａ２７４Ｖ，Ｄ０４１Ｅ，Ｄ０９９Ｇ，Ｄ０９９Ｎ，Ｄ１２０Ａ，Ｄ１２０Ｋ，Ｄ１２０Ｑ，Ｄ１２０Ｒ，Ｄ１２０Ｓ，Ｄ１４０Ｅ，Ｄ１８１Ｓ，Ｄ２５９Ｅ，Ｅ０５４Ｄ，Ｅ１５６Ｄ，Ｅ１５６Ｔ，Ｅ２５１Ｖ，Ｆ２６１Ｇ，Ｆ２６１Ｈ，Ｆ２６１Ｌ，Ｆ２６１Ｒ，Ｆ２６１Ｓ，Ｆ２６１Ｔ，Ｆ２６１Ｖ，Ｆ２６１Ｗ，Ｇ００７Ａ，Ｇ００７Ｓ，Ｇ０２０Ａ，Ｇ０２０Ｄ，Ｇ０２０Ｓ，Ｇ０２４Ｎ，Ｇ０２４Ｒ，Ｇ０２４Ｓ，Ｇ０２４Ｔ，Ｇ０２４Ｖ，Ｇ０２４Ｗ，Ｇ０５３Ｈ，Ｇ０５３Ｋ，Ｇ０５３Ｎ，Ｇ０５３Ｔ，Ｇ０９７Ａ，Ｇ０９７Ｄ，Ｇ０９７Ｔ，Ｇ１３１Ａ，Ｇ１３１Ｈ，Ｇ１３１Ｐ，Ｇ１３１Ｑ，Ｇ１３１Ｔ，Ｇ１３１Ｖ，Ｇ１６０Ｈ，Ｇ１６０Ｐ，Ｇ１６６Ａ，Ｇ１６６Ｓ，Ｇ１６６Ｔ，Ｇ２１１Ａ，Ｇ２１１Ｄ，Ｇ２１１Ｍ，Ｇ２１１Ｎ，Ｇ２１１Ｐ，Ｇ２１１Ｑ，Ｇ２１１Ｒ，Ｇ２１１Ｗ，Ｇ２１５Ａ，Ｇ２１５Ｎ，Ｇ２１５Ｖ，Ｈ０１７Ｌ，Ｈ０１７Ｍ，Ｈ０１７Ｔ，Ｈ０１７Ｖ，Ｈ０１７Ｙ，Ｈ０３９Ａ，Ｈ０３９Ｃ，Ｈ０３９Ｎ，Ｈ２２６Ｆ，Ｈ２２６Ｉ，Ｈ２２６Ｍ，Ｈ２２６Ｓ，Ｈ２２６Ｖ，Ｈ２２６Ｙ，Ｉ０３５Ｖ，Ｉ０７９Ａ，Ｉ０７９Ｓ，Ｉ０７９Ｔ，Ｉ０７９Ｖ，Ｉ０７９Ｗ，Ｉ１０８Ｖ，Ｉ１１５Ｌ，Ｉ１２２Ａ，Ｉ２３４Ｌ，Ｉ２３４Ｖ，Ｋ０１２Ｒ，Ｋ０２７Ｒ，Ｋ１３６Ｒ，Ｋ１４１Ｆ，Ｋ２１３Ｗ，Ｋ２３７Ｒ，Ｋ２５６Ｒ，Ｋ２６５Ｑ，Ｌ０１６Ａ，Ｌ０１６Ｆ，Ｌ０１６Ｉ，Ｌ０１６Ｓ，Ｌ０１６Ｖ，Ｌ０４２Ｉ，Ｌ０７５Ａ，Ｌ０７５Ｍ，Ｌ０７５Ｑ，Ｌ０７５Ｖ，Ｌ０７５Ｙ，Ｌ０８２Ｋ，Ｌ０８２Ｍ，Ｌ０８２Ｑ，Ｌ０８２Ｖ，Ｌ０９０Ｉ，Ｌ１９６Ｉ，Ｌ１９６Ｖ，Ｌ２０９Ｑ，Ｌ２０９Ｗ，Ｌ２３３Ａ，Ｌ２３３Ｑ，Ｌ２３３Ｖ，Ｌ２３５Ｉ，Ｌ２３５Ｋ，Ｌ２５０Ｉ，Ｌ２５７Ａ，Ｌ２５７Ｈ，Ｌ２５７Ｑ，Ｌ２５７Ｓ，Ｌ２５７Ｙ，Ｌ２６７Ｑ，Ｌ２６７Ｒ，Ｌ２６７Ｓ，Ｌ２６７Ｔ，Ｍ１９９Ｖ，Ｎ０２５Ｆ，Ｎ０２５Ｇ，Ｎ０２５Ｈ，Ｎ０２５Ｋ，Ｎ０２５Ｌ，Ｎ０２５Ｍ，Ｎ０２５Ｓ，Ｎ０２５Ｙ，Ｎ０６１Ｆ，Ｎ０６１Ｈ，Ｎ０６１Ｐ，Ｎ０６１Ｓ，Ｎ０６１Ｔ，Ｎ０６１Ｖ，Ｎ０６１Ｗ，Ｎ０７６Ｇ，Ｎ０７６Ｗ，Ｎ０７８Ｓ，Ｎ０７８Ｔ，Ｎ０７８Ｖ，Ｎ１０１Ａ，Ｎ１０１Ｈ，Ｎ１０１Ｌ，Ｎ１０１Ｔ，Ｎ１０９Ｋ，Ｎ１０９Ｒ，Ｎ１１７Ａ，Ｎ１１７Ｅ，Ｎ１１７Ｈ，Ｎ１１７Ｋ，Ｎ１１８Ｇ，Ｎ１８４Ｇ，Ｎ１８４Ｈ，Ｎ１８４Ｉ，Ｎ１８４Ｓ，Ｎ１８４Ｖ，Ｎ２１２Ａ，Ｎ２１２Ｆ，Ｎ２１２Ｉ，Ｎ２１２Ｋ，Ｎ２１２Ｐ，Ｎ２１２Ｑ，Ｎ２１２Ｓ，Ｎ２１２Ｙ，Ｎ２１８Ａ，Ｎ２１８Ｈ，Ｎ２１８Ｌ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２４０Ｅ，Ｎ２４０Ｈ，Ｎ２４０Ｌ，Ｎ２４０Ｒ，Ｎ２４０Ｔ，Ｎ２４３Ａ，Ｎ２４３Ｑ，Ｎ２４３Ｔ，Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２５２Ａ，Ｎ２５２Ｋ，Ｎ２５２Ｌ，Ｎ２５２Ｑ，Ｎ２５２Ｒ，Ｎ２５２Ｓ，Ｎ２５２Ｔ，Ｎ２６９Ｑ，Ｎ２６９Ｓ，Ｐ０１４Ｇ，Ｐ０１４Ｑ，Ｐ０１４Ｔ，Ｐ０４０Ａ，Ｐ０４０Ｈ，Ｐ０４０Ｓ，Ｐ０４０Ｔ，Ｐ０４０Ｖ，Ｐ０４０Ｙ，Ｐ０８６Ａ，Ｐ０８６Ｃ，Ｐ０８６Ｆ，Ｐ０８６Ｈ，Ｐ０８６Ｓ，Ｐ１２９Ｄ，Ｐ１２９Ｇ，Ｐ１２９Ｋ，Ｐ１２９Ｔ，Ｐ１７２Ａ，Ｐ１７２Ｑ，Ｐ１９４Ａ，Ｐ１９４Ｇ，Ｐ１９４Ｌ，Ｐ１９４Ｍ，Ｐ１９４Ｓ，Ｐ１９４Ｖ，Ｐ１９４Ｙ，Ｐ２１０Ｇ，Ｐ２１０Ｒ，Ｐ２１０Ｖ，Ｑ００２Ａ，Ｑ００２Ｓ，Ｑ０１０Ａ，Ｑ０１０Ｆ，Ｑ０１０Ｈ，Ｑ０１０Ｉ，Ｑ０１０Ｌ，Ｑ０１０Ｎ，Ｑ０１０Ｓ，Ｑ０１０Ｔ，Ｑ０１９Ａ，Ｑ０１９Ｇ，Ｑ０１９Ｎ，Ｑ０１９Ｓ，Ｑ０１９Ｔ，Ｑ０１９Ｖ，Ｑ０１９Ｗ，Ｑ０５９Ｉ，Ｑ１０３Ｌ，Ｑ１０３Ｓ，Ｑ１８５Ａ，Ｑ１８５Ｈ，Ｑ１８５Ｌ，Ｑ１８５Ｔ，Ｑ１８５Ｙ，Ｑ２０６Ｐ，Ｑ２０６Ｓ，Ｑ２０６Ｙ，Ｑ２１７Ｉ，Ｑ２１７Ｎ，Ｑ２１７Ｓ，Ｑ２１７Ｔ，Ｑ２４５Ｋ，Ｑ２７５Ｄ，Ｑ２７５Ｓ，Ｑ２７５Ｗ，Ｓ００３Ａ，Ｓ００３Ｇ，Ｓ００３Ｈ，Ｓ００３Ｍ，Ｓ００３Ｐ，Ｓ００３Ｑ，Ｓ００３Ｔ，Ｓ００３Ｖ，Ｓ００９Ｉ，Ｓ００９Ｌ，Ｓ００９Ｐ，Ｓ００９Ｔ，Ｓ００９Ｗ，Ｓ０１８Ａ，Ｓ０１８Ｇ，Ｓ０１８Ｉ，Ｓ０１８Ｌ，Ｓ０１８Ｍ，Ｓ０１８Ｎ，Ｓ０１８Ｐ，Ｓ０１８Ｖ，Ｓ０１８Ｗ，Ｓ０３３Ｔ，Ｓ０３７Ｑ，Ｓ０３７Ｔ，Ｓ０３７Ｖ，Ｓ０３８Ｇ，Ｓ０３８Ｈ，Ｓ０３８Ｋ，Ｓ０３８Ｑ，Ｓ０３８Ｔ，Ｓ０６３Ｋ，Ｓ０６３Ｎ，Ｓ０６３Ｑ，Ｓ０６３Ｔ，Ｓ０８７Ａ，Ｓ０８７Ｆ，Ｓ０８７Ｇ，Ｓ０８７Ｑ，Ｓ０８７Ｔ，Ｓ０８９Ｌ，Ｓ０８９Ｍ，Ｓ０８９Ｎ，Ｓ０８９Ｑ，Ｓ０８９Ｔ，Ｓ０８９Ｗ，Ｓ１３０Ａ，Ｓ１３０Ｆ，Ｓ１３０Ｇ，Ｓ１３０Ｌ，Ｓ１３０Ｖ，Ｓ１４５Ａ，Ｓ１４５Ｈ，Ｓ１４５Ｍ，Ｓ１４５Ｖ，Ｓ１５９Ａ，Ｓ１５９Ｇ，Ｓ１５９Ｈ，Ｓ１５９Ｑ，Ｓ１５９Ｒ，Ｓ１６１Ａ，Ｓ１６１Ｇ，Ｓ１６１Ｈ，Ｓ１６１Ｌ，Ｓ１６１Ｍ，Ｓ１６１Ｐ，Ｓ１６１Ｑ，Ｓ１６１Ｗ，Ｓ１６２Ａ，Ｓ１６２Ｆ，Ｓ１６２Ｇ，Ｓ１６２Ｌ，Ｓ１６２Ｎ，Ｓ１６２Ｐ，Ｓ１６２Ｒ，Ｓ１６２Ｖ，Ｓ１６３Ｐ，Ｓ１７３Ａ，Ｓ１７３Ｇ，Ｓ１８２Ａ，Ｓ１８２Ｈ，Ｓ１８２Ｋ，Ｓ１８２Ｌ，Ｓ１８２Ｎ，Ｓ１８２Ｐ，Ｓ１８２Ｑ，Ｓ１８２Ｔ，Ｓ１８３Ａ，Ｓ１８３Ｇ，Ｓ１８３Ｈ，Ｓ１８３Ｑ，Ｓ１８８Ａ，Ｓ１８８Ｇ，Ｓ１８８Ｔ，Ｓ１８８Ｖ，Ｓ１９１Ａ，Ｓ２０４Ａ，Ｓ２０４Ｉ，Ｓ２０４Ｌ，Ｓ２０４Ｑ，Ｓ２０４Ｖ，Ｓ２２４Ｃ，Ｓ２３６Ａ，Ｓ２３６Ｎ，Ｓ２３６Ｑ，Ｓ２４８Ａ，Ｓ２４８Ｆ，Ｓ２４８Ｇ，Ｓ２４８Ｉ，Ｓ２４８Ｋ，Ｓ２４８Ｌ，Ｓ２４８Ｍ，Ｓ２４８Ｎ，Ｓ２４８Ｑ，Ｓ２４８Ｔ，Ｓ２４８Ｖ，Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４９Ｃ，Ｓ２４９Ｈ，Ｓ２４９Ｑ，Ｓ２４９Ｔ，Ｓ２４９Ｗ，Ｓ２４９Ｙ，Ｓ２６０Ｈ，Ｓ２６０Ｎ，Ｓ２６０Ｐ，Ｓ２６０Ｔ，Ｔ０２２Ｈ，Ｔ０２２Ｋ，Ｔ０２２Ｎ，Ｔ０２２Ｒ，Ｔ０２２Ｓ，Ｔ０２２Ｙ，Ｔ０５５Ａ，Ｔ０５５Ｇ，Ｔ０５５Ｌ，Ｔ０５５Ｎ，Ｔ０５５Ｐ，Ｔ０５５Ｑ，Ｔ０７１Ｓ，Ｔ１５８Ｈ，Ｔ１５８Ｓ，Ｔ１６４Ｎ，Ｔ２０８Ｃ，Ｔ２０８Ｌ，Ｔ２２０Ｓ，Ｔ２４２Ｎ，Ｔ２４４Ａ，Ｔ２４４Ｇ，Ｔ２４４Ｈ，Ｔ２４４Ｉ，Ｔ２４４Ｑ，Ｔ２４４Ｓ，Ｔ２４４Ｖ，Ｔ２４４Ｗ，Ｔ２５３Ａ，Ｔ２５３Ｇ，Ｔ２５３Ｈ，Ｔ２５３Ｑ，Ｔ２５４Ｖ，Ｔ２５５Ａ，Ｔ２５５Ｇ，Ｔ２５５Ｈ，Ｔ２５５Ｉ，Ｔ２５５Ｑ，Ｔ２５５Ｙ，Ｖ００４Ｇ，Ｖ００４Ｎ，Ｖ００４Ｒ，Ｖ００８Ａ，Ｖ００８Ｃ，Ｖ００８Ｍ，Ｖ０２６Ｉ，Ｖ０４４Ｉ，Ｖ０４４Ｌ，Ｖ０４５Ｈ，Ｖ０４５Ｋ，Ｖ０４５Ｌ，Ｖ０４５Ｍ，Ｖ０４５Ｑ，Ｖ０４５Ｓ，Ｖ０４５Ｖ，Ｖ０４５Ｗ，Ｖ０４５Ｙ，Ｖ０５１Ｉ，Ｖ０８１Ｌ，Ｖ０８１Ｑ，Ｖ０８１Ｔ，Ｖ０８４Ａ，Ｖ０８４Ｓ，Ｖ０８４Ｔ，Ｖ０９３Ｉ，Ｖ１２１Ｉ，Ｖ１４３Ｎ，Ｖ１４３Ｓ，Ｖ１４３Ｙ，Ｖ１４７Ｃ，Ｖ１４７Ｉ，Ｖ１４７Ｌ，Ｖ１４７Ｔ，Ｖ１８０Ｉ，Ｖ１８０Ｌ，Ｖ１８０Ｔ，Ｖ１９２Ａ，Ｖ１９２Ｓ，Ｖ１９２Ｔ，Ｖ１９８Ｉ，Ｖ１９８Ｌ，Ｖ１９８Ｍ，Ｖ２０３Ｈ，Ｖ２０３Ｉ，Ｖ２０３Ｌ，Ｖ２０３Ｎ，Ｖ２０３Ｑ，Ｖ２０３Ｔ，Ｖ２０３Ｗ，Ｖ２０３Ｙ，Ｖ２７０Ａ，Ｖ２７０Ｓ，Ｖ２７０Ｔ，Ｗ２４１Ｍ，Ｗ２４１Ｙ，Ｙ００６Ｇ，Ｙ００６Ｈ，Ｙ００６Ｉ，Ｙ００６Ｋ，Ｙ００６Ｌ，Ｙ００６Ｐ，Ｙ００６Ｑ，Ｙ００６Ｔ，Ｙ００６Ｖ，Ｙ００６Ｗ，Ｙ０２１Ａ，Ｙ０２１Ｄ，Ｙ０２１Ｅ，Ｙ０２１Ｌ，Ｙ０２１Ｑ，Ｙ０２１Ｒ，Ｙ０２１Ｓ，Ｙ１０４Ｆ，Ｙ１０４Ｉ，Ｙ２１４Ｌ，Ｙ２１４Ｖ，Ｙ２１４Ｗ，Ｙ２６２Ａ，Ｙ２６２Ｇ，Ｙ２６２Ｌ，Ｙ２６２Ｎ，Ｙ２６２Ｓ，Ｙ２６２Ｗ，Ｙ２６３Ｇ，及びＹ２６３Ｗ，からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。したがって、例えば、本発明は、置換Ａ１２８Ｓ，を含むアミノ酸配列ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）、例えば、ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ｓ−Ｙ２１７Ｑを含む。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１、２、３、４、５、６又はそれ以上のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｆ，Ａ００１Ｋ，Ａ００１Ｌ，Ａ００１Ｍ，Ａ００１Ｑ，Ａ００１Ｒ，Ａ００１Ｓ，Ａ００１Ｔ，Ａ００１Ｖ，Ａ０１３Ｃ，Ａ０１３Ｓ，Ａ０１５Ｄ，Ａ０１５Ｅ，Ａ０１５Ｌ，Ａ０１５Ｒ，Ａ０４８Ｓ，Ａ０７３Ｎ，Ａ０７３Ｔ，Ａ０７４Ｇ，Ａ０７４Ｓ，Ａ０８５Ｃ，Ａ０８５Ｇ，Ａ０８５Ｓ，Ａ０８５Ｖ，Ａ０８８Ｍ，Ａ０８８Ｓ，Ａ０９２Ｓ，Ａ０９８Ｇ，Ａ１１４Ｇ，Ａ１３３Ｐ，Ａ１３７Ｅ，Ａ１３７Ｈ，Ａ１４４Ｇ，Ａ１４４Ｈ，Ａ１４４Ｋ，Ａ１４４Ｌ，Ａ１４４Ｎ，Ａ１５３Ｓ，Ａ１５３Ｖ，Ａ１７６Ｃ，Ａ１７９Ｇ，Ａ１８７Ｇ，Ａ１８７Ｓ，Ａ２００Ｇ，Ａ２１６Ｗ，Ａ２２３Ｓ，Ａ２２８Ｓ，Ａ２３０Ｔ，Ａ２３０Ｖ，Ａ２３１Ｖ，Ａ２３２Ｃ，Ａ２３２Ｖ，Ａ２７２Ｅ，Ａ２７２Ｇ，Ａ２７２Ｋ，Ａ２７２Ｐ，Ａ２７３Ｇ，Ａ２７３Ｌ，Ａ２７３Ｖ，Ａ２７４Ｍ，Ａ２７４Ｒ，Ｄ０３６Ｅ，Ｄ０９９Ａ，Ｄ０９９Ｑ，Ｄ１２０Ｅ，Ｄ１８１Ａ，Ｄ１８１Ｇ，Ｄ２５９Ａ，Ｄ２５９Ｇ，Ｄ２５９Ｑ，Ｄ２５９Ｔ，Ｅ１５６Ａ，Ｅ１５６Ｓ，Ｅ２５１Ｉ，Ｅ２５１Ｌ，Ｅ２５１Ｑ，Ｅ２５１Ｔ，Ｆ０５８Ｙ，Ｆ２６１Ｃ，Ｆ２６１Ｄ，Ｆ２６１Ｋ，Ｆ２６１Ｐ，Ｇ０２０Ｅ，Ｇ０２０Ｆ，Ｇ０２０Ｈ，Ｇ０２０Ｌ，Ｇ０２０Ｎ，Ｇ０２０Ｑ，Ｇ０２０Ｒ，Ｇ０２０Ｔ，Ｇ０２０Ｙ，Ｇ０２４Ａ，Ｇ０２４Ｐ，Ｇ０５３Ａ，Ｇ０５３Ｄ，Ｇ０５３Ｅ，Ｇ０５３Ｆ，Ｇ０５３Ｌ，Ｇ０５３Ｑ，Ｇ０５３Ｓ，Ｇ０５３Ｙ，Ｇ０９７Ｋ，Ｇ０９７Ｍ，Ｇ１５７Ａ，Ｇ１５７Ｓ，Ｇ１６０Ａ，Ｇ１６０Ｌ，Ｇ１６６Ｃ，Ｇ１６６Ｉ，Ｇ１６６Ｑ，Ｇ１６９Ａ，Ｇ２１１Ｋ，Ｇ２１５Ｈ，Ｇ２１５Ｌ，Ｇ２１５Ｓ，Ｇ２１５Ｔ，Ｇ２１５Ｗ，Ｇ２５８Ｓ，Ｈ０１７Ｉ，Ｈ０３９Ｓ，Ｈ２２６Ｌ，Ｈ２３８Ｎ，Ｈ２３８Ｙ，Ｉ０１１Ｌ，Ｉ０１１Ｖ，Ｉ０３１Ｌ，Ｉ０７９Ｆ，Ｉ０７９Ｋ，Ｉ０７９Ｌ，Ｉ０７９Ｍ，Ｉ０７９Ｑ，Ｉ２０５Ａ，Ｉ２０５Ｖ，Ｉ２６８Ｌ，Ｉ２６８Ｍ，Ｋ０１２Ｇ，Ｋ０４３Ｆ，Ｋ０４３Ｈ，Ｋ０４３Ｉ，Ｋ０４３Ｎ，Ｋ０４３Ｑ，Ｋ０４３Ｔ，Ｋ１４１Ａ，Ｋ１４１Ｒ，Ｋ１４１Ｗ，Ｋ１７０Ａ，Ｋ２１３Ａ，Ｋ２１３Ｇ，Ｋ２１３Ｈ，Ｋ２１３Ｉ，Ｋ２１３Ｌ，Ｋ２１３Ｎ，Ｋ２１３Ｑ，Ｋ２１３Ｒ，Ｋ２１３Ｓ，Ｋ２１３Ｔ，Ｋ２１３Ｖ，Ｋ２３７Ａ，Ｋ２３７Ｈ，Ｋ２３７Ｉ，Ｋ２３７Ｌ，Ｋ２３７Ｎ，Ｋ２３７Ｓ，Ｋ２５６Ａ，Ｋ２５６Ｇ，Ｋ２５６Ｈ，Ｋ２５６Ｍ，Ｋ２５６Ｐ，Ｋ２５６Ｑ，Ｋ２５６Ｗ，Ｋ２６５Ｈ，Ｌ０１６Ｅ，Ｌ０４２Ｖ，Ｌ０７５Ｇ，Ｌ０７５Ｈ，Ｌ０７５Ｉ，Ｌ０７５Ｔ，Ｌ０８２Ａ，Ｌ０８２Ｆ，Ｌ０８２Ｈ，Ｌ０８２Ｒ，Ｌ０８２Ｓ，Ｌ０８２Ｔ，Ｌ０９０Ｍ，Ｌ１３５Ｆ，Ｌ１９６Ｍ，Ｌ２０９Ｃ，Ｌ２０９Ｈ，Ｌ２０９Ｓ，Ｌ２３３Ｓ，Ｌ２３５Ｍ，Ｌ２３５Ｒ，Ｌ２３５Ｗ，Ｌ２５７Ｃ，Ｌ２５７Ｇ，Ｌ２６７Ｆ，Ｍ０５０Ｙ，Ｍ１１９Ｃ，Ｍ１１９Ｉ，Ｍ１２４Ｌ，Ｎ０２５Ｃ，Ｎ０２５Ｅ，Ｎ０２５Ｐ，Ｎ０６１Ａ，Ｎ０６１Ｇ，Ｎ０６１Ｉ，Ｎ０６１Ｋ，Ｎ０６１Ｌ，Ｎ０６１Ｑ，Ｎ０６１Ｒ，Ｎ０６２Ｓ，Ｎ０６２Ｔ，Ｎ０７６Ａ，Ｎ０７６Ｐ，Ｎ０７６Ｑ，Ｎ０７６Ｓ，Ｎ０７６Ｔ，Ｎ０７６Ｖ，Ｎ０７８Ｇ，Ｎ０７８Ｈ，Ｎ０７８Ｋ，Ｎ０７８Ｐ，Ｎ０７８Ｑ，Ｎ０７８Ｒ，Ｎ１０１Ｆ，Ｎ１１７Ｒ，Ｎ１１７Ｓ，Ｎ１１８Ｄ，Ｎ１１８Ｈ，Ｎ１１８Ｑ，Ｎ１１８Ｒ，Ｎ１１８Ｓ，Ｎ１１８Ｔ，Ｎ１８４Ｃ，Ｎ１８４Ｅ，Ｎ１８４Ｒ，Ｎ２１２Ｄ，Ｎ２１２Ｒ，Ｎ２１２Ｗ，Ｎ２１８Ｆ，Ｎ２１８Ｇ，Ｎ２１８Ｍ，Ｎ２１８Ｐ，Ｎ２１８Ｔ，Ｎ２１８Ｖ，Ｎ２１８Ｗ，Ｎ２４０Ａ，Ｎ２４０Ｇ，Ｎ２４０Ｑ，Ｎ２４０Ｓ，Ｎ２４０Ｗ，Ｎ２４３Ｃ，Ｎ２４３Ｇ，Ｎ２４３Ｓ，Ｎ２５２Ｖ，Ｎ２６９Ｈ，Ｐ００５Ａ，Ｐ００５Ｄ，Ｐ００５Ｍ，Ｐ００５Ｑ，Ｐ０１４Ａ，Ｐ０１４Ｍ，Ｐ０１４Ｒ，Ｐ０１４Ｖ，Ｐ０４０Ｆ，Ｐ０４０Ｒ，Ｐ０４０Ｗ，Ｐ１２９Ｅ，Ｐ１２９Ｒ，Ｐ１７２Ｅ，Ｐ１７２Ｋ，Ｐ１９４Ｈ，Ｐ１９４Ｒ，Ｐ１９４Ｗ，Ｐ２０１Ａ，Ｐ２０１Ｇ，Ｐ２１０Ｌ，Ｐ２３９Ｋ，Ｐ２３９Ｒ，Ｑ００２Ｄ，Ｑ００２Ｅ，Ｑ００２Ｇ，Ｑ００２Ｉ，Ｑ００２Ｐ，Ｑ００２Ｖ，Ｑ０１０Ｄ，Ｑ０１０Ｒ，Ｑ０１９Ｃ，Ｑ０１９Ｄ，Ｑ０１９Ｅ，Ｑ０１９Ｈ，Ｑ０１９Ｌ，Ｑ０１９Ｐ，Ｑ０１９Ｒ，Ｑ０５９Ａ，Ｑ０５９Ｅ，Ｑ０５９Ｌ，Ｑ０５９Ｓ，Ｑ０５９Ｔ，Ｑ１０３Ｗ，Ｑ１８５Ｄ，Ｑ１８５Ｋ，Ｑ１８５Ｒ，Ｑ１８５Ｗ，Ｑ２０６Ｇ，Ｑ２０６Ｈ，Ｑ２０６Ｌ，Ｑ２０６Ｖ，Ｑ２０６Ｗ，Ｑ２１７Ｅ，Ｑ２１７Ｆ，Ｑ２１７Ｈ，Ｑ２１７Ｌ，Ｑ２１７Ｖ，Ｑ２４５Ｍ，Ｑ２７１Ａ，Ｑ２７１Ｄ，Ｑ２７１Ｇ，Ｑ２７１Ｌ，Ｑ２７１Ｐ，Ｑ２７１Ｔ，Ｑ２７１Ｙ，Ｑ２７５Ｆ，Ｑ２７５Ｌ，Ｑ２７５Ｐ，Ｑ２７５Ｒ，Ｓ００３Ｄ，Ｓ００３Ｆ，Ｓ００３Ｋ，Ｓ００３Ｒ，Ｓ００９Ｋ，Ｓ０１８Ｄ，Ｓ０１８Ｒ，Ｓ０３７Ａ，Ｓ０３７Ｇ，Ｓ０３７Ｋ，Ｓ０３７Ｌ，Ｓ０３７Ｐ，Ｓ０３８Ｍ，Ｓ０６３Ａ，Ｓ０６３Ｆ，Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０６３Ｍ，Ｓ０６３Ｒ，Ｓ０６３Ｙ，Ｓ０８７Ｃ，Ｓ０８７Ｋ，Ｓ０８７Ｌ，Ｓ０８７Ｍ，Ｓ０８７Ｎ，Ｓ０８７Ｙ，Ｓ０８９Ａ，Ｓ０８９Ｄ，Ｓ０８９Ｆ，Ｓ０８９Ｇ，Ｓ０８９Ｈ，Ｓ０８９Ｉ，Ｓ０８９Ｋ，Ｓ０８９Ｒ，Ｓ０８９Ｖ，Ｓ０８９Ｙ，Ｓ１３０Ｄ，Ｓ１３０Ｅ，Ｓ１３０Ｋ，Ｓ１３０Ｗ，Ｓ１４５Ｇ，Ｓ１４５Ｌ，Ｓ１４５Ｒ，Ｓ１４５Ｔ，Ｓ１５９Ｄ，Ｓ１５９Ｌ，Ｓ１５９Ｗ，Ｓ１６１Ｅ，Ｓ１６１Ｒ，Ｓ１６２Ｃ，Ｓ１６２Ｅ，Ｓ１６２Ｗ，Ｓ１６３Ａ，Ｓ１８２Ｅ，Ｓ１８２Ｒ，Ｓ１８３Ｃ，Ｓ１８３Ｄ，Ｓ１８３Ｐ，Ｓ１８３Ｒ，Ｓ１８８Ｄ，Ｓ１８８Ｐ，Ｓ２０４Ｇ，Ｓ２０４Ｙ，Ｓ２０７Ｇ，Ｓ２２４Ｇ，Ｓ２２４Ｔ，Ｓ２３６Ｃ，Ｓ２３６Ｇ，Ｓ２４８Ｄ，Ｓ２４８Ｈ，Ｓ２４８Ｒ，Ｓ２４９Ｅ，Ｓ２４９Ｌ，Ｓ２４９Ｒ，Ｓ２６０Ａ，Ｓ２６０Ｇ，Ｓ２６０Ｋ，Ｓ２６０Ｑ，Ｓ２６０Ｖ，Ｓ２６０Ｙ，Ｔ０２２Ｌ，Ｔ０５５Ｄ，Ｔ０５５Ｅ，Ｔ０５５Ｉ，Ｔ０５５Ｋ，Ｔ０５５Ｍ，Ｔ０５５Ｓ，Ｔ０５５Ｖ，Ｔ０５５Ｙ，Ｔ１５８Ａ，Ｔ１５８Ｇ，Ｔ１５８Ｌ，Ｔ１５８Ｑ，Ｔ１５８Ｖ，Ｔ１６４Ｋ，Ｔ１６４Ｑ，Ｔ２０８Ｓ，Ｔ２４４Ｄ，Ｔ２４４Ｅ，Ｔ２４４Ｒ，Ｔ２５３Ｅ，Ｔ２５３Ｒ，Ｔ２５３Ｙ，Ｔ２５４Ｇ，Ｔ２５５Ｄ，Ｔ２５５Ｅ，Ｔ２５５Ｋ，Ｔ２５５Ｒ，Ｖ０２６Ａ，Ｖ０２８Ｉ，Ｖ０２８Ｌ，Ｖ０３０Ｉ，Ｖ０４４Ｃ，Ｖ０４４Ｐ，Ｖ０４５Ｅ，Ｖ０４５Ｇ，Ｖ０４５Ｎ，Ｖ０７２Ｌ，Ｖ０８１Ａ，Ｖ０８１Ｇ，Ｖ０８１Ｈ，Ｖ０８１Ｓ，Ｖ０８４Ｉ，Ｖ０８４Ｍ，Ｖ０９５Ａ，Ｖ０９５Ｃ，Ｖ１４３Ａ，Ｖ１４３Ｆ，Ｖ１４３Ｈ，Ｖ１４３Ｑ，Ｖ１４３Ｔ，Ｖ１４３Ｗ，Ｖ１４７Ａ，Ｖ１４７Ｑ，Ｖ１４７Ｓ，Ｖ１４８Ｉ，Ｖ１４８Ｌ，Ｖ１４９Ｃ，Ｖ１４９Ｉ，Ｖ１４９Ｌ，Ｖ１６５Ｌ，Ｖ１８０Ａ，Ｖ１８０Ｃ，Ｖ１８０Ｍ，Ｖ１９２Ｃ，Ｖ１９２Ｆ，Ｖ１９２Ｉ，Ｖ１９２Ｑ，Ｖ１９２Ｙ，Ｖ２０３Ａ，Ｖ２０３Ｇ，Ｖ２０３Ｋ，Ｖ２０３Ｓ，Ｖ２７０Ｃ，Ｖ２７０Ｌ，Ｖ２７０Ｐ，Ｗ２４１Ｆ，Ｙ００６Ａ，Ｙ００６Ｍ，Ｙ００６Ｎ，Ｙ００６Ｒ，Ｙ００６Ｓ，Ｙ０２１Ｃ，Ｙ０９１Ｗ，Ｙ１０４Ｖ，Ｙ１０４Ｗ，Ｙ２６２Ｃ，Ｙ２６２Ｄ，Ｙ２６２Ｅ，Ｙ２６２Ｈ，Ｙ２６２Ｉ，Ｙ２６２Ｒ，及びＹ２６２Ｖ，からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約０．９のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較してタンパク質分解活性が向上し得、並びに／あるいは、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい場合がある。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約０．９のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１、２、３、４、５、６又はそれ以上のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｄ，Ａ００１Ｈ，Ａ００１Ｎ，Ａ０１５Ｃ，Ａ０４８Ｃ，Ａ０４８Ｅ，Ａ０８５Ｔ，Ａ１３３Ｒ，Ａ１３７Ｒ，Ａ１４２Ｃ，Ａ１４４Ｄ，Ａ１４４Ｒ，Ａ１５２Ｓ，Ａ１５３Ｇ，Ａ１８７Ｐ，Ａ１８７Ｑ，Ａ１８７Ｔ，Ａ１８７Ｖ，Ａ２１６Ｒ，Ａ２３０Ｓ，Ａ２７２Ｒ，Ａ２７３Ｈ，Ａ２７３Ｔ，Ａ２７４Ｈ，Ｄ０３６Ｎ，Ｄ０３６Ｓ，Ｄ１８１Ｈ，Ｄ１８１Ｔ，Ｄ２５９Ｎ，Ｄ２５９Ｐ，Ｄ２５９Ｓ，Ｅ１５６Ｇ，Ｅ１５６Ｈ，Ｅ１５６Ｌ，Ｅ１５６Ｑ，Ｅ１５６Ｖ，Ｅ２５１Ｃ，Ｆ１８９Ｓ，Ｆ１８９Ｔ，Ｆ１８９Ｗ，Ｆ１８９Ｙ，Ｆ２６１Ｅ，Ｇ０２０Ｃ，Ｇ０２４Ｄ，Ｇ０５３Ｍ，Ｇ０５３Ｒ，Ｇ０９７Ｒ，Ｇ１３１Ｄ，Ｇ１３１Ｒ，Ｇ１５７Ｎ，Ｇ１６０Ｒ，Ｇ１６０Ｖ，Ｇ１６６Ｌ，Ｇ１６６Ｗ，Ｇ２１１Ｅ，Ｇ２１５Ｄ，Ｇ２５８Ａ，Ｇ２５８Ｄ，Ｇ２５８Ｐ，Ｉ０１１Ｔ，Ｉ０３１Ｃ，Ｉ０７９Ｅ，Ｉ０７９Ｒ，Ｉ１７５Ｌ，Ｉ２０５Ｃ，Ｋ０１２Ｈ，Ｋ０１２Ｎ，Ｋ０２７Ａ，Ｋ０２７Ｎ，Ｋ０２７Ｓ，Ｋ０４３Ａ，Ｋ０４３Ｄ，Ｋ０４３Ｅ，Ｋ０４３Ｇ，Ｋ０４３Ｌ，Ｋ０４３Ｍ，Ｋ０４３Ｐ，Ｋ０４３Ｖ，Ｋ０４３Ｗ，Ｋ０４３Ｙ，Ｋ１３６Ｈ，Ｋ１４１Ｈ，Ｋ１４１Ｌ，Ｋ１４１Ｍ，Ｋ１４１Ｎ，Ｋ１４１Ｑ，Ｋ１４１Ｔ，Ｋ１４１Ｖ，Ｋ１７０Ｇ，Ｋ１７０Ｓ，Ｋ２３７Ｔ，Ｋ２３７Ｖ，Ｋ２５６Ｄ，Ｋ２５６Ｓ，Ｋ２５６Ｔ，Ｋ２５６Ｖ，Ｋ２６５Ｎ，Ｋ２６５Ｓ，Ｌ０４２Ｆ，Ｌ０４２Ｍ，Ｌ０８２Ｅ，Ｌ２０９Ａ，Ｌ２０９Ｅ，Ｌ２０９Ｇ，Ｌ２０９Ｒ，Ｌ２３３Ｇ，Ｌ２３５Ｖ，Ｌ２５７Ｄ，Ｌ２５７Ｅ，Ｌ２５７Ｐ，Ｌ２５７Ｒ，Ｌ２５７Ｗ，Ｌ２６７Ｅ，Ｍ０５０Ｌ，Ｎ０５６Ｄ，Ｎ０５６Ｓ，Ｎ０６１Ｃ，Ｎ０６１Ｄ，Ｎ０６２Ａ，Ｎ０６２Ｈ，Ｎ０６２Ｌ，Ｎ０６２Ｖ，Ｎ０６２Ｙ，Ｎ０７６Ｄ，Ｎ０７６Ｌ，Ｎ０７６Ｍ，Ｎ０７８Ｄ，Ｎ０７８Ｆ，Ｎ１０１Ｄ，Ｎ１０１Ｒ，Ｎ１１８Ａ，Ｎ２１２Ｃ，Ｎ２１２Ｅ，Ｎ２１８Ｃ，Ｎ２１８Ｄ，Ｎ２１８Ｅ，Ｎ２５２Ｄ，Ｎ２５２Ｅ，Ｐ０１４Ｆ，Ｐ０１４Ｋ，Ｐ０５７Ａ，Ｐ０５７Ｗ，Ｐ１７２Ｒ，Ｐ１９４Ｅ，Ｐ２０１Ｔ，Ｐ２１０Ｅ，Ｑ０５９Ｃ，Ｑ０５９Ｄ，Ｑ０５９Ｒ，Ｑ１８５Ｅ，Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２１７Ａ，Ｑ２１７Ｋ，Ｑ２１７Ｒ，Ｑ２４５Ａ，Ｑ２４５Ｄ，Ｑ２４５Ｅ，Ｑ２４５Ｈ，Ｑ２４５Ｒ，Ｑ２７１Ｅ，Ｑ２７１Ｆ，Ｑ２７１Ｒ，Ｑ２７１Ｗ，Ｑ２７５Ｇ，Ｑ２７５Ｉ，Ｒ１８６Ｉ，Ｒ１８６Ｌ，Ｒ１８６Ｖ，Ｒ１８６Ｗ，Ｓ００３Ｅ，Ｓ００９Ｃ，Ｓ００９Ｅ，Ｓ０１８Ｃ，Ｓ０３７Ｄ，Ｓ０３７Ｅ，Ｓ０３７Ｈ，Ｓ０３７Ｒ，Ｓ０３７Ｙ，Ｓ０３８Ｄ，Ｓ０３８Ｐ，Ｓ０３８Ｒ，Ｓ０３８Ｙ，Ｓ０６３Ｌ，Ｓ０８７Ｄ，Ｓ０８７Ｒ，Ｓ０８９Ｃ，Ｓ０８９Ｅ，Ｓ１３０Ｃ，Ｓ１３０Ｒ，Ｓ１４５Ｄ，Ｓ１５９Ｃ，Ｓ１５９Ｐ，Ｓ１６１Ｃ，Ｓ１７３Ｔ，Ｓ１８２Ｃ，Ｓ１８８Ｅ，Ｓ１８８Ｆ，Ｓ１８８Ｋ，Ｓ１８８Ｌ，Ｓ１８８Ｒ，Ｓ１８８Ｗ，Ｓ１９０Ａ，Ｓ１９０Ｇ，Ｓ１９０Ｔ，Ｓ２０４Ｒ，Ｓ２３６Ｄ，Ｓ２３６Ｅ，Ｓ２４８Ｃ，Ｓ２４８Ｅ，Ｓ２６０Ｃ，Ｓ２６０Ｅ，Ｓ２６０Ｒ，Ｔ０２２Ｐ，Ｔ０５５Ｃ，Ｔ０５５Ｗ，Ｔ０７１Ａ，Ｔ１５８Ｄ，Ｔ１５８Ｅ，Ｔ１５８Ｐ，Ｔ１５８Ｒ，Ｔ１５８Ｙ，Ｔ１６４Ｒ，Ｔ２４２Ｄ，Ｔ２４２Ｇ，Ｔ２５５Ｃ，Ｖ００４Ｅ，Ｖ００４Ｔ，Ｖ０４５Ｃ，Ｖ０４５Ｄ，Ｖ０４５Ｒ，Ｖ０４５Ｔ，Ｖ０５１Ｈ，Ｖ０８１Ｒ，Ｖ１４３Ｃ，Ｖ１４３Ｅ，Ｖ１４３Ｇ，Ｖ１９２Ｇ，Ｖ２０３Ｃ，Ｖ２０３Ｄ，Ｖ２０３Ｅ，Ｖ２０３Ｍ，Ｖ２０３Ｒ，Ｖ２７０Ｇ，Ｗ２４１Ｌ，Ｙ２１４Ｈ，Ｙ２１４Ｑ，Ａ００１Ｅ，Ａ１３３Ｅ，Ａ１８７Ｌ，Ａ１８７Ｎ，Ａ２１６Ｃ，Ａ２１６Ｈ，Ａ２７３Ｑ，Ｄ０９９Ｈ，Ｄ２５９Ｈ，Ｅ１５６Ｃ，Ｅ１９５Ｇ，Ｆ１８９Ｈ，Ｇ１３１Ｃ，Ｇ１４６Ａ，Ｇ１６６Ｖ，Ｇ２１５Ｃ，Ｇ２１５Ｅ，Ｉ１０７Ｌ，Ｋ０１２Ａ，Ｋ０１２Ｓ，Ｋ０１２Ｔ，Ｋ０４３Ｃ，Ｋ１７０Ｃ，Ｋ２５６Ｃ，Ｋ２５６Ｅ，Ｋ２６５Ｇ，Ｋ２６５Ｙ，Ｌ２３３Ｅ，Ｍ２２２Ｆ，Ｍ２２２Ｓ，Ｎ０６２Ｑ，Ｎ０７６Ｅ，Ｎ０７８Ｅ，Ｎ１８４Ｐ，Ｎ２１８Ｒ，Ｐ００５Ｖ，Ｐ０１４Ｄ，Ｑ００２Ｋ，Ｑ００２Ｌ，Ｑ００２Ｒ，Ｑ０１０Ｗ，Ｑ２７１Ｃ，Ｒ１８６Ｈ，Ｓ０４９Ｃ，Ｓ０６３Ｃ，Ｓ０６３Ｄ，Ｓ１０５Ｔ，Ｓ１８８Ｃ，Ｓ１９０Ｃ，Ｓ２０４Ｅ，Ｔ０５５Ｒ，Ｔ１６４Ｇ，Ｖ００４Ｄ，Ｖ０４４Ｔ，Ｖ０４５Ｉ，Ｖ１６５Ｃ，Ｖ１８０Ｓ，Ｙ００６Ｃ，Ｙ００６Ｄ，Ｙ００６Ｅ，Ｙ１０４Ｔ，Ａ００１Ｃ，Ａ１８７Ｃ，Ａ２３０Ｇ，Ａ２７３Ｄ，Ａ２７３Ｐ，Ｄ０３６Ｑ，Ｆ１８９Ｇ，Ｆ１８９Ｌ，Ｆ１８９Ｒ，Ｇ１５７Ｔ，Ｇ１７８Ａ，Ｉ０３１Ｆ，Ｉ１１１Ｍ，Ｋ０１２Ｆ，Ｋ０１２Ｌ，Ｋ０２７Ｔ，Ｋ０４３Ｒ，Ｋ１３６Ｇ，Ｋ１４１Ｇ，Ｋ１７０Ｑ，Ｍ２２２Ａ，Ｍ２２２Ｌ，Ｎ０６２Ｒ，Ｎ１１７Ｇ，Ｎ２６９Ｃ，Ｐ００５Ｗ，Ｐ１２９Ｖ，Ｐ２３９Ａ，Ｐ２３９Ｈ，Ｐ２３９Ｔ，Ｑ０５９Ｗ，Ｑ２１７Ｇ，Ｑ２７５Ａ，Ｒ１８６Ａ，Ｓ１９１Ｇ，Ｔ１６４Ａ，Ｔ２２０Ａ，Ａ００１Ｐ，Ａ１８７Ｆ，Ａ１８７Ｗ，Ａ２７３Ｒ，Ｄ０４１Ｃ，Ｄ０６０Ｇ，Ｄ１９７Ｔ，Ｆ１８９Ａ，Ｇ０４６Ｄ，Ｇ１５７Ｐ，Ｋ０１２Ｃ，Ｋ０１２Ｅ，Ｋ０１２Ｗ，Ｌ０４２Ｃ，Ｍ２２２Ｔ，Ｎ０６２Ｃ，Ｐ２３９Ｇ，Ｐ２３９Ｎ，Ｑ２１７Ｃ，Ｒ１８６Ｍ，Ｓ０４９Ｔ，Ｓ０８９Ｐ，Ｓ１２５Ａ，Ｓ１７３Ｖ，及びＶ０４４Ａ，からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ２４Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１、２、３、４、５、６又はそれ以上のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ２１６Ｅ，Ｌ０９０Ｉ，Ａ０９８Ｒ，Ａ０９８Ｗ，Ａ０９８Ｙ，Ａ１１６Ｇ，Ａ１１６Ｒ，Ａ１１６Ｓ，Ａ１３３Ｍ，Ｉ１０７Ｌ，Ｉ１１５Ｖ，Ｍ１２４Ｌ，Ｎ１０１Ｉ，Ｎ１０９Ｈ，Ｎ１０９Ｓ，Ｎ１０９Ｔ，Ｎ１１７Ｒ，Ｐ００５Ｇ，Ｑ１８５Ｌ，Ｓ０８９Ｖ，Ｖ０９５Ａ，Ａ０１５Ｙ，Ａ０２９Ｇ，Ａ０９８Ｄ，Ａ０９８Ｅ，Ａ０９８Ｇ，Ａ０９８Ｎ，Ａ０９８Ｓ，Ａ０９８Ｔ，Ａ０９８Ｖ，Ａ１１４Ｓ，Ａ１１４Ｔ，Ａ１１６Ｅ，Ａ１１６Ｌ，Ａ１１６Ｔ，Ａ１１６Ｖ，Ａ１３３Ｈ，Ａ１３３Ｌ，Ａ１３３Ｓ，Ａ１３７Ｇ，Ａ１３７Ｉ，Ａ１３７Ｌ，Ａ１３７Ｓ，Ａ１３７Ｖ，Ａ１３８Ｓ，Ａ１４４Ｓ，Ａ１４４Ｖ，Ａ１７６Ｓ，Ａ１７６Ｔ，Ａ１８７Ｔ，Ａ２１６Ｆ，Ａ２１６Ｐ，Ａ２１６Ｑ，Ａ２１６Ｒ，Ａ２１６Ｓ，Ａ２１６Ｔ，Ａ２１６Ｖ，Ａ２１６Ｙ，Ｄ０４１Ｅ，Ｄ１２０Ａ，Ｄ１２０Ｅ，Ｄ１２０Ｑ，Ｄ１２０Ｒ，Ｄ１２０Ｓ，Ｄ１８１Ｓ，Ｇ０２０Ａ，Ｇ０２０Ｓ，Ｇ０２４Ａ，Ｇ０９７Ａ，Ｇ０９７Ｄ，Ｇ０９７Ｓ，Ｇ１３１Ｑ，Ｇ１６０Ｓ，Ｇ１６６Ｉ，Ｇ２１１Ｌ，Ｇ２１５Ｎ，Ｈ０３９Ｎ，Ｈ２３８Ｎ，Ｉ１１１Ｌ，Ｉ１１１Ｖ，Ｉ１２２Ａ，Ｌ０７５Ｉ，Ｌ０７５Ｑ，Ｌ１３５Ｍ，Ｌ２０９Ｔ，Ｌ２０９Ｖ，Ｌ２３３Ｖ，Ｌ２３５Ｍ，Ｌ２３５Ｒ，Ｌ２５７Ａ，Ｍ１１９Ｉ，Ｎ０２５Ａ，Ｎ０２５Ｇ，Ｎ０２５Ｔ，Ｎ０６１Ｋ，Ｎ１０１Ｆ，Ｎ１０１Ｈ，Ｎ１０１Ｌ，Ｎ１０１Ｑ，Ｎ１０１Ｒ，Ｎ１０１Ｓ，Ｎ１０１Ｔ，Ｎ１０９Ａ，Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｋ，Ｎ１０９Ｌ，Ｎ１１７Ｅ，Ｎ１１７Ｈ，Ｎ１１７Ｋ，Ｎ１１７Ｓ，Ｎ２１２Ｇ，Ｎ２１２Ｓ，Ｎ２１８Ｆ，Ｎ２１８Ｇ，Ｎ２１８Ｈ，Ｎ２１８Ｌ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２１８Ｗ，Ｎ２４０Ｑ，Ｎ２５２Ｍ，Ｎ２５２Ｒ，Ｎ２５２Ｓ，Ｐ００５Ｔ，Ｐ０４０Ａ，Ｐ０４０Ｇ，Ｐ０４０Ｔ，Ｐ１２９Ｄ，Ｐ１２９Ｓ，Ｐ１９４Ｓ，Ｐ２１０Ｒ，Ｑ０１９Ｒ，Ｑ０１９Ｗ，Ｑ１０３Ｌ，Ｑ１０３Ｗ，Ｑ１８５Ａ，Ｑ１８５Ｇ，Ｑ１８５Ｍ，Ｑ１８５Ｒ，Ｑ１８５Ｔ，Ｑ２０６Ｇ，Ｑ２０６Ｙ，Ｑ２１７Ａ，Ｑ２１７Ｅ，Ｑ２１７Ｒ，Ｑ２１７Ｓ，Ｑ２１７Ｔ，Ｓ００３Ｑ，Ｓ００９Ｈ，Ｓ０１８Ｍ，Ｓ０３３Ｔ，Ｓ１３０Ａ，Ｓ１３０Ｆ，Ｓ１３０Ｇ，Ｓ１３０Ｔ，Ｓ１３０Ｖ，Ｓ１４５Ｔ，Ｓ１５９Ａ，Ｓ１６１Ｎ，Ｓ１６１Ｔ，Ｓ１６２Ｖ，Ｓ１６２Ｙ，Ｓ１８２Ｌ，Ｓ１８２Ｗ，Ｓ１８３Ｆ，Ｓ１８３Ｌ，Ｓ１８３Ｖ，Ｓ１８３Ｗ，Ｓ１８８Ｋ，Ｓ１８８Ｗ，Ｓ２３６Ｑ，Ｓ２３６Ｔ，Ｓ２４８Ｌ，Ｔ０２２Ｈ，Ｔ０２２Ｋ，Ｔ２０８Ｃ，Ｔ２５３Ｈ，Ｔ２５５Ｖ，Ｖ０４４Ｉ，Ｖ１２１Ｉ，Ｖ１３９Ｃ，Ｖ１４３Ｈ，Ｖ１４３Ｑ，Ｖ１４３Ｔ，Ｖ１４３Ｗ，Ｖ１４３Ｙ，Ｙ００６Ｋ，Ｙ０２１Ａ，Ｙ１０４Ｗ，Ａ００１Ｆ，Ａ００１Ｇ，Ａ００１Ｈ，Ａ００１Ｋ，Ａ００１Ｌ，Ａ００１Ｑ，Ａ００１Ｓ，Ａ００１Ｙ，Ａ０１３Ｖ，Ａ０１５Ｇ，Ａ０１５Ｋ，Ａ０１５Ｒ，Ａ０１５Ｓ，Ａ０１５Ｔ，Ａ０１５Ｗ，Ａ０４８Ｓ，Ａ０７３Ｎ，Ａ０７３Ｓ，Ａ０９２Ｓ，Ａ０９８Ｋ，Ａ０９８Ｐ，Ａ１１６Ｄ，Ａ１１６Ｗ，Ａ１２８Ｓ，Ａ１３３Ｐ，Ａ１３３Ｔ，Ａ１３３Ｖ，Ａ１３４Ｇ，Ａ１３４Ｓ，Ａ１３７Ｈ，Ａ１３７Ｎ，Ａ１３７Ｔ，Ａ１４４Ｄ，Ａ１４４Ｋ，Ａ１４４Ｌ，Ａ１４４Ｍ，Ａ１４４Ｎ，Ａ１４４Ｒ，Ａ１７９Ｇ，Ａ１７９Ｓ，Ａ１８７Ｖ，Ａ２１６Ｇ，Ａ２１６Ｌ，Ａ２１６Ｗ，Ａ２２３Ｓ，Ａ２３０Ｃ，Ａ２７２Ｋ，Ａ２７２Ｌ，Ａ２７２Ｐ，Ａ２７２Ｓ，Ａ２７２Ｔ，Ａ２７２Ｗ，Ａ２７３Ｇ，Ａ２７３Ｓ，Ａ２７４Ｇ，Ａ２７４Ｍ，Ａ２７４Ｔ，Ｄ１２０Ｋ，Ｄ１４０Ｅ，Ｄ１８１Ａ，Ｄ１８１Ｅ，Ｄ１８１Ｇ，Ｄ１８１Ｈ，Ｄ１８１Ｔ，Ｄ２５９Ｅ，Ｄ２５９Ｎ，Ｄ２５９Ｑ，Ｅ０５４Ｄ，Ｅ１５６Ｄ，Ｅ１５６Ｔ，Ｅ２５１Ｌ，Ｅ２５１Ｔ，Ｅ２５１Ｖ，Ｆ０５８Ｙ，Ｆ１８９Ｗ，Ｆ２６１Ｋ，Ｆ２６１Ｑ，Ｆ２６１Ｒ，Ｇ００７Ａ，Ｇ００７Ｓ，Ｇ０２０Ｆ，Ｇ０２０Ｈ，Ｇ０２０Ｎ，Ｇ０２０Ｑ，Ｇ０２０Ｔ，Ｇ０２０Ｙ，Ｇ０２４Ｆ，Ｇ０２４Ｑ，Ｇ０２４Ｒ，Ｇ０２４Ｔ，Ｇ０２４Ｖ，Ｇ０２４Ｗ，Ｇ０２４Ｙ，Ｇ０５３Ｔ，Ｇ０９７Ｋ，Ｇ０９７Ｍ，Ｇ０９７Ｒ，Ｇ０９７Ｔ，Ｇ１３１Ａ，Ｇ１３１Ｈ，Ｇ１３１Ｐ，Ｇ１３１Ｒ，Ｇ１３１Ｔ，Ｇ１３１Ｖ，Ｇ１６０Ｈ，Ｇ１６０Ｔ，Ｇ１６６Ｃ，Ｇ１６６Ｑ，Ｇ１６６Ｓ，Ｇ１６６Ｔ，Ｇ２１１Ａ，Ｇ２１１Ｄ，Ｇ２１１Ｋ，Ｇ２１１Ｍ，Ｇ２１１Ｎ，Ｇ２１１Ｑ，Ｇ２１１Ｒ，Ｇ２１１Ｖ，Ｇ２１１Ｗ，Ｇ２１５Ｓ，Ｇ２１５Ｔ，Ｇ２１５Ｗ，Ｈ０１７Ｔ，Ｈ０１７Ｗ，Ｈ０１７Ｙ，Ｈ０３９Ｖ，Ｈ２２６Ａ，Ｈ２２６Ｆ，Ｈ２２６Ｉ，Ｈ２２６Ｌ，Ｈ２２６Ｍ，Ｈ２２６Ｖ，Ｉ０３５Ｖ，Ｉ０７９Ａ，Ｉ０７９Ｓ，Ｉ１０８Ｖ，Ｉ２０５Ｖ，Ｉ２３４Ｌ，Ｉ２３４Ｖ，Ｉ２６８Ｖ，Ｋ０１２Ｓ，Ｋ０４３Ｐ，Ｋ１３６Ｈ，Ｋ１３６Ｒ，Ｋ１４１Ａ，Ｋ１４１Ｆ，Ｋ１４１Ｔ，Ｋ１４１Ｗ，Ｋ１７０Ａ，Ｋ１７０Ｇ，Ｋ１７０Ｒ，Ｋ２１３Ａ，Ｋ２１３Ｒ，Ｋ２１３Ｓ，Ｋ２３７Ａ，Ｋ２３７Ｈ，Ｋ２３７Ｌ，Ｋ２３７Ｓ，Ｋ２３７Ｖ，Ｋ２５６Ａ，Ｋ２５６Ｇ，Ｋ２５６Ｈ，Ｋ２５６Ｍ，Ｋ２５６Ｐ，Ｋ２５６Ｑ，Ｋ２５６Ｒ，Ｌ０１６Ａ，Ｌ０１６Ｑ，Ｌ０１６Ｔ，Ｌ０１６Ｖ，Ｌ０４２Ｖ，Ｌ０７５Ｍ，Ｌ０７５Ｔ，Ｌ０８２Ｍ，Ｌ０８２Ｖ，Ｌ１３５Ｆ，Ｌ１９６Ｉ，Ｌ２０９Ｈ，Ｌ２０９Ｑ，Ｌ２０９Ｒ，Ｌ２０９Ｓ，Ｌ２０９Ｗ，Ｌ２３３Ａ，Ｌ２３３Ｍ，Ｌ２３３Ｑ，Ｌ２３５Ｉ，Ｌ２３５Ｋ，Ｌ２５０Ｉ，Ｌ２５７Ｓ，Ｌ２５７Ｔ，Ｌ２５７Ｖ，Ｌ２６７Ａ，Ｌ２６７Ｑ，Ｌ２６７Ｔ，Ｌ２６７Ｖ，Ｍ１１９Ｃ，Ｍ１９９Ｖ，Ｎ０２５Ｃ，Ｎ０２５Ｅ，Ｎ０２５Ｆ，Ｎ０２５Ｉ，Ｎ０２５Ｋ，Ｎ０２５Ｌ，Ｎ０２５Ｍ，Ｎ０２５Ｑ，Ｎ０２５Ｖ，Ｎ０２５Ｙ，Ｎ０６１Ｆ，Ｎ０６１Ｐ，Ｎ０６１Ｓ，Ｎ０６１Ｔ，Ｎ０７６Ｇ，Ｎ０７８Ｓ，Ｎ１０１Ａ，Ｎ１０９Ｍ，Ｎ１０９Ｑ，Ｎ１０９Ｒ，Ｎ１１７Ａ，Ｎ１１７Ｍ，Ｎ１１７Ｑ，Ｎ１１８Ｄ，Ｎ１１８Ｇ，Ｎ１１８Ｈ，Ｎ１１８Ｑ，Ｎ１１８Ｒ，Ｎ１１８Ｓ，Ｎ１８４Ａ，Ｎ１８４Ｃ，Ｎ１８４Ｇ，Ｎ１８４Ｌ，Ｎ１８４Ｒ，Ｎ１８４Ｓ，Ｎ１８４Ｔ，Ｎ１８４Ｖ，Ｎ１８４Ｗ，Ｎ２１２Ｃ，Ｎ２１２Ｆ，Ｎ２１２Ｉ，Ｎ２１２Ｋ，Ｎ２１２Ｌ，Ｎ２１２Ｐ，Ｎ２１２Ｑ，Ｎ２１２Ｒ，Ｎ２１２Ｖ，Ｎ２１２Ｗ，Ｎ２１２Ｙ，Ｎ２１８Ａ，Ｎ２１８Ｐ，Ｎ２１８Ｔ，Ｎ２４０Ａ，Ｎ２４０Ｅ，Ｎ２４０Ｇ，Ｎ２４０Ｈ，Ｎ２４０Ｌ，Ｎ２４０Ｒ，Ｎ２４０Ｓ，Ｎ２４０Ｔ，Ｎ２４３Ｃ，Ｎ２４３Ｑ，Ｎ２４３Ｔ，Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２５２Ａ，Ｎ２５２Ｇ，Ｎ２５２Ｋ，Ｎ２５２Ｑ，Ｐ０１４Ｇ，Ｐ０１４Ｑ，Ｐ０１４Ｒ，Ｐ０１４Ｓ，Ｐ０１４Ｔ，Ｐ０４０Ｆ，Ｐ０４０Ｌ，Ｐ０４０Ｑ，Ｐ０４０Ｓ，Ｐ０４０Ｖ，Ｐ０８６Ｃ，Ｐ０８６Ｈ，Ｐ０８６Ｓ，Ｐ１２９Ａ，Ｐ１２９Ｅ，Ｐ１２９Ｇ，Ｐ１２９Ｋ，Ｐ１２９Ｒ，Ｐ１７２Ａ，Ｐ１７２Ｋ，Ｐ１７２Ｑ，Ｐ１７２Ｓ，Ｐ１９４Ａ，Ｐ１９４Ｇ，Ｐ１９４Ｈ，Ｐ１９４Ｌ，Ｐ１９４Ｍ，Ｐ１９４Ｑ，Ｐ１９４Ｒ，Ｐ１９４Ｖ，Ｐ１９４Ｗ，Ｐ１９４Ｙ，Ｐ２１０Ａ，Ｐ２１０Ｇ，Ｐ２１０Ｌ，Ｐ２１０Ｓ，Ｐ２３９Ｋ，Ｐ２３９Ｒ，Ｑ００２Ａ，Ｑ００２Ｓ，Ｑ０１０Ａ，Ｑ０１０Ｎ，Ｑ０１０Ｒ，Ｑ０１０Ｔ，Ｑ０１９Ａ，Ｑ０１９Ｃ，Ｑ０１９Ｄ，Ｑ０１９Ｇ，Ｑ０１９Ｓ，Ｑ０１９Ｔ，Ｑ０１９Ｖ，Ｑ０５９Ｉ，Ｑ０５９Ｖ，Ｑ１０３Ｓ，Ｑ１８５Ｆ，Ｑ１８５Ｈ，Ｑ１８５Ｉ，Ｑ１８５Ｋ，Ｑ１８５Ｎ，Ｑ１８５Ｓ，Ｑ１８５Ｙ，Ｑ２０６Ｈ，Ｑ２０６Ｌ，Ｑ２０６Ｐ，Ｑ２０６Ｗ，Ｑ２１７Ｆ，Ｑ２１７Ｈ，Ｑ２１７Ｉ，Ｑ２１７Ｋ，Ｑ２１７Ｌ，Ｑ２１７Ｎ，Ｑ２１７Ｖ，Ｑ２７１Ｇ，Ｑ２７１Ｒ，Ｑ２７１Ｔ，Ｑ２７５Ｆ，Ｑ２７５Ｐ，Ｑ２７５Ｒ，Ｒ１８６Ａ，Ｒ１８６Ｉ，Ｒ１８６Ｋ，Ｓ００３Ａ，Ｓ００３Ｆ，Ｓ００３Ｇ，Ｓ００３Ｈ，Ｓ００３Ｋ，Ｓ００３Ｒ，Ｓ００３Ｔ，Ｓ００９Ｔ，Ｓ０１８Ｎ，Ｓ０１８Ｔ，Ｓ０３７Ｇ，Ｓ０３７Ｔ，Ｓ０３７Ｖ，Ｓ０３８Ｇ，Ｓ０３８Ｑ，Ｓ０６３Ｎ，Ｓ０６３Ｑ，Ｓ０６３Ｔ，Ｓ０８９Ｍ，Ｓ０８９Ｎ，Ｓ１３０Ｋ，Ｓ１３０Ｌ，Ｓ１３０Ｒ，Ｓ１３０Ｗ，Ｓ１３２Ｎ，Ｓ１４５Ｇ，Ｓ１４５Ｋ，Ｓ１４５Ｍ，Ｓ１４５Ｒ，Ｓ１４５Ｖ，Ｓ１５９Ｃ，Ｓ１５９Ｈ，Ｓ１５９Ｌ，Ｓ１５９Ｑ，Ｓ１５９Ｒ，Ｓ１５９Ｔ，Ｓ１５９Ｗ，Ｓ１６１Ａ，Ｓ１６１Ｃ，Ｓ１６１Ｇ，Ｓ１６１Ｈ，Ｓ１６１Ｉ，Ｓ１６１Ｋ，Ｓ１６１Ｐ，Ｓ１６１Ｑ，Ｓ１６１Ｒ，Ｓ１６２Ｆ，Ｓ１６２Ｇ，Ｓ１６２Ｉ，Ｓ１６２Ｌ，Ｓ１６２Ｍ，Ｓ１６２Ｎ，Ｓ１６２Ｐ，Ｓ１６２Ｒ，Ｓ１６３Ｇ，Ｓ１７３Ａ，Ｓ１７３Ｇ，Ｓ１８２Ｆ，Ｓ１８２Ｇ，Ｓ１８２Ｋ，Ｓ１８２Ｎ，Ｓ１８２Ｑ，Ｓ１８２Ｖ，Ｓ１８３Ａ，Ｓ１８３Ｍ，Ｓ１８３Ｑ，Ｓ１８３Ｒ，Ｓ１８３Ｔ，Ｓ１８８Ａ，Ｓ１８８Ｆ，Ｓ１８８Ｇ，Ｓ１８８Ｐ，Ｓ１８８Ｒ，Ｓ１８８Ｔ，Ｓ１８８Ｖ，Ｓ１９０Ｃ，Ｓ２０４Ａ，Ｓ２０４Ｇ，Ｓ２０４Ｉ，Ｓ２０４Ｌ，Ｓ２０４Ｑ，Ｓ２０４Ｒ，Ｓ２０４Ｖ，Ｓ２０７Ｇ，Ｓ２２４Ａ，Ｓ２２４Ｔ，Ｓ２３６Ｃ，Ｓ２３６Ｄ，Ｓ２３６Ｅ，Ｓ２３６Ｇ，Ｓ２３６Ｎ，Ｓ２４８Ａ，Ｓ２４８Ｆ，Ｓ２４８Ｋ，Ｓ２４８Ｍ，Ｓ２４８Ｔ，Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４９Ｒ，Ｓ２４９Ｔ，Ｓ２４９Ｖ，Ｓ２４９Ｗ，Ｓ２４９Ｙ，Ｓ２６０Ｇ，Ｓ２６０Ｈ，Ｓ２６０Ｋ，Ｓ２６０Ｎ，Ｔ０２２Ａ，Ｔ０２２Ｇ，Ｔ０２２Ｑ，Ｔ０２２Ｓ，Ｔ０２２Ｖ，Ｔ０２２Ｙ，Ｔ０５５Ａ，Ｔ０５５Ｋ，Ｔ１５８Ａ，Ｔ１５８Ｓ，Ｔ２０８Ｌ，Ｔ２０８Ｓ，Ｔ２０８Ｖ，Ｔ２２０Ｓ，Ｔ２４２Ｄ，Ｔ２４２Ｎ，Ｔ２４２Ｓ，Ｔ２４４Ｅ，Ｔ２４４Ｇ，Ｔ２４４Ｉ，Ｔ２４４Ｒ，Ｔ２４４Ｖ，Ｔ２４４Ｗ，Ｔ２５３Ａ，Ｔ２５３Ｇ，Ｔ２５３Ｎ，Ｔ２５３Ｓ，Ｔ２５４Ｓ，Ｔ２５４Ｖ，Ｔ２５５Ｈ，Ｔ２５５Ｉ，Ｔ２５５Ｋ，Ｔ２５５Ｌ，Ｔ２５５Ｑ，Ｔ２５５Ｒ，Ｔ２５５Ｓ，Ｔ２５５Ｙ，Ｖ００４Ａ，Ｖ００４Ｎ，Ｖ００４Ｐ，Ｖ００４Ｗ，Ｖ００８Ａ，Ｖ００８Ｍ，Ｖ０２６Ｉ，Ｖ０４５Ｓ，Ｖ０４５Ｗ，Ｖ０５１Ｉ，Ｖ０８１Ｑ，Ｖ０８１Ｔ，Ｖ０８４Ｃ，Ｖ０９３Ｉ，Ｖ０９５Ｃ，Ｖ１４３Ａ，Ｖ１４３Ｅ，Ｖ１４３Ｆ，Ｖ１４３Ｎ，Ｖ１４３Ｓ，Ｖ１４７Ｉ，Ｖ１４７Ｌ，Ｖ１４７Ｓ，Ｖ１４７Ｔ，Ｖ１４８Ｉ，Ｖ１４９Ｃ，Ｖ１４９Ｉ，Ｖ１６５Ｍ，Ｖ１８０Ａ，Ｖ１８０Ｃ，Ｖ１８０Ｉ，Ｖ１８０Ｌ，Ｖ１８０Ｔ，Ｖ１９２Ａ，Ｖ１９２Ｃ，Ｖ１９２Ｉ，Ｖ１９２Ｓ，Ｖ１９２Ｔ，Ｖ１９２Ｙ，Ｖ１９８Ｌ，Ｖ２０３Ａ，Ｖ２０３Ｆ，Ｖ２０３Ｋ，Ｖ２０３Ｌ，Ｖ２０３Ｍ，Ｖ２０３Ｎ，Ｖ２０３Ｙ，Ｗ２４１Ｙ，Ｙ００６Ａ，Ｙ００６Ｇ，Ｙ００６Ｈ，Ｙ００６Ｌ，Ｙ００６Ｎ，Ｙ００６Ｐ，Ｙ００６Ｑ，Ｙ００６Ｔ，Ｙ０２１Ｅ，Ｙ０２１Ｋ，Ｙ０２１Ｌ，Ｙ０２１Ｎ，Ｙ０２１Ｑ，Ｙ０２１Ｒ，Ｙ０２１Ｓ，Ｙ０２１Ｔ，Ｙ１０４Ｆ，Ｙ１０４Ｉ，Ｙ１０４Ｖ，Ｙ１７１Ｆ，Ｙ２１４Ｆ，Ｙ２１４Ｌ，Ｙ２１４Ｗ，Ｙ２６２Ｆ，及びＹ２６２Ｓ，からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、１６℃及びｐＨ ８での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜５のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、
８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１、２、３、４、５、６又はそれ以上のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｄ，Ａ００１Ｍ，Ａ００１Ｎ，Ａ００１Ｒ，Ａ００１Ｔ，Ａ００１Ｖ，Ａ０１３Ｃ，Ａ０１３Ｇ，Ａ０１３Ｓ，Ａ０１５Ｄ，Ａ０１５Ｆ，Ａ０１５Ｌ，Ａ０１５Ｍ，Ａ０１５Ｐ，Ａ０１５Ｑ，Ａ０７４Ｇ，Ａ０７４Ｓ，Ａ０８５Ｓ，Ａ０８５Ｔ，Ａ０８５Ｖ，Ａ０８８Ｃ，Ａ０８８Ｌ，Ａ０８８Ｓ，Ａ０８８Ｔ，Ａ０８８Ｖ，Ａ１３３Ｅ，Ａ１３３Ｇ，Ａ１３３Ｒ，Ａ１３７Ｅ，Ａ１４４Ｇ，Ａ１４４Ｈ，Ａ１４４Ｑ，Ａ１４４Ｔ，Ａ１５１Ｃ，Ａ１５２Ｓ，Ａ１５３Ｇ，Ａ１５３Ｓ，Ａ１５３Ｖ，Ａ１７６Ｃ，Ａ１８７Ｇ，Ａ１８７Ｑ，Ａ１８７Ｓ，Ａ２００Ｇ，Ａ２２８Ｓ，Ａ２２８Ｔ，Ａ２３０Ｔ，Ａ２３０Ｖ，Ａ２３１Ｃ，Ａ２３１Ｖ，Ａ２３２Ｃ，Ａ２３２Ｖ，Ａ２７２Ｅ，Ａ２７２Ｇ，Ａ２７２Ｉ，Ａ２７２Ｑ，Ａ２７２Ｒ，Ａ２７３Ｌ，Ａ２７３Ｖ，Ａ２７４Ｌ，Ａ２７４Ｑ，Ａ２７４Ｒ，Ａ２７４Ｖ，Ｄ０３６Ｅ，Ｄ２５９Ａ，Ｄ２５９Ｇ，Ｄ２５９Ｐ，Ｄ２５９Ｓ，Ｄ２５９Ｔ，Ｅ１５６Ａ，Ｅ１５６Ｓ，Ｅ１５６Ｖ，Ｅ１９５Ｇ，Ｅ２５１Ｃ，Ｅ２５１Ｉ，Ｅ２５１Ｑ，Ｆ１８９Ｙ，Ｆ２６１Ａ，Ｆ２６１Ｇ，Ｆ２６１Ｈ，Ｆ２６１Ｌ，Ｆ２６１Ｐ，Ｆ２６１Ｓ，Ｆ２６１Ｔ，Ｆ２６１Ｖ，Ｆ２６１Ｗ，Ｇ０２０Ｃ，Ｇ０２０Ｄ，Ｇ０２０Ｅ，Ｇ０２０Ｌ，Ｇ０２０Ｒ，Ｇ０２４Ｄ，Ｇ０２４Ｉ，Ｇ０２４Ｎ，Ｇ０２４Ｐ，Ｇ０２４Ｓ，Ｇ０５３Ａ，Ｇ０５３Ｄ，Ｇ０５３Ｆ，Ｇ０５３Ｈ，Ｇ０５３Ｋ，Ｇ０５３Ｎ，Ｇ０５３Ｓ，Ｇ０５３Ｙ，Ｇ１５７Ａ，Ｇ１５７Ｓ，Ｇ１６０Ａ，Ｇ１６０Ｌ，Ｇ１６０Ｐ，Ｇ１６０Ｒ，Ｇ１６６Ａ，Ｇ１６６Ｌ，Ｇ１６６Ｖ，Ｇ１６６Ｗ，Ｇ１６９Ａ，Ｇ２１１Ｅ，Ｇ２１１Ｐ，Ｇ２１５Ａ，Ｇ２１５Ｄ，Ｇ２１５Ｅ，Ｇ２１５Ｈ，Ｇ２１５Ｖ，Ｇ２５８Ｄ，Ｇ２５８Ｓ，Ｈ０１７Ｆ，Ｈ０１７Ｉ，Ｈ０１７Ｌ，Ｈ０１７Ｍ，Ｈ０１７Ｖ，Ｈ０３９Ｃ，Ｈ２２６Ｓ，Ｈ２２６Ｙ，Ｉ０１１Ｔ，Ｉ０１１Ｖ，Ｉ０３１Ｃ，Ｉ０３１Ｌ，Ｉ０３１Ｖ，Ｉ０７９Ｆ，Ｉ０７９Ｋ，Ｉ０７９Ｌ，Ｉ０７９Ｍ，Ｉ０７９Ｑ，Ｉ０７９Ｒ，Ｉ０７９Ｔ，Ｉ０７９Ｖ，Ｉ０７９Ｗ，Ｉ１１５Ｌ，Ｉ２０５Ａ，Ｉ２０５Ｃ，Ｉ２６８Ｌ，Ｋ０１２Ｒ，Ｋ０１２Ｔ，Ｋ０２７Ｒ，Ｋ０４３Ａ，Ｋ０４３Ｅ，Ｋ０４３Ｆ，Ｋ０４３Ｈ，Ｋ０４３Ｉ，Ｋ０４３Ｍ，Ｋ０４３Ｎ，Ｋ０４３Ｑ，Ｋ０４３Ｔ，Ｋ０４３Ｖ，Ｋ０４３Ｙ，Ｋ１４１Ｈ，Ｋ１４１Ｑ，Ｋ１４１Ｖ，Ｋ１７０Ｓ，Ｋ２１３Ｇ，Ｋ２１３Ｈ，Ｋ２１３Ｉ，Ｋ２１３Ｌ，Ｋ２１３Ｎ，Ｋ２１３Ｑ，Ｋ２１３Ｔ，Ｋ２１３Ｗ，Ｋ２３７Ｉ，Ｋ２３７Ｎ，Ｋ２３７Ｒ，Ｋ２３７Ｔ，Ｋ２５６Ｃ，Ｋ２５６Ｅ，Ｋ２５６Ｓ，Ｋ２５６Ｔ，Ｋ２５６Ｖ，Ｋ２５６Ｗ，Ｋ２６５Ｈ，Ｋ２６５Ｒ，Ｌ０１６Ｅ，Ｌ０１６Ｆ，Ｌ０１６Ｉ，Ｌ０１６Ｓ，Ｌ０４２Ｉ，Ｌ０４２Ｍ，Ｌ０７５Ａ，Ｌ０７５Ｈ，Ｌ０７５Ｙ，Ｌ０８２Ｋ，Ｌ０８２Ｑ，Ｌ０８２Ｔ，Ｌ１９６Ｍ，Ｌ１９６Ｖ，Ｌ２０９Ａ，Ｌ２０９Ｃ，Ｌ２０９Ｅ，Ｌ２０９Ｇ，Ｌ２３５Ｗ，Ｌ２５７Ｃ，Ｌ２５７Ｈ，Ｌ２５７Ｑ，Ｌ２５７Ｙ，Ｌ２６７Ｅ，Ｌ２６７Ｆ，Ｌ２６７Ｒ，Ｌ２６７Ｓ，Ｍ０５０Ｙ，Ｎ０２５Ｈ，Ｎ０２５Ｐ，Ｎ０２５Ｓ，Ｎ０５６Ｄ，Ｎ０６１Ａ，Ｎ０６１Ｃ，Ｎ０６１Ｄ，Ｎ０６１Ｇ，Ｎ０６１Ｈ，Ｎ０６１Ｉ，Ｎ０６１Ｌ，Ｎ０６１Ｑ，Ｎ０６１Ｒ，Ｎ０６１Ｖ，Ｎ０６１Ｗ，Ｎ０６２Ａ，Ｎ０６２Ｓ，Ｎ０６２Ｖ，Ｎ０７６Ａ，Ｎ０７６Ｅ，Ｎ０７６Ｌ，Ｎ０７６Ｍ，Ｎ０７６Ｑ，Ｎ０７６Ｓ，Ｎ０７６Ｔ，Ｎ０７６Ｗ，Ｎ０７８Ｇ，Ｎ０７８Ｈ，Ｎ０７８Ｋ，Ｎ０７８Ｐ，Ｎ０７８Ｑ，Ｎ０７８Ｔ，Ｎ１０１Ｄ，Ｎ１１８Ａ，Ｎ１１８Ｔ，Ｎ１８４Ｅ，Ｎ１８４Ｈ，Ｎ１８４Ｉ，Ｎ２１２Ａ，Ｎ２１２Ｄ，Ｎ２１２Ｅ，Ｎ２１８Ｃ，Ｎ２１８Ｄ，Ｎ２１８Ｅ，Ｎ２１８Ｍ，Ｎ２１８Ｒ，Ｎ２１８Ｖ，Ｎ２４０Ｗ，Ｎ２４３Ａ，Ｎ２４３Ｇ，Ｎ２４３Ｐ，Ｎ２４３Ｓ，Ｎ２５２Ｄ，Ｎ２５２Ｅ，Ｎ２５２Ｌ，Ｎ２５２Ｔ，Ｎ２５２Ｖ，Ｎ２６９Ｓ，Ｐ００５Ａ，Ｐ００５Ｄ，Ｐ００５Ｍ，Ｐ００５Ｑ，Ｐ０１４Ａ，Ｐ０１４Ｄ，Ｐ０１４Ｆ，Ｐ０１４Ｍ，Ｐ０１４Ｖ，Ｐ０４０Ｈ，Ｐ０４０Ｒ，Ｐ０４０Ｗ，Ｐ０４０Ｙ，Ｐ０８６Ａ，Ｐ１２９Ｔ，Ｐ１７２Ｅ，Ｐ１７２Ｇ，Ｐ１７２Ｒ，Ｐ１９４Ｅ，Ｐ２０１Ａ，Ｐ２０１Ｇ，Ｐ２１０Ｅ，Ｐ２１０Ｖ，Ｑ００２Ｅ，Ｑ００２Ｇ，Ｑ０１０Ｄ，Ｑ０１０Ｆ，Ｑ０１０Ｈ，Ｑ０１０Ｉ，Ｑ０１０Ｌ，Ｑ０１０Ｓ，Ｑ０１９Ｅ，Ｑ０１９Ｈ，Ｑ０１９Ｎ，Ｑ０５９Ａ，Ｑ０５９Ｌ，Ｑ０５９Ｒ，Ｑ０５９Ｓ，Ｑ０５９Ｔ，Ｑ１８５Ｄ，Ｑ１８５Ｅ，Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｓ，Ｑ２０６Ｖ，Ｑ２１７Ｇ，Ｑ２４５Ｄ，Ｑ２４５Ｅ，Ｑ２４５Ｋ，Ｑ２４５Ｍ，Ｑ２４５Ｒ，Ｑ２７１Ａ，Ｑ２７１Ｆ，Ｑ２７１Ｐ，Ｑ２７１Ｙ，Ｑ２７５Ｄ，Ｑ２７５Ｈ，Ｑ２７５Ｉ，Ｑ２７５Ｌ，Ｑ２７５Ｓ，Ｑ２７５Ｗ，Ｒ１８６Ｈ，Ｒ１８６Ｌ，Ｒ１８６Ｖ，Ｒ１８６Ｗ，Ｓ００３Ｄ，Ｓ００３Ｅ，Ｓ００３Ｍ，Ｓ００３Ｐ，Ｓ００３Ｖ，Ｓ００９Ａ，Ｓ００９Ｅ，Ｓ００９Ｇ，Ｓ００９Ｉ，Ｓ００９Ｋ，Ｓ００９Ｍ，Ｓ００９Ｐ，Ｓ００９Ｗ，Ｓ０１８Ａ，Ｓ０１８Ｇ，Ｓ０１８Ｉ，Ｓ０１８Ｌ，Ｓ０１８Ｐ，Ｓ０１８Ｒ，Ｓ０１８Ｖ，Ｓ０１８Ｗ，Ｓ０３７Ａ，Ｓ０３７Ｄ，Ｓ０３７Ｑ，Ｓ０３７Ｒ，Ｓ０３７Ｙ，Ｓ０３８Ｄ，Ｓ０３８Ｈ，Ｓ０３８Ｋ，Ｓ０３８Ｍ，Ｓ０３８Ｒ，Ｓ０３８Ｔ，Ｓ０６３Ａ，Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０６３Ｋ，Ｓ０６３Ｍ，Ｓ０６３Ｒ，Ｓ０８７Ａ，Ｓ０８７Ｄ，Ｓ０８７Ｆ，Ｓ０８７Ｇ，Ｓ０８７Ｑ，Ｓ０８７Ｔ，Ｓ０８９Ａ，Ｓ０８９Ｃ，Ｓ０８９Ｈ，Ｓ０８９Ｉ，Ｓ０８９Ｋ，Ｓ０８９Ｌ，Ｓ０８９Ｑ，Ｓ０８９Ｒ，Ｓ０８９Ｔ，Ｓ０８９Ｙ，Ｓ１３０Ｄ，Ｓ１３０Ｅ，Ｓ１４５Ａ，Ｓ１４５Ｈ，Ｓ１４５Ｌ，Ｓ１５９Ｇ，Ｓ１６１Ｅ，Ｓ１６１Ｌ，Ｓ１６１Ｍ，Ｓ１６１Ｗ，Ｓ１６２Ａ，Ｓ１６２Ｃ，Ｓ１６２Ｅ，Ｓ１６２Ｗ，Ｓ１６３Ｐ，Ｓ１７３Ｔ，Ｓ１８２Ａ，Ｓ１８２Ｃ，Ｓ１８２Ｅ，Ｓ１８２Ｈ，Ｓ１８２Ｒ，Ｓ１８２Ｔ，Ｓ１８３Ｃ，Ｓ１８３Ｄ，Ｓ１８３Ｇ，Ｓ１８３Ｈ，Ｓ１８８Ｃ，Ｓ１８８Ｄ，Ｓ１８８Ｅ，Ｓ１８８Ｌ，Ｓ１９０Ｔ，Ｓ１９１Ａ，Ｓ２０４Ｙ，Ｓ２２４Ｃ，Ｓ２３６Ａ，Ｓ２４８Ｃ，Ｓ２４８Ｄ，Ｓ２４８Ｇ，Ｓ２４８Ｉ，Ｓ２４８Ｎ，Ｓ２４８Ｑ，Ｓ２４８Ｒ，Ｓ２４８Ｖ，Ｓ２４９Ｃ，Ｓ２４９Ｈ，Ｓ２４９Ｌ，Ｓ２４９Ｑ，Ｓ２６０Ａ，Ｓ２６０Ｃ，Ｓ２６０Ｅ，Ｓ２６０Ｐ，Ｓ２６０Ｑ，Ｓ２６０Ｒ，Ｓ２６０Ｔ，Ｔ０２２Ｌ，Ｔ０２２Ｎ，Ｔ０２２Ｒ，Ｔ０５５Ｃ，Ｔ０５５Ｄ，Ｔ０５５Ｇ，Ｔ０５５Ｉ，Ｔ０５５Ｌ，Ｔ０５５Ｎ，Ｔ０５５Ｑ，Ｔ０５５Ｓ，Ｔ０５５Ｖ，Ｔ０５５Ｙ，Ｔ０７１Ａ，Ｔ０７１Ｓ，Ｔ１５８Ｇ，Ｔ１５８Ｈ，Ｔ１５８Ｌ，Ｔ１５８Ｐ，Ｔ１５８Ｑ，Ｔ１５８Ｒ，Ｔ１５８Ｖ，Ｔ１５８Ｙ，Ｔ１６４Ｎ，Ｔ１６４Ｓ，Ｔ２４４Ａ，Ｔ２４４Ｄ，Ｔ２４４Ｈ，Ｔ２４４Ｑ，Ｔ２４４Ｓ，Ｔ２５３Ｑ，Ｔ２５３Ｒ，Ｔ２５３Ｙ，Ｔ２５４Ａ，Ｔ２５４Ｇ，Ｔ２５５Ａ，Ｔ２５５Ｄ，Ｔ２５５Ｅ，Ｖ００４Ｅ，Ｖ００４Ｇ，Ｖ００４Ｒ，Ｖ００８Ｃ，Ｖ０２６Ａ，Ｖ０２８Ｌ，Ｖ０３０Ｉ，Ｖ０４４Ｃ，Ｖ０４５Ｄ，Ｖ０４５Ｅ，Ｖ０４５Ｈ，Ｖ０４５Ｍ，Ｖ０４５Ｑ，Ｖ０４５Ｙ，Ｖ０７２Ｌ，Ｖ０８１Ｌ，Ｖ０８１Ｓ，Ｖ０８４Ａ，Ｖ０８４Ｉ，Ｖ０８４Ｍ，Ｖ０８４Ｔ，Ｖ１４３Ｃ，Ｖ１４７Ｃ，Ｖ１４７Ｑ，Ｖ１４９Ｌ，Ｖ１６５Ｌ，Ｖ１８０Ｍ，Ｖ１９２Ｆ，Ｖ１９２Ｇ，Ｖ１９２Ｑ，Ｖ１９８Ｉ，Ｖ１９８Ｍ，Ｖ２０３Ｃ，Ｖ２０３Ｅ，Ｖ２０３Ｈ，Ｖ２０３Ｉ，Ｖ２０３Ｑ，Ｖ２０３Ｒ，Ｖ２０３Ｔ，Ｖ２０３Ｗ，Ｖ２７０Ａ，Ｖ２７０Ｌ，Ｖ２７０Ｔ，Ｗ２４１Ｆ，Ｗ２４１Ｍ，Ｙ００６Ｃ，Ｙ００６Ｄ，Ｙ００６Ｅ，Ｙ００６Ｉ，Ｙ００６Ｍ，Ｙ００６Ｒ，Ｙ００６Ｓ，Ｙ００６Ｖ，Ｙ００６Ｗ，Ｙ０２１Ｃ，Ｙ０２１Ｄ，Ｙ０２１Ｖ，Ｙ０９１Ｗ，Ｙ１６７Ｆ，Ｙ２１４Ｖ，Ｙ２６２Ａ，Ｙ２６２Ｃ，Ｙ２６２Ｉ，Ｙ２６２Ｍ，Ｙ２６２Ｒ，Ｙ２６２Ｔ，Ｙ２６２Ｖ，及びＹ２６２Ｗ，からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１、２、３、４、５、６又はそれ以上のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｅ，Ａ０１５Ｃ，Ａ０１５Ｅ，Ａ０４８Ｃ，Ａ０４８Ｅ，Ａ０７３Ｔ，Ａ０８５Ｃ，Ａ０８５Ｇ，Ａ０８８Ｉ，Ａ０８８Ｍ，Ａ１１４Ｇ，Ａ１３７Ｒ，Ａ１８７Ｌ，Ａ１８７Ｎ，Ａ１８７Ｐ，Ａ１８７Ｗ，Ａ２１６Ｃ，Ａ２３０Ｓ，Ａ２７３Ｄ，Ａ２７３Ｈ，Ａ２７３Ｔ，Ｄ０３６Ｎ，Ｄ０９９Ｎ，Ｄ２５９Ｈ，Ｅ１５６Ｃ，Ｅ１５６Ｇ，Ｅ１５６Ｈ，Ｅ１５６Ｑ，Ｆ１８９Ｈ，Ｆ１８９Ｒ，Ｆ１８９Ｓ，Ｆ１８９Ｔ，Ｆ２６１Ｃ，Ｆ２６１Ｄ，Ｆ２６１Ｅ，Ｇ０５３Ｅ，Ｇ０５３Ｍ，Ｇ０５３Ｑ，Ｇ１３１Ｃ，Ｇ１３１Ｄ，Ｇ１５７Ｎ，Ｇ１６０Ｖ，Ｇ２１５Ｃ，Ｇ２１５Ｌ，Ｇ２５８Ａ，Ｈ０３９Ａ，Ｉ０１１Ｌ，Ｉ０７９Ｅ，Ｉ２６８Ｍ，Ｋ０１２Ａ，Ｋ０１２Ｇ，Ｋ０１２Ｈ，Ｋ０１２Ｎ，Ｋ０２７Ｎ，Ｋ０４３Ｃ，Ｋ０４３Ｄ，Ｋ０４３Ｇ，Ｋ０４３Ｌ，Ｋ０４３Ｗ，Ｋ１３６Ｇ，Ｋ１４１Ｇ，Ｋ１４１Ｌ，Ｋ１４１Ｍ，Ｋ１４１Ｎ，Ｋ１４１Ｒ，Ｋ１７０Ｃ，Ｋ１７０Ｑ，Ｋ２１３Ｖ，Ｋ２５６Ｄ，Ｋ２６５Ｇ，Ｋ２６５Ｎ，Ｋ２６５Ｑ，Ｋ２６５Ｓ，Ｌ０８２Ａ，Ｌ０８２Ｆ，Ｌ０８２Ｈ，Ｌ０８２Ｒ，Ｌ０８２Ｓ，Ｌ０９０Ｍ，Ｌ２３３Ｓ，Ｌ２３５Ｖ，Ｌ２５７Ｅ，Ｌ２５７Ｇ，Ｌ２５７Ｒ，Ｌ２５７Ｗ，Ｍ２２２Ｓ，Ｎ０２５Ｒ，Ｎ０６２Ｈ，Ｎ０６２Ｔ，Ｎ０７６Ｄ，Ｎ０７６Ｐ，Ｎ０７８Ｄ，Ｎ０７８Ｅ，Ｎ０７８Ｆ，Ｎ０７８Ｒ，Ｎ０７８Ｖ，Ｎ２６９Ｈ，Ｎ２６９Ｑ，Ｐ０１４Ｋ，Ｐ０５７Ａ，Ｐ０８６Ｆ，Ｐ２０１Ｔ，Ｑ００２Ｄ，Ｑ００２Ｉ，Ｑ００２Ｐ，Ｑ００２Ｖ，Ｑ０１９Ｌ，Ｑ０１９Ｐ，Ｑ０５９Ｃ，Ｑ０５９Ｄ，Ｑ０５９Ｅ，Ｑ１８５Ｗ，Ｑ２７１Ｃ，Ｑ２７１Ｄ，Ｑ２７１Ｅ，Ｑ２７１Ｌ，Ｑ２７１Ｗ，Ｑ２７５Ｇ，Ｒ１８６Ｍ，Ｓ００９Ｃ，Ｓ００９Ｌ，Ｓ０１８Ｄ，Ｓ０３７Ｅ，Ｓ０３７Ｈ，Ｓ０３７Ｋ，Ｓ０３７Ｌ，Ｓ０３７Ｐ，Ｓ０３８Ｐ，Ｓ０６３Ｃ，Ｓ０６３Ｄ，Ｓ０６３Ｆ，Ｓ０６３Ｌ，Ｓ０６３Ｙ，Ｓ０８７Ｌ，Ｓ０８７Ｎ，Ｓ０８７Ｒ，Ｓ０８７Ｙ，Ｓ０８９Ｄ，Ｓ０８９Ｆ，Ｓ０８９Ｇ，Ｓ０８９Ｗ，Ｓ１０５Ｔ，Ｓ１２５Ａ，Ｓ１３０Ｃ，Ｓ１５９Ｄ，Ｓ１５９Ｐ，Ｓ１６３Ａ，Ｓ１８２Ｐ，Ｓ１８３Ｐ，Ｓ１９０Ａ，Ｓ１９０Ｇ，Ｓ２０４Ｅ，Ｓ２２４Ｇ，Ｓ２４８Ｅ，Ｓ２４８Ｈ，Ｓ２４９Ｅ，Ｓ２６０Ｖ，Ｓ２６０Ｙ，Ｔ０５５Ｍ，Ｔ０５５Ｒ，Ｔ０５５Ｗ，Ｔ１５８Ｄ，Ｔ１５８Ｅ，Ｔ１６４Ｇ，Ｔ１６４Ｋ，Ｔ１６４Ｑ，Ｔ２２０Ａ，Ｔ２４２Ｇ，Ｔ２５３Ｅ，Ｔ２５５Ｃ，Ｔ２５５Ｇ，Ｖ００４Ｄ，Ｖ０４４Ｌ，Ｖ０４４Ｐ，Ｖ０４５Ｃ，Ｖ０４５Ｇ，Ｖ０４５Ｌ，Ｖ０４５Ｎ，Ｖ０４５Ｒ，Ｖ０４５Ｖ，Ｖ０８１Ａ，Ｖ０８１Ｇ，Ｖ０８１Ｈ，Ｖ０８４Ｓ，Ｖ１４７Ａ，Ｖ２０３Ｄ，Ｖ２０３Ｇ，Ｖ２７０Ｃ，Ｖ２７０Ｐ，Ｖ２７０Ｓ，Ｗ２４１Ｌ，Ｙ１０４Ｔ，Ｙ２１４Ｑ，Ｙ２６２Ｄ，Ｙ２６２Ｅ，Ｙ２６２Ｇ，Ｙ２６２Ｈ，Ｙ２６２Ｌ，Ｙ２６２Ｎ，Ｙ２６３Ｇ，及びＹ２６３Ｗ，からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約０．９のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約０．９のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１、２、３、４、５、６又はそれ以上のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｃ，Ａ１４２Ｃ，Ａ１８７Ｃ，Ａ２１６Ｈ，Ａ２７３Ｑ，Ａ２７４Ｈ，Ｄ０３６Ｑ，Ｄ０３６Ｓ，Ｄ０９９Ｓ，Ｄ１９７Ｔ，Ｅ１５６Ｌ，Ｆ１８９Ａ，Ｆ１８９Ｌ，Ｇ０５３Ｌ，Ｇ０５３Ｒ，Ｇ１５７Ｐ，Ｇ１７８Ａ，Ｇ２５８Ｐ，Ｈ０３９Ｓ，Ｈ２３８Ｙ，Ｋ０１２Ｃ，Ｋ０１２Ｅ，Ｋ０１２Ｌ，Ｋ０１２Ｗ，Ｋ１３６Ｅ，Ｋ２６５Ｙ，Ｌ０７５Ｇ，Ｌ０７５Ｖ，Ｌ０８２Ｅ，Ｌ１２６Ｗ，Ｌ２５７Ｄ，Ｌ２５７Ｐ，Ｍ０５０Ｌ，Ｍ２２２Ａ，Ｍ２２２Ｆ，Ｍ２２２Ｌ，Ｎ０５６Ｓ，Ｎ０６２Ｃ，Ｎ０６２Ｌ，Ｎ０６２Ｙ，Ｎ２６９Ｃ，Ｐ０５７Ｗ，Ｑ００２Ｋ，Ｑ００２Ｌ，Ｑ２１７Ｃ，Ｑ２４５Ａ，Ｑ２４５Ｈ，Ｓ０１８Ｃ，Ｓ０３８Ｙ，Ｓ０４９Ｃ，Ｓ０８７Ｃ，Ｓ０８７Ｋ，Ｓ１４５Ｄ，Ｓ１９１Ｇ，Ｔ０２２Ｐ，Ｔ０５５Ｅ，Ｔ１６４Ａ，Ｔ１６４Ｒ，Ｖ０４５Ｋ，Ｖ０５１Ｈ，Ｖ０８１Ｒ，Ｖ１４３Ｇ，Ｖ１４８Ｌ，Ｖ１８０Ｓ，Ｖ２０３Ｓ，Ｖ２７０Ｇ，Ｙ２１４Ｈ，Ａ１８７Ｆ，Ａ２７３Ｐ，Ｆ１８９Ｇ，Ｇ０４６Ｄ，Ｇ１４６Ａ，Ｇ１５７Ｔ，Ｉ０３１Ｆ，Ｉ１７５Ｌ，Ｋ０１２Ｆ，Ｋ０２７Ｔ，Ｌ０４２Ｆ，Ｌ２３３Ｅ，Ｌ２３３Ｇ，Ｍ２２２Ｔ，Ｎ０６２Ｒ，Ｎ１８４Ｐ，Ｐ００５Ｖ，Ｐ００５Ｗ，Ｐ１２９Ｖ，Ｐ２３９Ｎ，Ｐ２３９Ｔ，Ｑ０１０Ｗ，Ｑ０５９Ｗ，Ｑ２７５Ａ，Ｖ００４Ｔ，Ｖ１６５Ｃ，Ａ１２８Ｈ，Ａ２３０Ｇ，Ｄ０４１Ｃ，Ｈ０６７Ｔ，Ｋ０２７Ｓ，Ｋ０４３Ｒ，Ｌ０９０Ｔ，Ｎ０６２Ｑ，Ｎ１１７Ｇ，Ｐ２２５Ｇ，Ｐ２２５Ｓ，Ｐ２３９Ｇ，Ｐ２３９Ｈ，Ｑ００２Ｒ，Ｓ０８９Ｅ，Ｖ０４４Ａ，Ｖ０４５Ｉ，Ａ００１Ｐ，Ａ２７３Ｒ，Ｄ０４１Ｎ，Ｄ０９９Ａ，Ｄ０９９Ｈ，Ｄ０９９Ｑ，Ｆ０５８Ｇ，Ｉ１１１Ｍ，Ｌ０４２Ｃ，Ｎ１１８Ｌ，Ｐ２３９Ａ，Ｓ０４９Ｎ，Ｓ０８９Ｐ，Ｓ１７３Ｖ，Ｔ２４２Ｐ，Ｖ０４４Ｔ，及びＶ０４５Ｔ，からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約０．５以上０．９未満のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１、２、３、４、５、６又はそれ以上のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
（実施例８）
親ＢＰＮ’−ｖ３６に基づく更なるコンビナトリアル変異体のクリーニング性能
ＤＮＡ ２．０により、親ＢＰＮ’−ｖ３６（ＢＰＮ’−Ｓ２４Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ）に基づく更なるコンビナトリアル変異体が作成され、提供された。これらの変異体を１６℃及びｐＨ ８での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本アッセイ、１６℃及びｐＨ ７での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本アッセイ、１６℃及びｐＨ ８での洗剤組成物４の卵微小標本アッセイ、並びに１６℃及びｐＨ ８での洗剤組成物４の植物微小標本アッセイで、クリーニング性能について試験した。ＴＣＡアッセイを用いてタンパク質含量を測定し、ＡＡＰＦアッセイを用いてプロテアーゼ活性についてアッセイした。実施例１に記載のようにすべてのアッセイを実施し、ＢＰＮ’−ｖ３６（ＰＩ値１．０を有する）と比較して性能指数を算出した。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ００９Ｔ−Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ，及びＳ１６２Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３、及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ０８８Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｑ１０３Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ１１６Ｔ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１２８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，Ａ１２８Ｓ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１１６Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ０２４Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ０２４Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ，Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ１６２Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ０８８Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ｋ２５６Ｒ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２４３Ｖ，Ｋ２５６Ｒ，Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０６１Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ０７６Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ１０９Ａ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ａ，Ｐ０４０Ａ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ１０３Ｈ−Ａ１１６Ｔ，Ｑ１０３Ｈ−Ａ１２８Ｓ，Ｑ１０３Ｈ−Ｇ１３１Ｈ，Ｑ１０３Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ１０３Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｇ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ１６２Ｇ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ２４９Ａ，Ｑ１０３Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ００９Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００９Ｔ−Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ０６１Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ，Ｓ０３３Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ１６２Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０６３Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ１６２Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ２４８Ｎ，Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ２４９Ａ，Ｔ１５８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，及びＴ１５８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、並びに、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ａ１１６Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ００１Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ０２４Ｅ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｑ１０３Ｈ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０６３Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１３１Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１６９Ａ，Ｇ１６９Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１６９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１６９Ａ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４９Ａ，Ｋ０４３Ｙ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１１６Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１２８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１３１Ｈ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１６９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｌ２５７Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ１０９Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２１８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−Ｑ１０３Ｈ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ０６３Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ１６２Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ２４８Ｎ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ２４９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ０８８Ｔ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ１０３Ｈ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，Ｐ０４０Ｅ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｑ１０３Ｈ，Ｑ１０３Ｈ−Ｇ１６９Ａ，Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ２０６Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｐ，Ｓ０３３Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ０４３Ｙ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｐ０４０Ｅ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ１６２Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ１６２Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ２４８Ｎ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４９Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ２４９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｇ１６９Ａ，Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，及びＴ１５８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約０．９のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約０．９のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組の酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｇ０２４Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１６９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｑ１０３Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０６３Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ０７６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１６９Ａ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ２０６Ｄ，Ｑ１０３Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｐ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，及びＧ０２４Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。
本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組の酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１１６Ｔ，Ｋ０４３Ｙ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ，Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１２８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１２８Ｓ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ０２４Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ０２４Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ，Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ０８８Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１１６Ｔ，Ｋ２５６Ｒ，Ｎ０７６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ａ，Ｑ１０３Ｈ−Ａ１２８Ｓ，Ｑ１０３Ｈ−Ｇ１３１Ｈ，Ｑ１０３Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ１０３Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ２４９Ａ，Ｑ１０３Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０３３Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ１６２Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ１６２Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ２４９Ａ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，及びＴ１５８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ７及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３、及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜５のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０６３Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ０８８Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｑ１０３Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ０２４Ｅ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｑ１０３Ｈ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０６３Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ１６２Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１６９Ａ，Ｇ１６９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４８Ｎ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１２８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１３１Ｈ，Ｋ０４３Ｙ−Ｋ２５６Ｒ，Ｋ０４３Ｙ−Ｌ２５７Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ１０９Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２４３Ｖ，Ｋ０４３Ｙ−Ｑ１０３Ｈ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ０６３Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ１６２Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ２４８Ｎ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ２４９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｔ１５８Ｓ，Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０６１Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ０８８Ｔ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１６９Ａ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ０７６Ｄ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ１０９Ａ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｐ０４０Ａ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ１０３Ｈ，Ｑ１０３Ｈ−Ａ１１６Ｔ，Ｑ１０３Ｈ−Ｇ１６９Ａ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｇ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ１６２Ｇ，Ｓ００９Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ００９Ｔ−Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ０４３Ｙ，Ｓ０３３Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ１６２Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ１６２Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４８Ｎ，Ｓ２４８Ｎ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４９Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ２４９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｇ１６９Ａ，Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，及びＴ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ７及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’プロテアーゼ（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０のＰＩ値を有する、並びに、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ａ１１６Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１６９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ａ０８８Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１２８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ｇ０２４Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１６９Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１６９Ａ−Ｑ２０６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ０７６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ０７６Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ１０３Ｈ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ１０３Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００９Ｔ−Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ０６１Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ１６２Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，及びＴ１５８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ７及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約０．９のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約０．９のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組の酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｇ０２４Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｑ１０３Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ａ１１６Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１６９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｐ０４０Ｅ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｑ２０６Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｐ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０３３Ｔ−Ｐ０４０Ｅ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｔ１５８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｐ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−Ｑ２０６Ｄ，及びＮ０７６Ｄ−Ｑ２０６Ｄ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ７及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組の酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ０２４Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ１０９Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ａ０８８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ１１６Ｔ，Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ，Ａ１２８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１２８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０６３Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ０２４Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ，Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ，Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ１６９Ａ，Ｇ１６９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ０８８Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ１０９Ｇ，Ｋ２５６Ｒ，Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ａ，Ｐ０４０Ａ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ１０３Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ１０３Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ００９Ｔ−Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ０４３Ｙ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ１６２Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４８Ｎ，Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，及びＴ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３、及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜５のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ａ１１６Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１６９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ００１Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０６３Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｑ１０３Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，Ａ１２８Ｓ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１１６Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｑ１０３Ｈ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ１６２Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１６９Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１６９Ａ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４９Ａ，Ｋ０４３Ｙ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１１６Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１２８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１６９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｋ２５６Ｒ，Ｋ０４３Ｙ−Ｌ２５７Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ０７６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２１８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２４３Ｖ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ０６３Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ２４８Ｎ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ２４９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｔ１５８Ｓ，Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０６１Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ０８８Ｔ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１６９Ａ，Ｎ０７６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ０７６Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ１０３Ｈ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ０７６Ｄ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ１０９Ａ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，Ｑ１０３Ｈ，Ｑ１０３Ｈ−Ａ１１６Ｔ，Ｑ１０３Ｈ−Ａ１２８Ｓ，Ｑ１０３Ｈ−Ｇ１３１Ｈ，Ｑ１０３Ｈ−Ｇ１６９Ａ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ１６２Ｇ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ２４９Ａ，Ｑ１０３Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ００９Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００９Ｔ−Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０３３Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ１６２Ｇ，Ｓ１６２Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ１６２Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ２４８Ｎ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４９Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｇ１６９Ａ，Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，及びＴ１５８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’プロテアーゼ（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、並びに、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｇ０２４Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２０４Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｑ１０３Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１２８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ０２４Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１３１Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１３１Ｈ，Ｋ０４３Ｙ−Ｑ１０３Ｈ，Ｋ０４３Ｙ−Ｑ２０６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｐ０４０Ｅ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｑ１０３Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ０６１Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｐ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｐ０４０Ｅ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｐ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ１６２Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