CN108795906B - 用于水解蛋壳膜的复合酶、蛋壳膜的水解方法、蛋壳膜水解产物及其提取方法 - Google Patents

用于水解蛋壳膜的复合酶、蛋壳膜的水解方法、蛋壳膜水解产物及其提取方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108795906B
CN108795906B CN201810707415.0A CN201810707415A CN108795906B CN 108795906 B CN108795906 B CN 108795906B CN 201810707415 A CN201810707415 A CN 201810707415A CN 108795906 B CN108795906 B CN 108795906B
Authority
CN
China
Prior art keywords
eggshell membrane
hydrolysate
eggshell
membrane
dry powder
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201810707415.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108795906A (zh
Inventor
张革
唐章勇
陈诚
陈云
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sichuan Deebio Pharmaceutical Co ltd
Original Assignee
Sichuan Deebio Pharmaceutical Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sichuan Deebio Pharmaceutical Co ltd filed Critical Sichuan Deebio Pharmaceutical Co ltd
Priority to CN201810707415.0A priority Critical patent/CN108795906B/zh
Publication of CN108795906A publication Critical patent/CN108795906A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108795906B publication Critical patent/CN108795906B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/56—Materials from animals other than mammals
    • A61K35/57—Birds; Materials from birds, e.g. eggs, feathers, egg white, egg yolk or endothelium corneum gigeriae galli
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products

Abstract

本发明涉及生物工程技术领域，提供了用于水解蛋壳膜的复合酶，包括质量比为0.2～5:1的角蛋白酶和碱性蛋白酶。该复合酶能使得蛋壳膜水解更充分。蛋壳膜的水解方法：将蛋壳膜干粉与水混合，在70～80℃下保温10～240分钟后冷却至50～55℃保温得到蛋壳膜液；调节蛋壳膜液的pH为8.0～8.5，加入复合酶，继续保温得蛋壳膜水解混合液。该水解方法能使蛋壳膜水解充分。蛋壳膜水解产物的提取方法，包括上述的蛋壳膜的水解方法，和调节pH至5.0～8.0，升温至90～100℃保温10～60分钟，经过滤、浓缩及喷雾干燥。该提取方法得到的水解产物的收率高，品质好。本发明还提供了采用上述提取方法制得的蛋壳膜水解产物。

Description

用于水解蛋壳膜的复合酶、蛋壳膜的水解方法、蛋壳膜水解产 物及其提取方法
技术领域
本发明涉及生物工程技术领域，具体而言，涉及一种用于水解蛋壳膜的复合酶、蛋壳膜的水解方法、蛋壳膜水解产物及其提取方法。
背景技术
