TWI405756B

TWI405756B - 新穎硫酸氫鹽

Info

Publication number: TWI405756B
Application number: TW095144927A
Authority: TW
Inventors: John Demattei; Tsung Hsun Chuang; Richard Anthony Storey; Gorkhn Sharma-Singh; Paul Alfred Dickinson; Mohammed Pervez; Christopher John Squire; James Gair Ford; Ronald John Roberts
Original assignee: Array Biopharma Inc; Astrazeneca Ab
Priority date: 2005-12-21
Filing date: 2006-12-04
Publication date: 2013-08-21
Also published as: EP1968948B1; KR20080080200A; KR101361460B1; CN101360718A; NZ569792A; MY157733A; FR21C1051I1; JP5127723B2; NL301139I1; FR21C1051I2; IL192224A0; BRPI0620091A2; ES2421746T3; JP2009521487A; NL301139I2; US9562017B2; US20120253049A1; DK1968948T3; WO2007076245A2; CA2634149A1

Description

新穎硫酸氫鹽

本發明係關於一種新穎鹽類，且更特別地說，係關於一種6-(4-溴-2-氯-苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羥基-乙氧基)-醯胺(以下皆稱為"化合物1")之新穎鹽類，其係為一種MEK抑制劑，係有益於治療及/或預防哺乳動物中之增生性疾病狀態，諸如癌症。更精確地說，本發明係關於一種化合物1的硫酸氫鹽及製備該鹽之方法。本發明亦提供包含化合物1的硫酸氫鹽之醫藥組成物，及該鹽於製備用來治療及/或預防在人類或動物體中增生性疾病狀態如癌症之藥劑之用途，以及藉由投予一治療有效量的化合物1之硫酸氫鹽治療在哺乳動物中增生性疾病狀態如癌症的方法。

透過生長因子受體及蛋白激酶的細胞傳訊，為細胞生長、增生及分化的一種重要的調節者。在正常的細胞生長中，生長因子透過受體活化(例如PDGF或EGF及其它)，活化MAP激酶路徑。其中最重要，也最為熟知的包括正常及不受控制細胞生長的MAP激酶路徑為Ras/Raf激酶路徑。活化GTP結合的Ras會造成Raf激酶的活化及間接磷酸化。之後Raf會磷酸化MEK1及2上兩個絲胺酸殘基(MEK1的S218及S222及MEK2的S222及S226)(Ahn等人，Methods in Enzymology,2001,332：417-413)。然後，被活化的MEK會磷酸化其目前僅習知的受質，MAP激酶ERK1及2。ERK的磷酸化，乃是藉由MEK發生在ERK1上的Y204及T202，以及ERK2上的Y185及T183(Ahn等人，Methods in Enzymology 2001,332：417-431)。被磷酸化的ERK二聚化且然後易位至其中其所累積之細胞核。(Khokhlatchev等人，Cell 1998,93：605-615)。在細胞核中，ERK涉及數個重要的細胞功能中，包括但不限定於細胞核運輸、訊號轉導、DNA修復、核小體裝配及易位，及mRNA加工和轉譯(Ahn等人，Molecular Cell,2000,6：1343-1354)。全面地，以生長因子治療細胞會導致ERK1及2的活化，將造成增生及在某些案例中，會造成分化(Lewis等人，Adv.Cancer Res.1998,74：49-139)。

在增生疾病中，基因突變及/或生長因子受體過度表現、下游訊號蛋白或蛋白激酶皆包含於ERK激酶路徑所導致的不受控制的細胞增生且，最終導致腫瘤形成。例如，一些包含突變的癌症由於持續的生長因子的產生而造成此路徑的持續活化。其它突變可導致已活化GTP結合Ras複合體的去活化作用喪失，再一次的造成MAP激酶路徑的活化。突變、致癌的Ras型可在50%的結腸癌及>90%胰臟癌中被發現，及許多其它型癌症(Kohl等人，Science,1993,260：1834-1837)。近來，bRaf突變在超過60%之惡性黑色素瘤中已被確認(Davies,H.，等人，Nature 2002,417：949-954)。在bRaf的這些突變會造成構成性地活性的MAP激酶級聯。原發性腫瘤的樣本及細胞系之研究已顯示出在胰臟、結腸、肺、卵巢及腎臟癌的MAP激酶路徑的構成性或過度的活化(Hoshino,R.，等人，Oncogene 1999,18：813-822)。因此，癌症及過度活化的MAP激酶路徑間有相當強的關連性，其造成原因源起於基因突變。

MAP激酶級聯的構成性或過度活化在細胞增生及分化上扮演了重要的角色，此路徑的抑制被相信有益於過度增生疾病。MEK在此路徑上為關鍵的角色，因其位在Ras及Raf的下游。另外，其為一具吸引力的治療標的，因為MEK磷酸化的習知受質僅有MAP激酶，ERK1及2。MEK的抑制在數個研究中已顯示出具有潛在的治療益處。例如小分子MEK抑制劑在裸鼠異種移植上，已顯示出會抑制人類腫瘤的生長(Sebolt-Leopold等人，Nature-Medicine 1999,5(7)：810-816；Trachet等人，AACR四月6-10,2002,Poster #5426；Tecle,H.,IBC 2^nd International Conference of Protein Kinases，九月9-10,2002)，阻止動物靜態痛覺超敏(static allodynia)(WO 01/05390)及抑制急性骨髓性白血病細胞的生長(Milella等人，J.Clin.Invest.2001,108(6)：851-859)。

MEK的小分子抑制劑已被揭示。至少十三個專利申請案已在過去幾年出現：US 5,525,625；WO 98/43960；WO 99/01421；WO 99/01426；WO 00/41505；WO 00/42002；WO 00/42003；WO 00/41994；WO 00/42022；WO 00/42029；WO 00/68201；WO 01/68619及WO 02/06213。

MEK的抑制劑亦被敘述於WO 03/077914中。6-(4-溴-2-氯-苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羥基-乙氧基)-醯胺，或"化合物1"係例示於WO 03/077914中且具有下列結構式：

化合物1已顯示出具有對MEK的抑制活性，且因此有益於治療過度增生疾病，諸如癌症。

WO 03/077914揭示，一般說來，某些其中所揭露之化合物的醫藥上可接受鹽類。更精確地，在WO 03/077914中陳述其中所揭露之化合物的醫藥上可接受鹽類具有足夠地鹼性部分，可形成含有酸性加成鹽的醫藥上可接受陰離子，及此類陰離子的範圍已列表。相似地，該具有酸性部份之化合物的適當鹽類，係藉由以一種鹼性化合物處理及特別是無機鹼處理該化合物而形成。

適合用於藥劑之醫藥上活性化合物的形式係為能提供適合處理的性質，該性質允許其被處理及調配。然而，茲亦需要確認最終配方之生物性質，諸如錠劑的溶解率及活性成分的生物體利用率係最佳化，在選擇最適當完全滿足不同需要的特地形式上需經常地妥協。然而，在某些事例中，鹽類不易形成及/或不穩定，原因可能為低的pKa值。pKa值表示酸和鹼的強度，例如酸失去質子的傾向或鹼得到質子的傾向(Bronsted J.N.,Rec.Trav.Chim. (1923)47：718)。此現象在化合物1特別如此。

