KR101361460B1

KR101361460B1 - 신규의 하이드로겐 설페이트 염

Info

Publication number: KR101361460B1
Application number: KR1020087017543A
Authority: KR
Inventors: 크리스토퍼 존 스콰이어; 존 데마테이; 로날드 존 로버츠; 쭝-순 추앙; 고르큰 샤르마-싱; 모하메드 페르베즈; 제임스 가이어 포드; 리차드 안토니 스토리; 파울 알프레드 디킨슨
Original assignee: 어레이 바이오파마 인크.; 아스트라제네카 아베
Priority date: 2005-12-21
Filing date: 2006-12-12
Publication date: 2014-02-10
Also published as: UA93531C2; EP1968948A2; TW200800915A; NL301139I1; CN101360718A; HK1124043A1; EP1968948A4; MY157733A; NL301139I2; AR058696A1; LTC1968948I2; IL192224A; HUS2100046I1; CY1114303T1; NZ569792A; ES2421746T3; BRPI0620091A2; DK1968948T3; JP2009521487A; MX2008008298A

Abstract

본 발명은 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염 및 그의 용매화물, 결정성 형태 및 무정형 형태, 및 그들의 제조방법에 관한 것이다.

6-(4-브로모-2-클로로-페닐아미노)-7-플루오로-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-카복실산 (2-하이드록시-에톡시)-아미드, 하이드로겐 설페이트 염, 증식성 질병상태.

Description

신규의 하이드로겐 설페이트 염{NOVEL HYDROGEN SULFATE SALT}

관련된 출원

본 출원은 본 명세서에 온전히 참고로 포함되어 있는 2005년 12월 21일자 미국 가출원 제 60/752,781 호를 우선권으로 주장한다.

본 발명은 신규의 염, 더욱 특히는 포유동물에서 암과 같은 증식성 질병상태의 치료 및/또는 예방에 유용한 MEK 억제제인 6-(4-브로모-2-클로로-페닐아미노)-7-플루오로-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-카복실산 (2-하이드록시-에톡시)-아미드 (이하에서는 "화합물 1"이라 칭함)의 신규한 염에 관한 것이다. 더욱 특히, 본 발명은 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염 및 상기 염의 제조방법에 관한 것이다. 또한, 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염을 함유하는 약제학적 조성물, 및 인간 또는 동물체에서 암과 같은 증식성 질병상태를 치료 및/또는 예방하는 의약의 제조에 있어서의 염의 용도, 및 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염의 치료학적 유효량을 투여함으로써 암과 같은 증식성 질병상태를 치료하는 방법이 제공된다.

성장인자 수용체 및 단백질 키나제를 통한 세포 신호전달 (signaling)은 세포 성장, 증식 및 분화의 중요한 조절자이다. 정상적인 세포 성장에서, 수용체 활 성화를 통한 성장인자 (즉, PDGF 또는 EF 등)는 MAP 키나제 경로를 활성화시킨다. 정상적이고 제어되지 않은 세포 성장에 포함되는 가장 중요하고 가장 잘 이해된 MAP 키나제 경로 중의 하나는 Ras/Raf 키나제 경로이다. 활성 GTP-결합된 Ras는 Raf 키나제의 활성화 및 간접적인 인산화를 야기한다. 그 후, Raf는 두 개의 세린 잔기 (MEK1의 경우에 S218 및 S222 및 MEK2의 경우에 S222 및 S226) 상에서 MEK1 및 2를 인산화시킨다 (Ahn et al., Methods in Enzymology , 2001, 332:417-431). 활성화된 MEK는 그 후에 그의 유일한 공지된 기질인 MAP 키나제 ERK1 및 2를 인산화시킨다. MEK에 의한 ERK 인산화는 ERK1의 경우에는 Y204 및 T202 상에서, ERK2의 경우에는 Y185 및 T183 상에서 일어난다 (Ahn et al., Methods in Enzymology , 2001, 332:417-431). 인산화된 ERK는 이량체화된 다음에, 핵으로 전좌하여 여기에서 축적된다 (Khokhlatchev et al., Cell 1998 93:605-615). 핵에서, ERK는 핵 수송, 신호 변환, DNA 복구, 뉴클레오좀 조립 및 전좌, 및 mRNA 프로세싱 (processing) 및 번역을 포함하는 (단, 이들로 제한되지는 않는다) 몇 개의 중요한 세포 기능과 관련된다 (Ahn et al., Molecular Cell , 2000, 6:1343-1354). 전체적으로, 성장인자에 의한 세포의 처리는 증식, 및 일부의 경우에 분화를 야기하는 ERK1 및 2의 활성화를 유도한다 (Lewis et al., Adv . Cancer Res . 1998, 74:49139).

증식성 질병에 있어서, ERK 키나제 경로에 관여하는 성장인자 수용체, 하류 신호전달 단백질, 또는 단백질 키나제의 유전적 돌연변이 및/또는 과발현은 조절되지 않는 세포 증식 및, 결국에는 종양 형성을 유도한다. 예를 들어, 일부의 암은 성장인자의 연속적인 생산에 기인한 이 경로의 연속적 활성화를 야기하는 돌연변이를 함유한다. 그 밖의 다른 돌연변이는 활성화된 GTP-결합된 Ras 복합체의 불활성화에 있어서 결함을 유도하여 다시 MAP 키나제 경로의 활성화를 야기할 수 있다. Ras의 돌연변이된 종양원성 형태는 결장암의 50％ 및 췌장암의 >90％뿐만 아니라 다수의 다른 유형의 암에서 발견된다 (Kohl et al., Science, 1993, 260:1834-1837). 최근에, bRaf 돌연변이가 악성 흑색종의 60％ 이상에서 확인되었다 (Davies, H., et al., Nature 2002, 417:949-954). bRaf에서의 이들 돌연변이는 구성적으로 활성인 MAP 키나제 캐스케이드 (cascade)를 제공한다. 원발성 종양 샘플 및 세포주의 연구는 또한 췌장, 결장, 폐, 난소 및 신장의 암에서 MAP 키나제 경로의 구성적 또는 과활성화를 밝혀내었다 (Hoshino, R., et al., Oncogene 1999, 18:813-822). 따라서, 유전적 돌연변이로 인한 과활성 MAP 키나제 경로와 암 사이에는 강력한 상관관계가 있다.

MAP 키나제 캐스케이드의 구성적 또는 과활성화는 세포 증식 및 분화에 있어서 중추적인 역할을 하기 때문에, 이 경로의 억제는 과증식성 질병에 유익한 것으로 믿어진다. MEK는 Ras 및 Raf의 하류에 위치하기 때문에 이것은 이 경로에서 주요 작용자이다. 추가로, 이것은 매력적인 치료학적 표적인데, 이는 MEK 인산화를 위한 유일한 공지된 기질이 MAP 키나제, ERK1 및 2이기 때문이다. MEK의 억제는 몇 가지의 연구에서 잠재적인 치료학적 이점을 갖는 것으로 나타났다. 예를 들어, 소분자 MEK 억제제는 누드 마우스 이종이식편에서 인간 종양성장을 억제하고 (Sebolt-Leopold et al., Nature - Medicine 1999, 5(7):810-816; Trachet et al., AACR April 6-10, 2002, Poster #5426; Tecle, H., IBC 2^nd International Conference of Protein Kinases, September 9-10, 2002), 동물에게서 정적 이질통을 차단하며 (WO 01/05390), 급성 골수성 백혈병 세포의 성장을 억제하는 (Milella et al., J. Clin . Invest . 2001, 108(6):851-859) 것으로 나타났다

MEK의 소분자 억제제는 공개되어 있다. 적어도 13 개의 특허출원이 지난 몇 년 동안에 출현하였다: US 5,525,625; WO 98/43960; WO 99/01421; WO 99/01426; WO 00/41505; WO 00/42002; WO 00/42003; WO 00/41994; WO 00/42022; WO 00/42029; WO 00/68201; WO 01/68619; 및 WO 02/06213.

MEK의 억제제는 또한 WO 03/077914에 기술되어 있다. 6-(4-브로모-2-클로로-페닐아미노)-7-플루오로-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-카복실산 (2-하이드록시-에톡시)-아미드 또는 "화합물 1"은 WO 03/077914에 예시되어 있으며, 이하의 구조식을 갖는다:

화합물 1은 MEK에 대한 억제활성을 가지며, 따라서 암과 같은 과증식성 질병의 치료에 유용한 것으로 나타났다.

WO 03/077914는 일반적인 관점에서 여기에 기술된 화합물의 특정한 약제학적으로 허용되는 염을 기술하고 있다. 구체적으로, WO 03/077914에는 충분하게 염기 성인 부분을 갖는 여기에 기술된 화합물의 약제학적으로 허용되는 염은 약제학적으로 허용되는 음이온을 함유하는 산부가염을 형성할 수 있다고 언급되어 있으며, 이러한 음이온의 범위가 기술되어 있다. 유사하게, 산성 부분을 갖는 화합물의 적합한 염은 화합물을 염기성 화합물, 특히 무기 염기로 처리함으로써 형성된다.

의약에서 사용되는 약제학적으로 활성인 화합물의 형태는 적합하게는 합리적인 취급특성을 제공하고, 가공되고 제제화될 수 있는 것이다. 그러나, 정제의 용해율 및 활성성분의 생체이용율과 같은 최종 제제의 생물학적 특성이 최적화되도록 하는 것이 또한 필수적이며, 이들 다양한 모든 필요조건을 가장 잘 충족시키는 특정의 형태를 선택하는데 있어서는 종종 절충이 이루어져야 한다. 그러나, 일부의 경우에, 염은 쉽게 형성되지 않고/않거나, 아마도 낮은 pKa 값에 기인하여 안정하지 않다. pKa 값은 산 및 염기의 강도, 즉 산이 양자를 잃거나 염기에 양자가 부가되는 경향을 표현한다 (Bronsted J.N., Rec . Trav. Chim. 1923 47:718). 이것은 특히 화합물 1의 경우에 해당한다.

