JP2015513360A - 化合物ｊｋ１２ａ及びその製造 - Google Patents

化合物ｊｋ１２ａ及びその製造 Download PDF

Info

Publication number
JP2015513360A
JP2015513360A JP2015504854A JP2015504854A JP2015513360A JP 2015513360 A JP2015513360 A JP 2015513360A JP 2015504854 A JP2015504854 A JP 2015504854A JP 2015504854 A JP2015504854 A JP 2015504854A JP 2015513360 A JP2015513360 A JP 2015513360A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
acid
jk12a
compound
crystal
base
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP2015504854A
Other languages
English (en)
Other versions
JP5925381B2 (ja
Inventor
成永之
成志
周敏
王兆俊
李慧珍
▲範聖剛▼
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
LIANYUNGANG JINKANG HEXIN PHARMACEUTICAL Co Ltd
Original Assignee
LIANYUNGANG JINKANG HEXIN PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by LIANYUNGANG JINKANG HEXIN PHARMACEUTICAL Co Ltd filed Critical LIANYUNGANG JINKANG HEXIN PHARMACEUTICAL Co Ltd
Publication of JP2015513360A publication Critical patent/JP2015513360A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP5925381B2 publication Critical patent/JP5925381B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/12—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D487/20—Spiro-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D475/00—Heterocyclic compounds containing pteridine ring systems
    • C07D475/02—Heterocyclic compounds containing pteridine ring systems with an oxygen atom directly attached in position 4
    • C07D475/04—Heterocyclic compounds containing pteridine ring systems with an oxygen atom directly attached in position 4 with a nitrogen atom directly attached in position 2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/12—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D487/18—Bridged systems

Abstract

本発明は一般式Ｉの構造を有する、略称はＪＫ１２Ａである化合物［４−（２−アミドゲン−１０−メチル−４−オキシ−６，７，８，９−テトラヒ−４Ａ，７−エピミノピリミド［４，５−Ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（４Ｈ）−イル）ベンゾイル］−グルタメートに関する。本発明はさらに化合物ＪＫ１２Ａの結晶形と塩、及びその製造方法と用途に関する。本発明の化合物ＪＫ１２Ａは薬物活性成分とする薬物或いは食品添加物の製造に用いることができる。【化１】【選択図】図１１

