JP2015506912A - Her3に特異的な結合分子及びそれらの使用 - Google Patents
Her3に特異的な結合分子及びそれらの使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2015506912A JP2015506912A JP2014543533A JP2014543533A JP2015506912A JP 2015506912 A JP2015506912 A JP 2015506912A JP 2014543533 A JP2014543533 A JP 2014543533A JP 2014543533 A JP2014543533 A JP 2014543533A JP 2015506912 A JP2015506912 A JP 2015506912A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- antigen
- her3
- seq
- binding fragment
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3015—Breast
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3023—Lung
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3046—Stomach, Intestines
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3053—Skin, nerves, brain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3069—Reproductive system, e.g. ovaria, uterus, testes, prostate
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
- G01N33/57492—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds localized on the membrane of tumor or cancer cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
- A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/32—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency specific for a neo-epitope on a complex, e.g. antibody-antigen or ligand-receptor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/567—Framework region [FR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/77—Internalization into the cell
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Neurology (AREA)
Abstract
Description
本出願は、2012年11月12日に作製され、サイズ31.3キロバイトを有する、「Her3-100WO1_SL」と題するテキストファイルとして、本出願と共に提出された配列表を、引用により組み込んでいる。
本発明は、HER3に特異的に結合する組成物、及び癌治療のためのそのような組成物の使用方法を提供する。
ヒト上皮細胞成長因子受容体3(HER3、Erbb3としても公知)は、受容体型タンパク質チロシンであり、且つEGFR(HER1/Erbb1)、HER2/Erbb2、HER3/Erbb3及びHER4/Erbb4からなる受容体型タンパク質チロシンキナーゼ(RTK)の上皮細胞成長因子受容体(EGFR)EGFR/HERサブファミリーに属する。EGFR及びHER2は、乳癌、結腸直腸癌、及び肺癌などの大範疇を含む複数の固形腫瘍型の腫瘍発生を駆動するRTKの中で最もよく確立された発癌性RTKである。EGFR及びHER2のチロシンキナーゼ活性は、それらの発癌活性に必須であることが示されている。
本開示は、抗-HER3結合分子、例えば、抗体又はそれらの抗原-結合断片、例えば、リガンド-依存性及び非依存性の両状況でHER3活性を抑制することが可能であるモノクローナル抗体を提供する。対照的に、当該技術分野における他の抗-HER3モノクローナル抗体(例えば、Ab #6(国際公開公報WO 2008/100624)及びU1-59(国際公開公報WO 2007077028;本明細書ではAMGとも称される)は、リガンド-依存性HER3活性のみを抑制することができる。同じく、増大した効力及び延長された半減期を伴い、その結果投与頻度が減り、投薬間隔が長くなり、且つ投与容積がより小さい、親和性成熟された抗-HER3-結合分子も開示されている。本開示はまた、抗-HER3結合分子を投与することを含む、ヒト対象において、癌などの疾患を治療する方法も提供する。一部の具体的態様において、2C2-誘導されたYTE変異体ヒト抗体が使用される。
(a)X1は、アミノ酸残基アルギニン(R)又はセリン(S)を表し、
(b)X2は、アミノ酸残基セリン(S)又はロイシン(L)を表し、
(c)X3は、アミノ酸残基セリン(S)又はグリシン(G)を表し、
(d)X4は、アミノ酸残基ロイシン(L)又はプロリン(P)を表し、
(e)X5は、アミノ酸残基アルギニン(R)、イソロイシン(I)、プロリン(P)又はセリン(S)を表し、且つ
(f)X6は、アミノ酸残基バリン(V)又はアラニン(A)を表す。)、単離された結合分子又はそれらの抗原結合断片を提供する。
(a)X1は、アミノ酸残基アルギニン(R)又はセリン(S)を表し、
(b)X2は、アミノ酸残基セリン(S)又はロイシン(L)を表し、
(c)X3は、アミノ酸残基セリン(S)又はグリシン(G)を表し、
(d)X4は、アミノ酸残基ロイシン(L)又はプロリン(P)を表し、
(e)X5は、アミノ酸残基アルギニン(R)、イソロイシン(I)、プロリン(P)又はセリン(S)を表し、且つ
(f)X6は、アミノ酸残基バリン(V)又はアラニン(A)を表す。)、
並びに、該VHが、下記アミノ酸配列を含む:
本発明は、HER3に結合する分子及びそれらの抗原-結合断片を提供する。一部の態様において、そのような分子は、HER3に特異的に結合する抗体及びそれらの抗原-結合断片である。関連したポリヌクレオチド、抗-HER3抗体又はそれらの抗原-結合断片を含有する組成物、並びに抗-HER3抗体及び抗原-結合断片を作製する方法も提供される。対象における癌の治療及び診断使用の方法のような、新規の抗-HER3抗体を使用する方法が、更に提供される。
本発明を詳細に説明する前に、本発明は、具体的な組成物又は処理工程に限定されず、それ自体は変動することができることは理解されなければならない。本明細書及び添付された請求項において使用される単数形「ひとつの(a、an、及びthe)」は、その文脈が別に明確に指摘しない限りは、複数の指示対象を含む。用語「ひとつの(a又はan)」に加え用語「1以上の」及び「少なくとも1つの」は、本文において互換的に使用することができる。
表1
本発明は、HER3結合分子、例えば、HER3に特異的に結合する抗体及びそれらの抗原-結合断片を提供する。HER3に関する完全長アミノ酸(aa)配列及びヌクレオチド(nt)配列は、当該技術分野において公知である(例えば、ヒトHER3についてはUniProt寄託番号P2186、又はマウスHER3についてはUniProt寄託番号O88458を参照されたい)。一部の態様において、抗-HER3結合分子は、ヒト抗体である。いくつかの態様において、HER3結合分子は、抗体又はそれらの抗原-結合断片である。一部の態様において、HER3結合分子、例えば抗体又はそれらの抗原-結合断片は、Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、一本鎖Fv若しくはscFv、ジスルフィド結合されたFv、V-NARドメイン、IgNar、イントラボディ、IgGΔCH2、ミニボディ、F(ab')3、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、単-ドメイン抗体、DVD-Ig、Fcab、mAb2、(scFv)2、又はscFv-Fcを含む。一部の態様において、この抗体は、前掲の「定義」のセクションで明らかにされたように、IgG1亜型であり、且つ三重変異体YTEを含む。
該抗-HER3抗体又はそれらの抗原結合断片は更に、下記のコンセンサスアミノ酸配列を含んでなるVH領域を含む:
(a)位置252のアミノ酸の、チロシン(Y)、フェニルアラニン(F)、トリプトファン(W)、又はトレオニン(T)による置換、
(b)位置254のアミノ酸の、トレオニン(T)による置換、
(c)位置256のアミノ酸の、セリン(S)、アルギニン(R)、グルタミン(Q)、グルタミン酸(E)、アスパラギン酸(D)、又はトレオニン(T)による置換、
(d)位置257のアミノ酸の、ロイシン(L)による置換、
(e)位置309のアミノ酸の、プロリン(P)による置換、
(f)位置311のアミノ酸の、セリン(S)による置換、
(g)位置428のアミノ酸の、トレオニン(T)、ロイシン(L)、フェニルアラニン(F)、又はセリン(S)による置換、
(h)位置433のアミノ酸の、アルギニン(R)、セリン(S)、イソロイシン(I)、プロリン(P)、又はグルタミン(Q)による置換、
(i)位置434のアミノ酸の、トリプトファン(W)、メチオニン(M)、セリン(S)、ヒスチジン(H)、フェニルアラニン(F)、又はチロシンによる置換、並びに
(j)前記置換の2以上の組合せ:
ここでこれらの位置は、KabatのEUインデックスに従い番号付けられ、且つここで修飾されたIgGは、野生型のIgG定常ドメインを有するIgGの血清半減期と比べ、増大された血清半減期を有する。
別の態様において、本発明は、本文に記載の様々な抗-HER3抗体が結合するのと同じエピトープへ結合するHER3-結合分子を含む。本文において使用される用語「エピトープ」とは、本発明の抗体へ結合することが可能であるタンパク質決定基をいう。エピトープは通常、アミノ酸又は糖鎖などの分子の化学的に活性のある表面基からなり、且つ特異的三次元構造特徴に加え、特異的帯電特徴を通常有する。立体構造エピトープと直線状(non-conformational)エピトープは、後者ではなく前者に対する結合が、変性溶媒の存在下で失われることで、識別される。そのような抗体は、標準のHER3結合アッセイにおいて、CL16抗体、2C2抗体、又は2C2-YTE変異体などの抗体と交差-競合する(例えば、統計学的に有意な様式で、結合を競合的に阻害する)それらの能力を基に同定することができる。従って一つの態様において、本発明は、抗-HER3抗体及びそれらの抗原-結合断片、例えばCL16抗体又は2C2抗体などの別の本発明の抗-HER3抗体又はそれらの抗原-結合断片とのHER3の結合について競合するヒトモノクローナル抗体を提供する。被験抗体の例えばCL16抗体又は2C2抗体などの結合を阻害する能力は、被験抗体は、HER3への結合に関してその抗体と競合することができること;そのような抗体は、非限定的理論に従い、それが競合する抗-HER3抗体又はそれらの抗原-結合断片と、HER3上の同じ又は関連のある(例えば、構造的に類似の又は空間的に近位の)エピトープに結合することができることを明らかにしている。一態様において、HER3上の同じエピトープに結合する抗-HER3抗体又はそれらの抗原-結合断片、例えば、CL16抗体又は2C2抗体は、ヒトモノクローナル抗体である。
一部の態様において、HER3-結合分子、例えば抗-HER3抗体又はそれらの抗原-結合断片は、HER3リン酸化を抑制することができる。他の態様において、HER3-結合分子、例えば抗-HER3抗体又はそれらの抗原-結合断片は、AKTリン酸化を抑制することができる。更に他の態様において、HER3-結合分子、例えば抗-HER3抗体又はそれらの抗原-結合断片は、HER2-HER3二量体形成を抑制することができる。一部の態様において、HER3-結合分子、例えば抗-HER3抗体又はそれらの抗原-結合断片は、細胞成長を抑制することができる。一部の態様において、HER3-結合分子、例えば抗-HER3抗体又はそれらの抗原-結合断片は、ADCC作用を欠いている。具体的態様において、HER3-結合分子、例えば抗-HER3抗体又はそれらの抗原-結合断片は、リガンド-非依存性の作用機序を介して、HER3リン酸化、AKTリン酸化、及び/又は腫瘍コロニー形成を抑制することができる。
モノクローナル抗-HER3抗体は、Kohler及びMilsteinの文献、Nature, 256: 495 (1975)に記載された方法などの、ハイブリドーマ法を用いて調製することができる。このハイブリドーマ法を用い、マウス、ハムスター、又は他の好適な宿主動物を、先に説明されたように免疫化し、免疫化する抗原に特異的に結合する抗体のリンパ球による産生を誘発する。リンパ球はまた、インビトロにおいても免疫化することができる。免疫化後、リンパ球は、単離され、且つ例えばポリエチレングリコールを用い、好適な骨髄腫細胞株と融合され、ハイブリドーマ細胞を形成し、これらは次に融合されないリンパ球と骨髄腫細胞から選別することができる。免疫沈降、免疫ブロット法、又はインビトロ結合アッセイ(例えばラジオイムノアッセイ(RIA);酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA))により決定されるように、選択された抗原に対し特異的に向けられたモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマは、次に、標準方法(Godingの文献、「モノクローナル抗体:原理と実践(Monoclonal Antibodies : Principles and Practice)」、Academic Press社、1986年)を使用するインビトロ培養において、又は動物内の腹水腫瘍としてインビボにおいてのいずれかで増殖することができる。このモノクローナル抗体は次に、先のポリクローナル抗体について説明されたように、培養培地又は腹水液から精製することができる。
いくつかの態様において、本発明は、HER3に特異的に結合するポリペプチド又はそれらの抗原-結合断片をコードしている核酸配列を含むポリヌクレオチドを包含している。例えば、本発明は、抗-HER3抗体をコードしているか又はそのような抗体の抗原-結合断片をコードしている核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明のポリヌクレオチドは、RNA形又はDNA形であることができる。DNAは、cDNA、ゲノムDNA、及び合成DNAを含み;且つ、二本鎖若しくは一本鎖であることができ、並びに一本鎖である場合は、コード鎖又は非コード(アンチセンス)鎖であることができる。
本発明の方法は、HER3発現又はHER3-発現細胞に関連した疾患を有する患者を治療するための、抗-HER3結合分子、例えばそれらの抗原-結合断片、変種、及び誘導体を含む抗体の使用に関する。「HER3-発現細胞」は、HER3を発現している細胞を意味する。細胞におけるHER3発現を検出する方法は、当該技術分野において周知であり、且つ非限定的に、PCR技術、免疫組織化学、フローサイトメトリー、ウェスタンブロット、ELISAなどが挙げられる。
本発明の抗-HER3結合分子、例えば抗体又はそれらの抗原-結合断片、変種、若しくは誘導体を調製し且つそれらを必要とする対象へ投与する方法は、当業者に周知であるか、又は当業者により容易に決定される。抗-HER3結合分子、例えば抗体又はそれらの抗原-結合断片、変種、若しくは誘導体の投与経路は、例えば、経口、非経口、吸入又は外用であることができる。本文において使用される用語非経口は、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、経直腸、又は経膣投与を含む。しかし本文の内容と適合する他の方法において、本発明の抗-HER3結合分子、例えば抗体又はそれらの抗原-結合断片、変種、若しくは誘導体は、有害な細胞集団の部位へ直接送達され、これにより罹患組織の治療薬への曝露を増加することができる。
本発明は更に、個体由来の組織又は他の細胞又は体液中のHER3タンパク質又は転写産物の発現レベルを測定すること、及び測定された発現レベルを正常な組織又は体液中の標準HER3発現レベルと比較し、これにより標準と比較した発現レベルの増加が、障害の指標であることが関与している、例えば、結腸癌、肺癌、胃癌、頭頸部の扁平細胞癌、メラノーマ、膵臓癌、前立腺癌、及び乳癌を含む、ある種の癌型などの、HER3-発現している細胞媒介性疾患の診断時に有用な診断方法を提供する。
本発明は、本文において説明したHER3-結合分子、例えば本発明の抗-HER3抗体又はそれらの抗原結合断片を備え、且つ本文において説明した方法を実行するために使用することができる、キットを提供する。いくつかの態様において、キットは、1個以上の容器内に少なくとも1種の精製された抗-HER3抗体又はそれらの抗原-結合断片を備える。一部の態様において、キットは、アッセイを実行するための全ての制御、指示、並びに結果の解析及び提示に必要なソフトウェアを含む、検出アッセイを実行するのに必要及び/又は十分な成分の全てを含んでいる。当業者は、開示されたHER3-結合分子、例えば本発明の抗-HER3抗体又はそれらの抗原結合断片は、当該技術分野において周知の確立されたキットフォーマットの一つに容易に取り込むことができることを、容易に認めるであろう。
抗-HER3結合分子、例えば本発明の抗体又はそれらの抗原-結合断片、本発明の分子の変種、又はそれらの誘導体は、当該技術分野において公知のいずれかの方法により、免疫特異的結合についてアッセイすることができる。使用することができるイムノアッセイは、いくつか名前を挙げると、ウェスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ELISA(酵素結合免疫吸着アッセイ)、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降素反応、ゲル拡散沈降素反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、免疫放射線検定法、蛍光イムノアッセイ、プロテインAイムノアッセイなどの技術を使用する、競合的及び非競合的アッセイシステムを含むが、これらに限定されるものではない。そのようなアッセイは、慣習的であり且つ当該技術分野において周知である(例えば、Ausubelら編集の文献、(1994)「分子生物学の最新プロトコール(Current Protocols in Molecular Biology)」(John Wiley & Sons社、NY)、第1巻を参照し、これはその全体が引用により本明細書中に組み込まれている)。
本開示の態様は、本開示のある抗体の詳細な調製及び本開示の抗体の使用方法を説明している以下の非限定的実施例を参照し、更に規定することができる。材料及び方法の両方への多くの変更を、本開示の範囲から逸脱しない限りは、実践することができることは、当業者には明らかであろう。
(1.1. 抗原及び細胞株)
組換えヒトHer1(ECD)/Fcキメラ、ヒトHER2(ECD)/Fcキメラ、ヒトHER3(ECD)/Fcキメラ及びヒトHer4(ECD)/Fcは全て、R&D Systems社(ミネアポリス、MN)から購入し、且つリンカーペプチドを介して、C-末端6Xヒスチジン-タグに融合した。組換えマウスHER3(ECD)/Fcキメラは、ウマにおいて作製した。ヒトKPL-4乳癌細胞は、5%ウシ胎仔血清(FBS)を補充したDMEMにおいて培養した。
非標識且つビオチン化されたHER3(ECD)/Fcを、DyaxのFab 310ヒトFabファージディスプレイライブラリー(Dyax社、ケンブリッジ、MA)からのHER3結合体(binder)選択の標的として使用した。パニングの2つのアームを実行した:捕獲パニング及び溶液内パニング。捕獲パニングに関して、投入ファージを最初に、固定された組換えタンパク質A/Gを介してイムノチューブ上に捕獲されたポリクローナルヒトIgGと共にインキュベーションし、その後固定された組換えタンパク質A/Gを介してイムノチューブ上に捕獲された標識されない標的により選択した。
選択の第2及び第3ラウンドから濃縮されたファージを、ヒト及びマウスHER3結合に関してファージELISAによりスクリーニングした。96-ウェルハーフエリアプレートを、1×PBS(pH7.4)中に希釈した異なる抗原の1ウェルにつき50μlの5μg/mlにより、4℃で一晩コーティングした。これらのコーティングされたプレートを、TPBS中3%(w/v)無脂肪ミルクにより、室温で1時間ブロックし、TPBSにより2回洗浄した。次にプレートを、一晩のファージ上清と一緒に、1時間インキュベーションした。TPBSで10回洗浄した後、プレートを、ホースラディッシュペルオキシダーゼ(HRP)-コンジュゲートされた抗-M13抗体と一緒に1時間インキュベーションし、10回洗浄した。プレートを、テトラメチルベンジジン(TMB)ペルオキシダーゼ基質溶液により呈色させ、この反応を、0.18M H2SO4により停止させ、プレートを、ELISAプレートリーダー上で450nmで読み取った。
陽性ファージクローン由来の免疫グロブリン可変軽鎖(VL)及び可変重鎖(VH)を、PCRにより作製し、且つラムダ軽鎖定常領域及びCH1-ヒンジ-CH2-CH3 IgG1領域を含むヒトIgG1発現ベクターへ挿入した。IgG1抗体を発現するために、ヒト胎児腎293-F細胞を、293fectin(商標)試薬(Invitrogen社、カールスバッド、CA)を使用し、再編成されたIgG ベクターにより、一過性にトランスフェクトした。馴化培地を、トランスフェクション後10日目に収穫し、プールし、且つ滅菌濾過した。IgG1を、プロテインAビーズを用いて精製した。最後に溶出したIgG1を、PBSに対して透析し、且つIgG1濃度を、タンパク質定量アッセイにより決定した。
ヒト乳癌KPL-4細胞を、クローン16抗体(CL16)により標識した。これらの細胞のCL16と一緒のインキュベーションは、HER3エンドサイトーシスの増加につながり、このことは、該受容体が細胞表面でHER2と活性シグナル複合体を形成するのを防いだ。
抗体クローン16の抗原結合断片(Fab)をコードしているDNAを、Dall’Acquaらにより先に説明された改変されたM13-ベースのファージ発現ベクター(Dall’Acquaらの文献、2005, Methods. 36: 43-60)にクローニングした。この改変されたベクターにおいて、ヒトラムダ(λ)定常領域DNAを、ヒトカッパ(κ)軽鎖の代わりに操作した。Fab断片の発現は、LacZプロモーターの制御下にあり、且つ該Fab断片の分泌は、Fab断片のVH鎖及びVL鎖のいずれかのN-末端に融合されたファージP3シグナル配列により可能である。このクローニングは、Kunkelの文献(Kunkel, T. A.、1985, Proc. Natl. Acad. Sci. USA; 82: 488-492)、及びWuの文献(Wu, H.、2003, Methods Mol. Biol. 207: 197-212)に記載されたように、ハイブリダイゼーション変異誘発により実行した。
配列解析は、クローン16(CL16)のVHフレームワークは、VH生殖系列遺伝子3-23と100%の配列同一性を共有するのに対し、VLフレームワークは、その最も近い生殖系列遺伝子である47*01と6つの位置で異なることを示している。生殖系列遺伝子47*01とは異なるアミノ酸の各々及び全てを変更するための位置指定変異誘発を行った。具体的には、6つの点変異を、下記のように軽鎖可変領域に導入し:Y2S、E3V、S18R、M21I、H38Q及びS50Y、ここで最初の文字は、オリジナルクローン16の1文字アミノ酸コードを表し、数字は、フレームワークの残基番号(Kabatに従う)を表し、且つ2番目の文字は、生殖系列配列の1文字アミノ酸コードを表す。各々、オリジナルVL CL16及び生殖系列化された(GL)VL CL16に相当する、図2A及び図2Cの配列を参照されたい。得られた変種は、Fabとして表し、且つそれらの組換えHER3タンパク質への結合は、ELISAにより決定した。
