KR20220042258A

KR20220042258A - 항 tigit 항체 및 그의 응용

Info

Publication number: KR20220042258A
Application number: KR1020227004671A
Authority: KR
Inventors: 친 멩; 지안 야오; 후이 펭; 셩 야오; 하이 우
Original assignee: 상하이 준스 바이오사이언스 컴퍼니 리미티드; 쑤저우 준멍 바이오사이언스 컴퍼니 리미티드
Priority date: 2019-07-15
Filing date: 2020-07-14
Publication date: 2022-04-04
Also published as: IL289656A; ZA202201464B; CN114269782B; CA3146986A1; US20220363754A1; AU2020314129A1; EP4001308A4; WO2021008523A1; CL2022000096A1; JP2022541022A; MX2022000586A; EP4001308A1; BR112022000628A2; CN114269782A

Abstract

본 발명은 TIGIT와 특이적으로 결합하는 항체 또는 그 항원 프래그먼트 및 그의 조성물을 제공한다. 또한 본 발명의 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트를 인코딩하는 핵산분자, 본 발명의 항체 또는 그 기능성 프래그먼트를 발현하는 발현 벡터와 숙주세포, 및 그의 치료와 진단 용도를 더 제공한다.

Description

항 TIGIT 항체 및 그의 응용

본 발명은 항 TIGIT 항체, 및 이러한 항체와 그 조성물의 암 치료에 있어서의 용도에 관한 것이다.

TIGIT(Ig와 ITIM 도메인을 갖는 T 세포 면역 수용체)는 세포 외 면역글로불린 도메인, I형 막관통(transmembrane) 영역과 2개의 ITIM 모티프(motif)로 구성되며, 주로 활성화된 T 세포와 NK 세포에서 발현되는 면역 조절 수용체이다(Stanietsky 등, PNAS.2009,106,17858-17863). TIGIT가 인식하는 리간드는 폴리오바이러스 수용체(PVR，CD155)와 넥틴(Nectin) 2(PVRL2/CD112)이며, 상기 리간드는 많은 다른 종양 세포에서 과발현된다. 이미 보고된 바와 같이, TIGIT는 리간드 PVR와 높은 친화력으로 결합한다. TIGIT와 리간드의 결합은 TIGIT의 세포질 꼬리부에 존재하는 면역 수용체 테일 티로신(ITT) 유사 모티프 및 면역 우위의 티로신 기반 억제(ITIM) 모티프 등 2개의 모티프에 의해 매개되는 억제성 신호를 활성화할 수 있다(Liu 등，Cell death and differentiation 2013，20, 456-464; Stanietsky 등，European journal of immunology, 2013, 43, 2138-2150). 종양 세포 표면 리간드는 NK 세포 및 T 세포 표면의 TIGIT의 ITIM 도메인과의 결합을 통해, NK 세포의 독성과 T 세포 활성을 억제함으로써, 종양 세포의 면역 회피 기전을 매개한다. TIGIT와 그 리간드의 결합을 차단하는 항 TIGIT 항체를 구비하여, TIGIT가 매개하는 면역 억제 작용을 통해, 종양 등 질환의 치료에 사용될 수 있다는 특허 문헌이 이미 다수 보도되어 있다(WO2004/024068, WO2009/126688, WO2015/009856, WO2016/028656).

단독으로 또는 기타 의약제제와 조합할 수 있고, 인간 TIGIT의 억제 활성을 저하시킴으로써 면역체계의 세포가 종양 세포를 공격하도록 하는 더욱 효과적이고, 특이적이며, 안전하거나 및/또는 안정적인 기타 의약제제를 제공함에 있어 충족되지 않은 요구가 존재한다.

본 발명은 독특한 CDR 서열 조성을 구비하고, 인간 TIGIT와의 결합에 고 친화력과 고 특이성을 지니는 것을 특징으로 하는 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트를 제공한다. 본 발명이 제공하는 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 독립된 치료법으로서 또는 기타 요법/또는 기타 항암제와 연합하여 암 등과 같은 치료에 사용될 수 있다.

본 발명은 일 측면으로 TIGIT와 고 특이적으로 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트를 제공한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 중쇄 상보성 결정영역(complementarity determining region) HCDR1, HCDR2와 HCDR3 중에서 선택된 1개 내지 3개를 포함하며, 여기서 상기 HCDR1은 SEQ ID NO: 1 또는 11에서 선택된 아미노산 서열과 일치하거나 또는 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 2 또는 12에서 선택된 아미노산 서열과 일치하거나 또는 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하며, HCDR3은 SEQ ID NO: 3 또는 13에서 선택된 아미노산 서열과 일치하거나 또는 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 중쇄 상보성 결정영역 HCDR1, HCDR2와 HCDR3을 포함하며, 여기서 상기 HCDR1은 SEQ ID NO: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 포함하며, HCDR3은 SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 중쇄 상보성 결정영역 HCDR1, HCDR2와 HCDR3을 포함하며, 여기서 상기 HCDR1은 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하며, HCDR3은 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 경쇄 상보성 결정영역 LCDR1, LCDR2와 LCDR3 중에서 선택된 1개 내지 3개를 포함하며, 여기서 상기 LCDR1은 SEQ ID NO: 6 또는 16의 아미노산 서열과 일치하거나 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 7 또는 17의 아미노산서열과 일치하거나 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하며, LCDR3은 SEQ ID NO: 8 또는 18의 아미노산 서열과 일치하거나 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 경쇄 상보성 결정영역 LCDR1, LCDR2와 LCDR3을 포함하며, 여기서 상기 LCDR1은 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하며, LCDR3은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 경쇄 상보성 결정영역 LCDR1, LCDR2와 LCDR3을 포함하며, 여기서 상기 LCDR1은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하며, LCDR3은 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 중쇄 상보성 결정영역 HCDR1, HCDR2와 HCDR3과 경쇄 상보성 결정영역 LCDR1, LCDR2와 LCDR3을 포함하며, 여기서 상기 HCDR1은 SEQ ID NO: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 포함하며, HCDR3은 SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하며, LCDR3은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 중쇄 상보성 결정영역 HCDR1, HCDR2와 HCDR3과 경쇄 상보성 결정영역 LCDR1, LCDR2와 LCDR3을 포함하며, 여기서 상기 HCDR1은 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하며, HCDR3은 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하며, LCDR3은 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 중쇄 가변영역(VH)을 포함하며, 상기 중쇄 가변영역(VH)은 SEQ ID NO: 4, 14, 21, 23, 25, 27 및 29에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열과 일치하거나 또는 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 경쇄 가변영역(VL)을 포함하며, 상기 경쇄 가변영역(VL)은 SEQ ID NO: 9, 19, 22, 24, 26, 28 및 30에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열과 일치하거나 또는 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 중쇄 가변영역(VH)과 경쇄 가변영역(VL)을 포함하며, 여기서 상기 VH는 SEQ ID NO: 4, 14, 21, 23, 25, 27 및 29에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열과 일치하거나 또는 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 및 상기 VL은 SEQ ID NO: 9, 19, 22, 24, 26, 28 및 30에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열과 일치하거나 또는 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 중쇄 가변영역(VH)과 경쇄 가변영역(VL)을 포함하며, 여기서 상기 VH는 SEQ ID NO: 4에 표시된 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL은 SEQ ID NO: 9에 표시된 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 중쇄 가변영역(VH)과 경쇄 가변영역(VL)을 포함하며, 여기서 상기 VH는 SEQ ID NO: 14에 표시된 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL은 SEQ ID NO: 19에 표시된 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 중쇄 가변영역(VH)과 경쇄 가변영역(VL)을 포함하며, 여기서 상기 VH는 SEQ ID NO: 21에 표시된 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL은 SEQ ID NO: 22에 표시된 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 중쇄 가변영역(VH)과 경쇄 가변영역(VL)을 포함하며, 여기서 상기 VH는 SEQ ID NO: 23에 표시된 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL은 SEQ ID NO: 24에 표시된 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 중쇄 가변영역(VH)과 경쇄 가변영역(VL)을 포함하며, 여기서 상기 VH는 SEQ ID NO: 25에 표시된 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL은 SEQ ID NO: 26에 표시된 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 중쇄 가변영역(VH)과 경쇄 가변영역(VL)을 포함하며, 여기서 상기 VH는 SEQ ID NO: 27에 표시된 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL은 SEQ ID NO: 28에 표시된 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 중쇄 가변영역(VH)과 경쇄 가변영역(VL)을 포함하며, 여기서 상기 VH는 SEQ ID NO: 29에 표시된 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL은 SEQ ID NO: 30에 표시된 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 경쇄 및/또는 중쇄를 포함하며, 상기 중쇄의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 31 또는 32에 표시된 바와 같고, 및/또는 상기 경쇄의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 32 또는 34에 표시된 바와 같다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항체의 중쇄의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 31에 표시된 바와 같고, 경쇄의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 32에 표시된 바와 같고; 또는 상기 항체의 중쇄의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 33에 표시된 바와 같고, 경쇄의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 34에 표시된 바와 같다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 인간 TIGIT 및 게잡이 원숭이(Cynomolgus monkey)의 TIGIT 단백질과 교차 결합하는 특성을 지닌다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 TIGIT와 그의 천연 리간드 PVR 및/또는 PVRL2의 결합을 차단하거나 억제하는 특성을 지닌다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 TIGIT가 매개에 관여하는 생물 활성 작용을 차단하거나 억제한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 마우스 항체, 키메라 항체, 인간화 항체 또는 완전 인간 항체이다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 완전 항체, 단쇄 항체, Fab 항체, Fab' 항체, (Fab')2 항체, 또는 이중(다중) 특이성 항체이다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 어느 IgG 아형, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4이다.

본 발명은 상기 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트를 인코딩하는 분리된 핵산분자를 제공한다.

본 발명은 하나 이상의 상기 핵산 서열을 포함하는 재조합 벡터 또는 발현 벡터를 제공하며, 상기 벡터는 상기 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트를 재조합 생성하기에 적합하다.

본 발명은 하나 이상의 상기 재조합 벡터 또는 발현 벡터, 또는 상기 핵산분자를 포함하거나, 또는 상기 어느 하나의 실시예에 따른 항체를 발현하는 숙주세포를 제공한다.

본 발명은 상기 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트와 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제의 조성물을 포함하는 약물 조성물을 제공한다.

일부 실시방식에서, 상기 약물 조성물은 PD-1 축 길항제를 더 포함한다.

일부 실시예에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 하기의 성질 중의 적어도 하나를 구비한다:

1) 적어도 약 5nM, 적어도 약 1nM, 적어도 약 0.1nM, 적어도 약 0.01nM, 적어도 약 0.001nM의 KD로 인간 TIGIT와 결합한다;

2) 게잡이 원숭이의 TIGIT와 교차 반응한다.

본 발명은 두 번째 측면으로 또한 본 발명에 따른 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트를 생성하기 위한 방법에 관한 것이다. 이러한 방법은 본 발명의 항체 또는 항원 결합 프래그먼트를 인코딩하는 분리된 핵산분자, 또는 이러한 핵산을 포함하는 발현 벡터, 특히 숙주세포에서 본 발명에 따른 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트를 재조합 생성하기 위한 벡터를 제공하는 단계를 포함한다.

본 발명은 세 번째 측면으로 또한하나 이상의 상기 재조합 벡터 또는 발현 벡터를 포함하는 숙주세포 및 본 발명에 따른 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트를 생성하기 위한 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 상기 숙주세포를 배양하고, 상기 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트를 정제 및 회수하는 단계를 포함한다.

본 발명은 상기 숙주세포를 배양하고, 배양물로부터 상기 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트를 회수하는 단계를 포함하는, 상기 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트를 생성하는 방법을 더 제공한다.

본 발명은 네 번째 측면으로 또한 피험자의 암을 치료하는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 상기 피험자에게 유효량의 본문에 따른 어느 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트 또는 그 약물 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.

일종의 실시방식에서, 또한 본 발명에 따른 어느 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트의 피험자의 암 치료를 위한 약물 제조에 있어서의 용도에 관한 것이다.

본 발명은 상기 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트, 핵산분자, 벡터, 숙주세포 또는 약물 조성물의 TIGIT가 매개하는 질환 또는 증상을 치료 및/또는 예방하기 위한 약물 제조에 있어서의 용도를 더 제공하며; 바람직하게는 상기 질환 또는 증상은 암이다.

본 발명은 다섯 번째 측면으로 또한 암 피험자에 대한 하나 이상의 치료법(예를 들어 치료방식 및/또는 기타 치료제)을 연합 투여하는 것에 관한 것이다. 일부 실시예에서, 상기 치료법은 상기 피험자에게 유효량의 본 발명의 어느 하나의 실시예에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트 또는 그 약물 조성물을 투여하는 방법을 포함한다. 일부 실시예에서, 치료방식은 수술치료 및 방사선 요법을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 기타 치료제는 화학요법제, PD-1 축 길항제 또는 기타 종양 표적 치료제로부터 선택되며; 바람직하게는 PD-1 축 길항제이다.

일부 실시예에서, 본 발명은 또한 본문에 따른 어느 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트와 PD-1 축 길항제의 조합으로 피험자의 암을 치료하기 위한 약물 제조에 있어서의 용도에 관한 것이다.

일부 실시예에서, 상기 PD-1 축 길항제는 항 PD-1 항체, 항 PD-Ll 항체 또는 PD-L2 항체로부터 선택된다.

본 발명은 여섯 번째 측면으로 또한 샘플 중 TIGIT를 검출하는 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 a) 샘플을 본문에 따른 어느 항 TIGIT 항체 또는 그 프래그먼트와 접촉시키는 단계; 및 b) 항 TIGIT 항체 또는 그 프래그먼트와 TIGIT 간의 복합물의 형성을 검출하는 단계를 포함한다. 일 실시예에서, 항 TIGIT 항체는 검출 가능하게 라벨링된다.

일부 실시예에서, 본 발명은 본문에 따른 어느 항 TIGIT 항체 또는 그 프래그먼트를 포함하는 키트 또는 제품에 관한 것이다. 일부 실시예에서, 상기 키트 또는 제품은 본문에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 프래그먼트와 임의로 선택한 약용 가능한 보조제, 및 임의로 선택한 하나 이상의 기타 치료제(예를 들어 화학요법제, PD-1 축 길항제 또는 종양 표적 치료제)를 포함한다.

