CN115399192B - 一种利用红衣补血口服液药渣生产蛹虫草菌质的方法及其应用 - Google Patents

一种利用红衣补血口服液药渣生产蛹虫草菌质的方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种利用红衣补血口服液药渣生产蛹虫草菌质的方法及其应用，属于微生物发酵技术领域。本发明结合红衣补血口服液原料药食同源的特性，经过物理破碎后作为发酵原料加入培养基，经过蛹虫草菌的长时间发酵和酶解消化全部转化为产品，不再产生二次污染。产品中含有中药中的部分有效成分同时含有丰富的虫草素、虫草多糖、腺苷、虫草酸，兼具调味和保健功能，同时药渣的加入能够明显提高产品中腺苷和虫草酸的含量。通过本发明方法，开发药渣新用途，实现红衣补血口服液药渣的高效利用，一举两得。

Description

一种利用红衣补血口服液药渣生产蛹虫草菌质的方法及其 应用
技术领域
本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种利用红衣补血口服液药渣生产蛹虫草菌质的方法及其应用。
背景技术
近年来随着我国中药制药产业的迅速发展和产能的逐步提高，中药材经过提取后产生的中药渣等固体废弃物也不断增多，中成药生产，中药饮片的炮制，含中药成分轻化工产品的生产过程中均有大量的药渣产生。据统计，我国中药生产企业每年都要产生数千万吨的中药渣，并且90％以上的生产厂家均将中药渣作为废料垃圾处理。中药渣种类多、湿度大、处理难度大，包括大量的粗纤维、粗脂肪、粗蛋白、淀粉及微量元素等有效成分，目前大部分采用焚烧和填埋方式进行处理，即造成了中药资源的浪费又容易引起环境污染。
目前中药渣的综合利用已经有很多报道，包括中药渣栽培食用菌，造纸，生产絮凝剂，其中利用中药渣生产食用菌的研究开展的比较多，并且已经取得了一定的效果，但是这种方法处理能力有限，并且食用菌采收后剩余的固体培养料又会产生新的污染。复方红衣补血口服液是已经上市的药物，具有功效稳定、毒副作用小的特点，受到市场的青睐。“CN101411784A一种复方红衣补血口服液的制备工艺”公开了如下内容：取木耳20g加16倍重量的水，浸泡30分钟，加热微沸2小时，滤过，药渣再加10倍重量的水，加热微沸1小时，滤过，合并滤液，浓缩至密度为1.02；取花生红衣100g、枸杞子100g、大枣200g，加水煎煮两次，第一次加10倍重量的水，第二次加8倍重量的水，每次加热微沸1小时，滤过，合并煎液，滤液浓缩至密度为1.07，再加乙醇使浓缩液中乙醇含量重量比达65％，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇，补加等重量的水，搅匀，静置8小时，滤过；然后在滤液中加入木耳浓缩液、蜂蜜30g和蔗糖140g，煮沸20分钟，滤过，滤液放冷至室温再加入柠檬酸2g，加水调至1000ml，分装，灭菌，即得。该工艺能够产生大量的药渣，并且采用的都是药食同源原料，药渣中含有大量的营养物质和有效活性成分，需要对其进一步处理。目前药渣的处理采用的方法大都按照简单废弃物进行处理，造成了资源的极大的浪费，并且还会再次产生废料，形成二次污染，中药资源无法完全利用的。因此如何高效的利用红衣补血药渣，是目前亟待解决的技术问题。
发明内容
本发明针对现有技术中存在的问题，本发明结合红衣补血口服液原料药食同源的特性，经过物理破碎后作为发酵原料加入培养基，经过蛹虫草菌的长时间发酵和酶解消化全部转化为产品，不再产生二次污染。产品中含有中药中的部分有效成分，同时含有丰富的虫草素、虫草多糖、腺苷、虫草酸，兼具调味和保健功能，同时药渣的加入能够明显提高产品中腺苷和虫草酸的含量。
为实现上述技术目的，本发明所采用的技术方案为：
一种利用红衣补血口服液药渣生产蛹虫草菌质的方法，包括以下制备步骤：
(1)药渣处理：将红衣补血口服液的药渣沥干水分，并进行胶体磨处理，得到药渣粉碎物；
(2)原料挑选：挑选干净无杂质的大米，加入自来水浸没大米，浸泡7-9h后捞出，沥干多余水分，备用；
