JP2015527391A - ヒアルロン酸をベースとする薬物送達システム - Google Patents

Abstract

本発明は、薬物またはタンパク質または核酸が装填されたベシクルを含む新規ヒアルロン酸（ＨＡ）ヒドロゲルに関する。新規ＨＡヒドロゲルは、眼科（例えば、緑内障、角膜疾患、炎症性眼疾患、網膜硝子体疾患および内科的網膜疾患）および皮膚科的状態を含むがこれらに限定されない、いくつかの臨床および手術用途に有用な持続放出製剤を提供する。

Description

（関連出願の相互参照）
本出願は、米国特許法１１９条（ｅ）に基づいて、参照により全体として本明細書に組み込まれている、２０１２年９月６日に出願した米国仮出願第６１／６９７，２９６号（発明の名称：「Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ Ａｃｉｄ−Ｂａｓｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ」）の優先権の利益を主張するものである。

本発明は、眼科（例えば、緑内障、角膜疾患、炎症性眼疾患、網膜硝子体疾患および内科的網膜疾患）および皮膚科的状態を含むがこれらに限定されない、いくつかの臨床および外科適用のための、薬物、例えば、小分子またはタンパク質もしくはペプチドもしくは核酸を、制御された速度で送達するヒアルロン酸（ＨＡ）ヒドロゲルの使用に関する。特に、本発明は、ＨＡヒドロゲル中に分散された装填ベシクルを含むＨＡヒドロゲルであって、該ベシクルは１種もしくは複数の薬物、１種もしくは複数のタンパク質または１種もしくは複数の核酸が装填されているＨＡゲルに関する。薬物またはタンパク質または核酸は、制御された方法で放出される。加えて、本発明は、薬物またはタンパク質または核酸が装填されたベシクルを含むＨＡヒドロゲルを調製するための種々の方法に関する。本発明は、内部に分散された装填ベシクルを含むＨＡヒドロゲルを調製するための方法に関する。

天然に存在するグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）であるヒアルロン酸（ＨＡ）が、創傷治癒において鍵となる役割を果たすことは周知である。ＨＡの天然の分子サイズは、１００〜１０，０００，０００Ｄａの範囲である。ＨＡは、組織の水恒常性、立体排除現象による他の物質の透過性の調節および関節の潤滑に関係する。ＨＡはまた、細胞外基質内、細胞表面および細胞サイトゾル中のタンパク質に特異的に結合し、それによって軟骨基質安定化、細胞運動性、成長因子作用、形態発生および胚発生ならびに炎症に関与する。無修飾のＨＡは、薬物送達および手術において多く重要な用途を有する。例えば、これは点眼薬の送達のための補助薬として使用されている。加えて、ＨＡは、粘弾性液手術、関節内補充療法および創傷治癒においても重要な用途を有する。ＨＡはまた、薬物送達、組織工学および関節内補充療法において適用する場合には、生体適合性および生分解性ポリマーの構成ブロックである。

ヒドロゲルは、架橋ポリマーによって形成され、溶解されることなく多量の水を吸収できる。ＨＡヒドロゲルは、物理的にまたは共有結合によって架橋されたＨＡゲルである。ＨＡ分子は一般に、架橋剤と反応できるように官能化される。架橋ＨＡヒドロゲルは、例えば、ジエポキシブタン、エチレングリコールジグリシジルエーテル（ＥＧＤＧＥ）またはポリグリコールジグリシジルエーテル（ＰＥＧＤＥ）などの分子との架橋によって調製されている。

ＨＡヒドロゲルは、薬物送達用途を含むいくつかの用途に使用されている。これらは、種々の治療薬の持続的な局所送達を提供できる。ヒドロゲルにおける足場材料としてのＨＡの使用は、ＨＡヒドロゲルの生体適合性、低毒性、免疫応答の欠如および生分解性のために推進されてきた。

ＨＡヒドロゲルは薬物送達用途について研究されているが、送達速度を制御することは困難である。親水性薬物がヒドロゲル中に組み込まれる場合、組み込みは容易である（大量を装填できる）が、放出も速い。他方、このようなヒドロゲル中に大量の疎水性薬物を入れることは、溶解度のために困難である。溶解されていない薬物は、ヒドロゲルの表面に移動し、一気に（１日または２日以内に）放出される。

Ｌｉａｏ Ｘ，Ｗａｎｇ Ｊ，Ｗａｎｇ Ｊ，Ｚｈａｎｇ Ｈ：Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｐｏｌｙ（ｌａｃｔｉｄｅ−ｃｏ−ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ） ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ ｏｆ ｂｏｎｅ ｓｉａｌｏｐｒｏｔｅｉｎ，Ｎａｎｏ Ｂｉｏｍｅｄ Ｅｎｇ ２０１０，２：１３３

したがって、前記欠点を回避しつつ、疎水性および親水性薬物、タンパク質または核酸の効率的で局所的な制御放出を可能にする、さらなる改善された薬物／タンパク質／核酸持続送達製剤を提供することが必要である。

本発明は、新しい改善された制御放出薬物またはタンパク質または核酸製剤およびこれらの調製方法を提供することによってこの必要に応えるものである。

第１の態様において、本発明は、内部に分散された装填ベシクルを含むヒアルロン酸（ＨＡ）ヒドロゲルであって、該ベシクルは薬物またはタンパク質およびペプチドまたは核酸が装填されている（「装填ベシクル」）、ＨＡゲルに関する。

装填ベシクルは、ミセル、リポソームおよび／または粒子、例えば、ミクロ粒子もしくはナノ粒子から選択される。好ましくは、ミセルは、両親媒性（ａｍｐｈｉｐｉｌｉｃ）自己集合性分子から作る。両親媒性自己集合性分子は、好ましくは、ブロックコポリマーを含むポリマーおよび界面活性剤から選択される。好ましくは、粒子は、キトサンナノ粒子またはミクロ粒子およびポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）ナノ粒子またはミクロ粒子から選択される。好ましくは、装填ベシクルの量は、ＨＡヒドロゲル系全体（装填ベシクルを含むＨＡヒドロゲル）の１〜４０重量％である。より好ましくは、ＨＡヒドロゲル系全体の１〜２０重量％である。

薬物は、好ましくは疎水性または親水性薬物から選択され、より好ましくは抗生物質、例えば、シプロフロキサシン、化学療法薬（ｃｈｅｍｉｏ−ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｄｒｕｇ）、例えば、パクリタキセルまたはドキソルビシンまたは５−フルオロウラシル、緑内障または高眼圧症の治療のための薬物、例えば、ラタノプロストおよび抗瘢痕薬（ａｎｔｉ−ｓｃａｒｉｎｇ ｄｒｕｇ）、例えば、５−フルオロウラシルからなる群から選択される。

タンパク質は、好ましくは、モノクローナル抗体、例えば、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ）およびラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ）または同様な類似の治療用タンパク質から選択される。

ペプチドは、好ましくは、ナトリウム利尿ペプチド、例えば、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、Ａ型ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）、キメラナトリウム利尿ペプチド（ＣＤ−ＮＰ）、変異体心房性ナトリウム利尿ペプチド（Ｍ−ＡＮＰ）である。