，及びＴ１５８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組の酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｋ２５６Ｒ，Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ１６２Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ０２４Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｔ１５８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ａ０８８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１１６Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ０２４Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４８Ｎ，Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｇ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０３３Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１６２Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ２４８Ｎ，Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ２４９Ａ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ，及びＴ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の植物微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３、及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｑ１０３Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ａ１１６Ｔ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ，Ａ１２８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，Ａ１２８Ｓ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｑ１０３Ｈ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０６３Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ，Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ１６２Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ１６９Ａ，Ｇ１６９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ０７６Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ０７６Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ａ，Ｑ１０３Ｈ−Ａ１１６Ｔ，Ｑ１０３Ｈ−Ｇ１６９Ａ，Ｑ１０３Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ１０３Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ１６２Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０３３Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ０４３Ｙ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ１６２Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ２４９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｇ１６９Ａ，及びＴ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の植物微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０のＰＩ値を有する、並びに、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｅ−Ｇ１６９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ００１Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｇ０２４Ｅ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，Ｇ１３１Ｈ，Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１６９Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１６９Ａ−Ｑ２０６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ０８８Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ｌ２５７Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ１０９Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ０８８Ｔ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１６９Ａ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ１０３Ｈ−Ａ１２８Ｓ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｑ１０３Ｈ−Ｓ２４９Ａ，Ｑ１０３Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｑ２０６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ２０６Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０３３Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４８Ｎ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４９Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｑ１０３Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０６３Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ｇ１３１Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１１６Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１６９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｋ２５６Ｒ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ０７６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ０６３Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ１６２Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ２４８Ｎ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ２４９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｑ１０３Ｈ，Ｑ１０３Ｈ−Ｇ１３１Ｈ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｇ０２４Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ａ０８８Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１１６Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１２８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ０２４Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１２８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１３１Ｈ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２１８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−Ｑ１０３Ｈ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ１０３Ｈ，Ｎ１０９Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｑ１０３Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｄ，Ａ００１Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２４３Ｖ，及びＳ０６３Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ２０６Ｄ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の植物微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本植物微小標本クリーニングアッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組の酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｐ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｐ，Ｐ０４０Ｅ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｇ１６９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１６９Ａ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ｇ１６９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１６９Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１６９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ｇ１６９Ａ−Ｓ２４８Ｎ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１６９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ｇ１６９Ａ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｇ１６９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１６９Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２１８Ｓ，Ｐ０４０Ａ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ０７６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０３３Ｔ，Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ０４３Ｙ，Ｓ０３３Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｇ１６９Ａ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１６９Ａ，Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ，Ｓ００９Ｔ−Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ０３３Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０３３Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０３３Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ａ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ００９Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｓ２６０Ｐ，Ｎ１０９Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ，Ｓ０３３Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１２８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００９Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ００９Ｔ−Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ａ１２８Ｓ−Ｋ１４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０６１Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ａ１２８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ１２８Ｓ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ−Ｎ０６１Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ０６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ０６１Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２０４Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ１０９Ｇ，Ｎ０６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ａ１１６Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ１１６Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ０２４Ｅ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ａ００１Ｅ−Ｇ０２４Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ００１Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ａ００１Ｅ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１１６Ｔ，Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ０２４Ｅ−Ａ０８８Ｔ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ｇ０２４Ｅ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ０２４Ｅ−Ｎ０７６Ｄ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ０８８Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ａ１１６Ｔ，Ｋ０４３Ｙ−Ｌ２５７Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ２４３Ｖ，Ｋ０４３Ｙ−Ｑ２０６Ｄ，Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ０７６Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ０７６Ｄ−Ｑ２０６Ｄ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｑ２０６Ｄ，Ｑ２０６Ｄ−Ｌ２５７Ｇ，Ｑ２０６Ｄ−Ｎ２４３Ｖ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ０６３Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０６３Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ００１Ｅ，Ａ００１Ｅ−Ｋ０４３Ｙ，Ａ００１Ｅ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ００１Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ａ００１Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ａ１１６Ｔ−Ｑ２０６Ｄ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ０２４Ｅ，Ｇ０２４Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ２４９Ａ，Ｇ０２４Ｅ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ，Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｋ２５６Ｒ，Ｋ０４３Ｙ−Ｎ０７６Ｄ，Ｋ２５６Ｒ，Ｌ２５７Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ａ０８８Ｔ，Ｎ０７６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１６２Ｇ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ，Ｑ２０６Ｄ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ０３３Ｔ−Ｐ０４０Ｅ−Ｑ１０３Ｈ−Ｎ１０９Ｇ，Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ１６２Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ１６２Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ１６２Ｇ−Ｑ２０６Ｄ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ２４８Ｎ，Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４９Ａ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，及びＴ１５８Ｓ−Ｑ２０６Ｄ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ＡＡＰＦタンパク質分解アッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３、及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜５のＰＩ値を有する、並びに／又は、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ００１Ｅ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ００１Ｅ−Ｓ０６３Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ１６２Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ０２４Ｅ−Ｓ０６３Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｑ２０６Ｄ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４９Ａ，Ｋ０４３Ｙ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ０６３Ｇ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ２４８Ｎ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ２４９Ａ，Ｋ０４３Ｙ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ０７６Ｄ，Ｎ０７６Ｄ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ０７６Ｄ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ａ，Ｑ１０３Ｈ−Ｇ１６９Ａ，Ｑ２０６Ｄ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ０７６Ｄ，Ｓ０６３Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ１６２Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ０６３Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ｓ１６２Ｇ，Ｓ１６２Ｇ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ２４８Ｎ−Ｓ２４９Ａ，Ｓ２４９Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，及びＴ１５８Ｓ−Ｓ２４９Ａ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ＡＡＰＦタンパク質分解アッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、並びに、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ｇ１３１Ｈ−Ｓ１６２Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｋ０４３Ｙ−Ｇ１３１Ｈ，Ｋ０４３Ｙ−Ｓ１６２Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ａ０８８Ｔ，Ｓ０６３Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ１６２Ｇ，Ｑ１０３Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ０３３Ｔ−Ｑ１０３Ｈ，及びＱ１０３Ｈ−Ａ１２８Ｓ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ＡＡＰＦタンパク質分解アッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約０．９のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本タンパク質分解アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約０．９のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組の酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、タンパク質分解アッセイを有する、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、又はＢＰＮ’（配列番号２）よりもＰＩ値が大きい、スブチリシンプロテアーゼ変異体も提供され、この変異体は、配列番号２又は配列番号６に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、変異体は、Ｘ００１Ｅ，Ｘ００９Ｔ，Ｘ０１８Ｔ，Ｘ０２１Ｎ，Ｘ０２４Ｇ，Ｘ０３３Ｔ，Ｘ０４０Ａ，Ｘ０４３Ｙ，Ｘ０６１Ｇ／Ｐ／Ｓ、Ｘ０６３Ｇ，Ｘ０７６Ｄ，Ｘ０８８Ｔ，Ｘ１０３Ｈ，Ｘ１０９Ａ／Ｇ／Ｑ／Ｓ、Ｘ１１６Ｔ，Ｘ１２８Ｓ，Ｘ１３１Ｈ，Ｘ１４１Ｒ，Ｘ１５８Ｓ，Ｘ１６２Ｇ，Ｘ１６９Ａ，Ｘ２０４Ｅ，Ｘ２０６Ｄ，Ｘ２１８Ｓ，Ｘ２４３Ｐ／Ｖ、Ｘ２４８Ａ／Ｎ、Ｘ２４９Ａ，Ｘ２５６Ｒ，Ｘ２５７Ｇ，及びＸ２６０Ｐ，からなる群から選択される少なくとも１つの置換を含み、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされ、選択的に、変異体はＡ００１Ｅ，Ｓ００９Ｔ，Ｓ０１８Ｔ，Ｙ０２１Ｎ，Ｓ０２４Ｇ，Ｓ０３３Ｔ，Ｐ０４０Ａ，Ｋ０４３Ｙ，Ｎ０６１Ｇ／Ｐ／Ｓ、Ｓ０６３Ｇ，Ｎ０７６Ｄ，Ａ０８８Ｔ，Ｑ１０３Ｈ，Ｎ１０９Ａ／Ｇ／Ｑ／Ｓ、Ａ１１６Ｔ，Ｇ１２８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ，Ｋ１４１Ｒ，Ｔ１５８Ｓ，Ｓ１６２Ｇ，Ｇ１６９Ａ，Ｓ２０４Ｅ，Ｑ２０６Ｄ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２４３Ｐ／Ｖ、Ｓ２４８Ａ／Ｎ、Ｓ２４９Ａ，Ｋ２５６Ｒ，Ｌ２５７Ｇ，及びＳ２６０Ｐ，からなる群から選択される少なくとも１つの置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられる）、並びに、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
（実施例９）
親ＢＰＮ’−ｖ３６に基づくコンビナトリアルライブラリからの変異体の構築及び変異体のクリーニング性能
ＢＰＮ’−ｖ３６親分子に基づくＢＰＮ’コンビナトリアルライブラリはＤＮＡ２．０により作成されたものであり、ライゲーション反応物として供給された。枯草菌（B subtilis）を効率的に形質転換させるため、形質転換前にライゲーション反応混合物中のＤＮＡを増幅させ、形質転換体を実施例２に記載のように増殖させた。１６℃及びｐＨ ８での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本アッセイ、並びに１６℃及びｐＨ ８での洗剤組成物４の卵微小標本アッセイを用いて、変異体をクリーニング性能について試験した。タンパク質含量はＴＣＡアッセイを用いて測定した。実施例１に記載のようにアッセイを実施し、ＢＰＮ’−ｖ３６（すなわち、ＢＰＮ’−Ｓ２４Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ）（ＰＩ値１．０を有する）と比較して性能指数を算出した。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１５３Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１４Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｙ００６Ｈ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１２Ｄ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４８Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ−Ｎ２６９Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ００３Ｐ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４７Ａ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ａ２７４Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｉ２３４Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｗ２４１Ｌ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１３７Ｖ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１５１Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ａ２７４Ｔ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｐ０１４Ｌ−Ａ０１５Ｌ−Ｌ０１６Ｃ−Ｈ０１７Ｔ−Ｓ０１８Ｌ−Ｑ０１９Ｋ−Ｇ０２０Ａ−Ｙ０２１Ｔ−Ｔ０２２Ｌ−Ｇ０２３Ｅ，Ｓ００３Ｆ−Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｖ００４Ａ−Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｖ００４Ａ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｖ００４Ｌ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｙ００６Ｈ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ００１Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ａ２７３Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｎ２６９Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｖ１４３Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ
−Ｖ１４７Ｉ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｉ１０７Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｎ２６９Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ１４５Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｖ１４３Ａ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｉ２３４Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４３Ｆ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｖ１４９Ｉ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｑ２７１Ｈ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｉ２６８Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｇ２１１Ｖ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２
５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｑ２７５Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１３７Ｖ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２３７Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ１４５Ｆ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｑ２７１Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｉ２６８Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ，Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１０５Ｐ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ２４８Ｎ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，及びＴ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３、及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ０８８Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ａ２７４Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ａ２７４Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｎ２６９Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ａ２１６Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｄ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１３８Ｖ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４９Ａ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ
−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１３７Ｅ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１５２Ｓ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４９Ａ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１５４Ａ−Ｎ１５５Ｐ−Ｅ１５６Ｔ−Ｇ１５７Ｌ−Ｔ１５８Ｍ−Ｓ１５９Ｅ−Ｇ１６０Ｅ−Ｓ１６１Ｌ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｑ２７１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｎ２６９Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｎ２６９Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｖ１４７Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｎ２６９Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｖ１４７Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０９８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ａ２３１Ｖ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０２４Ｓ−Ｇ０５３Ｓ−Ｎ０７８Ｓ−Ｇ０９７Ａ−Ｎ１０１Ｓ−Ａ１２８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４７Ｉ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｉ１０７Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｉ１０７Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１４４Ｖ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４７Ａ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４９Ａ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｉ２６８Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｉ２６８Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ１４１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｓ２６０Ｆ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７５Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ１８２Ｆ−Ｓ２０４Ｆ−Ｓ２０７Ｌ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２３６Ｆ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｒ，Ｐ０５７Ｑ−Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ００３Ｐ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００３Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ａ２７２Ｖ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２３３Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｎ２６９Ｄ，及びＶ００４Ａ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０のＰＩ値を有する、並びに、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ０８８Ｔ−Ａ０９８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｌ２６７Ｍ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｑ２７１Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２３７Ｒ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｎ２６９Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｗ２４１Ｌ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１３８Ｖ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２３３Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４９Ａ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ
−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７５Ｋ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｖ１４７Ｉ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１３９Ｉ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｋ１４１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０２４Ｓ−Ｇ０５３Ｓ−Ｎ０７８Ｓ−Ｇ０９７Ａ−Ｎ１０１Ｓ，Ｇ０５３Ｓ−Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｇ１６９Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｋ１４１Ｒ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４０Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｎ２６９Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｋ２５６Ｒ，Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｉ２３４Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２３７Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ００３Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ００３Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ１０５Ｈ−Ｗ１０６Ｇ−Ｉ１０７Ｌ−Ｉ１０８Ｓ−Ｎ１０９Ａ−Ｇ１１０Ａ−Ｉ１１１Ｓ−Ｅ１１２Ｎ−Ｗ１１３Ｇ−Ａ１１４Ｐ，Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２３３Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，及びＶ００４Ｌ−Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約０．９のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約０．９のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組の酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ０１５Ｓ−Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ０９８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ１４１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｉ１０７Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｄ１４０Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｄ１４０Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｄ１４０Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ１４１Ｅ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｑ２７１Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４９Ｌ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｋ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｙ１０４Ｈ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ１４１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｎ２６９Ｄ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｑ２７１Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１５７Ｅ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｉ２６８Ｖ，Ｉ１０７Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｌ０９０Ｉ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ１４１Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ００３Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ００３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｖ００４Ａ−Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｙ００６Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｙ１０４Ｈ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｉ２３４Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４９Ｌ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｉ１０７Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ａ２２３Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｋ２１３Ｎ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ２３２Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｄ１４０Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｍ１２４Ｉ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｖ１４８Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｔ２５５Ｋ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｑ２４５Ｋ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１５０Ａ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｉ１０７Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ１４１Ｅ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１４６Ｃ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１３８Ｅ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｆ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｖ２０３Ｉ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｄ１４０Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｅ２５１Ｋ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｉ１０８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ１４１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｗ２４１Ｒ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，及びＧ０６５Ｄ−Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組の酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ−Ｎ２６９Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ａ２７３Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ００３Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ａ２１６Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｎ２６９Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｖ１４７Ｉ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｉ１０７Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｉ１０７Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１５３Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｎ２６９Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１３８Ｖ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４９Ａ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｖ１４３Ａ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｖ１４７Ｉ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１４Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｉ２３４Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｉ１０７Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１３７Ｖ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１５１Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ
−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｇ２１１Ｖ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２３７Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ００３Ｆ−Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２３３Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｖ００４Ａ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｙ００６Ｈ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ａ２７２Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ０９８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｌ２６７Ｍ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ａ２７４Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ａ２７４Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｄ１４０Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１
５８Ｓ−Ｎ２１８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４８Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１５４Ａ−Ｎ１５５Ｐ−Ｅ１５６Ｔ−Ｇ１５７Ｌ−Ｔ１５８Ｍ−Ｓ１５９Ｅ−Ｇ１６０Ｅ−Ｓ１６１Ｌ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｖ１４７Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｎ２６９Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｖ１４７Ａ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ａ２３１Ｖ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４３Ｆ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ
−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｋ１４１Ｒ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｉ２３４Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１４４Ｖ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４９Ａ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｉ２６８Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｑ２７５Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ１４５Ｆ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ａ２７４Ｔ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｓ２６０Ｆ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ１８２Ｆ−Ｓ２０４Ｆ−Ｓ２０７Ｌ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２３６Ｆ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｒ，Ｓ００３Ｐ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ２４８Ｎ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ａ２７２Ｖ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｖ００４Ａ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，及びＹ００６Ｈ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３、及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、並びに／又は、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ０１５Ｓ−Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４７Ａ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｎ２６９Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｖ１４３Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１３８Ｖ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ１４１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｉ１０７Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ａ２２３Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ２３２Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｎ２６９Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｆ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｑ２７１Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４９Ａ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４９Ｌ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ
−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｑ２７１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｎ２６９Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ａ２７４Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｎ２６９Ｄ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ１４５Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｎ２６９Ｄ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｑ２７１Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１５０Ａ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｋ１４１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｖ１４９Ｉ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｑ２７１Ｈ，Ｇ０２４Ｓ−Ｇ０５３Ｓ−Ｎ０７８Ｓ−Ｇ０９７Ａ−Ｎ１０１Ｓ，Ｇ０２４Ｓ−Ｇ０５３Ｓ−Ｎ０７８Ｓ−Ｇ０９７Ａ−Ｎ１０１Ｓ−Ａ１２８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４０Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｉ２６８Ｖ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ−Ｎ２６９Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｗ２４１Ｌ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｉ１０７Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｉ１０７Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｉ２６８Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ１４１Ｅ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ１４１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７５Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｉ２６８Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ００３Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２３３Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｎ２６９Ｄ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｖ００４Ｌ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，及びＹ００６Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにお
いて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、並びに、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ０８８Ｔ−Ａ０９８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｑ２７１Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｉ２３４Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４９Ｌ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ１４１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１４９Ａ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１２Ｄ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１３７Ｅ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｄ１４０Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１５２Ｓ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｄ１４０Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｑ２４５Ｋ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７５Ｋ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０９８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ１４１Ｅ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１３９Ｉ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ０５３Ｓ−Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｇ１６９Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｋ２５６Ｒ，Ｌ０９０Ｉ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２３７Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｑ２７１Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ００３Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ００３Ｐ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ｓ１０５Ｈ−Ｗ１０６Ｇ−Ｉ１０７Ｌ−Ｉ１０８Ｓ−Ｎ１０９Ａ−Ｇ１１０Ａ−Ｉ１１１Ｓ−Ｅ１１２Ｎ−Ｗ１１３Ｇ−Ａ１１４Ｐ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｖ００４Ａ−Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｖ００４Ａ−Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｙ００６Ｈ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｙ１０４Ｈ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｄ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２３７Ｒ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｋ２１３Ｎ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｄ１４０Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｍ１２４Ｉ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｌ２３３Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｔ２５５Ｋ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｖ２０３Ｉ
−Ｎ２１８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｙ１０４Ｈ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｄ１４０Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１５７Ｅ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｗ２４１Ｒ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ２４３Ｖ，Ｐ０１４Ｌ−Ａ０１５Ｌ−Ｌ０１６Ｃ−Ｈ０１７Ｔ−Ｓ０１８Ｌ−Ｑ０１９Ｋ−Ｇ０２０Ａ−Ｙ０２１Ｔ−Ｔ０２２Ｌ−Ｇ０２３Ｅ，Ｓ００３Ｐ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｙ１０４Ｈ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１３８Ｅ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ−Ｉ２６８Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｗ２４１Ｌ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｗ２４１Ｒ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｉ２３４Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１３７Ｖ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｋ１４１Ｅ−Ｌ２５７Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ，Ａ０８８Ｔ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｙ１０４Ｈ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ａ１３７Ｅ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｇ０６５Ｄ−Ａ０８８Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ，Ｙ１０４Ｈ−Ｎ２１８Ｓ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｇ１３１Ｈ−Ｖ１５０Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｉ１０８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ｇ１３１Ｈ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ−Ｌ２５７Ｇ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｑ２７１Ｐ，Ａ０８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｖ１４８Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ０８８Ｔ−Ｙ１０４Ｈ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１５３Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｌ２５７Ｇ−Ｎ２６９Ｄ，及びＶ００４Ｍ−Ａ１１６Ｔ−Ｖ１４８Ａ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組の酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本又は卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６及び／又はＢＰＮ−’ｖ３と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／又は、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、スブチリシンプロテアーゼ変異体も提供され、この変異体は、配列番号２又は配列番号６に対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、この変異体は、Ｘ００１Ｒ／Ｔ、Ｘ００２Ｒ，Ｘ００３Ｆ／Ｐ、Ｘ００４Ａ／Ｌ／Ｍ／Ｐ、Ｘ００５Ｓ，Ｘ００６Ｈ，Ｘ０１４Ｌ，Ｘ０１５Ｌ／Ｓ、Ｘ０１６Ｃ，Ｘ０１７Ｔ，Ｘ０１８Ｌ，Ｘ０１９Ｋ，Ｘ０２０Ａ，Ｘ０２１Ｔ，Ｘ０２２Ｌ，Ｘ０２３Ｅ，Ｘ０２４Ｓ，Ｘ０３４Ｓ，Ｘ０５３Ｓ，Ｘ０５７Ｑ，Ｘ０６５Ｄ，Ｘ０７８Ｓ，Ｘ０８６Ｌ，Ｘ０８８Ｔ，Ｘ０９０Ｉ，Ｘ０９７Ａ，Ｘ０９８Ｓ，Ｘ１０１Ｓ，Ｘ１０４Ｈ，Ｘ１０５Ｈ／Ｐ、Ｘ１０６Ｇ，Ｘ１０７Ｌ／Ｔ、Ｘ１０８Ｓ／Ｔ、Ｘ１０９Ａ／Ｇ／Ｓ、Ｘ１１０Ａ，Ｘ１１１Ｓ，Ｘ１１２Ｎ，Ｘ１１３Ｇ，Ｘ１１４Ｐ／Ｓ、Ｘ１１６Ｔ，Ｘ１２４Ｉ，Ｘ１２８Ｓ，Ｘ１３１Ｄ／Ｈ、Ｘ１３７Ｅ／Ｖ、Ｘ１３８Ｅ／Ｖ、Ｘ１３９Ｉ，Ｘ１４０Ｇ，Ｘ１４１Ｅ／Ｒ、Ｘ１４３Ａ／Ｆ、Ｘ１４４Ｖ，Ｘ１４５Ｆ／Ｐ／Ｔ、Ｘ１４６Ｃ，Ｘ１４７Ａ／Ｉ、Ｘ１４８Ａ，Ｘ１４９Ａ／Ｉ／Ｌ、Ｘ１５０Ａ，Ｘ１５１Ｓ，Ｘ１５２Ｓ，Ｘ１５３Ｓ，Ｘ１５４Ａ，Ｘ１５５Ｐ，Ｘ１５６Ｔ，Ｘ１５７Ｅ／Ｌ、Ｘ１５８Ｍ／Ｓ、Ｘ１５９Ｅ，Ｘ１６０Ｅ，Ｘ１６１Ｌ，Ｘ１６９Ｓ，Ｘ１８２Ｆ，Ｘ２０３Ｉ，Ｘ２０４Ｆ，Ｘ２０７Ｌ，Ｘ２１１Ｖ，Ｘ２１２Ｄ，Ｘ２１３Ｎ，Ｘ２１６Ｓ，Ｘ２１８Ｓ／Ｔ、Ｘ２２３Ｇ，Ｘ２３１Ｖ，Ｘ２３２Ｓ，Ｘ２３３Ｓ，Ｘ２３４Ｔ，Ｘ２３５Ｐ，Ｘ２３６Ｆ／Ｐ、Ｘ２３７Ｎ／Ｒ、Ｘ２４０Ｈ，Ｘ２４１Ｌ／Ｒ、Ｘ２４３Ｆ／Ｖ、Ｘ２４５Ｋ，Ｘ２４８Ｎ，Ｘ２５１Ｋ，Ｘ２５５Ｋ，Ｘ２５６Ｒ，Ｘ２５７Ｇ，Ｘ２６０Ｆ，Ｘ２６７Ｍ，Ｘ２６８Ｖ，Ｘ２６９Ｄ／Ｓ、Ｘ２７１Ｈ／Ｋ／Ｐ／Ｒ、Ｘ２７２Ｇ／Ｖ、Ｘ２７３Ｔ，Ｘ２７４Ｄ／Ｌ／Ｔ／Ｖ及びＸ２７５Ｋ／Ｒ／Ｓの群から選択される少なくとも１つの置換を含み、選択的に、Ａ００１Ｒ／Ｔ、Ｑ００２Ｒ，Ｓ００３Ｆ／Ｐ、Ｖ００４Ａ／Ｌ／Ｍ／Ｐ、Ｐ００５Ｓ，Ｙ００６Ｈ，Ｐ０１４Ｌ，Ａ０１５Ｌ／Ｓ、Ｌ０１６Ｃ，Ｈ０１７Ｔ，Ｓ０１８Ｌ，Ｑ０１９Ｋ，Ｇ０２０Ａ，Ｙ０２１Ｔ，Ｔ０２２Ｌ，Ｇ０２３Ｅ，Ｇ０２４Ｓ，Ｇ０３４Ｓ，Ｇ０５３Ｓ，Ｐ０５７Ｑ，Ｇ０６５Ｄ，Ｎ０７８Ｓ，Ｐ０８６Ｌ，Ａ０８８Ｔ，Ｌ０９０Ｉ，Ｇ０９７Ａ，Ａ０９８Ｓ，Ｎ１０１Ｓ，Ｙ１０４Ｈ，Ｓ１０５Ｈ／Ｐ、Ｗ１０６Ｇ，Ｉ１０７Ｌ／Ｔ、Ｉ１０８Ｓ／Ｔ、Ｎ１０９Ａ／Ｇ／Ｓ、Ｇ１１０Ａ，Ｉ１１１Ｓ，Ｅ１１２Ｎ，Ｗ１１３Ｇ，Ａ１１４Ｐ／Ｓ、Ａ１１６Ｔ，Ｍ１２４Ｉ，Ａ１２８Ｓ，Ｇ１３１Ｄ／Ｈ、Ａ１３７Ｅ／Ｖ、Ａ１３８Ｅ／Ｖ、Ｖ１３９Ｉ，Ｄ１４０Ｇ，Ｋ１４１Ｅ／Ｒ、Ｖ１４３Ａ／Ｆ、Ａ１４４Ｖ，Ｓ１４５Ｆ／Ｐ／Ｔ、Ｇ１４６Ｃ，Ｖ１４７Ａ／Ｉ、Ｖ１４８Ａ，Ｖ１４９Ａ／Ｉ／Ｌ、Ｖ１５０Ａ，Ａ１５１Ｓ，Ａ１５２Ｓ，Ａ１５３Ｓ，Ｇ１５４Ａ，Ｎ１５５Ｐ，Ｅ１５６Ｔ，Ｇ１５７Ｅ／Ｌ、Ｔ１５８Ｍ／Ｓ、Ｓ１５９Ｅ，Ｇ１６０Ｅ，Ｓ１６１Ｌ，Ｇ１６９Ｓ，Ｓ１８２Ｆ，Ｖ２０３Ｉ，Ｓ２０４Ｆ，Ｓ２０７Ｌ，Ｇ２１１Ｖ，Ｎ２１２Ｄ，Ｋ２１３Ｎ，Ａ２１６Ｓ，Ｎ２１８Ｓ／Ｔ、Ａ２２３Ｇ，Ａ２３１Ｖ，Ａ２３２Ｓ，Ｌ２３３Ｓ，Ｉ２３４Ｔ，Ｌ２３５Ｐ，Ｓ２３６Ｆ／Ｐ、Ｋ２３７Ｎ／Ｒ、Ｎ２４０Ｈ，Ｗ２４１Ｌ／Ｒ、Ｎ２４３Ｆ／Ｖ、Ｑ２４５Ｋ，Ｓ２４８Ｎ，Ｅ２５１Ｋ，Ｔ２５５Ｋ，Ｋ２５６Ｒ，Ｌ２５７Ｇ，Ｓ２６０Ｆ，Ｌ２６７Ｍ，Ｉ２６８Ｖ，Ｎ２６９Ｄ／Ｓ、Ｑ２７１Ｈ／Ｋ／Ｐ／Ｒ、Ａ２７２Ｇ／Ｖ、Ａ２７３Ｔ，Ａ２７４Ｄ／Ｌ／Ｔ／ＶＱ２７５Ｋ／Ｒ／Ｓの群から選択される少なくとも１つの置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、ＢＰＮ’（配列番号２）、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６よりもＰＩ値が大きい。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
（実施例１０）
ＢＰＮ’−ｖ３６の更なる変異体の構築及び変異体のクリーニング性能
ＢＰＮ’−ｖ３６（実施例７に記載のもの）の部位評価ライブラリのＤＮＡに、エラープローンＰＣＲにより更に変異を誘発させた。Ｔａｑ ＤＮＡポリメラーゼ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用い、これらのライブラリをプライマーＰ４９７３及びＰ４９５０（実施例７に記載のもの）により増幅させた。各ＰＣＲ増幅反応物には、３０ｐｍｏｌの各プライマー、１００ｎｇのテンプレートＤＮＡ（ＳＥＬｓのＢＰＮ’−ｖ３６）及び様々な量のＭｎＣｌ２を含有させた。ＰＣＲ反応（２０μＬ）は、まず始めに９５℃で２．５分加熱した後、続いて９４℃で１５秒の変性、５５℃で１５秒のアニーリング、及び７２℃で２分の伸長を３０サイクル行った。ＤＮＡ断片をＱＩＡＧＥＮ（登録商標）ゲルバンド精製用キットによりゲル精製し、制限酵素ＢａｍＨＩ及びＨｉｎｄＩＩＩで消化し、同じ制限酵素で消化したｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’ｐａｒｔｉａｌ ｏｐｔベクターとライゲーションさせた。Ｉｌｌｕｓｔｒａ Ｔｅｍｐｌｉｐｈｉキットでローリング・サークル型増幅法を用い、ライゲーション混合物を製造元（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の推奨に従って増幅させることで、枯草菌（Bacillus subtilis）に形質転換させるための多量体ＤＮＡを生成した。この目的のため、１μＬのライゲーション混合物と５μＬのサンプル緩衝液を混合し、９５℃で３分間加熱し、氷中で冷却した。次に、５μＬの反応緩衝液及び０．２μＬの酵素を各チューブに加え、続いて３０℃で１０時間にわたってインキュベートした。ローリング・サークル型増幅産物を１００倍希釈し、枯草菌（B. subtilis）細胞の形質転換に用いた（ΔａｐｒＥ，ΔｎｐｒＥ，ａｍｙＥ：：ｘｙｌＲＰｘｙｌＡｃｏｍＫ−ｐｈｌｅｏ）。形質転換混合物のアリコートを、１．６％のスキムミルク及び１０μｇ／ｍＬのネオマイシンを含有しているＬＢプレートに蒔き、３７℃で一晩インキュベートした。
約５００，０００個のクローンをスキムミルクプレートでプレスクリーニングした。ハロー（すなわち、機能的なプロテアーゼが存在していることの指標）を形成したものは非常に少なかった。ハローを生じたコロニーをつつき、１０μｇ／ｍＬのネオマイシンを含有している１５０μＬのＬＢ培地に植菌し、配列決定した（Ｑｕｉｎｔａｒａ）。プールに複数回生じた、性能効果を提供し得る変異の組み合わせを見つけることで、これらのコロニーの配列を解析した。これらの変異の組み合わせの性能を評価するために、以下に記載するように融合ＰＣＲにより、ＢＰＮ’−ｖ３６バックグラウンドに二重変異を導入した。この目的のため、２又は３つの部分的に重複している断片を変異原性プライマーにより増幅させた。各変異を生成するために使用したプライマーの組み合わせを表１０−１に示し、プライマー配列を表１０−２に示す。
Figure 2016028571
Figure 2016028571
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）

