JP2016158557A - 容器、生体関連物質精製カートリッジ及び生体関連物質精製カートリッジ組立体キット - Google Patents
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Abstract
【課題】プランジャーが移動したとしてもカートリッジ内の圧力の変化が小さく抑えられ、かつ、カートリッジ内の液体の漏出を抑制できる生体関連物質精製カートリッジを提供する。【解決手段】本発明に係る生体関連物質精製カートリッジは、第1部分、及び第1部分よりも内径の小さい第2部分を有するシリンジと、第1部分の内周面に篏合可能な筒状部、及び筒状部に支持され、第2部分の内周面に篏合可能な棒状部を有し、シリンジの第1部分側から挿入可能であり、シリンジに対して挿入方向に移動可能なプランジャーと、筒状部の内部空間と外部とを連通させる通気口と、通気口を塞ぐように配置された通気性のシートと、を有し、筒状部に接続されるキャップと、を含む。【選択図】図15
Description
本発明は、容器、生体関連物質精製カートリッジ及び生体関連物質精製カートリッジ組立体キットに関する。
生化学の分野において、PCR(Polymerase Chain Reaction:ポリメラーゼ連鎖反応)の技術が確立されている。最近、PCRにおける増幅の精度や検出感度は向上してきており、極微量の検体(DNA等)を増幅し、検出・解析することができるようになってきた。PCRは、増幅の対象とする核酸(標的核酸)及び試薬を含む溶液(反応液)に熱サイクルを施すことで、標的核酸を増幅させる手法である。PCRの熱サイクルとしては、2段階又は3段階の温度で熱サイクルを施す手法が一般的である。
一方、医療の現場におけるインフルエンザ等の感染症の診断は、現状ではイムノクロマト等の簡易検査キットを用いることが主流である。しかし、このような簡易検査では、精度が不十分となる場合があり、より高い検査精度を期待できるPCRを感染症の診断に適用することが望まれている。また、医療機関における一般外来では、診察の時間が制限される関係から、検査に費やすことのできる時間は短時間に制限される。そのため、例えばインフルエンザの検査は、検査の精度を犠牲にして、簡易的なイムノクロマト等の検査により短時間化して行われているのが現状である。また、空港等における検疫では、迅速に結果を得る必要があるため、PCRの高速化が望まれている。
このような要請のもと、例えば、特許文献1には、核酸を増幅するためのカートリッジが提案されている。特許文献1に記載されたカートリッジは、検体の導入から核酸の増幅反応までを、1つのカートリッジで一貫して行うことを試みている。具体的には、核酸を含む検体を前処理部で連続的に抽出、精製し、係る核酸を溶出液に溶出させている。そして、係る核酸を含む溶出液をプランジャーによって核酸増幅反応容器に押し出し、引き続き核酸増幅反応を行う旨が開示されている。
特許文献1に記載されたカートリッジでは、検体の導入から核酸の増幅反応までを一貫して行うための工夫として、プランジャーに筒状部と棒状部を設け、当該棒状部がシリンジに挿入されることで溶出液を核酸増幅反応容器に押し出すという手法を採っている。
特許文献1に記載されたカートリッジは、プランジャーの動作によって、カートリッジの内容積が変化する。ところが、カートリッジの内容積が変化することによって内圧が変化することについての対策は必ずしも十分ではなかった。例えば、特許文献1のカートリッジでは、プランジャーを押し込む際に、内圧が高まる結果、所定の時期よりも早期に溶出液を核酸増幅反応容器に押し出してしまう場合があった。
また、カートリッジの操作において、プランジャーを引く動作が含まれる場合には、カ
ートリッジの内容積が変化することによって内圧が低下することになるが、その場合にも、内圧の低下によって液体のプラグが意図せぬ位置に移動してしまうことが懸念される。
ートリッジの内容積が変化することによって内圧が低下することになるが、その場合にも、内圧の低下によって液体のプラグが意図せぬ位置に移動してしまうことが懸念される。
ここで、カートリッジの内圧の変化を小さく抑えるためには、適宜の通気口を設けることが有効と考えられる。しかし、カートリッジ内に各種の液体が存在する場合には、単に通気口を設けるだけでは、内部の液体の漏出等が生じやすくなる。
本発明の幾つかの態様に係る目的の1つは、プランジャーが移動したとしてもカートリッジ内の圧力の変化が小さく抑えられ、かつ、カートリッジ内の液体の漏出を抑制できる生体関連物質精製カートリッジを提供することにある。
本発明は、上記課題の少なくとも一部を解決するために為されたものであり、以下の態様又は適用例として実現することができる。
[適用例1]本発明に係る生体関連物質精製カートリッジの一態様は、
第1部分、及び前記第1部分よりも内径の小さい第2部分を有するシリンジと、
前記第1部分の内周面に篏合可能な筒状部、及び前記筒状部に支持され、前記第2部分の内周面に篏合可能な棒状部を有し、前記シリンジの前記第1部分側から挿入可能であり、前記シリンジに対して挿入方向に移動可能なプランジャーと、
前記筒状部の内部空間と外部とを連通させる通気口と、前記通気口を塞ぐように配置された通気性のシートと、を有し、前記筒状部に接続されるキャップと、
を含む。
第1部分、及び前記第1部分よりも内径の小さい第2部分を有するシリンジと、
前記第1部分の内周面に篏合可能な筒状部、及び前記筒状部に支持され、前記第2部分の内周面に篏合可能な棒状部を有し、前記シリンジの前記第1部分側から挿入可能であり、前記シリンジに対して挿入方向に移動可能なプランジャーと、
前記筒状部の内部空間と外部とを連通させる通気口と、前記通気口を塞ぐように配置された通気性のシートと、を有し、前記筒状部に接続されるキャップと、
を含む。
本適用例に係る生体関連物質精製カートリッジでは、キャップをした状態でプランジャーをシリンジ内で移動させて内容積を変化させたとしても、通気口を通じて外部との気体の流通をすることができ、カートリッジ内の圧力の変化を小さく抑えることができる。さらに、本適用例に係る生体関連物質精製カートリッジでは、プランジャー内に液体が存在する場合であっても、通気性のシートにより、カートリッジ内の液体の漏出を抑制することができる。
[適用例2]適用例1において、
前記シートは、撥水性の材料を含んでもよい。
前記シートは、撥水性の材料を含んでもよい。
このような生体関連物質精製カートリッジによれば、シートに液体が接触したとしても、通気性を良好に保持することができる。
[適用例3]適用例1又は適用例2において、
前記筒状部の内部に液体が配置されていてもよい。
前記筒状部の内部に液体が配置されていてもよい。
このような生体関連物質精製カートリッジによれば、効率的に生体関連物質を精製することができる。
[適用例4]適用例1ないし適用例3のいずれか一例において、
前記キャップの前記通気口にはメッシュが配置され、前記メッシュは、前記シートよりも前記プランジャーの前記内部空間の側に配置されてもよい。
前記キャップの前記通気口にはメッシュが配置され、前記メッシュは、前記シートよりも前記プランジャーの前記内部空間の側に配置されてもよい。
このような生体関連物質精製カートリッジによれば、プランジャー内に液体が存在する場合であっても、よりシートに液体が接触しにくく、通気性をさらに良好に保持することができる。
[適用例5]適用例1ないし適用例4のいずれか一例において、
物質結合性固体担体に生体関連物質を吸着させる吸着液と、該吸着液とは混和しない流体を封止収納する吸着容器と、前記物質結合性固体担体から前記生体関連物質を溶出させる溶出液と該溶出液とは混和しない流体を封止収納する溶出容器と、を含んでもよく、
前記吸着容器は、前記シリンジと、前記プランジャーと、前記キャップとを有してもよい。
物質結合性固体担体に生体関連物質を吸着させる吸着液と、該吸着液とは混和しない流体を封止収納する吸着容器と、前記物質結合性固体担体から前記生体関連物質を溶出させる溶出液と該溶出液とは混和しない流体を封止収納する溶出容器と、を含んでもよく、
前記吸着容器は、前記シリンジと、前記プランジャーと、前記キャップとを有してもよい。
このような生体関連物質精製カートリッジによれば、少なくとも溶出液を意図しない時期に吐出させないようにできるため、安定して効率的に生体関連物質を精製することができる。
以下、本発明の好適な実施形態について、図面を用いて詳細に説明する。なお、以下に説明する実施形態は、特許請求の範囲に記載された本発明の内容を不当に限定するものではない。また、以下で説明される構成の全てが本発明の必須構成要件であるとは限らない。
本発明に係る生体関連物質精製カートリッジ(容器組立体)は、PCRを行うためのカートリッジであり、生体関連物質を精製する。ここで、生体関連物質としては、生体に関連した物質であって、核酸(DNA、RNA)、ポリペプチド、タンパク質、多糖類などの生体高分子、タンパク質、酵素、ペプチド、ヌクレオチド、アミノ酸、ビタミンなどの生体由来の低分子有機化合物、及び無機化合物などを含む。以下の実施形態では、生体関連物質として核酸を例に用いて説明する。
本発明に係る生体関連物質精製カートリッジは、生体関連物質が吸着される物質結合性固相担体を含んでもよい。ここで、物質結合性固相担体は、生体関連物質を吸着すなわち可逆的な物理的結合により保持することが可能な物質である。物質結合性固相担体の形状は微粒子であることが好ましいが、これに限らず微細な繊維や網状体であってもよく、特に限定されない。物質結合性固相担体は、生体関連物質を吸着したまま容器組立体内を所望の方向へ移動させるため、磁性を有することが好ましい。以下の実施形態では、物質結