發明摘述

本發明提供一種化合物1的硫酸氫鹽(1：1藥物：H₂SO₄)及其各種形式，其全部皆包括在本發明範疇之中。該鹽類可呈不同的形式，其全部皆包括在本發明範疇之中。這些形式包括無水形式及溶劑合物。更進一步形式可藉由去溶劑化溶劑合物產生。在一特別具體態樣中，該鹽類係呈無水形式。

在進一步的觀點中，本發明提供一種使用化合物1硫酸氫鹽作為治療過度增生疾病及症狀之藥劑的方法。

本發明之另外的觀點係為一種化合物1硫酸氫鹽之用途，其係用於製備治療或預防過度增生疾病及症狀之藥劑。

本發明另外的優點及新穎的特徵將有部份在接下來敘述中提出，及有部份將顯而易見為熟習此技術者基於檢視緊接著的說明書或是可從本發明的實施中學習。本發明的優點可由特別是在附加的申請專利範圍項中所指出的手段、組合物、組成物及方法中所了解及達到。

發明詳述

參考資料可依本發明的特定具體態樣來詳細地撰寫，其中實例的闡述伴隨有結構及分子式。當本發明以列舉的具體態樣敘述的同時，須知其並非要以這些具體態樣限制本發明。相反地，本發明乃是要涵蓋所有替代物、修飾物及等價物，這些可能包含於如申請專利範圍項中所定義的本發明範疇。熟習該項技術者將認可許多類似或相等於此處所描述的方法及材料，可被用於本發明的實施。本發明並不僅限於在此所述的方法及材料。倘若有一或多個被包含的文獻、專利及相似的材料不同於或相反於本申請案，包括但不限於所定義的術語、術語用法、所述技術或類似者，皆屬為本申請案所支配。

本發明提供一種化合物1的硫酸氫鹽(1：1藥物對H₂SO₄)及其各種形式，其全部皆包括在本發明範圍之中。該鹽類可呈不同的形式，其全部皆包括在本發明範圍之中。這些形式包括無水形式及溶劑合物。更進一步形式可藉由去溶劑化溶劑合物產生。在一特別具體態樣中，該鹽類為無水化合物1的硫酸氫鹽類。更進一步的觀點，本發明提供一種化合物1硫酸氫鹽形式，其展現使其在用於藥劑上特別適合的獨特物理及醫藥性質。

在特定具體態樣中，化合物1的鹽類為結晶狀。在製造操作性質的觀點上，特別是在其靜態及流動性質上，該結晶鹽已被發現較游離鹼佳。鹽類的形成能提供一種純化的手段，就如處理過的雜質可被分離及鹽類一般較游離鹼形式易於分離。

在本發明的一具體態樣中，化合物1之硫酸氫鹽為結晶鹽，其令人驚訝地被發現當與化合物1的游離鹼形式及化合物1之特定其它鹽形式比較時，具有改進的醫藥性質。特別地，此結晶鹽的溶解率及其生物體利用率已被發現較其游離鹼形式及其它鹽類特別地高，就如接下來所闡述實例。化合物1的硫酸氫鹽超過游離鹼形式的增加的生物體利用率已顯示與用於投藥的配方無關。游離鹼形式與硫酸氫鹽形式的生物體利用率已在此被比較，當以相同分散調配物給藥時，而在簡單錠劑調配物中亦可觀察到相似的差異。

硫酸氫鹽所提供的增加的生物體利用率的程度係令人驚訝，並且特別有益，因為化合物1的游離鹼形式已被分類為BCS第4級化合物。BCS第4級化合物正常具有低的生物體利用率，因其低溶解率及滲透性，而吸收上的滲透性的限制意指此鹽類通常不被期望能在吸收上能產生實質的影響(參見，例如：Dressman等人，(2001)Pharm Tech.七月：68)。

化合物1之硫酸氫鹽之適合的溶劑合物係形成自寬廣範圍的溶劑，特別是有機溶劑，諸如四氫呋喃(THF)、已腈(ACN)、乙醇(EtOH)及甲醇(MeOH)。適當的有機溶劑包括酯類，諸如C₁-₆烷基酯，例如乙酸乙酯，以及酮類，諸如C₁-₆烷基酮，例如甲基乙基酮(2-丁酮)。

該鹽類的製備能被化合物1的漿液在有機溶劑及水中與硫酸的反應所影響。為了製備1：1的鹽類，約需使用1當量的硫酸。因此，於一更進一步的觀點中，本發明提供一種製備化合物1的硫酸氫鹽的方法，該方法包括：(i)將化合物1之漿液在有機溶液及水中與約1當量的硫酸反應；(ii)回收來自生成溶液的鹽類；及(iii)之後，若意欲或需要，形成其溶劑合物。

硫酸對化合物1的量的莫耳比率係適當地為自1.00：1至2：1的範圍內，例如範圍為從1.05：1至1.15：1。適當的被使用的硫酸形式為濃硫酸的形式。在一個特別的具體態樣中，硫酸對化合物1的莫耳比率為1.10：1.0。

在步驟(i)中所加入水的適當量係限制在必須確保鹽類的形成。被使用的精確的量係視溶劑的特殊本質，硫酸的濃度等等而定，但典型地，水的量將以低於20% v/v的總液體量存在，例如由13%至17% v/v。

在一特別的具體態樣中，在步驟(i)中所使用的有機溶劑為2-丁酮(甲基乙基酮)，水約佔液體體積的15%，使用的液體總量相對於化合物1約為8毫升/克化合物1。

適當地，在步驟(i)硫酸的添加係以控制的方式進行，例如溫度低於10℃，及然後步驟(i)剩餘者，在提高溫度下進行，例如由30-90℃，更進一步的實例為範圍在55℃-75℃間，及更進一步的實例約在65℃。

適合的有機液體包括有機溶劑，其中化合物1及其鹽類係溶解度不佳。如在此所用者，"溶解度不佳"意指溶解度低於每克溶質100毫升溶劑，例如每克溶質30至100毫升溶劑。這些溶劑包括烷基酮類，例如C₁-₆烷基酮類，諸如2-丁酮。醇類，諸如C₁-₆醇類，例如甲醇或乙醇，及酯類，諸如C₁-₆烷基酯，例如乙酸乙酯。在一具體態樣中，有機溶劑為甲基乙基酮(2-丁酮)。

適當地，反應混合物在步驟(i)及(ii)間過濾以移除任何外來雜質。該殘餘物被選擇性地清洗，例如以有機液體及水之混合物，且該來自濾液之所欲的鹽結晶，其可選擇性地與清洗液結合。

在特定具體態樣中，於步驟(ii)中，藉由冷卻反應混合物、選擇性地添加另外的有機液體而使硫酸氫鹽沉澱以回收硫酸氫鹽。另外的有機液體可為於步驟(i)中所使用之相同的有機液體，或其可為一不同的有機液體，其條件為此作用係作為化合物1之硫酸氫鹽的反溶劑。以化合物1之硫酸氫鹽的結晶播種溶液，可幫助沉澱的步驟。

在一具體態樣中，在冷卻前，濾液先經過蒸餾步驟以移除水分並確保鹽類能在可接受的產量下回收。在一特別的具體態樣中，溶劑為2-丁酮且濾液在大氣壓力下蒸餾。

在冷卻過程中，鹽類可從生成漿液中回收，例如藉由過濾的方式。然後，回收物質可被乾燥，例如在提高溫度下，例如由40至60℃，且另一例為約50℃，直到達到固定的重量。如果產物為具有有機液體(諸如甲醇)的溶劑合物，如有需要，在此時可藉由加熱去溶劑化。

