CZ2002212A3

CZ2002212A3 - Varianty subtilisinové proteasy mající aminokyselinové substituce v definovaných epitopových oblastech

Info

Publication number: CZ2002212A3
Application number: CZ2002212A
Authority: CZ
Inventors: Elizabeth Ellen Sikorski; Donn Nelton Rubingh
Original assignee: The Procter & Gamble Company
Priority date: 1999-07-22
Filing date: 2000-07-11
Publication date: 2002-07-17
Also published as: MXPA02000840A; BR0012660A; KR20020021398A; WO2001007578A2; AU6085800A; JP2003505070A; US6586223B1; CN1399677A; WO2001007578A3; EP1210415A2; CA2376045A1

Description

Oblast techniky

Tento vynález se (subtili sinových genovým inženýrstvím, jež jsou užitečné jsou například prostředky péče o tělo, prostředky k čištění pevných povrchů prostředky.

proteas pozměněných v prostředcích^ jako prací prostředky, a jemné čistící

Dosavadní stav techni kv

Enzymy tvoří největší třídu přirozeně se vyskytujících bílkovin. Jedna třída enzymů zahrnuje proteasy, jež katalysují hydrolysu jiných bílkovin. Schopnost hydrolyzovat bílkoviny byla využita zahrnutím přirozeně se vyskytujících a genovým inženýrstvím pozměněných proteas do čistících prostředků, obzvláště těch, co jsou relevantní pro prací aplikace.

Nej šíře používanými z těchto proteas jsou v oboru čištění serinové proteasy. většina z těchto serinových proteas je produkována bakteriálními organismy, zatímco některé jsou produkovány jinými organismy, jako jsou houby, viz siezen, Ronald J. et al. „Homology Modelling and Protein Engineering Stratégy of Subtilases, the Family of Subtilisin-Like Serine Proteases“, Protein Engineering, sv. 4, č. 7, str. 719-737 (1991). Bohužel, účinnost proteas divokého typu v jejich přirozeném prostředí často není optimalizována pro umělé prostředí čistícího prostředku. Konkrétně nejsou pro použití mimo přirozené prostředí enzymu nutně optimalizovány proteasové charakteristiky, jako jsou například tepelná stabilita, pH stabilita, oxidativní stabilita a substrátová spéci fita.

S cílem zvýšit účinnost proteasy v nepřirozeném mycím/pracím prostředí se použilo několik přístupů ke změně aminokyselinové sekvence divokého typu serinové proteasy. Tyto • · přístupy zahrnovaly nový genový design pro zvýšení tepelné stability a zlepšení oxidační stability za poměrně různorodých podmínek.

Protože však takto modifikované proteasy jsou pro savce cizí, jsou potenciálními antigeny. Jako antigeny způsobují tyto proteasy u savců imunogenní nebo alergenní odezvy (zde hromadně popisované jako imunogenní odezvy).

Dále: Zatímco genové inženýrství bylo prominentní složkou trvajícího vyhledávání vysoce účinných proteas pro použití v pracích aplikacích, proteasy pocházející z genového inženýrství nebyly komerčně využity v prostředcích péče o tělo nebo jemných detergentů. Prvotným důvodem pro absenci použití proteas pocházejících z genového inženýrství v produktech, jakými jsou například gely, tělové šampony, a vlasové šampony, byl problém zcitlivění osob vedoucí k nežádoucím imunologickým odezvám. Bylo by proto vysoce výhodné poskytovat prostředek péče o tělo nebo jemný detergent, jež by poskytovaly čistící vlastnosti proteasy z genového inženýrství s minimalizovaným vyvoláváním imunologické odezvy.

Jedna cesta ke zmírnění imunologické aktivity proteasy vede přes nový design jednoho nebo více epitopů proteasy. Epitopy jsou ty aminokyselinové oblasti antigenu, jež vyvolávají imunologickou odezvu prostřednictvím vazby protilátek nebo presentace zpracovaného antigenu T buňkám přes bílkovinu hlavního histokompatibilitního komplexu (MHC). změny v epitopu mohou ovlivňovat jeho účinnost jako antigenu. viz Walsh, B. J. a Μ. E. H. Howden, „A Method for the Detection of igE Binding Sequences of Allergens Based on a Modification Epitope Mapping“, Journal of Immunological Methods, sv. 121, str. 275 - 280 (1989).

Předkladatelé objevili, že serinové proteasy běžně známé jako subtilisiny, včetně subtilisinu BNP', mají prominentní epitopové oblasti u aminokyselinových posic 103 - 126 a 220 246, jakož i u aminokyselinových posic 70 - 84 odpovídajících subtilisinu BNP'. Předkladatelé zde nově geneticky designovali takovéto subtilisiny ke zmírnění imunogenních odezev připisovaných této epitopové oblasti. Předkladatelé přitom objevili subtilisiny, jež vyvolávají sníženou imunologickou • · • · odezvu, ale udržují svou aktivitu jako účinná čistící proteasa. v souladu s tím jsou takovéto proteasy vhodné k použití v různých typech prostředků včetně, ale bez omezení, v pracích prostředcích, prostředcích k mytí nádobí, pevných povrchů, prostředcích péče o kůži, vlasy, v krášlících prostředcích, prostředcích ústní hygieny a péče o kontaktní čočky.

Podstata vynálezu

Tento vynález se týká variant serinových proteas majících sníženou imunogenicitu ve srovnání s odpovídajícími proteasami divokého typu. Konkrétněji se vynález týká variant majících aminokyselinové sekvence divokého typu modifikované, přičemž modifikovaná aminokyselinová sekvence zahrnuje substituci jedné nebo více epitopových oblastí, kde epitopovými oblastmi jsou 103 - 126 a 220 - 246 odpovídající subtilisinu bnp'. Navíc se vynález týká modifikovaných aminokyselinových sekvencí obsahujících jednu nebo více substitucí ve dvou nebo více epitopových oblastech, kde epitopovými oblastmi jsou 70 84, 103 - 126 a 220 - 246 odpovídající subtilisinu BNP'. Vynález se dále týká mutantních genů kódujících takovéto varianty a čistících prostředků a prostředků péče o tělo obsahujících takovéto varianty.

Podrobný popis vynálezu

Podstatné složky vynálezu jsou zde popsány níže. zahrnuty jsou rovněž neomezující popisy různých případných a výhodných složek užitečných v provedeních vynálezu.

Vynález se může skládat, nebo se může v podstatě skládat z kterýchkoli požadovaných nebo případných složek nebo omezení zde popsaných nebo je zahrnovat.

Všechna procenta a poměry jsou počítány podle hmotnosti pokud se neuvádí jinak. Všechna procenta jsou počítána podle úplného prostředku pokud se neuvádí jinak.

• · • · • · · • · · · • · · · · • · · všechny hladiny složky nebo prostředku jsou s odkazem k aktivní hladině této složky nebo prostředku, a nezahrnují nečistoty, například zbytková rozpouštědla nebo vedlejší produkty, jež mohou být přítomné v komerčně dostupných produktech.

Všechny dokumenty, na něž se zde odkazuje, včetně všech patentů, patentových přihlášek a tištěných publikací, jsou zde v úplnosti zahrnuty odkazem.

Jak se zde používá, k popisu aminokyselin jsou použity zkratky. Tabulka I poskytuje seznam zde použitých zkratek:

Tabulka I

Aminokyselina	Tří písmenková zkratka	Jednopísměnková zkratka
Alanin	Ala	A
Arginin	Arg	R
Asparagin	Asn	N
Kys. asparagová	Asp	D
Cystei n	Cys	C
Glutamin	Glň	Q
Kys. glutamová	ČTii	E
Glycin		G
Histidin	His	H
isoleucin	Ile	I
Leucin	Leu	L
Lysin	Lys	K
Methionin	Met	M
Feny! alanin	pfiě	F
Prolin	pro	P
Serin	Ser	S
Threonin	ŤEr	T
Tryptofan	Trp	w
Tyrosi n	Tyr	Y
Val i n	Val	v

Definice

Jak se zde používá, výraz „mutace“ odkazuje na změnu v sekvenci genu nebo v aminokyselinové sekvenci produkované těmito sekvencemi genů. Mutace zahrnují delece, substituce a adice aminokyselinových zbytků v bílkovinné sekvenci divokého typu.

Jak se zde používá, výraz „divoký typ“ odkazuje na bílkovinu, zde konkrétně na proteasu, produkovanou nemutovaným organismem.

Jak se zde používá, výraz „variant“ znamená bílkovinu, zde konkrétně proteasu, mající aminokyselinovou sekvenci, jež se liší od sekvence odpovídající bílkoviny divokého typu.

Jak se zde používají (i když varianty podle vynálezu nejsou omezeny na varianty subtilisinu BNP') všechna číslování aminokyselin jsou s odkazem na aminokyselinovou sekvenci subtilisinu BNP', jež je předvedena v SEQ ID č. 1. Tato aminokyselinová sekvence pro subtilisin BNP' je dále popsána wellsem et al., NucTeic Acids Research, sv. li, 7911 - 7925 (1983), zahrnuto zde odkazem.

Varianty podle vynálezu

Předkladatelé objevili v serinových proteasach tři epitopové oblasti, jež odpovídají posicím 103 - 126 (na něž se zde odkazuje jako na první epitopovou oblast), 220 - 246 (na něž se zde odkazuje jako na druhou epitopovou oblast), a 70 84 (na něž se zde odkazuje jako na třetí epitopovou oblast) subtilisinu BNP'. Předkladatelé dále objevili, že jedna nebo více substitucí v jedné nebo více epitopových oblastech poskytuje varianty, jež vyvolávají sníženou alergenní nebo imunitní odezvu v porovnání se setinovými proteasami divokého typu.

Jak se zde používá, variant může být označen odkazy na substituované aminokyselinové posice, jež variant charakterizují, substituce jsou zde vyznačeny poskytnutím aminokyselinového zbytku divokého typu, následovaným posičním číslem, následovaným substituovaným zbytkem k substituci. Tam, kde substituovaný aminokyselinový zbytek může být libovolná přirozená aminokyselina povolená pro tuto konkrétní posici, poskytuje se symbol Násobné substituce zakládající určitý variant jsou odděleny symbole Pro ilustraci, substituce val i nu za glycin v posici 70 je označen buď Gly70Val nebo G70V. Příklad variantu majícího substituci ve dvou posicích 70 a 108 může být označen Gly70Val + llelO8Ala nebo G70v + H08A.

varianty podle vynálezu jsou varianty proteas podobných subtilisinu. lak se zde používá, „proteasa podobná subtilisinu“ znamená proteasu, jež má přinejmenším 50 %, a s výhodou 80 %, identity aminokyselinové sekvence se sekvencemi subtilisinu BNP'. Proteasy divokého typu podobné subtilisinu jsou produkovány například mikroorganismy Bači Hus alcalophilus, Bači 11us amyloliquefaciens, Bacili us amylosaccharics, Bači Hus licheniformis, Bači Hus lentus, a Bači 7 7us subtilis. Diskusi týkající se serinových proteas podobných subtilisinu a jejich homologií lze nalézt v siezen et al., „Homology Modelling nad Protein Engineering Stratégy of subtilases, the Family of Subtilisin-Like Serine Protease“, Protein Engineering, sv. 4, č. 7, str. 719 737 (1991).

Varianty podle vynálezu jsou varianty serinových proteas mající aminokyselinové sekvence divokého typu modifikované, přičemž modifikovaná aminokyselinová sekvence zahrnuje substituci jedné nebo více epitopových oblastí, kde epitopová oblast odpovídá posicím 103, 104, 105, 106, 107,

110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119,

122, 123, 124, 125 a 126 (103 - 126) subtilisinu BNP’ epitopová oblast odpovídá posicím 220, 221, 222,

225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234,

237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245 a 246 (220 - 246)

epitopová
108,	109,
120,	121,
>’ a	druhá
223,	224,
235,	236,

předcházejících aminokyselinová předcházejících aminokyselinová předcházejících subtilisinu BNP'. výhodněji obsahuje aminokyselinová sekvence substituci dvou posic. Ještě výhodněji obsahuje sekvence substituci tří posic. Nejvýhodněji obsahuje sekvence substituci čtyř posic. Substituce v těchto modifikovaná nebo více módifi kovaná nebo více módifi kovaná nebo ví ce posicích se • 4 ·

44 » 4 4 • 4 4 4 ·· ·4 · · · • 4 · ·

4 4

4444 realizují náhradou aminokyselinového zbytku divokého typy jiným zbytkem přirozené aminokyseliny, jak je uvedeno v Tabulce I.

