CN102746054B

CN102746054B - 用以培养牛樟芝子实体的培养基及其培养方法

Info

Publication number: CN102746054B
Application number: CN201110108966.3A
Authority: CN
Inventors: 张闳积
Original assignee: GANQUAN BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: GANQUAN BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2011-04-18
Filing date: 2011-04-18
Publication date: 2014-05-07
Anticipated expiration: 2031-04-18
Also published as: CN102746054A

Abstract

本发明是有关于一种用以培养牛樟芝子实体的培养基及其培养方法，该培养基的成份包括浓度为1％～2％(w／v)的马铃薯葡萄糖肉汤、浓度为2.8％～3.6％(w／v)的葡萄糖(glucose)、浓度为2.2％～4％(w／v)的琼脂(agar)以及浓度为16.7％～40％(w／v)的中药组合物；牛樟芝子实体的培养方法包括以下步骤：依各成分的比例配置固态培养基；将一牛樟芝菌种接菌至该固态培养基上；以及将含有该牛樟芝菌种的固态培养基放置于一特定环境下培养一特定时间，以生成牛樟芝子实体，其中，利用此培养方法所得到的牛樟芝子实体具有与野生牛樟芝相同的指标性成分。

Description

用以培养牛樟芝子实体的培养基及其培养方法

技术领域

本发明涉及一种用以培养牛樟芝子实体的培养基及其培养方法，特别是涉及一种利用含有特殊配方的培养基以培养牛樟芝子实体的培养方法，以生成牛樟芝子实体具有与野生牛樟芝相同的指标性成分。

背景技术

牛樟芝(Antrodia cinnamomea)属于非褶菌目、多孔菌科、薄孔菌属、樟芝种，乃多年生蕈菌类。樟芝为之一，而此三帖类化合物使牛樟芝具有独特的苦味，并且牛樟芝的三帖类化合物含量远超过灵芝。目前已知三帖类化合物的功能包含了防癌、保肝、降血压等功效。此外，牛樟芝中所含有的其他化合物，例如多醣体、超氧歧化酵素、线苷、β-D-葡聚醣等生理活性成分，皆对于人体生理机能可发挥均衡保健的功效。

由于野生牛樟芝数量稀少取得不易，并且有遭受环境污染之虞，因此近年来多以人工栽培方法来培养牛樟芝。现有习知的人工栽培方法包括椴木栽培法、固态栽培法以及液态发酵法。

椴木栽培法是使用枯死的牛樟树椴木，将牛樟芝菌体植入椴木中，使牛樟芝在椴木中生长，藉此取得牛樟芝子实体。利用该种方法所得到的牛樟芝子实体，其所含有的成分与野生牛樟芝相似，然而，该种培养方式的成本高、培养时间长(约需2年)，不利于量产与推广。特别是牛樟树椴木取得不易，使得牛樟芝相关产品的价格高居不下。

固态培养法主要是利用含有营养物质的太空包来培养牛樟芝(亦即既有栽培香菇的方法)，所得到的牛樟芝其外观虽然与野生牛樟芝相似，但其三帖类化合物的含量低，并且其他主要成分与野生牛樟芝子实体并不相同。

再者，藉由液态发酵法培养牛樟芝虽然可在短时间内收成牛樟芝液体发酵产品，但其主要产物为多醣类，并不含有三帖类化合物，并且其他主要成分与野生牛樟芝子实体相去甚远。

有鉴于此，必须提供一种新颖的牛樟芝子实体培养方法，藉以有效的培养出牛樟芝子实体，并且其主要成分如三帖类化合物是与野生牛樟芝相似，以有效达到人体保健的效果。

发明内容

本发明的主要目的在于，提供一种用以培养牛樟芝子实体的培养基，藉由将培养基的成份及其含量作适当的调整，以提升牛樟芝的培养效率，并可稳定牛樟芝子实体的内含成分。

本发明的另一目的在于，提供一种提供一种牛樟芝子实体的培养方法，藉由适当调整的培养基成分以及适当的培养条件，以达到高效率的牛樟芝子实体的培养效果，并可减少培养成本、缩短培养时间，以提升量产及推广的价值。