硫酸氫鹽的物理性質將在實施例中作更進一步的探討及敘述。

本發明亦包含同位素標誌化合物，其與本發明所敘述者相同，但事實上，會有一或多個原子被具有與通常自然界已發現者不同的原子質量或質量數的原子所取代。可被併入本發明化合物的同位素的實例包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟及氯的同位素，諸如個別地為²H、³H、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸O、¹⁷O、³¹P、³²P、³⁵S、¹⁸F及³⁶Cl。包含前述提及之同位素及/或其它原子之其他同位素之化合物1之硫酸氫鹽及其多晶型物皆包括在本發明的範圍中。本發明的特定同位素標誌的化合物，例如那些含有放射活性同位素，諸如³H及¹⁴C係被併入，其在藥物及/或受質組織分佈試驗中相當有用。氚化，即³H及碳-14，即¹⁴C，之同位素因其易於製備及偵測而廣泛的被使用。更進一步來說，以較重的同位素諸如氘，即2H取代，因其較大的代謝穩定性而能提供特定治療上的益處，如增加體內半生期或減少劑量的需要量，且因此，可用於一些特殊環境中。本發明同位素標誌的鹽類一般能依已揭露於WO 03/077914中的流程來製備，其係在製備期間藉由已準備好隨時可用的同位素標誌試劑替代非同位素試劑，或在製備此鹽類時，如有需要，可使用同位素標誌的硫酸。

該組成物可為適合口服的形式(例如藥片、錠劑、硬的或軟的膠囊、乳液、可分散的粉末或顆粒、糖漿、酏劑、含油的或即時製備的水性懸浮液)、適合藉由吸入式投藥的形式(例如極細的分離的粉末或液體噴劑)、適合藉由吹入式投藥的形式(例如極細的分離的粉末)、適合非經腸胃道注射的形式(例如無菌溶液、用於靜脈、皮下、肌肉內、血管內或灌輸劑量的懸浮液或乳液)、適合局部投藥的形式(例如乳霜、軟膏、凝膠、含油溶液或懸浮液或即時製備的水性懸浮液)、適合直腸投藥的形式(例如栓劑)。在一具體態樣中，化合物1之硫酸氫鹽係口服投藥。一般而言，上述組成物可使用傳統佐劑以習常方式製備。

活性化合物的投予量，視被治療者、病症及症狀的嚴重性、投藥速率、化合物的處置及開藥醫師的斟酌而定。然而，一有效的劑量範圍為約每天每公斤體重約0.01至約100毫克，而約1至約35毫克/公斤/天較佳，以單一或分開的劑量方式投藥。對一70公斤的人而言，劑量為約0.7至7000毫克/天，而約70至約2500毫克/天則較佳。在某些例子中，低於前述範圍下限的劑量者可能亦有效，而在其它實例中，使用較大的劑量可能亦不會造成任何有害的副作用，其條件在於此類較大的劑量可先分散成數個小劑量後，分散在每天投藥中。諸如藥片及膠囊，一單位劑量形式將通常含有，例如1-1000毫克的活性成分，而5-420毫克的活性成分則較佳。較佳地為使用每日劑量範圍0.03-6毫克/公斤。

依據本發明進一方面來說，其提供一種在本明所定義的化合物1之硫酸氫鹽藉由治療法用於人類或動物體的治療或預防的方法。本發明更進一步的觀點為將此發明所定義的化合物1之硫酸氫鹽使用作為藥劑。在更進一步的觀點中，本發明提供本發明所定義的化合物之硫酸氫鹽用於作為治療透過MEK所媒介之疾病狀態，特別是在溫血哺乳動物，諸如人類的增生性疾病、或不正常細胞生長，諸如癌症之藥劑。因此，本發明之另外的觀點，係提供一種本發明所定義之化合物1之硫酸氫鹽之用途，其係用於製備治療透過MEK所媒介之疾病狀態，特別是在溫血哺乳動物，諸如人類的增生性疾病、或不正常細胞生長，諸如癌症之藥劑。

依據本發明更進一步的觀點，本發明提供一種用於治療透過MEK所媒介的疾病狀態，特別是在需要此種治療之溫血哺乳動物，諸如人類的增生性疾病、或不正常細胞生長，諸如癌症之方法，其包含投予一有效量之本發明所提之化合物1之硫酸氫鹽或本發明所定義之醫藥組成物至該哺乳動物。

增生性疾病的特殊實例，其可使用本發明的鹽類或組成物來治療，包括哺乳動物的過度增生性疾病。特殊的癌症為腦癌、肺癌、鱗狀細胞癌、膀胱癌、胃癌、胰臟癌、乳癌、頭部癌、頸部癌、腎癌、腎臟癌、卵巢癌、攝護腺癌、結腸直腸癌、食道癌、睪丸癌、婦癌或甲狀腺癌。

然而，本發明的化合物及組成物亦可被用於非癌症過度增生性病症的治療上，諸如良性皮膚增生(例如牛皮癬)、血管再狹窄或攝護腺(例如良性攝護腺肥大症(BPH))。

因MEK所媒介的疾病的其它實例(可使用本發明化合物或組成物來治療者)包括胰腺炎或腎臟疾病(包括增生性腎小球性腎炎及糖尿病引發腎臟疾病)或是哺乳動物疼痛的治療。

該等化合物或組成物亦可被用於哺乳動物胚細胞著床的預防或用於哺乳動物脈管生成或血管生成相關之疾病的治療。此類疾病可能包括腫瘤血管新生、慢性發炎疾病，諸如類風濕性關節炎、動脈粥狀硬化、發炎性腸病，皮膚疾病，諸如牛皮癬、溼疹、及硬皮症、糖尿病、糖尿病視網膜病變、早產兒視網膜病變、老化型黃斑病變、血管瘤、神經膠質瘤、黑色素細胞瘤、卡波西氏肉瘤及卵巢癌、乳癌、肺癌、胰臟炎、攝護腺癌、結腸癌及表皮癌。

〝不正常細胞生長〞及〝過度增生性疾病〞用語在本申請案中可替換使用，意指細胞生長不受正常調節機制所控制(例如接觸性抑制的喪失)。這包括如(1)因突變的酪胺酸激酶的表現或受體酪胺酸激酶的過度表現所增生的腫瘤細胞(腫瘤)之不正常生長；(2)其它增生性疾病的良性及惡性細胞，其中異常酪胺酸激酶活化產生之不正常生長；(3)任何藉由受體酪胺酸激酶而增生的腫瘤之不正常生長；(4)任何藉由異常絲胺酸/蘇胺酸激酶活化而增生的腫瘤之不正常生長；(5)其它增生性疾病的良性及惡性細胞，其中異常絲胺酸/蘇胺酸激酶活化產生之不正常生長。

除非有其它指定，此處所用之用語〝治療(treating)〞乃意指逆轉、減輕、抑制進展或避免病症或疾病，或一或多種此種病症或疾病的症狀。除非有其它指定，此處所用之用語〝治療(treatment)〞乃意指剛剛上述定義"治療(treating)"的治療行為。