各ＰＣＲ増幅反応には、３０ｐｍｏｌの各プライマー及び１００ｎｇのＢＰＮ’−ｖ３６親テンプレートＤＮＡ（ｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’−ｖ３６プラスミド、図４を参照されたい）を含有させた。増幅はＶｅｎｔ ＤＮＡポリメラーゼ（ＮＥＢ）を用いて実施した。ＰＣＲ反応（２０μＬ）は、まず始めに９５℃で２．５分加熱した後、続いて９４℃で１５秒の変性、５５℃で１５秒のアニーリング、及び７２℃で４０秒の伸長を３０サイクル行った。増幅させた後、５’及び３’遺伝子断片を、ＱＩＡＧＥＮ（登録商標）ゲルバンド精製用キットによりゲル精製し、混合して（各断片につき５０ｎｇ）、プライマーＰ４９７３及びＰ４９５０を用いて再度ＰＣＲで混合及び増幅させて、完全長の遺伝子断片を生成した。伸長工程を７２℃で２分にわたって実施したことを除き、ＰＣＲ条件は上記の条件と同様のものであった。完全長のＤＮＡ断片をＱＩＡＧＥＮ（登録商標）ゲルバンド精製用キットによりゲル精製し、制限酵素ＢａｍＨＩ及びＨｉｎｄＩＩＩで消化し、同様の制限酵素で消化したｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’ｐａｒｔｉａｌ ｏｐｔベクターとライゲーションさせた。Ｉｌｌｕｓｔｒａ Ｔｅｍｐｌｉｐｈｉキットでローリング・サークル型増幅法を用い、ライゲーション混合物を製造元（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の推奨に従って増幅させることで、枯草菌（Bacillus subtilis）に形質転換させるための多量体ＤＮＡを生成した。この目的のため、１μＬのライゲーション混合物と５μＬのサンプル緩衝液を混合し、９５℃で３分間加熱し、氷中で冷却した。次に、５μＬの反応緩衝液及び０．２μＬの酵素を各チューブに加え、続いて３０℃で１０時間にわたってインキュベートした。ローリング・サークル型増幅産物を１００倍希釈し、枯草菌（B. subtilis）細胞の形質転換に用いた（ΔａｐｒＥ，ΔｎｐｒＥ，ａｍｙＥ：：ｘｙｌＲＰｘｙｌＡｃｏｍＫ−ｐｈｌｅｏ）。形質転換混合物のアリコートを、１．６％のスキムミルク及び１０μｇ／ｍＬのネオマイシンを含有しているＬＢプレートに蒔き、３７℃で一晩インキュベートした。続いて、ハローを生じたコロニーを、１０μｇ／ｍＬのネオマイシンを含有している１５０μＬのＬＢ培地に接種した。翌日、培養物は１５％のグリセロールと共に凍結させるか、あるいは実施例２に記載されるような生化学的解析のためにＭＤＢ培地で増殖させた。
これらの変異体を、１６℃及びｐＨ ８での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本アッセイ、１６℃及びｐＨ ７での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本アッセイ、並びに、１６℃及びｐＨ ８での洗剤組成物４の卵微小標本アッセイを用いて、クリーニング性能について試験した。タンパク質含量はＴＣＡアッセイを用いて測定した。実施例１に記載のように全アッセイを実施し、ＢＰＮ’−ｖ３６（すなわち、ＢＰＮ’−Ｓ２４Ｇ−Ｓ５３Ｇ−Ｓ７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ）（ＰＩ値１．０を有する）と比較して性能指数を算出した。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ１３３Ｖ−Ｓ２６０Ｎ，Ｎ０６１Ｓ−Ｓ２６０Ｐ，Ｐ０１４Ｔ−Ｓ０３７Ｔ，Ｓ００９Ｔ−Ｋ１４１Ｆ，Ｓ００９Ｔ−Ｋ１４１Ｒ，Ｓ０１８Ｆ−Ｓ１６２Ｌ，Ｓ０１８Ｌ−Ｙ０２１Ｓ，Ｓ０１８Ｐ−Ｄ１２０Ｎ，Ｓ０１８Ｔ−Ｓ１６２Ｐ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ，Ｓ０１８Ｙ−Ｋ２１３Ｒ，Ｓ１６１Ｐ−Ｓ１６２Ｌ，Ｓ１６１Ｐ−Ｓ２６０Ｐ，及びＴ２５３Ａ−Ｓ２６０Ｐ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、並びに、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ１３４Ｔ−Ｓ２６０Ｇ，Ｉ１１５Ｖ−Ｎ１８４Ｙ，Ｎ０２５Ｋ−Ｓ０３７Ｐ，Ｑ０１０Ｌ−Ｓ０３７Ｐ，Ｑ０１９Ｌ−Ｓ２６０Ｎ，Ｑ０１９Ｌ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ０３７Ｐ−Ｔ２５４Ｓ，及びＳ１６１Ｐ−Ｔ２５３Ａ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約０．９のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約０．９のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組の酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ０４５Ｓ−Ｓ２３６Ｇ，Ｇ０２４Ａ−Ｓ０３７Ｗ，Ｉ０３１Ｖ−Ｓ０３８Ｗ，Ｎ０６１Ｄ−Ｓ２６０Ｉ，Ｑ０１０Ｒ−Ｓ０３７Ｔ，Ｉ１１５Ｔ−Ｓ１８３Ｔ，Ｎ０２５Ｋ−Ｐ１２９Ｋ，Ｎ０２５Ｋ−Ｐ１２９Ｒ，Ａ０４５Ｓ−Ｓ２３６Ｙ，及びＳ１６２Ｌ−Ｄ１８１Ｈ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組の酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ｓ０１８Ｆ−Ｓ１６２Ｌ，Ｓ０１８Ｐ−Ｄ１２０Ｎ，Ｐ０１４Ｔ−Ｓ０３７Ｔ，Ｓ００９Ｔ−Ｋ１４１Ｒ，及びＳ１６１Ｐ−Ｓ１６２Ｌ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ７及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３、及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ｎ０６１Ｓ−Ｓ２６０Ｐ，Ｑ０１０Ｌ−Ｓ０３７Ｐ，Ｓ００９Ｔ−Ｋ１４１Ｆ，Ｓ０１８Ｌ−Ｙ０２１Ｓ，Ｓ０１８Ｔ−Ｓ１６２Ｐ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ，Ｓ０１８Ｙ−Ｋ２１３Ｒ，Ｓ０３７Ｐ−Ｔ２５４Ｓ，Ｓ１６１Ｐ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ１６１Ｐ−Ｔ２５３Ａ，及びＴ２５３Ａ−Ｓ２６０Ｐ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ７及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、並びに、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’変異体：Ａ１３３Ｖ−Ｓ２６０Ｎ，Ａ１３４Ｔ−Ｓ２６０Ｇ，Ｉ１１５Ｔ−Ｓ１８３Ｔ，Ｉ１１５Ｖ−Ｎ１８４Ｙ，Ｎ０６１Ｄ−Ｓ２６０Ｉ，Ｑ０１９Ｌ−Ｓ２６０Ｎ，及びＱ０１９Ｌ−Ｓ２６０Ｐ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号２）は、ｐＨ ７及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約０．９のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並びに上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ０４５Ｓ−Ｓ２３６Ｇ，Ｇ０２４Ａ−Ｓ０３７Ｗ，Ｑ０１０Ｒ−Ｓ０３７Ｔ，Ａ０４５Ｓ−Ｓ２３６Ｙ，Ｉ０３１Ｖ−Ｓ０３８Ｗ，Ｎ０２５Ｋ−Ｓ０３７Ｐ，Ｓ１６２Ｌ−Ｄ１８１Ｈ，及びＮ０２５Ｋ−Ｐ１２９Ｒ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ７及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組の酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ｉ０３１Ｖ−Ｓ０３８Ｗ，Ｐ０１４Ｔ−Ｓ０３７Ｔ，Ｓ０１８Ｆ−Ｓ１６２Ｌ，Ｓ０１８Ｐ−Ｄ１２０Ｎ，及びＳ１６２Ｌ−Ｄ１８１Ｈ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３、及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ１３３Ｖ−Ｓ２６０Ｎ，Ａ１３４Ｔ−Ｓ２６０Ｇ，Ｇ０２４Ａ−Ｓ０３７Ｗ，Ｉ１１５Ｖ−Ｎ１８４Ｙ，Ｎ０２５Ｋ−Ｐ１２９Ｋ，Ｎ０２５Ｋ−Ｐ１２９Ｒ，Ｎ０６１Ｄ−Ｓ２６０Ｉ，Ｑ０１９Ｌ−Ｓ２６０Ｐ，Ｓ００９Ｔ−Ｋ１４１Ｆ，Ｓ００９Ｔ−Ｋ１４１Ｒ，Ｓ０１８Ｌ−Ｙ０２１Ｓ，Ｓ０１８Ｔ−Ｓ１６２Ｐ，Ｓ０１８Ｔ−Ｙ０２１Ｎ，Ｓ０１８Ｙ−Ｋ２１３Ｒ，Ｓ１６１Ｐ−Ｓ１６２Ｌ，Ｓ１６１Ｐ−Ｔ２５３Ａ，及びＴ２５３Ａ−Ｓ２６０Ｐ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約１．０のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して約１．０のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して約１．０のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ａ０４５Ｓ−Ｓ２３６Ｇ，Ａ０４５Ｓ−Ｓ２３６Ｙ，Ｉ１１５Ｔ−Ｓ１８３Ｔ，Ｎ０２５Ｋ−Ｓ０３７Ｐ，Ｎ０６１Ｓ−Ｓ２６０Ｐ，Ｑ０１０Ｌ−Ｓ０３７Ｐ，Ｑ０１０Ｒ−Ｓ０３７Ｔ，Ｑ０１９Ｌ−Ｓ２６０Ｎ，Ｓ０３７Ｐ−Ｔ２５４Ｓ，及びＳ１６１Ｐ−Ｓ２６０Ｐ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．８以上０．９以下のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．８以上０．９以下のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組の酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ若しくは卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、スブチリシンプロテアーゼ変異体も提供され、この変異体は、配列番号２又は配列番号６に対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、この変異体は、Ｘ００９Ｔ，Ｘ０１０Ｌ／Ｒ、Ｘ０１４Ｔ，Ｘ０１８Ｆ／Ｌ／Ｐ／Ｔ／Ｙ、Ｘ０１９Ｌ，Ｘ０２１Ｎ／Ｓ、Ｘ０２４Ａ，Ｘ０２５Ｋ，Ｘ０３１Ｖ，Ｘ０３７Ｐ／Ｔ／Ｗ、Ｘ０３８Ｗ，Ｘ０４５Ｓ，Ｘ０６１Ｄ／Ｓ、Ｘ１１５Ｔ／Ｖ、Ｘ１２０Ｎ，Ｘ１２９Ｋ／Ｒ、Ｘ１３３Ｖ，Ｘ１３４Ｔ，Ｘ１４１Ｆ／Ｒ、Ｘ１６１Ｐ，Ｘ１６２Ｌ／Ｐ、Ｘ１８１Ｈ，Ｘ１８３Ｔ，Ｘ１８４Ｙ，Ｘ２１３Ｒ，Ｘ２３６Ｇ／Ｙ、Ｘ２５３Ａ，Ｘ２５４Ｓ，及びＸ２６０Ｇ／Ｉ／Ｎ／Ｐの群から選択される少なくとも１つの置換を含む少なくとも１つの置換を含み、選択的に、Ｓ００９Ｔ，Ｑ０１０Ｌ／Ｒ、Ｐ０１４Ｔ，Ｓ０１８Ｆ／Ｌ／Ｐ／Ｔ／Ｙ、Ｑ０１９Ｌ，Ｙ０２１Ｎ／Ｓ、Ｇ０２４Ａ，Ｎ０２５Ｋ，Ｉ０３１Ｖ，Ｓ０３７Ｐ／Ｔ／Ｗ、Ｓ０３８Ｗ，Ａ０４５Ｓ，Ｎ０６１Ｄ／Ｓ、Ｉ１１５Ｔ／Ｖ、Ｄ１２０Ｎ，Ｐ１２９Ｋ／Ｒ、Ａ１３３Ｖ，Ａ１３４Ｔ，Ｋ１４１Ｆ／Ｒ、Ｓ１６１Ｐ，Ｓ１６２Ｌ／Ｐ、Ｄ１８１Ｈ，Ｓ１８３Ｔ，Ｎ１８４Ｙ，Ｋ２１３Ｒ，Ｓ２３６Ｇ／Ｙ、Ｔ２５３Ａ，Ｔ２５４Ｓ，及びＳ２６０Ｇ／Ｉ／Ｎ／Ｐの群から選択される少なくとも１つの置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、ＢＰＮ’（配列番号２）、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６よりもＰＩ値が大きい。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくともこのような１つの変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのような変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
（実施例１１）
１．コンビナトリアルライブラリＦＳ１〜ＦＳ３の生成
ＢＰＮ’発現カセットを含有しているｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’−ｖ３プラスミドをクローニング用テンプレートＤＮＡ（親プラスミド）として使用した。３つの別個のコンビナトリアルライブラリ（ＦＳ１、ＦＳ２、及びＦＳ３）はＤＮＡ２．０により合成され、個々のライゲーション反応物として供給された。ライブラリ及び導入可能な置換を表１１−１に示す。野生型残基又は表１１−１に記載の各部位での置換のいずれかが導入できるようにライブラリを設計した。
枯草菌（B. subtilis）を効率的に形質転換させるために、Ｉｌｌｕｓｔｒａ Ｔｅｍｐｌｉｐｈｉキット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いるローリング・サークル型増幅（ＲＣＡ）により、ライゲーション反応物からＤＮＡを増幅させた。反応は製造元のプロトコルに従い実施した。１マイクロリットルの、１０倍希釈した増幅ＤＮＡを使用して、コンピテント枯草菌（B. subtilis）細胞（ΔａｐｒＥ，ΔｎｐｒＥ，ａｍｙＥ：：ｘｙｌＲＰｘｙｌＡｃｏｍＫ−ｐｈｌｅｏ）５０μＬを形質転換させた。形質転換混合物を３７℃にて１時間にわたって振盪した。形質転換混合物の１０マイクロリットルアリコートを、１０μｇ／ｍＬのネオマイシン（Ｔｅｋｎｏｖａ）を添加したスキムミルク（１．６％）Ｌｕｒｉａ寒天プレートに蒔いた。
形質転換体をつつき、１０μｇ／ｍＬのネオマイシンを添加した１２５〜１５０μＬのルリアブロス培地を含有しているマイクロタイタープレートに植菌した。マイクロタイタープレートにＥｎＺｙｓｃｒｅｅｎ ｌｉｄ（ＥｎＺｙｓｃｒｅｅｎ）を用い、プレートを３７℃、７０〜８０％湿度にて、２５０〜３００ｒｐｍで振盪させながら一晩増殖させた。１０μｇ／ｍＬのネオマイシンを添加した１９０μＬのＭＢＤ培地（ＭＯＰＳ系合成培地）を含有している新しいマイクロタイタープレートに、一晩培養プレートから７〜１０マイクロリットルを使用して接種した。ＮＨ４Ｃｌ２、ＦｅＳＯ４、及びＣａＣｌ２を基本培地から除外したこと、３ｍＭのＫ２ＨＰＯ４を用いたこと、並びに、６０ｍＭの尿素、及び、２１０ｇ／Ｌのグルコースと３５０ｇ／Ｌマルトデキストリンとから作製した１００ｍＬの溶液を含有させたこと、を除き、ＭＢＤ培地は本質的に当該技術分野において既知であるように調製した（Ｎｅｉｄｈａｒｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１１９：７３６〜７４７［１９７４］を参照されたい）。微量栄養素は、４００ｍｇのＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、１００ｍｇのＭｎＳＯ４・Ｈ２Ｏ、１００ｍｇのＺｎＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、５０ｍｇのＣｕＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、１００ｍｇのＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、１００ｍｇのＮａＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ、１００ｍｇのＮａ２Ｂ４Ｏ７・１０Ｈ２Ｏ、１０ｍＬの１ＭのＣａＣｌ２及び１０ｍＬの０．５Ｍのクエン酸ナトリウムを１リットル中に含有している、１００Ｘ原液として調製した。タンパク質発現を測定するために、Ｅｎｚｙｓｃｒｅｅｎ ｌｉｄｓ（Ｅｎｚｙｓｃｒｅｅｎ）を用いて、ＭＢＤ培地を含有しているマイクロタイタープレートで、３７℃、７０〜８０％湿度にて、２５０〜３００ｒｐｍで、６０〜７０時間にわたって増殖させた。翌日、培養物をマイクロフィルタプレート（０．２２μｍ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で濾過し、得られた濾液を生化学的解析に使用した。
Figure 2016028571
２．ＢＰＮ’安定性を改善するための変異体の生産
ＢＰＮ’安定性を改善するために、どちらもＧｅｎｅ Ｏｒａｃｌｅにより合成された分子ｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ８７Ｄ又はｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｐ４０Ｅ，、あるいはＧｅｎｅＡｒｔにより合成された親分子ｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ７８Ｎ及びｐＨＰＬＴ−ｐａｒｔｉａｌ ｏｐｔ ＦＮＡ（バチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシンＢＰＮ’−Ｙ２１７Ｌ）のいずれかを用いて変異体を構築した。
表１１−２及び１１−３に列挙されている情報は、本明細書で提供される変異体を構築するのに使用された親分子、導入された変異、及びプライマーを要約するものである。
Figure 2016028571
Figure 2016028571
１０ｐｐｍのネオマイシンを含有している１．６％のスキムミルクプレートに、プラスミドを発現する枯草菌（Bacillus subtilis）株を画線し、３７℃で一晩増殖させた。プレートから単独のコロニーを、１０ｐｐｍのネオマイシンを含有している５ｍＬのルリアブロスで、３７℃で２５０ｒｐｍで振盪させながら一晩増殖させた。１マイクロリットルのＲｅａｄｙ Ｌｙｓｅ ｌｙｓｏｚｙｍｅ（Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ）を添加した、ＱＩＡＧＥＮ（登録商標）ミニプレップキットプロトコルを用い、細胞の溶解を助けるために緩衝液Ｐ１で、３７℃で１５分間プラスミドを単離した。ＤＮＡ配列が正しいものであることを確認するために、加工前にプラスミドを配列決定した。ＮＥＢのＤａｍメチラーゼキットを用いて、プラスミドを、７７．５μＬの水＋１０μＬの１０Ｘ緩衝液＋０．２５μＬのＳＡＭ＋２μＬのＤＡＭメチラーゼ＋１０μＬのミニプレップＤＮＡ（約１５０ｎｇ／μＬ）を含有させた反応液中で、３７℃で一晩メチル化した。ＤＮＡ Ｃｌｅａｎ ａｎｄ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒキット（Ｚｙｍｏ）を用いて、あるいはＱＩＡＧＥＮ（登録商標）ＰＣＲ精製キットにより、メチル化したプラスミドＤＮＡを精製した。２．５μＬの５Ｘ緩衝液＋０．７５μＬのＱｕｉｋ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ＋０．５μＬのプライマー１（２５μＭ）＋０．５μＬのプライマー２（２５μＭ）＋１．５μＬのｄＮＴＰ＋１μＬの酵素ブレンド＋１６．２５μＬのＨ２Ｏ＋２μＬのＤＮＡを含有させた反応混合液で、各ＤＮＡテンプレートに対してＱＵＩＫＣＨＡＮＧＥ（登録商標）の多部位変異誘発反応を行った。使用したＰＣＲプログラムは以下の通りであった：９５℃で１分、（９５℃で１分、５３℃で１分、６５℃で１０分）×２９サイクル、６５℃で１０分、４℃で保持。すべての反応で、ＭＪ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＰＴＣ−２００ Ｐｅｌｔｉｅｒ ｔｈｅｒｍａｌ ｃｙｃｌｅｒを用いてＰＣＲを実施した。１μＬのＤｐｎＩをＱＵＩＫＣＨＡＮＧＥ（登録商標）変異誘発キットに加え、３７℃で一晩置くことでＰＣＲサンプルから親ＤＮＡを除去した。形質転換頻度を増加させるために、製造元のプロトコルに従ってＩｌｌｕｓｔｒａ ＴｅｍｐｌｉＰｈｉキットを用い、ローリング・サークル型増幅（ＲＣＡ）させることで、ＤｐｎＩ消化した反応物を増幅させた。枯草菌（B. subtilis）細胞（ΔａｐｒＥ，ΔｎｐｒＥ，ａｍｙＥ：：ｘｙｌＲＰｘｙｌＡｃｏｍＫ−ｐｈｌｅｏ）を、各１μＬのＲＣＡ反応物で形質転換し、形質転換させた細胞を、１０ｐｐｍのネオマイシンを含有しているＬＡ＋１．６％スキムミルクプレートに蒔き、３７℃で一晩インキュベートした。一晩増殖物からコロニーを選択し、「ｐｕＲｅＴａｑ Ｒｅａｄｙ−Ｔｏ−Ｇｏ ＰＣＲ Ｂｅａｄｓ」（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を用いて配列決定するためにコロニーＰＣＲを実施した。ＰＣＲ及び配列決定に使用したプライマーは、ｐＨＰＬＴ Ｆ１（配列番号５４）及びｐＨＰＬＴ ｓｅｑ Ｒ１（配列番号５５）であった。適切な配列を有するコロニーを凍結した。尿素を含有しているＭＯＰＳ系培地を用い、３７℃で６８時間にわたり、９６ウェルマイクロタイタープレートで枯草菌（B. subtilis）形質転換体を増殖させることで、ＢＰＮ’変異体タンパク質を生産させた。
３．異なる５種の親プラスミドからのＢＰＮ’変異体の生産
表１１−４に示される、合計５種の異なるテンプレート：ＢＰＮ’−ｖ３（Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ）、ＢＰＮ’−ｖ４（Ｇ９７Ａ−Ｎ１２３Ｇ−Ｙ２１７Ｑ）、ＢＰＮ’変異体８、（Ｓ８７Ｄ−Ｇ９７Ａ−Ｎ１０９Ｄ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１８８Ｄ−Ｓ２４８Ｒ−Ｙ２１７Ｑ）、ＢＰＮ’変異体１６（Ｓ８７Ｄ−Ｇ９７Ａ−Ｎ１０９Ｄ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１８８Ｄ−Ｙ２１７Ｑ）及びＢＰＮ’変異体２１（Ｓ８７Ｒ−Ｇ９７Ａ−Ｎ１０９Ｒ−Ｇ１２８Ａ−Ｓ１８８Ｒ−Ｙ２１７Ｑ−Ｓ２４８Ｒ）を用い、ＢＰＮ’変異体を構築した。ＢＰＮ’−ｖ４及びＢＰＮ’−ｖ３の生成は、このような説明についての参照により本案件に組み込まれる、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ０９／４６０６６（国際公開第０９／１４９１４４号）（２００９年６月３日出願）に記載されている。ＢＰＮ’変異体８、１６、２１はＧｅｎｅ Ｏｒａｃｌｅにより合成されたものであり、親プラスミドとして用い、更なる変異体を作成した。以下に記載するような融合ＰＣＲを用いて作成した２種の変異体（変異体５及び３３）を除き、すべての変異体はＱＵＩＫＣＨＡＮＧＥ（登録商標）変異誘発キットを用いて生成した。変異体を生成するためのプライマー（表１１−５に記載）はＩｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓにより合成された。導入された変異（太字で示されるもの）、並びに使用されたプライマー及びテンプレートを表１１−４に示す。

