CN1399677A - 在确定表位区有氨基酸取代的枯草杆菌蛋白酶变体 - Google Patents

在确定表位区有氨基酸取代的枯草杆菌蛋白酶变体 Download PDF

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    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
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    • C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
    • C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase

Abstract

本发明涉及与它们相应的野生型蛋白酶相比具有降低的免疫原性的枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶的变体。更具体地说，本发明涉及具有野生型氨基酸序列的修饰的氨基酸序列的变体，其中修饰的氨基酸序列包含一个或多个表位区内的取代。本发明进一步涉及编码这种的变体的突变基因以及含有这种的变体的洗涤和个人护理组合物。

Description

在确定表位区有氨基酸取代的枯草杆菌蛋白酶变体
                        发明领域
本发明涉及用于组合物的基因工程枯草杆菌蛋白酶，所述组合物象例如个人护理组合物、洗衣组合物、硬表面洗涤组合物和轻垢洗涤组合物。
                        发明背景
酶构成最大类的天然存在的蛋白质。一类酶包含催化其它蛋白质水解的蛋白质水解酶。通过将天然存在的和基因工程的蛋白酶掺入到洗涤组合物、特别是与洗衣应用有关的那些组合物中，人们已经在利用水解蛋白质的这种能力。
在洗涤领域，这些蛋白酶中最广泛使用的是丝氨酸蛋白酶。这些丝氨酸蛋白酶中的大多数是由细菌生物体生产的，而另一些是由其它生物体例如真菌生产的。参见，siezen，Roland J.等，“Subtilases的同源性模拟和蛋白质工程战略，枯草杆菌蛋白酶样丝氨酸蛋白酶家族”，蛋白质工程，第4卷，No.7，719-737页(1991)。令人遗憾的是，野生型蛋白酶在其天然环境中的效力对于洗涤组合物的人工环境常常不是最佳的。具体地说，蛋白酶特征，例如热稳定性，pH稳定性，氧化稳定性和底物特异性，对于在该酶的天然环境之外的应用未必是最佳的。
为了提高该蛋白酶在非天然洗涤环境中的效力，曾应用过几种方法来改变丝氨酸蛋白酶的野生型氨基酸序列。这些方法包含蛋白酶的基因重设计来增强热稳定性和在完全不同的条件下改善氧化稳定性。
但是由于这样的修饰的蛋白酶对于哺乳动物是外源的，它们是潜在的抗原。作为抗原，这些蛋白酶在哺乳动物中可以引起免疫原性反应和/或过敏反应(这里统称为免疫原性反应)。
此外，尽管在对在洗衣应用中使用的更高效蛋白酶的不懈探索中基因工程已经是重要的了，但是在个人护理组合物和轻垢洗涤剂中还没有商业化地应用基因工程蛋白酶。象例如肥皂，凝胶体，浴液和香波这样的产品中没有基因工程蛋白酶的主要原因是由于导致不期望的免疫反应的人类致敏问题。因此，提供一种提供具有最小免疫反应激发的基因工程蛋白酶的清洁性能的个人护理组合物或轻垢洗涤是非常有利的。
减弱蛋白酶的免疫活性的一个方法是通过该蛋白酶的一个或多个表位的重设计。表位是通过抗体结合或者通过主要的组织相容性复合体蛋白(MHC)将处理过的抗原呈递给T细胞而诱发免疫反应的抗原的那些氨基酸区。表位的变化能够影响它们作为抗原的效力。参见Walsh，B.J.和M.E.H.Howden，“以表位图谱的修饰为基础测定变应原的IgE结合序列的方法”，免疫学方法杂志(Journal of Immunological Methods)，121卷，275-280页(1989)。
本发明人发现那些通常通称为枯草杆菌蛋白酶、包括枯草杆菌蛋白酶BPN’的丝氨酸蛋白酶在相应于枯草杆菌蛋白酶BPN’的氨基酸位置103-126和220-246以及氨基酸位置70-84具有突出的表位区。在此本发明人基因重设计了这样的枯草杆菌蛋白酶以减弱归因于该表位区的免疫原性性能。由此，本发明人发现了能诱发降低的免疫反应但是仍保持其作为有效洗涤蛋白酶活性的枯草杆菌蛋白酶。因此，本发明蛋白酶适合在几种类型的组合物中使用，包含但不限于洗衣、洗碟、硬表面、皮肤护理、头发护理、美容护理，口腔和隐形眼镜(contact len)组合物。
                          发明概述
本发明涉及相对于它们的相应的野生型蛋白酶来说具有降低的免疫原性的丝氨酸蛋白酶变体。更具体地说，本发明涉及具有野生型氨基酸序列的修饰的氨基酸序列的变体，其中所述修饰的氨基酸序列包含一个或多个表位区的取代，其中所述表位区是相应于枯草杆菌蛋白酶BPN’的103-126和220-246。另外，本发明涉及包含在两个或多个表位区中的一个或多个取代的修饰的氨基酸序列，其中所述表位区是相应于枯草杆菌蛋白酶BPN’的70-84，103-126和220-246。本发明进一步涉及编码这样的变体的突变基因和含有这样的变体的洗涤和个人护理组合物。
                        本发明的详细描述
下面描述本发明的基本成分。也包含本发明实施方案中使用的各种任选的和优选的成分的非限制性描述。
本发明能包含任何必需的或任选的成分和/或这里描述的限定，由任何必需的或任选的成分和/或这里描述的限定构成，或者基本上由任何必需的或任选的成分和/或这里描述的限定构成。
除非另有说明，所有的百分比和比例以重量计算。除非另有说明，所有的百分比以总的组合物为基础计算。
所有的成分或组成水平都与那个成分或组成的活性水平有关，并且不包含在商业可获得的来源中可能存在的杂质，例如残留溶剂或副产物。
这里提到的所有的文献，包括所有的专利，专利申请和印刷的出版物，都全文引作参考。
如这里使用的，将用缩写来描述氨基酸。表I提供了这里使用的缩写表：
                          表I
    氨基酸     三字母缩写     一字母缩写
    丙氨酸     Ala     A
    精氨酸     Arg     R
    天冬酰胺     Asn     N
    天冬氨酸     Asp     D
    半胱氨酸     Cys     C
    谷氨酰胺     Gln     Q
    谷氨酸     Glu     E
    甘氨酸     Gly     G
    组氨酸     His     H
    异亮氨酸     Ile     I
    亮氨酸     Leu     L
    赖氨酸     Lys     K
    蛋氨酸     Met     M
    苯丙氨酸     Phe     F
    脯氨酸     Pro     P
    丝氨酸     Ser     S
    苏氨酸     Thr     T
    色氨酸     Trp     W
    酪氨酸     Tyr     Y
    缬氨酸     Val     V
                            定  义
如这里使用的，术语“突变”指在基因序列和/或这些基因序列产生的氨基酸序列中的改变。突变包括使野生型蛋白质序列缺失、取代和添加氨基酸残基。
如这里使用的，术语“野生型”指没有突变的生物体生产的蛋白质，这里具体指蛋白酶。
如这里使用的，术语“变体”指具有不同于相应的野生型蛋白质的氨基酸序列的蛋白质，这里具体指蛋白酶。
如这里所指的，虽然本发明的变体不局限于枯草杆菌蛋白酶BPN’的那些，但是所有的氨基酸编号都参照SEQ ID NO：1代表的枯草杆菌蛋白酶BPN’的氨基酸序列。Wells等，核酸研究(Nucleic Acids Research)，II卷，7911-7925(1983)进一步描述了枯草杆菌蛋白酶BPN’的氨基酸序列，该文献在这里引入作为参考。
                         本发明的变体
本发明人在丝氨酸蛋白酶中发现了三个表位区，其相应于枯草杆菌蛋白酶BPN’的103-126位(这里称之为第一表位区)、220-246位(这里称之为第二表位区)和70-84位(这里称之为第三表位区)。本发明人还发现一个或多个表位区中的一个或多个氨基酸取代提供了诱发相对于相应的野生型丝氨酸蛋白酶来说降低的变应原性和/或免疫反应的变体。
如这里所使用的，通过参考表征变体的取代氨基酸位置可以设计变体。在此，通过提供野生型氨基酸残基，接着是位置编号，接着是将要取代的取代的氨基酸残基来指示取代。其中取代的氨基酸残基可以是位于特定位置的任何天然氨基酸时，提供符号“*”。包含多个取代的变体用符号“+”隔开。为了详细说明，在70位用缬氨酸取代甘氨酸表示为Gly70Val或者G70V。在70和108位具有取代的变体的例子可以表示为Gly70Val+Ile108Ala或G70V+I108A。
本发明的变体是枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶的变体。如这里使用的，术语“枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶”指与枯草杆菌蛋白酶BPN’的序列具有至少50％、优选80％氨基酸序列同一性的蛋白酶。例如嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alcalophilus)，解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)，Bacillus amylosaccharicus，地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)，迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)微生物生产野生型枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶。与枯草杆菌蛋白酶样丝氨酸蛋白酶及其同源物相关的讨论可以参见Siezen等，“Subtilases同源性模拟和蛋白质工程战略，枯草杆菌蛋白酶样丝氨酸蛋白酶家族”，蛋白质工程(Protein Engineering)，第4卷，No.7，719-737页(1991)。
本发明的变体是具有野生型氨基酸序列的修饰的氨基酸序列的丝氨酸蛋白酶变体，其中所述修饰的氨基酸序列包含在一个或多个表位区内一个或多个位置处的取代氨基酸的取代，其中第一个表位区相应于枯草杆菌蛋白酶BPN’的103，104，105，106，107，108，109，110，111，112，113，114，115，116，117，118，119，120，121，122，123，124，125和126(103-126)位，第二个表位区相应于枯草杆菌蛋白酶BPN’的220，221，222，223，224，225，226，227，228，229，230，231，232，233，234，235，236，237，238，239，240，241，242，243，244，245和246(220-246)位。更优选地，所述修饰的氨基酸序列包含在两个或多个前述位置处的取代。更优选地，所述修饰的氨基酸序列包含在三个或多个前述位置处的取代。最优选地，所述修饰的氨基酸序列包含在四个或多个前述位置处的取代。通过用例如表I中给出的另一个天然氨基酸残基置换野生型氨基酸残基进行这些位置处的取代。
优选地，所述丝氨酸蛋白酶变体具有野生型氨基酸序列的修饰的氨基酸序列，所述野生型序列包含第一个表位区和第二个表位区，所述修饰的氨基酸序列包含在一个或多个表位区内一个或多个位置处的取代氨基酸的取代，其中：
(a) 当取代发生在第一个表位区中时，所述取代发生在103，104，105，106，107，108，109，110，111，112，113，114，115，116，117，118，119，120，121，122，123，124，125和126位的一个或多个位置处，其中：
(i)  当取代发生在103位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ii)  当取代发生在104位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val和Trp；
(iii)  当取代发生在105位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iv)  当取代发生在106位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val和Tyr；
(v)  当取代发生在107位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vi)  当取代发生在108位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vii)  当取代发生在109位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(viii)当取代发生在110位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ix)  当取代发生在111位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(x)  当取代发生在112位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xi)  当取代发生在113位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val和Tyr；
(xii)  当取代发生在114位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiii)  当取代发生在115位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiv)  当取代发生在116位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xv)  当取代发生在117位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvi)  当取代发生在118位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvii)  当取代发生在119位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xviii)  当取代发生在120位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xix)  当取代发生在121位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(xx)  当取代发生在122位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxi)  当取代发生在123位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxii)  当取代发生在124位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxiii)  当取代发生在125位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(xxiv)  当取代发生在126位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(b)当取代发生在第二个表位区中时，所述取代发生在220，221，222，223，224，225，226，227，228，229，230，231，232，233，234，235，236，237，238，239，240，241，242，243，244，245和246位的一个或多个位置处，其中：
(i)  当取代发生在220位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Val，Trp和Tyr；
(ii)  当取代发生在221位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iii)  当取代发生在222位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iv)  当取代发生在223位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(v)  当取代发生在224位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vi)  当取代发生在225位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vii)  当取代发生在226位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(viii)  当取代发生在227位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(ix)  当取代发生在228位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(x)  当取代发生在229位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xi)  当取代发生在230位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xii)  当取代发生在231位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiii)  当取代发生在232位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiv)  当取代发生在233位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xv)  当取代发生在234位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvi)  当取代发生在235位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvii)  当取代发生在236位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xviii)  当取代发生在237位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xix)  当取代发生在238位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xx)  当取代发生在239位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxi)  当取代发生在240位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxii)  当取代发生在241位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val和Tyr；
(xxiii)  当取代发生在242位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Val，Trp和Tyr；
(xxiv)  当取代发生在243位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxv)  当取代发生在244位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Val，Trp和Tyr；
(xxvi)  当取代发生在245位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(xxvii)  当取代发生在246位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr。
更优选地，所述丝氨酸蛋白酶变体具有野生型氨基酸序列的修饰的氨基酸序列，所述野生型序列包含第一个表位区和第二个表位区，所述修饰的氨基酸序列包含在一个或多个表位区内一个或多个位置处的取代氨基酸的取代，其中：