因此，病患可以本發明的化合物及組成物來治療，例如被診斷出患有牛皮癬、血管再狹窄、動脈粥狀硬化、BPH、肺癌、非小細胞肺癌、骨癌、CMML、胰臟癌、結腸直腸癌、皮膚癌、頭頸部癌症、黑色素細胞癌(特別是侵犯皮膚或眼內的黑色素細胞癌)、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門附近區域的癌症、胃癌、結腸癌、乳癌、睪丸癌、婦癌(例如，子宮肉瘤、輸卵管癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、陰道癌或外陰癌)、卵巢癌、多發性骨髓瘤、肝細胞癌、何杰金氏淋巴瘤、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌(例如，甲狀腺、副甲狀腺或腎上腺癌)、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、攝護腺癌、慢性或急性血癌、特別是兒童急性骨髓性白血病固形瘤、淋巴細胞淋巴瘤、膀胱癌、腎或輸尿管癌(例如，腎細胞癌、腎盂癌)或中樞神經系統癌(例如，原發性中樞神經系統淋巴瘤、脊椎軸癌、腦幹神經膠瘤或腦垂體腺癌)。

化合物1之硫酸氫鹽可用於單獨治療或除了化合物1之硫酸氫鹽外，與其它一或多種物質及/或治療併用。此類合併治療可藉由療程中個別組成物的同時、連續或分開投予來達成。在醫療腫瘤學的領域中，合併不同型治療方式治療癌症病患乃是正常的實施方式。在醫療腫瘤學中，此類合併治療的其它組成，除了化合物1之硫酸氫鹽外，可能還有手術、放射線治療或化學治療。此類化學治療可能涵蓋的治療劑種類，諸如：(i)抗血管新生藥劑，諸如會抑制血管內皮生長因子的藥劑(例如，抗血管內皮細胞生長因子抗體bevacizumab[癌思停^TM]、及VEGF受體酪胺酸激酶抑制劑，諸如4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(ZD6474；在WO 01/32651中的實施例2)、4-(4-氟-2-甲基吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基-7-(3-吡咯啶-1-基丙氧基)喹唑啉(AZD2171；在WO 00/47212中的實施例240)、vatalanib(PTK787；WO 98/35985)及SU11248(sunitinib；WO 01/60814)、化合物，諸如揭示於國際專利申請案WO 97/22596、WO 97/30035、WO 97/32856及WO 98/13354以及那些藉由與本發明不同的機制作用者(例如，linomide、整合素αvβ3功能抑制劑、血管抑素、razoxin、沙利竇邁(thalidomide)、MMP-2(基質金屬蛋白酶2)抑制劑、MMP-9(基質金屬蛋白酶9)抑制劑及COX-II(環氧化酵素II)抑制劑)及(ii)血管標靶劑(例如，combrestastatin phosphate及揭示於WO 00/40529、WO 00/41669、WO 01/92224、WO 02/04434及WO 02/08213中的化合物以及敘述於國際專利申請案號WO 99/02166中之血管損害劑(例如，N-乙醯基秋水仙醇-O-磷酸鹽))；(iii)細胞生長抑制劑，諸如抗雌激素劑(例如，體得適錠(tamoxifen)、弗端斯錠(toremifene)、那洛西芬(raloxifene)、卓羅昔芬(droloxifene)及愛垛西芬(iodoxyfene))、雌激素受體下降調節劑(例如，氟維司群(fulvestrant))、黃體酮(例如，megestrol acetate)、芳香酶抑制劑(例如，阿那曲唑(anastrozole)、來曲唑(letrazole)、福拉唑(vorazole)、及依稀美坦(exemestane))、抗助孕素、抗雄性素(例如，氟他胺(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)及醋酸環丙氯地孕酮(cyproterone acetate))、LHRH激動劑及拮抗劑(例如，戈舍瑞林乙酸鹽(goserelin acetate)、亮丙瑞林(leuprorelin)及布舍瑞林(buserelin))、5α-還原酶之抑制劑(例如，非那雄胺 (finasteride))；(iv)抗侵入劑(例如，金屬蛋白酶抑制劑如馬立馬斯他(marimastat)及尿激酶纖溶酶原激活因子受體功能抑制劑或抗肝素酶(heparanese)抗體)；(v)生長因子功能抑制劑(此類生長因子包括，如血小板衍生生長因子及肝細胞生長因子)，此類抑制劑包括生長因子抗體、生長因子受體抗體(例如，抗-erbb2抗體trastuzumab[Herceptin^TM]，抗-EGFR抗體panitumumab、抗-erbB1抗體cetuximab[C225])及任何Stern等人，Critical reviews in oncology/haematology，2005，Vol.54，第11-29頁揭示的生長因子或生長因子受體抗體；此類抑制劑亦包括酪胺酸激酶抑制劑，諸如表皮生長因子家族抑制劑(例如，EGFR家族酪胺酸激酶抑制劑，諸如N-(3-氯-4-氯苯基)-7-甲氧基-6-(3-嗎啉代丙氧基)-喹唑啉-4-胺(gefitinib，AZD1839)、N-(3-乙炔基苯基)-6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(埃羅替尼(erlotinib)，OSI-774)及6-丙烯醯胺基-N-(3-氯-4-氯苯基)-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉-4-胺(CI1033)及erbB2酪胺酸激酶抑制劑，諸如拉帕替尼(lapatinib)、肝細胞生長因子家族抑制劑、血小板衍生生長因子家族抑制劑，諸如伊馬替尼(imabinib)、絲胺酸及蘇胺酸激酶抑制劑(例如，Ras/Raf傳訊抑制劑，諸如法尼基(farnesyl)轉移酶抑制劑，例如索雷弗尼(sorafenib)(BAY 43-9006))、透過MEK及/或AKT激酶作用之細胞傳訊抑制劑、c-kit抑制劑、ab1激酶抑制劑、IGF受體(類胰島素生長因子)激酶抑制劑；aurora激酶抑制劑(例如，AZD1152、PH739358、VX-680、MLN8054、R763、MP235、MP529、VX-528及AX39459)及細胞週期蛋白依賴性激酶抑制劑，諸如CDK2及/或CDK4抑制劑；(vi)抗增生/抗腫瘤藥及其組合，就如醫藥腫瘤學中所使用者，諸如，抗代謝物藥(例如，抗葉酸藥，如滅殺除癌錠(methotrexate)、氟嘧錠類，如5-氟脲嘧啶、替加福(tegafur)、嘌呤及腺苷酸相似物及阿糖胞苷、羥基脲，或是如特別揭示於歐洲專利申請案號239362中之抗代謝物藥之一，諸如N-(5-[N-(3,4-二氫-2-甲基-4-側氧喹唑啉(oxoquinazolin)-6-基甲基)-N-甲基胺-2-噻吩甲醯基)-L-麸胺酸；抗腫瘤抗生素(例如，蔥環類(anthracycline)，諸如阿鰴素(adriamycin)、撲類惡(bleomycin)、艾鰴素(doxorubicin)、道諾鰴素(daunomycin)、泛艾鰴素(epirubicin)及艾達艾鰴素(idarubicin)、排多癌(mitomycin-C)、可美淨(dactinomycin)及普卡鰴素(mithramycin))；鉑衍生物(例如，順鉑及卡鉑)；烷化藥劑(例如，氮芥、美法崙(melphalan)、瘤可寧(chlorambucil)、白消安(busulphan)、環磷醯胺、異環磷酰胺(ifosfamide)、亞硝脲(nitrosourea)及替派(thiotepa))；抗有絲分裂劑(例如，長春花生物鹼，諸如維克絲丁(vincristine)、敏伯斯登(vinblastine)、長春花鹼醯胺(vindesine)及溫諾平(vinorelbine)；及紫杉醇類(taxoid)，諸如紫杉醇及剋癌易(taxotere))；拓樸異構酶抑制劑(例如，差向鬼臼毒素(epipodophyllotoxin)，諸如滅必治(etoposide)及替尼泊苷(teniposide)、安莎克林(amsacrine)、癌康定(topotecan)、坎普特賽辛(camptothecin)及抗癌妥(irinotecan))；酵素(例如，天冬醯胺酸酶)；及胸苷酸合成酶抑制劑(例如，雷替曲塞(raltitrexed))；及額外化學治療劑形式包括：(vii)生物反應調節劑(例如，干擾素)；(viii)抗體(例如，依決洛單抗(edrecolomab))；(ix)反義療法，例如那些關於上述所列之標的，諸如，ISIS2503(一種抗ras之反義)；(x)基因治療法，包括如置換異常基因，諸如異常的p53或異常的BRCA1或BRCA2，GDEPT法(基因導向酵素前藥治療)，諸如利用胞嘧啶脫氨酶、胸腺嘧啶激酶或細菌氮還原酶酵素，及增加病患對化療或放射治療耐受性的方法，諸如多重抗藥性基因治療；及(xi)免疫治療法，包括如在活體外或活體內增加病患腫瘤細胞免疫原性的方法，諸如介白素2、介白素4或顆粒球-巨噬細胞集落刺激因子；減少T細胞失能的方法，利用轉染免疫細胞的方法，諸如細胞激素-轉染之樹突細胞；利用細胞激素轉染之腫瘤細胞株的方法，以及利用抗特應抗體的方法。