S výhodou: Když má variant serinové proteasy aminokyselinovou sekvenci modifikovanou z aminokyselinové sekvence divokého typu, přičemž aminokyselinová sekvence divokého typu obsahuje první epitopovou oblast a druhou epitopovou oblast, modifikovaná aminokyselinová sekvence obsahuje substituci substituující aminokyselinou přinejmenším v jedné nebo více posicích v jedné nebo více epitopových oblastí, kde

když	substituce nastává	v první	epitopové
oblasti v jedné	nebo	více z	posic 103,	104,	105,
106,	107, 108,	109,	110,	111, 112,	113,	114,
115,	116, 117,	118,	119,	120, 121,	122,	123,
124,	125 a 126,	kde

1) když substituce nastává v posici 103, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

2) když substituce nastává v posici 104, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val a Trp;

3) když substituce nastává v posici 105, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;

4) když substituce nastává v posici 106, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val a Tyr;

• ·

5) když substituce nastává v posici 107, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

6) když substituce nastává v posici 108, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

7) když substituce nastává v posici 109, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

8) když substituce nastává v posici 110, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

9) když substituce nastává v posici 111, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

10) když substituce nastává v posici 112, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

11) když substituce nastává v posici 113, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val a Tyr;

12) když substituce nastává v posici 114, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, ·· *· • * · • · ··

Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

13) když substituce nastává v posici 115, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

14) když substituce nastává v posici 116, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

15) když substituce nastává v posici 117, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

16) když substituce nastává v posici 118, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

17) když substituce nastává v posici 119, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

18) když substituce nastává v posici 120, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

19) když substituce nastává v posici 121, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Pro, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;

• ·

- 10 • · · • ·♦· • · • 9 ·♦·· ·· ·« <

• · ·

9 · · ♦ · 999·

9 9 *·

9999

20) když substituce nastává v posici 122, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

21) když substituce nastává v posici 123, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

22) když substituce nastává v posici 124, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

23) když substituce nastává v posici 125, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr; a

24) když substituce nastává v posici 126, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr; a

B) když substituce nastává v druhé epitopové oblasti v jedné nebo více z posic 220, 221, 222,

223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231,

232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240,

241, 242, 243, 244, 245 a 246, kde

1) když substituce nastává v posici 220, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Val, Trp a Tyr;

• ·

- 11 • ···

♦··· ·· ·♦ ♦♦ • · ·

·«► ·· • · · · • · · • · ♦ ·· ····

2) když substituce nastává v posici 221, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;

3) když substituce nastává v posici 222, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

4) když substituce nastává v posici 223, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

5) když substituce nastává v posici 224, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;

6) když substituce nastává v posici 225, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

7) když substituce nastává v posici 226, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

8) když substituce nastává v posici 227, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;

9) když substituce nastává v posici 228, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe,

- 12 9 9

9 9 9 9 9

999 9 9 9 9 9

9 999 9999999

9 9 9 9 9 9

99999 99 9

Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

10) když substituce nastává v posici 229, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

11) když substituce nastává v posici 230, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

12) když substituce nastává v posici 231, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

13) když substituce nastává v posici 232, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

14) když substituce nastává v posici 233, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

15) když substituce nastává v posici 234, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

16) když substituce nastává v posici 235, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

- 13 • 9 9 9 ♦ ♦ · • ···

9999

9

9 9

9 9 9 • 99999

9 9

99

9 9 9

9 9

9999

17) když substituce nastává v posici 236, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;

18) když substituce nastává v posici 237, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

19) když substituce nastává v posici 238, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

20) když substituce nastává v posici 239, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

21) když substituce nastává v posici 240, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

22) když substituce nastává v posici 241, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

23) když substituce nastává v posici 242, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Val, Trp a Tyr;

24) když substituce nastává v posici 243, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, • 4

Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

25) když substituce nastává v posici 244, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Val, Trp a Tyr;

26) když substituce nastává v posici 245, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr; a

27) když substituce nastává v posici 246, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Trp a Tyr.

Výhodněji: Když má variant serinové proteasy aminokyselinovou sekvenci modifikovanou z aminokyselinové sekvence divokého typu, přičemž aminokyselinová sekvence divokého typu obsahuje první epitopovou oblast a druhou epitopovou oblast, modifikovaná aminokyselinová sekvence obsahuje substituci substituující aminokyselinou přinejmenším v jedné nebo více posicích v jedné nebo více epitopových oblastí, kde

A) když substituce nastává v první epitopové oblasti v jedné nebo více z posic 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125 a 126, kde

1) když substituce nastává v posici 108, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;

- 15 • ··· · · » · · · * ·· · * · ···*·*· · · «»· 9 · · * · · • |«| fc* ·· * ·· ·♦··

2) když substituce nastává v posici 109, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Phe, Gly, His, Leu, Met, Pro, Gin, Trp a Tyr;

3) když substituce nastává v posici 110, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

4) když substituce nastává v posici 111, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

5) když substituce nastává v posici 112, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Val, Trp a Tyr;

6) když substituce nastává v posici 113, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val a Tyr;

7) když substituce nastává v posici 114, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

8) když substituce nastává v posici 115, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

9) když substituce nastává v posici 116, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Phe, Gly,

- 16 «« ·· « ·> ·* » ·« · »» * »> * • ·»· α · · · * · · • · · » · · ···* · · · · • · · « · · Λ · ·

His, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Val, Trp a Tyr;

10) když substituce nastává v posici 117, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

11) když substituce nastává v posici 118, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Met, Pro, Gin, Arg, Thr, Trp a Tyr;

12) když substituce nastává v posici 119, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

13) když substituce nastává v posici 120, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

14) když substituce nastává v posici 121, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Trp a Tyr;

15) když substituce nastává v posici 122, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

16) když substituce nastává v posici 123, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, val, Trp a Tyr;

n ·

17) když substituce nastává v posici 124, substituující aminokyselina je vybrána ze

skupiny sestávající	z	Cys,	Asp,	Glu,
Phe, Gly, His, Asn, Thr, val, Trp a Tyr;	Pro,	Gin,	Arg,	Ser,
18) když substituce nastává	v posici	125,
substituující aminokyselina je	vybrána ze
skupiny sestávající z	Ala	, Cys,	Asp,	Glu,
Phe, Gly, His, ile,	Lys,	Leu,	Met,	Asn,

Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr; a

19) když substituce nastává v posici 126, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr; a

B) když substituce nastává v druhé epitopové oblasti v jedné nebo více z posic 221, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245 a 246, kde

1) když substituce nastává v posici 221, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;

2) když substituce nastává v posici 223, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

3) když substituce nastává v posici 224, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;

- 18 • · · · • · · • · ··

4) když substituce nastává v posici 225, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Asn, Thr, Trp a Tyr;

5) když substituce nastává v posici 226, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;

6) když substituce nastává v posici 227, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Trp a Tyr;

7) když substituce nastává v posici 228, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

8) když substituce nastává v posici 229, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

9) když substituce nastává v posici 230, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

10) když substituce nastává v posici 231, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

11) když substituce nastává v posici 232, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly,

- 19 His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

12) když substituce nastává v posici 233, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

13) když substituce nastává v posici 234, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

14) když substituce nastává v posici 235, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Met, Asn, Pro, Gin, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

15) když substituce nastává v posici 236, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;

16) když substituce nastává v posici 237, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

17) když substituce nastává v posici 238, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

18) když substituce nastává v posici 239, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

- 20 44 ·4 ·4

4 4 ♦

4 4 4 4

4 4 4

4444 4 · · ·

19) když substituce nastává v posici 240, substituující aminokyselina je vybrána ze

skupiny sestávající z Ala,	Cys,	Asp,	Glu,
Phe,	Gly, His, Ile, Leu,	Met,	Pro,	Gin,
Ser,	Thr, Val, Trp a Tyr;
20) když	substituce nastává	v posici	241,

substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr a Val;

21) když substituce nastává v posici 242, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Val, Trp a Tyr;

22) když substituce nastává v posici 243, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

23) když substituce nastává v posici 244, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Val, Trp a Tyr;

24) když substituce nastává v posici 245, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr; a

25) když substituce nastává v posici 246, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Trp a Tyr.

Ještě výhodněji: Když má variant serinové proteasy aminokyselinovou sekvenci modifikovanou z aminokyselinové

- 21 β * · » • · · · • · · · · · • · · · · · « · · · · ···· · · · · sekvence divokého typu, přičemž aminokyselinová sekvence divokého typu obsahuje první epitopovou oblast a druhou epitopovou oblast, modifikovaná aminokyselinová sekvence obsahuje substituci substituující aminokyselinou ve dvou nebo více posicích v jedné nebo více epitopových oblastí, kde

1) když substituce nastává v posici 108, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

2) když substituce nastává v posici 109, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;

3) když substituce nastává v posici 110, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

5) když substituce nastává v posici 112, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

6) když substituce nastává v posici 113, substituující aminokyselina je vybrána ze « · « · • «

- 22 skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val a Tyr;

7) když substituce nastává v posici 114, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

9) když substituce nastává v posici 116, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

10) když substituce nastává v posici 117, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

11) když substituce nastává v posici 118, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

12) když substituce nastává v posici 119, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

13) když substituce nastává v posici 120, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Glu, Phe, Gly, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

14) když substituce nastává v posici 121, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Pro, Arg, ser, Thr, Trp a Tyr;

15) když substituce nastává v posici 122, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

16) když substituce nastává v posici 123, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

17) když substituce nastává v posici 124, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

18) když substituce nastává v posici 125, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr; a

B) když substituce nastává v druhé epitopové oblasti v jedné nebo více z posic 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245 a 246, kde

1) když substituce nastává v posici 221, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;

- 24 » · · • ♦ • Μ·

2) když substituce nastává v posici 222, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

3) když substituce nastává v posici 223, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

4) když substituce nastává v posici 224, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;

5) když substituce nastává v posici 225, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

6) když substituce nastává v posici 226, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

7) když substituce nastává v posici 227, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Trp a Tyr;

8) když substituce nastává v posici 228, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

9) když substituce nastává v posici 229, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, • *

Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

10) když substituce nastává v posici 230, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

11) když substituce nastává v posici 231, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

12) když substituce nastává v posici 232, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

13) když substituce nastává v posici 233, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

14) když substituce nastává v posici 234, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

15) když substituce nastává v posici 235, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

16) když substituce nastává v posici 236, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;

• » · »

- 26 ι: . • · · ·

« · · « > « · · ·

17) když substituce nastává v posici 237, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

18) když substituce nastává v posici 238, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

19) když substituce nastává v posici 239, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

20) když substituce nastává v posici 240, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

21) když substituce nastává v posici 241, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

22) když substituce nastává v posici 242, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, val, Trp a Tyr;

23) když substituce nastává v posici 243, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

24) když substituce nastává v posici 244, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, • ·

- 27 - ·*!·*·· ·*« · · · «···«« ·* · ·* ··¹

Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, val, Trp a Tyr;

25) když substituce nastává v posici 245, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr; a

26) když substituce nastává v posici 246, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr.

v jiném výhodném provedení varianty obsahují substituci substituující aminokyselinou v jedné nebo více posicích ve dvou nebo více epitopových oblastech, přičemž epitopovými oblastmi jsou první epitopová oblast odpovídající posicím 103 - 126 subtilisinu bnp', druhá epitopová oblast odpovídající posicím 220 - 246 subtilisinu BNP' a třetí epitopová oblast odpovídající posicím 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79,

80, 81, 82, 83 a 84 (70 - 84) subtilisinu BNP'. V tomto provedení slovní spojení „substituce substituující aminokyselinou v jedné nebo více posicích ve dvou nebo více epitopových oblastech“ znamená, že přinejmenším jedna substituce nastává v jedné z epitopových oblastí a přinejmenším jedna substituce nastává v odlišné epitopové oblasti. Samozřejmě v tomto provedení alespoň jedna substituce může nastat v každé epitopové oblasti, výhodně v tomto provedení obsahuje modifikovaná aminokyselinová sekvence substituci substituující aminokyselinou ve dvou nebo více posicích ve dvou nebo ve více epitopových oblastech (tj. variant obsahuje substituci substituující aminokyselinou v jedné nebo více posicích v jedné nebo ve více epitopových oblastech a substituci substituující aminokyselinou ve dvou nebo více posicích jiné epitopové oblasti), výhodněji v tomto provedení obsahuje modifikovaná aminokyselinová sekvence substituci substituující aminokyselinou ve třech nebo více posicích v jedné nebo ve více epitopových oblastech (tj.