生殖系列化されたクローンGL-P6の6つ全ての相補性-決定領域(CDR)の各アミノ酸を、ハイブリダイゼーション変異誘発法(Kunkelの文献、1985)を使用し、他の20種のアミノ酸へ個別に変異した。DNAプライマーの2つのセットの一方は8種のアミノ酸をコードしているNSSコドンを含み、他方は12種の異なるアミノ酸をコードしているNWSコドンを含むが、これらを使用し、各標的化されたCDR位置に変異を導入した。個別の縮重プライマーを、ハイブリダイゼーション変異誘発反応において使用した。簡単に述べると、各縮重プライマーをリン酸化し、次にウリジニル化されたGL-16 Fab ssDNAと、10:1の比で使用した。この混合物を、95℃に加熱し、次に1時間かけて55℃まで冷却した。その後、T4リガーゼ及びT7 DNAポリメラーゼを添加し、この混合物を、37℃で1.5時間インキュベーションした。VH及びVL CDRに関する合成産物を、各々、プールしたが;しかし、NSS及びNWSライブラリーは、個別に維持し、且つ独立してスクリーニングした。典型的には、プールしたライブラリーDNAの1μLを、XL1-Blue細菌叢上のプラーク形成のため、又はFab断片の作製のために、XL1-Blueへ電気穿孔した(Wu及びAnの文献、2003)。
一次スクリーニングは、別所記載のように、96-ウェルプレート(ディープウェル)において成長され且つ個別の組換えM13クローンにより感染された細菌の培養物上清を使用し実行されるシングルポイントELISA(SPE)アッセイからなる(Wu及びAnの文献、2003)。簡単に述べると、この捕獲ELISAは、96-ウェルMaxisorpイムノプレートの個々のウェルの、炭酸緩衝液(pH8.5)中のヒツジ抗-ヒトFd抗体(Biodesign International社、ME)約50ngによる4℃で一晩のコーティングに関与している。翌日、このプレートを、PBS緩衝液中の3%BSAにより、室温で1時間ブロックした。次にFab上清を、このプレートに添加し、室温で1時間インキュベーションした。洗浄後、ビオチン化されたHER3タンパク質0.1μgを、このウェルに添加し、この混合物を、室温で1.5時間インキュベーションした。これに続けて、ニュートラビジン-ホースラディッシュペルオキシダーゼ(HRP)コンジュゲート(Pierce社、IL)と一緒に室温で約40分間インキュベーションした。HRP活性を、テトラ-メチル-ベンジジン(TMB)基質で検出し、この反応を0.2M H2SO4によりクエンチした。プレートは、450nmで読み取った。
HER3への結合に関して有益であることが決定されたVH及びVLの点変異は、更に組合せて、追加の結合相乗性を獲得した。これらのコンビナトリアル変異体は、Fabとして発現し、且つHER3結合ELISAを用いてスクリーニングした。Fab断片のVH鎖内のY50I又はY50V点変異のいずれか一方をVL変異と組合せると、恩恵はなかったが、HER3への結合を低下したのに対し、いくつかのVL変異の組合せは更に結合を改善した。VL変異のこれらの組合せは、クローン1A4(L96P、S97P及びV100A点変異を含む)、クローン2C2(S26L、L96P、S97P及びV100A点変異を含む)、クローン2F10(S97P及びV100A変異を含む)並びにクローン3E1(S23R、L96P、S97P及びV100A点変異を含む)における組合せを含む。
改善された結合を発揮する単一変異体及び組合せ変異体変種を、更なる特徴決定のために、IgGフォーマットに変換した。各変種の可変領域を、HEK 293F細胞を使用する発現のためのIgG哺乳動物の発現ベクターへのクローニングを促進するために、制限部位をコードしたプライマーを用いるPCRにより増幅した。分泌された可溶性ヒトIgG1タンパク質を、馴化培地から、1mL HiTrapプロテインAカラム(GE Healthcare社、NJ)上で製造業者の指示に従い、直接精製した。精製されたヒトIgG1試料(ドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動により典型的には均質性>95%と判定)を、PBSに対して透析し、急速冷凍し、且つ-70℃で貯蔵した。
表4
抗-HER3 IgGのヒトHER3タンパク質の細胞外ドメインへの結合に関する動態速度(kon、koff)及び平衡解離定数(KD)を、BIAcore(商標)表面プラズモン共鳴技術を用い、センサーチップ表面上に捕獲されたIgGへのヒトHER3細胞外ドメイン(hu HER3(ECD))の結合を測定することにより、決定した。次に個々の結合(kon)及び解離(koff)の速度定数を、得られた結合曲線から、販売業者を通じて入手可能なBIAevaluationソフトウェアを用いて、計算した。データは、1:1結合モデルにフィットし、これは物質移行が制限した結合(mass transport limited binding)を補正する項目を含み、これは検出されるべきであった。次にこれらの速度定数から、IgGのヒトHER3細胞外ドメインタンパク質との相互作用に関する見かけの解離結合定数(KD)を、koff/konの商から計算した。
表5:親CL16(クローン16)抗体と比較した様々な親和性-最適化されたリードの生物物理特性のまとめ
表6:親CL16モノクローナル抗体と比較した親和性最適化されたリードの生物学的特性のまとめ
(2.1. MCF-7細胞におけるHRG-誘導したHER3リン酸化(pHER3)アッセイ)
MCF-7(ATCC番号HTB-22(商標))は、HER3発現を伴うが、内因性HRG発現を伴わない、ヒト乳癌細胞株である。MCF-7細胞を、96-ウェルプレート中に密度30,000個細胞/ウェルで播種し、一晩接着させた。次にこれらの細胞を、24時間血清-飢餓とし、その後処理した。血清-飢餓後、培地を除去し、被験抗体及び対照抗体を含有する無血清培地と置き換え、該細胞を37℃で1時間インキュベーションした。この実験及び以下に提供した追加の実験で使用した被験抗体は、クローン16、2C2、2C2-YTEなどの本文に提供した抗-HER3抗体;並びに、当該技術分野において公知の抗-HER3抗体、特に各々、本文においてはAMG及びMMと称される、U1-59(国際公開公報WO 2007077028)及びAb#6(特許公開WO 2008/100624)を含んだ。それと同時に、ヘレグリン(HRGβ1、R&D Systems社、ミネアポリス、MN)ストックを、無血清成長培地において4×(80ng/ml)で調製した。1時間のインキュベーション期間の終了時に、HRGβ1を、ウェルにスパイクし(最終濃度20ng/ml)、且つ37℃で20分間インキュベーションした。処理の終了時に、培地を除去し、且つ細胞をPBSで洗浄した。細胞を、プロテアーゼインヒビター及びホスファターゼインヒビター(Calbiochem社、ラホヤ、CA)を含むTriton X溶解緩衝液(Boston Bioproducts社、アッシュランド、MA)80μl中に溶解し、分析まで-20℃で貯蔵した。次にpHER3 ELISAを、製造業者のプロトコール(R&D Systems社、DYC1769)に従い、半量96-ウェルCorning(登録商標)Costar(登録商標)3690 ELISAプレート(Corning Life Science社、ローエル、MA)及び1ウェル当たり細胞溶解液50μlを用いて実行した。
MDA-MB-175(ATCC番号HTB-25(商標))は、成長及び生存に関してHRG-HER3シグナル伝達経路に左右される、樹立されたHRG-発現する(γ-アイソフォーム)乳癌細胞株である。細胞を、96-ウェル白色壁のプレート中に2,000個細胞/ウェルの密度で播種し、一晩接着させた。翌日、培地を除去し、被験抗体及び対照抗体を含有する新鮮な完全成長培地と100μl/ウェルで置き換えた。次にプレートを、合計6日間インキュベーションした。相対細胞数を計算するために、CellTiter-Glo(商標)(Promega社、マジソン、WI)を、製造業者のプロトコールに従い使用した。CellTiter-Glo(商標)添加後、プレートを、室温で10分間インキュベーションし、且つルミネセンスをマイクロプレートリーダーを用いて測定した。
HMCB(ATCC番号CRL-9607(商標))は、HRG-誘導したHER2-HER3ヘテロ二量体化により駆動された、樹立されたHRG-発現する(1β-アイソフォーム)メラノーマモデルである。HMCB細胞を、96ウェルプレート(Costar(登録商標))内の、10%熱-失活したFBSを含有する完全培地100μl中に、750個/ウェルの密度で播種した。翌日、抗体処理物を、完全培地中で調製した。全ての抗-HER3モノクローナル抗体及び対照IgGの開始時の濃度は、10μg/mlであり、且つ連続希釈物を、完全培地中に調製した。播種培地を除去し、且つ処理物を、100μl/ウェルで3つ組みで添加した。
HER3リードの、HRG-オートクリンHMCBモデル(ATCC番号CRL-9607(商標))及びA549モデル(ATCC番号CCL-185)におけるHER3シグナル伝達経路を抑制する能力を、評価した。HMCB細胞は、24-ウェルプレート内、及び10%熱-失活させたFBSを含有する培地中に、105個/ウェルで播種し、抗体処理前に、集密度80%以上に到達させた。播種培地を除去し、これらの細胞を、抗体と一緒のインキュベーションに供した。抗-HER3モノクローナル抗体及び対照IgGを、完全培地において調製した。全ての抗-HER3抗体について開始時の濃度は、10μg/mlであり、且つ連続希釈を行った。対照IgGは、濃度10μg/mlでのみ使用した。播種培地の除去後、処理を適用した。5%CO2中、37℃で6時間(HMCB細胞)又は72時間(A549細胞)インキュベーションした後、細胞を、氷冷したPBSで1回洗浄し、次にLaemmli還元緩衝液(Boston BioProducts社、アッシュランド、MA)の添加により、溶解した。
(2.5.1. pHER3細胞アッセイ)
細胞(HCC827 NSCLC細胞、ゲフィチニブ-抵抗性HCC827 NSCLC細胞、MKN45胃癌細胞、Kato III胃癌細胞、又はBT-474 HER2-増幅された乳癌細胞)を、96-ウェルプレート内に、密度30,000個細胞/ウェルで播種し、一晩接着させた。次に、細胞を、被験抗体又は対照抗体により、指定された投与量-曲線で、37℃で4時間処理した。処理の終了時に、培地を除去し、且つ細胞をPBSで洗浄した。細胞を、プロテアーゼインヒビター及びホスファターゼインヒビター(Calbiochem社、ラホヤ、CA)を含むTriton X溶解緩衝液(Boston BioProducts社、アッシュランド、MA)80μl中に溶解し、分析時まで-20℃で貯蔵した。次にpHER3 ELISAを、製造業者のプロトコール(R&D Systems社、DYC1769、ミネアポリス、MN)に従い、半量96-ウェルELISAプレート(Costar 3690)及び細胞溶解液50μl/ウェルを使用し、実行した。
HCC827細胞(ATCC CRL-2868(商標))は、変異体EGFR-駆動された非小細胞肺癌(NSCLC)モデルであるが、これを、被験抗体又は対照抗体で、実施例のセクション2.5.1において先に記載のように処理した(前記参照)。図8Aに示したように、2C2抗体は、pHER3シグナルを部分的に阻害することができるのに対し、公表された抗-HER3モノクローナル抗体AMG及びMMは、2C2よりも効果が低く、且つ強度は10分の1未満であった。
HCC827は、変異体-EGFRを収容し且つこれにより駆動されるが、このことは、HCC827を、ゲフィチニブなどのEGFRチロシンキナーゼ阻害薬(TKI)に対し高度に感受性としている。親HCC827細胞を、ゲフィチニブの一定の毒性量に曝露し、且つ抵抗性クローンを単離し、これはTKI療法を回避する癌の公知の機序である増幅されたcMETを収容することが示された。TKI-抵抗性HCC827細胞を、実施例のセクション2.5.1において先に記載のように、抗-HER3モノクローナル抗体により処理した(上記参照)。図8Bに示されたように、抗-HER3モノクローナル抗体2C2は、ゲフィチニブに対し抵抗性となった変異体HCC827において、HER3活性を抑制した。親細胞株について認められた結果同様に、2C2は、TKI-抵抗性HCC827細胞株において、AMG及びMM抗体よりもより高い効力を示した(約10倍より良い効力)。
cMETはHer-ファミリーのメンバーではないにもかかわらず、HER3と二量体を形成することが可能であることが示されている。cMET-増幅された胃癌モデル細胞株であるMKN45を使用し、抗-HER3抗体は、cMET-駆動されたHER3活性化に拮抗することができるかどうかを評価した。MKN45細胞を、実施例のセクション2.5.1において先に記載のように、抗-HER3 モノクローナル抗体で処理した。図8Cに示されたように、3種の抗-HER3モノクローナル抗体(2C2、AMG及びMM)は全て、MKN45細胞におけるpHER3を抑制することができたが、2C2は、AMG及びMM抗体よりもより高い効力を示した(およそ5〜7倍より良い効力)。
EGFR、HER2及びcMETとのカップリングに加え、HER3は、FGFR2と二量体化し、その悪性転換能を促進する。Kato III(ATCC番号HTB-103(商標))細胞株は、FGFR2-増幅された胃癌モデルであるが、これを使用し、抗-HER3抗体は、FGFR2-駆動されたHER3活性化を抑制することができるかどうかを評価した。Kato III細胞を、実施例のセクション2.5.1において先に記載のように、抗-HER3モノクローナル抗体で処理した(上記参照)。このモデルにおいて、3種の抗-HER3モノクローナル抗体(2C2、AMG、及びMM)は全て、pHER3抑制の類似した最大の程度(〜60%)を達成したが、IC50として測定した場合、2C2は、AMG及びMM抗体よりも、各々、15〜20倍より強力であった(図8D)。
HER2-HER3二量体は、癌における最も悪性転換する発癌実体のひとつであることが示されている。従って本発明者らは、このリガンドを発現せず、且つリガンド-非依存性HER2-HER3二量体化により駆動されると予想される良く樹立されたHER2-増幅された乳癌モデルであるBT-474細胞株(ATCC番号HTB-20(商標))において、抗-HER3モノクローナル抗体を調べた。実施例のセクション2.5.1に先に記載のように、BT-474細胞を、3種の抗-HER3モノクローナル抗体及び同じく2C2-YTEにより処理した。HCC827細胞、ゲフィチニブ-抵抗性HCC827細胞、MKN45細胞、及びKato III細胞などの、試験した3種全ての抗-HER3モノクローナル抗体が活性があったモデルとは異なり、2C2(親2C2及び2C2-YTE変異体の両方)は、試験した抗-HER3モノクローナル抗体の中でpHER3を抑制する実質的活性を示す唯一のものであった(図8E)。これらの結果は、2C2(親2C2型及び2C2-YTE変異体の両方)は、リガンド-非依存性モデルにおいて機能したことを指摘し、且つリガンド-依存性及びリガンド-非依存性の両方の状況における2C2の二重機能性を明らかにした。
(2.6.1. pAKT細胞アッセイ)
細胞(MKN45胃癌細胞、Kato III胃癌細胞、又はBT-474 HER2-増幅された乳癌細胞)を、96-ウェルプレート内に、密度30,000個細胞/ウェルで播種し、且つ一晩接着させた。次に細胞を、指定された投与量-曲線で、被験抗体又は対照抗体により、37℃で4時間処理した。処理の終了時に、培地を除去し、細胞をPBSで洗浄した。細胞を、プロテアーゼインヒビター及びホスファターゼインヒビター(Calbiochem社、ラホヤ、CA)を含む、Triton X溶解緩衝液(Boston BioProducts社、アッシュランド、MA)80μl中に溶解し、分析時まで-20℃で貯蔵した。AKT/pAKTを、Phospho (Ser473)/Total AKT全細胞溶解キット(カタログ番号K15100D、Meso-Scale Discovery社、ゲティスバーグ、MD)に備えられた製造業者のプロトコールを基に分析し、pAKT含量を決定した。
2C2は、pHER3に加え、HER3下流のシグナル伝達経路を抑制することができるかどうかを確認するために、本発明者らは加えて、増幅されたcMET-駆動された胃癌モデルMKN45において、AKTリン酸化を抑制するその能力を評価した。MKN45細胞を、実施例のセクション2.6.1に先に記載のように、抗-HER3モノクローナル抗体で処理した。このモデルシステムにおいて、2C2モノクローナル抗体は、AMG及びMM抗-HER3モノクローナル抗体よりもより高い効力で(およそ5〜7倍より高い)、部分的pAKT阻害を達成した(図9A)。このことは、2C2は、HER3活性を阻害するのみではなく、pAKTなどのHER3の下流のエフェクター分子も抑制することを明らかにした。
この活性はHER3のエフェクターであるpAKTを抑制するより良い効力に翻訳されるかどうかを調べるために、本発明者らは、実施例のセクション2.6.1に先に記載のように、この細胞株、Meso-Scale Discoveryアッセイを用い、様々な抗-HER3モノクローナル抗体によるpAKT阻害を分析した。図9Bに示したように、pHER3データと一致して、2C2は、増幅されたFGFR2-駆動された胃癌モデルであるKato III細胞において、pAKTを抑制した。再度2C2は、pAKT阻害において、AMG及びMM抗体よりも、より高い効力(IC50により測定した場合)及び最大反応を達成した。
HER2-HER3二量体は、癌における最も悪性転換する発癌実体のひとつであることが示されている。従って本発明者らは、BT-474細胞株において、抗-HER3モノクローナル抗体の活性を調べた。BT-474細胞は、前掲の実施例のセクション2.6.1に先に記載のように、抗-HER3モノクローナル抗体で処理し、同じく2C2のYTE変異体型でも処理した。MKN45細胞及びKatoIII細胞などの、試験した3種全ての抗-HER3モノクローナル抗体(2C2、AMG及びMM)が活性があったモデルとは異なり、2C2(親2C2及び2C2-YTE変異体の両方)は、試験した抗-HER3モノクローナル抗体の中でpAKTを抑制する実質的活性を示す唯一のものであった(図9C)。これらの結果は、2C2(親2C2型及び2C2-YTE変異体の両方)は、リガンド-非依存性モデルにおいて機能したことを指摘し、且つリガンド-依存性及びリガンド-非依存性の両方の状況における2C2(親2C2型及び2C2-YTE変異体の両方)の二重機能性を明らかにした。
トラスツズマブに高度に反応性ではないHER2-増幅された乳癌細胞における2C2-YTEの活性を特徴付けるために、本発明者らは、PI3K経路の固有の活性化に起因したトラスツズマブに対するその抵抗性に寄与し得る、PIK3CAに活性化変異(E545K)を収容する乳癌モデルである、MDA-MB-361(ATCC番号HTB-27)に焦点を当てた(Junttilaらの文献、2009, Cancer Cell, 15:429-40)。本発明者らは、このモデルにおける2C2のHER3シグナル伝達及び細胞増殖に対する作用を決定した。
追加の新規HRG-依存性癌を同定するために、数倍の多発性の(times multiple)肺扁平上皮癌(SCC)細胞株を、HER3シグナル伝達活性及びHRG発現についてスクリーニングした。HARA-B細胞株(JCRB番号JCRB1080.1)及びKNS-62細胞株(JCRB番号IFO50358)は、HER3、HRGに加えpHER3を有意なレベルで発現した(データは示さず)。従って本発明者らは、HARA-B細胞株及びKNS-62細胞株における、2C2の活性を調べた。これらの細胞を、前掲の実施例のセクション2.4に本質的に先に記載のように、抗-HER3モノクローナル抗体により処理し、2C2は、HARA-B細胞株(図11)及びKNS-62細胞株(データは示さず)において、pHER3レベルを低下することができた。以下に示すように(実施例、セクション5.4)、2C2-YTEは、ヒト扁平HARA-B NSCLC異種移植片モデルにおいて投与量-依存性の抗腫瘍効率を明らかにした。従って、これらの判定基準(すなわち、HER3、HRGに加えpHER3の発現)は、例えば、本文に記載の2C2、AMG、MM及び他の当該技術分野において公知のものを含む、抗-HER3抗体に対し反応性の追加の癌型を同定するための有用なスクリーニングツールであることができる(例えば、国際公開公報WO2011/136911、WO2012/019024、WO2010/022814参照)。
HER3リガンドヘレグリン(HRG)の存在下において、HER3は、EGFR又はHER2とヘテロ二量体化し、これはHER3のリン酸化並びにAKTとしても公知のホスホイノシチド3キナーゼ(PI3K)及びプロテインキナーゼB(PKB)を介した発癌シグナルの伝達へ繋がる。CRCモデルの収集は、EGFR又はHER2のどの受容体チロシンキナーゼが、HER3介したシグナル伝達の主要な駆動者であるかを決定するために、特徴付けられる。具体的には、6つの異なるCRC腫瘍細胞株SW620(ATCC番号CCL-227)、SW480(ATCC番号CCL-228)、Colo205(ATCC番号CCL-222)、LOVO(ATCC番号CCL-229)、HCT15(ATCC番号CCL-225)、及びCaco-2(ATCC番号HTB-37)を、HER2又はEGFRのアンタゴニスト単独で、又はHER3アンタゴニスト2C2との組合せにより処理した。簡単に述べると、細胞を、密度1.5×105個細胞/ウェルで、24-ウェルプレートへ蒔いた。翌日、2つの同一の細胞のセットを、10μg/mLの2C2抗-HER3抗体、R347対照IgG抗体、抗-HER2抗体2C4(例えば、特許公報WO2001/00245)、抗-EGFR抗体セツキシマブ、又は5μMのEGFRチロシンキナーゼ阻害薬ゲフィチニブにより処理した。5〜6時間37℃でインキュベーションした後、HRGを、50ng/mLでの1つの細胞セットに、37℃で15分間添加した。次に全ての細胞を、冷PBSで洗浄し、2×SDS(ドデシル硫酸ナトリウム)試料緩衝液(Invitrogen社)60μLの添加により溶解した。溶解液を、1.5mLチューブに移し、且つ5分間煮沸し、引き続き氷上で2分間急冷した。等量(20μL)のタンパク質試料を、NuPAGE Novexビス-トリスゲル(Invitrogen社)中に溶解し、その後フッ化ポリビニリデン(PVDF)メンブレン(Invitrogen社)に移した。メンブレンを、0.1%Tween 20(Sigma社)を含有するトリス-緩衝食塩水(KPL)中で洗浄し、且つHER3(Santa Cruz Biotechnology社)、pHER3-Tyr1289(Cell Signaling Technology社)、リン酸化AKT(プロテインキナーゼB(pAKT))(Cell Signaling Technology社)、リン酸化ERK(マイトジェン-活性化プロテインキナーゼ/細胞外シグナル-調節されたキナーゼ(pERK))(Cell Signaling Technology社)、及びグリセルアルデヒド3-リン酸デヒドロゲナーゼ(GAPDH)(Sigma社)に対する抗体と一緒に4℃で一晩インキュベーションした。メンブレンを、0.1%Tween 20(Sigma社)を含有するトリス-緩衝食塩水(KPL)中で洗浄し、次にホースラディッシュペルオキシダーゼ-コンジュゲートされた二次抗体(GE HealthCare社)の中で1時間インキュベーションした。洗浄後、タンパク質バンドを、SuperSignal West Pico化学発光基質(Pierce/Thermo Scientific社)を用いることにより、X-線フィルム上で検出した。
(3.1. HER3へのリガンド-結合を部分的にブロックするクローン16)
抗-HER3モノクローナル抗体のリガンド-誘導したHER3活性をブロックする有効性は、リガンド-結合を直接ブロックするそれらの能力に起因し得る。このシナリオを調べるために、本発明者らは、プレートを、ヘレグリン(HRG)によりコーティングし、且つこれに標識された組換えHER3タンパク質を結合することにより、インビトロHRG-HER3結合アッセイを確立した。