Figure 2016028571

ＱＵＩＫＣＨＡＮＧＥ（登録商標）変異誘発によるＢＰＮ’変異体の生産
ＢＰＮ’−ｖ３、ＢＰＮ’−ｖ４、ＢＰＮ’変異体８、ＢＰＮ’変異体１６、及びＢＰＮ’変異体２１を発現するプラスミドを含有している枯草菌（Bacillus subtilis）株を、１０ｐｐｍのネオマイシンを含有している１．６％のスキムミルクプレートに画線し、３７℃で一晩増殖させた。プレートから単独のコロニーを、１０ｐｐｍのネオマイシンを含有している５ｍＬのルリアブロスで、３７℃で２５０ｒｐｍで振盪させながら一晩増殖させた。ＢＰＮ’−ｖ３、ＢＰＮ’−ｖ４、ＢＰＮ’変異体８、ＢＰＮ’変異体１６、及びＢＰＮ’変異体２１を発現しているプラスミドを、１マイクロリットルのＲｅａｄｙ Ｌｙｓｅ ｌｙｓｏＺｙｍｅを添加しかつ３７℃で１５分にわたってインキュベートする細胞溶解は行わずに、ＱＩＡＧＥＮ（登録商標）ミニプレップキットプロトコルを用い単離した。ＮＥＢのＤａｍメチラーゼキットを用いて、プラスミドを、７７．７５μＬのＨ２Ｏ＋１０μＬの１０Ｘ緩衝液＋０．２５μＬのＳＡＭ＋２μＬのＤＡＭメチラーゼ＋１０μＬのミニプレップＤＮＡを含有させた反応液中で、３７℃で一晩メチル化した。メチル化したＤＮＡを、ＱＩＡＧＥＮ（登録商標）ＰＣＲ精製キットを用い精製した。表１１−４に列挙した変異体１４、１８、及び１９を、ＱＵＩＫＣＨＡＮＧＥ ＬＩＧＨＴＮＩＮＧ（商標）Ｍｕｌｔｉ Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ Ｋｉｔ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を用い、２．５μＬの５Ｘ緩衝液＋０．７５μＬのＱｕｉｋ溶液＋０．５μＬのプライマー１（２５μＭ）＋０．５μＬのプライマー２（２５μＭ）＋１．５μＬのｄＮＴＰ＋１μＬの酵素ブレンド＋１６．２５μＬのＨ２Ｏ＋２μＬのＤＮＡを含有させた反応混合液で生成した。使用したＰＣＲプログラムは以下の通りであった：９５℃で２分、（９５℃で２０秒、５５℃で３０秒、６４℃で２分３０秒）×２９サイクル、６４℃で５分、４℃で保持。
残りの変異体は、ＱＵＩＫＣＨＡＮＧＥ（登録商標）Ｍｕｌｔｉ Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ Ｋｉｔを用いて、２．５μＬの５Ｘ緩衝液＋０．７５μＬのＱｕｉｋ溶液＋０．５μＬのプライマー１（２５μＭ）＋０．５μＬのプライマー２（２５μＭ）＋１．５μＬのｄＮＴＰ＋１μＬの酵素ブレンド＋１６．２５μＬのＨ２O＋２μＬのＤＮＡを含有させた反応混合液で生成した。使用したＰＣＲプログラムは以下の通りであった：９５℃で１分、（９５℃で１分、５３℃で１分、６５℃で１０分）×２９サイクル、６５℃で１０分、４℃で保持。すべての反応で、ＭＪ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＰＴＣ−２００ Ｐｅｌｔｉｅｒ ｔｈｅｒｍａｌ ｃｙｃｌｅｒを用いてＰＣＲを実施した。Ｑｕｉｋ−Ｃｈａｎｇｅ反応に使用したプライマーを表１１−５に提供する。

Figure 2016028571
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）

１μＬのＤｐｎＩをＱｕｉｋ−Ｃｈａｎｇｅ反応物に加え、３７℃で一晩置くことでＰＣＲサンプルから親ＤＮＡを除去した。製造元のプロトコルに従ってＩｌｌｕｓｔｒａ ＴｅｍｐｌｉＰｈｉキットを用い、ローリング・サークル型増幅（ＲＣＡ）させることで、ＤｐｎＩ消化した反応物１μＬを増幅させた。枯草菌（B. subtilis）細胞（ΔａｐｒＥ，ΔｎｐｒＥ，ａｍｙＥ：：ｘｙｌＲＰｘｙｌＡｃｏｍＫ−ｐｈｌｅｏ）を、各１μＬのＲＣＡ反応物で形質転換し、形質転換させた細胞を、１０ｐｐｍのネオマイシンを含有しているＬＡ＋１．６％スキムミルクプレートに蒔き、３７℃で一晩インキュベートした。一晩増殖物からコロニーを選択し、「ｐｕＲｅＴａｑ Ｒｅａｄｙ−Ｔｏ−Ｇｏ ＰＣＲ Ｂｅａｄｓ」（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を用いてコロニーＰＣＲを実施した。使用したＰＣＲプライマーはｐＨＰＬＴ Ｆ１（配列番号５４）及びｐＨＰＬＴ ｓｅｑ Ｒ１（配列番号５５）であった。適切な配列を有するコロニーを凍結した。尿素を含有しているＭＯＰＳ系培地を用い、３７℃で６８時間にわたり、９６ウェルマイクロタイタープレートで枯草菌（B. subtilis）形質転換体を増殖させることで、ＢＰＮ’変異体を発現させた。
融合ＰＣＲによるＢＰＮ’変異体の生産
テンプレートｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’−ｖ３から増幅させた断片で融合ＰＣＲを用い、変異体５及び３３を生成した。これらの変異体を生成するために使用したＰＣＲプライマーは表１１−５に包含される。変異体５に関しては、ＢＰＮ’遺伝子の５’断片は、順方向プライマーｐＨＰＬＴ Ｆ１（配列番号５４）、及び逆方向プライマーＳ２４８Ｄ ｒｅｖｆｕｓを用いて増幅させた。ＢＰＮ’遺伝子の３’断片は、所望の変異を含有している順方向プライマーＳ２４８Ｄ ｆｏｒｆｕｓ及び逆方向プライマーｐＨＰＬＴ Ｒ１を用いて増幅させた。２０ｂｐの重複配列を含有している２種の生成物は、１μＬの各断片と、融合プライマーＱＣ ＦＵＳＩＯＮ＿Ｆｏｒ１及びＱＣ ＦＵＳＩＯＮ＿Ｒｅｖ１を最終的なＰＣＲ反応で組み合わせることで融合させた。ＰＣＲ反応は、すべてＨｅｒｃｕｌａｓｅ ＩＩ ＰＣＲキット（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）の標準条件を用いて実施した。ＰＣＲミックスには、１μＬのＤＮＡポリメラーゼ、１μＬのプラスミドＤＮＡ（又は融合用断片ＤＮＡ）、０．５μＬのｄＮＴＰ、１．２５μＬの２５μＭの順方向プライマー、１．２５μＬの２５μＭの逆方向プライマー、１０μＬの５Ｘ緩衝液、３５μＬのＨ２Ｏを含有させた。使用したＰＣＲプログラムは以下の通りであった：９５℃で２分、（９５℃で３０秒、５５℃で３０秒、７２℃で「Ｘ」秒）×２９サイクル、７２℃で１分、４℃保持（「Ｘ」は増幅させるＤＮＡの１ｋＢつき１５秒）。
変異体３３に関しては、ＢＰＮ’遺伝子の５’断片は、テンプレートｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’−ｖ３、並びにプライマーｐＨＰＬＴ Ｆ１（配列番号５４）及びＥＧ１００Ｅ＿Ｆｓｒｅｖを用いて増幅させた。プライマーＧ１００Ｅ＿Ｆｓｆｏｒ及びｐＨＰＬＴ Ｒ１を用い、変異を含有させた３’断片を増幅させた。２０ｂｐの重複配列を含有している２種の生成物は、１μＬの各断片と、融合プライマーＱＣ ＦＵＳＩＯＮ＿Ｆｏｒ１及びＱＣ ＦＵＳＩＯＮ＿Ｒｅｖ１を最終的なＰＣＲ反応で組み合わせることで融合させた。ＰＣＲ条件は上記のものと同様であった。
ＱＩＡＧＥＮ（登録商標）ＰＣＲ精製カラムを用い、供給元により提供された条件で２種の融合生成物を精製し、ＢｇｌＩ及びＨｉｎｄＩＩＩ酵素を用い一晩消化した。同じ酵素を用い、プラスミドｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’ ｐａｒｔｉａｌ ｏｐｔを消化し、ベクターのバンドをゲルから抽出し、製造元の推奨に従いＱＩＡＧＥＮ（登録商標）ゲル精製カラムで精製した。制限酵素ミックスには１０μＬの精製ＤＮＡ、５μＬのＲｏｃｈｅ Ｂｕｆｆｅｒ Ｂ、０．５μＬのＨｉｎｄＩＩＩ、０．５μＬのＢｇｌＩ、３４μＬのＨ２Ｏを含有させ、反応は３７℃で８時間にわたって、続いて６５℃で２０分にわたって実施した。ＱＩＡＧＥＮ（登録商標）ＰＣＲ精製カラムを用い消化物を精製し、及びＭｉｇｈｔｙ Ｍｉｘ Ｌｉｇａｓｅキット（Ｔｅｋａｒａ）を用い、切断したベクター骨格と１６℃で一晩ライゲーションさせた。インキュベーション後、１μＬのライゲーションミックスをＩｌｌｕｓｔｒａ ＴｅｍｐｌｉＰｈｉキットを用いて増幅させた。
増幅反応に関して、１μＬのライゲーション反応ミックスを、ＴｅｍｐｌｉＰｈｉキットの５μＬのサンプル緩衝液と混合し、９５℃で３分加熱してＤＮＡを変性させた。反応物を氷中に置き、２分冷却し、次いで簡単にスピン・ダウンさせた。５マイクロリットルの反応緩衝液、及びＴｅｍｐｌｉＰｈｉキットの０．２μＬのｐｈｉ２９ポリメラーゼを加え、反応物をＭＪ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＰＣＲ ｍａｃｈｉｎｅで３０℃で４時間にわたってインキュベートした。ｐｈｉ２９酵素は、ＰＣＲ装置中で、６５℃で１０分にわたってインキュベートすることにより、反応液中で熱失活させた。枯草菌（Bacillus subtilis）細胞（ΔａｐｒＥ，ΔｎｐｒＥ，ａｍｙＥ：：ｘｙｌＲＰｘｙｌＡｃｏｍＫ−ｐｈｌｅｏ）を１μＬの反応混合物を用いて形質転換させ、形質転換体を、１０ｐｐｍのネオマイシンを含有している１．６％のスキムミルクプレート上で３７℃で一晩増殖させた。形質転換体を選択してコロニーＰＣＲを実施し、「ｐｕＲｅＴａｑ Ｒｅａｄｙ−Ｔｏ−Ｇｏ ＰＣＲ Ｂｅａｄｓ」（Ａｍｅｒｓｈａｍ）並びにプライマーｐＨＰＬＴ Ｆ１（配列番号５４）及びｐＨＰＬＴ ｓｅｑＲ１（配列番号５５）を用いて配列決定した。
４．ライブラリＲＣＬ４−ＲＣＬ７からのＢＰＮ’変異体の生産
ＲＣＬ４ライブラリ
「ＲＣＬ４」は、ＢＰＮ’−ｖ３をコードしている（ＢＰＮ”−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ）遺伝子の、３つの隣接するコドンを同時にランダム化させる融合ＰＣＲにより作成された、部位飽和ライブラリ群を指す。各ライブラリ中で、３つの変異コドンに対応するアミノ酸位置は表１１−６に提供される。それぞれ３つの縮重コドンを含有している、２種の部分的に重複している相補的な変異原性プライマーを使用して、以下表１１−６に示されるように各ライブラリ内に変異を導入した。各プライマー中で、対象とする各縮重コドンの最初の２つのヌクレオチド（ＮＮＸ、Ｎ＝Ａ、Ｃ、Ｔ、又はＧであり、及びＸは変化していないヌクレオチドである）のみを変異させた（表１１−６）。
各ライブラリを生成するために、共通の３’側の遺伝子に隣接するプライマー（Ｐ４９７６、ＣＣＴＣＴＣＧＧＴＴＡＴＧＡＧＴＴＡＧＴＴＣ、（配列番号６１））及び変異原性プライマー、あるいは共通の５’側の遺伝子に隣接するプライマー（Ｐ４９７４、ＧＣＣＴＣＡＣＡＴＴＴＧＴＧＣＣＡＣＣＴＡ、（配列番号６０））及び表１１−６で各ライブラリについて示される変異原性プライマーを用いて、２種類のＰＣＲ反応を実施した。これらのＰＣＲ反応は、２種のＰＣＲ断片を生成した。一方は変異ＢＰＮ’−ｖ３遺伝子の５’側半分（５’遺伝子断片）をコードするものであり、他方は変異ＢＰＮ’−ｖ３遺伝子の３’側半分（３’遺伝子断片）をコードするものである。各ＰＣＲ増幅反応には、３０ｐｍｏｌの各プライマー及び１００ｎｇのＢＰＮ’−ｖ３親テンプレートＤＮＡ（ｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’−ｖ３プラスミド、図１を参照されたい）を含有させた。増幅はｖｅｎｔ ＤＮＡポリメラーゼ（ＮＥＢ）を用いて実施した。ＰＣＲ反応（２０μＬ）は、まず始めに９５℃で２．５分加熱した後、続いて９４℃で１５秒の変性、５５℃で１５秒のアニーリング、及び７２℃で４０秒の伸長を３０サイクル行った。増幅させた後、５’及び３’遺伝子断片を、ＱＩＡＧＥＮ（登録商標）ゲルバンド精製用キットによりゲル精製し、混合して（各断片につき５０ｎｇ）、プライマーＰ４９７３（ＡＡＡＧＧＡＴＣＣＴＡＡＴＣＧＧＣＧＣＴＴＴＴＣ、配列番号６２）及びＰ４９５０（ＣＴＴＧＴＣＴＣＣＡＡＧＣＴＴＡＡＡＡＴＡＡＡＡ、配列番号６３）を用いて再度ＰＣＲで増幅させて、完全長の遺伝子断片を生成した。伸長工程を７２℃で２分にわたって実施したことを除き、ＰＣＲ条件は上記の条件と同様のものであった。完全長のＤＮＡ断片をＱＩＡＧＥＮ（登録商標）ゲルバンド精製用キットによりゲル精製し、制限酵素ＢａｍＨＩ及びＨｉｎｄＩＩＩで消化し、同様の制限酵素で消化したｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’ｐａｒｔｉａｌ ｏｐｔベクターとライゲーションさせた。Ｉｌｌｕｓｔｒａ Ｔｅｍｐｌｉｐｈｉキットでローリング・サークル型増幅法を用い、ライゲーション混合物を製造元（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の推奨に従って増幅させることで、枯草菌（Bacillus subtilis）に形質転換させるための多量体ＤＮＡを生成した。この目的のため、１μＬのライゲーション混合物と５μＬのサンプル緩衝液を混合し、９５℃で３分間加熱し、氷中で冷却した。次に、５μＬの反応緩衝液及び０．２μＬの酵素を各チューブに加え、続いて３０℃で１０時間にわたってインキュベートした。ローリング・サークル型増幅産物を１００倍希釈し、枯草菌（B. subtilis）細胞の形質転換に用いた（ΔａｐｒＥ，ΔｎｐｒＥ，ａｍｙＥ：：ｘｙｌＲＰｘｙｌＡｃｏｍＫ−ｐｈｌｅｏ）。形質転換混合物のアリコートを、１．６％のスキムミルク及び１０μｇ／ｍＬのネオマイシンを含有しているＬＢプレートに蒔き、３７℃で一晩インキュベートした。続いて、ハローを生じたコロニーを、１０μｇ／ｍＬのネオマイシンを含有している１２０μＬのＬＢ培地に接種した。