본 발명은 본문에 따른 어느 실시예의 어느 조합을 더 포함한다. 본문에 따른 어느 실시예 또는 그 어느 조합은 본문에 따른 발명의 어느 및 모든 항 TIGIT 항체 또는 그 프래그먼트, 방법 및 용도에 적용된다.

도 1은 Luciferase assay로 하이브리도마 항체가 T 세포 활성에 미치는 영향을 검출한 도면이다.
도 2는 Elisa로 키메라 항체와 TIGIT의 결합 작용을 검출한 도면이다.
도 3은 Luciferase assay로 키메라 항체가 T 세포 활성에 미치는 영향을 검출한 도면이다.
도 4는 Elisa로 인간화 항체와 TIGIT의 결합 작용을 검출한 도면이다.
도 5는 Luciferase assay로 인간화 항체가 T 세포 활성에 미치는 영향을 검출한 도면이다.
도 6은 FACS로 인간화 항체의 TIGIT와 리간드 PVR의 결합 작용 차단을 검출한 도면이다.
도 7은 MC38 종양을 보유한 TIGIT 변형 유전자 마우스에서 인간화 TIGIT 항체 및 그 항체와 항PD-1 항체의 연합의 약효 연구를 나타낸 도면이다.

정의

별도로 설명하지 않는 한, 본 발명의 실시는 분자생물학(재조합 기술 포함), 미생물학, 세포생물학, 생화학과 면역학의 종래 기술을 적용할 것이며, 이들은 모두 본 분야의 기술 범위 내에 포함된다.

본 발명을 보다 쉽게 이해할 수 있도록 하기 위하여, 일부 과학기술 용어는 다음과 같이 구체적으로 정의한다. 본문의 기타 부분에서 별도로 명확하게 정의되지 않는 한, 본문에 사용되는 과학기술 용어는 모두 본 발명이 속하는 분야의 당업자가 통상적으로 이해할 수 있는 의미를 갖는다. 본 분야의 정의 및 용어에 관하여, 전문 인원은 구체적으로 Current Protocolsin Molecular Biology (Ausubel)를 참고할 수 있다. 아미노산 잔기의 약자는 본 분야에서 사용되는 20개의 상용 L-아미노산 중 하나를 대신하는 표준 3개의 알파벳 및/또는 1개의 알파벳 코드이다. 본문(청구항 포함)에서 사용되는 단수 형식은 본문에서 별도로 명확하게 규정하지 않는 한, 상응하는 복수 형식을 포함한다.

용어 "약"은 숫자의 수치와 연합하여 사용 시 지정된 숫자의 수치보다 5% 작은 하한과 지정된 숫자의 수치보다 5% 큰 상한 범위 내의 숫자의 수치를 포함하는 것을 의미한다.

본문 중의 용어 "TIGIT"의 완전한 명칭은 T 세포 면역글로불린과 ITIM 도메인(T cell Ig 및 ITIM domain)이며, 별도의 설명이 없는 한, 어느 척추동물(영장류 동물(예를 들어 사람)과 같은 포유동물과 설치류 동물(예를 들어, 마우스와 래트) 포함)로부터 유래된 모든 천연 TIGIT를 의미한다. 상기 용어는 "전장"의 가공되지 않는 TIGIT 및 세포 내에서 가공 생산된 어느 형식의 TIGIT 또는 그의 어느 프래그먼트를 포함한다. 상기 용어는 천연에 존재하는 TIGIT의 변이체, 예를 들어 스플라이스 변이체 또는 대립 변이체(allelic variant)를 더 포함한다. 일 실시예에서, TIGIT란 인간과 게잡이 원숭이로부터 유래된 TIGIT 전장 또는 그 프래그먼트(예컨대 신호 펩타이드가 결핍된 성숙한 프래그먼트)를 의미한다. 일 실시예에서, 인간 TIGIT란 Genbank 등록번호 NP_776160.2 (SEQ ID NO: 31)인 아미노산 잔기 22-244 서열과 일치하는 성숙한 TIGIT(아미노산 잔기 1-21은 리더 펩타이드(leader peptide))를 의미한다. 일 실시예에서, 인간 TIGIT란 Genbank 등록번호 NP_776160.2인 아미노산 잔기 22-141 서열과 일치하는 TIGIT 세포 외 도메인을 의미한다. 일 실시예에서, 게잡이 원숭이(Wacaca fascicuiaris)의 TIGIT란 Genbank 등록번호 XP_005548158.1인 아미노산 잔기 22-245 서열과 일치하는 TIGIT를 의미한다.

“백분율(%) 아미노산 서열 동일성”의 정의는 상기 서열을 정렬하여(필요 시 갭 도입) 최대 백분율의 서열 동일성을 획득하고, 어떤 보존적 치환(conservative substitution)도 서열 동일성의 일부로 간주하지 않은 후, 후보 서열 중에서의 아미노산 잔기 대 참조 표준 폴리펩타이드 서열 중의 동일한 아미노산 잔기의 백분율을 의미한다. 백분율 아미노산 서열 동일성을 측정하기 위해서는 당업계의 각종 방법을 사용하여 서열 정렬을 실시할 수 있으며, 예를 들어 대중적으로 획득 가능한 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 MEGALIGN(DNASTAR) 등과 같은 컴퓨터 소프트웨어를 사용할 수 있다. 본 분야 당업자는 비교될 서열의 전장에 대해 최대 정렬을 획득하는데 필요한 어느 알고리즘을 포함하여, 정렬 측정에 적합한 파라미터를 결정할 수 있다.

"면역응답"이란, 예를 들어 림프구, 항원 제시 세포(antigen-presenting cell), 식세포(phagocytes), 과립구(granulocytes) 및 상기 세포 또는 간에서 생성되는 가용성 거대 분자(항체, 사이토카인(cytokine)과 보체(complement) 포함)의 작용을 의미하며, 상기 작용은 침입한 병원체, 병원체에 감염된 세포 또는 조직, 암세포 또는 자가 면역 또는 병리성 염증인 상황에서의 정상인의 세포 또는 조직을 인체로부터 선택적으로 손상, 파괴 또는 제거시키는 결과를 초래한다.

"신호 전달 경로"또는 "신호 전달 활성"이란 통상적으로 단백질 간의 상호작용, 예컨대 성장인자(growth factor)가 수용체에 결합됨으로 인해 촉진되는 생화학적 인과관계를 말하며, 상기 관계는 신호가 세포의 일부분으로부터 세포의 다른 부분으로 전달되는 결과를 초래한다. 일반적으로 전달은 신호 전이를 야기하는 일련의 반응 중의 하나 이상의 단백질 상의 하나 이상의 티로신, 세린, 또는 트레오닌 잔기의 특정 인산화를 포함한다. 마지막 두 번째 과정은 통상적으로 세포핵 이벤트를 포함하며, 따라서 유전자 발현의 변화를 초래한다.

용어 "활성"과 "생물 활성", 또는 용어 "생물 성질"과 "생물 특징"은 여기서는 교환하여 사용이 가능하며, 또한 에피토프/항원 친화력과 특이성, 체내 또는 체외 중화 또는 TIGIT 활성 길항 능력, IC50, 항체의 체내 안정성과 항체의 면역원 성질을 포함하되, 이에 한정되지 않는다. 본 분야에서 공지의 항체의 기타 동정(identification) 가능한 생물학적 성질 또는 특징은, 예를 들어 교차반응성(즉 통상적으로 표적 펩타이드와의 비인간 상동체, 또는 기타 단백질 또는 조직과의 교차반응성), 및 포유동물 세포 중 단백질의 고 발현 수준을 유지하는 능력을 포함한다. 본 분야의 공지의 기술을 사용하여 앞에서 언급한 성질 또는 특징을 관찰, 측정 또는 평가하였으며, 상기 기술은 ELISA, FACS 또는 BIACORE 플라즈마 공명 분석, 무제한적 체외 또는 체내 중화 측정, 수용체 결합, 사이토카인 또는 성장인자의 생성 및/또는 분비, 신호 전달 및 상이한 기원(인류, 영장류 또는 기타 어느 기원)의 조직 절편의 면역 조직 화학을 포함하되, 이에 한정되지 않는다.

"항체"란 필요한 생물 활성을 갖는 어느 형식의 항체를 의미한다. 따라서, 가장 넓은 의미로 사용되며, 구체적으로는, 단일클론 항체(전장 단일클론 항체 포함), 다중클론 항체, 다중 특이성 항체(예를 들어 이중 특이성 항체), 인간화 항체, 완전 인간 항체, 키메라 항체와 낙타화(camelized) 단일 도메인 항체를 포함하되, 이에 한정되지 않는다.

"분리 항체"란 결합 화합물의 정제된 상태를 말하며, 또한 이러한 경우 상기 분자에 대체로 다른 생물 분자, 예를 들어 핵산, 단백질, 지질, 당 또는 세포 파편 및 생장 배지와 같은 기타 물질이 포함되어 있지 않음을 의미한다. 이들이 본문에 따른 결합 화합물의 실험 또는 치료를 명백하게 간섭하는 양으로 존재하지 않는 한, 용어 "분리(된)"이란 이러한 물질이 전혀 존재하지 않거나 또는 물, 완충액 또는 염이 존재하지 않는다는 것을 의미하지는 않는다.

"단일클론 항체"란 기본 균질 항체군으로부터 획득되는 항체를 말하며, 즉 상기 군을 구성하는 각 항체는 자연에 소량으로 존재할 수 있는 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 단일클론 항체는 고도로 특이적이며, 단일 항원 에피토프를 대상으로 한다. 이에 비해, 일반(다중클론) 항체의 조제물은 통상적으로 각기 다른 에피토프(또는 각기 다른 에피토프에 대해 특이성을 갖는)를 대상으로 하는 다량의 항체를 포함한다. 수식어 "단일클론"이란 기본 균질 항체군으로부터 획득되는 항체의 특성을 나타내며, 어떤 특정한 방법을 통해 항체를 생성해야 하는 것으로 해석해서는 안 된다.

"전장 항체"는 자연적으로 존재 시 4가닥의 펩타이드 사슬을 포함하는 면역글로불린 분자로서, 두 가닥의 중(H)쇄(전장일 때 약 50kDa 내지 70kDa)와 2가닥의 경(L)쇄(전장일 때 약 25kDa)가 이황화 결합(disulfide bond)을 통해 서로 연결된다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변영역(heavy chain variable region)(본문에서는 VH로 약칭함)과 중쇄 불변영역(heavy chain constant region)(본문에서는 CH로 약칭함)으로 구성된다. 중쇄 불변영역은 3개의 도메인 CH1, CH2와 CH3으로 구성된다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변영역(본문에서는 VL로 약칭함)과 경쇄 불변영역으로 구성된다. 경쇄 불변영역은 1개의 도메인 CL로 구성된다. VH와 VL 영역은 높은 가변성을 지닌 상보성 결정 영역(complementarity determining region)(CDR)과 그 간격이 더욱 보존적인 프레임워크 영역(FR)으로 칭하는 영역으로 더 세분화될 수 있다. 각각의 VH 또는 VL 영역은 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4의 순서에 따라 아미노기 말단으로부터 카르복실기 말단까지 배열되는 3개의 CDR와 4개의 FR로 구성된다. 중쇄와 경쇄의 가변영역에는 항원과 상호 작용하는 결합 도메인이 함유되어 있다. 항체의 불변영역은 면역글로블린 단백질의 숙주 조직 또는 인자(면역시스템의 각종 세포(예를 들어 효과기 세포(effector cell))와 고전적 보체 시스템(classical complement system)의 제1성분(Clq) 포함)에 대한 결합을 매개할 수 있다.

항체("패런털 항체(parental antibody)")의 "항원 결합 프래그먼트"는 항체의 프래그먼트 또는 유도체를 포함하며, 통상적으로 패런털 항체의 항원 결합영역 또는 가변영역(예를 들어 하나 이상의 CDR)의 적어도 하나의 프래그먼트를 포함하고, 이는 패런털 항체의 적어도 일부 결합 특이성을 유지한다. 항원 결합 프래그먼트의 구현예는 Fab, Fab', F(ab')2와 Fv 프래그먼트; 이중항체(Diabody); 선형 항체; sc-Fv와 같은 단쇄 항체 분자; 항체 프래그먼트로부터 형성되는 나노항체(nanobody) 및 다중특이성 항체를 포함하되, 이에 한정되지 않는다. 항원의 결합 활성이 몰 농도의 기초 상에 표시될 때, 결합 프래그먼트 또는 유도체는 통상적으로 그 항원 결합 활성의 적어도 10%를 유지한다. 바람직하게는 결합 프래그먼트 또는 유도체는 패런털 항체의 항원 결합 친화력의 적어도 20%, 50%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 100% 또는 그 이상을 유지한다. 또한 항체의 항원 결합 프래그먼트에는 그 생물 활성을 뚜렷하게 변화시키지 않는 보존적이거나 또는 비보존적인 아미노산 대체물(항체의 "보존성 변이체" 또는 "기능적 보존성 변이체"라고 칭함)을 포함할 수 있는 것으로 더 예측된다. 용어 "결합 화합물"이란 항체 및 그 결합 프래그먼트 두 가지를 의미한다.

"단쇄 Fv" 또는 "scFv"항체란 항체의 VH와 VL 도메인을 포함하는 항체 프래그먼트를 의미하는 바, 여기서 이러한 도메인은 단일 가닥의 폴리펩타이드 사슬에 존재한다. Fv 폴리펩타이드는 일반적으로 VH와 VL 도메인 사이의 폴리펩타이드 링커를 더 포함하며, 이는 scFv가 항원 결합에 필요한 구조를 형성할 수 있도록 한다.

"도메인 항체"는 중쇄 가변영역 또는 경쇄 가변영역만 함유하는 면역기능성 면역글로불린 프래그먼트이다. 일부 상황에서, 2개 또는 그 이상의 VH 영역은 펩타이드 링커와 공유적으로(covalently) 연결되어 2가 도메인 항체를 형성한다. 2가 도메인 항체의 2개의 VH 영역은 동일하거나 또는 상이한 항원을 표적으로 할 수 있다.