合性固相担体として核酸を吸着する磁気ビーズ30(後述の図7、図8を参照)を用いて説明する。
合性固相担体として核酸を吸着する磁気ビーズ30(後述の図7、図8を参照)を用いて説明する。
本実施形態に係る生体関連物質精製カートリッジ(容器組立体1)は、第1部分、及び前記第1部分よりも内径の小さい第2部分を有するシリンジと、前記第1部分の内周面に篏合可能な筒状部、及び前記筒状部に支持された前記第2部分の内周面に篏合可能な棒状部を有し、前記シリンジの前記第1部分側から挿入可能であり、前記シリンジに対して挿入方向に移動可能なプランジャーと、前記プランジャーの筒状部の内部空間と外部とを連通させる通気口と、前記通気口を塞ぐように配置された通気性のシートと、を有し、前記プランジャーの前記筒状部に接続されるキャップと、を含むことを特徴の一つとする。
また、本実施形態の生体関連物質精製カートリッジ(容器組立体1)は、前記シリンジと、前記プランジャーと、前記キャップとを有する吸着容器であって、物質結合性固体担体に生体関連物質を吸着させる吸着液と、該吸着液とは混和しない流体を封止収納する吸着容器と、前記物質結合性固体担体から前記生体関連物質を溶出させる溶出液と該溶出液とは混和しない流体を封止収納する溶出容器と、を含んでもよい。
1.容器組立体の概要
まず、図1〜図4を用いて、本実施形態に係る容器組立体1の概要について説明する。図1は、実施形態に係る容器組立体1(以下、カートリッジということがある)の正面図である。図2は、実施形態に係る容器組立体1の側面図である。図3は、実施形態に係る容器組立体1の平面図である。図4は、実施形態に係る容器組立体1の斜視図である。なお、図1〜図3における容器組立体1の状態を正立状態として説明する。
まず、図1〜図4を用いて、本実施形態に係る容器組立体1の概要について説明する。図1は、実施形態に係る容器組立体1(以下、カートリッジということがある)の正面図である。図2は、実施形態に係る容器組立体1の側面図である。図3は、実施形態に係る容器組立体1の平面図である。図4は、実施形態に係る容器組立体1の斜視図である。なお、図1〜図3における容器組立体1の状態を正立状態として説明する。
容器組立体1は、吸着容器100と、洗浄容器200と、溶出容器300と、反応容器400と、を含む。容器組立体1は、吸着容器100から反応容器400まで連通する図示しない流路を形成する容器である。容器組立体1の流路は、一方の端部はキャップ110によって、他方の端部は底部402によって閉じられている。
容器組立体1は、吸着容器100内で図示しない磁気ビーズに核酸を結合させ、磁気ビーズが洗浄容器200内を移動する間に精製し、溶出容器300内で図示しない溶出液液滴中に核酸を溶出させる前処理と、反応容器400内で核酸を含む溶出液の液滴に対しポリメラーゼ反応の熱サイクル処理と、を行う容器である。
容器組立体1の材質は、特に限定されないが、例えば、ガラス、高分子、金属などとすることができる。容器組立体1の材質にガラスや高分子などの可視光において透明性を有する材質を選択すると、容器組立体1の外部から内部(空洞内)を観察することができるのでより好ましい。また、容器組立体1の材質に、磁力を透過する物質や非磁性体を選択すると、容器組立体1に図示しない磁気ビーズを通過させる場合などに、容器組立体1の外部から磁力を与えることによってこれを行うことが容易化されるため好ましい。容器組立体1の材質は、例えば、ポリプロピレン樹脂であることができる。
吸着容器100は、内部に図示しない吸着液を収容する円筒状のシリンジ部120と、シリンジ部120の内部に挿入された可動式の押子であるプランジャー部130と、プランジャー部130の一方の端部に固定されるキャップ110と、を有する。吸着容器100は、キャップ110をシリンジ部120に対して移動することでプランジャー部130をシリンジ部120の内面に摺動させ、シリンジ部120内に収容した図示しない吸着液を洗浄容器200へ押し出すことができる。なお、吸着液については、後述する。
洗浄容器200は、第1〜第3洗浄容器210,220,230を接合して組み立てる
ことで得られる。第1〜第3洗浄容器210,220,230は、それぞれ内部に図示しないオイル層で仕切られた1つ以上の洗浄液層を有する。そして、第1〜第3洗浄容器210,220,230を接合することで、洗浄容器200は内部に図示しない複数のオイル層によって区切られた複数の洗浄液層を有する。本実施形態の洗浄容器200では第1〜第3洗浄容器210,220,230からなる3つの洗浄容器を用いた例について説明したが、これに限らず、洗浄液層の数に応じて適宜増減することができる。なお、洗浄液については、後述する。
ことで得られる。第1〜第3洗浄容器210,220,230は、それぞれ内部に図示しないオイル層で仕切られた1つ以上の洗浄液層を有する。そして、第1〜第3洗浄容器210,220,230を接合することで、洗浄容器200は内部に図示しない複数のオイル層によって区切られた複数の洗浄液層を有する。本実施形態の洗浄容器200では第1〜第3洗浄容器210,220,230からなる3つの洗浄容器を用いた例について説明したが、これに限らず、洗浄液層の数に応じて適宜増減することができる。なお、洗浄液については、後述する。
溶出容器300は、洗浄容器200の第3洗浄容器230に接合され、内部に溶出液をプラグの形状を維持可能に収容する。ここで、「プラグ」とは、流路内において、特定の液体が一区画を占める場合の液体を意味する。より具体的には、特定の液体のプラグは、流路の長手方向において、実質的に当該特定の液体のみが内部を占める柱状のものを指し、液体のプラグによって流路の内部の一定の空間が区画されている状態を示す。ここでの実質的にとの表現は、プラグの周囲、すなわち流路の内壁に少量(例えば薄膜状)の他の物質(液体等)が存在していてもよいことを指す。なお、溶出液については、後述する。
核酸精製デバイス5は、吸着容器100と、洗浄容器200と、溶出容器300と、を含む。
反応容器400は、溶出容器300に接合され、溶出容器300から押し出された液体を受け入れる容器であると共に、熱サイクル処理時に検体を含む溶出液の液滴を収容する容器である。また、反応容器400は、図示しない試薬を収容する。なお、試薬については、後述する。
2.容器組立体の詳細構造
次に、容器組立体1の詳細構造について、図5及び図6を用いて説明する。図5は、実施形態に係る容器組立体1の図3におけるA−A断面図である。図6は、実施形態に係る容器組立体1の図3におけるC−C断面図である。なお、実際には、容器組立体1は、洗浄液などの内容物が充填された状態で組み立てられるものであるが、図5及び図6では容器組立体1の構造を説明するため内容物の記載を省略する。
次に、容器組立体1の詳細構造について、図5及び図6を用いて説明する。図5は、実施形態に係る容器組立体1の図3におけるA−A断面図である。図6は、実施形態に係る容器組立体1の図3におけるC−C断面図である。なお、実際には、容器組立体1は、洗浄液などの内容物が充填された状態で組み立てられるものであるが、図5及び図6では容器組立体1の構造を説明するため内容物の記載を省略する。
2−1.吸着容器
吸着容器100は、シリンジ部120の一方の開口端部からプランジャー部130が挿入され、プランジャー部130の開口端部にはキャップ110が挿入されている。キャップ110は、その中央に通気部112を有し、プランジャー部130を操作したときに通気部112によってプランジャー部130の内圧の変化を抑えることができる。
吸着容器100は、シリンジ部120の一方の開口端部からプランジャー部130が挿入され、プランジャー部130の開口端部にはキャップ110が挿入されている。キャップ110は、その中央に通気部112を有し、プランジャー部130を操作したときに通気部112によってプランジャー部130の内圧の変化を抑えることができる。
プランジャー部130は、シリンジ部120の内周面を摺動する略円筒状の押子であり、キャップ110が挿入された開口端部と、該開口端部に対向する底部からシリンジ部120の長手方向に延びる棒状部132と、棒状部132の先端の先端部134と、を有する。棒状部132はプランジャー部130の底部の中央から突出しており、棒状部132の周囲には貫通孔が形成されてプランジャー部130内とシリンジ部120内とは連通する。
シリンジ部120は、容器組立体1の流路2の一部を構成し、プランジャー部130を収容する大径部と、該大径部より内径が小さい小径部と、大径部から小径部へ内径を縮径する縮径部と、該小径部の先端に吸着挿入部122と、吸着挿入部122の周囲を覆う円筒状の吸着カバー部126と、を有する。容器組立体1の流路2の一部となる大径部、小径部及び吸着挿入部122は、略円筒状である。
プランジャー部130の先端部134は、作業者への提供時において、シリンジ部120の小径部を封止して大径部及び縮径部と小径部とを仕切り、2つの区画を形成する。
シリンジ部120の吸着挿入部122は、洗浄容器200における第1洗浄容器210の一方の開口端部である第1受入部214内に挿入して嵌合することでシリンジ部120と第1洗浄容器210とを接合する。吸着挿入部122の外周面と第1受入部214の内周面とは密着して内容物である液体が外部へ漏れることを防止する。
2−2.洗浄容器
洗浄容器200は、容器組立体1の流路2の一部を構成し、第1〜第3洗浄容器210,220,230からなる組立体である。第1〜第3洗浄容器210,220,230は、基本的な構造は同じであるので、第1洗浄容器210の構造について説明し、第2、第3洗浄容器220,230についての説明は省略する。
洗浄容器200は、容器組立体1の流路2の一部を構成し、第1〜第3洗浄容器210,220,230からなる組立体である。第1〜第3洗浄容器210,220,230は、基本的な構造は同じであるので、第1洗浄容器210の構造について説明し、第2、第3洗浄容器220,230についての説明は省略する。
第1洗浄容器210は、容器組立体1の長手方向に延びる略円筒状であって、一方の開口端部に形成された第1挿入部212と、他方の開口端部に形成された第1受入部214と、第1挿入部212の周囲を覆う円筒状の第1カバー部216と、を有する。
第1挿入部212の外径は第2受入部224の内径と略同じである。また、第1受入部214の内径は吸着挿入部122の外径と略同じである。
第1洗浄容器210の第1挿入部212を第2洗浄容器220の第2受入部224に挿入して嵌合することで、第1挿入部212の外周が第2受入部224の内周と密着してシールすると共に、第1洗浄容器210と第2洗浄容器220とを接合する。同様にして、第1〜第3洗浄容器210,220,230が連結されて洗浄容器200を形成する。ここで「シールする」とは、少なくとも容器等に収容された液体または気体が外部に漏れないように封ずることであり、外部から内部へ液体または気体が侵入することを封ずることを含んでもよい。
2−3.溶出容器
溶出容器300は、容器組立体1の長手方向に延びる略円筒状であって、容器組立体1の流路2の一部を構成する。溶出容器300は、一方の開口端部に形成された溶出挿入部302と、他方の開口端部に形成された溶出受入部304と、を有する。
溶出容器300は、容器組立体1の長手方向に延びる略円筒状であって、容器組立体1の流路2の一部を構成する。溶出容器300は、一方の開口端部に形成された溶出挿入部302と、他方の開口端部に形成された溶出受入部304と、を有する。
溶出受入部304の内径は第3洗浄容器230の第3挿入部232の外径と略同じである。第3挿入部232を溶出受入部304に挿入して嵌合することで、第3挿入部232の外周が溶出受入部304の内周と密着してシールすると共に、第3洗浄容器230と溶出容器300とを接合する。
2−4.反応容器
反応容器400は、容器組立体1の長手方向に延びる略円筒状であって、容器組立体1の流路2の一部を構成する。反応容器400は、開口端部に形成された反応受入部404と、他方の閉じた端部に形成された底部402と、反応受入部404を覆うリザーバー部406と、を有する。
反応容器400は、容器組立体1の長手方向に延びる略円筒状であって、容器組立体1の流路2の一部を構成する。反応容器400は、開口端部に形成された反応受入部404と、他方の閉じた端部に形成された底部402と、反応受入部404を覆うリザーバー部406と、を有する。
反応受入部404の内径は、溶出容器300の溶出挿入部302の外径と略同じである。溶出挿入部302を反応受入部404に挿入して嵌合することで、溶出容器300と反応容器400は接合する。
反応受入部404の周囲には所定の空間を有するリザーバー部406が設けられる。リ
ザーバー部406は、プランジャー部130の移動によって反応容器400から溢れ出る液体を受容できる容積を有する。
ザーバー部406は、プランジャー部130の移動によって反応容器400から溢れ出る液体を受容できる容積を有する。
3.容器組立体の内容物及び容器組立体の操作
次に、容器組立体1の内容物について図7の(a)を用いて説明し、容器組立体1の操作について図7及び図8を用いて説明する。図7は、実施形態に係る容器組立体1の操作を説明する模式図である。図8は、実施形態に係る容器組立体1の操作を説明する模式図である。なお、図7及び図8では内容物の状態を説明するため、各容器を流路2で表現し、外形状や接合構造については省略している。
次に、容器組立体1の内容物について図7の(a)を用いて説明し、容器組立体1の操作について図7及び図8を用いて説明する。図7は、実施形態に係る容器組立体1の操作を説明する模式図である。図8は、実施形態に係る容器組立体1の操作を説明する模式図である。なお、図7及び図8では内容物の状態を説明するため、各容器を流路2で表現し、外形状や接合構造については省略している。
3−1.内容物
図7の(a)は、図1の状態における流路2内の内容物の状態を示す。流路2内の内容物は、キャップ110側から反応容器400へ向かって順に、吸着液10、第1オイル20、第1洗浄液12、第2オイル22、第2洗浄液14、第3オイル24、磁気ビーズ30、第3オイル24、第3洗浄液16、第4オイル26、溶出液32、第4オイル26、試薬34である。
図7の(a)は、図1の状態における流路2内の内容物の状態を示す。流路2内の内容物は、キャップ110側から反応容器400へ向かって順に、吸着液10、第1オイル20、第1洗浄液12、第2オイル22、第2洗浄液14、第3オイル24、磁気ビーズ30、第3オイル24、第3洗浄液16、第4オイル26、溶出液32、第4オイル26、試薬34である。
流路2は、容器組立体1の長手方向に直交する面の断面積が大きい部分(流路2の太い部分)と小さい部分(流路2の細い部分)とが交互に配置される。第1〜第4オイル20,22,24,26及び溶出液32は、その各液の一部または全部が流路2の細い部分に収容されている。流路2の細い部分の断面積は、隣接する互いに混和しない液体(流体であってもよい。以下同じ)の界面が流路2の細い部分に配置された場合に、その界面を安定に維持可能な面積を有する。したがって、流路2の細い部分に配置された液体によって、その液体とその液体の上下に配置された他の液体との配置関係を安定に維持することができる。また、流路2の細い部分に配置された液体と流路2の太い部分に配置された他の液体との界面が流路2の太い部分に形成される場合であっても、強い衝撃によってその界面が乱れても、静止した状態に置くことで、界面は所定の位置で安定に形成される。
流路2の細い部分は、吸着挿入部122、第1挿入部212、第2挿入部222、第3挿入部232、溶出挿入部302の内側に形成され、溶出容器300においては溶出挿入部302を超えて上方へ延在する。なお、流路2の細い部分に収容された液体は、容器を組み立てる前であっても安定に維持される。
3−1−1.オイル
第1〜第4オイル20,22,24,26は、いずれもオイルからなり、図7の状態において各オイルの前後の液体の間でプラグとして存在する。第1〜第4オイル20,22,24,26がプラグとして存在するために、各オイルの前後で隣接する液体は、互いに相分離する液体、すなわち混和しない液体が選択される。また、第1〜第4オイル20,22,24,26を構成するオイルは、互いに異なる種類のオイルであってもよい。これらに用いることができるオイルとしては、例えば、ジメチルシリコーンオイル等のシリコーン系オイル、パラフィン系オイル及びミネラルオイル並びにそれらの混合物から選択される一種を挙げることができる。
第1〜第4オイル20,22,24,26は、いずれもオイルからなり、図7の状態において各オイルの前後の液体の間でプラグとして存在する。第1〜第4オイル20,22,24,26がプラグとして存在するために、各オイルの前後で隣接する液体は、互いに相分離する液体、すなわち混和しない液体が選択される。また、第1〜第4オイル20,22,24,26を構成するオイルは、互いに異なる種類のオイルであってもよい。これらに用いることができるオイルとしては、例えば、ジメチルシリコーンオイル等のシリコーン系オイル、パラフィン系オイル及びミネラルオイル並びにそれらの混合物から選択される一種を挙げることができる。
3−1−2.吸着液
吸着液10とは、磁気ビーズ30に核酸を吸着させる場となる液体のことを指し、例えば、カオトロピック物質を含む水溶液である。吸着液10としては、例えば、5Mグアニジンチオシアン酸塩、2%Triton X−100、50mM Tris−HCl(pH7.2)を用いることができる。吸着液10はカオトロピック物質を含有すれば特に限定されないが、吸着液10には細胞膜の破壊あるいは細胞中に含まれるタンパク質を変性させる目的で界面活性剤を含有させてもよい。この界面活性剤としては、一般に細胞等か
らの核酸抽出に使用されるものであれば特に限定されないが、具体的には、Triton−Xなどのトリトン系界面活性剤やTween20などのツイーン系界面活性剤のような非イオン性界面活性剤、N−ウラロイルサルコシンナトリウム(SDS)等の陰イオン性界面活性剤が挙げられるが、特に非イオン性界面活性剤を、0.1%〜2%の範囲となるように使用するのが好ましい。さらには、2−メルカプトエタノールあるいはジチオスレイトール等の還元剤を含有させることが好ましい。溶解液は、緩衝液であってもよいが、pH6〜8の中性であることが好ましい。これらのことを考慮し、具体的には、3M〜7Mのグアニジン塩、0%〜5%の非イオン性界面活性剤、0mM〜0.2mMのEDTA、0M〜0.2Mの還元剤等を含有することが好ましい。
吸着液10とは、磁気ビーズ30に核酸を吸着させる場となる液体のことを指し、例えば、カオトロピック物質を含む水溶液である。吸着液10としては、例えば、5Mグアニジンチオシアン酸塩、2%Triton X−100、50mM Tris−HCl(pH7.2)を用いることができる。吸着液10はカオトロピック物質を含有すれば特に限定されないが、吸着液10には細胞膜の破壊あるいは細胞中に含まれるタンパク質を変性させる目的で界面活性剤を含有させてもよい。この界面活性剤としては、一般に細胞等か
らの核酸抽出に使用されるものであれば特に限定されないが、具体的には、Triton−Xなどのトリトン系界面活性剤やTween20などのツイーン系界面活性剤のような非イオン性界面活性剤、N−ウラロイルサルコシンナトリウム(SDS)等の陰イオン性界面活性剤が挙げられるが、特に非イオン性界面活性剤を、0.1%〜2%の範囲となるように使用するのが好ましい。さらには、2−メルカプトエタノールあるいはジチオスレイトール等の還元剤を含有させることが好ましい。溶解液は、緩衝液であってもよいが、pH6〜8の中性であることが好ましい。これらのことを考慮し、具体的には、3M〜7Mのグアニジン塩、0%〜5%の非イオン性界面活性剤、0mM〜0.2mMのEDTA、0M〜0.2Mの還元剤等を含有することが好ましい。
ここで、カオトロピック物質とは、水溶液中でカオトロピックイオン(イオン半径の大きな1価の陰イオン)を生じ、疎水性分子の水溶性を増加させる作用を有しており、核酸の固相担体への吸着に寄与するものであれば、特に限定されない。具体的には、グアニジン塩酸塩、ヨウ化ナトリウム、過塩素酸ナトリウム等が挙げられるが、これらのうち、タンパク質変成作用の強いグアニジンチオシアン酸塩またはグアニジン塩酸塩が好ましい。これらのカオトロピック物質の仕様濃度は、各物質によって異なり、例えば、グアニジンチオシアン酸塩を使用する場合には、3M〜5.5Mの範囲で、グアニジン塩酸塩を使用する場合は、5M以上で使用するのが好ましい。
水溶液中にカオトロピック物質が存在することによって、水溶液中の核酸は、水子に囲まれて存在するよりも、固体に吸着して存在するほうが熱力学的に有利となるため、磁気ビーズ30の表面に吸着することとなる。
3−1−3.洗浄液
第1〜第3洗浄液12,14,16は、核酸の結合した磁気ビーズ30を洗浄するものである。
第1〜第3洗浄液12,14,16は、核酸の結合した磁気ビーズ30を洗浄するものである。
第1洗浄液12は、第1オイル20及び第2オイル22のいずれとも相分離する液体である。第1洗浄液12は、水または低塩濃度水溶液であることが好ましく、低塩濃度水溶液の場合、緩衝液であることが好ましい。低塩濃度水溶液の塩濃度は、100mM以下が好ましく、50mM以下がより好ましく、10mM以下が最も好ましい。また、第1洗浄液12は、上述したような界面活性剤を含有してもよく、pHは特に限定されない。第1洗浄液12を緩衝液とするための塩は特に限定されないが、トリス、ヘペス、ピペス、リン酸などの塩が好ましい。さらに、第1洗浄液12は、アルコールを核酸の担体への吸着、逆転写反応、PCR反応などを阻害しない量だけ含むことが好ましい。この場合、アルコール濃度は特に限定されない。
なお、第1洗浄液12にカオトロピック物質を含有させてもよい。例えば、第1洗浄液12にグアニジン塩酸塩を含有させると、磁気ビーズ30等に吸着した核酸の吸着を維持または強化しつつ磁気ビーズ30等を洗浄することができる。
第2洗浄液14は、第2オイル22及び第3オイル24のいずれとも相分離する液体である。第2洗浄液14は、基本的に、第1洗浄液12と同じでも異なる組成であってもよいが、カオトロピック物質を事実上含まない溶液であるほうが好ましい。後の溶液に、カオトロピック物質の持ち込みを無くすためである。第2洗浄液14としては、例えば5mMトリス塩酸緩衝液からなってもよい。第2洗浄液14は、上述したように、アルコールを含むことが好ましい。
第3洗浄液16は、第3オイル24及び第4オイル26のいずれとも相分離する液体である。第3洗浄液16は、基本的に、第2洗浄液14と同じでも異なる組成であってもよ
いが、アルコールを含まない。また、第3洗浄液16は、アルコールを反応容器400に持ち込むことを防止するためにクエン酸を含むことができる。
いが、アルコールを含まない。また、第3洗浄液16は、アルコールを反応容器400に持ち込むことを防止するためにクエン酸を含むことができる。
3−1−4.磁気ビーズ
磁気ビーズ30は、核酸を吸着するビーズであり、容器組立体1の外にある磁石3によって移動させることができるように比較的強い磁性を有することが好ましい。磁気ビーズ30は、例えば、シリカビーズまたはシリカコーティングされたビーズであってもよい。磁気ビーズ30は、好ましくはシリカコーティングされたビーズであってもよい。
磁気ビーズ30は、核酸を吸着するビーズであり、容器組立体1の外にある磁石3によって移動させることができるように比較的強い磁性を有することが好ましい。磁気ビーズ30は、例えば、シリカビーズまたはシリカコーティングされたビーズであってもよい。磁気ビーズ30は、好ましくはシリカコーティングされたビーズであってもよい。
3−1−5.溶出液
溶出液32は、第4オイル26と相分離する液体であり、溶出容器300中の流路2内で第4オイル26,26に挟まれたプラグとして存在する。溶出液32は、磁気ビーズ30に吸着した核酸を、磁気ビーズ30から溶出液32中に溶出させる液体である。また、溶出液32は、加熱によって第4オイル26中で液滴となる。溶出液32は、例えば、純水を用いることができる。ここで、「液滴」とは、自由表面で囲まれた液体である。
溶出液32は、第4オイル26と相分離する液体であり、溶出容器300中の流路2内で第4オイル26,26に挟まれたプラグとして存在する。溶出液32は、磁気ビーズ30に吸着した核酸を、磁気ビーズ30から溶出液32中に溶出させる液体である。また、溶出液32は、加熱によって第4オイル26中で液滴となる。溶出液32は、例えば、純水を用いることができる。ここで、「液滴」とは、自由表面で囲まれた液体である。
3−1−6.試薬
試薬34は、反応に必要な成分を含む。試薬34は、反応容器400における反応がPCRである場合には、溶出液の液滴36(図8を参照)の中に溶出させた標的核酸(DNA)を増幅するためDNAポリメラーゼなどの酵素及びプライマー(核酸)と、増幅産物を検出するための蛍光プローブのうち少なくとも一つが含まれていることができ、ここでは、プライマー、酵素及び蛍光プローブの全てが含まれている。試薬34は、第4オイル26とは相溶せず、核酸を含む溶出液32の液滴36に接すると溶けて反応するものであり、反応容器400内の流路2の重力方向における最下部の領域に固体状態で存在する。例えば、試薬34は、凍結乾燥(フリーズドライ)したものを用いることができる。
試薬34は、反応に必要な成分を含む。試薬34は、反応容器400における反応がPCRである場合には、溶出液の液滴36(図8を参照)の中に溶出させた標的核酸(DNA)を増幅するためDNAポリメラーゼなどの酵素及びプライマー(核酸)と、増幅産物を検出するための蛍光プローブのうち少なくとも一つが含まれていることができ、ここでは、プライマー、酵素及び蛍光プローブの全てが含まれている。試薬34は、第4オイル26とは相溶せず、核酸を含む溶出液32の液滴36に接すると溶けて反応するものであり、反応容器400内の流路2の重力方向における最下部の領域に固体状態で存在する。例えば、試薬34は、凍結乾燥(フリーズドライ)したものを用いることができる。
3−2.容器組立体の操作
容器組立体1の操作の一例として、図7及び図8を用いて説明する。
容器組立体1の操作の一例として、図7及び図8を用いて説明する。
容器組立体1の操作は、
(A)吸着容器100、洗浄容器200、溶出容器300及び反応容器400を接合して容器組立体1を組み立てる工程と、
(B)吸着液10が収容された吸着容器100に、核酸を含有する検体を導入する工程と、
(C)第2洗浄容器220から吸着容器100へ磁気ビーズ30を移動する工程と、
(D)吸着容器100を揺動して核酸を磁気ビーズ30に吸着させる工程と、
(E)吸着容器100から、第1オイル20、第1洗浄液12、第2オイル22、第2洗浄液14、第3オイル24、第3洗浄液16及び第4オイル26の順に通過して、溶出容器300へ、核酸が吸着した磁気ビーズ30を移動する工程と、
(F)溶出容器300内で、溶出液32に対して磁気ビーズ30から核酸を溶出させる工程と、
(G)核酸を含む液滴を反応容器400内の試薬34に接触させる工程と、
を含む。
(A)吸着容器100、洗浄容器200、溶出容器300及び反応容器400を接合して容器組立体1を組み立てる工程と、
(B)吸着液10が収容された吸着容器100に、核酸を含有する検体を導入する工程と、
(C)第2洗浄容器220から吸着容器100へ磁気ビーズ30を移動する工程と、
(D)吸着容器100を揺動して核酸を磁気ビーズ30に吸着させる工程と、
(E)吸着容器100から、第1オイル20、第1洗浄液12、第2オイル22、第2洗浄液14、第3オイル24、第3洗浄液16及び第4オイル26の順に通過して、溶出容器300へ、核酸が吸着した磁気ビーズ30を移動する工程と、
(F)溶出容器300内で、溶出液32に対して磁気ビーズ30から核酸を溶出させる工程と、
(G)核酸を含む液滴を反応容器400内の試薬34に接触させる工程と、
を含む。
以下、各工程について順番に説明する。
(A)容器組立体1を組み立てる工程
図7の(a)に示すように、組み立てる工程は、吸着容器100から反応容器400までを接合して、吸着容器100から反応容器400まで連続する流路2を形成するように容器組立体1を組み立てる。なお、図7の(a)では、吸着容器100はキャップ110
が装着されているが、キャップ110をプランジャー部130に装着するのは(B)工程の後である。
図7の(a)に示すように、組み立てる工程は、吸着容器100から反応容器400までを接合して、吸着容器100から反応容器400まで連続する流路2を形成するように容器組立体1を組み立てる。なお、図7の(a)では、吸着容器100はキャップ110
が装着されているが、キャップ110をプランジャー部130に装着するのは(B)工程の後である。
より具体的には、反応容器400の反応受入部404に溶出容器300の溶出挿入部302を挿入し、溶出容器300の溶出受入部304に第3洗浄容器230の第3挿入部232を挿入し、第3洗浄容器230の第3受入部234に第2洗浄容器220の第2挿入部222を挿入し、第2洗浄容器220の第2受入部224に第1洗浄容器210の第1挿入部212を挿入し、第1洗浄容器210の第1受入部214に吸着容器100の吸着挿入部122を挿入する。
(B)検体を導入する工程
導入する工程は、例えば検体が付着した綿棒を、吸着容器100のキャップ110が装着される開口から吸着液10の中に差し入れ、吸着液10にこれを浸漬して行う。より具体的には、吸着容器100のシリンジ部120に挿入された状態のプランジャー部130の一方の端部にある開口から綿棒を差し入れる。次に、綿棒を吸着容器100から取り出し、キャップ110を装着する。これが図7の(a)の状態である。また、検体は、ピペット等によって吸着容器100へ導入してもよい。また、検体がペースト状や固体状であれば、例えば、吸着容器100へ匙やピンセット等によりプランジャー部130の内壁に付着させたり投入したりしてもよい。図7の(a)に示すように、シリンジ部120及びプランジャー部130の中は途中まで吸着液10が充填されているが、キャップ110の装着される開口側には空間が残されている。
導入する工程は、例えば検体が付着した綿棒を、吸着容器100のキャップ110が装着される開口から吸着液10の中に差し入れ、吸着液10にこれを浸漬して行う。より具体的には、吸着容器100のシリンジ部120に挿入された状態のプランジャー部130の一方の端部にある開口から綿棒を差し入れる。次に、綿棒を吸着容器100から取り出し、キャップ110を装着する。これが図7の(a)の状態である。また、検体は、ピペット等によって吸着容器100へ導入してもよい。また、検体がペースト状や固体状であれば、例えば、吸着容器100へ匙やピンセット等によりプランジャー部130の内壁に付着させたり投入したりしてもよい。図7の(a)に示すように、シリンジ部120及びプランジャー部130の中は途中まで吸着液10が充填されているが、キャップ110の装着される開口側には空間が残されている。
検体には標的となる核酸が含まれている。以下、これを単に標的核酸ということがある。標的核酸は、例えば、DNAやRNA(DNA:Deoxyribonucleic Acid、及び/又はRNA:Ribonucleic Asid)である。標的核酸は、検体から抽出され、後述する溶出液32に溶出された後、例えばPCRの鋳型として利用される。検体としては、血液、鼻腔粘液、口腔粘膜、その他各種の生体試料などが挙げられる。
(C)磁気ビーズを移動する工程
磁気ビーズ30を移動する工程は、図7の(a)に示すように第2洗浄容器220の第3オイル24,24に挟まれてプラグ状に存在する磁気ビーズ30を、容器外部に配置した磁石3の磁力を印加した状態で、磁石3を吸着容器100へ向かって移動させることによって行う。
磁気ビーズ30を移動する工程は、図7の(a)に示すように第2洗浄容器220の第3オイル24,24に挟まれてプラグ状に存在する磁気ビーズ30を、容器外部に配置した磁石3の磁力を印加した状態で、磁石3を吸着容器100へ向かって移動させることによって行う。
この磁気ビーズ30の移動に合わせて、あるいはこれより先にキャップ110及びプランジャー部130をシリンジ部120から抜き出す方向へ移動して、吸着液10内の検体をプランジャー部130内からシリンジ部120内へ移動させる。このプランジャー部130の移動によって、先端部134によって塞がれていた流路2は吸着液10へ連通する。
磁気ビーズ30は、磁石3の移動に伴って流路2内を上昇し、図7の(b)に示すように、検体のある吸着液10内へ到達する。
(D)核酸を磁気ビーズに吸着させる工程
核酸を吸着させる工程は、吸着容器100を揺動させて行われる。この工程は、吸着容器100の開口がキャップ110によって吸着液10が漏れ出さないように封止されているので、効率的に行うことができる。この工程により、標的核酸は、カオトロピック剤の作用により、磁気ビーズ30の表面に吸着される。この工程では、磁気ビーズ30の表面に標的核酸以外の核酸や蛋白質が吸着してもよい。
核酸を吸着させる工程は、吸着容器100を揺動させて行われる。この工程は、吸着容器100の開口がキャップ110によって吸着液10が漏れ出さないように封止されているので、効率的に行うことができる。この工程により、標的核酸は、カオトロピック剤の作用により、磁気ビーズ30の表面に吸着される。この工程では、磁気ビーズ30の表面に標的核酸以外の核酸や蛋白質が吸着してもよい。
吸着容器100を揺動させる方法としては、公知のボルテックスシェイカーなどの装置を用いてもよいし、作業者の手で振り混ぜてもよい。また、磁気ビーズ30の磁性を利用して、外部から磁場を与えながら吸着容器100を揺動してもよい。
(E)核酸が吸着した磁気ビーズを移動する工程
核酸が吸着した磁気ビーズ30を移動する工程は、吸着容器100、洗浄容器200及び溶出容器300の外部から磁石3の磁力を印加しながら移動することによって磁気ビーズ30を吸着液10、第1〜第4オイル20,22,24,26及び第1〜第3洗浄液12,14,16の中を移動させる。
核酸が吸着した磁気ビーズ30を移動する工程は、吸着容器100、洗浄容器200及び溶出容器300の外部から磁石3の磁力を印加しながら移動することによって磁気ビーズ30を吸着液10、第1〜第4オイル20,22,24,26及び第1〜第3洗浄液12,14,16の中を移動させる。
磁石3は、例えば、永久磁石、電磁石等を用いることができる。また、磁石3は、作業者の手で動かして行ってもよいし、機械装置等を利用して行ってもよい。磁気ビーズ30は、磁力によって引き寄せられる性質を有しているため、この性質を利用して、吸着容器100、洗浄容器200、そして溶出容器300へと、磁石3の相対的な配置を変化させて、流路2内を移動させる。磁気ビーズ30が各洗浄液を通過するときの速度は特に限定されないし、同一洗浄液内で流路2の長手方向に沿って往復するようにして移動させてもよい。なお、磁気ビーズ30以外の粒子等をチューブ内で移動させる場合は、例えば、重力や電位差を利用してこれを行うことができる。
(F)核酸を溶出させる工程
核酸を溶出させる工程は、溶出容器300内で、溶出液の液滴36に対して磁気ビーズ30から核酸を溶出させる。図7における溶出液32は、溶出容器300の流路の細い部分にプラグとして存在していたが、上記のように磁気ビーズ30を移動させる間に、反応容器400を加熱することで内容液が膨張し、図8に示すように液滴36として溶出容器300内を上方へ移動している。そして、図8の(a)に示すように、磁気ビーズ30が溶出容器300の溶出液の液滴36に到達すると、溶出液の作用により、磁気ビーズ30に吸着された標的核酸が、溶出液の液滴36内に溶出する。
核酸を溶出させる工程は、溶出容器300内で、溶出液の液滴36に対して磁気ビーズ30から核酸を溶出させる。図7における溶出液32は、溶出容器300の流路の細い部分にプラグとして存在していたが、上記のように磁気ビーズ30を移動させる間に、反応容器400を加熱することで内容液が膨張し、図8に示すように液滴36として溶出容器300内を上方へ移動している。そして、図8の(a)に示すように、磁気ビーズ30が溶出容器300の溶出液の液滴36に到達すると、溶出液の作用により、磁気ビーズ30に吸着された標的核酸が、溶出液の液滴36内に溶出する。
(G)試薬34に接触させる工程
試薬34に接触させる工程は、核酸を含む液滴36を反応容器400内の最下部にある試薬34に接触させる。具体的には、図8の(b)に示すように、キャップ110を押し、プランジャー部130の先端部134によって第1オイル20を押し下げることで、磁石3の磁力が印加された磁気ビーズ30を所定位置に維持したまま、標的核酸が溶出した溶出液の液滴36が反応容器400へ移動し、反応容器400の最下部にある試薬34に接触する。液滴36が接触した試薬34は溶けて溶出液中の標的核酸と混ざり合い、例えば熱サイクルを用いたPCRを実施することができる。
試薬34に接触させる工程は、核酸を含む液滴36を反応容器400内の最下部にある試薬34に接触させる。具体的には、図8の(b)に示すように、キャップ110を押し、プランジャー部130の先端部134によって第1オイル20を押し下げることで、磁石3の磁力が印加された磁気ビーズ30を所定位置に維持したまま、標的核酸が溶出した溶出液の液滴36が反応容器400へ移動し、反応容器400の最下部にある試薬34に接触する。液滴36が接触した試薬34は溶けて溶出液中の標的核酸と混ざり合い、例えば熱サイクルを用いたPCRを実施することができる。
4.PCR装置
図9及び図10を用いて、容器組立体1を用いて核酸溶出処理及びPCRを行うPCR装置50について説明する。図9は、PCR装置50の概略構成図である。図10は、PCR装置50のブロック図である。
図9及び図10を用いて、容器組立体1を用いて核酸溶出処理及びPCRを行うPCR装置50について説明する。図9は、PCR装置50の概略構成図である。図10は、PCR装置50のブロック図である。
PCR装置50は、回転機構60と、磁石移動機構70と、押圧機構80と、蛍光測定器55と、コントローラー90と、を有する。
4−1.回転機構
回転機構60は、回転用モーター66とヒーター65とを含み、回転用モーター66を駆動することにより容器組立体1及びヒーター65を回転する。回転機構60が容器組立体1及びヒーター65を回転して上下反転させることによって、反応容器400の流路内
において標的核酸を含む液滴が移動し、熱サイクル処理が行われる。
回転機構60は、回転用モーター66とヒーター65とを含み、回転用モーター66を駆動することにより容器組立体1及びヒーター65を回転する。回転機構60が容器組立体1及びヒーター65を回転して上下反転させることによって、反応容器400の流路内
において標的核酸を含む液滴が移動し、熱サイクル処理が行われる。
ヒーター65は、図示しない複数のヒーターを含み、例えば、溶出用、高温用及び低温用のヒーターを含むことができる。溶出用ヒーターは、容器組立体1のプラグ状の溶出液を加熱し、標的核酸の磁気ビーズから溶出液への溶出を促進する。高温用ヒーターは、反応容器400の流路の上流側の液体を低温用ヒーターよりも高い温度に加熱する。低温用ヒーターは、反応容器の流路の底部402を加熱する。高温用ヒーターと低温用ヒーターによって、反応容器400の流路内の液体に温度勾配を形成することができる。ヒーター65には、温度制御装置が設けられ、コントローラー90からの指令に従って、容器組立体1内の液体を処理に適した温度に設定できる。
ヒーター65は、反応容器400の底部402の外壁が露出する開口を有する。蛍光測定器55は、その開口から溶出液の液滴の輝度を測定する。
4−2.磁石移動機構
磁石移動機構70は、磁石3を移動させる機構である。磁石移動機構70は、容器組立体1内の磁気ビーズを磁石3に引き寄せるとともに、磁石3を移動させることによって磁気ビーズを容器組立体1内で移動させる。磁石移動機構70は、一対の磁石3と、昇降機構と、揺動機構と、を有する。
磁石移動機構70は、磁石3を移動させる機構である。磁石移動機構70は、容器組立体1内の磁気ビーズを磁石3に引き寄せるとともに、磁石3を移動させることによって磁気ビーズを容器組立体1内で移動させる。磁石移動機構70は、一対の磁石3と、昇降機構と、揺動機構と、を有する。
揺動機構は、一対の磁石3を図9の左右方向(図9の前後方向であってもよい)に揺動させる機構である。一対の磁石3は、PCR装置50に装着された容器組立体1を左右方向から挟みこむように配置(図7、図8を参照)され、容器組立体1の流路と直交する方向(ここでは図9の左右方向)で磁気ビーズと磁石3との距離を近接させることができる。したがって、一対の磁石3を左右方向に矢印のように揺動させると、その動きに合わせて容器組立体1内の磁気ビーズが左右方向に移動する。昇降機構は、磁石3を上下方向に移動させ、磁石3の移動に合わせて磁気ビーズを図9の上下方向に移動させることができる。
4−3.押圧機構
押圧機構80は、容器組立体1のプランジャー部を押す機構であり、プランジャー部が押圧機構80によって押されることによって、溶出容器300内の液滴が反応容器400内に押し出され、反応容器400内でPCRを実施することができるようになる。
押圧機構80は、容器組立体1のプランジャー部を押す機構であり、プランジャー部が押圧機構80によって押されることによって、溶出容器300内の液滴が反応容器400内に押し出され、反応容器400内でPCRを実施することができるようになる。
図9では、押圧機構80を正立した容器組立体1の上方に配置して示しているが、押圧機構80がプランジャー部を押す方向は、図9における上下方向ではなく、例えば、上下方向に対して45度傾いていてもよい。このようにすることで、磁石移動機構70と干渉しない位置に押圧機構80を配置することが容易になる。
4−4.蛍光測定器
蛍光測定器55は、反応容器400の液滴の輝度を測定する測定器である。蛍光測定器55は、反応容器400の底部402に対向する位置に配置される。なお、蛍光測定器55は、マルチプレックスPCRに対応できるように、複数の波長域の輝度検出が可能であると望ましい。
蛍光測定器55は、反応容器400の液滴の輝度を測定する測定器である。蛍光測定器55は、反応容器400の底部402に対向する位置に配置される。なお、蛍光測定器55は、マルチプレックスPCRに対応できるように、複数の波長域の輝度検出が可能であると望ましい。
4−5.コントローラー
コントローラー90は、PCR装置50の制御を行う制御部である。コントローラー90は、例えばCPUなどのプロセッサーと、ROMやRAMなどの記憶装置とを有する。記憶装置には各種プログラム及びデータが記憶されている。また、記憶装置は、プログラムを展開する領域を提供する。プロセッサーが記憶装置に記憶されたプログラムを実行す
ることによって、各種の処理が実現される。
コントローラー90は、PCR装置50の制御を行う制御部である。コントローラー90は、例えばCPUなどのプロセッサーと、ROMやRAMなどの記憶装置とを有する。記憶装置には各種プログラム及びデータが記憶されている。また、記憶装置は、プログラムを展開する領域を提供する。プロセッサーが記憶装置に記憶されたプログラムを実行す
ることによって、各種の処理が実現される。
例えば、コントローラー90は、回転用モーター66を制御して、容器組立体1を所定の回転位置まで回転させる。回転機構60には図示しない回転位置センサが設けられており、コントローラー90は、回転位置センサの検出結果に応じて回転用モーター66を駆動・停止させる。
また、コントローラー90は、ヒーター65を制御して、ヒーターをオン・オフ制御して発熱させ、容器組立体1内の液体を所定の温度まで加熱する。
また、コントローラー90は、磁石移動機構70を制御して、磁石3を上下方向に移動させ、図示しない位置センサの検出結果に応じて磁石3を図9の左右方向に揺動させる。
また、コントローラー90は、蛍光測定器55を制御して、反応容器400内の液滴の輝度を測定する。この測定結果は、コントローラー90の図示しない記憶装置に保存される。
このPCR装置50に容器組立体1を装着し、上記3−2の(C)〜(G)の工程を実施することができ、さらにPCRを実施することができる。
5.シリンジ、プランジャー、及びキャップの詳細な説明
本実施形態に係る容器組立体1(以下、生体関連物質精製カートリッジ1として同様の符号を用いる。)の、シリンジ部120及びプランジャー部130及びキャップについて、図面を参照しながらより詳細に説明する。
本実施形態に係る容器組立体1(以下、生体関連物質精製カートリッジ1として同様の符号を用いる。)の、シリンジ部120及びプランジャー部130及びキャップについて、図面を参照しながらより詳細に説明する。
図11は、実施形態に係るシリンジ部120、プランジャー部130及びキャップ110を模式的に示す断面であって、図6の拡大図である。図12は、実施形態に係るシリンジ部120を模式的に示す断面図であって、図11と同じ断面を示している。図13は、実施形態に係るプランジャー部130を模式的に示す平面図である。図14は、実施形態に係るプランジャー部130を模式的に示す断面図であって、図11と同じ断面を示している。なお、便宜上、図11では、生体関連物質精製カートリッジ1内の内容物の図示を省略している。また、図13では、互いに直交する3軸として、X軸、Y軸、及びZ軸を図示している。
5.1.シリンジ
シリンジ部120は、図11及び図12に示すように、プランジャー部130が挿入される開口端部502を有している。シリンジ部120の内面(内周面)504は、プランジャー部130と接触する。シリンジ部120は、第1部分(大径部)505と、第1部分505よりも内径の小さい第2部分(小径部)506と、第1部分505から第2部分506へ内径を縮径する第3部分(縮径部)507と、を有している。第1部分505は、プランジャー部130の筒状部131を収容する。第2部分506は、プランジャー部130の棒状部132を収容する。開口端部502は、第1部分505に設けられている。
シリンジ部120は、図11及び図12に示すように、プランジャー部130が挿入される開口端部502を有している。シリンジ部120の内面(内周面)504は、プランジャー部130と接触する。シリンジ部120は、第1部分(大径部)505と、第1部分505よりも内径の小さい第2部分(小径部)506と、第1部分505から第2部分506へ内径を縮径する第3部分(縮径部)507と、を有している。第1部分505は、プランジャー部130の筒状部131を収容する。第2部分506は、プランジャー部130の棒状部132を収容する。開口端部502は、第1部分505に設けられている。
5.2.プランジャー
プランジャー部130は、シリンジ部120の第1部分505側から(開口端部502から)挿入可能である。プランジャー部130は、図11及び図14に示すように、キャップ110が挿入される開口端部602を有している。プランジャー部130は、筒状部131と、棒状部132と、を有している。
プランジャー部130は、シリンジ部120の第1部分505側から(開口端部502から)挿入可能である。プランジャー部130は、図11及び図14に示すように、キャップ110が挿入される開口端部602を有している。プランジャー部130は、筒状部131と、棒状部132と、を有している。
筒状部131には、開口端部602が設けられている。筒状部131は、開口端部602と対向する端部(底部)606を有している。筒状部131は、シリンジ部120の第1部分505の内周面504に篏合可能である。筒状部131の外周面604には、リング状のフランジ部608が設けられ、フランジ部608がシリンジ部120の内周面504と接触することにより、プランジャー部130は、シリンジ部120に圧入される。図示の例では、フランジ部608は、プランジャー部130の挿入方向A(矢印Aの方向)に2つ並んで設けられている。
筒状部131の内周面には、シリンジ部120の長手方向(挿入方向A)に延在する突起部610が複数設けられている。図示の例では、突起部610は、端部606から開口端部602側に向けて延在している。複数の突起部610は、例えば、筒状部131の内周面に沿って、等間隔で配置されている。
棒状部132は、筒状部131の端部606に支持されて、挿入方向Aに延在している。棒状部132は、シリンジ部120の第2部分506の内周面504に篏合可能である。棒状部132は、端部606の中央から突出している。図示の例では、棒状部132は、中空構造であり、棒状部132の内部は、筒状部131の内部と連通している。
フィルター700は、図11,13,14に示すように、筒状部131の端部606に設けられている。図示の例では、フィルター700は、プランジャー部130と一体に形成されている。フィルター700及びプランジャー部130は、射出成形により一体に形成されてもよい。フィルター700は、端部606を構成している。
フィルター700は、図13に示すように、X軸方向(第1方向)に延在する第1延在部702がY軸方向(第1方向と直交する第2方向)に複数並ぶ第1構造体部712と、Y軸方向に延在する第2延在部704がX軸方向に複数並ぶ第2構造体部714と、を有している。第1構造体部712及び第2構造体部714は、挿入方向Aに(図13の例ではZ軸方向に)並んで互いに接続されている。構造体部712,714は、一体に形成されている。延在部702,704の数は、特に限定されない。延在部702,704は、等間隔で並んでいてもよいし、異なる間隔で並んでいてもよい。延在部702,704の幅は、互いに等しくてもよいし、互いに異なっていてもよい。延在部702,704は、挿入方向Aからみて(図13におけるZ軸方向からみて)、互いに直交している。挿入方向Aからみて、延在部702,704は、網状に設けられている。なお、図13では、第2延在部704を灰色で示している。
フィルター700には、網状に設けられた延在部702,704によって、複数の貫通孔720が設けられている。貫通孔720は、プランジャー部130の内部と外部とを連通している。図13に示す例では、挿入方向Aからみて、貫通孔720は、四角形の形状を有しているが、その形状は特に限定されない。挿入方向Aからみて、貫通孔720の大きさは、例えば、0.01mm以上1mm以下であり、好ましくは、0.3mmである。貫通孔720の大きさが0.01mm以上にすることにより、核酸が貫通孔720でトラップされることを防止でき、貫通孔720の大きさを1mm以下にすることにより、夾雑物の通過を防止できる。なお、「貫通孔の大きさ」とは、貫通孔の差渡しの最大値であり、図13に示す例では、貫通孔720の対角線の長さである。
5.3.キャップ
図15は、キャップ110を拡大して示す模式図である。図15(a)は、キャップ110を模式的に示す斜視図であり、図15(b)は、キャップ110を模式的に示す平面図であり、図15(c)、(d)及び(e)は、それぞれ、図15(b)のA−A線、B−B線及びG−G線の断面の模式図である。
図15は、キャップ110を拡大して示す模式図である。図15(a)は、キャップ110を模式的に示す斜視図であり、図15(b)は、キャップ110を模式的に示す平面図であり、図15(c)、(d)及び(e)は、それぞれ、図15(b)のA−A線、B−B線及びG−G線の断面の模式図である。
キャップ110は、図11に示すように、プランジャー部130の開口端部502から挿入される。キャップ110は、プランジャー部130の内面と摺合し、プランジャー部130の内部620に内部空洞を形成する。
図15に示すように、キャップ110は、プランジャー部130の開口端部602に嵌合され、プランジャー部130の内部620を封止するように装着される。キャップ110は、プランジャー部130をシリンジ部120へ挿入する、又は、シリンジ部120から引き出す、ための手がかり(取手)として機能することができる。キャップ110は、例えば、上述の押圧機構80によって、プランジャー部130がシリンジ部120の内部へと挿入する際に、押圧機構80によって適宜に把持される。また、押圧機構80は、プランジャー部130をシリンジ部120から引き出す方向の動作を行ってもよく、その際には、キャップ110が押圧機構80によって把持されることにより行われることができる。
キャップ110は、プランジャー部130の筒状部131の内部620の空間(内部空洞)と、外部と、を連通させる通気部112(通気口)を有する。キャップ110は、図15に示すように、筒状の形状を有する胴部111と、胴部111のプランジャー部130に挿入される側と反対側の端に、胴部111よりも外径の大きい冠部113と、を有している。胴部111及び冠部113は、一体的に形成されており、両者を貫通するように内部に通気部112が形成されている。
また、キャップ110は、通気部112(通気口)を塞ぐように配置された通気性のシート114を有する。シート114は、通気性を有すればよく、材質、形状、厚さ等は、任意である。シート114は、キャップ110を装着した状態でプランジャー部130が動作した場合に、生体関連物質精製カートリッジ1の内部の圧力が大きく変化しない程度の通気性を有する。
図示の例では、シート114は、キャップ110の通気部112の内側面の段差118に対して図示しない接着剤によって貼り付けて設けられている。シート114の設置の方法や、設置される位置は限定されないが、図示のように設けられることで、キャップ110の製造を容易化でき、また、キャップ110を使用する際に、ユーザーの指等、他の物体がシート114に接触しにくく、コンタミネーション等を低減することができる。なお、図示の例ではシート114は、貼り付けによって設けられているが、機械的な固定や、キャップ110との一体成形等その他の方法で設けられてもよい。シート114としては特に限定されず、各種の材質の、布帛、不織布、多孔性フィルム、及びそれらの積層体とすることができる。
既に述べたが、プランジャー部130の内部には、吸着液(液体)及び気体が存在している。キャップ110をプランジャー部130に装着した後、生体関連物質精製カートリッジ1を静かに立てた状態のままであれば、吸着液がシート114に接触することはない。しかし、キャップ110をプランジャー部130に装着した後、カートリッジを倒立させたり、振動させたりすると、吸着液がシート114に接触する場合がある。そのような場合にシート114の全面が濡れてしまうと、シート114の通気性が失われる場合があり、あるいは、その状態でプランジャー部130をシリンジ部120に押し込むと吸着液の一部がシート114の外側へ漏出してしまう場合がある。
このような観点から、シート114は、撥水性の材質を含んでいることが好ましい。撥水性の材質としては、フッ素系ポリマー、シリコン系ポリマー(シリコーン樹脂)、オレフィン系ポリマーなどが挙げられる。より具体的には、フッ素系ポリマーとしては、ポリ
テトラフルオロエチレン(PTFE)、ポリフッ化ビニリデン(PVDF)、ポリフッ化ビニル(PVF)並びにそれらのコポリマー及びブレンド物が挙げられる。また、オレフィン系ポリマーとしては、ポリエチレン、ポリプロピレン、並びにそれらのコポリマー及びブレンド物が挙げられる。
テトラフルオロエチレン(PTFE)、ポリフッ化ビニリデン(PVDF)、ポリフッ化ビニル(PVF)並びにそれらのコポリマー及びブレンド物が挙げられる。また、オレフィン系ポリマーとしては、ポリエチレン、ポリプロピレン、並びにそれらのコポリマー及びブレンド物が挙げられる。
さらに、シート114として、市販されている防水透湿膜を使用することができる。その具体例としては、ゴアテックス(登録商標)、ハイドロブリーズ(登録商標)、ドライテック(登録商標)、HIREC(登録商標)、マルチポア(登録商標)など(いずれも撥水性及び通気性を有する。)を例示でき、これらを単独あるいは組み合わせる等して使用することができる。
また、シート114が積層体の態様である場合には、撥水性の材質が少なくともプランジャー部130側となるように配置されることがより効果的である。また、シート114をポリプロピレンによって形成する場合には、キャップ110と一体的に形成することができる。また、シート114は、撥水性の乏しい材質で形成された後、コーティング等によって、撥水性の表面が形成されてもよい。そのようなコーティングとしては、含フッ素化合物のコーティングが挙げられる。この場合でも、シート114は、撥水性の材質を含んで構成されたとみなすことができる。さらに、シート114のプランジャー部130側の面には、いわゆる超撥水加工(フラクタル形状等の付与)が施されていてももよい。
シート114が撥水性の材質を含むことにより、仮にシート114が吸着液に接触したとしても、全面が濡れることが抑制され、通気性を良好に確保することができる。
本実施形態のキャップ110は、図15に示すように、メッシュ116を有している。メッシュ116は、網目状の形状を有しており、シート114よりもプランジャー部130の内部空洞側に配置されている。また、メッシュ116は、シート114と離間して設けられている。メッシュ116は、シート114に対して吸着液の液体が付着しにくいようにする機能を有しているため、シート114と離間して設けられることが好ましい。
メッシュ116は、通気部112を塞ぐように設けられ、網目を通しての通気性が確保されれる。メッシュ116の目開きの大きさは、吸着液が液滴となって通過しにくい程度の大きさとなっている。すなわち、吸着液の表面張力の大きさを考慮して、メッシュ116を通過する際に、液滴となって新たな表面を形成することが自由エネルギーの観点から不利となる程度の大きさとする。具体的には、メッシュ116の目開きは、例えば、0.01mm以上0.1mm以下である。0.01mm以上にすることにより、十分な通気性を確保でき、0.1mm以下にすることにより、吸着液の通過を十分に抑制することができる。なお「目開き」とは、メッシュ116の貫通孔の差渡しの最大値である。
メッシュ116が設けられることにより、吸着液が液体の状態でプランジャー部130の外部へ漏出しにくくなる。これによりシート114への吸着液の接触がさらに抑えられる。
本実施形態のキャップ110では、より好ましい態様として、シート114及びメッシュ116の両者が設けられている。しかし、シート114が撥水性の材質を含む場合には、メッシュ116は存在しなくてもキャップ110は良好に機能できる。また、シート114が撥水性の材質を含まない場合には、メッシュ116の存在により、シート114の全面が吸着液で濡れてしまうことを抑制することができる。
なお、本実施形態のキャップ110では、シート114及びメッシュ116を有する場合を例示しているが、キャップ110は、シート114を複数枚(例えば2枚)有しても
よい。例えば、上記例示したメッシュ116の位置に、メッシュ116の代わりに、シート114を配置してもよい。このようにしても、通気性を確保できるとともに、吸着液の漏出を抑制することができる。
よい。例えば、上記例示したメッシュ116の位置に、メッシュ116の代わりに、シート114を配置してもよい。このようにしても、通気性を確保できるとともに、吸着液の漏出を抑制することができる。
5.4.精製処理におけるプランジャーの操作及びキャップの効果
図16及び図17は、生体関連物質精製カートリッジ1を用いて、検体から夾雑物を除去する方法を説明するための図である。なお、便宜上、図16及び図17では、生体関連物質精製カートリッジ1内の内容物の図示を省略している。
図16及び図17は、生体関連物質精製カートリッジ1を用いて、検体から夾雑物を除去する方法を説明するための図である。なお、便宜上、図16及び図17では、生体関連物質精製カートリッジ1内の内容物の図示を省略している。
図16に示すように、プランジャー部130の筒状部131の内部620に、核酸及び夾雑物を含む検体を収容する。具体的には、キャップ110がプランジャー部130から取り外された状態で、先端に検体が付着した綿棒800を、開口端部602から内部620に挿入する。例えば綿棒800の先端を、プランジャー部130の内周面に設けられた突起部610に擦り付けることにより、綿棒800の先端から検体を分離させることができる。このようにして、筒状部131の内部620に、検体を収容することができる。検体に含まれる核酸は、吸着液10(図7等参照)に溶け、または分散される。一方、検体に含まれる夾雑物は、吸着液10に溶けない。
次に、図17に示すように、プランジャー部130をシリンジ部120に対して挿入方向A(図11参照)と反対方向B(引き抜き方向)に移動させる。具体的には、プランジャー部130の開口端部602をキャップ110で封止した後、プランジャー部130をシリンジ部120に対して方向Bに移動させる。本工程において、検体に含まれる核酸は、吸着液10と伴に、フィルター700を通過してプランジャー部130の外部(プランジャー部130の外部であってシリンジ部120の内部)622に排出される。吸着液10の液面は、フィルター700に対して下降する。一方、検体に含まれる夾雑物は、フィルター700の貫通孔720より大きいため、フィルター700を通過することができない。したがって、核酸と夾雑物とは、分離される。プランジャー部130のシリンジ部120に対する移動は、例えば、PCR装置50(図9参照)によって行われる。
この工程において、プランジャー部130をシリンジ部120から引き抜く方向に移動させることで、キャップ110のシート114よりも下側(生体関連物質精製カートリッジ1内)の空間の容積は増大する(図7(b)を併せて参照。)。そのため、シート114が通気性を有しない場合には生体関連物質精製カートリッジ1内の内圧が低下することになる。そうすると、その他のプラグの位置が所定の位置から移動してしまうおそれがある。これに対して、本実施形態のキャップ110では、シート114が通気性を有するため、生体関連物質精製カートリッジ1内の内圧の低下が抑制される。これにより、その他のプラグを所定の位置に安定に維持することができる。
次いで、図7(b)及び図8(a)に示すように、磁気ビーズ30に核酸を吸着させ、核酸が吸着した磁気ビーズ30を、吸着容器100、洗浄容器200及び溶出容器300の外部から磁石3の磁力を印加しながら移動させる。そして、溶出容器300内で、溶出液の液滴36に対して磁気ビーズ30から核酸を溶出させる。その後、図8(b)に示すように、キャップ110を押し、プランジャー部130の先端部134によって第1オイル20を押し下げる(図11の矢印方向Aを参照。)ことで、磁石3の磁力が印加された磁気ビーズ30を所定位置に維持したまま、標的核酸が溶出した溶出液の液滴36が反応容器400へ移動させ、核酸を含む液滴36を反応容器400内の最下部にある試薬34に接触させる。
この工程において、プランジャー部130がシリンジ部120に挿入される方向に移動することで、キャップ110のシート114よりも下側(生体関連物質精製カートリッジ
1内)の空間の容積は減少する(図8(a)、(b)を参照。)。そのため、シート114が通気性を有しない場合には、プランジャー部130の先端部134がシリンジ部120の第2部分(小径部)506に嵌合するよりも早期に、生体関連物質精製カートリッジ1内の内圧が増大することになる。そうすると、その他のプラグの位置が、意図しない時期に所定の位置から移動してしまうおそれがある。
1内)の空間の容積は減少する(図8(a)、(b)を参照。)。そのため、シート114が通気性を有しない場合には、プランジャー部130の先端部134がシリンジ部120の第2部分(小径部)506に嵌合するよりも早期に、生体関連物質精製カートリッジ1内の内圧が増大することになる。そうすると、その他のプラグの位置が、意図しない時期に所定の位置から移動してしまうおそれがある。
これに対して、本実施形態のキャップ110では、シート114が通気性を有するため、生体関連物質精製カートリッジ1内の内圧の上昇が抑制される。これにより、その他のプラグを所定の位置に安定に維持することができ、プランジャー部130の先端部134によって第1オイル20を押し下げることで、意図したとおりに液滴36を反応容器400へ移動させることができる。
本発明は、上述した実施形態に限定されるものではなく、さらに種々の変形が可能である。例えば、本発明は、実施形態で説明した構成と実質的に同一の構成(例えば、機能、方法、及び結果が同一の構成、あるいは目的及び効果が同一の構成)を含む。また、本発明は、実施形態で説明した構成の本質的でない部分を置き換えた構成を含む。また、本発明は、実施形態で説明した構成と同一の作用効果を奏する構成又は同一の目的を達成することができる構成を含む。また、本発明は、実施形態で説明した構成に公知技術を付加した構成を含む。
1…容器組立体、2…流路、3…磁石、5…核酸精製デバイス、10…吸着液、12…第1洗浄液、14…第2洗浄液、16…第3洗浄液、20…第1オイル、22…第2オイル、24…第3オイル、26…第4オイル、30…磁気ビーズ、32…溶出液、34…試薬、6…液滴、50…PCR装置、55…蛍光測定器、60…回転機構、65…ヒーター、66…回転用モーター、70…磁石移動機構、80…押圧機構、90…コントローラー、100…吸着容器、110…キャップ、111…胴部、112…通気部、113…冠部、114…シート、116…メッシュ、118…段差、120…シリンジ部、122…吸着挿入部、126…吸着カバー部、130…プランジャー部、132…棒状部、134…先端部、200…洗浄容器、210…第1洗浄容器、212…第1挿入部、214…第1受入部、216…第1カバー部、220…第2洗浄容器、222…第2挿入部、224…第2受入部、226…第2カバー部、230…第3洗浄容器、232…第3挿入部、234…第3受入部、236…第3カバー部、300…溶出容器、302…溶出挿入部、304…溶出受入部、400…反応容器、402…底部、404…反応受入部、406…リザーバー部、502…開口端部、504…内周面、505…第1部分、506…第2部分、507…第3部分、602…開口端部、604…外周面、606…端部、608…フランジ部、610…突起部、620…内部、622…外部、700…フィルター、702…第1延出部、704…第2延出部、712…第1構造体部、714…第2構造体部、720…貫通孔、800…綿棒
Claims (5)
- 第1部分、及び前記第1部分よりも内径の小さい第2部分を有するシリンジと、
前記第1部分の内周面に篏合可能な筒状部、及び前記筒状部に支持され、前記第2部分の内周面に篏合可能な棒状部を有し、前記シリンジの前記第1部分側から挿入可能であり、前記シリンジに対して挿入方向に移動可能なプランジャーと、
前記筒状部の内部空間と外部とを連通させる通気口と、前記通気口を塞ぐように配置された通気性のシートと、を有し、前記筒状部に接続されるキャップと、
を含む、生体関連物質精製カートリッジ。 - 請求項1において、
前記シートは、撥水性の材料を含む、生体関連物質精製カートリッジ。 - 請求項1又は請求項2において、
前記筒状部の内部に液体が配置されている、生体関連物質精製カートリッジ。 - 請求項1ないし請求項3のいずれか一項において、
前記キャップの前記通気口にはメッシュが配置され、前記メッシュは、前記シートよりも前記プランジャーの前記内部空間の側に配置された、生体関連物質精製カートリッジ。 - 請求項1ないし請求項4のいずれか一項において、
物質結合性固体担体に生体関連物質を吸着させる吸着液と、該吸着液とは混和しない流体を封止収納する吸着容器と、前記物質結合性固体担体から前記生体関連物質を溶出させる溶出液と該溶出液とは混和しない流体を封止収納する溶出容器と、を含み、
前記吸着容器は、前記シリンジと、前記プランジャーと、前記キャップとを有する、
生体関連物質精製カートリッジ。
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