Φ· Φφ φ· · ♦ · ·· • « · ·>· » « φ ·

Φ·»Φ ·Ι<Φ φ · » «-) Q ··♦····»··♦·· *

- 20 - φφφφφ· φ · φ «•V »» ·· φ «· ΦΦ·· variant obsahuje substituci substituující aminokyselinou v jedné nebo více posicích v jedné nebo ve více epitopových oblastech a substituci substituující aminokyselinou ve třech nebo více posicích jiné epitopové oblasti). Substituce v předcházejících posicích se realizují náhradou aminokyselinového zbytku divokého typy jiným zbytkem přirozené aminokyseliny, jak je uvedeno v Tabulce I.

A) když substituce nastává v první epitopové oblasti,

substituce	nastává v jedné nebo více z posic	103,
104,	105,	106, 107, 108, 109, 110,	111, 112,	113,
114,	115,	116, 117, 118, 119, 120,	121, 122,	123,
124,	125 a	126, kde
	1)	když substituce nastává	v posici	103,

substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

• »

11) když substituce nastává v posici 113, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,

- 30 Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val a Tyr;

12) když substituce nastává v posici 114, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

- 31 4 4* ♦ <

24) když substituce nastává v posici 126, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr; a když substituce nastává v posici 126, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr; a

B) když substituce nastává v druhé epitopové oblasti, substituce nastává v jedné nebo více

99 »99 9

9 * »99 9

- 32 99 99

9 9

9 99 9 9

9 99 9·

99 9·99 z posic 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236,

237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245 a 246, kde

7) když substituce nastává v posici 226, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,

- 33 Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro,

Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

9) když substituce nastává v posici 228, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

- 34 • 4 ♦· · 4

444

22) když substituce nastává v posici 241, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, • * 4 · · · ·

4 4 4 4 · ·

4 4 4·· 4 4 4 ·

Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Asn,

Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

23) když substituce nastává v posici 242, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Val, Trp a Tyr;

24) když substituce nastává v posici 243, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

25) když substituce nastává v posici 244, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Val, Trp a Tyr;

26) když substituce nastává v posici 245, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr; a

27) když substituce nastává v posici 246, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr; a

C) když substituce nastává v třetí epitopové oblasti, substituce nastává v jedné nebo více z posic 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83 a 84, kde

1) když substituce nastává v posici 70, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

♦ ♦

- 36 • ···

* · • · · • ··*· ·· • · · • · ♦ · · ·» ····

2) když substituce nastává v posici 71, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, val, Trp a Tyr;

3) když substituce nastává v posici 72, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Trp a Tyr;

4) když substituce nastává v posici 73, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Ser, Val, Trp a Tyr;

5) když substituce nastává v posici 74, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

6) když substituce nastává v posici 75, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

7) když substituce nastává v posici 76, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

8) když substituce nastává v posici 77, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

9) když substituce nastává v posici 78, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,

- 37 Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn,

Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;

10) když substituce nastává v posici 79, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

11) když substituce nastává v posici 80, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

12) když substituce nastává v posici 81, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Trp a Tyr;

13) když substituce nastává v posici 82, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

14) když substituce nastává v posici 83, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

15) když substituce nastává v posici 84, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

výhodněji v tomto provedení: Když má variant serinové proteasy aminokyselinovou sekvenci modifikovanou z aminokyselinové sekvence divokého typu, přičemž aminokyselinová sekvence divokého typu obsahuje první epitopovou oblast, druhou epitopovou oblast a třetí epitopovou

- 38 ·* · 99 99

9 9 9 9 9 • 9 9 9 9 ·

9999999 9 9

9 9 9 9

9 9 9 9 9 99 9 oblast, modifikovaná aminokyselinová sekvence obsahuje substituci substituující aminokyselinou v jedné nebo více posicích ve dvou nebo více epitopových oblastech, kde

A) když substituce nastává v první epitopové oblasti, substituce nastává v jedné nebo více z posic 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124 a 125 kde

6) když substituce nastává v posici 113, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,

- 39 ·* ·

9 · 99 ···· ·· ««

9 9 ·

• · « * « ·♦ 99

Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val a Tyr;

- 40 • * · • »·· ♦ * * * • * · ···* ·· ·* » · · · • ·»·*«· • · · «· * »« ·· • 4 4 4 · · » « · « 4 ♦ *4 ·♦**

17) když substituce nastává v posici 124, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr; a

18) když substituce nastává v posici 125, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe,

		Gly, His, Lys, Leu, Met, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;	Asn, Pro,	Gin,
když substituce nastává v druhé epitopové oblasti, substituce nastává v jedné nebo více z posic 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245 a 246, kde
	1)	když substituce nastává	v posici	221,

substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;

- 41 ♦· ·* • * · • ··* « · • · »»«f ·« ♦ · · • 0 0 • · · 0 • 0 t·»· • * * «0 0 »0 ·· • 0< * • · · • · ·

0 0

W0 0000

2) když substituce nastává v posici 222, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

8) když substituce nastává v posici 228, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

9) když substituce nastává v posici 229, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, ·

- 42 ·· ·· • · · • ··« η* ·· 9 • · · · · · • · ···· • · · ·· * • C ·· • · 9 • · • · • · ····

Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

16) když substituce nastává v posici 236, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;

- 43 ·· · · · * · · · • · · · · · · • ··· ····· ·· e· · ······

17) když substituce nastává v posici 237, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

24) když substituce nastává v posici 244, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,

- 44 • · 4 4 · 4 4

Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, val, Trp a Tyr;

1) když substituce nastává v posici 70, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Gly, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;

2) když substituce nastává v posici 71, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;

3) když substituce nastává v posici 72, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, ser, Thr, Trp, a Tyr;

4) když substituce nastává v posici 73, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Arg, Asn, Asp, cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;

· ·· ··· ♦ ♦ · ♦ ···· « ··· · · ·

-45- .* ! ί * ί ! * ί ί ·* ···· ·· ·· · ·· ····

5) když substituce nastává v posici 74, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Arg, Asn, Asp, cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;

6) když substituce nastává v posici 75, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, ile, Lys, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a val;

7) když substituce nastává v posici 76, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, cys, Ile, Leu, Met, Gin, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;

8) když substituce nastává v posici 77, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Cys, Glu, Gin, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;

9) když substituce nastává v posici 78, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Thr, Trp, Tyr a val;

10) když substituce nastává v posici 79, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;

11) když substituce nastává v posici 80, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a val;

12) když substituce nastává v posici 81, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp,

- 46 φ · ·

Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, a Tyr;

13) když substituce nastává v posici 82, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Met, Pro, ser, Thr, Trp, Tyr a val;

14) když substituce nastává v posici 83, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a val;

15) když substituce nastává v posici 84, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp a Tyr; a

Ještě výhodněji v tomto provedení: Když substituce nastává v třetí epitopové oblasti, substituce nastává v jedné nebo více z posic 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83 a 84, kde

2) když substituce nastává v posici 71, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Cys, Gin, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, ser, Thr, Trp, Tyr a val;

- 47 4) když substituce nastává v posici 73, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Arg, Asn, Asp, Cys, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;

10) když substituce nastává v posici 79, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Cys, Gin, Gly, Phe, His, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a val;

11) když substituce nastává v posici 80, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, • *

- 48 Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, ser, Thr, Trp, Tyr a Val;

12) když substituce nastává v posici 81, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, ser, Thr, Trp, a Tyr;

14) když substituce nastává v posici 83, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a val; a

15) když substituce nastává v posici 84, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, ser, Thr, Trp a Tyr.

Nejvýhodněji, když substituce nastává v třetí epitopové oblasti, varianty podle vynálezu zahrnují substituci nastává v jedné nebo více z posic 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83 (73 - 83), výhodněji v jedné nebo více z 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82 (75 - 82), a nejvýhodněji 78 nebo 79.

Navíc mohou být v kterékoli posici serinové proteasy vytvořeny jedna nebo dvě substituční mutace („stabilizační mutace“) například proto, aby znovu stabilizovaly proteasu po mutaci epitopové oblasti nebo aby zvýšily proteolytickou aktivitu daného variantu. Mnohé takovéto stabilizační mutace jsou v oboru známé. Příklady takovýchto stabilizačních mutací jsou zveřejněny například v wo 95/10591, Baeck et al., zveřejněno 20. dubna 1995; US patent čís. 4 914 031, Zukowski et al., vydán 3. dubna 1990; US patent čís. 5 470 733, Bryan « · •» ··· ·· ·» • · · ··« ·»·< • · · · · ··· · · »

- 49 - <* Z Z * Z Ζ **Ζ* * Z Ζ ···· ·· ·· · ·* ···· et al., vydán 28. listopadu 1995; US patent čís. 5 567 601, Bryan et al., vydán 22. října 1996; WO 89/07642, US patent čís. 5 707 848, Bryan et al., vydán 13.ledna 1998; Van Eckelen et al., publikováno 24. srpna 1989; WO/87/04461, Stabinski et al., publikováno 30. července 1987; US patent čís. 4 760 025, Estell et al., vydán 26. července 1988; WO 92/11348, Branner et al., vydáno 9. července 1992; ep 0 405 901, Casteleijn et al., publikováno 2. ledna 1991; WO 91/00345, Branner et al., publikováno 10. ledna 1991; a WO 94/11348, Brode et al., vydáno 23. března 1995.

výhodné stabilizační mutace zahrnují jednu nebo více z: H07V; Y217L; Y217K; N218S; G162A; M50F; Q19e, P5A; I31L;

E156S; G169A; N212G; S188P; T254A; S3C + Q206C; a Q271E.

výhodnější stabilizační mutace zahrnují jednu nebo více z: I31L; E156S; G169A; N212G; S188P; T254A; S3C + Q206C; Q271E; Y217L a Y217K. Nejvýhodnější stabilizační mutace zahrnují Y217L a Y217K.

způsoby provedení varianty jsou připravovány mutováním nukleotidových sekvencí, jež kódují serinovou proteasu divokého typu, což vede k variantům, jež mají modifikované nukleotidové sekvence. Takovéto způsoby jsou v oboru dobře známé a jeden takovýto způsob je načrtnut níže:

Fagemid pSS-5 obsahující gen subtilisinu bnp' divokého typu (Mitchison, c. aj. A. Wells, „ Protein Engineering of Disulfide Bonds in Subtili sin BNP'“, Biochemistry, sv. 28, str. 4807-4815 (1989)) je transformován do kmene Escherichia coli dut- ung- 0236 a jednovláknový uráčil obsahující DNA templát je produkován s použitím pomocného fága VCSM13 (Kunkel et al., „Rapid and Efficient Site-Specific Mutagenesis without Phenotypic selection“, Methods in Enzymology, sv. 154, str. 367 - 382 (1987), v modifikaci podle Yuckenberga et al., „Site-Directed in vitro Mutagenesis using Uracil-Containing DNA and Phagemid vectors“, Di rected Mutagenesis - A Practicai Approach, McPherson, M. J. ed., str. 27 - 48 (1991).

« ·

- 50 ♦ « · » · <

• · f · · « ··«·*«« · ·

K vytvoření všech mutantů se použila řízená mutagenese s primery modifikovaná ze způsobu zollera a Smithe (zoller, M.

3., a M. Smith, „Oligonucleotide-Directed Mutagenesis Using Ml3-Derived vectors: An Efficient and General Proceduře for the Production of Point Mutation in any Fragment of dna“, v podstatě jak je uváděna v Yuckenberg et al., shora.

Oligonukleotidy byly připraveny s použitím DNA syntetizátoru 380B (Applied Biosystems, lne.) Reakční produkty mutagenesy byly transformovány do Escherichia coli kmene MM294 (American Type culture Collection 33625). Všechny mutace byly potvrzeny sekvenováním DNA a isolovaná dna byla transformována k expresi do kmene Bacillus subtilis PG632 (Saunders et al., „Optimazation of the Signál-Sequence cleavage Site for Secretion from Bacillus subtilis of a 34-amino acid Fragment of Human Parathyroid Hormone“, Gene sv. 102, str. 277-282 (1991) a Ynang et al., „Cloning of the Neutra! Protease Gene of Bacillus subtilis and the Use of the Cloned Gene to Create an in 1/7 tro-Der i ved Deletion Mutation“, Journal of

Bacteriology, sv. 160, str. 15-24 (1984). Předběžné určení aktivity variantu se stanoví schopností buněk PG623 transformovaných mutantním plasmidem hydrolyzovat kasein.

