KR20050040520A

KR20050040520A - 상황버섯 균사체 추출물을 이용한 당뇨치료용 소재

Info

Publication number: KR20050040520A
Application number: KR1020030075757A
Authority: KR
Inventors: 홍방균
Original assignee: 청일잠비농산
Priority date: 2003-10-29
Filing date: 2003-10-29
Publication date: 2005-05-03

Abstract

본 발명은 상황버섯을 혈당강하성분 및 각종 생리활성물질을 지닌 상엽(Morus alba L.의 잎), 현미, 메밀 및 율무 등으로 구성된 고체배지에 접종하여 배양한 균사체를 얻고, 이 균사체의 유효성분을 효율적으로 추출하기 위해 식물세포간물질 분해효소(Maceration enzyme)를 처리한 후 열수추출하여 얻어진 추출물을 이용한 당뇨치료용 소재의 제조방법에 관한 것이다.

Description

상황버섯 균사체 추출물을 이용한 당뇨치료용 소재 {Therapeutical preperation of Phellinus linteus mycellia for diabetes mellitus.}

본 발명은 상황버섯 균사체 추출물을 이용한 당뇨치료용 소재의 제조방법에 관한 것으로 더욱 상세하게는 혈당강하성분 및 각종 생리활성물질을 함유하고 있는 상엽, 현미, 메밀 및 율무 등으로 구성된 고체배지에 상휴ㅘㅇ버섯의 액체종균을 무균적으로 접종하여 온도 25-28도, 습도 60-70%에서 50-60일간 배양하여 균사체를 얻고 이 균사체 중의 유효성분의 추출율을 향상시키기 위한 방법으로서 식물세포간물질 분해효소(Maceration enzyme)를 처리한후 95-100℃에서 3-5시간 열수추출한 추출물을 이용한 당뇨 치료용 소재의 제조방법에 관한 것이다.

근래 식생활의 서구화 및 인구의 노령화가 가속되고 있어 성인병 즉 암,당뇨,비만,고혈압 등의 환자수가 급격히 증가추세를 보이고 있다.특히 영양의 과다섭취,운동부족 및 스트레스등의 이유로 당뇨환자도 급격히 증가되고있다.국내의 당뇨환자의 90% 이상은 인슐린 비의존성 환자로 "비구아니드","설포닐우레아"계 경구용 혈당강하제를 복용하고 있어 부작용이 없고 안정성이 높은 천연물 유래의 경구용 혈당강하제의 개발이 요구되고 있는 실정이다.

상황버섯은 항종양작용, 면역증강작용 및 혈당강하작용 등의 약리작용 뿐만 아니라 인체의 향상성 유지에 도움을 주는것으로 알려져 왔으나 타 버섯에 비해 재배가 쉽지않아 범용성이 있는 의학,식품의 소재개발에 어려움이 되고있다. 또한 주요활성 성분인 베타 1,3-글루칸의 추출 방법으로 열수에 의한방법(공개특허 2001-0046778),에탄올등의 유기용매를 이용한 방법( 공개특허 2003-0026613)및 고주파를 이용한 방법(공개특허 2002-0084619)등이 보고되고 있으나 식물세포간 물질 분해효소인 "Maceration enzyme"을 이용한 효소처리방법은 보고된바 없다.

본 발명은 상황버섯의 균사체 배양방법 및 효율적인 추출방법을 연구해온 결과,상엽,현미,메밀 및 율무 등의 혈당강하 기능을 지닌 천연물을 상황버섯의 고체배지로 사용하여 버섯균사체의 증식과정에서 대사,흡수되도록 조정하고 얻어진 균사체의 유효성분을 "Maceration enztme"을 처리하여 추출효율을 향상시키는데 그 목적이 있다.

상기의 목적을 달성하기 위해 본 발명은 균사체 형성방법,"Maceration enzyme"의 제조방법 및 이를 이용한 균사체의 추출방법으로 구성되어진다.

균사체 형성방법으로는 우선 상황버섯의 액체종균으로서 시험관에서 7일이상 배양된 버섯의 균사체를 1ℓ 플라스크에 300㎖ 용량의 살균된 액체배지(포도당 4% W/V,감자전분 4% W/V )에 접종하여 25℃에서 7일간 배양한것을 사용하였다.균사체 형성을 위한 고체배지로는 율무,현미,메밀및 상옆이 각각 30:30:30:10 의 조성으로 조정하고 버섯배양 용기인 프라스틱병에 200g 씩 분주하고 물 250㎖를 가하여 마개를하고 121℃에서 2시간동안 살균하였다. 이를 25℃로 냉각한 후 미리배양된 액체종균을 액체종균접종기( 유성과학 Co.)를 이용하여 무균적으로 20㎖ 씩 접종하였다.이후 온도 25-28℃,습도 60-70% 로 유지되는 배양실에서 50-60일간 배양하여 균사체를 형성시켰다.