マイクロプレートウェルを、ヘレグリン(HRGβ1、カタログ番号377-HB、R&D Systems社、ミネアポリス、MN)10ng/mlにより、4℃で一晩コーティングした。翌日、プレートを、PBST(PBS+0.05%Tween 20)により4回洗浄し、且つPBS+1μg/ml BSA中で室温で1時間ブロックした。ブロック時に、被験抗体(クローン16、AMG、MM及び陽性対照抗-HER3リガンドブロッキングモノクローナル抗体)の連続希釈物を、PBSTB(PBS+0.05% Tween 20+0.1% BSA)中の個別のプレート内に調製し、且つ組換えHER3(カタログ番号348-RB、R&D Systems社、ミネアポリス、MN)5μg/mlと室温で30分間一緒にした。次にELISAプレートを、PBSTで4×洗浄し、その後抗体-HER3混合物を添加した。プレートを、室温で1時間インキュベーションし、引き続きPBSTで4回洗浄した。抗-His HRP(カタログ番号34460、Qiagen社、バレンシア、CA)を、室温で1時間添加した。プレートを、PBSTにより4回洗浄し、引き続きTMBにより検出した。プレートを、マイクロプレートリーダーを用い、450nmで読み取った。代表的結果を、図13に示している。
いくつかのモノクローナル抗体(クローン16、AMG、MM及び陽性対照抗-HER3リガンドブロッキングモノクローナル抗体)のHRGのHER3への結合を妨害する能力を試験した。陽性対照HER3リガンド-ブロッキングモノクローナル抗体は、HER3のHRGへの結合を効果的かつ完全に抑制した。対照的に、クローン16(2C2の親リード、上記実施例のセクション1.6「親和性最適化」参照)は、この結合の破壊には部分的にのみ効果があった(最大阻害約30%)。AMG及びMMモノクローナル抗体は、同様の弱い部分的ブロック作用を示した(図13)。これらの知見は、クローン16は、恐らく直接リガンド-ブロッキングモノクローナル抗体として機能する可能性が低いことを示した。
そのキナーゼ-欠損の性質のために、HER3モノマーは、活性がなく、且つこれは活性があるためには他のRTKとヘテロ二量体を形成することが必要である。HER2:HER3二量体は、リガンド-依存性及び非依存性の両方の状況において、最も発癌性のシグナル伝達種であることが示されている(Junttilaらの文献、Cancer Cell, 15:429-40, 2009)。2C2によるHER2-HER3二量体化の破壊は、HRG-誘導したHER3-HER2二量体形成を示すリガンド-依存性乳癌モデルであるT-47D細胞において、及びリガンド-非依存性BT-474細胞において、HRG-誘導したHER2-HER3二量体形成アッセイを用いて評価した。このアッセイは、HER3-HER2免疫共沈降を基にした。
T-47D細胞(ATCCカタログ番号HTB-133(商標))は、6ウェルプレートに1×106個/ウェルで、一晩蒔いた。翌朝、細胞を、2C2、CL16、AMG及びMMモノクローナル抗体により、完全血清中濃度5μg/mlで、37℃で2時間処理した。対照は、抗体処理を含まないか、又は対照R347 IgG1による処理であった。この処理に、50ng/mlのHRGによる、37℃で10分間の処理が続いた(HRGで処理しない対照を含む)。細胞を、冷PBSで3回洗浄し、その後、プロテアーゼインヒビター及びホスファターゼインヒビター(Sigma社、セントルイス、MO)を含有する、細胞溶解緩衝液500μlを添加した。細胞を、少なくとも30分間氷上で溶解した。溶解液を、細胞スクレーパーにより収集した。抗-HER3 mAb(カタログ番号MAB3481、R&D Systems社、ミネアポリス、MN)1μgにコンジュゲートされたプロテインAビーズ25μlを含有するプロテインAビーズ溶液50μlを、細胞溶解液500μlに添加し、且つ免疫沈降(IP)カラムに移した。IPカラムを、4℃で一晩回転させた。引き続き、IPカラムを遠心沈殿させ、溶解液を除去し、且つビーズを冷細胞溶解緩衝液で洗浄した。50mM DTTを含有する2×SDS試料緩衝液50μlを、各IPカラムへ添加し、且つカラムを4分間煮沸した。各カラムのボトムチップを取り外し、且つカラムを遠心沈殿させ、溶出液を収集した。溶出液20μlを、SDS-PAGEを用いて分離した。HER2及びHER3の両方について、ウェスタンブロットを行った(抗-HER2抗体により、カタログ番号OP15L、CalBiochem社、ラホヤ、CA;及び、抗-HER3抗体により、カタログ番号SC-285、Santa Cruz Biotechnology社、サンタクルズ、CA)。
BT-474細胞(ATCCカタログ番号HTB-20(商標))を、6-ウェルプレート中に、10%熱-失活したFBSを含む完全RPMI 1640細胞培養培地内で、密度1×106個細胞/ウェルで播種した。翌日、播種培地を除去し、飽和投与量の被験抗体を含有する新鮮な完全RPMI 1640と置き換えた。この実験において、CL16、2C2の前駆体のより低い親和性型、2C2、及びR347、対照IgGを、濃度5μg/mLで試験した。細胞を、抗体と一緒に37℃で2時間インキュベーションした。次に、培地を除去し、細胞を冷PBSで1回洗浄した。1mLの冷PBS中のクロスリンカー3,3’-ジチオビス[スルホスクシンイミジルプロピオネート](DTSSP)を、濃度2mMで添加した。細胞を、氷上で少なくとも1時間インキュベーションした。次に細胞を、冷PBSで3回洗浄した。プロテアーゼインヒビター及びホスファターゼインヒビターを含有する細胞溶解緩衝液(500μL)を添加し、これらの細胞を少なくとも30分間氷上に配置し、溶解させ、その後細胞スクレーパーにより収集した。HER2及びHER3は、細胞溶解液から免疫沈降させた。細胞溶解液(500μL)を、SigmaPrep回転カラム(Sigma社)中でHER3 MAb(MAB3481、R&D Systems社)1μgと予めコンジュゲートさせたプロテインAセファロースビーズ(50%スラリー;Invitrogen社)50μLと一緒にした。この混合物を、4℃で一晩の回転によりインキュベーションした。翌日、ビーズを、遠心分離により細胞溶解液から分離した。カラム中のビーズは、プロテアーゼインヒビター(Sigma社)及びホスファターゼインヒビター(EMD Millipore社)を含有する冷細胞溶解緩衝液(Cell Signaling Technologies社)により4回洗浄した。この洗浄手順の後、50mMジチオスレイトール(DTT;EMD Chemicals社)を含有する2×SDS(ドデシル硫酸ナトリウム)試料緩衝液50μLを、回転カラムに添加した。次にこのカラムを、4分間煮沸した。タンパク質を、遠心分離により溶離し、直ちに免疫ブロッティングに使用した(セクション2.4において行ったように)。
HRGにより処理又は未処理のT-47D細胞を、溶解した。HER3を、抗-HER3モノクローナル抗体により沈降させ、次にペレット中のタンパク質を、SDS-PAGE上で分解させ、且つHER2-HER3相互作用の徴候として、HER2の存在についてブロットした。該二量体は、リガンド-刺激後にのみ生じたので、このモデルは、リガンド-誘導性であった。2C2による予備処理は、二量体形成を効率的に防止し、このことはリガンド-誘導したHER2-HER3二量体形成を妨げるその能力を明らかにしている。MM、AMG、及び親クローン16を含む他の抗-HER3モノクローナル抗体も、有効であることが認められた(図14A)。クロス-リンカーDTSSPを使用し、タンパク質複合体を生化学的に安定化する場合、構成的HER2:HER3ヘテロ二量体は、BT-474細胞において、HRG非存在下で捕獲され、このことは、リガンド-非依存性ヘテロ二量体形成を示唆している。細胞の2C2又はCL16による予備処理は、このヘテロ二量体形成を効果的に破壊した(図14B)。
標的インターナリゼーション及び分解は、それによりモノクローナル抗体が、それらの標的機能を阻害する、2つの一般的機序である。第一に、本発明者らは、BT-474乳癌細胞において、2C2-媒介されたHER3インターナリゼーションを評価した。次に、本発明者らは、この急速な2C2-誘導したHER3インターナリゼーションに、標的分解が続くかどうかを確定した。
HER3インターナリゼーションは、蛍光活性化細胞選別(FACS)アッセイを用いて決定した。BT-474細胞を、アキュターゼ酵素により剥離し、これらの細胞を1%BSAを含有するPBS(FACS緩衝液)中に、細胞密度10×106個細胞/mlになるよう、懸濁させた。細胞50μlを、U-字底96ウェルプレートの各細胞に添加した。抗-HER3 モノクローナル抗体50μlに加え同位体対照(20μg/ml)を、各ウェルに添加し、最終濃度10μg/mlを達成した。このプレートを、37℃で0.5時間、2時間及び4.5時間、各々インキュベーションした。細胞を、冷FACS緩衝液で2回洗浄した(細胞は、1,500rpmで2分間の遠心分離によりペレット化させた)。細胞を、マウス抗-ヒトHER3モノクローナル抗体(カタログ番号MAB3481、R&D Systems社、ミネアポリス、MN)1μg/ml又は10μg/mlを含有する冷FACS緩衝液により再懸濁させた。
Lovo、HCT15及びSW620結腸直腸モデル癌細胞(ATCC番号、各々、CCL-229、CCL-225及びCCL-227)を、24ウェルプレート内に、1.5×105個/ウェルで蒔いた。一晩接着した後、これらの細胞を、2C2及び対照モノクローナル抗体により3〜4時間処理した。細胞を、冷PBSにより1回洗浄し、2×SDS試料緩衝液50〜60μlにより直接溶解し、且つ100℃で10分間煮沸した。試料20μlを、SDS-PAGEゲルに負荷し、電気泳動により分離し、且つHER3に対する抗体(Santa Cruz Biotech社)によりウェスタンブロットし、総HER3タンパク質レベルを定量した。GAPDHに対する抗体(Sigma社)も、一般的タンパク質負荷対照としてGAPDHレベルの定量に使用した。
図15Aに示したように、2C2の両方の投与量は、非常に類似した影響を有した。30分間の処理は、表面HER3集団の39%喪失(61%残存)を引き起こしたのに対し、2時間処理は、62%喪失(38%残存)を引き起こし、このことは2C2による迅速な標的インターナリゼーションを示唆している。加えて、3種の異なる結腸直腸癌モデルを2C2とインキュベーションした場合、SW620細胞において完全なHER3分解が認められたのに対し、他の2種の細胞株においてはほぼ完全な分解が認められ(図15B)、このことは2C2は、強力な標的分解能が可能であることを明らかにしている。
ADCCは、それを介してモノクローナル抗体が、インビボにおいてその抗腫瘍効力を付与することができる一つの認められた様式である。クローン16のADCC活性を評価するために、本発明者らは、2種のHER2-増幅された乳癌モデルBT-474及びSkBR3において、インビトロPBMC-が可能にしたADCCアッセイを使用した。ハーセプチン/トラスツズマブは、これらの癌型においてADCC作用を付与することが示されているので、これを、陽性対照として使用した。両方のモデルにおいて、本発明者らは、ハーセプチンから有意な腫瘍-殺傷作用を認めたが、試験した残りのモノクローナル抗体であるクローン16、AMG及びMMは、非常に不活性であり、このことは、これらは測定可能なADCC作用を欠いていることを指摘している(データは示さず)。2C2-YTEを、補体給源として、ヒト血清を用いるCDCアッセイにおいて試験した。加えて、抗-HER2抗体トラスツズマブ及び抗-CD20抗体リツキシマブを、対照として含んだ。2C2-YTEを含むいずれの抗体も、いずれの濃度でも検出可能なCDC活性を示さなかった(データは示さず)。SkBR3細胞は、CD20を発現しない。陽性対照として、リツキシマブは、CD20を発現する Daudi細胞に対する類似のCDCアッセイにおいて、かなりの細胞殺傷活性を明らかにした(データは示さず)。
(3.5.1. SkBR3乳癌細胞における細胞周期停止アッセイ)
BioSante細胞(ATCC番号HTB-30)を、6-ウェルプレート中に、密度150,000個細胞/ウェルで播種し、且つ一晩接着させた。翌日、培地を除去し、被験抗体及び対照抗体を含有する新鮮な成長培地と置き換えた。次に細胞を、37℃で48時間インキュベーションした。この処理の最後に、細胞をトリプシン処理し、15mlコニカルチューブにプールし、且つ1500rpmで5分間遠心分離した。次に細胞をPBSで1回洗浄し、氷冷した70%エタノール中で-20℃で一晩固定した。
FACS-ベースの細胞周期分析は、BT-474に類似したHER2-増幅された乳癌細胞株であるSkBR3細胞において、ハーセプチン及びクローン16(2C2の親リード)の両方は、G1期で細胞周期停止を引き起こした(図16に示されたようなS/G2集団の減少による、G1-集団の増加)ことを示した。
HRGは、様々な癌モデルにおいて、主要なプロ-血管新生(pro-angiogenic)サイトカインであるVEGFの分泌を駆動することが示されている。従って本発明者らは、2つの乳癌モデルMCF-7及びBT-474において、HRG-誘導したVEGF分泌を抑制する2C2の阻害作用を評価した。
MCF-7細胞及びBT-474細胞を、24-ウェルプレート中に、密度100,000個細胞/ウェルで播種し、且つ2日間静止(rest)させた。次に培地を除去し、2%FBS並びに対照抗体及び被験抗体を含有する新鮮な成長培地500μlと置き換えた。引き続き24時間インキュベーションし、細胞培養培地を収集し、VEGF ELISAキット(R&D Systems社、DY293B)を用い、VEGFレベルを決定した。各ウェル中の相対細胞数を、新鮮培地を細胞へCell Titer Glo(Promega社、比1:1)と一緒に添加し、及びプレートを室温で10分間インキュベーションすることにより決定した。ルミネセンスを、プレートリーダーを用いて読み取り、且つこれらの値をデータの正規化に使用した。
HRG処理は、BT-474(図17A)及びMCF-7(図17B)の両方の乳癌モデル細胞株において、VEGF分泌を、6.5倍〜8倍の範囲での劇的な増加を誘導した。CL16(クローン16)、及びMMモノクローナル抗体は、この増加のほとんどを抑制することができ、このことは、これらの抗-HER3モノクローナル抗体は、追加の血管調節作用を付与することができることを示唆している。
(4.1. ヒトHER3と同様の親和性でカニクイザル及びマウスHER3に結合する2C2)
関連のある毒性試験種の選択を可能にするために、2C2のヒト、カニクイザル(cyno)及びマウスのHER3に対する親和性を比較するために、Biacoreアッセイを、本質的に先に記載のように行った(表7の上側部分)。より高い解像度のBIAcore機器、代替のFc捕獲試薬及びバックグラウンド結合の補正のために精緻化された注入プロトコールを用い、2C2-YTEについて、追加のBiacoreアッセイを行った。簡単に述べると、機器の製造業者により概説されたような標準アミンプロトコールを用い、プロテインA捕獲試薬を、同じCM5センサーチップ上に連続して接続された2つの隣接するフローセル上に固定した。これらのプロテインA表面の一つを、本実験の参照表面として使用し、同時に他方のものは、IgG捕獲及び引き続きのHER3(ECD)結合を記録するために使用する活性表面として働いた。参照フローセル表面及び活性フローセル表面上の最終のプロテインA密度は、各々、1986 RU及び1979 RUとして記録した。構成に従い、本方法は、2C2-YTE IgGは、最初に活性プロテインA表面上にのみ捕獲され、引き続き活性及び参照の両フローセル表面上にHER3タンパク質溶液が注入されるように設定した。そのような実行において、この戦略は、HER3被検体のプロテインA捕獲表面への任意の非特異的結合に関する結合曲線を補正した。IgG捕獲工程に関して、2C2-YTE IgGは、HBS-EP+機器緩衝液(0.01M HEPES、pH7.4、0.15M NaCl、3mM EDTA、及び0.05% P20)中に10nMで調製し、次に、活性プロテインAフローセル表面上に流量10μL/分で30秒かけて注入した。次にヒト、カニクイザル、及びマウスのHER3タンパク質を、最初に機器緩衝液中に500nMストック溶液で調製し、次に各々の2倍の連続希釈シリーズを作製し、最終濃度0.39nMを提供した。次にHER3タンパク質を、活性及び参照の両セルのプロテインA表面の上に120秒かけて、流量75μL/分で注入した。解離データを、15分間収集し、引き続き注入の間に10mM Gly緩衝液(pH1.7)による60秒パルス2回を施し、フローセルをプロテインA捕獲表面へ戻すよう再生した。数回の緩衝液注入をまた、一連の注入を通じて割り込ませた。選択緩衝液注入を、引き続き参照セルデータと共に使用し、注入アーチファクツ及び/又は非特異的結合相互作用に関して、生データセットを補正したが、これは「二重参照(double-referencing)」と通常称される技術である(Myszkaの文献、1999)。次に完全に補正した結合データを、検出されるべき、物質移行が制限した結合を補正する項を含んだ、1:1結合モデルに全域的にフィットさせた(BIAevaluation 4.1ソフトウェア)。この解析は、動態速度(kon、koff)定数を決定し、これらから次にみかけのKDを、koff/konとして計算した(表7下側)。これら2つの実験セット間のKon値及びKoff値の変動は、恐らく先に詳述されたような2つのプロトコールの間の差異によるものであり、且つ概してこれらの動態パラメータを測定するために受け容れられる2倍誤差範囲内であった。表7に示されたように、2C2、及び2C2-YTEのカニクイザルHER3への親和性は、ヒトHER3に対する親和性と事実上同じであった。マウスHER3に関する親和性は、ヒトHER3に関する親和性の3倍以内であった。
表7:2C2のヒト、カニクイザル、及びマウスHER3への親和性を示すBiacore結合アッセイ
Ad293細胞(Stratagene社、No. 240085)を、リポフェクタミン2000試薬(Invitrogen社)と共に供されたプロトコールに従い、完全長cynoHER3-発現ベクターにより一過性にトランスフェクトした。細胞を、37℃で48時間インキュベーションさせ、その後処理した。抗体を、完全成長培地内に、10μg/mlで1時間添加し、引き続きHRGβ1(R&D Systems社)20ng/mlにより37℃で10分間刺激した。処理の最後に、培地を除去し、細胞を、PBSにより1回洗浄した。細胞を、2×Novexトリス-グリシン試料緩衝液(Invitrogen社)により溶解し、且つpHER3及び総HER3のレベルを、免疫ブロット法により決定した(各々、Cell Signaling社、抗体#4791、及びSanta Cruz社、抗体#285)。バンドのデンシトメトリーは、ImageJソフトウェア(NIH、imagej.nih.gov/ij/)を用いて遂行した。
カニクイザルHER3の2C2による結合及び交差調節(cross-modulation)を完全に確立するために、ウェスタンブロットにより明らかにされるように、完全長カニクイザルHER3を異所性に発現している安定したAd293細胞株を樹立した(図18A)。HRGで処理した場合、カニクイザルHER3は、pHER3シグナルの誘導により証明されるような強固な活性化を受けた(図18B)。細胞を2C2により同時処理した場合、しかしR347対照抗体では処理されなかった場合、pHER3誘導は、完全に抑止され、このことは、2C2は、細胞表面上のカニクイザルHER3に結合することができるのみではなく、その活性化を効果的にアブレートすることができることを明らかにしている(図18B)。2C2がカニクイザルHER3に対しヒトHER3に対するのと同じ親和性を発揮したことを示す上記Biacore親和性測定データとの組合せて、これらの結果は、2C2治験に関する関連のある毒性試験種としてカニクイザルを実証した。
(4.4. 皮下ヒトFADU頭頸部異種移植片モデル試験)
(4.4.1. 方法)
ヒトFADU頭頸部細胞(ATCC番号HTB-43)を、5%CO2インキュベーター内、4.5g/Lグルコース、L-グルタミン、ピルビン酸ナトリウム及び10%ウシ胎仔血清を含有するRPMI 1640培地中で、37℃で維持した。異種移植片を、4〜6週齢の無胸腺nu/nuマウスの右側腹部へ、マウス1匹あたり5×106個細胞(50%マトリゲル中に懸濁させた)の皮下注入により樹立した。腫瘍を、200mm3まで成長させ、その後有効性試験のために無作為化した。2C2、2C2-YTE、セツキシマブ、対照IgG1又は2C2のセツキシマブモノクローナル抗体との組合せを、腹腔内投与した。投与量依存性試験のために、2C2を体重1kg当たり3、5、7、及び10mg(mg/kg)、対照を10mg/kg投与した。組合せ試験のために、2C2を3mg/kg、セツキシマブを30mg/kg、及び対照抗体を6mg/kg投与した。マウスにおける腫瘍成長に関して、キャリパー測定を行い、下記式を用い腫瘍容積を計算した:
腫瘍容積=π÷6(長さ×幅×幅)
。抗腫瘍作用は、%デルタ腫瘍成長阻害(TGI)として表し、これは下記のように計算した:
%ΔTGI=1−(dT÷dC)×100
(式中、dT=病期分類(staging)時の値と比較した、治療群における平均腫瘍容積の変化、及びdC=病期分類時の値と比較した、対照群における平均腫瘍容積の変化)。
雌のヌードマウスにおいて皮下に成長したヒトFADU頭頸部異種移植片モデルを利用し、2C2は、投与量-依存性の抗腫瘍効率を明らかにした。99%腫瘍成長阻害(dTGI)での最大有効性は、本試験の期間に、週2回投与された7mg/kgで認められた(図19A)。
(4.5.1. 方法)
ヒトDetroit562頭頸部細胞(ATCC番号CCL-138)を、5%CO2インキュベーター内、4.5g/Lグルコース、L-グルタミン、ピルビン酸ナトリウム及び10%ウシ胎仔血清を含有するRPMI 1640培地中で、37℃で維持した。異種移植片を、4〜6週齢の無胸腺nu/nuマウスの右側腹部へ、マウス1匹あたり5×106個細胞の皮下注入により樹立した。腫瘍を、200mm3まで成長させ、その後有効性試験のために無作為化した。2C2、2C2-YTE、セツキシマブ、対照IgG1又は2C2のセツキシマブモノクローナル抗体との組合せを、腹腔内投与した。投与量依存性試験のために、2C2を体重1kg当たり1、3、10、及び30mg(mg/kg)投与した。組合せ試験のために、2C2を3mg/kg、セツキシマブを30mg/kg、及び対照抗体を10mg/kg投与した。マウスにおける腫瘍成長に関して、キャリパー測定を行い、下記式を用い腫瘍容積を計算した:
腫瘍容積=π÷6(長さ×幅×幅)
。抗腫瘍作用は、%デルタ腫瘍成長阻害(TGI)として表し、これは下記のように計算した:
%ΔTGI=1−(dT÷dC)×100
(式中、dT=病期分類時の値と比較した、治療群における平均腫瘍容積の変化、及びdC=病期分類時の値と比較した、対照群における平均腫瘍容積の変化)。
2C2は、雌のヌードマウスにおいて皮下に成長したヒトDetroit562頭頸部異種移植片モデルにおいて、抗腫瘍効率を明らかにした。2C2の週2回投与された10mg/kgは、72%dTGIで最大有効性であった(図23A)。Detroit562モデルは、PIK3CA変異を含む。
(4.6.1. 方法)
ヒトCAL27頭頸部細胞(ATCC番号CRL-2095)を、5%CO2インキュベーター内、4.5g/Lグルコース、L-グルタミン、ピルビン酸ナトリウム及び10%ウシ胎仔血清を含有するRPMI 1640培地中で、37℃で維持した。異種移植片を、4〜6週齢の無胸腺nu/nuマウスの右側腹部へ、マウス1匹あたり5×106個細胞の皮下注入により樹立した。腫瘍を、200mm3まで成長させ、その後有効性試験のために無作為化した。2C2-YTE、セツキシマブ、又は対照IgG1を、腹腔内投与した。投与量依存性試験のために、2C2-YTEを体重1kg当たり3、10、及び30mg(mg/kg)投与した。マウスにおける腫瘍成長に関して、キャリパー測定を行い、下記式を用い腫瘍容積を計算した:
腫瘍容積=π÷6(長さ×幅×幅)
。抗腫瘍作用は、%デルタ腫瘍成長阻害(TGI)として表し、これは下記のように計算した:
%ΔTGI=1−(dT÷dC)×100
(式中、dT=病期分類時の値と比較した、治療群における平均腫瘍容積の変化、及びdC=病期分類時の値と比較した、対照群における平均腫瘍容積の変化)。
2C2-YTEの投与量-依存性活性は、2C2-YTEを用い、第三の頭頸部腫瘍モデルCAL27において確認された。2C2-YTEの週2回投与される3、10又は30mg/kgは、対照IgG1-処理動物と比べ、各々、TGIの26.4%、55.2%、又は68.8%を示した(図24)。
(4.7.1. 方法)
ヒトA549 NSCLC細胞(ATCC番号CCL-185)は、KRAS遺伝子のコドン12に変異を含むが、これを5%CO2インキュベーター内、4.5g/Lグルコース、L-グルタミン、ピルビン酸ナトリウム及び10%ウシ胎仔血清を含有するハムF12K培地中で、37℃で維持した。異種移植片を、4〜6週齢の無胸腺nu/nuマウスの右側腹部へ、マウス1匹あたり5×106個細胞(50%マトリゲル中に懸濁させた)の皮下注入により樹立した。腫瘍を、200mm3まで成長させ、その後有効性試験のために無作為化した。2C2、2C2-YTE、セツキシマブ、対照IgG1又は2C2のセツキシマブモノクローナル抗体との組合せを、腹腔内投与した。投与量依存性試験のために、2C2を体重1kg当たり3、10、及び30mg(mg/kg)で、並びに2C2-YTEを10mg/kgで投与した。組合せ試験のために、2C2及びセツキシマブを各々10mg/kgで投与した。マウスにおける腫瘍成長に関して、キャリパー測定を行い、下記式を用い腫瘍容積を計算した:
腫瘍容積=π÷6(長さ×幅×幅)
。抗腫瘍作用は、%デルタ腫瘍成長阻害(TGI)として表し、これは下記のように計算した:
%ΔTGI=1−(dT÷dC)×100
(式中、dT=病期分類時の値と比較した、治療群における平均腫瘍容積の変化、及びdC=病期分類時の値と比較した、対照群における平均腫瘍容積の変化)。
2C2は、雌のヌードマウスにおいて皮下に成長したヒトA549 NSCLC異種移植片モデルにおいて、投与量-依存性の抗腫瘍効率を明らかにした。91% dTGIの最大有効性は、33日目まで週2回投与された2C2の30mg/kgで達成された(図25A)。10mg/kgで与えられた2C2及び2C2-YTEは、このA549腫瘍モデルにおいて類似した抗腫瘍効率を示した。一旦治療を停止したならば、この腫瘍は、対照-治療マウスにおける腫瘍と同じ速度で成長を始めた。A549異種移植片モデルは、KRAS変異及びLKB-1欠失を含む。
(4.8.1. 方法)
ヒト扁平HARA-B NSCLC細胞は、野生型RAS遺伝子、HRG及びpHER3を発現するが、これを5%CO2インキュベーター内、4.5g/L Dグルコース、2.383g/L HEPES緩衝液、L-グルタミン、1.5g/L重炭酸ナトリウム(Sodium Bicarbinate)、110mg/Lピルビン酸ナトリウム及び10%ウシ胎仔血清を含有するRPMI 1640培地中で、37℃で維持した。異種移植片(50%マトリゲル中に懸濁させた)を、4〜6週齢の無胸腺nu/nuマウスの右側腹部へ、マウス1匹あたり5×106個細胞の皮下注入により樹立した。腫瘍を、227mm3まで成長させ、その後有効性試験のために無作為化した。2C2-YTEを、体重1kg当たり3、10及び30mg(mg/kg)、対照を30mg/kgで、腹腔内投与した。マウスにおける腫瘍成長に関して、キャリパー測定を行い、下記式を用い腫瘍容積を計算した:
腫瘍容積=π÷6(長さ×幅×幅)
。抗腫瘍作用は、%デルタ腫瘍成長阻害(TGI)として表し、これは下記のように計算した:
%ΔTGI=1−(dT÷dC)×100
(式中、dT=病期分類時の値と比較した、治療群における平均腫瘍容積の変化、及びdC=病期分類時の値と比較した、対照群における平均腫瘍容積の変化)。
2C2-YTEは、雌のヌードマウスにおいて皮下に成長したヒト扁平HARA-B NSCLC異種移植片モデルにおいて、投与量-依存性の抗腫瘍効率を明らかにした。64.6% dTGIの最大有効性は、29日目まで週2回投与された2C2-YTEの30mg/kgで達成された(図26)。10mg/kgで与えられた2C2-YTEは、30mg/kgと類似した抗腫瘍効率を示したが;しかし、3mg/kgの2C2-YTEは、このHARA-B腫瘍モデルにおいて有効ではなかった。HARA-B異種移植片モデルは、野生型RAS対立遺伝子を含む。
(4.9.1. 方法)
ヒトHT-29結腸直腸癌細胞(ATCC番号HTB-38)は、5%CO2インキュベーター内、4.5g/Lグルコース、L-グルタミン、ピルビン酸ナトリウム及び10%ウシ胎仔血清を含有するRPMI 1640培地中で、37℃で維持した。異種移植片を、4〜6週齢の無胸腺nu/nuマウスの右側腹部へ、マウス1匹あたり5×106個細胞の皮下注入により樹立した。腫瘍を、200mm3まで成長させ、その後有効性試験のために無作為化した。2C2、2C2-YTE及び対照IgG1モノクローナル抗体を、腹腔内投与した。2C2は、体重1kg当たり2、10及び30mg(mg/kg)で投与したのに対し、2C2-YTEは、30mg/kgであった。マウスにおける腫瘍成長に関して、キャリパー測定を行い、下記式を用い腫瘍容積を計算した:
腫瘍容積=π÷6(長さ×幅×幅)
。抗腫瘍作用は、%デルタ腫瘍成長阻害(TGI)として表し、これは下記のように計算した:
%ΔTGI=1−(dT÷dC)×100
(式中、dT=病期分類時の値と比較した、治療群における平均腫瘍容積の変化、及びdC=病期分類時の値と比較した、対照群における平均腫瘍容積の変化)。
2C2は、雌のヌードマウスにおいて皮下注入したヒトHT-29結腸直腸異種移植片モデルを利用し、投与量-依存性の抗腫瘍効率を示した。週2回投与される2C2の30mg/kgは、治療相時に、56% dTGIの最大有効性であった(図27)。2C2-YTEは、2C2と同じ有効性を、両方共30mg/kgの投与で示した。一旦治療が停止されると、腫瘍は、対照腫瘍と同じ速度で成長した。HT-29異種移植片モデルは、BRAF変異を含む。セツキシマブ10mg/kgの単独は、このモデルにおいて測定可能な抗-腫瘍活性を有さなかった。セツキシマブ10mg/kgと組合せた2C2 30mg/kgの活性は、治療相の終了時に、2C2 30mg/kg単独の活性と区別不可能であった(データは示さず)。このことは、このEGFR-発現しているCRC腫瘍モデルは、2C2に良く反応するが、これは2C2-YTEのセツキシマブへの添加により更に阻害されることはないことを指摘している。
(4.10.1. 方法)
ヒトHCT-116結腸直腸癌細胞は、5%CO2インキュベーター内、4.5g/Lグルコース、L-グルタミン、ピルビン酸ナトリウム及び10%ウシ胎仔血清を含有するRPMI 1640培地中で、37℃で維持した。異種移植片を、4〜6週齢の無胸腺nu/nuマウスの右側腹部へ、マウス1匹あたり5×106個細胞の皮下注入により樹立した。腫瘍を、200mm3まで成長させ、その後有効性試験のために無作為化した。2C2、2C2-YTE、セツキシマブ及び対照IgG1モノクローナル抗体を、腹腔内投与した。2C2は、体重1kg当たり3、10及び30mg(mg/kg)で投与したのに対し、2C2-YTEは、30mg/kgであった。マウスにおける腫瘍成長に関して、キャリパー測定を行い、下記式を用い腫瘍容積を計算した:
腫瘍容積=π÷6(長さ×幅×幅)
。抗腫瘍作用は、%デルタ腫瘍成長阻害(TGI)として表し、これは下記のように計算した:
%ΔTGI=1−(dT÷dC)×100
(式中、dT=病期分類時の値と比較した、治療群における平均腫瘍容積の変化、及びdC=病期分類時の値と比較した、対照群における平均腫瘍容積の変化)。
週2回投与されるいくつかの異なる濃度の2C2、及び10mg/kgの2C2-YTEは、雌のヌードマウスへの皮下注入によりヒトHCT-116 結腸直腸異種移植片モデルにおいて軽度の抗腫瘍効率を示した(図28)。最大有効性は、2C2の10mg/kgについて43% dTGIが記録された。抗-EGFRモノクローナル抗体セツキシマブは、10mg/kgで有効性がなかった。HCT-116異種移植片モデルは、KRAS変異を含む。
(4.11.1. 方法)
ヒトLOVO結腸直腸癌細胞(ATCC番号CCL-229)は、5%CO2インキュベーター内、4.5g/Lグルコース、L-グルタミン、ピルビン酸ナトリウム及び10%ウシ胎仔血清を含有するハムF12K培地中で、37℃で維持した。異種移植片を、4〜6週齢の無胸腺nu/nuマウスの右側腹部へ、マウス1匹あたり5×106個細胞の皮下注入により樹立した。腫瘍を、200mm3まで成長させ、その後有効性試験のために無作為化した。2C2、2C2-YTE、セツキシマブ及び対照IgG1モノクローナル抗体を、腹腔内投与した。2C2は、体重1kg当たり10又は30mg(mg/kg)で投与し、2C2-YTE及びセツキシマブは、10mg/kgで、並びに対照は30mg/kgで投与した。マウスにおける腫瘍成長に関して、キャリパー測定を行い、下記式を用い腫瘍容積を計算した:
腫瘍容積=π÷6(長さ×幅×幅)
。抗腫瘍作用は、%デルタ腫瘍成長阻害(TGI)として表し、これは下記のように計算した:
%ΔTGI=1−(dT÷dC)×100
(式中、dT=病期分類時の値と比較した、治療群における平均腫瘍容積の変化、及びdC=病期分類時の値と比較した、対照群における平均腫瘍容積の変化)。
週2回投与される30mg/kgの2C2は、雌のヌードマウスにおいて皮下に成長したヒトLOVO結腸直腸異種移植片モデルにおいて48% dTGIの抗腫瘍効率を達成した(図29)。2C2、2C2-YTE及びセツキシマブの全て10mg/kgは、同等の有効性を有した。LOVO異種移植片モデルは、KRAS変異を含む。
(4.12.1. 方法)
ヒトDU145前立腺癌細胞(ATCC番号HTB-81)は、5%CO2インキュベーター内、アール塩、L-グルタミン、及び10%ウシ胎仔血清を含有するMEM培地中で、37℃で維持した。異種移植片を、4〜6週齢の無胸腺nu/nuマウスの右側腹部へ、マウス1匹あたり5×106個細胞(50%マトリゲル中に懸濁された)の皮下注入により樹立した。腫瘍を、200mm3まで成長させ、その後有効性試験のために無作為化した。2C2、MM及びAMGモノクローナル抗体を、体重1kg当たり30mgで腹腔内投与した。マウスにおける腫瘍成長に関して、キャリパー測定を行い、下記式を用い腫瘍容積を計算した:
腫瘍容積=π÷6(長さ×幅×幅)
。抗腫瘍作用は、%デルタ腫瘍成長阻害(TGI)として表し、これは下記のように計算した:
%ΔTGI=1−(dT÷dC)×100
(式中、dT=病期分類時の値と比較した、治療群における平均腫瘍容積の変化、及びdC=病期分類時の値と比較した、対照群における平均腫瘍容積の変化)。
週2回2C2の30mg/kgが投与される雄のヌードマウスにおいて皮下に成長したヒトDU145前立腺癌異種移植片モデルを使用し、この腫瘍モデルにおいて77% dTGIの抗腫瘍効率が明らかになった(図30)。DU145異種移植片モデルは、LKB-1欠失を含む。30mg/kgで使用した抗-HER3モノクローナル抗体AMG及びMMは、抗腫瘍効率を明らかにしたが、これらは、同じ投与量30mg/kgの2C2よりも効果が低かった。
(4.13.1. 方法)
ヒトBT-474乳癌細胞を、5%CO2インキュベーター内、4.5g/Lグルコース、L-グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、及び10%ウシ胎仔血清を含有するRPMI 1640培地中で、37℃で維持した。同所性異種移植片を、4〜6週齢の無胸腺nu/nuマウスの右側腹部上の乳腺脂肪帯へ、マウス1匹あたり1×107個細胞(50%マトリゲル中に懸濁された)の注入により樹立した。エストロゲンペレット(0.36mg)を、細胞注入前1〜2日に、左側腹部の皮膚下側に配置した。腫瘍を、200mm3まで成長させ、その後有効性試験のために無作為化した。2C2、2C2-YTE、及び/又は当該技術分野において公知の抗-HER2抗体であるMM、AMG及びトラスツズマブ(商品名ハーセプチン(登録商標);例えば、米国特許第5,821,337号)を、体重1kg当たり30mg腹腔内投与した。ラパチニブを、体重1kg当たり100mgで経口経管栄養により投与した。マウスにおける腫瘍成長に関して、キャリパー測定を行い、下記式を用い腫瘍容積を計算した:
腫瘍容積=π÷6(長さ×幅×幅)
。抗腫瘍作用は、%デルタ腫瘍成長阻害(TGI)として表し、これは下記のように計算した:
%ΔTGI=1−(dT÷dC)×100
(式中、dT=病期分類時の値と比較した、治療群における平均腫瘍容積の変化、及びdC=病期分類時の値と比較した、対照群における平均腫瘍容積の変化)。
HER2-駆動されたヒト乳癌モデルBT-474を使用し、週2回注入される30mg/kgの2C2投与を、雌ヌードマウスの乳腺脂肪帯へ同所性注入し、BT-474異種移植片における55% dTGIにつながった(図31A)。BT-474は、HercepTestにより3+と特徴付けられる、非常に高いレベルでHER2を発現する。両方共30mg/kgで投与されたAMG及びMMは、このHER2-駆動されたモデルにおいて抗腫瘍効率を示さなかった。
(4.14.1. 方法)
ヒトMCF-7乳癌細胞を、5%CO2インキュベーター内、グルタマックス、2.4/L炭酸水素ナトリウム、Hepes及び5%ウシ胎仔血清を含有するOptimem培地中で、37℃で維持した。同所性異種移植片を、4〜6週齢の無胸腺nu/nuマウスの右側腹部上の乳腺脂肪帯へ、マウス1匹あたり5×106個細胞(50%マトリゲル中に懸濁された)の注入により樹立した。エストロゲンペレット(0.36mg)を、細胞注入前1〜2日に、左側腹部の皮膚下側に配置した。腫瘍を、200mm3まで成長させ、その後有効性試験のために無作為化した。2C2、2C2-YTE及びトラスツズマブモノクローナル抗体を、腹腔内投与した。2C2は、体重1kg当たり10又は30mg投与し、2c2-YTE及びトラスツズマブは10mg/kg投与した。パクリタキセルは、体重1kg当たり10mg静脈内投与した。マウスにおける腫瘍成長に関して、キャリパー測定を行い、下記式を用い腫瘍容積を計算した:
腫瘍容積=π÷6(長さ×幅×幅)
。抗腫瘍作用は、%デルタ腫瘍成長阻害(TGI)として表し、これは下記のように計算した:
%ΔTGI=1−(dT÷dC)×100
(式中、dT=病期分類時の値と比較した、治療群における平均腫瘍容積の変化、及びdC=病期分類時の値と比較した、対照群における平均腫瘍容積の変化)。
2C2の10mg/kg又は30mg/kgのいずれかは、雌ヌードマウスの乳腺脂肪帯へ同所性注入されたヒトMCF-7乳癌異種移植片モデルにおいて、34% dTGIで、軽度の抗腫瘍効率を示した。2C2-YTEの10mg/kgは、同じ濃度の2C2と類似の有効性を有した(図33A)。トラスツズマブは、このHER2発現モデルにおいて有効性を示さず、このことは、HER2は腫瘍成長を駆動するのに十分ではないことを指摘している。MCF-7腫瘍は、HercepTestにより測定し、低レベルのHER2(1+)を発現した。
(4.15.1. 方法)
ヒトMDA-MB-361乳癌細胞を、5%CO2インキュベーター内、4.5g/Lグルコース、L-グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、及び10%ウシ胎仔血清を含有するRPMI 1640培地中で、37℃で維持した。同所性異種移植片を、4〜6週齢の無胸腺nu/nuマウスの右側腹部上の乳腺脂肪帯へ、マウス1匹あたり5×106個細胞(50%マトリゲル中に懸濁された)の注入により樹立した。エストロゲンペレット(0.36mg)を、細胞注入前1〜2日に、左側腹部の皮膚下側に配置した。腫瘍を、230mm3まで成長させ、その後有効性試験のために無作為化した。2C2-YTEであり、並びに/又は当該技術分野において公知の抗-HER2抗体、特にトラスツズマブ(商品名ハーセプチン(登録商標);例えば、米国特許第5,821,337号)及びRhuMAb 2C4(例えば、国際公開公報WO2001/00245)は、本文において各々、トラスツズマブ及び2C4と称される。トラスツズマブ及び2C4モノクローナル抗体を、体重1kg当たり30mg(2C2-YTE)、又は体重1kg当たり10mg(トラスツズマブ及び2C4)、腹腔内投与した。ラパチニブを、体重1kg当たり100mgで経口経管栄養により投与した。マウスにおける腫瘍成長に関して、キャリパー測定を行い、下記式を用い腫瘍容積を計算した:
腫瘍容積=π÷6(長さ×幅×幅)
。抗腫瘍作用は、%デルタ腫瘍成長阻害(TGI)として表し、これは下記のように計算した:
%ΔTGI=1−(dT÷dC)×100
(式中、dT=病期分類時の値と比較した、治療群における平均腫瘍容積の変化、及びdC=病期分類時の値と比較した、対照群における平均腫瘍容積の変化)。
雌ヌードマウスの乳腺脂肪帯へ同所性注入されたHER2-駆動されたヒト乳癌モデルMDA-MB-361(Hercepttest +2)を使用し、5種の投与量について週2回30mg/kg注入される2C2-YTEの投与は、MDA-MB-361異種移植片の70.1% dTGIへつながった(図34A-C)。MDA-MB-361細胞は、HercepTestにより特徴付けられた2+の中等レベル及びFISH分析(蛍光インサイチュハイブリダイゼーション分析)による陽性スコアでHER2を発現した。トラスツズマブ及びrhuMAb 2C4の両方の10mg/kg投与、及びラパチニブ100mg/kgの1日2回投与は、MDA-MB-361腫瘍モデルにおける抗腫瘍効率を示した。
(4.16.1. 方法)
ヒトFcRn受容体を発現しているトランスジェニック雌SCIDマウスに、クローン16-GL、2C2、又は2C2-YTEの単回投与量60mg/kgを静脈内経路を介して与えた。これらのマウスから、投薬後いくつかの時点で、心穿刺により血清を採取し、且つ血液をSST microtainerチューブに収集した。これらのチューブを、10秒間穏やかに攪拌し、室温で20分間維持し、血清を凝結させた。試料を、1000×gで10分間遠心分離し、血清試料を新たなチューブへ慎重に移し、-80℃で貯蔵した。マウス血清中の2C2の定量的決定のために、間接的酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)フォーマットを使用した。標準、品質対照、及びマウス血清試料を、96-ウェルマイクロタイタープレート上に固定されたヤギ抗-ヒトIgG抗体と一緒にインキュベーションした。インキュベーション後、未結合の材料を、洗浄工程により除去し、且つ2C2を、ホースラディッシュ-ペルオキシダーゼコンジュゲートを伴うヤギ抗-ヒトIgGを用い検出した。酸性停止液を添加し、450nmの吸光度を測定することにより、基質の酵素的代謝回転の程度を決定した。測定した吸光度は、マウス血清中に存在する2C2又は2C2-YTEの濃度に正比例した。このアッセイに関する2C2又は2C2-YTE標準曲線を使用し、血清試料の濃度を内挿した。
(4.16.2. 結果)
KRAS変異(V-Ki-ras2 Kirstenラット肉腫ウイルス癌遺伝子)及びBRAF変異(v-rafマウス肉腫ウイルス癌遺伝子B1)は、発癌性Ras/Raf/Mek/Erk経路を通るEGFRシグナル伝達の構成的活性化につながる。Kras変異は、多くの固形癌、特に結腸直腸(CRC、30〜40%)及び肺癌(LC、20〜25%)において最も頻発する変異事象である。Braf変異も、CRC(〜15%)において、比較的高い頻度で生じる。ERK経路を構成的に活性化するそれらの能力のために、変異体Kras及びBrafは、RTK療法に対し、特にセツキシマブ及びパニツムマブなどのEGFR mAbに対し、腫瘍抵抗性をもたらすことが示されている。CRC及びLCモデルにおけるHER3経路上のマイトジェン-活性化プロテインキナーゼ(MEK)を阻害する作用を、MEK阻害剤セルメチニブ(AstraZeneca社、例えば、WO03/077914及びWO2007/076245を参照)を、単独で又は2C2(若しくは2C2-YTE)と組合せて用いて試験した。mut-Krasを保有するもの(例えば、A549、LOVO)又はmut-Brafを保有するもの(例えば、HT-29、Colo205)又は野生型RASを保有するもの(例えば、HARA-B、KNS-62)を含む、数多くのCRC及びLCモデルを試験した。
細胞培養試験:細胞を、24-ウェルプレート内、10%熱-失活したFBSを含有する培地中に、105個/ウェルで播種し、且つ処置前に、集密度80%以上に到達させた。2C2(10μg/mL)又は対照抗体、MEK阻害剤セルメチニブ(1又は10μM)又は2C2(10μg/mL)とセルメチニブ(10μM)の組合せを、完全培地内に調製した。播種培地を除去した後、処置を適用した。5%CO2中で37℃で24時間インキュベーションした後、細胞を、氷冷したPBSで1回洗浄し、次に2×ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)試料緩衝液(Invitrogen社)60μLを添加することにより、溶解した。試料を、5分間加熱し、次に氷上で2分間急冷した。試料を、本質的に先に記載のようなウェスタンブロットにより分析した(実施例のセクション2.4参照)。
腫瘍容積=π÷6(長さ×幅×幅)
。抗腫瘍作用は、%デルタ腫瘍成長阻害(TGI)として表し、これは下記のように計算した:
%ΔTGI=1−(dT÷dC)×100
(式中、dT=病期分類時の値と比較した、治療群における平均腫瘍容積の変化、及びdC=病期分類時の値と比較した、対照群における平均腫瘍容積の変化)。
図36に示したように、総及びpHER3の両方のタンパク質レベルは、変異体BRAFを発現する培養物中で成長されたHT-29結腸直腸癌細胞、及び変異体KRASを発現するLOVO細胞において、MEK阻害剤セルメチニブによる処置後、増加した(図36、各々、左側及び中央のブロット)。HER3の増加は、セルメチニブ処置後、mut-BRAFを発現するColo205細胞、並びに変異体KRASを発現するDLD-1細胞及びHCT細胞においても認められた(図36、右側ブロット、及びデータは示さず)。これらの増加は、セルメチニブ投与量1μM及び10μMの両方で生じた。セルメチニブの活性は、1μM及び10μMの両方の投与量での全ての細胞株中のpERKの減少により確認された。MEKの阻害は、ERKリン酸化の阻害を生じる。抗-HER3抗体である2C2は、HT-29細胞及びLOVO細胞において、総及びpHER3の両方を阻害した。2C2はまた、Colo205細胞及びDLD-1細胞において、HER3を低下した。加えて、2C2のセルメチニブによる同時処置は、HT-29細胞、LOVO細胞及びDLD-1細胞において、セルメチニブによる、総HER3及びpHER3の誘導をブロックした(図36、及びデータは示さず)。未処置細胞又はセルメチニブ処置細胞のいずれかにおいて、検出可能なHER3又はpHER3は、変異体KRASを発現するSW480結腸直腸癌細胞においては、認められなかった。
(4.18.1. 方法)
20匹の雄のカニクイザル(Macaca fascicularis)を、4つの群(1群に動物5匹)に割り当て、媒体対照又は2C2-YTEの10、30又は120mg/kgの合計5回投与量を投与した。動物には、投与量容積5mL/kgの5分間のIV注入により、週1回投与した。1群につき3匹の動物は、32日目に剖検し(投薬相の29日目の最終投与量投与後3日目)、及び1群につき2匹の動物は、回復相の43日目に剖検した(投薬相の29日目の最終投与量投与後45日目)。毒性評価は、死亡率、臨床知見、体重、投与部位刺激スコア、臨床及び解剖病理学的評価を含む多くの要因を基にした。
少なくとも1ヶ月間カニクイザルへIV注入により週1回投与された場合(合計5回投与量)の2C2-YTEの毒性及び活性を評価するため、並びに6週間の回復期間の後の可逆性、持続性又は何らかの作用の遅れた出現を評価するために、6週間の回復相を伴う、2C2-YTEの非-GLP、1ヶ月、反復投与量毒性試験をカニクイザルにおいて実行した。雄のカニクイザルにおいて、5週間にわたる2C2-YTEの最大120mg/kg/投与量の週1回のIV投与(5分間の注入)の後に(合計5回投与量)、有害作用は認められなかった。
本文において言及した全ての刊行物及び特許は、個別の刊行物又は特許が各々具体的且つ個別に引用により本明細書中に組み込まれているように、それらの全体が引用により本明細書中に組み込まれている。加えて、2011年11月23日に出願された米国特許仮出願第61/563,092号;2012年6月7日に出願された第61/656,670号;及び、2012年11月5日に出願された第61/722,558号は、あらゆる目的に関してそれらの全体が引用により組み込まれている。
Claims (119)
- HER3の細胞外ドメイン内のエピトープへ特異的に結合する単離された結合分子又はそれらの抗原-結合断片であって、ここで該結合分子が、CL16又は2C2の重鎖可変領域(VH)及び軽鎖可変領域(VL)を含む抗体又はそれらの抗原-結合断片と同じHER3エピトープへ特異的に結合する、単離された結合分子又はそれらの抗原-結合断片。
- HER3へ特異的に結合し、且つCL16又は2C2のVH及びVLを含む抗体又はそれらの抗原-結合断片によるHER3結合を競合的に阻害する、単離された結合分子又はそれらの抗原-結合断片。
- 前記CL16のVH及びVLが、各々、配列番号:2及び1を含み、且つ2C2のVH及びVLが、各々、配列番号:2及び3を含む、請求項1又は2記載の結合分子又はそれらの断片。
- 抗体又はそれらの抗原-結合断片を含む、請求項1〜3のいずれか一項記載の結合分子又はそれらの断片。
- 前記結合分子が、親和性成熟されている、請求項1〜4のいずれか一項記載の結合分子又はそれらの断片。