(3)蛹虫草培养基配置：将步骤(2)所得大米，步骤(1)所得药渣粉碎物以及葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、酵母粉均匀混合后分装，高温灭菌处理后，自然冷却至室温，得到蛹虫草培养基；
(4)蛹虫草液体菌种制备：将蛹虫草菌株无菌接种于PDA斜面培养基上，于25℃避光培养5-8d，获得F2代菌株；将长满菌丝的PDA平板，使用6mm打孔器打孔，用接种钩取3-4块，接种至灭菌的PDB液体培养基中，放入摇床中25℃，180r/min进行活化培养5-8d，培养基变浑浊，出现大量菌丝时，液体菌种制备完成；
(5)接种：培养基冷却至30℃以下时，于无菌条件下将液体菌种接种至步骤(3)所得蛹虫草培养基中，接种比例为：每100g培养基接种液体菌种10mL；
(6)发酵培养：将接种后的培养基排放在培养室的层架上进行培养，培养完成，得到充分发酵的菌饼；
(7)蛹虫草菌质制备：将菌饼取出，破成小块，65℃下烘干18-24小时，至含水量5-8％，粉碎，过80目筛，获得蛹虫草菌质。
优选的，步骤(1)所述胶体磨齿间隙为20-40μm。
优选的，步骤(3)大米、药渣粉碎物、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、酵母粉的重量比为(65-85)：(10-30)：(2-4)：(0.05-0.1)：0.05：0.05。
优选的，步骤(3)所述高温灭菌温度为121℃，灭菌时间为1h。
优选的，步骤(6)培养条件为：室内保持黑暗，20-25℃下培养，15-20d，菌丝长满料层；控制温度21-23℃，空气相对湿度70％-80％，光照强度100-200lx，每天光照24h，培养4-6d，至培养基表面菌丝变为深橘黄色；控制温度21-23℃，空气相对湿度70％-80％，二氧化碳体积分数小于0.1％，光照强度200-300lx，每天白光光照12h，培养30-40d，即可结束培养。
一种利用红衣补血口服液药渣生产蛹虫草菌质的方法的应用，所得蛹虫草菌质用于生产调味粉和调味膏，用于肉汤类食品调味使用。
优选的，按重量份，所述调味粉包括以下重量份的原料混合而成：蛹虫草菌质300-500份、八角粉40-60份、花椒80-100份、干姜粉120-150份、草果粉30-60份、肉桂粉30-60份。
优选的，按重量份，所述调味膏的包括以下重量份的原料制备而成：蛹虫草菌质400-500份、黄原胶3-4份、食盐40-60份、白砂糖40-60份、八角粉50-80份、花椒30-50份、干姜粉60-100份、草果粉30-60份、肉桂粉30-60份、小茴粉20-30份、丁香粉3-5份。
更优选的，所述调味膏的制备方法为：将蛹虫草菌质中添加2-3倍重量的蒸馏水，加入到反应釜中，煮沸20-30min，冷却至室温，调节pH为4.0-5.5，恒温45-55℃，加入纤维素酶和复合蛋白酶搅拌，搅拌速度为20-40r/min，反应时间为3-4h，再加热至95-100℃恒温30min灭酶，制备获得蛹虫草菌质酶解物；再加入剩余原料，斩拌锅中3000-5000r/min斩拌10min，即得调味膏。
更优选的，所述纤维素酶的加入量为300-500U/g，所述复合蛋白酶为酸性蛋白酶和中性蛋白酶按照质量比2：1均匀混合得到，复合蛋白酶的加入量为600-800U/g。
本发明各原料均市售可得，蛹虫草菌株选用市售普通菌株即可。
本发明调味粉和调味膏用于肉制品的调味，用量为肉汤质量的0.5-1.5％，可以增香提味。
蛹虫草(Cordyceps militaris)，又名北虫草、北冬虫夏草，与野生冬虫夏草同属异种。蛹虫草子实体含有丰富的虫草素、虫草多糖、腺苷、虫草酸、超氧化物岐化酶等，具有提高人体免疫力、抑制肿瘤、抗疲劳、降血脂等功效，被认为是冬虫夏草的理想替代品。食用菌是健康天然食材，世界卫生组织和粮农组织曾提出“一荤一素一菌”的理念，把食用菌作为三大人类健康膳食结构的组成部分之一。食用菌调味品更加注重健康养生，是第四代调味品发展方向。