蛋壳膜的主要组成成分是蛋白质，以糖蛋白的形式存在，占膜总重的90％，具有较高的药用价值，但是直接食用难以起到较好的药用效果，将糖蛋白从蛋壳膜中提取出来成为关键。但是现有的酶解法提取蛋壳膜中糖蛋白等活性物质的收率均较低。
鉴于此，特提出本申请。
发明内容
本发明提供了一种用于水解蛋壳膜的复合酶，旨在改善现有酶水解蛋壳膜不够充分的问题。
本发明提供了一种蛋壳膜的水解方法，旨在改善现有的蛋壳膜采用酶法水解不够充分的问题。
本发明还提供了一种蛋壳膜水解产物的提取方法，旨在改善现有酶解法提取蛋壳膜水解产物收率较低的问题。
本发明还提供了一种蛋壳膜水解产物，其品质好。
本发明是这样实现的：
一种用于水解蛋壳膜的复合酶，包括质量比为0.2～5:1的角蛋白酶和碱性蛋白酶。
一种蛋壳膜的水解方法，包括：
将蛋壳膜干粉与其重量8～20倍的水混合，在70～80℃下保温 10～240min后冷却至50～55℃得到蛋壳膜液；
调节蛋壳膜液的pH为8.0～8.5，加入上述的复合酶，在50～55℃的环境下保温12～20h得蛋壳膜水解混合液，复合酶占蛋壳膜干粉重量的0.4％～10％，且角蛋白酶和碱性蛋白酶占蛋壳膜干粉的重量均大于或等于0.2％。
一种蛋壳膜水解产物的提取方法，包括上述的蛋壳膜的水解方法，还包括：
调节蛋壳膜水解混合液的pH至5.0～8.0，升温至90～100℃保温 10～60min，然后依次经过滤、浓缩及喷雾干燥得到蛋壳膜水解产物。
一种蛋壳膜水解产物，采用上述的蛋壳膜水解产物的提取方法制得。
本发明的有益效果是：本发明通过上述设计得到的用于水解蛋壳膜的复合酶，由于其包括合理比例的角蛋白酶和碱性蛋白酶，当该复合酶用于蛋壳膜水解时，能使得蛋壳膜水解更充分，提高蛋壳膜水解产物的收率。
本发明通过上述设计得到的蛋壳膜的水解方法，由于采用合适量的本发明提供的用于水解蛋壳膜的复合酶，且水解过程温度以及pH 值设置合理，而使得制蛋壳膜能够水解更充分。
本发明通过上述设计得到的蛋壳膜水解产物的提取方法，包括本发明提供的蛋壳膜的水解方法，由于包括上述水解方法，故其收率高，并且水解后在合适温度和pH环境下使得复合酶及部分大分子蛋白质失活沉淀去除，进而使得水解产物的品质好。
本发明通过上述设计得到的蛋壳膜水解产物，由于采用上述蛋壳膜水解产物的提取方法制得，故该蛋壳膜水解产物的品质好。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例提供用于水解蛋壳膜的复合酶、蛋壳膜的水解方法、蛋壳膜水解产物及其提取方法进行说明。
一种用于水解蛋壳膜的复合酶，包括质量比为0.2～5:1的角蛋白酶和碱性蛋白酶。
鸡蛋壳膜中富含大量的角蛋白，而角蛋白因其独特的网状结构，其大分子之间主要通过-S-S-键建立起稳定的结合，从而构成不溶性的蛋白质。本发明提供的复合酶，其中所含的角蛋白酶作用于角蛋白二硫键，将胱氨酸(-S-S-)还原为半胱氨酸(-SH)，使角蛋白高级结构解体而形成变性角蛋白。碱性蛋白酶是一种丝氨酸蛋白质酶，它能水解蛋白质分子肽链生成多肽或氨基酸，除了水解肽键外，还具有水解酯键、酰胺键的能力，具有较强的分解蛋白质的能力，经角蛋白酶水解得到的变性角蛋白则在碱性蛋白酶的作用下水解成大部分多肽、寡肽和少部分游离氨基酸。
采用本发明提供的用于水解蛋壳膜的复合酶水解蛋壳膜时，能将蛋壳膜水解更完全。
一种蛋壳膜的水解方法，包括：
S1、将蛋壳膜干粉与其重量8～20倍的水混合，在70～80℃下保温10～240min后冷却至50～55℃得到蛋壳膜液。
具体地，首先准备干净的蛋壳膜，由于蛋壳膜为纤维状网格结构难溶于水，故将该蛋壳膜干燥后粉碎得到蛋壳膜粉，粉碎后的蛋壳膜的紧密网状结构被破坏，有利于酶法提取蛋壳膜中水溶性物质。
然后将蛋壳膜干粉与其重量8～20倍的水混合，混合过程不停搅拌以使得两者能够尽快混合均匀，混合均匀后将混合液升温至 70～80℃，然后保温10～240min，保温结束后冷却至50～55℃得到蛋壳膜液。
升温至70～80℃，然后保温10～240min是由于常温下蛋壳膜中蛋白分子的立体致密结构不利于蛋白酶水解，热处理使其结构变得松散，暴露蛋白内部作用位点，蛋壳膜蛋白经酶解产生了更多的亲水基团，即可提高溶解性能。温度不宜过高或过低，当温度为70～80℃溶解性能的提高效果最好。
S2、调节蛋壳膜液的pH为8.0～8.5，加入本发明提供的复合酶，在50～55℃的环境下保温12～20h得蛋壳膜水解混合液，复合酶占蛋壳膜干粉重量的0.4％～10％，且角蛋白酶和碱性蛋白酶占蛋壳膜干粉的重量均大于或等于0.2％。