Description

本発明は複素環式化合物分野（Ｃ０７ｄ）に属し、その中で、前記複素環式化合物は二つ以上の複素環を含み、かつ一つの環システムにおける窒素のみは複素環原子とし、その中少なくとも一つの６価の環は少なくとも一つの窒素原子を有する（４７１／００）。具体的には、本発明は化合物［４−（２−アミドゲン−１０−メチル−４−オキシ−６，７，８，９−テトラヒ−４Ａ，７−エピミノピリミド［４，５−Ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（４Ｈ）−イル）ベンゾイル］−グルタメート及びその結晶形、並びにその製造方法及び応用に関する。
トリアザビシクロ［３，２，１］オクタン構成を有する化合物は、その独特な分子構成により、化学者及び医療関係者の間で注目されている。
ＡｐｌＡｍｉｎＡｌは初めて発見されたトリアザビシクロ［３，２，１］オクタン機構を有する化合物であり、当該化合物は、最初、２００８年にＴａｋｅｓｈｉ Ｋｕｒｏｄａ と Ｈｉｄｅｏ Ｋｉｇｏｓｈｉらによりアメフラシから分離・精製された（非特許文献１）。具体的な構造は以下のとおりである。
当該文献はＡｐｌＡｍｉｎＡｌの構造に対して行うＮＭＲ及び単結晶Ｘ−回折キャラクタリゼーションである。レポートによるとＡｐｌＡｍｉｎＡｌは抗ＨｅＬＡ Ｓ３細胞毒性（ＩＣ５０＝ ０．５１ μｇ／ｍＬ）を有し、その更なる臨床試験は未だ研究中である。
生物抽出でＡｐｌＡｍｉｎＡｌを製造するコストは非常に高い。また、収率は非常に低く、１８ｋｇアメフラシの中に２ｍｇのＡｐｌＡｍｉｎＡｌしか抽出できないため、Ａｍｏｓ Ｂ． Ｓｍｉｔｈ ＩＩＩ と Ｚｈｕｑｉｎｇ Ｌｉｕらは、人工合成法を通じて、Ｎ−ＢｏＣ−（ｄ）−セリンを原料とし、水酸基保護、化学縮合、還元等９つの反応を通じてＡｐｌＡｍｉｎＡｌを収率は１７％で得た（非特許文献２）。具体的な反応過程は以下のとおりである。
しかし、トリアザビシクロ［３，２，１］オクタン構造を有する化合物を人工合成することは同じく困難であり、上記ＡｐｌＡｍｉｎＡｌを合成する方法は、反応ステップが冗長であり、水素化ジイソブチルアルミニウム（ＤＩＢＡＬ−Ｈ）、パラジウム及びプラチナのような高価な試薬が必要であり、中間プロセスをコントロールしにくく、また、安全性が低く、収率が低く、工業化生産にも適しない。
現在、他のトリアザビシクロ式化合物のレポートも少なくない。特許文献１が開示する薬物組成物は５，７，１４−トリニトルヘテロテトラシクロ［１０．３．１．０（２，１１）．０（４，９）］−ヘキサデセン−２（１１）３，５，７，９−ペンタエンである。特許文献２は１１−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１４，１９−ジオキサ−５，７，２６−トリニトルヘテロテトラシクロ［１９．３．１．１（２，６）．１（８，１２）］ヘプタコサン−１（２５），２（２６），３，５，８，１０，１２（２７），１６，２１，２３−デシンクエン酸塩を開示している。特許文献３は５，８，１４−トリニトルヘテロテトラシクロ［１０．３．１．０２，１１．０４，９］−ヘクサデカ−２（１１），３，５，７，９−ペンタエンのクエン酸塩を開示している。特許文献４は５，８，１４−トリニトルヘテロテトラシクロ［１０．３．１．０２，１１．０４，９］−ヘクサデカ−２（１１），３，５，７，９，−ペンタエンの酒石酸塩を開示している。特許文献５は５，８，１４−トリニトルヘテロテトラシクロ［１０．３．１．０．２，１０．０４，８）−ヘクサデカ−２（１１），３，５，７，９−ペンタエンのコハク酸塩及びその薬用組成物を開示している。これら特許文献はすべてトリニトルヘテロテトラシクロの化学構造を開示している。
本発明者は鋭意研究を行い、意外にも、簡単であって、実現可能かつ経済的な方法を開発し、５−メチルテトラヒ葉酸を原料としてトリアザビシクロ［３，２，１］オクタン構造の新規化合物の製造に成功した。当該化合物はＴリンパ細胞増殖に対して著しい抑制作用を有する。
中国特許出願公開第１８６４６６３号明細書 中国特許出願公開第１０２２８２１４８Ａ号明細書 中国特許出願公開第１５０９２８８号明細書 中国特許出願公開第１５０９１７４号明細書 中国特許出願公開第１５８９１４８号明細書 中国特許出願公開第１１２２３３７Ａ号明細書 中国特許出願第９２１００２４７．５号明細書 中国特許出願第２００９１０１３４４７４．４号明細書 中国特許出願第２００６１００４１５４１．４号明細書 中国特許出願第００１０８８８４．Ｘ号明細書 ギリシャ国特許出願公開第３０２９５５２Ｔ３号明細書
Ｏｒｇ． Ｌｅｔｔ．， Ｖｏｌ． １０， Ｎｏ． ３， ｐ４８９−４９１ ，２００８ Ｏｒｇ． Ｌｅｔｔ．， Ｖｏｌ． １０， Ｎｏ． １９， ｐ４３６３−４３６５ ，２００８
本発明の第一目的は、新規にトリアザビシクロ［３，２，１］オクタン構造の化合物を提供し、かつその構造に対して特徴づけ、その化学名称は［４−（２−アミドゲン−１０−メチル−４−オキシ−６，７，８，９−テトラヒ−４Ａ，７−エピミノピリミド［４，５−Ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（４Ｈ）−イル）ベンゾイル］−グルタメートであり、以下はＪＫ１２Ａと略称する。
本発明の第二目的は上記化合物ＪＫ１２Ａの結晶形を提供する。
本発明の第三目的は上記化合物ＪＫ１２Ａの製造方法を提供する。
本発明の第四目的は上記化合物ＪＫ１２Ａの応用を提供する。
そのために、本発明は化合物ＪＫ１２Ａを提供し、下式の構造：
或いは前記化合物ＪＫ１２Ａの立体異性体を有する。
本発明は前記化合物ＪＫ１２Ａの結晶体を提供する。
本発明は、前記本発明提供の所述の化合物ＪＫ１２Ａの薬学的に許容可能な塩或いは当該塩の立体異性体である。前記の塩は結晶塩である。
本発明はさらに前記の化合物ＪＫ１２ＡのＩ結晶形を提供し、Ｃｕ−Ｋα輻射を使用し、そのＸ線回折図は、度で示される２θ角が１３．３±０．２、１４．０±０．２、１６．９±０．２、１９．１±０．２、２４．４±０．２、２７．６±０．２である場所に回折ピークがある。
さらに、本発明は前記の化合物ＪＫ１２ＡのＩ結晶形を提供し、Ｃｕ−Ｋα輻射を使用し、そのＸ線回折図は、度で示される２θ角が１３．３、１４．０、１６．９、１９．１、２４．４、２７．６である場所に一番多い回折ピークを有する。化合物ＪＫ１２ＡのＩ結晶形の更なるＸ線回折図は、ほぼ図１１に示すような図形である。
本発明はさらに前記の化合物ＪＫ１２ＡのＩＩ結晶形を提供し、Ｃｕ−Ｋα輻射を使用し、そのＸ線回折図は、度で示される２θ角が６．８±０．２、１２．２±０．２、１３．７±０．２、１５．９±０．２、１８．４±０．２、２３．０±０．２である場所に回折ピークがある。
さらに、本発明は化合物ＪＫ１２ＡのＩＩ結晶形を提供し、Ｃｕ−Ｋα輻射を使用し、そのＸ線回折図は、度で示される２θ角が６．８、１２．２、１３．７、１５．９、１８．４、２３．０である場所に一番多い回折ピークを有する。化合物ＪＫ１２ＡのＩＩ結晶形の更なるＸ線回折図は、ほぼ図１２の示すような図形である。
本発明は前記の化合物ＪＫ１２Ａの製造方法を提供し、当該方法は５−メチルテトラヒ葉酸に対して酸化するステップを含む。
本発明は前記の化合物ＪＫ１２Ａの結晶体のＩ結晶形の製造方法を提供し、以下のステップを含む：
ａ）前記５−メチルテトラヒ葉酸を極性媒体に添加するステップ；
ｂ）塩基でｐＨを６〜８程度に調節するステップ；