발명의 요약

본 발명은 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염 (1:1 약물:H₂SO₄) 및 그의 다양한 형태 (이들은 모두 본 발명의 범주 내에 포함된다)를 제공한다. 염은 다양한 형태로 존재할 수 있으며, 이들은 모두 본 발명의 범주 내에 포함된다. 이들 형태에는 무수물 형태뿐만 아니라 용매화물이 포함된다. 추가의 형태는 용매화물을 탈용매화시킴으로써 생산될 수 있다. 특정의 실시양태에서, 염은 무수물 형태이다.

추가의 관점에서, 본 발명은 과증식성 질병 또는 상태를 치료하기 위한 의약으로서 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염을 사용하는 방법을 제공한다.

본 발명의 추가의 관점은 과증식성 질병 또는 상태의 치료 또는 예방을 위한 의약의 제조에 있어서의 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염의 용도이다.

본 발명의 추가의 이점 및 신규의 특징은 이하의 상세한 설명에 부분적으로 언급되어 있으며, 부분적으로는 이하의 명세서를 검토함으로써 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 명백하게 되거나, 본 발명을 실시함으로써 터득될 수 있다. 본 발명의 이점은 특히 첨부된 특허청구범위에 지적된 수단, 조합, 조성물 및 방법을 이용함으로써 실현되고 달성될 수 있다.

본 명세서에 포함되고 명세서의 일부분을 형성하는 첨부된 도면은 본 발명의 비-제한적인 실시양태를 설명한 것이며, 상세한 설명과 함께 본 발명의 원리를 설명하는 역할을 한다.

도면에서,

도 1은 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염의 XPRD를 나타내며;

도 2는 DRIFTS 샘플링 기술을 사용하여 수득된 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염의 적외선 스펙트럼을 나타내고;

도 3은 단식시킨 개에게 화합물 1 (×) 및 하이드로겐 설페이트 염 (▲)의 150 ㎎ 유리 염기에 상응하는 용량의 경구용 분산액을 투여한 후에 화합물 1의 혈장농도 수준의 결과를 나타낸 것이다.

이제는 본 발명의 특정한 실시양태에 대해서 상세히 언급할 것이며, 그의 예는 첨부된 구조 및 제제에서 설명된다. 본 발명은 열거된 실시양태와 함께 기술될 것이지만, 이들은 본 발명을 이들 실시양태로 제한하고자 하는 것은 아님이 이해될 것이다. 그와는 반대로, 본 발명은 특허청구범위에 의해서 정의되는 바와 같은 본 발명의 범위 내에 포함될 수 있는 모든 대안, 변형 및 등가물을 포함하고자 한다. 본 기술분야에서 숙련된 전문가는 본 발명을 실시하는데 사용될 수 있는, 본 명세서에 기술된 것과 유사하거나 동등한 모든 방법 및 물질을 인식할 것이다. 본 발명은 어떤 식으로든 기술된 방법 및 물질로 제한되지는 않는다. 포함된 문헌, 특허 및 유사한 자료 중의 하나 또는 그 이상이 정의된 용어, 용어 사용, 설명된 기술 등을 비롯하여 (단, 이들로 제한되지는 않는다) 본 출원과 상이하거나 모순되는 경우에, 본 출원에 의해 규정된다.

본 발명은 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염 (1:1 약물:H₂SO₄) 및 그의 다양한 형태 (이들은 모두 본 발명의 범주 내에 포함된다)를 제공한다. 염은 다양한 형태로 존재할 수 있으며, 이들은 모두 본 발명의 범주 내에 포함된다. 이들 형태에는 무수물 형태뿐만 아니라 용매화물이 포함된다. 추가의 형태는 용매화물을 탈용매화시킴으로써 생산될 수 있다. 특정의 실시양태에서, 염은 화합물 1의 무수 하이드로겐 설페이트 염이다. 추가로, 본 발명은 의약으로 사용하는데 특히 적합하도록 만드는 독특한 물리적 및 약제학적 특성을 나타내는 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염을 제공한다.

특정의 실시양태에서, 화합물 1의 염은 결정성이다. 결정성 염은 제조의 관점에서 취급 특성, 특히 그들의 정적 및 유동 특성의 면에서 유리 염기보다 더 우수한 것으로 확인되었다. 공정 불순물이 분리되고 염은 일반적으로 유리 염기보다 더 쉽게 분리될 수 있기 때문에, 염의 형성은 정제의 수단을 제공할 수 있다.

본 발명의 한가지 실시양태에서, 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염은 놀랍게도 화합물 1의 유리 염기 및 화합물 1의 특정한 다른 염 형태와 비교하여 개선된 약제학적 특성을 갖는 것으로 확인된 결정성 염이다. 특히, 이러한 결정성 염의 용해율뿐만 아니라 그의 생체이용율은 이하의 실시예에서 나타낸 바와 같이 유리 염기 및 다른 염에 비해서 특히 높은 것으로 확인되었다. 유리 염기에 비해서 증진된 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염의 생체이용율은 투여를 위해서 사용된 제제와는 무관한 것으로 나타났다. 유리 염기 및 하이드로겐 설페이트 형태의 생체이용율은 본 명세서에서 동일한 분산액 제제로 투약하는 경우를 비교하였지만, 생체이용율에서의 유사한 차이는 또한 간단한 정제 제제의 경우에도 관찰되었다.

본 발명이 결정성 염인 화합물 1의 염에 관한 것으로 언급되는 경우에, 결정화도는 편리하게는 약 60％ 이상, 더욱 편리하게는 약 80％ 이상, 바람직하게는 약 90％ 이상, 더욱 바람직하게는 약 95％ 이상이다. 가장 바람직하게는, 결정화도는 약 98％ 이상이다.

화합물 1의 유리 염기는 BCS 클래스 (Class) 4 화합물로 분류되고 있기 때문에, 하이드로겐 설페이트 염에 의해서 제공되는 증진된 생체이용율의 정도는 놀라운 것이며, 특히 유용하다. BCS 클래스 4 화합물은 통상적으로 낮은 용해율 및 투과성 둘 다에 기인하여 낮은 생체이용율을 가지며, 흡수에 대한 투과성의 제한은 이러한 염이 일반적으로 흡수에 대해서 실질적인 영향을 미치는 것으로 예상되지 않을 것임을 의미한다 (참조예: Dressman et al. (2001) Pharm Tech . July: 68).

화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염의 적합한 용매화물은 광범위한 용매, 특히 테트라하이드로푸란 (THF), 아세토니트릴 (ACN), 에탄올 (EtOH) 및 메탄올 (MeOH)과 같은 유기용매로부터 형성된다. 적합한 유기용매에는 C₁ _-6 알킬 에스테르와 같은 에스테르, 예를 들어, 에틸 아세테이트, 및 C₁ _-6 알킬 케톤과 같은 케톤, 예를 들어, 메틸 에틸 케톤 (2-부타논)이 포함된다.

염의 제조는 화합물 1의 슬러리를 유기용매 및 물 중에서 황산과 반응시킴으로써 수행될 수 있다. 1:1 염의 제조를 위해서는 1 당량의 황산이 사용된다. 따라서, 추가의 관점에서 본 발명은

(i) 유기 액체 및 물 중의 화합물 1의 슬러리를 약 1 당량의 황산과 반응시키는 단계;

(ii) 생성된 용액으로부터 염을 회수하는 단계;

(iii) 그 후에, 경우에 따라 또는 필요하다면, 그의 용매화물을 형성시키는 단계를 포함하는, 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염을 제조하는 방법을 제공한다.

화합물 1에 대한 황산의 양의 몰비는 적합하게는 1.00:1 내지 2:1의 범위, 예를 들어, 1.05:1 내지 1.15:1의 범위이다. 사용되는 황산은 적합하게는 진한 황산의 형태이다. 특정한 실시양태에서, 화합물 1에 대한 황산의 몰비는 1.10:1.0이다.

적합하게는 단계 (i)에 첨가된 물의 양은 염이 형성되는 것을 보장하는데 필요한 양으로 제한된다. 사용되는 정확한 양은 용매의 독특한 성질, 황산의 농도 등에 따라서 좌우될 것이지만, 일반적으로 물은 존재하는 전체 액체의 20％ v/v 미만, 예를 들어, 13-17％ v/v의 양으로 존재할 수 있다.

특정한 실시양태에서, 단계 (i)에서 사용된 유기용매는 2-부타논 (메틸 에틸 케톤)이며, 물은 액체 용적의 약 15％이고, 화합물 1에 대비하여 사용된 액체의 총량은 화합물 1 그램당, 약 8 ㎖이다.

적합하게는, 단계 (i)에서 황산의 첨가는 조절된 방식으로, 예를 들어, 10℃ 이하의 온도에서 수행되며, 그 후에 단계 (i)의 나머지는 상승된 온도에서, 예를 들어, 30-90℃, 추가의 예로는 55-75℃ 범위, 및 추가의 예로 약 65℃의 온도에서 수행된다.

적합한 유기 액체에는 화합물 1 및 그의 염이 조금 용해되는 유기용매가 포함된다. 본 명세서에서 사용된 것으로, 표현 "조금 용해"는 용질의 그램당, 100 ㎖ 미만의 용매, 예를 들어, 용질의 그램당, 30 내지 100 ㎖의 용매인 용해도를 갖는 것을 의미한다. 이들 용매에는 알킬 케톤, 예를 들어, 2-부타논과 같은 C₁ _-6 알킬 케톤, C₁ _-6 알콜과 같은 알콜, 예를 들어, 메탄올 또는 에탄올, 및 C₁ _-6 알킬 에스테르와 같은 에스테르, 예를 들어, 에틸 아세테이트가 포함된다. 한가지 실시양태에서, 유기용매는 메틸 에틸 케톤 (2-부타논)이다.