(a)当取代发生在第一个表位区中时，所述取代发生在108，109，110，111，112，113，114，115，116，117，118，119，120，121，122，123，124，125和126位的一个或多个位置处，其中：
(i)  当取代发生在108位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(ii)  当取代发生在109位时，取代氨基酸选自Phe，Gly，His，Leu，Met，Pro，Gln，Trp和Tyr；
(iii)  当取代发生在110位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iv)  当取代发生在111位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(v)  当取代发生在112位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Val，Trp和Tyr；
(vi)  当取代发生在113位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val和Tyr；
(vii)  当取代发生在114位时，取代氨基酸选自Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(viii)  当取代发生在115位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ix)  当取代发生在116位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Phe，Gly，His，Ile，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Ser，Val，Trp和Tyr；
(x)  当取代发生在117位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Leu，Met，Pro，Gln，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xi)  当取代发生在118位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Met，Gln，Arg，Thr，Trp和Tyr；
(xii)  当取代发生在119位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiii)  当取代发生在120位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Glu，Phe，Gly，Ile，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiv)  当取代发生在121位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(xv)  当取代发生在122位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvi)  当取代发生在123位时，取代氨基酸选自Asp，Glu，Phe，His，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Val，Trp和Tyr；
(xvii)  当取代发生在  124位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xviii)  当取代发生在125位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(xix)  当取代发生在126位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(b)当取代发生在第二个表位区中时，所述取代发生在221，223，224，225，226，227，228，229，230，231，232，233，234，235，236，237，238，239，240，241，242，243，244，245和246位的一个或多个位置处，其中：
(i)  当取代发生在221位时，取代氨基酸选自Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ii)  当取代发生在223位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iii)  当取代发生在224位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Val，Trp和Tyr；
(iv)  当取代发生在225位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Phe，Gly，His，Ile，Asn，Thr，Trp和Tyr；
(v)  当取代发生在226位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vi)  当取代发生在227位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(vii)  当取代发生在228位时，取代氨基酸选自Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(viii)  当取代发生在229位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ix)  当取代发生在230位时，取代氨基酸选自Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(x)  当取代发生在231位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xi)  当取代发生在232位时，取代氨基酸选自Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xii)  当取代发生在233位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiii)  当取代发生在234位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiv)  当取代发生在235位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Met，Asn，Pro，Gln，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xv)  当取代发生在236位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvi)  当取代发生在237位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvii)  当取代发生在238位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xviii)  当取代发生在239位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xix)  当取代发生在240位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Leu，Met，Pro，Gln，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xx)  当取代发生在241位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr和Val；
(xxi)  当取代发生在242位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Val，Trp和Tyr；
(xxii)  当取代发生在243位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxiii)  当取代发生在244位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Val，Trp和Tyr；
(xxiv)  当取代发生在245位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(xxv)  当取代发生在246位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr。
更优选地，所述丝氨酸蛋白酶变体具有野生型氨基酸序列的修饰的氨基酸序列，所述野生型序列包含第一个表位区和第二个表位区，所述修饰的氨基酸序列包含在一个或多个表位区内两个或多个位置处的取代氨基酸的取代，其中：
(a) 当取代发生在第一个表位区中时，所述取代发生在108，109，110，111，112，113，114，115，116，117，118，119，120，121，122，123，124，和125位的一个或多个位置处，其中：
(i)  当取代发生在108位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ii)  当取代发生在109位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iii)  当取代发生在110位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iv)  当取代发生在111位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(v)  当取代发生在112位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vi)  当取代发生在113位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val和Tyr；
(vii)  当取代发生在114位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(viii)当取代发生在115位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ix)  当取代发生在116位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(x)  当取代发生在117位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xi)  当取代发生在118位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xii)  当取代发生在119位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiii)  当取代发生在120位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Glu，Phe，Gly，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiv)  当取代发生在121位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(xv)  当取代发生在122位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvi)  当取代发生在123位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvii)  当取代发生在124位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(XViii)  当取代发生在125位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(b)当取代发生在第二个表位区中时，所述取代发生在221，222，223，224，225，226，227，228，229，230，231，232，233，234，235，236，237，238，239，240，241，242，243，244，245和246位的一个或多个位置处，其中：
(i)  当取代发生在221位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ii)  当取代发生在222位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Asn，Pro，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iii)  当取代发生在223位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iv)  当取代发生在224位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(v)  当取代发生在225位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vi)  当取代发生在226位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vii)  当取代发生在227位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(viii)  当取代发生在228位时，取代氨基酸选自Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ix)  当取代发生在229位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(x)  当取代发生在230位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xi)  当取代发生在231位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xii)  当取代发生在232位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiii)  当取代发生在233位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiv)  当取代发生在234位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xv)  当取代发生在235位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Met，Asn，Pro，Gln，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvi)  当取代发生在236位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvii)  当取代发生在237位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Met，Asn，Pro，Gln，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xviii)  当取代发生在238位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xix)  当取代发生在239位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xx)  当取代发生在240位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxi)  当取代发生在241位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr，Val和Tyr；
(xxii)  当取代发生在242位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Val，Trp和Tyr；
(xxiii)  当取代发生在243位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxiv)  当取代发生在244位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Val，Trp和Tyr；
(xxv)  当取代发生在245位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(xxvi)  当取代发生在246位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr。
在本发明另一个优选的实施方案中，所述变体包含在两个或多个表位区内一个或多个位置处的取代氨基酸的取代。在该实施方案中，所述表位区是相应于枯草杆菌蛋白酶BPN’的103-126位的第一个表位区，相应于枯草杆菌蛋白酶BPN’的220-246位的第二个表位区，以及相应于枯草杆菌蛋白酶BPN’的70，71，72，73，74，75，76，77，78，79，80，81，82，83和84(70-84)位的第三个表位区。在该实施方案中，短语“通过在两个或多个表位区内一个或多个位置处的取代氨基酸的取代”指在所述表位区中的一个中至少发生一处取代，并且在不同的表位区至少发生一处取代。当然，在该实施方案中，在每一个表位区都能发生至少一处取代。优选地，在该实施方案中，所述修饰的氨基酸序列包含在一个或多个表位区内两个或多个位置处的取代氨基酸的取代(即所述变体包含在一个或多个表位区内一个或多个位置处的取代氨基酸的取代和在另一个表位区内两个或多个位置处的取代氨基酸的取代)。更优选地，在该实施方案中，所述修饰的氨基酸序列包含在一个或多个表位区内三个或多个位置处的取代氨基酸的取代(即所述变体包含在一个或多个表位区内一个或多个位置处取代氨基酸的取代和在另一个表位区内三个或多个位置处取代氨基酸的取代)。通过用例如表I中给出的另一个天然氨基酸残基置换野生型氨基酸残基进行上述位置处的取代。
优选地，在该实施方案中，所述丝氨酸蛋白酶变体具有野生型氨基酸序列的修饰的氨基酸序列，所述野生型序列包含第一个表位区，第二个表位区和第三个表位区，其中所述修饰的氨基酸序列包含在两个或多个表位区内一个或多个位置处的取代氨基酸的取代，其中：
(a) 当取代发生在第一个表位区中时，所述取代发生在103，104，105，106，107， 108，109，110，111，112，113，114，115，116，117，118，119，120，121，122，123，124，125和126位的一个或多个位置处，其中：
(i)  当取代发生在103位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ii)  当取代发生在104位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val和Trp；
(iii)  当取代发生在105位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iv)  当取代发生在106位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val和Tyr；
(v)  当取代发生在107位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vi)  当取代发生在108位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vii)  当取代发生在109位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(viii)  当取代发生在110位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ix)  当取代发生在111位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(x)  当取代发生在112位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xi)  当取代发生在113位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val和Tyr；