核酸は、好ましくは、ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ＤＮＡ、ｃＤＮＡおよびプラスミドＤＮＡの群から選択される。

本発明によるＨＡヒドロゲルは、好ましくは、共有結合架橋ＨＡヒドロゲルであるＨＡヒドロゲルである。ヒドロゲルを形成するＨＡ部分（主鎖）を官能基で官能化して、架橋剤に連結させる。架橋剤は、ＨＡヒドロゲルの調製において架橋剤として作用するのに好適な任意の分子である。架橋を装填ベシクルの存在下で行って、本発明のヒドロゲルを提供する。官能基は、ＨＡに結合する、好ましくはＨＡに共有結合によって結合する任意の分子または部分もしくは基であって、架橋剤分子と反応して、官能化ＨＡを架橋させ、ＨＡヒドロゲルを形成することができるものである。あるいは、官能基は、ＨＡに結合する、好ましくはＨＡに共有結合によって結合する任意の分子または部分もしくは基であって、それ自体が架橋剤として作用してＨＡを形成できるものである。好ましくは、ＨＡをメタクリル酸もしくはメタクリル酸無水物で官能化してメタクリレート−ＨＡ（ＨＡ−ＭＡ）を生成し、ＨＡをアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）で官能化してＨＡ−ＡＤＨを生成し、またはＨＡを乳酸で官能化してＭｅＬＡＨＡを生成し、もしくはカプロラクトンで官能化してＭｅＣＬＨＡを生成する。好ましくは、架橋剤分子は、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル（ＰＥＧＤＥ）である。装填ベシクルの存在下でのＰＥＧＤＥによるＨＡ−ＭＡの架橋により、本発明による、内部に分散された装填ベシクルを含むＨＡヒドロゲルが提供される。あるいは、装填ベシクルの存在下でのＰＥＧＤＥによるＨＡ−ＡＤＨの架橋により、本発明による、内部に分散された装填ベシクルを含むＨＡヒドロゲルが提供される。

あるいは、官能化ＨＡにおいて、官能化基（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｉｎｇ ｇｒｏｕｐ）は架橋剤である。好ましくは、官能化ＨＡは、ＨＡ−ＭＡまたはＨＡ−ＡＤＨから選択される。官能基ＭＡは、架橋剤として作用して、ＨＡ−ＭＡヒドロゲルを形成できる。官能基ＡＤＨは、架橋剤として作用して、ＨＡ−ＡＤＨヒドロゲルを形成できる。

好ましくは、ＨＡヒドロゲルは、ＨＡ−ＭＡヒドロゲル、ＨＡ−ＡＤＨヒドロゲル、ＰＥＧＤＥ架橋ＨＡ−ＡＤＨ−ヒドロゲル、ＰＧＤＥ架橋ＨＡ−ＭＡ−ヒドロゲルから選択される。

好ましくは、効果的に官能化されたＨＡの架橋剤（架橋剤は官能基自体ではない）に対するモル比は、１：２０〜１：１、好ましくは１：１０〜１：２、より好ましくは１：５〜１：２の範囲である。したがって、好ましくは、添加する架橋剤の量は、効果的に官能化されたＨＡのモル数の２〜１０倍である。例えば、ＨＡ−ＡＤＨ系などの系については、架橋剤（ＡＤＨ自体でない）を使用する。例えば、ＨＡ−ＡＤＨの場合は、架橋剤ＰＥＧＤＥを使用する。一般に、ＰＥＧＤＥは、効果的に官能化されたＨＡ−ＡＤＨのモル数の２〜１０倍の比で使用する。例えば、ＨＡ−ＡＤＨの官能化度が５０％である（すなわち、全ＨＡ分子の５０％がＡＤＨを有する）場合、この量の２〜１０倍のＰＥＧＤＥを添加できる。

第２の態様において、本発明は、本発明による内部に分散された装填ベシクルを含むＨＡヒドロゲルを調製するための方法に提供する。

この方法は、ａ）官能化ＨＡに、架橋剤に連結させるのに好適な官能基／部分を提供するステップと、ｂ）官能化ＨＡ部分を、場合によって架橋剤の存在下で架橋させるステップとを含み、該架橋は装填ベシクルの存在下で行われ、該架橋剤が存在しない場合にはＨＡ上の官能基／部分が架橋剤として作用する。好ましくは、官能化ＨＡは、ＨＡ−ＭＡまたはＨＡ−ＡＤＨから選択される。好ましくは、架橋剤はＰＥＧＤＥから選択される。好ましくは、官能基が架橋剤として作用する場合には、官能基はＭＡである。

本発明の方法によれば、装填ベシクルを官能化ＨＡと混合して、混合物を形成する。次いで、架橋剤を前記混合物に加え、架橋させて、内部に分散された装填ベシクルを含むＨＡヒドロゲルを生成する。あるいは、装填ベシクルを架橋剤と混合し、続いて官能化ＨＡを加える。

架橋剤を必要としない実施形態においては、ＨＡ官能化部分の官能基／部分が架橋剤として作用するので、官能化されたＨＡおよび装填ベシクルを含む混合物を架橋させる。官能化ＨＡは、凍結乾燥された官能化ＨＡとして、装填ベシクルを含む溶液に加えることができる。装填ベシクルを含む溶液中の官能化ＨＡの濃度は、好ましくは１％〜２０％（ｗ／ｖ）、より好ましくは２％〜４％（ｗ／ｖ）である。

架橋は、化学反応またはラジカル重合（架橋）、好ましくは光架橋である。好ましくは、光架橋は、場合によっては光重合開始剤の存在下において行われるＵＶ光架橋である。Ｉｒｇａｃｕｒｅ（登録商標） ２９５９などの開始剤を用いて、架橋を開始させる。開始剤の量は、官能化ＨＡの３％〜１５重量％、好ましくは官能化ＨＡの１０重量％である。例えば、ＨＡ−ＭＡを用いてＨＡ−ＭＡヒドロゲルを調製する場合には、開始剤の量は、ＨＡ−ＭＡの３％〜１５重量％、好ましくはＨＡ−ＭＡの１０重量％である。

第３の態様において、本発明は、本発明の方法のいずれかによって得ることができる、内部に分散された装填ベシクルを含むＨＡヒドロゲルを対象とする。

第４の態様において、本発明は、医薬品として使用するための、前記で定義した通りの、内部に分散された装填ベシクルを含むＨＡヒドロゲルを対象とする。

第５の態様において、本発明は、前記で定義した通りの、内部に分散された装填ベシクルを含むＨＡヒドロゲルを含む医薬製剤を対象とする。医薬製剤は、経口、局所、静脈内、皮下、眼内または筋肉内投与用である。