ｃ）酸化剤を添加し、攪拌するステップ；
ｄ）酸でｐＨを３〜５程度に調節するステップ；
ｅ）結晶体を析出させるステップ。
本発明はさらに化合物ＪＫ１２Ａの結晶体のＩＩ結晶形の製造方法を提供し、当該方法は前記化合物ＪＫ１２Ａを極性媒体における超音波でｐＨ≧３状態に結晶させることを含む。前記極性媒体は水或いは水と混融できる有機溶剤の混合物である。
さらに、本発明は化合物ＪＫ１２ＡのＩＩ結晶形の製造方法を提供し、以下のステップを含む：
ａ）前記化合物ＪＫ１２Ａを取り、極性媒体に添加するステップ；
ｂ）塩基でｐＨを６〜１０程度に固体が溶解するまでに調節するステップ；
ｃ）超音波処理をし、かつ酸でｐＨを３〜６程度に調節し、結晶体を析出させるステップ。
上記方法を通じて製造される化合物ＪＫ１２Ａの結晶体のＩ結晶形とＩＩ結晶形の純度は９８．０％以上に達することができる。
本発明はさらに化合物ＪＫ１２Ａを５−メチルテトラヒ葉酸に転換する転換方法を提供し、当該転換方法は化合物ＪＫ１２Ａを５−メチルテトラヒ葉酸に還元することである。
本発明はまた、化合物ＪＫ１２Ａを５−メチルテトラヒ葉酸に転換する転換方法を提供し、当該転換方法の一つの実施措置は、前記化合物ＪＫ１２Ａを水に塩基を加えて溶解させ、脱酸剤を添加して反応させ、最終的に５−メチルテトラヒ葉酸を得る。
本発明の化合物ＪＫ１２Ａは、薬物活性成分とする薬物或いは食品添加物を製造する面での用途である。
ＪＫ１２Ａの紫外スペクトルである。 ＪＫ１２Ａの赤外スペクトルである。 ＪＫ１２Ａの高分解能質量分析図である。 ＪＫ１２Ａの核磁気共鳴水素原子スペクトルである。 ＪＫ１２Ａの核磁気共鳴炭素スペクトルである。 ＪＫ１２Ａの核磁気共鳴ＤＥＰＴ１３５スペクトルである。 ＪＫ１２Ａの核磁気共鳴１Ｈ−１ＨＣＯＳＹスペクトルである。 ＪＫ１２Ａの核磁気共鳴１Ｈ−１ＨＮＯＥＳＹスペクトルである。 ＪＫ１２Ａの核磁気共鳴ＨＳＱＣスペクトルである。 ＪＫ１２Ａの核磁気共鳴ＨＭＢＣスペクトルである。 ＪＫ１２ＡのＩ結晶形Ｘ線回折図である。 ＪＫ１２ＡのＩＩ結晶形Ｘ線回折図である。
さらに本発明の技術方案を理解するために、以下、本発明の具体的な実施例を結合して本発明の技術方案をさらに説明をするが、本発明はこれらに限定されない。
本発明に関する前記化合物ＪＫ１２Ａは多種の方式でキャラクタリゼーションされることができる。
前記化合物ＪＫ１２Ａの特徴は、５−メチルテトラヒ葉酸に対して酸化することにより合成されることである。その中、５−メチルテトラヒ葉酸の化学名称はＮ−［４−［［（２−アミドゲン−１，４，５，６，７，８−ヘキサヒドロ−４−オキシ−５−メチル−６−プテリジル）メチル］アミドゲン］ベンゾイル］−Ｌ−グルタメートである。５−メチルテトラヒ葉酸に関する特徴は特許文献６〜１１を参照することができ、そのために、前記特許文献が開示する技術内容は本発明の出願文献に引用され、本発明の技術開示の一部分とする。
本発明では、酸化剤で５−メチルテトラヒ葉酸に対して酸化する。以下で述べるとおり、使用される酸化剤は空気、酸素ガス、或いは過酸化水素である。
前記化合物ＪＫ１２Ａの特徴は、下記に記載する方法により製造されることである：
ａ）極性媒体には５−メチルテトラヒ葉酸を塩基で溶解させるステップ；
ｂ）酸化剤を添加し、反応して前記化合物ＪＫ１２Ａを生成するステップ；
ｃ）酸を添加して前記化合物ＪＫ１２Ａを溶液から分離するステップ。
その中、ステップａ）では、窒素或いは不活性ガスで保護し；好ましくは窒素を使用する。塩基で５−メチルテトラヒ葉酸溶液のｐＨを６〜８程度に固体が溶解するまでに調節する。ステップｂ）では、高表面活性物質を使用して触媒とし、および／または超音波で処理する。酸化剤は好ましくは空気、或いは酸素ガス、或いは過酸化水素を使用する。ステップｃ）では、好ましくは酸で前記反応溶液のｐＨを３〜５程度に調節する。固体が析出した後で濾過、洗浄および乾燥をする。前記製造過程は常温、常圧で行う。本分野技術者は各ステップの時間を原料（５−メチルテトラヒ葉酸）使用量、使用される塩基及び酸の種類等要素により判断する。
前記化合物ＪＫ１２Ａの特徴はさらに、その分子構造が以下である：
本発明はさらに前記化合物ＪＫ１２Ａの多種立体異性体に関し、［４−（（４ＡＳ，７Ｒ）−２−アミドゲン−１０−メチル−４−オキシ−６，７，８，９−テトラヒ−４Ａ，７−エピミノピリミド［４，５−Ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（４Ｈ）−イル）ベンゾイル］−Ｌ−グルタメート、［４−（（４ＡＳ，７Ｓ）−２−アミドゲン−１０−メチル−４−オキシ−６，７，８，９−テトラヒ−４Ａ，７−エピミノピリミド［４，５−Ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（４Ｈ）−イル）ベンゾイル］−Ｌ−グルタメート、［４−（（４ＡＳ，７Ｓ）−２−アミドゲン−１０−メチル−４−オキシ−６，７，８，９−テトラヒ−４Ａ，７−エピミノピリミド［４，５−Ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（４Ｈ）−イル）ベンゾイル］−Ｌ−グルタメート、［４−（（４ＡＲ，７Ｒ）−２−アミドゲン−１０−メチル−４−オキシ−６，７，８，９−テトラヒ−４Ａ，７−エピミノピリミド［４，５−Ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（４Ｈ）−イル）ベンゾイル］−Ｌ−グルタメート等である。
本発明のＪＫ１２Ａは以下の一種或いは多種の方式でキャラクタリゼーションされる：
● 約２０３．０ｎｍ、２５２．５ｎｍと２９５．５ｎｍで最大吸収ピークの紫外スペクトルを有する；
● 約３３８３Ｃｍ−１、２８８５Ｃｍ−１、１６０８Ｃｍ−１、１５５８Ｃｍ−１、１５０８Ｃｍ−１、１４２１Ｃｍ−１と１３２１Ｃｍ−１でピークの赤外スペクトルを有する；
● 約１．８９、２．０４、２．３１、３．４３、３．４９、３．８６、３．９０、３．９４、４．２１、６．４８、７．６２で水素化学シフトの１ＨＮＭＲスペクトルを有する；
● 約２８．３７、３１．２６、３４．２５、４５．１８、５５．０４、５５．１６、５５．９３、６８．８０、１１２．２３、１２９．１７、１４６．３６、１６５．５８、１６９．５０、１７１．７４、１７６．６５、１７９．２９、１８２．４９で炭素化学シフトの１３ＣＮＭＲスペクトルを有する；
● 約ｍ／ｚ＝４５６．１６３７６（［Ｍ−Ｈ］−）でピークのＨＲ−ＭＳ（ＥＳＩ−）スペクトルを有する；ＪＫ１２Ａの分子量は４５７であり、その元素構造はＣ２０Ｈ２３Ｎ７Ｏ６であることを説明する。
本発明はさらに前記化合物ＪＫ１２Ａの結晶体に関する。実験を通じて、本発明者は二種類の結晶形を発見した。
前記化合物ＪＫ１２Ａの結晶体のＩ結晶形の特徴は以下のとおりであり、その製造方法は以下のステップを含む：
ａ）前記５−メチルテトラヒ葉酸を極性媒体に添加するステップ；
ｂ）塩基でｐＨを６〜８程度に調節するステップ；
ｃ）酸化剤を添加し、攪拌するステップ；
ｄ）酸でｐＨを３〜５程度に調節するステップ；
ｅ）結晶体を析出させるステップ。
好ましくは、前記ステップａ）では、前記極性媒体は水或いは水及び水と混融できる有機溶剤の混合物である。本方法は極性媒体の使用量に対して具体的な要求はなく、一般の反応或いは結晶媒質の使用量が適宜である。前記５−メチルテトラヒ葉酸は（６Ｓ）−５−メチルテトラヒ葉酸、（６Ｒ）−５−メチルテトラヒ葉酸、（６Ｒ，Ｓ）−５−メチルテトラヒ葉酸から選ばれ、最適は（６Ｓ）−５−メチルテトラヒ葉酸である。