적합하게는, 반응 혼합물은 단계 (i)과 (ii) 사이에서 여과하여 어떤 외인성 물질이라도 제거한다. 잔류물은 임의로, 예를 들어, 유기 액체와 물의 혼합물로 세척하며, 목적하는 염은 임의로 세척액과 혼합될 수 있는 여액으로부터 결정화된다.

특정의 실시양태에서, 하이드로겐 설페이트 염은 단계 (ii)에서, 추가의 유기 액체를 임의로 첨가하여 반응 혼합물을 냉각시켜 하이드로겐 설페이트 염을 침전시킴으로써 회수된다. 추가의 유기 액체는 단계 (i)에서 사용된 것과 동일한 유기 액체일 수 있거나, 이것은 상이한 유기 액체일 수 있지만, 단 이것은 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염에 대한 역용매 (anti-solvent)로서 작용하여야 한다. 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염의 결정과 용액을 접종하여 침전과정을 도와줄 수 있다.

한가지 실시양태에서는, 냉각시키기 전에 여액을 우선 증류단계에 적용하여 물을 제거하고, 염이 허용되는 수율로 회수되도록 보장한다. 특정한 실시양태에서, 용매는 2-부타논이고, 여액은 대기압에서 증류한다.

냉각시, 염은 생성된 슬러리로부터 예를 들어, 여과에 의해서 회수될 수 있다. 그 후에, 회수된 물질은 항량이 수득될 때까지 예를 들어, 상승된 온도에서, 예를 들어, 40-60℃, 및 또 다른 예로서 약 50℃에서 건조시킬 수 있다. 생성물이 메탄올과 같은 유기 액체에 의한 용매화물인 경우에, 이것은 경우에 따라 이 시점에서 가열하여 탈용매화시킬 수 있다.

하이드로겐 설페이트 염의 물리적 특성을 조사하였으며, 실시예에서 더 기술한다.

본 발명은 또한, 하나 또는 그 이상의 원자가 일반적으로 천연에 존재하는 원자 질량 또는 질량수와는 상이한 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자에 의해서 치환된 것을 제외하고는 본 발명에 언급된 것과 동일한 동위원소-표지된 화합물을 포함한다. 본 발명의 화합물 내에 혼입될 수 있는 동위원소의 예로는 각각 ²H, ³H, ¹³C, ¹⁴C, ¹⁵N, ¹⁸O, ¹⁷O, ³¹P, ³²P, ³⁵S, ¹⁸F 및 ³⁶Cl과 같은 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 황, 불소 및 염소의 동위원소가 포함된다. 상기 언급한 동위원소 및/또는 다른 원자의 다른 동위원소를 함유하는 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염 및 그의 다형체는 본 발명의 범주 내에 포함된다. 본 발명의 특정한 동위원소-표지된 화합물, 예를 들어, ³H 및 ¹⁴C와 같은 방사성 동위원소가 혼입된 화합물은 약물 및/또는 기질 조직 분포시험에서 유용하다. 삼중수소, 즉 ³H 및 탄소-14, 즉 ¹⁴C가 그들의 제조의 용이성 및 검출가능성으로 인하여 특히 광범위하게 사용된다. 추가로 중수소, 즉 ²H와 같이 더 무거운 동위원소에 의한 치환은 더 큰 대사안정성, 예를 들어, 증가된 생체내 반감기 또는 감소된 투약 필요성으로 인하여 특정의 치료학적 이점을 제공할 수 있으며, 따라서 일부의 특정한 환경에서 이용될 수 있다. 본 발명의 동위원소 표지된 염은 일반적으로, WO 03/077914에 기술된 공정을 수행함으로써 제조 중에 비-동위원소 표지된 시약을 쉽게 이용할 수 있는 동위원소 표지된 시약으로 치환시키거나, 경우에 따라, 염의 제조에 동위원소 표지된 황산을 사용하여 제조될 수 있다.

조성물은 경구 투여 (예를 들어, 정제, 로젠지, 경질 또는 연질 캅셀제, 에멀젼, 분산성 분말 또는 과립, 시럽, 엘릭서 또는 오일성 또는 즉석에서 제조된 수성 현탁액으로서), 흡입에 의한 투여 (예를 들어, 미세하게 분할된 분말 또는 액체 에어로졸로서), 취입에 의한 투여 (예를 들어, 미세하게 분할된 분말로서), 비경구적 주사 (예를 들어, 정맥내, 피하, 근육내, 혈관내, 또는 주입 투약을 위한 멸균 용액, 현탁액 또는 에멀젼으로서), 국소 투여 (예를 들어, 크림, 연고, 겔, 오일성 용액 또는 현탁액 또는 즉석에서 제조된 수성 현탁액으로서), 또는 직장 투여 (예를 들어, 좌제로서)에 적합한 형태일 수 있다. 한가지 실시양태에서, 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염은 경구적으로 투여된다. 일반적으로, 상기 조성물은 통상적인 부형제를 사용하여 통상적인 방식으로 제조될 수 있다.

투여된 활성 화합물의 양은 처리될 대상체, 질환 또는 상태의 중증도, 투여율, 화합물의 성질, 및 처방하는 의사의 판단에 따라서 좌우될 수 있다. 그러나, 유효 투약량은 단일 또는 분할 용량으로 1일에 체중 ㎏당, 약 0.01 내지 약 100 ㎎, 바람직하게는 약 1 내지 약 35 ㎎/㎏/일의 범위이다. 70 ㎏ 인간의 경우에, 이것은 약 0.7 내지 7000 ㎎/일, 바람직하게는 약 70 내지 약 2500 ㎎/일에 해당할 수 있다. 일부의 경우에는 상기 언급된 범위의 하한선 이하의 투약량 수준이 적절한 것 이상일 수 있는 한편, 다른 경우에는 어떤 유해한 부작용도 야기하지 않으면서 더 대용량이 사용될 수 있지만, 이러한 대용량은 우선 하루 전체에 걸쳐서 투여하기 위해서 몇 개의 소용량으로 분할하여야 한다. 정제 또는 캅셀제와 같은 단위 투약형은 일반적으로, 예를 들어, 1-1000 ㎎의 활성성분, 바람직하게는 5-420 ㎎의 활성성분을 함유할 수 있다. 바람직하게는, 0.03-6 ㎎/㎏ 범위의 1일 용량이 사용된다.

본 발명의 추가의 관점에 따르면, 치료법에 의해서 인간 또는 동물체를 치료 또는 예방하는 방법에서 사용하기 위한, 본 명세서에 정의된 바와 같은 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염이 제공된다. 본 발명의 추가의 특징은 의약으로 사용하기 위한, 본 명세서에 정의된 바와 같은 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염이다. 추가의 관점에서, 본 발명은 인간과 같은 온혈 포유동물에게서 MEK를 통해서 매개된 질병상태, 특히 암과 같은 증식성 질환 또는 비정상적인 세포 성장을 치료하기 위한 의약으로서 사용하기 위한, 본 명세서에 정의된 바와 같은 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염을 제공한다. 따라서, 본 발명의 추가의 관점은 인간과 같은 온혈 포유동물에게서 MEK를 통해서 매개된 질병상태, 특히 암과 같은 증식성 질환 또는 비정상적인 세포 성장의 치료에 사용하기 위한 의약을 제조하는데 있어서의, 본 명세서에 정의된 바와 같은 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염의 용도를 제공한다.

본 발명의 추가의 특징에 따르면, MEK를 통해서 매개된 질병상태, 특히 암과 같은 증식성 질환 또는 비정상적인 세포 성장의 치료를 필요로 하는 인간과 같은 온혈 포유동물에게 유효량의 본 명세서에서 정의된 바와 같은 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염 또는 본 명세서에서 정의된 바와 같은 약제학적 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 포유동물에게서 MEK를 통해서 매개된 질병상태, 특히 암과 같은 증식성 질환 또는 비정상적인 세포 성장을 치료하는 방법이 제공된다.

본 발명의 염 또는 조성물을 사용하여 치료될 수 있는 증식성 질환의 특정한 예로는 포유동물에서의 과증식성 질환이 포함된다. 특정한 암은 뇌, 폐, 편평세포, 방광, 위, 췌장, 유방, 머리, 목, 신성, 신장, 난소, 전립선, 결장직장, 식도, 고환, 부인과적 또는 갑상선 암이다.

그러나, 본 발명의 화합물 및 조성물은 또한 피부 (예를 들어, 건선), 재발협착증 또는 전립선 (예를 들어, 양성 전립선 비대증 (BPH))의 양성 과형성과 같은 비-암성 과증식성 질환의 치료에도 사용될 수 있다.

본 발명의 화합물 또는 조성물을 사용하여 치료될 수 있는 MEK 매개된 질병의 그 밖의 다른 예에는 췌장염 또는 신장 질병 (증식성 사구체신염 및 당뇨병-유도된 신성 질병) 또는 포유동물에서의 통증의 치료가 포함된다.

화합물 및 조성물은 또한, 포유동물에게서 배아세포 이식의 예방을 위해서, 또는 포유동물에게서 맥관형성 또는 혈관형성과 연관된 질병을 치료하기 위해서도 사용될 수 있다. 이러한 질병에는 종양 혈관형성, 류마티스성 관절염과 같은 만성 염증성 질병, 아테롬성 경화증, 염증성 장질환, 건선, 습진 및 경피증과 같은 피부 질병, 당뇨병, 당뇨병성 망막증, 미숙아 망막증, 노화-관련된 황반변성, 혈관종, 신경교종, 흑색종, 카포시 육종 및 난소, 유방, 폐, 췌장, 전립선, 결장 및 유표피종 암이 포함될 수 있다.