本発明は、詳細な説明を参照して、非限定的な実施例および添付図面と併せて考察すれば、よりよく理解されるであろう。

ＰＥＧ／ＰＰＧ／ＰＥＧブロックコポリマーのミセルの形成および疎水性薬物の装填のスキームを示す図である。 ＰＥＧ／ＰＬＡブロックコポリマーのミセルの形成および疎水性薬物の装填のスキームを示す図である。 リポソームの構成ブロックであるリン脂質構造を示す図である。 リポソームの断面図である。この図は、親水性薬物をリポソームのコアに装填できることおよび疎水性薬物がリポソームの二重層中に存在できることを示している。 ラタノプロスト（Ｌｔｐ）が卵リポソーム中に装填されている、および、装填されていないＨＡヒドロゲルにおけるＬｔｐ累積放出％を示すグラフである。 光架橋性ＨＡ−ＭＡを用いて、装填ベシクルが分散されたＨＡヒドロゲルを調製するための方法のスキームを示す図である。 ［Ｌｔｐが直接的に装填されている（ベシクルを含まない）ＨＡ−ＭＡヒドロゲル４％］対［本発明による、すなわち、Ｌｔｐが装填されたリポソームを含むＨＡ−ＭＡヒドロゲル４％］の１５日間にわたる薬物累積放出％を示すグラフである。 ５−ＦＵが装填されたＰＬＧＡミクロ粒子のＳＥＭ画像である。この図は、粒度および球形度を示している。 ＨＡヒドロゲル中のバッチ１０、１１および６のＰＬＧＡミクロ粒子からの５−ＦＵの放出プロフィールを示すグラフである。 １）ＨＡ−ＭＡ＋５ＦＵゾル、２）ＨＡ−ＭＡ＋５−ＦＵゲルおよび３）ＨＡ−ＭＡ＋ＰＬＧＡ／５ＦＵバッチ６ミクロ粒子の累積放出％の比較を示すグラフである。

本発明者らは、疎水性および／または親水性薬物またはタンパク質または核酸が装填されたベシクルをＨＡヒドロゲル中に組み込むことが、放出制御プロフィールを有する製剤を提供し、親水性／疎水性薬物またはタンパク質または核酸のヒドロゲル中への直接的な組み込みの欠点（それぞれ、速い放出および１日または２日以内での一気の放出）を示さないことを見出した。

有利なことに、本発明者らは、内部に分散された装填ベシクルを含むＨＡヒドロゲルが、薬物またはタンパク質または核酸がＨＡヒドロゲル中に直接的に装填されている系と比較した場合、および薬物またはタンパク質または核酸がベシクル中に装填されておりかつベシクルのみから放出される系（ＨＡヒドロゲルが存在しない）と比較した場合に、改善された放出制御プロフィールを有する系を提供することを発見した。

したがって、一態様において、本発明は、内部に分散された装填ベシクルを含むＨＡヒドロゲルであって、該ベシクルは１種もしくは複数の薬物、１種もしくは複数のタンパク質または１種もしくは複数の核酸が装填されているＨＡゲルを対象とする。

本明細書中で定義する「ベシクル」は、薬物／タンパク質／ペプチド／核酸を含有しかつ所望の生理的条件においてそれを放出することができる小胞／バブルである。好ましくは、本発明によるベシクルは、リポソームまたはミセルまたはナノ粒子およびミクロ粒子から選択される粒子から選択される。ベシクルは、疎水性もしくは親水性薬物、タンパク質、ペプチドまたは核酸が装填されるように調製する。好ましくは、装填ベシクルは、調製してから、ＨＡヒドロゲルに組み込む。

「ミセル」は、自己集合性両親媒性分子から作る。自己集合性両親媒性分子は、特定の濃度を超えた場合、自然発生的に独特の構造（ミセル）中に存在する。この濃度は、「臨界ミセル濃度」（ＣＭＣ）として知られている。自己集合性両親媒性分子は、例えば、ポリマーおよび界面活性剤であることができる。例としては、界面活性剤、例えば、Ｃ_１０−Ｃ_２２硫酸アルキル、Ｃ_１０−Ｃ_２２アルキルベタイン、Ｃ_１０−Ｃ_２２アルキルトリメチルアンモニウム塩およびＣ_１０−Ｃ_２２アルキルグルコシドならびにポリマー、好ましくはブロックコポリマー、例えば、ＰＬＧＡ（ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド））とＰＥＧ（ポリエチレングリコール）のコポリマー、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）とＰＥＧのコポリマー、ポリエチレングリコール−ポリ乳酸（ＰＥＧ／ＰＬＡ）のコポリマー、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）とポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）（ポリエチレンおよびポリプロピレンオキシドとしても知られている）のコポリマーが挙げられる。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）とポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）のコポリマーは、一般にＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）の商標名で販売されている。

前述の通り、自己集合性両親媒性分子、例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）の定義されている性質は、水溶液中で自己集合してミセルとなる、「ユニマー」と称する分子の能力である。これらの「ユニマー」は、ＣＭＣ未満の分子濃度では水中で分子分散液を形成する。ＣＭＣを超える濃度では、ユニマーは凝集して、「ミセル化」と称するプロセスによってミセルを形成する。例えば、ブロックコポリマーの場合には、ミセル化の駆動力は、疎水性ブロック（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）中のＰＯブロック）の疎水性相互作用である。疎水性ブロックは、親水性ブロック（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）中のＥＯブロック）の親水性コロナによって被覆されたミセルの内部コアへと自己集合する。Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）ミセルは、例えば、ＰＯコアおよびＥＯコロナによって構成される球体として図示されている（図１）。ラメラまたはロッドを含むさらなるミセル形態を形成できる。一般に、ミセルは、使用するブロックポリマーの型に応じて、異なる平均流体力学的径を有する。例えば、使用するＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）型に応じて、ミセルは２０〜約８０ｎｍの範囲の平均流体力学的径を有し得る。１つのミセルを形成するブロックポリマーの数を、「凝集数」と称する。

ミセルの中心は、疎水性である。図１で示すように、疎水性薬物または分子をこのようなポリマーに混入させる場合、薬物は疎水性コアに存在する。ミセル溶液の疎水性コア（例えばＰＯコア）への疎水性薬物の移動プロセスを、「可溶化」と称する。次いで、薬物送達メカニズムによって、薬物の放出が起こる。

ポリエチレングリコール−ポリ乳酸（ＰＥＧ／ＰＬＡ）コポリマーは、水溶液中でＣＭＣを超える濃度でミセルを形成するコポリマーの別の例である（図２）。本発明者らは、ＰＥＧ／ＰＬＡコポリマーが、疎水性薬物、例えば、パクリタキセルを組み込むミセルを形成できることを見出した。本発明者らは、より高レベルの放出制御および全薬物装填量を得るために、かなりの量のこのようなミセルをＨＡヒドロゲルに組み込み（約１０〜２０重量％）、それによって、薬物放出の持続時間を数日から数ヶ月まで延長することができることを見出した。

