TWI645034B - 蛹蟲草子實體的培養方法 - Google Patents

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Abstract

本發明的一主要目的在提供一種可改善蛹蟲草子實體形態(morphology)的蛹蟲草子實體的培養方法，其中吸收有茶汁的米作為一固態培養基被使用。相較於吸收水的米作為固態培養基，於相同的培養條件下使用本發明的固態培養基所培養出來的蛹蟲草子實體顯著的較為粗大。

Description

蛹蟲草子實體的培養方法
本發明係關於一種蛹蟲草子實體的培養方法，尤其有關一種可改善蛹蟲草子實體形態(morphology)的蛹蟲草子實體的培養方法。
TW200600006台灣專利申請案揭示一種培養蛹蟲草子實體的方法，包括提供蛹蟲草；將蛹蟲草自由配對；將配對後之蛹蟲草培養於固態培養基上；將培養之蛹蟲草移至液態培養基內培養；獲得蛹蟲草菌絲體；將蛹蟲草菌絲體避光培養於含有米飯的培養基上；將蛹蟲草菌絲體照光培養；及獲得蛹蟲草子實體。藉此提供一種可快速且大量繁殖蛹蟲草子實體之方法。此申請案並無提及蛹蟲草子實體的形態，更無討論如何改善所獲得的蛹蟲草子實體的形態。
TW201404880台灣專利申請案揭示一種以茶葉為基質培養蛹蟲草之方法及其產物，該方法包含有如下步驟：茶葉殺青處理之步驟；製作茶液培養基之步驟；將蛹蟲草菌絲體接種於茶液培養基中之茶葉上之步驟；蛹蟲草菌絲體培養成長之步驟，於是得到蛹蟲草、茶葉及富含活性物質 之茶水。此申請案的主要內容為透過添加糖於茶液培養基中探討蛹蟲草菌絲體成長面積的變化，及透過添加糖或脫脂乳於茶液培養基中探討由蛹蟲草分泌釋放至茶水中的活性物質含量的變化，以獲得富含活性物質且可飲用之茶水。此申請案並無提及蛹蟲草子實體的形態。
本發明的一主要目的在提供一種可改善蛹蟲草子實體形態(morphology)的蛹蟲草子實體的培養方法，亦即透過本發明方法可培養出相對較為粗大的蛹蟲草子實體。
為了達成上述本發明的目的一種新的固態培養基被用來培養蛹蟲草子實體，該固態培養基包含吸收有茶汁的米。相較於吸收水的米作為固態培養基，於相同的培養條件下以本發明的吸收有茶汁的米作為固態培養基所培養出來的蛹蟲草子實體顯著的較為粗大。
圖1示出了使用同一株菌株，30克米中分別添加RO水；RO水及0.5克，0.75克，1.0克，1.5克，2.0克，及2.5克的茶葉；及茶水所獲得的蛹蟲草子實體的乾重。
圖2示出了使用同一株菌株，30克米中分別添加RO水；RO水及1.0克的茶葉；及茶水所獲得的蛹蟲草子實體的長、寛及乾重。
圖3示出了使用编號為38207及38808兩株不同蛹蟲草菌株，於30克米中分別添加RO水；RO水及1.0克的茶葉；及茶水所獲得的蛹蟲草子實體的寛(mm)。
本發明提供一種蛹蟲草子實體的培養方法，包含下列步驟：a)提供一種源，其為活化的蛹蟲草孢子或蛹蟲草菌絲體；b)提供一固態培養基，其中該固態培養基包含米；c)將步驟a)的種源接種於步驟b)的固態培養基的米上，並進行培養直到形成蛹蟲草子實體；其特徵在於：該步驟b)的固態培養基的米吸收有茶汁。
較佳的，步驟b)的固態培養基係通過含有下列步驟的方法而被提供：1)將茶葉、米及水依序加入於一容器內，其中該茶葉對米的乾重比為0.5：30至3：30，及該茶葉和米的總乾重對水的重量比為1：1至1：0.5；及2)對該容器內的茶葉、米及水進行滅菌。
更佳的，該茶葉位於該容器內呈現自然分佈。
較佳的，步驟b)的固態培養基係通過含有下列步驟的方法而被提供：i)將茶葉與水混合； ii)固液分離步驟i)的混合物而獲得一茶汁；iii)將米及步驟ii)的茶汁混合，並對所獲得的米及茶汁混合物進行滅菌，其中該茶葉對米的乾重比為0.5：30至3：30，及該茶葉和米的總乾重對水的重量比為1：1至1：0.5。
較佳的，步驟i)的水為溫度介於45-99℃的熱水，並且該茶葉與水的混合時間介於1分鐘至1小時。
較佳的，步驟i)的水為溫度介於5℃至室溫的水，並且該茶葉與水的混合時間介於0.5小時至48小時。
較佳的，該茶葉為未醱酵茶、半醱酵茶或醱酵茶。以未醱酵茶為更佳。
較佳的，該米為糙米、胚芽米或白米。以白米為更佳。
實驗
材料
試劑及培養基：PDB(potato dextrose broth)購自BD(Becton Dickinson and Company,NJ,USA)。粳米(含水量14.2wt%，購自池上米糧食行，台灣台東市)。茶葉來自行政院農委會茶業改良場(未醱酵茶，含水量3.7wt%)。
儀器：電子天平、-80℃超低溫直立式冷凍櫃、光照培養箱、25℃培養箱、冷凍乾燥機。
方法
(1)種菌培養液：將-80℃冷凍孢子保存液(108spores/mL)接種1%至PDB培養基中(potato starch 4g/L,dextrose 20g/L)，25℃振盪培養(150rpm)約5-7天即為固態培養之種源。
(2)蛹蟲草固態培養：取30g白米，按照1：0.8的固液重量比加入RO水，置於已加入不同茶葉含量(0.5~5g)之450mL玻璃瓶中，蓋上蓋子進行高溫高壓滅菌(121℃，15分鐘)，待冷卻後，取上述液態培養的種菌液15mL接入含已滅菌完成之固態培養基中，環境條件分為兩階段培養：
a.避光培養：溫度25±3℃/7天，。
b.光照培養：溫度23±3℃、光照強度500~1500lux、照光時間10小時/不照光14小時交替，培養2個月後採收子實體後凍乾，記錄子實體之產量(g/瓶)。
茶水製備：將1g茶葉加入24mL之90℃熱水，攪拌20分鐘後去除茶葉留下茶水，以茶水取代前述RO水並重覆上述蛹蟲草固態培養之步驟。
(3)子實體大小量取：將收取後子實體，以尺規量取每根子實體長度及頂端寬度，記錄後，統計分析其差異性。
(4)菌株測試：分別以2株不同菌株進行測試，評估固態培養基有無添加茶葉或茶水對不同菌株的蛹蟲草子實體形態之影響。
結果
於30克米中分別添加0.5克，0.75克，1.0克，1.5克，2.0克，2.5克，3.0克，4.0克，及5.0克的茶葉所獲得的蛹蟲草子實體顯示當茶葉添加量由0增加至1.0克時，所獲得的蛹蟲草子實體的長、寛及乾重都逐漸提高。但當茶葉添加量由1.0增加至5.0克時，所獲得的蛹蟲草子實體的長、寛及乾重並未再增加或甚至降低。
圖1示出了使用同一株菌株，30克米中分別添加RO水；RO水及0.5克，0.75克，1.0克，1.5克，2.0克，及2.5克的茶葉；及茶水所獲得的蛹蟲草子實體的乾重。
圖2示出了使用同一株菌株，30克米中分別添加RO水；RO水及1.0克的茶葉；及茶水所獲得的蛹蟲草子實體的長、寛及乾重。
從圖1可以看出當茶葉添加量1克/瓶時子實體乾重(2.36±0.29g/瓶)達最高。當茶葉添加量2.5克/瓶時子實體乾重已低於只添加RO水的固體培養基的對照組。從圖2可以看出以茶水取代的RO水所製備的固體培養基具有相當於於30克米中添加1.0克茶葉的固體培養基的實驗結果，兩組實驗所獲得的蛹蟲草子實體的長、寛及乾重都大約相同。
圖3示出了使用编號為38207及38808兩株不同蛹蟲草菌株，於30克米中分別添加RO水；RO水及1.0克的茶葉；及茶水所獲得的蛹蟲草子實體的寛(mm)。從圖3的結果可以看出對38207及38808兩株不同蛹蟲草菌株，依本發明方法所培養的蛹蟲草子實體相對於對照組具有大約相同的寛度增加程度。

Claims (12)

  1. 一種蛹蟲草子實體的培養方法，包含下列步驟：a)提供一種源，其為活化的蛹蟲草孢子或蛹蟲草菌絲體；b)提供一固態培養基，其中該固態培養基包含米；c)將步驟a)的種源接種於步驟b)的固態培養基的米上，並進行培養直到形成蛹蟲草子實體；其特徵在於：該步驟b)的固態培養基的米吸收有茶葉的茶汁，其中該茶葉對米的乾重比為0.5：30至2：30。
  2. 如請求項1的方法，其中步驟b)的固態培養基係通過含有下列步驟的方法而被提供：1)將該茶葉、米及水依序加入於一容器內，其中該茶葉和米的總乾重對水的重量比為1：1至1：0.5；及2)對該容器內的茶葉、米及水進行滅菌。
  3. 如請求項1的方法，其中步驟b)的固態培養基係通過包含下列步驟的方法而被提供：i)將該茶葉與水混合；ii)固液分離步驟i)的混合物而獲得一茶汁；iii)將米及步驟ii)的茶汁混合，並對所獲得的米及茶汁混合物進行滅菌，其中該茶葉和米的總乾重對水的重量比為1：1至1：0.5。
  4. 如請求項2或3的方法，其中該茶葉為未醱酵茶、半醱酵茶或醱酵茶。
  5. 如請求項4的方法，其中該茶葉為未醱酵茶。
  6. 如請求項1的方法，其中該米為糙米、胚芽米或白米。
  7. 如請求項6的方法，其中該米為白米。
  8. 如請求項2的方法，其中該茶葉位於該容器內與米呈現自然分佈。
  9. 如請求項3的方法，其中步驟i)的水為溫度介於45-99℃的熱水，並且該茶葉與水的混合時間介於1分鐘至1小時。
  10. 如請求項3的方法，其中步驟i)的水為溫度介於5℃至室溫的水，並且該茶葉與水的混合時間介於0.5小時至48小時。
  11. 如請求項1的方法，其中步驟a)的種源為活化的蛹蟲草孢子。
  12. 如請求項1的方法，其中步驟a)的種源為蛹蟲草菌絲體。
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