前記ステップｂ）では、前記塩基は５−メチルテトラヒ葉酸と塩になる無機塩基或いは有機塩基であり、前記無機塩基はアルカリ金属或いはアルカリ土類金属の塩基、炭酸塩、炭酸水素塩から選ばれる。前記有機塩基はアンモニア水、アミン類、ピリジン類或いはピペラジン類から選ばれ、好ましくは以下のものから選ばれる：水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、酸性炭酸カリウム、重曹、アンモニア水、モノメチルアミン、４−二メチルピリジン或いはピペラジン。塩基は直接添加できるか、或いは溶液の形式（水溶液のような）で添加できる。塩基で溶液のｐＨを一般的に６．０〜８．０に中和して調節し、好ましくは溶液のｐＨを７．０〜７．５に調節する。
前記ステップｃ）では、前記酸化剤は空気、或いは酸素ガス、或いは過酸化水素である。
好ましくは、ステップｃ）の前にさらに高表面活性物質を添加するステップを含み、前記高表面活性物質は活性炭、活性シリカゲル、活性アルミナから選ばれ、最適は活性炭であり、その中前記高表面活性物質の使用量は５−メチルテトラヒ葉酸質量の０．０５〜１０倍であり、最適は０．５〜２倍であり、さらに最適は０．５〜１倍である。さらに好ましくは、ステップｂ）とステップｃ）の間では高表面活性物質を添加し、すなわち高表面活性物質を添加した後で、すぐに酸化剤を添加する。前記攪拌時間はＨＰＬＣ検出原料５−メチルテトラヒ葉酸反応が終わるまでが適宜であり、一般的に１０時間以上であり、最適は１２〜２４時間である。
前記ステップｄ）では、前記酸は有機酸或いは無機酸である。好ましくは、前記無機酸は塩酸、硫酸、臭化水素酸から選ばれる。有機酸は蟻酸、酢酸、メチルベンゼンスルホン酸から選ばれる。酸で溶液のｐＨを調節する時に好ましくは４〜５に調節する。結晶体を析出した後で、濾過、洗浄、乾燥等のステップを行うことが理解される。
前記化合物ＪＫ１２Ａの結晶体のＩ結晶形の特徴はさらに以下のとおりである：Ｘ線回折図の主なピークは銅輻射ＣｕＫαで測定される２θとＤ−ピッチで以下のように示される（示される誤差範囲内である）。
前記化合物ＪＫ１２Ａの結晶体のＩＩ結晶形の特徴は以下のとおりである：前記化合物ＪＫ１２Ａは超音波処理により、極性媒体におけるｐＨ≧３の状態で結晶化する。好ましくは、前記極性媒体は水或いは水及び水と混融できる有機溶剤の混合物である。さらに、前記化合物ＪＫ１２Ａの結晶体のＩＩ結晶形の特徴は、以下のようなステップで製造されることである：
ａ）前記化合物ＪＫ１２Ａを極性媒体に添加するステップ；
ｂ）塩基でｐＨを６〜１０程度に固体が溶解するまでに調節するステップ；
ｃ）超音波処理をし、かつ酸でｐＨを３〜６程度に調節し、結晶体を析出させるステップ。
ステップａ）では、前記化合物ＪＫ１２Ａの形態は無定形或いはＩ結晶形である。前記極性媒体は水或いは水及び水と混融できる有機溶剤の混合物である。前記ステップｂ）では、前記塩基は有機塩基或いは無機塩基である。好ましくは、前記無機塩基は水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、酸性炭酸カリウム、重曹から選ばれる。前記有機塩基はアンモニア水、モノメチルアミン、４−二メチルピリジン或いはピペラジンから選ばれる。塩基は直接添加できるか、或いは溶液の形式（水溶液のような）で添加できる。塩基で溶液のｐＨを好ましくは７．０〜８．０に中和して調節し、さらに好ましくは溶液のｐＨを７．０〜７．５に調節する。
前記ステップｃ）では、前記酸は有機酸或いは無機酸である。好ましくは、前記無機酸は塩酸、硫酸、臭化水素酸から選ばれる。有機酸は蟻酸、酢酸、メチルベンゼンスルホン酸から選ばれる。酸で溶液のｐＨを調節する時に好ましくは３〜４に調節する。超音波はステップｂ）で使用でき、前記化合物ＪＫ１２Ａが早く溶解することに有利である。ステップｃ）では超音波を使用することはＩＩ結晶形を形成することに有利であり、超音波を使用する時間の長さは本分野の技術者により判断され、十分足りる量の固体を析出した後に停止することができる。
前記化合物ＪＫ１２ＡのＩＩ結晶形の特徴はさらに以下のとおりである：Ｘ線回折図の主要ピークは銅輻射ＣｕＫαで測定される２θとＤ−ピッチで以下のように示される（示される誤差範囲内である）。
本発明はさらに前記の化合物ＪＫ１２Ａが５−メチルテトラヒ葉酸に転換する転換方法に関し、その特徴は以下のとおりである：前記化合物ＪＫ１２Ａを５−メチルテトラヒ葉酸に還元する。当該方法は５−メチルテトラヒ葉酸の純化にも用いられることができる。粗品５−メチルテトラヒ葉酸をＪＫ１２Ａに酸化し、結晶して析出した後で、再び５−メチルテトラヒ葉酸に還元し、得られる５−メチルテトラヒ葉酸の化学純度及び光学純度は著しく高まる。そのために、本発明の化合物ＪＫ１２Ａの用途の一つは５−メチルテトラヒ葉酸の製造と純化である。
本発明は５−メチルテトラヒ葉酸の製造方法に関し、その特徴は以下のとおりであり、前記化合物ＪＫ１２Ａを還元反応により５−メチルテトラヒ葉酸を生成する。
好ましくは、５−メチルテトラヒ葉酸の製造方法は以下のとおりである。まず前記化合物ＪＫ１２Ａを水に塩基を加えて溶解させ、その後脱酸剤を添加して反応し、分離処理により５−メチルテトラヒ葉酸を得る。その中、前記脱酸剤は好ましくは水素化硼素化合物、或いは還元性ガス、或いはスルフヒドリル化合物である。前記水素化硼素化合物は水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素カリウム、トリ−ｔｅｒｔ−ブチル水素化ホウ素カリウムから選ばれる。前記還元性ガスはＨ２、ボロン水素から選ばれる。前記スルフヒドリル化合物はメルカプトエタノール、システイン、メルカプトエタンスルホネートナトリウムから選ばれる。前記分離処理は５−メチルテトラヒ葉酸を溶液から分離することを指し、分離処理方法は既存技術であり、前文で引用される相関の対比文書を参照できる。
前記塩基は与５−メチルテトラヒ葉酸と塩になる無機塩基或いは有機塩基であり、前記無機塩基はアルカリ金属或いはアルカリ土類金属のアルカリ、炭酸塩、炭酸水素塩から選ばれる。前記有機塩基はアンモニア水、アミン類、ピリジン類或いはピペラジン類から選ばれ；最適は以下のものである：水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、酸性炭酸カリウム、重曹、アンモニア水、モノメチルアミン、４−二メチルピリジン或いはピペラジン。塩基は直接添加できるか、或いは溶液の形式（水溶液のような）で添加できる。
本発明はさらに化合物ＪＫ１２Ａが接受できる塩に関し、それはアルカリ金属塩或いはアルカリ土類金属塩から選ばれ、最適はカリウム塩、ナトリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、バリウム塩、ストロンチウム塩であり、さらに最適はカルシウム塩である。
本発明はさらに化合物ＪＫ１２Ａカルシウム塩の製造方法に関し、以下のステップを含む：
ａ）前記化合物ＪＫ１２Ａを極性媒体に添加するステップ；
ｂ）塩基でｐＨを７〜８程度に固体が溶解するまでに調節するステップ；
ｃ）塩化カルシウムを添加するステップ；
ｄ）超音波処理をし、結晶体を析出させ、その後濾過し、洗浄し、乾燥するステップ。