(xii)  当取代发生在114位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiii)  当取代发生在115位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiv)  当取代发生在116位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xv)  当取代发生在117位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvi)  当取代发生在118位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvii)  当取代发生在119位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xviii)  当取代发生在120位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xix)  当取代发生在121位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(xx)  当取代发生在122位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxi)  当取代发生在123位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxii)  当取代发生在124位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxiii)  当取代发生在125位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(xxiv)  当取代发生在126位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(b)当取代发生在第二个表位区中时，所述取代发生在220，221，222，223，224，225，226，227，228，229，230，231，232，233，234，235，236，237，238，239，240，241，242，243，244，245和246位的一个或多个位置处，其中：
(i)  当取代发生在220位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Val，Trp和Tyr；
(ii)  当取代发生在221位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iii)  当取代发生在222位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iv)  当取代发生在223位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(v)  当取代发生在224位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vi)  当取代发生在225位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vii)  当取代发生在226位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(viii)  当取代发生在227位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(ix)  当取代发生在228位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(x)  当取代发生在229位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xi)  当取代发生在230位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xii)  当取代发生在231位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiii)  当取代发生在232位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiv)  当取代发生在233位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xv)  当取代发生在234位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvi)  当取代发生在235位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvii)  当取代发生在236位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xviii)  当取代发生在237位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xix)  当取代发生在238位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xx)  当取代发生在239位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxi)  当取代发生在240位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxii)  当取代发生在241位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val和Tyr；
(xxiii)  当取代发生在242位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Val，Trp和Tyr；
(xxiv)  当取代发生在243位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxv)  当取代发生在244位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Val，Trp和Tyr；
(xxvi)  当取代发生在245位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(xxvii)  当取代发生在246位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；和
(c)  当取代发生在第三个表位区中时，所述取代发生在70，71，72，73，74，75，76，77，78，79，80，81，82，83和84位的一个或多个位置处，其中：
(i)  当取代发生在70位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ii)  当取代发生在71位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Val，Trp和Tyr；
(iii)  当取代发生在72位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(iv)  当取代发生在73位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(v)  当取代发生在74位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vi)  当取代发生在75位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vii)  当取代发生在76位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(viii)  当取代发生在77位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ix)  当取代发生在78位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(x)  当取代发生在79位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xi)  当取代发生在80位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xii)  当取代发生在81位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(xiii)  当取代发生在82位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiv)  当取代发生在83位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(xv)  当取代发生在84位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr。
更优选地，在该实施方案中，所述丝氨酸蛋白酶变体具有野生型氨基酸序列的修饰的氨基酸序列，所述野生型序列包含第一个表位区，第二个表位区和第三个表位区，其中所述修饰的氨基酸序列包含通过在两个或多个表位区内一个或多个位置处的取代氨基酸的取代，其中：
(a) 当取代发生在第一个表位区中时，所述取代发生在108，109，110，111，112，113，114，115，116，117，118，119，120，121，122，123，124和125位的一个或多个位置处，其中：
(i)  当取代发生在108位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ii)  当取代发生在109位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iii)  当取代发生在110位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iv)  当取代发生在111位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(v)  当取代发生在112位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vi)  当取代发生在113位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val和Tyr；
(vii)  当取代发生在114位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(viii)  当取代发生在115位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ix)  当取代发生在116位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(x)  当取代发生在117位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xi)  当取代发生在118位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xii)  当取代发生在119位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiii)当取代发生在120位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Glu，Phe，Gly，Ile，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiv)  当取代发生在121位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(xv)  当取代发生在122位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvi)  当取代发生在123位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvii)  当取代发生在124位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(xviii)  当取代发生在125位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(b)当取代发生在第二个表位区中时，所述取代发生在221，222，223，224，225，226，227，228，229，230，231，232，233，234，235，236，237，238，239，240，241，242，243，244，245和246位的一个或多个位置处，其中：
(i)  当取代发生在221位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ii)  当取代发生在222位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Asn，Pro，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iii)  当取代发生在223位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iv)  当取代发生在224位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(v)  当取代发生在225位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vi)  当取代发生在226位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vii)  当取代发生在227位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(viii)  当取代发生在228位时，取代氨基酸选自Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ix)  当取代发生在229位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(x)  当取代发生在230位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xi)  当取代发生在231位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xii)  当取代发生在232位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiii)  当取代发生在233位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiv)  当取代发生在234位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xv)  当取代发生在235位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Met，Asn，Pro，Gln，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvi)  当取代发生在236位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，ValTrp和Tyr；
(xvii)  当取代发生在237位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Met，Asn，Pro，Gln，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xviii)  当取代发生在238位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xix)  当取代发生在239位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xx)  当取代发生在240位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxi)  当取代发生在241位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr，Val和Tyr；
(xxii)  当取代发生在242位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Val，Trp和Tyr；
(xxiii)  当取代发生在243位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxiv)  当取代发生在244位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Val，Trp和Tyr；
(xxv)  当取代发生在245位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(xxvi)  当取代发生在246位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；和
(c)  当取代发生在第二个表位区中时，所述取代发生在70，71，72，73，74，75，76，77，78，79，80，81，82，83和84位的一个或多个位置处，其中：
(i)  当取代发生在70位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；
(ii)  当取代发生在71位时，取代氨基酸选自Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Gly，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Trp，Tyr和Val；
(iii)  当取代发生在72位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Gly，Phe，His，I le，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(iv)  当取代发生在73位时，取代氨基酸选自Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Gly，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；
(v)  当取代发生在74位时，取代氨基酸选自Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Gly，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；
(vi)  当取代发生在75位时，取代氨基酸选自Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Gly，Phe，His，Ile，Lys，Met，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；
(vii)  当取代发生在76位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Cys，Ile，Leu，Met，Gln，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；