용어 "비정상적인 세포 성장" 및 "과증식성 질환"은 본 출원에서 상호교환적으로 사용되며, 정상적인 조절기전과는 무관한 (예를 들어, 접촉억제의 상실) 세포 성장을 나타낸다. 이것은 예를 들어, 다음의 세포들의 비정상적인 성장을 포함한다: (1) 돌연변이된 타이로신 키나제를 발현시키거나 수용체 타이로신 키나제를 과발현시킴으로써 증식하는 종양세포 (종양); (2) 비정상적인 타이로신 키나제 활성화가 나타나는 다른 증식성 질병의 양성 및 악성 세포; (3) 수용체 타이로신 키나제에 의해서 증식하는 모든 종양; (4) 비정상적인 세린/트레오닌 키나제 활성화에 의해서 증식하는 모든 종양; 및 (5) 비정상적인 세린/트레오닌 키나제 활성화가 나타나는 다른 증식성 질병의 양성 및 악성 세포.

본 명세서에서 사용된 것으로, 용어 "치료하는"은 다른 식으로 언급되지 않는 한, 이러한 용어가 적용되는 질환 또는 상태, 또는 이러한 질환 또는 상태의 하나 또는 그 이상의 증상을 반전시키거나, 완화시키거나, 진행을 억제하거나, 예방하는 것을 의미한다. 본 명세서에서 사용된 것으로, 용어 "치료"는 다른 식으로 언급되지 않는 한, 바로 위에서 "치료하는"을 정의한 바와 같이 치료하는 작용을 의미한다.

따라서, 본 발명의 화합물 또는 조성물로 치료될 수 있는 환자는 예를 들어, 건선, 재발협착증, 아테롬성 경화증, BPH, 폐암, 소세포 폐암, 골암, CMML, 췌장암, 결장직장암, 피부암, 두경부암, 흑색종 (특히, 피부 또는 안내 흑색종), 자궁암, 난소암, 직장암, 항문 부분의 암, 위암, 결장암, 유방암, 고환암, 부인과적 종양 (예를 들어, 자궁 육종, 나팔관의 암, 자궁내막암, 경부암, 질암 또는 외음암), 난소암, 다발성 골수종, 간세포암, 호지킨병, 식도암, 소장암, 내분비계의 암 (예를 들어, 갑상선, 부갑상선 또는 부신의 암), 연조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 만성 또는 급성 백혈병, 특히 급성 골수성 백혈병, 소아의 충실성 종양, 림프구성 림프종, 방광암, 신장 또는 요관의 암 (예를 들어, 신세포암, 신우암), 또는 중추신경계의 신생물 (예를 들어, 원발성 CNS 림프종, 척추종양 (spinal axis tumor), 뇌간 신경교종, 뇌하수체 선종)을 갖는 것으로 진단된 환자를 포함한다.

화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염은 유일한 치료법으로 적용될 수 있거나, 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염 이외에도 하나 또는 그 이상의 다른 물질 및/또는 치료가 포함될 수 있다. 이러한 공동치료는 치료의 각각의 성분들을 동시에, 순차적으로, 또는 별도로 투여하는 방법에 의해서 달성될 수 있다. 의학적 종양학의 분야에서, 암에 걸린 각각의 환자를 치료하기 위해서 다양한 형태의 치료를 조합하여 사용하는 것은 통상적인 관례이다. 의학적 종양학에서, 화합물 1 하이드로겐 설페이트 염 이외의 이러한 공동치료의 다른 성분(들)은 수술, 방사선요법 또는 화학요법일 수 있다. 이러한 화학요법은 다음과 같은 치료제의 카테고리를 포함할 수 있다:

(i) 항혈관형성 약제, 예를 들어, 혈관내피성장인자의 효과를 억제하는 약제 (예를 들어, 항-혈관내피세포 성장인자 항체 베바시주마브 [아바스틴 (Avastin™)], 및 4-(4-브로모-2-플루오로아닐리노)-6-메톡시-7-(1-메틸피페리딘-4-일메톡시)퀴나졸린 (ZD6474; WO 01/32651 내의 실시예 2), 4-(4-플루오로-2-메틸인돌-5-일옥시)-6-메톡시-7-(3-피롤리딘-1-일프로폭시)퀴나졸린 (AZD2171; WO 00/47212 내의 실시예 20), 바탈라니브 (PTK787; WO 98/35985) 및 SU11248 (수니티니브; WO 01/60814)과 같은 VEGF 수용체 타이로신 키나제 억제제, 국제특허출원 WO 97/22596, WO 97/30035, WO 97/32856 및 WO 98/13354에 기술된 바와 같은 화합물 및 본 명세서에 정의된 것과는 상이한 기전에 의해서 실행한 화합물 (예를 들어, 리노마이드, 인테그린 αγβ3 기능의 억제제, 앤지오스타틴, 라족신, 탈리도마이드, MMP-2 (매트릭스-메탈로프로테이나제 2) 억제제, MMP-9 (매트릭스-메탈로프로테이나제 9) 억제제, 및 COX-II (사이클로옥시게나제 II) 억제제), 및

(ii) 혈관 표적화제 (예를 들어, 콤브레타스타틴 포스페이트 및 WO 00/40529, WO 00/41669, WO 01/92224, WO 02/04434 및 WO 02/08213에 기술된 화합물, 및 국제특허출원 공개 WO 99/02166에 기술된 혈관 손상제 (예를 들어, N-아세틸콜치놀-O-포스페이트));

(iii) 세포증식억제제, 예를 들어, 항에스트로젠 (예를 들어, 타목시펜, 토레미펜, 랄록시펜, 드롤록시펜, 및 요오독시펜), 에스트로젠 수용체 하향 조절자 (down regulators) (예를 들어, 풀베스트란트), 프로제스토젠 (예를 들어, 메제스트롤 아세테이트), 아로마타제 억제제 (예를 들어, 아나스트로졸, 레트라졸, 보라졸 및 엑세메스테인), 항프로제스토젠, 항안드로젠 (예를 들어, 플루타마이드, 닐루타마이드, 비칼루타마이드 및 사이프로테론 아세테이트), LHRH 아고니스트 및 길항제 (예를 들어, 고세렐린 아세테이트, 류프로렐린 및 부세렐린), 5α-리덕타제의 억제제 (예를 들어, 피나스테라이드);

(iv) 항침입제 (anti-invasion agent) (예를 들어, 마리마스탯 (marima-stat)과 같은 메탈로프로테이나제 억제제 및 유로키나제 플라스미노겐 활성화제 수용체의 억제제 또는 헤파라네스에 대한 항체;

(v) 성장인자 기능의 억제제 (이러한 성장인자에는 예를 들어, 혈소판 유도된 성장인자 및 간세포 성장인자가 포함된다), 이러한 억제제는 성장인자 항체, 성장인자 수용체 항체 (예를 들어, 안티-erbb2 항체 트라스투주마브 [헤르셉틴 (Herceptin™)], 안티-EGFR 항체 판니투무마브, 안티-erbB1 항체 세툭시마브 [C225]), 및 문헌 (Stern et al. Critical reviews in oncology/haematology, 2005, Vol. 54, pp 11-29)에 기술된 모든 성장인자 또는 성장인자 수용체 항체를 포함한다; 이러한 억제제는 또한 타이로신 키나제 억제제, 예를 들어, 표피성장인자 집단의 억제제 (예를 들어, N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-7-메톡시-6-(3-모르폴리노프로폭시)-퀴나졸린-4-아민 (제피티니브, AZD1839), N-(3-에티닐페닐)-6,7-비스(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-4-아민 (에를로티니브, OSI-774) 및 6-아크릴아미도-N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-7-(3-모르폴리노프로폭시)퀴나졸린-4-아민 (CI 1033)과 같은 EGFR 집단 타이로신 키나제 억제제) 및 라파티니브와 같은 erbB2 타이로신 키나제 억제제, 간세포 성장인자 집단의 억제제, 이마티니브와 같은 혈소판-유도된 성장인자 집단의 억제제, 세린/트레오닌 키나제의 억제제 (예를 들어, 파르네실 트랜스퍼라제 억제제와 같은 Ras/Raf 신호전달 억제제, 예를 들어, 소라페니브 (BAY 43-9006)), MEK 및/또는 AKT 키나제를 통한 세포 신호전달의 억제제; 오로라 키나제 억제제 (예를 들어, AZD1152, PH739358, VX-680, MLN8054, R763, MP235, MP529, VX-528 및 AX39459), 및 CDK2 및/또는 CDK4 억제제와 같은 사이클린 의존성 키나제 억제제를 포함한다;

(vi) 의학적 종양학에서 사용되는 것으로서 항증식성/항신생물성 약물 및 이들의 조합물, 예를 들어, 항대사물질 (예를 들어, 메토트렉세이트와 같은 안티폴레이트, 5-플루오로우라실과 같은 플루오로피리미딘, 테가푸르, 퓨린 및 아데노신 유사체, 및 사이토신 아라비노사이드, 하이드록시우레아, 또는 예를 들어, N-(5-[N-(3,4-디하이드로-2-메틸-4-옥소퀴나졸린-6-일메틸)-N-메틸아미노-2-테노일)-L-글루타민산과 같은 유럽특허출원 제 239362 호에 구체적으로 기술된 항대사물질 중의 하나); 항종양 항생물질 (예를 들어, 아드리아마이신, 블레오마이신, 독소루비신, 다우노마이신, 에피루비신 및 이다루비신과 같은 안트라사이클린, 미토마이신-C, 닥티노마이신 및 미트라마이신); 백금 유도체 (예를 들어, 시스플라틴 및 카보플라틴); 알킬화제 (예를 들어, 질소 머스타드, 멜팔란, 클로람부실, 부설판, 사이클로포스파마이드, 이포스파마이드, 니트로소우레아 및 티오테파); 항유사분열제 (예를 들어, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신 및 비노렐빈과 같은 빈카 알칼로이드, 및 탁솔 및 탁소테레와 같은 탁소이드); 토포이소머라제 억제제 (예를 들어, 에토포사이드 및 테니포사이드와 같은 에피포도필로톡신, 암사크린, 토포테칸, 캄프토테신 및 이리노테칸); 효소 (예를 들어, 아스파라기나제); 및 티미딜레이트 신타제 억제제 (예를 들어, 랄티트렉시드); 및