- 抗体VLを含むHER3へ特異的に結合する単離された結合分子又はそれらの抗原結合断片であって、ここで該VLが、下記アミノ酸配列を含む:
(a)X1は、アミノ酸残基アルギニン(R)又はセリン(S)を表し、
(b)X2は、アミノ酸残基セリン(S)又はロイシン(L)を表し、
(c)X3は、アミノ酸残基セリン(S)又はグリシン(G)を表し、
(d)X4は、アミノ酸残基ロイシン(L)又はプロリン(P)を表し、
(e)X5は、アミノ酸残基アルギニン(R)、イソロイシン(I)、プロリン(P)又はセリン(S)を表し、並びに
(f)X6は、アミノ酸残基バリン(V)又はアラニン(A)を表す。)、前記単離された結合分子又はそれらの抗原結合断片。 - FW1が配列番号:40又は44を含み、FW2が配列番号:41を含み、FW3が配列番号:42を含み、及びFW4が配列番号:43を含む、請求項6記載の結合分子又はそれらの断片。
- FW5が配列番号:36を含み、FW6が配列番号:37を含み、FW7が配列番号:38を含み、及びFW8が配列番号:39を含む、請求項8記載の結合分子又はそれらの断片。
- 抗体VL及び抗体VHを含むHER3へ特異的に結合する単離された結合分子又はそれらの抗原結合断片であって、ここで該VLが、下記アミノ酸配列を含み:
(a)X1は、アミノ酸残基アルギニン(R)又はセリン(S)を表し、
(b)X2は、アミノ酸残基セリン(S)又はロイシン(L)を表し、
(c)X3は、アミノ酸残基セリン(S)又はグリシン(G)を表し、
(d)X4は、アミノ酸残基ロイシン(L)又はプロリン(P)を表し、
(e)X5は、アミノ酸残基アルギニン(R)、イソロイシン(I)、プロリン(P)又はセリン(S)を表し、及び
(f)X6は、アミノ酸残基バリン(V)又はアラニン(A)を表す。)、
並びに、該VHが、下記アミノ酸配列を含む:
- 前記FW1が配列番号:40又は44を含み、FW2が配列番号:41を含み、FW3が配列番号:42を含み、FW4が配列番号:43を含み、FW5が配列番号:36を含み、FW6が配列番号:37を含み、FW7が配列番号:38を含み、及びFW8が配列番号:39を含む、請求項10記載の結合分子又はそれらの断片。
- 抗体又はそれらの抗原-結合断片を含む、請求項6〜11のいずれか一項記載の結合分子又はそれらの断片。
- 抗体VLを含むHER3へ特異的に結合する単離された結合分子又はそれらの抗原結合断片であって、ここで該VLが、配列番号:18、配列番号:19、又は配列番号:20と同一であるか、又は4、3、2若しくは1つのアミノ酸置換以外は同一であるVL相補性決定領域-1(VL-CDR1)アミノ酸配列を含んでなる、前記単離された結合分子又はそれらの抗原結合断片。
- 抗体VLを含むHER3へ特異的に結合する単離された結合分子又はそれらの抗原結合断片であって、ここで該VLが、配列番号:21と同一であるか、又は4、3、2若しくは1つのアミノ酸置換以外は同一であるVL相補性決定領域-2(VL-CDR2)アミノ酸配列を含んでなる、前記単離された結合分子又はそれらの抗原結合断片。
- 抗体VLを含むHER3へ特異的に結合する単離された結合分子又はそれらの抗原結合断片であって、ここで該VLが、配列番号:22、配列番号:23、配列番号:24、配列番号:25、配列番号:26、配列番号:27、配列番号:28、配列番号:29、又は配列番号:30と同一であるか、又は4、3、2若しくは1つのアミノ酸置換以外は同一である相補性決定領域-3(VL-CDR3)アミノ酸配列を含んでなる、前記単離された結合分子又はそれらの抗原結合断片。
- 抗体VHを含むHER3へ特異的に結合する単離された結合分子又はそれらの抗原結合断片であって、ここで該VHが、配列番号:31と同一であるか、又は4、3、2若しくは1つのアミノ酸置換以外は同一である相補性決定領域-1(VH-CDR1)アミノ酸配列を含んでなる、前記単離された結合分子又はそれらの抗原結合断片。
- 抗体VHを含むHER3へ特異的に結合する単離された結合分子又はそれらの抗原結合断片であって、ここで該VHが、配列番号:32、配列番号:33、又は配列番号:34と同一であるか、又は4、3、2若しくは1つのアミノ酸置換以外は同一である相補性決定領域-2(VH-CDR2)アミノ酸配列を含んでなる、前記単離された結合分子又はそれらの抗原結合断片。
- 抗体VHを含むHER3へ特異的に結合する単離された結合分子又はそれらの抗原結合断片であって、ここで該VHが、配列番号:35と同一であるか、又は4、3、2若しくは1つのアミノ酸置換以外は同一である相補性決定領域-3(VH-CDR3)アミノ酸配列を含んでなる、前記単離された結合分子又はそれらの抗原結合断片。
- 抗体VLを含むHER3へ特異的に結合する単離された結合分子又はそれらの抗原結合断片であって、ここで該VLが、各々、配列番号:18、21及び22、配列番号:18、21、及び26、配列番号:18、21、及び27、配列番号:20、21、及び22、配列番号:19、21、及び22、配列番号:18、21、及び25、配列番号:18、21、及び28、配列番号:18、21、及び29、配列番号:18、21、及び30、配列番号:18、21、及び23、配列番号:19、21、及び23、配列番号:20、21、及び23、配列番号:18、21、及び24、又は配列番号:18、21、及び25と同一であるか、又は1つ以上のVL-CDRにおいて、4、3、2若しくは1つのアミノ酸置換以外は同一であるVL-CDR1、VL-CDR2、及びVL-CDR3アミノ酸配列を含んでなる、前記単離された結合分子又はそれらの抗原結合断片。
- 抗体VHを含むHER3へ特異的に結合する単離された結合分子又はそれらの抗原結合断片であって、ここで該VHが、各々、配列番号:31、32及び35、配列番号:31、33、及び35、又は配列番号:31、34、及び35と同一であるか、又は1つ以上のVH-CDRにおいて、4、3、2若しくは1つのアミノ酸置換以外は同一であるVH-CDR1、VH-CDR2、及びVH-CDR3アミノ酸配列を含んでなる、前記単離された結合分子又はそれらの抗原結合断片。
- 前記結合分子又はそれらの断片が、抗体又はそれらの抗原-結合断片を含む、請求項13〜20のいずれか一項記載の結合分子。
- 各々、配列番号:18、21、22、31、32、及び35、配列番号:18、21、26、31、32及び35、配列番号:18、21、27、31、32及び35、配列番号:20、21、22、31、32及び35、配列番号:19、21、22、31、32及び35、配列番号:18、21、25、31、32及び35、配列番号:18、21、28、31、32及び35、配列番号:18、21、29、31、32及び35、配列番号:18、21、30、31、32及び35、配列番号:18、21、23、31、32及び35、配列番号:19、21、23、31、32及び35、配列番号:20、21、23、31、32及び35、配列番号:18、21、24、31、32及び35、又は配列番号:18、21、25、31、32及び35と同一であるか、又は1つ以上のCDRにおいて、4、3、2若しくは1つのアミノ酸置換以外は同一であるVL-CDR1、VL-CRD2、VL-CDR3、VH-CDR1、VH-CDR2、及びVH-CDR3アミノ酸配列を含んでなる、VL及びVHを含むHER3へ特異的に結合する、単離された抗体又はそれらの抗原-結合断片。
- 抗体VL及び抗体VHを含むHER3へ特異的に結合する単離された結合分子又はそれらの抗原結合断片であって、ここで該VLが、配列番号:1、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5、配列番号:6、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16、及び配列番号:17からなる群から選択される参照アミノ酸配列と少なくとも約90%〜約100%同一であるアミノ酸配列を含んでなる、前記単離された結合分子又はそれらの抗原結合断片。
- 抗体VL及び抗体VHを含むHER3へ特異的に結合する単離された結合分子又はそれらの抗原結合断片であって、ここで該VHが、配列番号:2、配列番号:12及び配列番号:13からなる群から選択される参照アミノ酸配列と少なくとも約90%〜約100%同一であるアミノ酸配列を含んでなる、前記単離された結合分子又はそれらの抗原結合断片。
- 抗体又はそれらの抗原-結合断片を含む、請求項23又は24記載の結合分子又はそれらの断片。
- HER3へ特異的に結合する単離された抗体又はそれらの抗原結合断片であって、ここで該抗体又は抗原結合断片が、配列番号:1、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5、配列番号:6、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16、及び配列番号:17からなる群から選択される参照アミノ酸配列と少なくとも約90%〜約100%同一である配列を含んでなるVLを含み、且つ該抗体又は抗原結合断片が、配列番号:2、配列番号:12及び配列番号:13からなる群から選択される参照アミノ酸配列と少なくとも約90%〜約100%同一である配列を含んでなるVHを含む、前記単離された抗体又はそれらの抗原結合断片。
- 表4に提供されたVLコンセンサス配列を含んでなるVL、及び表4に提供されたVHコンセンサス配列を含んでなるVHを含む、単離された抗体又はそれらの抗原結合断片。
- 配列番号:3を含むVL及び配列番号:2を含むVHを含む、単離された抗体又はそれらの抗原結合断片。
- 重鎖定常領域又はそれらの断片を含む、請求項4、12、21、22、又は25〜28のいずれか一項記載の抗体又はそれらの抗原-結合断片。
- 前記重鎖定常領域又はそれらの断片が、IgG定常領域である、請求項29記載の抗体又はそれらの抗原-結合断片。
- 前記IgG定常領域が、IgG1定常領域、IgG2定常領域、IgG3定常領域及びIgG4定常領域から選択される、請求項30記載の抗体又はそれらの抗原-結合断片。
- 前記IgG定常領域が、IgG1定常領域である、請求項30記載の抗体又はそれらの抗原-結合断片。
- ヒトカッパ定常領域及びヒトラムダ定常領域からなる群から選択される軽鎖定常領域を含む、請求項4、12、21、22、又は25〜32のいずれか一項記載の抗体又はそれらの抗原-結合断片。
- 前記IgG定常ドメインが、野生型IgG定常ドメインに対する1つ以上のアミノ酸置換を含み、ここで修飾されたIgGが、野生型IgG定常ドメインを有するIgGの半減期と比べ増大した半減期を有する、請求項30〜32のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。
- 前記IgG定常ドメインが、位置251-257、285-290、308-314、385-389、及び428-436のアミノ酸残基の1つ以上のアミノ酸置換を含み、ここで番号付けはKabatに定めるEUインデックスに従う、請求項31記載の単離された抗体又は抗原結合断片。
- 少なくとも1つのIgG定常ドメインアミノ酸置換が:
(a)位置252のアミノ酸の、チロシン(Y)、フェニルアラニン(F)、トリプトファン(W)、又はトレオニン(T)による置換、
(b)位置254のアミノ酸の、トレオニン(T)による置換、
(c)位置256のアミノ酸の、セリン(S)、アルギニン(R)、グルタミン(Q)、グルタミン酸(E)、アスパラギン酸(D)、又はトレオニン(T)による置換、
(d)位置257のアミノ酸の、ロイシン(L)による置換、
(e)位置309のアミノ酸の、プロリン(P)による置換、
(f)位置311のアミノ酸の、セリン(S)による置換、
(g)位置428のアミノ酸の、トレオニン(T)、ロイシン(L)、フェニルアラニン(F)、又はセリン(S)による置換、
(h)位置433のアミノ酸の、アルギニン(R)、セリン(S)、イソロイシン(I)、プロリン(P)、又はグルタミン(Q)による置換、
(i)位置434のアミノ酸の、トリプトファン(W)、メチオニン(M)、セリン(S)、ヒスチジン(H)、フェニルアラニン(F)、又はチロシンによる置換、並びに
(j)前記置換の2つ以上の組合せ:からなる群から選択され、ここで番号付けはKabatに定めるEUインデックスに従う、請求項35記載の単離された抗体又は抗原結合断片。 - 前記ヒトIgG定常ドメインが、位置252、254、及び256に、野生型ヒトIgG定常ドメインに対するアミノ酸置換を含み、ここで:
(a)位置252のアミノ酸は、チロシン(Y)により置換され、
(b)位置254のアミノ酸は、トレオニン(T)により置換され、並びに
(c)位置256のアミノ酸は、グルタミン酸(E)により置換され、ここで番号付けはKabatに定めるEUインデックスに従う、請求項36記載の単離された抗体又は抗原結合断片。 - 前記位置434のアミノ酸が、トリプトファン(W)、メチオニン(M)、チロシン(Y)、及びセリン(S)からなる群から選択されるアミノ酸により置換され、ここで番号付けはKabatに定めるEUインデックスに従う、請求項37記載の単離された抗体又は抗原結合断片。
- 前記位置428のアミノ酸が、トレオニン(T)、ロイシン(L)、フェニルアラニン(F)、及びセリン(S)からなる群から選択されるアミノ酸により置換され、ここで番号付けはKabatに定めるEUインデックスに従う、請求項38記載の単離された抗体又は抗原結合断片。
- 前記位置257のアミノ酸が、ロイシン(L)により置換され、且つKabat位置434のアミノ酸が、チロシン(Y)により置換され、ここで番号付けはKabatに定めるEUインデックスに従う、請求項38記載の単離された抗体又は抗原結合断片。
- 前記Kabat位置428のアミノ酸が、ロイシン(L)により置換され、且つKabat位置434のアミノ酸が、セリン(S)により置換される、請求項39記載の単離された抗体又は抗原結合断片。
- 配列番号:3の抗体VL、配列番号:2の抗体VH、及び配列番号:46のIgG1定常領域を含む、HER3の細胞外ドメイン内のエピトープへ特異的に結合する、単離された結合分子又はそれらの抗原-結合断片。
- 配列番号:3の抗体VL、配列番号:2の抗体VH、及び配列番号:46のIgG1定常領域からなる、HER3の細胞外ドメイン内のエピトープに特異的に結合する、単離された結合分子又はそれらの抗原-結合断片。
- 前記ヒトIgG定常領域が、位置252、254、及び256に、野生型ヒトIgG定常ドメインに対するアミノ酸置換を含み、ここで番号付けはKabatに定めるEUインデックスに従い、且つここで:
(a)位置252のアミノ酸は、チロシン(Y)により置換され、
(b)位置254のアミノ酸は、トレオニン(T)により置換され、並びに
(c)位置256のアミノ酸は、グルタミン酸(E)により置換される、請求項29又は30記載の単離された抗体又は抗原結合断片。 - 前記抗体が、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、多重特異性抗体、又はそれらの抗原-結合断片である、請求項4、12、21、22、又は25〜44のいずれか一項記載の抗体又は抗原-結合断片。
- Fv、Fab、F(ab')2、Fab'、dsFv、scFv、及びsc(Fv)2である、請求項4、12、21、22、又は25〜45のいずれか一項記載の抗原-結合断片。
- 少なくとも1種の異種物質にコンジュゲートされている、請求項4、12、21、22、又は25〜46のいずれか一項記載の抗体又はそれらの断片。
- 請求項4、12、21、22、又は25〜47のいずれか一項記載の抗体又はそれらの断片、及び担体を含有する、組成物。
- 請求項4、12、21、22、又は25〜48のいずれか一項記載の抗体をコードしている配列を含む核酸。
- 請求項49記載の核酸を含有する、組成物。
- 請求項49記載の核酸を含む、ベクター。
- 請求項49記載の核酸配列、請求項50記載の組成物、又は請求項51記載のベクターを含む、宿主細胞。
- (a)請求項46記載の細胞を培養すること;及び、(b)抗体又はそれらの抗原-結合断片を単離すること:を含む、請求項4、12、21、22、又は25〜46のいずれか一項記載の抗体又は抗原-結合断片の製造方法。
- 更に抗癌剤を含有する、請求項48記載の組成物。
- 標識されている、請求項4、12、21、22、又は25〜47のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片を含有する診断薬。
- 請求項4、12、21、22、若しくは25〜47のいずれか一項記載の抗体、又は請求項48若しくは54のいずれか一項記載の組成物を備える、キット。
- 抗体依存性細胞性細胞傷害(ADCC)を誘導しない、請求項4、12、21、22、又は25〜47のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。
- BT-474細胞、SkBR3細胞、又はそれらの組合せにおいて、抗体依存性細胞性細胞傷害(ADCC)を誘導しない、請求項57記載の抗体又は抗原結合断片。
- HER3のアンタゴニストである、請求項4、12、21、22、25〜47、57又は52のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。
- BT-474細胞、SkBR3細胞、MDA-MB-175細胞、MDA-MB-361細胞、A549細胞、HARA-B細胞、HMCB細胞、HCC827細胞、MCF-7細胞、MKN45細胞、Kato III細胞、ゲフィチニブ-抵抗性HCC827細胞、又は列挙された細胞の2種以上の組合せからなる群から選択される細胞における、HER3のアンタゴニストである、請求項59記載の抗体又は抗原結合断片。
- 前記HER3が、ヒトHER3である、請求項59又は60のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。
- 前記抗体又は抗原結合断片のHER3への結合が、細胞増殖を減少することができる、請求項4、12、21、22、25〜47又は57〜61のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。
- 前記抗体又は抗原結合断片のHER3への結合が、BT-474細胞、MDA-MB-175細胞、MDA-MB-361細胞、HMCB細胞、又は列挙された細胞の2種以上の組合せにおける細胞増殖を減少することができる、請求項62記載の抗体又は抗原結合断片。
- 前記抗体又は抗原結合断片のHER3への結合が、HER3-媒介性シグナル伝達を減少することができる、請求項4、12、21、22、25〜47又は57〜63のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。
- 前記抗体又は抗原結合断片のHER3への結合が、BT-474細胞、SkBR3細胞、MDA-MB-175細胞、MDA-MB-361細胞、A549細胞、HARA-B細胞、HMCB細胞、HCC827細胞、MCF-7細胞、MKN45細胞、Kato III細胞、ゲフィチニブ-抵抗性HCC827細胞、又は列挙された細胞の2種以上の組合せからなる群から選択される細胞におけるHER3-媒介性シグナル伝達を減少することができる、請求項64記載の抗体又は抗原結合断片。
- 前記抗体又は抗原結合断片のHER3への結合が、リガンド-依存性HER3リン酸化を減少することができる、請求項4、12、21、22、25〜47又は57〜65のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。
- 前記抗体又は抗原結合断片のHER3への結合が、MCF-7細胞、HMCB細胞、HCC827細胞、MKN45細胞、Kato III細胞、又は列挙された細胞の2種以上の組合せにおけるリガンド-依存性HER3リン酸化を減少することができる、請求項66記載の抗体又は抗原結合断片。
- 前記リガンド-依存性HER3リン酸化が、HRG-駆動された、EGFR-駆動された、cMET-駆動された、又はFGFR2-駆動されたか、又はそれらの組合せである、請求項66又は67のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。
- 前記抗体又は抗原結合断片のHER3への結合が、Aktプロテインキナーゼのリガンド-依存性リン酸化を減少することができる、請求項4、12、21、22、25〜47又は57〜68のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。
- 前記抗体又は抗原結合断片のHER3への結合が、A549細胞、HMCB細胞、MKN45細胞、Kato III細胞、又は列挙された細胞の2種以上の組合せにおけるAktプロテインキナーゼのリガンド-依存性リン酸化を減少することができる、請求項69記載の抗体又は抗原結合断片。
- 前記リガンド-依存性Aktリン酸化が、cMET-駆動された、FGFR2-駆動されたか、又は両方である、請求項69又は70のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。
- 前記抗体又は抗原結合断片のHER3への結合が、リガンド-非依存性AKT又はHER3リン酸化を減少することができる、請求項4、12、21、22、25〜47又は57〜71のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。
- 前記抗体又は抗原結合断片のHER3への結合が、BT-474細胞における、リガンド-非依存性AKTリン酸化、HER3リン酸化、又は両方を減少することができる、請求項72記載の抗体又は抗原結合断片。
- 前記抗体又は抗原結合断片のHER3への結合が、EGFRを標的化するチロシンキナーゼ阻害薬(TKI)に対し抵抗性のある細胞におけるHER3リン酸化を減少することができる、請求項4、12、21、22、25〜47又は57〜73のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。
- 前記抗体又は抗原結合断片のHER3への結合が、ゲフィチニブ-抵抗性HCC827細胞におけるEGFRを標的化するチロシンキナーゼ阻害薬(TKI)に対し抵抗性のある細胞におけるHER3リン酸化を減少することができる、請求項74記載の抗体又は抗原結合断片。
- 前記抗体又は抗原結合断片が、ヒトHER3、カニクイザルHER3、及びマウスHER3に結合することができる、請求項4、12、21、22、25〜47又は57〜75のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。
- 前記細胞を、請求項4、12、21、22、25〜47、又は57〜76のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片と接触させることを含む、HER3を発現している細胞の成長を阻害する方法。
- 請求項4、12、21、22、25〜47、又は57〜76のいずれか一項記載の抗体又はそれらの抗原結合断片の治療有効量を対象へ投与することを含む、対象における癌の治療方法。
- 前記癌が、結腸癌、肺癌、胃癌、乳癌、及び頭頸部癌からなる群から選択される、請求項78記載の方法。
- 前記癌が、KRAS変異を含む細胞を含んでなる、請求項79記載の方法。
- 前記KRAS変異が、ヒトKRAS遺伝子のコドン12の変異を含む、請求項80記載の方法。
- 前記対象がヒトである、請求項78〜81のいずれか一項記載の方法。
- 請求項4、12、21、22、25〜47、又は57〜76記載の抗体又はそれらの抗原結合断片である第一の薬剤の治療有効量を、第一の薬剤以外の抗癌剤である第二の薬剤の治療有効量と組合せて、対象へ投与することを含む、対象における癌の治療方法。
- 前記第一の薬剤及び第二の薬剤の組合せが、相乗的に作用する、請求項83記載の方法。
- 前記第二の薬剤が、EGFR阻害剤、HER2阻害剤、HER3阻害剤又はMEK阻害剤である、請求項83又は84のいずれか一項記載の方法。
- 前記第二の薬剤が、抗体又はそれらの抗原結合断片を含有する、請求項83〜85のいずれか一項記載の方法。
- 前記第二の薬剤が、上皮細胞成長因子受容体(EGFR)へ特異的に結合する、請求項86記載の方法。
- 前記第二の薬剤が、セツキシマブ、パニツムマブ、マツズマブ又はニモツズマブである、請求項83〜87のいずれか一項記載の方法。
- 前記第二の薬剤が、HER2に特異的に結合する、請求項86記載の方法。
- 前記第二の薬剤が、トラスツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、ペルツズマブ、MM-111又はペルツズマブである、請求項83〜87及び89のいずれか一項記載の方法。
