JP2014513555A - サルモネラ検出物品及び使用方法 - Google Patents
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Abstract
【選択図】図1
Description
[0001] サルモネラ微生物は、食中毒の有意な原因物質である。これらの微生物は、生肉、野菜、ピーナッツバター等の乳製品及び加工食品に見られる。サルモネラ感染は、熱、腹痛及び下痢等の腸炎の症状をもたらし、加えて、悪心及び嘔吐を引き起こし得る。大規模食品製造施設は、多数の消費者に流通され得る、汚染食品の源であり、消費者の多くは、細菌に感染する可能性がある。
[0002] 概して、本発明は、微生物を検出するための物品、システム、及び方法に関する。具体的には、システム及び方法は、サルモネラ属に属する微生物を検出するために使用され得る。本発明の物品は、栄養培地と、ほとんどの微生物の増殖を実質的に妨げる一方で、サルモネラ微生物の増殖を可能にする、高度に選択的な薬剤の組み合わせとを含む。物品は更に、最大で3つの指示薬系を含み、各指示薬系は、サルモネラ微生物の存在可能性を示す固有の機能を果たす。本発明の物品がサルモネラ微生物の存在可能性を示す時に、サルモネラ微生物の存在を示すために、第4の固有の指示薬系が更に使用され得る。有利に、システム及び方法は、方法が開始された後に、数時間内のサルモネラ微生物の存在を示すために使用され得る。
[0021] 食品試料中のサルモネラ微生物を検出するための現在の方法は、非標的微生物(例えば、非サルモネラエンテロバクテリアセエ:シトロバクター、大腸菌、プロテウス/モルガネラ/プロビデンシア、非エンテロバクテリアセエ(non-Enterobactericeae):エロモナス等)に対して、標的(サルモネラ)微生物の数及び/又は濃度を増加させるために、選択増菌手順の使用を含む。典型的には16〜48時間続く増菌手順後に、得られた培養物は、例えば、めっき技術、免疫診断技術(例えば、ELISA、免疫クロマトグラフィ)、及び遺伝学的技術(例えば、PCR、rt−PCR、ハイブリッド形成技術)等、当該技術分野において既知である種々の技術によって、サルモネラ微生物の存在に対して試験され得る。技術のそれぞれは、サルモネラ微生物を同定するために追加の時間を必要とし、技術を実施するために、及び/又は結果を解釈するために、高度な訓練を受けた操作者を必要とし、多くの場合、高価な試薬、デバイス、及び/又は装置を必要とする。
[0049] 実施形態1は、標的微生物を検出するための培養デバイスであって、
標的微生物の増殖を促進するための栄養素と、セフスロジン、ナリジクス酸、ストレプトマイシン、メチシリン、及び胆汁酸塩を含む複数の選択剤とを含む選択的増殖培地と、
第1の識別指示薬系と、
ゲル化剤と、を含む、培養デバイスである。
サルモネラ微生物に対して高度に選択的である栄養培地と、少なくとも2つの識別指示薬系とを含む培養デバイスであって、第1の識別指示薬系が、サルモネラ微生物の陽性指示薬であり、第2の識別指示薬系が、サルモネラ微生物の陰性指示薬である、培養デバイスと、
第3の識別指示薬系を含む検出物品であって、第3の識別指示薬系が、サルモネラ微生物の陽性指示薬である、検出物品と、を含む、システムである。
液体試料、実施形態1〜8のいずれか1つに記載の培養デバイス、及び第3の識別指示薬系を提供することと、
接種された培養デバイスを形成するために、培養デバイス中で、規定の体積の試料を、選択的増殖培地;第1の指示薬系;存在する場合、非識別指示薬系;存在する場合、第2の指示薬系;及びゲル化剤と接触させることと、
第1の期間にわたって、接種された培養デバイスをインキュベートすることと、
標的微生物の試料中の存在可能性の指示を検出するために、接種増殖培地を観察することと、
標的微生物の存在可能性の指示がある時に、第3の識別を水和した増殖培地と接触させることと、