例如，化合物1之硫酸氫鹽可與有效量之一或多種選自抗血管生成劑、訊息傳導抑制劑及抗增生劑之物質合併使用。

在一特別的具體態樣中，抗血管生成劑，諸如MMP-2(基質-金屬蛋白酶2)抑制劑、MMP-9(基質-金屬蛋白酶9)抑制劑及COX-II(環氧化酶II)抑制劑，皆可與本發明化合物1之硫酸氫鹽及本發明所述之醫藥組成合併使用。有用的COX-II抑制劑的實例包括希樂葆(CELEBRE^TM)(alecoxib)、伐地考昔(valdecoxib)及羅非昔布(rofecoxib)。有用的基質-金屬蛋白酶抑制劑的實例已敘述於WO 96/33172、WO 96/27583、WO 98/07697、WO 98/03516、WO 98/34918、WO 98/34915、WO 98/33768、WO 98/30566、WO 90/05719、WO 99/52910、WO 99/52889、WO 99/29667、美國專利第5,863,949號及美國專利第5,861,510號，這些全部都併於此處作為參考。適當的MMP-2及MMP-9抑制劑為那些具有少量或不具有抑制MMP-1的活性者。特別是那些相對於其它基質-金屬蛋白酶(即，MMP-1、MMP-3、MMP-4、MMP-5、MMP-6、MMP-7、MMP-8、MMP-10、MMP11、MMP-12及MMP-13)而會選擇性抑制MMP-2及/或MMP-9者會被使用。能用於本發明的特別的MMP抑制劑的實例為AG-3340、RO 32-3555及RS 13-0830。

因此，本發明更進一步觀點就是化合物1之硫酸氫鹽與上列(i)-(ix)之抗腫瘤劑中任何一種的組合使用。一本發明更進一步的觀點係提供化合物1之硫酸氫鹽與上列(i)-(ix)之抗腫瘤劑中的一或多種的組合使用。一本發明更進一步的觀點係提供化合物1之硫酸氫鹽與上列(i)-(ix)之任何類型的抗腫瘤劑組合使用。

此處，用語〝組合〞的使用乃是指同時、分開或連續投藥。在一個本發明觀點中，〝組合〞意指同時投藥。在另一個本發明觀點中，〝組合〞意指分開投藥。在本發明更進一步觀點中，〝組合〞意指連續投藥。其中，投藥係為連續或分開者，其延遲投予第二成分之時間，不應喪失此組合效果之益處。

依據一本發明更進一步的觀點，乃是提供一種包含化合物1之硫酸氫鹽及一種選自上述(i)-(xi)的抗腫瘤劑之組合的套組。

依據一本發明更進一步的觀點，乃是提供一種套組，其包括：a)第一單位劑量形式的化合物1之硫酸氫鹽；b)一種選自上述(i)-(xi)的抗腫瘤劑為第二單位劑量形式；及c)作為包含該第一及第二劑量形式之容器裝置。

化合物1已被發現在下列試驗中具有活性。於大腸桿菌中表現N端具有6個His-標誌、構成性地活性的MEK1(2-393)，並且以傳統的方式(Ahn等人，Science 1994,265：966-970)將蛋白質純化。MEK1的活性被評估，其係藉由測量γ ³³P-ATP上之γ ³³P-phosphate併入N端His標誌之ERK2，此蛋白質乃是於大腸桿菌中表現並以傳統方法純化，而且是在MEK1存在的狀況下。此試驗乃是在96孔聚丙烯盤中進行。培養混合物(100微升)包含pH7.4之25mM之Hepes、10mM之氯化鎂、5mM之β-甘油磷酸鹽、100μM之釩酸鈉、5mM之DTT、5nM之MEK1及1μM之ERK2。抑制劑係懸浮於DMSO，而所有反應的進行，包括對照組，下在1%DMSO的最終濃度下進行。反應乃藉由添加10μM之ATP(伴隨0.5μCi之γ ³³P-ATP/孔)而起始，並且培養於周圍溫度中持續45分鐘。加入等體積之25%的TCA以終止反應並沉澱此蛋白質。沉澱的蛋白質以玻璃纖維B過濾盤獲取，而過量的標誌ATP則以Tomtec MACH III harvestor洗掉。在Packard Microscint 20以30μL/孔加入過濾盤前，可以先將過濾盤風乾，且該盤以Packard TopCount計數。在此試驗中，化合物1表現出的IC₅₀少於50微莫耳濃度。

實施例

為了闡釋本發明，接下來的實施例皆被包括。然而，需被了解的是這些實施例並不會侷限本發明並且僅是意指建議實施本發明的方法。所提供產率係用於所進行之實施例，並且極可能透過更進步研發而增加產率。¹H NMR光譜(400MHz)以TMS(0.00ppm)為參考值、¹³C NMR光譜(100MHz)以NMR溶劑(39.5ppm)為參考值及¹⁹F NMR光譜以三氯氟甲烷(0.00ppm)為參考值。FTIR光譜由Nicolet Magna 860 ESP FTIR光譜儀以不同方式獲得，包括來自於粉狀KBr中之此物質的2%w/w分散物，其係利用DRIFTS取樣技術，超過4,000-400公分^-1的中紅外線光譜區。

實施例1 化合物1之硫酸氫鹽的製備

加入硫酸(12.3毫升、0.226莫耳)至0-5℃之於2-丁酮(680毫升)及水(115毫升)中之6-(4-溴-2-氯-苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羥基-乙氧基)-醯胺(100克、0.206莫耳)(可如敘述於WO 03/077914的實施例10中獲得，該文獻可做為本發明參考資料，且描述如下)之攪拌懸浮液中，接著加入水(5毫升)並維持溫度在10℃或更低。將此攪拌混合物加熱至65℃並在過濾掉外來雜質前持續30分鐘。此過濾器以2-丁酮(85毫升)及水(15毫升)之混合物清洗。將此合併的濾液在加入2-丁酮(500毫升)前，先加熱至72℃並維持溫度於60-72℃間。產生的混合物在大氣壓力(大約蒸餾溫度為73-74℃)下進行蒸餾直到收集到500毫升的餾出物。