다음의 약제들을 포함하는 화학요법제의 추가의 유형:

(vii) 생물학적 반응 변형제 (예를 들어, 인터페론);

(viii) 항체 (예를 들어, 에드레콜로마브);

(ix) 안티센스 치료제, 예를 들어, ISIS 2503 및 안티-ras 안티센스와 같이 상기 열거된 표적에 대해 지시된 치료제;

(x) 예를 들어, 비정상적인 p53 또는 비정상적인 BRCA1 또는 BCRA2와 같은 비정상적인 유전자를 치환시키는 접근방법, 사이토신 데아미나제, 티미딘 키나제 또는 세균성 니트로리덕타제 효소를 사용하는 것과 같은 GDEPT (유전자-지시 효소 전구약물 치료법) 접근방법, 및 다중-약물 내성 유전자 치료법과 같이 화학요법 또는 방사선요법에 대한 환자 허용성을 증가시키기 위한 접근방법을 포함하는 유전자 치료 접근방법; 및

(xi) 예를 들어, 인터류킨 2, 인터류킨 4 또는 과립구-대식세포 콜로니 자극인자와 같은 사이토킨에 의한 형질감염 (transfection)과 같이 환자 종양세포의 면역원성을 증가시키기 위한 생체외 및 생체내 접근방법, T-세포 아네르기 (anergy)를 감소시키기 위한 접근방법, 사이토킨-형질감염된 수상돌기세포와 같은 형질감염된 면역세포를 사용하는 접근방법, 사이토킨-형질감염된 종양세포주를 사용한 접근방법 및 항유전인자형 항체 (anti-idiotypic antibody)를 사용한 접근방법을 포함한 면역요법 접근방법.

예를 들어, 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염은 항혈관형성제, 신호 전달 억제제 및 항증식제로부터 선택된 유효량의 하나 또는 그 이상의 물질과 함께 사용될 수 있다.

특정한 실시양태에서는, MMP-2 (매트릭스-메탈로프로테이나제 2) 억제제, MMP-9 (매트릭스-메탈로프로테이나제 9) 억제제 및 COX-II (사이클로옥시게나제 II) 억제제와 같은 항혈관형성제를 본 명세서에 기술된 본 발명의 화합물 1 하이드로겐 설페이트 염 및 약제학적 조성물과 함께 사용할 수 있다. 유용한 COX-II 억제제의 예로는 셀레브렉스 (CELEBREX™; 알레콕시브), 발데콕시브 및 로페콕시브가 포함된다. 유용한 매트릭스 메탈로프로테이나제 억제제의 예는 WO 96/33172, WO 96/27583, WO 98/07697, WO 98/03516, WO 98/34918, WO 98/34915, WO 98/33768, WO 98/30566, WO 90/05719, WO 99/52910, WO 99/52889, WO 99/29667, 미국 특허 제 5,863,949 호 및 미국 특허 제 5,861,510 호 (이들은 모두 본 명세서에 온전히 참고로 포함된다)에 기술되어 있다. 적합한 MMP-2 및 MMP-9 억제제는 MMP-1을 억제하는 활성이 거의 또는 전혀 없는 것이다. 특히, 다른 매트릭스-메탈로프로테이나제 (즉, MMP-1, MMP-3, MMP-4, MMP-5, MMP-6, MMP-7, MMP-8, MMP-10, MMP-11, MMP-12 및 MMP-13)에 비해서 MMP-2 및/또는 MMP-9를 선택적으로 억제하는 것이 사용된다. 본 발명에서 유용한 MMP 억제제의 특정한 예는 AG-3340, RO 32-3555 및 RS 13-0830이다.

따라서, 본 발명의 추가의 관점은 본 명세서에서 상기에 (i)-(xi)로 열거된 항종양제 중의 어느 하나와 조합된 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염에 관한 것이다. 본 발명의 추가의 관점은 본 명세서에서 상기에 (i)-(xi)로 열거된 항종양제 중의 하나 또는 그 이상과 조합된 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염을 제공한다. 본 발명의 추가의 관점은 본 명세서에서 상기에 (i)-(xi)로 열거된 항종양제의 부류 중의 어느 하나와 조합된 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염을 제공한다.

본 명세서에서, 용어 "조합"이 사용되는 경우에, 이것은 동시, 별도 또는 순차적 투여를 의미하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명의 한가지 관점에서, "조합"은 동시 투여를 나타낸다. 본 발명의 또 다른 관점에서, "조합"은 별도의 투여를 나타낸다. 본 발명의 추가의 관점에서, "조합"은 순차적 투여를 나타낸다. 투여가 순차적 또는 별도로 이루어지는 경우에, 두 번째 성분을 투여하는데 있어서의 지연은 조합의 유익한 효과를 상실하는 것과 같이 되지 않도록 하여야 한다.

본 발명의 추가의 관점에 따르면, 본 명세서에서 상기에 (i)-(xi)로 열거된 것으로부터 선택된 항종양제와 함께 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염을 함유하는 키트가 제공된다.

본 발명의 추가의 관점에 따르면,

a) 제 1 단위 투약형으로 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염;

b) 제 2 단위 투약형으로 본 명세서에서 상기에 (i)-(xi)로 열거된 것으로부터 선택된 항종양제; 및

c) 상기 제 1 및 2 투약형을 함유하기 위한 용기 수단을 포함하는 키트가 제공된다.

화합물 1은 다음의 시험방법에서 활성을 갖는 것으로 확인되었다. N-말단 6 His-태깅된, 구성적으로 활성인 MEK1 (2-393)을 이. 콜라이 (E. coli) 내에서 발현시키고, 단백질을 통상적인 방법에 의해서 정제한다 (Ahn et al., Science 1994, 265:966-970). MEK1의 활성은 MEK1의 존재 하에서 γ-³³P-ATP로부터 γ-³³P-포스페이트가, 이. 콜라이 내에서 발현되고 통상적인 방법에 의해서 정제된 N-말단 His 태깅된 ERK2 상에 통합되는 것을 측정함으로써 평가된다. 이 시험방법은 96-웰 폴리프로필렌 플레이트 내에서 수행된다. 배양 혼합물 (100 ㎕)은 25 mM Hepes, pH 7.4, 10 mM MgCl₂, 5 mM β-글리세로포스페이트, 100 μM 나트륨 오르토바나데이트, 5 mM DTT, 5 mM MEK1, 및 1 μM ERK2를 포함한다. 억제제를 DMSO에 현탁시키고, 대조군을 포함한 모든 반응은 1％ DMSO의 최종 농도에서 수행한다. 반응은 10 μM ATP (0.5 μCi γ-³³P-ATP/웰)를 첨가함으로써 개시되며, 주위온도에서 45 분 동안 배양한다. 동등한 용적의 25％ TCA를 첨가하여 반응을 중지시키고, 단백질을 침전시킨다. 침전된 단백질을 유리섬유 N 필터플레이트 상에 트래핑시키고 (trapped), 과잉의 표지된 ATP는 톰테크 (Tomtec) MACH III 수확기를 사용하여 씻어낸다. 플레이트가 공기-건조되도록 한 후에 30 ㎕/웰의 패카드 마이크로신트 (Packard Microscint) 20을 첨가하고, 플레이트를 패카드 톱카운트 (Packard TopCount)를 사용하여 계수한다. 이 시험방법에서, 화합물 1은 50 마이크로몰 미만의 IC₅₀을 나타내었다.

본 발명을 설명하기 위해서, 이하의 실시예들이 포함된다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 제한하지 않으며, 단지 본 발명을 실시하는 방법을 제시하는 것을 의미하는 것으로 이해되어야 한다. 수율은 수행한 실시예에 대해서 제시된 것이며, 추가의 발전을 통해서 증진될 수 있을 것이다. ¹H NMR 스펙트럼 (400 MHz)은 TMS (0.00 ppm)를 기준으로 하였으며, ¹³C NMR 스펙트럼 (100 MHz)은 NMR 용매 (39.5 ppm)를 기준으로 하였고, ¹⁹F NMR 스펙트럼은 트리클로로플루오로메탄 (0.00 ppm)을 기준으로 하였다. FTIR 스펙트럼은 분말상 KBr 중의 이 물질의 2％ w/w 분산액으로부터 DRIFTS 샘플링 기술을 사용하는 것을 포함하는 다양한 방법으로 4,000-400 ㎝^-1 중적외선 스펙트럼 영역에 걸쳐서 니콜렛 마그나 (Nicolet Magna) 860 ESP FTIR 분광계 상에서 수득하였다.

실시예 1

화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염의 제조

0-5℃에서 2-부타논 (680 ㎖) 및 물 (115 ㎖) 중의 6-(4-브로모-2-클로로-페닐아미노)-7-플루오로-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-카복실산 (2-하이드록시-에톡시)-아미드 (100 g, 0.206 mol) (본 명세서에 참고로 포함되어 있는 WO 03/077914의 실시예 10에 기술된 바와 같이, 및 이하에 기술된 바와 같이 수득할 수 있음)의 교반된 현탁액에 황산 (12.3 ㎖, 0.226 mol)을 첨가하고, 이어서 10℃ 또는 그 이하의 온도를 유지하면서 물 (5 ㎖)을 첨가하였다. 교반된 혼합물을 65℃로 가열하고, 30 분 동안 유지시킨 후에 여과하여 모든 외인성 물질을 제거하였다. 필터를 2-부타논 (85 ㎖) 및 물 (15 ㎖)의 혼합물로 세척하였다. 여액을 합하여 72℃로 가열 한 후, 60-72℃의 온도를 유지하면서 2-부타논 (500 ㎖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 500 ㎖의 증류액이 수집될 때까지 대기압 (약 73-74℃의 증류온도)에서 증류하였다.