因此，本发明人想到利用蛹虫草来发酵红衣补血药渣，两者相互促进，共同实现药渣的综合利用，同时开发了药渣的新用途。
有益效果
(1)使用蛹虫草发酵药渣，菌饼全部进行利用，中药渣利用彻底，不会再次产生二次废渣等污染；
(2)药渣经蛹虫草发酵后，残留的活性成分部分带入调味品中，部分转化小分子物质更易人体吸收；使中药资源得到更有效利用；
(3)蛹虫草发酵培养基中，添加中药渣能够提升产品中腺苷和虫草酸等活性物质的含量；药渣和蛹虫草菌株相互促进，共同作用，实现了药渣资源的高效利用；
(4)制备得到的特色的蛹虫草调味料，风味独特，营养丰富，使用方便，同时具有虫草本身所具有的保健功能活性成分，经济效益和社会效益显著。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明的技术方案做进一步说明，但不限于此。
实施例1
一种利用红衣补血口服液药渣生产蛹虫草菌质的方法，包括以下制备步骤：
(1)药渣处理：将红衣补血口服液的药渣沥干水分，并进行胶体磨处理，得到药渣粉碎物；
(2)原料挑选：挑选干净无杂质的大米，加入自来水浸没大米，浸泡7h后捞出，沥干多余水分，备用；
(3)蛹虫草培养基配置：将步骤(2)所得大米，步骤(1)所得药渣粉碎物以及葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、酵母粉均匀混合后分装，高温灭菌处理后，自然冷却至室温，得到蛹虫草培养基；
(4)蛹虫草液体菌种制备：将蛹虫草菌株无菌接种于PDA斜面培养基上，于25℃避光培养5d，获得F2代菌株；将长满菌丝的PDA平板，使用6mm打孔器打孔，用接种钩取3-4块，接种至灭菌的PDB液体培养基中，放入摇床中25℃，180r/min进行活化培养5d，培养基变浑浊，出现大量菌丝时，液体菌种制备完成；
(5)接种：培养基冷却至30℃以下时，于无菌条件下将液体菌种接种至步骤(3)所得蛹虫草培养基中，接种比例为：每100g培养基接种液体菌种10mL；
(6)发酵培养：将接种后的培养基排放在培养室的层架上进行培养，培养完成，得到充分发酵的菌饼；
(7)蛹虫草菌质制备：将菌饼取出，破成小块，65℃下烘干18小时，至含水量5％，粉碎，过80目筛，获得蛹虫草菌质。
步骤(1)所述胶体磨齿间隙为20μm。
步骤(3)大米、药渣粉碎物、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、酵母粉的重量比为65：30：4：0.1：0.05：0.05。分装可采用300mL的塑料瓶，加入培养基100g，液体菌种接种10mL。
步骤(3)所述高温灭菌温度为121℃，灭菌时间为1h。
步骤(6)培养条件为：室内保持黑暗，23±1℃下培养，15d，菌丝长满料层；控制温度22±1℃，空气相对湿度75±1％，光照强度150lx，每天光照24h，培养5d，至培养基表面菌丝变为深橘黄色；控制温度22±1℃，空气相对湿度75％，二氧化碳体积分数小于0.1％，光照强度250lx，每天白光光照12h，培养35d，即可结束培养。
一种利用红衣补血口服液药渣生产蛹虫草菌质的方法的应用，所得蛹虫草菌质用于生产调味粉和调味膏，用于肉汤类食品调味使用。
本实施例各原料均市售可得，蛹虫草菌株选用市售普通菌株即可。
实施例2
一种利用红衣补血口服液药渣生产蛹虫草菌质的方法，包括以下制备步骤：
(1)药渣处理：将红衣补血口服液的药渣沥干水分，并进行胶体磨处理，得到药渣粉碎物；
(2)原料挑选：挑选干净无杂质的大米，加入自来水浸没大米，浸泡9h后捞出，沥干多余水分，备用；
(3)蛹虫草培养基配置：将步骤(2)所得大米，步骤(1)所得药渣粉碎物以及葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、酵母粉均匀混合后分装，高温灭菌处理后，自然冷却至室温，得到蛹虫草培养基；