具体地，保持S1步骤中得到的蛋壳膜液温度为50～55℃，然后采用1～4M的盐酸调节蛋壳膜液的pH为8.0～8.5，加入本发明提供的复合酶，继续在50～55℃的环境下保温12～20h得到蛋壳膜水解混合液，复合酶的加入量为蛋壳干粉重量的0.4％～10％，且角蛋白酶和碱性蛋白酶占蛋壳膜干粉的重量均大于或等于0.2％，优选地，角蛋白酶占蛋壳膜干粉重量的0.2％～5％，碱性蛋白酶占蛋壳膜干粉重量的 0.2％～5％。
本发明提供的复合酶在温度为50～55℃，pH为8.0～8.5的条件下，其所含的角蛋白酶和碱性蛋白酶相互配合作用，能将蛋壳膜所含的角蛋白充分水解为多肽、寡肽及游离的氨基酸。
一种蛋壳膜水解产物的提取方法，包括上述的蛋壳膜的水解方法，还包括：
S3、调节蛋壳膜水解混合液的pH至5.0～8.0，升温至90～100℃保温10～60min，然后依次经过滤、浓缩及喷雾干燥得到蛋壳膜水解产物。
具体地，采用1～4M的盐酸调节蛋壳膜水解混合液的pH至 5.0～8.0，然后升高蛋壳膜水解混合液的温度至90～100℃保温10～60min使角蛋白酶和碱性蛋白酶以及一些大分子中性蛋白质变性以沉淀的形式析出。
保温后得到悬浊液，将此悬浊液进行过滤，保留滤液弃去或回收滤渣。得到的滤液中即含有蛋壳膜的水解产物：多肽、寡肽以及一些游离氨基酸。
将得到的滤液进行浓缩，浓缩至质量浓度为10％～20％得到浓缩液，便于后续喷雾干燥。
浓缩后为保证制得的水解产物储存时间更长，将该浓缩液经孔径为1～0.22μm的膜再次过滤，以达到除菌的效果。过滤后将得到的无菌浓缩液在200～250℃条件下喷雾干燥得到蛋壳膜水解产物成品。
本发明提供的蛋壳膜水解产物的提取方法由于采用本发明提供的复合酶，在合适温度和pH下对角蛋白水解更充分，进而使得制得的蛋壳膜水解产物收率高。
本发明提供方的蛋壳膜水解产物，该水解产物由本发明提供的蛋壳膜水解产物的提取方法制得。
以下结合具体实施例对本发明提供的用于水解蛋壳膜的复合酶、蛋壳膜的水解方法、蛋壳膜水解产物及其提取方法进行具体说明。
实施例1
本实施例提供了一种水解蛋壳膜的复合酶、蛋壳膜的水解方法、蛋壳膜水解产物及其提取方法。
一种水解蛋壳膜的复合酶，其包括质量比为0.2：1的角蛋白酶和碱性蛋白酶。
一种蛋壳膜的水解方法，包括：将干净的蛋壳膜干燥后粉碎成蛋壳膜干粉，将蛋壳膜干粉与其重量8倍的水混合，在70℃下保温 240min后冷却至50℃得到蛋壳膜液。将蛋壳液膜在保温50℃下采用质量浓度为1M的盐酸溶液调pH至8.0，向其中加入复合酶，其中角蛋白酶的加入量为蛋壳膜干粉重量的0.2％，碱性蛋白酶的加入量为蛋壳膜干粉重量的1％，然后在50℃条件下再继续保温12h得到蛋壳膜水解混合液。
一种蛋壳膜水解产物的提取方法，包括：调节蛋壳膜的水解方法制得的蛋壳膜水解混合液的pH至5.0，然后升温至90℃保温10min，保温结束后得到悬浊液，将悬浊液过滤得到滤液，将滤液浓缩得到质量浓度为10％的浓缩液，将浓缩液经0.22μm的膜过滤得无菌浓缩液，将无菌浓缩液在200℃下喷雾干燥得到蛋壳膜水解产物。
实施例2
本实施例提供了一种水解蛋壳膜的复合酶、蛋壳膜的水解方法、蛋壳膜水解产物及其提取方法。
一种水解蛋壳膜的复合酶，其包括质量比为5：1的角蛋白酶和碱性蛋白酶。
一种蛋壳膜的水解方法，包括：将干净的蛋壳膜干燥后粉碎成蛋壳膜干粉，将蛋壳膜干粉与其重量20倍的水混合，在80℃下保温10min后冷却至55℃得到蛋壳膜液。将蛋壳液膜在保温55℃下采用质量浓度为4M的盐酸溶液调pH至8.5，向其中加入复合酶，其中角蛋白酶的加入量为蛋壳膜干粉重量的1％，碱性蛋白酶的加入量为蛋壳膜干粉重量的0.2％，然后在55℃条件下再继续保温20h得到蛋壳膜水解混合液。
一种蛋壳膜水解产物的提取方法，包括：调节蛋壳膜的水解方法制得的蛋壳膜水解混合液的pH至8.0，然后升温至100℃保温60min，保温结束后得到悬浊液，将悬浊液过滤得到滤液，将滤液浓缩得到质量浓度为20％的浓缩液，将浓缩液经0.1μm的膜过滤得无菌浓缩液，将无菌浓缩液在250℃下喷雾干燥得到蛋壳膜水解产物。
实施例3
本实施例提供了一种水解蛋壳膜的复合酶、蛋壳膜的水解方法、蛋壳膜水解产物及其提取方法。
一种水解蛋壳膜的复合酶，其包括质量比为1：1的角蛋白酶和碱性蛋白酶。
一种蛋壳膜的水解方法，包括：将干净的蛋壳膜干燥后粉碎成蛋壳膜干粉，将蛋壳膜干粉与其重量15倍的水混合，在75℃下保温 30min后冷却至52℃得到蛋壳膜液。将蛋壳液膜在保温52℃下采用质量浓度为3M的盐酸溶液调pH至8.2，向其中加入复合酶，其中角蛋白酶的加入量为蛋壳膜干粉重量的1％，碱性蛋白酶的加入量为蛋壳膜干粉重量的1％，然后在52℃条件下再继续保温16h得到蛋壳膜水解混合液。