ステップａ）では、前記極性媒体は水或いは水及び水と混融できる有機溶剤の混合物であり、最適は水である。ステップｂ）では、前記塩基は有機塩基或いは無機塩基である。好ましくは、前記無機塩基は水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、酸性炭酸カリウム、重曹から選ばれる；前記有機塩基はアンモニア水、モノメチルアミン、４−二メチルピリジン或いはピペラジンから選ばれる。
前記の化合物ＪＫ１２Ａの薬物製造上の用途は薬物の活性成分とすることである。実施例１６の免疫生物学的活性実験は、化合物ＪＫ１２Ａが薬物の製造に用いることができることを表す。前記の化合物ＪＫ１２Ａはさらに食品添加剤の製造にも用いる。
本発明の薬学製剤或いは組成物は上記化合物ＪＫ１２Ａを含み、本発明の方法で製造される化合物ＪＫ１２Ａ或いはその塩は薬学製剤に対して理想的である。活性成分以外に、本発明の薬学製剤は一種或いは多種の付形剤を含むことができ、付形剤を製剤に添加して各種の目的に用いる。上記製剤は本分野従来の方法により製造することができる。以下は本発明で製造されるＪＫ１２Ａに対する分析をする。
１．紫外スペクトル（ＵＶ）分析：
器械モデル：北京普析通用、ＴＵ−１９０１
サンプル濃度：０．０２３６６ｍｇ／ｍｌ
溶剤：メタノール
スキャン範囲：２００．００ないし９００．００ ｎｍ
スキャン間隔：０．５０ ｎｍ
テスト結果：本品の紫外スペクトルは２０３．０ｎｍ、２５２．５ｎｍ及び２９５．５ｎｍで最大吸収を有することを表し、帰属は−Ｃ＝Ｏと六員環のＫ帯吸収であり、紫外吸收光スペクトルは図１に示すとおりである。
２． 紫外スペクトル（ＩＲ）分析：
器械モデル：Ｓｈｉｍａｄｚｕ、ＦＴＩＲ Ｐｒｅｓｉｔａｇｅ ２１
テスト条件：ＫＢｒ押しつぶし法
テスト結果：主要の吸収ピーク及び帰属は表１に示されており、紅外吸收光スペクトル図は図２に示すとおりである。
３．高分解能質量分析（ＨＲ−ＭＳ）：
器械モデル：Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｃｓ、Ｉｎｃ．，ＡＰＥＸＩＩＩ ７．０ＴＥＳＬＡＦＴＭＳ
テスト結果：本品は高分解能質量分析測定元素により組成される。マススペクトルエレクトロスプレーイオン化イオン源アニオンパターンで４５６．１６３７６ピークを検出し得て、本品の元素組成はＣ２０Ｈ２３Ｎ７Ｏ６であることを証明する。データリストは表２に示すとおりであり、マススペクトル図は図３に示すとおりである。
４．核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ分析）
器械モデル：Ｂｒｕｋｅｒ、 ＡＶＡＮＣＥ ＩＩＩ５００ＭＨｚ ＵｌｔｒａＳｈｉｅｌＤ−ＰｌｕｓＴＭＤｉｇｉｔａｌ ＮＭＲ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ
溶剤：Ｄ２Ｏ
テスト項目：
１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、ＤＥＰＴ１３５、１Ｈ−１ＨＣＯＳＹ、１Ｈ−１ＨＮＯＥＳＹ、ＨＳＱＣ、ＨＭＢＣ
テスト結果：ＮＭＲスペクトル図は図４−１０に示すとおりである。帰属状況は表３と表４に示す。
（実施例１）
ＪＫ１２ＡのＩ結晶形製造
窒素保護の状態で５グラムの５−メチルテトラヒ葉酸を取り、反応バルブに置き、５０グラムの水を添加し、攪拌し、飽和炭酸ナトリウムで溶液ｐＨを７．５に調節して、固体は完全に溶解して透明になった。２．５グラムの活性炭を添加し、酸素ガスボールシールド一晩を経て反応させる。ＨＰＬＣ検出原料反応完了後、濾過し、濾液を５０％の酢酸でｐＨを４．８に調節し、結晶体を析出させ、濾過し、濾過ケーキを別々エタノール、アセトンで洗浄し、真空乾燥して３．０グラムの黄色固体を得た。化学純度は８７．５３％である。
（実施例２）
ＪＫ１２ＡのＩ結晶形製造
窒素保護の状態で５グラムの５−メチルテトラヒ葉酸を取り、反応バルブに置き、４０グラムの水を添加し、攪拌し、９０％モノメチルアミンで溶液ｐＨを７．０に調節し、固体は完全に溶解し透明になった。２．５グラムの活性炭を添加し、酸素ガスボールシールド一夜を経て反応させた。ＨＰＬＣ検出原料反応完了後、濾過し、１０％塩酸で濾液のｐＨを３．０に調節し、結晶体を析出させ、濾過し、濾過ケーキを別々エタノール、アセトンで洗浄し、真空乾燥して２．５グラムの黄色固体を得た。化学純度は９７．３７％である。
（実施例３）
ＪＫ１２ＡのＩ結晶形製造
窒素保護の状態で５グラムの５−メチルテトラヒ葉酸を取り、反応バルブに置き、４０グラムの水を添加し、攪拌し、１０％水酸化ナトリウムで溶液ｐＨを７．５に調節し、固体は完全に溶解し透明になった。２．５グラムの活性炭を添加し、オープン状態で一晩を経て反応させた。ＨＰＬＣ検出原料反応完了後、濾過し、５０％の酢酸で濾液のｐＨを４．２に調節し、結晶体を析出させ、濾過し、濾過ケーキを別々エタノール、アセトンで洗浄し、真空乾燥して２．３グラムの黄色固体を得た。化学純度は９５．００％である。
（実施例４）
ＪＫ１２ＡのＩ結晶形製造
窒素保護の状態で７３．３グラムの５−メチルテトラヒ葉酸を取り、反応バルブに置き、５８０グラムの水を添加し、攪拌し、１０％水酸化ナトリウムで溶液ｐＨを７．２に調節し、固体は完全に溶解し透明になった。４０グラムの活性炭を添加し、酸素ガスボールシールド一晩を経て反応する。ＨＰＬＣ検出原料反応完了後、濾過し、 ５０％の酢酸で濾液のｐＨを４．０に調節し、結晶体を析出させ、濾過し、濾過ケーキを別々エタノール、アセトンで洗浄し、真空乾燥して４７．８グラムの黄色固体を得た。化学純度は９６．２０％である
（実施例５）
ＪＫ１２ＡのＩ結晶形製造
窒素保護の状態に１０グラムの５−メチルテトラヒ葉酸を取り、反応バルブに置き、８０グラムの水を添加し、攪拌し、１０％水酸化ナトリウムで溶液ｐＨを７．３に調節し、固体は完全に溶解し透明になった。５グラムの活性炭を添加し、オープンして攪拌下で一晩を経て反応させた。ＨＰＬＣ検出原料反応完了後、濾過し、５０％の酢酸で濾液のｐＨを４．０に調節し、結晶体を析出させ、濾過し、濾過ケーキを別々エタノール、アセトンで洗浄し、真空乾燥して６．０グラムの黄色固体ＪＫ１２Ａを得た。化学純度は９９．４２％である。
（実施例６）
ＪＫ１２ＡのＩ結晶形製造
窒素保護の状態で５グラムの５−メチルテトラヒ葉酸を取り反応バルブに置き、４０グラムの水を添加し、攪拌し、１０％水酸化ナトリウムで溶液ｐＨを７．５に調節し、固体は完全に溶解し透明になった。５グラムの活性炭を添加し、酸素ガスボールシールド一晩を経て反応する。ＨＰＬＣ検出原料反応完了後、濾過し、濾液を５０％の酢酸でｐＨを４．８に調節し、結晶体を析出させ、濾過し、濾過ケーキを別々エタノール、アセトンで洗浄し、真空乾燥して２．７グラムの黄色固体ＪＫ１２Ａを得た。化学純度は９９．６０％である。
（実施例７）
ＪＫ１２ＡのＩ結晶形製造
窒素保護の状態で５グラムの５−メチルテトラヒ葉酸を取り、反応バルブに置き、５０グラムの水を添加し、攪拌し、１０％水酸化ナトリウムで溶液ｐＨを７．２に調節し、固体は完全に溶解し透明になった。４グラムの活性シリカゲルを添加し、酸素ガスボールシールド一晩を経て反応させる。ＨＰＬＣ検出原料反応完了後、濾過し、５０％の酢酸で濾液のｐＨを４．５に調節し、結晶体を析出させ、濾過し、濾過ケーキを別々エタノール、アセトンで洗浄し、真空乾燥して２．３グラムの黄色固体ＪＫ１２Ａを得た。化学純度は９８．４１％である。
（実施例８）