"Maceration enztme"은 자연계에서 분리한 Aspergillus niger 를 사용하였으며 cellulase 및 xylanasa 등의 효소활성이 우수한 균을 선정하여 시험관에서 7일정도 배양하여 균사체를 얻었다. 이를 살균한 밀기울 고체배지에 접종하여 25℃,수분70% 의 조건으로 7일간 배양하고 이 배양물에 10배 용량의 물을 가해 조효소를 침출시킨후 4℃에서 5배량의 에탄올로 침전시킨 것을 진공건조하여 사용하였다.

균사체 추출방법으로는 상황버섯의 고체배지에서 얻은 균사체를 45℃의 열풍건조기에서 건조한후, 20mesh 크기로 분쇄하고 이 상황버섯 분쇠물에 10배 용량의 물을 가하고 45℃ 수욕상에서 "Maceration enztme" 을 0.2% (W/V)되도록 첨가하여 3시간동안 효소분해를 행하였다. 이를 90℃에서 3시간동안 열수추출한 후.여과하여 추출물을 얻었다. 추출물 중의당류의 분석은 박층액체크로마토그라피(MERK사 제품 )으로 생성된 당류의 종류를 정성확인하였고 Glucose 는 Glucose oxidase kit (영동제약제품)를 이용하였고 총당 (Total sugar)은 "Anthrone" 시약을 이용한 비색법으로 정량하였다.

비교예1)

상황버섯 균사체 건조분말 150g 에 물을 1.5ℓ첨가하여 95℃에서 3시간 추출한후 여과하여 1ℓ의 추출액을 얻었다.

실시예1)

상황버섯균사체 건조분말 150g에 물 1.5ℓ를 첨가하여 45℃ 의 수욕상에서 "Maceration enztme" (0.2% W/V) 으로 효소분해 하였다.이후 비교예1)과 동일한 방법으로 추출하여 추출액 1ℓ를 얻었다.

박층액체크로마토그라피로 추출물중의 당류를 확인한 결과, Glucose,Maltose

Oligo당류 및 베타 글루칸 등의 생성됨을 알수 있었으며 Glucose 및 총당 을 측정한 결과, 비교예1)의 경우,각각 2㎎/㎖, 20㎎/㎖ 의 수치를 나타낸 반면,실시예1)의 경우,각각 8 ㎎/㎖,40㎎/㎖ 를 나타내 상황버섯 균사체 추출물 중의 총당이 2배정도 높은것으로 나타났다. 이결과는 "Maceration enztme" 이 상황버섯 균사체 세포벽의 주요성분인 Xylan,Cellulose,Glucan 등으로 구성된 다당체들을 분해함으로서 추출수율을 향상시킨 결과로 판단되었다.

실시예2)

평소 혈당이 250㎎/㎗ 인 당뇨 환자에게 실시예1)의 추출액을 1일 3회 (1회/120㎖) 복용하게 하였다.

그 결과 1시간 경과후 200㎎/㎗ 로 급속한 혈당저하 를 나타냈다.또한 12주일 후에는 정상혈당을 유지하게 되어 당뇨치료 효과가 매우 큰것으로 나타났다.

본 발명에 의하면 혈당강하기능을 지닌 곡류 및 식물을 이용해 만든 버섯배지에 상황버섯을 배양하여 균사체를 얻는 배양방법이 가능하여 종례의 원목 또는 액체배지에 비해 생산비가 저렴하면서도 유효성분의 함량을 증가시킬수 있었다. 또한 식물세포간 물질 분해효소(Maceration enztme)를 균사체 추출에 이용한 결과, 추출수율을 2배 정도 높일수있는 신규 추출방법이 가능하였다. 이 추출물을 이용한 혈당강하 실험에서 급속한 혈당강하 기능을 나타내 당뇨치료용 소재로 매우 유용한 것으로 판단되었다.

Claims

상황버섯의 고체배지 조성물로서 율무,현미,메밀 및 상엽 등을 사용하여 액체종균을 접종하고 25-28℃에서 50-60일간 배양한후 균사체를 형성시키는 균사체 제조방법.
균사체 추출방법으로서 Aspergillus niger유래의 Maceration enzyme을 0.1-0.5% 가하고 90-100℃에서 3-5시간 추출하는 것을 특징으로 하는 추출방법.
제 2항에서 얻어진 추출물을 사용하여 제조한 당뇨치료용 소재.