本发明的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。依据本发明提出的种用以培养牛樟芝子实体的培养基，其至少包含：马铃薯葡萄糖肉汤(potato dextrose broth，PDB)，其浓度为1％～2％(w／v)；葡萄糖(glucose)，其浓度为2.8％～3.6％(w／v)；琼脂(agar)，其浓度为2.2％～4％(w／v)；及中药组合物，其浓度为16.7％～40％(w／v)。

本发明的目的及解决其技术问题还可采用以下技术措施进一步实现。

前述的用以培养牛樟芝子实体的培养基，其中所述的培养基的pH值为5.5～7。

前述的用以培养牛樟芝子实体的培养基，其中所述的中药组合物是由以下组合中选择一或多个成份使用：黄蓍、山药、白参、细辛、赤芍、茯苓、黄柏、陈皮、柴胡、葛根、麦门冬、黄精、当归、紫苏、羌活、芡实、延胡索、槟榔、蓁艽、金银花以及黄麻。

本发明的目的及解决其技术问题还采用以下技术方案来实现。依据本发明提出的一种牛樟芝子实体的培养方法，其至少包含以下步骤：(1)、依比例预先混合培养基的各组成成分，该培养基的组成成分包括浓度为1％～2％(w／v)的马铃薯葡萄糖肉汤、浓度为2.8％～3.6％(w／v)的葡萄糖、浓度为2.2％～4％(w／v)的琼脂以及浓度为16.7％～40％(w／v)的中药组合物；(2)、将混合后的组成成分置入一可灭菌容器中；(3)、将二次蒸馏水加入至该可灭菌容器中，使培养基的各组成成分达到所需的浓度；(4)、将可灭菌容器及其内含的培养基溶液进行一灭菌程序；(5)、将灭菌后的培养基溶液以一特定体积倒入至少一培养皿中；(6)、静置培养基溶液，待冷却后便形成一固态培养基；(7)、将一牛樟芝菌种接菌至该固态培养基上；以及(8)、将含有该牛樟芝菌种的固态培养基放置于一特定环境下培养一特定时间，以生成牛樟芝子实体。

前述的种牛樟芝子实体的培养方法，其中所述的步骤(1)所述的该中药组合物是由以下组合中选择一或多个成份使用：黄蓍、山药、白参、细辛、赤芍、茯苓、黄柏、陈皮、柴胡、葛根、麦门冬、黄精、当归、紫苏、羌活、芡实、延胡索、槟榔、蓁艽、金银花以及黄麻。

前述的种牛樟芝子实体的培养方法，其中完成步骤(3)之后，更可进行一pH值调整的步骤，以将培养基溶液的pH值调整至5.5～7。

前述的种牛樟芝子实体的培养方法，其中所述的步骤(4)所述的该灭菌程序是采用一高温高压灭菌法，其温度为121℃，压力为15磅／平方英寸，时间为20～30分钟。

前述的种牛樟芝子实体的培养方法，其中所述的步骤(5)所述的该特定体积为18～25ml。

前述的种牛樟芝子实体的培养方法，其中所述的步骤(8)所述的该特定环境包括培养温度为14℃～30℃、培养湿度为65％～95％、空气进气量为5-30m³／min、空气排气量为3-10m³／min。

前述的种牛樟芝子实体的培养方法，其中所述的步骤(8)所述的该特定时间为120天～150天。本发明与现有技术相比具有明显的优点和有益效果。借由上述技术方案，本发明用以培养牛樟芝子实体的培养基及其培养方法至少具有下列优点及有益效果：