(viii)  当取代发生在77位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Cys，Gln，Glu，Gly，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；
(ix)  当取代发生在78位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Gly，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Thr，Trp，Tyr和Val；
(x)  当取代发生在79位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Gly，Phe，His，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；
(xi)  当取代发生在80位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；
(xii)  当取代发生在81位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Gly，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(xiii)当取代发生在82位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Gly，Phe，His，Ile，Lys，Met，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；
(xiv)  当取代发生在83位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；和
(xv)  当取代发生在84位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Gly，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Trp和Tyr。
更优选地，在此实施方案中，当取代发生在第三个表位区中时，所述取代发生在70，71，72，73，74，75，76，77，78，79，80，81，82，83和84位的一个或多个位置处，其中：
(i)  当取代发生在70位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；
(ii)  当取代发生在71位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Asn，Cys，Gln，Gly，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Trp，Tyr和Val；
(iii)  当取代发生在72位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Gly，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(iv)  当取代发生在73位时，取代氨基酸选自Asn，Asp，Cys，Glu，Gly，Phe，His，Ile，Lys，Met，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；
(v)  当取代发生在74位时，取代氨基酸选自Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Gly，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；
(vi)  当取代发生在75位时，取代氨基酸选自Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Gly，Phe，His，Ile，Lys，Met，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；
(vii)  当取代发生在76位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Cys，Ile，Leu，Met，Gln，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；
(viii)当取代发生在77位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Cys，Gln，Glu，Gly，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；
(ix)  当取代发生在78位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Gly，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Thr，Trp，Tyr和Val；
(x)  当取代发生在79位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Asn，Cys，Gln，Gly，Phe，His，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；
(xi)  当取代发生在80位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；
(xii)  当取代发生在81位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Gly，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(xiii)  当取代发生在82位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Gly，Pne，His，Ile，Lys，Met，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；
(xiv)  当取代发生在83位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；和
(xv)  当取代发生在84位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Asn，Asp，Cys，Gin，Glu，Gly，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Trp和Tyr。
最优选地，其中一个或多个取代发生在第三个表位区中时，本发明变体包含在73，74，75，76，77，78，79，80，81，82，83(73-83)位的一个或多个位置、更优选75，76，77，78，79，80，81，82(75-82)位的一个或多个位置、最优选78或79位置处的取代。
为了例如在所述表位区突变时再次稳定蛋白酶或者为了提高所述变体的蛋白水解活性，可以在丝氨酸蛋白酶的任何位置另外进行一处或多处其它的取代突变(“稳定化取代”)。很多这样的稳定化突变是本领域公知的。这样的稳定化突变的例子描述于，例如，1995年4月20日公开的WO 95/10591，Baeck等；1990年4月3日授权的美国专利No.4,914,031，Zukowski等；1995年11月28日授权的美国专利No.5,470,733，Bryan等；1996年10月22日授权的美国专利No.5,567,601，Bryan等；1998年1月13日授权的WO 89/07642，美国专利No.5,707,848，Bryan等；1989年8月24日公开的，Van Eekelen等；1987年7月30日公开的WO 87/04461，Stabinsky等；1988年7月26日授权的美国专利No.4,760,025，Estell等；1992年7月9日公开的WO 92/11348，Branner等；1991年1月2日公开的EP 0,405,901，Casteleijn等；1991年1月10日公开的WO 91/00345，Branner等；1995年3月23日公开的WO 94/10020，Brode等。
优选的稳定化突变包含下面所列中的一个或多个：I107V；K213R；Y217L；Y217K；N218S；G169A；M50F；Q19E；P5A；S9A；I31L；E156S；G169A；N212G；S188P；T254A；S3C+Q206C；和Q271E。更优选的稳定化突变包含下面所列中的一个或多个：P5A；S9A；I31L；E156S；G169A；N212G；S188P；T254A；S3C+Q206C；Q271E；Y217L；和Y217K。最优选的稳定化突变包含Y2l7L和Y217K。
                        制备方法
通过诱变编码野生型丝氨酸蛋白酶的核苷酸序列，从而产生具有修饰的氨基酸序列的变体来制备所述变体。这样的方法是本领域公知的；下面给出这样一种方法：
含有野生型枯草杆菌蛋白酶BPN’基因的噬菌粒(pSS-5)(Mitchison，C.和J.A.Wells，“枯草杆菌蛋白酶BPN’中二硫键的蛋白质工程”，生物化学(Biochemistry)，28卷，4807-4815页(1989))被转化到大肠杆菌dut-ung-菌株CJ236中，并且使用VCSMl3辅助噬菌体制备单链含尿嘧啶的DNA模板(Kunkel等，“无表型选择的快速并且高效的位点专一诱变”，酶学方法(Methods in Enzymology)，154卷，367-382页(1987)，正如Yuckenberg等.，“使用含尿嘧啶的DNA和噬菌粒载体的位点专一体外诱变”，位点专一诱变-实际操作规程(Directed Mutagenesis-APractical Approach)，McPherson，M.J.编著，27-48页(1991)所改进的)。利用对Zoller和Smith的方法(Zoller，M.J.，和M.Smith，“寡核苷酸-利用M13衍生的载体的定向诱变：在任何DNA片段中点突变产生的有效和一般方法”，核酸研究(Nucleic Acids Research)，10卷，6487-6500页(1982))修饰的引物定点诱变来制备所有的突变体(基本上如上文中Yuckenberg等给出)。
利用380B DNA合成仪(Applied Biosystem Inc.)制备寡核苷酸。将诱变反应产物转化到大肠杆菌菌株MM294(美国典型培养物保藏中心大肠杆菌33625)中。通过DNA测序证实所有的突变，并且将分离的DNA转化到枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)表达菌株PG632中(Saunders等，“人类甲状旁腺激素的34-氨基酸片段从枯草芽胞杆菌分泌的信号-序列裂解位点的优化”，基因(Gene)，102卷，277-282页(1991)和Yang等，“枯草芽胞杆菌中性蛋白酶基因的克隆和该克隆基因产生体外衍生缺失突变的应用”，细菌学杂志(Journal of Bacteriology)，160卷，15-21页(1984))。通过用突变质粒转化的PG632细胞水解酪蛋白的能力来确定变体活性的初步评估。
如下进行发酵。在1升含有10克/升葡萄糖的LB肉汤中使含有感兴趣变体的枯草芽胞杆菌细胞(PG632)生长至对数中期，并且接种到总体积9升的Biostat发酵罐(Braun Bioteck，Inc.，Allentown，PA)中。发酵培养基含有酵母提取物，酪蛋白水解产物，水溶性部分水解的淀粉(Maltrin M-250)，消泡剂，缓冲剂和痕量矿物质(参见“杆菌生物学：工业应用”，Doi，R.H.和M.McGloughlin编著(1992))。在发酵进行期间，肉汤的pH恒定在7.5。加入卡那霉素(50微克/毫升)为了诱变质粒的抗生素筛选。细胞在37℃生长18小时至A600大约为60，并且收获产物。
发酵肉汤进行下面步骤以获得纯的变体。通过切向流通过0.16微米的膜从肉汤中去除枯草芽胞杆菌细胞。然后用8000分子量截留膜通过超滤浓缩不含细胞的肉汤。用浓MES缓冲剂(2-(N-吗啉代)乙磺酸)将pH调节到5.5。通过用S-琼脂糖凝胶进行阳离子交换色谱并且用NaCl梯度洗脱来进一步纯化变体(参见Scopes，R.K.，“蛋白质纯化原理和操作”，Spinger-Verlag，纽约(1984))。
利用pNA分析(DelMar等，分析生物化学(AnalyticalBiochemistry)，99卷，316-320(1979))来测定在梯度洗脱期间收集的级分的活性变体浓度。该分析测定当变体水解可溶性合成底物，琥珀酰基-丙氨酸-丙氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸-对硝基苯胺(sAAPF-pNA)时，其释放对硝基苯胺的速率。用分光光度计在410nm处测定水解反应产生黄色的速率，并且其与活性酶浓度成比例。另外，利用280nm处时的吸收度来确定总蛋白质浓度。活性酶/总蛋白质比例给出了变体纯度，并且用来鉴定待合并作为贮存液的组分。
为了避免在贮存期间变体的自溶现象，向从色谱柱获得的合并组分中加入等重量的丙二醇。纯化程序完成时，用SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠聚丙烯基酰胺凝胶电泳)检查贮存变体溶液的纯度，并且通过使用II-T型胰蛋白酶抑制剂：火鸡蛋白(Sigma Chemical Co.，St.Louis，Missouri)的活性位点滴定方法来测定绝对酶浓度。
在用于应用的制备中，所述酶贮存液通过Sephadex-G25(Pharmacia，Piscataway，New Jersey)大小排阻层析柱洗脱以去除丙二醇并且交换缓冲剂。将酶贮存液中的MES缓冲剂换为含有0.01M CaCl2的0.1M tris缓冲剂(三(羟甲基-氨基甲烷))，并且用HCl将pH调节到8.6。所有的实验在25℃恒温的tris缓冲液中于pH8.6下进行。
                           分析方法
利用下面的方法可以对本发明变体测定酶活性和免疫和/或变应原性反应，这两种方法都是本领域技术人员公知的。或者，可以使用本领域公知的其它方法。
                           变体活性
通过本领域公知的方法可以分析本发明的变体的蛋白酶活性。下面给出两种这类方法：
皮肤薄片活性方法
使用Scotch#3750G胶带，反复从受试者的腿上剥离人皮肤薄片，直到带有皮肤薄片的胶带薄片基本上不透光。然后将该胶带切为一英寸乘一英寸的方块放置一边。在10毫米×35毫米培养皿中，在0.01M KH2PO4pH5.5缓冲液中加入2毫升的0.75毫克/毫升对照酶(例如枯草杆菌蛋白酶BPN’)或者待测定的变体。向该溶液中加入1毫升2.5％pH8.6的月桂酸钠溶液。该溶液在平台振荡器上温和混合。继续温和混合下将先前制备的胶带块浸泡在该溶液中10分钟(薄片一面向上)。然后将胶带块在自来水中温和漂洗15秒钟。将Stevenel蓝染料(3毫升，从Sigma ChemicalCo.，St.Louis，MO购得)移入干净的培养皿中。温和混合下，将漂洗过的胶带方块置于染料中三分钟(薄片一面向上)。从染料中取出胶带块，并且依次在两个300毫升蒸馏水的烧杯中漂洗，每次漂洗15秒钟。使胶带块风干。目测或者通过色度计(chromameter)比较从对照酶获得的胶布块与从变体获得的胶布块之间的色强度。相对于对照酶胶布块，显示较小色强度的变体胶布块是具有较高活性变体的指示。
染色的胶原活性方法
将50毫升含有0.01M CaCl2的0.1M tris缓冲液(三羟甲基-氨基甲烷)(pH8.6)和0.5克azocoll(浸过胶原的偶氮染料，从Sigma ChemicalCo.，St.Louis，MO购得)混合。该混合物用平台振荡器温和混合下在25℃下温育。通过0.2微米针筒式滤器过滤2毫升该混合物，并且将该混合物在分光光度计520nm处的吸收度读为零。向剩下的48毫升tris/azocoll混合物中加入1ppm对照酶(例如枯草杆菌蛋白酶BPN’)或者待测定的变体。每2分钟通过0.2微米针筒式滤器过滤2毫升含有对照物/变体的溶液，共10分钟。对每个滤过样品，立即读取520nm处的吸收度，用该值对时间作图。对照物和受试缀合物的斜率是样品相对活性的指征。较高斜率的指示较高的活性。受试变体活性(斜率)可以表示为对照活性(斜率)的百分比。
                 用于免疫原性的小鼠鼻内试验
利用本领域公知的方法或者通过下面给出的用于免疫原性的小鼠鼻内试验可以测定本发明丝氨酸蛋白酶免疫原性的潜力。该实验类似于下面文献中描述的测定：Robinson等，“小鼠中对枯草杆菌蛋白酶Carlsberg(Alcalase)的特异性抗体反应：鼻内暴露模型的进展”，基础和应用毒理学(Fundamental and Applied Toxicology)，34卷，15-24页(1996)和Robinson等，“小鼠鼻内试验(MINT)测定洗涤酶的变应原效力的用途：与豚鼠气管内试验(GPIT)之比较”，毒理科学(Toxicological Science)，43卷，39-46页(1998)，这两篇文献中的测定都可以代替下面给出的试验而使用。
在该实验中使用体重大约18至大约20克的雌性BDF1小鼠(CharlesRiver Laboratories，Portage，MI)。在给药之前一周对小鼠检疫。小鼠关养在铺有碎木屑的笼中，控制其中的湿度(30-70％)和温度(67-77华氏度)，并且有12小时光亮和黑暗周期。小鼠喂食Purina小鼠饲料(PurinaMills，Richmond，IN)并自由进水。
对一组五只小鼠施用待测试的潜在抗原(作为阳性对照的枯草杆菌蛋白酶BPN’或本发明变体)。在施用之前，通过腹膜内(i.p.)注射盐酸氯胺酮(Ketaset)(88.8毫克/千克)和甲苯噻嗪(6.67毫克/千克)的混合物，将每一只小鼠麻醉。将麻醉的动物放在手掌心中，反转向下，并且用5毫升蛋白酶缓冲液(0.01M KH2PO4，pH5.5)经鼻内给药。各组接受相同剂量的同时，可以测试不同剂量。将药溶液小心放在各鼻孔外面让小鼠吸入。在第3，10，17和24天重复给药。
在第29天采集血清样品。通过抗原捕获ELISA方法测定小鼠血清中酶特异性IgG1抗体。使用标准ED50值，可以将所述变体的免疫原性与枯草杆菌蛋白酶BPN’的免疫原性相比较。
                          本发明组合物
在适合各自野生型蛋白酶的任何应用中都能够使用本发明变体。一个这样的例子包含洗涤组合物。由于本发明变体预期的降低的变应原性和/或免疫原性性质，本发明变体可以进一步用应于从使用蛋白酶得到最小利益的那些应用中。这样的应用的例子包括其中变体必须接触人皮肤的那些应用，例如使用个人护理组合物。
                           洗涤组合物
本发明变体可以用在洗涤组合物中，包括但不限于洗衣组合物，硬表面洗涤组合物，轻垢洗涤组合物，包括洗碟组合物和自动洗碟机洗涤组合物。
这里的洗涤组合物含有有效量的一种或多种本发明变体和洗涤组合物载体。
如这里所使用的，“有效量的变体”或类似的表达方式是指在具体的洗涤组合物中实现需要的蛋白水解活性所必需的变体的量。本领域技术人员容易确定这样的有效量，并且其基于很多因素，例如所使用的特定变体，洗涤应用，洗涤组合物的具体组成以及期望的是液体组合物还是干燥的组合物(例如颗粒，条块)等等。优选地，洗涤组合物含有大约0.0001％至大约10％，更优选大约0.001％至大约1％，最优选大约0.01％至大约0.1％的一种或多种本发明的变体。下面进一步详细讨论其中可以使用本发明变体的各种洗涤组合物的几个例子。
除了本发明变体之外，本发明洗涤组合物进一步含有包含与所述变体相容的一或多种洗涤组合物材料的洗涤组合物载体。如这里使用的术语“洗涤组合物材料”指为了需要的特殊类型的洗涤组合物和产物形式(例如液体，颗粒，条块，喷雾剂，棍，膏，凝胶)而选择的任何材料，该材料也与组合物中使用的变体相容。通过考虑要洗涤的材料、使用中的洗涤条件需要的组合物形式，可以容易地进行洗涤组合物材料的具体选择。如这里使用的，术语“相容”指洗涤组合物材料不使所述变体的蛋白水解活性在正常使用情况下降低到不象该变体期望的那样有效的程度。下文举例详细描述具体的洗涤组合物材料。
本发明的变体可以用于各种需要高起泡和好的洗涤活性的洗涤组合物中。因此，所述变体可以和各种常规成分一起使用以提供完全配制的硬表面清洁品、洗碟组合物、织物洗涤组合物等等。这样的组合物可以是液体、颗粒、条块等等形式。这样的组合物可以配制成含有大约30％至大约60％(按重量计)表面活性剂的“浓缩”洗涤剂。