一种蛋壳膜水解产物的提取方法，包括：调节蛋壳膜的水解方法制得的蛋壳膜水解混合液的pH至7.0，然后升温至95℃保温30min，保温结束后得到悬浊液，将悬浊液过滤得到滤液，将滤液浓缩得到质量浓度为15％的浓缩液，将浓缩液经0.22μm的膜过滤得无菌浓缩液，将无菌浓缩液在220℃下喷雾干燥得到蛋壳膜水解产物。
实施例4
本实施例提供了一种水解蛋壳膜的复合酶、蛋壳膜的水解方法、蛋壳膜水解产物及其提取方法。
一种水解蛋壳膜的复合酶，其包括质量比为0.5：1的角蛋白酶和碱性蛋白酶。
一种蛋壳膜的水解方法，包括：将干净的蛋壳膜干燥后粉碎成蛋壳膜干粉，将蛋壳膜干粉与其重量12倍的水混合，在72℃下保温1h 后冷却至51℃得到蛋壳膜液。将蛋壳液膜在保温51℃下采用质量浓度为2M的盐酸溶液调pH至8.4，向其中加入复合酶，其中角蛋白酶的加入量为蛋壳膜干粉重量的2％，碱性蛋白酶的加入量为蛋壳膜干粉重量的4％，然后在51℃条件下再继续保温13h得到蛋壳膜水解混合液。
一种蛋壳膜水解产物的提取方法，包括：调节蛋壳膜的水解方法制得的蛋壳膜水解混合液的pH至6，然后升温至92℃保温20min，保温结束后得到悬浊液，将悬浊液过滤得到滤液，将滤液浓缩得到质量浓度为13％的浓缩液，将浓缩液经0.2μm的膜过滤得无菌浓缩液，将无菌浓缩液在230℃下喷雾干燥得到蛋壳膜水解产物。
实施例5
本实施例提供了一种水解蛋壳膜的复合酶、蛋壳膜的水解方法、蛋壳膜水解产物及其提取方法。
一种水解蛋壳膜的复合酶，其包括质量比为2：1的角蛋白酶和碱性蛋白酶。
一种蛋壳膜的水解方法，包括：将干净的蛋壳膜干燥后粉碎成蛋壳膜干粉，将蛋壳膜干粉与其重量12倍的水混合，在77℃下保温2h 后冷却至53℃得到蛋壳膜液。将蛋壳液膜在保温53℃下采用质量浓度为3.5M的盐酸溶液调pH至8.4，向其中加入复合酶，其中角蛋白酶的加入量为蛋壳膜干粉重量的5％，碱性蛋白酶的加入量为蛋壳膜干粉重量的2.5％，然后在53℃条件下再继续保温18h得到蛋壳膜水解混合液。
一种蛋壳膜水解产物的提取方法，包括：调节蛋壳膜的水解方法制得的蛋壳膜水解混合液的pH至7.5，然后升温至98℃保温50min，保温结束后得到悬浊液，将悬浊液过滤得到滤液，将滤液浓缩得到质量浓度为18％的浓缩液，将浓缩液经0.15μm的膜过滤得无菌浓缩液，将无菌浓缩液在240℃下喷雾干燥得到蛋壳膜水解产物。
实施例6
本实施例提供了一种水解蛋壳膜的复合酶、蛋壳膜的水解方法、蛋壳膜水解产物及其提取方法。
一种水解蛋壳膜的复合酶，其包括质量比为4：1的角蛋白酶和碱性蛋白酶。
一种蛋壳膜的水解方法，包括：将干净的蛋壳膜干燥后粉碎成蛋壳膜干粉，将蛋壳膜干粉与其重量15倍的水混合，在80℃下保温 30min后冷却至52℃得到蛋壳膜液。将蛋壳液膜在保温52℃下采用质量浓度为3M的盐酸溶液调pH至8.2，向其中加入复合酶，其中角蛋白酶的加入量为蛋壳膜干粉重量的3.2％，碱性蛋白酶的加入量为蛋壳膜干粉重量的0.8％，然后在52℃条件下再继续保温16h得到蛋壳膜水解混合液。
一种蛋壳膜水解产物的提取方法，包括：调节蛋壳膜的水解方法制得的蛋壳膜水解混合液的pH至7.0，然后升温至95℃保温40min，保温结束后得到悬浊液，将悬浊液过滤得到滤液，将滤液浓缩得到质量浓度为12％的浓缩液，将浓缩液经0.22μm的膜过滤得无菌浓缩液，将无菌浓缩液在225℃下喷雾干燥得到蛋壳膜水解产物。
实施例7
本实施例提供了一种水解蛋壳膜的复合酶、蛋壳膜的水解方法、蛋壳膜水解产物及其提取方法。
一种水解蛋壳膜的复合酶，其包括质量比为1：1的角蛋白酶和碱性蛋白酶。
一种蛋壳膜的水解方法，包括：将干净的蛋壳膜干燥后粉碎成蛋壳膜干粉，将蛋壳膜干粉与其重量15倍的水混合，在80℃下保温 30min后冷却至52℃得到蛋壳膜液。将蛋壳液膜在保温52℃下采用质量浓度为3M的盐酸溶液调pH至8.2，向其中加入复合酶，其中角蛋白酶的加入量为蛋壳膜干粉重量的5％，碱性蛋白酶的加入量为蛋壳膜干粉重量的5％，然后在52℃条件下再继续保温16h得到蛋壳膜水解混合液。
一种蛋壳膜水解产物的提取方法，包括：调节蛋壳膜的水解方法制得的蛋壳膜水解混合液的pH至7.0，然后升温至95℃保温40min，保温结束后得到悬浊液，将悬浊液过滤得到滤液，将滤液浓缩得到质量浓度为18％的浓缩液，将浓缩液经0.22μm的膜过滤得无菌浓缩液，将无菌浓缩液在225℃下喷雾干燥得到蛋壳膜水解产物。