標的微生物の存在の指示のために、水和した増殖培地中の第3の識別指示薬系を観察することと、を含む、方法である。
試料、実施形態8に記載の培養デバイス、及び第3の識別指示薬系を提供することと、
水和した増殖培地を形成するために、培養デバイス中で、規定の体積のサルモネラを含まない水性液体を、選択的増殖培地;第1の識別指示薬系;存在する場合、非識別指示薬系;存在する場合、第2の識別指示薬系;及びゲル化剤と接触させることと、
水和した増殖培地に試料を接種して、接種された培養デバイスを形成することと、
第1の期間にわたって、接種された培養デバイスをインキュベートすることと、
標的微生物の試料中の存在可能性の指示を検出するために、水和した増殖培地を観察することと、
標的微生物の存在可能性の指示がある時に、第3の識別を水和した増殖培地と接触させることと、
標的微生物の存在の指示のために、水和した増殖培地中の第3の識別指示薬系を観察することと、を含む、方法である。
[0071] 実施例1.サルモネラ検出物品の調製
[0072] 上に0.5インチ(12.7mm)の正方格子線を有する防水のポリエチレンでコーティングされた紙上に、接着剤をコーティングしたことを除いて、米国特許第5,409,838号の実施例4に従って、薄膜培養プレート用の基板部材を調製した。2重量部の2−デオキシ−D−リボース(2DR)と、98重量部のグアーガム(M150グアーMEYPROGATガム、Meyhall Chemical AG)とを混合することによって、粉末組成物を調製した。少量(0.5%未満)のシリカ(CAB−O−SILシリカ、Cabot Corp.,Boston MA)を、処理のために必要に応じて添加した。次いで、粉末混合物を接着剤コーティングされた紙上に振りかけ、過剰な粉末を除去するために、傾斜させ軽く叩いた。
[0077] サルモネラ細菌の純培養(肉混合物から単離された3Mの培養指定FSDCC SAL140)を緩衝ペプトン水(Merck,Darmstadt,Germany)に接種し、37℃で一晩インキュベートした。得られたブロスは、約1×109コロニー形成単位/mL(cfu/mL)の濃度を有した。ブロスを、滅菌緩衝ペプトン水中で、約1×106cfu/mLの最終濃度まで希釈した。
[0080] 参照により全体が本明細書に組み込まれる米国特許出願第61/428,722号の実施例1及び2に記載されるディスクを、コロニーの上に配置し、ディスクを37℃でインキュベートする。3、4、及び5時間後に、ディスクを増殖に対して検査する。
Claims (20)
- 標的微生物を検出するための培養デバイスであって、
前記標的微生物の増殖を促進するための栄養素と、セフスロジン、ナリジクス酸、ストレプトマイシン、メチシリン、及び胆汁酸塩を含む複数の選択剤とを含む選択的増殖培地と、
第1の識別指示薬系と、
ゲル化剤と、を含む、培養デバイス。 - 前記標的微生物の存在を示すための非識別指示薬系を更に含む、請求項1に記載の培養デバイス。
- 前記第1の識別指示薬系が、pH指示薬を含む、請求項1又は2に記載の培養デバイス。
- 非標的微生物の存在を示すための第2の識別指示薬系を更に含む、請求項1〜3のいずれか一項に記載の培養デバイス。
- 前記第2の識別指示薬が、発色性β−ガラクトシダーゼ酵素基質を含む、請求項4に記載の培養デバイス。
- 微生物β−ガラクトシダーゼ酵素活性の誘導物質を更に含む、請求項4又は5に記載の培養デバイス。
- 前記選択的増殖培地が、乾燥、再水和可能選択的増殖培地を含み、前記ゲル化剤が、乾燥、冷水可溶性ゲル化剤を含む、請求項1〜6のいずれか一項に記載の培養デバイス。
- 前記培養デバイスが、薄膜培養デバイスを含む、請求項7に記載の培養デバイス。
- サルモネラ微生物を検出するためのシステムであって、
サルモネラ微生物に対して高度に選択的である栄養培地と、少なくとも2つの識別指示薬系とを含む培養デバイスであって、第1の識別指示薬系が、前記サルモネラ微生物の陽性指示薬であり、第2の識別指示薬系が、前記サルモネラ微生物の陰性指示薬である、培養デバイスと、