Fermentace je jak následuje: Buňky Bacillus subtilis (PG623) obsahující variant, jenž je předmětem zájmu, se nechají růst do střední logaritmické fáze v jednom litru LB půdy obsahující 10 g/1 glukosy a jsou dány jako inokulum do fermentoru Biostat C (Braun Biotech, lne., Allentown, PA) do celkového objemu 9 litrů. Fermentační médium obsahuje kvasníčný extrakt, hydrolyzát kaseinu, rozpustný částečně hydrolyzovaný škrob (Maltrin M-250), činidlo proti pěnění, pufry, a stopové minerály (viz „Biology of Bacilli:

Applications to Industry“, Doi, R. H. a M. McGloghlin, ed. (1992)). Půda je během fermentace držena na stálém pH 7,5. K antibiotické selekci mutagenisovaného plasmidu je přidán kanamycin (50 pg/ml). Buňky se nechají růst po 18 hodin při 37 °C k k hodnotě A₆₀₀ asi 60 a produkt se sklidí.

Fermentační půda se bere k získání čistého variantu do následujících kroků: z půdy se odstraní buňky Bacillus subtilis tangenciálním tokem proti membráně s póry 0,16 pm.

- 51 • · « · · · · · · • · · · · · » * · ' • · · · · · » β · » ♦ • · · « · ·····«« · * «··· · ♦ «· 4 ·» · · · ·

Půda prostá buněk je pak zkoncentrována ult rafii trací s membráno o hraně molekulové hmotnosti 8000. Hodnota pH je nastavena na 5,5 koncentrovaným MES pufrem (kyselina 2-(Nmorfolino)ethansulfonová). Variant je dále purifikován katexovou chromatografií S-sepharosou a elucí gradienty Nad. (Viz Scopes R. K., „Protein Purification Principles and Practice“, springer-verlag, New York (1984)).

Ke stanovení koncentrace aktivního variantu ve frakcích sebraných při gradientově eluci se použije pNA test (DelMar et al., Analyticaf Biochemistry, sv. 99, str. 316-320 (1979)). Tento test měří rychlost, s níž je uvolňován p-nitroanilin, když daný variant hydrolyzuje rozpustný syntetický substrát sukci nyl-alani n-alani n-proli n-fenylalani n-p-ni troani1 i n (sAAPF-pNA). Rychlost tvorby žlutého zabarvení z hydrolyzační reakce se měří při 410 nm na spektrofotometru a je úměrná koncentraci aktivního enzymu. Navíc se ke stanovení celkové koncentrace bílkoviny používá měření absorbance při 280 nm. Poměr aktivní enzym/celková bílkovina udává čistotu variantu a používá se k identifikaci frakcí, jež mají být spojeny do zásobního roztoku.

Aby se předešlo autolýze variantu během skladování, ke spojeným frakcím získaným z chromatografické kolony se přidá stejný objem propylenglykolu. Po dokončení purifikačního postupu se ověří čistota zásobního roztoku variantu pomocí SDS-PAGE (gelové elektroforesy s dodecylsulfátem na polyakrylamidovém gelu) a absolutní koncentrace enzymu se stanoví metodou titrace aktivního místa s použitím trypsinového inhibitoru typu Il-T:krůtího vaječného bil ku (Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri).

Při přípravě k použití je zásobní roztok enzymu eluován přes kolonu Sephadex-G25 (Pharmacia, Piscataway, New Jersey) s exklusí podle velikosti k odstranění propylenglykolu a výměně pufru. Pufr MES ze zásobního roztoku enzymu je vyměněn za 0,1 M tris pufr (tris(hydroxymethyl-aminomethan) obsahující 0,01 M cacl₂ a pH je nastaveno na 8,6 pomocí HCl. Všechny experimenty se provádějí při pH 8,6 v tris pufru za termostatování na 25 °C.

« · « 9

- 52 9 9 9

99 ·9

9 9 9 · *

9 9 9 9 ·

9 9 9 9 9 9 » ·

Analytické metody

Varianty mohou být testovány na enzymatickou aktivitu a imunitní nebo alergenickou odezvu s použitím následujících metod, jež jsou obě známé zběhlému v oboru. Alternativně lze použít jiné metody v oboru dobře známé.

Aktivita variantu

Proteasová aktivita variantu podle vynálezu může být testována způsoby, jež jsou v oboru dobře známy. Dva takovéto způsoby jsou načrtnuty níže:

Metoda aktivity k vločkám kůže

S použitím pásky Scotch® #375OG se z nohou osoby strhávají opakovaně vločky lidské kůže dokud nemá páska od vloček v podstatě kalný vzhled. Páska je pak rozřezána na čtverečky 2,5 cm x 2,5 cm a odložena stranou. Do Petři ho misek rozměrů 10 mm x 35 mm se přidají 2 ml roztoku 0,75 mg/ml kontrolního enzymu (například subtilisinu bnp') nebo variantu k testování v pufru 0,01 M KH₂PO₄ , pH 5,5. K tomuto roztoku se přidá 1 ml 2,5 %-ního laurátu sodného, pH 8,6. Roztok se jemně míchá na platformě třepačky. Předem připravené čtverečky pásky se na 10 minut namočí do tohoto roztoku (nahoru stranou s vločkami) za pokračujícího jemného míchání, čtvereček pásky se pak jemně promyje ve vodovodní vodě po patnáct vteřin. Do čisté Petři ho misky se napipetuje barvivo Stevenel Blue stain (3 ml, komerčně dostupné od Sigma Chemical Co., St. Louis, MO). Promytý čtvereček pásky se na tři minuty umístí do barviva (nahoru stranou s vločkami) za jemného míchání. Čtvereček pásky se vyjme z barviva a promyje postupně ve dvou kádinkách s 300 ml destilované vody, vždy po patnácti vteřinách, čtvereček pásky se nechá uschnou na vzduchu. Visuálně nebo pomocí chromametru se porovnají intensity zabarvení mezi čtverečkem pásky získaného z kontrolního enzymu a čtverečkem pásky získaného z variantu. Když vzhledem ke kontrolnímu enzymovému čtverečku pásky vykazuje čtvereček • * • » pásky variantu menši intensitu zabarvení, ukazuje to na variant, jež má vyšší aktivitu.

Metoda pro aktivitu se zabarveným kolagenem

Smísí se 50 ml 0,1 M tris pufru (tri s(hydroxymethy!aminomethanu) obsahujícího 0,01 M CaCl₂ o pH 8,6 a 0,5 g azocollu (kolagen impregnovaný azobarvivem, komerčně dostupný od sigma Chemical Co., St. Louis, MO). Směs se inkubuje při 25 °C za jemného míchání na platformě třepačky. Dva mililitry této směsi se zfiltrují přes 0,2 mikronový filtr na injekční stříkačce a absorbance této směsi se odečte jako nula na spektrofotometru při 520 nm. K zbývajícím 48 ml směsi tris / azocoll se přidá 1 ppm buď kontrolního enzymu (například subtilisinu BNP') anebo variantu k testování. Každé dvě minuty po celkem 10 minut se zfiltrují přes 0,2 mikronový filtr na injekční stříkačce 2 ml roztoku obsahujícího kontrolu / variant. Pro každý vzorek se okamžitě odečte absorbance při 520 nm. výsledky se vynesou proti času. Směrnice kontroly a testovaného variantu ukazují relativní aktivity vzorků. Strmější směrnice ukazuje na vyšší aktivitu. Aktivita testovaného variantu (směrnice) může být vyjádřena jako procento aktivity (směrnice) kontroly.

Myší intranasální test na imunogenitu imunogenní potenciál variantů serinové proteasy podle vynálezu může být stanoven způsobem známým v oboru jako myší intranasální test na imunogenitu, jak je presentován zde níže. Tento test je podobný testu popsanému v Robinson et al., „Spéci fic Antibody Responses to Subtilisin Carlsberg (Alcalase) in Míce: Development of intranasal Exposure Model“, Fundamental and Applied Toxicology, sv. 34, str. 15-24 (1996) a Robinson et al., „Use of the Mouše intranasal Test (MINT) to Determine the Allergenic Potency of Detergent Enzymes: Comparison to the Guinea Pig Intratracheal (GPIT) Test“, • · «4 ·9 φ 44 44 ♦ 4 4 444 4*4*

444 444· 4 4 » * 4 ♦ · 4 4 4444 444 4

Toxicological Science, sv. 43, str. 39-46 (1998), přičemž oba testy lze použít místo testu nečrtnutého níže.

Pro test se použijí samice myší BDFl (Charles River Laboratories, Portage, MI) vážící od asi 18 do asi 20 g. Myši jsou jeden týden před dávkováním v karanténě. Myši jsou chovány v klecích s podestýlkou dřevité vlny v místnostech s řízenou vlhkostí (30 - 70 %), teplotou (20 - 25 °C) a 12-ti hodinovým cyklem světla a tmy. Myši byly krmeny myším krmením Purina® (Purina Mills, Richmond, IN) a vodou ad Tibidum.

Potenciální antigen určený k testování (buď subtilisin BNP' jako positivní kontrola, nebo variant podle vynálezu) je dávkován skupině pěti myší. Před dávkováním jsou všechny myši anestetizovány intraperitonální (i.p.) injekcí směsi Ketasetu (88,8 mg/kg) a Rompunu (6,67 mg/kg). Anestetizovaná zvířata jsou držena v dlani, dolu hřbetem, a dávkována itranasálně 5 ml proteasy v pufrovém roztoku (0,01 M kh₂po₄ , pH 5,5). i když každá skupina dostává stejnou dávku, lze testovat různá dávkování. Dávkovači roztoky se jemně podávají na vnější stranu obou nozder a jsou myší inhalovány. Dávkování se opakuje ve dnech 3, 10, 17 a 24.

vzorky sér se odebírají v den 29. Enzym-specifické protilátky igGl se v myším séru měří metodou ELIS se zachycením antigenu. imunogenita variantu může být porovnána proti imunogenitě subtilisinu BNP' s použitím standardních hodnot ED₅₀.

Prostředky podle vynálezu varianty mohou být použity v čistících prostředcích včetně, ale bez omezení, pracích prostředků, prostředků k čištění pevných povrchů, jemných čistících prostředků zahrnujících prostředky k mytí nádobí a detergenční prostředky do myček nádobí.

Čistící prostředky zde obsahují účinné množství jednoho nebo více variantů podle vynálezu a nosič čistícího prostředku.

- 55 Jak se zde používá, „účinné množství variantu“, nebo podobně, odkazuje na množství variantu potřebné k dosažení proteolytické aktivity, jež je zapotřebí v konkrétním čistícím prostředku. Takováto účinná množství jsou snadno určena osobou s obyčejnou zběhlostí v oboru a jsou založena na mnohých faktorech, jako je konkrétní použitý variant, čistící aplikace, konkrétní složení čistícího prostředku, a na tom, zda je žádoucí kapalný nebo suchý prostředek (např. granulární nebo ve formě kostky), a podobně, s výhodou obsahuje čistící prostředek od asi 0,0001 % do asi 10 %, výhodněji od asi 0,001 do asi 1 % a nejvýhodněji od asi 0,01 % do asi 0,1 % jednoho nebo více variantů podle vynálezu. Několik příkladů různých čistících prostředků, u nichž lze varianty používat, je rozebráno podrobněji níže.

Navíc k variantům podle vynálezu obsahují čistící prostředky nosič čistícího prostředku, jenž obsahuje jeden nebo více materiálů čistícího prostředku, jež jsou kompatibilní s daným variantem, výraz „materiál čistícího prostředku“ jak se zde používá, znamená jakýkoli materiál vybraný pro konkrétní typ žádoucího čistícího prostředku, a pro danou formu produktu (např. kapalnou, granulární, kostku, sprej, tyčinku, pastu, gel), přičemž materiály jsou rovněž kompatibilní s variantem použitým v daném prostředku. Konkrétní výběr materiálů čistícího prostředku se snadnou učiní uvážením materiálu, jenž má být čištěn, a žádoucí formy prostředku pro čistící podmínky v průběhu použití. Výraz „kompatibilní“ jak se zde používá, znamená materiály čistícího prostředku, jež nesnižují proteolytickou aktivitu variantu do té míry, jež by činila variant neúčinným oproti tomu jak je žádoucí v normálních situacích používání. Příklady konkrétních materiálů čistících prostředků budou zde uvedeny podrobně později.

Varianty podle vynálezu detergentových prostředků, kde dobrá čistící aktivita. Takto s různými konvenčními složkami k poskytnutí plně formulovaných čistidel pevných povrchů, prostředků k mytí nádobí, prostředků k praní tkaní a podobně. Takovéto prostředky mohou být použity v řadě vysoké pěnění a varianty použity mohou být je žádoucí mohou být

- 56 ·· «

φ φ ·φφφ » · ·

formulovány jako „koncentrované“ detergenty, které mají tak vysoký obsah povrchově aktivních látek, jako je až od asi 30 % do asi 60 %, podle hmotnosti.