实施例8
本实施例提供了一种水解蛋壳膜的复合酶、蛋壳膜的水解方法、蛋壳膜水解产物及其提取方法。
一种水解蛋壳膜的复合酶，其包括质量比为1：1的角蛋白酶和碱性蛋白酶。
一种蛋壳膜的水解方法，包括：将干净的蛋壳膜干燥后粉碎成蛋壳膜干粉，将蛋壳膜干粉与其重量15倍的水混合，在80℃下保温 30min后冷却至52℃得到蛋壳膜液。将蛋壳液膜在保温52℃下采用质量浓度为3M的盐酸溶液调pH至8.2，向其中加入复合酶，其中角蛋白酶的加入量为蛋壳膜干粉重量的0.2％，碱性蛋白酶的加入量为蛋壳膜干粉重量的0.2％，然后在52℃条件下再继续保温16h得到蛋壳膜水解混合液。
一种蛋壳膜水解产物的提取方法，包括：调节蛋壳膜的水解方法制得的蛋壳膜水解混合液的pH至7.0，然后升温至95℃保温40min，保温结束后得到悬浊液，将悬浊液过滤得到滤液，将滤液浓缩得到质量浓度为18％的浓缩液，将浓缩液经0.22μm的膜过滤得无菌浓缩液，将无菌浓缩液在225℃下喷雾干燥得到蛋壳膜水解产物。
实施例9
本实施例提供了一种水解蛋壳膜的复合酶、蛋壳膜的水解方法、蛋壳膜水解产物及其提取方法。
一种水解蛋壳膜的复合酶，其包括质量比为0.8：1的角蛋白酶和碱性蛋白酶。
一种蛋壳膜的水解方法，包括：将干净的蛋壳膜干燥后粉碎成蛋壳膜干粉，将蛋壳膜干粉与其重量15倍的水混合，在80℃下保温 30min后冷却至52℃得到蛋壳膜液。将蛋壳液膜在保温52℃下采用质量浓度为3M的盐酸溶液调pH至8.2，向其中加入复合酶，其中角蛋白酶的加入量为蛋壳膜干粉重量的0.4％，碱性蛋白酶的加入量为蛋壳膜干粉重量的0.5％，然后在52℃条件下再继续保温16h得到蛋壳膜水解混合液。
一种蛋壳膜水解产物的提取方法，包括：调节蛋壳膜的水解方法制得的蛋壳膜水解混合液的pH至7.0，然后升温至95℃保温40min，保温结束后得到悬浊液，将悬浊液过滤得到滤液，将滤液浓缩得到质量浓度为12％的浓缩液，将浓缩液经0.22μm的膜过滤得无菌浓缩液，将无菌浓缩液在225℃下喷雾干燥得到蛋壳膜水解产物。
实施例10
本实施例提供了一种水解蛋壳膜的复合酶、蛋壳膜的水解方法、蛋壳膜水解产物及其提取方法。
一种水解蛋壳膜的复合酶，其包括质量比为0.7：1的角蛋白酶和碱性蛋白酶。
一种蛋壳膜的水解方法，包括：将干净的蛋壳膜干燥后粉碎成蛋壳膜干粉，将蛋壳膜干粉与其重量15倍的水混合，在80℃下保温 30min后冷却至52℃得到蛋壳膜液。将蛋壳液膜在保温52℃下采用质量浓度为3M的盐酸溶液调pH至8.2，向其中加入复合酶，其中角蛋白酶的加入量为蛋壳膜干粉重量的2.8％，碱性蛋白酶的加入量为蛋壳膜干粉重量的4％，然后在52℃条件下再继续保温16h得到蛋壳膜水解混合液。
一种蛋壳膜水解产物的提取方法，包括：调节蛋壳膜的水解方法制得的蛋壳膜水解混合液的pH至7.0，然后升温至95℃保温40min，保温结束后得到悬浊液，将悬浊液过滤得到滤液，将滤液浓缩得到质量浓度为12％的浓缩液，将浓缩液经0.22μm的膜过滤得无菌浓缩液，将无菌浓缩液在225℃下喷雾干燥得到蛋壳膜水解产物。
对比例1
本对比例与实施例1基本相同，不同之处在于，角蛋白酶占蛋壳膜干粉质量的0.1％。
对比例2
本对比例与实施例2基本相同，不同之处在于，碱性蛋白酶占蛋壳膜干粉质量的0.1％。
对比例3
本对比例与实施例3基本相同，不同之处在于，将复合蛋白酶替换成等量的角蛋白酶。
对比例4
本对比例与实施例3基本相同，不同之处在于，将复合蛋白酶替换成等量的碱性蛋白酶。
对比例5
本对比例与实施例1基本相同，不同之处在于，加入复合蛋白酶后保温温度为45摄氏度。
对比例6
本对比例与实施例2基本相同，不同之处在于，加入复合蛋白酶后保温温度为60摄氏度。
实验例1
每组以1kg蛋壳膜干粉为原料，测定实施例1-10和对比例1-8 制得的产物的收率。收率的计算方法为：产物质量除以蛋壳膜干粉质量。将实施例1-10和对比例1-8喷雾干燥得到的蛋壳膜水解产物收率记录至表1
表1各组蛋壳膜水解产物收率
Figure BDA0001715758620000151
从表1能够看出，本发明实施例1-10最终得到的水解产物的收率均达到60％以上，现有的采用酶解法对蛋壳膜进行水解通常是直接采用角蛋白酶进行即对比例3，水解产物的收率仅达27.5％，由此可见，采用本发明提供的复合蛋白酶对蛋壳膜进行水解，使得水解产物的收率远远高于现有的制备蛋壳膜水解产物方法的收率。