本発明の一態様において、ミセルは、自己集合性両親媒性分子から作る。自己集合性両親媒性分子は、界面活性剤、例えば、Ｃ_１０〜Ｃ_２２硫酸アルキル、Ｃ_１０〜Ｃ_２２アルキルベタイン、Ｃ_１０〜Ｃ_２２アルキルトリメチルアンモニウム塩およびＣ_１０〜Ｃ_２２アルキルグルコシドならびにポリマー、例えば、ブロックコポリマーから選択され得る。好ましくは、本発明による自己集合性両親媒性分子は、ブロックコポリマーである。好ましくは、自己集合性両親媒性分子は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）とポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）のコポリマー、例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）およびＰＥＧ／ＰＬＡから選択され、より好ましくは、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）はＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）１２７である。

「リポソーム」は、脂質二重層によって構成されるベシクルである。リポソームは、多くの場合、ホスファチジルコリンを多く含むリン脂質から構成される（図３）。親水性および疎水性のいずれの薬物も、リポソーム中に装填できる。疎水性薬物は、脂質ベシクルの二重層に組み込まれるのに対し、親水性薬物は、リポソームの「コア」に装填される（図３）。例えば、本発明者らは、リポソームのコアに親水性薬物である抗生物質シプロフロキサシンを組み込み、良好な装填量および放出制御を得た。このような装填リポソームをＨＡヒドロゲル前駆体と混合して架橋させた場合には、さらなる放出制御が達成された。加えて、本発明者らは、リポソーム二重層中に疎水性薬物、例えば、ラタノプロストを組み込んだ。装填リポソームをさらにＨＡヒドロゲル前駆体に組み込んでから、ＨＡヒドロゲルを架橋させた。ヒドロゲル前駆体に、ＨＡヒドロゲルを形成させた。ＨＡヒドロゲルへのリポソームの組み込みは、薬物の放出制御をさらに向上させた。

別の実施形態において、疎水性および親水性の両薬物を同一リポソーム中に装填することができる。疎水性薬物は、受動的装填（ｐａｓｓｉｖｅ ｌｏａｄｉｎｇ）によってリポソームの二重層部分に存在し、親水性薬物は、能動的装填（ａｃｔｉｖｅ ｌｏａｄｉｎｇ）によってリポソームのコアに存在する。

リポソームは好ましくは、ＥＰＣ（またはＥｇｇＰＣ）リポソーム、１−パルミトイル−２−オレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）をベースとするリポソームおよび１，２−ジミリストイル（ｄ５４）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）をベースとするリポソームから選択される。

本発明による粒子は、５ｎｍ〜５０μｍのサイズ（直径）範囲の非自己集合性粒子である。粒子は、それらのサイズ（直径）範囲に応じて、ナノ粒子またはミクロ粒子と定義される。一般に、ナノ粒子は、５ｎｍ〜２５０ｎｍのサイズ範囲を有する。ミクロ粒子は、２５０ｎｍより大きく５０μｍまでのサイズ範囲を有する。ナノ粒子およびミクロ粒子の調製は、薬物、好ましくは親水性薬物とアニオン種またはカチオン種との間で錯体を形成し、次いでナノ粒子を形成することによって行う。ナノ粒子およびミクロ粒子の調製に使用するアニオン種は、例えば、ポリスチレンスルホネートまたはポリアクリル酸であり、カチオン種は、例えば、キトサンである。

非限定的な例を挙げると、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）
などの薬物は、ＮＨ_４ＯＨに溶解し、高ｐＨにおいて陰イオンとして存在し、より低いｐＨでは陽イオンとして存在する。したがって、このような薬物は、低ｐＨではアニオン種（例えば、ポリスチレンスルホネートまたはポリアクリル酸）と錯形成して、純粋な薬物と比較してヒドロゲル中により効率的に装填され得る錯体を形成することができる。より高いｐＨでは、これらの薬物は、キトサンなどのカチオンと錯形成することができる。

したがって、親水性薬物に関しては、本発明は、例えばキトサンを用いた錯化薬物の調製を含む。キトサンを用いた錯化の後、ナノ粒子またはミクロ粒子を形成する。形成されたナノ粒子またはミクロ粒子を、架橋されるＨＡヒドロゲル前駆体中に混入させる。放出制御は、最適化される。キトサンナノ粒子またはミクロ粒子中に装填し得る薬物の種類としては、化学療法薬および抗瘢痕薬として使用される５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）が挙げられる。核酸、例えば、ｓｉＲＮＡ、プラスミドＤＮＡをナノ粒子またはミクロ粒子に装填できる。

本発明によるナノ粒子またはミクロ粒子はまた、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）−ナノ粒子（ＮＰ）またはＰＬＧＡ−ミクロ粒子（ＰＬＧＡ−ＭＰ）である。ＰＬＧＡ−ＮＰまたはＰＬＧＡ−ＭＰに、薬物またはタンパク質もしくはポリペプチドもしくは核酸を装填する。次いで、装填したＰＬＧＡ−ＮＰまたはＰＬＧＡ−ＭＰを、ＨＡヒドロゲル前駆体の重合によってＨＡヒドロゲルに埋め込む。ＰＬＧＡ−ＮＰまたはＰＬＧＡ−ＭＰは、ダブルエマルション溶媒蒸発（ｄｏｕｂｌｅ ｅｍｕｌｓｉｏｎ ｓｏｌｖｅｎｔ ｅｖａｐｏｒａｔｉｏｎ）によって調製できる。ダブルエマルション溶媒蒸発法は、開示されている（例えば、非特許文献１参照）。

本発明によるナノ粒子は、５ｎｍ〜２５０ｎｍ、好ましくは４０〜１００ｎｍの範囲の直径を有する。本発明によるミクロ粒子は、２５０ｎｍより大きく５０μｍまでの直径を有する。

ＨＡは、アニオン性の、硫酸化されていないグリコサミノグリカンである。本明細書中で定義する「ＨＡヒドロゲル」は、架橋ＨＡ網状組織である。架橋は好ましくは共有結合架橋である。すなわち、ＨＡは、共有結合によって架橋剤分子に結合することによって、ポリマー網状組織を生成する。ＨＡは、水に対する親和性を有する多数の親水性基を含有する。ＨＡヒドロゲルは、架橋剤によってＨＡ鎖間に結合が形成されるため、溶解することができない。したがって、ＨＡまたは化学的に修飾にされたＨＡは、重合（架橋結合）によってＨＡヒドロゲルを形成することができる。

ＨＡ分子は、架橋に好適な化学基によって架橋され得るカルボキシル基、アセトアミド基およびＯＨ基を有する。本発明によれば、官能化ＨＡは、「ＨＡヒドロゲル前駆体」である。架橋剤は、その他の「ＨＡヒドロゲル前駆体」である。官能化ＨＡが、場合によって架橋剤分子の存在下で、架橋される場合、官能化ＨＡはＨＡヒドロゲルを形成する。官能化ＨＡの例は、アジピン酸ジヒドラジドＨＡ（ＨＡ−ＡＤＨ）、メタクリル化ＨＡ（ＨＡ−ＭＡ）、チオール化ＨＡ（ＨＡ−ＳＨ）である。ＨＡ−ＡＤＨは合成でき、メタクリル酸無水物との反応によるＨＡ−ＭＡの調製に使用できる。ＨＡ−ＡＤＨは、Ｔｒａｕｔ試薬（イミノチオラン（ｉｍｍｉｎｏｔｈｉｏｌａｎｅ））との反応によるチオール化ＨＡ（ＨＡ−ＳＨ）の調製に使用できる。他の官能化ＨＡは、ＭｅＬＡＨＡおよびＭｅＣＬＨＡである。好ましい官能化ＨＡは、ＨＡ−ＭＡおよびＨＡ−ＡＤＨである。