Figure 2016028571
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）

ＲＣＬ５変異体
「ＲＣＬ５」は、親（テンプレート）分子として数個のＢＰＮ’変異体を用いて融合ＰＣＲにより生成した１組のコンビナトリアル変異体を指す。各親プラスミドに導入した変異を表１１−７に示し、変異体を生成するのに使用した変異原性プライマーを表１１−８に示す。
Figure 2016028571
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）

Figure 2016028571

各変異体を生成するために、共通の３’側の遺伝子に隣接するプライマー（Ｐ４９７６、ＣＣＴＣＴＣＧＧＴＴＡＴＧＡＧＴＴＡＧＴＴＣ、配列番号６１）及び変異原性プライマー、あるいは共通の５’側の遺伝子に隣接するプライマー（Ｐ４９７４、ＧＣＣＴＣＡＣＡＴＴＴＧＴＧＣＣＡＣＣＴＡ、配列番号６０）及び表１１−８で各ライブラリについて示される変異原性プライマーを用いて、２種類のＰＣＲ反応を実施した。これらのＰＣＲ反応は、２種のＰＣＲ断片を生成した。一方はＢＰＮ’変異遺伝子の５’側半分（５’遺伝子断片）をコードするものであり、他方はＢＰＮ’変異遺伝子の３’側半分（３’遺伝子断片）をコードするものである。各ＰＣＲ増幅反応には、３０ｐｍｏｌの各プライマー及び表１１−７に列挙した１００ｎｇの親分子を含有させた。増幅はＶｅｎｔ ＤＮＡポリメラーゼ（ＮＥＢ）を用いて実施した。ＰＣＲ反応（２０μＬ）は、まず始めに９５℃で２．５分加熱した後、続いて９４℃で１５秒の変性、５５℃で１５秒のアニーリング、及び７２℃で４０秒の伸長を３０サイクル行った。増幅させた後、５’及び３’遺伝子断片を、ＱＩＡＧＥＮ（登録商標）ゲルバンド精製用キットによりゲル精製し、混合して（各断片につき５０ｎｇ）、プライマーＰ４９７３（ＡＡＡＧＧＡＴＣＣＴＡＡＴＣＧＧＣＧＣＴＴＴＴＣ、配列番号６２）及びＰ４９５０（ＣＴＴＧＴＣＴＣＣＡＡＧＣＴＴＡＡＡＡＴＡＡＡＡ、配列番号６３）を用いて再度ＰＣＲで増幅させて、完全長の遺伝子断片を生成した。伸長工程を７２℃で２分にわたって実施したことを除き、ＰＣＲ条件は上記の条件と同様のものであった。完全長のＤＮＡ断片をＱＩＡＧＥＮ（登録商標）ゲルバンド精製用キットによりゲル精製し、制限酵素ＢａｍＨＩ及びＨｉｎｄＩＩＩで消化し、同様の制限酵素で消化したｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’ｐａｒｔｉａｌ ｏｐｔでライゲーションした。Ｉｌｌｕｓｔｒａ Ｔｅｍｐｌｉｐｈｉキットでローリング・サークル型増幅法を用い、ライゲーション混合物を製造元（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）からの取扱説明書に従って増幅させることで、枯草菌（Bacillus subtilis）に形質転換させるための多量体ＤＮＡを生成した。この目的のため、１μＬのライゲーション混合物と５μＬのサンプル緩衝液を混合し、９５℃で３分間加熱し、氷中で冷却した。次に、５μＬの反応緩衝液及び０．２μＬの酵素を各チューブに加え、続いて３０℃で１０時間にわたってインキュベートした。ローリング・サークル型増幅産物を１００倍希釈し、枯草菌（B. subtilis）細胞の形質転換に用いた（ΔａｐｒＥ，ΔｎｐｒＥ，ａｍｙＥ：：ｘｙｌＲＰｘｙｌＡｃｏｍＫ−ｐｈｌｅｏ）。形質転換混合物のアリコートを、１．６％のスキムミルク及び１０μｇ／ｍＬのネオマイシンを含有しているＬＢプレートに蒔き、３７℃で一晩インキュベートした。続いて、ハローを生じたコロニーを、１０μｇ／ｍＬのネオマイシンを含有している１２０μＬのＬＢ培地に接種した。
ＲＣＬ６コンビナトリアルライブラリ
「ＲＣＬ６」は、親（テンプレート）分子として数個のＢＰＮ’変異体を用いて融合ＰＣＲにより生成した一群のコンビナトリアルライブラリを指す。これらの各ライブラリの構築に、ＢＰＮ’変異体の混合物をテンプレート（親分子）として使用した。これらのライブラリを生成するために使用した親分子の５つの異なる混合物を表１１−９に提供し、各ライブラリに導入した変異を表１１−１０に列挙する。
各変異体を生成するために、共通の３’側の遺伝子に隣接するプライマー（Ｐ４９７６、ＣＣＴＣＴＣＧＧＴＴＡＴＧＡＧＴＴＡＧＴＴＣ、配列番号６１）及び変異原性プライマー、あるいは共通の５’側の遺伝子に隣接するプライマー（Ｐ４９７４、ＧＣＣＴＣＡＣＡＴＴＴＧＴＧＣＣＡＣＣＴＡ、配列番号６０）及び表１１−１０で各ライブラリについて示される変異原性プライマーを用いて、２種類のＰＣＲ反応を実施した。これらのＰＣＲ反応は、２種のＰＣＲ断片を生成した。一方はＢＰＮ’変異遺伝子の５’側半分（５’遺伝子断片）をコードするものであり、他方はＢＰＮ’変異遺伝子の３’側半分（３’遺伝子断片）をコードするものである。各ＰＣＲ増幅反応には、３０ｐｍｏｌの各プライマー及び表１１−９に列挙した１００ｎｇの親分子を含有させた。増幅はＶｅｎｔ ＤＮＡポリメラーゼ（ＮＥＢ）を用いて実施した。ＰＣＲ反応（２０μＬ）は、まず始めに９５℃で２．５分加熱した後、続いて９４℃で１５秒の変性、５５℃で１５秒のアニーリング、及び７２℃で４０秒の伸長を３０サイクル行った。増幅させた後、５’及び３’遺伝子断片を、ＱＩＡＧＥＮ（登録商標）ゲルバンド精製用キットによりゲル精製し、混合して（各断片につき５０ｎｇ）、プライマーＰ４９７３（ＡＡＡＧＧＡＴＣＣＴＡＡＴＣＧＧＣＧＣＴＴＴＴＣ、配列番号６２）及びＰ４９５０（ＣＴＴＧＴＣＴＣＣＡＡＧＣＴＴＡＡＡＡＴＡＡＡＡ、配列番号６３）を用いて再度ＰＣＲで増幅させて、完全長の遺伝子断片を生成した。伸長工程を７２℃で２分にわたって実施したことを除き、ＰＣＲ条件は上記の条件と同様のものであった。完全長のＤＮＡ断片をＱＩＡＧＥＮ（登録商標）ゲルバンド精製用キットによりゲル精製し、制限酵素ＢａｍＨＩ及びＨｉｎｄＩＩＩを用いて消化し、同様の制限酵素で消化したｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’ｐａｒｔｉａｌ ｏｐｔベクターとライゲーションさせた。Ｉｌｌｕｓｔｒａ Ｔｅｍｐｌｉｐｈｉキットでローリング・サークル型増幅法を用い、ライゲーション混合物を製造元（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）からの取扱説明書に従って増幅させることで、枯草菌（Bacillus subtilis）に形質転換させるための多量体ＤＮＡを生成した。この目的のため、１μＬのライゲーション混合物と５μＬのサンプル緩衝液を混合し、９５℃で３分間加熱し、氷中で冷却した。次に、５μＬの反応緩衝液及び０．２μＬの酵素を各チューブに加え、続いて３０℃で１０時間にわたってインキュベートした。ローリング・サークル型増幅産物を１００倍希釈し、枯草菌（B. subtilis）細胞の形質転換に用いた（ΔａｐｒＥ，ΔｎｐｒＥ，ａｍｙＥ：：ｘｙｌＲＰｘｙｌＡｃｏｍＫ−ｐｈｌｅｏ）。形質転換混合物のアリコートを、１．６％のスキムミルク及び１０μｇ／ｍＬのネオマイシンを含有しているＬＢプレートに蒔き、３７℃で一晩インキュベートした。続いて、ハローを生じたコロニーを、１０μｇ／ｍＬのネオマイシンを含有している１２０μＬのＬＢ培地に接種した。
Figure 2016028571
Figure 2016028571
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）

ＲＣＬ７コンビナトリアル変異体
「ＲＣＬ７」は、親（テンプレート）プラスミドとして数個のＢＰＮ’変異体を用いて融合ＰＣＲにより生成した１組のコンビナトリアル変異体を指す。各親プラスミドに導入した変異を表１１−１１に示し、変異体を生成するのに使用した変異原性プライマーを表１１−１０に示す。
各変異体を生成するために、共通の３’側の遺伝子に隣接するプライマー（Ｐ４９７６、ＣＣＴＣＴＣＧＧＴＴＡＴＧＡＧＴＴＡＧＴＴＣ、配列番号６１）及び変異原性プライマー、あるいは共通の５’側の遺伝子に隣接するプライマー（Ｐ４９７４、ＧＣＣＴＣＡＣＡＴＴＴＧＴＧＣＣＡＣＣＴＡ、配列番号６０）及び表１１−１０で各ライブラリについて示される変異原性プライマーを用いて、２種類のＰＣＲ反応を実施した。これらのＰＣＲ反応は、２種のＰＣＲ断片を生成した。一方はＢＰＮ’変異遺伝子の５’側半分（５’遺伝子断片）をコードするものであり、他方はＢＰＮ’変異遺伝子の３’側半分（３’遺伝子断片）をコードするものである。各ＰＣＲ増幅反応には、３０ｐｍｏｌの各プライマー及び表１１−１１に列挙した１００ｎｇの親分子を含有させた。増幅はＶｅｎｔ ＤＮＡポリメラーゼ（ＮＥＢ）を用いて実施した。ＰＣＲ反応（２０μＬ）は、まず始めに９５℃で２．５分加熱した後、続いて９４℃で１５秒の変性、５５℃で１５秒のアニーリング、及び７２℃で４０秒の伸長を３０サイクル行った。増幅させた後、５’及び３’遺伝子断片を、ＱＩＡＧＥＮ（登録商標）ゲルバンド精製用キットを用いてゲル精製し、混合して（各断片につき５０ｎｇ）、プライマーＰ４９７３（ＡＡＡＧＧＡＴＣＣＴＡＡＴＣＧＧＣＧＣＴＴＴＴＣ、配列番号６２）及びＰ４９５０（ＣＴＴＧＴＣＴＣＣＡＡＧＣＴＴＡＡＡＡＴＡＡＡＡ、配列番号６３）を用いて再度ＰＣＲで増幅させて、完全長の遺伝子断片を生成した。伸長工程を７２℃で２分にわたって実施したことを除き、ＰＣＲ条件は上記の条件と同様のものであった。完全長のＤＮＡ断片をＱＩＡＧＥＮ（登録商標）ゲルバンド精製用キットを用いてゲル精製し、制限酵素ＢａｍＨＩ及びＨｉｎｄＩＩＩを用いて消化し、同様の制限酵素で消化したｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’ｐａｒｔｉａｌ ｏｐｔとライゲーションした。Ｉｌｌｕｓｔｒａ Ｔｅｍｐｌｉｐｈｉキットでローリング・サークル型増幅法を用い、ライゲーション混合物を製造元（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）からの取扱説明書に従って増幅させることで、枯草菌（Bacillus subtilis）に形質転換させるための多量体ＤＮＡを生成した。この目的のため、１μＬのライゲーション混合物と５μＬのサンプル緩衝液を混合し、９５℃で３分間加熱し、氷中で冷却した。次に、５μＬの反応緩衝液及び０．２μＬの酵素を各チューブに加え、続いて３０℃で１０時間にわたってインキュベートした。ローリング・サークル型増幅産物を１００倍希釈し、枯草菌（B. subtilis）細胞の形質転換に用いた（ΔａｐｒＥ，ΔｎｐｒＥ，ａｍｙＥ：：ｘｙｌＲＰｘｙｌＡｃｏｍＫ−ｐｈｌｅｏ）。形質転換混合物のアリコートを、１．６％のスキムミルク及び１０μｇ／ｍＬのネオマイシンを含有しているＬＢプレートに蒔き、３７℃で一晩インキュベートした。続いて、ハローを有するコロニーを、１０μｇ／ｍＬのネオマイシンを含有している１２０μＬのＬＢ培地に接種した。

Figure 2016028571
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）

（実施例１２）
洗剤の表
パートＩ実施例１２のアッセイで使用される洗剤の組成を表１２−１に示す。ＢＰＮ’変異体のタンパク質サンプルを、パートＩ実施例１に記載のような洗剤組成物に添加して、列挙した様々な特性についてのアッセイを行った。

Figure 2016028571

１「ランダムグラフトコポリマー」は、ポリエチレンオキシド主鎖と複数のポリビニルアセテート側鎖とを有する、ポリビニルアセテートグラフト化ポリエチレンオキシドコポリマーである。ポリエチレンオキシド主鎖の分子量は約６０００であり、ポリエチレンオキシドとポリビニルアセテートとの重量比は約４０：６０であり、５０個のエチレンオキシド単位当たりのグラフト点は１以下である。
２ −ＮＨにつき２０個のエトキシル基を有するポリエチレンイミン（ＭＷ＝６００）。
３ 両親媒性アルコキシル化グリース洗浄ポリマーは、−ＮＨにつき２４個のエトキシル基、及び−ＮＨにつき１６個のプロポキシル基を有するポリエチレンイミン（ＭＷ＝６００）である。
ＢＰＮ’のコンビナトリアル変異体のシミ除去性能
実施例１１に記載のように生成したＢＰＮ’のコンビナトリアル変異体の、シミ除去性能の評価実験を、ＢＭＩ染色した微小標本を用いて実施した。アッセイを実施例１に記載のように実施した（ＢＭＩ微小標本アッセイ）。表１２−２は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物１の、並びにｐＨ ８及び３２℃での洗剤組成物１の、ＢＭＩ微小標本アッセイを用いて、並びに、１６℃及びｐＨ ８での加熱不活性化した市販のＴＩＤＥ（登録商標）２Ｘ Ｃｏｌｄ（Ｐｒｏｃｔｅｒ ＆ Ｇａｍｂｌｅ）洗剤のＢＭＩ微小標本アッセイを用いて、ＲＣＬ４ライブラリから生成した変異体の性能指数（ＰＩ）値を提供する。市販の洗剤配合物の加熱不活性化は、任意のタンパク質成分の内因性の酵素活性を破壊しつつ、非酵素成分の特性は保持させる。洗剤の加熱不活性化は、予め計量した液体洗剤（ガラス瓶中）を９５℃のウォーターバスに２時間にわたって配置することで行った。ＴＩＤＥ（登録商標）２Ｘ Ｃｏｌｄ洗剤は、地元のスーパーマーケットで購入した。不活性化率を正確に判定するために、未加熱及び加熱洗剤のどちらも、洗剤を溶解させて５分以内にアッセイを行った。酵素活性はＡＡＰＦアッセイにより試験した。希釈標準溶液は、加熱不活性化した母液から調製した。所望される条件に一致するよう適切な硬度の水及び緩衝液を洗剤溶液に加えた（表１２−２）。瓶をボルテックスにかけるか反転させるかして溶液を混合した。
Figure 2016028571
表１２−３に列挙した変異体の配列は、ＢＰＮ’−ｖ３：Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑと比較したものである。ＰＩ値はＢＰＮ’−ｖ３と比較して算出する。この一覧中のすべての変異のＰＩは、試験した少なくとも１種の特性について０．５以上は切り捨てられている。「洗剤組成物（Det. Comp.）」は洗剤組成物を意味する。

Figure 2016028571

本発明は、タンパク質分解活性を有するプロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並びに表１２−３のものから選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。このようなプロテアーゼ変異体のタンパク質分解活性は、ＢＰＮ’又はＢＰＮ’−ｖ３プロテアーゼよりも大きくてもよい。このようなプロテアーゼ変異体は、それぞれ単離物、組み換え体、実質的な純品、又は天然に生じたものではないプロテアーゼ変異体であり得る。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられる）、並びに、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
表１２−４は、１６℃及びｐＨ ８での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本アッセイ、並びに、１６℃及びｐＨ ８での洗剤組成物２のＢＭＩ微小標本アッセイ、並びに、洗剤組成物３で測定された安定性を用いて、ＲＣＬ ５〜７及びＦＳ１〜３から生成した変異体の性能指数（ＰＩ）値を提供する。ＡＡＰＦ加水分解による比活性についてのＰＩ値（ＡＡＰＦ比のＰＩ）も同様に測定した。すべてのアッセイは実施例１に記載のように実施した。変異体の配列は、ＢＰＮ’−ｖ３：Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑと比較したものである。ＰＩ値はＢＰＮ’−ｖ３と比較して算出した。この一覧中のすべての変異のＰＩは、試験した少なくとも１種の特性について０．５以上は切り捨てられている。０．０１未満のＰＩ値は、太字のイタリック体で修飾して０．０１と表示させた。

Figure 2016028571
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）

本発明は、タンパク質分解活性を有するプロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並びに表１２−４に列挙されるものから選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。このようなプロテアーゼ変異体は、それぞれ単離物、組み換え体、実質的な純品、又は天然に生じたものではないプロテアーゼ変異体であり得る。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられる）、並びに、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
表１２−５は、１６℃及びｐＨ ８での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本アッセイ（洗剤組成物１，ｐＨ ８，１６℃，ＢＭＩ ＰＩ）におけるシミ除去についての、並びに、ＬＡＳ／ＥＤＴＡ（ＬＡＳ／ＥＤＴＡ 安定性 ＰＩ）の安定性についての、ＢＰＮ’変異体（「ＢＰＮ’安定性を改善するための変異体の生産」に記載のように生成、表１１−３を参照されたい）の性能指数（ＰＩ）値を提供する。アッセイは実施例１に記載のように実施した（ＢＭＩ微小標本アッセイ、ＬＡＳ／ＥＤＴＡ安定性アッセイ）。変異体の配列は、ＢＰＮ’及びＦＮＡの両方と比較して示す。すなわち、各変異体配列は、特定のアミノ酸置換変異を有するＢＰＮ’又はＦＮＡ配列である。ＰＩ値は、親ＦＮＡすなわちＢＰＮ’−Ｙ２１７Ｌと比較して示す。

Figure 2016028571

本発明は、タンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＦＮＡと比較して安定性が改善されている、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並びに表１２−５に列挙された少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。このようなプロテアーゼ変異体は、ＢＰＮ’又はＢＰＮ’−ｖ３よりも大きなタンパク質分解活性を有し得る。このようなプロテアーゼ変異体は、それぞれ単離物、組み換え体、実質的な純品、又は天然に生じたものではないプロテアーゼ変異体であり得る。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられる）、並びに、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
表１２−６は、１６℃及びｐＨ ８での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本アッセイにおけるシミ除去についての、並びに、ＬＡＳ／ＥＤＴＡでの安定性についての、親ライブラリ：ＢＰＮ’−ｖ３：Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑ（「ＢＰＮ’安定性を改善するための変異体の生産」に記載のようなもの、表１１−３を参照されたい）から生成されたＢＰＮ’変異体の性能指数（ＰＩ）値を提供する。アッセイは実施例１に記載のように実施した（ＢＭＩ微小標本アッセイ及びＬＡＳ／ＥＤＴＡ安定性アッセイ）。性能指数は、ＢＰＮ’−ｖ３：Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑと比較して算出した。この一覧中のすべての変異のＰＩは、試験した少なくとも１種の特性について０．５以上は切り捨てられている。

Figure 2016028571

本発明は、タンパク質分解活性を有する、及びＢＰＮ’−ｖ３と比較して安定性が改善されている、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並びに表１２−６に列挙された少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。このようなプロテアーゼ変異体は、それぞれ単離物、組み換え体、実質的な純品、又は天然に生じたものではないプロテアーゼ変異体であり得る。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられる）、並びに、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
表１２−７は、１６℃及びｐＨ ８での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本アッセイにおけるシミ除去についての、ＢＰＮ’変異体（「異なる５種の親プラスミドからのＢＰＮ’変異体の生産」に記載のように生成、表１１−４を参照されたい）の性能指数（ＰＩ）値を提供する。アッセイは実施例１に記載のように実施した（ＢＭＩ微小標本アッセイ）。各変異体の性能指数は、ＢＰＮ’−ｖ３：Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑと比較して算出した。この一覧中のすべての変異のＰＩは、試験した少なくとも１種の特性について０．５以上は切り捨てられている。

Figure 2016028571

本発明は、タンパク質分解活性を有するプロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並びに表１２−７に列挙されるものから選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。このようなプロテアーゼ変異体は、それぞれ単離物、組み換え体、実質的な純品、又は天然に生じたものではないプロテアーゼ変異体であり得る。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられる）、並びに、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
表１２−８は、１６℃及びｐＨ ８での洗剤組成物１のＢＭＩ微小標本アッセイを用い、シミ除去についての、ＢＰＮ’変異体（実施例３に記載の「コンビナトリアルライブラリの作成及び変異体ＢＰＮ’−ｖ３＋Ｓ７８Ｎのクリーニング性能」で記載されるように生成）の性能指数（ＰＩ）値を提供する。アッセイは実施例１に記載のように実施した（ＢＭＩ微小標本アッセイ）。各変異体の性能指数は、ＢＰＮ’−Ｓ７８Ｎ−Ｇ９７Ａ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑと比較して算出した。０．０１未満のＰＩ値は修飾され、太字のイタリック体で「０．０１」として記される。