而将对比例1与实施例1进行对比发现，当角蛋白酶含量较低其与碱性蛋白酶的比值不在0.2～5:1的范围内时，制得的水解产物的收率明显低于角蛋白酶和碱性蛋白酶的比值在0.2～5:1内时，将对比例 2和实施例1进行对比发现当碱性蛋白酶含量较低其与角蛋白酶的比值不在1：0.2～5的范围内时，制得的水解产物的收率明显低于角蛋白酶和碱性蛋白酶的比值在0.2～5:1内时。由此可见，复合蛋白酶的用量以及角蛋白酶和碱性蛋白酶的质量比在0.2～5:1范围内时能使得蛋壳膜水解更充分。
将对比例3和对比例4与实施例3对比发现，单独使用任何一种酶对蛋壳膜进行水解都不能达到较好的水解效果或水解效果极差，由此能够说明，复合蛋白酶中角蛋白酶和碱性蛋白酶相互协同作用使得蛋壳膜的水解效果更好。
将对比例5与实施例1对比，将对比例6和实施例2对比发现，当保温温度不在50～55摄氏度范围内时，水解产物收率明显降低。由此可以说明，当酶解温度在50～55摄氏度范围内时，复合酶对蛋壳膜的水解效果更好。
实验例2
检测实施例3制得的水解产物各成分含量记录至表2。
表2实施例3制得的水解产物各成分含量
Figure BDA0001715758620000161
Figure BDA0001715758620000171
通过表2能够看出，经实施例3制得的水解产物的品质较高。
综上所述，本发明提供的用于水解蛋壳膜的复合酶，由于其包括合理比例的角蛋白酶和碱性蛋白酶，当该复合酶用于蛋壳膜水解时，能使得蛋壳膜水解更充分，提高蛋壳膜水解产物的收率。
本发明提供的蛋壳膜的水解方法，由于采用合适量的本发明提供的用于水解蛋壳膜的复合酶，且水解过程温度以及pH值设置合理，而使得制蛋壳膜能够水解更充分。
本发明提供的蛋壳膜水解产物的提取方法，包括本发明提供的蛋壳膜的水解方法，由于包括上述水解方法，故其收率高，并且水解后在合适温度和pH环境下使得复合酶及部分大分子蛋白质失活沉淀去除，进而使得水解产物的品质好。
本发明提供的蛋壳膜水解产物，由于采用上述蛋壳膜水解产物的提取方法制得，故该蛋壳膜水解产物的品质好。
以上所述仅为本发明的优选实施方式而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种蛋壳膜的水解方法，其特征在于，包括：
将蛋壳膜干粉与其重量8~20倍的水混合，在70~80℃下保温10~240min后冷却至50~55℃得到蛋壳膜液；
调节所述蛋壳膜液的pH为8.0~8.5，加入复合酶，所述复合酶包括质量比为0.2~5:1的角蛋白酶和碱性蛋白酶，在50~55℃的环境下保温12~20h得蛋壳膜水解混合液，所述复合酶占所述蛋壳膜干粉重量的0.4%~10%，且所述角蛋白酶和所述碱性蛋白酶占所述蛋壳膜干粉的重量均大于或等于0.2%。
2.根据权利要求1所述的蛋壳膜的水解方法，其特征在于，所述角蛋白酶占所述蛋壳膜干粉重量的0.2%~5%，所述碱性蛋白酶占所述蛋壳膜干粉重量的0.2%~5%。
3.根据权利要求1所述的蛋壳膜的水解方法，其特征在于，向所述蛋壳膜干粉中加水之前还包括，将蛋壳膜干燥后粉碎得到所述蛋壳膜干粉。
4.一种蛋壳膜水解产物的提取方法，其特征在于，包括如权利要求1-3任一项所得的蛋壳膜的水解方法，还包括：
调节所述蛋壳膜水解混合液的pH至5.0~8.0，升温至90~100℃保温10~60min，然后依次经过滤、浓缩及喷雾干燥得到蛋壳膜水解产物。
5.根据权利要求4所述的蛋壳膜水解产物的提取方法，其特征在于，将过滤得到的滤液浓缩至质量浓度为10%~20%得到浓缩液，后喷雾干燥得成品。
6.根据权利要求4所述的蛋壳膜水解产物的提取方法，其特征在于，调节pH的试剂为1~4M的盐酸。
7.根据权利要求4所述的蛋壳膜水解产物的提取方法，其特征在于，在进行喷雾干燥前还包括将浓缩后得到的浓缩液经孔径为1~0.22μm膜过滤。
8.根据权利要求4所述的蛋壳膜水解产物的提取方法，其特征在于，喷雾干燥的温度为200~250℃。
9.一种蛋壳膜水解产物，其特征在于，采用如权利要求4-8任一项所述的蛋壳膜水解产物的提取方法制得。
