CN103733991B - 牛樟芝扦插枝的培育方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了牛樟芝扦插枝的培育方法，是采用海绵液体培养基先增殖培养牛樟芝继代培养材料，再转接培养至液体培养基，重复多次后转接至添加有琼脂粉的固体培养基中生根培养成眠，即得到牛樟芝组培苗。本发明的有益效果为：本发明提供的牛樟芝扦插枝的培育方法，具有以下优点：1、牛樟芝组培材料能充分吸收到营养成份，提高品质及产量，增殖率可达5-6倍，存活率可达80%；2、海绵可重复利用，且液体培养基分装配制比较方便，瓶子等用具容易清洗干净；3、省去购买琼脂粉的费用，降低生产成本。

Description

牛樟芝扦插枝的培育方法

技术领域

本发明涉及植物组培苗快繁领域，具体涉及牛樟芝扦插枝的培育方法。

背景技术

牛樟芝又名牛樟菇，属于非褶菌目、多孔科、多年生蕈菌类，学名为（Antrodiacamphorata），是1990年才被生化界发表的新种。其生长区域为台湾山区海拔450-2000公尺山林间，只生长在台湾特有百年以上的牛樟树树干腐朽之心材内壁，或枯死倒伏之牛樟树木材潮湿表面，其采集极为不易。目前，一般牛樟芝扦插枝的存活率为20%。

发明内容

本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种可提高存活率的牛樟芝扦插枝的培育方法。

为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：牛樟芝扦插枝的培育方法，是采用海绵液体培养基先增殖培养牛樟芝继代培养材料，再转接培养至液体培养基，重复多次后转接至添加有琼脂粉的固体培养基中生根培养成眠，即得到牛樟芝组培苗。

进一步的，上述的牛樟芝扦插枝的培育方法，包括以下步骤：

1）制备海绵液体培养基：选择圆柱形的耐高温过滤海绵，直径与透气盖螺纹瓶底部大小一致，海绵厚度为1cm，在海绵上面均匀开有15个口径为0.8cm，深度为0.5cm大小的V形孔，将海绵块平放在培养瓶底部，开孔的一面朝上，直接用自来水配制药品并经定容调好PH值即成液体培养基，适量分装到放有海绵的培养瓶中，使营养液刚刚侵泡完海绵块即可；所述液体培养基的组分组成为PDB培养基+MY培养基；

2）培养基的灭菌：将步骤1）得到的分装好的海绵液体培养基经高压灭菌，灭菌温度为121-123℃，灭菌压力为0.11-0.13MP，灭菌时间为22-25分钟，得到灭菌后培养基；

3）培养材料的接种：无菌状态下，将牛樟芝培养材料分切成单芽分别插种到灭菌后的海绵液体培养基的V形孔中，进行快速增殖培养，培养时间为30-35天，增殖率为5-6倍；

4）增殖材料的转接：将步骤3）中增殖后的材料挟出分切再接种到新鲜的液体培养基中继续进行增殖培养；此后当培养到30-35天时，再次将材料进行分切更换到新鲜的液体培养基中进行增殖培养；

5）生根培养：将步骤4）得到的增殖培养后的牛樟芝增殖材料转接到一定数量后，将其分切成单株转接到添加有琼脂粉的固体培养基中进行生根培养，经过2～3个月培养炼苗后即得到牛樟芝组培苗移植株。

本发明的有益效果为：本发明提供的牛樟芝扦插枝的培育方法，具有以下优点：

1、牛樟芝组培材料能充分吸收到营养成份，提高品质及产量，增殖率可达5-6倍，存活率可达80%；

2、海绵可重复利用，且液体培养基分装配制比较方便，瓶子等用具容易清洗干净；

3、省去购买琼脂粉的费用，降低生产成本。

具体实施方式

实施例1：

（一）海绵液体培养基的制作：

选择圆柱形的耐高温过滤海绵，直径与透气盖螺纹瓶底部大小一致，海绵厚度为1cm即可，在海绵上面均匀开有15个口径为0.8cm，深度为0.5cm大小的V形孔，将海绵块平放在培养瓶底部，开孔的一面朝上。因不加琼脂粉，可直接用自来水配制药品并经定容调好PH值即成液体培养基，最后适量分装到放有海绵的培养瓶中，使营养液刚刚侵泡完海绵块即可；