Čistící prostředky mohou případně, a s výhodou, obsahovat různé povrchově aktivní látky (t j. anionické, neionické nebo zwitterionické povrchově aktivní látky). Takovéto povrchově aktivní látky jsou typicky přítomné v hladinách od asi 5 % do asi 35 % prostředku.

Neomezující příklady povrchově aktivních látek zde užitečných zahrnují konvenční C_u-C₁₈ alkyl benzensulfonáty a primární a randomní alkyl sul fáty, C₁₀-C₁₈ sekundární (2,3) alkyl sul fáty o vzorcích CH₃(CH₂)_X(CHOSO₃)M⁺)CH₃ a

CH₃(CH₂)_X(CHOSO₃'M⁺)CH₂CH₃ kde x a y+1 jsou celá čísla přinejmenším asi 7, s výhodou přinejmenším asi 9, a M je kati on pro rozpustnost ve vodě, obzvláště sodík, c₁₀-c₁₈alkylalkoxysul fáty (obzvláště EO 1-5 EO 1-5 ethoxysulfáty), C₁₀-C₁₈ alkyl alkoxy karboxyláty (obzvláště EO 1-5 ethoxykarboxyláty), C₁₀-C₁₈ alkylpolyglykosidy a jejich odpovídající sulfatované polyglykosidy, C₁₂-C₁₈ a-sulfonované estery mastných kyselin, C₁₂-C₁₈ alkyl a alkyl fenol alkoxyláty (obzvláště ethoxyláty a směsné ethoxy/propoxy), C₁₂-C₁₈ betainy a sulfobetainy („sultainy“), C₁₀-C₁₈ aaminoxidy a podobně.

Výhodné zde jsou alkoxysulfáty (AES) a alkylalkoxykarboxyláty (AEC). Použití takových povrchově aktivních látek v kombinaci s povrchově aktivním aminoxidem a/nebo betainem nebo sultainem je, v závislosti na přání formulátora, rovněž výhodné. Jiné užitečné konvenční povrchově aktivní látky jsou uváděny ve standardních textech. Obzvláště užitečné povrchově aktivní látky zahrnují C₁₀-C₁₈ N-methylglukamidy zveřejněné v US patentu čís. 5 194 639, Connor et al., vydaném 16. března 1993.

Do detergentních čistících prostředků zde může být zahrnuta velká řada jiných složek včetně, například, jiných aktivních složek, nosičů, hydrotropů, pomocných látek zpracování, barviv nebo pigmentů, a rozpouštědel pro kapalné formulace. Když je žádoucí jakýkoli další přírůstek pěnění, mohou být do prostředku zařazeny látky podporující pěnění, jako jsou C₁₀-C₁₆ alko!amidy, typicky v hladinách asi 1 % až 10 %. Typickou třídu takovýchto činidel podporujících pěnění • * • ·

- 57 představují C₁₀-C₁₄ monoethanol- a diethanolamidy. Použití takovýchto činidel podporujících pěnění s vysoce pěnícími přídatnými povrchově aktivními látkami, jako jsou aminoxidy, betainy a sultainy, může rovněž být výhodné. Pokud je to žádoucí, k poskytnutí dalšího pěnění mohou být přidány rozpustné hořečnaté sole jako MgCl₂ nebo MgSO₄ , typicky v hladinách od asi 0,1 % do asi 2 %.

Kapalné detergentové prostředky mohou zde jako nosiče obsahovat vodu a jiná rozpouštědla, vhodné jsou primární a sekundární alkoholy o nízké molekulové hmotnosti, jejichž příklady jsou methanol, ethanol, propanol a /so-propanol. Pro sol ubil i začni povrchově aktivní látky jsou výhodné monohydroxylové alkoholy, ale lze rovněž použít polyoly, jako jsou ty, co obsahují od asi dvou do asi šesti uhlíkových atomů a od asi dvou do asi šesti hydroxylových skupin (např.

1,3-propandiol, ethylenglykol, glycerin a 1,2-propandiol). Prostředek může obsahovat od asi 5 % do asi 90 %, typicky od asi 10 % do asi 50 % takovýchto nosičů.

Detergentové prostředky zde budou s výhodou formulovány tak, že během používání ve vodných čistících procesech bude mycí voda mít pH mezi asi 6,8 a asi 11. Hotové produkty jsou typicky formulovány v tomto rozmezí. Techniky pro řízení pH při používání k těmto doporučovaným hladinám zahrnují například použití pufrů, alkálií a kyselin. Takovéto techniky jsou zběhlým v oboru dobře známé.

Když se formulují prostředky k čištění pevných povrchů a prostředky k čištění tkanin podle vynálezu, může si formulátor přát použít různé výstavbové substance v hladinách od asi 5 % do asi 50 % podle hmotnosti. Typické výstavbové substance zahrnují 1-10 mikronové zeolity, polykarboxyláty jako jsou citrát a oxydisukcináty, vrstvené silikáty, fosfáty a podobně. Jiné konvenční výstavbové substance jsou uváděny v seznamech standardních předpisů.

Podobně si může formulátor přát použít v takovýchto prostředcích různé další enzymy, jako jsou celulasy, lipasy, amylasy a proteasy, typicky v hladinách od asi 0,001 % do asi 1 % podle hmotnosti, v oboru pracích detergentů jsou dobře známé odpuzující enzymy a enzymy k péči o tkaniny.

- 58 • · «♦ » · · • · ·· ♦ · « • · « t · · · * · · • · · ·· v takovýchto prostředcích mohou být použity různé bělící sloučeniny, jako jsou peruhličitany, perboritany a podobně, typicky v hladinách od asi 1 % do asi 15 % podle hmotnosti. Když je to žádoucí, takovéto prostředky mohou rovněž obsahovat aktivátory bělení, jako je tetraacetyldiamin, nonanoyloxybenzen sulfonát a podobně, jež jsou rovněž v oboru známé. Hladiny k použití jsou typicky v rozsahu od asi 0,1 % do asi 10 % podle hmotnosti.

v takovýchto prostředcích mohou být použita činidla k uvolňování znečištění, obzvláště typu anionických oligoesterů, chelatační činidla, obzvláště aminofosfonáty a ethylendiamindisukcináty, činidla k uvolňování znečištění hlínou, obzvláště ethoxylovaný tetraethylenpentamin, dispergační činidla, obzvláště polyakryláty a polyaspartáty, činidla ke zvýšení jasu, obzvláště anionická činidla ke zvýšení jasu, čindila k potlačení pěnění, obzvláště silikony a sekundární alkoholy, změkčovače tkanin, obzvláště smektitové hlinky, a podobně, v hladinách typicky v rozsahu od asi 1 % do asi 35 % podle hmotnosti. Standardní seznamy předpisů a publikované patenty obsahují mnohé podrobné popisy takovýchto konvenčních materiálů.

v čistících prostředcích mohou být použity rovněž stabilizátory enzymů. Takovéto stabilizátory enzymů zahrnují propylenglykol (s výhodou od asi 1 % do asi 10 %), mravenčan sodný (s výhodou od asi 0,1 % do asi 1 %) a mravenčan vápenatý (s výhodou od asi 0,1 % do asi 1 %).

Varianty podle vynálezu jsou užitečné v prostředcích k čištění pevných povrchů. Jak se zde používá, „prostředek k čištění pevných povrchů“ odkazuje na kapalný nebo granulární detergentové prostředky k čištění pevných povrchů, jako jsou podlahy, zdi, koupelnové kachlíky a podobně. Prostředky k čištění pevných povrchů podle vynálezu obsahují účinné množství jednoho nebo více variantů podle vynálezu, s výhodou od asi 0,001 % do asi 10 %, výhodněji od asi 0,01 % do asi 5 %, ještě výhodněji od asi 0,05 % do asi 1 %, bráno na hmotnost prostředku. Navíc k obsahu jednoho nebo více variantů obsahují takovéto prostředky k čištění pevných povrchů typicky povrchově aktivní látku a ve vodě rozpustnou

- 59 • 0 00 0 0 0

0 00 0 0 0 ·

0 0

0 0 0 0 0

0 0 0 0

0 0 0

00000

0 0

0· 0

0* • 0 0 0

0 0

0 0 0 0 0 0 ft 0000 sekvestrační výstavbovou substanci. v určitých specialisovaných výrobcích, jako jsou sprejové čističe oken, povrchově aktivní látka však není někdy používána, protože může zanechávat na povrchu skla nános nebo šmouhy.

Složka povrchově aktivní látky, pokud je přítomna, může zde tvořit tak málo, jako je 0,1 % prostředků, ale typicky budou prostředky obsahovat od asi 0,25 % do asi 10 %, výhodněji od asi 1 % do asi 5 % povrchově aktivní látky.

Typicky budou prostředky obsahovat od asi 0,5 % do asi 50 %, detergentové výstavbové substance, výhodněji od asi 1 % do asi 10 %.

PH má být s výhodou v rozsahu od asi 7 do asi 12. Pokud je potřebné nastavení, lze použít konvenční činidla k nastavení pH, jako hydroxid sodný, uhličitan sodný a kyselina chlorovodíková.

v prostředcích mohou být zařazena rozpouštědla, užitečná rozpouštědla zahrnují, ale bez omezení, glykolethery jako je diethylenglykol monohexylether, diethylenglykol monobutylether, ethylenglykol monobutylether, ethylenglykol monohexylether, propylenglykol monobutylether, dipropylenglykol monobutylether, a dioly, jako je 2,2,4trimethyl-1,3-pentandiol a 2-ethyl-l,3-hexandiol. Když se použijí, takováto rozpouštědla jsou typicky přítomna v hladinách od asi 0,5 % do asi 15 %, výhodněji od asi 3 % do asi 11 %.

Navíc mohou být v prostředcích použity vysoce těkavá rozpouštědla jako ťso-propanol nebo ethanol pro umožnění rychlejšího odpařování prostředků z povrchů, když povrch není omyt po aplikaci prostředku na povrch „plnou silou“. Když se použijí, těkavá rozpouštědla jsou typicky v prostředku přítomna v hladinách od asi 2 % do asi 12 %.

- 60 ·» • 99 99 • · 9 · 9 9 · 9 9 9

9*9 9··· 9 9 ♦ * 9 9 9 9999 999 4

9 9 99 9 994

99«· 94 9· 9 9* 9949

Příklady provedení vynálezu

Příklady 1 až 6

Kapalné prostředky k čištění pevných povrchů

	Př. 1	Př. 2	Př. 3	Př. 4	Př. 5	Př. 6
variant n109a	0,05 %	0,50 %	0,02 %	0,03 %	0,30 %	0,05 %
edta	-	-	2,90 %	2,90 %	-	-
Citrát sodný	-	-	-	-	2,90 %	2,90 %
NaCi2 alkyl benzen sulfonát	1,95 %	““	1,95 %		1,95 %
NaCi2 alkyl sul fát	-	2,20 %	-	2,20 %	-	2,20 %
NaCi2 (ethoxy) sulfát		2,20 %	—	2,20 %	—	2,20 %
C12 dimethylamin- oxi a	·“	0,50 %		0,50 %		0,50 %
Kumen sulfonát sodný	1,30 %		1,30 %		1,30 %	·“
Hexylkaroitol	6,30 %	6,30 %	6,30 %	6,30 %	6,30 %	6,30 %
Voda	90,4 %	88,3 %	87,53 %	85,87 %	87,25 %	85,85 %

všechny formulace jsou nastaveny na pH 7.

Příklady 7 až 10

Kapalné detergenty k mytí nádobí

V jiném provedení vynálezu obsahují jeden nebo více variantů prostředky k mytí nádobí. Jak se zde používá, „prostředek k mytí nádobí“ odkazuje na veškeré formy prostředků k čištění nádobí včetně, ale bez omezení, granulárních a kapalných forem. Prostředky k mytí nádobí podle vynálezu jsou vysvětleny následujícími příklady.