"2가 항체"는 2개의 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 경우, 2개의 결합 부위는 동일한 항원 특이성을 지닌다. 그러나, 2가 항체는 이중 특이성인 것일 수 있다.

"이중항체"란 2개의 항원 결합 부위를 갖는 소 항체 프래그먼트를 말하며, 상기 프래그먼트는 동일한 폴리펩타이드 사슬(VH-VL 또는 VL-VH) 중 경쇄 가변 도메인(VL)과 연결되는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다. 동일한 사슬의 2개의 도메인 사이를 페어링하지 못할 정도로 짧은 링커를 사용하여, 상기 도메인을 다른 사슬의 상보성 도메인과 페어링시켜 2개의 항원 결합 부위를 생성한다.

"키메라 항체"는 제1항체의 가변 도메인과 제2항체의 불변 도메인을 갖는 항체로서, 여기서 제1항체와 제2항체는 상이한 종으로부터 유래한 것이다. 통상적으로 가변 도메인은 설치류 동물 등 실험 동물의 항체("패런털 항체")로부터 획득되고, 불변 도메인의 서열은 인간 항체로부터 획득되므로, 패런털 설치류 항체와 비교하여, 획득되는 키메라 항체는 인간 피험자에서 이상 면역응답을 유도할 가능성이 비교적 낮다.

"인간화 항체"란 인간과 비인간(예를 들어 마우스, 래트) 항체로부터의 서열을 함유하는 항체 형식을 의미한다. 일반적으로, 인간화 항체는 대체로 모든 적어도 하나, 통상적으로 2개의 가변 도메인을 포함하며, 여기서 모든 또는 대체로 모든 초가변 루프(hypervariable loop)는 비인간 면역글로불린의 초가변 루프에 해당하고, 모든 또는 대체로 모든 프레임워크(FR) 영역은 인간 면역글로불린 서열의 프레임워크 영역이다. 인간화 항체는 선택적으로 적어도 일부의 인간 면역글로불린 불변영역(Fc)을 포함할 수 있다.

"완전 인간 항체(Full human antibody)"란 인간 면역글로불린 서열만 포함하는 항체를 의미한다. 마우스, 마우스의 세포 또는 마우스 세포로부터 유래된 하이브리도마에서 생성되는 경우, 즉 완전 인간 항체는 마우스 당사슬(sugar chain)을 함유할 수 있다. 마찬가지로, "마우스 항체"란 마우스의 면역글로불린 서열만 포함하는 항체를 의미한다. 또는, 래트, 래트 세포 또는 래트 세포로부터 유래된 하이브리도마에서 생성되는 경우, 즉 완전 인간 항체는 래트 당사슬을 함유할 수 있다. 마찬가지로, "래트 항체"란 래트의 면역글로불린 서열만 포함하는 항체를 의미한다.

“동종형”항체란 중쇄 불변영역 유전자가 제공하는 항체 종류(예를 들어, IgM, IgE, IgGl, IgG2 또는 IgG4와 같은 IgG)를 의미한다. 동종형은 이러한 종류 중 하나의 변형 형식(modified form)을 더 포함하며, 여기서 변형은 이펙터 기능 또는 Fc 수용체에 대한 결합을 강화시키거나 또는 약화시키는 등과 같은 Fc 기능을 변경시키기 위해 발생된다.

용어 “PD-1 축 길항제”란 PD-1 축 결합 리간드와 하나 이상의 그의 결합 리간드의 상호작용을 억제함으로써, PD-1 신호 전달축으로부터 유래된 신호 전달인 T 세포 기능 장애를 제거하는 분자를 의미하며, 하나의 결과는 T 세포 기능(예를 들어 증식, 사이토카인 생성, 표적세포 살상)의 회복 또는 강화이다. 본문에서 사용되는 바와 같이, PD-1 축 길항제는 PD-1 길항제(예를 들어 항 PD-1 항체), PD-Ll 길항제(예를 들어 PD-Ll 항체) 및 PD-L2 길항제(예를 들어 항 PD-L2 항체)를 포함한다.

용어 “PD-1 길항제”란 PD-1과 하나 이상의 그의 결합 리간드(예컨대 PD-Ll，PD-L2)의 상호작용으로부터 유래된 신호 전달을 감소, 차단, 억제, 제거 또는 간섭하는 분자를 의미한다. 일부 실시예에서, PD-1 길항제는 PD-1에 하나 이상의 그의 결합 리간드가 결합하는 것을 억제하는 분자이다. 일부 구체적인 실시예에서, PD-1 길항제는 PD-1에 PD-Ll 및/또는 PD-L2가 결합하는 것을 억제한다. 예를 들어, PD-1 길항제는 PD-1과 PD-Ll 및/또는 PD-L2와의 상호작용으로부터 유래된 신호 전달을 감소, 차단, 억제, 제거 또는 간섭하는 항 PD-1 항체, 그 항원 결합 프래그먼트, 면역 아데신(Immunoadhesin), 융합 단백질, 올리고 펩타이드 및 기타 분자를 포함한다. 일 실시예에서, PD-1 길항제는 T 림프구 상의 발현을 거친 세포 표면 단백질 또는 세포 표면 단백질에 의해 매개되는 네거티브 보조자극 신호(negative costimulatory signal)(PD-1의 매개에 의한 신호 전달)를 감소시킴으로써, 기능 장애성 T 세포의 기능 장애성이 그다지 크지 않도록 한다(예를 들어 항원 인식에 대한 이펙터의 응답 강화). 일부 실시예에서, PD-1 길항제는 항 PD-1 항체이다. 일 구체적인 실시예에서, PD-1 길항제는 nivolumab, pembrolizumab, pidilizumab 또는 WO2014/206107에 공개된 어느 항 PD-1 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트이다.

용어 “PD-L1 길항제”란 PD-Ll과 하나 이상의 그의 결합 리간드(예컨대 PD-1，B7-1)의 상호작용으로부터 유래된 신호 전달을 감소, 차단, 억제, 제거 또는 간섭하는 분자를 의미한다. 일부 실시예에서는 PD-Ll에 그의 결합 리간드가 결합하는 것을 억제하는 분자이다. 일 특정 측면에서, PD-Ll 길항제는 PD-Ll에 PD-1 및/또는 B7-1이 결합하는 것을 억제한다. 일부 실시예에서, PD-Ll 길항제는 PD-L1과 하나 이상의 그의 결합 리간드(예컨대 PD-1, B7-1)의 상호작용으로부터 유래된 신호 전달을 감소, 차단, 억제, 제거 또는 간섭하는 항 PD-L1항체, 그 항원 결합 프래그먼트, 면역 아데신(Immunoadhesin), 융합 단백질, 올리고 펩타이드 및 기타 분자를 포함한다. 일 실시예에서, PD-Ll 길항제는 T 림프구 상의 발현을 거친 세포 표면 단백질 또는 세포 표면 단백질에 의해 매개되는 네거티브 보조자극 신호(negative costimulatory signal)(PD-Ll을 통해 매개한 신호 전달)를 감소시킴으로써, T 세포의 활성을 강화시킨다(예를 들어 항원 인식에 대한 이펙터의 응답 강화). 일부 실시예에서, PD-Ll 길항제는 항 PD-Ll 항체이다. 일 구체적인 측면에서, 항 PD-Ll 항제는 atezolizumab, durvalumab 또는 WO2018/153320에 공개된 어느 항 PD-L1 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트이다.

용어 "PD-L2 길항제"란 PD-L2와 하나 이상의 그의 결합 리간드(예컨대 PD-1)의 상호작용으로부터 유래된 신호 전달을 감소, 차단, 억제, 제거 또는 간섭하는 분자를 의미한다. 일부 실시예에서, PD-L2 길항제는 PD-L2에 하나 이상의 그의 결합 리간드가 결합하는 것을 억제하는 분자이다. 일 특정 측면에서, PD-L2 길항제는 PD-L2에 PD-1이 결합하는 것을 억제한다. 일부 실시예에서, PD-L2 길항제는 PD-L2와 하나 이상의 그의 결합 리간드(예컨대 PD-1)의 상호작용으로부터 유래된 신호 전달을 감소, 차단, 억제, 제거 또는 간섭하는 항 PD-L2 항체, 그 항원 결합 프래그먼트, 면역 아데신(Immunoadhesin), 융합 단백질, 올리고 펩타이드 및 기타 분자를 포함한다. 일 실시예에서, PD-L2 결합 길항제는 T 림프구 상의 발현을 거친 세포 표면 단백질 또는 세포 표면 단백질에 의해 매개되는 네거티브 보조자극 신호(negative costimulatory signal)(PD-L2의 매개에 의한 신호 전달)를 감소시킴으로써, T 세포의 활성을 강화시킨다(예를 들어 항원 인식에 대한 이펙터의 응답 강화).

용어 “etigilimab”이란 CAS 신청 번호: 2044984-83-8 서열과 일치하는 항체 또는 그 동종형 항체를 의미한다. 일 구체적인 실시예에서, 상기 etigilimab은 그의 IgG4 동종형이다.

용어 "핵산" 또는 "폴리뉴클레오티드"란 디옥시리보헥산(DNA) 또는 리보핵산(RNA) 및 이들의 단일 사슬 또는 이중 사슬 형식을 띠는 폴리머를 의미한다. 명확하게 한정하지 않는 한, 용어는 기준 핵산과 유사한 결합성질을 구비하며 천연에 존재하는 뉴클레오티드와 유사한 방식으로 대사되는 이미 알려져 있는 천연 뉴클레오티드 유사물을 함유한 핵산을 포함한다(Kariko 등의 미국 특허 제8,278,036호 참조, 유리딘이 슈도유리딘으로 대체된 mRNA 분자, 상기 mRNA 분자를 합성하는 방법 및 체내에 치료성 단백질을 전달하는 방법을 공개였다). 별도로 지적하지 않는 한, 특정 핵산 서열은 보존적으로 변형된 그의 변이체(예를 들어 퇴화 코돈(degenerate codon) 치환), 대립 유전자(allele), 오솔로그(ortholog), SNP와 상보 서열 및 명확히 제시된 서열도 암묵적으로 더 포함한다. 구체적으로, 퇴화 코돈 치환은 그 중 하나 이상의 선택된(또는 전체) 코돈의 세 번째 위치가 혼합 염기 및/또는 디옥시이노신(Deoxyinosine) 잔기에 의해 치환된 서열을 생성함으로써 구현될 수 있다(Batzer 등, Nucleic Acid Res. 19:5081(1991); Ohtsuka 등, J. Biol. Chem. 260:2605-2608(1985); 및 Rossolini 등, Mol. Cell. Probes 8:91-98(1994)).

"구조체(construct)"란 어떤 기원으로부터 유래된, 유전체와 통합되거나 자율적으로 복제할 수 있는 모든 재조합 폴리뉴클레오티드 분자(예를 들어 플라스미드, 코스미드(cosmid), 바이러스, 자율복제 폴리뉴클레오티드 분자, 박테리오파지(bacteriophage) 또는 선형 혹은 고리형 단일 사슬 또는 이중 사슬 DNA 또는 RNA 폴리뉴클레오티드 분자) 중, 이미 하나 이상의 폴리뉴클레오티드 분자가 기능 조작 방식으로 연결(즉, 조작 가능하게 연결)되어 폴리뉴클레오티드 분자를 구성한 것을 의미한다. 재조합 구조체는 통상적으로 전사 개시 조절 서열에 조작 가능하게 연결되는 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함하며, 이러한 서열은 폴리뉴클레오티드가 숙주 세포 중에서 전사되도록 유도할 수 있다. 이종(heterologous) 및 비이종(즉, 내생(endogenous)) 프로모터를 사용하여 본 발명의 핵산의 발현을 유도할 수 있다.

"벡터"란 어느 재조합 폴리뉴클레오티드 구조체를 의미하며, 상기 구조체는 형질전환 목적에 사용될 수 있다(즉 이종 DNA를 숙주세포에 도입한다). 벡터 유형 중의 하나는 "플라스미드"로서, 별도의 DNA 분절(segment)을 연결할 수 있는 고리형 이중 사슬 DNA 루프를 의미한다. 벡터의 또 다른 유형은 바이러스 벡터로서, 별도의 DNA 분절을 바이러스 유전체에 연결할 수 있다. 어떤 벡터들은 도입된 숙주세포 중에서 자율적으로 복제될 수 있다(예를 들어, 세균 복제 개시점을 갖는 세균 벡터 및 에피솜(episomal) 포유동물 벡터). 숙주세포에 도입된 후, 기타 벡터(예를 들어 비에피솜 포유동물 벡터)가 숙주세포의 유전체에 통합되며, 또한 이로 인해 숙주 유전체와 함께 복제된다. 이밖에, 어떤 벡터들은 조작적으로 연결되는 유전자의 발현을 유도할 수 있다. 본문에서 이러한 벡터를 "발현 벡터"라 칭한다.

본문에서 사용되는 용어인 "발현 벡터"란 숙주세포로 형질전환, 형질주입 또는 형질도입 시 목적 유전자를 복제 및 발현할 수 있는 핵산 분자를 의미한다. 발현 벡터는 하나 이상의 표현형(phenotypic) 선택 마커(Selectable marker) 및 복제 개시점을 포함함으로써, 벡터의 유지를 보장하고, 필요한 경우 숙주 내부에서 증폭을 제공한다.

세포 또는 수용체에 사용되는 "활성화", "자극" 및 "처리"는 본문에서 별도로 또는 명확하게 규정하지 않는 한, 동일한 의미를 가질 수 있으며, 예를 들어 세포 또는 수용체는 리간드를 통해 활성화, 자극 또는 처리된다. "리간드"는 사이토카인, 사이토카인의 변이체, 유사체, 돌연변이 단백질과 항체로부터 유래된 결합 화합물과 같은 천연 및 합성 리간드를 포함한다. "리간드"는 사이토카인의 펩타이드 모사체(peptide mimetics) 및 항체의 펩타이드 모사체와 같은 소분자를 더 포함한다. "활성화"란 내부 매커니즘 및 외부 또는 환경 요소를 통해 조절하는 세포 활성화를 의미할 수 있다. "응답/반응", 예를 들어 세포, 조직, 기관 또는 생물체의 응답은 생화학적 또는 생리적 행위(예를 들어 생물 구역 실내의 농도, 밀도, 점착 또는 이동, 유전자 발현 속도 또는 분화 상태)의 변화를 포함하며, 여기서 상기 변화는 활성화, 자극 또는 처리와 관련이 있거나, 또는 예를 들어 유전자 프로그래밍 등 내부 매커니즘과 관련이 있다.