(4)蛹虫草液体菌种制备：将蛹虫草菌株无菌接种于PDA斜面培养基上，于25℃避光培养8d，获得F2代菌株；将长满菌丝的PDA平板，使用6mm打孔器打孔，用接种钩取3-4块，接种至灭菌的PDB液体培养基中，放入摇床中25℃，180r/min进行活化培养8d，培养基变浑浊，出现大量菌丝时，液体菌种制备完成；
(5)接种：培养基冷却至30℃以下时，于无菌条件下将液体菌种接种至步骤(3)所得蛹虫草培养基中，接种比例为：每100g培养基接种液体菌种10mL；
(6)发酵培养：将接种后的培养基排放在培养室的层架上进行培养，培养完成，得到充分发酵的菌饼；
(7)蛹虫草菌质制备：将菌饼取出，破成小块，65℃下烘干24小时，至含水量8％，粉碎，过80目筛，获得蛹虫草菌质。
步骤(1)所述胶体磨齿间隙为40μm。
步骤(3)大米、药渣粉碎物、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、酵母粉的重量比为85：10：4：0.1：0.05：0.05。分装可采用300mL的塑料瓶，加入培养基100g，液体菌种接种10mL。
步骤(3)所述高温灭菌温度为121℃，灭菌时间为1h。
步骤(6)培养条件为：室内保持黑暗，21℃下培养，20d，菌丝长满料层；控制温度21-23℃，空气相对湿度71％，光照强度100lx，每天光照24h，培养6d，至培养基表面菌丝变为深橘黄色；控制温度21-23℃，空气相对湿度80％，二氧化碳体积分数小于0.1％，光照强度200lx，每天白光光照12h，培养40d，即可结束培养。
一种利用红衣补血口服液药渣生产蛹虫草菌质的方法的应用，所得蛹虫草菌质用于生产调味粉和调味膏，用于肉汤类食品调味使用。
实施例3
一种利用红衣补血口服液药渣生产蛹虫草菌质的方法，包括以下制备步骤：
(1)药渣处理：将红衣补血口服液的药渣沥干水分，并进行胶体磨处理，得到药渣粉碎物；
(2)原料挑选：挑选干净无杂质的大米，加入自来水浸没大米，浸泡8h后捞出，沥干多余水分，备用；
(3)蛹虫草培养基配置：将步骤(2)所得大米，步骤(1)所得药渣粉碎物以及葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、酵母粉均匀混合后分装，高温灭菌处理后，自然冷却至室温，得到蛹虫草培养基；
(4)蛹虫草液体菌种制备：将蛹虫草菌株无菌接种于PDA斜面培养基上，于25℃避光培养8d，获得F2代菌株；将长满菌丝的PDA平板，使用6mm打孔器打孔，用接种钩取3-4块，接种至灭菌的PDB液体培养基中，放入摇床中25℃，180r/min进行活化培养8d，培养基变浑浊，出现大量菌丝时，液体菌种制备完成；
(5)接种：培养基冷却至30℃以下时，于无菌条件下将液体菌种接种至步骤(3)所得蛹虫草培养基中，接种比例为：每100g培养基接种液体菌种10mL；
(6)发酵培养：将接种后的培养基排放在培养室的层架上进行培养，培养完成，得到充分发酵的菌饼；
(7)蛹虫草菌质制备：将菌饼取出，破成小块，65℃下烘干20小时，至含水量6％，粉碎，过80目筛，获得蛹虫草菌质。
步骤(1)所述胶体磨齿间隙为40μm。
步骤(3)大米、药渣粉碎物、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、酵母粉的重量比为74：23：2：0.05：0.05：0.05。分装可采用300mL的塑料瓶，加入培养基100g，液体菌种接种10mL。
步骤(3)所述高温灭菌温度为121℃，灭菌时间为1h。
步骤(6)培养条件为：室内保持黑暗，21℃下培养，20d，菌丝长满料层；控制温度21-23℃，空气相对湿度70％，光照强度200lx，每天光照24h，培养6d，至培养基表面菌丝变为深橘黄色；控制温度21-23℃，空气相对湿度80％，二氧化碳体积分数小于0.1％，光照强度300lx，每天白光光照12h，培养40d，即可结束培养。
一种利用红衣补血口服液药渣生产蛹虫草菌质的方法的应用，所得蛹虫草菌质用于生产调味粉和调味膏，用于肉汤类食品调味使用。