这里的洗涤组合物可以任选地、并且优选地含有各种表面活性剂(例如阴离子，非离子或两性离子表面活性剂)。这种表面活性剂典型地以大约5％至大约35％的水平存在于组合物中。
这里使用的表面活性剂的非限制性例子包括常规的C11-C18烷基苯磺酸盐和伯烷基硫酸盐和任意烷基硫酸盐，式CH3(CH2)x(CHOSO3)-M+)CH3和CH3(CH2)y(CHOSO3 -M+)CH2CH3的C10-C18仲(2，3)烷基硫酸盐，其中x和(y+1)是至少大约7、优选大约9的整数，M是水溶性阳离子，特别是钠，C10-C18烷基烷氧基硫酸盐(特别是EO 1-5乙氧基硫酸盐)，C10-C18烷基烷氧基羧酸盐类(特别是EO 1-5乙氧基羧酸盐)，C10-C18烷基聚苷类和它们相应的硫酸化聚苷类，C12-C18 a-磺酸化脂肪酸酯类，C12-C18烷基和烷基苯酚烷氧基化物类(特别是乙氧基化物和混合乙氧基/丙氧基)，C12-C18甜菜碱类和磺基三甲铵乙内酯类(“磺基甜菜碱类”)，C10-C18氧化胺类等等。烷基烷氧基硫酸盐(AES)和烷基烷氧基羧酸盐(AEC)是优选的。根据配方者的需要，这样的表面活性剂与氧化胺和/或甜菜碱或磺基甜菜碱表面活性剂结合使用也是优选的。在标准教科书中列出了其它常规的有用表面活性剂。特别有用的表面活性剂包括在1993年3月16日授权的Connor等人的美国专利No.5,194,639中公开的C10-C18N-甲基葡糖酰胺。
组合物中可以含有用于去污洗涤组合物的各种其它成分，其包括，例如，其它活性成分、载体、水溶助长剂、操作助剂、染料或颜料以及用于液体配方的溶剂。如果需要额外的增加起泡，则典型地以大约1％至大约10％的水平向组合物中掺入增泡剂，例如C10-C16烷氧酰胺(alkolamides)。C10-C14一乙醇酰胺和二乙醇酰胺能举例说明这样的一类增泡剂。这类增泡剂与高起泡添加剂表面活性剂如上述氧化胺、甜菜碱和磺基甜菜碱一起使用也是有利的。如果需要，典型地可以以大约0.1％至大约2％的水平加入可溶性镁盐，例如MgCl2、MgSO4等等，以提供额外的起泡。
这里的液体洗涤组合物可以含有水和其它溶剂作为载体。例如甲醇、乙醇、丙醇和异丙醇这类低分子量的伯醇或仲醇是合适的。一元醇对于溶解表面活性剂是优选的，但是也可以使用例如含有大约2至大约6个碳原子和大约2至大约6个羟基的那些多元醇(例如1，3-丙二醇，乙二醇，甘油和1，2-丙二醇)。组合物可以含有大约5％至大约90％、典型地大约10％至大约50％这样的载体。
优选配制这里所述的洗涤组合物使得在含水洗涤操作中，洗用水具有的pH在大约6.8和大约11之间。典型地在该范围内配制最终产品。将pH控制在推荐的使用水平的技术包括使用例如缓冲剂、碱和酸。这样的技术是本领域技术人员公知的。
当配制本发明硬表面洗涤组合物和织物洗涤组合物时，配方者可以期望以大约5％至大约50％(按重量计)的水平应用各种助洗剂。典型的助洗剂包括1-10微米沸石、聚羧酸酯类，例如柠檬酸酯和氧代二琥珀酸酯，层状硅酸盐，磷酸盐等等。在标准配方手册中列出了其它常规助洗剂。
同样，配方者可以期望在这样的组合物中使用各种各样其它的酶，例如纤维素酶、脂酶、淀粉酶和蛋白酶，典型地大约为0.001％至大约1％(按重量计)的水平。各种洗涤酶和织物护理酶是洗衣洗涤剂领域公知的。
这样的组合物中可以使用各种各样的漂白化合物，例如过碳酸盐，过硼酸盐等等，典型地为大约1％至大约15％(按重量计)的水平。如果需要，这样的组合物还可以含有漂白活性剂，例如四乙酰基乙二胺、壬酰氧基苯磺酸盐等等，这也是本领域公知的。使用水平典型的是大约1％至大约10％(按重量计)。
污垢释放剂、特别是阴离子低聚酯型，螯合剂、特别是氨基膦酸盐(酯)和乙二胺二琥珀酸盐(酯)，粘土污垢去除剂、特别是乙氧基化的四亚乙基五胺，分散剂、特别是聚丙烯酸酯类和聚天冬氨酸酯类，增白剂、特别是阴离子增白剂，抑泡剂、特别是硅氧烷类和仲醇类，织物柔软剂、特别是绿土粘土(smectite clays)等等都可以以大约1％至大约35％(按重量计)的水平用于这样的组合物中。标准配方手册和公开的专利对这样的常规材料有很多详细描述。
在洗涤组合物中也可以使用酶稳定剂。这样的酶稳定剂包括丙二醇(优选大约1％至大约10％)，甲酸钠(优选大约0.1％至大约1％)和甲酸钙(优选大约0.1％至大约1％)。
本发明变体在硬表面洗涤组合物中是有用的。如这里使用的，“硬表面洗涤组合物”指用于清洁硬表面例如底板、墙面、浴室瓷砖等等的液体和颗粒洗涤组合物。本发明硬表面洗涤组合物含有有效量的一或多种本发明的变体，优选占组合物变体的大约0.001％至大约10％，更优选大约0.01％至大约5％，更优选大约0.05％至大约1％(按重量计)。除了含有一种或多种所述变体之外，这样的硬表面洗涤组合物典型地含有表面活性剂和水溶性螯合助洗剂。但是在一些特殊化产品例如喷雾式窗户清洁剂中有时不使用表面活性剂，因为它们可能在玻璃表面上产生薄膜和/或条痕残余物。
当存在时，组合物中可以含有仅仅0.1％的表面活性剂成分，但是典型地组合物含有大约0.25％至大约10％、更优选大约1％至大约5％的表面活性剂。
典型地组合物含有大约0.5％至大约50％的洗涤助洗剂，优选大约1％至大约10％。
优选地，pH应该在大约7至大约12的范围内。如果需要调节，可以使用常规的pH调节剂，例如氢氧化钠、碳酸钠或盐酸。
组合物中可以含有溶剂。有用的溶剂包括但不限于乙二醇醚，例如二乙二醇一己醚，二乙二醇一丁醚，乙二醇一丁醚，乙二醇一己醚，丙二醇一丁醚，二丙二醇一丁醚和二元醇，例如2，2，4-三甲基-1，3-戊二醇和2-乙基-1，3-己二醇。当使用时，这样的溶剂典型地以大约0.5％至大约15％、更优选大约3％至大约11％的水平存在。
另外，本发明组合物中可以使用高挥发性溶剂，例如异丙醇或乙醇以有利于当对表面“全强度”施用组合物之后不淋洗表面时组合物从表面的快速蒸发。当使用时，挥发性溶剂典型地以占组合物大约2％至大约12％的水平存在。
通过下面的实施例详细说明本发明的硬表面洗涤组合物。
                         实施例1-6
                    液体硬表面洗涤组合物
 实施例1  实施例2  实施例3  实施例4   实施例5   实施例6
    变体N109A   0.05％   0.50％   0.02％   0.03％   0.30％   0.05％
    EDTA   -   -   2.90％   2.90％   -   -
    柠檬酸钠   -   -   -   -   2.90％   2.90％
    C12烷基苯磺酸钠   1.95％   -   1.95％   -   1.95％   -
    C12烷基硫酸钠   -   2.20％   -   2.20％   -   2.20％
    C12(乙氧基)硫酸钠   -   2.20％   -   2.20％   -   2.20％
    C12二甲胺氧化物   -   0.50％   -   0.50％   -   0.50％
    异丙基苯磺酸钠   1.30％   -   1.30％   -   1.30％   -
    己基卡必醇   6.30％   6.30％   6.30％   6.30％   6.30％   6.30％
    水   90.4％   88.3％   87.53％   85.87％   87.25％   85.85％
所有的配方都调节到pH7。
在本发明的另一个实施方案中，洗碟组合物包含一种或多种本发明变体。如这里使用的，“洗碟组合物”指用于洗涤碟子的组合物的所有形式，包括但不限于颗粒和液体形式。通过下面的实施例详细说明本发明的洗碟组合物。
                        实施例7-10
                      液体碟子洗涤剂
 实施例7  实施例8  实施例9  实施例10
    变体I115A   0.05％   0.50％   0.02％   0.40％
    C12-C14N-甲基葡糖酰胺   0.90％   0.90％   0.90％   0.90％
    C12乙氧基(1)硫酸盐   12.0％   12.0％   12.0％   12.0％
    2-甲基十一烷酸   4.50％   4.50％   4.50％   4.50％
    C12乙氧基(2)羧酸盐   4.50％   4.50％   4.50％   4.50％
    C12醇乙氧基化物(4)   3.00％   3.00％   3.00％   3.00％
    C12氧化胺   3.00％   3.00％   3.00％   3.00％
    异丙基苯磺酸钠   2.00％   2.00％   2.00％   2.00％
    乙醇   4.00％   4.00％   4.00％   4.00％
    Mg2+(以MgCl2的形式)   0.20％   0.20％   0.20％   0.20％
    Ca2+(以CaCl2的形式)   0.40％   0.40％   0.40％   0.40％
    水   65.45％   65％   65.48％   65.1％
所有的配方都调节到pH7。
通过下面的实施例详细说明本发明的液体织物洗涤组合物。
                        实施例11-13
                     液体织物洗涤组合物
 实施例11  实施例12  实施例13
    变体A116V   0.05％   0.03％   0.30％
    C12-C14烷基硫酸钠   20.0％   20.0％   20.0％
    2-丁基辛酸   5.0％   5.0％   5.0％
    柠檬酸钠   1.0％   1.0％   1.0％
    C10醇乙氧基化物(3)   13.0％   13.0％   13.0％
    一乙醇胺   2.50％   2.50％   2.50％
    水/丙二醇/乙醇(100∶1∶1)   58.45％   58.47％   58.20％
                       个人护理组合物
本发明变体特别适合用于个人护理组合物，例如置留型(leave-on)和淋洗型(rinse-off)头发调理剂、香波、置留型和淋洗型粉刺组合物、洗面奶和调理剂、沐浴胶(shower gel)、肥皂、起泡和非起泡洁面用品、化妆品、手和面部以及身体洗液以及润肤用品(moisturizers)、置留型面部润肤用品、化妆用和清洁用巾(wipes)、口腔护理组合物以及隐形眼镜护理组合物。本发明个人护理组合物包含一或多种本发明变体和个人护理载体。
为了详细说明，下面参考文献中描述的组合物中适合含有本发明变体：1997年6月24日授权的Linare等人的美国专利No.5,641,479(洁肤剂)；1997年2月4日授权的Wivell等人的美国专利No.5,599,549(洁肤剂)；1996年12月17日授权的Ha等人的美国专利No.5,585,104(洁肤剂)；1996年7月30日授权的Kefauver等人的美国专利No.5,540,852(洁肤剂)；1996年4月23日授权的Dunbar等人的美国专利No.5,510,050(洁肤剂)；1997年3月18日授权的Guang Lin等人的美国专利No.5,612,324(抗粉刺制品)；1996年12月24日授权的Warren等人的美国专利No.5,587,176(抗粉刺制品)；1996年8月27日授权的Venkateswaran等人的美国专利No.5,549,888(抗粉刺制品)；1995年11月28日授权的Corless等人的美国专利No.5,470,884(抗粉刺制品)；1997年7月22日授权的Gordon等人的美国专利No.5,650,384(沐浴胶)；1997年3月4日授权的Moore等人的美国专利No.5,607,678(沐浴胶)；1997年4月29日授权的Coffindaffer等人的美国专利No.5,624,666(头发调理剂和/或香波)；1997年4月8日授权的Bolich等人的美国专利No.5,618,524(头发调理剂和/或香波)；1997年3月18日授权的Inman等人的美国专利No.5,612,301(头发调理剂和/或香波)；1996年11月12日授权的Wells等人的美国专利No.5,573,709(头发调理剂和/或香波)；1996年1月9日授权的Pings等人的美国专利No.5,482,703(头发调理剂和/或香波)；1994年4月12日再次授权的Grote等人的美国专利No.Re.34,584(头发调理剂和/或香波)；1997年6月24日授权的Date等人的美国专利No.5,641,493(化妆品)；1997年2月25日授权的Blank等人的美国专利No.5,605,894(化妆品)；1996年12月17日授权的Yoshioka等人的美国专利No.5,585,090(化妆品)；1990年7月3日授权的Cheney等人的美国专利No.4,939,179(洗手液，洗面液和/或沐浴露)；1997年3月4日授权的McAtee等人的美国专利No.5,607,980(洗手液，洗面液和/或沐浴露)；1977年8月30日授权的Richter等人的美国专利No.4,045,364(化妆巾和清洁巾)；1994年10月12日公开的Touchet等人的欧洲专利申请EP 0 619 074(化妆巾和清洁巾)；1990年12月4日授权的Brown-Skrobot等人的美国专利No.4,975,217(化妆巾和清洁巾)；1992年3月17日授权的Seibel等人的美国专利No.5,096,700(口腔清洁组合物)；1991年7月2日授权的Sampathkumar等人的美国专利No.5,028,414(口腔清洁组合物)；1991年7月2日授权的Benedict等人的美国专利No.5,028,415(口腔清洁组合物)；1989年9月5日授权的Davies等人的美国专利No.4,863,627(隐形眼镜清洁液)；1988年5月24日再次授权的Huth等人的美国专利No.Re.32,672(隐形眼镜清洁液)；以及1986年9月2日授权的Schafer等人的美国专利No.4,609,493(隐形眼镜清洁液)。
为了进一步详细说明本发明的口腔清洁组合物，组合物中可以含有药学可接受量的一或多种本发明变体用于从牙齿或假牙上去除蛋白质污垢。如这里使用的，“口腔清洁组合物”指洁齿剂，牙膏，牙胶，牙粉，漱口液，口腔喷雾剂，口腔胶，口香糖，糖锭，香囊，片剂，凝胶过滤剂(biogel)，预防膏剂，牙科治疗液等等。优选地，所述口腔清洁组合物含有占组合物重量大约0.0001％至大约20％、更优选大约0.001％至大约10％、更优选大约0.01％至大约5％的一或多种本发明变体以及药学可接受的载体。如这里使用的，“药学可接受”指术语描述的药剂、药物或惰性成分适合用于与人和低级动物组织接触而没有不适当的毒性、不相容性、不稳定性、刺激性、过敏反应等等，并具有合理的利益/风险比。
典型地，所述口腔清洁组合物的口腔清洁成分的药学可接受口腔清洁载体占所述组合物重量的大约50％至大约99.99％，优选大约65％至大约99.99％，更优选大约65％至大约99％。
包含在本发明口腔清洁组合物中的药学可接受载体成分和任选成分是本领域技术人员公知的。上文引述的参考文献中公开了用于口腔清洁组合物的各种组合物类型、载体成分和任选成分。
在本发明的另一个实施方案中，用于口腔外清洁假牙的假牙清洁组合物包含一或多种本发明变体。这样的假牙清洁组合物包含有效量的一或多种所述变体，优选占所述组合物重量大约0.0001％至大约50％、更优选大约0.001％至大约35％、更优选大约0.01％至大约20％的一或多种所述变体以及假牙清洁载体。各种假牙清洁组合物形式例如泡腾片等是本领域公知的(参见，例如Young的美国专利No.5,055,305)，并且通常适合掺入一或多种所述变体以去除假牙上的蛋白质污垢。
在本发明的另一个实施方案中，隐形眼镜清洁组合物包含一或多种本发明变体。这样的隐形眼镜清洁组合物包含有效量的一或多种所述变体，优选占所述组合物重量大约0.01％至大约50％、更优选大约0.01％至大约20％、更优选大约1％至大约5％的一或多种所述变体以及隐形眼镜清洁载体。各种隐形眼镜清洁组合物形式例如片剂、液体等是本领域公知的，并且通常适合掺入一或多种本发明变体以从隐形眼镜上去除蛋白质污物。
通过实施例14-17详细说明本发明的隐形眼镜清洁组合物实施方案。
                     实施例14-17
                   隐形眼镜清洁溶液
实施例14 实施例15 实施例16 实施例17
  变体M119A   0.01％   0.5％   0.1％   2.0％
  葡萄糖   50.0％   50.0％   50.0％   50.0％
  非离子表面活性剂(聚氧乙烯-聚)   2.0％   2.0％   2.0％   2.0％
  阴离子表面活性剂(聚氧乙烯-烷基苯基醚硫酸酯钠(sodium sulfricester))   1.0％   1.0％   1.0％   1.0％
  氯化钠   1.0％   1.0％   1.0％   1.0％
  硼砂   0.30％   0.30％   0.30％   0.30％
  水   45.69％   45.20％   45.60％   43.70％
实施例18-21详细说明本发明变体在洁身(bodywash)产品中的应用。
                     实施例18-21
                       洁身产品
 实施例18  实施例19  实施例20  实施例21
    水   62.62％   65.72％   57.72％   60.72％
    -EDTA二钠   0.2％   0.2％   0.2％   0.2％
    甘油   3.0％   3.0％   3.0％   3.0％
    Polyquaternium 10   0.4％   0.4％   0.4％   0.4％
    月桂基醚硫酸钠   12.0％   12.0％   12.0％   12.0％
    椰油酰胺(Cocamide)MEA   2.8％   2.8％   2.8％   2.8％
    Sodium lauraphoacetate   6.0％   6.0％   6.0％   6.0％
    十四烷酸   1.6％   1.6％   1.6％   1.6％
    硫酸镁七水合物   0.3％   0.3％   0.3％   0.3％
    三羟基硬脂精   0.5％   0.5％   0.5％   0.5％
    PEG-6辛/癸三酸甘油酯   3.0％   -   -   -
棉脂肪酸(cottonate fatty acid)蔗糖聚酯   3.0％   -   -   -
    山萮脂肪酸蔗糖聚酯   3.0％   -   4.0％   -
    凡士林   -   4.0％   8.0％   -
    矿物油   -   -   -   6.0％
    DMDM乙内酰脲   0.08％   0.08％   0.08％   0.08％
    变体D120A   0.1％   2.0％   2.0％   5.0％
    柠檬酸   1.40％   1.40％   1.40％   1.40％
实例22-25详细说明本发明变体在洗面产品中的应用：
                       实施例22-25
                         洗面产品
 实施例22  实施例23  实施例24  实施例25
    水   66.52％   65.17％   68.47％   68.72％
    EDTA二钠   0.1％   0.1％   0.2％   0.2％
    柠檬酸   -   -   1.4％   1.4％
    月桂基醚-3硫酸钠   3.0％   3.5％   -   -
    月桂基醚-4羧酸钠   3.0％   3.5％   -   -
    月桂基醚-12   1.0％   1.2％   -   -
    Polyquaternium 10   -   -   0.4％   0.4％
    Polyquaternium 25   0.3％   0.3％   -   -
    甘油   3.0％   3.0％   3.0％   3.0％
    Sodium Lauroamphoacetate   -   -   6.0％   6.0％
    月桂酸   6.0％   6.0％   3.0％   3.0％
    十四烷酸   -   -   3.0％   3.0％
    硫酸镁七水合物   2.3％   2.0％   2.0％   2.0％
    三乙醇胺   4.0％   4.0％   4.0％   4.0％
    三羟基硬脂精   0.5％   0.5％   0.5％   0.5％
    山萮脂肪酸蔗糖聚酯   2.0％   2.0％   -   -
    棉脂肪酸(cottonate fatty acid)蔗糖聚酯   3.0％   2.0％   -   -