第3の識別指示薬系を含む検出物品であって、前記第3の識別指示薬系が、前記サルモネラ微生物の陽性指示薬である、検出物品と、を含む、システム。 - 前記第2及び第3の識別指示薬系が、発色性酵素基質を含み、各発色性酵素基質が、炭水化物構成成分及び発色団を含む、請求項9に記載のシステム。
- 前記第2及び第3の識別指示薬系のそれぞれが、同一の発色団を含む、請求項10に記載のシステム。
- 前記第2の識別指示薬系が、β−ガラクトシダーゼ酵素活性の発色性指示薬を含む、請求項9〜11のいずれか一項に記載のシステム。
- 前記第3の識別指示薬系が、α−ガラクトシダーゼ酵素活性の発色性指示薬を含む、請求項9〜11のいずれか一項に記載のシステム。
- サルモネラ微生物を検出する方法であって、
液体試料、請求項1〜8のいずれか一項に記載の培養デバイス、及び第3の識別指示薬系を提供することと、
接種された培養デバイスを形成するために、前記培養デバイス中で、規定の体積の前記試料を、前記選択的増殖培地;前記第1の指示薬系;存在する場合、前記非識別指示薬系;存在する場合、前記第2の指示薬系;及び前記ゲル化剤と接触させることと、
第1の期間にわたって、前記接種された培養デバイスをインキュベートすることと、
前記標的微生物の前記試料中の存在可能性の指示を検出するために、前記接種増殖培地を観察することと、
前記標的微生物の前記存在可能性の指示がある時に、前記第3の識別を前記水和した増殖培地と接触させることと、
前記標的微生物の存在の指示のために、前記水和した増殖培地中の前記第3の識別指示薬系を観察することと、を含む、方法。 - サルモネラ微生物を検出する方法であって、
試料、請求項8に記載の培養デバイス、及び第3の識別指示薬系を提供することと、
水和した増殖培地を形成するために、前記培養デバイス中で、規定の体積のサルモネラを含まない水性液体を、前記選択的増殖培地;前記第1の識別指示薬系;存在する場合、前記非識別指示薬系;存在する場合、前記第2の識別指示薬系;及び前記ゲル化剤と接触させることと、
前記水和した増殖培地に前記試料を接種して、接種された培養デバイスを形成することと、
第1の期間にわたって、前記接種された培養デバイスをインキュベートすることと、
前記標的微生物の前記試料中の存在可能性の指示を検出するために、前記水和した増殖培地を観察することと、
前記標的微生物の前記存在可能性の指示がある時に、前記第3の識別を前記水和した増殖培地と接触させることと、
前記標的微生物の存在の指示のために、前記水和した増殖培地中の前記第3の識別指示薬系を観察することと、を含む、方法。 - 前記標的微生物の前記存在可能性の指示を検出することが、前記非識別指示薬系及び前記第1の識別指示薬系と反応するが、前記第2の識別指示薬系とは反応しないコロニーを観察することを更に含む、請求項14又は15に記載の方法。
- 前記第2の構成成分を前記水和した増殖培地と接触させることの後に、前記方法が、第2の期間にわたって、前記培養デバイスをインキュベートすることを更に含む、請求項14〜16のいずれか一項に記載の方法。
- 第1の期間にわたって、前記接種された培養デバイスをインキュベートすることが、約0.5時間〜約24時間にわたって、前記接種された培養デバイスをインキュベートすることを含む、請求項14〜17のいずれか一項に記載の方法。
- 第1の期間にわたって、前記接種された培養デバイスをインキュベートすることが、約0.5時間〜約6時間にわたって、前記接種された培養デバイスをインキュベートすることを含む、請求項18に記載の方法。
- 第2の期間にわたって、前記接種された培養デバイスをインキュベートすることが、約30分〜約360分にわたって、前記接種された培養デバイスをインキュベートすることを含む、請求項14〜19のいずれか一項に記載の方法。
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