- ゲフィチニブ、カネルチニブ、ラパチニブ、エルロチニブ、アファチニブ、ネラチニブ、セルメチニブ、WX-554、セルメチニブ、トラメチニブ、レファメチニブ、E-6201及びMEK-162からなる群から選択される、請求項85記載の方法。
- 請求項4、12、21、22、25〜47又は57〜75のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片の治療有効量と、細胞を接触させることを含む、チロシンキナーゼ阻害薬に抵抗性である細胞の成長を阻害する方法。
- 請求項4、12、21、22、25〜47又は57〜75のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片の治療有効量を対象へ投与することを含む、対象におけるチロシンキナーゼ阻害薬への抵抗性を治療する方法。
- 前記チロシンキナーゼ阻害薬が、EGFR又はHER2を標的化する、請求項92又は93のいずれか一項記載の方法。
- 請求項4、12、21、22、25〜47又は57〜75のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片の治療有効量と、細胞を接触させることを含む、トレオニンキナーゼ阻害剤に抵抗性である細胞の成長を阻害する方法。
- 請求項4、12、21、22、25〜47又は57〜75のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片の治療有効量を対象へ投与することを含む、対象におけるトレオニン阻害剤への抵抗性を治療する方法。
- 前記トレオニンキナーゼ阻害剤が、MEKを標的化する、請求項95又は96記載の方法。
- 前記抗体又はそれらの抗原結合断片がBiacore(商標)チップに結合されているBiacore(商標)表面プラズモン共鳴アッセイにより測定された、約0.45nM(±0.05nM)又はそれよりも優れた解離定数(KD)により特徴づけられる親和性で、HER3ポリペプチド又はそれらの断片へ、特異的に結合することができる、請求項4、12、21、22、25〜47、又は57〜76のいずれか一項記載の抗体又はそれらの抗原結合断片。
- HER3ポリペプチド又はそれらの断片がBiacore(商標)チップに結合されているBiacore(商標)表面プラズモン共鳴アッセイにより測定された、約0.1nM又はそれよりも優れた解離定数(KD)により特徴づけられる親和性で、HER3ポリペプチド又はそれらの断片へ、特異的に結合することができる、請求項4、12、21、22、25〜47、又は57〜76のいずれか一項記載の抗体又はそれらの抗原結合断片。
- 抗体若しくはそれらの抗原結合断片がBiacore(商標)チップに結合されているBiacore(商標)表面プラズモン共鳴アッセイにより測定された、Kon 1×105 M−1 s−1 〜6×105 M−1 s−1 及び/又はKoff 0.5×10−4 s−1 〜2.0×10−4 s−1により特徴づけられる親和性で、HER3ポリペプチド又はそれらの断片へ、特異的に結合することができる、請求項4、12、21、22、25〜47、又は57〜76のいずれか一項記載の抗体又はそれらの抗原結合断片。
- ELISAにより測定された、約30ng/mL又はそれよりも優れたIC50で、HRG-駆動されたMCF-7細胞におけるHER3リン酸化を特異的に抑制することができる、請求項4、12、21、22、25〜47、又は57〜76のいずれか一項記載の抗体又はそれらの抗原結合断片。
- ELISAにより測定された、約10ng/mL又はそれよりも優れたIC50で、HRG-駆動されたMCF-7細胞におけるHER3リン酸化を特異的に抑制することができる、請求項4、12、21、22、25〜47、又は57〜76のいずれか一項記載の抗体又はそれらの抗原結合断片。
- 約0.90μg/mL又はそれよりも優れたIC50で、MDAMB-175細胞における細胞成長を特異的に抑制することができる、請求項4、12、21、22、25〜47、又は57〜76のいずれか一項記載の抗体又はそれらの抗原結合断片。
- 約0.15μg/mL又はそれよりも優れたIC50で、MDAMB-175細胞における細胞成長を特異的に抑制することができる、請求項4、12、21、22、25〜47、又は57〜76のいずれか一項記載の抗体又はそれらの抗原結合断片。
- 約0.2μg/mL又はそれよりも優れたIC50で、HMCB細胞における細胞成長を特異的に抑制することができる、請求項4、12、21、22、25〜47、又は57〜76のいずれか一項記載の抗体又はそれらの抗原結合断片。
- 約0.03μg/mL又はそれよりも優れたIC50で、HMCB細胞における細胞成長を特異的に抑制することができる、請求項4、12、21、22、25〜47、又は57〜76のいずれか一項記載の抗体又はそれらの抗原結合断片。
- 約20ng/mL又はそれよりも優れたIC50で、HCC827細胞におけるHER3リン酸化を特異的に抑制することができる、請求項4、12、21、22、25〜47、又は57〜76のいずれか一項記載の抗体又はそれらの抗原結合断片。
- 約2ng/mL又はそれよりも優れたIC50で、HCC827細胞におけるHER3リン酸化を特異的に抑制することができる、請求項4、12、21、22、25〜47、又は57〜76のいずれか一項記載の抗体又はそれらの抗原結合断片。
- 約25ng/mL又はそれよりも優れたIC50で、チロシンキナーゼ阻害薬に対し抵抗性のHCC827細胞におけるHER3リン酸化を特異的に抑制することができる、請求項4、12、21、22、25〜47、又は57〜76のいずれか一項記載の抗体又はそれらの抗原結合断片。
- 約5ng/mL又はそれよりも優れたIC50で、チロシンキナーゼ阻害薬に対し抵抗性のHCC827細胞におけるHER3リン酸化を特異的に抑制することができる、請求項4、12、21、22、25〜47、又は57〜76のいずれか一項記載の抗体又はそれらの抗原結合断片。
- 約10ng/mL又はそれよりも優れたIC50で、MKN45細胞におけるHER3リン酸化を特異的に抑制することができる、請求項4、12、21、22、25〜47、又は57〜76のいずれか一項記載の抗体又はそれらの抗原結合断片。
- 約5ng/mL又はそれよりも優れたIC50で、MKN45細胞におけるHER3リン酸化を特異的に抑制することができる、請求項4、12、21、22、25〜47、又は57〜76のいずれか一項記載の抗体又はそれらの抗原結合断片。
- 約10ng/mL又はそれよりも優れたIC50で、MKN45細胞におけるpAKTを特異的に抑制することができる、請求項4、12、21、22、25〜47、又は57〜76のいずれか一項記載の抗体又はそれらの抗原結合断片。
- 約5ng/mL又はそれよりも優れたIC50で、MKN45細胞におけるpAKTを特異的に抑制することができる、請求項4、12、21、22、25〜47、又は57〜76のいずれか一項記載の抗体又はそれらの抗原結合断片。
- 約8ng/mL又はそれよりも優れたIC50で、Kato III細胞におけるpHERを特異的に抑制することができる、請求項4、12、21、22、25〜47、又は57〜76のいずれか一項記載の抗体又はそれらの抗原結合断片。
- 約1ng/mL又はそれよりも優れたIC50で、Kato III細胞におけるpHERを特異的に抑制することができる、請求項4、12、21、22、25〜47、又は57〜76のいずれか一項記載の抗体又はそれらの抗原結合断片。
- 約5ng/mL又はそれよりも優れたIC50で、Kato III細胞におけるpAKTを特異的に抑制することができる、請求項4、12、21、22、25〜47、又は57〜76のいずれか一項記載の抗体又はそれらの抗原結合断片。
- 約1ng/mL又はそれよりも優れたIC50で、Kato III細胞におけるpAKTを特異的に抑制することができる、請求項4、12、21、22、25〜47、又は57〜76のいずれか一項記載の抗体又はそれらの抗原結合断片。
- 対象由来の皮膚生検標本中のリン酸化されたHER3のレベルを検出することを含む、HER3の活性レベルを検出するエクスビボ方法であって、ここで該皮膚が生検の前又は後にHRGにより処理される、方法。
Applications Claiming Priority (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201161563092P | 2011-11-23 | 2011-11-23 | |
US61/563,092 | 2011-11-23 | ||
US201261656670P | 2012-06-07 | 2012-06-07 | |
US61/656,670 | 2012-06-07 | ||
US201261722558P | 2012-11-05 | 2012-11-05 | |
US61/722,558 | 2012-11-05 | ||
PCT/US2012/066038 WO2013078191A1 (en) | 2011-11-23 | 2012-11-20 | Binding molecules specific for her3 and uses thereof |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017047055A Division JP6513728B2 (ja) | 2011-11-23 | 2017-03-13 | Her3に特異的な結合分子及びそれらの使用 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2015506912A true JP2015506912A (ja) | 2015-03-05 |
JP2015506912A5 JP2015506912A5 (ja) | 2016-01-21 |
JP6180425B2 JP6180425B2 (ja) | 2017-08-23 |
Family
ID=48470246
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014543533A Active JP6180425B2 (ja) | 2011-11-23 | 2012-11-20 | Her3に特異的な結合分子及びそれらの使用 |
JP2017047055A Active JP6513728B2 (ja) | 2011-11-23 | 2017-03-13 | Her3に特異的な結合分子及びそれらの使用 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017047055A Active JP6513728B2 (ja) | 2011-11-23 | 2017-03-13 | Her3に特異的な結合分子及びそれらの使用 |
Country Status (18)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US9220775B2 (ja) |
EP (2) | EP2797957B1 (ja) |
JP (2) | JP6180425B2 (ja) |
KR (1) | KR102080535B1 (ja) |
CN (2) | CN104093743B (ja) |
AU (1) | AU2012340766B2 (ja) |
BR (1) | BR112014012539B1 (ja) |
CA (1) | CA2856297C (ja) |
CO (1) | CO7051008A2 (ja) |
DK (1) | DK2797957T3 (ja) |
ES (1) | ES2745684T3 (ja) |
HK (1) | HK1203207A1 (ja) |
IL (1) | IL232726B2 (ja) |
MX (1) | MX350957B (ja) |
RU (1) | RU2620068C2 (ja) |
SG (1) | SG11201402536PA (ja) |
WO (1) | WO2013078191A1 (ja) |
ZA (1) | ZA201403570B (ja) |
Families Citing this family (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
BR112014012539B1 (pt) | 2011-11-23 | 2022-12-20 | Medimmune, Llc | Anticorpo que se liga especificamente a her3, composição compreendendo o mesmo, e usos do anticorpo |
ES2758433T3 (es) * | 2011-12-05 | 2020-05-05 | Novartis Ag | Anticuerpos contra el receptor 3 del factor de crecimiento epidérmico (HER3) |
AR094403A1 (es) | 2013-01-11 | 2015-07-29 | Hoffmann La Roche | Terapia de combinación de anticuerpos anti-her3 |
US11305012B2 (en) * | 2013-09-24 | 2022-04-19 | Medimmune, Llc | Binding molecules specific for HER3 and uses thereof |
MX2016011155A (es) * | 2014-02-28 | 2017-02-22 | Merus Nv | Anticuerpo que une erbb-2 y erbb-3. |
CA2941030A1 (en) | 2014-02-28 | 2015-09-03 | Merus N.V. | Antibodies that bind egfr and erbb3 |
EP3125885B1 (en) * | 2014-04-04 | 2021-06-30 | Astrazeneca AB | Combination of egfr inhibitor and mek inhibitor for use in the treatment of nras mutated cancer |
WO2015157634A1 (en) * | 2014-04-11 | 2015-10-15 | Kolltan Pharmaceuticals, Inc. | Anti-erbb antibodies and methods of use thereof |
WO2016040622A1 (en) * | 2014-09-11 | 2016-03-17 | Bulldog Pharmaceuticals, Inc. | Uses of anti-her3 antibodies for treating cancer |
US20180171027A1 (en) * | 2015-04-17 | 2018-06-21 | Celldex Therapeutics, Inc. | Biomarkers Related to Treatment of Cancer with HER3 and EGFR Inhibitors |
TW201716439A (zh) | 2015-07-20 | 2017-05-16 | 美國禮來大藥廠 | Her3抗體 |
CN108602888B (zh) | 2015-10-23 | 2022-10-04 | 美勒斯公司 | 抑制癌症生长的结合分子 |
WO2017100642A1 (en) | 2015-12-11 | 2017-06-15 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods for reducing or preventing growth of tumors resistant to egfr and/or erbb3 blockade |
CA3011949A1 (en) | 2016-03-15 | 2017-09-21 | Merrimack Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating er+, her2-, hrg+ breast cancer using combination therapies comprising an anti-erbb3 antibody |
KR101796684B1 (ko) | 2016-05-19 | 2017-11-10 | 건국대학교 산학협력단 | 케라틴 8 인산화 억제제를 포함하는 황반변성 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 황반변성 치료제의 스크리닝 방법 |
CN110475569B (zh) * | 2017-02-28 | 2023-11-21 | 第一三共株式会社 | Egfr-tki耐受性的非小细胞肺癌的治疗剂以及抗her3抗体-药物偶联物的应用 |
MX2019011660A (es) | 2017-03-31 | 2019-11-18 | Merus Nv | Anticuerpos biespecificos que se unen al receptor 2 del factor de crecimiento humano (erbb-2) y receptor 3 del factor de crecimiento humano (erbb3) para usarse en el tratamiento de celulas que tienen un gen de fusion de neuregulina-1 (nrg1). |
MA49846A (fr) | 2017-08-09 | 2020-06-17 | Merus Nv | Anticorps qui se lient à l'egfr et à cmet |
CN110724194B (zh) * | 2018-07-17 | 2021-03-19 | 上海生物制品研究所有限责任公司 | 抗her3人源化单克隆抗体及其制剂 |
CN110760003A (zh) * | 2019-09-10 | 2020-02-07 | 广东药科大学 | 一种抗her3单链抗体的制备方法 |
WO2023165475A1 (zh) * | 2022-03-03 | 2023-09-07 | 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 | Her3结合蛋白及其用途 |
WO2024083166A1 (zh) * | 2022-10-19 | 2024-04-25 | 普众发现医药科技(上海)有限公司 | 抗体-药物偶联物及其制备方法和在抗肿瘤中的用途 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005504044A (ja) * | 2001-08-09 | 2005-02-10 | マックス−プランク−ゲゼルシャフト・ツア・フェルデルング・デア・ヴィッセンシャフテン・エー・ファオ | Her3活性の阻害剤 |
WO2011044311A2 (en) * | 2009-10-09 | 2011-04-14 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Generation, characterization and uses thereof of anti-her 3 antibodies |
WO2011136911A2 (en) * | 2010-04-09 | 2011-11-03 | Aveo Pharmaceuticals, Inc. | Anti-erbb3 antibodies |
WO2012022814A1 (en) * | 2010-08-20 | 2012-02-23 | Novartis Ag | Antibodies for epidermal growth factor receptor 3 (her3) |
Family Cites Families (156)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US4683195A (en) | 1986-01-30 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences |
DE229046T1 (de) | 1985-03-30 | 1987-12-17 | Marc Genf/Geneve Ballivet | Verfahren zum erhalten von dns, rns, peptiden, polypeptiden oder proteinen durch dns-rekombinant-verfahren. |
US6492107B1 (en) | 1986-11-20 | 2002-12-10 | Stuart Kauffman | Process for obtaining DNA, RNA, peptides, polypeptides, or protein, by recombinant DNA technique |
US4676980A (en) | 1985-09-23 | 1987-06-30 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Target specific cross-linked heteroantibodies |
US5618920A (en) | 1985-11-01 | 1997-04-08 | Xoma Corporation | Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use |
DE3600905A1 (de) | 1986-01-15 | 1987-07-16 | Ant Nachrichtentech | Verfahren zum dekodieren von binaersignalen sowie viterbi-dekoder und anwendungen |
US5681718A (en) | 1986-03-14 | 1997-10-28 | Celltech Limited | Methods for enhanced production of tissue plasminogen activator in cell culture using alkanoic acids or salts thereof |
US5225539A (en) | 1986-03-27 | 1993-07-06 | Medical Research Council | Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies |
US4946778A (en) | 1987-09-21 | 1990-08-07 | Genex Corporation | Single polypeptide chain binding molecules |
GB8823869D0 (en) | 1988-10-12 | 1988-11-16 | Medical Res Council | Production of antibodies |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
CA2016841C (en) | 1989-05-16 | 1999-09-21 | William D. Huse | A method for producing polymers having a preselected activity |
AU652539B2 (en) | 1989-05-16 | 1994-09-01 | Medical Research Council | Co-expression of heteromeric receptors |
CA2016842A1 (en) | 1989-05-16 | 1990-11-16 | Richard A. Lerner | Method for tapping the immunological repertoire |
US5183884A (en) | 1989-12-01 | 1993-02-02 | United States Of America | Dna segment encoding a gene for a receptor related to the epidermal growth factor receptor |
GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