본문에서 사용된 바와 같이, 일 실시예에서 어떠한 질환 또는 증상의 "치료" 또는 "의료처치"란 질환 또는 증상을 개선하는 것(즉, 질환의 진도 또는 임상 증상 중의 적어도 하나를 경감 또는 저지 또는 감소시키는 것)을 의미한다. 다른 실시예에서, "치료" 또는 "의료처치"란 환자가 식별할 수 없는 물리적인 파라미터를 포함할 가능성이 있는 적어도 하나의 신체 파라미터를 완화 또는 개선하는 것을 의미한다. 다른 실시예에서, "치료" 또는 "의료처치"란 신체적(예를 들어 식별 가능한 증상의 안정), 생리적(예를 들어, 신체 파라미터의 안정) 또는 이러한 두 측면에서의 질환 또는 증상을 조절하는 것을 의미한다. 본문에서 명확하게 설명하지 않는 한, 질환의 치료 및/또는 예방을 평가하기 위한 방법은 본 분야에서 이미 알려져 있는 것이다.

"피험자"는 모든 인간 또는 비인간 동물을 포함한다. 용어 "비인간 동물"이란 모든 척추동물, 예를 들어 비인간 영장동물, 면양, 개, 고양이, 말, 소, 닭, 양서동물, 파충류 동물 등과 같은 포유동물과 비포유동물을 의미한다. 본문에서 사용된 바와 같이, 용어 "cyno" 또는 "사이노몰거스 원숭이"란 게잡이 원숭이를 의미한다.

하나 이상의 기타 치료제를 “연합”하는 투여는 동시(공동) 투여 및 임의의 순서의 연속 투여를 포함한다.

"치료 유효량", "치료 유효 용량" 및 "유효량"이란 본 발명의 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트가 단독으로 또는 기타 치료약물과 조합하여 세포, 조직 또는 피험자에게 투여될 때, 하나 이상 질환 또는 증상, 또는 상기 질환 또는 증상의 발전을 효과적으로 예방 또는 개선할 수 있는 양을 의미한다. 치료 유효 용량이란 또한 증상을 개선시키기에 충분한 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트의 양을 의미하기도 하며, 예를 들어 관련 의학적 증상을 치료, 치유, 예방 또는 개선하거나 또는 이러한 증상의 치료, 치유, 예방 또는 개선 속도를 높일 수 있는 양이다. 개체에 대해 단독으로 부여된 활성 성분을 투여하는 경우, 치료 유효 용량은 상기 성분만 의미한다. 조합하여 투여 시, 조합, 순차적 투여 또는 동시 투여를 막론하고, 치료 유효 용량이란 치료 효과를 일으키는 활성 성분의 종합적인 양을 의미한다. 치료제의 유효량은 진단표준 또는 파라미터를 적어도 10%, 통상적으로는 적어도 20%, 바람직하게는 적어도 약 30%, 더욱 바람직하게는 적어도 40%, 가장 바람직하게는 적어도 50% 이상 향상시킨다.

“암”및“암성”이란 포유동물 중에서 통상적으로 제어되지 않는 세포 성장이 특징인 질환을 의미한다. 이러한 정의에는 양성과 악성 암 및 휴면 종양 또는 미세전이(micrometastasis)를 포함한다. 암의 예로는 암종, 림프종, 모세포종, 육종, 및 백혈병을 포함하되 이에 한정되지 않는다. 이러한 암의 더욱 구체적인 예는 편평세포암종, 폐암(소세포폐암, 비소세포폐암, 폐의 선암, 및 폐의 편평세포암 포함), 복막암, 간세포암, 위의 암종 또는 위암(위장암 포함), 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간종양(hepatoma), 유선암, 결장암, 결장직장암, 자궁내막암 또는 자궁암, 이하선암, 신장암 또는 신장의 암종, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간의 암종, 및 각종 유형의 두부 및 경부암, 및 B세포 림프종(저급/여포성 비호지킨 림프종(NHL), 소림프구(SL) NHL, 중급/여포성 NHL, 중급 미만성 NHL, 고급 면역모세포 NHL, 고급 림프모구 NHL, 고급 소 비균열 세포(Small non-cleaved cell) NHL, 축적질환(bulky disease) NHL, 맨틀세포 림프종, AIDS 관련 림프종, 및 발덴스트룀(Waldenstrom) 거대글로불린혈증), 만성 림프구 백혈병(CLL), 급성 림프모구 백혈병(ALL), 털세포 백혈병, 만성 골수세포 백혈병, 및 이식 후 림프증식 질환(PTLD), 및 모반증(phakomatoses), 수종(edema)(예를 들어 뇌종양과 관련됨) 및 메이그(Meigs) 증후군과 관련된 비정상적 혈관 증식을 포함하되, 이에 한정되지 않는다.

항 TIGIT 항체 및 그의 생성

용어 “항 TIGIT 항체”, “항 TIGIT”, “TIGIT 항체” 또는 “TIGIT가 결합된 항체”란 상기 항체가 TIGIT를 표적으로 하는 진단제 및/또는 치료제로 사용될 수 있도록 충분한 친화력으로 TIGIT 단백질 또는 그 프래그먼트에 결합하는 것을 의미한다.

항체를 생성하기 위한 적합한 방법이라면 어떤 것이든 본 발명의 항체를 생성하는 데 사용될 수 있다. 적합한 형식의 TIGIT라면 모두 항체를 생성하는 면역원(항원)으로 사용될 수 있다. 비제한적인 예를 통해, 어느 TIGIT 변이체 또는 그 프래그먼트이든지 모두 면역원으로 사용될 수 있다. 일부 실시방식에서, 마우스의 단일클론 항 인간 TIGIT 항체를 생성하는 하이브리도마 세포는 본 분야에서 공지의 방법을 통해 생성할 수 있다. 이러한 방법은 최초로 Kohler 등(1975)(Nature 256: 495-497)이 연구 개발한 하이브리도마 기술을 포함하되 이에 한정되지 않는다. 바람직하게는 표준 프로토콜에 따르면, 마우스의 비장 세포를 분리하여, PEG 또는 전기융합을 통해 마우스의 골수종 세포계와 융합시킨다. 이후 TIGIT 억제 활성을 지닌 항체를 분비하는 하이브리도마 세포를 선별한다. 본 발명의 하이브리도마 세포 면역글로불린 가변영역의 DNA 서열은 퇴화 프라이머(degenerate primer) PCR에 기반한 방법을 이용하여 측정할 수 있다.

설치동물(예를 들어 마우스)로부터 유래된 항체는 체내에서 치료 약물로 사용 시 불필요한 항체 면역원성을 야기할 수 있으며, 반복 사용 시 인체에 치료성 항체에 대한 면역 응답을 초래한다. 이러한 면역 응답은 적어도 치료 효과 상실을 초래하며, 심각한 경우에는 잠재적으로 치명적인 알레르기 반응을 일으킨다. 설치동물 항체의 면역원성을 낮추는 방법 중 하나는 마우스 가변영역과 인간 불변영역을 융합시키는 키메라 항체의 생성을 포함한다(Liu 등(1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 3439-43). 그러나, 키메라 항체에서 온전한 설치동물 가변영역의 유지는 여전히 환자에게 유해한 면역 원성을 야기할 수 있다. 설치동물 가변 도메인의 상보성 결정 영역(CDR) 루프를 인간 프레임워크에 이식하는(즉 인간화) 방법이 이미 설치동물 서열을 최소화하는 데 이용되었다(Jones 등(1986)Nature 321: 522; Verhoeyen 등(1988)Science 239: 1534).

일부 실시예에서, 본 발명의 키메라 또는 인간화 항체는 상기 제조된 마우스 단일클론 하이브리도마 항체의 서열을 기반으로 제조될 수 있다. 중쇄와 경쇄 면역글로불린을 인코딩한 DNA는 목표 마우스 하이브리도마로부터 획득할 수 있으며, 또한 표준 분자생물학 기술을 이용하여 비마우스(예를 들어 인간) 면역글로불린 서열을 포함하도록 공학적으로 개조한다.

일부 실시예에서, 본 발명에 가술한 키메라 TIGIT 항체는 본 분야에서 이미 알려져 있는 방법을 사용하여 하이브리도마로부터 유래된 면역글로불린 중쇄와 경쇄 가변영역을 인간 IgG 불변영역과 효과적으로 연결시켜(예를 들어 Cabilly 등의 미국 특허제4,816,567호 참조), 키메라성 중쇄 및 키메라성 경쇄를 획득할 수 있다. 일부 실시예에서, 본 발명의 키메라 항체에 포함되는 불변영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4와 같은 인간 IgG의 어느 아형으로부터 선택될 수 있으며, 바람직하게는 IgG4이다.

일부 실시예에서, 본 발명의 키메라 TIGIT 항체는 키메라형 경쇄와 키메라형 중쇄 발현 플라스미드의 “혼합 및 매칭된” 형질주입 발현 세포에 의해 획득될 수 있으며, 이러한 “혼합 및 매칭된” 항체의 TIGIT 결합은 상기 결합 측정 및 기타 일반적인 결합 측정(예를 들어, ELISA)을 사용하여 테스트할 수 있다.

본 발명에 따른 항체의 가변영역 CDR의 정확한 아미노산 서열 경계는 항체의 3차원 구조 및 CDR 루프의 토폴로지학에 기반한 Chothia(Chothia 등. (1989)Nature 342: 877-883，Al-Lazikani 등,“Standard conformations for the canonical structures of immunoglobulins”, Journal of Molecular Biology, 273, 927-948(1997)), 항체 서열 가변성에 기초한 Kabat(Kabat 등, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 제4판, U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987)), AbM(University of Bath)，Contact(University College London)，국제 ImMunoGeneTics database (IMGT)(1999 Nucleic Acids Research, 27, 209-212), 및 다량의 결정체 구조를 이용한 유사도 전파 클러스터링(affinity propagation clustering)에 기반한 North CDR 정의를 포함하는 많은 알려져 있는 방안 중 에서 어느 방안을 사용하여 확정할 수 있다. 본 발명의 항체의 CDR은 본 분야의 당업자가 본 분야에서의 어느 방안(예를 들어 상이한 할당 시스템(assignment system) 또는 조합)에 따라 경계를 확정될 수 있다.

상이한 할당 시스템에 기반하여 획득된 동일한 항체의 가변영역의 CDR 경계는 차이가 있을 수 있다는 점에 유의하여야 한다. 즉 상이한 할당 시스템에 의해 정의된 동일한 항체 가변영역의 CDR 서열에는 차이가 있다. 따라서, 본 발명에 정의된 구체적인 CDR 서열로 항체를 한정 시, 상기 항체의 범위는 가변영역 서열에 상기 구체적인 CDR 서열을 포함하는 항체를 더 포함하지만, 다른 방안(예를 들어 상이한 할당 시스템 또는 조합)을 응용하였기 때문에, 소위 CDR 경계와 본 발명에서 정의된 구체적인 CDR 경계는 다르다.

상이한 특이성(즉, 항원마다 다른 결합 부위에 대하여)을 지닌 항체는 각기 다른 CDR을 갖는다. 비록 CDR가 항체와 항체 사이에서는 다르지만, CDR 내에 제한적인 수량의 아미노산 위치만 항원과의 결합에 직접적으로 관여한다. Kabat, Chothia, AbM, Contact와 North 방법 중 적어도 두 가지를 사용하여 최소 중첩 영역을 확정함으로써, 항원 결합을 위한 “최소 결합 단위”를 제공할 수 있다. 최소 결합 단위는 CDR의 하나의 하위 부분일 수 있다. 분 분야의 당업자가 이해하는 바와 같이, 항체 구조와 단백질의 접힘(protein folding)을 통해 CDR 서열의 나머지 부분의 잔기를 확정할 수 있다. 따라서, 본 발명은 본문에 제공된 어느 CDR의 변이체를 더 고려하였다. 예를 들어 하나의 CDR의 변이체에서, 최소 결합 단위의 아미노산 잔기는 변하지 않고 유지될 수 있으나, Kabat 또는 Chothia에 따라 정의된 나머지 CDR 잔기는 보존성 아미노산 잔기에 대체될 수 있다.

본 발명에 따른 인간화 항체는 본 분양에서 이미 알려져 있는 방법을 사용하여 마우스의 CDR 영역을 인간 생식세포(human germline) 프레임워크 영역에 삽입할 수 있다. Winter 등의 미국 특허 제5,225,539호 및 Queen 등의 미국 특허 제5,530,101호, 제5,585,089호, 제5,693,762호 및 제6,180,370호를 참조한다. 간단히 말해, 발명인은 NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/) 사이트 중의 인간 면역글로불린 유전자 데이터베이스를 통해 마우스 항체 가변영역의 cDNA 서열과 상동인 인간 생식세포(human germline) IgG 유전자를 검색하였으며, 원칙적으로 선택된 CDR의 그래프팅(grafting)을 통해 인간화를 구현하였다. 그러나, CDR 루프의 교환은 여전히 개시 항체와 동일한 결합 성질을 갖는 항체를 균일하게 생성할 수 없다. 인간화 항체에서, 종종 항원 결합 친화력을 유지하기 위하여 프레임 잔기(FR)(CDR 루프 지원에 참여하는 잔기)의 변경이 더 필요하다. 간단히 말하면, 인간화 변형 과정은 이하 단계와 관련이 있다: A. 각 후보 항체의 유전자 서열을 인간 배아 항체 유전자 서열과 비교하여, 상동성이 높은 서열을 찾는다; B. HLA-DR 친화성을 분석 고찰하여, 친화력이 낮은 인간 배아 프레임워크 서열을 선출한다; C. 컴퓨터 시뮬레이션 기술을 이용하고, 분자 도킹(molecular docking)을 응용하여 가변영역 및 그 주변의 프레임워크 아미노산 서열을 분석하고, 그 공간 입체 결합방식을 고찰한다. 정전기력, 반데르발스 힘(van der Waals force), 친소수성과 엔트로피(entropy value)의 계산을 통해, 각 후보 항체 유전자 서열 중 TIGIT와 작용할 수 있고 공간 프레임워크를 유지할 수 있는 핵심 아미노산 개체를 분석하여, 이를 이미 선택된 인간 배아 유전자 프레임워크에 다시 그래프팅하고, 이를 기초로 반드시 유지되어야 하는 프레임워크 영역의 아미노산 부위를 표준 구성(standard configuration)함으로써 인간화 항체를 합성한다.