ＪＫ１２ＡのＩＩ結晶形製造
２．０グラムのＪＫ１２Ａを取り、２２グラムの水を添加し、氷水鍋に置き、攪拌下で１０％水酸化ナトリウムを滴下し、溶液ｐＨを６．７に調節し、固体は完全に溶解し、反応液を高密度儀に転換し、滴加５０％の酢酸を滴下し溶液ｐＨを５．２に調節し、３０ｍｉｎ反応させた後に濾過し、濾過ケーキを別々水、エタノール、アセトンで洗浄し、真空乾燥して１．０グラムの黄色固体ＪＫ１２Ａを得た。化学純度は９８．２％である。
（実施例９）
ＪＫ１２ＡのＩＩ結晶形製造
５．０グラムのＪＫ１２Ａを取り、５０グラムの水を添加し、氷水鍋に置き、攪拌下で１０％水酸化ナトリウムを滴下し、溶液ｐＨを７．５に調節し、固体は完全に溶解し、反応液を高密度儀に転換し、溶液ｐＨが４．０になるまで５０％の酢酸を滴下し、３０ｍｉｎ反応させた後に濾過し、濾過ケーキを別々水、エタノール、アセトンで洗浄し、真空乾燥して２．２グラムの黄色固体ＪＫ１２Ａを得た。化学純度は９８．５％である。
（実施例１０）
ＪＫ１２ＡのＩＩ結晶形製造
８．０グラムのＪＫ１２Ａを取り、１２０グラムの水を添加し、氷水鍋に置き、攪拌下で１０％水酸化ナトリウムを滴下し、溶液ｐＨを８．０に調節し、固体は完全に溶解し反応液を高密度儀に転換し、溶液ｐＨが５．０になるまで５０％の酢酸を滴下し、３０ｍｉｎ反応させた後に濾過し、濾過ケーキを別々水、エタノール、アセトンで洗浄し、真空乾燥して５．２グラムの黄色固体ＪＫ１２Ａを得た。化学純度は９８．７％である。
（実施例１１）
ＪＫ１２Ａカルシウム塩の製造
４．０グラムのＪＫ１２Ａを取り、２０グラムの水を添加し、室温で攪拌し、１０％水酸化ナトリウムを添加し、溶液ｐＨを７．０に調節し、固体は完全に溶解し、反応液を１０℃まで温度を下げ、４．０グラムの５０％塩化カルシウム溶液を添加し、１０分攪拌した後で２５ｍｌアルコールを添加し、３０ｍｉｎで高密度反応をさせ、濾過し、濾過ケーキを別々エタノール、アセトンで洗浄し、真空乾燥して、ＪＫ１２Ａカルシウム塩３．５グラムを得た。化学純度は９７．６％である。
（実施例１２）
ＪＫ１２Ａの還元
３グラムのＪＫ１２Ａ（純度９６．６４％）を取り、６０グラムの水を添加し、攪拌下で１０％水酸化ナトリウムでｐＨを７．０に調節し、固体は全部溶解し、その後２グラムのＫＢＨ４を緩やかに添加し、１ｈ攪拌し続けた。その後、反応液を検査した。５−メチルテトラヒ葉酸含有量は７１．２６％である。
（実施例１３）
ＪＫ１２Ａの還元
３グラムのＪＫ１２Ａ（純度９６．６４％）を取り、６０グラムの水を添加し、攪拌下で１０％水酸化ナトリウムでｐＨを７．２に調節し、固体は全部溶解し、その後２グラムのＮＡＢＨ４を緩やかに添加し、１．５ｈ攪拌し続けた。その後、反応液を検査した。５−メチルテトラヒ葉酸含有量は７９．３２％である。
（実施例１４）
ＪＫ１２Ａの還元
１０グラムのＪＫ１２Ａ（純度９６．６４％）を取り、１５０グラムの水を添加し、攪拌下で１０％水酸化ナトリウムでｐＨを７．０に調節し、固体は全部溶解し、その後１．０グラムのＰＤ／Ｃを添加し、均一に攪拌し、Ｈ２を添加し、０．２ＭＰＡまで加圧し、２ｈ攪拌した後で、反応液を検査し、５−メチルテトラヒ葉酸含有量は７０．３２％である。
（実施例１５）
５−メチルテトラヒ葉酸の純化
１０グラムの５−メチルテトラヒ葉酸（化学純度８２％、光学純度９０％）を取り、１００グラムの水に添加し、攪拌下で１０％水酸化ナトリウムで溶液のｐＨを７．０に調節し、固体は全部溶解し、５グラムの活性炭を添加し、酸素ガスボールシールド反応し、ＨＰＬＣ検出原料反応完了後、濾過し、１０％塩酸で濾液のｐＨを３．０に調節し、結晶体を析出させ、濾過し、濾過ケーキを別々エタノール、アセトンで洗浄し、真空乾燥して５．２グラムの黄色固体ＪＫ１２Ａを得た。化学純度は９７．８％である。この固体を８０グラムの水に添加し、攪拌下で１０％水酸化ナトリウムで溶液のｐＨを７．０に調節し、１２グラムの水素化ホウ素ナトリウムを緩やかで添加し、４時間反応させた後で、１０％塩酸でｐＨを３．０に調節し、結晶体を析出させ、濾過し、濾過ケーキを別々エタノール、アセトンで洗浄し、真空乾燥して、２．９グラムの５−メチルテトラヒ葉酸を得た。化学純度９８．１％であり、光学純度９６％である。
（実施例１６）
免疫生物学的活性
実験方法：
マウス脾臓リンパ細胞の製造
マウスの脊髄を引き出して屠殺し、無菌状態でその脾臓製造単一細胞サスペンションを取り、赤血球ライセートで赤血球を除去し、細胞濃度を調節する。
ＣＣＫ−８方法による、化合物のマウス脾臓リンパ細胞活性に対する影響の測定
マウス脾臓リンパ細胞サスペンションを５×１０５細胞／ウェルで９６ウェルプレートに接種し、同時に異なる濃度の化合物を添加し、また相応の溶媒参照及び培養液背景参照を設ける。総体積は２００μｌである。３７℃、５％ＣＯ２培養器で４８時間ほど培養する。培養が完了する前８−１０時間にＣＣＫ−８溶液を添加する。培養が完了したあとで、マイクロプレートリーダ４５０ｎＭ（参考６５０ｎＭ）のところでＯＤ値を測定する。
３Ｈ−ＴＤＲ取り込み法による、化合物のマウス脾臓Ｔリンパ細胞増殖功能に対する影響の測定
マウス脾臓リンパ細胞サスペンションを５×１０５細胞／ウェルで９６ウェルプレートに接種し、ＣｏｎＡ（終了濃度５ μｇ／ｍｌ）、異なる濃度の化合物を添加し、かつ相応の無ＣｏｎＡ参照ウェル及び無薬物参照ウェルを設ける。３７℃、５％ＣＯ２培養器で４８時間ほど培養する。培養が完了する前８時間に、各ウェルに２５μｌ ３Ｈ−チミジル酸（１０μＣｉ／ｍｌ）を添加する。実験が完了するまでに培養し続ける。細胞収集器械で細胞をグラス繊維膜に収集し、シンチレーションソルチョンを添加した後でＢｅｔＡカウンター（ＭｉＣｒｏＢｅｔＡ Ｔｒｉｌｕｘ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で細胞ＤＮＡに取り込まれた３Ｈ−ＴＤＲの量を読み込む。Ｃｐｍ値で細胞増殖の状況を表す。
初歩選別結果は、前記化合物ＪＫ１２Ａが（１．０２４と０．４１ μＭ）マウスＴリンパ細胞増殖に対して著しい抑制作用を有することを表す。
（実施例１７）
ＪＫ１２ＡのＩ結晶形のＸ線回折図条件及びデータ
器械モデル：Ｂｒｕｋｅｒ Ｄ８ Ａｄｖａｎｃｅ ＸＲＤ
回折線：銅輻射ＣｕＫα（（４０ ｋＶ、 ４０ ｍＡ）
スキャン速度率：８°／ｍｉｎ （２θ値）
スキャン範囲：５° 〜 ４５ （２θ値）
Ｐｅａｋ Ｓｅａｒｃｈ Ｒｅｐｏｒｔ （４１ Ｐｅａｋｓ、 Ｍａｘ Ｐ／Ｎ ＝ ２５．４）
ＰＥＡＫ： ２７−ｐｔｓ／ＰａｒａＢｏｌｉｃ Ｆｉｌｔｅｒ、 Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ＝３．０、 Ｃｕｔｏｆｆ＝０．１％、 ＢＧ＝３／１．０、 Ｐｅａｋ−Ｔｏｐ＝Ｓｕｍｍｉｔ
（実施例１８）
ＪＫ１２ＡのＩＩ結晶形のＸ線回折図条件及びデータ
器械モデル：Ｂｒｕｋｅｒ Ｄ８ Ａｄｖａｎｃｅ ＸＲＤ
回折線：銅輻射 ＣｕＫα（（４０ ｋＶ、 ４０ ｍＡ）
スキャン速度率：８°／ｍｉｎ （２θ値）
スキャン範囲：５° 〜 ４５ （２θ値）
Ｐｅａｋ Ｓｅａｒｃｈ Ｒｅｐｏｒｔ （４５ Ｐｅａｋｓ、 Ｍａｘ Ｐ／Ｎ ＝ ３２．８）
ＰＥＡＫ： ２１−ｐｔｓ／ＰａｒａＢｏｌｉｃ Ｆｉｌｔｅｒ、 Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ＝３．０、 Ｃｕｔｏｆｆ＝０．１％、 ＢＧ＝３／１．０、 Ｐｅａｋ−Ｔｏｐ＝Ｓｕｍｍｉｔ