US6172197B1 (en) | 1991-07-10 | 2001-01-09 | Medical Research Council | Methods for producing members of specific binding pairs |
US5633425A (en) | 1990-08-29 | 1997-05-27 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
US5545806A (en) | 1990-08-29 | 1996-08-13 | Genpharm International, Inc. | Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
US5661016A (en) | 1990-08-29 | 1997-08-26 | Genpharm International Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes |
US5625126A (en) | 1990-08-29 | 1997-04-29 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
EP0814159B1 (en) | 1990-08-29 | 2005-07-27 | GenPharm International, Inc. | Transgenic mice capable of producing heterologous antibodies |
DE69129154T2 (de) | 1990-12-03 | 1998-08-20 | Genentech, Inc., South San Francisco, Calif. | Verfahren zur anreicherung von proteinvarianten mit geänderten bindungseigenschaften |
AU675916B2 (en) | 1991-06-14 | 1997-02-27 | Genentech Inc. | Method for making humanized antibodies |
ATE408012T1 (de) | 1991-12-02 | 2008-09-15 | Medical Res Council | Herstellung von autoantikörpern auf phagenoberflächen ausgehend von antikörpersegmentbibliotheken |
DE69233204T2 (de) | 1991-12-13 | 2004-07-15 | Xoma Corp., Berkeley | Verfahren und materialien zur herstellung von modifizierten variablen antikörperdomänen und ihre therapeutische verwendung |
US5639641A (en) | 1992-09-09 | 1997-06-17 | Immunogen Inc. | Resurfacing of rodent antibodies |
US5641870A (en) | 1995-04-20 | 1997-06-24 | Genentech, Inc. | Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification |
CA2229043C (en) | 1995-08-18 | 2016-06-07 | Morphosys Gesellschaft Fur Proteinoptimierung Mbh | Protein/(poly)peptide libraries |
US6696248B1 (en) | 1995-08-18 | 2004-02-24 | Morphosys Ag | Protein/(poly)peptide libraries |
US5714352A (en) | 1996-03-20 | 1998-02-03 | Xenotech Incorporated | Directed switch-mediated DNA recombination |
ES2274537T5 (es) * | 1996-03-27 | 2015-09-14 | Genentech, Inc. | Anticuerpos ErbB3 |
US5968511A (en) | 1996-03-27 | 1999-10-19 | Genentech, Inc. | ErbB3 antibodies |
US5804968A (en) | 1997-01-29 | 1998-09-08 | Picker International, Inc. | Gradient coils with reduced eddy currents |
US20030105057A1 (en) | 1997-03-19 | 2003-06-05 | Yale University | Methods and compositions for stimulating apoptosis and cell death or for inhibiting cell growth and cell attachment |
JP2001510483A (ja) | 1997-06-13 | 2001-07-31 | ジェネンテク,インコーポレイテッド | タンパク質の回収 |
US6417168B1 (en) | 1998-03-04 | 2002-07-09 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods of treating tumors |
ZA200007412B (en) | 1998-05-15 | 2002-03-12 | Imclone Systems Inc | Treatment of human tumors with radiation and inhibitors of growth factor receptor tyrosine kinases. |
AUPQ105799A0 (en) | 1999-06-18 | 1999-07-08 | Victor Chang Cardiac Research Institute, The | Cell growth inhibition |
DE10084743T1 (de) | 1999-06-25 | 2002-08-14 | Genentech Inc | Humanisierte Anti-ErbB2-Antikörper und Behandlung mit Anti-ErbB2-Antikörpern |
DK1133565T3 (da) | 1999-07-02 | 2011-01-24 | Morphosys Ag | Generering af specifikke bindingspartnere til (poly)peptider, som der kodes for af genomiske DNA-fragmenter eller EST'er |
US7390632B2 (en) | 1999-09-30 | 2008-06-24 | Tumor Biology Investment Group, Inc. | Soluble ErbB3 receptor isoforms |
US7097840B2 (en) | 2000-03-16 | 2006-08-29 | Genentech, Inc. | Methods of treatment using anti-ErbB antibody-maytansinoid conjugates |
PL217410B1 (pl) | 2000-05-19 | 2014-07-31 | Genentech Inc | Zastosowanie antagonisty ErbB, antagonista ErbB do zastosowania w metodzie leczenia raka i sposób identyfikacji pacjenta skłonnego do korzystnej odpowiedzi na antagonistę ErbB przy leczeniu raka |
US7658921B2 (en) | 2000-12-12 | 2010-02-09 | Medimmune, Llc | Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof |
EP1355919B1 (en) | 2000-12-12 | 2010-11-24 | MedImmune, LLC | Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof |
EP1228766A1 (en) | 2001-01-31 | 2002-08-07 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | PYK2 phosphorylation by HER3 induces tumor invasion |
WO2002087619A1 (fr) | 2001-04-27 | 2002-11-07 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Methode de prevention et de traitement du cancer |
WO2002087618A1 (fr) | 2001-04-27 | 2002-11-07 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Methode de prevention et de traitement du cancer |
US7638302B2 (en) | 2001-05-31 | 2009-12-29 | Tumor Biology Investment Group, Inc. | Soluble ErbB3 receptor isoforms |
US7744882B2 (en) | 2001-05-31 | 2010-06-29 | Tumor Biology Investment Group, Inc. | Soluble ErbB3 methods of detection and antibodies |
IL158969A0 (en) | 2001-06-01 | 2004-05-12 | Cornell Res Foundation Inc | Modified antibodies to prostate-specific membrane antigen and uses thereof |
CA2450285C (en) | 2001-06-13 | 2016-08-02 | Genmab A/S | Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor (egfr) |
JP2005500034A (ja) | 2001-06-20 | 2005-01-06 | プロション バイオテク リミテッド | 受容体型タンパク質チロシンキナーゼ活性化を遮断する抗体、そのスクリーニング方法、及びその使用 |
WO2003011897A1 (en) | 2001-07-27 | 2003-02-13 | The Regents Of The University Of California | Modulation of heregulin and her3 interaction |
AU2002326531A1 (en) | 2001-08-03 | 2003-02-17 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Monoclonal antibodies to activated erbb family members and methods of use thereof |
WO2003066662A2 (en) | 2002-02-05 | 2003-08-14 | Genentech, Inc. | Protein purification |
US7591994B2 (en) | 2002-12-13 | 2009-09-22 | Immunomedics, Inc. | Camptothecin-binding moiety conjugates |
EP3000810B1 (en) | 2002-03-13 | 2017-07-19 | Array Biopharma, Inc. | N3 alkylated benzimidazole derivative as mek inhibitor |
US7919098B2 (en) | 2002-03-26 | 2011-04-05 | Zensun ( Shanghai ) Sci & Tech Co., Ltd. | ErbB-3 based methods and compositions for treating neoplasms |
US7332580B2 (en) | 2002-04-05 | 2008-02-19 | The Regents Of The University Of California | Bispecific single chain Fv antibody molecules and methods of use thereof |
US7332585B2 (en) | 2002-04-05 | 2008-02-19 | The Regents Of The California University | Bispecific single chain Fv antibody molecules and methods of use thereof |
WO2003102132A2 (en) | 2002-04-26 | 2003-12-11 | Genetech, Inc. | Non-affinity purification of proteins |
US20040229299A1 (en) | 2002-05-21 | 2004-11-18 | Badal M. Youssouf | Intracellular complexes as biomarkers |
US20040229293A1 (en) | 2002-05-21 | 2004-11-18 | Po-Ying Chan-Hui | Surface receptor complexes as biomarkers |
US20040229380A1 (en) | 2002-05-21 | 2004-11-18 | Po-Ying Chan-Hui | ErbB heterodimers as biomarkers |
US7402397B2 (en) | 2002-05-21 | 2008-07-22 | Monogram Biosciences, Inc. | Detecting and profiling molecular complexes |
US7538195B2 (en) | 2002-06-14 | 2009-05-26 | Immunogen Inc. | Anti-IGF-I receptor antibody |
AT413486B (de) | 2002-07-03 | 2006-03-15 | Igeneon Krebs Immuntherapie | Verwendung eines antikörpers gerichtet gegen lewis-antigene |
CA2490758C (en) * | 2002-07-15 | 2014-09-23 | Genentech, Inc. | Dosage form of recombinant humanized monoclonal antibody 2c4 |
GB0216648D0 (en) | 2002-07-18 | 2002-08-28 | Lonza Biologics Plc | Method of expressing recombinant protein in CHO cells |
AU2003258061A1 (en) | 2002-08-02 | 2004-02-23 | Salmedix, Inc. | Therapeutic inhibitionof protein kinases in cancer cells |
EP1552849A1 (en) | 2002-09-19 | 2005-07-13 | Orient Cancer Therapy Co. Ltd | Immunotherapeutic for cancer |
EA010570B1 (ru) | 2002-11-07 | 2008-10-30 | Иммьюноджен, Инк. | Антитело к cd33 и способы его применения |
CA2513113A1 (en) | 2003-01-23 | 2004-08-05 | Genentech, Inc. | Methods for producing humanized antibodies and improving yield of antibodies or antigen binding fragments in cell culture |
EP1597350B1 (en) | 2003-02-27 | 2015-04-08 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Nucleic acid molecules, and compositions containing same useful for treating and detecting influenza virus infection |
AU2004229501B2 (en) | 2003-04-11 | 2011-08-18 | Medimmune, Llc | Recombinant IL-9 antibodies and uses thereof |
TW568408U (en) | 2003-05-14 | 2003-12-21 | High Tech Comp Corp | Slide structure |
RU2431500C2 (ru) | 2003-06-09 | 2011-10-20 | Самуэль ВАКСАЛ | Способ ингибирования рецепторных тирозинкиназ с помощью внеклеточного антагониста и внутриклеточного антагониста |
EP1493445A1 (en) | 2003-07-04 | 2005-01-05 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Inhibition of stress-induced ligand-dependent EGFR activation |
SI1648940T1 (sl) | 2003-07-28 | 2016-08-31 | Genentech, Inc. | Zmanjševanje izluževanja proteina A med afinitetno kromatografijo proteina A |
WO2005011607A2 (en) | 2003-08-01 | 2005-02-10 | Smithkline Beecham Corporation | Treatment of cancers expressing p95 erbb2 |
WO2005044302A1 (en) | 2003-11-06 | 2005-05-19 | Pfizer Products Inc. | Selective erbb2 inhibitor/anti-erbb antibody combinations in the treatment of cancer |
EP1725585A2 (en) | 2004-03-10 | 2006-11-29 | Lonza Ltd | Method for producing antibodies |
AU2005232657B2 (en) | 2004-04-08 | 2010-12-16 | David B. Agus | ErbB antagonists for pain therapy |
WO2005117973A2 (en) | 2004-05-05 | 2005-12-15 | Merrimack Pharmaceuticals, Inc. | Bispecific binding agents for modulating biological activity |
AU2005279347A1 (en) | 2004-08-30 | 2006-03-09 | Lonza Biologics Plc. | Affinity- plus ion exchange- chromatography for purifying antibodies |
WO2006042002A2 (en) | 2004-10-05 | 2006-04-20 | Oregon Health And Science University | Compositions and methods for treating disease |
US8802820B2 (en) | 2004-11-12 | 2014-08-12 | Xencor, Inc. | Fc variants with altered binding to FcRn |
US20070009972A1 (en) | 2005-02-16 | 2007-01-11 | Ginger Chao | Epidermal growth factor receptor polypeptides and antibodies |
SI1850874T1 (sl) | 2005-02-23 | 2014-01-31 | Genentech, Inc. | Podaljšanje časa za napredovanje bolezni ali za preživetje pri pacientkah z rakom na jajčnikih ob uporabi pertuzumaba |
KR20080004480A (ko) | 2005-03-07 | 2008-01-09 | 타게티드 몰레큘라 다이아그노스틱스, 엘엘씨 | 티로신 키나제 억제제 조성물, 그의 제조 방법 및 이를이용한 질병 치료 방법 |
WO2006133460A2 (en) | 2005-06-09 | 2006-12-14 | Yale University | Methods for diagnosing and treating breast cancer based on a her/er ratio |
PE20070207A1 (es) | 2005-07-22 | 2007-03-09 | Genentech Inc | Tratamiento combinado de los tumores que expresan el her |
EP1928912A4 (en) | 2005-09-07 | 2010-02-24 | Medimmune Inc | EPH ANTI-RECEPTOR ANTIBODIES CONJUGATED TO TOXINS |
CN101309933A (zh) * | 2005-09-07 | 2008-11-19 | 米迪缪尼有限公司 | 毒素偶联的Eph受体抗体 |
TWI405756B (zh) | 2005-12-21 | 2013-08-21 | Array Biopharma Inc | 新穎硫酸氫鹽 |
AR056857A1 (es) | 2005-12-30 | 2007-10-24 | U3 Pharma Ag | Anticuerpos dirigidos hacia her-3 (receptor del factor de crecimiento epidérmico humano-3) y sus usos |
JP5474354B2 (ja) | 2005-12-30 | 2014-04-16 | アステックス、セラピューティックス、リミテッド | 医薬化合物 |
US7897723B2 (en) | 2006-04-07 | 2011-03-01 | Københavns Universitet | ErbB receptor-derived peptide fragments |
CA2639070A1 (en) | 2006-04-13 | 2007-11-01 | Oncomethylime Sciences S.A. | Novel tumour suppressor |
