JP2015104364A - 核酸増幅反応用容器、核酸増幅反応用カートリッジ、及び核酸増幅反応用カートリッジキット - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 凍結乾燥された核酸増幅反応試薬と、オイルと、前記核酸増幅反応試薬及び前記オイルを収容する容器と、を含み、前記核酸増幅反応試薬が前記オイル中に保持されている、核酸増幅反応用容器とし、それを用いて、核酸増幅反応用カートリッジ、及び核酸増幅反応用カートリッジキットを構成する。
【選択図】図1
Description
本発明に係るさらなる一実施態様は、核酸増幅反応用カートリッジであって、長手方向を有し、オイルからなる第1プラグ、オイルと相分離し、核酸が結合した微粒子を洗浄する第1洗浄液からなる第2プラグ、オイルからなる第3プラグ、オイルと相分離し、前記核酸が結合した微粒子から前記核酸を溶出する溶出液からなる第4プラグ、オイルからなる第5プラグ、を、順に内部に備えたチューブと、前記チューブの前記第5プラグの配置された側に連通し、オイルを含む核酸増幅反応用容器と、を備え、オイルに溶解せず、凍結乾燥された核酸増幅反応試薬が前記核酸増幅反応用容器に含まれる前記オイルに保持されている、核酸増幅反応用カートリッジである。前記核酸増幅反応試薬は、前記核酸増幅反応用容器の前記チューブに連通する側とは反対側の端部に配置されていることが好ましい。前記核酸反応用容器の前記チューブに連通する側とは反対側の端部はテーパー状であることが好ましい。前記オイルの比重が前記溶出液の比重より小さいことが好ましく、前記核酸増幅反応用容器に含まれる前記オイルの粘度が50cs以下であることが好ましい。前記チューブの第1プラグの配置された側の開口部に取り付けられ、前記チューブの第5プラグの配置された側から前記核酸増幅反応用容器へ液体を押し出すための押出手段を備えてもよい。前記チューブの第5プラグの配置された側の先端は、前記核酸増幅反応用容器中に保持されたオイルに接していてもよい。前記核酸増幅反応用容器中のオイルが脱水処理されていてもよい。前記核酸増幅反応試薬が、DNAポリメラーゼ及びdNTPを含んでもよい。前記核酸増幅反応試薬が、核酸増幅反応用プライマーを含んでもよく、あるいは、前記溶出液が、核酸増幅反応用プライマーを含んでもよい。前記核酸増幅反応試薬が、逆転写酵素を含んでもよい。前記核酸増幅反応試薬とオイルとが、固形ワックスで隔てられていてもよい。なお、前記核酸増幅反応試薬を凍結乾燥させるための核酸増幅反応試薬溶液の量は、前記溶出液の溶液量より少なくてもよい。
本発明に係るさらなる一実施態様は、核酸増幅反応用カートリッジキットであって、上記いずれかの核酸増幅反応用カートリッジと、前記チューブに前記核酸結合性固相担体を導入するためのタンクと、を備えた核酸増幅反応用カートリッジキットである。前記タンクは、核酸を抽出するための溶解液と前記核酸結合性固相担体を含んでもよい。前記タンクは開口部を有し、前記開口部には、取り外し可能な蓋を有してもよい。前記タンクの開口部は、前記チューブの第1プラグ側の開口部に取り付け可能であるように構成されていてもよい。
本発明の第1実施形態は、凍結乾燥された核酸増幅反応試薬と、オイルと、核酸増幅反応試薬及びオイルを収容する容器とを含み、核酸増幅反応試薬がオイル中に保持されている、核酸増幅反応用容器である。凍結乾燥された核酸増幅反応試薬はオイルに溶解しないことが好ましい。
まず、PCR装置50(核酸増幅反応装置)に装着されるカートリッジについて説明した後、本実施形態のPCR装置50の構成・動作について説明する。
図1A及び図1Bは、カートリッジ1の説明図である。図2A〜図2Cは、カートリッジ1の動作説明図である。図2Aは、カートリッジ1の初期状態の説明図である。図2Bは、図2Aの状態からプランジャー10を押して、シール12Aが下シリンジ22に接触したときの側面図である。図2Cは、プランジャー10を押した後のカートリッジ1の説明図である。
図3A〜図3Dは、タンク3の説明図である。
カートリッジ本体9は、プランジャー10と、チューブ20と、PCR容器30とを有する。
以下、図2A〜図2Cを参照しながら、プランジャー10について説明する。
以下、図2A〜図2Cを参照しながら、チューブ20について説明する。
チューブの外形の長手方向に垂直な断面の形状も限定されない。さらにチューブの肉厚(内部の空洞の側面から外部の表面までの寸法)も特に限定されない。チューブが円筒状の場合、その内径(内部の空洞の長手方向に垂直な断面における円の直径)は、例えば、0.5mm以上2mm以下とすることができる。チューブの内径がこの範囲であると、チューブの材質、液体の種類において広範な範囲で液体のプラグを形成しやすい。先端はよりテーパー状に細くなっていることが好ましく、0.2mm以上1mm以下とすることができる。そして、キャピラリー23の末端の内径(キャピラリー23の開口径)を小さくすることによって、PCR容器30内で液滴化した溶出液47がキャピラリー23の開口に吸着して離れなくなることを抑制できる。但し、キャピラリー23の末端の内径を小さくし過ぎると、多数の小さな液滴の溶出液47が形成されてしまう。なお、キャピラリー23の末端以外の部分まで末端と同様に細径化すると、各プラグの体積を確保する必要性からカートリッジ1が長くなってしまい、望ましくない。
溶出液プラグ47の体積は、特に限定されず、核酸を吸着させた粒子等の量などを指標として適宜設定することができる。例えば、粒子等の体積が、0.5μLである場合には、溶出液プラグ47の体積は、0.5μL以上であれば十分であり、0.8μL以上5μL以下とすることが好ましく、1μL以上3μL以下とすることがさらに好ましい。溶出液プラグ47の体積がこれらの範囲であれば、例えば、核酸結合性固相担体の体積を0.5μLにしても、担体から核酸を十分溶出することができる。
図5A及び図5Bは、PCR容器30の周辺の説明図である。図5Aは、初期状態の説明図である。図5Bは、プランジャー10が押された後の状態の説明図である。以下、図2A〜図2Cも参照しながら、PCR容器30について説明する。
図6Aは、PCR装置50の内部構成の斜視図である。図6Bは、PCR装置50の主要構成の側面図である。図7は、PCR装置50のブロック図である。PCR装置50は、カートリッジ1を用いて、核酸溶出処理及び熱サイクル処理を行うものである。
回転機構60は、カートリッジ1及びヒーターを回転させる機構である。回転機構60がカートリッジ1及びヒーターを上下反転させることによって、PCR容器30の流路形成部35内において液滴状の溶出液47が移動し、熱サイクル処理が行われることになる。
磁石移動機構70は、磁石71を移動させる機構である。磁石移動機構70は、カートリッジ1内の磁気ビーズ7を磁石71に引き寄せるとともに、磁石71を移動させることによって磁気ビーズ7をカートリッジ1内で移動させる。磁石移動機構70は、一対の磁石71と、昇降機構73と、揺動機構75とを有する。
押圧機構80は、カートリッジ1のプランジャー10を押す機構である。プランジャー10が押圧機構80によって押されることによって、カートリッジ1の溶出液プラグ47及びオイルプラグがPCR容器30に押し出され、PCR容器30のオイル中に液滴状の溶出液47が形成される。
蛍光測定器55は、PCR容器30の溶出液47に励起光を照射する励起光源と、溶出液47から放出される蛍光の強度を測定する蛍光光度計を有する。蛍光測定器55は、カートリッジ1のPCR容器30の底35Aと対向するように、回転体61よりも下側に配置されている。蛍光測定器55は、低温側ヒーター65Cの挿入穴64Aの下側開口から、PCR容器30の底35Aにある溶出液47から放出される蛍光の強度を測定することになる。
コントローラー90は、PCR装置50の制御を行う制御装置である。コントローラー90は、例えばCPUなどのプロセッサーと、ROMやRAMなどの記憶装置とを有する。記憶装置には各種プログラム及びデータが記憶されている。また、記憶装置は、プログラムを展開する領域を提供する。プロセッサーが記憶装置に記憶されたプログラムを実行することによって、各種の処理が実現される。
(1)カートリッジ1の装着動作
図9A〜図9Dは、カートリッジ1の装着時のPCR装置50の状態の説明図である。図9Aは、カートリッジ1の装着前の初期状態の説明図である。図9Bは、待機状態の説明図である。図9Cは、カートリッジ1の装着直後の説明図である。図9Dは、カートリッジ1の装着状態での初期状態の説明図である。
・磁石71の上下動
図10は、磁石71を下方向に移動させたときの磁気ビーズ7の挙動の概念図である。カートリッジ1内の磁気ビーズ7は、磁石71に引き寄せられる。このため、カートリッジ1の外部で磁石71が移動すると、カートリッジ1内の磁気ビーズ7が磁石71とともに移動する。
磁石71を上下方向に移動させている間、コントローラー90は、揺動用モーター75Aを駆動させて、カートリッジ1を挟む一対の磁石71を前後方向に揺動させても良い。
図14A〜図14Cは、液滴形成処理の説明図である。図14Aは、磁石71を引き上げたときのPCR装置50の状態の説明図である。図14Bは、回転体61を45度回転させた状態の説明図である。図14Cは、押圧機構80のロッド82がプランジャー10を押した状態の説明図である。
図15A及び図15Bは、熱サイクル処理の説明図である。図15Aは、溶出液47に低温側の温度処理を施す状態の説明図である。図15Bは、溶出液47に高温側の温度処理を施す状態の説明図である。各図の左側にはPCR装置50の状態が示されており、各図の右側にはPCR容器30の流路形成部35の内部の状態が示されている。
図15Aに示すように、回転体61が基準位置にあるとき、蛍光測定器55がカートリッジ1のPCR容器30の底35Aと対向する。そのため、溶出液47の蛍光測定時には、コントローラー90は、回転体61を基準位置にした状態で、低温側ヒーター65Cの挿入穴64Aの下側開口からPCR容器30の底35Aにある溶出液47の蛍光強度を蛍光測定器55に測定させる。
===その他===
上記の実施形態は、本発明の理解を容易にするためのものであり、本発明を限定して解釈するためのものではない。本発明は、その趣旨を逸脱することなく、変更、改良され得ると共に、本発明にはその等価物が含まれることは言うまでもない。
前述のPCR装置50は、熱サイクル処理として所定サイクル数にてカートリッジ1の姿勢を変化させて、PCR容器30を上下反転させていた。但し、カートリッジ1の姿勢を変化させる回数は、複数回に限られるものではなく、1回でも良い。
本発明の第3実施形態は、上述の第2実施形態において凍結乾燥した核酸増幅反応試薬300を、核酸増幅反応用容器に配置するのではなく、チューブ301の溶出液プラグ47の下流側に設けられた第3オイルプラグ311中に配置したものである。
核酸増幅反応試薬300の形状は特に限定されないが、チューブ301に栓をするようなプラグ形の場合、溶出液を押出す圧力によって、核酸増幅反応試薬300がオイルプラグとともに移動し、核酸増幅反応試薬が溶出液47に溶解するのを妨げることがある。そこで、チューブ301の核酸増幅反応試薬300が保持されている領域には、オイルが自由に流動できるための空間が存在すること、具体的には、核酸増幅反応試薬をチューブ301の内壁に沿って中空状に配置されることが好ましい(図19A)。すなわち、核酸増幅反応試薬300が中空状に配置した場合、図20に模式図を示したように、プランジャーによる核酸増幅反応用容器への液体の押し出し動作によって、オイル311は核酸増幅試薬300を避けてチューブ301の中央部を通過し、核酸増幅試薬に到達した溶出液47は、核酸増幅反応試薬300を溶解する。その後、核酸増幅試薬300を溶解した溶出液47は、チューブから核酸増幅反応用容器へ押出される。このプランジャーは、溶出液47が核酸増幅反応試薬300に接触したとき、一定時間停止してもよい。これによって、核酸増幅反応試薬300が溶出液47に溶けるまで、核酸増幅反応試薬300を溶出液47に浸漬しておくことができる。また、溶出液47が核酸増幅反応試薬300に接触したとき、引き動作が可能であってもよい。これによって、プランジャーを押したり引いたりすることで、核酸増幅反応試薬300が溶出液47に溶解しやすくなる。また、溶出液47が核酸増幅反応試薬300に接触したとき、溶出液47が加熱される加熱手段を有してもよい。それによって、核酸増幅反応試薬300が溶出液47に溶解しやすくなる。この加熱手段は、例えば、高温側ヒーター65Bまたは低温側ヒーター65Cであってもよい。なお、このようなプランジャーの動作は、コンピュータなどの制御装置によって調節してもよい。さらに、核酸増幅反応試薬300の移動を防ぐため、核酸増幅反応試薬300の下流で、チューブ301に肉厚部302を設け、チューブ301の内径を狭くしてもよい(図19B)。核酸増幅反応試薬をプラグ形にする場合は、膨張によって溶液に負担がかかるのを避けるため、凍結乾燥した核酸増幅反応試薬300に泡303を入れておいてもよい(図19C)。また、複数の核酸増幅反応試薬300を、壁面に配置してもよい(図19D)。
本実験例では、図16に示すように、上述の核酸抽出用キットのうち、チューブ200の内部に、第1プラグ210から第7プラグ270を有する構成を使用した。
まず、容量3mLのポリエチレン製容器130に、375μLの溶解液、及び1μLの磁性ビーズ分散液を収容した。溶解液は、76質量%のグアニジン塩酸塩、1.7質量%のエチレンジアミン四酢酸二水素二ナトリウム二水和物、及び10質量%のポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートの水溶液(東洋紡製、MagExtractor−Genome−、NPK−1)を用いた。また、磁性ビーズ原液としては、50体積%の磁性シリカ粒子及び20質量%の塩化リチウムが含有されたものを用いた。
ヒトから採取した血液を、ピペットを用いて容器130の口121から50μL入れ、容器130に蓋122をして手で30秒間振って撹拌した。その後、容器130の蓋122を外してチューブ200に接続した。なお、チューブ200には両端に栓110が為されており、第1プラグ210側の栓110を外してチューブ200に容器130を接続した。
ここで、第1プラグ210、第3プラグ230、第7プラグ270、第5プラグ250は、シリコーンオイルとした。第2プラグ220の第1洗浄液は、76質量%のグアニジン塩酸塩の水溶液とした。また、第4プラグ240の第2洗浄液は、pHが8.0のトリス−塩酸緩衝液(溶質濃度5mM)とした。第6プラグ260の溶出液は、滅菌水とした。
そして、永久磁石410を動かして、容器130内の磁性ビーズ125をチューブ200内に導入した。そして、磁性ビーズ125を第6プラグ260まで移動させた。磁性ビーズ125がチューブ200内の各プラグに存在した時間はおよそ以下の通りであった。第1、3、7プラグ:各3秒、第2プラグ:20秒、第4プラグ:20秒、第6プラグ:30秒。なお、第2プラグ220及び第4プラグ240においては、磁性ビーズを振動させる等の操作は行わなかった。また、第2プラグ220、第4プラグ240、及び第6プラグ260の体積は、それぞれ、25μL、25μL、及び1μLとした。
次いで、チューブの第7プラグ側の栓110を取り外し、容器120を手で変形させて、第7プラグ270及び第6プラグ260をPCRの反応容器に吐出させた。この操作は、磁性ビーズを永久磁石によって動かして、第2プラグ220まで退避させた上でおこなった。
そして、その抽出液に19μLのPCRの反応試薬を加え、リアルタイムPCRを定法に従って行った。PCRの反応試薬の内訳は、ライトサイクラー480ジェノタイピングマスター(ロシュ・ダイアグノスティックス社製4 707 524)4μL、滅菌水で1000倍希釈したSYBR Green I(ライフテクノロジーズ社製S7563)0.4μL、100μMのβアクチン検出用プライマー(F/R)各0.06μL、滅菌水14.48μLである。実験例1のPCRの増幅曲線を図20に示す。なお、図17の縦軸は、蛍光強度であり、横軸はPCRのサイクル数である。
実験例2では、一般的な核酸抽出法により核酸の抽出を行った。
まず、容量1.5mLのポリエチレン製容器(エッペンドルフチューブ)に、375μLの溶解液、及び20μLの磁性ビーズ分散液を収容した。溶解液、磁性ビーズ分散液の組成としては、上記実験例と同様である。
次にヒトから採取した血液を容器の口からピペットを用いて50μL導入し、容器に蓋をして、ボルテックスミキサーで10分間撹拌し、磁気スタンド及びピペットを操作してB/F分離操作を行った。この状態では、容器内には磁性ビーズ及び少量の溶解液が残存していた。
次いで容器に実験例1と同じ組成の第1洗浄液を450μL導入し、蓋をして5秒間ボルテックスミキサーにより撹拌し、磁気スタンド及びピペットを操作して第1洗浄液を除去した。この操作を2回繰り返した。この状態では、容器内には磁性ビーズ及び少量の第1洗浄液が残存していた。
次いで容器に実験例1と同じ組成の第2洗浄液を450μL導入し、蓋をして5秒間ボルテックスミキサーにより撹拌し、磁気スタンド及びピペットを操作して第1洗浄液を除去した。この操作を2回繰り返した。この状態では、容器内には磁性ビーズ及び少量の第2洗浄液が残存していた。
そして、滅菌水(溶出液)50μLを容器に加え、蓋をして10分間ボルテックスミキサーにより撹拌し、磁気スタンド及びピペットを操作して上澄み液を回収した。この上澄み液が標的核酸を含んでいる。
そしてその抽出液から1μLを分注し、さらに19μLのPCRの反応試薬を加え、リアルタイムPCRを定法に従って行った。PCRの反応試薬の内訳は、ライトサイクラー480ジェノタイピングマスター(ロシュ・ダイアグノスティックス社製4 707 524)4μL、滅菌水で1000倍希釈したSYBR Green I(ライフテクノロジーズ社製S7563)0.4μL、100μMのβアクチン検出用プライマー(F/R)各0.06μL、滅菌水14.48μLである。このときの増幅曲線を図17に示す。
上記実験例から、以下のことが理解できる。
本実施例では、核酸増幅用試薬が溶液の状態のときと、凍結乾燥のときとでの保存安定性能の比較を行った。
まず、200μLのエッペンドルフPCRチューブ(核酸増幅反応用容器)内に調整した核酸増幅溶液を10μL入れ、一方は溶液のまま、もう一方は凍結乾燥にかけた。なお、核酸増幅溶液は、以下の通りである。
0.8μM Primer F:GAC CAA TCC TGT CAC CTC TGA C
0.8μM Primer R:AGG GCA TTT TGG ACA AAG CGT CTA
0.2μMプローブ
TaqMan probe: FAM- TGC AGT CCT CGC TCA CTG GGC ACG -TAMRA
1xSuperScriptIII RT/Platimun Taq Mix
1xPCR Master Mix
凍結乾燥した核酸増幅用試薬は、オイルを重層し、それぞれ室温(25℃)で保存し、数日〜1ヵ月後のRT−PCRの反応を調べた。なお、RT−PCRの条件は、以下の通りである。
逆転写 50℃ 60秒
酵素不活性化 95℃ 10秒
変性 95℃ 5秒
アニーリング・伸張 57℃ 20秒
(50サイクル)
図18(A)に示すように、溶液状態では、一日の保存もできない。一方、図18(B)に示すように、凍結乾燥状態では、1ヶ月以上保存可能であった。
このように、核酸増幅用試薬が凍結乾燥状態であれば、室温で1ヶ月以上保存後のサンプルでも、調製直後と変わらず反応が起きる。さらに、凍結乾燥物がオイルで覆われていても、オイルからの阻害を受けることなく反応が起きる。
実験例3と同じ条件で、図19Aのように作製した凍結乾燥した核酸増幅用試薬300を用い、図20のようにして核酸増幅用試薬300を溶出液47に溶解させ、押出して得られた溶出液47を用いて、RT−PCRを行った(図21では点線)。コントロールとして、実験直前に調整した核酸増幅用試薬を用い、同様にRT−PCRを行った(図21では実線)。
図21に示すように、増幅に関し、両者はほとんど同様だった。このように、凍結乾燥した核酸増幅用試薬をチューブに固着させても、RT−PCRは、凍結乾燥しない核酸増幅用試薬と同様の効率で、核酸を増やすことができた。
3 タンク、3A 蓋、3B 変形部、
5 アダプター、5A蓋、7 磁気ビーズ、
9 カートリッジ本体、
10 プランジャー、11 筒状部、11A 取付台、
12 棒状部、12A シール、13 リブ、
20 チューブ、21 上シリンジ、22 下シリンジ、
23 キャピラリー、25 固定爪、26 ガイド板、
30 PCR容器、31 シール形成部、
32 オイル受容部、32A オイル受容空間、
33 段差部、34A 上シール部、34B 下シール部、
35 流路形成部、35A 底、
36A 高温領域、36B 低温領域、
41 溶解液、42 オイル、43 洗浄液、
44 第1オイルプラグ、45 洗浄液プラグ、46 第2オイルプラグ、
47 溶出液(PCR溶液)、
47A 溶解液、47B オイルプラグ、47C 核酸増幅反応液、
48 第3オイルプラグ、
50 PCR装置、51 ベース、52 支持台、53 側壁、
53A カートリッジ挿入口、55 蛍光測定器、
60 回転機構、61 回転体、
62 装着部、63 固定部、
63A ガイドレール、64A 挿入穴、
65 ヒーター、65A 溶出用ヒーター、
65B 高温側ヒーター、65C 低温側ヒーター、
65D スペーサー、66 回転用モーター、
70 磁石移動機構、71 磁石、72 アーム、
73 昇降機構、73A キャリッジ、
73B 昇降用モーター、73C キャリッジガイド、
73D ベルト、73E プーリー、
75 揺動機構、75A 揺動用モーター、75B 揺動回転軸、
80 押圧機構、81 プランジャー用モーター、82 ロッド、
90 コントローラー
110 栓
120 (装着後の)タンク
121 開口部
122 蓋
123 空間
124 溶解液
125 磁気ビーズ
130 (装着前の)タンク
200 キャピラリー
210〜270 第1〜第7プラグ
300 凍結乾燥した核酸増幅用試薬
301 チューブ
302 肉厚部
303 泡
311 オイル
Claims (26)
- 凍結乾燥された核酸増幅反応試薬と、
オイルと、
前記核酸増幅反応試薬及び前記オイルを収容する容器と、
を含み、前記核酸増幅反応試薬が前記オイル中に保持されている、核酸増幅反応用容器。 - 前記オイルが脱水処理されている、請求項1に記載の核酸増幅反応用容器。
- 前記凍結乾燥された核酸増幅反応試薬がケーキ状であること、を特徴とする請求項1または2に記載の核酸増幅反応用容器。
- 前記凍結乾燥された核酸増幅反応試薬は、直径20μm以下の孔を有する多孔質であること、を特徴とする請求項1〜3のいずれか一項に記載の核酸増幅反応用容器。
- 前記核酸増幅反応試薬が、DNAポリメラーゼ及びdNTPを含む、請求項1〜4のいずれか一項に記載の核酸増幅反応用容器。
- 前記核酸増幅反応試薬が、核酸増幅反応用プライマーを含む、請求項5に記載の核酸増幅反応用容器。
- 前記核酸増幅反応試薬が、逆転写酵素を含む、請求項5または6に記載の核酸増幅反応用容器。
- 前記核酸増幅反応試薬と前記核酸増幅反応用オイルとが、固形ワックスで隔てられている、請求項1〜7のいずれか一項に記載の核酸増幅反応用容器。
- 長手方向を有し、
オイルからなる第1プラグ、
オイルと相分離し、核酸が結合した微粒子を洗浄する第1洗浄液からなる第2プラグ、
オイルからなる第3プラグ、
オイルと相分離し、前記核酸が結合した微粒子から前記核酸を溶出する溶出液からなる第4プラグ、
オイルからなる第5プラグ、
を、順に内部に備えたチューブと、
前記チューブの前記第5プラグの配置された側に連通し、オイルを含む核酸増幅反応用容器と、を備え
凍結乾燥された核酸増幅反応試薬が前記核酸増幅反応用容器に含まれる前記オイル中に保持されている、核酸増幅反応用カートリッジ。 - 前記核酸増幅反応試薬は、前記核酸増幅反応用容器の前記チューブに連通する側とは反対側の端部に配置されていること、を特徴とする、請求項9に記載の核酸増幅反応用カートリッジ。
- 前記核酸反応用容器の前記チューブに連通する側とは反対側の端部はテーパー状であることを特徴とする、請求項10に記載の核酸増幅反応用カートリッジ。
- 前記核酸増幅反応用容器に含まれる前記オイルの比重が前記溶出液の比重より小さいこと、を特徴とする、請求項10または11に記載の核酸増幅反応用カートリッジ。
- 前記核酸増幅反応用容器に含まれる前記オイルの粘度が50cs以下であること、を特徴とする、請求項9〜12のいずれか一項に記載の核酸増幅反応用カートリッジ。
- 前記チューブの第1プラグの配置された側の開口部に取り付けられ、前記溶出液を、前記チューブの第5プラグの配置された側から前記核酸増幅反応用容器へ押し出すための押出手段を備える、請求項9〜13のいずれか一項に記載の核酸増幅反応用カートリッジ。
- 前記チューブの第5プラグの配置された側の先端は、前記核酸増幅反応用容器中に保持されたオイルに接していることを特徴とする、請求項9〜14のいずれか一項に記載の核酸増幅反応用カートリッジ。
- 前記核酸増幅反応用容器中のオイルが脱水処理されている、請求項9〜15のいずれか一項に記載の核酸増幅反応用カートリッジ。
- 前記核酸増幅反応試薬が、DNAポリメラーゼ及びdNTPを含む、請求項9〜16のいずれか一項に記載の核酸増幅反応用カートリッジ。
- 前記核酸増幅反応試薬が、核酸増幅反応用プライマーを含む、請求項17に記載の核酸増幅反応用カートリッジ。
- 前記溶出液が、核酸増幅反応用プライマーを含む、請求項17に記載の核酸増幅反応用カートリッジ。
- 前記核酸増幅反応試薬が、逆転写酵素を含む、請求項17〜19のいずれか一項に記載の核酸増幅反応用カートリッジ。
- 前記核酸増幅反応試薬とオイルとが、固形ワックスで隔てられている、請求項9〜20のいずれか一項に記載の核酸増幅反応用カートリッジ。
- 前記核酸増幅反応試薬を凍結乾燥させるための核酸増幅反応試薬溶液の量は、前記溶出液の溶液量より少ない、請求項9〜21のいずれか一項に記載の核酸増幅反応用カートリッジ。
- 請求項9〜22に記載の核酸増幅反応用カートリッジと、前記チューブに前記核酸結合性固相担体を導入するためのタンクと、を備えた核酸増幅反応用カートリッジキット。
- 前記タンクは、核酸を抽出するための溶解液と前記核酸結合性固相担体を含む、請求項23に記載の核酸増幅反応用カートリッジキット。
- 前記タンクは開口部を有し、前記開口部には、取り外し可能な蓋を有する、請求項23または24に記載の核酸増幅反応用カートリッジキット。
- 前記タンクの開口部は、前記チューブの第1プラグ側の開口部に取り付け可能であるように構成されている、請求項23〜25のいずれか一項に記載の核酸増幅反応用カートリッジキット。
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