实施例4
利用实施例3所得蛹虫草菌质制备调味粉：
按重量份，所述调味粉包括以下重量份的原料混合而成：蛹虫草菌质500份、八角粉50份、花椒100份、干姜粉120份、草果粉50份、肉桂粉50份。
实施例5
利用实施例3所得蛹虫草菌质制备调味膏：
按重量份，所述调味膏的包括以下重量份的原料制备而成：蛹虫草菌质500份、黄原胶4份、食盐50份、白砂糖50份、八角粉50份、花椒50份、干姜粉80份、草果粉50份、肉桂粉50份、小茴粉30份、丁香粉5份。
所述调味膏的制备方法为：将蛹虫草菌质中添加3倍重量的蒸馏水，加入到反应釜中，煮沸30min，冷却至室温，调节pH为5，恒温50℃，加入纤维素酶和复合蛋白酶搅拌，搅拌速度为30r/min，反应时间为4h，再加热至95-100℃恒温30min灭酶，制备获得蛹虫草菌质酶解物；再加入剩余原料，斩拌锅中3000-5000r/min斩拌10min，即得调味膏。
所述纤维素酶的加入量为300-500U/g，所述复合蛋白酶为酸性蛋白酶和中性蛋白酶按照质量比2：1均匀混合得到，复合蛋白酶的加入量为600-800U/g。
对比例1
一种生产蛹虫草菌质的方法，包括以下制备步骤：
(1)原料挑选：挑选干净无杂质的大米，加入自来水浸没大米，浸泡7h后捞出，沥干多余水分，备用；
(2)蛹虫草培养基配置：将步骤(1)所得大米，以及葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、酵母粉均匀混合后分装，高温灭菌处理后，自然冷却至室温，得到蛹虫草培养基；
(3)蛹虫草液体菌种制备：将蛹虫草菌株无菌接种于PDA斜面培养基上，于25℃避光培养5d，获得F2代菌株；将长满菌丝的PDA平板，使用6mm打孔器打孔，用接种钩取3-4块，接种至灭菌的PDB液体培养基中，放入摇床中25℃，180r/min进行活化培养5d，培养基变浑浊，出现大量菌丝时，液体菌种制备完成；
(4)接种：培养基冷却至30℃以下时，于无菌条件下将液体菌种接种至步骤(2)所得蛹虫草培养基中，接种比例为：每100g培养基接种液体菌种10mL；
(5)发酵培养：将接种后的培养基排放在培养室的层架上进行培养，培养完成，得到充分发酵的菌饼；
(6)蛹虫草菌质制备：将菌饼取出，破成小块，65℃下烘干18小时，至含水量5％，粉碎，过80目筛，获得蛹虫草菌质。
步骤(1)大米、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、酵母粉的重量比为95：4：0.1：0.05：0.05。分装可采用300mL的塑料瓶，加入培养基100g，液体菌种接种10mL。
本对比例，除不使用红衣补血药渣外，其余原料和工艺均同实施例1。
对比例2
一种生产蛹虫草菌质的方法，包括以下制备步骤：
(1)原料挑选：挑选干净无杂质的大米，加入自来水浸没大米，浸泡9h后捞出，沥干多余水分，备用；
(2)蛹虫草培养基配置：将步骤(1)所得大米、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、酵母粉均匀混合后分装，高温灭菌处理后，自然冷却至室温，得到蛹虫草培养基；
(3)蛹虫草液体菌种制备：将蛹虫草菌株无菌接种于PDA斜面培养基上，于25℃避光培养8d，获得F2代菌株；将长满菌丝的PDA平板，使用6mm打孔器打孔，用接种钩取3-4块，接种至灭菌的PDB液体培养基中，放入摇床中25℃，180r/min进行活化培养8d，培养基变浑浊，出现大量菌丝时，液体菌种制备完成；
(4)接种：培养基冷却至30℃以下时，于无菌条件下将液体菌种接种至步骤(2)所得蛹虫草培养基中，接种比例为：每100g培养基接种液体菌种10mL；
(5)发酵培养：将接种后的培养基排放在培养室的层架上进行培养，培养完成，得到充分发酵的菌饼；
(6)蛹虫草菌质制备：将菌饼取出，破成小块，65℃下烘干24小时，至含水量8％，粉碎，过80目筛，获得蛹虫草菌质。