• 4

- 61 ·· · • · 4 4«

44·« 4 444

4«4 44«·

4 4 4 4

	př. 7	Př. 8	Př. 9	Př. 10
Variant I115A	0,05 %	0,50 %	0,02 %	0,40 %
C12-C14 N-methylglukosamid	0,90 %	0,90 %	0,90 %	0,90 %
C12 ethoxy(l) sulfát	12,0 %	12,0 %	12,0 %	12,0 %
Kyselina 2-methylundekanová	4,50 %	4,50 %	4,50 %	4,50 %
C12 etoxy(2)karboxylát	4,50 %	4,50 %	4,50 %	4,50 %
C12 alkoholethoxylát(4)	3,00 %	3,00 %	3,00 %	3,00 %
C12 aminoxid	3,00 %	3,00 %	3,00 %	3,00 %
Kumen sulfonát sodný	2,00 %	2,00 %	2,00 %	2,00 %
Ethanol	4,00 %	4,00 %	4,00 %	4,00 %
Mg²⁺ (jako MgCb)	0,20 %	0,20 %	0,20 %	0,20 %
ca²⁺ (jako Cách)	0,40 %	0,40 %	0,40 %	“0,40 %
voda	65,45 %	65 %	65,48 %	65,1 %

všechny formulace jsou nastaveny na pH 7.

Příklady 11 až 13

Kapalné prostředky k čištění tkanin

Kapalné prostředky k čištění tkanin podle vynálezu jsou vysvětleny následujícími příklady.

	Př. 11	Př. 12	Př. 13
Variant A116V	0,05 %	0,03 %	0,30 %
C12-C14 alkyl sul fát sodný	20,0 %	20,0 %	20,0 %
Kyselina 2-butyloktanová	5,0 %	5,0 %	5,0 %
Citrát sodný	1,0 %	1,0 %	1,0 %
C10 alkoholethoxylát(3)	13,0 %	13,0 %	13,0 %
Monoethanolamin	2,50 %	2,50 %	2,50 %
voda/propylenglykol/ethanol (100:1:1)	58,45 %	58,47 %	58,20 %

- 62 • · · ·« *· • · « » < · ♦ · · • · · · · 1 »····»· · · • · « · · • ·· · · * ·

Příklady 14 až 27

Prostředky péče o tělo

Varianty podle vynálezu jsou obzvlášť vhodné pro použití v prostředcích péče o tělo, jako jsou například depositní a smývací vlasové kondicionéry, šampony, depositní a smývací áprostředky proti akné, pleťové obličejová mléka a kondicionéry, sprchové gely, mýdla, pěnivé a nepěnivé prostředky k čištění obličeje, kosmetika, vody a zvlhčovače rukou, obličeje a těla, depositní zvlhčovače obličeje, kosmetické a čistící tampony, prostředky péče o oči a prostředky péče o kontaktní čočky. Prostředky péče o tělo zde obsahují jeden nebo více variantů podle vynálezu a nosič prostředku péče o tělo.

Pro vysvětlení: varianty podle vynálezu jsou vhodné k zařazení do prostředků popsaných v následujících odkazech. US patent čís. 5 641 479, Linares et al., vydaný 24. června 1997 (prostředky k čištění pokožky); US patent čís. 5 559 549, wivell et al., vydaný 4. února 1997 (prostředky k čištění pokožky); US patent čís. 5 585 104, Ha et al., vydaný 17. prosince 1996 (prostředky k čištění pokožky); US patent čís. 5 540 852, Kefauver et al., vydaný 30. července 1996 (prostředky k čištění pokožky); US patent čís. 5 510 050, Dunbar et al., vydaný 23. dubna 1996 (prostředky k čištění pokožky); US patent čís. 5 612 324, Guang Lín et al., vydaný

18. března 1997 (prostředky proti akné); US patent čís. 5 587 176, Warren et al., vydaný 24. prosince 1996 (prostředky proti akné); US patent čís. 5 549 888, venkateswaran et al., vydaný 27. srpna 1996 (prostředky proti akné); US patent čís. 5 470 884, Corless et al., vydaný 28. listopadu 1996 (prostředky proti akné); US patent čís. 5 650 384, Gordon et al., vydaný 22. července 1997 (sprchové gely); US patent čís. 5 650 384, Moore et al., vydaný 4. března 1997 (sprchové gely); US patent čís. 5 624 666, coffindaffer et al., vydaný 29. dubna 1997 (vlasové kondicionéry a šampony); US patent čís. 5 618 524, Bol lích et al., vydaný 8. dubna 1997 (vlasové kondicionéry a šampony); US patent čís. 5 612 301, Inman et al., vydaný 18. března 1997 (vlasové kondicionéry a šampony);

- 63 4 4 4 4 4 4 4

4 4 4 4 4 4

4444444 4 4

4 4 4 4 4

4 44 4 4 4 4

US patent čís. 5 573 709, Wells et al., vydaný 12. listopadu 1996 (vlasové kondicionéry a šampony); US patent čís. 5 482 703, Pings, vydaný 9. ledna 1996 (vlasové kondicionéry a šampony); US patent čís. Re. 34 584, Grote et al., znovu vydaný 12. dubna 1994 (vlasové kondicionéry a šampony); US patent čís. 5 641 493, Dáte et al., vydaný 24. června 1997 (vlasové kondicionéry a šampony); US patent čís. 5 605 894, Blank et al., vydaný 25. února 1997 (kosmetika); US patent čís. 5 585 090, Yoshioka et al., vydaný 17. prosince 1996 (kosmetika); US patent čís. 4 939 179, Cheney et al., vydaný

3. července 1990 (pleťové vody na ruce, obličej a tělo); US patent čís. 5 607 980, McAtee et al., vydaný 4. března 1997 (pleťové vody na ruce, obličej a tělo); US patent čís. 4 045 364, Richter et al., vydaný 30. srpna 1977 (kosmetické a čistící tampony); evropská patentová přihláška EP 0 619 074, Touchet et al., publikovaná 12. října 1994 (kosmetické a čistící tampony); US patent čís. 4 975 217, Brown-Skrobot et al., vydaný 4. prosince 1990 (kosmetické a čistící tampony); US patent čís. 5 096 700, Seibel, vydaný 17. března 1992 (prostředky ústní hygieny); US patent čís. 5 028 414, Sampathkumar, vydaný 2. července 1991 (prostředky ústní hygieny); US patent čís. 5 028 415, Benedict et al. , vydaný

2. července 1991 (prostředky ústní hygieny); US patent čís. 4 863 627, Davies et al., vydaný 5. září 1989 (roztoky k čištění kontaktních čoček); US patent čís. Re. 32 672, Huth et al., vydaný 24. května 1988 (roztoky k čištění kontaktních čoček); a US patent čís. 4 609 493, Davies et al., vydaný

2. září 1986 (roztoky k čištění kontaktních čoček).

K dalšímu vysvětlení prostředků ústní hygieny podle vynálezu: Do prostředků je zařazeno farmaceuticky přijatelné množství jednoho nebo více variantů podle vynálezu, jež jsou užitečné k odstraňování skvrn bílkovinného charakteru ze zubů nebo zubních náhrad. Jak se zde používá, „prostředky ústní hygieny“ odkazují na prostředky k čištění zubních náhrad, zubní pasty, zubní gely, zubní prášky, ústní vody, ústní spreje, ústní gely, žvýkačky, pastilky, parfémované ubrousky, tablety, biogely, profylaktické pasty, roztoky k ošetření zubů a podobně. Prostředky ústní hygieny obsahují s výhodou od asi

- 64 4« 44

I · 4 • · 44 ( · «φ Φ4 • 4 4 4 4 «

4 4 «4 * «444444 · 4

4 4 4 4 k 4 44 4444 zde používá, médi kamenty a

0,0001 % do asi 20 % jednoho nebo více variantů podle vynálezu, výhodněji od 0,001 % do asi 10 %, ještě výhodněji od asi 0,01 % do asi 5 %, podle hmotnosti prostředku, a farmaceuticky přijatelný nosič. Jak se „farmaceuticky přijatelný“ znamená, že léky, inertní složky, jež výraz popisuje, jsou vhodné pro použití v kontaktu s tkáněmi lidí nebo nižších živočichů bez nevhodné toxicity, nekompatibility, nestability, podráždění, alergické odezvy a podobně, s přiměřeným rozumným poměrem prospěchu a rizika.

Typicky budou farmaceuticky přijatelné orální čistící nosičové složky orálních čistících prostředků prostředku ústní hygieny tvořit obecně od asi 50 % do asi 99,99 %, výhodně od asi 65 % do asi 99,99 %, výhodněji od asi 65 % do asi 99 % hmotnosti prostředku.

Farmaceuticky přijatelné nosičové složky a případné další složky, jež mohou být obsaženy v prostředcích ústní hygieny podle vynálezu jsou dobře známé zběhlým v oboru, velká řada typů prostředků, nosičových složek a případných dalších složek je zveřejněna v odkazech citovaných zde shora.

V jiném provedení vynálezu obsahují prostředky k čištění zubních náhrad, pro použití mimo ústní dutinu, jeden nebo více variantů podle vynálezu. Takovéto prostředky čištění chrupu obsahují účinné množství jednoho nebo více variantů podle vynálezu, s výhodou od asi 0,0001 % do asi 50 % jednoho nebo více variantů podle vynálezu, výhodněji od 0,001 % do asi 35 %, ještě výhodněji od asi 0,01 % do asi 20 %, podle hmotnosti prostředku, a nosič čištění chrupu. Různé formáty prostředků k čištění chrupu, jako jsou efervescentní tablety a podobně, jsou v oboru dobře známé (viz např. US patent čís. 5 055 305, Young), a jsou obecně vhodné pro zařazení jednoho nebo více variantů k odstraňování skvrn bílkovinného charakteru z chrupu.

V jiném provedení vynálezu obsahují prostředky k čištění kontaktních čoček jeden nebo více variantů podle vynálezu. Takovéto prostředky čištění kontaktních čoček obsahují účinné množství jednoho nebo více variantů podle vynálezu, s výhodou od asi 0,01 % do asi 50 % jednoho nebo více variantů,

- 65 • * · • ·«« • · · • » · • ·· · 99 *

» · · • · · · • Λ * H·* • · · ·· 9 *· ·«

9 9 9

9 * « 9 9 9

9 9 »« 9999 výhodněji od 0,01 % do asi 20 %, ještě výhodněji od asi 1 % do asi 5 %, podle hmotnosti prostředku, a nosič čištění kontaktních čoček. Různé formáty prostředků k čištění konaktních čoček, jako jsou tablety, kapaliny a podobně, jsou v oboru dobře známé a jsou obecně vhodné pro zařazení jednoho nebo více variantů podle vynálezu k odstraňování skvrn bílkovinného charakteru z kontaktních čoček.

Provedení vynálezu jako čistících prostředků na kontaktní čočky je ilustrováno Příklady 14 - 17.

Roztok k čištění kontaktních čoček

	Př. 14	Př. 15	Př. 16	Př. 17
Variant M119A	0,01 %	0,5 %	0,1 %	2,0 %
Glukosa	50,0 %	50,0 %	50,0 %	50,0 %
Neionická povrchově aktivní látka (polyoxyethylen -	2,0 %	2,0 %	2,0 %	2,0 %
Aniiomcka povrchově aktivní látka (polyoxyethylen - alkyl fenylether thioester, sodná sůl)	1,0 %	1,0 %	1,0 %	1,0 %
Chlorid sodný	1,0 %	1,0 %	1,0 %	1,0 %
Borax	0,30 %	0,30 %	0,30 %	0,30 %
voda	45,69 %	45,20 %	45,60 %	43,70 %

- 66 Produkty k mytí těla

	Př. 18	Př. 19	Př. 20	Př. 21
Voda	62,62 %	65,72 %	57,72 %	62,62 %
Dvoj sodná sůl EDTA	0,2 %	0,2 %	0,2 %	“072 %
Glycerin	3,0 %	3,0 %	3,0 %	3,0 %
Polykvaternium 10	0,4 %	0,4 %	0,4 %	0,4 %
Lauretsulfát sodný	12,0 %	12,0 %	12,0 %	12,0 %
Kokamid MEA	2,8 %	2,8 %	2,8 %	2,8 %
Laurafoacetát sodný	6,0 %	6,0 %	6,0 %	6,0 %
Kyselina myristylová	1,6 %	1,6 %	1,6 %	1,6 %
siran horečnatý, heptahydrát	0,3 %	0,3 %	0,3 %	0,3 %
Tri hydroxysteari n	0,5 %	0,5 %	0,5 %	0,5 %
PEG-6 kaprylová / kapronové tnglyceridy	3,0 %		”·	-
Sacharosové polyestery kotonatové mastné kyseliny	3,0 %	-
sacharosové polyestery behenatové mastné kyseliny	3,0 %		4,0 %	—
vaselina	-	4,0 %	8,0 %
Minerální olej	-	-	-	6,0 %
DMDM hydantoin	0,08 %	0,08 %	0,08 %	0,08 %
Variant D120A	0,1 %	2,0 %	2,0 %	5,0 %
Kyselina citrónová	1,40 %	1,40 %	1,40 %	1,40 %