일부 실시방식에서, 본 발명의 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 이미 아미노산 결실, 삽입 또는 치환을 통해 돌연변이 되었으나, 여전히 상기 항체(특히 상기 서열 중에 묘사한 CDR 영역 중)와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 지닌 항체들을 포함한다. 일부 실시예에서, 본 발명의 항체를 본 발명의 구체적인 서열 중에 묘사한 CDR 영역과 비교 시, CDR 영역 중 이미 아미노산 결실, 삽입 또는 치환을 통해 1, 2, 3, 4, 또는 5개를 초과하지 않는 아미노산 돌연변이가 실현되었다.

일부 실시예에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 중쇄 상보 결정영역 HCDR1、HCDR2와 HCDR3에서 선택되는 1개 내지 3개를 포함하며, 여기서 상기 HCDR1은 SEQ ID NO: 1 또는 11에서 선택된 아미노산서열과 일치하거나 또는 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 2 또는 12에서 선택된 아미노산서열과 일치하거나 또는 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하며, HCDR3은 SEQ ID NO: 3 또는 13에서 선택된 아미노산서열과 일치하거나 또는 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 경쇄 상보성 결정영역(complementarity determining region) LCDR1, LCDR2와 LCDR3 중에서 선택된 1개 내지 3개를 포함하며, 여기서 상기 LCDR1은 SEQ ID NO: 6 또는 16의 아미노산 서열과 일치하거나 또는 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 7 또는 17의 아미노산 서열과 일치하거나 또는 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하며, LCDR3은 SEQ ID NO: 8 또는 18의 아미노산 서열과 일치하거나 또는 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 중쇄 상보성 결정영역 LCDR1, LCDR2와 LCDR3을 포함하며, 여기서 상기 LCDR1은 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하며, LCDR3의 SEQ ID NO: 8인 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 중쇄 상보성 결정영역 LCDR1, LCDR2와 LCDR3을 포함하며, 여기서 상기 LCDR1은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하며, LCDR3은 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 중쇄 상보성 결정영역(HCDR1, HCDR2와 HCDR3)과 경쇄 상보성 결정영역(LCDR1, LCDR2와 LCDR3)을 포함하며, 여기서 상기 HCDR1은 SEQ ID NO: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 포함하며, HCDR3은 SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하며, LCDR2는 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하고 LCDR3은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 포함한다;

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 중쇄 가변영역(VH)을 포함하며, 상기 중쇄 가변영역(VH)은 SEQ ID NO: 4, 14, 21, 23, 25, 27 및 29에서 선택된 아미노산 서열과 일치하거나 또는 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 경쇄 가변영역(VL)을 포함하며, 상기 경쇄 가변영역(VL)은 SEQ ID NO: 9, 19, 22, 24, 26, 28 및 30에서 선택된 아미노산 서열과 일치하거나 또는 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 중쇄 가변영역(VH)과 경쇄 가변영역(VL)을 포함하며, 여기서 상기 VH는 SEQ ID NO: 4, 14, 21, 23, 25, 27 및 29에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열과 일치하거나 또는 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 및

상기 VL은 SEQ ID NO: 9, 19, 22, 24, 26, 28 및 30에서 선택된 아미노산 서열과 일치하거나 또는 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 중쇄 가변영역(VH)과 경쇄 가변영역(VL)을 포함하며, 여기서 상기 VH는 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL은 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 중쇄 가변영역(VH)과 경쇄 가변영역(VL)을 포함하며, 여기서 상기 VH는 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL은 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 중쇄 가변영역(VH)과 경쇄 가변영역(VL)을 포함하며, 여기서 상기 VH는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL은 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 중쇄 가변영역(VH)과 경쇄 가변영역(VL)을 포함하며, 여기서 상기 VH는 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL은 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 중쇄 가변영역(VH)과 경쇄 가변영역(VL)을 포함하며, 여기서 상기 VH는 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL은 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 중쇄 가변영역(VH)과 경쇄 가변영역(VL)을 포함하며, 여기서 상기 VH는 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL은 SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 중쇄 가변영역(VH)과 경쇄 가변영역(VL)을 포함하며, 여기서 상기 VH는 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL은 SEQ ID NO: 30의 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시방식에서, 본문에서 제공되는 항체의 Fc 영역에 하나 이상의 아미노산 변형을 도입하여, 이를 통해 Fc 영역 변이체를 생성할 수 있다. Fc 영역 변이체는 하나 이상의 아미노산 위치에 아미노산 변형(예를 들어 치환)을 포함하는 인간 Fc 영역 서열(예를 들어 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 Fc 영역)을 포함할 수 있다.

일부 실시방식에서, 항체의 하나 이상의 잔기가 시스테인 잔기를 통해 치환되는 "티오 MAb"와 같이, 시스테인을 통해 공학적으로 개조된 항체를 생성하는 것이 필요할 수 있다.

일부 실시방식에서, 본문에서 제공된 항체는 더 나아가 본 분야에서 이미 알려져 있는 것이면서 쉽게 획득할 수 있는 기타 비단백질 부분을 함유하도록 변형될 수 있다. 항체 유도 작용에 적합한 부분은 수용성 폴리머를 포함하되 이에 한정되지 않는다. 수용성 폴리머의 비제한적인 구현예로는, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜 공중합체, 카르복시메틸 셀룰로오스, 덱스트란, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐피롤리돈, 폴리-1,3-디옥산, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/무수말레산 공중합체, 폴리아미노산(호모폴리머 또는 랜덤 공중합체), 및 덱스트란 또는 폴리(n-에틸렌 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 호모폴리머, 폴리프로필렌옥사이드/에틸렌옥사이드 공중합체, 폴리옥시에틸화 폴리올(예를 들어 글리세린), 폴리비닐 알코올, 및 그의 혼합물을 포함하되, 이에 한정되지 않는다.

일부 실시예에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 이하 특성 중의 하나 이상을 구비한다: (1) 인간 TIGIT 단백질에 특이적으로 결합한다; (2) 게잡이 원숭이의 TIGIT와 교차 반응한다; (3) TIGIT와 PVR 및/또는 PVRL2의 결합을 억제한다; (4) TIGIT에 의해 매개된 활성 신호 전달을 억제한다; (5) PD-1 축 길항제의 T 세포에 대한 활성화 작용을 촉진한다; (6) 단독으로 또는 PD-1 축 길항제와 연합 사용 시 종양의 생장을 현저히 억제할 수 있다.

일부 실시예에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 프래그먼트는 약 1nM의 KD 또는 그보다 높은 친화력(예를 들어 lnM 내지2pM, 1nM, 100pM, 10pM 또는 2pM)으로 TIGIT에 특이적으로 결합한다. 일 실시예에서, 인간 TIGIT에 특이적으로 결합하는 본 발명의 항체는 게잡이 원숭이의 TIGIT와도 교차 반응한다. 본문에 따른 "교차 반응성"이란 항체와 기타 종으로부터 유래된 상동 단백질과 반응하는 능력을 의미한다. 항체가 인간 TIGIT에 특이적으로 결합하는지 여부는 본 분야에서 이미 알려져 있는 어느 측정법을 사용하여 확정할 수 있다. 본 분야에서 이미 알려져 있는 결합 친화력을 측정하는 분석의 구현예는 표면 플라즈몬 공명(예를 들어, BIACORE) 또는 유사 기술(예를 들어, ForteBio)을 포함한다.

일부 실시예에서, 본 발명에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 억제 활성을 지니며, 예를 들어 TIGIT의 발현(예를 들어 세포 표면의 TIGIT의 발현 억제), 활성 및/또는 신호 전달 억제, 또는 TIGIT와 PVR 및/또는 PVRL2 사이의 상호작용을 간섭한다. 본 발명이 제공하는 TIGIT 항체는 TIGIT(예를 들어 인간 TIGIT)와 결합하거나 또는 그와 상호작용 후 TIGIT의 발현 혹은 활성을 완전히 또는 부분적으로 감소시키거나 또는 조절한다. 항체와 인간 TIGIT 폴리펩타이드 및/또는 펩타이드 간의 상호작용 후, TIGIT의 생물학적 기능에 대한 감소 또는 조절은 완전하고 현저하고 또는 부분적이다. 본문에 따른항체와의 상호작용(예를 들어 결합)이 없을 때 TIGIT의 발현 또는 활성 수준과 비교하여, 항체가 존재할 때의 TIGIT의 발현 또는 활성 수준이 적어도 95% 감소(예를 들어 96％, 97％, 98％, 99％ 또는 100％ 감소)되었을 때, 상기 항체는 TIGIT의 발현 또는 활성을 완전히 억제할 수 있는 것으로 간주된다. 본문에 따른 항 TIGIT 항체와의 결합이 존재하지 않을 때, TIGIT의 발현 또는 활성 수준과 비교하여, TIGIT 항체가 존재할 때의 TIGIT의 발현 또는 활성 수준은 적어도 50% 감소(예를 들어 55％, 60％, 75％, 80％, 85％ 또는 90％ 감소)되었으며, 이때 상기 TIGIT 항체는 TIGIT의 발현 또는 활성을 현저히 억제할 수 있는 것으로 간주된다. 본문에 따른 항체와의 상호작용(예를 들어 결합)이 존재하지 않을 때 TIGIT의 발현 또는 활성 수준과 비교하여, TIGIT 항체가 존재할 때의 TIGIT의 발현 또는 활성 수준은 95% 감소(예를 들어 10％, 20％, 25％, 30％, 40％, 50％, 60％, 75％, 80％, 85％ 또는 90％ 감소)되었으며, 이때 상기 항체는 TIGIT의 발현 또는 활성을 부분적으로 억제할 수 있는 것으로 간주된다.

항체의 발현

일 측면에서, 본 발명은 하나 이상의 발현 벡터를 포함하는 숙주세포 및 본 발명에 따른 어느 항체 또는 그 프래그먼트를 생성하기 위한 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 상기 숙주세포를 배양하고, 상기 항체 또는 항원 결합 프래그먼트를 정제 및 회수하는 단계를 포함한다.

일 측면에서, 본 발명은 이상 어느 항 TIGIT 항체 또는 그 프래그먼트를 인코딩하는 핵산을 제공한다. 상기 핵산은 항체의 경쇄 가변영역 및/또는 중쇄 가변영역의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산을 포함하거나, 또는 항체의 경쇄 및/또는 중쇄의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산을 포함할 수 있다.

일 실시예에서, 상기 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터를 제공한다. 일 실시예에서, 벡터는 발현 벡터이다.

본 발명의 재조합 항체를 발현하기 위한 포유동물 숙주세포는 American Type Culture Collection(ATCC)에서 얻은 많은 불멸화 세포계(immortalized cell line)를 포함하며, 특히 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, NS0, SP2/0 세포, HeLa 세포, 어린 햄스터 신장(BHK) 세포, 원숭이 신장 세포(COS), 인간 간암 세포, A549 세포, 293T 세포 및 많은 기타 세포계를 포함한다. 포유동물의 숙주세포는 인간, 마우스, 래트, 개, 원숭이, 돼지, 산양, 소, 말 및 햄스터 세포를 포함한다. 어느 세포계가 높은 발현 수준을 지니는지 측정함으로써 유난히 바람직한 세포계를 선택한다.

일 실시예에서, 본 발명은 항 TIGIT 항체를 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은, 발현 벡터를 포유동물의 숙주세포에 도입하고, 숙주세포를 충분한 일정 시간 동안 배양하여, 항체가 숙주세포에 발현되도록 허용하거나, 또는 더욱 바람직하게는 항체가 숙주세포가 생장하는 배지에 분비되도록 허용함으로써 항체를 생성한다. 표준 단백질 정제 방법을 사용하여 배지로부터 항체를 회수할 수 있다.

상이한 세포계로부터 발현되거나 또는 유전자 변형 동물에서 발현될 가능성이 있는 항체는 각자 다른 당화(glycosylation)를 갖는다. 그러나, 본문에서 제공하는 핵산 분자를 통해 인코딩되거나 또는 본문에서 제공하는 아미노산 서열을 포함하는 모든 항체는 항체의 당화에 관계 없이 본 발명의 구성 부분이다. 마찬가지로, 일부 실시방식에서, 비퓨코실화(non-fucosylation) 항체는 통상적으로 체외 및 체내에서 퓨코실화 대응물에 비해 더욱 강력한 효과를 지니며, 또한 이들의 당 구조가 천연 인간 혈청 IgG의 정상적인 성분이므로 면역 원성일 가능성이 없어 유리하다.

약물 조성물과 약물 제제

본 발명은 TIGIT에 결합하는 단일클론 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트를 포함하는 하나 이상의 약물 조성물을 제공한다. 이애하여 할 점은, 본 발명이 제공하는 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트 또는 그 약물 조성물은 제제에 적합한 운반체, 부형제 및 기타 시약을 통합하여 연합 투여가 가능하며, 이에 따라 개선된 전이, 전달, 내수성 등을 제공할 수 있다.

용어 “약물 조성물”이란, 그 중에 포함되는 활성성분의 생물학적 활성이 유효한 형식으로 존재하도록 허용되고, 또한 상기 제제가 투여되는 피험자에게 허용될 수 없는 독성을 지닌 별도의 성분을 포함하지 않는 제제를 의미한다.

필요한 순도를 지닌 본 발명의 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트를 하나 이상의 임의로 선택한 약용 첨가제(Remington' s Pharmaceutical Sciences，제16판，Osol, A. 편집(1980))와 혼합함으로써 본문에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트를 포함하는 약물 제제를 제조할 수 있으며, 바람직하게는 상기 약물 제제는 수용액 또는 동결건조제제의 형식이다.