    PEG-6辛/癸三酸甘油酯   -   -   -   2.0％
    凡士林   -   -   4.0％   -
    矿物油   -   -   -   2.0％
    椰油酰胺丙基甜菜碱   2.0％   3.0％   1.8％   1.8％
    月桂基二甲基胺氧化物   1.0％   1.2％   1.2％   1.2％
    Dex Panthenol   1.0％   0.25％   0.25％   -
    DMDM乙内酰脲   0.08％   0.08％   0.08％   0.08％
    变体A114*   1.0％   2.0％   0.5％   0.5％
    香料   0.2％   0.2％   0.2％   0.2％
实施例26-27详细说明本发明变体在置留型润肤组合物中的应用。
                       实施例26-27
                    置留型润肤组合物
   实施例26    实施例27
    甘油     5.0％     -
    硬脂酸     3.0％     -
    C11-13异链烷烃     2.0％     -
    乙二醇硬脂酸酯     1.5％     -
    丙二醇     -     3.0％
    矿物油     1.0％     10.0％
    芝麻油     -     7.0％
    凡士林     -     1.8％
    三乙醇胺     0.7％     -
    乙酸十六烷酯     0.65％     -
    硬脂酸甘油酯     0.48％     2.0％
    TEA硬脂酸酯     -     2.5％
    十六烷醇     0.47％     -
    羊毛脂醇     -     1.8％
   DEA-十六烷基磷酸酯     0.25％     -
    羟苯甲酸甲酯     0.2％     0.2％
    羟苯甲酸丙酯     0.12％     0.1％
    Carbomer 934     0.11％     -
    EDTA二钠     0.1％     -
    变体N117A     0.1％     0.5％
    水     84.32％     71.1％
实施例28详细说明本发明变体在清洁巾组合物中的应用。
             实施例28
           清洁巾组合物
    丙二醇     1.0％
    月桂基硫酸铵     0.6％
    琥珀酸     4.0％
    琥珀酸钠     3.2％
    Triclosan     0.15％
    变体I122A     0.05％
    水     91.0％
将上述组合物以吸收薄纸(sheet)重量大约250％的量浸润到由纤维素和/或聚酯组成的编织吸收薄纸中。
                     序列表
                     序列表<110>  Procter & Gamble公司<120>  在确定的表位区内具有氨基酸取代的枯草杆菌蛋白酶变体<130>  表位取代<140>  PCT/US00/<141>  2000-07-11<160>  1<170>  PatentIn Ver.2.0<210>  1<211>  275<212>  PRT<213>  解淀粉芽孢杆菌<400>  1Ala Gln Ser Val Pro Tyr Gly Val Ser Gln Ile Lys Ala Pro Ala Leu1               5                  10                  15His Ser Gln Gly Tyr Thr Gly Ser Asn Val Lys Val Ala Val Ile Asp
         20                  25                  30Ser Gly Ile Asp Ser Ser His Pro Asp Leu Lys Val Ala Gly Gly Ala
     35                  40                  45Ser Met Val Pro Ser Glu Thr Asn Pro Phe Gln Asp Asn Asn Ser His
 50                  55                  60Gly Thr His Val Ala Gly Thr Val Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly65                  70                  75                  80Val Leu Gly Val Ala Pro Ser Ala Ser Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu
             85                  90                  95Gly Ala Asp Gly Ser Gly Gln Tyr Ser Trp Ile Ile Asn Gly Ile Glu
        100                 105                 110Trp Ala Ile Ala Asn Asn Met Asp Val Ile Asn Met Ser Leu Gly Gly
    115                 120                 125Pro Ser Gly Ser Ala Ala Leu Lys Ala Ala Val Asp Lys Ala Val Ala
130                 135                 140Ser Gly Val Val Val Val Ala Ala Ala Gly Asn Glu Gly Thr Ser Gly145                 150                 155                 160Ser Ser Ser Thr Val Gly Tyr Pro Gly Lys Tyr Pro Ser Val Ile Ala
            165                 170                 175Val Gly Ala Val Asp Ser Ser Asn Gln Arg Ala Ser Phe Ser Ser Val
        180                 185                 190Gly Pro Glu Leu Asp Val Met Ala Pro Gly Val Ser Ile Gln Ser Thr
    195                 200                 205Leu Pro Gly Asn Lys Tyr Gly Ala Tyr Asn Gly Thr Ser Met Ala Ser
210                 215                 220Pro His Val Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ile Leu Ser Lys His Pro Asn225                 230                 235                 240Trp Thr Asn Thr Gln Val Arg Ser Ser Leu Glu Asn Thr Thr Thr Lys
            245                 250                 255Leu Gly Asp Ser Phe Tyr Tyr Gly Lys Gly Leu Ile Asn Val Gln Ala
        260                 265                 270Ala Ala Gln
    275

Claims (12)

1.枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶变体，其特征在于所述变体具有野生型氨基酸序列的修饰的氨基酸序列，所述野生型序列包含第一个表位区和第二个表位区，所述修饰的氨基酸序列包含在一个或多个表位区内一个或多个位置处的取代氨基酸的取代，其中：
(a) 当取代发生在第一个表位区中时，所述取代发生在108，109，110，111，112，113，114，115，116，117，118，119，120，121，122，123，124，125和126位的一个或多个位置处，其中：
(i)   当取代发生在108位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(ii)  当取代发生在109位时，取代氨基酸选自Phe，Gly，His，Leu，Met，Pro，Gln，Trp和Tyr；
(iii)  当取代发生在  110位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iv)  当取代发生在111位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(v)  当取代发生在112位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Val，Trp和Tyr；
(vi)  当取代发生在113位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val和Tyr；
(vii)  当取代发生在114位时，取代氨基酸选自Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(viii)  当取代发生在115位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ix)  当取代发生在116位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Phe，Gly，His，Ile，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Ser，Val，Trp和Tyr；
(x)  当取代发生在117位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Leu，Met，Pro，Gln，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xi)  当取代发生在118位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Met，Gln，Arg，Thr，Trp和Tyr；
(xii)  当取代发生在119位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiii)  当取代发生在120位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Glu，Phe，Gly，Ile，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiv)  当取代发生在121位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(xv)  当取代发生在122位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvi)  当取代发生在123位时，取代氨基酸选自Asp，Glu，Phe，His，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Val，Trp和Tyr；
(xvii)  当取代发生在124位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xviii)  当取代发生在125位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(xix)  当取代发生在126位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(b)当取代发生在第二个表位区中时，所述取代发生在221，223，224，225，226，227，228，229，230，231，232，233，234，235，236，237，238，239，240，241，242，243，244，245和246位的一个或多个位置处，其中：
(i)  当取代发生在221位时，取代氨基酸选自Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ii)  当取代发生在223位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iii)  当取代发生在224位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Val，Trp和Tyr；
(iv)  当取代发生在225位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Asn，Thr，Trp和Tyr；
(v)  当取代发生在226位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vi)  当取代发生在227位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(vii)  当取代发生在228位时，取代氨基酸选自Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(viii)  当取代发生在229位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ix)  当取代发生在230位时，取代氨基酸选自Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(x)  当取代发生在231位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xi)  当取代发生在232位时，取代氨基酸选自Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xii)  当取代发生在233位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiii)  当取代发生在234位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiv)  当取代发生在235位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Met，Asn，Pro，Gln，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xv)  当取代发生在236位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvi)  当取代发生在237位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvii)  当取代发生在238位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xviii)  当取代发生在239位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xix)  当取代发生在240位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Leu，Met，Pro，Gln，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xx)  当取代发生在241位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr和Val；
(xxi)  当取代发生在242位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Val，Trp和Tyr；
(xxii)  当取代发生在243位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxiii)  当取代发生在244位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Val，Trp和Tyr；
(xxiv)  当取代发生在245位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(xxv)  当取代发生在246位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr。
2.枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶变体，其特征在于所述变体具有野生型氨基酸序列的修饰的氨基酸序列，所述野生型序列包含第一个表位区和第二个表位区，其中所述修饰的氨基酸序列包含在一个或多个表位区内两个或多个位置处的取代氨基酸的取代，其中：
(a)当取代发生在第一个表位区中时，所述取代发生在108，109，110，111，112，113，114，115，116，117，118，119，120，121，122，123，124和125位的一个或多个位置处，其中：
(i)  当取代发生在108位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ii)  当取代发生在109位时，取代氨基酸选自ACys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iii)  当取代发生在110位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Va1，Trp和Tyr；
(iv)  当取代发生在111位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(v)  当取代发生在112位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vi)  当取代发生在113位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val和Tyr；
(vii)  当取代发生在114位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(viii)  当取代发生在115位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ix)  当取代发生在116位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(x)  当取代发生在117位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xi)  当取代发生在118位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xii)  当取代发生在119位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiii)  当取代发生在120位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Glu，Phe，Gly，Ile，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiv)  当取代发生在121位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(xv)  当取代发生在122位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvi)  当取代发生在123位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvii)  当取代发生在124位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，Hi s，Lys，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(xviii)  当取代发生在125位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(b)当取代发生在第二个表位区中时，所述取代发生在221，222，223，224，225，226，227，228，229，230，231，232，233，234，235，236，237，238，239，240，241，242，243，244，245和246位的一个或多个位置处，其中：