- 67 • ·

Produkty k mytí obličeje

	Př. 22	Př. 23	Př. 24	Př. 25
voda	62,62 %	65,17 %	68,47 %	68,72 %
Dvoj sodná sůl edta	0,1 %	0,1 %	0,1 %	0,1 %
Kyselina citrónová	-	—	1,4 %	1,4 %
Lauret-3 sulfát sodný	3,0 %	3,0 %	-	-
Lauret-4 karboxylát sodný	3,0 %	3,0 %	-	-
Laureth-12	1,0 %	1,2 %	-	-
Polykvaternium 10	-	-	0,4 %	0,4 %
Polykvaternium 25	0,3 %	0,3 %	—	-
Glycerin	3,0 %	3,0 %	3,0 %	3,0 %
Laurafoacetát sodný	-	-	6,0 %	6,0 %
Kyselina laurová	6,0 %	6,0 %	3,0 %	3,0 %
Kyselina myristylová	-	-	3,0 %	3,0 %
Síran horečnatý, heptahydrát	2,3 %	2,0 %	2,0 %	2,0 %
Triethanolamin	4,0 %	4,0 %	4,0 %	4,0 %
Tri hydroxysteari n	0,5 %	0,5 %	0,5 %	0,5 %
Sacharosové polyestery behenatové mastné kyseliny	2,0 %	2,0 %		—
sacharosové polyestery kotonatové mastné kyseliny	3,0 %	2,0 %		—
peg-6 kapry!ová / kapronové triglyceridy		—		2,0 %
vaselina	-	-	4,0 %	—
Minerální olej		-	-	2,0 %
Kokami dop ropylbetai n	2,0 %	3,0 %	1,8 %	1,8 %
Lu ryldi methyloxi d	1,0 %	1,2 %	1,2 %	1,2 %
Dex panthenol	1,0 %	0,25 %	0,25 %
DMDM Hydantoin	0,08 %	0,08 %	0,08 %	0,08 %
variant A114*	1,0 %	2,0 %	0,5 %	0,5 %
Parfém	0,2 %	0,2 %	0,2 %	0,2 %

- 68 • · · • · ··· ·

Prostředek ke zvlhčování pokožky, depositní

	Př. 26	Př. 27
Glycerin	5,0 %
Kyselina stearová	3,0 %	-
C_u.₁₃ isoparafin	2,0 %	-
Glykol stearát	1,5 %
Propylenglykol	-	3,0 %
Minerální olej	1,0 %	10,0 %
Sezamový olej	-	7,0 %
Vaselina	-	1,8 %
Triethanolamin	0,7 %	-
Cetylacetát	0,65 %	-
Glyceryl stearát	0,48 %	2,0 %
TEA stearát	-	2,5 %
Cetylalkohol	0,47 %	-
Lano!in alkohol	-	1,8 %
DEA-cetylfosfát	0,25 %	—
Methylparaben	0,2 %	0,2 %
Propulparaben	0,12 %	0,1 %
Carbomer 934	0,11 %	—
Dvoj sodná sůl EDTA	0,1 %	—
Variant N117A	0,1 %	0,5 %
voda	84,32 %	71,1 %

·· ·· • · · ♦

- 69 Příklad 28

Prostředek čistících tamponů

Propylenglykol	1,0 %
Lurylsulfát, sodná sůl	0,6 %
Kyselina jantarová	4,0 %
Jantaran sodný	3,2 %
Tri closan®	0,15 %
Variant 1122a	0,05 %
Voda	91,0 %

Prostředek shora se naimpregnuje do tkaného absorpčního tamponu z celu!osy a/nebo polyesteru v množství asi 250 % hmotnosti absorpčního tamponu.

• · . . · · > · · · · · .

» ······· · * »4 4 · · · • 4 4 44 4444

tím, že

- 70 - : :

« · 4 4 · ·

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Variant serinové proteasy, charakteristický řečený variant má aminokyselinovou sekvenci modifikovanou z aminokyselinové sekvence divokého typu, přičemž aminokyselinová sekvence divokého typu obsahuje první epitopovou oblast a druhou epitopovou oblast, a modifikovaná aminokyselinová sekvence obsahuje substituci substituující aminokyselinou přinejmenším v jedné nebo více posicích v jedné nebo více epitopových oblastech, kde

A) když substituce nastává v první epitopové oblasti v jedné nebo více z posic 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125 a 126, kde

1) když substituce nastává v posici 108, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;
2) když substituce nastává v posici 109, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Phe, Gly, His, Leu, Met, Pro, Gin, Trp a Tyr;
3) když substituce nastává v posici 110, substituující aminokyselina je vybrána ze

skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr; 4) když substituce nastává v posici 111,

substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

5) když substituce nastává v posici 112, substituující aminokyselina je vybrána ze v ·

- 71 • · • · · · • · · · · • · · · ·· ·· skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, val, Trp a Tyr;

6) když substituce nastává v posici 113, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val a Tyr;

7) když substituce nastává v posici 114, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

8) když substituce nastává v posici 115, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

9) když substituce nastává v posici 116, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Val, Trp a Tyr;

10) když substituce nastává v posici 117, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

11) když substituce nastává v posici 118, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Met, Pro, Gin, Arg, Thr, Trp a Tyr;

12) když substituce nastává v posici 119, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

13) když substituce nastává v posici 120, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

14) když substituce nastává v posici 121, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;

15) když substituce nastává v posici 122, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

16) když substituce nastává v posici 123, substituující aminokyselina je vybrána ze

skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, val, Trp a Tyr; 17) když substituce nastává v posici 124,

substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

18) když substituce nastává v posici 125, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr; a

19) když substituce nastává v posici 126, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr; a

- 73 • · · ·

B) když substituce nastává v druhé epitopové oblasti v jedné nebo více z posic 221, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245 a 246, kde

1) když substituce nastává v posici 221, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;

2) když substituce nastává v posici 223, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

3) když substituce nastává v posici 224, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;
4) když substituce nastává v posici 225, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Asn, Thr, Trp a Tyr;
5) když substituce nastává v posici 226, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;
6) když substituce nastává v posici 227, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;
7) když substituce nastává v posici 228, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly, • a

His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
8) když substituce nastává v posici 229, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;
9) když substituce nastává v posici 230, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
10) když substituce nastává v posici 231, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;
11) když substituce nastává v posici 232, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
12) když substituce nastává v posici 233, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
13) když substituce nastává v posici 234, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
14) když substituce nastává v posici 235, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

- 75 • · · · • · · ♦ » · ♦ · · · » · ······· · 9 • · 119 • · · · · · ·
15) když substituce nastává v posici 236, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;
16) když substituce nastává v posici 237, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
17) když substituce nastává v posici 238, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
18) když substituce nastává v posici 239, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
19) když substituce nastává v posici 240, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Leu, Met, Pro, Gin, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
20) když substituce nastává v posici 241, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr a val;
21) když substituce nastává v posici 242, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Val, Trp a Tyr;
22) když substituce nastává v posici 243, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,

- 76 4 4 44 > 4 4

4 4 44

44 4«

4 * · ’

4 4 <

Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
23) když substituce nastává v posici 244, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, val, Trp a Tyr;
24) když substituce nastává v posici 245, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr; a
25) když substituce nastává v posici 246, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Trp a Tyr.

2. Variant proteasy podobné subtilisinu, charakteristický tím, že řečený variant má aminokyselinovou sekvenci modifikovanou z aminokyselinové sekvence divokého typu, přičemž aminokyselinová sekvence divokého typu obsahuje první epitopovou oblast a druhou epitopovou oblast, a modifikovaná aminokyselinová sekvence obsahuje substituci substituující aminokyselinou přinejmenším v jedné nebo více posicích v jedné nebo více epitopových oblastech, kde

A) když substituce nastává v první epitopové oblasti v jedné nebo více z posic 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124 a 125, kde

1) když substituce nastává v posici 108, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

9· ··

-77 ·« • 9 ♦ • ··· »· 9 • 9 9

9 9 9 9 • · · · · 9

9 9 9

99 9

9 · · • · · • 99

99 99·9

2) když substituce nastává v posici 109, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;

3) když substituce nastává v posici 110, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

4) když substituce nastává v posici 111, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

5) když substituce nastává v posici 112, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

6) když substituce nastává v posici 113, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val a Tyr;

7) když substituce nastává v posici 114, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

8) když substituce nastává v posici 115, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

9) když substituce nastává v posici 116, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe,

- 78 • 4· ·· • · · · · · * « « ♦ · · ··»···* · · • · » · · • ·4 ·»··

Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

10) když substituce nastává v posici 117, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

11) když substituce nastává v posici 118, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

12) když substituce nastává v posici 119, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

13) když substituce nastává v posici 120, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

14) když substituce nastává v posici 121, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Pro, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;

15) když substituce nastává v posici 122, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

16) když substituce nastává v posici 123, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

·· 9

99 99 • 9 9 9

9 · *

9 · ·

9 · ·

99 99··

17) když substituce nastává v posici 124, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr; a

18) když substituce nastává v posici 125, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr.

b) když substituce nastává v druhé epitopové oblasti v jedné nebo více z posic 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245 a 246, kde

1) když substituce nastává v posici 221, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;

2) když substituce nastává v posici 222, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

3) když substituce nastává v posici 223, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

4) když substituce nastává v posici 224, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;

• · ·* ·

- 80 • · · • · ·♦ ♦ · • · • W · · · « ·· ·»··

5) když substituce nastává v posici 225, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

6) když substituce nastává v posici 226, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

7) když substituce nastává v posici 227, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;

8) když substituce nastává v posici 228, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

9) když substituce nastává v posici 229, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

10) když substituce nastává v posici 230, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

11) když substituce nastává v posici 231, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

12) když substituce nastává v posici 232, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe,

- 81 • ·

9 9 9 ·· ··*· • · ♦

Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

13) když substituce nastává v posici 233, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

14) když substituce nastává v posici 234, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

15) když substituce nastává v posici 235, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

16) když substituce nastává v posici 236, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;

17) když substituce nastává v posici 237, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

18) když substituce nastává v posici 238, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

19) když substituce nastává v posici 239, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

• ·

20) když substituce nastává v posici 240, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

21) když substituce nastává v posici 241, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

22) když substituce nastává v posici 242, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, val, Trp a Tyr;

23) když substituce nastává v posici 243, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

24) když substituce nastává v posici 244, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, pro, Gin, Arg, Ser, val, Trp a Tyr;

25) když substituce nastává v posici 245, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr; a
26) když substituce nastává v posici 246, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr.

- 83 «« • · 9

9 9··

9 9 9 9

9 9 9

9 9·· 9· r· 0

9 · · • 0 0 0

0 0 0000

0 0 0

00 »

00 00 • 0 0 ♦ • 0 »

0 0« *

0 0 0

00 0000

3. Variant proteasy podobné subtilisinu, charakteristický tím, že řečený variant má aminokyselinovou sekvenci modifikovanou z aminokyselinové sekvence divokého typu, přičemž aminokyselinová sekvence divokého typu obsahuje první epitopovou oblast, druhou epitopovou oblast a třetí epitopovou oblast, a modifikovaná aminokyselinová sekvence obsahuje substituci substituující aminokyselinou v jedné nebo více posicích ve dvou nebo více epitopových oblastech, kde

A) když substituce nastává v první epitopové oblasti, substituce nastává v jedné nebo více z posic 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124 a 125 kde

1) když substituce nastává v posici 108, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

2) když substituce nastává v posici 109, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Gly, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;

3) když substituce nastává v posici 110, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

4) když substituce nastává v posici 111, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

- 84 5) když substituce nastává v posici 112, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

6) když substituce nastává v posici 113, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val a Tyr;

7) když substituce nastává v posici 114, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

8) když substituce nastává v posici 115, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

9) když substituce nastává v posici 116, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

10) když substituce nastává v posici 117, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

11) když substituce nastává v posici 118, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

12) když substituce nastává v posici 119, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu,

- 85 Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

13) když substituce nastává v posici 120, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

14) když substituce nastává v posici 121, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Pro, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;

15) když substituce nastává v posici 122, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

16) když substituce nastává v posici 123, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

17) když substituce nastává v posici 124, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr; a

18) když substituce nastává v posici 125, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;

B) když substituce nastává v druhé epitopové oblasti, substituce nastává v jedné nebo více z posic 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231,

232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241,

242, 243, 244, 245 a 246, kde

1) když substituce nastává v posici 221, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;

2) když substituce nastává v posici 222, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Asn, Pro, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

3) když substituce nastává v posici 223, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

4) když substituce nastává v posici 224, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;

5) když substituce nastává v posici 225, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

6) když substituce nastává v posici 226, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

7) když substituce nastává v posici 227, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;

8) když substituce nastává v posici 228, substituující aminokyselina je vybrána ze

4 4 skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

9) když substituce nastává v posici 229, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

10) když substituce nastává v posici 230, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

11) když substituce nastává v posici 231, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

12) když substituce nastává v posici 232, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

13) když substituce nastává v posici 233, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

14) když substituce nastává v posici 234, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

15) když substituce nastává v posici 235, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

- 88 • · · · · · ·

16) když substituce nastává v posici 236, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;

17) když substituce nastává v posici 237, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

18) když substituce nastává v posici 238, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, lle, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

19) když substituce nastává v posici 239, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

20) když substituce nastává v posici 240, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

21) když substituce nastává v posici 241, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val a Tyr;

22) když substituce nastává v posici 242, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, ser, Val, Trp a Tyr;

23) když substituce nastává v posici 243, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, • ·· ·· ·«· ··· · · ♦ • ··· · ··· · ·

-89- _w· j j * ; ; ··;· · ; i .

