JP2015177770A - 標的物質の精製装置、核酸精製装置、標的物質の生成方法、及び核酸増幅方法 - Google Patents
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Abstract
Description
を含む方法である。前記精製方法は、前記キャピラリーの長手方向と交わる面内で、前記磁性体を移動させる工程を有してもよい。前記キャピラリー内を加圧することによって、前記標的物質が溶出した前記液体を、前記キャピラリー長手方向に移動させてもよい。前記キャピラリー内をプランジャーによって加圧してもよい。
==標的物質の精製装置==
以上のような構成を有する精製装置80を用い、標的物質を精製することができる。例えば、まず、細胞やウイルスなど、そこから標的物質を精製したいサンプルを溶解液などで溶解したり、抽出液などで抽出したりする。そして、標的物質を着脱可能に保持することのできる磁性体Mを加え、標的物質を結合させる。この標的物質着脱可能に保持する磁性体Mは、遠心チューブなどを用い、緩衝液などで洗浄することができる。その後、プラグ状の液体10を有するキャピラリー12内に、標的物質を着脱可能に保持する磁性体Mを導入する。導入方法は特に限定されないが、同じ種類の液体に懸濁した磁性体Mをキャピラリー12の端部24よりキャピラリー12内に導入し、プラグ状の液体10に合一させればよい。
図3に示すように、本実施例の核酸の精製装置は、反応容器100と物質抽出用装置300を有する。反応容器100は、長手方向を有するキャピラリー12と、キャピラリー12の一端に設けられた開口部120側に接続するプランジャー130を有する。また、キャピラリー12は開口部120とは反対側の端部に開口部140を有し、キャピラリー12内部には開口部140側から開口部120側へ、オイルからなる第1プラグ200、洗浄液からなる第2プラグ210、オイルからなる第3プラグ220、溶出液からなる第4プラグ230、オイルからなる第5プラグ240が充填されている。ここで、洗浄液および溶出液はオイルとは混和しない水溶液である。また、物質抽出用装置300は、反応容器100を装着するための装着部310、反応容器100のキャピラリー12側面から磁力を印加する永久磁石320A,Bと、プランジャー130を押し、反応容器100内の液体を送液するための送液機構330、およびキャピラリー12の一部を加熱するための加熱部340を有する。なお、本実施例では、オイルとして、シリコーンオイルを用いた。また、洗浄液には76質量%のグアニジン塩酸塩の水溶液を用いた。さらに溶出液として滅菌水を用いた。
図6に示すように、本実施例の核酸の精製装置は、反応容器100と物質抽出用装置300を有する。反応容器100は、長手方向を有するキャピラリー12と、キャピラリー12の上端に設けられた開口部120側に接続するプランジャー130を有する。また、キャピラリー12は開口部120とは反対側の下端部に開口部140を有し、反応容器100は、内部が開口部140に連通する核酸増幅用容器430を有する。キャピラリー12内部には開口部120側から開口部140側へ、オイルからなる第1プラグ200、洗浄液からなる第2プラグ210、オイルからなる第3プラグ220、溶出液からなる第4プラグ230、オイルからなる第5プラグ240が充填されている。ここで、洗浄液および溶出液はオイルとは混和しない水溶液である。また、物質抽出用装置300は、反応容器100を装着するための装着部310、反応容器100の外から磁力を印加する磁力印加機構320と、反応容器100のキャピラリー12側面から磁力を印加する永久磁石320A,Bと、プランジャー130を押し、反応容器100内の液体を送液するための送液機構330、およびキャピラリー12の一部を加熱するための加熱部340を有する。
核酸増幅用容器430にはオイルで満たされており、凍結乾燥された核酸増幅反応試薬がオイル中に保持されている。凍結乾燥された核酸増幅反応試薬はオイルに溶解しないことが好ましい。