(1)、本发明利用皿培式培养法来培养牛樟芝子实体，不仅可缩短培养时间，更可提升培养成功率(成功率约为90％～95％)以及产量，以增加推广价值。

(2)、本发明所提供的培养基成份，在进行适当调整之后，可提升牛樟芝的培养效率，并可稳定牛樟芝子实体的三帖类生成量。

(3)、藉由本发明所提供的培养方法，可有效控制牛樟芝子实体的生长状况，并藉由模拟野生牛樟芝的生长环境，使本发明的牛樟芝子实体的内含成份能非常接近于野生牛樟芝，以达到相当的保健效果。

上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，而可依照说明书的内容予以实施，并且为了让本发明的上述和其他目的、特征和优点能够更明显易懂，以下特举较佳实施例，并配合附图，详细说明如下。

附图说明

图1是本发明牛樟芝子实体的培养方法步骤图。

图2是本发明一较佳实施例的牛樟芝子实体的培养方法步骤图。

图3是利用本发明的培养基以及培养方法所得到的牛樟芝子实体的成份图。

101～109：本发明的牛樟芝子实体的培养方法步骤编号

201～209：本发明较佳实施例的牛樟芝子实体的培养方法步骤编号

A：樟芝酸A

B：樟芝酸B

C：樟芝酸C

K：antcin K

具体实施方式

为更进一步阐述本发明为达成预定发明目的所采取的技术手段及功效，以下结合附图及较佳实施例，对依据本发明提出的用以培养牛樟芝子实体的培养基及其培养方法其具体实施方式、结构、特征及其功效，详细说明如后。

为达前述的目的与功效，发明人利用皿培式培养法来培养牛樟芝子实体，并将培养基的成分及其含量作适当的调配，在不断的修正与调整下，始得到本发明的一种用以培养牛樟芝子实体的培养基及其培养方法。

首先对于本发明的该种用以培养牛樟芝子实体的培养基做详细介绍。本发明所提供的培养基包含以下成分：马铃薯葡萄糖肉汤，其浓度为1％～2％(w／v)；葡萄糖(glucose)，其浓度为2.8％～3.6％(w／v)；琼脂(agar)，其浓度为2.2％～4％(w／v)；及中药组合物，其浓度为16.7％～40％(w／v)。其中，该培养基的pH值为5.5～7，而该中药组合物可由黄蓍、山药、白参、细辛、赤芍、茯苓、黄柏、陈皮、柴胡、葛根、麦门冬、黄精、当归、紫苏、羌活、芡实、延胡索、槟榔、蓁艽、金银花以及黄麻等中药材料中选择一或多种成分而搭配使用。

接着对于本发明的该种牛樟芝子实体的培养方法进行详细介绍。请参照如图1所示，是本发明牛樟芝子实体的培养方法步骤图。此方法包含以下步骤：依比例预先混合培养基的各组成成分，该培养基的组成成分包括浓度为1％～2％(w／v)的PDB、浓度为2.8％～3.6％(w／v)的glucose、浓度为2.2％～4％(w／v)的agar以及浓度为16.7％～40％(w／v)的中药组合物(步骤101)，其中，该中药组合物可由黄蓍、山药、白参、细辛、赤芍、茯苓、黄柏、陈皮、柴胡、葛根、麦门冬、黄精、当归、紫苏、羌活、芡实、延胡索、槟榔、蓁艽、金银花以及黄麻等中药材料中选择一或多种成分而搭配使用；将混合后的组成成分置入一可灭菌容器中(步骤102)；将二次蒸馏水加入至该可灭菌容器中，使培养基的各组成成分达到所需的浓度(步骤103)；将培养基溶液的pH值调整至5.5～7(步骤104)；将可灭菌容器及其内含的培养基溶液进行一灭菌程序(步骤105)，其中，该灭菌程序是采用一高温高压灭菌法，其温度为121℃，压力为15磅／平方英寸，时间为20～30分钟；将灭菌后的培养基溶液以一特定体积倒入一培养皿中(步骤106)，其中，该特定体积为18～5ml；静置培养基溶液，待冷却后便形成一固态培养基(步骤107)；将一牛樟芝菌种接菌至该固态培养基上(步骤108)；以及将含有该牛樟芝菌种的固态培养基放置于一特定环境下培养一特定时间，以生成牛樟芝子实体(步骤109)，其中，该特定环境包括培养温度为14℃～30℃、培养湿度为65％～95％、空气进气量为5-30m³／min、空气排气量为3-10m³／min，而该特定时间为120天～150天，并且培养温度、培养湿度、空气进气量以及空气排气量是依据日夜的变化而加以转换，藉以模拟野生牛樟芝的生长状态。