CN201810707415.0A 2018-07-02 2018-07-02 用于水解蛋壳膜的复合酶、蛋壳膜的水解方法、蛋壳膜水解产物及其提取方法 Active CN108795906B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810707415.0A CN108795906B (zh) 2018-07-02 2018-07-02 用于水解蛋壳膜的复合酶、蛋壳膜的水解方法、蛋壳膜水解产物及其提取方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810707415.0A CN108795906B (zh) 2018-07-02 2018-07-02 用于水解蛋壳膜的复合酶、蛋壳膜的水解方法、蛋壳膜水解产物及其提取方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108795906A CN108795906A (zh) 2018-11-13
CN108795906B true CN108795906B (zh) 2022-02-22

Family

ID=64073991

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810707415.0A Active CN108795906B (zh) 2018-07-02 2018-07-02 用于水解蛋壳膜的复合酶、蛋壳膜的水解方法、蛋壳膜水解产物及其提取方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108795906B (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111330078B (zh) * 2020-03-18 2020-12-22 华中农业大学 一种基于分层蛋壳膜和蛋白诱导制备的仿生矿化膜、制备方法及应用
CN111808215B (zh) * 2020-07-10 2022-05-27 上海林清轩生物科技有限公司 一种复合酶水解法从蛋壳膜中制备生物活性物质的方法
CN115381044A (zh) * 2022-08-15 2022-11-25 武汉新华扬生物股份有限公司 一种用于酶解鸡蛋的复合酶制剂及其应用
CN116711862B (zh) * 2023-08-09 2023-10-20 北京盛美诺生物技术有限公司 一种提高骨密度的组合物及应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108642031A (zh) * 2018-07-02 2018-10-12 四川德博尔制药有限公司 一种弹性蛋白酶及其提取方法
CN111808215A (zh) * 2020-07-10 2020-10-23 上海林清轩生物科技有限公司 一种复合酶水解法从蛋壳膜中制备生物活性物质的方法

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102762222B (zh) * 2009-12-09 2015-11-25 丹尼斯科美国公司 包含蛋白酶变体的组合物和方法
CN105884933B (zh) * 2016-04-26 2018-07-24 浙江农林大学 禽类蛋壳膜中透明质酸的提取方法
CN107118272B (zh) * 2017-05-24 2020-05-22 四川德博尔制药有限公司 一种细胞色素c及其内毒素的去除方法
CN110699411B (zh) * 2019-11-07 2021-10-22 江南大学 一种蛋壳膜多肽的制备方法
CN111330078B (zh) * 2020-03-18 2020-12-22 华中农业大学 一种基于分层蛋壳膜和蛋白诱导制备的仿生矿化膜、制备方法及应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108642031A (zh) * 2018-07-02 2018-10-12 四川德博尔制药有限公司 一种弹性蛋白酶及其提取方法
CN111808215A (zh) * 2020-07-10 2020-10-23 上海林清轩生物科技有限公司 一种复合酶水解法从蛋壳膜中制备生物活性物质的方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Comparative biochemistry of the proteinases of eucaryotic microorganisms.;M J North;《Microbiological reviews》;19820930;第46卷(第3期);第308–340页 *