······ ·· · ·····

Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

24) když substituce nastává v posici 244, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,

Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn,

Pro, Gin, Arg, Ser, val, Trp a Tyr;

25) když substituce nastává v posici 245, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu,

Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn,

Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr; a

26) když substituce nastává v posici 246, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,

Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn,

Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr; a

C) když substituce nastává v třetí epitopové oblasti, substituce nastává v jedné nebo více z posic 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79,

80, 81, 82, 83 a 84, kde

1) když substituce nastává v posici 70, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp,

Cys, Gin, Gly, Phe, His, ile, Lys, Leu,

Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;

2) když substituce nastává v posici 71, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp,

Cys, Gin, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu,

Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a val;

3) když substituce nastává v posici 72, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp,

Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, ile, Lys,

Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, a Tyr;

• · ·

- 90 • · ·

4) když substituce nastává v posici 73, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a val;

5) když substituce nastává v posici 74, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a val;

6) když substituce nastává v posici 75, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, ile, Lys, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;

7) když substituce nastává v posici 76, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, cys, ile, Leu, Met, Gin, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;

8) když substituce nastává v posici 77, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Cys, Glu, Gin, Gly, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a val;

9) když substituce nastává v posici 78, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Thr, Trp, Tyr a val;

10) když substituce nastává v posici 79, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Gly, Phe, His, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;

11) když substituce nastává v posici 80, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, « «

- 91 cys, Gin, Gly, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;

12) když substituce nastává v posici 81, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, a Tyr;

13) když substituce nastává v posici 82, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a val;

14) když substituce nastává v posici 83, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, cys, Gin, Glu, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a val;

15) když substituce nastává v posici 84, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp a Tyr.

4. Variant podle kteréhokoli z předcházejících nároků, kde modifikovaná aminokyselinová sekvence obsahuje substituci substituující aminokyselinou ve dvou nebo více posicích ve dvou nebo více epitopových oblastech.

5. Variant podle kteréhokoli z předcházejících nároků, kde serinová proteasa je vybrána ze skupiny sestávající ze subtilisinu BPN', subtilisinu Carlsberg, subtilisinu DY, subtilisinu 309, proteinasy K a termitasy, a kde řečený variant dále obsahuje jednu nebo více stabilizujících mutací.

• · _ 92 - «····· ·.·. . · ······ · * · ·

6. Variant podle kteréhokoli z předcházejících nároků, kde modifikovaná aminokyselinová sekvence obsahuje substituci substituující aminokyselinou ve třech nebo více posicích v jedné nebo více epitopových oblastech.

7. čistící prostředek vyznačující se tím, ž e obsahuje variant podle nároku 1 a nosič čistícího prostředku.

8. Prostředek péče o tělo vyznačující se tím, ž e řečený prostředek obsahuje nosič prostředku péče o tělo a variant proteasy podobné subtilisinu, jenž má aminokyselinovou sekvenci modifikovanou z aminokyselinové sekvence divokého typu, přičemž aminokyselinová sekvence divokého typu obsahuje první epitopovou oblast a druhou epitopovou oblast, a modifikovaná aminokyselinová sekvence obsahuje substituci substituující aminokyselinou přinejmenším v jedné nebo více posicích v jedné nebo více epitopových oblastech, kde

A) když substituce nastává v první epitopové oblasti, substituce nastává v jedné nebo více z posic 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113,

114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123,

124, 125 a 126, kde

1) když substituce nastává v posici 103, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

2) když substituce nastává v posici 104, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val a Trp;

• *

3) když substituce nastává v posici 105, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;

4) když substituce nastává v posici 106, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val a Tyr;

5) když substituce nastává v posici 107, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

6) když substituce nastává v posici 108, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

7) když substituce nastává v posici 109, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

8) když substituce nastává v posici 110, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

9) když substituce nastává v posici 111, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

10) když substituce nastává v posici 112, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Phe, « ·

-94- **;* * :

······ ·· · ··

Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

11) když substituce nastává v posici 113, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val a Tyr;

12) když substituce nastává v posici 114, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

13) když substituce nastává v posici 115, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

14) když substituce nastává v posici 116, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

15) když substituce nastává v posici 117, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

16) když substituce nastává v posici 118, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

17) když substituce nastává v posici 119, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

- 95 »* • ·· • · · • · · • · · • · ··· ·

18) když substituce nastává v posici 120, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

19) když substituce nastává v posici 121, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Pro, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;

20) když substituce nastává v posici 122, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

21) když substituce nastává v posici 123, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

22) když substituce nastává v posici 124, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

23) když substituce nastává v posici 125, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr; a

24) když substituce nastává v posici 126, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr; a když substituce nastává v posici 126, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu,

- 96 Phe, Gly, His, ile, Lys, Met, Asn, pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr; a

B) když substituce nastává v druhé epitopové oblasti, substituce nastává v jedné nebo více z posic 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245 a 246, kde

1) když substituce nastává v posici 220, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, val, Trp a Tyr;

2) když substituce nastává v posici 221, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;

3) když substituce nastává v posici 222, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

4) když substituce nastává v posici 223, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

5) když substituce nastává v posici 224, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;

6) když substituce nastává v posici 225, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, ·· 9

- 97 ·· ·· * · · • ·«·

9 9 ·

9999 99

99 99

9 9 9 9

9 9 · • 9 · • ♦ · ·· 9999

Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

7) když substituce nastává v posici 226, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

8) když substituce nastává v posici 227, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;

9) když substituce nastává v posici 228, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

10) když substituce nastává v posici 229, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

11) když substituce nastává v posici 230, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

12) když substituce nastává v posici 231, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

13) když substituce nastává v posici 232, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

- 98 ·* 99 • 9 · • ··· • 9 99

9 9 9 · • · * ····

14) když substituce nastává v posici 233, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

15) když substituce nastává v posici 234, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

16) když substituce nastává v posici 235, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

17) když substituce nastává v posici 236, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;

18) když substituce nastává v posici 237, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

19) když substituce nastává v posici 238, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

20) když substituce nastává v posici 239, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

21) když substituce nastává v posici 240, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,

- 99 ·« ·· k · · • ···

Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

22) když substituce nastává v posici 241, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

23) když substituce nastává v posici 242, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Val, Trp a Tyr;

24) když substituce nastává v posici 243, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

25) když substituce nastává v posici 244, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Val, Trp a Tyr;

26) když substituce nastává v posici 245, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr; a
27) když substituce nastává v posici 246, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr.

• 4 ·· • 4 4 ·

4 4 4

4 4 4

4 4·

44 4444

-100• 4 · « · · Μ· • · · · · ·

4444 ·· ·· ·

9. Prostředek péče o tělo vyznačující se tím, ž e řečený prostředek obsahuje nosič prostředku péče o tělo a variant proteasy podobné subtilisinu, jenž má aminokyselinovou sekvenci modifikovanou z aminokyselinové sekvence divokého typu, přičemž aminokyselinová sekvence divokého typu obsahuje první epitopovou oblast, druhou epitopovou oblast a třetí epitopovou oblast, a modifikovaná aminokyselinová sekvence obsahuje substituci substituující aminokyselinou přinejmenším ve dvou nebo více posicích v jedné nebo více epitopových oblastech, kde

A) když substituce nastává v první epitopové oblasti, substituce nastává v jedné nebo více z posic 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125 a 126, kde

1) když substituce nastává v posici 103, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

2) když substituce nastává v posici 104, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val a Trp;

3) když substituce nastává v posici 105, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;

4) když substituce nastává v posici 106, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val a Tyr;

-101• Φ ·· ·· · φφ ·· φ · · φ · φ · ·* φ · ···· φ · φ · φφ * φ φ φ · · ·»···· φ φ · φφφ φφφ φφφ ···· ·· φφ φ φφ φφφφ

5) když substituce nastává v posici 107, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,

Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro,

Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

6) když substituce nastává v posici 108, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,

Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro,

Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

7) když substituce nastává v posici 109, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,

Phe, His, Gly, ile, Lys, Leu, Met, Pro,

Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

8) když substituce nastává v posici 110, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,

Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro,

Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

9) když substituce nastává v posici 111, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,

Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro,

Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

10) když substituce nastává v posici 112, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Phe,

Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro,

Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

11) když substituce nastává v posici 113, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,

Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn,

Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val a Tyr;

12) když substituce nastává v posici 114, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe,

-102Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

13) když substituce nastává v posici 115, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

14) když substituce nastává v posici 116, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

15) když substituce nastává v posici 117, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

16) když substituce nastává v posici 118, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

17) když substituce nastává v posici 119, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

18) když substituce nastává v posici 120, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

19) když substituce nastává v posici 121, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Pro, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;

*

-10320) když substituce nastává v posici 122, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

21) když substituce nastává v posici 123, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

22) když substituce nastává v posici 124, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

23) když substituce nastává v posici 125, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr; a

24) když substituce nastává v posici 126, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr; a když substituce nastává v posici 126, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr; a • ·

-104- ·..* : ·· ··

B) když substituce nastává v druhé epitopové oblasti, substituce nastává v jedné nebo více z posic 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245 a 246, kde

1) když substituce nastává v posici 220, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, val, Trp a Tyr;

2) když substituce nastává v posici 221, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;

3) když substituce nastává v posici 222, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

4) když substituce nastává v posici 223, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

5) když substituce nastává v posici 224, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;

6) když substituce nastává v posici 225, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

• ·

-1057) když substituce nastává v posici 226, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

8) když substituce nastává v posici 227, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;

9) když substituce nastává v posici 228, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

10) když substituce nastává v posici 229, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

11) když substituce nastává v posici 230, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

12) když substituce nastává v posici 231, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

13) když substituce nastává v posici 232, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

14) když substituce nastává v posici 233, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, • ·

-106Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

15) když substituce nastává v posici 234, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

16) když substituce nastává v posici 235, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

17) když substituce nastává v posici 236, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;

18) když substituce nastává v posici 237, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

19) když substituce nastává v posici 238, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

20) když substituce nastává v posici 239, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

21) když substituce nastává v posici 240, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

• ·

22) když substituce nastává v posici 241, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

23) když substituce nastává v posici 242, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, val, Trp a Tyr;

24) když substituce nastává v posici 243, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

25) když substituce nastává v posici 244, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, val, Trp a Tyr;

26) když substituce nastává v posici 245, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr; a

27) když substituce nastává v posici 246, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;

C) když substituce nastává v třetí epitopové oblasti, substituce nastává v jedné nebo více z posic 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83 a 84, kde • ·

-1081) když substituce nastává v posici 70, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

2) když substituce nastává v posici 71, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Val, Trp a Tyr;

3) když substituce nastává v posici 72, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;

4) když substituce nastává v posici 73, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Ser, val, Trp a Tyr;

5) když substituce nastává v posici 74, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

6) když substituce nastává v posici 75, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;

7) když substituce nastává v posici 76, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

8) když substituce nastává v posici 77, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,

-109• · • · ··

Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro,

Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

9) když substituce nastává v posici 78, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;

10) když substituce nastává v posici 79, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

11) když substituce nastává v posici 80, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;

12) když substituce nastává v posici 81, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;

13) když substituce nastává v posici 82, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

14) když substituce nastává v posici 83, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;

15) když substituce nastává v posici 84, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr.

4 ·

-11010. Prostředek péče o tělo vyznačující se tím, že obsahuje variant podle nároku 1 a nosič prostředku péče o tělo.

11. Čistící prostředek vyznačující se tím, ž e obsahuje variant podle nároku 3 a nosič čistícího prostředku.

12. Prostředek péče o tělo vyznačující se tím, že obsahuje variant podle nároku 3 a nosič prostředku péče o tělo.