본 발명의 약물 조성물 또는 제제는 하나 이상의 기타 활성 성분을 더 포함할 수 있으며, 상기 활성 성분은 치료되는 특정 적응증에 필요한 것으로서, 바람직하게는 서로의 상보적 활성에 불리하게 영향을 미치지 않을 활성 성분을 지니고 있다. 일부 실시방식에서, 기타 활성성분은 화학요법제, 면역관문 억제제(immune checkpoint inhibitor), 성장 억제제, 항생제 또는 기지의 각종 항종양 또는 항암제이며, 상기 활성 성분은 목적 용도에 대해 유효한 양으로 적절하게 조합되어 존재한다. 일부 실시방식에서, 본 발명의 약물 조성물은 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드의 조성물을 더 포함한다.

항체의 의약 용도

일 측면으로, 본 발명은 T 세포 또는 NK 세포가 매개하는 항종양 활성을 유도하거나 또는 유기체의 면역 응답을 강화시키기 위해, 피험자에게 유효량의 본문에 따른 어느 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트, 또는 상기 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트를 포함하는 면역 콘쥬게이트(conjugate) 또는 약물 조성물을 투여하는 방법에 관한 것이다.

다른 측면으로, 본 발명은 각종 암, 면역 관련 질환 및 T 세포 기능 장애성 질환을 치료 또는 지연시키기 위해, 피험자에게 유효량의 본문에 따른 어느 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트, 또는 상기 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트를 포함하는 면역 콘쥬게이트 또는 약물 조성물을 투여하는 방법에 관한 것이다.

다른 측면으로, 본 발명은 피험자에게 유효량의 하나 이상의 치료법(예를 들어 치료방식 및/또는 기타 치료제)을 연합 투여하는 것에 관한 것이다. 일부 실시예에서, 상기 치료법은 수술치료 및/또는 방사선 요법을 포함한다. 일부 실시예에서, 기타 치료제는 화학요법제, PD-1 축 길항제(예를 들어, 항 PD-1 항체, 항 PD-Ll 항체 또는 PD-L2 항체)로부터 선택된다.

기타 측면에서, 본 발명은 본문에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트의 약물을 생산하거나 제조하는데 있어서의 용도를 제공하며, 상기 약물은 위에서 언급한 관련 질환 또는 증상을 치료하기 위한 것이다. 본 발명은 본문에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트와 PD-1 축 길항제(예를 들어, 항 PD-1 항체, 항 PD-Ll 항체 또는 PD-L2 항체)의 약물을 생산하거나 제조하는데 있어서의 용도를 더 제공하며, 상기 약물은 위에서 언급한 관련 질환 또는 증상을 치료하기 위한 것이다.

어떤 실시예에서, 본문에 따른 방법과 용도는 상기 개체에게 하나 이상의 치료법(예를 들어 치료방식 및/또는 기타 치료제)을 투여하는 것을 더 포함한다. 단독으로 또는 치료법 중의 기타 치료제와의 조합에 의해 본 발명의 항체를 사용할 수 있다. 예를 들어 적어도 하나의 별도의 치료제와 함께 사용될 수 있다.

진단과 검출을 위한 방법

어떤 실시예에서, 본문이 제공하는 어느 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 프래그먼트는 생물 샘플 중에서 TIGIT의 존재를 검출하는데 사용될 수 있다. 용어 “검출”은 본문에서 사용될 경우, 정량 또는 정성 검출을 포함한다. 어떤 실시예에서 생물 샘플은 혈액, 혈청 또는 생물로부터 유래된 기타 액체 샘플이다. 어떤 실시예에서, 생물 샘플은 세포 또는 조직을 포함한다.

본 발명은 상기 특정 실시방식의 모든 조합을 포함한다. 본 발명의 추가적인 실시방식 및 응용 가능한 완전한 범주는 아래에서 제공할 상세한 기재를 통해 자명해질 것이다. 그러나, 이해하여야 할 점은, 비록 상세 기재 및 특정 실시예가 본 발명의 바람직한 실시방식을 지시하고 있으나, 단 설명 방식으로만 이러한 기재 및 실시예를 제공하며, 그 이유는 본 발명의 정신 및 범주 내의 각종 변경 및 수정이 본 기술을 숙지한 자에게 있어서 이러한 상세한 기재로부터 자명해질 것이기 때문이다. 모든 목적 차원에서, 인용문을 포함하는 본문에 인용된 모든 공개물, 특허 및 특허 출원은 인용 방식으로 모두 본문에 포함될 것이다.

본 발명은 하기의 축약어를 사용한다:

RLU는 상대 발광 단위를 대표하고;

BSA는 소혈청 알부민을 대표한다.

실시예

실시예 1: 재조합 단백질 hTIGIT-ECD-mFC

일반적인 PCR 기술을 통해 TIGIT 세포 외 도메인을 인코딩하는 cDNA 서열을 증폭시키고, 일반적인 클로닝 기술을 이용하여 증폭된 프래그먼트를 자체적으로 구축된 진핵 발현 플라스미드 시스템(MX2-mFc，마우스 IgG2a Fc 도메인 포함)에 복제하였다. 퓨로마이신 스크리닝 시스템이 포함되어 있어, 이에 따라 재조합 융합 단백질 발현 플라스미드 hTIGIT-ECD-mFC를 생성하였다. 발현 세포 293E를 이용하여 발현 및 정제시켜 hTIGIT-ECD-mFC 재조합 단백질을 획득하였다.

여기서 인간 TIGIT 세포 외 도메인(hTIGIT-ECD) 아미노산 서열은 NCBI 등록번호가 NM_173799.4인 24-155번째 자리의 아미노산이며, 본 발명의 항체의 면역원과 활성 검출에 사용된다.

게잡이 원숭이의 TIGIT 세포 외 도메인(cynoTIGIT-ECD) 서열은 NCBI 등록번호가 XP_015300912.1이며，본 발명의 항체 활성 검출에 사용된다.

실시예 2: 하이브리도마 항체의 제조와 선별

표준 분자생물학 기술을 사용하여 하이브리도마 항체를 생성하였다. 간단히 말하면, 재조합 단백질 hTIGIT-ECD-mFC를 항원으로 하여 등량의 면역 어쥬번트와 혼합하고, 5마리의 6주령 암컷 Balb/c 마우스를 택하여 면역을 실시하였다. 최초 면역 완료 후, 최초 면역 후 3주째때 1회 부스터 면역(booster immunization)을 실시한 다음, 2주에 1번씩 총 6회의 부스터 면역을 실시하였다. 마지막 부스터 면역접종 후, 혈청 내에 높은 적정도의 항 hTIGIT 항체를 지닌 마우스를 세포 융합 실험 면역 세포의 공급원으로 선택하였다. 표준 하이브리도마 기술을 사용하여, 비장 세포를 분리하고, 일반적인 전기천공법(electroporation)(BTX사의 전기천공기 매뉴얼 참조)에 따라 마우스 골수종 세포주 SP2/0 세포(ATCC)와 융합시켰다. 융합 세포를 HAT가 함유된 DMEM 완전 배지(Corning)에 재현탁시키고, 마우스 지지 세포(feeder cell)가 함유된 384웰 플레이트에 고르게 도포하여 플레이팅하였다.

초기 희망하는 항체/항원 결합 특징(예컨대 TIGIT 결합 특이성, TIGIT와 PVR 결합 차단 능력, TIGIT가 매개하는 생물활성 차단)을 기반으로, 단일클론 하이브리도마 분비 상청을 동정하였으며, 여기서 하이브리도마 2O18과 23O20이 분비하는 상청 항체를 추가적인 특징으로 사용하였다.

실시예 3: 마우스 항 TIGIT 항체가 T세포 활성에 미치는 영향

T 세포는 항원 제시 세포(APC)상의 주요 조직적합성(histocompatibility) 복합체 클래스 I 또는 클래스 II 단백질에 의해 제시되는 특이적 펩타이드를 인식하는 T 세포 수용체 (TCR)를 자극함으로써 활성화가 구현된다. 활성화된 TCR은 전사인자(예를 들어 활성인자(activator)-단백질-l(AP-l), 활성화된 T 세포의 핵인자(NFAT) 또는 활성화된 B 세포의 핵인자 κ경쇄 인핸서(NFκb))가 구동하는 보고 유전자(reporter gene)를 통해 모니터링될 수 있는 신호 전달 이벤트 캐스케이드를 촉진한다. T 세포 응답은 T 세포에 있는 발현을 조성하거나 유도하는 공동 수용체의 결합(engagement)을 통해 조정된다. 프로그램된 세포 사멸 단백질(PD1)과 TIGIT는 T 세포 활성의 음성 조절자(negative regulator)이다. PD-1과 TIGIT는 각각 APC 또는 암을 포함한 세포에서 발현되는 그의 리간드(PD-L1) 및 PVR(또는/및 PVRL2)와 상호작용하면서, 이러한 상호작용은 포스포타아제를 TCR 시그널로솜(signalosome)에 모집함으로써 억제 신호의 전달을 초래하며, 이에 따라 양성 신호 전달의 억제가 발생한다. 2개의 공학적으로 개조된 안정적인 발현 세포계(cell line)인 Jurkat 세포 (Jurkat/NFAT-Luc/hPD-1-hTIGIT)와 CHO 세포(CHO/hPD-L1-hPVRL2)의 구축을 통해 APC와 T 세포 간의 상호작용이 유도하는 T 세포 신호 전달을 측정하였다.

구체적으로, hPD-L1/hPVRL2를 안정적으로 발현하는 CHO 세포를 96웰 플레이트에 각 웰당 5×10⁴의 세포량으로 플레이팅하고, 37℃, 7%의 CO₂에서 하룻밤 동안 배양한 후, 세포 상청을 제거하고, 각 웰당 40μL의 항 TIGIT 항체(2O18, 23O20 또는 MBSA43) 희석액(개시 농도는 10ug/ml，3 배 적정)을 투입하거나, 및/또는 미리 40μL의 JS001(0.5ug/ml)을 투입하고, 40μL의 hPD-1/hTIGIT/NFAT-루시페라아제(luciferase)를 지속적으로 발현할 수 있는 Jurkat 보고자 세포(reporter cell), 총 세포수 1×10⁵의 세포를 투입하여，37℃, 7%의 CO₂에서 6시간 동안 배양하고, 루시페라아제 시약을 투입한 후, 마이크로플레이트리더로 발광값을 검출하였다.

여기서, MBSA43은 상용화된 항 인간 TIGIT 항체로서, ThermoFisher로부터 구입하였으며, CAT 번호는 16-9500-82이다.

JS001: 쥔시 바이오(

)가 자체적으로 연구 개발한 항 PD-1 항체(CN201310258289，항체 38)이다.

GraphPad Prism 5를 이용하여 데이터를 분석하고, TIGIT 항체가 T 세포를 활성화시킨 EC₅₀값을 계산하여, 항 TIGIT 항체의 단일 약물 또는 항 PD-1 항체(JS001)와의 연합이 T 세포 활성화에 미치는 영향을 평가하였다. 구체적으로는 도 1 및 하기 표 1을 참조한다.

결과에 의해:

(1) 항체 2O18과 23O20은 T 세포의 활성을 현저히 촉진시킬 수 있다;

(2) 항체 2O18의 T 세포에 대한 활성화 작용은 상용 항체인 MBSA43보다 현저히 우수하다;

(3) 항체 2O18, 23O20 및 MBSA43과 항 PD-1 항체 JS001의 T 세포에 대한 활성화는 모두 시너지 효과를 갖는다.

실시예 4： 키메라 항체의 구축과 표현

퇴화 프라이머 PCR에 기반한 방법을 사용하여, 하이브리도마 2O18과 23O20에 의해 발현된 항체 가변영역의 DNA 서열을 측정하였다.

2O18과 23O20의 뉴클레오티드 서열과 아미노산 서열은 표 2와 같다.

인간 혈액세포(베이징 혈액 연구소)로부터 인간 IgG4 중쇄 불변영역 Fc 프래그먼트(SEQ ID NO:35)와 경쇄 불변영역을 클로닝하고, pCDNA3.1 플라스미드에 삽입하여 개조하였다. 상기 중쇄와 경쇄 가변영역 서열 프래그먼트는 Genscript사로부터 합성하였고, 중쇄는 Bspq I 효소 절단을 거치고, 경쇄는 Bspq I 효소 절단을 거친 후, 상응하게 개조된 pCDNA3.1 플라스미드에 삽입하였다. 서열 측정을 통해 IgG4 키메라성 중쇄(ch-HC) 또는 경쇄(ch-LC)의 발현 플라스미드를 확정하였다. 상기 상이한 키메라성 중쇄와 경쇄의 발현 플라스미드를 혼합하여 형질주입 발현 세포에 페어링하고 번호가 ch1에서 ch4인 4종의 키메라 항체를 획득하였다(표 3 참조).

실시예 5: ELISA를 이용한 검출된 키메라 항 TIGIT 항체와 항원 TIGIT 결합 활성

즉 1μg/ml의 인간 TIGIT-ECD-mFc를 96웰 엘리사 플레이트에 코팅하고, 37℃ 항온에서 60-90분 동안 인큐베이팅하였다. 이후 웰 내부의 용액을 제거하고, 세척 완충액으로 3회 세척한 다음, 2% BSA가 함유된 PBS 용액을 투입하여 60분 동안 밀폐시켰다. 세척 완충액으로 3회 세척 후 상이한 농도의 키메라 희석액을 투입하고, 37℃에서 60분 동안 인큐베이팅한 후, 세척 완충액으로 3회 세척한 다음, 1:5000배로 희석된 항 IgG4-HRP를 투입하고, 37℃에서 30분 동안 인큐베이팅하고, 세척 완충액으로 3회 헹군 다음, 100μL의 TMB 기질(Substrate) 용액을 투입하여 발색시키며, 실온에서 30분 동안 반응시킨 후, 100μL, 2M의 염산용액으로 반응을 종료시키고 450nm 부위에서 흡광도를 측정하였다.

도 2에 도시된 바와 같이, 키메라 항체 ch1, ch4는 인간 TIGIT와의 결합에 비교적 높은 특이성을 지니며, 그 EC₅₀은 각각 32.49ng/mL와 8.932ng/mL이다.