Figure 2016028571

本発明は、タンパク質分解活性を有するプロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並びに表１２−８に列挙されるものから選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。このようなプロテアーゼ変異体は、それぞれ単離物、組み換え体、実質的な純品、又は天然に生じたものではないプロテアーゼ変異体であり得る。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられる）、並びに、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
表１２−９は、１６℃及びｐＨ ８での洗剤組成物２でのＢＭＩ微小標本アッセイにおける、シミ除去についての、並びに、洗剤組成物３で測定される安定性についての、ＢＰＮ’単独変異体（ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ０９／４６１５６（２００９年６月３日出願、記載は本明細書に参照により組み込まれる）に記載のような融合ＰＣＲを用いて構築）の性能指数（ＰＩ）値を提供する。ＡＡＰＦ加水分解による比活性についてのＰＩ値（ＡＡＰＦ比のＰＩ）を測定した。すべてのアッセイは実施例１に記載のように実施した。性能指数値はＢＰＮ野生型と比較して算出した。０．０１未満のＰＩ値は、太字のイタリック体で「０．０１」として示す。「洗剤組成物（Det. Comp.）」は洗剤組成物を意味する。
Figure 2016028571
本発明は、タンパク質分解活性を有するプロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列、並びに表１２−９に列挙されるものから選択される少なくとも１つの置換を含み、ここで、変異体の位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。このようなプロテアーゼ変異体は、それぞれ単離物、組み換え体、実質的な純品、又は天然に生じたものではないプロテアーゼ変異体であり得る。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられる）、並びに、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
（実施例１３）
液体洗濯洗剤組成物
この実施例では、液体洗濯洗剤組成物についての様々な配合物を提供する。本発明の以下の液体洗濯洗剤組成物は、下記に示すように調製される。これらの配合物のそれぞれにおいて、本明細書で提供される少なくとも１つのプロテアーゼ変異体は、約０．０００１〜約１０重量％の濃度で含まれる。一部の代替的な態様では、必要性に応じ、配合者により決定されるものとして、他の濃度での使用も見出される。
Figure 2016028571
＃１：１ＮのＨＣｌ水溶液を添加して、配合物の正味ｐＨを約３〜約５の範囲に調整。
表１３−１の配合物（Ｉ）〜（ＩＩ）のｐＨは約５〜約７であり、表１３−１の配合物（ＩＩＩ）〜（Ｖ）のｐＨは約７．５〜約８．５である。
（実施例１４）
食器手洗い用液体洗剤組成物
この実施例では、様々な食器手洗い用液体洗剤配合物が提供される。以下の本発明の食器手洗い用液体洗剤組成物が、下記に提供される。これらの配合物のそれぞれにおいて、本明細書に提供される少なくとも１つのプロテアーゼ変異体が約０．０００１〜約１０重量パーセントの濃度で含まれる。一部の代替的態様では、配合者に必要に基づいて判定されるように他の濃度の使用が見出される。
Figure 2016028571
表１４−１の配合物（Ｉ）〜（ＶＩ）のｐＨは、約８〜約１１である。
（実施例１５）
液体自動食器洗浄洗剤組成物
この実施例では、様々な液体自動食器洗浄洗剤配合物が提供される。以下の本発明の食器手洗い用液体洗剤組成物が、下記に提供される。これらの配合物のそれぞれにおいて、本明細書で提供される少なくとも１つのプロテアーゼ変異体は、約０．０００１〜約１０重量％の濃度で含まれる。一部の代替的な態様では、必要性に応じ、配合者により決定されるものとして、他の濃度での使用も見出される。
Figure 2016028571
（実施例１６）
顆粒及び／又はタブレット洗濯組成物
この実施例は、顆粒及び／又はタブレット洗濯洗剤のための様々な配合物を提供する。顆粒又はタブレットの形態であり得る以下の本発明の洗濯組成物が下記に提供される。これらの配合物のそれぞれにおいて、本明細書で提供される少なくとも１つのプロテアーゼ変異体は、約０．０００１〜約１０重量％の濃度で含まれる。一部の代替的な態様では、必要性に応じ、配合者により決定されるものとして、他の濃度での使用も見出される。
Figure 2016028571
＊ 香料、染料、増白剤／ＳＲＰ１／カルボキシメチルセルロースナトリウム／光漂泊剤／ＭｇＳＯ４／ＰＶＰＶＩ／抑泡剤／高分子量ＰＥＧ／粘土。
（実施例１７）
液体洗濯洗剤
この実施例は、液体洗濯洗剤用の様々な配合を提供する。以降、本発明の液体洗濯洗剤配合物が提供される。これらの配合物のそれぞれにおいて、本明細書で提供される少なくとも１つのプロテアーゼ変異体は、約０．０００１〜約１０重量％の濃度で含まれる。一部の代替的な態様では、必要性に応じ、配合者により決定されるものとして、他の濃度での使用も見出される。
Figure 2016028571
（実施例１８）
高密度食器洗浄洗剤
この実施例は、高密度食器洗浄洗剤についての様々な配合物を提供する。以下の本発明のコンパクト高密度食器洗浄洗剤は、下記に提供される。これらの配合物のそれぞれにおいて、本明細書で提供される少なくとも１つのプロテアーゼ変異体は、約０．０００１〜約１０重量％の濃度で含まれる。一部の代替的な態様では、必要性に応じ、配合者により決定されるものとして、他の濃度での使用も見出される。
Figure 2016028571
＊香料／染料／ＳＲＰ１／カルボキシメチルセルロースナトリウム／光漂泊剤／ＭｇＳＯ４／ＰＶＰＶＩ／抑泡剤／高分子量ＰＥＧ／粘土。
表１８−１の配合物（Ｉ）〜（ＶＩ）のｐＨは、約９．６〜約１１．３である。
（実施例１９）
タブレット洗剤組成物
この実施例は、様々なタブレット洗剤配合物を提供する。以下の本発明のタブレット洗剤組成物は、標準的な１２ヘッドロータリープレスを用いて、１３ＫＮ／ｃｍ２の圧力にて顆粒食器洗浄洗剤組成物を圧縮することにより、調製される。これらの配合物のそれぞれにおいて、本明細書で提供される少なくとも１つのプロテアーゼ変異体は、約０．０００１〜約１０重量％の濃度で含まれる。一部の代替的な態様では、必要性に応じ、配合者により決定されるものとして、他の濃度での使用も見出される。
Figure 2016028571
＊増白剤／ＳＲＰ１／カルボキシメチルセルロースナトリウム／光漂泊剤／ＭｇＳＯ４／ＰＶＰＶＩ／抑泡剤／高分子量ＰＥＧ／粘土。
表１９−１の配合物（Ｉ）〜（ＶＩＩ）のｐＨは約１０〜約１１．５であり、表１９−１の配合物（ＶＩＩＩ）のｐＨは８〜１０である。表１９−１の配合物（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）のタブレット重量は、約２０グラム〜約３０グラムである。
（実施例２０）
液体硬質表面クリーニング洗剤
この実施例は、液体硬質表面クリーニング洗剤についての様々な配合物を提供する。以下の本発明の液体硬質表面クリーニング洗剤組成物は、下記に適用される。これらの配合物のそれぞれにおいて、本明細書で提供される少なくとも１つのプロテアーゼ変異体は、約０．０００１〜約１０重量％の濃度で含まれる。一部の代替的な態様では、必要性に応じ、配合者により決定されるものとして、他の濃度での使用も見出される。
Figure 2016028571
表２０−１の配合物（Ｉ）〜（ＶＩＩ）のｐＨは、約７．４〜約９．５である。
（実施例２１）
ＢＰＮ’−ｖ３６ポリペプチド変異体のクリーニング性能
骨格鎖若しくは親配列としてＢＰＮ’−ｖ３６変異体を用いて、アミノ酸置換を２つ含むＢＰＮ’−ｖ３６ポリペプチド変異体を標準融合ＰＣＲにより構築した。この目的のため、所望の置換をコードするように調製された変異原性プライマーにより、２つ又は３つの部分的に重複している断片を増幅させた。ＰＣＲ増幅反応は、上記パートＩの実施例７に記載のように実施した。以下のＢＰＮ’−ｖ３６二重変異体（すなわち、以下のアミノ酸置換を有するＢＰＮ’−ｖ３６）を構築した：Ｑ０１９Ｒ−Ｎ０２５Ｄ，Ａ００１Ｙ−Ｑ２７５Ｒ，Ｖ００４Ａ−Ｓ２４９Ｎ，Ｖ００４Ｅ−Ｓ２６０Ｐ，Ｖ００４Ａ−Ｔ５５Ａ，Ｙ００６Ｆ−Ｓ２４９Ｃ，Ｙ００６Ｄ−Ｔ５５Ａ，Ｖ００８Ｌ−Ｑ２７５Ｒ，Ｑ０１０Ｒ−Ｑ２７５Ｋ，Ｌ０１６Ｑ−Ｑ２１７Ｈ，Ｈ０１７Ｒ−Ｔ１５８Ａ，Ｓ１８３Ｄ−Ｑ２０６Ｒ，Ｐ２１０Ｓ−Ｎ２１２Ｄ，Ｓ０１８Ｙ−Ｖ２０３Ａ，Ｓ０１８Ｋ−Ｖ２０３Ｉ，Ｙ０２１Ｈ−Ｄ２５９Ｇ，Ｙ０２１Ｈ−Ｄ２５９Ｒ，Ｋ０２７Ｒ−Ｎ２６９Ｄ，Ｋ０２７Ｒ−Ｎ２６９Ｔ，Ｓ０３７Ｐ−Ｓ２６０Ｆ，Ｓ０３７Ｔ−Ｓ２６０Ｐ，Ｄ０４１Ｅ−Ｎ０７７Ｄ，Ｄ０４１Ｇ−Ｎ０７７Ｅ，Ｇ１６６Ｖ−Ｓ１８３Ｔ，Ｎ２５２Ｓ−Ｌ２５７Ｈ，Ｖ０４４Ａ−Ｑ２０６Ｈ，Ｖ０４４Ａ−Ｑ２０６Ｋ，Ｖ０４４Ａ−Ｑ２０６Ｒ，Ｎ０７６Ｔ−Ｎ２１２Ｄ，Ｎ０７６Ｐ−Ｎ２１２Ｓ，Ｎ０７７Ｄ−Ｎ２５２Ｄ，Ｎ０７７Ｄ−Ｎ２５２Ｔ，Ｋ１４１Ｉ−Ｓ２４８Ｎ，Ｔ１５８Ｉ−Ｄ２５９Ｎ，Ｔ１５８Ａ−Ｄ２５９Ｐ，Ｓ１６１Ｅ−Ｑ１８５Ｈ，Ｋ２３７Ｍ−Ｈ２３８Ｒ，Ｇ１６０Ａ−Ｄ２５９Ｇ，Ｇ１６０Ｒ−Ｄ２５９Ｖ，Ｇ２１５Ｒ−Ｄ２５９Ｒ，Ｇ２１５Ｄ−Ｄ２５９Ｖ，Ｎ０６１Ｄ−Ｑ２０６Ｒ，Ｎ０６１Ｌ−Ｑ２０６Ｈ，Ｓ００９Ｌ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ１６１Ｅ−Ｓ２６０Ｔ，Ｑ０１９Ａ−Ｎ１０９Ｓ，Ｔ０２２Ｓ−Ｇ１６６Ｖ，Ｙ０２１Ｈ−Ｎ２５２Ｈ，Ｐ１２９Ｓ−Ｋ１３６Ｒ，Ｔ０２２Ｓ−Ｔ２４２Ｓ，Ｎ０２５Ｋ−Ｈ２３８Ｒ，Ｎ０２５Ｄ−Ｑ１８５Ｒ，Ｓ０３７Ｇ−Ｑ２７５Ｈ，Ｋ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｓ，Ｋ０４３Ｎ−Ｑ２１７Ｒ，Ｋ０４３Ｎ−Ｓ１６３Ｔ，Ｔ０５５Ａ−Ｖ１４７Ａ，Ｎ０６１Ｋ−Ｎ２５２Ｋ，Ｎ０６２Ｙ−Ｇ０９７Ｄ，Ｙ０２１Ｈ−Ｖ０８４Ｅ，Ｙ０２１Ｈ−Ｓ０３７Ｅ，Ｎ０６２Ｙ−Ｔ２４４Ａ，Ｋ０２７Ｅ−Ｙ０９１Ｆ，Ａ０７４Ｓ−Ｐ１２９Ｑ，Ｓ２４９Ｒ−Ｑ２７５Ｒ，Ｉ０７９Ｖ−Ｑ２１７Ｈ，Ａ０９８Ｔ−Ｔ１５８Ａ，Ｋ０２７Ｒ−Ｄ１２０Ｈ，Ｑ０１９Ｒ−Ｑ１８５Ｒ，Ｇ１３１Ｓ−Ｋ２６５Ｎ，Ａ１３３Ｖ−Ｄ２５９Ｎ，Ａ１４４Ｈ−Ｔ２４４Ａ，Ｉ０３５Ｖ−Ｋ０４３Ｎ，Ｇ１６０Ｒ−Ｔ２４４Ａ，Ｓ１６１Ｐ−Ｔ２５３Ａ，Ｓ１６３Ｔ−Ｑ２４５Ｌ，Ｋ１７０Ｒ−Ｄ２５９Ｇ，Ｓ１８３Ｔ−Ｓ２４９Ｒ，Ｎ１８４Ｙ−Ｙ２６２Ｎ，Ｖ１９８Ｌ−Ｄ２５９Ｇ，Ａ２００Ｔ−Ｈ２２６Ｌ，Ｑ２０６Ｒ−Ｓ２６０Ｐ，Ｇ２１１Ｖ−Ｔ２４４Ａ，Ｑ２１７Ｒ−Ｔ２４４Ａ，Ｌ７５Ｉ−Ｎ７６Ｄ，Ｓ２６０Ｐ−Ｑ２７５Ｌ，Ｓ２６０Ｐ−Ｑ２７５Ｒ，Ｙ２６２Ｎ−Ｑ２７５Ｒ，Ｖ００４Ａ−Ｙ００６Ｆ，Ｈ０１７Ｌ−Ｑ０１９Ａ，Ｎ０２５Ｄ−Ｖ０２６Ａ，Ｎ１１８Ｇ−Ｖ１２１Ａ，Ｖ０７２Ｆ−Ｌ０７５Ｉ，Ｓ１８３Ｔ−Ｒ１８６Ｋ，Ｖ２０３Ａ−Ｑ２１７Ｒ，及びＳ２４９Ｒ−Ｙ２６２Ｈ。パートＩの実施例１に記載のように、これらの変異体のクリーニング性能を、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、並びにｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、試験した。結果は以下に提供される。
以下のＢＰＮ’プロテアーゼ変異体：Ｓ１８３Ｔ−Ｓ２４９Ｒ，Ｎ６１Ｄ−Ｑ２０６Ｒ，Ｙ２６２Ｎ−Ｑ２７５Ｒ，Ｋ４３Ｒ−Ｎ７６Ｓ，Ｋ１７０Ｒ−Ｄ２５９Ｇ，Ｙ６Ｆ−Ｓ２４９Ｃ，Ｑ１９Ａ−Ｎ１０９Ｓ，Ｈ１７Ｌ−Ｑ１９Ａ，Ｑ１９Ｒ−Ｑ１８５Ｒ，Ｓ１８Ｙ−Ｖ２０３Ａ，Ｓ１６１Ｅ−Ｓ２６０Ｔ，Ｓ１８Ｋ−Ｖ２０３Ｉ，Ｖ４Ａ−Ｔ５５Ａ，Ｎ２５２Ｓ−Ｌ２５７Ｈ，Ｓ２４９Ｒ−Ｙ２６２Ｈ，Ｎ６１Ｌ−Ｑ２０６Ｈ，Ｎ１８４Ｙ−Ｙ２６２Ｎ，Ｑ１９Ｒ−Ｎ２５Ｄ，Ａ７４Ｓ−Ｐ１２９Ｑ，Ｋ２７Ｒ−Ｄ１２０Ｈ，Ｙ２１Ｈ−Ｎ２５２Ｈ，Ｋ２７Ｒ−Ｎ２６９Ｄ，Ａ９８Ｔ−Ｔ１５８Ａ，Ｉ７９Ｖ−Ｑ２１７Ｈ，Ｓ９Ｌ−Ｎ２１８Ｓ，Ｖ４Ａ−Ｙ６Ｆ，Ｓ１６１Ｐ−Ｔ２５３Ａ，Ｖ２０３Ａ−Ｑ２１７Ｒ，Ｔ２２Ｓ−Ｔ２４２Ｓ，Ｎ７６Ｐ−Ｎ２１２Ｓ，Ｓ３７Ｔ−Ｓ２６０Ｐ，Ｔ５５Ａ−Ｖ１４７Ａ，Ｇ１６０Ｒ−Ｔ２４４Ａ，Ｎ２５Ｄ−Ｑ１８５Ｒ，Ｇ２１１Ｖ−Ｔ２４４Ａ，Ａ１４４Ｈ−Ｔ２４４Ａ，Ｙ２１Ｈ−Ｎ２５２Ｈ，Ａ１Ｙ−Ｑ２７５Ｒ，Ｖ１９８Ｌ−Ｄ２５９Ｇ，Ｋ１４１Ｉ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ１８３Ｔ−Ｒ１８６Ｋ，Ｓ１６１Ｅ−Ｑ１８５Ｈ，Ｐ１２９Ｓ−Ｋ１３６Ｒ，Ｋ４３Ｎ−Ｓ１６３Ｔ，Ｓ３７Ｇ−Ｑ２７５Ｈ，Ｎ６２Ｙ−Ｔ２４４Ａ，及びＳ２６０Ｐ−Ｑ２７５Ｒ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号：６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．９以上１．０以下のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．９以上１．０以下のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２又は配列番号６の配列と少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのような変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、向上したタンパク質分解活性を有する、並びに、ＢＰＮ’と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、スブチリシンプロテアーゼ変異体も提供され、この変異体は、配列番号２又は配列番号６に対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、この変異体は、Ｘ１Ｙ，Ｘ４Ａ，Ｘ６Ｆ，Ｘ９Ｌ，Ｘ１７Ｌ，Ｘ１８Ｋ／Ｙ、Ｘ１９Ａ／Ｒ、Ｘ２１Ｈ，Ｘ２２Ｓ，Ｘ２５Ｄ，Ｘ２７Ｒ，Ｘ３７Ｇ／Ｔ、Ｘ４３Ｎ／Ｒ、Ｘ５５Ａ，Ｘ６１Ｄ／Ｌ、Ｘ６２Ｙ，Ｘ７４Ｓ，Ｘ７６Ｐ／Ｓ、Ｘ７９Ｖ，Ｘ９８Ｔ，Ｘ１０９Ｓ，Ｘ１２０Ｈ，Ｘ１２９Ｑ／Ｓ、Ｘ１３６Ｒ，Ｘ１４１Ｉ，Ｘ１４４Ｈ，Ｘ１４７Ａ，Ｘ１５８Ａ，Ｘ１６０Ｒ，Ｘ１６１Ｅ／Ｐ、Ｘ１６３Ｔ，Ｘ１７０Ｒ，Ｘ１８３Ｔ，Ｘ１８４Ｙ，Ｘ１８５Ｈ／Ｒ、Ｘ１８６Ｋ，Ｘ１９８Ｌ，Ｘ２０３Ａ／Ｉ、Ｘ２０６Ｈ／Ｒ、Ｘ２１１Ｖ，Ｘ２１２Ｓ，Ｘ２１７Ｈ／Ｒ、Ｘ２１８Ｓ，Ｘ２４２Ｓ，Ｘ２４４Ａ，Ｘ２４８Ｎ，Ｘ２４９Ｃ／Ｒ、Ｘ２５２Ｈ／Ｓ、Ｘ２５３Ａ，Ｘ２５７Ｈ，Ｘ２５９Ｇ，Ｘ２６０Ｐ／Ｔ、Ｘ２６２Ｈ／Ｎ、Ｘ２６９Ｄ，及びＸ２７５Ｈ／Ｒからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含む少なくとも１つの置換を含み、選択的にＡ１Ｙ，Ｖ４Ａ，Ｙ６Ｆ，Ｓ９Ｌ，Ｈ１７Ｌ，Ｓ１８Ｋ／Ｙ、Ｑ１９Ａ／Ｒ、Ｙ２１Ｈ，Ｔ２２Ｓ，Ｎ２５Ｄ，Ｋ２７Ｒ，Ｓ３７Ｇ／Ｔ、Ｋ４３Ｎ／Ｒ、Ｔ５５Ａ，Ｎ６１Ｄ／Ｌ、Ｎ６２Ｙ，Ａ７４Ｓ，Ｎ７６Ｐ／Ｓ、Ｉ７９Ｖ，Ａ９８Ｔ，Ｎ１０９Ｓ，Ｄ１２０Ｈ，Ｐ１２９Ｑ／Ｓ、Ｋ１３６Ｒ，Ｋ１４１Ｉ，Ａ１４４Ｈ，Ｖ１４７Ａ，Ｔ１５８Ａ，Ｇ１６０Ｒ，Ｓ１６１Ｅ／Ｐ、Ｓ１６３Ｔ，Ｋ１７０Ｒ，Ｓ１８３Ｔ，Ｎ１８４Ｙ，Ｑ１８５Ｈ／Ｒ、Ｒ１８６Ｋ，Ｖ１９８Ｌ，Ｖ２０３Ａ／Ｉ、Ｑ２０６Ｈ／Ｒ、Ｇ２１１Ｖ，Ｎ２１２Ｓ，Ｑ２１７Ｈ／Ｒ、Ｎ２１８Ｓ，Ｔ２４２Ｓ，Ｔ２４４Ａ，Ｓ２４８Ｎ，Ｓ２４９Ｃ／Ｒ、Ｎ２５２Ｈ／Ｓ、Ｔ２５３Ａ，Ｌ２５７Ｈ，Ｄ２５９Ｇ，Ｓ２６０Ｐ／Ｔ、Ｙ２６２Ｈ／Ｎ、Ｎ２６９Ｄ，及びＱ２７５Ｈ／Ｒからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのような変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’スブチリシンプロテアーゼ変異体：Ｙ２１Ｈ−Ｄ２５９Ｇ，Ａ１３３Ｖ−Ｄ２５９Ｎ，Ｉ７９Ｖ−Ｑ２１７Ｈ，Ｓ１８Ｋ−Ｖ２０３Ｉ，Ｔ１５８Ａ−Ｄ２５９Ｐ，Ｎ６１Ｋ−Ｎ２５２Ｋ，Ｋ４３Ｎ−Ｑ２１７Ｒ，Ｔ１５８Ａ−Ｄ２５９Ｐ，Ｑ２０６Ｒ−Ｓ２６０Ｐ，Ａ１３３Ｖ−Ｄ２５９Ｎ，Ｖ１９８Ｌ−Ｄ２５９Ｇ，Ｎ６１Ｋ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１６１Ｅ−Ｓ２６０Ｔ，Ｇ１６０Ａ−Ｄ２５９Ｇ，Ｋ４３Ｎ−Ｑ２１７Ｒ，Ａ１Ｙ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ２００Ｔ−Ｈ２２６Ｌ，Ｑ２１７Ｒ−Ｔ２４４Ａ，Ｓ２６０Ｐ−Ｑ２７５Ｒ，Ｑ２０６Ｒ−Ｓ２６０Ｐ，Ｔ１５８Ｉ−Ｄ２５９Ｎ，Ｑ２１７Ｒ−Ｔ２４４Ａ，Ｌ７５Ｉ−Ｎ７６Ｄ，Ｓ１６１Ｅ−Ｑ１８５Ｈ，Ｙ２１Ｈ−Ｓ３７Ｅ，Ｓ２４９Ｒ−Ｑ２７５Ｒ，Ｔ１５８Ｉ−Ｄ２５９Ｎ，Ｙ２１Ｈ−Ｓ３７Ｅ，Ｎ７６Ｔ−Ｎ２１２Ｄ，Ｓ２６０Ｐ−Ｑ２７５Ｌ，Ｇ１３１Ｓ−Ｋ２６５Ｎ，Ｖ４Ａ−Ｓ２４９Ｎ，Ｎ２５Ｄ−Ｑ１８５Ｒ，Ｋ４３Ｒ−Ｎ７６Ｓ，Ｓ１８３Ｄ−Ｑ２０６Ｒ，Ｑ１０Ｒ−Ｑ２７５Ｋ，Ｋ４３Ｎ−Ｓ１６３Ｔ，Ｑ１０Ｒ−Ｑ２７５Ｋ，Ｎ２５Ｄ−Ｖ２６Ａ，Ｇ１３１Ｓ−Ｋ２６５Ｎ，Ｓ２６０Ｐ−Ｑ２７５Ｌ，Ｋ１４１Ｉ−Ｓ２４８Ｎ，Ｌ１６Ｑ−Ｑ２１７Ｈ，Ｓ２４９Ｒ−Ｑ２７５Ｒ，Ｋ２７Ｒ−Ｎ２６９Ｔ，Ｐ２１０Ｓ−Ｎ２１２Ｄ，Ｌ７５Ｉ−Ｎ７６Ｄ，Ｓ１８３Ｄ−Ｑ２０６Ｒ，Ｎ１１８Ｇ−Ｖ１２１Ａ，Ｇ２１５Ｄ−Ｄ２５９Ｖ，Ｎ７６Ｔ−Ｎ２１２Ｄ，Ｋ２７Ｒ−Ｎ２６９Ｔ，Ｎ６２Ｙ−Ｇ９７Ｄ，Ｖ４Ｅ−Ｓ２６０Ｐ，Ｇ２１５Ｄ−Ｄ２５９Ｖ，Ｋ２７Ｅ−Ｙ９１Ｆ，Ｙ６Ｄ−Ｔ５５Ａ，Ｎ７７Ｄ−Ｎ２５２Ｔ，Ｖ４Ｅ−Ｓ２６０Ｐ，Ｙ６Ｄ−Ｔ５５Ａ，Ｎ２５Ｋ−Ｈ２３８Ｒ，Ｖ４４Ａ−Ｑ２０６Ｈ，Ｌ１６Ｑ−Ｑ２１７Ｈ，Ｖ４４Ａ−Ｑ２０６Ｒ，Ｖ４４Ａ−Ｑ２０６Ｈ，及びＳ３７Ｐ−Ｓ２６０Ｆ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、又は９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組の酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのような変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ｙ２１Ｈ−Ｄ２５９Ｇ，Ｓ１８３Ｔ−Ｓ２４９Ｒ，Ｎ６１Ｄ−Ｑ２０６Ｒ，Ｙ２６２Ｎ−Ｑ２７５Ｒ，Ｋ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｓ，Ａ１３３Ｖ−Ｄ２５９Ｎ，及びＩ０７９Ｖ−Ｑ２１７Ｈ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３、及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのような変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、スブチリシンプロテアーゼ変異体も提供され、この変異体は配列番号２又は配列番号６に対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、この変異体は、Ｘ０２１Ｈ，Ｘ０４３Ｒ，Ｘ０６１Ｄ，Ｘ０７６Ｓ，Ｘ０７９Ｖ，Ｘ１３３Ｖ，Ｘ１８３Ｔ，Ｘ２０６Ｒ，Ｘ２１７Ｈ，Ｘ２４９Ｒ，Ｘ２５９Ｇ／Ｎ、Ｘ２６２Ｎ，及びＸ２７５Ｒ，の群から選択される少なくとも１つの置換を含み、選択的に、Ｙ０２１Ｈ，Ｋ０４３Ｒ，Ｎ０６１Ｄ，Ｎ０７６Ｓ，Ｉ０７９Ｖ，Ａ１３３Ｖ，Ｓ１８３Ｔ，Ｑ２０６Ｒ，Ｑ２１７Ｈ，Ｓ２４９Ｒ，Ｄ２５９Ｇ／Ｎ、Ｙ２６２Ｎ，及びＱ２７５Ｒ，の群から選択される少なくとも１つの置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’よりもＰＩ値が大きい。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのような変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ｋ１７０Ｒ−Ｄ２５９Ｇ，Ｓ１８Ｋ−Ｖ２０３Ｉ，Ｙ６Ｆ−Ｓ２４９Ｃ，Ｑ１９Ａ−Ｎ１０９Ｓ，Ｈ１７Ｌ−Ｑ１９Ａ，Ｑ１９Ｒ−Ｑ１８５Ｒ，Ｓ１８Ｙ−Ｖ２０３Ａ，Ｎ６１Ｄ−Ｑ２０６Ｒ，Ｓ１６１Ｅ−Ｓ２６０Ｔ，Ｓ１８Ｋ−Ｖ２０３Ｉ，Ｖ４Ａ−Ｔ５５Ａ，Ｎ２５２Ｓ−Ｌ２５７Ｈ，Ｓ２４９Ｒ−Ｙ２６２Ｈ，Ｎ６１Ｌ−Ｑ２０６Ｈ，Ｎ１８４Ｙ−Ｙ２６２Ｎ，Ｑ１９Ｒ−Ｎ２５Ｄ，Ｓ２４９Ｒ−Ｙ２６２Ｈ，Ａ７４Ｓ−Ｐ１２９Ｑ，Ｔ１５８Ａ−Ｄ２５９Ｐ，Ｈ１７Ｌ−Ｑ１９Ａ，Ｋ２７Ｒ−Ｄ１２０Ｈ，Ｖ４Ａ−Ｔ５５Ａ，Ｎ６１Ｋ−Ｎ２５２Ｋ，Ｙ２１Ｈ−Ｎ２５２Ｈ，Ｋ２７Ｒ−Ｎ２６９Ｄ，Ｋ４３Ｎ−Ｑ２１７Ｒ，Ｔ１５８Ａ−Ｄ２５９Ｐ，Ｑ２０６Ｒ−Ｓ２６０Ｐ，Ｋ２７Ｒ−Ｎ２６９Ｄ，Ａ９８Ｔ−Ｔ１５８Ａ，Ｉ７９Ｖ−Ｑ２１７Ｈ，Ｓ９Ｌ−Ｎ２１８Ｓ，Ｖ４Ａ−Ｙ６Ｆ，Ｓ１６１Ｐ−Ｔ２５３Ａ，Ｖ２０３Ａ−Ｑ２１７Ｒ，Ｔ２２Ｓ−Ｔ２４２Ｓ，Ｎ７６Ｐ−Ｎ２１２Ｓ，Ａ１３３Ｖ−Ｄ２５９Ｎ，Ｓ３７Ｔ−Ｓ２６０Ｐ，Ｔ５５Ａ−Ｖ１４７Ａ，Ｖ１９８Ｌ−Ｄ２５９Ｇ，Ｑ１９Ｒ−Ｑ１８５Ｒ，Ｖ４Ａ−Ｙ６Ｆ，Ｑ１９Ａ−Ｎ１０９Ｓ，Ｙ２６２Ｎ−Ｑ２７５Ｒ，Ｇ１６０Ｒ−Ｔ２４４Ａ，Ｑ１９Ｒ−Ｎ２５Ｄ，Ｎ２５Ｄ−Ｑ１８５Ｒ，Ｎ６１Ｋ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１６１Ｅ−Ｓ２６０Ｔ，Ａ９８Ｔ−Ｔ１５８Ａ，Ｎ６１Ｌ−Ｑ２０６Ｈ，Ｇ２１１Ｖ−Ｔ２４４Ａ，Ｓ９Ｌ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１４４Ｈ−Ｔ２４４Ａ，Ａ１４４Ｈ−Ｔ２４４Ａ，Ｓ１８Ｙ−Ｖ２０３Ａ，Ｙ２１Ｈ−Ｎ２５２Ｈ，Ａ７４Ｓ−Ｐ１２９Ｑ，Ｇ１６０Ａ−Ｄ２５９Ｇ，Ｋ４３Ｎ−Ｑ２１７Ｒ，Ａ１Ｙ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ１Ｙ−Ｑ２７５Ｒ，Ａ２００Ｔ−Ｈ２２６Ｌ，Ｑ２１７Ｒ−Ｔ２４４Ａ，Ｓ２６０Ｐ−Ｑ２７５Ｒ，Ｑ２０６Ｒ−Ｓ２６０Ｐ，Ｋ１４１Ｉ−Ｓ２４８Ｎ，Ｓ１８３Ｔ−Ｒ１８６Ｋ，Ｔ１５８Ｉ−Ｄ２５９Ｎ，Ｓ３７Ｔ−Ｓ２６０Ｐ，Ｋ２７Ｒ−Ｄ１２０Ｈ，Ｔ２２Ｓ−Ｔ２４２Ｓ，Ｑ２１７Ｒ−Ｔ２４４Ａ，Ｓ１６１Ｅ−Ｑ１８５Ｈ，Ｐ１２９Ｓ−Ｋ１３６Ｒ，Ｇ２１１Ｖ−Ｔ２４４Ａ，Ｎ７６Ｐ−Ｎ２１２Ｓ，Ｌ７５Ｉ−Ｎ７６Ｄ，Ｓ１６１Ｅ−Ｑ１８５Ｈ，Ｙ２１Ｈ−Ｓ３７Ｅ，Ｓ２４９Ｒ−Ｑ２７５Ｒ，Ｇ１６０Ａ−Ｄ２５９Ｇ，Ｋ４３Ｎ−Ｓ１６３Ｔ，Ｔ１５８Ｉ−Ｄ２５９Ｎ，Ｙ２１Ｈ−Ｓ３７Ｅ，Ｓ３７Ｇ−Ｑ２７５Ｈ，Ｓ１６１Ｐ−Ｔ２５３Ａ，Ｎ７６Ｔ−Ｎ２１２Ｄ，Ｓ２６０Ｐ−Ｑ２７５Ｌ，Ｙ６Ｆ−Ｓ２４９Ｃ，Ｎ１８４Ｙ−Ｙ２６２Ｎ，Ｇ１３１Ｓ−Ｋ２６５Ｎ，Ｖ４Ａ−Ｓ２４９Ｎ，Ｎ２５Ｄ−Ｑ１８５Ｒ，Ｎ２５２Ｓ−Ｌ２５７Ｈ，Ｋ４３Ｒ−Ｎ７６Ｓ，Ｓ１８３Ｄ−Ｑ２０６Ｒ，Ｇ１６０Ｒ−Ｔ２４４Ａ，Ｑ１０Ｒ−Ｑ２７５Ｋ，Ｓ３７Ｇ−Ｑ２７５Ｈ，Ｋ４３Ｎ−Ｓ１６３Ｔ，Ｑ１０Ｒ−Ｑ２７５Ｋ，Ｎ２５Ｄ−Ｖ２６Ａ，Ｐ１２９Ｓ−Ｋ１３６Ｒ，Ｇ１３１Ｓ−Ｋ２６５Ｎ，Ｓ２６０Ｐ−Ｑ２７５Ｌ，Ｋ１４１Ｉ−Ｓ２４８Ｎ，Ｔ２２Ｓ−Ｇ１６６Ｖ，Ｎ６２Ｙ−Ｔ２４４Ａ，Ｌ１６Ｑ−Ｑ２１７Ｈ，Ｓ２４９Ｒ−Ｑ２７５Ｒ，Ｓ２６０Ｐ−Ｑ２７５Ｒ，Ｋ２７Ｒ−Ｎ２６９Ｔ，Ｐ２１０Ｓ−Ｎ２１２Ｄ，Ｌ７５Ｉ−Ｎ７６Ｄ，Ｓ１８３Ｄ−Ｑ２０６Ｒ，Ｎ１１８Ｇ−Ｖ１２１Ａ，Ｇ２１５Ｄ−Ｄ２５９Ｖ，Ｎ７６Ｔ−Ｎ２１２Ｄ，Ｖ４Ａ−Ｓ２４９Ｎ，Ｋ２７Ｒ−Ｎ２６９Ｔ，Ｇ１６６Ｖ−Ｓ１８３Ｔ，Ｎ６２Ｙ−Ｇ９７Ｄ，Ｖ４Ｅ−Ｓ２６０Ｐ，Ｇ２１５Ｄ−Ｄ２５９Ｖ，Ｋ２７Ｅ−Ｙ９１Ｆ，Ｙ２１Ｈ−Ｄ２５９Ｒ，Ｙ６Ｄ−Ｔ５５Ａ，Ｎ７７Ｄ−Ｎ２５２Ｔ，Ｖ４Ｅ−Ｓ２６０Ｐ，Ｙ６Ｄ−Ｔ５５Ａ，Ｎ７７Ｄ−Ｎ２５２Ｔ，Ｙ２１Ｈ−Ｄ２５９Ｒ，Ｎ２５Ｋ−Ｈ２３８Ｒ，Ｎ７７Ｄ−Ｎ２５２Ｄ，Ｖ４４Ａ−Ｑ２０６Ｈ，Ｌ１６Ｑ−Ｑ２１７Ｈ，Ｖ７２Ｆ−Ｌ７５Ｉ，Ｓ３７Ｐ−Ｓ２６０Ｆ，Ｖ７２Ｆ−Ｌ７５Ｉ，Ｎ７７Ｄ−Ｎ２５２Ｄ，Ｖ４４Ａ−Ｑ２０６Ｒ，Ｓ１６３Ｔ−Ｑ２４５Ｌ，Ｖ４４Ａ−Ｑ２０６Ｈ，Ｖ４４Ａ−Ｑ２０６Ｒ，Ｓ３７Ｐ−Ｓ２６０Ｆ，Ｇ２１５Ｒ−Ｄ２５９Ｒ，Ｖ４４Ａ−Ｑ２０６Ｋ，及びＶ４４Ａ−Ｑ２０６Ｋ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上１．０満のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上１．０以下のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組の酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのような変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
（実施例２２）
更なるＢＰＮ’−ｖ３６ポリペプチド変異体のクリーニング性能
以下のＰＮ’−ｖ３６変異体は、クローニング用テンプレートＤＮＡ（親プラスミド）として提供されているＢＰＮ’発現カセットを含有するｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’−ｖ３６を用いて、ＤＮＡ２．０（Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＣＡ）により合成された：Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｍ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｍ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｍ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ−Ｓ２２４Ａ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０１Ｑ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０１Ｑ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｓ−Ｓ１３０Ｔ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｓ−Ｓ１３０Ｔ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｉ３１Ｌ−Ｓ３３Ｔ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１Ｇ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１Ｇ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｉ３１Ｌ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ｑ，Ｓ３３Ｔ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ｑ，Ａ１Ｇ−Ｉ３１Ｌ−Ｓ３３Ｔ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ｑ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ｑ，及びＡ１Ｇ−Ｉ３１Ｌ−Ｓ３３Ｔ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ｑ。
パートＩの実施例１１に記載のようにタンパク質を発現させるために、変異体を増殖させた。パートＩの実施例１に記載のように、これらの変異体の性能を、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、並びにＡＡＰＦアッセイにおいて、試験した。結果は以下に提供される。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｍ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｍ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０１Ｑ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｓ−Ｓ１３０Ｔ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，及びＡ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’アミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３、及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのような変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、スブチリシンプロテアーゼ変異体も提供され、この変異体は、配列番号２又は配列番号６に対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、この変異体は、Ｘ６１Ｇ／Ｐ／Ｓ、Ｘ６３Ｇ，Ｘ８８Ｔ，Ｘ１０１Ｑ，Ｘ１０９Ｇ／Ｍ／Ｑ／Ｓ、Ｘ１１４Ｓ，Ｘ１１６Ｔ，Ｘ１２８Ｓ，Ｘ１２９Ｓ，Ｘ１３０Ｔ，Ｘ１５８Ｓ，Ｘ１８３Ｌ／Ｖ、Ｘ２２４Ａ，Ｘ２４３Ｖ，Ｘ２４８Ａ，及びＸ２５６Ｒ，の群から選択される少なくとも１つの置換を含む少なくとも１つの置換を含み、選択的に、Ｎ６１Ｇ／Ｐ／Ｓ、Ｓ６３Ｇ，Ａ８８Ｔ，Ｎ１０１Ｑ，Ｎ１０９Ｇ／Ｍ／Ｑ／Ｓ、Ａ１１４Ｓ，Ａ１１６Ｔ，Ａ１２８Ｓ，Ｐ１２９Ｓ，Ｓ１３０Ｔ，Ｔ１５８Ｓ，Ｓ１８３Ｌ／Ｖ、Ｓ２２４Ａ，Ｎ２４３Ｖ，Ｓ２４８Ａ，及びＫ２５６Ｒ，の群から選択される少なくとも１つの置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、ＢＰＮ’（配列番号２）、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、かつ本アッセイにおいて、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６よりもＰＩ値が大きい。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのような変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ｇ２４Ｓ−Ｇ５３Ｓ−Ｎ７８Ｓ−Ｇ９７Ａ−Ｎ１０１Ｓ−Ａ１２８Ｓ，Ｇ２４Ｓ−Ｇ５３Ｓ−Ｎ７８Ｓ−Ｇ９７Ａ−Ｎ１０１Ｓ，Ｓ３３Ｔ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１Ｇ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ｑ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ｑ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ７６Ｄ，Ｎ１０９Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０１Ｑ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｓ−Ｓ１３０Ｔ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｍ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ６３Ｇ−Ｎ７６Ｄ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，及びＳ３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．９以上１．０以下のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列の位置と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．９以上１．０以下のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２又は配列番号６の配列と少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択された少なくとも１組の酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのような変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ｉ３１Ｌ−Ｓ３３Ｔ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１Ｇ−Ｉ３１Ｌ−Ｓ３３Ｔ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ｑ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１Ｇ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ｑ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，及びＳ３３Ｔ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組の酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、このような変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ｓ３３Ｔ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１Ｇ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ｑ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ｑ，Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｍ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｍ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ６３Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０１Ｑ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｓ−Ｓ１３０Ｔ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，及びＡ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３、及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜５のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのような変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、スブチリシンプロテアーゼ変異体も提供され、この変異体は、配列番号２又は配列番号６に対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、この変異体は、Ｘ１Ｇ，Ｘ３３Ｔ，Ｘ５５Ｐ，Ｘ６１Ｇ／Ｐ／Ｓ、Ｘ６３Ｇ，Ｘ７６Ｄ，Ｘ８８Ｔ，Ｘ１０１Ｑ，Ｘ１０９Ｇ／Ｍ／Ｑ／Ｓ、Ｘ１１４Ｓ，Ｘ１１６Ｔ，Ｘ１２８Ｓ，Ｘ１２９Ｓ，Ｘ１３０Ｔ，Ｘ１３１Ｈ，Ｘ１５８Ｓ，Ｘ１６９Ａ，Ｘ１８３Ｌ／Ｖ、Ｘ２１８Ｓ，Ｘ２２４Ａ，Ｘ２４３Ｖ，Ｘ２４８Ａ／Ｎ、Ｘ２４９Ｑ，Ｘ２５６Ｒ，の群から選択される少なくとも１つの置換を含む少なくとも１つの置換を含み、選択的に、Ａ１Ｇ，Ｓ３３Ｔ，Ｔ５５Ｐ，Ｎ６１Ｇ／Ｐ／Ｓ、Ｓ６３Ｇ，Ｎ７６Ｄ，Ａ８８Ｔ，Ｎ１０１Ｑ，Ｎ１０９Ｇ／Ｍ／Ｑ／Ｓ、Ａ１１４Ｓ，Ａ１１６Ｔ，Ａ１２８Ｓ，Ｐ１２９Ｓ，Ｓ１３０Ｔ，Ｇ１３１Ｈ，Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１６９Ａ，Ｓ１８３Ｌ／Ｖ、Ｎ２１８Ｓ，Ｓ２２４Ａ，Ｎ２４３Ｖ，Ｓ２４８Ａ／Ｎ、Ｓ２４９Ｑ，Ｋ２５６Ｒ，の群から選択される少なくとも１つの置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３、及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６よりもＰＩ値が大きい。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのような変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：置換Ｓ３３Ｔ−Ｎ７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ及びＳ０６３Ｇ−Ｎ７６Ｄ，からなる群から選択されるアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４の卵ＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上１．０以下のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上１．０以下のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は配列番号２又は配列番号６に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、Ｓ３３Ｔ−Ｎ７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｎ７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，及びＳ０６３Ｇ−Ｎ０７６Ｄ，からなる群から選択されるアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのような変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ｇ２４Ｓ−Ｇ５３Ｓ−Ｎ７８Ｓ−Ｇ９７Ａ−Ｎ１０１Ｓ−Ａ１２８Ｓ，Ｉ３１Ｌ−Ｓ３３Ｔ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ１Ｇ−Ｉ３１Ｌ−Ｓ３３Ｔ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ｑ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１Ｇ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ｑ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１Ｇ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｔ５５Ｐ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ｑ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ｎ−Ｋ２５６Ｒ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ７６Ｄ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ｓ３３Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ，Ａ１Ｇ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４９Ｑ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｇ−Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１４Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｓ２４８Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ７６Ｄ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｍ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ１８３Ｌ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ７６Ｄ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｓ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｍ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０１Ｑ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｓ−Ｓ１３０Ｔ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｍ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ６３Ｇ−Ａ１２８Ｓ，Ｎ１０９Ｓ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ６１Ｓ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０１Ｑ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ−Ｔ１５８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１１６Ｔ，Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ，Ａ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｇ，Ｎ１０９Ｇ−Ｋ２５６Ｒ，Ｎ６１Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ６１Ｐ−Ｓ６３Ｇ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１３１Ｈ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｇ１６９Ａ−Ｎ２１８Ｓ−Ｎ２４３Ｖ，Ｓ３３Ｔ−Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｎ２１８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，Ｎ１０９Ｇ−Ａ１２８Ｓ−Ｐ１２９Ｓ−Ｓ１３０Ｔ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，及びＡ８８Ｔ−Ｎ１０９Ｑ−Ａ１１６Ｔ−Ａ１２８Ｓ−Ｓ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｖ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ＡＡＰＦタンパク質分解アッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０超〜約１０、１．０超〜約８、又は１．０超〜約５のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３、及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６よりもＰＩ値が大きい。本発明は、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’（配列番号２）と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、ＢＰＮ’−ｖ３と比較して１．０超〜５のＰＩ値を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、この変異体は配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのような変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
ＡＡＰＦタンパク質分解アッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して１．０超〜約５のＰＩ値を有する、スブチリシンプロテアーゼ変異体も提供され、この変異体は、配列番号２又は配列番号６に対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、この変異体は、Ｘ１Ｇ，Ｘ３１Ｌ，Ｘ３３Ｔ，Ｘ５５Ｐ，Ｘ６１Ｇ／Ｐ／Ｓ、Ｘ６３Ｇ，Ｘ７６Ｄ，Ｘ８８Ｔ，Ｘ１０１Ｑ，Ｘ１０９Ｇ／Ｍ／Ｑ／Ｓ、Ｘ１１４Ｓ，Ｘ１１６Ｔ，Ｘ１２８Ｓ，Ｘ１２９Ｓ，Ｘ１３０Ｔ，Ｘ１３１Ｈ，Ｘ１５８Ｓ，Ｘ１６９Ａ，Ｘ１８３Ｌ／Ｖ、Ｘ２１８Ｓ，Ｘ２２４Ａ，Ｘ２４３Ｖ，Ｘ２４８Ａ／Ｎ、Ｘ２４９Ｑ，及びＸ２５６Ｒ，の群から選択される少なくとも１つの置換を含む少なくとも１つの置換を含み、選択的に、Ａ１Ｇ，Ｉ３１Ｌ，Ｓ３３Ｔ，Ｔ５５Ｐ，Ｎ６１Ｇ／Ｐ／Ｓ、Ｓ６３Ｇ，Ｎ７６Ｄ，Ａ８８Ｔ，Ｎ１０１Ｑ，Ｎ１０９Ｇ／Ｍ／Ｑ／Ｓ、Ａ１１４Ｓ，Ａ１１６Ｔ，Ａ１２８Ｓ，Ｐ１２９Ｓ，Ｓ１３０Ｔ，Ｇ１３１Ｈ，Ｔ１５８Ｓ，Ｇ１６９Ａ，Ｓ１８３Ｌ／Ｖ、Ｎ２１８Ｓ，Ｓ２２４Ａ，Ｎ２４３Ｖ，Ｓ２４８Ａ／Ｎ、Ｓ２４９Ｑ，及びＫ２５６Ｒ，の群から選択される少なくとも１つの置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体は、ＢＰＮ’（配列番号２）、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６と比較して向上したタンパク質分解活性を有し、本アッセイにおいて、ＢＰＮ’、ＢＰＮ’−ｖ３及びＢＰＮ’−ｖ３６よりもＰＩ値が大きい。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのような変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：アミノ酸置換Ｇ２４Ｓ−Ｇ５３Ｓ−Ｎ７８Ｓ−Ｇ９７Ａ−Ｎ１０１Ｓ又はＳ０６３Ｇ−Ｎ７６Ｄ，を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ＡＡＰＦタンパク質分解アッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上１．０以下のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上１．０以下のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、置換Ｇ２４Ｓ−Ｇ５３Ｓ−Ｎ７８Ｓ−Ｇ９７Ａ−Ｎ１０１Ｓ又はＳ０６３Ｇ−Ｎ７６Ｄ，を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのような変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
（実施例２３）
ＢＰＮ’−ｖ３６ポリペプチドに基づくコンビナトリアルライブラリ由来の、ポリペプチドＢＰＮ’−ｖ３６のポリペプチド変異体のクリーニング性能
２つの別個のコンビナトリアルライブラリ（ＡＪ１及びＡＪ２）は、ＤＮＡ２．０（Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＣＡ）により合成されたものであり、個々のライゲーション反応物として供給された。ＢＰＮ’発現カセットを含有しているｐＨＰＬＴ−ＢＰＮ’−ｖ３６プラスミド（図４）をライブラリ構築のためのテンプレートＤＮＡ（親プラスミド）として使用した。可能なアミノ酸位置、及び各ライブラリの置換の一覧を表２３−１に示す。各ライブラリについてのライゲーション反応物を用いて枯草菌（B. subtilis）を形質転換し、ライブラリ変異体は、実施例１１に記載のようにタンパク質発現のために増殖させた。パートＩの実施例１に記載のようにｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおける性能について変異体を試験した。
Figure 2016028571
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ｇ０２４Ｓ−Ｇ０５３Ｓ−Ｎ０７８Ｓ−Ｇ０９７Ａ−Ｎ１０１Ｓ（すなわち、ＢＰＮ’−ｖ３）、Ｇ０２４Ｓ−Ｇ０５３Ｓ−Ｎ０７８Ｓ−Ｇ０９７Ａ−Ｎ１０１Ｓ−Ａ１２８Ｓ（すなわち、ＢＰＮ’−ｖ１２）、Ｎ０６２Ｌ，Ｎ０６２Ｌ−Ｓ０６３Ｇ，Ｎ０６２Ｓ，Ｎ０６２Ｓ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２１７Ｌ，Ｎ０６２Ｓ−Ｓ０６３Ｌ−Ｑ２１７Ｌ，Ｎ０６２Ｓ−Ｓ０６３Ｎ，Ｎ０６２Ｓ−Ｓ０６３Ｒ，Ｑ２１７Ｅ，Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２１７Ｌ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２１７Ｌ−Ｍ２２２Ｓ，Ｓ０６３Ｌ−Ｑ２１７Ｌ，Ｓ０６３Ｎ，Ｓ０６３Ｎ−Ｑ２１７Ｌ，Ｄ０９９Ｎ−Ｋ１４１Ｙ−Ｋ２１３Ｑ，Ｄ０９９Ｎ−Ｋ１４１Ｙ−Ｋ２５６Ｑ，Ｋ０４３Ｔ，Ｋ０４３Ｔ−Ｋ１４１Ｙ−Ｅ１５６Ｑ，Ｎ０６２Ｌ−Ｑ２１７Ｅ，Ｎ０６２Ｌ−Ｑ２１７Ｌ，Ｎ０６２Ｌ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２１７Ｅ，Ｎ０６２Ｌ−Ｓ０６３Ｌ，Ｎ０６２Ｌ−Ｓ０６３Ｎ−Ｑ２１７Ｌ，Ｎ０６２Ｓ−Ｑ２１７Ｌ，Ｎ０６２Ｓ−Ｓ０６３Ｇ，Ｎ０６２Ｓ−Ｓ０６３Ｌ，Ｎ０６２Ｓ−Ｓ０６３Ｎ−Ｑ２１７Ｌ，Ｎ０６２Ｓ−Ｓ０６３Ｒ−Ｑ２１７Ｅ，Ｑ２１７Ｌ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２１７Ｅ，Ｓ０６３Ｎ−Ｑ２１７Ｅ，Ｓ０６３Ｒ，Ｓ０６３Ｒ−Ｑ２１７Ｅ，Ｓ０６３Ｒ−Ｑ２１７Ｌ，）、Ｄ０９９Ｎ−Ｋ１４１Ｙ−Ｋ２１３Ｑ，Ｄ０９９Ｎ−Ｋ１４１Ｙ−Ｋ２５６Ｑ，Ｋ０４３Ｔ，Ｋ０４３Ｔ−Ｋ１４１Ｙ−Ｅ１５６Ｑ，Ｎ０６２Ｌ−Ｑ２１７Ｅ，Ｎ０６２Ｌ−Ｑ２１７Ｌ，Ｎ０６２Ｌ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２１７Ｅ，Ｎ０６２Ｌ−Ｓ０６３Ｌ，Ｎ０６２Ｓ−Ｑ２１７Ｌ，Ｎ０６２Ｓ−Ｓ０６３Ｇ，Ｎ０６２Ｓ−Ｓ０６３Ｌ，Ｎ０６２Ｓ−Ｓ０６３Ｎ−Ｑ２１７Ｌ，Ｑ２１７Ｌ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２１７Ｅ，Ｓ０６３Ｎ−Ｑ２１７Ｅ，Ｓ０６３Ｒ，Ｓ０６３Ｒ−Ｑ２１７Ｅ，及びＳ０６３Ｒ−Ｑ２１７Ｌ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上１．０未満のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上１．０以下のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％又は９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組の酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのような変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。配列番号６の位置２４のＧ、位置５３のＧ、位置７８のＧ及び位置１０１のＮが配列番号６の位置２４、５３、７８及び１０１の各々でＳに置換されているので、アミノ酸置換Ｇ０２４Ｓ−Ｇ０５３Ｓ−Ｎ０７８Ｓ−Ｇ０９７Ａ−Ｎ１０１Ｓを含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）であるプロテアーゼ変異体がＢＰＮ’−ｖ３（配列番号４）であることに留意されたい。加えて、配列番号６の位置９７のＧは、Ａで置換されている。したがって、得られる配列は、配列番号４である。
以下のＢＰＮ’−ｖ３６変異体：Ｄ０９９Ｎ，Ｋ１４１Ｙ−Ｅ１５６Ｑ，Ｎ０６２Ｌ−Ｓ０６３Ｌ−Ｑ２１７Ｌ，Ｎ０６２Ｌ−Ｓ０６３Ｎ，Ｎ０６２Ｌ−Ｓ０６３Ｎ−Ｑ２１７Ｅ，Ｎ０６２Ｌ−Ｓ０６３Ｒ，Ｎ０６２Ｌ−Ｓ０６３Ｒ−Ｑ２１７Ｌ，Ｎ０６２Ｓ−Ｑ２１７Ｅ，Ｎ０６２Ｓ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２１７Ｅ，Ｎ０６２Ｓ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２１７Ｒ，Ｎ０６２Ｓ−Ｓ０６３Ｎ−Ｑ２１７Ｒ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ１２５Ａ，Ｄ０６０Ｇ−Ｑ２１７Ｌ，Ｄ１２０Ｎ−Ｋ１４１Ｙ−Ｋ２１３Ｑ，Ｋ０４３Ｔ−Ｄ０９９Ｎ−Ｄ１２０Ｎ−Ｋ１４１Ｙ，Ｋ０４３Ｔ−Ｄ０９９Ｎ−Ｋ１４１Ｙ−Ｋ２５６Ｑ，Ｋ０４３Ｔ−Ｋ２３７Ａ，Ｎ０６２Ｌ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２１７Ｒ，Ｎ０６２Ｌ−Ｓ０６３Ｇ−Ｓ１２５Ａ，Ｎ０６２Ｌ−Ｓ０６３Ｌ−Ｑ２１７Ｅ，Ｎ０６２Ｌ−Ｓ０６３Ｎ−Ｓ１２５Ａ−Ｑ２１７Ｌ，Ｎ０６２Ｓ−Ｑ２１７Ｒ，Ｎ０６２Ｓ−Ｓ０６３Ｌ−Ｑ２１７Ｅ，Ｎ０６２Ｓ−Ｓ０６３Ｒ−Ｑ２１７Ｌ，Ｓ０６３Ｇ−Ｍ２２２Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２１７Ｒ，Ｄ１２０Ｎ−Ｅ１５６Ｑ−Ｋ２５６Ｑ，Ｋ１４１Ｙ−Ｄ１９７Ｎ，Ｎ０６２Ｌ−Ｑ２１７Ｒ，Ｎ０６２Ｌ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２１７Ｌ−Ｍ２２２Ｓ，Ｎ０６２Ｌ−Ｓ０６３Ｌ−Ｑ２１７Ｒ，Ｎ０６２Ｌ−Ｓ０６３Ｎ−Ｑ２１７Ｒ，Ｎ０６２Ｓ−Ｑ２１７Ｇ，Ｎ０６２Ｓ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２１７Ｇ，Ｎ０６２Ｓ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２１７Ｌ−Ｍ２２２Ｌ，Ｎ０６２Ｓ−Ｓ０６３Ｇ−Ｓ１２５Ａ−Ｑ２１７Ｌ，Ｎ０６２Ｓ−Ｓ０６３Ｎ−Ｑ２１７Ｅ，Ｑ２１７Ｇ，Ｓ０３３Ｇ−Ｎ０６２Ｓ−Ｓ０６３Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２１７Ｇ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２１７Ｌ−Ｍ２２２Ｌ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ１２５Ａ−Ｑ２１７Ｒ，Ｓ０６３Ｌ−Ｑ２１７Ｒ，Ｓ０６３Ｎ−Ｍ２２２Ｓ，Ｓ０６３Ｎ−Ｑ２１７Ｒ，Ｓ０６３Ｎ−Ｓ１２５Ａ−Ｑ２１７Ｌ，Ｓ０６３Ｒ−Ｑ２１７Ｒ，Ｓ０６３Ｒ−Ｓ１２５Ａ−Ｑ２１７Ｌ，Ｄ０９９Ｎ−Ｅ１５６Ｑ−Ｋ２５６Ｑ，Ｅ１５６Ｑ，Ｋ０１２Ｔ−Ｄ０９９Ｎ−Ｋ２１３Ｑ，Ｋ０１２Ｔ−Ｋ２５６Ｑ，Ｋ０４３Ｔ−Ｄ０９９Ｎ−Ｋ１４１Ｙ−Ｋ２１３Ｑ，Ｋ０４３Ｔ−Ｅ１５６Ｑ，Ｋ１４１Ｙ−Ｋ２１３Ｑ，Ｎ０６２Ｌ−Ｑ２１７Ｇ，Ｎ０６２Ｌ−Ｑ２１７Ｌ−Ｍ２２２Ｌ，Ｎ０６２Ｌ−Ｑ２１７Ｌ−Ｍ２２２Ｓ，Ｎ０６２Ｌ−Ｓ０６３Ｇ−Ｍ２２２Ｓ，Ｎ０６２Ｌ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２１７Ｌ−Ｍ２２２Ｌ，Ｎ０６２Ｌ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２１７Ｒ−Ｍ２２２Ｓ，Ｎ０６２Ｌ−Ｓ０６３Ｎ−Ｑ２１７Ｌ−Ｍ２２２Ｓ，Ｎ０６２Ｌ−Ｓ０６３Ｎ−Ｓ１２５Ａ，Ｎ０６２Ｌ−Ｓ０６３Ｒ−Ｓ１２５Ａ，Ｎ０６２Ｌ−Ｓ１２５Ａ，Ｎ０６２Ｓ−Ｓ０６３Ｇ−Ｍ２２２Ｓ，Ｎ０６２Ｓ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２１７Ｇ−Ｍ２２２Ｓ，Ｎ０６２Ｓ−Ｓ０６３Ｇ−Ｓ１２５Ａ，Ｎ０６２Ｓ−Ｓ０６３Ｎ−Ｑ２１７Ｌ−Ｍ２２２Ｌ，Ｎ０６２Ｓ−Ｓ０６３Ｎ−Ｓ１２５Ａ−Ｑ２１７Ｌ，Ｎ０６２Ｓ−Ｓ０６３Ｒ−Ｑ２１７Ｇ，Ｎ０６２Ｓ−Ｓ０６３Ｒ−Ｑ２１７Ｌ−Ｍ２２２Ｓ，Ｑ２１７Ｇ−Ｍ２２２Ｓ，Ｑ２１７Ｌ−Ｍ２２２Ｓ，Ｑ２１７Ｒ，Ｓ０３３Ｇ−Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２１７Ｒ，Ｓ０６３Ｇ−Ｑ２１７Ｅ−Ｍ２２２Ｓ，Ｓ０６３Ｇ−Ｓ１２５Ａ−Ｑ２１７Ｇ，Ｓ０６３Ｌ−Ｑ２１７Ｅ，Ｓ０６３Ｎ−Ｑ２１７Ｇ，Ｓ０６３Ｎ−Ｑ２１７Ｇ−Ｍ２２２Ｓ，Ｓ０６３Ｎ−Ｑ２１７Ｌ−Ｍ２２２Ｓ，Ｓ０６３Ｒ−Ｑ２１７Ｌ−Ｍ２２２Ｓ，及びＳ０６３Ｒ−Ｓ１２５Ａ，からなる群から選択される少なくとも１組のアミノ酸置換を含むＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ−Ｓ０５３Ｇ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１０１Ｎ−Ｇ１２８Ａ−Ｙ２１７Ｑアミノ酸配列（配列番号６）は、ｐＨ ８及び１６℃での洗剤組成物４のＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイにおいて、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有するものと判定されたが、ここで、変異体のアミノ酸位置は配列番号２の配列と対応させることにより番号付けされる。このような変異体はタンパク質分解活性を有する。本発明は、本アッセイにおいて、タンパク質分解活性を有する、並びに／あるいは、ＢＰＮ’−ｖ３６と比較して０．５以上０．９未満のＰＩ値を有する、プロテアーゼ変異体を含み、変異体は、配列番号２又は配列番号６の配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記群から選択される少なくとも１組の酸置換を含み、ここで、変異体のアミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置と対応させることにより番号付けされる。本明細書の他箇所により詳細に記載されるような、少なくとも１つのこのような変異体を含む組成物（クリーニング組成物が挙げられるが、これに限定されない）、並びに、少なくとも１つのこのようなプロテアーゼ変異体を用いるクリーニング方法も含まれる。
パートＩＩ
シリーズＩ ＧＧ３６冷水プロテアーゼ変異体
野生型成熟バチルス・レンタス（Bacillus lentus）ＧＧ３６プロテアーゼのアミノ酸配列は以下の通りである。
ＡＱＳＶＰＷＧＩＳＲＶＱＡＰＡＡＨＮＲＧＬＴＧＳＧＶＫＶＡＶＬＤＴＧＩＳＴＨＰＤＬＮＩＲＧＧＡＳＦＶＰＧＥＰＳＴＱＤＧＮＧＨＧＴＨＶＡＧＴＩＡＡＬＮＮＳＩＧＶＬＧＶＡＰＳＡＥＬＹＡＶＫＶＬＧＡＳＧＳＧＳＶＳＳＩＡＱＧＬＥＷＡＧＮＮＧＭＨＶＡＮＬＳＬＧＳＰＳＰＳＡＴＬＥＱＡＶＮＳＡＴＳＲＧＶＬＶＶＡＡＳＧＮＳＧＡＧＳＩＳＹＰＡＲＹＡＮＡＭＡＶＧＡＴＤＱＮＮＮＲＡＳＦＳＱＹＧＡＧＬＤＩＶＡＰＧＶＮＶＱＳＴＹＰＧＳＴＹＡＳＬＮＧＴＳＭＡＴＰＨＶＡＧＡＡＡＬＶＫＱＫＮＰＳＷＳＮＶＱＩＲＮＨＬＫＮＴＡＴＳＬＧＳＴＮＬＹＧＳＧＬＶＮＡＥＡＡＴＲ（配列番号７５５）
本明細書に示すように、好適なシリーズＩ ＧＧ３６冷水プロテアーゼ変異体は、親プロテアーゼから誘導される酵素変異体を含み、上記親プロテアーゼは、配列番号７５５のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％又は１００％同一であり、上記プロテアーゼ変異体は、以下の特徴の１つ以上を有する：
ａ）少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．１〜約１０、１．１〜約８、又は更には１．１〜約５の試験方法２の性能指数、
ｂ）少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．１〜約１０、１．１〜約８、又は更には１．１〜約５の試験方法３の性能指数、
ｃ）少なくとも１．０、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０〜約１０、１．１〜約８、又は更には１．１〜約５の試験方法４の性能指数。
試験方法２、試験方法３及び試験方法４は、パートＩＩ実施例１の「試験方法」の部分に明記されている。本明細書で参照されるすべての変異は、図５に示すようなＢＰＮ’番号付けスキームを用いる。一部の態様では、本明細書で参照される変異体は、ＢＰＮ’番号付けスキームを用いて、配列番号７５５のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸配列を有する変異体を照会する。
好適なシリーズＩのＧＧ３６冷水プロテアーゼは、スブチリシンの変異体、又はスブチリシンから誘導される変異体、特に配列番号７５５のスブチリシンバチルス・レンタス（Bacillus lentus）ＧＧ３６から誘導されるものであることができ、一部の態様では、以下の変異：Ａ１Ｒ，Ｑ２Ｓ，Ｖ４Ｒ，Ｖ４Ｓ，Ｓ９Ａ，Ｒ１０Ｓ，Ｐ１４Ｋ，Ａ１６Ｓ，Ｈ１７Ｒ，Ｎ１８Ｒ，Ｇ２０Ｒ，Ｔ２２Ａ，Ｔ２２Ｒ，Ｓ２４Ｒ，Ｓ２４Ｗ，Ｇ２５Ｒ，Ｇ２５Ｖ，Ｖ２６Ｆ，Ｌ４２Ｉ，Ｎ４３Ｒ，Ｎ４３Ａ，Ｇ４６Ｒ，Ｐ５２Ｆ，Ｐ５２Ｅ，Ｐ５２Ｎ，Ｔ５７Ｒ，Ｑ５９Ａ，Ｎ６２Ｅ，Ｎ６２Ｑ，Ｖ６８Ａ，Ｖ６８Ｃ，Ｔ７１Ｇ，Ｉ７２Ｃ，Ａ７４Ｃ、Ｌ７５Ａ，Ｌ７５Ｆ，Ｌ７５Ｒ，Ｎ７６Ｄ，Ｓ７８Ｒ，Ｌ８２Ｒ，Ｐ８６Ｗ，Ｅ８９Ｐ，Ｅ８９Ｔ，Ｅ８９Ｇ，Ｅ８９Ｈ，Ｅ８９Ｉ，Ｅ８９Ｖ，Ｅ８９Ｗ，Ｙ９１Ｎ，Ｋ９４Ｎ，Ｇ１００Ｓ，Ｓ１０１Ａ，Ｓ１０１Ｎ，Ｓ１０１Ｇ，Ｓ１０１Ｄ，Ｓ１０３Ｇ，Ｓ１０３Ｎ，Ｖ１０４Ｌ，Ｖ１０４Ｉ，Ｓ１０６Ｖ，Ｓ１０６Ｇ，Ａ１０８Ｉ，Ｌ１１１Ｖ，Ｅ１１２Ｖ，Ｇ１１５Ｋ，Ｇ１１５Ｒ，Ｎ１１７Ｆ，Ｇ１１８Ｉ，Ｖ１２１Ｆ，Ｓ１２８Ｄ，Ｓ１２８Ｆ，Ｓ１２８Ｌ，Ｓ１２８Ｎ，Ｐ１２９Ｅ，Ｓ１４４Ｒ，Ｌ１４８Ｉ，Ａ１５８Ｅ、Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１６０Ｄ，Ｓ１６６Ｄ，Ｎ１８５Ｅ，Ｎ１８５Ｉ，Ｒ１８６Ｈ，Ｓ１８８Ｅ，Ｓ１８８Ｄ，Ｄ１９７Ｆ，Ｖ２０３Ｅ，Ｙ２０９Ｓ，Ｙ２０９Ｎ，Ｙ２０９Ｆ，Ｙ２０９Ｔ，Ｙ２０９Ｅ，Ｙ２０９Ｈ，Ｙ２０９Ｇ，Ｐ２１０Ｒ，Ｓ２１２Ｉ，Ｓ２１２Ｆ，Ｙ２１４Ｆ，Ａ２１５Ｎ，Ａ２１５Ｄ，Ａ２１５Ｅ，Ｌ２１７Ｅ，Ｌ２１７Ｎ，Ｔ２２４Ａ，Ａ２３０Ｅ，Ａ２３１Ｉ，Ｑ２３６Ｆ，Ｎ２３８Ｒ，Ｎ２３８Ｋ，Ｐ２３９Ｋ，Ｐ２３９Ｇ，Ｐ２３９Ｒ，Ｐ２３９Ｓ，Ｗ２４１Ｒ，Ｓ２４２Ｒ，Ｓ２４２Ｌ，Ｎ２４３Ｒ，Ｖ２４４Ｒ，Ｎ２４８Ｉ，Ｎ２４８Ｖ，Ｈ２４９Ｒ，Ｌ２５０Ｉ，Ｎ２５２Ｒ，Ｔ２５３Ｒ，Ｌ２６２Ｄ，Ｙ２６３Ｆ，Ｓ２６５Ｆ，Ｌ２６７Ｖ，Ｌ２６７ＮＮ２６９Ｉ，Ｎ２６９Ｒ，Ｅ２７１Ｆ，Ｅ２７１Ｉ，Ｅ２７１Ｈ，Ｅ２７１Ｐ，Ｅ２７１Ｔ，Ｅ２７１Ｖ，Ｅ２７１Ｌ及び／又はＡ２７２Ｆ，の１つ以上を含み、ここで、変異体はタンパク質分解活性を有し、変異体の各アミノ酸位置は、配列番号２のアミノ酸配列と変異体のアミノ酸配列とのアラインメントによって決定される配列番号２（ＢＰＮ’）のアミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。
一態様では、好適なシリーズＩ ＧＧ３６冷水プロテアーゼ変異体としては、以下の組の置換：Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｓ００９Ａ−Ｅ２７１Ｌ，Ｎ０１８Ｒ−Ｗ２４１Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｇ１１５Ｒ，Ｎ０４３Ｒ−Ｈ２４９Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｈ２４９Ｒ，Ｖ００４Ｒ−Ｈ２４９Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ００９Ａ−Ｇ０２０Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｗ２４１Ｒ，Ｓ００９Ａ−Ｓ０７８Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｇ１１５Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｓ０２４Ｒ−Ｓ２４２Ｒ，Ｔ０２２Ｒ−Ｇ１１５Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｓ２４２Ｒ，Ｓ２４２Ｒ−Ｎ２６９Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｖ２４４Ｒ，Ｓ０２４Ｒ−Ｎ２６９Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｅ２７１Ｌ，Ｓ０２４Ｒ−Ｅ２７１Ｌ，Ｖ００４Ｒ−Ｓ００９Ａ，Ｇ０２０Ｒ−Ｎ２６９Ｒ，Ａ００１Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｖ２４４Ｒ−Ｅ２７１Ｌ，Ｓ００９Ａ−Ｎ０１８Ｒ，Ｗ２４１Ｒ−Ｅ２７１Ｌ，Ｖ００４Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｓ００９Ａ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ００９Ａ−Ｔ０２２Ｒ，Ｎ０６２Ｅ−Ｐ１２９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１５９Ｅ，Ａ０１６Ｓ−Ｌ１４８Ｉ，Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ，Ａ０１６Ｓ−Ｎ０６２Ｅ，Ｌ１１１Ｖ−Ｓ１８８Ｄ，Ｔ０２２Ａ−Ｎ０６２Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｌ１４８Ｉ，Ｔ０２２Ａ−Ｐ１２９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｅ２７１Ｆ，Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ，Ａ０１６Ｓ−Ｇ１５９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｒ１８６Ｈ，Ｓ１２８Ｎ−Ｇ１５９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ，Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１２８Ｎ，Ｌ１４８Ｉ−Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１０３Ｇ−Ａ１５８Ｅ，Ｌ１１１Ｖ−Ｇ１５９Ｅ，Ａ１５８Ｅ−Ｅ２７１Ｆ，Ａ０１６Ｓ−Ｓ１８８Ｄ，Ｔ０２２Ａ−Ｌ１１１Ｖ，Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ，Ａ０１６Ｓ−Ａ１５８Ｅ，Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ，Ｓ１２８Ｎ−Ｒ１８６Ｈ，Ｇ１５９Ｅ−Ｙ２０９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ，Ｌ１１１Ｖ−Ｙ２０９Ｅ，Ｌ１４８Ｉ−Ｓ１８８Ｄ，Ｓ１０１Ａ−Ｙ２０９Ｅ，Ｔ０２２Ａ−Ｓ１８８Ｄ，Ａ０１６Ｓ−Ｔ０２２Ａ，Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ，Ａ０１６Ｓ−Ｙ２０９Ｅ，Ａ０１６Ｓ−Ｓ１２８Ｎ，Ｔ０２２Ａ−Ｅ０８９Ｐ，Ｓ１２８Ｎ−Ｙ２０９Ｅ，Ｅ０８９Ｐ−Ａ１５８Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０３Ｇ，Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ，Ａ０１６Ｓ−Ｐ１２９Ｅ，Ｅ０８９Ｐ−Ｇ１５９Ｅ，Ｌ１１１Ｖ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ１０１Ａ−Ｐ１２９Ｅ，Ｌ１４８Ｉ−Ｙ２０９Ｅ，Ｔ０２２Ａ−Ｇ１５９Ｅ，Ｐ１２９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ，Ｐ１２９Ｅ−Ｙ２０９Ｅ，Ｖ１０４Ｌ−Ｐ１２９Ｅ，Ｓ１２８Ｎ−Ｓ１８８Ｄ，Ｌ１１１Ｖ−Ａ１５８Ｅ，Ｔ０２２Ａ−Ａ１５８Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｙ２０９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ１０１Ａ−Ｒ１８６Ｈ，Ｅ０８９Ｐ−Ｐ１２９Ｅ，Ｐ１２９Ｅ−Ｅ２７１、Ｔ２２Ａ−Ｌ１１１Ｖ−Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ−Ｙ２０９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１８８Ｄ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｇ１５９Ｅ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ｅ２７１Ｆ−Ｙ２０９Ｅ，Ｔ２２Ａ−Ｙ２０９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｙ２０９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｙ２０９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ，Ｔ２２Ａ−Ｌ１１１Ｖ−Ｓ１２８Ｎ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ，Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ，Ｎ６２Ｅ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｎ６２Ｅ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｓ２４Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｔ２５３Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２３８Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ７６Ｄ，及び／又はＳ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，の１つ以上を含むスブチリシン、特に配列番号７５５のバチルス・レンタス（Bacillus lentus）ＧＧ３６から誘導されるものが挙げられ、ここで、変異体はタンパク質分解活性を有し、変異体の各アミノ酸位置は、配列番号２のアミノ酸配列と変異体のアミノ酸配列とのアラインメントによって決定される配列番号２（ＢＰＮ’）のアミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。
別の態様では、好適なシリーズＩのＧＧ３６冷水プロテアーゼとしては、スブチリシンの変異体、特に配列番号７５５のバチルス・レンタス（Bacillus lentus）ＧＧ３６から誘導されるものが挙げられ、ここで、変異体は、位置１、２、４、９、１０、１４、１６、１７、１８、２０、２２、２４、２５、２６、４２、４３、４６、５２、５７、５９、６２、６８、７１、７２、７４、７５、７６、７８、８２、８６、８９、９１、９４、１００、１０１、１０３、１０４、１０６、１０８、１１１、１１２、１１５、１１７、１１８、１２１、１２８、１２９、１４４、１４８、１５８、１５９、１６０、１６６、１８５、１８６、１８８、１９７、２０３、２０９、２１０、２１２、２１４、２１５、２１７、２２４、２３０、２３１、２３６、２３８、２３９、２４１、２４２、２４３、２４４、２４８、２４９、２５０、２５２、２５３、２６２、２６３、２６５、２６７、２６９、２７１及び２７２を含む位置の群内に３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は更には２５個の変異を含む。
別の態様では、好適なシリーズＩのＧＧ３６冷水プロテアーゼとしては、スブチリシンの変異体、特に配列番号７５５のバチルス・レンタス（Bacillus lentus）ＧＧ３６から誘導されるものが挙げられ、ここで、変異体は、Ａ１Ｒ，Ｑ２Ｓ，Ｖ４Ｒ，Ｖ４Ｓ，Ｓ９Ａ，Ｒ１０Ｓ，Ｐ１４Ｋ，Ａ１６Ｓ，Ｈ１７Ｒ，Ｎ１８Ｒ，Ｇ２０Ｒ，Ｔ２２Ａ，Ｔ２２Ｒ，Ｓ２４Ｒ，Ｓ２４Ｗ，Ｇ２５Ｒ，Ｇ２５Ｖ，Ｖ２６Ｆ，Ｌ４２Ｉ，Ｎ４３Ｒ，Ｎ４３Ａ，Ｇ４６Ｒ，Ｐ５２Ｆ，Ｐ５２Ｅ，Ｐ５２Ｎ，Ｔ５７Ｒ，Ｑ５９Ａ，Ｎ６２Ｅ，Ｎ６２Ｑ，Ｖ６８Ａ，Ｖ６８Ｃ，Ｔ７１Ｇ，Ｉ７２Ｃ，Ａ７４Ｃ、Ｌ７５Ａ，Ｌ７５Ｆ，Ｌ７５Ｒ，Ｎ７６Ｄ，Ｓ７８Ｒ，Ｌ８２Ｒ，Ｐ８６Ｗ，Ｅ８９Ｐ，Ｅ８９Ｔ，Ｅ８９Ｇ，Ｅ８９Ｈ，Ｅ８９Ｉ，Ｅ８９Ｖ，Ｅ８９Ｗ，Ｙ９１Ｎ，Ｋ９４Ｎ，Ｇ１００Ｓ，Ｓ１０１Ａ，Ｓ１０１Ｎ，Ｓ１０１Ｇ，Ｓ１０１Ｄ，Ｓ１０３Ｇ，Ｓ１０３Ｎ，Ｖ１０４Ｌ，Ｖ１０４Ｉ，Ｓ１０６Ｖ，Ｓ１０６Ｇ，Ａ１０８Ｉ，Ｌ１１１Ｖ，Ｅ１１２Ｖ，Ｇ１１５Ｋ，Ｇ１１５Ｒ，Ｎ１１７Ｆ，Ｇ１１８Ｉ，Ｖ１２１Ｆ，Ｓ１２８Ｄ，Ｓ１２８Ｆ，Ｓ１２８Ｌ，Ｓ１２８Ｎ，Ｐ１２９Ｅ，Ｓ１４４Ｒ，Ｌ１４８Ｉ，Ａ１５８Ｅ、Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１６０Ｄ，Ｓ１６６Ｄ，Ｎ１８５Ｅ，Ｎ１８５Ｉ，Ｒ１８６Ｈ，Ｓ１８８Ｅ，Ｓ１８８Ｄ，Ｄ１９７Ｆ，Ｖ２０３Ｅ，Ｙ２０９Ｓ，Ｙ２０９Ｎ，Ｙ２０９Ｆ，Ｙ２０９Ｔ，Ｙ２０９Ｅ，Ｙ２０９Ｈ，Ｙ２０９Ｇ，Ｐ２１０Ｒ，Ｓ２１２Ｉ，Ｓ２１２Ｆ，Ｙ２１４Ｆ，Ａ２１５Ｎ，Ａ２１５Ｄ，Ａ２１５Ｅ，Ｌ２１７Ｅ，Ｌ２１７Ｎ，Ｔ２２４Ａ，Ａ２３０Ｅ，Ａ２３１Ｉ，Ｑ２３６Ｆ，Ｎ２３８Ｒ，Ｎ２３８Ｋ，Ｐ２３９Ｋ，Ｐ２３９Ｇ，Ｐ２３９Ｒ，Ｐ２３９Ｓ，Ｗ２４１Ｒ，Ｓ２４２Ｒ，Ｓ２４２Ｌ，Ｎ２４３Ｒ，Ｖ２４４Ｒ，Ｎ２４８Ｉ，Ｎ２４８Ｖ，Ｈ２４９Ｒ，Ｌ２５０Ｉ，Ｎ２５２Ｒ，Ｔ２５３Ｒ，Ｌ２６２Ｄ，Ｙ２６３Ｆ，Ｓ２６５Ｆ，Ｌ２６７Ｖ，Ｌ２６７Ｎ，Ｎ２６９Ｉ，Ｎ２６９Ｒ，Ｅ２７１Ｆ，Ｅ２７１Ｉ，Ｅ２７１Ｈ，Ｅ２７１Ｐ，Ｅ２７１Ｔ，Ｅ２７１Ｖ，Ｅ２７１ＬＡ２７２Ｆから選択される合計３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は更には２５個の変異を含み、選択的に、以下の変異：Ｓ１０３Ａ，Ｇ１５９Ｄ，Ｑ２３６Ｈ，Ｑ２４５Ｒ，Ｎ２４８Ｄ及びＮ２５２Ｋ，のうちの１つ以上を含み、ここで、変異体はタンパク質分解活性を有し、変異体の各アミノ酸位置は、配列番号２のアミノ酸配列と変異体のアミノ酸配列とのアラインメントによって決定される配列番号２（ＢＰＮ’）のアミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる。
一部の態様では、シリーズＩ ＧＧ３６冷水プロテアーゼ変異体は１つ以上の変異を含み、Ｂ．レンタス（B. lentus）スブチリシンＧＧ３６野生型（配列番号７５５）と比較して−５、−４、−３、−２、−１、又０の合計正味電荷を有する。
別の態様では、シリーズＩ ＧＧ３６冷水プロテアーゼ変異体は、低イオン強度のシリーズＩ ＧＧ３６冷水プロテアーゼ変異体である。このような低イオン強度のシリーズＩ ＧＧ３６冷水プロテアーゼ変異体は１つ以上の変異を含み、Ｂ．レンタス（B. lentus）スブチリシンＧＧ３６プロテアーゼ野生型（配列番号７５５）と比較して−５、−４、−３、−２、−１、又０の合計正味電荷を有する。これらの変異体は、（ａ）以下の変異の２つ以上：Ａ１Ｒ，Ｑ２Ｓ，Ｖ４Ｒ，Ｖ４Ｓ，Ｓ９Ａ，Ｒ１０Ｓ，Ｐ１４Ｋ，Ａ１６Ｓ，Ｔ２２Ａ，Ｔ２２Ｒ，Ｓ２４Ｒ，Ｇ２５Ｖ，Ｖ２６Ｆ，Ｌ４２Ｉ，Ｐ５２Ｆ，Ｐ５２Ｅ，Ｐ５２Ｎ，Ｎ６２Ｅ，Ｎ６２Ｑ，Ｖ６８Ａ，Ｖ６８Ｃ，Ｔ７１Ｇ，Ｉ７２Ｃ，Ａ７４Ｃ、Ｌ７５Ａ，Ｌ７５Ｆ，Ｓ７８Ｒ，Ｅ８９Ｐ，Ｅ８９Ｔ，Ｅ８９Ｇ，Ｅ８９Ｈ，Ｅ８９Ｗ，Ｙ９１Ｎ，Ｋ９４Ｎ，Ｇ１００Ｓ，Ｓ１０１Ａ，Ｓ１０１Ｎ，Ｓ１０１Ｇ，Ｓ１０１Ｄ，Ｓ１０３Ｇ，Ｓ１０３Ｎ，Ｖ１０４Ｌ，Ｖ１０４Ｉ，Ａ１０８Ｉ，Ｌ１１１Ｖ，Ｅ１１２Ｖ，Ｇ１１５Ｋ，Ｎ１１７Ｆ，Ｖ１２１Ｆ，Ｓ１２８Ｄ，Ｓ１２８Ｆ，Ｓ１２８Ｌ，Ｓ１２８Ｎ，Ｐ１２９Ｅ，Ｌ１４８Ｉ，Ａ１５８ＥＧ１５９Ｅ，Ｓ１６０Ｄ，Ｓ１６６Ｄ，Ｎ１８５Ｅ，Ｒ１８６Ｈ，Ｓ１８８Ｅ，Ｓ１８８Ｄ，Ｖ２０３Ｅ，Ｙ２０９Ｓ，Ｙ２０９Ｎ，Ｙ２０９Ｆ，Ｙ２０９Ｔ，Ｙ２０９Ｅ，Ｙ２０９Ｈ，Ｙ２０９Ｇ，Ｐ２１０Ｒ，Ｓ２１２Ｉ，Ｓ２１２Ｆ，Ｙ２１４Ｆ，Ａ２１５Ｎ，Ａ２１５Ｄ，Ａ２１５Ｅ，Ｌ２１７Ｅ，Ｌ２１７Ｎ，Ｔ２２４Ａ，Ａ２３０Ｅ，Ａ２３１Ｉ，Ｑ２３６Ｆ，Ｎ２３８Ｒ，Ｎ２３８Ｋ，Ｐ２３９Ｋ，Ｐ２３９Ｇ，Ｐ２３９Ｒ，Ｎ２４８Ｖ，Ｈ２４９Ｒ，Ｌ２５０Ｉ，Ｌ２６２Ｄ，Ｙ２６３Ｆ，Ｓ２６５Ｆ，Ｌ２６７Ｖ，Ｌ２６７ＮＮ２６９Ｉ，Ｎ２６９Ｒ，Ｅ２７１Ｆ，Ｅ２７１Ｉ，Ｅ２７１Ｈ及びＡ２７２Ｆ、並びに／あるいは、（ｂ）以下の組の変異の１つ以上：Ｎ０６２Ｅ−Ｐ１２９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１５９Ｅ，Ａ０１６Ｓ−Ｌ１４８Ｉ，Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ，Ａ０１６Ｓ−Ｎ０６２Ｅ，Ｌ１１１Ｖ−Ｓ１８８Ｄ，Ｔ０２２Ａ−Ｎ０６２Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｌ１４８Ｉ，Ｔ０２２Ａ−Ｐ１２９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｅ２７１Ｆ，Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ，Ａ０１６Ｓ−Ｇ１５９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｒ１８６Ｈ，Ｓ１２８Ｎ−Ｇ１５９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ，Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１２８Ｎ，Ｌ１４８Ｉ−Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１０３Ｇ−Ａ１５８Ｅ，Ｌ１１１Ｖ−Ｇ１５９Ｅ，Ａ１５８Ｅ−Ｅ２７１Ｆ，Ａ０１６Ｓ−Ｓ１８８Ｄ，Ｔ０２２Ａ−Ｌ１１１Ｖ，Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ，Ａ０１６Ｓ−Ａ１５８Ｅ，Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ，Ｓ１２８Ｎ−Ｒ１８６Ｈ，Ｇ１５９Ｅ−Ｙ２０９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ，Ｌ１１１Ｖ−Ｙ２０９Ｅ，Ｌ１４８Ｉ−Ｓ１８８Ｄ，Ｓ１０１Ａ−Ｙ２０９Ｅ，Ｔ０２２Ａ−Ｓ１８８Ｄ，Ａ０１６Ｓ−Ｔ０２２Ａ，Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ，Ａ０１６Ｓ−Ｙ２０９Ｅ，Ａ０１６Ｓ−Ｓ１２８Ｎ，Ｔ０２２Ａ−Ｅ０８９Ｐ，Ｓ１２８Ｎ−Ｙ２０９Ｅ，Ｅ０８９Ｐ−Ａ１５８Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０３Ｇ，Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ，Ａ０１６Ｓ−Ｐ１２９Ｅ，Ｅ０８９Ｐ−Ｇ１５９Ｅ，Ｌ１１１Ｖ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ１０１Ａ−Ｐ１２９Ｅ，Ｌ１４８Ｉ−Ｙ２０９Ｅ，Ｔ０２２Ａ−Ｇ１５９Ｅ，Ｐ１２９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ，Ｐ１２９Ｅ−Ｙ２０９Ｅ，Ｖ１０４Ｌ−Ｐ１２９Ｅ，Ｓ１２８Ｎ−Ｓ１８８Ｄ，Ｌ１１１Ｖ−Ａ１５８Ｅ，Ｔ０２２Ａ−Ａ１５８Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｙ２０９Ｅ，Ｎ０６２Ｅ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ１０１Ａ−Ｒ１８６Ｈ，Ｅ０８９Ｐ−Ｐ１２９Ｅ，Ｐ１２９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ，Ｔ２２Ａ−Ｌ１１１Ｖ−Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ−Ｙ２０９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１８８Ｄ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｇ１５９Ｅ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ｅ２７１Ｆ−Ｙ２０９Ｅ，Ｔ２２Ａ−Ｙ２０９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｙ２０９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｙ２０９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ，Ｔ２２Ａ−Ｌ１１１Ｖ−Ｓ１２８Ｎ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１５９Ｅ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ，Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ，Ｎ６２Ｅ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｎ６２Ｅ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｓ２４Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｔ２５３Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ，Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２３８Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ７６Ｄ及びＳ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，から選択することができ、ここで、変異体はタンパク質活性を有し、変異体の各アミノ酸位置は配列番号２（ＢＰＮ’）のアミノ酸配列におけるアミノ酸と対応させることにより番号付けされる。
別の態様では、上記低イオン強度のシリーズＩ ＧＧ３６冷水プロテアーゼ変異体は、典型的には洗濯洗浄機内で、水に希釈されて洗濯洗剤洗浄液を形成する洗剤組成物の部分を形成し、その伝導率は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約３ｍＳ／ｃｍ、約０．３ｍＳ／ｃｍ〜約２．５ｍＳ／ｃｍ、又は更には約０．５ｍＳ／ｃｍ〜約２ｍＳ／ｃｍである。
別の態様では、シリーズＩ ＧＧ３６冷水プロテアーゼ変異体は、高イオン強度のシリーズＩ ＧＧ３６冷水プロテアーゼ変異体である。このような高イオン強度のシリーズＩ ＧＧ３６冷水プロテアーゼ変異体は２つ以上の変異を含み、Ｂ．レンタス（B.lentus）スブチリシンＧＧ３６プロテアーゼ野生型（配列番号７５５）と比較して＋５、＋４、＋３、＋２、＋１又０の合計正味電荷を有する。これらの変異は、（ａ）以下の変異：Ｖ４Ｒ，Ｈ１７Ｒ，Ｎ１８Ｒ，Ｇ２０Ｒ，Ｔ２２Ｒ，Ｓ２４Ｒ，Ｓ２４Ｗ，Ｇ２５Ｒ，Ｎ４３Ｒ，Ｎ４３Ａ，Ｇ４６Ｒ，Ｐ５２Ｆ，Ｐ５２Ｎ，Ｔ５７Ｒ，Ｑ５９Ａ，Ｎ６２Ｑ，Ｔ７１Ｇ，Ｌ７５Ｒ，Ｎ７６Ｄ，Ｓ７８Ｒ，Ｌ８２Ｒ，Ｐ８６Ｗ，Ｅ８９Ｐ，Ｅ８９Ｗ，Ｅ８９Ｔ，Ｅ８９Ｉ，Ｅ８９Ｈ，Ｅ８９Ｖ，Ｖ１０４Ｌ，Ｓ１０６Ｖ，Ｓ１０６Ｇ，Ｇ１１５Ｒ，Ｇ１１８Ｉ，Ｖ１２１Ｆ，Ｓ１４４Ｒ，Ｎ１８５Ｉ，Ｄ１９７Ｆ，Ｙ２０９Ｎ，Ｙ２０９Ｓ，Ｌ２１７Ｅ，Ａ２３１Ｉ，Ｐ２３９Ｒ，Ｐ２３９Ｓ，Ｗ２４１Ｒ，Ｓ２４２Ｒ，Ｓ２４２Ｌ，Ｎ２４３Ｒ，Ｖ２４４Ｒ，Ｎ２４８Ｉ，Ｈ２４９Ｒ，Ｎ２５２Ｒ，Ｔ２５３Ｒ，Ｅ２７１Ｔ，Ｅ２７１Ｖ，Ｅ２７１Ｌ，Ｅ２７１Ｈ，Ｅ２７１Ｆ，Ｅ２７１Ｐ，Ａ１Ｒ，Ｓ９Ａ，Ｓ２１２Ｆ及びＮ２６９Ｒのうちの２つ以上、並びに／あるいは、（ｂ）以下の組の変異：Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｓ００９Ａ−Ｅ２７１Ｌ，Ｎ０１８Ｒ−Ｗ２４１Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｇ１１５Ｒ，Ｎ０４３Ｒ−Ｈ２４９Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｈ２４９Ｒ，Ｖ００４Ｒ−Ｈ２４９Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ００９Ａ−Ｇ０２０Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｗ２４１Ｒ，Ｓ００９Ａ−Ｓ０７８Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｇ１１５Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｓ０２４Ｒ−Ｓ２４２Ｒ，Ｔ０２２Ｒ−Ｇ１１５Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｓ２４２Ｒ，Ｓ２４２Ｒ−Ｎ２６９Ｒ，Ｎ０１８Ｒ−Ｖ２４４Ｒ，Ｓ０２４Ｒ−Ｎ２６９Ｒ，Ｇ０２０Ｒ−Ｅ２７１Ｌ，Ｓ０２４Ｒ−Ｅ２７１Ｌ，Ｖ００４Ｒ−Ｓ００９Ａ，Ｇ０２０Ｒ−Ｎ２６９Ｒ，Ａ００１Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｖ２４４Ｒ−Ｅ２７１Ｌ，Ｓ００９Ａ−Ｎ０１８Ｒ，Ｗ２４１Ｒ−Ｅ２７１Ｌ，Ｖ００４Ｒ−Ｓ０２４Ｒ，Ｓ００９Ａ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ００９Ａ−Ｔ０２２Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｓ２４Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２５２Ｋ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ，のうちの１つ以上から選択することができ、ここで、変異体はタンパク質活性を有し、変異体の各アミノ酸位置は配列番号２（ＢＰＮ’）のアミノ酸配列におけるアミノ酸と対応させることにより番号付けされる。
別の態様では、上記高イオン強度のシリーズＩ ＧＧ３６冷水プロテアーゼ変異体は、典型的には洗濯洗浄機内で、水に希釈されて洗濯洗剤洗浄液を形成する洗剤組成物の部分を形成し、その伝導率は、約３ｍＳ／ｃｍ〜約３０ｍＳ／ｃｍ、約３．５ｍＳ／ｃｍ〜約２０ｍＳ／ｃｍ、又は更には約４ｍＳ／ｃｍ〜約１０ｍＳ／ｃｍである。
シリーズＩ ＧＧ３６冷水プロテアーゼ変異体の電荷は、配列番号７５５のアミノ酸配列を有するＢ．レンタス（B. lentus）スブチリシンＧＧ３６プロテアーゼ野生型と比較して、表される。単一負電荷を付与するアミノ酸はＤ及びＥであり、単一正電荷を付与するアミノ酸はＲ、Ｈ及びＫである。配列番号７５５に対して電荷を変化させる任意のアミノ酸変化を使用することで、シリーズＩ ＧＧ３６冷水プロテアーゼ変異体の電荷を算出する。例えば、野生型中性位置に負電荷変異を導入することはシリーズＩ ＧＧ３６冷水プロテアーゼ変異体に−１の正味電荷を加えることになり、一方、野生型正アミノ酸残基（Ｒ、Ｈ又はＫ）に負電荷変異（Ｄ及びＥ）を導入することは−２の正味電荷を加えることになる。配列番号７５５のアミノ酸配列を有するＢ．レンタス（B. lentus）スブチリシンＧＧ３６プロテアーゼ野生型と比較して、シリーズＩ ＧＧ３６冷水プロテアーゼ変異体について異なっているすべてのアミノ酸残基からの電荷変化の合計は、シリーズＩ ＧＧ３６冷水プロテアーゼ変異体の電荷変化を与える。理論に束縛されるものではないが、（ａ）低伝導性洗濯洗剤溶液において使用されるシリーズＩ ＧＧ３６冷水プロテアーゼ変異体に好ましい電荷範囲は、−５、−４、−３、−２、−１、０、特に−２、−１である、並びに（ｂ）高伝導性洗濯洗剤溶液において使用されるシリーズＩ ＧＧ３６冷水プロテアーゼに好ましい電荷範囲は、＋５、＋４、＋３、＋２、＋１、０、特に＋２、＋１である、と考えられる。電荷を正しく選択することにより、予想外にレベルの改善された冷水クリーニング性能を得ることができる。「低伝導性洗濯洗剤溶液」は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約３ｍＳ／ｃｍ、約０．３ｍＳ／ｃｍ〜約２．５ｍＳ／ｃｍ、又は更には約０．５ｍＳ／ｃｍ〜約２ｍＳ／ｃｍの伝導率を有するものとして定義される。「高伝導性洗濯洗剤溶液」は、約３ｍＳ／ｃｍ〜約３０ｍＳ／ｃｍ、約３．５ｍＳ／ｃｍ〜約２０ｍＳ／ｃｍ、又は更には約４ｍＳ／ｃｍ〜約１０ｍＳ／ｃｍの伝導率を有するものとして定義される。上記の例は非限定的であることが意図されている。冷水性能を最適化するために変異が組み合わされる場合にも、酵素電荷は更なる位置における変異により均衡が得られ得る。
冷水プロテアーゼ変異体ＧＧ３６の製造方法
冷水プロテアーゼ変異体ＧＧ３６をコードしている本発明の改変ポリヌクレオチドを生成するのに好適な様々な方法が当該技術分野において既知であり、限定するものではないが、例えば、部位特異的飽和変異誘発、走査変異誘発、挿入変異誘発、欠失変異誘発、無作為変異誘発、部位特異的変異誘発及び指向進化、並びに様々な他の組み換え手法が挙げられる。シリーズＩ ＧＧ３６冷水プロテアーゼ変異体を製造する非限定的な代表的方法は、上記表題「ベクター、細胞及び本発明のプロテアーゼ変異体ポリペプチドの製造方法」の項で提供される。
加熱不活性化した洗剤の酵素活性の試験に関しては、洗剤の希釈標準溶液は加熱不活性化母液から調製した。所望の条件に一致するよう、適切な水硬度（例えば、６ｇｐｇ又は１２ｇｐｇ）及び緩衝剤を洗剤溶液に加える。瓶をボルテックスにかけるか反転させるかして溶液を混合する。以下の表は本明細書で使用される市販の洗剤及び試験条件の一部についての情報を提供する。一部の実験では、追加の及び／又は他の市販の洗剤が以下の実施例で使用されることが見出される。
Figure 2016028571
一部の更なる実施例では、以下の溶液の使用が見出される：
Figure 2016028571
表Ｃは、布地の洗濯に好適な本発明に従って製造された顆粒洗濯洗剤組成物を提供する。
Figure 2016028571
１ ランダムグラフトコポリマーは、ポリエチレンオキシド主鎖と複数のポリビニルアセテート側鎖とを有する、ポリビニルアセテートグラフト化ポリエチレンオキシドコポリマーである。ポリエチレンオキシド主鎖の分子量は約６０００であり、ポリエチレンオキシドとポリビニルアセテートとの重量比は約４０：６０であり、５０個のエチレンオキシド単位当たりのグラフト点は１以下である。
２ −ＮＨにつき２０個のエトキシル基を有するポリエチレンイミン（ＭＷ＝６００）。
３ 両親媒性グリース洗浄ポリマーは、−ＮＨにつき２４個のエトキシル基、及び−ＮＨにつき１６個のプロポキシル基を有するポリエチレンイミン（ＭＷ＝６００）である。
４ 次の構造を有する可逆性プロテアーゼ抑制剤。
Figure 2016028571
５ エトキシル化チオフェン色調染料については米国特許第７，２０８，４５９（Ｂ２）号に記述されている。
表Ｃにおいて、製品に添加した活性タンパク質の％として表される（本発明の）冷水プロテアーゼ変異体を除き、すべての酵素濃度は酵素原材料％として表される。表Ｄは、タテ型自動洗濯機に好適な顆粒洗濯洗剤組成物（洗剤組成物７〜９）、及びドラム式洗濯機に好適な顆粒洗濯洗剤組成物（洗剤組成物１０〜１１）を提供する。試験したＧＧ３６プロテアーゼ変異体、及び／又は本発明の冷水プロテアーゼ変異体をこれらの配合物に別個に加える。