加入第二次等分部分之2-丁酮(500毫升)，並維持此混合物的溫度高於70℃。產生的混合物再次蒸餾直到收集到250毫升的餾出物。該混合物被冷卻至0-5℃達約1小時。將產生的漿液過濾，以2-丁酮(240毫升)清洗，並在減壓、50℃下乾燥，直到達到恆重，產生一灰白色結晶固體的6-(4-溴-2-氯-苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羥基-乙氧基)-醯胺硫酸氫鹽(103.5克、0.186莫耳、90%產率)。 ¹H-NMR(400MHz、D₆ DMSO)δ 3.58(2H、t、CH₂OH)、3.89(2H、t、CH₂ON)、3.99(3H、s、CH₃)、6.47(1H、dd、ArH)、7.29(1H、dd、ArH)、7.63(1H、d、ArH)、7.91(1H、s、ArH)、7.96(3H、br、ROH、NH、SOH)、8.10(1H、br、ArNH)、8.94(1H、s、NCHN)、11.79(1H、s、ONH)。¹³C NMR(100MHz、D₆ DMSO)δ 32.1(CH₃)、58.5(CH₂OH)、77.3(CH₂ON)、108.2(CH)、109.6(CBr)、115.8(CH)、120.6(CCl)、122.0(C)、125.0(CC=O)、129.4(C)、130.5(CH)、131.1(CH)、132.3(C)、140.6(C)、145.8(CF)、146.5(CH)、164.2(C=O)。

紅外線分析的結果顯示於圖2。光譜線的標定(spectral assignment)摘述於表1。

實施例1A 化合物1之硫酸氫鹽的製備

將硫酸(1.52毫升、27.86毫莫耳)加入於四氫呋喃(THF)(62毫升)及水(8毫升)之6-(4-溴-2-氯苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羥基乙氧基)-醯胺(10克、 0.0214莫耳)(可如敘述於WO 03/077914的實施例10中獲得，該文獻可做為本發明參考資料，且描述如下)之攪拌懸浮液中，此時溫度需維持於10℃或更低。在過濾掉任何外來雜質前，加熱攪拌混合物至65℃並持續30分鐘。然後加入THF(150毫升)至混合物中並維持溫度高於60℃。然後冷卻混合物至0-5℃達約2小時。過濾產生的漿液，以THF(30毫升)清洗並於50℃減壓乾燥，直到達到恆重，產生一灰白色結晶固體的6-(4-溴-2-氯苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羥基乙氧基)-醯胺硫酸氫鹽(9.81克、0.17莫耳、82%產率)。該產物與上面實施例1所產生者相同。

實施例1B 6-(4-溴-2-氯-苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羥基-乙氧基)-醯胺的製備

步驟A：2,3,4-三氟-5-硝基-苯甲酸：在容量3公升的三頸圓底燒瓶裝入125毫升的硫酸。加入發煙硝酸(8.4毫升、199毫莫耳)並緩慢攪拌此混合物。達90分鐘以上，將5克數份之2,3,4-三氟苯甲酸(25克、142毫莫耳)分批加入。攪拌此深棕黃色溶液60分鐘至反應完成。將反應混合物倒入1升的冰：水混合物中，並以二乙基醚萃取(3x600毫升)。將合併萃取物乾燥(MgSO₄)並在減壓下濃縮以產生一黃色固體。將此固體懸浮於己烷中並攪拌30分鐘，之後過濾產生29克(92%)的灰黃色固體的淨化產物：MS APCI(-)m/z 220(M-1)偵測。

步驟B：4-胺基-2,3-二氟-5-硝基苯甲酸：將氫氧化銨溶液(~30%於水)(35毫升、271毫莫耳)加至2,3,4-三氟-5-硝基- 苯甲酸(15克、67.8毫莫耳)的30毫升水溶液中並於0℃攪拌。當氫氧化銨加入完成後，將反應物加溫至室溫並攪拌之。2.5小時後，將反應混合物冷卻至0℃並小心加入濃鹽酸直到反應混合物酸鹼值達到0。以水(30毫升)稀釋反應混合物並以二乙基醚萃取之(3x50毫升)。乾燥(硫酸鎂)此合併的有機萃取物並減壓濃縮以得到14克(95%)所要的純的產物：MS APCI(-)m/z 217(M-1)偵測。

步驟C：4-胺基-2,3-二氟-5-硝基苯甲酸甲基酯：在氮氣、0℃下，將於己烷(6.88毫升、13.75毫莫耳)中之2M的四甲基矽烷(TMS)重氮甲烷之溶液加至4-胺基-2,3-二氟-5-硝基苯甲酸(2.00克、9.17毫莫耳)的25毫升4：1四氫呋喃(THF)：甲醇之懸浮液中。在上述加入完成後，加溫反應混合物至室溫。0.5小時後，小心加入醋酸以破壞過量的TMS重氮甲烷。然後，此反應在減壓下濃縮並且於真空中乾燥出1.95克所欲的純產物：MS APCI(-)m/z 231(M-1)偵測。

步驟D：4-胺基-3-氟-5-硝基-2-苯胺基-苯甲酸甲基酯：懸浮4-胺基-2,3-二氟-5-硝基苯甲酸甲基酯(23.48克、101.1毫莫耳)於二甲苯(125毫升)中並加入苯胺(92毫升、1011毫莫耳)。在125℃及氮氣下將此反應混合物攪拌16個小時。將該反應混合物冷卻至室溫且從溶液中沉澱出固體。以過濾收集此固體並以二甲苯清洗後再以二乙基醚清洗。得到22.22克(72.78毫莫耳)的黃色固體，其為所欲之純產物。該濾液在減壓上濃縮，於二氯甲烷中再溶解及透過以二氯甲烷洗提之矽膠塞沖洗。該所欲部分在減壓下濃縮以產生褐色固體，其以二乙基醚研制以產生5.47克(17.91毫莫耳)之黃色固體，其為所欲之純產物。該合併產物產率為27.69克(90%)。MS APCI(-)m/z 304(M-1)偵測。

步驟E：7-氟-6-苯胺基-3H-苯并咪唑-5-羧酸甲基酯：4-胺基-3-氟-5-硝基-2-苯胺基-苯甲酸甲基酯(16.70克、54.71毫莫耳)、甲酸(250毫升、6.63莫耳)及20% Pd(OH)₂/C(9.00克、16.91毫莫耳)之乙醇(250毫升)於氮氣下、40℃攪拌2小時，之後於95℃攪拌16小時。冷卻反應混合物至室溫並透過助濾劑過濾並以乙酸乙酯漂洗。濾液以減壓方式濃縮出一黃色固體。將此固體以二乙基醚研制，產生成13.47克(86%)所要之棕褐色的固體產物。MS APCI(+)M/Z 286(M+1)偵測；MS APCI(-)m/z 284(M-1)偵測。