실시예 6: 키메라 항 TIGIT 항체가 T 세포 활성에 미치는 영향

실시예 3에 따른 실험 원리 및 실험 방법과 같이, 루시페라제 보고자 유전자 실험(Luciferase Assay)을 이용하여 키메라 항체 ch1, ch4가 T 세포 활성에 미치는 영향을 검출하였다.

도 3에 도시된 바와 같이, 키메라 항체 ch1, ch4는 각각 형광신호를 현저히 증강시킬 수 있으며, 즉 T 혈액 세포의 활성화를 촉진시킬 수 있고 그 EC₅₀은 각각 76.64ng/mL와 103.9ng/mL이다.

실시예 7: 항체의 인간화 변형

항체의 인간화에 대하여, 먼저 NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/) 웹사이트 중의 인간 면역글로불린 데이터베이스로부터 마우스 항체 가변영역의 cDNA 서열과 상동인 인간 생식세포(human germline) IgG 유전자를 검색한 다음, Kabat 넘버링 시스템 또는 IMGT 넘버링 시스템에 의하여 가변영역 CDR의 아미노산 서열 및 그 정확한 경계를 정의하며, IMGT가 정의한 마우스 항체 가변영역 CDR 서열은 표 4와 같다. 원칙적으로 마우스 항체 가변영역과 높은 상동성을 갖는 인간 IGVH 및 IGVk를 인간화 탬플릿으로 선택하고, CDR 그래프팅을 통해 인간화를 실시하였다. 간단히 말하면, 인간화 변형 과정은 이하 단계와 관련이 있다: A. 각 후보 항체의 유전자 서열을 인간 배아 항체 유전자 서열과 비교하여, 상동성이 높은 서열을 찾는다; B. HLA-DR 친화성을 분석 고찰하여, 친화력이 낮은 인간 배아 프레임워크 서열을 선출한다; C. 컴퓨터 시뮬레이션 기술을 이용하고, 분자 도킹(molecular docking)을 응용하여 가변영역 및 그 주변의 프레임워크 아미노산 서열을 분석하고, 그 공간 입체 결합방식을 고찰한다. 정전기력, 반데르발스 힘(van der Waals force), 친소수성과 엔트로피(entropy value)의 계산을 통해, 각 후보 항체 유전자 서열 중 TIGIT와 작용할 수 있고 공간 프레임워크를 유지할 수 있는 핵심 아미노산 개체를 분석하여, 이를 이미 선택된 인간 배아 유전자 프레임워크에 다시 그래프팅하고, 이를 기초로 반드시 유지되어야 하는 프레임워크 영역의 아미노산 부위를 표준 구성(standard configuration)함으로써 인간화 항체를 합성한다. 이상의 각 요소를 종합하여, 총 81개의 인간화 항체를 설계하고 항체 활성 선별을 실시하였다. 여기서 항체 hu3, hu20, hu62, hu69와 hu81의 아미노산 서열 정보는 표 5와 같고; 항체 hu3, hu20의 전장 아미노산 서열 정보는 표 6과 같다.

실시예 8: ELSIA를 통한 인간화 항체와 인간 TIGIT의 결합 특이성 검출

일반적인 ELISA 검출방법을 이용하여 인간화 항체와 인간 TIGIT의 결합 특이성을 검출하였다. 즉 0.5μg/ml의 인간 TIGIT-ECD-mFc를 96웰 엘리사 플레이트에 코팅하고, 37℃ 항온에서 60-90분 동안 인큐베이팅하였다. 이후 웰 내부의 용액을 제거하고, 세척 완충액으로 3회 세척한 다음, 2% BSA가 함유된 PBS 용액을 투입하여 60분 동안 밀폐시켰다. 세척 완충액으로 3회 세척 후 상이한 농도의 항체 희석액을 투입하고, 37℃에서 60분 동안 인큐베이팅한 후, 세척 완충액으로 3회 세척한 다음, 1：5000배로 희석된 항 IgG4-HRP를 투입하고, 37℃에서 30분 동안 인큐베이팅하였다. 세척 완충액으로 3회 헹군 다음, 100μL의 TMB 기질(Substrate) 용액을 투입하여 발색시키며, 실온에서 30분 동안 반응시킨 후, 100 μL의 2M의 염산용액으로 반응을 종료시키고 450nm 부위에서 흡광도를 측정하였다.

도 4에 도시된 바와 같이, 항체 hu3, hu20, hu62, hu69 및 hu81과 인간 TIGIT의 결합은 비교적 높은 특이성을 지니며, 그 EC₅₀은 각각 23.20ng/mL, 37.84ng/ml, 8.60ng/mL, 10.66ng/mL와 9.83ng/mL이고; 또한 항체 hu3, hu62, hu69 및 hu81과 TIGIT의 결합 특이성은 대조 항체 Etigilimab보다 현저히 우수하다.

실시예 9: 인간화 항 TIGIT 항체가 T 세포 활성에 미치는 영향

실시예 3에 따른 실험 원리 및 실험 방법과 같이, 루시페라제 보고자 유전자 실험(Luciferase Assay)을 이용하여 인간화 항 TIGIT 항체 hu3, hu20, hu62, hu69 및 hu81이 T 세포 활성에 미치는 영향을 검출하였다.

도 5에 도시된 바와 같이, 항체 hu3, hu20, hu62, hu69 및 hu81은 각각 형광신호를 현저히 증강시킬 수 있으며, 즉 T 혈액세포의 활성화를 촉진할 수 있고, 그 EC₅₀은 각각 139.9ng/mL, 42.39ng/mL, 109.4ng/mL, 102.7ng/mL, 88.43ng/mL이며; 또한 항체 hu3, hu20, hu62, hu69 및 hu81이 T 혈액세포의 활성화 촉진 작용은 대조항체 Etigilimab보다 현저히 우수하다.

실시예 10: FACS를 통한 항체의 hTIGIT와 그 리간드 hPVR의 결합 작용 검출

경쟁적 유세포분석(FACS)에 기반한 측정을 이용하여, 항체의 hTIGIT와 그의 리간드 hPVR 등의 결합에 대한 차단 작용을 검출하였다. 간단히 말하면, 상이한 농도의 항체 희석액(초기 30μg/ml, 3배 적정)을 PVR-mFC(1ug/ml, 50μL)와 혼합하여, 실온에서 30분 동안 인큐베이팅하였다. 이후 혼합물과 세포 현탁액(293F-hPVR 안정적으로 형질전환된 세포주, 2.5×10⁴세포/웰)을 37℃에서 15분 동안 인큐베이팅하고, PBS로 3회 용리 후， 100μL의 산양 항 인간 IgG-PE 항체를 투입하고, 차광하여 30min 동안 인큐베이팅하였다. PBS로 3회 용리 후, FACS를 통해 검출하였다. FSC/SSC로부터 생세포에 대해 관문 조절(gate-control)을 수행하고, 그 기하 평균 형광(geometric mean fluorescence)을 측정하였다.

도 6에 도시된 바와 같이, 본 발명의 인간화 항체는 TIGIT와 세포 표면의 PVR의 결합을 효과적으로 차단할 수 있다.

실시예 11: BIACORE를 통한 인간화 항체와 상이한 종속의 TIGIT의 결합 검출

Biacore T200(GE)을 이용하여 본 발명의 항체와 TIGIT 간의 친화력과 결합동력학(binding kinetics)을 검출하였다. 먼저 S 시리즈의 CM5 칩(GE)을 기기에 장착하고, 아세트산나트륨-아세트산 완충액(pH 5.0)에 용해된 40 μg/mL의 양 항 인간 Fc 프래그먼트 항체(Jackson ImmuneResearch사)를 칩 표면에 커플링시켰다. 항체의 항원 결합 검출에 사용되는 완충액은 GE 의료생명과학사의 HBS-EP+이다. 항체 hu3과 hu20을 각각 8μg/mL로 희석하고, 칩 표면에 포획시켰다. 항원 hTIGIT Fc를 20nM까지 희석시키고, 30μL/min의 유속으로 칩 표면에 180s 동안 주입한 후, 항체와 항원의 결합 해리 신호를 검출하였다. Biacore T200 Evaluation Software 3.0 소프트웨어를 이용하여 1:1 결합 모델 분석으로 데이터를 획득하였다. 피팅을 통해 획득한 항체와 항원 간의 결합 동력학 상수 결합률ka(1/Ms), 해리율kd(1/s), 평형 해리 상수KD(M)는 하기 표 7과 같다.

결과는 본 발명의 항체가 인간, 게잡이 원숭이의 TIGIT와 모두 높은 친화력을 지니며, 항체와 인간의 KD값이 0.13nM으로 낮은 것을 보여준다.

실시예 12: 인간화 항체가 마우스 종양 생장에 대한 억제 작용

본 연구는 B-hPD-1/hTIGIT 인간화 마우스(Biocytogen 쟝쑤 유전자 바이오테크놀로지 유한공사로부터 구입; 암컷) MC38 결장암 동물 모델의 구축과 항 TIGIT 항체 및 그와 항-PD1 항체의 연합 투여의 시너지 항종양 효과 연구에 관한 것이다.

PBS로 재현탁한 MC38 세포를 5×10⁵개/0.1 mL의 농도와, 0.1mL/마리의 부피로 B-hPD-1/hTIGIT 인간화 마우스의 등 부위 우측 피하에 접종하였다. 평균 종양 부피가 80-100mm3에 이르렀을 때，마우스의 종양 부피와 체중에 따라 적절한 마우스 그룹에 편입하고, 평균적으로 8개의 실험군에 각 군별로 8마리씩 분배하여, 그룹을 나눈 당일 투여를 시작하였다. 구체적인 약물 투여 방안은 하기 표 8을 참조한다.

전체 연구 기간 동안 6일째(약물 투여 전)로부터 매주 2회 종양의 부피와 동물의 체중을 측정하고, 3주간 연속으로 모니터링하였다. 버니어 캘리퍼스로 종양의 장지름(L)과 단지름(W)을 측정하고, 종양의 부피(V)는 이하 공식에 따라 계산하였다: V=L×W2/2. 각 군별의 마우스 종양 부피와 시간을 그래프로 그렸다. 분산분석(ANOVA)을 사용하여 통계적 유의성을 확정하였다. P값이 < 0.05이면 모든 분석 중 통계적 유의성을 지니는 것으로 간주된다.

26일째 실험 종료 시, 마우스를 안락사시켰다. 종양조직을 분리하여 촬영하고 무게를 측정하였으며, 각 그룹의 마우스 종양의 무게와 부피(종양 종말 부피)를 측정하고, 상대 종양 성장 억제율(TGI(%))을 계산하였다.

결과:

(1) 도 7에 도시된 바와 같이, 단일 약물 측면에서, 3주 투여 후, 군 1(KLH hIgG4; 10mg/kg) 약물 투여군, 군 2(JS001; 0.3mg/kg), 군 3(hu20; 1mg/kg), 군 4(hu20; 3mg/kg) 및 군 5(hu20; 10mg/kg) 약물 투여군에 비해 상대적으로 MC38 종양 보유 마우스에서 종양의 증식과 성장에 대해 뚜렷한 억제 작용이 있었으며, 종양의 부피가 감소하고, 종양의 성장도 둔화되었다. 연합 투여 측면에서, 연합 투여군은 단일 투여군(군 6 vs 군 3/군 2; 군 7 vs 군 4/군 2; 군 8 vs 군 5/군 2)에 비해 MC38 종양 보유 마우스에서 종양의 증식과 성장에 대한 억제 작용이 더욱 뚜렷하였으며, 즉 본 발명의 항 TIGIT 단일항체 hu20과 항 PD-1 단일항체 JS001의 연합 투여는 양호한 시너지 항종양 효과를 나타내었다.

(2) 본 발명은 또한 26일째(종양 이식 후) 실험 종료 시 각 그룹의 마우스 중의 상대 종양 성장 억제율을 더 계산하였다. 상대 종양 성장 억제율의 계산 공식은 다음과 같다:

상대 종양 성장 억제율 TGI(%)= [1-( T_i-T₀)/(V_i-V₀)] ×100%

여기서, T_i-T₀=약물 투여군에게 약물을 투여한 후의 종양 종말 부피-약물 투여군에게 약물을 투여하기 전의 종양 부피이고; V_i-V₀=대조군에게 약물을 투여한 후의 종양 종말 부피-대조군에게 약물을 투여하기 전의 종양 부피(6일째 약물 투여 전의 종양 부피)이다.

계산 결과는 하기 표 9와 같다.

결과에 따르면, 실험 말기(종양 이식 후 26일째)에, 항 TIGIT 항체 hu20과 항PD-1 항체 JS001의 연합 투여군의 상대 종양 성장 억제율(TGI(%))이 hu20 또는 JS001 단독 투여군(군 6 vs 군 3/군 2; 군 7 vs 군 4/군 2; 군 8 vs 군 5/군 2)보다 현저히 높은 것으로 나타났다.