步骤(1)大米、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、酵母粉的重量比为95：4：0.1：0.05：0.05。分装可采用300mL的塑料瓶，加入培养基100g，液体菌种接种10mL。
本对比例，除不使用红衣补血药渣外，其余原料和工艺均同实施例2。
对比例3
一种生产蛹虫草菌质的方法，包括以下制备步骤：
(1)原料挑选：挑选干净无杂质的大米，加入自来水浸没大米，浸泡8h后捞出，沥干多余水分，备用；
(2)蛹虫草培养基配置：将步骤(1)所得大米、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、酵母粉均匀混合后分装，高温灭菌处理后，自然冷却至室温，得到蛹虫草培养基；
(3)蛹虫草液体菌种制备：将蛹虫草菌株无菌接种于PDA斜面培养基上，于25℃避光培养8d，获得F2代菌株；将长满菌丝的PDA平板，使用6mm打孔器打孔，用接种钩取3-4块，接种至灭菌的PDB液体培养基中，放入摇床中25℃，180r/min进行活化培养8d，培养基变浑浊，出现大量菌丝时，液体菌种制备完成；
(4)接种：培养基冷却至30℃以下时，于无菌条件下将液体菌种接种至步骤(2)所得蛹虫草培养基中，接种比例为：每100g培养基接种液体菌种10mL；
(5)发酵培养：将接种后的培养基排放在培养室的层架上进行培养，培养完成，得到充分发酵的菌饼；
(6)蛹虫草菌质制备：将菌饼取出，破成小块，65℃下烘干20小时，至含水量6％，粉碎，过80目筛，获得蛹虫草菌质。
步骤(1)大米、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、酵母粉的重量比为97：2：0.05：0.05：0.05。分装可采用300mL的塑料瓶，加入培养基100g，液体菌种接种10mL。
本对比例，除不使用红衣补血药渣外，其余原料和工艺均同实施例3。
营养成分测定
菌质粉蛋白质含量参考GB 5009.5-2016中的方法进行测定。
称取0.5g样品于硝化管中，加入6g硫酸钾催化剂，0.4g硫酸铜和20mL硫酸硝化1h，冷却后加入50mL蒸馏水，用自动凯氏定氮仪进行测定。样品中蛋白质含量按式计算：
Figure SMS_1
X——样品中蛋白质含量，g/100g；
V1——样品消耗硫酸的体积，mL；
V2——空白消耗硫酸的体积，mL；
c——硫酸标准溶液浓度，mol/L；
m——样品质量，g；
V3——消化液体积，mL
腺苷的测定
参照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥD)测定。
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈－0.04mol/L磷酸二氢钾溶液(5：95)为流动相；检测波长为260nm。理论板数按腺苷峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备：取腺苷对照品适量，精密称定，加0.5％磷酸溶液制成每1ml含12μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取样品0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加乙醚20ml，密塞，浸泡30分钟，滤过，弃去乙醚，残渣挥干乙醚，连同滤纸一并置具塞锥形瓶中，精密加入0.5％磷酸溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟(功率250W,频率33kHZ)，放冷，再称定重量，用0.5％磷酸溶液补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，滤过，取续滤液，即得。
测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
甘露醇(虫草酸)含量测定