（二）培养基的灭菌：

由于选用的海绵为耐高温材料，主要成分为聚氨酯，具有抗腐蚀、无毒副作用、耐高温（可达200℃）、强度高（回弹性好）、吸水性极强，可回收利用等优点，经过多次高压灭菌后不变型仍可重复使用；分装好的培养基经高压灭菌（灭菌温度为121-123度，压力为0.11-0.13MP，时间为22-25分钟），最后将灭菌好的液体培养基放到培养基储藏室备用；

（三）培养材料的接种：

在无菌工作台上将培养材料分切成单芽分别插种到海绵液体培养基的V形孔中，由于海绵有很好的回弹性和吸水性，对插在V形孔中的培养材料有一定的固定作用和保湿功能，利于培养物的生长和养分的吸收；

（四）培养材料的增殖培养：

培养在海绵液体培养基上的材料，由于液体培养基中分子或离子运动较快，其基部能够充分接触到营养液并能较好的吸收养分，同时也将自身切口分泌出来的醌类有害物质稀释到液体培养基中，减少褐化的产生，从而达到快速增殖的效果，一般培养30-35天后增殖率可达到5-6倍；

(五)增殖材料的转接：

当增殖材料在液体培养基中培养30-35天后，培养材料不断地增殖生长，已经吸收了大部分的营养成份和水分，同时液体培养基中也积累了一定的醌类等有害成分；此时应将增殖后的材料挟出分切再接种到新鲜的液体培养基中继续进行增殖培养，此后当培养到30-35天时，不断地将材料进行分切更换到新鲜的液体培养基中进行增殖培养，即可使生产达到一定数量和规模的材料；

（六）生根培养：

牛樟芝增殖材料转接到生产所需的数量后，将其分切成单株转接到添加有琼脂粉的固体培养基中进行生根培养，经过2～3个月培养炼苗后即可出瓶移植。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (1)

1.牛樟芝扦插枝的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）制备海绵液体培养基：选择圆柱形的耐高温过滤海绵，直径与透气盖螺纹瓶底部大小一致，海绵厚度为1cm，在海绵上面均匀开有15个口径为0.8cm，深度为0.5cm大小的V形孔，将海绵块平放在培养瓶底部，开孔的一面朝上，直接用自来水配制药品并经定容调好pH值即成液体培养基，适量分装到放有海绵的培养瓶中，使营养液刚刚浸泡完海绵块即可；所述液体培养基的组分组成为PDB培养基+MY培养基；

2）培养基的灭菌：将步骤1）得到的分装好的海绵液体培养基经高压灭菌，灭菌温度为121-123℃，灭菌压力为0.11-0.13MP，灭菌时间为22-25分钟，得到灭菌后培养基；

3）培养材料的接种：无菌状态下，将牛樟芝培养材料分切成单芽分别插种到灭菌后的海绵液体培养基的V形孔中，进行快速增殖培养，培养时间为30-35天，增殖率为5-6倍；

4）增殖材料的转接：将步骤3）中增殖后的材料挟出分切再接种到新鲜的液体培养基中继续进行增殖培养；此后当培养到30-35天时，再次将材料进行分切更换到新鲜的液体培养基中进行增殖培养；

5）生根培养：将步骤4）得到的增殖培养后的牛樟芝增殖材料转接到一定数量后，将其分切成单株转接到添加有琼脂粉的固体培养基中进行生根培养，经过2～3个月培养炼苗后即得到牛樟芝组培苗移植株。