「架橋剤」または架橋試薬／作用剤は、ＨＡまたは官能化ＨＡの特定の官能基に化学的に結合できる２つ以上の反応性末端を含有する分子である。本発明によるＨＡヒドロゲルの調製に使用できる架橋剤の非限定的例は、ブチレン（ｂｕｔｈｙｌｅｎｅ）グリコールジグリシジルエーテル（ＢＤＧ）、ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＧＥ）またはポリ（エチレングリコール）ジグリシジルエーテル（ＰＥＧＤＥ）である。好ましくは、架橋剤はＰＥＧＤＥ、より好ましくは式
［式中、ｎ＝１〜５０、好ましくはｎ＝３〜６］
のＰＥＧＤＥである。

官能化ＨＡは、架橋剤の存在下で架橋させることができる。本発明のこの実施形態の例示的な一例として、ＨＡ−ＡＤＨおよびＰＥＧＤＥまたはＨＡ−ＭＡおよびＰＥＧＤＥは、装填ベシクルの存在下で架橋させて、本発明のＨＡヒドロゲルを生成できる。官能化ＨＡは、装填ベシクルの存在下および架橋剤の非存在下で架橋させることができる。これは、架橋剤の非存在下でも官能基が架橋剤として作用するためである。本発明のこの実施形態の例示的な一例として、装填ベシクルの存在下で、ＨＡ−ＭＡを架橋させることができ、好ましくは光架橋させて、内部に装填ベシクルが分散されたＨＡヒドロゲル（ＨＡ−ＭＡヒドロゲル）を生成する。あるいは、本発明のこの実施形態の例示的な一例として、装填ベシクルの存在下で、ＨＡ−ＡＤＨを化学的に架橋させて、内部に装填ベシクルが分散されたＨＡヒドロゲル（ＨＡ−ＡＤＨヒドロゲル）を生成できる。

ＨＡヒドロゲル中の装填ベシクルの量は、ＨＡヒドロゲル系全体（ＨＡヒドロゲル＋装填ベシクル）の１〜６０重量％の範囲であることができる。好ましくは、装填ベシクルの量は、ＨＡヒドロゲル系全体の２〜３０重量％、より好ましくは、ＨＡヒドロゲル系全体の４〜２０重量％である。

ＨＡ主鎖の官能化率／官能化度は、官能化基によって異なり得る。典型的には、官能化率は、５〜８０％である（すなわち、ＨＡ分子の５〜８０％が官能化されている／官能基を有する）。ＨＡ−ＡＤＨの官能化度は好ましくは２０〜８０％であり、ＨＡ−ＭＡの官能化度は好ましくは５％〜２０％、より好ましくは１０％であり、ＨＡ−ＡＤＨの官能化度は好ましくは４５％〜５０％である。

したがって、本発明による用語「官能化ＨＡ」または「ＨＡ−ＡＤＨ」もしくは「ＨＡ−ＭＡ」などは、官能化されているＨＡと官能化されていないＨＡの両方を含むＨＡの組成物を示す。官能化度は、前記で開示したように百分率で示される。用語「効果的に官能化されたＨＡ」は、効果的に官能基を有する「官能化ＨＡ」の部分を指す。説明的な非限定的例として、５０％の官能化度を有するＨＡ−ＭＡは、ＨＡ分子の半分がＭＡで官能化されておりかつＨＡ分子の半分が官能化されていない組成物を意味する。ＨＡ分子の５０％は、ＭＡで効果的に官能化されている。さらなる説明的な非限定的例として、６０％の官能化度を有するＨＡ−ＭＡは、ＨＡ分子の６０％がＭＡで官能化されておりかつＨＡ分子の４０％が官能化されていない組成物を意味する。すなわち、ＨＡ分子の６０％は、ＭＡで「効果的に」官能化されている。

第２の態様において、本発明は、内部に装填ベシクルが分散されたＨＡヒドロゲルを調製するための方法を対象とする。この方法は、
ａ）官能化ＨＡに官能部分を提供するステップであって、該官能部分が架橋のためのものであるステップと、
ｂ）該官能化ＨＡを、場合によって架橋剤の存在下で架橋させるステップと
を含み、
該架橋が装填ベシクルの存在下で行われ、
架橋剤が存在しない場合には該官能部分が架橋剤として作用する。

官能化ＨＡは、ＨＡヒドロゲル前駆体である。本発明のこの方法において、官能化ＨＡは、ＨＡヒドロゲルの調製に好適な任意の官能化ＨＡであることができる。官能化ＨＡは、例えば、ＨＡ−ＭＡ、ＨＡ−ＡＤＨ、ＨＡ−ＳＨ、ＭｅＬＡＨＡおよびＭｅＣＬＨＡである。好ましくは、官能化ＨＡは、ＨＡ−ＡＤＨおよびＨＡ−ＭＡから選択される。

架橋剤分子は、ＨＡヒドロゲル前駆体である。「架橋剤」または「架橋試薬」は、ＨＡまたは官能化ＨＡの特定の官能基に化学的に結合できる２つ以上の反応性末端を含有する分子である。本発明によるＨＡヒドロゲルを調製するために使用できる架橋剤の非限定的な例は、ブチレングリコールジグリシジルエーテル（ＢＤＧ）、ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＧＥ）またはポリ（エチレングリコール）ジグリシジルエーテル（ＰＥＧＤＥ）である。架橋剤は、好ましくはＰＥＧＤＥ、より好ましくは式
［式中、ｎ＝５０〜４００、ｎ＝１〜５０、好ましくはｎ＝３〜６］
のＰＥＧＤＥである。

前記で開示した、薬物またはタンパク質もしくはペプチドもしくは核酸が装填されたベシクル、例えば、ミセル、リポソームならびにナノ粒子およびミクロ粒子から選択される粒子は、本発明の方法において、内部に分散された装填ベシクルを含むＨＡヒドロゲルを調製するのに使用する。

架橋反応は，例えば縮合もしくは付加反応による化学架橋、または重合（架橋）が何らかの開始剤源、例えば、光、温度もしくは酸化還元反応によるラジカルの形成を伴うラジカル重合であることができる。好ましくは、ラジカル重合（架橋）は、光重合（光架橋）によって行われる。典型的には、光架橋にはＵＶ照射を使用する。典型的には、光架橋によってＨＡヒドロゲルを形成する場合には、光重合開始剤、例えば、Ｉｒｇａｃｕｒｅ（登録商標） ２９５９が、ＨＡヒドロゲル前駆体および装填ベシクルを含有する溶液中に存在する。

アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）を用いたＨＡのＯＨ基のアルデヒドへの変換、それに続く、エチレンジカルボジイミド（ＥＤＣ）との反応による、ＨＡ主鎖中における反応性官能基（ＨＡ−ＡＤＨ）の生成を、本発明の方法において使用できる。その場合、下記スキーム
に従って、架橋剤、例えば、ＰＥＤＧＥの存在下での架橋によって、ヒドロゲルを形成する。

ゲル前駆体（この場合、ＨＡ−ＡＤＨおよびＰＥＧＤＥ）は、前記で開示した装填ベシクル、例えば、装填リポソーム／装填ミセル／装填ナノ粒子と混合し、次いで架橋させることができる。架橋プロセスは、化学架橋または光架橋によって行う。架橋プロセスは、任意の好適な温度で行う。好ましくは、これは周囲温度で行う。好ましくは、これは、２０℃〜２５℃の範囲の温度で行う。この特徴の利点は、ベシクル中に装填されたタンパク質／核酸を変性させないことである。

本発明によるベシクルは、前記で開示した、リポソーム、ミセル、好ましくは自己集合性両親媒性分子からなるミセルまたはナノ粒子およびミクロ粒子から選択される粒子であることができる。

装填ベシクルは、溶液または懸濁液で提供できる。溶媒は、ベシクルに応じて選択し得る。溶媒は、例えば、水またはエタノールであることができる。好ましくは、溶媒は水である。

本発明に従って使用するＨＡは、ヒドロゲルを形成するのに好適な形態のＨＡである。これは、ＨＡヒドロゲル前駆体と称することができる。したがって、ＨＡヒドロゲル前駆体は、官能化ＨＡであることができる。一態様において、本発明の方法には、架橋させるために官能化された任意のＨＡを使用できる。好ましくは、ＨＡ−ＡＤＨ、ＨＡ−ＭＡ、ＨＡ−ＳＨを本発明の方法において使用する。架橋可能な官能化ＨＡを、凍結乾燥された官能化ＨＡとしてまたは溶液として、装填ベシクルの溶液／懸濁液に加えることができる。

ＨＡヒドロゲルの調製に好適な架橋剤を、装填ベシクルおよび官能化ＨＡを含有する溶液／懸濁液に加えてもよい。本発明の方法は、ＨＡヒドロゲルの調製に好適な任意の架橋剤の使用を想定する。好ましい架橋剤は、ブチレングリコールジグリシジルエーテル（ＢＤＧ）、ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＧＥ）またはポリ（エチレングリコール）ジグリシジルエーテル（ＰＥＤＧＥ）である。より好ましい架橋剤は、ＰＥＧＤＥである。

装填ベシクルを含む溶液／懸濁液をＨＡヒドロゲル前駆体と混合するとすぐに、架橋反応が引き起こされる。架橋反応は、化学架橋反応、例えば、縮合もしくは付加反応またはラジカル重合（架橋）であることができる。ラジカル重合は、光（光架橋）、温度または酸化還元反応によって開始させることができ、好ましくはラジカル重合は光架橋である。好ましくは、光架橋はＵＶ架橋反応である。

典型的には、ＰＥＤＧＥおよびＨＡ−ＡＤＨの存在下でのＨＡヒドロゲルの調製は、化学架橋反応である。典型的には、ＨＡ−ＭＡの存在下かつさらなる架橋剤の非存在下でのＨＡヒドロゲルの調製は、光架橋反応による。光架橋は、光重合開始剤の存在を必要とする場合がある。光重合開始剤をＨＡ−ヒドロゲル前駆体と混合してから、装填ベシクルの溶液／懸濁液に加えてもよい。あるいは、ＨＡヒドロゲル前駆体および光重合開始剤を、装填ベシクルを含む溶液に逐次的にまたは同時に加えてもよい。次いで、装填ベシクル、ＨＡヒドロゲル前駆体および光重合開始剤を含む溶液／懸濁液を好適な照射に曝露することによって、光架橋反応を開始させる。本発明による光重合開始剤は、好ましくは式
のＩｒｇａｃｕｒｅ（登録商標） ２９５９である。

ＨＡ−ＭＡを用いた光架橋性ＨＡヒドロゲルの調製の例示的なスキームを、図５に報告する。

投与方法
本発明のＨＡヒドロゲルを含む医薬製剤は、投与方法に応じて好適な賦形剤を用いて適宜に調製することができる。好適な医薬製剤は、錠剤、カプセル剤、液剤、例えば、注射剤、懸濁剤、クリーム剤の形態であることができる。

前述のＨＡヒドロゲル製剤は、注射によって、より特定すると皮下注射、皮内注射、眼内注射もしくは筋肉内注射によって、経口的にまたは局所的に投与することができる。これらはまた、がんの治療において局所的に（例えば、脊椎内または腫瘍内）送達することができる。本発明のＨＡヒドロゲルは、有効量の薬物、タンパク質またはペプチドまたは核酸を含有する。正確な投与量は、患者因子、例えば、年齢、性別、全身状態などによって異なる。当業者ならば、これらの因子を考慮に入れ、過度の実験に頼らずにこれらを使用して有効治療濃度を確定することが容易であり得る。

本発明によるＨＡヒドロゲルは、有利なことに、その場で調製できる。換言すれば、架橋は、対象部位へのヒドロゲルの適用直前に行うことができる。

前記で開示した、本発明によるヒアルロン酸（ＨＡ）ヒドロゲルは、眼科（例えば、緑内障、角膜疾患、炎症性眼疾患、網膜硝子体疾患および内科的網膜疾患）および皮膚科的状態を含むがこれらに限定されない、いくつかの臨床および手術用途のための、薬物またはタンパク質もしくはペプチドもしくは核酸を制御された速度で送達する。

定義
本明細書中で使用する用語「Ｃ_１０〜Ｃ_２２アルキル」は、１０〜２２個の炭素原子をそれぞれ含む飽和、直鎖または分枝鎖炭化水素基などを指す。Ｃ_１０〜Ｃ_２２アルキル基の例としては、Ｃ_１０アルキル基、Ｃ_１２アルキル基、例えば、ラウリル基、Ｃ_１４アルキル基、Ｃ_１６アルキル基が挙げられるが、これらに限定するものではない。

ラタノプロスト装填リポソームの調製：抗緑内障薬ラタノプロスト（Ｌｔｐ）の放出持続時間の延長
Ｌｔｐは、疎水性薬物である。Ｌｔｐ装填ＥＰＣリポソームを作るために、濃度０．５ｍＭのＬｔｐおよび１０ｍｍ ＥＰＣを、丸底フラスコ中でクロロホルム：メタノールの２：１（ｖ／ｖ）の比の混合溶媒に溶解させた（薬物対脂質比０．０５）。薬物−脂質溶液を手動で混合し、水浴中で４０℃に保持されたロータリーエバポレーターを用いて２時間かけてフラスコから溶媒を除去した。薄い乾燥した薬物−脂質フィルムが得られた。このフィルムを、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）緩衝液を用いて水和させた。このフィルムを、６０℃に保持された水浴中で１０〜１５分間手動で振盪することによって、完全に水和させて、多重膜ベシクル（ＭＬＶ）を形成した。ＭＬＶ懸濁液を、卓上押出機に装着されたサイズ０．２μｍおよび０．０８μｍのポリカーボネートフィルターに通して１５回押出して、ＥＰＣの大きいＬｔｐ装填単層膜ベシクル（ＬＵＶ）（サイズ約１００ｎｍ）を得た。