Claims (29)

  1. ＪＫ１２Ａと略称とされる、下記一般式Ｉで表される構造を有する化合物［４−（２−アミドゲン−１０−メチル−４−オキシ−６，７，８，９−テトラヒ−４Ａ，７−エピミノピリミド［４，５−Ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（４Ｈ）−イル）ベンゾイル］−グルタメート、或いは前記化合物ＪＫ１２Ａの立体異性体。
  2. 請求項１に記載の化合物ＪＫ１２Ａの結晶体。
  3. 請求項１に記載の化合物ＪＫ１２Ａの薬学的に許容可能な塩或いは当該塩の立体異性体。
  4. 前記の塩は結晶塩であることを特徴とする、請求項３に記載の塩。
  5. 前記の塩はカルシウム塩であることを特徴とする、請求項３または４に記載の塩。
  6. 前記化合物ＪＫ１２Ａの結晶体はＩ結晶形或いはＩＩ結晶形であって、その中に、
    Ｉ結晶形Ｘ線回折図は２θ角が１３．３±０．２、１４．０±０．２、１６．９±０．２、１９．１±０．２、２４．４±０．２、２７．６±０．２である場所に回折ピークを有する；或いは
    ＩＩ結晶形Ｘ線回折図は２θ角が６．８±０．２、１２．２±０．２、１３．７±０．２、１５．９±０．２、１８．４±０．２、２３．０±０．２である場所に回折ピークを有することを特徴とする、請求項２に記載の化合物ＪＫ１２Ａの結晶体。
  7. 結晶形Ｘ線回折図は２θ角が１３．３、１４．０、１６．９、１９．１、２４．４、２７．６である場所に回折ピークを有する；或いは
    ＩＩ結晶形Ｘ線回折図は２θ角が６．８、１２．２、１３．７、１５．９、１８．４、２３．０である場所に回折ピークを有することを特徴とする、請求項６に記載の化合物ＪＫ１２Ａの結晶体。
  8. Ｉ結晶形Ｘ線回折図は、ほぼ図１１のような図形であり；
    ＩＩ結晶形Ｘ線回折図は、ほぼ図１２のような図形であることを特徴とする、請求項２に記載の化合物ＪＫ１２Ａの結晶体。
  9. ５−メチルテトラヒ葉酸に対して酸化することを特徴とする、請求項１に記載の化合物ＪＫ１２Ａの製造方法。
  10. ａ）前記５−メチルテトラヒ葉酸を極性媒体に添加するステップ；
    ｂ）塩基でｐＨを６〜８程度に調節するステップ；
    ｃ）酸化剤を添加し、攪拌するステップ；
    ｄ）酸でｐＨを３〜５程度に調節するステップ；
    ｅ）結晶体を析出させるステップ
    含むことを特徴とする、請求項６〜８のいずれか一項に記載の化合物ＪＫ１２Ａの結晶体のＩ結晶形の製造に用いる請求項９に記載の製造方法。
  11. 前記ステップａ）では、前記極性媒体は水或いは水と混融できる有機溶剤の混合物であることを特徴とする、請求項１０に記載の製造方法。
  12. 前記ステップｂ）では、前記塩基は有機塩基或いは無機塩基であることを特徴とする、請求項１０に記載の製造方法。
  13. 前記ステップｃ）では、前記酸化剤は空気、或いは酸素ガス、或いは過酸化水素であることを特徴とする、請求項１０に記載の製造方法。
  14. 前記無機塩基は水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、酸性炭酸カリウム、重曹から選ばれ；
    前記有機塩基はアンモニア水、モノメチルアミン、４−二メチルピリジン或いはピペラジンから選ばれることを特徴とする請求項１２に記載の製造方法。
  15. 前記ステップｄ）では、前記酸は有機酸或いは無機酸であることを特徴とする、請求項１０に記載の製造方法。
  16. 前記無機酸は塩酸、硫酸、臭化水素酸から選ばれ；
    前記有機酸は蟻酸、酢酸、メチルベンゼンスルホン酸から選ばれることを特徴とする、請求項１５に記載の製造方法。
  17. ステップｃ）の前に高表面活性物質を添加するステップをさらに含み、
    前記高表面活性物質は活性炭、活性シリカゲル、活性アルミナから選ばれ、その中前記高表面活性物質の使用量は５−メチルテトラヒ葉酸質量の０．０５〜１０倍であり、好ましくは０．５〜２倍であり、更に好ましくは０．５〜１倍であることを特徴とする、請求項１０〜１６のいずれか一項に記載の製造方法。
  18. 前記化合物ＪＫ１２Ａは超音波処理により、極性媒体におけるｐＨ≧３の状態で結晶することを特徴とする、請求項６〜８のいずれか一項に記載のＪＫ１２Ａの結晶体のＩＩ結晶形製造方法。
  19. 前記極性媒体は水或いは水と混融できる有機溶剤の混合物であることを特徴とする、請求項１８に記載の製造方法。
  20. ａ）前記化合物ＪＫ１２Ａを極性媒体に添加するステップ；
    ｂ）塩基でｐＨを６〜１０程度に固体が溶解するまでに調節するステップ；
    ｃ）超音波処理をし、かつ酸でｐＨを３〜６程度に調節し、結晶体を析出させるステップ
    を含むことを特徴とする、請求項１８または１９に記載の製造方法。
  21. 前記ステップｂ）では、前記塩基は有機塩基或いは無機塩基であることを特徴とする、請求項２０に記載の製造方法。
  22. 前記無機塩基は水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、酸性炭酸カリウム、重曹から選ばれ；
    前記有機塩基はアンモニア水、モノメチルアミン、４−二メチルピリジン或いはピペラジンから選ばれることを特徴とする、請求項２１に記載の製造方法。
  23. 前記ステップｃ）では、前記酸は有機酸或いは無機酸であることを特徴とする、請求項２０に記載の製造方法。
  24. 前記無機酸は塩酸、硫酸、臭化水素酸から選ばれ；
    前記有機酸は蟻酸、酢酸、メチルベンゼンスルホン酸から選ばれることを特徴とする、請求項２３に記載の製造方法。
  25. 前記化合物ＪＫ１２Ａを５−メチルテトラヒ葉酸に還元することを特徴とする、請求項１に記載の化合物ＪＫ１２Ａを５−メチルテトラヒ葉酸に転換する転換方法。
  26. まず、前記化合物ＪＫ１２Ａを水に塩基を加えて溶解させ、その後脱酸剤を加えて反応させ、分離処理により５−メチルテトラヒ葉酸を得ることを特徴とする、請求項２５に記載の転換方法。
  27. 前記脱酸剤は水素化硼素化合物、或いは還元性ガス、或いはスルフヒドリル化合物であることを特徴とする、請求項２６に記載の転換方法。
  28. 前記水素化硼素化合物は水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素カリウム、トリ−ｔｅｒｔ−ブチル水素化ホウ素カリウムから選ばれ；
    前記還元性ガスはＨ２、ボロン水素から選ばれる；前記スルフヒドリル化合物はメルカプトエタノール、システイン、メルカプトエタンスルホネートナトリウムから選ばれることを特徴とする、請求項２７に記載の転換方法。
  29. 請求項１に記載の化合物ＪＫ１２Ａを薬物の活性成分或いは食品添加剤とする方面の用途。
JP2015504854A 2012-04-13 2013-04-09 化合物［４−（２−アミノ−１０−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４ａ，７−エピミノピリミド［４，５−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（４Ｈ）−イル）ベンゾイル］−グルタメート及びその製造 Active JP5925381B2 (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201210109743 2012-04-13
CN201210109743.3 2012-04-13
PCT/CN2013/073959 WO2013163917A1 (zh) 2012-04-13 2013-04-09 化合物jk12a及其制备