取样品约1g，精密称定，置150ml圆底烧瓶内，精密加入乙醇100ml，称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置碘瓶中，精密加入高碘酸钠(钾)溶液(取硫酸溶液90ml与高碘酸钠(钾)溶液110ml混合制成)50ml，置水浴上加热15分钟，放冷，加碘化钾试液10ml，密塞，放置5分钟，用硫代硫酸钠滴定液(0.05mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液1ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml硫代硫酸钠滴定液(0.05mol/L)相当于0.9109mg甘露醇(C6H14O6)。
具体测试结果如表1所示：
表1测试结果
组别 蛋白质(％) 腺苷(％) 虫草酸(％)
实施例1 32.84 0.19 6.34
对比列1 32.34 0.14 5.37
实施例2 33.26 0.18 6.67
对比例2 33.32 0.14 5.43
实施例3 33.43 0.22 7.53
对比列3 32.97 0.16 6.54
对实施例4所得调味粉进行进一步试验：
选取新鲜的排骨，洗净，水中浸泡5分钟。将排骨放入锅中，水煮出多余的浮沫。大火煮5分钟，加适量醋、葱姜、食盐中火煮15分钟，之后加入汤重约1％实施例4调味粉，小火煮15分钟即可，汤汁鲜香可口，汤色微黄。同时，以不添加调味粉的肉汤作为对照组。
邀请20位专业人员组成评审小组，对产品的色泽、风味进行评定，取评分结果的平均值作为评定结果。感官评定项目及评分标准见下表：
表2评分标准
Figure SMS_2
表3评价结果
组别 评分
实施例4 9.21
对照组 7.65
将实施例5所得调味膏用于肉肠制作：
虫草香肠的制作：
配料：猪精肉10％、鸡胸肉40％、乳化物36％(膘油8％、鸡胸肉8％、瓜尔角1％、大豆蛋白2％、水17％)、水4％、食盐1％、白砂糖2％、乳酸钠2％、大豆蛋白2.6％、食用香精1.3％、蛹虫草调味膏1％。
乳化物斩拌5分钟，刀速3000r/min，出锅温度8-10℃。
猪精肉、鸡胸肉6mm网板绞制，连同乳化物、香精、辅料入滚揉罐滚揉3h,真空度85％，转速16r/min，填充机填充，100g/支，112℃杀菌30min,放至常温后观察，鲜香可口，有菇香味，相比于相同配方未添加蛹虫草调味膏的对照组，香味特征突出，味道更好。
邀请20位专业人员组成评审小组，对产品的色泽、风味、口感进行评定，取评分结果的平均值作为评定结果。感官评定项目及评分标准见下表：
表4评分标准
Figure SMS_3
表5评价结果
组别 评分
实施例5 9.51
对照组 8.35
综上，本发明结合红衣补血口服液原料药食同源的特性，经过物理破碎后作为发酵原料加入培养基，经过蛹虫草菌的长时间发酵和酶解消化全部转化为产品，不再产生二次污染。产品中含有中药中的部分有效成分同时含有丰富的虫草素、虫草多糖、腺苷、虫草酸，兼具调味和保健功能，同时药渣的加入能够明显提高产品中腺苷和虫草酸的含量。通过本发明方法，开发药渣新用途，实现红衣补血口服液药渣的高效利用，一举两得。
需要说明的是，上述实施例仅仅是实现本发明的优选方式的部分实施例，而非全部实施例。显然，基于本发明的上述实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的其他所有实施例，都应当属于本发明保护的范围。

Claims (10)

1.一种利用红衣补血口服液药渣生产蛹虫草菌质的方法，其特征在于，包括以下制备步骤：
(1)药渣处理：将红衣补血口服液的药渣沥干水分，并进行胶体磨处理，得到药渣粉碎物；
(2)原料挑选：挑选干净无杂质的大米，加入自来水浸没大米，浸泡7-9h后捞出，沥干多余水分，备用；
(3)蛹虫草培养基配置：将步骤(2)所得大米，步骤(1)所得药渣粉碎物以及葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、酵母粉均匀混合后分装，高温灭菌处理后，自然冷却至室温，得到蛹虫草培养基；