メタクリレートＨＡ（ＨＡ−ＭＡ）＋Ｌｔｐ装填ＥＰＣ溶液の調製
凍結乾燥ＨＡ−ＭＡ ２０ｍｇまたは４０ｍｇを取り、Ｌｔｐ装填ＥＰＣリポソーム懸濁液１ｍｌ中に直接的に溶解させ、室温で終夜撹拌して、それぞれ２％（ｗ／ｖ）または４％のＨＡ−ＭＡ溶液を調製した。

アジピン酸ジヒドラジドＨＡ（ＨＡ−ＡＤＨ）＋Ｌｔｐ装填ＥＰＣ溶液の調製
凍結乾燥ＨＡ−ＡＤＨ ４０ｍｇを取り、Ｌｔｐ装填ＥＰＣリポソーム懸濁液１ｍｌ中に直接的に溶解させ、室温で終夜撹拌して、４％（ｗ／ｖ）のＨＡ−ＡＤＨ溶液を調製した。

向イオン性ゲル化（ｉｏｎｏｔｒｏｐｉｃ ｇｅｌａｔｉｏｎ）によるキトサン／５−ＦＵナノ粒子の調製
材料： キトサン１００ｋＤａ（ＵＳ試料）、キトサン（Ｓｉｇｍａ：２０〜２００ｃｐ）、トリポリリン酸ナトリウム（ＴＰＰ）、親水性薬物（５−ＦＵ）

装置： ＩＫＡオーバーヘッドスターラー、磁気撹拌機、熱遠心分離機、超遠心機

プロトコールＩ：
§ １％酢酸中１ｍｇ／ｍＬキトサン−５ＦＵ（親水性薬物）溶液を調製し、０．２２μｍフィルターを用いて濾過する（１００ｍＬ）
§ 超純水中トリフェニルホスフィン（ＴＰＰ）濃度０．５ｍｇ／ｍＬを調製し、０．２２μｍフィルターを用いて濾過する（５０ｍＬ）
§ ５Ｍ ＮａＯＨを加えることによって、キトサン溶液のｐＨを４．６〜４．８に調整する
§ ＩＫＡオーバーヘッドスターラーを用いて１２００ｒｐｍで撹拌しながらＴＰＰ溶液をキトサン溶液に３０分かけて滴加し、撹拌を３０分間続ける
§ 溶液を２５０００ｒｐｍで遠心分離し、ペレットを再分散させ、Ｍａｌｖｅｒｎゼータサイザーを用いてサイズを測定する

観察： 前記プロトコールに従って調製した全てのバッチにおいて、約９０％の粒子が５０〜１４０ｎｍのサイズ範囲を有する。

Ｌｔｐ−ＥｇｇＰＣリポソーム化学架橋ありおよび架橋なしＨＡヒドロゲル
ＥｇｇＰＣは、リポソームを形成する脂質である。ラタノプロスト（Ｌｔｐ）は、文献に記載されている標準的な方法を用いてｅｇｇＰＣ中に装填した。次いで、これらのリポソームをＨＡ−ＡＤＨおよびエポキシ架橋剤ＰＥＧＤＥと混合し、終夜放置した。次いで、ラタノプロストの放出を定量化した。ラタノプロスト（リポソームなし）が装填されたＨＡヒドロゲルを調製した。次いで、ラタノプロストの放出を定量化した。

リポソーム含有または非含有ＨＡ−ヒドロゲルからのＬｔｐ累積放出を測定した。結果を、図４に報告する。

ラタノプロスト装填リポソームが、ヒドロゲル中に直接的に分散された薬物よりも薬物を緩やかに放出するのは明らかである。

５−ＦＵの結膜（ｓｕｂ−ｃｏｎｊｕｎｔｉｖａｌ）放出制御のための、ＰＬＧＡミクロ粒子をベースとする系
５−ＦＵが装填されたＰＬＧＡミクロ粒子を、ダブルエマルション技術によって調製した。次いで、ミクロ粒子を凍結乾燥し、ＨＡ前駆体溶液（ＨＡ−ＭＡ）中に分散させた。Ｉｒｇａｃｕｒｅ（登録商標）を開始剤として使用した。続いて、ＵＶ架橋を行って、内部に５−ＦＵ装填ＰＬＧＡミクロ粒子が分散されているＨＡヒドロゲルを生成した。バッチ製剤を、表１に開示する。

図７は、得られたミクロ粒子のＳＥＭ画像を示している。

図８は、１５日の期間にわたる３つのバッチの放出プロフィールを示すものである。

次に、バッチ６のヒドロゲルを、ＨＡ−ＭＡヒドロゲル（５−ＦＵなし／粒子なし）中に分散された５−ＦＵおよびＨＡ−ＭＡゾル中に分散された５−ＦＵの製剤と比較した。５−ＦＵが装填されたＰＬＧＡミクロ粒子の組み込みによって薬物の放出が遅延されることが、明らかに認められる（図９）。特に、図９は、ゾル（架橋なし）中に装填された場合または架橋ゲルからは、５−ＦＵが２〜３日で完全に放出されることを示している。

ＵＶ架橋性ヒドロゲル
疎水性薬物をゲル中に組み込んでから架橋させ、この放出プロフィールを測定した。加えて、同一の疎水性薬物を含有するリポソームもまた、ゲル前駆体中に組み込んでから架橋させ、結果としての放出プロフィールもまた、定量化した。特に、ラタノプロストを薬物として使用し、ＨＡ−ＭＡをＨＡ官能化部分として使用した。ヒドロゲルは、４％（ｗ／ｖ）ＨＡ−ＭＡヒドロゲルである。データを図６に示す。

ヒドロゲル中へのリポソームの組み込みは、薬物の放出を遅延させ、かつ２週間にわたってほぼ直線的な（理想的な）放出プロフィールをもたらすことが明らかに認められる。この原理は、最初にリポソーム／ミセル中に、次いでヒドロゲル中に組み込まれる疎水性薬物に適用できる。

本明細書中に例示的に記載した本発明は、本明細書中に特には開示されていない要素、限定がなくても好適に実施できる。したがって、例えば、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」などは、発展的にかつ制限することなく、解釈すべきである。加えて、本明細書中で使用する用語および表現は、説明の用語として使用するのであって、限定の用語として使用するものではなく、このような用語および表現の使用に、示しかつ記載した特徴またはその部分の均等物を排除する意図はなく、特許請求の範囲に記載した本発明の範囲内で、種々の変更形態が可能なことが認識される。したがって、本発明を例示的な実施形態ならびに場合による特徴によって特に開示したが、当業者ならば、本明細書中に開示した、本明細書中で具体化された本発明の変更形態および変形形態を行うことができること、ならびにこのような変更形態および変形形態を本発明の範囲内とみなすべきことを、理解すべきである。