70℃ 이상으로 혼합물의 온도를 유지시키면서 2-부타논의 이차 분취액 (500 ㎖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 250 ㎖의 증류액이 수집될 때까지 다시 증류하였다. 혼합물을 약 1 시간에 걸쳐서 0-5℃로 냉각시켰다. 생성된 슬러리를 여과하고, 2-부타논 (240 ㎖)으로 세척하고, 항량이 달성될 때까지 감압 하에 50℃에서 건조시켜 회백색 결정성 고체로서 6-(4-브로모-2-클로로-페닐아미노)-7-플루오로-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-카복실산 (2-하이드록시-에톡시)-아미드 하이드로겐 설페이트 (103.5 g, 0.186 mol, 90％ 수율)를 수득하였다.

적외선 분석의 결과는 도 2에 나타내었다. 스펙트럼 할당 (spectral assignment)은 표 1에 요약하였다.

파수 (㎝^-1)	할당
3,255	일급 알콜기의 O-H 신축진동 및 이급 방향족 아민 및 이급 아미드기의 N-H 신축진동을 포함.
3,200-2,700	방향족 환 및 벤즈이미다졸기의 =C-H 신축진동 및 지방족 C-H 신축진동을 포함.
2,700-2,300	벤즈이미다졸 1:1 설페이트 염 기의 다중 NH⁺ 신축진동을 포함.
1,673 1,653	카보닐기가 수소결합과 같은 상이한 환경적 영향을 받는 경우의 이급 아미드기의 C=O 신축진동.
1,640-1,370	C=C 방향족 환 신축진동, 벤즈이미다졸기의 C=C 및 C=N 신축진동, 일급 알콜기의 O-H 변형진동 및 지방족 C-H 변형진동을 포함.
1,570	이급 아미드기의 CNH 조합 밴드 (combination band).
1,506	이급 방향족 아민기의 CNH 굽힘진동을 포함.
1,213	아릴 C-F 신축진동.
1,189	벤즈이미다졸 1:1 설페이트 염 기의 비대칭적 SO₃ ^- 신축진동.
1,100-1,000	일급 알콜기의 C-O 신축진동 및 아릴 C-Br 신축진동을 포함.
1,011	벤즈이미다졸 1:1 설페이트 염 기의 대칭적 SO₃ ^- 신축진동.
920-600	1,2,4-삼치환된 방향족 환 및 벤즈이미다졸기의 C-H 앞뒤흔듦 진동 (wag vibration) 및 C=C 환 굽힘진동을 포함.
888	벤즈이미다졸 1:1 설페이트 염 기의 S-O(H) 신축진동을 포함.

실시예 1A

화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염의 제조

황산 (1.52 ㎖, 27.86 mmol)을 10℃ 또는 그 이하의 온도를 유지시키면서 테트라하이드로푸란 (THF) (62 ㎖) 및 물 (8 ㎖) 중의 6-(4-브로모-2-클로로페닐아미노)-7-플루오로-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-카복실산 (2-하이드록시에톡시)-아미드 (10 g, 0.0214 mol) (본 명세서에 참고로 포함되어 있는 WO 03/077914의 실시예 10에 기술된 바와 같이, 및 이하에 기술된 바와 같이 수득할 수 있음)의 교반된 현탁액에 첨가하였다. 교반된 혼합물을 65℃로 가열하고, 30 분 동안 유지시킨 후에 여과하여 모든 외인성 물질을 제거하였다. 그 후, THF (150 ㎖)를 60℃ 이상의 온도를 유지하는 혼합물에 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 약 2 시간에 걸쳐서 0-5℃로 냉각시켰다. 생성된 슬러리를 여과하고, THF (30 ㎖)로 세척하고, 항량이 달성될 때까지 감압 하에 50℃에서 건조시켜 회백색 결정성 고체로서 6-(4-브로모-2-클로로페닐아미노)-7-플루오로-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-카복실산 (2-하이드록시에톡시)-아미드 하이드로겐 설페이트 (9.81 g, 0.17 mol, 82％ 수율)를 수득하였다. 물질은 상기 실시예 1에서 생성된 것과 동일하였다.

실시예 1B

6-(4- 브로모 -2- 클로로 - 페닐아미노 )-7- 플루오로 -3- 메틸 -3H- 벤조이미다졸 -5- 카복실산 (2- 하이드록시 - 에톡시 )-아미드의 제조

단계 A: 2,3,4- 트리플루오로 -5-니트로-벤조산: 3 리터의 3구 둥근 바닥 플라스크를 125 ㎖의 H₂SO₄로 충전하였다. 발연 질산 (8.4 ㎖, 199 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 온화하게 교반하였다. 2,3,4-트리플루오로벤조산 (25 g, 142 mmol)을 90 분에 걸쳐서 5 g씩 첨가하였다. 어두운 갈색을 띤 황색 용액을 60 분 동안 교반하고, 이 시간에 반응을 완결시켰다. 반응 혼합물을 1 리터의 얼음:물 혼합물에 붓고, 디에틸 에테르 (3×600 ㎖)로 추출하였다. 추출물을 합하여 건조시키고 (MgSO₄), 감압 하에서 농축시켜 황색 고체를 수득하였다. 고체를 헥산에 현탁시키고, 30 분 동안 교반한 후에 여과하여 탁한 황색 (off-yellow)의 고체로서 29 g (92％)의 깨끗한 목적 생성물을 수득하였다: MS APCI (-) m/z 220 (M-1)이 검출됨.

단계 B: 4-아미노-2,3- 디플루오로 -5-니트로-벤조산: 수산화암모늄 용액 (물 중의 약 30％) (35 ㎖, 271 mmol)을 0℃에서 교반하면서 30 ㎖의 물 중의 2,3,4-트리플루오로-4-니트로-벤조산 (15 g, 67.8 mmol)의 용액에 첨가하였다. 수산화암모늄 용액 첨가가 완료되면, 반응 혼합물을 교반하면서 실온으로 가온하였다. 2.5 시간 후에, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 반응 혼합물의 pH가 0이 될 때까지 진한 HCl을 주의해서 첨가하였다. 반응 혼합물을 물 (30 ㎖)로 희석하고, 디에틸 에테르 (3×50 ㎖)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하여 건조시키고 (MgSO₄), 감압 하에서 농축시켜 14 g (95％)의 순수한 목적 생성물을 수득하였다: MS APCI (-) m/z 217 (M-1)이 검출됨.

단계 C: 4-아미노-2,3- 디플루오로 -5- 니트로벤조산 메틸 에스테르: 헥산 중의 테트라메틸실란 (TMS) 디아조메탄의 2 M 용액 (6.88 ㎖, 13.75 mmol)을 질소 대기 하에 0℃에서 25 ㎖의 4:1 테트라하이드로푸란 (THF):MeOH 중의 4-아미노-2,3-디플루오로-5-니트로벤조산 (2.00 g, 9.17 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 첨가가 완료되면, 반응 혼합물을 실온으로 가온하였다. 0.5 시간 후에, 과잉의 TMS 디아조메탄은 아세트산을 조심스럽게 첨가함으로써 파괴시켰다. 그 후, 반응액을 감압 하에서 농축시키고, 진공 중에서 건조시켜 1.95 g (92％)의 순수한 목적 생성물을 수득하였다: MS APCI (-) m/z 231 (M-1)이 검출됨.

단계 D: 4-아미노-3- 플루오로 -5-니트로-2- 페닐아미노 -벤조산 메틸 에스테르: 4-아미노-2,3-디플루오로-5-니트로벤조산 메틸 에스테르 (23.48 g, 101.1 mmol)를 크실렌 (125 ㎖)에 현탁시키고, 아닐린 (92 ㎖, 1011 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 N₂ 하에 125℃에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰으며, 고체는 용액으로부터 침전하였다. 고체를 여과에 의해서 수거하여 크실렌으로 세척한 다음에 디에틸 에테르로 세척하였다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 메틸렌 클로라이드에 재용해시켜 메틸렌 클로라이드로 용출시키는 실리카겔의 플러그를 통해서 플러쉬하였다. 목적하는 분획을 감압 하에서 농축시켜 갈색 고체를 수득하고, 이것을 디에틸 에테르와 함께 분쇄하여 순수한 목적 생성물인 5.47 g (17.91 mmol)의 황색 고체를 수득하였다. 생성물의 합해진 수득량은 27.69 g (90％)이었다. MS APCI (-) m/z 304 (M-1)이 검출됨.

단계 E: 7- 플루오로 -6- 페닐아미노 -3H- 벤조이미다졸 -5- 카복실산 메틸 에스테르: 에탄올 (250 ㎖) 중의 4-아미노-3-플루오로-5-니트로-2-페닐아미노-벤조산 메틸 에스테르 (16.70 g, 54.71 mmol), 포름산 (250 ㎖, 6.63 mol) 및 20％ Pd(OH)₂/C (9.00 g, 16.91 mmol)를 N₂ 하에 40℃에서 2 시간 동안 교반한 다음에, 95℃에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트로 세정하는 셀라이트 (Celite)를 통해서 여과하였다. 여액을 감압 하에서 농축시켜 황색 고체를 수득하였다. 고체를 디에틸 에테르와 함께 분쇄하여 황갈색 고체로서 13.47 g (86％)의 목적 생성물을 수득하였다. MS APCI (+) M/Z 286 (M+1)이 검출됨; MS APCI (-) m/z 284 (M-1)이 검출됨.