在上述的牛樟芝子实体的培养条件中，培养温度以及培养湿度更可依培养阶段的不同而进行阶段性的调整。以总培养时间为120天至150天为例，培养温度可被区分为前期培养温度、中期培养温度以及后期培养温度，而每一时期包含了40天至50天，其中，前期培养温度为24℃～30℃、中期培养温度为20℃～30℃、后期培养温度为14℃～30℃。培养湿度可被区分为前期培养湿度以及后期培养湿度，而每一时期包含了60天至75天，其中，前期培养湿度为85％～95％、后期培养湿度为65％～95％。

接着以前述的培养基成分以及牛樟芝子实体的培养方法为基础，提出一较佳实施例的用以培养牛樟芝子实体的培养基及其培养方法，藉由一实际例子以对于本发明的技术精神作更加详细的介绍。

在本发明的该较佳实施例中，该种用以培养牛樟芝子实体的培养基包含以下成分：PDB，其浓度为1.5％(w／v)；glucose，其浓度为3.2％(w／v)；agar，其浓度为3.1％(w／v)；中药组合物，其浓度为28.35％(w／v)，该中药组合物是包括等量的黄蓍、山药、白参、细辛以及赤芍等中药材。以一培养基的体积为20ml为例，每一培养基包含了0.3克的PDB、0.64克的glucose、0.62克的agar、5.67克的中药组合物，而黄蓍、山药、白参、细辛以及赤芍等中药材分别为1.134克。

接着对于本发明较佳实施例的牛樟芝子实体的培养方法进行详细介绍。请参照如图2所示，是本发明较佳实施例的牛樟芝子实体的培养方法步骤图。在本较佳实施例中，是以一个培养基的体积为20ml为例，而各成份便列出一个培养基中的所需含量。此方法包含以下步骤：预先混合培养基的各组成成分，包括0.3克的PDB、0.64克的glucose、0.62克的agar、5.67克的中药组合物(步骤201)，其中，黄蓍、山药、白参、细辛以及赤芍等中药材分别为1.134克；将混合后的组成成分置入一血清瓶中(步骤202)；将20mi的二次蒸馏水加入至该血清瓶中(步骤203)；将培养基溶液的pH值调整至7(步骤204)；将血清瓶及其内含的培养基溶液进行一高温高压灭菌法(步骤205)，其温度为121℃，压力为15磅／平方英寸，时间为20分钟；将灭菌后的培养基溶液20ml倒入一培养皿中(步骤206)；静置培养基溶液，待冷却后便形成一固态培养基(步骤207)；将一牛樟芝菌种接菌至该固态培养基上(步骤208)；以及将含有该牛樟芝菌种的固态培养基培养于前期培养温度为24℃～30℃、中期培养温度为20℃～30℃、后期培养温度为14℃～30℃、前期培养湿度为85％～5％、后期培养湿度为65％～95％、空气进气量为5-30m³／min、空气排气量为3-10m³／min，并且培养时间为135天，以生成牛樟芝子实体(步骤209)。