本発明は、本明細書中に広範にかつ包括的に記載した。包括的開示に含まれる狭義の種および下位概念の分類のそれぞれも、本発明の一部を形成する。これは、本発明の包括的な説明を、削除される材料が本明細書中に特に列挙されているか否かに関わらず類概念から何らかの対象を除去する条件および否定的な限定と共に含む。

他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内である。加えて、本発明の特徴または態様をマーカッシュ群によって記載する場合、当業者ならば、本発明がそれによって、マーカッシュ群のいずれかの個々の構成要素または下位群の構成要素によって記載されることがわかるであろう。

Claims (29)

1. 内部に分散された装填ベシクルを含むヒアルロン酸（ＨＡ）ヒドロゲルであって、該装填ベシクルは１種もしくは複数の薬物、１種もしくは複数のタンパク質または１種もしくは複数の核酸が装填されているＨＡヒドロゲル。
2. 前記装填ベシクルが、ミセル、リポソームおよび／またはナノ粒子もしくはミクロ粒子から選択される粒子から選択される、請求項１に記載のＨＡヒドロゲル。
3. 前記ミセルが、両親媒性自己集合性分子から作られている、請求項１または２に記載のＨＡヒドロゲル。
4. 前記ベシクルがリポソームである、請求項１または２に記載のＨＡヒドロゲル。
5. 前記自己集合性分子が、ポリマーおよび界面活性剤、好ましくはブロックコポリマー、より好ましくはＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）ブロックコポリマーから選択される、請求項１から４のいずれか一項に記載のＨＡヒドロゲル。
6. 前記粒子が、キトサンナノ粒子、キトサンミクロ粒子、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）ナノ粒子およびポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）ミクロ粒子から選択される、請求項１から５のいずれか一項に記載のＨＡヒドロゲル。
7. 前記薬物が、疎水性または親水性薬物から選択され、好ましくは抗生物質、化学療法薬、緑内障または高眼圧の治療のための薬物、例えば、ラタノプロストまたは５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）から選択され、前記タンパク質が、治療用ペプチドもしくはタンパク質またはモノクローナル抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、例えば、ベバシズマブおよびラニビズマブから選択され、前記核酸が、ｓｉＲＮＡおよびプラスミドＤＮＡから選択される、請求項１から６のいずれか一項に記載のＨＡヒドロゲル。
8. 共有結合によって架橋されたヒドロゲルである、請求項１から７のいずれか一項に記載のＨＡヒドロゲル。
9. 前記ヒドロゲルにおいて、
   ａ）架橋のために官能化された官能化ＨＡが、架橋剤によって相互に結合されている、または
   ｂ）官能化ＨＡで、官能化基が架橋剤である、
   請求項１から８のいずれか一項に記載のＨＡヒドロゲル。
10. 前記官能化ＨＡが、メタクリレート−ＨＡ（ＨＡ−ＭＡ）またはアジピン酸ジヒドラジドＨＡ（ＨＡ−ＡＤＨ）から選択される、請求項１から９のいずれか一項に記載のＨＡヒドロゲル。
11. 前記架橋剤が、ポリ（エチレングリコール）ジグリシジルエーテル（ＰＥＧＤＥ）である、請求項１から１０のいずれか一項に記載のＨＡヒドロゲル。
12. ＨＡ−ＭＡヒドロゲル、ＨＡ−ＡＤＨヒドロゲル、ＰＥＧＤＥ架橋ＨＡ−ＡＤＨ−ヒドロゲル、ＰＥＧＤＥ架橋ＨＡ−ＭＡ−ヒドロゲルから選択される、請求項１から１０のいずれか一項に記載のＨＡヒドロゲル。
13. 前記ＨＡヒドロゲル中に分散された装填ベシクルの量が、全ＨＡヒドロゲルの１〜４０重量％である、請求項１から１２のいずれか一項に記載のＨＡヒドロゲル。
14. 前記ａ）における前記架橋剤のモル数が、効果的に官能化されたＨＡのモル数の２〜１０倍である、請求項９に記載のＨＡヒドロゲル。
15. 前記装填ベシクルが、５−ＦＵが装填されたＰＧＬＡナノ粒子、５−ＦＵが装填されたＰＧＬＡミクロ粒子、またはラタノプロストが装填されたＥｇｇＰＣリポソーム、５−ＦＵが装填されたキトサンナノ粒子、５−ＦＵが装填されたキトサンミクロ粒子、パクリタキセルが装填されたＰＥＧ／ＰＬＡミセル、ドキソルビシンが装填されたリポソーム、ｓｉＲＮＡが装填されたリポソーム、プラスミドＤＮＡが装填されたリポソームから選択される、請求項１から１４のいずれか一項に記載のＨＡヒドロゲル。
16. 請求項１から１５のいずれか一項に記載のＨＡヒドロゲルを調製するための方法であって、
    ａ）官能化ＨＡに官能部分を提供するステップであり、該官能部分が架橋のためのものであるステップと、
    ｂ）該官能化ＨＡを、場合によって架橋剤の存在下で架橋させるステップと
    を含み、
    該架橋が装填ベシクルの存在下で行われ、
    架橋剤が存在しない場合には該官能部分が架橋剤として作用する、
    方法。
17. 前記官能化ＨＡが、ＨＡ−ＭＡまたはＨＡ−ＡＤＨから選択される、請求項１６に記載の方法。
18. 前記架橋剤がＰＥＧＤＥから選択される、請求項１６または１７に記載の方法。
19. 前記装填ベシクルを前記官能化ＨＡと混合して混合物を形成し、次いで該混合物に前記架橋剤を加える、請求項１６から１８のいずれか一項に記載の方法。
20. 前記官能化ＨＡが、凍結乾燥されたＨＡ−ＭＡである、請求項１９に記載の方法。
21. 効果的に官能化されたＨＡと前記架橋剤が、１：１〜１：２０の比で存在する、請求項１６から２０のいずれか一項に記載の方法。
22. 前記架橋が、２０℃〜２５℃で行われる、請求項１６から２１のいずれか一項に記載の方法。
23. 前記架橋が光架橋である、請求項１６から２２のいずれか一項に記載の方法。
24. 前記光架橋がＵＶ光架橋である、請求項２３に記載の方法。
25. 請求項１６から２４のいずれか一項に記載の方法によって得ることができる、内部に分散された装填ベシクルを含むＨＡヒドロゲル。
26. 医薬品として使用するための、請求項１〜１５および２５のいずれか一項に記載の内部に分散された装填ベシクルを含むＨＡヒドロゲル。
27. 請求項１〜１５ならびに２５および２６のいずれか一項に記載のＨＡヒドロゲルを含む医薬製剤。
28. 経口、局所、静脈内、皮下または筋肉内投与のための、請求項２７に記載の医薬製剤。
29. 前記官能化ＨＡが、５〜８０％の範囲の官能化度を有する、請求項１６から２５のいずれか一項に記載の方法。