核酸増幅反応試薬の凍結乾燥は、通常行われる方法で行えばよく、例えば、核酸増幅反応用容器430のための容器に、核酸増幅反応用バッファーの中に1反応分の核酸増幅反応試薬を入れ、急速凍結させ、低圧にして、所定時間放置する。核酸増幅反応用バッファーの量は特に限定されないが、5μLでもよく、2.5μLが好ましく、1.6μLがより好ましく、バッファーの量が少ないほど,核酸増幅反応試薬が容器の底に小さく硬く固着するようになる。急速凍結の際の温度は特に限定されず、-10℃から-160℃が好ましいが、約-80℃であることが最も好ましい。凍結乾燥した核酸増幅反応試薬はスポンジ状もしくはケーキ状で、中に気泡がたまっている微細孔(気孔)が沢山ある多孔質であることが好ましく、それによって、溶解性が良くなる。そして、急速に凍結させた方が、微細孔がさらに小さくなり、保存性がさらに良くなる。孔の平均空隙径(例えば、断面の孔の径を顕微鏡下で一定回数計測し、その平均値をとったもの)が20μm以下であることが好ましい。低圧時の圧力は特に限定されず、100mmHg以下であることが好ましいが、20mmHg以下であることが最も好ましい。低圧に保つ時間も特に限定されず、2-24時間であることが好ましいが、8時間程度であることが最も好ましい。なお、核酸増幅反応試薬を凍結乾燥させるための核酸増幅反応試薬溶液の量は、核酸増幅反応試薬を溶解させる水溶液の量より少ないことが好ましい。
Claims (14)
- 長手方向を有し、
オイルからなるプラグ、
オイルと相分離し、標的物質を着脱可能に保持する磁性体から前記標的物質を溶出する溶出液からなるプラグ、
オイルからなるプラグ、
を、順に内部に備えているキャピラリーと、
前記キャピラリーに磁力を印加して前記磁性体を保持し、前記磁性体のキャピラリー長手方向の移動を制御する磁力印加機構と、
前記磁力印加機構が前記磁性体の前記キャピラリー長手方向の移動を制限している間に、前記溶出液を前記キャピラリー長手方向に移動させる送液機構と、
を有する、標的物質の精製装置。 - 前記キャピラリーを装着可能な装着部を有する、請求項1に記載の標的物質の精製装置。
- 前記磁力印加機構は永久磁石を有する、請求項1〜3のいずれか1項に記載の標的物質の精製装置。
- 前記送液機構が加圧手段を有する、請求項1〜4のいずれか1項に記載の標的物質の精製装置。
- 前記加圧手段がプランジャーである、請求項5に記載の標的物質の精製装置。
- 長手方向を有し、
オイルからなるオイルプラグ、
洗浄液からなる洗浄液プラグ
オイルからなるオイルプラグ
オイルと相分離し、核酸を着脱可能に保持する磁性体から前記核酸を溶出する溶出液からなる溶出液プラグ、
オイルからなるオイルプラグ、
を、順に内部に備えているキャピラリーと、
前記キャピラリーに磁力を印加して前記磁性体を保持し、前記磁性体のキャピラリー長手方向の移動を制御する磁力印加機構と、
前記磁力印加機構が前記磁性体の前記キャピラリー長手方向の移動を制限している間に、前記溶出液プラグを前記キャピラリー長手方向に移動させる送液機構と、
を有する、核酸精製装置。 - 前記磁力印加機構は、前記キャピラリーの長手方向と交わる面内で前記磁性体を移動させる、請求項6に記載の核酸精製装置。
- 前記キャピラリー内部と連通した核酸増幅用容器を備える、請求項6または7に記載の核酸精製装置。
- 前記核酸増幅用容器が、凍結乾燥された核酸増幅用試薬を含む、請求項8に記載の精製装置。
- 標的物質の精製方法であって、
長手方向を有し、オイルからなるプラグ、オイルと相分離し前記標的物質を着脱可能に保持する磁性体から前記標的物質を溶出する溶出液からなる溶出液プラグ、オイルからなるプラグを、順に内部に備えているキャピラリー内に、前記標的物質を保持した磁性体を導入する工程と、
前記キャピラリーの外から磁力を加えて、前記溶出液プラグ内に、前記磁性体を移動し、保持する工程と、
前記液体内で前記標的物質を前記磁性体から溶出させる工程と、
前記磁性体の前記キャピラリー長手方向の移動を制限しながら、前記標的物質が溶出した前記液体を前記キャピラリー長手方向に移動させ、前記キャピラリーから外に出す工程と、
を含む方法。 - 前記キャピラリーの長手方向と交わる面内で、前記磁性体を移動させる工程を有する、請求項10に記載の方法。
- 前記キャピラリー内を加圧することによって、前記標的物質が溶出した前記液体を、前記キャピラリー長手方向に移動させる、請求項10または11に記載の方法。
- 前記キャピラリー内をプランジャーによって加圧する、請求項12に記載の方法。
- 前記標的物質が核酸であり、請求項10〜13のいずれか1項の方法によって得られた核酸を増幅させる核酸増幅方法。
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