(i)  当取代发生在221位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ii)  当取代发生在222位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Asn，Pro，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iii)  当取代发生在223位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iv)  当取代发生在224位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(v)  当取代发生在  225位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vi)  当取代发生在226位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vii)  当取代发生在227位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(viii)  当取代发生在228位时，取代氨基酸选自Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ix)  当取代发生在229位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(x)  当取代发生在230位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xi)  当取代发生在231位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xii)  当取代发生在232位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiii)  当取代发生在233位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiv)  当取代发生在234位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xv)  当取代发生在235位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Met，Asn，Pro，Gln，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvi)  当取代发生在236位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvii)  当取代发生在237位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Met，Asn，Pro，Gln，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xviii)  当取代发生在238位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xix)  当取代发生在239位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xx)  当取代发生在240位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxi)  当取代发生在241位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr，Val和Tyr；
(xxii)  当取代发生在242位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Val，Trp和Tyr；
(xxiii)  当取代发生在243位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxiv)  当取代发生在244位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Val，Trp和Tyr；
(xxv)  当取代发生在245位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(xxvi)  当取代发生在246位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr。
3.枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶变体，其特征在于所述变体具有野生型氨基酸序列的修饰的氨基酸序列，所述野生型序列包含第一个表位区，第二个表位区和第三个表位区，其中所述修饰的氨基酸序列包含在两个或多个表位区内一个或多个位置处的取代氨基酸的取代，其中：
(a) 当取代发生在第一个表位区中时，所述取代发生在108，109，110，111，112，113，114，115，116，117，118，119，120，121，122，123，124和125位的一个或多个位置处，其中：
(i)  当取代发生在108位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ii)  当取代发生在109位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iii)  当取代发生在110位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iv)  当取代发生在111位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(v)  当取代发生在112位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vi)  当取代发生在113位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val和Tyr；
(vii)  当取代发生在114位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(viii)  当取代发生在115位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ix)  当取代发生在116位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(x)  当取代发生在117位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xi)  当取代发生在118位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xii)  当取代发生在119位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiii)  当取代发生在120位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Glu，Phe，Gly，Ile，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiv)  当取代发生在121位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(xv)  当取代发生在122位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvi)  当取代发生在123位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvii)  当取代发生在  124位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(xviii)  当取代发生在125位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(b)当取代发生在第二个表位区中时，所述取代发生在221，222，223，224，225，226，227，228，229，230，231，232，233，234，235，236，237，238，239，240，241，242，243，244，245和246位的一个或多个位置处，其中：
(i)  当取代发生在221位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ii)  当取代发生在222位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Asn，Pro，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iii)  当取代发生在223位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iv)  当取代发生在224位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(v)  当取代发生在225位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vi)  当取代发生在226位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vii)  当取代发生在227位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(viii)  当取代发生在228位时，取代氨基酸选自Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ix)  当取代发生在229位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(x)  当取代发生在230位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xi)  当取代发生在231位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xii)  当取代发生在232位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiii)  当取代发生在233位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiv)  当取代发生在234位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xv)  当取代发生在235位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Met，Asn，Pro，Gln，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvi)  当取代发生在236位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvii)  当取代发生在237位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Met，Asn，Pro，Gln，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xviii)  当取代发生在238位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xix)  当取代发生在239位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xx)  当取代发生在240位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxi)  当取代发生在241位时，取代氨基酸选自Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr，Val和Tyr；
(xxii)  当取代发生在242位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Val，Trp和Tyr；
(xxiii)  当取代发生在243位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxiv)  当取代发生在244位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Val，Trp和Tyr；
(xxv)  当取代发生在245位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(xxvi)  当取代发生在246位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；和
(c)  当取代发生在第二个表位区中时，所述取代发生在70，71，72，73，74，75，76，77，78，79，80，81，82，83和84位的一个或多个位置处，其中：
(i)  当取代发生在70位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；
(ii)  当取代发生在71位时，取代氨基酸选自A，Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Gly，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Trp，Tyr和Val；
(iii)  当取代发生在72位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Gly，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(iv)  当取代发生在73位时，取代氨基酸选自Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Gly，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；
(v)当取代发生在74位时，取代氨基酸选自Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Gly，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；
(vi)  当取代发生在75位时，取代氨基酸选自Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Gly，Phe，His，Ile，Lys，Met，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；
(vii)  当取代发生在76位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Cys，Ile，Leu，Met，Gln，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；
(viii)  当取代发生在77位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Cys，Gln，Glu，Gly，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；
(ix)  当取代发生在78位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Gly，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Thr，Trp，Tyr和Val；
(x)  当取代发生在79位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Gly，Phe，His，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；
(xi)  当取代发生在80位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；
(xii)  当取代发生在81位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Gly，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(xiii)  当取代发生在82位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Gly，Phe，His，Ile，Lys，Met，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；
(xiv)  当取代发生在83位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr和Val；和
(xv)  当取代发生在84位时，取代氨基酸选自Ala，Arg，Asn，Asp，Cys，Gln，Glu，Gly，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Trp和Tyr。
4.前述权利要求任一项中所述的变体，其中所述修饰的氨基酸序列包含在两个或多个表位区内两个或多个位置处的取代氨基酸的取代。
5.前述权利要求任一项中所述的变体，其中所述丝氨酸蛋白酶选自枯草杆菌蛋白酶BPN’，枯草杆菌蛋白酶Carlsberg，枯草杆菌蛋白酶DY，枯草杆菌蛋白酶309，蛋白酶K和thermitase，并且其中所述变体进一步包含一个或多个稳定化突变。
6.前述权利要求任一项中所述的变体，其中所述修饰的氨基酸序列包含在一个或多个表位区内三个或多个位置处的取代氨基酸的取代。
7.含有权利要求1中所述变体和洗涤组合物载体的洗涤组合物。
8.个人护理组合物，其特征在于所述组合物含有个人护理载体和具有野生型氨基酸序列的修饰的氨基酸序列的枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶变体，所述野生型序列包含第一个表位区和第二个表位区，其中所述修饰的氨基酸序列包含在一个或多个表位区内一个或多个位置处的取代氨基酸的取代，其中：
(a)当取代发生在第一个表位区中时，所述取代发生在103，104，105，106，107，108，109，110，111，112，113，114，115，116，117，118，119，120，121，122，123，124，125和126位的一个或多个位置处，其中：
(i)当取代发生在  103位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ii)  当取代发生在104位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gin，Arg，Ser，Thr，Val，和Trp；
(iii)  当取代发生在105位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gin，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iv)  当取代发生在106位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val和Tyr；