可溶性鸡蛋壳膜蛋白与多肽的制备及其抗氧化活性的研究;周艳华;《万方数据》;20110215;第1-120页 *
对蛋壳膜中角蛋白与胶原蛋白的提取分离技术及功能多肽的概述;周艳华等;《四川食品与发酵》;20080825;第44卷(第04期);第48-54页 *
碱性蛋白酶法提取废养毛中角蛋白的机理;史吉华等;《印染》;20140617;第40卷(第9期);第5-9页 *
角蛋白酶/碱性蛋白酶制备羽毛蛋白粉的工艺研究;郝鲁江等;《中国家禽》;20160110;第38卷(第1期);第32-36页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN108795906A (zh) 2018-11-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108795906B (zh) 用于水解蛋壳膜的复合酶、蛋壳膜的水解方法、蛋壳膜水解产物及其提取方法
CN109943615B (zh) 一种利用南极磷虾粉制备活性肽的方法
WO2016173222A1 (zh) 一种低致敏低腥味鱼蛋白低聚肽及其工业化制备方法和应用
US20070105190A1 (en) Processes for making protein hydrolysates from animal peptone and for preserving mucosa
CN108771244A (zh) 鲍鱼低聚肽提取物的制备方法、制备鲍鱼低聚肽和鲍鱼粉的方法、鲍鱼低聚肽及其应用
RU2461384C1 (ru) Способ получения биологически активного концентрата из консервированных пантов
US2381407A (en) Protein composition of matter and method of making
CN110387396A (zh) 一种乳清蛋白溶液的水解方法及乳清蛋白粉
CN109897101B (zh) 一种胶原蛋白三肽及其生产方法和应用
RU2386444C1 (ru) Способ получения биологически активного продукта из сырых пантов
Liu et al. Effects of synergistic modification with enzymatic hydrolysis and phosphorylation on functional and structural properties of ovalbumin
JPH04112753A (ja) 低アレルゲン化したホエータンパク加水分解物及びその製造法
US2399443A (en) Desiccated virus vaccines and process of producing same
CN108796016B (zh) 核桃肽及其酶解提取方法
CN113957112A (zh) 一种鹿血肽的制备方法及鹿血肽
CN106831938B (zh) 一种制备阿胶小分子低肽的方法
CN105861608A (zh) 一种制备龟蛋白多肽的方法
WO2023077876A1 (zh) 鸡肉轻度酶解工艺及其酶解产物在犬粮中的应用
JPH0582412B2 (zh)
JPS60974B2 (ja) 加工卵白液の製造法
US11421045B2 (en) Krill-derived chitin products and methods of making same
CN1102859A (zh) 一种酶解卵清白蛋白的制作工艺
RU2610669C1 (ru) Способ получения протеолитического препарата для медицинского применения
JP3092870B2 (ja) 牛乳ホエータンパク加水分解物の製造方法
EP1613662B1 (fr) Procede d'obtention d'acide chondroitine sulfurique et ses utilisations

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant