JP2015037396A - 牛樟芝の培養方法 - Google Patents
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Abstract
Description
前記培地は、粉末状の基材と水とを含み、前記粉末状の基材は、少なくとも1つの全粒穀物、例えば、苦蕎麦粉、玄米粉、ハトムギ粉、または少なくとも2つの前記粉末を所定の比率で混合したものを有する。
以下では、図面を参照しながら、本考案の実施例に対して詳しく説明する。
種菌の調製
本実施例の牛樟芝の菌株(BCRC 35396)は、台湾新竹食品工業発展研究の生物資料保存および研究センターに提供され、牛樟芝の菌糸で満たされるまで25℃、斜面培地にて培養された。ここで、斜面培地は、2%ブドウ糖、2%麦芽エキス、0.1%蛋白分解物(Peptone)、および2%コロイドから調製された。
細胞内多糖類の測定法
被測定試料の粉末100mgと蒸留水10mlとを遠心分離管に入れ、滅菌した後8000rpmで5分間遠心分離し、上清液を回収した。前記上清液と95%アルコールとを1:4の体積比で混合し、この混合物における多糖体を沈殿させるように4℃の冷蔵庫で24時間静置した。次に、混合物を8000rpmで5分間遠心分離し、当該上清液を除去することで沈殿物を得た。前記沈殿物を水酸化ナトリウムで再溶解、希釈し、フェノール硫酸法(Phenol-sulfuric acid assay)で細胞内多糖類の濃度を測定した。希釈した後の溶液を5%のフェノール溶液と混合し、濃硫酸5mlを加えて10分間混合し、さらに25℃の恒温水槽で15分間反応させ、分光光度計で波長490nmにおける吸光度を測定し、ブドウ糖標準液の濃度とその吸光度の標準曲線とを参照することにより、前記被測定試料における多糖類の濃度を知ることができる。
総ポリフェノール含有量の測定
被測定試料である菌糸体を取って、固定倍率(1:20)のメタノールで、50℃、130rpmの水溝において12時間抽出反応した後に、8000rpmで5分間遠心分離することにより、上清液を得た。当該上清液に2%炭酸ナトリウム6mlを添加し均一に混合した。さらに、フェノール試薬(Folin-Clocalteu's phenol reagent)を添加し約30分間反応させた後、730nmの波長でその吸光度を測定し、既知濃度の標準没食子酸(Gallic acid)の検量線と比較することにより、当該被測定試料の総ポリフェノール含量を算出した。
トリテルペン類含有量の測定
被測定試料100mgと50%エタノール3mlとを遠心分離管中に混合し、30分間超音波振動をかけながら抽出を行い、さらに8000rpmで5分間遠心分離した。遠心分離管から上清液3mlを取り出してバイアルに入れ、そして遠心分離管で上述したアルコールの添加、抽出および遠心分離などの工程を繰り返した後に、上清液3mlを取り出してバイアルに入れた。当該バイアルにおける上清液を乾燥することによって得ることのできる乾燥物に、水3mlとクロロホルム3mlとを添加して当該乾燥物を再溶解し、30分間超音波振動をかけながら抽出を行うことによって、その下層液を取り出し、そして、5%炭酸水素ナトリウム3mlを添加してから、30分間超音波振動をかけながら抽出を行い、pH値を2〜3に調整し、その下層液を取出して乾燥し、飽和状態のエタノール2mlを添加し、波長245nmによって吸光度を測定することにより、当該被測定試料におけるトリテルペン類含有量を得ることができる。
培養用照射光の波長および強度に関する分析
玄米をミル装置で粉末状に粉砕し、玄米粉25gをガラス板上に置いて、水15gと均一混合した。この混合物を減菌した後、牛樟芝を培養するための固体粉末の培地として用いた。実施例1により培養された牛樟芝種菌を、5%の接種菌量で前記固体粉末の培地に接種し、封入した後に25℃の恒温にてインキュベーターで15日間培養し、その後、光照射を行った。本実施例において、照射光の波長によって2つの実験グループに分けた。第1実験グループでは、緑色光を照射し、第2実験グループでは、青色光を照射した。さらに、各実験グループは、照射光の強度によって4つの群に分けた。各実験グループの各前記第1群が空白で、各前記第2群における照射光の強度が1〜2 μmol/s・m2、各前記第3群における照射光の強度が15〜16μmol/s・m2、各前記第4群における照射光の強度が19〜20μmol/s・m2であった。各群に対し、照射光によって15日間培養した後、各群で成長した牛樟芝をそれぞれ回収し、24時間乾燥し、さらに粉砕してから実施例2〜4の方法で各群の牛樟芝におけるトリテルペン類、総ポリフェノール、および細胞内多糖類の含有量を測定した。各群に対して、上記の工程を三回繰り返した。各群の牛樟芝における各有効成分含有量を統計した結果を図1および図2に示す。図1と図2は、それぞれ、第1実験グループと第2実験グループで測定した結果を示す。
固体培地含水量の分析
玄米粉末を適切な量で、相対的な割合の水と培養容器で混合し、それぞれ第1群および第2群としての、含水量55%の玄米粉末の固体培地および含水量45%の玄米粉末の固体培地を調製した。次に、各群の固体培地に5%の種菌を接種し、3ヶ月間培養し、さらに3ヶ月目に培養したときに、成長した牛樟芝をその固体培地から分離させ、実施例2〜4の方法で、各群において培養された牛樟芝の有効成分含有量を測定した。その結果を図3に示す。
培養温度の分析
本実施例には、3つの実験群があった。各群において、それぞれ、玄米をミル装置で粉末状に粉砕し、玄米粉25gをガラス板上において含水量45%に水分を調整することにより、固体培地を形成した。当該固体培地を減菌した後、実施例1の種菌を5%の種菌量で各群の固体培地に接種した。その後、各群において、異なる培養温度で牛樟芝を培養した。ここで、第1群では、25℃の恒温培養室で牛樟芝を30日間固体培養した。第2群では、まず、25℃の恒温培養室で牛樟芝を15日間固体培養し、次に、培養温度30℃で15日間培養した。第3群では、まず、25℃の恒温培養室で牛樟芝を15日間固体培養し、次に、培養温度35℃で15日間培養した。培養された各群の牛樟芝を回収し、実施例2〜4の方法で、各群の牛樟芝の有効成分含有量を測定した。その結果を図6に示す。
固体培地組成の分析
まず、玄米、苦蕎麦およびハトムギをそれぞれ粉末状に粉砕し、異なる比率で含水量45%の固体培地を4群調製した。各群の培地に用いる各成分比率は以下のとおりである。第1群では、玄米粉のみを用いた。第2群では、玄米粉、苦蕎麦粉およびハトムギ粉の組成比率は、5:2:1であった。第3群では、玄米粉、苦蕎麦粉およびハトムギ粉の組成比率は、7:2:1であった。第4群では、玄米粉、苦蕎麦粉およびハトムギ粉の組成比率は、9:2:1であった。各群の固体培地を減菌した後、実施例1の種菌を5%の接菌量で各群の固体培地中に接種し、牛樟芝を3ヶ月間培養し、実施例2〜4の方法で、各群の牛樟芝の有効成分含有量を測定した。その結果を図7に示す。
Claims (19)
- 牛樟芝の培養方法であって、
種菌を培地中に接種し、少なくとも1つの培養条件下で培養し、
前記培養条件は、緑色光と青色光とからなる群より選択された光照射環境を含むことを特徴とする牛樟芝の培養方法。 - 前記光照射環境における照射光強度は、1〜20μmol/s・m2であることを特徴とする請求項1に記載の牛樟芝の培養方法。
- 前記光照射環境が青色光照射である場合、前記光照射環境における照射光強度は、2〜16μmol/s・m2であることを特徴とする請求項2に記載の牛樟芝の培養方法。
- 前記光照射環境が緑色光照射である場合、前記光照射環境における照射光強度は、11〜20μmol/s・m2であることを特徴とする請求項2に記載の牛樟芝の培養方法。
- 前記培養条件は、25〜35℃の培養温度をさらに含むことを特徴とする請求項1に記載の牛樟芝の培養方法。
- 前記培地は、粉末状の基材及び水を含むことを特徴とする請求項1に記載の牛樟芝の培養方法。
- 前記粉末状の基材は、少なくとも1つの全粒穀物を有することを特徴とする請求項6に記載の牛樟芝の培養方法。
- 前記粉末状の基材は、苦蕎麦粉と、玄米粉と、ハトムギ粉とからなる群より選択されることを特徴とする請求項7に記載の牛樟芝の培養方法。
- 前記粉末状の基材は、所定の比率の苦蕎麦粉と、玄米粉と、ハトムギ粉とからなることを特徴とする請求項8に記載の牛樟芝の培養方法。
- 前記粉末状の基材において、ハトムギ粉の含有量が最も低く、苦蕎麦粉の含有量がその次に低く、玄米粉の含有量が最も高いことを特徴とする請求項9に記載の牛樟芝の培養方法。
- 前記粉末状の基材において、ハトムギ粉の含有量が最も低く、玄米粉の含有量がその次に低く、苦蕎麦粉の含有量が最も高いことを特徴とする請求項9に記載の牛樟芝の培養方法。
- 前記粉末状の基材の組成比として、ハトムギ粉が1で、玄米粉がハトムギ粉の10〜2倍で、苦蕎麦粉がハトムギ粉の2〜10倍であることを特徴とする請求項9に記載の牛樟芝の培養方法。
- 玄米粉、苦蕎麦粉及びハトムギ粉の組成比は、9:2:1であることを特徴とする請求項12に記載の牛樟芝の培養方法。
- 前記培地の含水量は、35〜55%であることを特徴とする請求項6に記載の牛樟芝の培養方法。
- 前記培地の含水量は、35〜50%であることを特徴とする請求項14に記載の牛樟芝の培養方法。
- 前記種菌は、破砕した牛樟芝の菌塊を培養して得られたものであることを特徴とする請求項1に記載の牛樟芝の培養方法。
- 光照射しない環境で15日間培養する一方の培養条件と、光照射環境で少なくとも15日間培養する他方の培養条件とからなる2つの培養条件を含むことを特徴とする請求項1〜16のいずれか一項に記載の牛樟芝の培養方法。
- 前記一方の培養条件の培養温度は、前記他方の培養条件の培養温度より低いことを特徴とする請求項17に記載の牛樟芝の培養方法。
- 前記一方の培養条件の培養温度が25℃で、前記他方の培養条件の培養温度が25〜35℃であることを特徴とする請求項18に記載の牛樟芝の培養方法。
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