Figure 2016028571

表Ｄにおいて、界面活性剤成分は、限定するものではないがＢＡＳＦ（例えば、ＬＵＴＥＮＳＯＬ（登録商標））、Ｓｈｅｌｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｓｔｅｐａｎ、Ｈｕｎｔｓｍａｎ、及びＣｌａｒｉａｎｔ（例えば、ＰＲＡＥＰＡＧＥＮ（登録商標））が挙げられる、任意の好適な供給元から得ることができる。ゼオライトはＩｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｚｅｏｌｉｔｅなどの供給元から得ることができる。クエン酸及びクエン酸ナトリウムは、Ｊｕｎｇｂｕｎｚｌａｕｅｒなどの供給元から得ることができる。過炭酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム及びセスキ炭酸ナトリウムは、Ｓｏｌｖａｙなどの供給元から得ることができる。アクリル酸／マレエートコポリマーは、ＢＡＳＦなどの供給元から得ることができる。カルボキシメチルセルロース及び疎水変性カルボキシメチルセルロースは、ＣＰＫｅｌｃｏなどの供給元から得ることができる。Ｃ．Ｉ．蛍光増白剤２６０は、３ｖ Ｓｉｇｍａから得ることができる（例えば、ＯＰＴＩＢＬＡＮＣ（登録商標）、ＯＰＴＩＢＬＡＮＣ（登録商標）２Ｍ／Ｇ、ＯＰＴＩＢＬＡＮＣ（登録商標）２ＭＧ／ＬＴ Ｅｘｔｒａ、又はＯＰＴＩＢＬＡＮＣ（登録商標）Ｅｃｏｂｒｉｇｈｔ）。Ｓ，Ｓ−エチレンジアミン二コハク酸四ナトリウムは、Ｉｎｎｏｓｐｅｃなどの供給元から得ることができる。テレフタレートコポリマーは、Ｃｌａｒｉａｎｔ（例えば、ＲＥＰＥＬＯＴＥＸ ＳＦ ２）から得ることができる。加えて、１−ヒドロキシエタン−１，１−ジホスホン酸は、Ｔｈｅｒｍｐｈｏｓから得ることができる。オキサジリジン系漂白増進剤は、式中、Ｒ１＝２−ブチルオクチルである以下の構造を有するものであり、米国特許第２００６／００８９２８４（Ａ１）号に従って製造される。
Figure 2016028571
酵素、ＮＡＴＡＬＡＳＥ（登録商標）、ＴＥＲＭＡＭＹＬ（登録商標）、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ ＰＬＵＳ（登録商標）、ＣＥＬＬＵＣＬＥＡＮ（登録商標）及びＭＡＮＮＡＷＡＹ（登録商標）は、ＮｏｖｏＺｙｍｅｓから得ることができる。フタロシアニンテトラスルホン酸亜鉛は、Ｃｉｂａ Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓから得ることができる（例えば、ＴＩＮＯＬＵＸ（登録商標）ＢＭＣ）。抑泡剤粒は、Ｄｏｗ Ｃｏｒｎｉｎｇから得ることができる。これらの洗剤組成物において、ランダムグラフトコポリマーは、ポリエチレンオキシド主鎖と複数のポリビニルアセテート側鎖とを有する、ポリビニルアセテートグラフト化ポリエチレンオキシドコポリマーである。ポリエチレンオキシド主鎖の分子量は約６０００であり、ポリエチレンオキシドとポリビニルアセテートとの重量比は約４０：６０であり、５０個のエチレンオキシド単位当たりのグラフト点は１以下である。
パートＩＩ実施例
（実施例１）
アッセイ及び試験方法
本実施例は、これらの実施例に記載される変異体の顕色において使用される様々な試験方法及びアッセイを記載する。提供されるプロトコルからの任意の変更は、関連実施例において示される。アッセイは、Ｂｉｏｍｅｋ ＦＸ Ｒｏｂｏｔ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）又は多チャンネルピペッター（例えば、Ｒａｉｎｉｎ ＰｉｐｅｔＬｉｔｅ（Ｍｅｔｔｌｅｒ−Ｔｏｌｅｄｏ））及びＳｐｅｃｔｒａＭＡＸ ＭＴＰ Ｒｅａｄｅｒ（３４０型、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて、行われた。
Ａ．試験方法
試験方法１
染料又は顔料物質が本発明の意図する布地色調剤であるかどうかを明らかにするための手順プロトコルを以下に提供する。
１）２つのターゴトメーターポットに英国Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｕｐｏｎ Ｔｙｎｅの水道水（総硬度約１２グレイン／米ガロン（Ｎｏｒｔｈｕｍｂｒｉａｎ Ｗａｔｅｒ，Ｐｉｔｙ Ｍｅ，Ｄｕｒｈａｍ，Ｃｏ．Ｄｕｒｈａｍ，ＵＫ）から供給）を８００ｍＬ充填する。
２）ポットをターゴトメーターに挿入する。試験中は水温を３０℃に制御し、撹拌を４０ｒｐｍに設定する。
３）各ポットにＩＥＣ−Ｂ洗剤（ＩＥＣ ６０４５６ Ｗａｓｈｉｎｇ Ｍａｃｈｉｎｅ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｂａｓｅ Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ Ｔｙｐｅ Ｂ）、ｗｆｋ（Ｂｒｕｇｇｅｎ−Ｂｒａｃｈｔ））から供給）を４．８ｇ加える。
４）２分後、第１のポットに活性着色剤を２．０ｍｇ加える。
５）１分後、５ｃｍ×５ｃｍ標本に切断した平坦な綿肌着（Ｗａｒｗｉｃｋ Ｅｑｕｅｓｔ（Ｃｏｎｓｅｔｔ，Ｃｏｕｎｔｙ Ｄｕｒｈａｍ，ＵＫ）により供給）５０ｇを各ポットに加える。
６）１０分後、ポットを排水し、硬度１４．４（イギリスクラーク硬度）を有しカルシウム対マグネシウムのモル比が３：１の冷水（１６℃）を再充填する。
７）２分間すすいだ後、布地を取り出す。
８）同じ処理を用いて工程３〜７を更に３サイクル繰り返す。
９）布地を回収し、屋内で１２時間自然乾燥させる。
１０）Ｄ６５光源及びＵＶＡ遮断フィルタを取り付けたＨｕｎｔｅｒ Ｍｉｎｉｓｃａｎスペクトロメーターを使用して標本を分析し、ハンターａ（赤−緑軸）及びハンターｂ（黄−青軸）値を得る。
１１）各組の布地についてハンターａ及びハンターｂ値の平均値を計算する。着色剤で処理した評価対象布地がａ軸又はｂ軸のいずれかにおいて平均で０．２単位より大きい色相の差を示した場合、本発明の目的のための布地色調剤であると判断される。
試験方法２
試験方法２のために、以下に提供されるＢＭＩ微小標本アッセイは、顆粒洗剤組成物１０（上記表Ｄを参照されたい）を用いて行われる。洗濯洗剤を、１２ｇｐｇの硬度を有する水に溶解させ、１６℃の温度に調整し、所望のプロテアーゼ変異体酵素を添加する。次いで、記載されるＢＭＩ微小標本アッセイ毎にプロテアーゼ変異体酵素の性能を測定する。性能指数は、配列番号７５５のアミノ酸配列を有するＢ．レンタス（B. lentus）ＧＧ３６スブチリシン酵素の性能とプロテアーゼ変異体酵素の性能を比較することにより判定され、全ての場合で酵素投与量は１．６ｐｐｍである。１．１以上の性能指数を有するプロテアーゼ変異体酵素は、冷水プロテアーゼ変異体であるとみなされる。
試験方法３
試験方法３のために、以下に提供されるＢＭＩ微小標本アッセイは、顆粒洗濯洗剤組成物７（上記表Ｄを参照されたい）を用いて行われる。洗濯洗剤を、６ｇｐｇの硬度を有する水に溶解させ、１６℃の温度に調整し、所望のＧＧ３６プロテアーゼ変異体酵素を添加する。次いで、記載されるＢＭＩ微小標本アッセイ毎にＧＧ３６プロテアーゼ変異体酵素の性能を測定する。性能指数は、配列番号７５５のアミノ酸配列を有するＢ．レンタス（B. lentus）ＧＧ３６スブチリシン酵素の性能とＧＧ３６プロテアーゼ変異体酵素の性能を比較することにより判定され、全ての場合で酵素投与量は４ｐｐｍである。１．１以上の性能指数を有するＧＧ３６プロテアーゼ変異型酵素は、冷水プロテアーゼ変異体であるとみなされる。
試験方法４
試験方法４のために、以下に提供されるＢＭＩ微小標本アッセイは、顆粒洗濯洗剤組成物７（上記表Ｄを参照されたい）を用いて行われる。洗濯洗剤を、６ｇｐｇの硬度を有する水に溶解させ、１６℃の温度に調整し、所望のＧＧ３６プロテアーゼ変異体酵素を添加する。次いで、記載されるＢＭＩ微小標本アッセイ毎にＧＧ３６プロテアーゼ変異体酵素の性能を測定する。性能指数は、参照酵素ＧＧ３６−Ａ１５８Ｅ，の性能とＧＧ３６プロテアーゼ変異体酵素の性能を比較することにより判定され、上記ＧＧ３６−Ａ１５８Ｅ参照酵素は、位置１５８にてアラニンをグルタミン酸に単一置換した（すなわち、Ａ１５８Ｅ変異）配列番号７５５のＢ．レンタススブチリシン（B. lentus subtilisin）ＧＧ３６プロテアーゼアミノ酸配列からなり、すべての場合で酵素投与量は４ｐｐｍである。１．０以上の性能指数を有するＧＧ３６プロテアーゼ変異型酵素は、冷水プロテアーゼ変異体であるとみなされる。
試験方法５
水溶液の伝導度をＡＳＴＭ Ｄ１１２５標準法に従ってアッセイし、単位ミリジーメンス／ｃｍ（本明細書ではｍＳ／ｃｍと略記）で報告する。
Ｂ．アッセイ
９６ウェルマイクロタイタープレートでタンパク質含量を測定するためのＴＣＡアッセイ。
ＧＧ３６及びＧＧ３６変異体に関し、このアッセイは、マイクロタイタープレートで、３７℃、加湿エアレーション下で、２５０ｒｐｍで振盪させながら２〜３日増殖させた、枯草菌（B. subtilis）培養上清の、濾過物を用いて開始した。新しい９６ウェルの平底マイクロタイタープレート（ＭＴＰ、Ｃｏｓｔａｒ ９０１７培地を透明なポリスチレンプレートと組み合わせた）をアッセイに使用した。最初に、１００μＬ／ウェルの０．２５Ｎ ＨＣｌを各ウェルに配置した。次いで、濾過した培養上清を２０〜２５μＬ加え、溶液を卓上ミキサーで５〜１０秒混合した（例えば、Ｌａｂ ｌｉｎｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、タイタープレート震盪機、４８２５型）。次いで「ブランク」読み取り値を得るために、４０５ｎｍで光散乱／吸光度を測定した。「試験」読み取りに関し、ＨＣｌと培養上清の混合物を含有している各ウェルに、１００μＬ／ウェルの３０％（重量／体積）トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）を添加し、プレートを室温で１０分にわたってインキュベートした。卓上ミキサーで２、３秒未満で溶液を簡単に混合した後、４０５ｎｍで光散乱／吸光度を測定した。サンプルの濁度／光散乱は、培養上清中の沈殿し得る合計タンパク質の量に相関して増加する。「試験」読み取り値（ＴＣＡ添加後に上記のように得られた値）から、「ブランク」（ＴＣＡは添加せずにＨＣｌのみを添加した後に得られた値）読み取り値を減算することで計算を実施し、サンプル中のタンパク質含量の相対的尺度を得た。必要に応じて、既知の変換係数を用い、クローンのＡＡＰＦアッセイにより、ＴＣＡ読み取り値を較正することで、検量線を生成することができる。しかしながら、ＴＣＡ結果は、５０〜５００百万分率のタンパク質濃度（ｐｐｍ）（ここで、１ｐｐｍは１ｍｇ／Ｌに相当する）に対して直線であることから、所望の性能を有する変異体を選択するために、酵素性能に対して直接プロットすることができる。
９６ウェルマイクロタイタープレートでのＡＡＰＦプロテアーゼアッセイ
セリンプロテアーゼ変異体のプロテアーゼ活性を測定するために、Ｎ−スクシニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−フェニル−ｐ−ニトロアニリド（ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ）の加水分解を計測した。使用した試薬溶液は、以下のものであった：０．００５％のＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０を含有している１００ｍＭのトリス／ＨＣｌ（ｐＨ ８．６）（トリス希釈緩衝液）、１ｍＭのＣａＣｌ２及び０．００５％のＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０を含有している１００ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ ８．６）（トリス／Ｃａ緩衝液）、並びに１６０ｍＭのｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ／ＤＭＳＯ（ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ保存溶液）（Ｓｉｇｍａ：Ｓ−７３８８）。ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ希釈標準溶液を調製するために、１ｍＬのｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ原液を１００ｍＬのトリス／Ｃａ緩衝液に加え、少なくとも１０秒にわたってウェルをよく混合した。１０μＬの希釈プロテアーゼ溶液を９６ウェルＭＴＰの各ウェルに加え、直ちに１ｍｇ／ｍＬのｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ希釈標準溶液１９０μＬを加えてアッセイを実施した。溶液を５秒にわたって混合し、吸光度の変化を、２５℃にて、４０５ｎｍで、ＭＴＰリーダーの動的解析モードにより読み取りした（５分毎に２５回読み取り）。プロテアーゼ活性はＡＵとして表記される（活性＝ΔＯＤ・ｍｉｎ−１ ｍｌ−１）。
エグリンＣ阻害アッセイ
本明細書に記載のセリンプロテアーゼ濃度及び比活性を、エグリンｃと呼ばれる阻害剤による滴定で測定した。エグリンｃ（ｌｅｅｃｈ Ｈｉｒｕｄｏ ｍｅｄｉｃｉｎａｌｉｓ）は、スブチリシン及びＡＳＰプロテアーゼとの相互作用が強いタンパク質阻害剤であり（ＨｅｉｎＺ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３１：８７５５〜６６［１９９２］）、それゆえプロテアーゼ酵素濃度を測定するのに使用することができ、ひいては比活性の算出が可能になる。エグリンｃ遺伝子を合成し、標準法により大腸菌（E. coli）で発現させた。特性及び阻害強度はＳｉｇｍａから購入したエグリンｃと同じであった。
（ｉ）エグリンＣ原液の濃度測定
既知の比活性を有するバチルス・レンタス（Bacillus Lentus）スブチリシンのサンプルを、１ｍＭのＣａＣｌ２及び０．００５％ ＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０（トリス／Ｃａ緩衝液）を含有している１００ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ ８．６）で、上記のＡＡＰＦプロテアーゼアッセイに適切な濃度に希釈した。トリス／Ｃａ緩衝液で、エグリンｃ原液の希釈物もいくつか調製した。各希釈エグリンｃ溶液のアリコートを、等量のバチルス・レンタス（Bacillus Lentus）スブチリシン希釈溶液と混合した。エグリンｃの非存在下での、阻害されていないスブチリシンの活性を測定するために、エグリンｃを含まないトリス／Ｃａ緩衝液のみのアリコートも、等量のバチルス・レンタス（Bacillus Lentus）スブチリシン希釈溶液と混合した。混合溶液を室温で１５〜３０分インキュベートし、次いで各サンプルのプロテアーゼ活性を上記のＡＡＰＦアッセイにより測定した。既知の比活性を有するバチルス・レンタス（Bacillus Lentus）のスブチリシンを用いて、各サンプル中の活性プロテアーゼ濃度を測定した。次いで各サンプル中のエグリンｃ濃度を、トリス／Ｃａ緩衝液のみ（エグリンｃを含まない）と混合した未阻害のスブチリシンサンプルと比較したときに観察されるプロテアーゼ活性の減少度に基づいて算出した。したがって、希釈度及び容量が既知のエグリンｃ溶液を用い、原液中のエグリンｃの濃度を測定した。
（ｉｉ）スブチリシン変異体の濃度及び比活性の測定
スブチリシン変異体サンプルを、１ｍＭのＣａＣｌ２及び０．００５％ ＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０（トリス／Ｃａ緩衝液）を含有している１００ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ ８．６）で希釈した。トリス／Ｃａ緩衝液で、既知の濃度のエグリンｃ原液の希釈物もいくつか調製した。各希釈エグリンｃ溶液のアリコートを、等量のスブチリシン変異体溶液と混合した。混合溶液を室温で１５〜３０分インキュベートし、次いで各サンプルのプロテアーゼ活性をＡＡＰＦアッセイにより測定した。各エグリンｃサンプル及び既知の濃度のエグリンｃの添加に基づくプロテアーゼ活性の減少を観察することで、各スブチリシン酵素変異体を完全に阻害するのに必要とされるエグリンｃ濃度を算出した。この濃度はサンプル中の酵素濃度と等価である。同様に、エグリンｃを含まない、トリス／Ｃａ緩衝液のみのアリコートを各スブチリシン変異体サンプルと混合し、エグリンｃの非存在下でのプロテアーゼ活性をＡＡＰＦアッセイにより測定した。次いでスブチリシン変異体の比活性を、上記のように測定した酵素濃度を用い算出した。
ＢＭＩ微小標本アッセイ
血液ミルク及びインク（ＢＭＩ）染色した、直径５．５ミリメートルの円形微小標本（ＥＭＰＡ１１６）をＣＦＴから得た。一方法では、ＥＭＰＡ１１６ ＢＭＩ布を水で予めすすぎ、その後、裁断して、９６ウェルのマイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ ３６４１）中に１ウェルにつき１標本入れる。第二の方法では、ＥＭＰＡ１１６布を裁断して直接９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ ３６４１）に入れ、ここで、標本を水で２度すすぐ。更に２００μＬのミリＱ水を各ウェル／標本に加え、７に設定した卓上ミキサー（Ｌａｂ ｌｉｎｅ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、タイタープレート震盪機、４８２５型）で１５分にわたって混合することですすぎを行った。洗浄液を除去し、標本に再度２００μＬの水を加え、更に１５分すすぐ。洗浄水を除去し、次いで標本をマイクロタイタープレートで風乾させる。
洗剤組成物７〜１１を、ミリＱ（脱イオン）水で、表１−１に記載の最終的な使用濃度に希釈した。これらの洗剤を２ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ １０．３）で緩衝化させた。更に、表１−１に記載の最終濃度にするため、水硬度組成物（３：１ Ｃａ：Ｍｇ．−ＣａＣｌ２：ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ）を各洗剤溶液に添加した。洗剤溶液を室温で０．５時間〜２時間にわたって混合し、５０ｍＬのポリプロピレンコニカルチューブで３０００×ｇで５〜１０分遠心分離にかけ、３２℃アッセイのために室温で保持し、あるいは１６℃アッセイのためにアイスウォーターバスで予め平衡化した。次いで、ＢＭＩ微小標本を含有しているＭＴＰの各ウェルに１９０μＬの所望の洗剤溶液を添加した。この混合物に、希釈した酵素の希釈母液を５〜１５μＬ加え、反応時酵素濃度をおよそ０．２５〜２μｇ／ｍＬに調整した。濾過した培養上清から、約２．５〜２０μｇ／ｍＬの酵素の希釈母液を調製した（上記のＴＣＡアッセイを参照されたい）。ＭＴＰをテープでシールし、冷蔵庫で予め１６℃に設定したｉＥＭＳ恒温器／振盪機（Ｔｈｅｒｍｏ／Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ）に１４００ｒｐｍで撹拌しながら３０分間配置し、あるいは卓上に３２℃にて１４００ｒｐｍで撹拌しながら３０分間配置した。適切な条件下でインキュベートした後、各ウェルから溶液を１２０〜１２５μＬずつ新しいＭＴＰ（Ｃｏｒｎｉｎｇ ９０１７）に移した。１２５μＬの溶液／ウェルを含有させた新しいＭＴＰを、ＭＴＰ ＳｐｅｃｔｒａＭａｘリーダーを用い、６００ｎｍで（５秒混合モードのプレートリーダーにより）読み取りした。ブランク対照は微小標本及び洗剤は含有したが、酵素は含有しなかった。得られた吸光度値をブランク値（酵素を除く基質）について補正し、加水分解活性を測定した。各サンプル（変異体）に関し、性能指数を算出した。性能指数は、同じタンパク質濃度下で変異体性能（実測値）と標準酵素性能（理論値）とを比較する。加えて、理論値は、標準プロテアーゼの性能用量応答曲線（performance dose response curve）のパラメーターを用いて算出することができる。性能指数（ＰＩ）が１超（ＰＩ＞１）の場合は、標準（例えば、野生型）と比較したときに変異体がより良好なものであることが特定され、一方でＰＩが１（ＰＩ＝１）である場合は、変異体が標準と同様に機能することが特定され、及びＰＩが１未満（ＰＩ＜１）の場合は、変異体の働きが標準よりも悪いことが特定される。したがって、ＰＩは優れたプロテアーゼを特定し、並びに特定の状況下での使用が望ましくない変異体を特定する。
Figure 2016028571
ＬＡＳ／ＥＤＴＡ安定性アッセイ
代表的なアニオン性界面活性剤（ＬＡＳ＝直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、ドデシルベンゼン硫酸ナトリウムＤＯＢＳ）及びＥＤＴＡ二ナトリウムの存在下でのプロテアーゼ変異体の安定性を、所定の条件下でのインキュベーション後に測定し、上記ＡＡＰＦアッセイを用いて残効性を測定した。試薬は、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム塩（ＤＯＢＳ，Ｓｉｇｍａ Ｎｏ．Ｄ−２５２５）、ＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０（Ｓｉｇｍａ Ｎｏ．Ｐ−８０７４）、ＥＤＴＡ二ナトリウム（Ｓｉｅｇｆｒｉｅｄ Ｈａｎｄｅｌ Ｎｏ．１６４５９９−０２）、ＨＥＰＥＳ（Ｓｉｇｍａ Ｎｏ．Ｈ−７５２３）、未負荷緩衝液：５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（１１．９ｇ／Ｌ）＋０．００５％ ＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０（ｐＨ ８．０）、負荷緩衝液：５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（１１．９ｇ／Ｌ）、０．１％（ｗ／ｖ）ＤＯＢＳ（１ｇ／Ｌ）、１０ｍＭのＥＤＴＡ（３．３６ｇ／Ｌ）（ｐＨ ８．０）、参照プロテアーゼ及びプロテアーゼ変異体培養上清（２００〜４００μｇ／ｍＬのタンパク質を含有）を使用した。装置は、希釈プレートとしてＶ又はＵ底ＭＴＰ（それぞれＧｒｅｉｎｅｒ ６５１１０１及び６５０１６１）、未負荷及びＬＡＳ／ＥＤＴＡ緩衝液用平底ＭＴＰ（Ｃｏｒｎｉｎｇ ９０１７）、並びにｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡプレート、Ｂｉｏｍｅｋ ＦＸ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ Ｐｌｕｓ ３８４ＭＴＰリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）及びｉＥＭＳ恒温器／振盪機（Ｔｈｅｒｍｏ Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用した。
ｉＥＭＳ恒温器／振盪機（Ｔｈｅｒｍｏ／Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ）は２９℃に設定する。培養上清を、未負荷緩衝液を含有しているプレートで約２５ｐｐｍ濃度に希釈した（マスター希釈プレート）。アッセイのため、マスター希釈プレートから、２０μＬのサンプルを、１８０μＬの未負荷緩衝液を含有しているプレートに加え、最終インキュベーション濃度２．５ｐｐｍを得た。含有物を混合し、室温で維持し、このプレートでＡＡＰＦアッセイを実施した。加えて、マスター希釈プレートから、２０μＬのサンプルを、１８０μＬ負荷緩衝液（５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（１１．９ｇ／Ｌ）、０．１％（ｗ／ｖ）ＤＯＢＳ（１ｇ／Ｌ）、１０ｍＭのＥＤＴＡ（３．３６ｇ／Ｌ）（ｐＨ ８．０））を含有しているプレートに加えた。溶液を混合し、直ちに、２９℃のｉＥＭＳ震盪機に４００ｒｐｍで３０分間配置した。３０分インキュベーションした後、ＡＡＰＦアッセイを負荷プレートで実施した。次のように残留及び開始ＡＡＰＦ比を算出することにより、サンプルの安定性を測定した：残効性（％）＝［ｍＯＤ．ｍｉｎ−１ストレス負荷］＊１００／［ｍＯＤ．ｍｉｎ−１ストレス未負荷］。
最終的な洗剤、水硬度及び緩衝液濃度は、使用したアッセイ系に基づいて決定した（例えば、北アメリカ、日本、西ヨーロッパ又は中央ヨーロッパ条件）。一部の態様では、プロテアーゼ変異体のシミ除去性能は、市販の洗剤で判定される。市販の洗剤配合物の加熱不活性化は、任意のタンパク質成分の酵素活性を破壊しつつ、非酵素成分の特性は保持する。したがって、この方法は、本発明の酵素変異体の試験に使用するために、市販の洗剤を調製するのに好適である。
卵を焼付けた微小標本アッセイ
このアッセイに関し、鶏卵黄を用い、卵黄を焼き付けた９６ウェルの基材プレートを調製する。鶏卵黄を白身から取り分け、膜嚢から出し、ミリＱ水で２０％（体積／重量）に希釈した。希釈した黄身を、電磁撹拌器を用い室温で１５分にわたって撹拌する。８チャンネルのピペットを用い、９６ウェルのＶ底プレート（Ｃｏｓｔａｒ＃３８９４）の各ウェルの中央に、注意深く５μＬずつ分取する。プレートを９０℃で１時間にわたって焼付け、室温に放冷する。卵黄基材を焼き付けたプレートを室温で保管し、調製の一週間以内に使用した。自動食器洗浄用洗剤を本明細書に記載のように調製し、５０℃に予熱する。８チャンネルのピペットを用い、洗剤の１９０μＬのアリコートを９６ウェルプレートの各ウェルに加える。９６チャンネルのピペット装置を用い、希釈酵素を各ウェルに１０μＬ加える。接着箔シーラーによりプレートを注意深くシールし、５０℃で３０分にわたって振盪した。１２０μＬの反応混合物を新しい９６ウェル平底プレートに移し、４０５ｎｍで吸光度／光散乱を測定した。４０５ｎｍでの吸光度／光散乱は、卵黄除去度に比例する。
卵黄微小標本アッセイ（「ＣＳ−３８微小標本アッセイ」；あるいは「卵」又は「食器」）
自動食器洗浄用洗剤を本明細書に記載のように調製する。使用する装置としては、Ｎｅｗ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ Ｉｎｎｏｖａ ４２３０振盪機／恒温機及びＳｐｅｃｔｒａＭＡＸ（３４０型）ＭＴＰ読み取り機が挙げられる。ＭＴＰは、Ｃｏｓｔａｒ（９０１７型）から入手する。色素を加えた時効処理卵黄標本（ＣＳ−３８）をＣｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｅｓｔ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ（Ｖｌａａｒｄｉｎｇｅｎ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）から入手する。０．２５インチ（０．６４ｃｍ）の微小標本に裁断する前に、布地を水で洗浄する。９６ウェルマイクロタイタープレートの各ウェルに微小標本を１つずつ配置する。試験洗剤を５０℃にて平衡化させる。微小標本を含有しているＭＴＰの各ウェルに１９０μＬの所望の洗剤溶液を添加する。この混合物に１０μＬの希釈酵素溶液を添加する。ＭＴＰを接着箔でシールし、撹拌しながら３０分間インキュベーターに配置する。インキュベーションに続いて、各ウェルから１００μＬの溶液を新たなＭＴＰに移す。このＭＴＰを、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ ＭＴＰ読み取り機を用いて、４０５ｎｍにて読み取りする。ブランク対照、並びに微小標本及び洗剤を含有しているが酵素は含有しない対照も包含させた。
一部の態様では、予め洗浄した微小標本が使用を見出される。この種類の微小標本は、周囲温度で、脱イオン水により２０分にわたって前洗浄する。前洗浄工程後、標本を紙タオルの上に置き乾燥させる。次いで、空気乾燥させた標本を、排出プレス機（expulsion preβ）で１／４”円形ダイを用い、切り出す。最終的には２つの微小標本を、表面積全体を曝露させるために９６ウェルＭＴＰの各ウェルに垂直に配置する（すなわち、ウェルの底に平らに配置することはない）。
試験するプロテアーゼ変異体のサンプルを、ＭＴＰプレートで増殖させた培養物の培養ブロスの濾過物から得る。装置は以下のものを使用する：Ｂｉｏｍｅｋ ＦＸロボット（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）、ＳｐｅｃｔｒａＭＡＸ ＭＴＰリーダー（３４０型、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）、ｉＥＭＳ恒温器／振盪機（Ｔｈｅｒｍｏ／Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ）、平底ＭＴＰ（Ｃｏｓｔａｒ ９０１７型、インキュベート後に反応プレートを読み取るために使用）、並びにＶ底ＭＴＰ（Ｇｒｅｉｎｅｒ ６５１１０１、上清の前希釈に使用）。本アッセイにおいて、プロテアーゼは基質及び遊離顔料及び基質由来の不溶性粒子を加水分解する。したがって、濁度の変化率は酵素活性の尺度を示す。
微小標本に対する、参照セリンプロテアーゼ及びセリンプロテアーゼ変異体のシミ除去性能を、市販の洗剤（Ｃａｌｇｏｎｉｔ ５ ｉｎ１）で、ＭＴＰスケールで測定する。ＣＦＴ Ｖｌａａｒｄｉｎｇｅｎから入手したＣＳ−３８微小標本（色素を含む卵黄、加熱により時効処理）を基質として使用する。１ウェルにつき２つの標本を用いる。Ｃａｌｇｏｎｉｔ ５ｉｎ１からのＡＤＷタブレットを使用して、洗剤溶液を調製する。タブレット中に存在するプロテアーゼ活性を不活性化するために、２１ｇのタブレットを、ウォーターバス内で６０℃の温度に加熱したミリＱ水に溶解させる。溶液を室温に冷却し、水の容量を７００ｍＬに調整する。溶液を更に水で希釈して、３ｇ／Ｌの最終濃度を得る。１．４６ｍＬのＣａ／Ｍｇ混合物（Ｃａ／Ｍｇ混合物［（３：１）、１．９２ＭのＣａＣｌ２＝２８２．３ｇ／ＬのＣａＣｌ２．２Ｈ２０；０．６４ＭのＭｇＣｌ２＝１３０．１ｇ／ＬのＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ）、１５０００ｇｐｇ］を添加することにより、水硬度を２１°ＧＨに調整する。酵素サンプルを１０ｍＭのＮａＣｌ、０．１ｍＭのＣａＣｌ２、０．００５％のＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０溶液中に予め希釈し、適切な濃度で試験する。
恒温機を所望温度５０℃に設定する。７２μＬの希釈緩衝液を空のＶ底プレート（すなわち、「希釈プレート」）に添加し、その後、８μＬの上清を得る。希釈プレートから９μＬを、１７１μＬの希釈溶液中でインキュベートされた微小標本を含有するプレートに添加する。希釈プレートから９μＬを、微小標本を含有するプレートに添加して、総希釈率２００Ｘの上清を得る。微小標本プレート（洗剤及び酵素を有する）をテープで覆い、恒温機／振盪機内に３０分にわたって１４００ｒｐｍで配置する。インキュベーション後、７５μＬの反応混合物を空のＦ底プレートに移し、ヘアドライヤーで脱泡した後に、ＭＴＰ読み取り機で４０５ｎｍにて吸光度を読み取る。微小標本を１又は２つと、参照プロテアーゼ含有サンプルを添加していない洗剤と、を含有するブランク対照も試験に包含する。
得られた吸光度値をブランク値（酵素を除く基質）について補正し、加水分解活性を測定する。各サンプル（変異体）に関し、性能指数を算出する。性能指数は、同様のタンパク質濃度下で変異体性能（実測値）と標準酵素性能（理論値）とを比較する。加えて、標準酵素のＬａｎｇｍｕｉｒ等式のパラメーターを用いることで、理論値が算出できる。
ステンレス鋼上の卵黄シミ
これらの実験に使用されるステンレス鋼シート（１０×１５ｃｍ、片面ブラッシング処理）を、高アルカリ性の市販の洗剤（例えば、ＥＣＯＬＡＢ（登録商標）洗剤、Ｈｅｎｋｅｌを用）いてラボラトリー食器洗浄機で９５℃にて十分に洗浄して、きれいでグリースのないシートを得る。第一回目の使用に先立って、これらのシートは、まくれを取り除いておく。シートを熱キャビネットにおいて８０℃にて３０分にわたって乾燥させ、その後、卵黄で汚す。ブラッシング処理される表面は、汚れを付ける前には触れない。また、表面上にいかなる水シミ又は毛羽立ちも許容しない。冷却したシートを汚れを付ける前に計量する。
およそ１０〜１１個の卵の卵黄（２００ｇの卵黄）を卵白から分離することにより、卵黄を調製する。卵黄をガラスビーカーの中でフォークで撹拌して、卵黄懸濁液を均質化する。次に、卵黄を裏漉し（およそ０．５ｍｍのメッシュ）して、粗い粒子及びあらゆる卵殻片を除去する。
平らなブラシ（２．５”（６．４ｃｍ））を使用して、汚れをつけていない約１ｃｍ幅の周縁部を残して（必要であれば接着テープを使用する）、ステンレス鋼シートのブラッシング処理するそれぞれの面上の１４０ｃｍ２の面積にわたって、可能な限り均質に１．０±０．１ｇ卵黄懸濁液を塗布する。汚れの付いたシートを水平にして（シートの周縁部上に液滴が形成するのを防止するために）、室温にて４時間（最大２４時間）にわたって乾燥させる。
変性させるために、沸騰している脱塩水の中にシートを３０秒にわたって浸漬させる（必要であれば、把持装置を用いる）。次に、シートを８０℃にて３０分にわたって再び乾燥させる。乾燥及び冷却後、シートを計量する。計量後、シートを少なくとも２４時間にわたって（２０℃、４０〜６０％の相対湿度）置いておき、その後、これらを洗浄試験にかける。試験要件を満たすように、５００±１００ｍｇ／１４０ｃｍ２（変性後の卵黄）を有するシートのみを試験に用いる。洗浄試験を行った後、シートを熱キャビネット内で８０℃にて３０分にわたって乾燥させ、冷却後再び計量する。（洗浄により剥離した卵黄のｍｇ×１００）を（変性した塗布済み卵黄のｍｇ）で除算することにより、洗浄性能パーセントを決定する。
磁器プレート上の挽肉
これらの実験のために、ＥＮ ５０２４２、基準１４９５、第０２１９に従う直径１９ｃｍのデザート皿（Ａｒｚｂｅｒｇ、白色施釉磁器）を使用する。豚肉及び牛肉（半分ずつ）の赤身２２５ｇを、目に見える脂肪を除去した後に細かく刻み、冷却する。この混合物を肉挽き機に２回かける。温度が３５℃以上に上昇させることは避ける。次に、２２５ｇの挽肉を７５ｇの卵（卵白及び卵黄は一緒に混合した）と共に混合する。調製物を、使用に先立って、最大三カ月−１８℃にて冷凍する。豚肉が入手できない場合には、牛肉を使用する。
挽肉と卵の混合物（３００ｇ）を室温に上昇させ、８０ｍＬの合成水と共に混合する。次に、２分にわたってキッチンハンドミキサーを用いてこの混合物を均質化する。次に、フォークを使用して、周縁部付近の約２ｃｍ幅の汚れのない辺縁を残して、３ｇの挽肉／卵／水混合物を各白色磁器プレート上に広げる。塗布される量は、１１．８±０．５ｍｇ／ｃｍ２である。プレートを予熱した熱キャビネット内で１２０℃にて２時間にわたってプレートを乾燥させた。プレートは冷却されればすぐに使用可能である。プレートは、各プレート間に紙タオルを挟んで積み重ねる。
洗浄後、挽肉の残渣の同定を良好に行うために、プレートにニンヒドリン溶液（１％エタノール）を噴霧する。色反応を促進するために、プレートを熱キャビネットにおいて８０℃にて１０分にわたって加熱する。ＩＫＷ写真カタログ（ＩＫＷ）を参照しながら挽肉残渣の色反応を目視することにより、洗浄性能の評価を行う。
ステンレス鋼上の卵／ミルクシミ
これらの実験に使用されるステンレス鋼シート（１０×１５ｃｍ、片面ブラッシング処理）を、高アルカリ性の市販の洗剤を用いてラボラトリー食器洗浄機で９５℃にて十分に洗浄して、グリースを除去してシートをクリーニングする。シートをセルロース布で磨き、乾燥させる。ブラッシング処理される表面は、汚れを付ける前には触れない。また、表面上にいかなる水シミ又は毛羽立ちも許容しない。汚れを付ける前に、シートを熱キャビネット内に８０℃にて３０分にわたって置いておく。汚れを付ける前に冷却したシートを計量する。
生の全卵の卵黄及び卵白（３〜４個の卵、１６０ｇ／卵）をボウル内に配置し、卵泡立て器で叩く。次に、５０ｍＬの準脱脂ＵＨＴ（１．５％脂肪分、超高温、均質化）ミルクを混合物に添加する。ミルク及び卵を泡が生じないように混合する。平坦なブラシを使用して、ステンレス鋼シートのブラッシング処理された面に１．０ｇ±０．１ｇの卵／ミルク混合物を均一に分布させ、均一に塗れたか秤を用いて確かめる。およそ１．０ｃｍの周辺部をシートの短辺の周りに残す。汚れの付いたシートを水平にして（シートの周縁部上に液滴が形成するのを防止するために）、室温にて４時間（最大２４時間）にわたって乾燥させる。
次に、シートを沸騰している脱塩水の中に３０秒にわたって浸漬させる（必要であれば、把持装置を用いる）。次に、シートを８０℃にて３０分にわたって再び乾燥させる。乾燥及び冷却後、シートを計量する。計量後、シートを少なくとも２４時間にわたって（２０℃、４０〜６０％の相対湿度）置いておき、その後、これらを洗浄試験にかける。試験要件を満たすように、１９０±１０ｍｇの卵黄の付いたシートのみを使用する。
洗浄試験を行った後、シートを熱キャビネット内で８０℃にて３０分にわたって乾燥させ、冷却後再び計量する。（洗浄により剥離した卵／ミルクのｍｇ×１００）を（塗布済み卵／ミルクのｍｇ）で除算することにより、洗浄性能百分率を決定する。
磁器プレート上のスパゲッティ混合ジミの調製
パスタソース（３９０ｇ）を１５０ｇのゆでたスパゲッティパスタ、２５ｇの挽肉（改善されたＩＫＷ組成−２２５グラムの無脂肪挽肉及び７５グラム卵黄）並びに５０ｇのＧｒｏｚｅｔｔｅ Ｆｏｒｍａｇｇｉｏチーズと混合する。スプーンを使用して、周縁部付近の約２ｃｍ幅の汚れのない辺縁を残して、この混合物３ｇを各白色磁器プレート（Ａｒｚｂｅｒｇ、直径１９ｃｍ、白色、施釉磁器、ＥＮ ５０２４２、基準１４９５、第０２１９に従う）上に広げる。これらをオーブン内で１２０℃にて２時間にわたって焼くことにより、プレートを乾燥させる。プレートは冷却されればすぐに使用可能である。プレートは、保管する際各プレート間に紙タオルを挟んで積み重ねる。洗浄後、炭水化物残渣の同定を良好に行うために、プレートにヨウ素溶液（０．０５Ｎ）を噴霧する。ＩＫＷ写真カタログ（ＩＫＷ）を参照しながら炭水化物残渣の色反応を目視することにより、洗浄性能の評価を行い、０〜１０の尺度で評価する（１０がきれいである）。
性能指数
性能指数は、同じタンパク質濃度下で変異体性能（実測値）と標準酵素性能（理論値）とを比較する。加えて、理論値は、標準プロテアーゼの性能用量応答曲線（performance dose response curve）のパラメーターを用いて算出することができる。以下に示される様々な用語は変異体を記載するために使用される：有害でない変異体はＰＩ＞０．０５であり、有害な変異体はＰＩ＝０．０５であり、組み合わせ可能な変異体は少なくとも１つの特性について性能指数が０．２以上であり、かつすべての特性について＞０．０５である変異体である。組み合わせ可能な変異体は、１つ以上の所望の特性について適切な性能指数を有する送達タンパク質と組み合わせることができる。これらのデータは、任意のスブチリシン／サブチラーゼを設計するために使用される。サブチラーゼが、特定の位置でスブチリシンＧＧ３６と異なるアミノ酸を有するように設計された場合でさえも、これらのデータは、ＧＧ３６野生型のアミノ酸の置換を含む最良の置換の選択を特定することにより、所望の特性を変更する置換を発見するのに使用される。
（実施例２）
部位評価ライブラリ（ＳＥＬ）を用いるＧＧ３６単独変異体の生産
本実施例に記載のＧＧ３６ＳＥＬの構築は、その適切な方法、並びに遺伝子最適化、遺伝子合成、ライブラリ作成、及び解析のための技術基盤を用いＧＥＮＥＡＲＴにより実施された（国際公開第２００４／０５９５５６（Ａ３）号、欧州特許番号第０ ２００ ３６２号及び同第０ ２０１ １８４号、並びに米国特許第４，６８３，１９５号、同第４，６８３，２０２号及び同第６，４７２，１８４号）。ＧＧ３６ ＳＥＬは、枯草菌（B. subtilis）発現プラスミドｐＨＰＬＴ−ＧＧ３６（図６を参照）を用い、本発明者らにより予め選択された位置で作成した。この枯草菌（B. subtilis）発現プラスミドは、以下に示すＧＧ３６発現カセットを含有する：バチルス・リケニホルミス（B. licheniformis）のＬＡＴプロモーター（Ｐｌａｔ）、並びにレプリカーゼ遺伝子（ｒｅｐｐＵＢ）、ネオマイシン／カナマイシン耐性遺伝子（ｎｅｏ）及びブレオマイシン耐性マーカー（ｂｌｅｏ）が挙げられる、ｐＵＢ１１０由来の更なる要素（ＭｃＫｅｎｚｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｓｍｉｄ，１５：９３〜１０３，１９８６）（米国特許第６，５６６，１１２号、図４）。ｐＨＰＬＴ−ＧＧ３６プラスミドマップを図６に提供する。ＧＧ３６発現カセット配列は以下に提供されるものである。
ＧＧ３６のＤＮＡ配列（シグナル配列は小文字で示され、プロペプチドは下線の引かれている小文字で示され、及びＧＧ３６成熟配列は大文字で示される）は以下に提供されるものである：
配列表３
Figure 2016028571
ＧＧ３６のタンパク質配列（シグナル配列は小文字で示され、プロペプチドは下線の引かれている小文字で示され、及びＧＧ３６成熟型プロテアーゼ配列は大文字で示される）は以下に提供されるものである：
配列表４
Figure 2016028571
変異誘発の方法は、所望の部位に縮重コドン、ＮＮＳ（（Ａ、Ｃ、Ｔ又はＧ）、（Ａ、Ｃ、Ｔ又はＧ）、（Ｃ又はＧ））を含有する順方向及び逆方向変異原性プライマーを用い、所望の特定のコドンにすべての可能なアミノ酸置換を同時に生成する、コドン特異的な変異法に基づくものであった。各ＧＧ３６ ＳＥＬを構築するために、３種のＰＣＲ反応を実施した：２種の変異誘発反応（一次ＰＣＲ１及びＰＣＲ２）では、ＮＮＳ順方向及び逆方向変異原性プライマー（２５〜４５ヌクレオチド長）を用い、成熟ＧＧ３６ＤＮＡ配列中に所望の成熟コドンを導入し、第三の反応では２つの変異誘発ＰＣＲ産物を一緒に融合させて、成熟ＧＧ３６配列中に所望の変異コドンを有するｐＨＰＬＴ−ＧＧ３６発現ベクターを構築する。
本実施例で使用されるプライマー配列は以下に提供されるものである：
Figure 2016028571
すべてのＰＣＲにＰｈｕｓｉｏｎ Ｈｉｇｈ−Ｆｉｄｅｌｉｔｙ ＤＮＡポリメラーゼ（Ｆｉｎｎｚｙｍｅｓカタログ番号Ｆ−５３０Ｌ）を使用し、ポリメラーゼを供給している製造元のプロトコルに従い反応を実施した。具体的には、一次ＰＣＲ１では、１μＬ（１０μＭ）の各ｐＨＰＬＴ−ＢｇｌＩＩ−Ｆｗプライマー及びＮＮＳ逆方向変異原性プライマーを使用し、一次ＰＣＲ２では、１μＬ（１０μＭ）のｐＨＰＬＴ−ＢｇｌＩＩ−Ｒｖプライマー及びＮＮＳ順方向変異導入プライマーを使用した。また、各反応には、１μＬのｐＨＰＬＴ−ＧＧ３６プラスミドテンプレートＤＮＡ（０．１〜１ｎｇ／μＬ）を含んだ。ＰＣＲには、ＭＪ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＰＴＣ−２００ Ｐｅｌｔｉｅｒ ｔｈｅｒｍａｌ ｃｙｃｌｅｒを使用した。この反応は、対象とするＧＧ３６コドン挟んでおよそ３０ヌクレオチドが重複している、およそ２〜３ｋｂの断片を２種生成した。得られた断片を、１μＬの一次ＰＣＲ１反応混合物、１μＬの一次ＰＣＲ２反応混合物、及び１μＬ（１０μＭ）の各順方向及び逆方向ＳａｃＩ−Ｆｗ及びＨｉｎｄＩＩＩ−Ｒｖプライマーを用い、上記のものと同様の第三ＰＣＲで融合させた。ＧＧ３６変異体遺伝子をコードしている、増幅させた線状の８５９ｂｐの断片を精製し（ＱＩＡＧＥＮ（登録商標）Ｑｉａｑｕｉｃｋ ＰＣＲ精製キットを用いた）、ＳａｃＩ及びＨｉｎｄＩＩＩＩ制限酵素で消化して融合断片の両端に接着端を作製した。ＳａｃＩ及びＨｉｎｄＩＩＩＩで消化した後に、約５０ｎｇのプラスミドｐＨＰＬＴ−ＧＧ３６も精製し、３．９ｋｂのベクター主鎖断片を得た。接着端をクローニングするための製造元のプロトコルに従い、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用い、消化したベクター断片を、変異体酵素をコードしている消化した８５９ｂｐ断片５０ｎｇとライゲーションした。続いて、ライゲーション混合物を使用して枯草菌（B. subtilis）細胞を国際公開第２００２／０１４４９０号に記載のように形質転換した（ΔａｐｒＥ，ΔｎｐｒＥ，ｏｐｐＡ，ΔｓｐｏＩＩＥ，ｄｅｇＵＨｙ３２，ΔａｍｙＥ：：［ｘｙｌＲ，ｐｘｙｌＡ−ｃｏｍＫ］）。
更なる生化学的解析のために変異体タンパク質を発現させるべく、ＧＧ３６変異体プラスミドを保持している枯草菌（B. subtilis）株を、１０μｇ／ｍＬのネオマイシンを添加した１５０μＬのルリアブロス培地を含有しているマイクロタイタープレートに接種した。マイクロタイタープレートにＥｎｚｙｓｃｒｅｅｎ ｌｉｄ（Ｅｎｚｙｓｃｒｅｅｎ）を用い、プレートを３７℃、８０％湿度にて、３００ｒｐｍで振盪させながら一晩増殖させた。１０μｇ／ｍＬのネオマイシンを添加した１９０μＬのＭＢＤ培地（ＭＯＰＳ系合成培地）を含有している新しいマイクロタイタープレートに、一晩培養プレートから１０マイクロリットル接種した。ＮＨ４Ｃｌ２、ＦｅＳＯ４、及びＣａＣｌ２を基本培地から除外したこと、３ｍＭのＫ２ＨＰＯ４を用いたこと、並びに、６０ｍＭの尿素、及び、２１０ｇ／Ｌのグルコースと３５０ｇ／Ｌマルトデキストリンとから作製した１００ｍＬの溶液を含有させたこと、を除き、ＭＢＤ培地は本質的に当該技術分野において既知であるように調製した（Ｎｅｉｄｈａｒｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１１９：７３６〜７４７［１９７４］を参照されたい）。微量栄養素は、４００ｍｇのＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、１００ｍｇのＭｎＳＯ４・Ｈ２Ｏ、１００ｍｇのＺｎＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、５０ｍｇのＣｕＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、１００ｍｇのＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、１００ｍｇのＮａＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ、１００ｍｇのＮａ２Ｂ４Ｏ７・１０Ｈ２Ｏ、１０ｍＬの１ＭのＣａＣｌ２、及び１０ｍＬの０．５Ｍのクエン酸ナトリウムを１リットル中に含有している、１００Ｘ原液として調製した。タンパク質発現を測定するために、Ｅｎｚｙｓｃｒｅｅｎ ｌｉｄｓ（Ｅｎｚｙｓｃｒｅｅｎ）を用いて、ＭＢＤ培地を含有しているマイクロタイタープレートで、３７℃、８０％湿度にて、３００ｒｐｍで、６８時間にわたって増殖させた。翌日、培養物をマイクロフィルタプレート（０．２２μｍ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で濾過し、得られた濾液を生化学的解析に使用した。洗剤組成物７〜１１のＴＣＡ及びＢＭＩ微小標本アッセイを、実施例１に記載のように実施した。性能指数も、実施例１記載のＢＭＩアッセイに記載のように算出した。これらは、表２−２中でＧＧ３６と比較して示される。以下の表中で、洗剤組成物は、上記表Ｄに示されるものと対応する。同様に、記載のように、アミノ酸位置はＢＰＮ’の番号付けに従って列挙される。
Figure 2016028571
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
Figure 2016028571
（実施例３）
ＧＧ３６変異体のＮＨＪ１及びＷＣＥ１のセットの構築及びクリーニング性能
本明細書に記載の、上記の枯草菌（B. subtilis）発現プラスミドｐＨＰＬＴ−ＧＧ３６（図６）を用い、ＧＧ３６変異体のＮＨＪ１及びＷＣＥ１セットをＤＮＡ２．０により構築した。変異体を実施例２に記載のように枯草菌（B. subtilis）細胞で発現させ（遺伝子型：ΔａｐｒＥ，ΔｎｐｒＥ，ａｍｙＥ：：ｘｙｌＲＰｘｙｌＡｃｏｍＫ−ｐｈｌｅｏ）、更に、実施例１に記載のようにタンパク質含量を測定するためのＴＣＡアッセイ、ＬＡＳ／ＥＤＴＡ安定性アッセイ、及びＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイを用いて特徴付けした。結果を表３−１及び３−２に示す。以下の表中で、洗剤組成物は、上記表Ｄに示されるものと対応する。同様に、記載のように、アミノ酸位置はＢＰＮ’の番号付けに従って列挙される。
Figure 2016028571
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
Figure 2016028571
（上記表の続き）
（実施例４）
ＧＧ３６変異体のＮＨＪ４セットの構築及びクリーニング性能
下表４−４に記載のＧＧ３６変異体のＮＨＪ４セットを、以下に記載するように、融合ＰＣＲ又はＱＵＩＫＣＨＡＮＧＥ（登録商標）Ｍｕｌｔｉ Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ Ｋｉｔ（「ＱＣＭＳキット」、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を使用し、枯草菌（B. subtilis）発現プラスミドｐＨＰＬＴ−ＧＧ３６（図６）を用い構築した。
ａ）ＱＵＩＫＣＨＡＮＧＥ（登録商標）Ｍｕｌｔｉ Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓによる、ＮＨＪ４変異体の構築
ＱＵＩＫＣＨＡＮＧＥ（登録商標）Ｍｕｌｔｉ Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓを用いて生成した変異体を表４−１に示す。製造元からの取扱説明書に従って、２マイクログラムのＤＮＡ及びＤａｍメチラーゼ（ＮＥＢ）を用い、親プラスミドｐＨＰＬＴ−ＧＧ３６（テンプレートＤＮＡ）をメチル化した。部位特異的な変異体を、製造元のプロトコルに従って、ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ（登録商標）Ｍｕｌｔｉ Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ Ｋｉｔ（「ＱＣＭＳキット」、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）により作成した。以下の変異を親プラスミドに導入した：Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ，Ｇ１５９Ｅ，Ｔ２２Ａ，Ｙ２０９Ｅ，Ｅ２７１Ｆ，Ｓ１０１Ａ，Ｓ１０３Ｇ，Ｌ１１１Ｖ，Ｓ１２８Ｎ，Ｎ６２Ｅ，及びＳ１８８Ｄ，。枯草菌（B. subtilis）を効率的に形質転換するため、Ｉｌｌｕｓｔｒａ Ｔｅｍｐｌｉｐｈｉキット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用い、ローリング・サークル型増幅（ＲＣＡ）によりＱＣＭＳ反応混合物からＤＮＡを増幅させ、製造元のプロトコルに従い反応を実施した。１マイクロリットルの、１０倍希釈した増幅ＤＮＡを使用して、コンピテントな枯草菌（B. subtilis）細胞（遺伝子型：ΔａｐｒＥ，ΔｎｐｒＥ，ａｍｙＥ：：ｘｙｌＲＰｘｙｌＡｃｏｍＫ−ｐｈｌｅｏ）５０μＬを形質転換させた。形質転換混合物を３７℃にて１時間にわたって振盪した。形質転換混合物の１０マイクロリットルアリコートを、１０μｇ／ｍＬのネオマイシン（Ｔｅｋｎｏｖａ）を添加したスキムミルク（１．６％）Ｌｕｒｉａ寒天プレートに蒔いた。続いて、プラスミドＤＮＡを抽出するため（ＱＩＡｐｒｅｐ Ｓｐｉｎミニプレップキット、Ｑｉａｇｅｎ）、ハローを生じたコロニーを１０μｇ／ｍＬのネオマイシンを含有している１２０μＬのＬＢ培地に接種した。抽出したプラスミドを配列決定して、所望の変異が存在しているか確認した。
ｂ）伸長ＰＣＲによるＮＨＪ４変異体の構築
伸長ＰＣＲにより、ＧＧ３６のコンビナトリアル変異体を１０種作成した。ｐＨＰＬＴプラスミドに含有させたＧＧ３６遺伝子に導入した変異のリストは、Ｔ２２Ａ，Ｎ６２Ｅ，Ｓ１０３Ｇ，Ｓ１０３Ｇ−Ｌ１１１Ｖ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ，Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ，Ｓ１０１Ａ，Ｓ１２８Ｎ，Ｇ１５９Ｄ，Ｇ１５９Ｅ，Ｙ２０９Ｅ，及びＬ１１１Ｖであった。各変異を生成するために、変異原性プライマー並びに順方向及び逆方向プライマーを用い、所望の変異を含有しているＰＣＲ断片を増幅させることでＧＧ３６変異体全体を増幅させた。各ＰＣＲ増幅反応物には、３０ｐｍｏｌの各変異原性プライマー及び１００ｎｇのＤＮＡテンプレート、ｐＨＰＬＴ−ＧＧ３６プラスミドを含有させた。増幅はＶｅｎｔ ＤＮＡポリメラーゼ（ＮＥＢ）を用いて実施した。ＰＣＲ反応（２０μＬ）は、まず始めに９５℃で２．５分加熱した後、続いて９４℃で１５秒の変性、５５℃で１５秒のアニーリング、及び７２℃で１分の伸長を３０サイクル行った。増幅させた後、各変異体につき２〜４種のＰＣＲ断片をＱＩＡＧＥＮ（登録商標）ゲルバンド精製用キットを用いゲル精製し、混合した（各断片につき５０ｎｇ）。これらの混合物は、完全長の遺伝子フラグメントを生成するための伸長ＰＣＲ用のＤＮＡテンプレートとして用いた。伸長工程を７２℃で２分にわたって実施したことを除き、ＰＣＲ条件は上記の条件と同様のものであった。完全長のＤＮＡフラグメントをＱＩＡＧＥＮ（登録商標）ゲルバンド精製用キットを用いてゲル精製し、制限酵素ＢａｍＨＩ及びＨｉｎｄＩＩＩを用いて消化し、同様の制限酵素で消化したｐＨＰＬＴ−ＧＧ３６とライゲーションした。Ｉｌｌｕｓｔｒａ Ｔｅｍｐｌｉｐｈｉキットでローリング・サークル型増幅法を用い、１マイクロリットルのライゲーション混合物を製造元（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）からの取扱説明書に従って増幅させることで、枯草菌（Bacillus subtilis）に形質転換させるための多量体ＤＮＡを生成した。ローリング・サークル型増幅産物を１００倍希釈し、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ細胞の形質転換に用いた（遺伝子型：ΔａｐｒＥ，ΔｎｐｒＥ，ａｍｙＥ：：ｘｙｌＲＰｘｙｌＡｃｏｍＫ−ｐｈｌｅｏ）。形質転換混合物のアリコートを、１．６％のスキムミルク及び１０μｇ／ｍＬのネオマイシンを含有しているＬＢプレートに蒔き、３７℃で一晩インキュベートした。続いて、プラスミドＤＮＡを抽出するため（ＱＩＡｐｒｅｐ Ｓｐｉｎミニプレップキット、Ｑｉａｇｅｎ）、ハローを生じたコロニーを１０μｇ／ｍＬのネオマイシンを含有している１２０μＬのルリアブロス培地に接種した。抽出したプラスミドを配列決定して、所望の変異が存在しているか確認した。伸長ＰＣＲにより生成される変異体は、表４−１に示される。
更なる生化学的解析のためにＮＨＪ４セットの変異体タンパク質を発現させるべく、変異体プラスミドを保持している枯草菌（B. subtilis）株を、１０μｇ／ｍＬのネオマイシンを添加した１５０μＬのルリアブロス培地を含有しているマイクロタイタープレートに接種した。実施例２に記載のようにタンパク質を発現させるために培養物を増殖させ、培養物を実施例２に記載のようにマイクロタイタープレート（０．２２μｍ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で濾過した。得られた濾液を生化学的解析に使用した。様々な洗剤で試験した、タンパク質含量を測定するためのエグリンｃ阻害アッセイ及びＢＭＩ微小標本アッセイを、実施例１に記載されるように実施した。同様に、実施例１に記載のＢＭＩアッセイで記載されるように、性能指数も算出する。表４−１は、これらの多重変異体に関する情報、及びこれらに関し得られる結果を提供する。ＰＩ値はＧＧ３６に対するものである。以下の表中で、洗剤組成物は、上記表Ｄに示されるものと対応する。同様に、記載のように、アミノ酸位置はＢＰＮ’の番号付けに従って列挙される。
Figure 2016028571
（実施例５）
ＧＧ３６変異体のＮＨＪ３セットの構築及びクリーニング性能
本明細書に記載の変異体のＮＨＪ３セットは、次の変異：Ｓ１０１Ｇ，Ｓ１０３Ａ，Ｖ１０４Ｉ，Ｇ１５９Ｄ，Ａ２３２Ｖ，Ｑ２３６Ｈ，Ｑ２４５Ｒ，Ｎ２４８Ｄ，及びＮ２５２Ｋ（ＢＰＮ’番号付け）、を含有しているＧＧ３６の変異体（ＧＧ３６−９として参照）に基づく。これらの変異は、ＤＮＡテンプレートとしてｐＲＡ６８プラスミド（図７を参照）を使用し、ＱＵＩＫＣＨＡＮＧＥ（登録商標）Ｌｉｇｈｔｎｉｎｇ Ｍｕｌｔｉ Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ（ＱＣＬＤＳキット、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を用いることで生成した。プラスミドｐＲＡ６８は、ｐＢＮ３ベクター（Ｂａｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２７：１１７〜１２４［１９９８］を参照）から誘導した。
ＧＧ３６−９変異体のＤＮＡ配列（シグナル配列は小文字で示され、プロペプチドは下線の引かれている小文字で示され、及びＧＧ３６−９成熟配列は大文字で示される）は以下に提供されるものである：
配列表５
Figure 2016028571
ＧＧ３６−９変異体のタンパク質配列（シグナル配列は小文字で示され、プロペプチドは下線の引かれている小文字で示され、及びＧＧ３６−９成熟型プロテアーゼ配列は大文字で示される）は以下に提供されるものである：
配列表６
Figure 2016028571
ＱＣＬＳＤキットを用いてＮＨＪ３変異体を生成するために、製造元のプロトコルに従い、各変異体用に変異原性プライマーを設計した。各変異体のための変異誘発反応物は次のもの、０．５μＬの１０Ｘ緩衝液、０．５μＬのｐＲＡ６８プラスミドＤＮＡ（１６８ｎｇ／μＬ）、０．５μＬの順方向変異原性プライマー（２５μＭ）、０．５μＬの逆方向変異原性プライマー（２５μＭ）、１μＬのｄＮＴＰ（ＱＣＬＳＤキットに供給）、１．５μＬのＱｕｉｋ溶液（ＱＣＬＭＳキットに供給）、１μＬの酵素ブレンド（ＱＣＬＳＤキットに供給）、及び４０μＬの滅菌脱イオン水からなっており、製造元の取扱説明書の通りに反応容量５０μＬになるよう作製した。サイクルプログラムは次の通りであった：９５℃で２分を１サイクル、９５℃で２０秒、６０℃で１０秒及び６８℃で３分２２秒を１８サイクル、並びに６８℃で５分間の最終サイクルであった。次に、キットに供給されている１μＬのＤｐｎＩ制限酵素を使用して反応物中のプラスミドＤＮＡを消化し、次に２μＬの反応物を使用して上位１０位の大腸菌（E. coli）コンピテント細胞（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ）を形質転換した。３７℃で一晩増殖させた後、５０μｇ／ｍＬ（ｐｐｍ）カルベニシリンを含有しているルリアブロス培地プレート上で大腸菌（E. coli）形質転換体を選択した。ＱＩＡｐｒｅｐ ｓｐｉｎミニプレップキット（Ｑｉａｇｅｎ）を用い、５０μｇ／ｍＬ（ｐｐｍ）カルベニシリンを含有しているＬＡ培地で増殖させた４〜８個の大腸菌（E. coli）コロニーからプラスミドＤＮＡを抽出した。プラスミドを配列決定して、所望の変異が存在しているか確認した。次いで実施例２に記載のように枯草菌（B. subtilis）細胞を変異体プラスミドで形質転換した。エグリンｃ阻害アッセイ（実施例１）及びＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイ（実施例１）を用いタンパク質含量を決定するなどといった、更なる生化学的解析を行うため、実施例２に記載のように枯草菌（B. subtilis）変異体株を増殖させた。結果を下表５−１及び５−２に提供する。ＰＩはＧＧ３６と比較した値である。以下の表中で、洗剤組成物は、上記表Ｄに示されるものと対応する。同様に、記載のように、アミノ酸位置はＢＰＮ’の番号付けに従って列挙される。
Figure 2016028571
Figure 2016028571
（実施例６）
ＧＧ３６変異体のＮＨＪ５セットの構築及びクリーニング性能
本明細書に記載の変異体のＮＨＪ５セットは、次の変異：Ｓ１０１Ｇ，Ｓ１０３Ａ，Ｖ１０４Ｉ，Ｇ１５９Ｄ，Ａ２３２Ｖ，Ｑ２４５Ｒ，Ｎ２４８Ｄ，及び（ＢＰＮ’番号付け）、を含有しているＧＧ３６の変異体（ＧＧ３６−７として参照）に基づく。ｐＲＡ９６プラスミド（図８を参照）をＤＮＡテンプレートとして使用し、部位特異的な変異導入キットＱＵＩＫＣＨＡＮＧＥ（登録商標）Ｌｉｇｈｔｎｉｎｇ Ｍｕｌｔｉ Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ Ｋｉｔ（ＱＣＬＭＳキット）を用いることで、これらの変異を生成した。組み込まれた変異としては、Ｈ２４３Ｒ（Ｈ２４９Ｒ）、Ｅ２６５Ｆ（Ｅ２７１Ｆ）、Ｄ１５７Ｅ（Ｄ１５９Ｅ）、Ａ１５６Ｅ（Ａ１５８Ｅ）、Ａ１５６Ｅ−Ｄ１５７Ｇ（Ａ１５８Ｅ−Ｄ１５９Ｅ）、Ｔ２２Ａ，Ｎ６０Ｅ（Ｎ６２Ｅ）、Ｎ２３２Ｒ（Ｎ２３８Ｒ）、Ｄ２４２Ｒ（Ｄ２４８Ｒ）、Ｔ２４７Ｒ（Ｔ２５３Ｒ）、Ｓ２４Ｒ，Ｎ７４Ｄ（Ｎ７６Ｄ）が挙げられ、ＧＧ３６番号付け及びＢＰＮ’番号付けを括弧付して示す。
変異体は実施例５に記載の方法を用いて生成された。エグリンｃ阻害アッセイ（実施例１）及びＢＭＩ微小標本クリーニングアッセイ（実施例１）を用いタンパク質含量を決定するなどといった、更なる生化学的解析を行うため、実施例２に記載のように枯草菌（B. subtilis）変異体株を増殖させた。結果を下表６−１に提供する。ＰＩ値はＧＧ３６に対するものである。以下の表中で、洗剤組成物は、上記表Ｄに示されるものと対応する。同様に、記載のように、アミノ酸位置はＢＰＮ’の番号付けに従って列挙される。
ＧＧ３６−７変異体のＤＮＡ配列（シグナル配列は小文字で示され、プロペプチドは下線の引かれている小文字で示され、及びＧＧ３６−７成熟配列は大文字で示される）は以下に提供されるものである：
配列表７
Figure 2016028571
ＧＧ３６−７変異体のタンパク質配列（シグナル配列は小文字で示され、プロペプチドは下線の引かれている小文字で示され、及びＧＧ３６−７成熟配列は大文字で示される）は以下に提供されるものである：
配列表８
Figure 2016028571
Figure 2016028571
（実施例７）
ＮＨＪ２コンビナトリアルライブラリの構築
本実施例は、次の変異：Ａ１６Ｓ，Ｔ２２Ａ，Ｓ１０１Ａ，Ｓ１０３Ｇ，Ｖ１０４Ｌ，Ｌ１１１Ｖ，Ｓ１２８Ｎ，及びＬ１４８Ｉ（ＢＰＮ’番号付け）のうちの１つ以上を伴うＧＧ３６コンビナトリアルライブラリの構築を記述する。ＮＨＪ２コンビナトリアルライブラリの作成のため、ｐＨＰＬＴ−ＧＧ３６枯草菌（B. subtilis）発現プラスミドをＤＮＡ ２．０Ｉｎｃ．に提供した。枯草菌（B. subtilis）株（遺伝子型：ΔａｐｒＥ，ΔｎｐｒＥ，ａｍｙＥ：：ｘｙｌＲＰｘｙｌＡｃｏｍＫ−ｐｈｌｅｏ）で形質転換するために、構築済みのＮＨＪ２ライブラリのライゲーション反応物が、ＤＮＡ ２．０，Ｉｎｃ．から提供された。これらの変異を１つ以上含有するよう生成された変異体を、本明細書に記載の方法及び洗剤組成物を用い、冷水クリーニング適用について試験する。
（実施例８）
更なるライブラリ及びＧＧ３６変異体の構築
次の組の変異：Ａ１Ｒ，Ａ２３０Ｅ，Ｅ２７１Ｌ，Ｇ１１５Ｒ，Ｇ２０Ｒ，Ｈ２４９Ｒ，Ｋ２３５Ｆ，Ｋ２７Ｖ／Ｆ／Ｌ、Ｌ７５Ｅ，Ｌ８２Ｒ，Ｎ１８Ｒ，Ｎ２６９Ｒ，Ｎ４３Ｄ，Ｎ４３Ｒ，Ｎ７６Ｄ，Ｒ４５Ｔ，Ｓ２１２Ｆ，Ｓ２４２Ｒ，Ｓ２４Ｒ，Ｓ７８Ｒ，Ｓ９Ａ，Ｔ２２Ｒ，Ｖ１２１Ｅ，Ｖ２４４Ｒ，Ｖ２８Ｅ，Ｖ３０Ｅ，Ｖ４Ｒ，Ｗ２４１Ｒ（ＢＰＮ’番号付け）を用いて、更なるライブラリ及び変異体を構築する。これらの変異を１つ以上含有するよう生成された変異体を、本明細書に記載の方法及び洗剤組成物を用い、冷水クリーニング適用について試験する。
次のもの：Ｇ２０Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｈ２４９Ｒ，Ｇ２０Ｒ−Ｔ２２Ｒ−Ｎ４３Ｒ，Ｇ２０Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ，Ｇ２０Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｅ２７１Ｌ，Ｇ２０Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｖ２４４Ｒ，Ｇ２０Ｒ−Ｓ２４Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ，Ｓ９Ａ−Ｔ２２Ｒ−Ｓ７８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ−Ｗ２４１Ｒ，Ｓ９Ａ−Ｇ２０Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ２１２Ｆ，Ｓ９Ａ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ２１２Ｆ，Ｇ２０Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ２１２Ｆ，Ｇ２０Ｒ−Ｔ２２Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ２１２Ｆ，Ｓ２４Ｒ−Ｓ７８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ，Ｓ９Ａ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ７８Ｒ，Ｓ９Ａ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ７８Ｒ−Ｓ２４２Ｒ，Ｓ９Ａ−Ｇ２０Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ７８Ｒ，Ｇ２０Ｒ−Ｓ２４Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ７８Ｒ−Ｓ２４２Ｒ，Ｔ２２Ｒ−Ｓ２４Ｒ−Ｓ７８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ，Ｓ９Ａ−Ｇ２０Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ７８Ｒ−Ｓ２４２Ｒ，Ｇ２０Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ７８Ｒ−Ｈ２４９Ｒ，Ｇ２０Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ７８Ｒ，Ｓ９Ａ−Ｓ７８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ，Ｓ９Ａ−Ｔ２２Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ７８Ｒ，Ｓ９Ａ−Ｇ２０Ｒ−Ｓ２４Ｒ−Ｎ４３Ｒ，Ｓ９Ａ−Ｔ２２Ｒ−Ｓ７８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ，Ｖ４Ｒ−Ｓ９Ａ−Ｔ２２Ｒ−Ｓ７８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ，Ｇ２０Ｒ−Ｓ２４Ｒ−Ｎ４３Ｒ，Ａ１Ｒ−Ｓ９Ａ−Ｎ４３Ｒ，Ｇ２０Ｒ−Ｓ２４Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｇ１１５Ｒ，Ｓ９Ａ−Ｓ２４Ｒ−Ｎ４３Ｒ，Ｇ２０Ｒ−Ｔ２２Ｒ−Ｓ２４Ｒ−Ｎ４３Ｒ，Ａ１Ｒ−Ｓ２４Ｒ−Ｎ４３Ｒ，Ｓ９Ａ−Ｇ２０Ｒ−Ｓ２４Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ，Ｓ９Ａ−Ｇ２０Ｒ−Ｔ２２Ｒ−Ｓ７８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ，Ｓ９Ａ−Ｓ２４Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｖ２４４Ｒ，Ｓ９Ａ−Ｓ２４Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ，Ｖ４Ｒ−Ｓ９Ａ−Ｔ２２Ｒ−Ｓ２４Ｒ−Ｓ２１２Ｆ，及びＴ２２Ｒ−Ｓ２４Ｒ−Ｎ４３Ｒ（ＢＰＮ’番号付け）が挙げられる、ＧＧ３６変異体の更なる組を構築し、本明細書に記載の方法及び洗剤組成物を用い、冷水クリーニング適用について試験する。
（実施例９）
ＧＧ３６ライブラリＷＣＥ２の構築及びクリーニング性能
ＷＣＥ２コンビナトリアルライブラリは、ｐＨＰＬＴ−ＧＧ３６枯草菌（B. subtilis）発現プラスミドを用い、ＤＮＡ２．０，Ｉｎｃ．により生成されたものである。枯草菌（B. subtilis）株（遺伝子型：ΔａｐｒＥ，ΔｎｐｒＥ，ａｍｙＥ：：ｘｙｌＲＰｘｙｌＡｃｏｍＫ−ｐｈｌｅｏ）で形質転換するために、構築済みＷＣＥ２ライブラリのライゲーション反応物が、ＤＮＡ ２．０，Ｉｎｃ．から提供された。ＷＣＥ２ライブラリを生成するために使用される変異の組は、Ａ２３０Ｅ，Ｇ２０Ｒ，Ｈ２４９Ｒ，Ｎ１８Ｒ，Ｎ４３Ｒ／Ｄ、Ｎ７６Ｄ，Ｒ４５Ｔ，Ｓ２４２Ｒ，及びＳ２４Ｒ（ＢＰＮ’番号付け）である。これらの変異を１つ以上含有するよう生成された変異体を、本明細書に記載の方法及び洗剤組成物を用い、冷水クリーニング適用について試験する。
（実施例１０）
ＧＧ３６変異体のＷＣＥ３セットの構築及びクリーニング性能
本実施例は、ＧＧ３６変異体、ＧＧ３６−７（実施例５）及びＧＧ３６−９（実施例４）に基づく変異のＷＣＥ３セットを記述する。これらの変異は、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｒ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｒ，Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｒ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｒ，、並びに、Ｓ１０１Ｇ，Ｓ１０３Ａ，Ｖ１０４Ｉ，Ａ２３２Ｖ，Ｑ２３６Ｈ，Ｑ２４５Ｒ，及びＮ２５２Ｋである。ｐＲＡ９６プラスミドを実施例５に記載のＤＮＡテンプレートとして使用し、ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ（登録商標）Ｌｉｇｈｔｎｉｎｇ Ｍｕｌｔｉ Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ Ｋｉｔ（ＱＣＬＭＳキット、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を用いて、これらを生成した。生成した変異体は、本案件に記載の方法及び洗剤組成物を用い、冷水クリーニング適用について試験する。
（実施例１１）
ＧＧ３６の更なるライブラリ及び変異体の構築
本実施例は、枯草菌（B. subtilis）発現プラスミド（例えば、ｐＨＰＬＴ−ＧＧ３６、図６）を用い、次の変異：Ａ１６Ｓ，Ｔ２２Ａ，Ｓ２４Ｒ，Ｎ６２Ｅ，Ｎ７６Ｄ，Ｅ８９Ｐ，Ｓ１０１Ａ／Ｇ、Ｓ１０３Ｇ／Ａ、Ｖ１０４Ｌ／Ｉ、Ｌ１１１Ｖ，Ｓ１２８Ｎ，Ｐ１２９Ｅ，Ａ２３２Ｖ，Ｌ１４８Ｉ，Ａ１５８Ｅ，Ｇ１５９Ｄ／Ｅ、Ｓ１６６Ｄ，Ｒ１８６Ｈ，Ｓ１８８Ｄ，Ｙ２０９Ｅ，Ｑ２３６Ｈ，Ｎ２３８Ｒ，Ｑ２４５Ｒ，Ｎ２４８Ｄ／Ｒ、Ｈ２４９Ｒ，Ｎ２５２Ｋ／Ｒ、Ｔ２５３Ｒ，Ｅ２７１Ｆ（ＢＰＮ’番号付け）の１つ以上を使用してＧＧ３６変異体及びライブラリを構築することを記述する。これらの変異を１つ以上含有するよう生成された変異体を、本明細書に記載の方法及び洗剤組成物を用い、冷水クリーニング適用について試験する。
（実施例１２）
ＧＧ３６の更なるライブラリ及び変異体の構築
本実施例は、次の変異：Ａ１Ｒ，Ｑ２Ｓ，Ｑ２Ｍ，Ｑ２Ａ，Ｑ２Ｒ，Ｑ２Ｗ，Ｓ３Ｒ，Ｖ４Ｒ，Ｖ４Ｓ，Ｖ４Ｃ，Ｉ８Ａ，Ｓ９Ａ，Ｓ９Ｆ，Ｓ９Ｗ，Ｒ１０Ｓ，Ｒ１０Ａ，Ｒ１０Ｈ，Ｒ１０Ｍ，Ｑ１２Ｆ，Ｑ１２Ｒ，Ｐ１４Ｋ，Ｐ１４Ｆ，Ｐ１４Ｑ，Ａ１５Ｒ，Ａ１５Ｆ，Ａ１６Ｓ，Ｈ１７Ｒ，Ｈ１７Ｍ，Ｈ１７Ｆ，Ｎ１８Ｒ，Ｎ１８Ｋ，Ｇ２０Ｆ，Ｇ２０Ｋ，Ｇ２０Ｒ，Ｔ２２Ａ，Ｔ２２Ｒ，Ｔ２２Ｙ，Ｔ２２Ｖ，Ｔ２２Ｑ，Ｔ２２Ｌ，Ｔ２２Ｗ，Ｇ２３Ａ，Ｇ２３Ｓ，Ｇ２３Ｆ，Ｓ２４Ｒ，Ｓ２４Ｆ，Ｓ２４Ｗ，Ｓ２４Ｑ，Ｓ２４Ｈ，Ｓ２４Ｌ，Ｇ２５Ｖ，Ｇ２５Ｆ，Ｇ２５Ｒ，Ｖ２６Ｆ，Ｋ２７Ｌ，Ｋ２７Ｆ，Ｋ２７Ｒ，Ｋ２７Ｖ，Ｖ２８Ａ，Ｖ２８Ｎ，Ｖ２８Ｅ，Ａ２９Ｔ，Ｖ３０Ｅ，Ｌ３１Ｆ，Ｔ３３Ｓ，Ｔ３３Ｇ，Ｔ３３Ｄ，Ｇ３４Ｐ，Ｉ３５Ｍ，Ｓ３６Ｔ，Ｓ３６Ｆ，Ｓ３６Ｒ，Ｔ３８Ｌ，Ｔ３８Ｆ，Ｔ３８Ｒ，Ｐ４０Ｎ，Ｐ４０Ｌ，Ｐ４０Ｔ，Ｐ４０Ｗ，Ｐ４０Ｈ，Ｐ４０Ｒ，Ｌ４２Ｉ，Ｎ４３Ａ，Ｎ４３Ｆ，Ｎ４３Ｉ，Ｎ４３Ｓ，Ｎ４３Ｒ，Ｎ４３Ｍ，Ｎ４３Ｗ，Ｎ４３Ｄ，Ｒ４５Ｔ，Ｇ４６Ｒ，Ａ４８Ｒ，Ｆ５０Ｃ，Ｖ５１Ｗ，Ｖ５１Ｆ，Ｖ５１Ｈ，Ｐ５２Ｆ，Ｐ５２Ｅ，Ｐ５２Ｎ，Ｐ５５Ｙ，Ｔ５７Ｒ，Ｑ５９Ａ，Ｑ５９Ｆ，Ｑ５９Ｒ，Ｄ６０Ｐ，Ｄ６０Ｑ，Ｄ６０Ａ，Ｎ６２Ｅ，Ｎ６２Ｑ，Ｇ６３Ｖ，Ｇ６３Ｍ，Ｇ６３Ｔ，Ｇ６３Ｉ，Ｇ６３Ａ，Ｇ６３Ｓ，Ｇ６３Ｈ，Ｇ６３Ｑ，Ｇ６３Ｄ，Ｇ６３Ｅ，Ｇ６３Ｐ，Ｈ６４Ｆ，Ｈ６４Ｔ，Ｖ６８Ａ，Ｖ６８Ｃ，Ａ６９Ｎ，Ａ６９Ｔ，Ａ６９Ｐ，Ａ６９Ｗ，Ｔ７１Ｇ，Ｉ７２Ｃ，Ａ７４Ｃ，Ｌ７５Ａ，Ｌ７５Ｆ，Ｌ７５Ｅ，Ｌ７５Ｒ，Ｎ７６Ｄ，Ｓ７８Ｒ，Ｓ７８Ｎ，Ｓ７８Ｉ，Ｉ７９Ｗ，Ｉ７９Ｑ，Ｖ８１Ｒ，Ｌ８２Ｆ，Ｌ８２Ｔ，Ｌ８２Ｖ，Ｌ８２Ｒ，Ｌ８２Ｍ，Ａ８５Ｍ，Ｐ８６Ｗ，Ｐ８６Ｌ，Ｐ８６Ｉ，Ｅ８９Ｐ，Ｅ８９Ｔ，Ｅ８９Ｇ，Ｅ８９Ｈ，Ｅ８９Ｌ，Ｅ８９Ｖ，Ｅ８９Ｗ，Ｅ８９Ｆ，Ｅ８９Ｉ，Ｙ９１Ｎ，Ｙ９１Ｆ，Ａ９２Ｆ，Ｋ９４Ｎ，Ｓ９９Ｆ，Ｓ９９Ｔ，Ｓ９９Ｐ，Ｓ９９Ｇ，Ｓ９９Ｍ，Ｇ１００Ｓ，Ｇ１００Ｎ，Ｇ１００Ｑ，Ｇ１００Ｉ，Ｓ１０１Ａ，Ｓ１０１Ｎ，Ｓ１０１Ｇ，Ｓ１０１Ｔ，Ｓ１０１Ｄ，Ｓ１０１Ｅ，Ｓ１０１Ｐ，Ｓ１０１Ｆ，Ｇ１０２Ａ，Ｇ１０２Ｔ，Ｇ１０２Ｎ，Ｇ１０２Ｈ，Ｇ１０２Ｅ，Ｓ１０３Ｇ，Ｓ１０３Ｎ，Ｓ１０３Ｄ，Ｓ１０３Ａ，Ｖ１０４Ｌ，Ｖ１０４Ｉ，Ｖ１０４Ｅ，Ｖ１０４Ｄ，Ｓ１０５Ｔ，Ｓ１０５Ｅ，Ｓ１０５Ｑ，Ｓ１０６Ｇ，Ｓ１０６Ｔ，Ｓ１０６Ｅ，Ｓ１０６Ｄ，Ｓ１０６Ａ，Ｓ１０６Ｖ，Ｓ１０６Ｆ，Ｉ１０７Ｍ，Ｉ１０７Ｆ，Ａ１０８Ｉ，Ａ１０８Ｇ，Ｑ１０９Ｍ，Ｌ１１１Ｖ，Ｌ１１１Ｉ，Ｅ１１２Ｖ，Ｅ１１２Ｌ，Ｅ１１２Ｑ，Ａ１１４Ｇ，Ｇ１１５Ｋ，Ｇ１１５Ｒ，Ｎ１１６Ｋ，Ｎ１１６Ａ，Ｎ１１６Ｌ，Ｎ１１７Ｆ，Ｇ１１８Ｒ，Ｇ１１８Ｉ，Ｍ１１９Ｃ，Ｈ１２０Ａ，Ｈ１２０Ｆ，Ｈ１２０Ｒ，Ｖ１２１Ｆ，Ｖ１２１Ｅ，Ｎ１２３Ｇ，Ｎ１２３Ｅ，Ｌ１２４Ｓ，Ｓ１２８Ｄ，Ｓ１２８Ｆ，Ｓ１２８Ｌ，Ｓ１２８Ｎ，Ｓ１２８Ｈ，Ｓ１２８Ｍ，Ｓ１２８Ｉ，Ｓ１２８Ｑ，Ｐ１２９Ｅ，Ｓ１３２Ａ，Ｓ１３２Ｅ，Ａ１３８Ｇ，Ｓ１４４Ｒ，Ｖ１４７Ｌ，Ｌ１４８Ｉ，Ａ１５８Ｅ，Ｇ１５９Ｄ，Ｇ１５９Ｅ，Ｇ１５９Ｃ，Ｓ１６０Ｄ，Ｓ１６６Ｄ，Ｓ１６６Ｅ，Ｙ１６７Ｗ，Ｍ１７５Ｖ，Ｖ１７７Ｃ，Ｄ１８１Ａ，Ｑ１８２Ｒ，Ｎ１８３Ｉ，Ｎ１８３Ｄ，Ｎ１８３Ｍ，Ｎ１８３Ｆ，Ｎ１８３Ｒ，Ｎ１８５Ｅ，Ｎ１８５Ｖ，Ｎ１８５Ｉ，Ｒ１８６Ｈ，Ｒ１８６Ｋ，Ｓ１８８Ｅ，Ｓ１８８Ｄ，Ｓ１８８Ｒ，Ｙ１９２Ｈ，Ｙ１９２Ｗ，Ａ１９４Ｅ，Ａ１９４Ｖ，Ａ１９４Ｆ，Ｄ１９７Ｆ，Ｉ１９８Ｌ，Ｉ１９８Ｆ，Ｖ２０３Ｅ，Ｖ２０３Ｃ，Ｔ２０８Ｓ，Ｙ２０９Ｓ，Ｙ２０９Ｎ，Ｙ２０９Ｆ，Ｙ２０９Ｔ，Ｙ２０９Ｅ，Ｙ２０９Ｈ，Ｙ２０９Ｇ，Ｙ２０９Ｌ，Ｐ２１０Ｒ，Ｐ２１０Ｖ，Ｐ２１０Ｌ，Ｇ２１１Ｑ，Ｇ２１１Ｒ，Ｓ２１２Ｉ，Ｓ２１２Ｍ，Ｓ２１２Ｆ，Ｔ２１３Ａ，Ｙ２１４Ｆ，Ａ２１５Ｎ，Ａ２１５Ｄ，Ａ２１５Ｅ，Ａ２１５Ｈ，Ａ２１５Ｆ，Ｓ２１６Ｆ，Ｓ２１６Ａ，Ｌ２１７Ｅ，Ｌ２１７Ｎ，Ｌ２１７Ｄ，Ｎ２１８Ｄ，Ｎ２１８Ｐ，Ｎ２１８Ｅ，Ｔ２２４Ａ，Ｔ２２４Ｇ，Ｖ２２７Ｉ，Ａ２３０Ｅ，Ａ２３１Ｉ，Ａ２３１Ｃ，Ａ２３２Ｖ，Ｌ２３３Ｃ，Ｖ２３４Ｆ，Ｋ２３５Ｆ，Ｑ２３６Ｆ，Ｑ２３６Ｎ，Ｑ２３６Ｈ，Ｎ２３８Ｒ，Ｎ２３８Ｋ，Ｎ２３８Ｌ，Ｐ２３９Ｋ，Ｐ２３９Ｇ，Ｐ２３９Ｒ，Ｐ２３９Ｈ，Ｐ２３９Ｔ，Ｐ２３９Ｎ，Ｐ２３９Ｓ，Ｐ２３９Ｆ，Ｓ２４０Ｒ，Ｗ２４１Ｒ，Ｓ２４２Ｌ，Ｓ２４２Ｒ，Ｎ２４３Ｆ，Ｎ２４３Ｒ，Ｖ２４４Ｒ，Ｑ２４５Ｒ，Ｉ２４６Ｓ，Ｎ２４８Ｄ，Ｎ２４８Ｖ，Ｎ２４８Ｉ，Ｎ２４８Ｒ，Ｈ２４９Ｒ，Ｈ２４９Ｔ，Ｌ２５０Ｉ，Ｋ２５１Ｒ，Ｋ２５１Ｓ，Ｎ２５２Ｉ，Ｎ２５２Ｆ，Ｎ２５２Ｒ，Ｎ２５２Ｋ，Ｎ２５２Ｈ，Ｔ２５３Ｉ，Ｔ２５３Ｒ，Ｔ２５３Ｆ，Ａ２５４Ｃ，Ｓ２５６Ｎ，Ｇ２５８Ｒ，Ｔ２６０Ｖ，Ｔ２６０Ｉ，Ｌ２６２Ｄ，Ｌ２６２Ｈ，Ｙ２６３Ｆ，Ｓ２６５Ｆ，Ｌ２６７Ｖ，Ｌ２６７Ｎ，Ｌ２６７Ｍ，Ｎ２６９Ｉ，Ｎ２６９Ｒ，Ａ２７０Ｃ，Ｅ２７１Ｉ，Ｅ２７１Ｖ，Ｅ２７１Ｈ，Ｅ２７１Ｍ，Ｅ２７１Ｌ，Ｅ２７１Ｐ，Ｅ２７１Ａ，Ｅ２７１Ｆ，Ｅ２７１Ｔ，Ａ２７２Ｆ，Ａ２７２Ｆ，Ａ２７２Ｒ，Ａ２７３Ｆ，Ａ２７３Ｉ，及びＴ２７４Ｇ（ＢＰＮ’番号付け）の１つ以上を使用して枯草菌（B. subtilis）のＧＧ３６変異体及びライブラリを構築することを記述する。これらの変異を１つ以上含有するよう生成された変異体を、本明細書に記載の方法及び洗剤組成物を用い、冷水クリーニング適用について試験する。
（実施例１３）
自動食器洗浄性能試験
本実施例では、一部の市販の食器洗剤を用いてプロテアーゼの洗浄性能を判定するために使用される方法を説明する。これらのプロテアーゼ変異体を様々な条件下で試験する。これらの洗剤はＷＦＫから市販されており、以下に提供される名称により呼ぶ。シミのタイプの各々についてのプロトコル（挽肉、卵黄及びミルクと一緒の卵黄）は下記に提供される。それぞれのタイプの汚れを試験食器に塗布する前に、食器は十分に洗浄しなければならない。前回の試験から特定のこびりついたシミの残渣が依然として食器上に存在する場合があることから、この洗浄は特に必要である。新しい食器も、試験での第一回目に使用される前に三回十分な洗浄にかけられた。
洗浄試験は、典型的には、上記のように汚れた食器及びステンレス鋼シートを装填した自動食器洗浄機（例えば、Ｍｉｅｌｅ：Ｇ６９０ＳＣ）で行われる。以下の結果の表に示すように、規定の量の洗剤を使用する。一部の実験では、試験される温度は、４５℃、５５℃及び６５℃である。一部の実験では、水硬度は、９°又は２１°ＧＨ（ドイツ硬度）（３７４ｐｐｍ Ｃａ）である。
上記のように、挽肉又はパスタ／ソース／肉／チーズで汚したプレートは、洗浄後、０〜１０の写真評価尺度を用いて目視により査定され、ここで、「０」は完全に汚いプレートを指し、「１０」はきれいなプレートを指す。これらの結果は、酵素含有洗剤のシミ又は汚れ除去（ＳＲ）能力に対応する。
洗浄した、卵黄及び／又は卵黄ミルクで汚れたステンレス鋼プレートは、重力測定的に分析し、洗浄後の残渣の量を判定する。
一部の代表的洗剤を以下に提供する。
Figure 2016028571
Figure 2016028571
（実施例１４）
顆粒及び／又はタブレット洗濯組成物
この実施例は、顆粒及び／又はタブレット洗濯洗剤のための様々な配合物を提供する。顆粒又はタブレットの形態であり得る以下の本発明の洗濯組成物が下記に提供される。これらの配合物のそれぞれにおいて、本明細書で提供される少なくとも１つのプロテアーゼ変異体は、約０．０００１〜約１０重量％の濃度で含まれる。一部の代替的な態様では、必要性に応じ、配合者により決定されるものとして、他の濃度での使用も見出される。
Figure 2016028571
＊ 香料、染料、増白剤／ＳＲＰ１／カルボキシメチルセルロースナトリウム／光漂泊剤／ＭｇＳＯ４／ＰＶＰＶＩ／抑泡剤／高分子量ＰＥＧ／粘土。
（実施例１５）
タブレット洗剤組成物
この実施例は、様々なタブレット洗剤配合物を提供する。以下の本発明のタブレット洗剤組成物は、標準的な１２ヘッドロータリープレスを用いて、１３ＫＮ／ｃｍ２の圧力にて顆粒食器洗浄洗剤組成物を圧縮することにより、調製される。これらの配合物のそれぞれにおいて、本明細書で提供される少なくとも１つのプロテアーゼ変異体は、約０．０００１〜約１０重量％の濃度で含まれる。一部の代替的な態様では、必要性に応じ、配合者により決定されるものとして、他の濃度での使用も見出される。
Figure 2016028571
＊増白剤／ＳＲＰ１／カルボキシメチルセルロースナトリウム／光漂泊剤／ＭｇＳＯ４／ＰＶＰＶＩ／抑泡剤／高分子量ＰＥＧ／粘土。
実施例１４（Ｉ）〜１４（ＶＩＩ）のｐＨは約１０〜約１１．５であり、１４（ＶＩＩＩ）のｐＨは８〜１０である。実施例１４（Ｉ）〜１４（ＶＩＩＩ）のタブレット重量は、約２０グラム〜約３０グラムである。
（実施例１６）
液体洗濯洗剤組成物
この実施例では、液体洗濯洗剤組成物についての様々な配合物を提供する。本発明の以下の液体洗濯洗剤組成物は、下記に示すように調製される。これらの配合物のそれぞれにおいて、本明細書で提供される少なくとも１つのプロテアーゼ変異体は、約０．０００１〜約１０重量％の濃度で含まれる。一部の代替的な態様では、必要性に応じ、配合者により決定されるものとして、他の濃度での使用も見出される。
Figure 2016028571
＃１：１ＮのＨＣｌ水溶液を添加して、配合物の正味ｐＨを約３〜約５の範囲に調整。
上記実施例１５（Ｉ）〜（ＩＩ）のｐＨは約５〜約７であり、１５（ＩＩＩ）〜（Ｖ）のｐＨは約７．５〜約８．５である。
Figure 2016028571
（実施例１７）
食器手洗い用液体洗剤組成物
この実施例では、様々な食器手洗い用液体洗剤配合物が提供される。以下の本発明の食器手洗い用液体洗剤組成物が、下記に提供される。これらの配合物のそれぞれにおいて、本明細書で提供される少なくとも１つのプロテアーゼ変異体は、約０．０００１〜約１０重量％の濃度で含まれる。一部の代替的な態様では、必要性に応じ、配合者により決定されるものとして、他の濃度での使用も見出される。
Figure 2016028571
実施例１６（Ｉ）〜（ＶＩ）のｐＨは、約８〜約１１である。
（実施例１８）
液体自動食器洗浄洗剤組成物
この実施例では、様々な液体自動食器洗浄洗剤配合物が提供される。以下の本発明の食器手洗い用液体洗剤組成物が、下記に提供される。これらの配合物のそれぞれにおいて、本明細書で提供される少なくとも１つのプロテアーゼ変異体は、約０．０００１〜約１０重量％の濃度で含まれる。一部の態様では、必要性に応じ、配合者により決定されるものとして、他の濃度での使用も見出される。
Figure 2016028571
（実施例１９）
高密度食器洗浄洗剤
この実施例は、高密度食器洗浄洗剤についての様々な配合物を提供する。以下の本発明のコンパクト高密度洗剤が、下記に提供される。各配合物において、本明細書で提供される少なくとも１つのプロテアーゼ変異体は、約０．０００１〜約１０重量％の濃度で含まれる。一部の態様では、必要性に応じ、配合者により決定されるものとして、他の濃度での使用も見出される。
Figure 2016028571
＊香料／染料／ＳＲＰ１／カルボキシメチルセルロースナトリウム／光漂泊剤／ＭｇＳＯ４／ＰＶＰＶＩ／抑泡剤／高分子量ＰＥＧ／粘土。
実施例１８（Ｉ）〜（ＶＩ）のｐＨは、約９．６〜約１１．３である。
（実施例２０）
液体硬質表面クリーニング洗剤
この実施例は、液体硬質表面クリーニング洗剤用の様々な配合物を提供する。以下の本発明の液体硬質表面クリーニング洗剤組成物は、下記に提供される。これらの配合物のそれぞれにおいて、本明細書で提供される少なくとも１つのプロテアーゼ変異体は、約０．０００１〜約１０重量％の濃度で含まれる。一部の態様では、必要性に応じ、配合者により決定されるものとして、他の濃度での使用も見出される。
Figure 2016028571
実施例１９（Ｉ）〜（ＶＩＩ）のｐＨは、約７．４〜約９．５である。
本明細書で引用されているすべての刊行物、特許出願及び特許は、個々の刊行物、特許出願又は特許のそれぞれが特定的に及び個々に参照により組み込まれるよう示されているように、参照により本明細書に組み込まれる。特に、本明細書に引用されているすべての刊行物は、本発明に関連して使用され得る組成物及び方法を、説明及び開示する目的で参照により明示的に本明細書に組み込まれる。上記発明は一部の詳細において理解の明確化の目的のために例示及び実施例により説明したが、添付の請求項の趣旨又は範囲から離れることなくこれに一定の変更及び修正を加えることができることは、本発明の教示を考慮すれば当業者であれば容易に理解される。

Claims (78)