SEQUENCE LISTING <110> 상하이 쥔시 바이오파마(上海君实生物医药科技股份有限公司, TopAlliance Biosciences Inc.) 쑤저우 쥔멍 바이오파마(苏州君盟生物医药科技有限公司, TopAlliance Biosciences Inc.) <120> 항 TIGIT 항체 및 그의 응용 <130> 204340 1PCWO <150> CN 201910634309.9 <151> 2019-07-15 <160> 34 <170> SIPOSequenceListing 1.0 <210> 1 <211> 8 <212> PRT <213> 생쥐(Mus musculus) <400> 1 Gly Tyr Ala Phe Thr Glu Tyr Thr 1 5 <210> 2 <211> 8 <212> PRT <213> 생쥐(Mus musculus) <400> 2 Ile Asn Pro Asn Thr Gly Gly Thr 1 5 <210> 3 <211> 12 <212> PRT <213> 생쥐(Mus musculus) <400> 3 Ala Lys Leu Leu Arg Leu Met Tyr Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 4 <211> 119 <212> PRT <213> 생쥐(Mus musculus) <400> 4 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Glu Tyr 20 25 30 Thr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Ile Asn Pro Asn Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Phe Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Leu Leu Arg Leu Met Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 5 <211> 357 <212> DNA <213> 생쥐(Mus musculus) <400> 5 gaggtccagc tgcaacagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60 tcctgcaaga cttctggata cgcattcact gaatacacca tgcactgggt gaaacagagc 120 catggaaaga gccttgagtg gattggaggt attaatccta acactggtgg tactacctac 180 aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccag cacagcctac 240 atggagttcc gcagcctgac atctgaggat tctgcagtct attactgtgc aaaattacta 300 cggctcatgt actactttga ctactggggc caaggcacca ctctcacagt ctcctca 357 <210> 6 <211> 6 <212> PRT <213> 생쥐(Mus musculus) <400> 6 Gln Asp Val Arg Thr Ala 1 5 <210> 7 <211> 3 <212> PRT <213> 생쥐(Mus musculus) <400> 7 Ser Ala Ser 1 <210> 8 <211> 9 <212> PRT <213> 생쥐(Mus musculus) <400> 8 His Gln His Tyr Ile Thr Pro Trp Thr 1 5 <210> 9 <211> 107 <212> PRT <213> 생쥐(Mus musculus) <400> 9 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Arg Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys His Gln His Tyr Ile Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 10 <211> 321 <212> DNA <213> 생쥐(Mus musculus) <400> 10 gacattgtga tgacccagtc tcacaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60 atcacctgca aggccagtca ggatgtgagg actgctgtag cctggtatca acagaaacca 120 ggacaatctc ctaaactact gatttactcg gcatcctacc ggtacactgg agtccctgat 180 cgcttcactg gcagtggatc tgggacggat ttcactttca ccatcagcag tgtgcaggct 240 gaagacctgg cactttatta ctgtcatcaa cattatatta ctccgtggac gttcggtgga 300 ggcaccaagc tggaaatcaa a 321 <210> 11 <211> 8 <212> PRT <213> 생쥐(Mus musculus) <400> 11 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Trp 1 5 <210> 12 <211> 8 <212> PRT <213> 생쥐(Mus musculus) <400> 12 Ile Tyr Pro Gly Gly His Tyr Thr 1 5 <210> 13 <211> 11 <212> PRT <213> 생쥐(Mus musculus) <400> 13 Thr Arg Tyr Tyr Gly Pro Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 14 <211> 118 <212> PRT <213> 생쥐(Mus musculus) <400> 14 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Asp Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Gln Ala Ala Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Ile Leu Trp Ile Lys Gln Arg Pro Arg His Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly His Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Tyr Tyr Gly Pro Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 15 <211> 354 <212> DNA <213> 생쥐(Mus musculus) <400> 15 caggtccagc tgcagcagtc tggagatgaa ctggtaaggc ctgggacttc agtgaaggtg 60 tcctgccagg ctgctggata caccttcact aactactgga tactttggat aaagcagagg 120 cctcgacatg gccttgagtg gattggagat atttaccctg gaggtcatta tactaattac 180 aatgagaaat tcaagggcaa ggccacactg actgcagaca catcctccag tacagcctac 240 atgcaactca acagcctgac atctgaggac tctgccatct attactgtac aagatactat 300 ggtccctatg ctatggacta ctggggtcaa ggaacctcag tcaccgtctc ctca 354 <210> 16 <211> 12 <212> PRT <213> 생쥐(Mus musculus) <400> 16 Gln Ser Leu Leu Tyr Asn Ser Asn Gln Lys Asn Tyr 1 5 10 <210> 17 <211> 3 <212> PRT <213> 생쥐(Mus musculus) <400> 17 Trp Ala Ser 1 <210> 18 <211> 9 <212> PRT <213> 생쥐(Mus musculus) <400> 18 Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 19 <211> 113 <212> PRT <213> 생쥐(Mus musculus) <400> 19 Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Pro Val Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Asn 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Gly Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 20 <211> 339 <212> DNA <213> 생쥐(Mus musculus) <400> 20 gacattgtga tgtcacagtc tccatcctcc ctacctgtgt cagttggaga gaaggttact 60 atgagctgca agtccagtca gagcctttta tataatagta atcaaaagaa ctacttggcc 120 tggtaccagc agataccagg gcagtctcct aaactgctga tttactgggc atccactggg 180 gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg ggacagattt cactctcacc 240 atcagcagtg tgaaggctga agacctggca gtttattact gtcagcaata ttatagctat 300 ccattcacgt tcggctcggg gacaaagttg gaaataaaa 339 <210> 21 <211> 119 <212> PRT <213> 인공서열(Artificial Sequence) <220> <223> 중쇄 가변영역의 아미노산 서열 <400> 21 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Glu Tyr 20 25 30 Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Asn Pro Asn Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Val Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Leu Leu Arg Leu Met Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 22 <211> 107 <212> PRT <213> 인공서열(Artificial Sequence) <220> <223> 경쇄 가변영역의 아미노산 서열 <400> 22 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Arg Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln His Tyr Ile Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 23 <211> 119 <212> PRT <213> 인공서열(Artificial Sequence) <220> <223> 중쇄 가변영역의 아미노산 서열 <400> 23 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Glu Tyr 20 25 30 Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Asn Pro Asn Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Val Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Leu Leu Arg Leu Met Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 24 <211> 107 <212> PRT <213> 인공서열(Artificial Sequence) <220> <223> 경쇄 가변영역의 아미노산 서열 <400> 24 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Val Arg Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln His Tyr Ile Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 25 <211> 118 <212> PRT <213> 인공서열(Artificial Sequence) <220> <223> 중쇄 가변영역의 아미노산 서열 <400> 25 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Ile Leu Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly His Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Tyr Tyr Gly Pro Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 26 <211> 113 <212> PRT <213> 인공서열(Artificial Sequence) <220> <223> 경쇄 가변영역의 아미노산 서열 <400> 26 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Asn 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Gly Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 27 <211> 118 <212> PRT <213> 인공서열(Artificial Sequence) <220> <223> 중쇄 가변영역의 아미노산 서열 <400> 27 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Ile Leu Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly His Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Tyr Tyr Gly Pro Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 28 <211> 113 <212> PRT <213> 인공서열(Artificial Sequence) <220> <223> 경쇄 가변영역의 아미노산 서열 <400> 28 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Asn 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Gly Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 65 70 75 80 Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 29 <211> 118 <212> PRT <213> 인공서열(Artificial Sequence) <220> <223> 중쇄 가변영역의 아미노산 서열 <400> 29 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Ile Leu Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly His Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu 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Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Glu Tyr 20 25 30 Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Asn Pro Asn Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Val Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Leu Leu Arg Leu Met Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val 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Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 33 <211> 446 <212> PRT <213> 인공서열(Artificial Sequence) <220> <223> 중쇄의 아미노산 서열 <400> 33 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Glu Tyr 20 25 30 Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Asn Pro Asn Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Val Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Leu Leu Arg Leu Met Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 34 <211> 214 <212> PRT <213> 인공서열(Artificial Sequence) <220> <223> 경쇄의 아미노산 서열 <400> 34 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Val Arg Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln His Tyr Ile Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210

Claims

분리된 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트에 있어서,
상기 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는
(1) 중쇄 상보성 결정영역 HCDR1, HCDR2와 HCDR3 중에서 선택된 1개 내지 3개를 포함하며, 상기 HCDR1은 SEQ ID NO: 1 또는 11의 아미노산 서열과 일치하거나 또는 적어도 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR2는 SEQ ID NO: 2 또는 12의 아미노산 서열과 일치하거나 또는 적어도 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HCDR3은 SEQ ID NO: 3 또는 13의 아미노산 서열과 일치하거나 또는 적어도 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
(2) 경쇄 상보성 결정영역 LCDR1, LCDR2와 LCDR3 중에서 선택된 1개 내지 3개를 포함하며, 상기 LCDR1은 SEQ ID NO: 6 또는 16의 아미노산 서열과 일치하거나 또는 적어도 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 LCDR2는 SEQ ID NO: 7 또는 17의 아미노산 서열과 일치하거나 또는 적어도 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하며, 상기 LCDR3은 SEQ ID NO: 8 또는 18의 아미노산 서열과 일치하거나 또는 적어도 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트.
제1항에 있어서, 상기 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 중쇄 상보성 결정영역 HCDR1, HCDR2와 HCDR3과 경쇄 상보성 결정영역 LCDR1, LCDR2와 LCDR3을 포함하며,
(1) 상기 HCDR1은 SEQ ID NO: 1에 표시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR2는 SEQ ID NO: 2에 표시된 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HCDR3은 SEQ ID NO: 3에 표시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 LCDR1은 SEQ ID NO: 6에 표시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 LCDR2는 SEQ ID NO: 7에 표시된 아미노산 서열을 포함하며, 상기 LCDR3은 SEQ ID NO: 8에 표시된 아미노산 서열을 포함하고; 또는
(2) 상기 HCDR1은 SEQ ID NO: 11에 표시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR2는 SEQ ID NO: 12에 표시된 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HCDR3은 SEQ ID NO: 13에 표시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 LCDR1은 SEQ ID NO: 16에 표시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 LCDR2는 SEQ ID NO: 17에 표시된 아미노산 서열을 포함하며, 상기 LCDR3은 SEQ ID NO: 18에 표시된 아미노산 서열을 포함하는, 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항체는 중쇄 가변영역(VH)과 경쇄 가변영역(VL)을 포함하며, 상기 VH는 SEQ ID NO: 4, 14, 21, 23, 25, 27 및 29에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열과 일치하거나 또는 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
상기 VL은 SEQ ID NO: 9, 19, 22, 24, 26, 28 및 30에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열과 일치하거나 또는 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트.
제3항에 있어서, 상기 항체는 중쇄 가변영역(VH)과 경쇄 가변영역(VL)을 포함하며, 상기 항체는
(1) 상기 VH는 SEQ ID NO: 4에 표시된 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL은 SEQ ID NO: 9에 표시된 아미노산 서열을 포함하는 항체; 또는
(2) 상기 VH는 SEQ ID NO: 14에 표시된 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL은 SEQ ID NO: 19에 표시된 아미노산 서열을 포함하는 항체; 또는
(3) 상기 VH는 SEQ ID NO: 21에 표시된 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL은 SEQ ID NO: 22에 표시된 아미노산 서열을 포함하는 항체; 또는
(4) 상기 VH는 SEQ ID NO: 23에 표시된 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL은 SEQ ID NO: 24에 표시된 아미노산 서열을 포함하는 항체; 또는
(5) 상기 VH는 SEQ ID NO: 25에 표시된 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL은 SEQ ID NO: 26에 표시된 아미노산 서열을 포함하는 항체; 또는
(6) 상기 VH는 SEQ ID NO: 27에 표시된 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL은 SEQ ID NO: 28에 표시된 아미노산 서열을 포함하는 항체; 또는
(7) 상기 VH는 SEQ ID NO: 29에 표시된 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL은 SEQ ID NO: 30에 표시된 아미노산 서열을 포함하는 항체에서 선택되는, 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트.
제1항 내지 제4항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 항체의 중쇄의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 31 또는 33에 표시된 바와 같고, 및/또는 상기 항체의 경쇄의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 32 또는 34에 표시된 바와 같은, 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트.
제5항에 있어서, 상기 항체의 중쇄의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 31에 표시된 바와 같고, 경쇄의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 32에 표시된 바와 같거나; 또는 상기 항체의 중쇄의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 33에 표시된 바와 같고, 경쇄의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 34에 표시된 바와 같은, 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트.
제1항 내지 제4항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 마우스 항체, 키메라 항체, 인간화 항체 또는 완전 인간 항체인, 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트.
제1항 내지 제4항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트는 완전 항체, 단쇄 항체, Fab 항체, Fab' 항체, (Fab')2 항체, 또는 이중(다중) 특이성 항체인, 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트.
제1항 내지 제4항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 어느 IgG 아형, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4인, 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트.
분리된 핵산분자에 있어서, 제1항 내지 제9항 중의 어느 한 항에 따른 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트를 인코딩하는, 분리된 핵산분자.
재조합 벡터 또는 발현 벡터에 있어서, 하나 이상의 제10항에 따른 핵산 서열을 포함하며, 상기 벡터는 제1항 내지 제9항 중의 어느 한 항에 따른 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트를 재조합 생성하기에 적합한, 재조합 벡터 또는 발현 벡터.
숙주세포에 있어서, 하나 이상의 제11항에 따른 재조합 벡터 또는 발현 벡터 또는 제10항에 따른 핵산분자를 포함하고, 및/또는 제1항 내지 제9항 중의 어느 한 항에 따른 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트를 표현하는, 숙주세포.
약물 조성물에 있어서, 제1항 내지 제9항 중의 어느 한 항에 따른 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트와 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제의 조성물을 포함하는, 약물 조성물.
제13항에 있어서, PD-1 축 길항제를 더 포함하는, 약물 조성물.
피험자의 암을 치료하는 방법에 있어서, 상기 피험자에게 유효량의 제1항 내지 제9항 중의 어느 한 항에 따른 항 TIGIT 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트, 또는 제13항 내지 14항 중의 어느 한 항에 따른 약물 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 피험자의 암을 치료하는 방법.
제15항에 있어서, 상기 피험자에게 하나 이상의 치료법을 연합 투여하는 단계를 더 포함하며, 상기 치료법은 수술치료 및/또는 방사선요법 및/또는 하나 이상의 기타 치료제의 투여를 포함하고, 상기 치료제는 화학요법제, PD-1 축 길항제와 항혈관생성제를 포함하는, 방법.
제16항에 있어서, 상기 치료제는 PD-1 축 길항제인, 방법.
제1항 내지 제9항 중의 어느 한 항에 따른 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트, 제10항에 따른 핵산분자, 제11항에 따른 벡터, 제12항에 따른 숙주세포 또는 제14항에 따른 약물 조성물의 TIGIT가 매개하는 질환 또는 증상을 치료 및/또는 예방하기 위한 약물 제조에의 용도에 있어서, 바람직하게는 상기 질환 또는 증상은 암인, 용도.
제1항 내지 제9항에 따른 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트의 생산 방법에 있어서, 제12항에 따른 숙주세포를 배양하고, 배양물로부터 상기 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트를 회수하는 단계를 포함하는, 방법.
제1항 내지 제9항에 따른 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트와 PD-1축 길항제 조합으로 피험자의 암을 치료하기 위한 약물 제조에 있어서의 용도에 있어서, 바람직하게는, 상기 항 PD-1 축 길항제는 항 PD-l 항체, 항 PD-Ll 항체 또는 항 PD-L2로부터 선택하는, 용도.