步驟F：6-(4-溴-苯胺基)-7-氟-3H-苯并咪唑-5-羧酸甲基酯：將7-氟-6-苯胺基-3H-苯并咪唑-5-羧酸甲基酯(4.99克、17.51毫莫耳)溶於N,N-二甲基甲醯胺(275毫升)中。加入固體N-溴琥珀醯亞胺(3.15克、17.70毫莫耳)並且將此反應混合物於氮氣、室溫下攪拌。30分鐘後，加入飽和亞硫酸氫鈉水溶液淬滅。然後，將此反應混合物倒入分液漏斗並以水及乙酸乙酯稀釋之而使液相分層。水層以乙酸乙酯萃取之。此合併有機萃取物以水清洗三次後以鹽水清洗一次，然後乾燥(硫酸鈉)並在減壓下濃縮產生6.38克純的棕褐色固體之所欲產物。MS ESI(+)m/z 364，366(M+Br pattern)偵測。

步驟G：6-(4-溴-2-氯-苯胺基)-7-氟-3H-苯并咪唑-5-羧酸甲基酯：將6-(4-溴-苯胺基)-7-氟-3H-苯并咪唑-5-羧酸甲基酯(6.38克、17.51毫莫耳)溶於N,N-二甲基甲醯胺(275毫升)中。加入固體N-氯琥珀醯亞胺(2.36克、17.70毫莫耳)並且將此反應混合於氮氣、室溫下攪拌，直到反應完成(5-6天)。將飽和亞硫酸氫鈉水溶液加至此反應混合物中淬滅而成一懸浮液。此生成固體以過濾收集之，然後以水及二乙基醚清洗及在減壓下乾燥以產生6.07克(87%)的米黃色固體之所欲純產物。MS ESI(+)m/z 398，400(M+Br pattern)偵測。

步驟H：6-(4-溴-2-氯苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸甲基酯及6-(4-溴-2-氯苯胺基)-7-氟-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-羧酸甲基酯：將6-(4-溴-2-氯-苯胺基)-7-氟-3H-苯并咪唑-5-羧酸甲基酯(150毫克、0.38毫莫耳)、碘甲烷(28微升、0.45毫莫耳)及碳酸鉀(78毫克、0.56毫莫耳)於二甲基甲醯胺(1.5毫升)中的溶液於75℃攪拌1小時。此反應混合物以乙酸乙酯稀釋，然後以飽和碳酸鉀水溶液清洗兩次，然後以鹽水清洗及乾燥(硫酸鈉)。快速管柱色層分析(20：1二氯甲烷/乙酸乙酯)提供56毫克(36%)的較流動的白色固體的6-(4-溴-2-氯苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸甲基酯。¹⁹F NMR(376MHz、CD₃OD)-133.5(s)。MS APCI(+)m/z 412，414(M+,Br pattern)偵測。54毫克(35%)的白色固體6-(4-溴-2-氯苯胺基)-7-氟-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-羧酸甲基酯亦被分離出來。¹⁹F NMR(376MHz、CD₃OD)-139.9(s)。MS APCI(+)m/z 412，414(M+,Br pattern)偵測。

步驟I：6-(4-溴-2-氯-苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸：將6-(4-溴-2-氯-苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑 -5-羧酸甲基酯(56毫克，0.14毫莫耳)溶於2：1 THF/水(3毫升)中及加入氫氧化鈉(0.55毫升、1.0M水溶液、0.55毫莫耳)。攪拌兩小時後以旋轉蒸發減少四分之一此反應的起始體積並將殘餘物以水稀釋至50毫升。藉由加入1.0M HCl水溶液酸化此水溶液至酸鹼值2，然後以1：1四氫呋喃/乙酸乙酯萃取(3x)，乾燥(硫酸鈉)及在減壓下濃縮以產生43毫克(79%)的灰白色固體純羧酸。MS ESI(+)m/z 397，398(M+Br pattern)偵測。

步驟J：6-(4-溴-2-氯-苯胺基-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-乙烯氧基-乙氧基)醯胺：將6-(4-溴-2-氯-苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2.00克、5毫莫耳)、O-(2-乙烯氧基-乙基)-羥基胺(0.776克、7.5毫莫耳)、HOBt(0.88克、6.5毫莫耳)、三乙胺(1.61毫升、2.3毫莫耳)及EDC1(1.3克、6.5毫莫耳)溶於二甲基甲醯胺(52毫升)，且於室溫攪拌48小時。反應混合物以乙酸乙酯稀釋，以水洗(3x)、飽和碳酸鉀洗(2x)、飽和氯化銨洗(2x)、鹽水洗，乾燥(Na₂SO₄)及在減壓下濃縮產生灰白色固體。以二乙基醚研制該固體以產生2.18克(90%)灰白色固體之所欲產物。MS ESI(=)m/z 483，485(M+Br pattern)偵測。

步驟K：6-(4-溴-2-氯-苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羥基-乙氧基)醯胺：將鹽酸(14毫升、1.0M水溶液、14毫莫耳)加入6-(4-溴-2-氯-苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-乙烯氧基乙氧基)醯胺(2.18克、4.50毫莫耳)於乙醇(50毫升)中之懸浮液並且攪拌該混合物24小時。以旋轉蒸發以濃縮此反應混合物至乾燥並分開此固體於3：1乙酸乙酯/四氫呋喃及飽和碳酸鉀間。水相以3：1乙酸乙酯/四氫呋喃萃取(3x)，並乾燥(硫酸鈉)此合併有機物，及濃縮產生2.11克(100%)的6-(4-溴-2-氯苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羥基乙氧基)醯胺的灰白色固體。MS ESI(+)m/z 457，459(M+Br pattern)偵測。¹H NMR(400MHz、MeOH-d₄)δ 8.26(s,1H)、7.78(s,1H)、7.57(d,1H)、7.24(dd,1H)、6.40(dd,1H)、3.86(s,3H)、3.79(m,2H)、3.49(m,2H)。¹⁹F NMR(376MHz，MeOH-d₄)-133.68(s)。

實施例2 硫酸氫鹽之物理性質研究

實施例1產物可以下列測試決定其物理特性。

粉狀X光繞射(PXRD)

所有樣本皆以Bruker D5000繞射儀測試。X光粉末繞射光譜乃是由將結晶鹽樣本中裝置在Siemens單晶矽(single silicon crystal(SSC))晶圓黏片(wafer mount)上並利用載玻片之幫助展開此樣本成一薄層來測定。以每分轉數30旋轉此樣本(以改善計算統計)並藉由銅長細聚焦管所產生之X光照射，操作控制於40kV及40mA且波長為1.5406埃。準直的X光源穿過一V20自動可變分歧狹縫組(automatic variable divergence slit set)，並以一2毫米反散射狹縫(antiscatter slit)及0.2毫米偵測狹縫(detector slit)導引反射輻射。暴露此樣本每0.02度2-θ增加量1秒(連續掃瞄模式)在θ-θ模式的範圍2度至40度2-θ間。此運轉時間為31分41秒。此設備配備有一閃爍計數器以作為偵測器。控制及資料獲取乃是藉由Dell Optiplex 686 NT 4.0 Workstation以Diffract+軟體操作。

資料在範圍2-θ 2-40°間收集，於每4秒提高一次的2-θ 0.02°的增加量並分類於表2，伴隨由固定狹縫(fixed slit)的繞射儀測量衍生的相對強度。

掃描結果表示於圖1，其中上方灰線表示化合物1之硫酸氫鹽的XRPD，而下方黑線表示游離形式。一開始就最強的最強峰表示於表3。位於24.59°的峰則特別強。

X光粉末繞射之熟習該項技術者將了解峰之相對強渡可被例如，尺寸大於30微米之顆粒及非單一高寬比率所影響，其可影響樣本的分析。熟習該項技術者亦將了解反射的位置可被位於繞射儀之樣本的精確高度及繞射儀之校零所影響。樣本的表面平面亦可具有小影響。因此，所呈現之繞射圖數據並不被視為絕對值(參見Jenkins，R.& Snyder，R.L.，"Introduction to X-Ray Powder Diffractometry"，John Wiley & Sons，1996，為進一步訊息)。