  1. 親プロテアーゼの単離されたプロテアーゼ変異体であって、前記変異体は、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ、Ｘ０７８Ｎ、Ｘ１０１Ｎ、Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｌ／Ｑからなる群から選択される３つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含み、ここで、前記変異体はタンパク質分解活性を有し、前記変異体の各アミノ酸位置は、配列番号２のアミノ酸配列と前記変異体のアミノ酸配列とのアラインメントによって決定される、配列番号２のアミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる、変異体。
  2. 前記変異体のアミノ酸配列が、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ、Ｘ０７８Ｎ、Ｘ１０１Ｎ、Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｌ／Ｑからなる群から選択される４つのアミノ酸置換を含む、請求項１に記載の変異体。
  3. 前記変異体のアミノ酸配列が、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ、Ｘ０７８Ｎ、Ｘ１０１Ｎ、Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｌ／Ｑからなる群から選択される５つのアミノ酸置換を含む、請求項１に記載の変異体。
  4. 前記変異体のアミノ酸配列が、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ、Ｘ０７８Ｎ、Ｘ１０１Ｎ、Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｌ／Ｑからなる群から選択される６つのアミノ酸置換を含む、請求項１に記載の変異体。
  5. 前記変異体のアミノ酸配列がアミノ酸置換Ｘ０９７Ａを更に含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の変異体。
  6. 前記変異体のアミノ酸配列がアミノ酸置換Ｘ０２４Ｇ／Ｒ＋Ｘ０５３Ｇ＋Ｘ０７８Ｎ＋Ｘ１０１Ｎ＋Ｘ１２８Ａ／Ｓ＋Ｘ２１７Ｌ／Ｑ又はＸ０９７Ａ＋Ｘ１２８Ａ／Ｓ＋Ｘ２１７Ｌ／Ｑを含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の変異体。
  7. 前記変異体のアミノ酸配列がアミノ酸置換Ｓ０２４Ｇ／Ｒ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ／Ｓ＋Ｙ２１７Ｌ／Ｑ又はＧ０９７Ａ＋Ｇ１２８Ａ／Ｓ＋Ｙ２１７Ｌ／Ｑを含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の変異体。
  8. 前記変異体のアミノ酸配列がアミノ酸置換Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ又はＳ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ、を含み、選択的に、Ｎ１０９Ｇ、Ｎ０７６Ｄ、Ｓ０３３Ｔ、Ｎ２４３Ｖ、Ｓ２４８Ａ、Ａ０８８Ｔ、及びＳ０６３Ｇからなる群から選択される置換を更に含む、請求項７に記載の変異体。
  9. 前記変異体のアミノ酸配列が、以下のもの：
    Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｌ２５７Ｇ、
    Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ、
    Ｓ００９Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ１４１Ｒ＋Ｎ２４３Ｖ、
    Ｓ１６２Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
    Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ、
    Ｎ１０９Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ、
    Ｓ１６２Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ、
    Ｎ０６１Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
    Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ａ、
    Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ、
    Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
    Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ、
    Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ、
    Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
    Ｔ１５８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ、
    Ｎ０６１Ｓ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
    Ｐ０４０Ａ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ、
    Ｓ００９Ｔ＋Ｓ０１８Ｔ＋Ｙ０２１Ｎ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ１４１Ｒ、
    Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
    Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ、
    Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
    Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
    Ｓ０６３Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
    Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ、
    Ｓ０６３Ｇ、
    Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ０７６Ｄ、
    Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓ、及び
    Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓからなる群から選択される１組のアミノ酸置換を更に含む、請求項７に記載の変異体。
  10. 前記変異体のアミノ酸配列がアミノ酸置換Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑを含み、以下のもの：
    Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｌ２５７Ｇ、
    Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ、
    Ｓ００９Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｋ１４１Ｒ＋Ｎ２４３Ｖ、
    Ｓ１６２Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
    Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ、
    Ｎ１０９Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ、
    Ｓ１６２Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ、
    Ｎ０６１Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
    Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ａ、
    Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ、
    Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
    Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ、
    Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ、
    Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
    Ｔ１５８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ、
    Ｎ０６１Ｓ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
    Ｐ０４０Ａ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ、
    Ｓ００９Ｔ＋Ｓ０１８Ｔ＋Ｙ０２１Ｎ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｋ１４１Ｒ、
    Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
    Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ、
    Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
    Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
    Ｓ０６３Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
    Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ、
    Ｓ０６３Ｇ＋Ａ１２８Ｓ、
    Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ０７６Ｄ、
    Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ａ１２８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ、及び
    Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓからなる群から選択される１組のアミノ酸置換を更に含む、請求項７に記載の変異体。
  11. 前記変異体のアミノ酸配列が、配列番号２又は配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の変異体。
  12. 前記変異体のアミノ酸配列が、配列番号２又は配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の変異体。
  13. 前記変異体が、前記親プロテアーゼと比較して向上したタンパク質分解活性及び／又はクリーニング活性を有するか、あるいは、配列番号２の配列を有するＢＰＮ’プロテアーゼのタンパク質分解活性と比較して向上したタンパク質分解活性及び／又はクリーニング活性を有する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の変異体。
  14. 前記変異体が、配列番号４の配列を有するプロテアーゼのタンパク質分解活性と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の変異体。
  15. 前記変異体が、配列番号６の配列を有するプロテアーゼのタンパク質分解活性と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の変異体。
  16. 前記親プロテアーゼがスブチリシンプロテアーゼである、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の変異体。
  17. 前記親プロテアーゼが、配列番号２のアミノ酸配列を有するバチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシンプロテアーゼＢＰＮ’に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する、請求項１６に記載の変異体。
  18. 前記親プロテアーゼが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する、請求項１６に記載の変異体。
  19. 前記変異体が配列番号６のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の変異体。
  20. 親プロテアーゼの単離されたプロテアーゼ変異体であって、前記プロテアーゼ変異体はタンパク質分解活性を有し、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される配列番号２のアミノ酸位置に対応する１つ以上のアミノ酸位置にて変異を含むアミノ酸配列を含み、ここで、前記変異の少なくとも１つは独立して、
    （ｉ）前記位置を占めるアミノ酸残基の上流又は下流における１つ以上のアミノ酸残基の挿入、
    （ｉｉ）前記位置を占めるアミノ酸残基の欠失、又は
    （ｉｉｉ）異なるアミノ酸残基による、前記位置を占めるアミノ酸残基の置換、
    であり、ここで、各アミノ酸位置は、配列番号２のアミノ酸配列と変異体のアミノ酸配列とのアラインメントによって決定される配列番号２に記載のバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）スブチリシンプロテアーゼＢＰＮ’のアミノ酸配列におけるアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる、変異体。
  21. 前記変異体が、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される２つのアミノ酸位置における変異を含むアミノ酸配列を含む、請求項２０に記載の変異体。
  22. 前記変異体が、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される３つのアミノ酸位置における変異を含むアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載の変異体。
  23. 前記変異体が、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される４つのアミノ酸位置における変異を含むアミノ酸配列を含む、請求項２２に記載の変異体。
  24. 前記変異体が、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される５つのアミノ酸位置における変異を含むアミノ酸配列を含む、請求項２３に記載の変異体。
  25. 前記変異体が、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される６つのアミノ酸位置における変異を含むアミノ酸配列を含む、請求項２４に記載の変異体。
  26. 前記変異体が、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される配列番号２の位置に対応するアミノ酸位置のそれぞれにおける変異を含むアミノ酸配列を含む、請求項２５に記載の変異体。
  27. 前記変異体が、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される位置における異なるアミノ酸残基によるアミノ酸残基の置換を含むアミノ酸配列を含む、請求項２０〜２６のいずれか一項に記載の変異体。
  28. 前記変異体が、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される２つの位置のそれぞれにおける異なるアミノ酸残基によるアミノ酸残基の置換を含むアミノ酸配列を含む、請求項２７に記載の変異体。
  29. 前記変異体が、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される４つの位置のそれぞれにおける異なるアミノ酸残基によるアミノ酸残基の置換を含むアミノ酸配列を含む、請求項２８に記載の変異体。
  30. 前記変異体が、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される５つの位置のそれぞれにおける異なるアミノ酸残基によるアミノ酸残基の置換を含むアミノ酸配列を含む、請求項２９に記載の変異体。
  31. 前記変異体が、位置２４、５３、７８、９７、１０１、１２８及び２１７からなる群から選択される６つの位置のそれぞれにおける異なるアミノ酸残基によるアミノ酸残基の置換を含むアミノ酸配列を含む、請求項３０に記載の変異体。
  32. 前記変異体が、位置２４、５３、７８、１０１、１２８及び２１７のそれぞれにおける異なるアミノ酸残基によるアミノ酸残基の置換を含むアミノ酸配列を含み、ここで、各位置が配列番号２における位置と対応させることにより番号付けされる、請求項３１に記載の変異体。
  33. 前記変異体が、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ、Ｘ０７８Ｎ、Ｘ０９７Ａ、Ｘ１０１Ｎ、Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｑ／Ｌからなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含む、請求項２０〜３２のいずれか一項に記載の変異体。
  34. 前記変異体が、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ、Ｘ０７８Ｎ、Ｘ０９７Ａ、Ｘ１０１Ｎ、Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｑ／Ｌからなる群から選択される少なくとも２つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含む、請求項３３に記載の変異体。
  35. 前記変異体が、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ、Ｘ０７８Ｎ、Ｘ０９７Ａ、Ｘ１０１Ｎ、Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｑ／Ｌからなる群から選択される少なくとも３つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含む、請求項３４に記載の変異体。
  36. 前記変異体が、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ、Ｘ０７８Ｎ、Ｘ０９７Ａ、Ｘ１０１Ｎ、Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｑ／Ｌからなる群から選択される少なくとも４つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含む、請求項３５に記載の変異体。
  37. 前記変異体が、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ、Ｘ０７８Ｎ、Ｘ０９７Ａ、Ｘ１０１Ｎ、Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｑ／Ｌからなる群から選択される少なくとも５つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載の変異体。
  38. 前記変異体が、Ｘ０２４Ｇ／Ｒ、Ｘ０５３Ｇ、Ｘ０７８Ｎ、Ｘ０９７Ａ、Ｘ１０１Ｎ、Ｘ１２８Ａ／Ｓ及びＸ２１７Ｑ／Ｌからなる群から選択される少なくとも６つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含む、請求項３７に記載の変異体。
  39. 前記変異体が、（ａ）Ｘ１２８Ａ／Ｓ及び／又はＸ２１７Ｌ／Ｑ、（ｂ）Ｇ１２８Ａ／Ｓ及び／又はＹ２１７Ｌ／Ｑ、並びに、（ｃ）Ｇ０９７Ａ、Ｇ１２８Ａ／Ｓ及び／又はＹ２１７Ｌ／Ｑからなる群から選択される置換の組を含むアミノ酸配列を含む、請求項２０〜３８のいずれか一項に記載の変異体。
  40. 前記変異体が、アミノ酸置換Ｘ０２４Ｇ／Ｒ＋Ｘ０５３Ｇ＋Ｘ０７８Ｎ＋Ｘ１０１Ｎ＋Ｘ１２８Ａ／Ｓ＋Ｘ２１７Ｑ／Ｌを含むアミノ酸配列を含む、請求項２０〜３９のいずれか一項に記載の変異体。
  41. 前記変異体が、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２０〜４０のいずれか一項に記載の変異体。
  42. 前記変異体が、配列番号２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４１に記載の変異体。
  43. 前記変異体のアミノ酸配列がＳ０２４Ｇ、Ｓ０５３Ｇ、Ｓ０７８Ｎ、Ｓ１０１Ｎ、Ｇ１２８Ａ／Ｓ及びＹ２１７Ｑの群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、請求項２０〜４２のいずれか一項に記載の変異体。
  44. 前記変異体のアミノ酸配列がアミノ酸置換Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑを含む、請求項２０〜４３のいずれか一項に記載の変異体。
  45. 前記変異体が、前記親プロテアーゼと比較して向上したタンパク質分解活性及び／又はクリーニング活性を有するか、あるいは、配列番号２に記載のプロテアーゼのタンパク質分解活性と比較して向上したタンパク質分解活性及び／又はクリーニング活性を有する、請求項２０〜４４のいずれか一項に記載の変異体。
  46. 前記変異体が、配列番号４に記載のプロテアーゼのタンパク質分解活性と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、請求項２０〜４４のいずれか一項に記載の変異体。
  47. 前記変異体が、配列番号６に記載のプロテアーゼのタンパク質分解活性と比較して向上したタンパク質分解活性を有する、請求項２０〜４４のいずれか一項に記載の変異体。
  48. 前記親プロテアーゼがスブチリシンプロテアーゼである、請求項２０〜４７のいずれか一項に記載の変異体。
  49. 前記親プロテアーゼが、配列番号２のアミノ酸配列を有するバチルス・アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）スブチリシンプロテアーゼＢＰＮ’に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する、請求項４８に記載の変異体。
  50. 前記親プロテアーゼが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する、請求項４９に記載の変異体。
  51. 親プロテアーゼの単離されたプロテアーゼ変異体であって、（ａ）前記プロテアーゼ変異体は、（ｉ）配列番号２の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列であって、（ｉｉ）位置２４及び５３におけるグリシンの置換、位置７８及び１０１におけるアスパラギンの置換、位置１２８におけるアラニン又はセリンの置換、及び位置２１７におけるグルタミンの置換を含む、アミノ酸配列を含み、（ｂ）前記親プロテアーゼは、配列番号２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、（ｃ）前記変異体の各アミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされ、並びに（ｄ）前記変異体は、親プロテアーゼと比較してタンパク質分解活性及び／又はクリーニング活性が増大している、変異体。
  52. 前記変異体が成熟型である、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の変異体。
  53. タンパク質分解活性を有する単離されたポリペプチドであって、前記ポリペプチドは、
    ａ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｌ２５７Ｇ、
    ｂ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ、
    ｃ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ００９Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ１４１Ｒ＋Ｎ２４３Ｖ、
    ｄ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ１６２Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
    ｅ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ、
    ｆ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ、
    ｇ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ１６２Ｇ＋Ｌ２５７Ｇ、
    ｈ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ０６１Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
    ｉ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ａ、
    ｊ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ、
    ｋ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
    ｌ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｇ１３１Ｈ＋Ｎ２４３Ｖ、
    ｍ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ、
    ｎ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
    ｏ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ、
    ｐ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ０６１Ｓ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ、
    ｑ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｐ０４０Ａ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｓ２４８Ｎ＋Ｋ２５６Ｒ、
    ｒ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ００９Ｔ＋Ｓ０１８Ｔ＋Ｙ０２１Ｎ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ１４１Ｒ、
    ｓ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
    ｔ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ａ０８８Ｔ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ａ１１６Ｔ＋Ｔ１５８Ｓ＋Ｎ２１８Ｓ＋Ｌ２５７Ｇ、
    ｕ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
    ｖ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ１０９Ｇ＋Ｎ２４３Ｖ＋Ｋ２５６Ｒ、
    ｗ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ０６３Ｇ＋Ｋ２５６Ｒ、
    ｘ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ１０９Ｇ、
    ｙ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ０６３Ｇ、
    ｚ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ０６３Ｇ＋Ｎ０７６Ｄ、
    ａａ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ｓ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｓ０３３Ｔ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓ、
    ｂｂ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ＋Ｎ０７６Ｄ＋Ｎ２１８Ｓ及び
    ｃｃ）ＢＰＮ’−Ｓ０２４Ｇ＋Ｓ０５３Ｇ＋Ｓ０７８Ｎ＋Ｓ１０１Ｎ＋Ｇ１２８Ａ＋Ｙ２１７Ｑ、からなる群から選択されるポリペプチド配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、前記変異体の各アミノ酸位置は、配列番号２の配列のアミノ酸位置に対応させることにより番号付けされる、変異体。
  54. 請求項１〜５２のいずれか一項に記載の変異体又は請求項５３に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列あるいはその相補的ポリヌクレオチド配列を含む、単離された核酸。
  55. 配列番号３若しくは配列番号５に記載のポリヌクレオチド配列又はその相補的ポリヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む、単離された核酸。
  56. 請求項５４又は５５に記載の少なくとも１つの核酸を含む発現ベクター。
  57. 前記少なくとも１つの核酸がプロモーターに作用可能に連結されている、請求項５６に記載の発現ベクター。
  58. （ａ）請求項６４又は６５に記載の核酸、あるいは、（ｂ）請求項５６又は５７に記載の発現ベクター、を含む、組み換え宿主細胞。
  59. 前記宿主細胞が細菌細胞である、請求項５８に記載の組み換え宿主細胞。
  60. 前記宿主細胞がバチルス細胞である、請求項５９に記載の組み換え宿主細胞。
  61. 前記宿主細胞が枯草菌（Bacillus subtilis）細胞である、請求項７０に記載の組み換え宿主細胞。
  62. （ａ）請求項５４又は５５に記載の核酸、あるいは、（ｂ）請求項５６又は５７に記載の発現ベクター、を含む、細胞培養物。
  63. プロテアーゼ変異体の製造方法であって、前記方法が、前記変異体の生産を促進する条件下で請求項５８〜６１のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞を培養することを含む、方法。
  64. 前記細胞培養物から前記変異体を回収することを更に含む、請求項６３に記載の方法。
  65. プロテアーゼ変異体の製造方法であって、前記方法が、
    （ａ）請求項５６又は５７に記載の組み換え発現ベクターを細胞集団に導入することと、
    （ｂ）前記発現ベクターによりコードされるプロテアーゼ変異体の生産を促進する条件下で培地内で前記細胞を培養することと、を含む、方法。
  66. （ｃ）前記細胞から又は前記培地から前記変異体を単離又は回収することを更に含む、請求項６５に記載の方法。
  67. 組成物が布地ケア製品及びホームケア製品ではない、請求項１〜５２のいずれか一項に記載の変異体又は請求項５３に記載のポリペプチドを含む組成物。
  68. 少なくとも１つの添加剤成分又は担体を含む、請求項６７に記載の組成物。
  69. 前記組成物が追加の酵素を含む、請求項６７又は６８に記載の組成物。
  70. 前記追加の酵素が、ヘミセルラーゼ、セルラーゼ、アミラーゼ、ペルオキシダーゼ、プロテアーゼ、キシラナーゼ、リパーゼ、ホスホリパーゼ、エステラーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼ、ペクタートリアーゼ、マンナナーゼ、ケラチナーゼ、レダクターゼ、オキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、リグニナーゼ、プルラナーゼ、タンナーゼ、ペントサナーゼ、マラナーゼ、β−グルカナーゼ、アラビノシターゼ、ヒアルロニダーゼ、コンドロイチナーゼ及びラッカーゼからなる群から選択される、請求項６９に記載の組成物。
  71. 前記組成物が、コンタクトレンズをクリーニングするための洗剤組成物である、請求項６７〜７０のいずれか一項に記載の組成物。
  72. 前記組成物が、パーソナルケア用途において有用であるクリーニング組成物である、請求項６７〜７０のいずれか一項に記載の組成物。
  73. 少なくとも１つのビルダー及び／又は少なくとも１つの界面活性剤を更に含む、請求項６７〜７２のいずれか一項に記載の組成物。
  74. クリーニングの必要のある物品又は表面をクリーニングするための方法であって、前記方法が、前記物品又は表面を、請求項１〜５２のいずれか一項に記載の変異体、請求項５３に記載のポリペプチド又は請求項６７〜７３のいずれか一項に記載の組成物と接触させることを含む、方法。
  75. 前記物品又は表面を水ですすぐことを更に含む、請求項７４に記載の方法。
  76. 表面又は物品をクリーニングするための方法であって、前記物品又は表面を所望の程度までクリーニング又は洗浄するのに、充分な時間にわたって並びに／又は充分な若しくは有効な条件下で、請求項１〜５２のいずれか一項に記載の変異体、請求項５３に記載のポリペプチド又は請求項６７〜７３のいずれか一項に記載の組成物と、洗浄すべき前記物品又は表面の少なくとも一部分を接触させることを含む、方法。
  77. 表面若しくは布地の処理及び／又はクリーニング方法であって、選択的に前記表面若しくは布地を洗浄する及び／又はすすぐ工程、前記表面若しくは布地を請求項１〜５２のいずれか一項に記載の変異体、請求項５２に記載のポリペプチド又は請求項６７〜７３のいずれか一項に記載の組成物と接触させる工程、次いで、選択的に前記表面若しくは布地を洗浄する及び／又はすすぐ工程を含む、方法。
  78. 請求項１〜５２のいずれか一項に記載の変異体であって、前記親プロテアーゼがスブチリシンプロテアーゼであり、前記変異体が、前記親スブチリシンプロテアーゼと比較したときに洗剤において向上した洗浄性能又は向上したクリーニング性能を有するスブチリシンプロテアーゼ変異体、又は、
    請求項５３に記載のポリペプチドであって、配列番号２、配列番号４又は配列番号６のプロテアーゼと比較したときに洗剤において向上した洗浄性能又は向上したクリーニング性能を有するポリペプチド。
JP2015147895A 2009-12-09 2015-07-27 プロテアーゼ変異体を含む組成物及び方法 Pending JP2016028571A (ja)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US28512709P 2009-12-09 2009-12-09
US61/285,127 2009-12-09
US39237310P 2010-10-12 2010-10-12
US61/392,373 2010-10-12

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2012543275A Division JP5863666B2 (ja) 2009-12-09 2010-12-09 プロテアーゼ変異体を含む組成物及び方法

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2016237236A Division JP6436957B2 (ja) 2009-12-09 2016-12-07 プロテアーゼ変異体を含む組成物及び方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2016028571A true JP2016028571A (ja) 2016-03-03

Family

ID=44146173

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2012543275A Active JP5863666B2 (ja) 2009-12-09 2010-12-09 プロテアーゼ変異体を含む組成物及び方法
JP2015147895A Pending JP2016028571A (ja) 2009-12-09 2015-07-27 プロテアーゼ変異体を含む組成物及び方法
JP2016237236A Active JP6436957B2 (ja) 2009-12-09 2016-12-07 プロテアーゼ変異体を含む組成物及び方法
JP2018212710A Pending JP2019068807A (ja) 2009-12-09 2018-11-13 プロテアーゼ変異体を含む組成物及び方法

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2012543275A Active JP5863666B2 (ja) 2009-12-09 2010-12-09 プロテアーゼ変異体を含む組成物及び方法

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2016237236A Active JP6436957B2 (ja) 2009-12-09 2016-12-07 プロテアーゼ変異体を含む組成物及び方法
JP2018212710A Pending JP2019068807A (ja) 2009-12-09 2018-11-13 プロテアーゼ変異体を含む組成物及び方法

Country Status (12)

Country Link
US (5) US8728790B2 (ja)
EP (3) EP3190183B1 (ja)
JP (4) JP5863666B2 (ja)
CN (2) CN105368809A (ja)
AR (1) AR079338A1 (ja)
AU (1) AU2010328121A1 (ja)
BR (1) BR112012014082B1 (ja)
CA (1) CA2782891C (ja)
DK (2) DK3190183T3 (ja)
ES (1) ES2746931T3 (ja)
MX (2) MX356282B (ja)
WO (1) WO2011072099A2 (ja)

Families Citing this family (152)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090060933A1 (en) * 2004-06-14 2009-03-05 Estell David A Proteases producing an altered immunogenic response and methods of making and using the same
DK2297314T3 (en) * 2008-06-06 2015-07-13 Danisco Us Inc COMPOSITIONS AND METHODS OF COMPREHENSIVE MICROBIAL PROTEASE VARIETIES
AR080886A1 (es) * 2010-04-15 2012-05-16 Danisco Us Inc Composiciones y metodos que comprenden proteasas variantes
DK2566961T3 (en) * 2010-05-06 2018-12-03 Danisco Us Inc COMPOSITIONS AND METHODS OF SUBTILISIN VARIETIES
WO2012151480A2 (en) * 2011-05-05 2012-11-08 The Procter & Gamble Company Compositions and methods comprising serine protease variants
AR086281A1 (es) * 2011-05-05 2013-12-04 Danisco Us Inc Composiciones y metodos que comprenden variantes de serina proteasas
ES2622230T3 (es) 2011-06-17 2017-07-06 Dalli-Werke Gmbh & Co. Kg Composición de detergente que comprende polímeros de liberación de suciedad con estabilidad en almacenamiento mejorada
US20130123162A1 (en) * 2011-11-10 2013-05-16 The Procter & Gamble Company Consumer products
CN104011204A (zh) * 2011-12-20 2014-08-27 诺维信公司 枯草杆菌酶变体和编码它们的多核苷酸
US9422697B2 (en) * 2012-09-14 2016-08-23 Impact Products, Llc Solid state fragrancing
US20160053243A1 (en) 2012-12-21 2016-02-25 Danisco Us Inc. Alpha-amylase variants
WO2014099525A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Danisco Us Inc. Paenibacillus curdlanolyticus amylase, and methods of use, thereof
ES2676895T5 (es) 2013-03-11 2022-04-27 Danisco Us Inc Variantes combinatorias de alfa-amilasa
EP4159854A1 (en) 2013-05-29 2023-04-05 Danisco US Inc Novel metalloproteases
US20160160202A1 (en) 2013-05-29 2016-06-09 Danisco Us Inc. Novel metalloproteases
JP6367930B2 (ja) 2013-05-29 2018-08-01 ダニスコ・ユーエス・インク 新規メタロプロテアーゼ
EP3004341B1 (en) 2013-05-29 2017-08-30 Danisco US Inc. Novel metalloproteases
WO2014200657A1 (en) 2013-06-13 2014-12-18 Danisco Us Inc. Alpha-amylase from streptomyces xiamenensis
WO2014200656A1 (en) 2013-06-13 2014-12-18 Danisco Us Inc. Alpha-amylase from streptomyces umbrinus
WO2014200658A1 (en) 2013-06-13 2014-12-18 Danisco Us Inc. Alpha-amylase from promicromonospora vindobonensis
US20160130571A1 (en) 2013-06-17 2016-05-12 Danisco Us Inc. Alpha-Amylase from Bacillaceae Family Member
EP3027747B1 (en) * 2013-07-29 2018-02-07 Novozymes A/S Protease variants and polynucleotides encoding same
EP3027748B1 (en) * 2013-07-29 2019-09-18 Novozymes A/S Protease variants and polynucleotides encoding same
US20160186102A1 (en) 2013-10-03 2016-06-30 Danisco Us Inc. Alpha-amylases from exiguobacterium, and methods of use, thereof
WO2015050723A1 (en) 2013-10-03 2015-04-09 Danisco Us Inc. Alpha-amylases from exiguobacterium, and methods of use, thereof
EP3058055A1 (en) 2013-10-15 2016-08-24 Danisco US Inc. Clay granule
DK3068879T3 (da) 2013-11-14 2020-03-16 Danisco Us Inc Stabile enzymer opnået ved glykeringsreduktion
JP6560214B2 (ja) 2013-11-20 2019-08-14 ダニスコ・ユーエス・インク プロテアーゼ開裂に対する感受性を低減した変異体α−アミラーゼ、及びその使用方法
ES2723948T3 (es) 2013-12-13 2019-09-04 Danisco Us Inc Serina proteasas procedentes de especies de Bacillus
US10533165B2 (en) 2013-12-13 2020-01-14 Danisco Us Inc Serine proteases of the bacillus gibsonii-clade
EP4163305A1 (en) 2013-12-16 2023-04-12 Nutrition & Biosciences USA 4, Inc. Use of poly alpha-1,3-glucan ethers as viscosity modifiers
WO2015095358A1 (en) 2013-12-18 2015-06-25 E. I. Du Pont De Nemours And Company Cationic poly alpha-1,3-glucan ethers
WO2015123323A1 (en) 2014-02-14 2015-08-20 E. I. Du Pont De Nemours And Company Poly-alpha-1,3-1,6-glucans for viscosity modification
WO2015138283A1 (en) 2014-03-11 2015-09-17 E. I. Du Pont De Nemours And Company Oxidized poly alpha-1,3-glucan as detergent builder
MX2016012044A (es) 2014-03-21 2017-06-29 Danisco Us Inc Serina proteasas de especies de bacillus.
JP6591998B2 (ja) * 2014-03-28 2019-10-16 ノボザイムス アクティーゼルスカブ 低ｐＨでのタンパク質結晶の再可溶化
US9771548B2 (en) 2014-06-19 2017-09-26 E I Du Pont De Nemours And Company Compositions containing one or more poly alpha-1,3-glucan ether compounds
US9714403B2 (en) 2014-06-19 2017-07-25 E I Du Pont De Nemours And Company Compositions containing one or more poly alpha-1,3-glucan ether compounds
CN107002110A (zh) * 2014-10-10 2017-08-01 恩细贝普有限公司 用具有改善的合成水解比的枯草杆菌蛋白酶变体的肽片段缩合和环化
EP3207129B1 (en) 2014-10-17 2019-11-20 Danisco US Inc. Serine proteases of bacillus species
BR112017007949A2 (pt) 2014-10-24 2018-01-23 Danisco Us Inc método para produção de álcool pelo uso de uma tripeptidil-peptidase
EP3212783A1 (en) 2014-10-27 2017-09-06 Danisco US Inc. Serine proteases
EP3212782B1 (en) 2014-10-27 2019-04-17 Danisco US Inc. Serine proteases
WO2016069557A1 (en) 2014-10-27 2016-05-06 Danisco Us Inc. Serine proteases of bacillus species
WO2016069552A1 (en) 2014-10-27 2016-05-06 Danisco Us Inc. Serine proteases
DK3212781T3 (da) 2014-10-27 2019-12-16 Danisco Us Inc Serinproteaser
CA2969241A1 (en) 2014-12-23 2016-06-30 E.I. Du Pont De Nemours And Company Enzymatically produced cellulose
JP7274819B2 (ja) 2015-05-13 2023-05-17 ダニスコ・ユーエス・インク ＡｐｒＬ－ＣＬＡＤＥプロテアーゼ変異体及びその使用
WO2016201069A1 (en) 2015-06-09 2016-12-15 Danisco Us Inc Low-density enzyme-containing particles
WO2016201040A1 (en) 2015-06-09 2016-12-15 Danisco Us Inc. Water-triggered enzyme suspension
DK3307427T3 (da) 2015-06-09 2023-11-06 Danisco Us Inc Osmotisk sprængnings-kapsler
EP4234693A3 (en) 2015-06-17 2023-11-01 Danisco US Inc Bacillus gibsonii-clade serine proteases
WO2017079756A1 (en) 2015-11-05 2017-05-11 Danisco Us Inc Paenibacillus and bacillus spp. mannanases
CN109072208A (zh) * 2015-11-05 2018-12-21 丹尼斯科美国公司 类芽孢杆菌属物种甘露聚糖酶
WO2017083226A1 (en) 2015-11-13 2017-05-18 E. I. Du Pont De Nemours And Company Glucan fiber compositions for use in laundry care and fabric care
US10822574B2 (en) 2015-11-13 2020-11-03 Dupont Industrial Biosciences Usa, Llc Glucan fiber compositions for use in laundry care and fabric care
EP3374400B1 (en) 2015-11-13 2022-04-13 Nutrition & Biosciences USA 4, Inc. Glucan fiber compositions for use in laundry care and fabric care
DE102015223270A1 (de) * 2015-11-25 2017-06-01 Henkel Ag & Co. Kgaa Proteasevarianten mit verbesserter Enzymstabilität in Wasch- und Reinigungsmitteln
BR112018010475B1 (pt) 2015-11-25 2023-02-14 Unilever Ip Holdings B.V. Composição de detergente líquido e método de lavagem de roupas utilizando uma composição de detergente líquido para lavar roupas
DK3387124T3 (da) 2015-12-09 2021-08-23 William Cuevas Kombinatoriske alfa-amylasevarianter
WO2017106676A1 (en) 2015-12-18 2017-06-22 Danisco Us Inc Polypeptides with endoglucanase activity and uses thereof
FI3419991T3 (fi) 2016-03-04 2023-01-31 Modifioidut ribosomaaliset promoottorit proteiinien tuottamiseksi mikro-organismeissa
WO2017173324A2 (en) 2016-04-01 2017-10-05 Danisco Us Inc. Alpha-amylases, compositions & methods
WO2017173190A2 (en) 2016-04-01 2017-10-05 Danisco Us Inc. Alpha-amylases, compositions & methods
DE102016205670A1 (de) * 2016-04-06 2017-10-12 Henkel Ag & Co. Kgaa Neue Protease mit verbesserter Waschleistung
CA3022875A1 (en) 2016-05-03 2017-11-09 Danisco Us Inc Protease variants and uses thereof
EP3452584B1 (en) 2016-05-05 2021-01-06 Danisco US Inc. Protease variants and uses thereof
JP2019523645A (ja) 2016-05-31 2019-08-29 ダニスコ・ユーエス・インク プロテアーゼ変異体およびその使用
BR112018075933A2 (pt) * 2016-06-17 2019-10-01 Danisco Us Inc variantes de protease e usos das mesmas
EP3497199A1 (en) 2016-08-08 2019-06-19 Basf Se Liquid laundry formulation
EP3535365A2 (en) 2016-11-07 2019-09-11 Danisco US Inc. Laundry detergent composition
KR20190086540A (ko) 2016-12-01 2019-07-22 바스프 에스이 조성물 중 효소의 안정화
MX2019007024A (es) * 2016-12-16 2019-08-16 Carbios Proteasas de degradacion de plastico mejoradas.
EP3559226B1 (en) 2016-12-21 2023-01-04 Danisco US Inc. Bacillus gibsonii-clade serine proteases
CN110312795A (zh) 2016-12-21 2019-10-08 丹尼斯科美国公司 蛋白酶变体及其用途
US20200040283A1 (en) 2017-03-31 2020-02-06 Danisco Us Inc Delayed release enzyme formulations for bleach-containing detergents
EP3601553A1 (en) 2017-03-31 2020-02-05 Danisco US Inc. Alpha-amylase combinatorial variants
CN110505803A (zh) 2017-04-13 2019-11-26 松下知识产权经营株式会社 水耕栽培装置
EP3404036A1 (en) * 2017-05-19 2018-11-21 Enzypep B.V. Subtilisin variants having a mutation in the s2 or s2' pocket
CA3067837A1 (en) 2017-06-30 2019-01-03 Danisco Us Inc Low-agglomeration, enzyme-containing particles
WO2019036721A2 (en) 2017-08-18 2019-02-21 Danisco Us Inc VARIANTS OF ALPHA-AMYLASES
EP3703661A1 (en) 2017-11-02 2020-09-09 Danisco US Inc. Freezing point depressed solid matrix compositions for melt granulation of enzymes
CN111373039A (zh) 2017-11-29 2020-07-03 丹尼斯科美国公司 具有改善的稳定性的枯草杆菌蛋白酶变体
EP3717611A1 (en) 2017-11-29 2020-10-07 Basf Se Compositions, their manufacture and use
US20210222148A1 (en) 2017-12-21 2021-07-22 Danisco Us Inc. Enzyme-containing, hot-melt granules comprising a thermotolerant desiccant
MX2020008302A (es) 2018-02-08 2020-10-14 Danisco Us Inc Partículas de matriz de cera térmicamente resistentes para encapsulación de enzimas.
EP3784779A1 (en) 2018-04-26 2021-03-03 Basf Se Lipase enzymes
EP3788145A1 (en) 2018-05-03 2021-03-10 Basf Se Amylase enzymes
CN110607291B (zh) * 2018-06-14 2022-05-31 青岛蔚蓝生物集团有限公司 耐热木聚糖酶突变体
WO2019238761A1 (en) 2018-06-15 2019-12-19 Basf Se Water soluble multilayer films containing wash active chemicals and enzymes
WO2019245705A1 (en) 2018-06-19 2019-12-26 Danisco Us Inc Subtilisin variants
WO2019245704A1 (en) 2018-06-19 2019-12-26 Danisco Us Inc Subtilisin variants
CN108795906B (zh) * 2018-07-02 2022-02-22 四川德博尔制药有限公司 用于水解蛋壳膜的复合酶、蛋壳膜的水解方法、蛋壳膜水解产物及其提取方法
US20230174962A1 (en) 2018-07-31 2023-06-08 Danisco Us Inc Variant alpha-amylases having amino acid substitutions that lower the pka of the general acid
WO2020030623A1 (en) 2018-08-10 2020-02-13 Basf Se Packaging unit comprising a detergent composition containing an enzyme and at least one chelating agent
WO2020047215A1 (en) 2018-08-30 2020-03-05 Danisco Us Inc Enzyme-containing granules
CN113166682A (zh) 2018-09-27 2021-07-23 丹尼斯科美国公司 用于医疗器械清洁的组合物
BR112021005954A2 (pt) 2018-10-05 2021-06-29 Basf Se preparação enzimática, processo para produzir uma preparação enzimática estável, métodos para reduzir perda de atividade lipolítica de pelo menos uma lipase, para preparar uma formulação de detergente, para remover manchas e para aumentar a estabilidade de armazenagem de uma formulação de detergente líquido, usos de um composto e da preparação enzimática, e, formulação de detergente.
EP3677676A1 (en) 2019-01-03 2020-07-08 Basf Se Compounds stabilizing amylases in liquids
WO2020069914A1 (en) 2018-10-05 2020-04-09 Basf Se Compounds stabilizing amylases in liquids
WO2020069915A1 (en) 2018-10-05 2020-04-09 Basf Se Compounds stabilizing hydrolases in liquids
US20220025355A1 (en) * 2018-10-10 2022-01-27 Shangrao Concord Pharmaceutical Co., Ltd Method for screening protease variant and obtained protease variant
CN113166745A (zh) 2018-10-12 2021-07-23 丹尼斯科美国公司 在螯合剂存在下具有可增强稳定性的突变的α-淀粉酶
CN112961853A (zh) * 2018-11-02 2021-06-15 中国科学院动物研究所 基于C2c1核酸酶的基因组编辑系统和方法
WO2020104231A1 (en) 2018-11-19 2020-05-28 Basf Se Powders and granules containing a chelating agent and an enzyme
WO2020112599A1 (en) 2018-11-28 2020-06-04 Danisco Us Inc Subtilisin variants having improved stability
CN114096676A (zh) 2019-02-20 2022-02-25 巴斯夫欧洲公司 用确定成分培养基和镁补料的芽孢杆菌工业发酵工艺
EP3927809A1 (en) 2019-02-20 2021-12-29 Basf Se Industrial fermentation process for bacillus using defined medium and trace element feed
JP7209348B2 (ja) 2019-03-29 2023-01-20 パナソニックＩｐマネジメント株式会社 車両管理装置、車両管理方法及び車両
WO2020229480A1 (en) 2019-05-14 2020-11-19 Basf Se Compounds stabilizing hydrolases in liquids
WO2020242858A1 (en) 2019-05-24 2020-12-03 Danisco Us Inc Subtilisin variants and methods of use
CN114174486A (zh) 2019-06-06 2022-03-11 丹尼斯科美国公司 用于清洁的方法和组合物
EP3983425A1 (en) 2019-06-13 2022-04-20 Basf Se Method of recovering a protein from fermentation broth using a divalent cation
US20220267699A1 (en) 2019-07-01 2022-08-25 Basf Se Peptide acetals for stabilising enzymes
WO2021001297A1 (en) 2019-07-02 2021-01-07 Basf Se Method for preparing a fermentation medium
CN114096677A (zh) 2019-07-05 2022-02-25 巴斯夫欧洲公司 使用补料分批预培养的微生物细胞工业发酵方法
WO2021074430A1 (en) 2019-10-18 2021-04-22 Basf Se Storage-stable hydrolase containing liquids
CN114846023A (zh) 2019-10-24 2022-08-02 丹尼斯科美国公司 成麦芽五糖/麦芽六糖变体α-淀粉酶
JP2023500362A (ja) 2019-11-11 2023-01-05 ダニスコ・ユーエス・インク バチルス属（ｂａｃｉｌｌｕｓ）細胞における強化されたタンパク質産生のための組成物及び方法
WO2021105330A1 (en) 2019-11-29 2021-06-03 Basf Se Compositions and polymers useful for such compositions
WO2021115912A1 (en) 2019-12-09 2021-06-17 Basf Se Formulations comprising a hydrophobically modified polyethyleneimine and one or more enzymes
WO2021160818A1 (en) 2020-02-14 2021-08-19 Basf Se Mannanase variants
EP4168523A1 (en) 2020-06-18 2023-04-26 Basf Se Compositions and their use
JP2023537833A (ja) 2020-07-09 2023-09-06 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 組成物及びその用途
WO2022008732A1 (en) 2020-07-10 2022-01-13 Basf Se Enhancing the activity of antimicrobial preservatives
US20240034960A1 (en) 2020-08-27 2024-02-01 Danisco Us Inc Enzymes and enzyme compositions for cleaning
CN116323932A (zh) * 2020-08-28 2023-06-23 诺维信公司 具有改善的溶解度的蛋白酶变体
WO2022083949A1 (en) 2020-10-20 2022-04-28 Basf Se Compositions and their use
WO2022106400A1 (en) * 2020-11-18 2022-05-27 Novozymes A/S Combination of immunochemically different proteases
CN112501149B (zh) * 2020-12-21 2022-03-18 天津科技大学 一种碱性蛋白酶突变体及其基因、工程菌、制备方法和应用
WO2022165107A1 (en) 2021-01-29 2022-08-04 Danisco Us Inc Compositions for cleaning and methods related thereto
WO2023278297A1 (en) 2021-06-30 2023-01-05 Danisco Us Inc Variant lipases and uses thereof
WO2023023644A1 (en) 2021-08-20 2023-02-23 Danisco Us Inc. Polynucleotides encoding novel nucleases, compositions thereof and methods thereof for eliminating dna from protein preparations
WO2023034486A2 (en) 2021-09-03 2023-03-09 Danisco Us Inc. Laundry compositions for cleaning
WO2023039270A2 (en) 2021-09-13 2023-03-16 Danisco Us Inc. Bioactive-containing granules
WO2023061827A1 (en) 2021-10-13 2023-04-20 Basf Se Compositions comprising polymers, polymers, and their use
WO2023066741A1 (en) 2021-10-20 2023-04-27 Basf Se Phosphate-free composition and methods for their manufacture and use
WO2023088761A1 (en) 2021-11-22 2023-05-25 Basf Se Compositions comprising polymers, polymers, and their use
WO2023088776A1 (en) 2021-11-22 2023-05-25 Basf Se Compositions comprising polymers, polymers, and their use
WO2023114936A2 (en) 2021-12-16 2023-06-22 Danisco Us Inc. Subtilisin variants and methods of use
WO2023114939A2 (en) 2021-12-16 2023-06-22 Danisco Us Inc. Subtilisin variants and methods of use
WO2023114988A2 (en) 2021-12-16 2023-06-22 Danisco Us Inc. Variant maltopentaose/maltohexaose-forming alpha-amylases
WO2023114932A2 (en) 2021-12-16 2023-06-22 Danisco Us Inc. Subtilisin variants and methods of use
WO2023110599A2 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Basf Se Compositions and their applications
WO2023137264A1 (en) 2022-01-13 2023-07-20 Danisco Us Inc. Compositions and methods for enhanced protein production in gram‑positive bacterial cells
WO2023168234A1 (en) 2022-03-01 2023-09-07 Danisco Us Inc. Enzymes and enzyme compositions for cleaning
WO2023225459A2 (en) 2022-05-14 2023-11-23 Novozymes A/S Compositions and methods for preventing, treating, supressing and/or eliminating phytopathogenic infestations and infections
WO2023250301A1 (en) 2022-06-21 2023-12-28 Danisco Us Inc. Methods and compositions for cleaning comprising a polypeptide having thermolysin activity
WO2024012894A1 (en) 2022-07-15 2024-01-18 Basf Se Alkanolamine formates for enzyme stabilization in liquid formulations
WO2024050346A1 (en) 2022-09-02 2024-03-07 Danisco Us Inc. Detergent compositions and methods related thereto
WO2024050339A1 (en) 2022-09-02 2024-03-07 Danisco Us Inc. Mannanase variants and methods of use
WO2024050343A1 (en) 2022-09-02 2024-03-07 Danisco Us Inc. Subtilisin variants and methods related thereto

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005519592A (ja) * 2002-01-16 2005-07-07 ジェネンコー・インターナショナル・インク 複数置換プロテアーゼ変異体
WO2008153925A2 (en) * 2007-06-06 2008-12-18 Danisco Us, Inc., Genencor Division Methods for improving multiple protein properties
WO2009149144A2 (en) * 2008-06-06 2009-12-10 Danisco Us Inc. Compositions and methods comprising variant microbial proteases

Family Cites Families (112)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1296839A (ja) 1969-05-29 1972-11-22
GB1372034A (en) 1970-12-31 1974-10-30 Unilever Ltd Detergent compositions
GB2048606B (en) 1979-02-28 1983-03-16 Barr & Stroud Ltd Optical scanning system
US4302544A (en) 1979-10-15 1981-11-24 University Of Rochester Asporogenous mutant of B. subtilis for use as host component of HV1 system
DK187280A (da) 1980-04-30 1981-10-31 Novo Industri As Ruhedsreducerende middel til et fuldvaskemiddel fuldvaskemiddel og fuldvaskemetode
GR76237B (ja) 1981-08-08 1984-08-04 Procter & Gamble
US4450235A (en) 1982-04-21 1984-05-22 Cpc International Inc. Asporogenic mutant of bacillus subtilis useful as a host in a host-vector system
US4561998A (en) 1982-05-24 1985-12-31 The Procter & Gamble Company Near-neutral pH detergents containing anionic surfactant, cosurfactant and fatty acid
US4550862A (en) 1982-11-17 1985-11-05 The Procter & Gamble Company Liquid product pouring and measuring package with self draining feature
US4597898A (en) 1982-12-23 1986-07-01 The Proctor & Gamble Company Detergent compositions containing ethoxylated amines having clay soil removal/anti-redeposition properties
US4760025A (en) 1984-05-29 1988-07-26 Genencor, Inc. Modified enzymes and methods for making same
US4515707A (en) 1983-06-27 1985-05-07 The Chemithon Corporation Intermediate product for use in producing a detergent bar and method for producing same
IE58014B1 (en) 1983-07-06 1993-06-16 Gist Brocades Nv Molecular cloning and expression in industrial microorganism species
US4515705A (en) 1983-11-14 1985-05-07 The Procter & Gamble Company Compositions containing odor purified proteolytic enzymes and perfumes
US4537706A (en) 1984-05-14 1985-08-27 The Procter & Gamble Company Liquid detergents containing boric acid to stabilize enzymes
US5763257A (en) 1984-05-29 1998-06-09 Genencor International, Inc. Modified subtilisins having amino acid alterations
US5972682A (en) 1984-05-29 1999-10-26 Genencor International, Inc. Enzymatically active modified subtilisins
US5264366A (en) 1984-05-29 1993-11-23 Genencor, Inc. Protease deficient bacillus
US5155033A (en) * 1989-01-06 1992-10-13 Genencor, Inc. Subtilisins modified at position 225 resulting in a shift in catalytic activity
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US4965188A (en) 1986-08-22 1990-10-23 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences using a thermostable enzyme
DK171161B1 (da) 1985-03-28 1996-07-08 Hoffmann La Roche Fremgangsmåde til påvisning af forekomst eller fravær af mindst én specifik nukleinsyresekvens i en prøve eller til skelnen mellem to forskellige nukleinsyresekvenser i denne prøve
DK154572C (da) 1985-08-07 1989-04-24 Novo Industri As Enzymatisk detergentadditiv, detergent og fremgangsmaade til vask af tekstiler
JPH0697997B2 (ja) 1985-08-09 1994-12-07 ギスト ブロカデス ナ−ムロ−ゼ フエンノ−トチヤツプ 新規の酵素的洗浄剤添加物
DK122686D0 (da) 1986-03-17 1986-03-17 Novo Industri As Fremstilling af proteiner
ATE110768T1 (de) 1986-08-29 1994-09-15 Novo Nordisk As Enzymhaltiger reinigungsmittelzusatz.
GB8629837D0 (en) 1986-12-13 1987-01-21 Interox Chemicals Ltd Bleach activation
US4972017A (en) 1987-03-24 1990-11-20 The Clorox Company Rinse soluble polymer film composition for wash additives
US4765916A (en) 1987-03-24 1988-08-23 The Clorox Company Polymer film composition for rinse release of wash additives
DE3851875T2 (de) 1987-05-29 1995-04-13 Genencor Int Cutinase haltige reinigungsmittelzusammensetzungen.
ES2076939T3 (es) 1987-08-28 1995-11-16 Novo Nordisk As Lipasa recombinante de humicola y procedimiento para la produccion de lipasas recombinantes de humicola.
JPS6474992A (en) 1987-09-16 1989-03-20 Fuji Oil Co Ltd Dna sequence, plasmid and production of lipase
JP2624859B2 (ja) 1988-01-07 1997-06-25 ノボ‐ノルディスク アクティーゼルスカブ 酵素洗剤
JP3079276B2 (ja) 1988-02-28 2000-08-21 天野製薬株式会社 組換え体ｄｎａ、それを含むシュードモナス属菌及びそれを用いたリパーゼの製造法
US4977252A (en) 1988-03-11 1990-12-11 National Starch And Chemical Investment Holding Corporation Modified starch emulsifier characterized by shelf stability
US4968451A (en) 1988-08-26 1990-11-06 The Procter & Gamble Company Soil release agents having allyl-derived sulfonated end caps
WO1990009446A1 (en) 1989-02-17 1990-08-23 Plant Genetic Systems N.V. Cutinase
EP0493398B1 (en) 1989-08-25 1999-12-08 Henkel Research Corporation Alkaline proteolytic enzyme and method of production
JP3112937B2 (ja) 1990-04-14 2000-11-27 カリ―ヒエミー アクチエンゲゼルシヤフト アルカリ性バチルスーリパーゼ、これをコード化するｄｎａ配列およびこのリパーゼを生産するバチルス
US5354559A (en) 1990-05-29 1994-10-11 Grain Processing Corporation Encapsulation with starch hydrolyzate acid esters
ES2174820T3 (es) 1991-01-16 2002-11-16 Procter & Gamble Composiciones detergentes compactas con celulasa de alta actividad.
GB9108136D0 (en) 1991-04-17 1991-06-05 Unilever Plc Concentrated detergent powder compositions
US5340735A (en) 1991-05-29 1994-08-23 Cognis, Inc. Bacillus lentus alkaline protease variants with increased stability
EP0679183B1 (en) 1992-12-01 2003-04-16 Novozymes A/S Enhancement of enzyme reactions
AU6029894A (en) 1993-01-18 1994-08-15 Procter & Gamble Company, The Machine dishwashing detergent compositions
CZ286401B6 (en) 1993-05-08 2000-04-12 Henkel Kgaa Use of inorganic redox-active substances
DK0697036T3 (da) 1993-05-08 2000-01-31 Henkel Kgaa Sølvkorrosionsbeskyttelsesmiddel II
US5888954A (en) 1993-05-08 1999-03-30 Henkel Kommanditgesellschaft Auf Aktien Corrosion inhibitors for silver
DK77393D0 (da) 1993-06-29 1993-06-29 Novo Nordisk As Aktivering af enzymer
US5698504A (en) 1993-07-01 1997-12-16 The Procter & Gamble Company Machine dishwashing composition containing oxygen bleach and paraffin oil and benzotriazole compound silver tarnishing inhibitors
US5486303A (en) 1993-08-27 1996-01-23 The Procter & Gamble Company Process for making high density detergent agglomerates using an anhydrous powder additive
US6436690B1 (en) * 1993-09-15 2002-08-20 The Procter & Gamble Company BPN′ variants having decreased adsorption and increased hydrolysis wherein one or more loop regions are substituted
DE4342680A1 (de) 1993-12-15 1995-06-22 Pfeiffer Erich Gmbh & Co Kg Austragvorrichtung für Medien
US5861271A (en) 1993-12-17 1999-01-19 Fowler; Timothy Cellulase enzymes and systems for their expressions
ES2364774T3 (es) 1994-02-24 2011-09-14 HENKEL AG & CO. KGAA Enzimas mejoradas y detergentes que las contienen.
US5691295A (en) 1995-01-17 1997-11-25 Cognis Gesellschaft Fuer Biotechnologie Mbh Detergent compositions
ATE512226T1 (de) 1994-02-24 2011-06-15 Henkel Ag & Co Kgaa Verbesserte enzyme und detergentien damit
US5686014A (en) 1994-04-07 1997-11-11 The Procter & Gamble Company Bleach compositions comprising manganese-containing bleach catalysts
ZA952220B (en) * 1994-05-02 1995-12-14 Procter & Gamble Bpn' variants having decreased adsorption and increased hydrolysis wherein one or more loop regions are substituted
PE6995A1 (es) 1994-05-25 1995-03-20 Procter & Gamble Composicion que comprende un polimero de polialquilenoamina etoxilado propoxilado como agente de separacion de sucio
JPH11500465A (ja) 1994-06-17 1999-01-12 ジェネンコア インターナショナル インコーポレーテッド 植物細胞壁分解酵素を有する洗浄用組成物とその洗浄方法における利用
GB2294268A (en) 1994-07-07 1996-04-24 Procter & Gamble Bleaching composition for dishwasher use
US5879584A (en) 1994-09-10 1999-03-09 The Procter & Gamble Company Process for manufacturing aqueous compositions comprising peracids
US5489392A (en) 1994-09-20 1996-02-06 The Procter & Gamble Company Process for making a high density detergent composition in a single mixer/densifier with selected recycle streams for improved agglomerate properties
US5691297A (en) 1994-09-20 1997-11-25 The Procter & Gamble Company Process for making a high density detergent composition by controlling agglomeration within a dispersion index
US5516448A (en) 1994-09-20 1996-05-14 The Procter & Gamble Company Process for making a high density detergent composition which includes selected recycle streams for improved agglomerate
DE69515331T2 (de) 1994-12-09 2000-10-19 Procter & Gamble Diacylperoxydteilchen enthaltende zusammensetzungen für automatische geschirreinigung
US5534179A (en) 1995-02-03 1996-07-09 Procter & Gamble Detergent compositions comprising multiperacid-forming bleach activators
US5574005A (en) 1995-03-07 1996-11-12 The Procter & Gamble Company Process for producing detergent agglomerates from high active surfactant pastes having non-linear viscoelastic properties
US5569645A (en) 1995-04-24 1996-10-29 The Procter & Gamble Company Low dosage detergent composition containing optimum proportions of agglomerates and spray dried granules for improved flow properties
US5597936A (en) 1995-06-16 1997-01-28 The Procter & Gamble Company Method for manufacturing cobalt catalysts
WO1997000312A1 (en) 1995-06-16 1997-01-03 The Procter & Gamble Company Automatic dishwashing compositions comprising cobalt catalysts
US5565422A (en) 1995-06-23 1996-10-15 The Procter & Gamble Company Process for preparing a free-flowing particulate detergent composition having improved solubility
US5576282A (en) 1995-09-11 1996-11-19 The Procter & Gamble Company Color-safe bleach boosters, compositions and laundry methods employing same
WO1997011151A1 (en) 1995-09-18 1997-03-27 The Procter & Gamble Company Delivery systems
MA24136A1 (fr) 1996-04-16 1997-12-31 Procter & Gamble Fabrication d'agents de surface .
US5929022A (en) 1996-08-01 1999-07-27 The Procter & Gamble Company Detergent compositions containing amine and specially selected perfumes
AU731577B2 (en) 1997-03-07 2001-04-05 Procter & Gamble Company, The Bleach compositions containing metal bleach catalyst, and bleach activators and/or organic percarboxylic acids
AU6226198A (en) 1997-03-07 1998-09-22 Procter & Gamble Company, The Improved methods of making cross-bridged macropolycycles
GB2327947A (en) 1997-08-02 1999-02-10 Procter & Gamble Detergent tablet
US6376445B1 (en) 1997-08-14 2002-04-23 Procter & Gamble Company Detergent compositions comprising a mannanase and a protease
DE19736591A1 (de) 1997-08-22 1999-02-25 Peter Prof Dr Hegemann Verfahren zum Herstellen von Nukleinsäurepolymeren
AR015977A1 (es) 1997-10-23 2001-05-30 Genencor Int Variantes de proteasa multiplemente substituida con carga neta alterada para su empleo en detergentes
US5935826A (en) 1997-10-31 1999-08-10 National Starch And Chemical Investment Holding Corporation Glucoamylase converted starch derivatives and their use as emulsifying and encapsulating agents
US6287839B1 (en) 1997-11-19 2001-09-11 Genencor International, Inc. Cellulase producing actinomycetes, cellulase produced therefrom and method of producing same
WO1999027082A1 (en) 1997-11-21 1999-06-03 Novo Nordisk A/S Protease variants and compositions
WO1999034011A2 (en) 1997-12-24 1999-07-08 Genencor International, Inc. Method of assaying for a preferred enzyme and/or detergent
US6642011B2 (en) * 1998-04-15 2003-11-04 Genencor International, Inc. Human protease and use of such protease for pharmaceutical applications and for reducing the allergenicity of non-human proteins
MXPA00012241A (es) 1998-06-10 2002-06-04 Novozymes As Mananasas novedosas.
US6376450B1 (en) 1998-10-23 2002-04-23 Chanchal Kumar Ghosh Cleaning compositions containing multiply-substituted protease variants
US6294514B1 (en) 1998-11-24 2001-09-25 The Procter & Gamble Company Process for preparing mono-long chain amine oxide surfactants with low nitrite, nitrosamine and low residual peroxide
EP1135392A2 (en) 1998-11-30 2001-09-26 The Procter & Gamble Company Process for preparing cross-bridged tetraaza macrocycles
CN1399677A (zh) * 1999-07-22 2003-02-26 宝洁公司 在确定表位区有氨基酸取代的枯草杆菌蛋白酶变体
US6440991B1 (en) 2000-10-02 2002-08-27 Wyeth Ethers of 7-desmethlrapamycin
US6582914B1 (en) 2000-10-26 2003-06-24 Genencor International, Inc. Method for generating a library of oligonucleotides comprising a controlled distribution of mutations
RU2311458C2 (ru) * 2001-03-23 2007-11-27 Джененкор Интернэшнл, Инк. Белки, вызывающие измененную иммуногенную реакцию, и способы их получения и использования
GB0114847D0 (en) 2001-06-18 2001-08-08 Unilever Plc Water soluble package and liquid contents thereof
US20050054843A1 (en) 2001-12-31 2005-03-10 Estell David A Proteases producing an altered immunological response and methods of making and using the same
WO2003057713A2 (en) * 2001-12-31 2003-07-17 Genencor International, Inc. Proteases producing an altered immunogenic response and methods of making and using the same
MXPA04008144A (es) * 2002-02-26 2004-11-26 Genencor Int Proteinas de subtilisina carlsberg con inmunogenicidad reducida.
US7557076B2 (en) 2002-06-06 2009-07-07 The Procter & Gamble Company Organic catalyst with enhanced enzyme compatibility
DE10260805A1 (de) 2002-12-23 2004-07-22 Geneart Gmbh Verfahren und Vorrichtung zum Optimieren einer Nucleotidsequenz zur Expression eines Proteins
US7294499B2 (en) 2003-01-30 2007-11-13 Novozymes A/S Subtilases
ES2299682T3 (es) 2003-05-23 2008-06-01 THE PROCTER & GAMBLE COMPANY Composicion limpiadora para usar en una lavadora o un lavavajillas.
EP1692160B1 (en) 2003-11-06 2010-10-27 Danisco US Inc. Fgf-5 binding and supported peptides
DK2664670T3 (da) 2003-12-03 2015-07-27 Danisco Us Inc Perhydrolase
AU2006299783B2 (en) 2005-10-12 2012-06-14 Danisco Us Inc. Use and production of storage-stable neutral metalloprotease
CA2652678A1 (en) 2006-06-05 2007-12-21 The Procter & Gamble Company Detergent compositions comprising polysaccharides as enzyme stabilizers
US20080090747A1 (en) 2006-07-18 2008-04-17 Pieter Augustinus Protease variants active over a broad temperature range
EP2100947A1 (en) 2008-03-14 2009-09-16 The Procter and Gamble Company Automatic dishwashing detergent composition
EP2510092A1 (en) * 2009-12-09 2012-10-17 The Procter & Gamble Company Fabric and home care products

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005519592A (ja) * 2002-01-16 2005-07-07 ジェネンコー・インターナショナル・インク 複数置換プロテアーゼ変異体
WO2008153925A2 (en) * 2007-06-06 2008-12-18 Danisco Us, Inc., Genencor Division Methods for improving multiple protein properties
WO2009149144A2 (en) * 2008-06-06 2009-12-10 Danisco Us Inc. Compositions and methods comprising variant microbial proteases
WO2009149200A2 (en) * 2008-06-06 2009-12-10 Danisco Us Inc. Compositions and methods comprising variant microbial proteases

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GODDETTE,D.W.ET AL.: ""Accession:P29599[gi:267046],Definition:RecName: Full=Subtilisin BL; AltName: Full=Alkaline protease", NCBI ENTREZ PROTEIN[ONLINE];22-SEP-2009 UPLOADED,NCBI,[RETRIEVED ON 19 JANUARY 2015], JPN6015002258, ISSN: 0003329790 *

Also Published As

Publication number Publication date
DK3190183T3 (da) 2019-10-14
EP3190183A1 (en) 2017-07-12
EP2510094B1 (en) 2016-11-30
AR079338A1 (es) 2012-01-18
US8728790B2 (en) 2014-05-20
BR112012014082A2 (pt) 2017-05-23
EP3599279A1 (en) 2020-01-29
CA2782891A1 (en) 2011-06-16
CN102762222B (zh) 2015-11-25
JP2019068807A (ja) 2019-05-09
ES2746931T3 (es) 2020-03-09
MX2012006549A (es) 2012-08-23
US20160083710A1 (en) 2016-03-24
CA2782891C (en) 2022-01-11
BR112012014082B1 (pt) 2020-12-15
AU2010328121A1 (en) 2012-06-07
EP3190183B1 (en) 2019-07-10
MX338884B (es) 2016-05-04
JP5863666B2 (ja) 2016-02-17
JP2017079756A (ja) 2017-05-18
US20220204959A1 (en) 2022-06-30
US20110262999A1 (en) 2011-10-27
US20200080069A1 (en) 2020-03-12
MX356282B (es) 2018-05-22
US20140273177A1 (en) 2014-09-18
CN102762222A (zh) 2012-10-31
EP2510094A4 (en) 2013-06-19
US9157052B2 (en) 2015-10-13
JP2013513385A (ja) 2013-04-22
JP6436957B2 (ja) 2018-12-12
WO2011072099A2 (en) 2011-06-16
DK2510094T3 (en) 2017-03-13
CN105368809A (zh) 2016-03-02
EP2510094A2 (en) 2012-10-17
WO2011072099A3 (en) 2011-09-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6436957B2 (ja) プロテアーゼ変異体を含む組成物及び方法
JP7002345B2 (ja) サブチリシン変異体を含む組成物及び方法
JP6018044B2 (ja) プロテアーゼ変異体を含む組成物及び方法
US20210292728A1 (en) Protease variants and uses thereof
AU2014206222B2 (en) Compositions and methods comprising protease variants

Legal Events

Date Code Title Description
A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20160607

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20160906

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20161007

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20161031

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20170321