在野生牛樟芝的成分当中，其包含了25％～30％的酒萃成分，而酒萃成分中又包含了三帖类化合物、单酚类化合物以及二酚类化合物，其中，三帖类化合物已被证实为牛樟芝中苦味以及有效成分的主要来源。而三帖类化合物又包括了麦角甾烷(Ergostane)以及羊毛甾烷(Lanostane)等成分，其中该羊毛甾烷不论在牛樟芝菌丝体或是牛樟芝子实体皆会形成，但是麦角甾烷只会出现于牛樟芝予实体中，由于麦角甾烷中的樟芝酸A(zhankuicacid A)、樟芝酸B(zhankuic acid B)、樟芝酸C(zhankuic acid C)以及antcin K等成分对于抗癌、提升免疫力有很大的功效，因此牛樟芝子实体比牛樟芝菌丝体具有更多方面的功效。

为了证实经由本发明所提供的培养基以及培养方法所得到的牛樟芝子实体确实具有功能性成分的三帖类化合物，即樟芝酸A、B、c以及antc in K，因此将牛樟芝子实体利用高解析液相层析仪(High performance liquidchromatography，HPLC)进行分析，并比对标准品，以确认牛樟芝子实体是否含有前述的成份。请参照如图3所示，是利用本发明的培养基以及培养方法所得到的牛樟芝子实体的成份图示。如图中所示，本发明的牛樟芝子实体经分析后证实具有樟芝酸A(图中的元件标号A)、樟芝酸B(图中的元件标号B)、樟芝酸C(图中的元件标号C)以及antcin K(图中的元件标号K)，因此本发明所培养得到的牛樟芝子实体所含有的三帖类化合物与野生牛樟芝非常相似，应具有相当的保健效果。

经由上述内容对于本发明进行详细说明后，可得知本发明具有以下的优点：

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述揭示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims

1.一种用以培养牛樟芝子实体的培养基，其特征在于其至少包含：

马铃薯葡萄糖肉汤，其浓度为1％～2％w／v；

葡萄糖，其浓度为2.8％～3.6％w／v；

琼脂，其浓度为2.2％～4％w／v；及

中药组合物，其浓度为16.7％～40％w／v，且该中药组合物包含等量的黄蓍、山药、白参、细辛以及赤芍。

2.根据权利要求1所述的用以培养牛樟芝子实体的培养基，其特征在于其中所述的培养基的pH值为5.5～7。

3.一种牛樟芝子实体的培养方法，其特征在于其至少包含以下步骤：

(1)、依比例预先混合培养基的各组成成分，该培养基的组成成分包括浓度为1％～2％w／v的马铃薯葡萄糖肉汤、浓度为2.8％～3.6％w／v的葡萄糖、浓度为2.2％～4％w／v的琼脂以及浓度为16.7％～40％w／v的中药组合物，其中，该中药组合物包含等量的黄蓍、山药、白参、细辛以及赤芍；

(2)、将混合后的组成成分置入一可灭菌容器中；

(3)、将二次蒸馏水加入至该可灭菌容器中，使培养基的各组成成分达到所需的浓度；

(4)、将可灭菌容器及其内含的培养基溶液进行一灭菌程序；

(5)、将灭菌后的培养基溶液以一特定体积倒入至少一培养皿中，其中该特定体积为20ml；

(6)、静置培养基溶液，待冷却后便形成一固态培养基；

(7)、将一牛樟芝菌种接菌至该固态培养基上；以及

(8)、将含有该牛樟芝菌种的固态培养基放置于一特定环境下培养120天～150天，以生成牛樟芝子实体，其中该特定环境包括培养温度为14℃～30℃、培养湿度为65％～95％、空气进气量为5～30m³／min、空气排气量为3～10m³／min。

4.根据权利要求3所述的一种牛樟芝子实体的培养方法，其特征在于其中所述的步骤(3)完成之后，更进行一pH值调整的步骤，以将培养基溶液的pH值调整至5.5～7。

5.根据权利要求3所述的一种牛樟芝子实体的培养方法，其特征在于其中所述的步骤(4)所述的灭菌程序是采用一高温高压灭菌法，其温度为121℃，压力为15磅／平方英寸，时间为20～30分钟。