實施例3 體內研究：在分散調配物中，鹽類對游離鹼的研究

於狗中進行研究，其係測量經禁食的狗投予150毫克於7.5毫升不同的分散調配物的游離鹼等價口服劑量，該分散調配物中所含化合物1係呈游離形式或硫酸氫鹽形式於藥學上可接受分散劑中。

給體重12-17公斤及2到6歲大的經禁食的米格魯犬(beagle dog)口服每三個劑量日150毫克的單一劑量。每劑量日係間隔一週。

所有調配物係臨時在分劑前製備，其係藉由10毫升可棄式注射器加7.5毫升適當的分散溶液至含有150毫克適當藥物形式的游離鹼等價物之管瓶，然後加蓋並震盪混合30 秒以形成一分散液。

此分散液利用可棄式注射器由管瓶中移出並藉由置入胃部的強飼管投予該動物藥物。藉由20毫升可棄式注射器加入15毫升水沖洗管瓶兩次(總沖洗體積=30毫升)，然後加蓋震盪5秒，利用可棄式注射器移出管瓶內沖洗液並藉由強飼管投予此沖洗液至動物中。

狗每日被餵予約400克的特殊飲食服務實驗餐A(Special Diet Services Laboratory Diet A)及無限制的水。於肝素鋰(lithium heparin)管中的全血(2毫升)由頸靜脈抽取，抽取時間分為給藥前立刻及給藥後0.5、1、2、3、4、5、6、8、12、18、24、36及48小時。血液以3000rpm離心15分鐘後將血漿移至血液收集管且該血漿儲藏於-20℃中直到要進行分析時。

分析血漿(50mcL)中化合物1之濃度。兩隻狗被排除分析，因其在服藥後沒多久就發生嘔吐。在口服藥物後的平均化合物1血漿濃度量變曲線表示於圖3中，其中以▲表示的線闡述一包含化合物1之硫酸氫鹽的調配物，而以×表示的線顯示出在相同調配物下化合物1游離鹼的結果。

茲顯示調配物的改變對暴露有相對小的影響力(結果未於此公開)。然而，當化合物1以硫酸氫鹽給藥時，產生一實質約4至8倍的暴露增加。

前述係被認為僅作為闡述本發明之原理。更進一步，因為許多修飾物及改變物對熟習該項技術者而言係容易地顯而易知，所以並非是要去限制本發明至如上述所顯示的明確結構及方法。因此，所有適當的修飾物及等價物可落於如以下申請專利範圍中所定義之本發明的範圍中。

當字彙〝包括(comprise)〞、〝包括(comprising)〞、〝包含(include)〞、〝包含(including)〞及〝包含(includes)〞用於本案說明書及接下來的申請專利範圍時，乃是意欲去詳細指明所陳述的特徵、整體、成分或步驟的呈現，但並非排除一或更多個特徵、整體、成分或步驟或其群組的呈現或增加。

伴隨的圖式(其併於此處且成為說明書之一部分)列舉說明本發明之非限制性的具體態樣，及與描述一起作為解釋本發明之原理。

圖1顯示化合物1硫酸氫鹽的XRPD。

圖2顯示利用DRIFTS取樣技術獲得化合物1的硫酸氫鹽的紅外線光譜。

圖3顯示在投予150毫克游離鹼等價口服分散劑量的化合物1(x)及硫酸氫鹽(▲)給禁食的狗後，化合物1血漿濃度程度之結果。

Claims

一種6-(4-溴-2-氯-苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羥基-乙氧基)-醯胺的硫酸氫鹽。
根據申請專利範圍第1項之6-(4-溴-2-氯-苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羥基-乙氧基)-醯胺的硫酸氫鹽，其係呈無水形式。
根據申請專利範圍第1項之6-(4-溴-2-氯-苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羥基-乙氧基)-醯胺的硫酸氫鹽，其係呈溶劑合物的形式。
根據申請專利範圍第1-3項中任一項之6-(4-溴-2-氯-苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羥基-乙氧基)-醯胺的硫酸氫鹽，其為結晶狀，且具有於約2-θ等於24.59°、20.97°處具有特定峰的X射線粉末衍射圖譜(X-ray powder diffraction pattern)。
根據申請專利範圍第4項之6-(4-溴-2-氯-苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羥基-乙氧基)-醯胺的硫酸氫鹽，其中該6-(4-溴-2-氯-苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羥基-乙氧基)-醯胺的硫酸氫鹽具有於約24.59°、20.97°、23.99°、27.65°、12.24°、23.49°、24.30°、17.02°及25.91°處具有特定峰的X射線粉末衍射圖譜。
根據申請專利範圍第5項之6-(4-溴-2-氯-苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羥基-乙氧基)-醯胺的硫酸氫鹽，其中該6-(4-溴-2-氯-苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羥基-乙氧基)-醯胺的硫酸氫鹽具有於約2-θ 等於24.59°、20.97°、23.99°、27.65°、12.24°、23.49°、24.30°、17.02°、25.91°及22.50°處具有特定峰的X射線粉末衍射圖譜。
根據申請專利範圍第1項之6-(4-溴-2-氯-苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羥基-乙氧基)-醯胺的硫酸氫鹽，其具有與圖1顯示的X射線粉末衍射圖譜實質上相同的X射線粉末衍射圖譜。
根據申請專利範圍第1或2項之6-(4-溴-2-氯-苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羥基-乙氧基)-醯胺的硫酸氫鹽，其係呈非晶形式。
一種製備根據申請專利範圍第1至8項中任一項之6-(4-溴-2-氯-苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羥基-乙氧基)-醯胺的硫酸氫鹽之方法，該方法包括(i)在有機液體中，將6-(4-溴-2-氯-苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羥基-乙氧基)-醯胺的漿液與至少一化學計量之硫酸與水反應；(ii)從生成溶液中回收該鹽；及(iii)之後，若意欲或需要，形成其溶劑合物。
根據申請專利範圍第9項之方法，其中在步驟(i)中加入的水量限於必須能確保鹽形成的量。
根據申請專利範圍第9或10項之方法，其中步驟(i)係在溫度自40-80℃下進行。
根據申請專利範圍第9或10項之方法，其中有機液體為C_1-6烷基酮。
根據申請專利範圍第9或10項之方法，其中硫酸氫鹽係在步驟(ii)中，藉由冷卻反應混合物，選擇性地添加進一步的有機液體來回收，以使硫酸氫鹽沉澱。
一種根據申請專利範圍第1、2或5至8項中任一項之6-(4-溴-2-氯-苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羥基-乙氧基)-醯胺的硫酸氫鹽之用途，其係用於製備用於治療透過MEK所媒介之疾病狀態的藥劑。
一種包含根據申請專利範圍第1、2或5至8項中任一項之6-(4-溴-2-氯-苯胺基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羥基-乙氧基)-醯胺的硫酸氫鹽的組成物，其係用於治療溫血哺乳動物中透過MEK所媒介之疾病狀態。