(v)  当取代发生在107位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vi)  当取代发生在108位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vii)  当取代发生在109位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(viii)  当取代发生在110位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ix)  当取代发生在111位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(x)  当取代发生在112位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xi)  当取代发生在113位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val和Tyr；
(xii)  当取代发生在114位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiii)  当取代发生在115位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiv)  当取代发生在116位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xv)  当取代发生在117位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvi)  当取代发生在118位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvii)  当取代发生在119位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xviii)  当取代发生在120位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xix)  当取代发生在121位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(xx)  当取代发生在122位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxi)  当取代发生在123位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxii)  当取代发生在124位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxiii)  当取代发生在125位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(xxiv)  当取代发生在126位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(b)当取代发生在第二个表位区中时，所述取代发生在220，221，222，223，224，225，226，227，228，229，230，231，232，233，234，235，236，237，238，239，240，241，242，243，244，245和246位的一个或多个位置处，其中：
(i)  当取代发生在220位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Val，Trp和Tyr；
(ii)  当取代发生在221位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iii)  当取代发生在222位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iv)  当取代发生在223位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(v)  当取代发生在224位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vi)  当取代发生在225位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vii)  当取代发生在226位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(viii)  当取代发生在227位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(ix)  当取代发生在228位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(x)  当取代发生在229位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xi)  当取代发生在230位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xii)  当取代发生在231位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiii)  当取代发生在232位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiv)  当取代发生在233位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xv)  当取代发生在234位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvi)  当取代发生在235位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvii)  当取代发生在236位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gin，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xviii)  当取代发生在237位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xix)  当取代发生在238位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xx)  当取代发生在239位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxi)  当取代发生在240位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxii)  当取代发生在241位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val和Tyr；
(xxiii)  当取代发生在242位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Val，Trp和Tyr；
(xxiv)  当取代发生在243位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxv)  当取代发生在244位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Val，Trp和Tyr；
(xxvi)  当取代发生在245位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(xxvii)  当取代发生在246位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr。
9.个人护理组合物，其特征在于所述组合物含有个人护理载体和具有野生型氨基酸序列的修饰的氨基酸序列的枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶变体，所述野生型序列包含第一个表位区、第二个表位区和第三个表位区，其中所述修饰的氨基酸序列包含在一个或多个表位区内两个或多个位置处的取代氨基酸的取代，其中：
(a)当取代发生在第一个表位区中时，所述取代发生在103，104，105，106，107，108，109，110，111，112，113，114，115，116，117，118，119，120，121，122，123，124，125和126位的一个或多个位置处，其中：
(i)  当取代发生在  103位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ii)  当取代发生在104位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，和Trp；
(iii)  当取代发生在105位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iv)  当取代发生在106位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val和Tyr；
(v)  当取代发生在107位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vi)  当取代发生在108位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vii)  当取代发生在109位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(viii)  当取代发生在110位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ix)  当取代发生在111位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(x)  当取代发生在112位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xi)  当取代发生在113位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val和Tyr；
(xii)  当取代发生在114位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiii)  当取代发生在115位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiv)  当取代发生在116位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xv)  当取代发生在117位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvi)  当取代发生在118位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvii)  当取代发生在119位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xviii)  当取代发生在120位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xix)  当取代发生在121位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(xx)  当取代发生在122位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxi)  当取代发生在123位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxii)  当取代发生在124位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxiii)  当取代发生在125位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(xxiv)  当取代发生在126位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(b)当取代发生在第二个表位区中时，所述取代发生在220，221，222，223，224，225，226，227，228，229，230，231，232，233，234，235，236，237，238，239，240，241，242，243，244，245和246位的一个或多个位置处，其中：
(i)  当取代发生在220位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Val，Trp和Tyr；
(ii)  当取代发生在221位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iii)  当取代发生在222位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(iv)  当取代发生在223位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(v)  当取代发生在224位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vi)  当取代发生在225位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vii)  当取代发生在226位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(viii)  当取代发生在227位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(ix)  当取代发生在228位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(x)  当取代发生在229位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xi)  当取代发生在230位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xii)  当取代发生在231位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiii)  当取代发生在232位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiv)  当取代发生在233位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xv)  当取代发生在234位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvi)  当取代发生在235位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xvii)  当取代发生在236位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xviii)  当取代发生在237位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xix)  当取代发生在238位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xx)  当取代发生在239位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxi)  当取代发生在240位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxii)  当取代发生在241位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val和Tyr；
(xxiii)  当取代发生在242位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Val，Trp和Tyr；
(xxiv)  当取代发生在243位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xxv)  当取代发生在244位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Val，Trp和Tyr；
(xxvi)  当取代发生在245位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(xxvii)  当取代发生在246位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；和
(c)  当取代发生在第三个表位区中时，所述取代发生在70，71，72，73，74，75，76，77，78，79，80，81，82，83和84位的一个或多个位置处，其中：
(i)  当取代发生在70位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ii)  当取代发生在71位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Val，Trp和Tyr；
(iii)  当取代发生在72位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(iv)  当取代发生在73位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(v)  当取代发生在74位时，取代氨基酸选自Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vi)  当取代发生在75位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(vii)  当取代发生在76位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(viii)  当取代发生在77位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(ix)  当取代发生在78位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Thr，Val，Trp和Tyr；
(x)  当取代发生在79位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xi)  当取代发生在80位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xii)  当取代发生在81位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr；
(xiii)  当取代发生在82位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；
(xiv)  当取代发生在83位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp和Tyr；和
(xv)  当取代发生在84位时，取代氨基酸选自Ala，Cys，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp和Tyr。
10.包含权利要求1所述变体和个人护理载体的个人护理组合物。
11.包含权利要求3所述变体和洗涤组合物载体的洗涤组合物。
12.包含权利要求3所述变体和个人护理载体的个人护理组合物。
CN00810747A 1999-07-22 2000-07-11 在确定表位区有氨基酸取代的枯草杆菌蛋白酶变体 Pending CN1399677A (zh)

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