단계 F: 6-(4- 브로모 - 페닐아미노 )-7- 플루오로 -3H- 벤조이미다졸 -5- 카복실 산 메틸 에스테르: 7-플루오로-6-페닐아미노-3H-벤조이미다졸-5-카복실산 메틸 에스테르 (4.99 g, 17.51 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (275 ㎖)에 용해시켰다. N-브로모석신이미드 (3.15 g, 17.70 mmol)를 고체로 첨가하고, 반응 혼합물을 N₂ 하에 실온에서 교반하였다. 30 분 후에, 포화 아황산수소나트륨 수용액을 첨가함으로써 반응 혼합물을 켄칭하였다. 그 후, 반응 혼합물을 분별 깔때기에 붓고, 물 및 에틸 아세테이트로 희석하여 층을 분리시켰다. 수층을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 추출물을 합하여 물로 3 회, 염수로 1 회 세척한 다음에, 건조시키고 (Na₂SO₄), 감압 하에서 농축시켜 황갈색 고체로서 6.38 g (100％)의 순수한 목적 생성물을 수득하였다. MS ESI (+) m/z 364, 366 (M+ Br 패턴)이 검출됨.

단계 G: 6-(4- 브로모 -2- 클로로 - 페닐아미노 )-7- 플루오로 -3H- 벤조이미다졸 -5-카 복실 산 메틸 에스테르: 6-(4-브로모-페닐아미노)-7-플루오로-3H-벤조이미다졸-5-카복실산 메틸 에스테르 (6.38 g, 17.51 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (275 ㎖)에 용해시켰다. N-클로로석신이미드 (2.36 g, 17.70 mmol)를 고체로 첨가하고, 반응 혼합물을 반응이 완료될 때까지 (5-6일) N₂ 하에 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 아황산수소나트륨 수용액을 첨가함으로써 켄칭하여 현탁액을 제공하였다. 생성된 고체를 여과에 의해서 수거하여 물 및 디에틸 에테르로 세척하고, 감압 하에서 건조시켜 베이지색 고체로서 6.07 g (87％)의 순수한 목적 생성물을 수득하였다. MS ESI (+) m/z 398, 400 (M+ Br 패턴)이 검출됨.

단계 H: 6-(4- 브로모 -2- 클로로페닐아미노 )-7- 플루오로 -3- 메틸 -3H- 벤조이 미다졸-5- 카복실산 메틸 에스테르 및 6-(4- 브로모 -2- 클로로페닐아미노 )-7- 플루 오로-1- 메틸 -1H- 벤조이미다졸 -5- 카복실산 메틸 에스테르: 디메틸포름아미드 (1.5 ㎖) 중의 6-(4-브로모-2-클로로-페닐아미노)-7-플루오로-3H-벤조이미다졸-5-카복실산 메틸 에스테르 (150 ㎎, 0.38 mmol), 요오도메탄 (28 ㎕, 0.45 mmol) 및 탄산칼륨 (78 ㎎, 0.56 mmol)의 용액을 75℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 포화 수성 탄산칼륨 (2×), 염수로 세척하여, 건조시켰다 (Na₂SO₄). 플래쉬 칼럼 크로마토그라피 (20:1 메틸렌 클로라이드/에틸 아세테이트)에 의해서 백색 고체로서 56 ㎎의 더 유동성이 있는 6-(4-브로모-2-클로로페닐아미노)-7-플루오로-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-카복실산 메틸 에스테르를 제공하였다. ¹⁹F NMR (376 MHz, CD₃OD) - 133.5 (s). MS APCI (+) m/z 412, 414 (M+, Br 패턴)이 검출됨. 또한, 백색 고체로서 54 ㎎ (35％)의 6-(4-브로모-2-클로로-페닐아미노)-7-플루오로-1-메틸-1H-벤조이미다졸-5-카복실산 메틸 에스테르가 분리되었다. ¹⁹F NMR (376 MHz, CD₃OD) - 139.9 (s). MS APCI (+) m/z 412, 414 (M+, Br 패턴)이 검출됨.

단계 I: 6-(4- 브로모 -2- 클로로 - 페닐아미노 )-7- 플루오로 -3- 메틸 -3H- 벤조 이미다졸-5- 카복실산: 6-(4-브로모-2-클로로-페닐아미노)-7-플루오로-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-카복실산 메틸 에스테르 (56 ㎎, 0.14 mmol)를 2:1 THF/물 (3 ㎖)에 용해시키고, NaOH (0.55 ㎖, 1.0 M 수용액, 0.55 mmol)를 첨가하였다. 2 시간 동안 교반한 후에, 반응액을 회전 증발기에 의해서 처음 용적의 1/4로 감소시키고, 나머지를 물에 의해서 40 ㎖로 희석하였다. 수용액을 1.0 M 수성 HCl을 첨가함으로써 pH 2로 산성화시키고, 1:1 테트라하이드로푸란/에틸 아세테이트 (3×)로 추출하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 감압 하에서 농축시켜 회백색 고체로서 43 ㎎ (79％)의 순수한 카복실산을 제공하였다. MS ESI (+) m/z 397, 398 (M+, Br 패턴)이 검출됨.

단계 J: 6-(4- 브로모 -2- 클로로 - 페닐아미노 )-7- 플루오로 -3- 메틸 -3H- 벤조이미다졸 -5- 카복실산 (2- 비닐옥시 - 에톡시 )-아미드: 6-(4-브로모-2-클로로-페닐아미노)-7-플루오로-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-카복실산 (2.00 g, 5.0 mmol), O-(2-비닐옥시-에틸)-하이드록실아민 (0.776 g, 7.5 mmol), HOBt (0.88 g, 6.5 mmol), 트리에틸아민 (1.61 ㎖, 2.3 mmol) 및 EDCl (1.3 g, 6.5 mmol)을 디메틸포름아미드 (52 ㎖)에 용해시키고, 실온에서 48 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 (3×), 포화 탄산칼륨 (2×), 포화 염화암모늄 (2×), 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 감압 하에서 농축시켜 회백색 고체를 수득하였다. 이 고체를 디에틸 에테르와 함께 분쇄하여 회백색 고체로서 2.18 g (90％)의 목적 생성물을 제공하였다. MS ESI (=) m/z 483, 485 (M+ Br 패턴)이 검출됨.

단계 K: 6-(4- 브로모 -2- 클로로 - 페닐아미노 )-7- 플루오로 -3- 메틸 -3H- 벤조 이미다졸-5- 카복실산 (2- 하이드록시 - 에톡시 )-아미드: 염산 (14 ㎖, 1.0 M 수용액, 14 mmol)을 에탄올 (50 ㎖) 중의 6-(4-브로모-2-클로로-페닐아미노)-7-플루오로-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-카복실산 (2-비닐옥시에톡시)-아미드 (2.18 g, 4.50 mmol)의 현탁액에 첨가하고, 반응 혼합물을 24 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 회전 증발에 의해서 농축 건조시키고, 고체를 3:1 에틸 아세테이트/테트라하이드로푸란과 포화 탄산칼륨 사이에 분배시켰다. 수성상을 3:1 에틸 아세테이트/테트라하이드로푸란 (3×)으로 추출하고, 유기상을 합하여 건조시키고 (Na₂SO₄), 농축시켜 회백색 고체로서 2.11 g (100％)의 6-(4-브로모-2-클로로페닐아미노)-7-플루오로-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-카복실산 (2-하이드록시에톡시)-아미드를 제공하였다. MS ESI (+) m/z 457, 459 (M+, Br 패턴)이 검출됨.

실시예 2

하이드로겐 설페이트 염의 물리적 특성의 조사

실시예 1의 생성물을 그의 물리적 특성을 측정하기 위해서 다음의 시험에 적용하였다.

분말 X-선 회절 ( PXRD )

모든 샘플은 브루커 (Bruker) D5000 회절계 상에서 추적하였다. X-선 분말 회절 스펙트럼은 시멘스 (Siemens) 단일 규소 결정 (SSC) 웨이퍼 마운트 (wafer mounts) 상에 결정성 염의 샘플을 고정시키고, 샘플을 현미경 슬라이드를 이용하여 박층으로 전연시킴으로써 측정하였다. 샘플을 분당 30 회전수로 회전시키고 (계수 통계학 (counting statistics)을 개선시키기 위함), 1.5406 옹스트롬의 파장으로 40 kV 및 40 mA에서 작동하는 구리 롱-화인 초점관 (copper long-fine focus tube)에 의해서 발생된 X-선을 조사하였다. 시준된 X-선원을 V20에서 설정된 자동 가변성 발산 슬릿 (automatic variable divergence slit)을 통과시키고, 반사된 방사선은 2 ㎜ 산란방지 슬릿 및 0.2 ㎜ 검출 슬릿 (detector slit)를 통해서 인도되었다. 샘플은 세타-세타 모드 (theta-theta mode)로 2 도에서 40 도의 범위에 걸쳐서 0.02 도당, 2-세타 증가분 (연속적 스캔 모드)으로 1 초 동안 노출시켰다. 운전시간은 31 분 41 초였다. 장치에는 검출기로서 섬광계수기가 장착되었다. 대조군 및 데이타 획득은 디프랙트+ (Diffract+) 소프트웨어에 의해서 작동하는 델 옵티플렉스 (Dell Optiplex) 686 NT 4.0 워크스테이션 (Workstation)을 이용하여 이루어졌다.

데이타는 증가분당 4s를 가지고 2-세타 0.02°의 증가분으로 2-세타 2-40° 범위에 걸쳐서 수집되었으며, 고정된 슬릿들에 의해서 측정된 회절도로부터 유도된 상대적 강도로 표 2에 분류되어 있다.