(4)蛹虫草液体菌种制备：将蛹虫草菌株无菌接种于PDA斜面培养基上，于25℃避光培养5-8d，获得F2代菌株；将长满菌丝的PDA平板，使用6mm打孔器打孔，用接种钩取3-4块，接种至灭菌的PDB液体培养基中，放入摇床中25℃，180r/min进行活化培养5-8d，培养基变浑浊，出现大量菌丝时，液体菌种制备完成；
(5)接种：培养基冷却至30℃以下时，于无菌条件下将液体菌种接种至步骤(3)所得蛹虫草培养基中，接种比例为：每100g培养基接种液体菌种10mL；
(6)发酵培养：将接种后的培养基排放在培养室的层架上进行培养，培养完成，得到充分发酵的菌饼；
(7)蛹虫草菌质制备：将菌饼取出，破成小块，65℃下烘干18-24小时，至含水量5-8％，粉碎，过80目筛，获得蛹虫草菌质。
2.根据权利要求1所述利用红衣补血口服液药渣生产蛹虫草菌质的方法，其特征在于，步骤(1)所述胶体磨齿间隙为20-40μm。
3.根据权利要求1所述利用红衣补血口服液药渣生产蛹虫草菌质的方法，其特征在于，步骤(3)大米、药渣粉碎物、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、酵母粉的重量比为(65-85)：(10-30)：
(2-4)：(0.05-0.1)：0.05：0.05。
4.根据权利要求1所述利用红衣补血口服液药渣生产蛹虫草菌质的方法，其特征在于，步骤(3)所述高温灭菌温度为121℃，灭菌时间为1h。
5.根据权利要求1所述利用红衣补血口服液药渣生产蛹虫草菌质的方法，其特征在于，步骤(6)培养条件为：室内保持黑暗，20-25℃下培养，15-20d，菌丝长满料层；控制温度21-23℃，空气相对湿度70％-80％，光照强度100-200lx，每天光照24h，培养4-6d，至培养基表面菌丝变为深橘黄色；控制温度21-23℃，空气相对湿度70％-80％，二氧化碳体积分数小于0.1％，光照强度200-300lx，每天白光光照12h，培养30-40d，即可结束培养。
6.一种由权利要求1-5任意一项所述利用红衣补血口服液药渣生产蛹虫草菌质的方法的应用，其特征在于，所得蛹虫草菌质用于生产调味粉和调味膏，用于肉汤类食品调味使用。
7.根据权利要求6所述利用红衣补血口服液药渣生产蛹虫草菌质的方法的应用，其特征在于，按重量份，所述调味粉包括以下重量份的原料混合而成：蛹虫草菌质300-500份、八角粉40-60份、花椒80-100份、干姜粉120-150份、草果粉30-60份、肉桂粉30-60份。
8.根据权利要求6所述利用红衣补血口服液药渣生产蛹虫草菌质的方法的应用，其特征在于，按重量份，所述调味膏的包括以下重量份的原料制备而成：蛹虫草菌质400-500份、黄原胶3-4份、食盐40-60份、白砂糖40-60份、八角粉50-80份、花椒30-50份、干姜粉60-100份、草果粉30-60份、肉桂粉30-60份、小茴粉20-30份、丁香粉3-5份。
9.根据权利要求8所述利用红衣补血口服液药渣生产蛹虫草菌质的方法的应用，其特征在于，所述调味膏的制备方法为：将蛹虫草菌质中添加2-3倍重量的蒸馏水，加入到反应釜中，煮沸20-30min，冷却至室温，调节pH为4.0-5.5，恒温45-55℃，加入纤维素酶和复合蛋白酶搅拌，搅拌速度为20-40r/min，反应时间为3-4h，再加热至95-100℃恒温30min灭酶，制备获得蛹虫草菌质酶解物；再加入剩余原料，斩拌锅中3000-5000r/min斩拌10min，即得调味膏。
10.根据权利要求9所述利用红衣补血口服液药渣生产蛹虫草菌质的方法的应用，其特征在于，所述纤维素酶的加入量为300-500U/g，所述复合蛋白酶为酸性蛋白酶和中性蛋白酶按照质量比2：1均匀混合得到，复合蛋白酶的加入量为600-800U/g。
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