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2015513360A true JP2015513360A (ja) 2015-05-11
JP5925381B2 JP5925381B2 (ja) 2016-05-25

Family

ID=49514204

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2015504854A Active JP5925381B2 (ja) 2012-04-13 2013-04-09 化合物［４−（２−アミノ−１０−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４ａ，７−エピミノピリミド［４，５−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（４Ｈ）−イル）ベンゾイル］−グルタメート及びその製造

Country Status (7)

Country Link
US (1) US9090623B2 (ja)
EP (1) EP2837632B1 (ja)
JP (1) JP5925381B2 (ja)
KR (1) KR101673979B1 (ja)
CN (1) CN104334561B (ja)
PL (1) PL2837632T3 (ja)
WO (1) WO2013163917A1 (ja)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107812195B (zh) * 2014-09-04 2021-04-20 连云港金康和信药业有限公司 (6s)‐5‐甲基‐四氢叶酸钙盐的稳定药物组合物
WO2016034145A1 (zh) * 2014-09-04 2016-03-10 连云港金康和信药业有限公司 (6s)-5-甲基四氢叶酸或其盐组合物及其制备和应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH07500842A (ja) * 1991-11-11 1995-01-26 クノル　アクチエンゲゼルシヤフト ５−メチル−テトラヒドロ葉酸の分割方法
JPH0841062A (ja) * 1994-05-09 1996-02-13 Eprova Ag 安定な結晶性（６ｓ）− 及び（６ｒ）− テトラヒドロ葉酸
JP2000327680A (ja) * 1999-04-15 2000-11-28 Eprova Ag 安定な結晶性５−メチルテトラヒドロ葉酸塩
CN101143863A (zh) * 2006-09-13 2008-03-19 南京莱因医药科技有限公司 5-甲基四氢叶酸的拆分及其成盐方法

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5124452A (en) * 1978-07-10 1992-06-23 Bioresearch S.P.A. Process for producing d,1-5-methyltetrahydrofolic acid and its salts
CH681303A5 (ja) 1991-01-16 1993-02-26 Eprova Ag
CN1509288A (zh) 2001-05-14 2004-06-30 �Ʒ� 5,8,14－三氮杂四环[10.3.1.02，11.04，9]－十六－2(11),3,5,7,9－五烯的柠檬酸盐
IL157933A0 (en) 2001-05-14 2004-03-28 Pfizer Prod Inc Tartrate salts of 5,8,14-triazatetracyclo [10.3.1.02,11.04,9] -hexadeca-2(11),3,5,7,9-pentaene and pharmaceutical compositions thereof
RU2004116311A (ru) 2001-11-29 2005-03-27 Пфайзер Продактс Инк. (Us) Сукцинатные соли 5,8,14-триазатетрацикло [10.3.1.02,11(04,9]гексадека- 2(11),3,5,7,9-пентаена и их фармацевтические композиции
CN1864663A (zh) 2001-11-30 2006-11-22 辉瑞产品公司 5,7,14－三氮杂四环[10.3.1.0(2,11).0(4,9)]－十六碳－2(11)3,5,7,9－五烯的药物组合物
SE0303526D0 (sv) * 2003-12-22 2003-12-22 Biofol Ab Chemotherapeutic agents
MY160005A (en) 2008-12-11 2017-02-15 Cti Biopharma Corp 11-(2-pyrrolidin-1-yl-ethoxy)-14,19-dioxa-5,7,26-triaza-tetracyclo(19.3.1.1(2,6).1(8,12))heptacosa-1(25),2(26),3,5,8,10,12(27),16,21,23-decaene citrate salt
CN101781637B (zh) 2009-01-16 2012-09-05 中国科学院生物物理研究所 人源5,10-次甲基四氢叶酸合成酶及其复合物的结晶方法、晶体以及应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH07500842A (ja) * 1991-11-11 1995-01-26 クノル　アクチエンゲゼルシヤフト ５−メチル−テトラヒドロ葉酸の分割方法
JPH0841062A (ja) * 1994-05-09 1996-02-13 Eprova Ag 安定な結晶性（６ｓ）− 及び（６ｒ）− テトラヒドロ葉酸
JP2000327680A (ja) * 1999-04-15 2000-11-28 Eprova Ag 安定な結晶性５−メチルテトラヒドロ葉酸塩
CN101143863A (zh) * 2006-09-13 2008-03-19 南京莱因医药科技有限公司 5-甲基四氢叶酸的拆分及其成盐方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JPN6015035163; ＫＵＲＯＤＡ，Ｔ．　ｅｔ　ａｌ: 'Ａｐｌａｍｉｎａｌ：　Ａ　Ｎｏｖｅｌ　Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　Ａｍｉｎａｌ　Ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　Ｓｅａ　Ｈａｒｅ　Ａｐｌｙｓｉａ　ｋｕｒｏｄａｉ' Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｌｅｔｔｅｒｓ Ｖｏｌ．１０，　Ｎｏ．３, 20080110, ｐ．４８９-４９１ *
JPN6015035164; ＳＭＩＴＨ，Ａ．Ｂ．　ｅｔ　ａｌ: 'Ｔｏｔａｌ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　（-）-Ａｐｌａｍｉｎａｌ' Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｌｅｔｔｅｒｓ Ｖｏｌ．１０，　Ｎｏ．１９, 20080828, ｐ．４３６３-４３６５ *

Also Published As

Publication number Publication date
US20150065708A1 (en) 2015-03-05
KR101673979B1 (ko) 2016-11-08
EP2837632B1 (en) 2016-05-18
US9090623B2 (en) 2015-07-28
PL2837632T3 (pl) 2017-01-31
CN104334561B (zh) 2016-06-22
CN104334561A (zh) 2015-02-04
EP2837632A1 (en) 2015-02-18
WO2013163917A1 (zh) 2013-11-07
EP2837632A4 (en) 2015-10-14
KR20140143437A (ko) 2014-12-16
JP5925381B2 (ja) 2016-05-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109180625B (zh) 一种硒代黄酮类化合物的制备方法
JP5925381B2 (ja) 化合物［４−（２−アミノ−１０−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４ａ，７−エピミノピリミド［４，５−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（４Ｈ）−イル）ベンゾイル］−グルタメート及びその製造
CN109608468B (zh) 一种枸橼酸托法替布杂质及其合成方法和用途
CN110156775A (zh) 一种吡昔替尼的简便制备方法
KR20160045068A (ko) 리팍시민 κ 제조공정
CN116621810A (zh) 2-甲基烟碱的制备方法
CN109988167A (zh) 一种他达拉非的制备方法
WO2023082839A1 (zh) 一种Filgotinib的制备方法
CN109400600A (zh) 10α-甲氧基-9,10-二氢麦角醇的制备新方法
CN113698402A (zh) 具有抗炎活性的天然生物碱Arbornamine的合成方法及应用
CN110840896B (zh) 一类二氢喹唑啉酮药物的制备方法及用途
CN111039885B (zh) 一种制备高纯度考布曲钙的方法
JP2018104312A (ja) イミダゾピロロキノリン塩及びその製造方法、並びに、医薬品、化粧品及び食品
JP4998264B2 (ja) （−）−ヒドロキシクエン酸のアルカリ土類金属塩の製造法
CN106117244A (zh) 头孢妥仑匹酯的精制方法
CN107739328B (zh) 用于合成巴瑞替尼的关键中间体1的制备方法
CN111995624A (zh) 一种制备外消旋顺式8-苄基-2,8-二氮杂二环[4,3,0]壬烷的方法
CN110964022A (zh) 一种检测过氧亚硝酸根离子的荧光探针及其制备方法和应用
CN104892596A (zh) 一种合成盐酸哌伦西平中间体的新方法
KR100704641B1 (ko) 고순도의 레보플록사신 제조방법
Xu et al. Synthesis and Cytotoxicity Assessment against Human Colorectal Cancer Cell Lines of Quaternary 8‐Dichloromethyl Protoberberine Alkaloids
CN112794849B (zh) 3-(2-氯乙基)-2-甲基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮的合成方法
CN110105371B (zh) 一种多拉达唑原料药中的杂质及其制备方法
CN112898277B (zh) 一种阿法替尼中间体的制备方法
EP3927689B1 (en) Processes for preparing (3r,4r)-1-benzyl-n,4-dimethylpiperidin-3-amine or a salt thereof and processes for preparing tofacitinib using the same

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20150303

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20150901

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20151120

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20151215

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20160226

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20160322

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20160419

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 5925381

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250