상대적 강도 ％	정의
25-100	VS - 매우 강함
10-25	S - 강함
3-10	M - 중간
1-3	W - 약함

스캔의 결과는 도 1에 나타내었으며, 여기에서 상부의 회색선은 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염의 XRPD를 나타낸 것이고, 하부의 흑색선은 유리 형태를 나타낸다. 가장 강한 것부터 시작하여 대부분의 강력한 피크들은 표 3에 제시하였다. 24.59°에서의 피크가 특히 강력하다.

2 세타 스케일	상대적 강도
24.59	VS
20.97	VS
23.99	S
27.65	S
12.24	S
23.49	S
24.30	S
17.02	S
25.91	S
22.50	M

X-선 분말 회절의 기술분야에서 숙련된 전문가는 피크의 상대적 강도가 예를 들어, 샘플의 분석에 영향을 미칠 수 있는 크기가 30 미크론 이상인 그레인 (grains) 및 비-단일형 종횡비에 의해서 영향을 받을 수 있음을 알 수 있을 것이다. 숙련된 전문가는 또한, 반사의 위치가 회절계 내에서 샘플이 자리하는 정확한 높이 및 회절계의 영점 조정 (zero calibration)에 의해서 영향을 받을 수 있음을 알 수 있을 것이다. 샘플의 표면 평탄도 (surface planarity)도 또한 작은 영향을 미칠 수 있다. 따라서, 제시된 회절패턴 데이타는 절대값으로 채택되지는 않는다 (추가의 정보를 위한 참조: Jenkins, R. & Snyder, R.L., "Introduction to X-Ray Powder Diffractometry", John Wiley & Sons, 1996).

실시예 3

생체내 조사: 분산된 제제에서 염 대비 유리 염기의 연구

시험은 개에게서 수행하여 단식시킨 개에게서 약제학적으로 허용되는 분산제 중에 유리 염기 또는 하이드로겐 설페이트 염으로 함유된 화합물 1을 갖는 7.5 ㎖의 다양한 분산제제를 150 ㎎의 유리 염기에 해당하는 경구 용량으로 투여한 후의 화합물 1의 혈장 수준을 측정하였다.

150 ㎎의 단일 용량을 체중이 12-17 ㎏이고 약 2 내지 6년이 된 단식시킨 비글 개에게 3일의 투약일 각각에 경구적으로 투여하였다. 각각의 투약일은 1 주일 차이를 두었다.

모든 제제는 7.5 ㎖의 적절한 분산용액을 10 ㎖ 일회용 주사기를 사용하여 150 ㎎의 유리 염기에 해당하는 적절한 약물 형태를 함유하는 바이알에 첨가하고, 캡을 씌우고 30 초 동안 와류 혼합 (vortex mixing)시켜 분산액을 형성시킴으로써 투약하기 직전에 즉석에서 제조하였다.

분산액은 일회용 주사기를 사용하여 바이알로부터 꺼내어 위 내에 배치된 가바즈 튜브 (gavage tube)를 통해서 동물에게 투약하였다. 바이알은 2 회의 세정 각각의 경우에, 20 ㎖ 일회용 주사기에 의해서 개별적으로 15 ㎖씩의 분취량의 물 (총 세정용적 = 30 ㎖)을 첨가하고, 캡을 씌우고 5 초 동안 와류 혼합시키고, 세척용액을 일회용 주사기를 사용하여 바이알로부터 꺼내어 가바즈 튜브를 통해서 동물에게 투약함으로써 2 회 세정하였다.

개는 매일 약 400 g의 스페샬 다이어트 서비스 래보라토리 다이어트 A (Special Diet Services Laboratory Diet A)를 먹이고, 물은 마음대로 먹도록 하였다. 리튬 헤파린 튜브 내의 전혈액 (2 ㎖)은 투약하기 직전 및 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 12, 18, 24, 36 및 48 시간째에 경정맥으로부터 채혈하였다. 혈액을 15 분 동안 3000 rpm으로 원심분리하고, 혈장을 보통 혈액 튜브 (plain blood tube) 내에 분리시켜 분석할 때까지 -20℃에서 저장하였다.

혈장 (50 mcL)은 화합물 1 농도에 대해서 분석하였다. 2 마리의 개는 투약하기 직전에 구토하였기 때문에 분석으로부터 제외되었다. 경구 투약한 후에 관찰된 화합물 1에 대한 평균 혈장농도 프로필은 도 3에 나타내었으며, 여기에서 ▲로 표시된 선은 화합물 1의 하이드로겐 설페이트 염을 포함하는 제제를 나타낸 것이고, ×로 표시된 선은 동일한 제제 내의 화합물 1 유리 염기의 결과를 나타낸 것이다.

제제 변화는 노출에 대하여 비교적 작은 영향을 미치는 것으로 보인다 (결과는 제시되지 않음). 그러나, 화합물 1을 하이드로겐 설페이트 염으로 투약한 경우에는 노출에 있어서 약 4 내지 8 배의 상당한 증가가 제공되었다.

전술한 설명은 단지 본 발명의 원리를 설명하는 것으로 생각된다. 또한, 다수의 변형 및 변화는 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 쉽게 명백할 것이기 때문에, 본 발명을 상술한 바와 같이 나타내는 정확한 구성 및 방법으로 제한하는 것은 바람직하지 않다. 따라서, 모든 적합한 변형 및 동등한 것은 이하의 특허청구범위에 정의된 바와 같은 본 발명의 범위 내에 포함되는 것으로 분류될 수 있다.

본 명세서 및 이하의 특허청구범위에서 사용되는 경우에, 단어 "포함한다" 및 "포함하는" ("comprise", "comprising", "include", "including" 및 "includes")은 언급된 특징, 정수, 성분 또는 단계들의 존재를 명기하기 위한 것이지만, 이들은 하나 또는 그 이상의 다른 특징, 정수, 성분, 단계 또는 이들의 군의 존재 또는 부가를 제외하는 것은 아니다.

Claims

6-(4-브로모-2-클로로-페닐아미노)-7-플루오로-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-카복실산(2-하이드록시-에톡시)-아미드의 하이드로겐 설페이트 염.
제1항에 있어서, 무수물 형태인 6-(4-브로모-2-클로로-페닐아미노)-7-플루오로-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-카복실산(2-하이드록시-에톡시)-아미드의 하이드로겐 설페이트 염.
제1항에 있어서, 용매화물의 형태인 6-(4-브로모-2-클로로-페닐아미노)-7-플루오로-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-카복실산(2-하이드록시-에톡시)-아미드의 하이드로겐 설페이트 염.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 결정성인 6-(4-브로모-2-클로로-페닐아미노)-7-플루오로-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-카복실산(2-하이드록시-에톡시)-아미드의 하이드로겐 설페이트 염.
제4항에 있어서, 약 24.59°에서 적어도 하나의 특정한 피크를 갖는 X-선 분말 회절패턴을 갖는 6-(4-브로모-2-클로로-페닐아미노)-7-플루오로-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-카복실산(2-하이드록시-에톡시)-아미드의 하이드로겐 설페이트 염.
제5항에 있어서, 24.59°, 20.97°, 23.99°, 27.65°, 12.24°, 23.49°, 24.30°, 17.02°, 25.91° 및 22.50°에 해당하는 대략의 2-세타에서 특이적 피크를 갖는 X-선 분말 회절패턴을 갖는 6-(4-브로모-2-클로로-페닐아미노)-7-플루오로-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-카복실산(2-하이드록시-에톡시)-아미드의 하이드로겐 설페이트 염.
제1항에 있어서, 하기에 나타낸 X-선 분말 회절패턴과 실질적으로 동일한 X-선 분말 회절패턴을 갖는 6-(4-브로모-2-클로로-페닐아미노)-7-플루오로-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-카복실산(2-하이드록시-에톡시)-아미드의 하이드로겐 설페이트 염.
제1항 또는 제2항에 있어서, 무정형 형태인 6-(4-브로모-2-클로로-페닐아미노)-7-플루오로-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-카복실산(2-하이드록시-에톡시)-아미드의 하이드로겐 설페이트 염.
(i) 유기 액체 내의 6-(4-브로모-2-클로로-페닐아미노)-7-플루오로-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-카복실산(2-하이드록시-에톡시)-아미드의 슬러리를 적어도 화학량론적 양의 황산 및 물과 반응시키는 단계;

(ii) 생성된 용액으로부터 염을 회수하는 단계; 및

(iii) 그 후에, 경우에 따라 또는 필요하다면, 그의 용매화물을 형성시키는 단계를 포함하는, 제1항 내지 제3항, 및 제7항 중 어느 한 항에 따르는 6-(4-브로모-2-클로로-페닐아미노)-7-플루오로-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-카복실산(2-하이드록시-에톡시)-아미드의 하이드로겐 설페이트 염을 제조하는 방법.
제9항에 있어서, 단계 (i)에서 첨가된 물의 양이 염이 형성되는 것을 보장하는데 필요한 양으로 제한되는 방법.
제9항에 있어서, 단계 (i)를 40-80℃의 온도에서 수행하는 방법.
제9항에 있어서, 유기 액체가 C_1-6 알킬 케톤인 방법.
제9항에 있어서, 하이드로겐 설페이트 염이 단계 (ii)에서, 임의로는 추가의 유기 액체를 첨가하여, 반응 혼합물을 냉각시켜 하이드로겐 설페이트 염을 침전시킴으로써 회수되는 방법.
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제1항 내지 제3항, 및 제7항 중 어느 한 항에 따르는 6-(4-브로모-2-클로로-페닐아미노)-7-플루오로-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-카복실산(2-하이드록시-에톡시)-아미드의 하이드로겐 설페이트 염을 포함하는, MEK를 통해서 매개된 질병상태인 증식성 질환의 치료용 제약 조성물.
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