AU2007353412A1 (en) | 2006-11-21 | 2008-11-20 | Fox Chase Cancer Center | Anti-EGFR family antibodies, bispecific anti-EGFR family antibodies and methods of use thereof |
EP2097754B2 (en) | 2006-11-28 | 2018-01-24 | Daiichi Sankyo Europe GmbH | Activated her3 as a marker for predicting therapeutic efficacy |
WO2008140603A2 (en) | 2006-12-08 | 2008-11-20 | Macrogenics, Inc. | METHODS FOR THE TREATMENT OF DISEASE USING IMMUNOGLOBULINS HAVING FC REGIONS WITH ALTERED AFFINITIES FOR FCγR ACTIVATING AND FCγR INHIBITING |
US8362217B2 (en) | 2006-12-21 | 2013-01-29 | Emd Millipore Corporation | Purification of proteins |
US7825127B2 (en) | 2006-12-28 | 2010-11-02 | Takeda Pharmaceutical Company, Limited | Method for treating cancer |
WO2008081331A2 (en) | 2006-12-29 | 2008-07-10 | Sinomab Bioscience Limited | Enhancing the level of antibody expression by framework re-engineering |
US7691980B2 (en) | 2007-01-09 | 2010-04-06 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Enhanced capacity and purification of antibodies by mixed mode chromatography in the presence of aqueous-soluble nonionic organic polymers |
PL2129396T3 (pl) | 2007-02-16 | 2014-02-28 | Merrimack Pharmaceuticals Inc | Przeciwciała przeciw ERBB3 i ich zastosowania |
AU2008223069B2 (en) | 2007-03-02 | 2012-12-13 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Predicting response to a HER dimerisation inhibitor based on low HER3 expression |
EP2134364B1 (en) | 2007-03-09 | 2013-02-13 | Geron Corporation | Treatment of carcinomas with a combination of egf-pathway and telomerase inhibitors |
CN104497143B (zh) | 2007-03-29 | 2020-08-25 | 健玛保 | 双特异性抗体及其制造方法 |
EP2076289B1 (en) | 2007-04-13 | 2014-11-12 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Methods for treating cancer resistant to erbb therapeutics |
WO2008150485A2 (en) | 2007-05-29 | 2008-12-11 | Wyeth | Erbb2 binding proteins and use thereof |
EP2205277B1 (en) | 2007-10-22 | 2017-07-26 | Genmab A/S | Novel antibody therapies |
AU2008328785A1 (en) * | 2007-11-27 | 2009-06-04 | Ablynx N.V. | Method for obtaining polypeptide constructs comprising two or more single domain antibodies |
EP2238154B1 (en) | 2008-01-18 | 2015-09-16 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Enhanced purification of phosphorylated and non-phosphorylated biomolecules by apatite chromatography |
JP5470817B2 (ja) | 2008-03-10 | 2014-04-16 | 日産自動車株式会社 | 電池用電極およびこれを用いた電池、並びにその製造方法 |
EP2281575B9 (en) | 2008-04-09 | 2014-02-12 | Universidad de Barcelona | Antibodies for treating cancer |
KR20110008086A (ko) | 2008-04-11 | 2011-01-25 | 메리맥 파마슈티컬즈, 인크. | 인간 혈청 알부민 링커 및 그 콘쥬게이트 |
WO2009157919A1 (en) | 2008-06-23 | 2009-12-30 | Tumor Biology Investment Group, Inc. | SOLUBLE ErbB3 DETECTION, REGULATION AND TREATMENT OF CANCER |
EP2138511A1 (en) * | 2008-06-27 | 2009-12-30 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | HER3 as a determinant for the prognosis of melanoma |
EP2159836B1 (en) | 2008-08-25 | 2017-05-31 | Soitec | Stiffening layers for the relaxation of strained layers |
EP2376087A4 (en) | 2008-11-07 | 2013-06-05 | Santaris Pharma As | ERBB-3 (HER3) -ELECTIVE COMBINATION THERAPY |
JP2012512244A (ja) | 2008-12-16 | 2012-05-31 | イー・エム・デイー・ミリポア・コーポレイシヨン | タンパク質の精製 |
CN102326081B (zh) | 2009-02-24 | 2014-11-19 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | s-ErbB-3作为癌症标志物的应用 |
MY152068A (en) | 2009-03-20 | 2014-08-15 | Genentech Inc | Bispecific anti-her antibodies |
ES2708124T3 (es) | 2009-04-27 | 2019-04-08 | Oncomed Pharm Inc | Procedimiento para preparar moléculas heteromultiméricas |
WO2010127181A1 (en) | 2009-04-29 | 2010-11-04 | Trellis Bioscience, Inc. | Improved antibodies immunoreactive with heregulin-coupled her3 |
US20120107270A1 (en) | 2009-06-30 | 2012-05-03 | Manuela Kaspar | Immunocytokines In Combination With Anti-ErbB Antibodies For The Treatment Of Cancer |
WO2011019620A1 (en) | 2009-08-10 | 2011-02-17 | Genentech, Inc. | Antibodies with enhanced adcc function |
CA2777242A1 (en) | 2009-10-14 | 2011-04-21 | Merrimack Pharmaceuticals, Inc. | Bispecific binding agents targeting igf-1r and erbb3 signalling and uses thereof |
JP5931736B2 (ja) | 2009-11-13 | 2016-06-08 | ウー3・フアルマ・ゲー・エム・ベー・ハーU3 Pharma | Her−3関連疾患を治療または予防するための物質および方法 |
KR20120098911A (ko) * | 2009-12-22 | 2012-09-05 | 로슈 글리카트 아게 | 항-her3 항체 및 이의 용도 |
EP2859893A1 (en) | 2010-03-11 | 2015-04-15 | Merrimack Pharmaceuticals, Inc. | Use of ERBB3 inhibitors in the treatment of triple negative and basal-like breast cancers |
WO2011153383A1 (en) | 2010-06-04 | 2011-12-08 | Bipar Science, Inc. | Methods of treating platinum-resistant recurrent ovarian cancer with 4-iodo-3-nitrobenzamide in combination with an anti-metabolite and a platinum compound |
WO2012019024A2 (en) | 2010-08-04 | 2012-02-09 | Immunogen, Inc. | Her3-binding molecules and immunoconjugates thereof |
US20120156130A1 (en) | 2010-08-06 | 2012-06-21 | Thore Hettmann | Use of her3 binding agents in prostate treatment |
TW201302793A (zh) | 2010-09-03 | 2013-01-16 | Glaxo Group Ltd | 新穎之抗原結合蛋白 |
CA2813796C (en) | 2010-10-18 | 2019-01-15 | Mediapharma S.R.L. | Erbb3 binding antibody |
ES2692379T3 (es) | 2010-11-01 | 2018-12-03 | Symphogen A/S | Anticuerpos anti-HER3 y composiciones |
US20150231238A1 (en) | 2011-03-15 | 2015-08-20 | Merrimack Pharmaceuticals, Inc. | Overcoming resistance to erbb pathway inhibitors |
EP2722343A4 (en) | 2011-06-20 | 2014-12-17 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | ANTI-ERBB3 ANTIBODIES |
ES2694153T3 (es) | 2011-09-30 | 2018-12-18 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anticuerpos anti-ErbB3 y usos de los mismos |
EP2788377B1 (en) | 2011-11-09 | 2019-01-23 | The UAB Research Foundation | Her3 antibodies and uses thereof |
BR112014012539B1 (pt) | 2011-11-23 | 2022-12-20 | Medimmune, Llc | Anticorpo que se liga especificamente a her3, composição compreendendo o mesmo, e usos do anticorpo |
ES2758433T3 (es) | 2011-12-05 | 2020-05-05 | Novartis Ag | Anticuerpos contra el receptor 3 del factor de crecimiento epidérmico (HER3) |
DK2830595T3 (da) | 2012-03-29 | 2019-12-02 | Translate Bio Inc | Ioniserbare kationiske lipider |
JP6136279B2 (ja) | 2013-01-15 | 2017-05-31 | 株式会社ジェイテクト | 転がり軸受装置 |
TWI503850B (zh) | 2013-03-22 | 2015-10-11 | Polytronics Technology Corp | 過電流保護元件 |
US11305012B2 (en) * | 2013-09-24 | 2022-04-19 | Medimmune, Llc | Binding molecules specific for HER3 and uses thereof |
TWI510996B (zh) | 2013-10-03 | 2015-12-01 | Acer Inc | 控制觸控面板的方法以及使用該方法的可攜式電腦 |
WO2015157634A1 (en) * | 2014-04-11 | 2015-10-15 | Kolltan Pharmaceuticals, Inc. | Anti-erbb antibodies and methods of use thereof |
WO2016040622A1 (en) | 2014-09-11 | 2016-03-17 | Bulldog Pharmaceuticals, Inc. | Uses of anti-her3 antibodies for treating cancer |
US9816280B1 (en) | 2016-11-02 | 2017-11-14 | Matthew Reitnauer | Portable floor |
-
2012
- 2012-11-20 BR BR112014012539-2A patent/BR112014012539B1/pt active IP Right Grant
- 2012-11-20 CN CN201280067754.8A patent/CN104093743B/zh active Active
- 2012-11-20 CN CN201810241627.4A patent/CN108424456B/zh active Active
- 2012-11-20 ES ES12852317T patent/ES2745684T3/es active Active
- 2012-11-20 MX MX2014006324A patent/MX350957B/es active IP Right Grant
- 2012-11-20 DK DK12852317.2T patent/DK2797957T3/da active
- 2012-11-20 JP JP2014543533A patent/JP6180425B2/ja active Active
- 2012-11-20 WO PCT/US2012/066038 patent/WO2013078191A1/en active Application Filing
- 2012-11-20 SG SG11201402536PA patent/SG11201402536PA/en unknown
- 2012-11-20 AU AU2012340766A patent/AU2012340766B2/en active Active
- 2012-11-20 EP EP12852317.2A patent/EP2797957B1/en active Active
- 2012-11-20 KR KR1020147016871A patent/KR102080535B1/ko active IP Right Grant
- 2012-11-20 EP EP19180848.4A patent/EP3608340A1/en active Pending
- 2012-11-20 RU RU2014120757A patent/RU2620068C2/ru active
- 2012-11-20 US US14/359,864 patent/US9220775B2/en active Active
- 2012-11-20 CA CA2856297A patent/CA2856297C/en active Active
-
2014
- 2014-05-16 ZA ZA2014/03570A patent/ZA201403570B/en unknown
- 2014-05-20 IL IL232726A patent/IL232726B2/en unknown
- 2014-06-06 CO CO14121983A patent/CO7051008A2/es unknown
-
2015
- 2015-04-15 HK HK15103666.0A patent/HK1203207A1/xx unknown
- 2015-11-20 US US14/947,865 patent/US10040857B2/en active Active
-
2017
- 2017-03-13 JP JP2017047055A patent/JP6513728B2/ja active Active
-
2018
- 2018-06-29 US US16/024,391 patent/US11091554B2/en active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005504044A (ja) * | 2001-08-09 | 2005-02-10 | マックス−プランク−ゲゼルシャフト・ツア・フェルデルング・デア・ヴィッセンシャフテン・エー・ファオ | Her3活性の阻害剤 |
WO2011044311A2 (en) * | 2009-10-09 | 2011-04-14 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Generation, characterization and uses thereof of anti-her 3 antibodies |
WO2011136911A2 (en) * | 2010-04-09 | 2011-11-03 | Aveo Pharmaceuticals, Inc. | Anti-erbb3 antibodies |
WO2012022814A1 (en) * | 2010-08-20 | 2012-02-23 | Novartis Ag | Antibodies for epidermal growth factor receptor 3 (her3) |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
G SALA ET AL.: "An ErbB-3 antibody, MP-RM-1, inhibits tumor growth by blocking ligand-dependent and independent acti", ONCOGENE, vol. 31, no. 10, JPN6016035801, 8 March 2012 (2012-03-08), pages 1275 - 1286, XP055042235, ISSN: 0003399684, DOI: 10.1038/onc.2011.322 * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11091554B2 (en) | Binding molecules specific for HER3 and uses thereof | |
US20180362443A1 (en) | Uses of anti-her3 antibodies for treating cancer | |
CA2696360C (en) | Monoclonal antibody targeting the egfr receptor and uses thereof | |
US11305012B2 (en) | Binding molecules specific for HER3 and uses thereof | |
US20150037323A1 (en) | Humanized axl antibodies | |
AU2015243377A1 (en) | Bispecific HER2 antibodies | |
JP2017514461A (ja) | 抗ox40抗体及び使用方法 | |
TW202323292A (zh) | 抗體藥物結合物 | |
US20170190788A1 (en) | Uses of anti-her3 antibodies for treating cancer | |
EA031184B1 (ru) | БИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ К EGFR/c-Met АНТИТЕЛА | |
KR20220042258A (ko) | 항 tigit 항체 및 그의 응용 | |
KR20160101909A (ko) | 뉴레귤린 알로스테릭 항-her3 항체 | |
JP7065935B2 (ja) | 抗ly6g6d抗体及び使用方法 | |
JP6655673B2 (ja) | ニューレグリンに対して非競合的でアロステリックな抗ヒトher3抗体及びその使用 | |
AU2008287335B8 (en) | Monoclonal antibody 175 targeting the EGF receptor and derivatives and uses thereof | |
NZ625046B2 (en) | Binding molecules specific for her3 and uses thereof |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150513 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20151120 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20151120 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160913 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20161207 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170310 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20170620 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170718 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6180425 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |