KR20140027407A - 살모넬라 검출용품 및 사용 방법 - Google Patents

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Abstract

살모넬라 미생물을 검출하기 위한 용품이 제공된다. 본 용품은 높은 선택성의 영양 배지 및 복수의 지시 시스템을 포함한다. 본 용품을 사용하여 살모넬라 미생물을 검출하는 방법이 또한 제공된다.

Description

살모넬라 검출용품 및 사용 방법{SALMONELLA DETECTION ARTICLES AND METHODS OF USE}
살모넬라(Salmonella) 미생물은 식품 매개 질병의 유의한 원인 물질(causative agent)이다. 이러한 미생물은 조리되지 않은 육류, 채소류, 유제품 및 가공 식품, 예를 들어 땅콩 버터에서 발견될 수 있다. 살모넬라 감염은 전장염의 증상, 예를 들어 발열, 복통 및 설사와, 간헐적 오심 및 구토로 이어질 수 있다. 대형 식품 제조 설비는 다수의 소비자에게 유통될 수 있는 오염된 식료품의 공급원인데, 상기 소비자 중 다수는 박테리아로 감염되게 될 수 있다.
일반적으로, 본 발명은 미생물을 검출하기 위한 용품, 시스템 및 방법에 관한 것이다. 특히, 본 시스템 및 방법을 사용하여 살모넬라 속에 속하는 미생물을 검출할 수 있다. 본 발명의 용품은 영양 배지와, 살모넬라 미생물의 성장을 가능하게 하면서 대부분의 미생물의 성장을 사실상 방지하는 에이전트(agent)들의 높은 선택성의 조합물을 포함한다. 본 용품은 3개 이하의 지시 시스템(indicator system)을 추가로 포함하며, 각각의 지시 시스템은 살모넬라 미생물의 존재 가능성을 지시하는 독특한 기능을 한다. 본 발명의 용품이 살모넬라 미생물의 존재 가능성을 지시할 때, 독특한 제4 지시 시스템을 사용하여 살모넬라 미생물의 존재를 추가로 지시할 수 있다. 유리하게는, 본 방법을 시작한 후 수 시간 이내에 살모넬라 미생물의 존재를 지시하는 데 본 시스템 및 방법이 사용될 수 있다.
일 태양에서, 본 발명은 표적 미생물 검출용 배양 장치를 제공한다. 본 배양 장치는 표적 미생물의 성장을 촉진하는 영양소 및 세프설로딘(Cefsulodin), 날리딕스산(Nalidixic Acid), 스트렙토마이신(Streptomycin), 메티실린(Methicillin) 및 담즙산염을 포함하는 복수의 선택제(selective agent)를 포함하는 선택 성장 배지를 포함할 수 있다. 본 배양 장치는 추가로 제1 식별 지시 시스템 및 겔화제를 포함할 수 있다.
임의의 실시 형태에서, 배양 장치는 표적 미생물의 존재를 지시하는 비식별 지시 시스템(nondifferential indicator system)을 추가로 포함할 수 있다. 상기 실시 형태들 중 임의의 것에서, 제1 식별 지시 시스템은 pH 지시제(indicator)를 포함할 수 있다. 상기 실시 형태들 중 임의의 것에서, 배양 장치는 비표적(nontarget) 미생물의 존재를 지시하는 제2 식별 지시 시스템을 추가로 포함할 수 있다. 상기 실시 형태들 중 임의의 것에서, 제2 식별 지시 시스템은 발색성 β-갈락토시다아제 효소 기질을 포함할 수 있다. 상기 실시 형태들 중 임의의 것에서, 선택 성장 배지는 건조된 재수화성(rehydratable) 선택 성장 배지를 포함할 수 있으며, 여기서 겔화제는 건조된 냉수 용해성 겔화제를 포함한다. 상기 실시 형태들 중 임의의 것에서, 배양 장치는 박막 배양 장치일 수 있다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 살모넬라 미생물의 검출 방법을 제공한다. 본 방법은 액체 샘플, 상기 배양 장치들 중 임의의 것 및 제3 식별 지시 시스템을 제공하는 단계를 포함할 수 있다. 본 방법은 배양 장치에서 소정 부피의 상기 샘플을, 선택 성장 배지; 제1 식별 지시 시스템; 존재할 경우, 비식별 지시 시스템; 존재할 경우, 제2 식별 지시 시스템; 및 겔화제와 접촉시켜 접종된 배양 장치를 형성하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 본 방법은 접종된 배양 장치를 제1 기간 동안 인큐베이션하는 단계; 성장 배지를 관찰하여 상기 샘플 내에 상기 표적 미생물의 존재 가능성에 대한 지시를 검출하는 단계; 상기 표적 미생물의 존재 가능성에 대한 지시가 있을 때, 상기 제3 식별 지시 시스템을 상기 수화된 성장 배지와 접촉시키는 단계; 및 상기 수화된 성장 배지 중 상기 표적 미생물의 존재의 지시에 대하여 상기 제3 식별 지시 시스템을 관찰하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 살모넬라 미생물류의 검출 방법을 제공한다. 본 방법은 샘플, 상기 박막 배양 장치들 중 임의의 것 및 제3 식별 지시 시스템을 제공하는 단계를 포함할 수 있다. 본 방법은 상기 배양 장치에서, 소정 부피의 살모넬라 무함유 수성 액체를, 선택 성장 배지; 제1 식별 지시 시스템; 존재할 경우, 비식별 지시 시스템; 존재할 경우, 제2 식별 지시 시스템; 및 겔화제와 접촉시켜 수화된 성장 배지를 형성하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 본 방법은 상기 수화된 성장 배지에 상기 샘플을 접종하여 접종된 배양 장치를 형성하는 단계; 상기 접종된 배양 장치를 제1 기간 동안 인큐베이션하는 단계; 상기 수화된 성장 배지를 관찰하여 상기 샘플 내의 상기 표적 미생물의 존재 가능성에 대한 지시를 검출하는 단계; 상기 표적 미생물의 존재 가능성에 대한 지시가 있을 때, 상기 제3 식별 지시 시스템을 상기 수화된 성장 배지와 접촉시키는 단계; 및 상기 수화된 성장 배지 중 상기 표적 미생물의 존재의 지시에 대하여 상기 제3 식별 지시 시스템을 관찰하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
본 방법의 상기 실시 형태들 중 임의의 것에서, 상기 표적 미생물의 존재 가능성에 대한 지시를 검출하는 단계는 상기 비식별 지시 시스템 및 상기 제1 식별 지시 시스템과는 반응하지만 상기 제2 식별 지시 시스템과는 반응하지 않는 콜로니를 관찰하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 상기 실시 형태들 중 임의의 것에서, 제2 성분을 상기 수화된 성장 배지와 접촉시킨 후, 상기 방법은 상기 배양 장치를 제2 기간 동안 인큐베이션하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 본 방법의 상기 실시 형태들 중 임의의 것에서, 상기 접종된 배양 장치를 제1 기간 동안 인큐베이션하는 단계는 상기 접종된 배양 장치를 약 0.5시간 내지 약 24시간 동안 인큐베이션하는 것을 포함할 수 있다. 본 방법의 상기 실시 형태들 중 임의의 것에서, 상기 접종된 배양 장치를 제2 기간 동안 인큐베이션하는 단계는 상기 접종된 배양 장치를 약 30분 내지 약 360분 동안 인큐베이션하는 것을 포함할 수 있다.
다른 태양에서, 본 발명은 살모넬라 미생물의 검출 시스템을 제공한다. 본 시스템은 살모넬라 미생물에 대하여 높은 선택성을 갖는 영양 배지 및 2가지 이상의 식별 지시 시스템 - 여기서, 제1 식별 지시 시스템은 상기 살모넬라 미생물의 양성 지시제이며, 제2 식별 지시 시스템은 상기 살모넬라 미생물의 음성 지시제임 - 을 포함하는 배양 장치를 포함할 수 있다. 본 시스템은 상기 살모넬라 미생물의 양성 지시제인 제3 식별 지시 시스템을 포함하는 검출용품(detection article)을 추가로 포함할 수 있다.
본 시스템의 임의의 실시 형태에서, 상기 제2 및 제3 식별 지시 시스템은 각각 발색성 효소 기질을 포함할 수 있으며, 각각의 발색성 효소 기질은 탄수화물 성분 및 발색단을 포함한다. 본 시스템의 임의의 실시 형태에서, 상기 제2 및 제3 식별 지시 시스템은 각각 동일한 발색단을 포함할 수 있다. 본 시스템의 임의의 실시 형태에서, 상기 제2 식별 지시 시스템은 β-갈락토시다아제 효소 활성의 발색성 지시제를 포함할 수 있다. 본 시스템의 임의의 실시 형태에서, 상기 제3 식별 지시 시스템은 α-갈락토시다아제 효소 활성의 발색성 지시제를 포함한다.
단어 "바람직한" 및 "바람직하게는"은 소정의 환경 하에서 소정의 이득을 제공할 수 있는 본 발명의 실시 형태를 말한다. 그러나, 동일한 또는 다른 상황 하에서 다른 실시 형태가 또한 바람직할 수 있다. 또한, 하나 이상의 바람직한 실시 형태의 언급은 다른 실시 형태가 유용하지 않다는 것을 의미하지 않으며, 본 발명의 범주로부터 다른 실시 형태를 배제하고자 하는 것은 아니다.
본원에서 사용될 때, 용어 "비식별 지시 시스템"은 예를 들어 상이한 유형의 미생물들을 구별하지 못하는 지시 염색제와 같은 일반 지시 시스템을 말한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "식별 지시 시스템"은 2가지 이상의 미생물 유형을 구별하는 식별 지시 시스템을 말한다. 일부 실시 형태에서, 식별 지시 시스템은 예를 들어 탄수화물 및 pH 지시제를 포함할 수 있으며, 여기서, 상기 시스템은 탄수화물을 산 최종 생성물로 발효시키는 미생물과, 탄수화물을 산 최종 생성물로 발효시키지 않는 미생물을 구별할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 식별 지시 시스템은 발색성 또는 형광성 효소 기질을 포함할 수 있으며, 여기서, 상기 시스템은 상기 효소 기질과 반응하는 효소를 포함하는 미생물과, 상기 효소 기질과 반응하는 효소를 포함하지 않는 미생물을 구별할 수 있다.
용어 "포함하는" 및 그 변형은 이들 용어가 발명의 상세한 설명 및 특허청구범위에서 나타날 경우 제한적 의미를 갖지 않는다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 단수형 용어("a," "an," "the"), "적어도 하나" 및 "하나 이상"은 서로 바꾸어서 사용될 수 있다. 따라서, 예를 들어 미생물은 "하나 이상의" 미생물을 의미하는 것으로 해석될 수 있다.
용어 "및/또는"은 열거된 요소 중 하나 또는 전부, 또는 열거된 요소의 임의의 둘 이상의 조합을 의미한다.
또한, 본 명세서에서 종점(endpoint)에 의한 수치 범위의 설명은 그 범위 이내에 포함된 모든 수를 포함한다 (예를 들어, 1 내지 5는 1, 1.5, 2, 2.75, 3, 3.80, 4, 5 등을 포함함).
상기 발명의 내용은 본 발명의 각각의 개시된 실시 형태 또는 모든 구현예를 설명하도록 의도된 것은 아니다. 이하의 기재는 더 구체적으로 예시적인 실시 형태를 예시한다. 본 출원 전체에 걸쳐 여러 곳에서, 예들의 목록을 통하여 지침이 제공되며, 상기 예들은 다양한 조합으로 사용될 수 있다. 각각의 경우에, 열거된 목록은 단지 대표적인 군으로서의 역할을 하며, 배타적인 목록으로 해석되어서는 안된다.
이들 및 다른 실시예의 추가 상세 사항이 첨부 도면 및 이하의 상세한 설명에 설명된다. 다른 특징, 목적 및 이점들은 상세한 설명 및 도면과 청구의 범위로부터 명확하게 될 것이다.
<도 1>
도 1은 본 발명에 따른 살모넬라 미생물을 검출하기 위한 배양 장치의 일 실시 형태의 상면 사시도.
<도 2>
도 2는 본 장치의 접종을 위한 "개방" 위치의 배양 장치를 나타내는 도 1의 배양 장치의 평면도.
식품 샘플에서 살모넬라 미생물을 검출하는 현재의 방법은 비표적 미생물 (예를 들어, 비-살모넬라 장내세균과(Enterobacteriaceae): 시트로박터(Citrobacter), 이. 콜라이(E. coli), 프로테우스(Proteus)/모르가넬라(Morganella)/프로비덴시아(Providencia), 비-장내세균과: 에어로모나스(Aeromonas) 등)에 비하여 표적 (살모넬라) 미생물의 수 및/또는 농도를 증가시키기 위한 선택적 풍부화 절차의 사용을 포함한다. 전형적으로 16-48시간 지속되는 풍부화 절차 후, 생성된 배양물은 예를 들어 도말 기술, 면역진단 기술 (예를 들어, ELISA, 면역크로마토그래피) 및 유전자적 기술 (예를 들어, PCR, rt-PCR, 혼성화 기술)과 같은 본 기술 분야에 공지된 다양한 기술에 의해 살모넬라 미생물의 존재에 대하여 검사할 수 있다. 상기 기술 각각은 살모넬라 미생물을 확인하기 위한 추가의 시간을 필요로 하고, 고도로 훈련된 작업자가 이 기술을 수행하고/하거나 결과를 해석하는 것을 필요로 하고, 흔히 고가의 시약, 장치 및/또는 장비를 필요로 한다.
본 발명은 살모넬라 미생물을 검출하기 위한 배양 장치를 제공한다. 도 1은 본 발명에 따른 부분 개방 배양 장치(110)의 일 실시 형태의 상면 사시도를 나타낸다. 배양 장치(110)는 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된 미국 특허 제4,565,783호에 개시된 건조 필름 배양 장치와 구성 면에서 유사하다.
배양 장치(110)는 자기-지지형 방수 기재(112) 및 커버 시트(124)를 포함한다. 폐쇄된 위치에서, 커버 시트(124)는 기재(112)에 인접하여 놓여 있다.
기재(112)는 바람직하게는 물을 흡수하지 않거나 또는 달리 물에 의해 영향을 받지 않을 폴리에스테르, 폴리프로필렌 또는 폴리스티렌과 같은 재료의 상대적으로 강직한 필름이다. 대략 0.10 내지 0.18 ㎜ (0.004 내지 0.007 인치)의 두께의 폴리에스테르 필름, 대략 0.10 내지 0.20 ㎜ (0.004 내지 0.008 인치)의 두께의 폴리프로필렌 필름 및 대략 0.38 ㎜ (0.015 인치)의 두께의 폴리스티렌 필름은 잘 작용하는 것으로 밝혀졌다. 다른 적합한 기재는 폴리에틸렌 또는 다른 방수 코팅을 포함하는 종이를 포함한다. 기재(12)는 박테리아 콜로니를 기재를 통하여 관찰하기를 원하는지에 따라 투명하거나 또는 불투명할 수 있다. 박테리아 콜로니의 계수를 용이하게 하기 위하여, 기재(12)는 바람직하게는 그 상부에 인쇄된 정사각형 격자 패턴을 갖는다.
기재(12)는 그의 상부 표면이 접착제(116) 층으로 코팅되며, 상기 접착제 층은 용이한 수화를 위하여 건조 겔화제 및/또는 영양소를 균일한 단층으로 포함하는 분말(114)을 유지하는 역할을 한다. 접착제(116)는 수불용성이고, 미생물의 성장에 대하여 비저해성이어야 한다. 바람직하게는, 접착제(116)는 습윤될 때 접착제(116)로 코팅된 필름을 통하여 박테리아 콜로니의 관찰이 가능하기에 충분히 투명하다. 접착제(116)는 감압성인 것이 바람직하다. 그러나, 더욱 낮은 융점의 물질이 더욱 높은 융점의 물질 상에 코팅된 열활성화 접착제가 또한 사용될 수 있다.
수분 활성화 접착제, 예를 들어 고무풀이 또한 유용할 수 있다. 접착제(116)는 바람직하게는 분말형 겔화제 및/또는 영양소의 입자의 직경보다 작은 두께로 기재(112) 상에 코팅되어야 한다. 그 목적은 상기 입자를 기재에 점착시키기에 충분하지만 입자를 접착제(116) 중에 완전히 매립되게 할 만큼 많은 것은 아닌 접착제(116)를 도포하는 것이다.
분말(114)의 균일한 단층은 충분한 표면 영역이 수화를 위해 노출되는 것이 요망된다. 일반적으로, 0.0051 내지 0.013 ㎜ (0.0002 내지 0.0005 인치)의 두께 범위의 접착제 층이 적합하다. 바람직한 접착제(116)는 아이소옥틸아크릴레이트/아크릴아미드(94/6의 몰비)의 공중합체이다. 사용될 수 있는 다른 감압 접착제는 아이소옥틸아크릴레이트/아크릴산(95/5 또는 94/6의 몰비) 및 실리콘 고무를 포함한다. 수분에의 노출시에 유백색으로 변하는 접착제는 덜 바람직하지만, 이는 투명하지 않은 기재와 함께 사용될 수 있거나 또는 콜로니 가시화가 필요하지 않은 경우 사용될 수 있다.
냉수 용해성 분말(114)의 단층은 접착제 층(116)에 균일하게 점착된다. 분말(114)은 겔화제, 미생물 성장용의 하나 이상의 영양소, 및 겔화제와 미생물 성장용의 하나 이상의 영양소의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 성분을 포함한다. 본 명세서 및 특허청구범위에서 사용되는 바와 같이, 용어 "분말"은 평균 직경이 400 마이크로미터 미만인 미분화 미립자 물질을 표시한다. 본 명세서 및 특허청구범위에서 사용되는 바와 같이, 용어 "냉수 용해성"은 실온에서 물 중 용액을 형성하는 물질을 표시한다.
본 발명의 장치에서 이용되는 분말의 "냉수 용해성"은 예를 들어 적절한 겔화제의 이들 분말 내의 포함에서 생길 수 있다. 분말(114) 중의 포함에 적합한 겔화제는 실온에서 물 중 용액을 형성하는 천연 및 합성 겔화제 둘 모두를 포함한다. 겔화제, 예를 들어 하이드록시에틸 셀룰로오스, 카르복시메틸 셀룰로오스, 폴리아크릴아미드, 로커스트 빈 검(locust bean gum) 및 알긴은 실온에서 물 중 용액을 형성하며, "냉수 용해성"인 분말을 제공하기에 적합한 겔화제이다.
나타낸 바와 같이, 분말(114)은 단지 겔화제를 포함할 수 있다. 제조된 장치가 단지 겔화제를 포함하는 분말을 함유할 경우, 최종 사용자는 "맞춤형"의 그 자신의 특수 영양소를 성장시키고 싶은 미생물 유형에 첨가한다. 예를 들어, 건조된 분말형 영양소는 에탄올 또는 "프레온(Freon)"과 같은 급속하게 증발하는 액체에 현탁될 수 있다. 다른 예에서, 건조된 분말형 영양소는 수성 용액에 현탁되거나 또는 용해될 수 있다. 액체의 분취물은, 접착제 및 겔화제로 이전에 코팅된 기재(112)의 표면에 부가된다. 상기 액체를 증발시켜서, 충분한 영양소를 겔화제와 함께 남긴다.
겔화제가 분말(114)에 포함될 경우, 충분한 양의 겔화제를 기재(112)에 점착시켜서, 기재 상에 두어진 물 또는 수성 샘플의 소정량, 예를 들어 1-3 밀리리터가 약 1500 cp 이상의 점도를 갖는 겔을 형성하게 하는데, 이는 25℃에서 브룩필드(Brookfield) 모델 L VF 점도계를 이용하여 60 rpm에서 측정할 때 그러하다. 이 점도의 겔은 편리한 취급 및 적재를 가능하게 하고, 특유한 콜로니 확인을 제공할 것이다. 대부분의 경우, 20.3 ㎠ (3.14 제곱인치)의 표면적 상의 0.025 내지 0.050 g의 구아 검이 1-3 밀리리터의 수성 샘플로 수화될 때 충분히 점성인 겔을 제공할 것이다. 분말 입자의 크기를 단위 면적당 코팅 중량을 제어하는 데 사용할 수 있다. 예를 들어, 대략 100 메시 구아 검을 1 ㎝ 직경의 디스크에 약 0.0098 g의 중량으로 (2 인치 직경의 디스크에 0.05 g의 중량으로) 코팅하며; 400 메시 구아 검을 약 1 ㎝ 직경의 디스크에 0.0049 g의 중량으로 (2 인치 직경의 디스크에 0.025 g의 중량으로) 코팅한다. 추가의 양의 겔화제 및/또는 영양소가 필요할 경우, 이 실시 형태의 커버 시트(124)가 또한 코팅될 수 있으며, 이는 본 명세서에 기재된 바와 같다.
임의의 실시 형태에서, 본 발명의 배양 장치는 예를 들어 트라이페닐테트라졸륨 클로라이드(TTC)와 같은 비식별 지시제를 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 비식별 지시 시스템을 분말(114) 내에 혼입하는 것이 바람직할 수 있다. 대안적으로, 비식별 지시 시스템 (예를 들어, 염료)을 접착제(116) 내에 혼입할 수 있다. 적합한 염료는 임의의 성장 미생물에 의해 대사되고 콜로니가 더욱 용이한 가시화를 위하여 착색되게 하는 것이다. 이러한 염료의 예에는 트라이페닐 테트라졸륨 클로라이드(TTC), p-톨릴 테트라졸륨 레드, 테트라졸륨 바이올렛, 베라트릴 테트라졸륨 블루 및 관련 염료가 포함된다.
일부 용도에 있어서, 획선에 의해 미생물의 접종을 허용하기에 충분히 강직한 배지를 형성하는 것이 바람직할 수 있다. 획선가능한 배지를 형성하기 위하여, 분말(114) 중에 소량의 가교결합제를 포함시키는 것이 바람직할 수 있으며, 여기서 분말(114)은 겔화제를 포함한다. 예를 들어, 구아 검에서, 가교결합제, 예를 들어 사붕산칼륨, 알루미늄 또는 칼슘 염이 분말(114)의 1.0 중량% 미만의 양으로 첨가될 수 있다. 의도된 미생물의 성장에 사실상 영향을 주지 않는 가교결합제를 선택하기 위하여 주의해야 한다.
커버 시트(124)는 바람직하게는 투명하여서 가시화, 및 선택적으로, 박테리아 콜로니의 계수를 용이하게 하며, 박테리아 및 수증기에 대해서는 사실상 불투과성이다. 본 명세서 및 특허청구범위에서 사용되는 바와 같이, "박테리아 및 수증기에 대하여 사실상 불투명한"은 본 장치의 선적, 보관 및 사용 동안 탈수된 배지의 원하지 않는 오염을 방지하고 인큐베이션 기간 동안 미생물의 성장을 지지할 환경을 제공하는 커버 시트를 표시한다. 일반적으로, 커버 시트(124)는 기재(112)와 동일한 특성을 가질 것이지만, 강직한 것일 필요는 없을 것이다. 커버 시트(124)용으로 바람직한 재료는 0.041 ㎜ (1.6 mil)의 이축 배향 폴리프로필렌 필름이다. 커버 시트(124)는 선택적 접착제 층(예시되지 않음)으로 코팅될 수 있다. 소정의 바람직한 실시 형태에서, 커버 시트(124)는 예를 들어 단지 감압 접착제 또는 양면 접착 테이프(126)를 통하여 기재(112)에 점착될 수 있다.
사실상 수분이 없는 그리고 겔화제, 하나 이상의 선택제, 미생물 성장을 위한 하나 이상의 영양소, 비식별 지시 시스템, 하나 이상의 식별 지시 시스템, 및 전술한 성분들 중 임의의 2가지 이상의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 성분을 포함하는 냉수 재구성성 물질로 본질적으로 이루어진 코팅(120)이 커버 시트(124)의 표면의 적어도 일부분 상에 코팅된다. 본 명세서 및 특허청구범위에서 사용되는 바와 같이, "사실상 수분이 없는"이라는 어구는 일단 코팅이 주위 환경과 평형을 이루도록 허용되었다면, 수분 함량이 탈수된 코팅의 대략적인 수분 함량 이하인 코팅을 표시한다.
코팅(120)에 이용된 물질은 냉수 재구성성이다. 본 명세서 및 특허청구범위에서 사용되는 바와 같이, "냉수 재구성성"은 실온에서 물 중 용액, 졸 또는 겔을 형성하는 물질을 표시한다. 이 실시 형태의 코팅에 포함시키기에 적합한 겔화제 (그러한 것을 코팅에 함유시킬 경우)는 실온에서 물 중 용액을 형성하는 상기 겔화제를 포함한다. 게다가, 한천은 끓는 물에 용해되어 코팅으로서 침적된 후 "냉수 재구성성"인 물질임이 밝혀졌다.
바람직한 코팅 혼합물은 하기 성분들의 혼합에 의해 제조된다:
Figure pct00001
당업자라면, 상기 혼합물이 적어도 2가지의 선택제 (예를 들어, 염화나트륨 및 담즙산염 3번)를 포함한다는 것을 인지할 것이다. 당업자라면, 상기 혼합물이 식별 지시 시스템 또는 식별 지시 시스템의 일부분으로 기능할 수 있는 적어도 2가지의 성분 (예를 들어, 페놀 레드 및 5-브로모-4-클로로-3-인독실-β-D-갈락토피라노시드)을 포함한다는 것을 추가로 인지할 것이다. 예를 들어, 페놀 레드는 예를 들어 살모넬라 미생물과 같은 미생물의 존재를 지시하기 위한 식별 지시 시스템을 형성하기 위하여 대사가능한 화합물 (예를 들어, 2-데옥시-D-리보스 또는 우레아)을 포함하는 제형에서 사용될 수 있다. 살모넬라 미생물은 2-데옥시-D-리보스를 산 부산물로 발효시키고, 이럼으로써 pH 지시제의 존재 하에 시각적으로 검출될 수 있는 산 구역을 생성할 수 있다. 살모넬라 미생물은 추가로 5-브로모-4-클로로-3-인독실-α-D-갈락토피라노사이드와 반응하여 흑색 콜로니를 형성할 수 있다. 비-살모넬라 미생물 (예를 들어, 대장균 미생물)은 5-브로모-4-클로로-3-인독실-β-D-갈락토피라노사이드와 반응하여 청녹색 콜로니를 형성할 수 있다. 놀랍게도, 비록 전술한 발색성 효소 기질들 둘 모두가 동일한 발색단(5-브로모-4-클로로-3-인독실-)을 포함한다 해도, 본 발명의 용품에서, 상기 기질들은 미생물에 의해 가수분해되어 시각적으로 특유한 색의 생성물을 생성한다. 식별 지시 시스템은 접착제 층, 분말 층 및/또는 건조된 재수화성 코팅의 형태로 배양 장치 내에 혼입될 수 있다.
상기 혼합물 중의 열거된 선택 성분에 더하여, 코팅 혼합물은 다양한 다른 (예를 들어, "비표적") 미생물의 성장을 사실상 방지하면서 살모넬라 미생물의 성장을 가능하게 하는 항생제의 높은 선택성의 조합물을 추가로 포함할 수 있다. 이러한 조합물의 비제한적인 예에는 세프설로딘 나트륨 염 (약 12 ㎎/L), 날리딕스산 나트륨 염 (약 4 ㎎/L), 스트렙토마이신 설페이트 염 (약 4 ㎎/L), 및 메티실린 나트륨 염 (약 45 ㎎/L)의 혼합물을 포함한다.
다시 도 1을 참조하면, 커버 시트(124)는 기재(112)에 대향하는 커버 시트(124)의 표면에 적용된 스페이서 요소(118)를 포함한다. 스페이서 요소(118)는 커버 시트(124) 상의 건조된 재수화성 코팅(120)이 노출되도록 중심부를 통하여 절단된 원형 개구(122)를 포함한다. 개구(122)의 벽은 소정의 크기 및 형상의 웰을 제공하여 수화 후 매질을 국한시킨다. 스페이서 요소(118)는 원하는 부피, 예를 들어 1, 2 또는 3 밀리리터의 웰을 형성하기에 충분한 두께를 가져야 한다. 폐쇄 셀 폴리에틸렌 폼(foam) 또는 폴리스티렌 폼이 스페이서 요소(118)에 바람직한 재료이지만, 소수성(비-습윤성)이며 미생물에 대하여 불활성이고 살균을 견딜 수 있는 임의의 재료가 사용될 수 있다.
커버 시트(124)를 횡단하는 천공(126)이 또한 도 1에 도시되어 있다. 천공(126)은 배양 장치(110)의 개방을 용이하게 하며, 일부 실시 형태에서, 배양 장치(110)를 개방하여 놓을 수 있고, 이는 도 2에 도시된 바와 같다.
도 2는 본 발명의 개방 배양 장치(110)의 평면도를 나타낸다. 기재(112), 커버 시트(124), 스페이서 요소(118), 개구(122), 및 천공(126)이 도 2에 도시되어 있다. 이 위치에서, 액체 샘플(예시되지 않음)은 플레이트의 접종을 위하여 스페이서 요소(118)에 의해 형성된 웰 내에 또는 기재(112) 상에 두어질 수 있다.
본 발명의 박막 배양 장치는 살모넬라 미생물의 존재에 대하여 샘플을 검사하는 데 사용될 수 있다. 샘플 재료는 살모넬라 미생물을 함유할 것으로 의심되는 샘플 재료를 포함한다. 샘플 재료는 액체, 고체, 액체 중에 현탁되거나 또는 분산된 고체, 하이드로겔일 수 있다. 실시 형태들 중 임의의 것에서, 샘플은 (예를 들어, 여과, 침전, 응집, 원심분리, 흡수 및/또는 흡착에 의한) 농축, 풍부화 (예를 들어, 선택적 성장에 의한 풍부화) 및 정제 (예를 들어 크로마토그래피에 의한 정제)를 포함하지만, 이에 한정되지 않는 하나 이상의 샘플 제조 기술을 가한 미생물 및/또는 재료 (예를 들어, 식품, 음료)를 포함할 수 있다.
일 실시 형태에서, 소정의 부피의 액체 샘플을 커버 시트 상의 코팅 및 기재 상의 분말과 접촉시켜 배양 장치를 수화시키고 접종된 배양 장치를 형성할 수 있다. 대안적인 실시 형태에서, 배양 장치의 수-재구성성 코팅은 수성 액체 (예를 들어, 살균수)로 수화될 수 있으며, 샘플은 선택적으로 획선 평판 기술을 이용하여, (예를 들어, 피펫, 면봉(swab), 루프에 의해) 수화된 배양 장치에 적용될 수 있다. 바람직하게는, 배양 장치 내의 코팅은 제1 식별 지시 시스템 (예를 들어, 2-데옥시-D-리보스 및 pH 지시제, 예를 들어 페놀 레드), 비식별 지시 시스템 (예를 들어, TTC), 및 제2 식별 지시 시스템 (예를 들어, 5-브로모-4-클로로-3-인독실-β-D-갈락토피라노사이드, "X-gal")을 포함한다. 선택적으로, 배양 장치는 β-갈락토시다아제 효소 활성의 유도제인 아이소프로필-β-D-티오갈락토사이드와 같은 식별 지시 시스템들 중 하나 이상과 결부된 미생물 활성에 대한 유도제를 포함할 수 있다. 살모넬라 미생물의 존재를 지시하는 데 사용되는 다른 식별 지시 시스템은 예를 들어 페놀 레드와 같은 pH 지시제 및 우레아를 포함한다.
배양 장치의 접종 후, 배양 장치를 소정의 기간 동안 인큐베이션하여 살모넬라 미생물의 성장을 용이하게 할 수 있다. 당업자라면, 살모넬라의 성장을 용이하게 하기 위한 최적 온도를 인식할 것이다. 배양 장치는 약 0.5 내지 약 48시간, 바람직하게는 약 0.5 내지 약 24시간, 더 바람직하게는, 약 0.5시간 내지 약 6시간 동안 인큐베이션될 수 있다.
인큐베이션 기간 후, 접종된 배양 배지는 살모넬라 미생물의 존재 가능성에 대한 지시에 대하여 관찰될 수 있다. 하나의 지시는 TTC로부터의 포르마잔 염료의 형성으로 인한 적색 콜로니의 출현이다. 더욱 더, 적색 콜로니를 둘러싸고 있는 산 구역은, 콜로니가 살모넬라 미생물을 포함함을 지시할 수 있는 반응인 2-데옥시-D-리보스의 산 부산물로의 발효를 콜로니 내의 박테리아가 시켰음을 지시한다. 콜로니가 X-gal과의 반응과 결부된 청녹색 구역을 가질 경우, 이는 콜로니가 아마도 살모넬라 미생물이 아님을 지시한다.
산 구역 (예를 들어, pH 지시제가 페놀 레드일 때, 황색 구역)으로 둘러싸인 적색 콜로니의 존재는 배양 장치에서의 살모넬라 미생물의 존재를 시사한다. 이러한 추정적 결과는 다른 식별 지시제 (예를 들어, 5-브로모-4-클로로-3-인독실-α-D-갈락토피라노사이드)를 콜로니와 접촉시킴으로써 추가로 지지될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 이것은 플레이트를 개방하고, 5-브로모-4-클로로-3-인독실-α-D-갈락토피라노사이드의 용액을 성장 배지에 적용함으로써 행해질 수 있다. 대안적으로, 이는 플레이트를 개방하고, 5-브로모-4-클로로-3-인독실-α-D-갈락토피라노사이드를 포함하는 코팅을 포함하는 건조된 재수화성 용품을 적용함으로써 행해질 수 있다. 상기 용품은 전체적으로 참고로 포함된 미국 특허 제6,022,682호에 기재된 바와 같이 만들어질 수 있다. 5-브로모-4-클로로-3-인독실-α-D-갈락토피라노사이드는 예를 들어 약 30분 내지 약 360분과 같은 기간 동안 배양 장치의 성장 구역과 접촉된다. 선택적으로, 상기 접촉은 승온 (예를 들어, 37℃)에서 일어날 수 있다.
5-브로모-4-클로로-3-인독실-α-D-갈락토피라노사이드를 성장 배지와 접촉시킨 후, 배양 장치는 콜로니와 결부된 매우 어두운 색 (예를 들어, 거의 흑색)에 대하여 관찰될 수 있다. 5-브로모-4-클로로-3-인독실-α-D-갈락토피라노사이드의 가수분해에 의한 매우 어두운 색 (예를 들어, 거의 흑색) 및 산 구역과 결부된 임의의 적색 콜로니는 살모넬라 미생물일 가능성이 매우 높다.
실시 형태
실시 형태 1은 표적 미생물을 검출하기 위한 배양 장치로서, 상기 배양 장치는
상기 표적 미생물의 성장을 촉진하는 영양소; 및 세프설로딘, 날리딕스산, 스트렙토마이신, 메티실린 및 담즙산염을 포함하는 복수의 선택제를 포함하는 선택 성장 배지;
제1 식별 지시 시스템;
겔화제를 포함한다.
실시 형태 2는 상기 표적 미생물의 존재를 지시하는 비식별 지시 시스템을 추가로 포함하는, 실시 형태 1의 배양 장치이다.
실시 형태 3은 상기 제1 식별 지시 시스템이 pH 지시제를 포함하는, 전술한 실시 형태들 중 어느 하나의 배양 장치이다.
실시 형태 4는 비표적 미생물의 존재를 지시하는 제2 식별 지시 시스템을 추가로 포함하는, 전술한 실시 형태들 중 어느 하나의 배양 장치이다.
실시 형태 5는 상기 제2 식별 지시 시스템이 발색성 β-갈락토시다아제 효소 기질을 포함하는, 실시 형태 4의 배양 장치이다.
실시 형태 6은 미생물 β-갈락토시다아제 효소 활성의 유도제를 추가로 포함하는, 실시 형태 4 또는 실시 형태 5의 배양 장치이다.
실시 형태 7은 상기 선택 성장 배지가 건조된 재수화성 선택 성장 배지를 포함하며, 상기 겔화제는 건조된 냉수 용해성 겔화제를 포함하는, 전술한 실시 형태들 중 어느 하나의 배양 장치이다.
실시 형태 8은 박막 배양 장치를 포함하는 실시 형태 7의 배양 장치이다.
실시 형태 9는 살모넬라 미생물을 검출하기 위한 시스템으로서, 상기 시스템은
살모넬라 미생물에 대하여 높은 선택성을 갖는 영양 배지 및 2가지 이상의 식별 지시 시스템 - 여기서, 제1 식별 지시 시스템은 상기 살모넬라 미생물의 양성 지시제이며, 제2 식별 지시 시스템은 상기 살모넬라 미생물의 음성 지시제임 - 을 포함하는 배양 장치; 및
상기 살모넬라 미생물의 양성 지시제인 제3 식별 지시 시스템을 포함하는 검출용품을 포함한다.
실시 형태 10은 상기 제2 및 제3 식별 지시 시스템이 각각 발색성 효소 기질을 포함하며, 각각의 발색성 효소 기질은 탄수화물 성분 및 발색단을 포함하는, 실시 형태 9의 시스템이다.
실시 형태 11은 상기 제2 및 제3 식별 지시 시스템이 각각 동일한 발색단을 포함하는, 실시 형태 10의 시스템이다.
실시 형태 12는 상기 제2 식별 지시 시스템이 β-갈락토시다아제 효소 활성의 발색성 지시제를 포함하는, 실시 형태 9 내지 실시 형태 11 중 어느 하나의 시스템이다.
실시 형태 13은 상기 제3 식별 지시 시스템이 β-갈락토시다아제 효소 활성의 발색성 지시제를 포함하는, 실시 형태 9 내지 실시 형태 11 중 어느 하나의 시스템이다.
실시 형태 14는 살모넬라 미생물을 검출하는 방법으로서, 상기 방법은
액체 샘플, 실시 형태 1 내지 실시 형태 8 중 어느 하나의 배양 장치 및 제3 식별 지시 시스템을 제공하는 단계;
상기 배양 장치에서 소정 부피의 상기 샘플을, 선택 성장 배지; 제1 식별 지시 시스템; 존재할 경우, 비식별 지시 시스템; 존재할 경우, 제2 식별 지시 시스템; 및 겔화제와 접촉시켜 접종된 배양 장치를 형성하는 단계;
상기 접종된 배양 장치를 제1 기간 동안 인큐베이션하는 단계;
접종된 성장 배지를 관찰하여 상기 샘플 내에 상기 표적 미생물의 존재 가능성에 대한 지시를 검출하는 단계;
상기 표적 미생물의 존재 가능성에 대한 지시가 있을 때, 상기 제3 식별 지시 시스템을 상기 수화된 성장 배지와 접촉시키는 단계; 및
상기 수화된 성장 배지 중 상기 표적 미생물의 존재의 지시에 대하여 상기 제3 식별 지시 시스템을 관찰하는 단계를 포함한다.
실시 형태 15는 살모넬라 미생물을 검출하는 방법으로서, 상기 방법은
샘플, 실시 형태 8의 배양 장치 및 제3 식별 지시 시스템을 제공하는 단계;
상기 배양 장치에서, 소정 부피의 살모넬라 무함유 수성 액체를, 선택 성장 배지;; 제1 식별 지시 시스템; 존재할 경우, 비식별 지시 시스템; 존재할 경우, 제2 식별 지시 시스템; 및 겔화제와 접촉시켜 수화된 성장 배지를 형성하는 단계;
상기 수화된 성장 배지에 상기 샘플을 접종하여 접종된 배양 장치를 형성하는 단계;
상기 접종된 배양 장치를 제1 기간 동안 인큐베이션하는 단계;
상기 수화된 성장 배지를 관찰하여 상기 샘플 내의 상기 표적 미생물의 존재 가능성에 대한 지시를 검출하는 단계;
상기 표적 미생물의 존재 가능성에 대한 지시가 있을 때, 상기 제3 식별 지시 시스템을 상기 수화된 성장 배지와 접촉시키는 단계; 및
상기 수화된 성장 배지 중 상기 표적 미생물의 존재의 지시에 대하여 상기 제3 식별 지시 시스템을 관찰하는 단계를 포함한다.
실시 형태 16은 상기 표적 미생물의 존재 가능성에 대한 지시를 검출하는 단계가 상기 비식별 지시 시스템 및 상기 제1 식별 지시 시스템과는 반응하지만 상기 제2 식별 지시 시스템과는 반응하지 않는 콜로니를 관찰하는 것을 추가로 포함하는, 실시 형태 14 또는 실시 형태 15의 방법이다.
실시 형태 17은, 제2 성분을 상기 수화된 성장 배지와 접촉시킨 후, 상기 방법은 상기 배양 장치를 제2 기간 동안 인큐베이션하는 단계를 추가로 포함하는, 실시 형태 14 내지 실시 형태 16 중 어느 하나의 방법이다.
실시 형태 18은 상기 접종된 배양 장치를 제1 기간 동안 인큐베이션하는 단계가 상기 접종된 배양 장치를 약 0.5시간 내지 약 24시간 동안 인큐베이션하는 것을 포함하는, 실시 형태 14 내지 실시 형태 17 중 어느 하나의 방법이다.
실시 형태 19는 상기 접종된 배양 장치를 제1 기간 동안 인큐베이션하는 단계가 상기 접종된 배양 장치를 약 0.5시간 내지 약 6시간 동안 인큐베이션하는 것을 포함하는, 실시 형태 18의 방법이다.
실시 형태 20은 상기 접종된 배양 장치를 제2 기간 동안 인큐베이션하는 단계가 상기 접종된 배양 장치를 약 30분 내지 약 360분 동안 인큐베이션하는 것을 포함하는, 실시 형태 14 내지 실시 형태 19 중 어느 하나의 방법이다.
실시예
본 발명은 하기에 설명된 특정 실시예에 한정되는 것으로 간주되어서는 안되며, 오히려 첨부된 특허청구범위에 적절히 기재된 본 발명의 모든 태양을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 명세서의 개관시 본 발명에 적용될 수 있는 다양한 변형, 동등한 공정뿐만 아니라, 다수의 구조는 본 발명과 관계된 분야의 숙련자에게 쉽게 명확해질 것이다. 달리 기술되지 않으면, 모든 백분율 및 부는 중량 기준이다. 달리 기술되지 않으면, 재료들은 미국 메릴랜드주 볼티모어 소재의 알파 바이오사이언시즈(Alpha Biosciences)로부터 구매가능하다.
재료
실시예 1. 살모넬라 검출용품의 제조
접착제를 12.7 ㎜ (0.5 인치)의 정사각형 격자선이 상부에 있는 방수 폴리에틸렌 코팅지 상에 코팅한 것을 제외하고는, 미국 특허 제5,409,838호의 실시예 4에 따라 박막 배양 플레이트용 베이스 부재를 제조하였다. 2 중량부의 2-데옥시-D-리보스(2DR) 및 98부의 구아 검(M150 구아 메이프로가트(MEYPROGAT) 검, 메이홀 케미칼 아게(Meyhall Chemical AG))을 혼합함으로써 분말 조성물을 제조하였다. 프로세싱에 필요할 경우 소량 (0.5% 미만)의 실리카 (캅-오-실(CAB-O-SIL) 실리카, 미국 매사추세츠주 보스턴 소재의 캐보트 코포레이션(Cabot Corp.))를 첨가하였다. 그 후, 상기 분말 혼합물을 접착제 코팅지 상에 뿌리고, 기울여서 가볍게 두드려 여분의 분말을 제거하였다.
브로쓰 혼합물을 표 1에 열거된 재료들을 용기 내의 1 리터의 탈이온수에 첨가함으로써 제조하고, 미국 특허 제6,022,682호의 실시예 1에 기재된 방법에 따라 혼합하였다.
[표 1]
Figure pct00002
선택제 혼합물은 12 ㎎의 세프설로딘 나트륨 염 (미국 일리노이주 시카고 소재의 리서치 프로덕츠 인터내셔널(Research Products International)), 4 ㎎의 날리딕스산 나트륨 염 (미국 미주리주 세인트 루이스 소재의 시그마 알드리치(Sigma Aldrich)), 4 ㎎의 스트렙토마이신 설페이트 염 (시그마), 45 ㎎의 메티실린 나트륨 염 (시그마), 0.4 ㎎의 아이소프로필-B-D-갈락토피라노사이드 (시그마), 및 2 g의 우레아 (EMD)를 20 ml의 살균 탈이온수에 첨가함으로써 제조하고, 완전히 용해될 때까지 유리 플라스크에서 스월링(swirl)시켰다. 상기 브로쓰를 약 40℃로 냉각시키고, 선택 혼합물을 격렬하게 혼합하면서 첨가하였다.
상기 선택 브로쓰를 커버 필름용의 0.074 ㎜ (2.9 mil) 두께의 폴리에스테르 필름의 코로나 처리면 상에 코팅한 것을 제외하고는 미국 특허 제6,022,682호의 실시예 VI에 기재된 바와 같이 커버 필름 및 박막 배양 플레이트를 준비하였다. 플레이트들은 크기가 대략 7.6 ㎝ × 10.2 ㎝였으며, 이때 5 ㎝의 직경의 원을 폼으로부터 절삭하여 플레이트의 대략 중심부 내에 웰을 제공하였다.
실시예 2. 살모넬라 미생물의 검출 방법
살모넬라 박테리아 (쓰리엠 배양물 표기명(3M Culture Designation): FSDCC SAL140, 육류 혼합물로부터 단리됨)의 순수 배양물을 완충된 펩톤수 (독일 다름스타트 소재의 머크(Merck)) 내에 접종하고, 37℃에서 하룻밤 인큐베이션하였다. 생성된 브로쓰는 대략 1×109의 콜로니 형성 단위/ml(cfu/ml)의 농도를 가졌다. 브로쓰를 대략 1×106cfu/ml의 최종 농도로 살균 완충 펩톤수에서 희석시켰다.
실시예 1의 박막 배양 플레이트는 1.5 mL의 버터필드 완충제(Butterfield's Buffer)를 분말 코팅 상의 웰의 위치의 대략 중간에 첨가함으로써 획선용으로 준비하였다. 커버 필름을 닫고, 겔을 약 1시간 동안 수화시켰다. 커버 필름을 개방하였을 때, 브로쓰 코팅은 겔 표면으로 이전되었다. 상기 최종 농도의 10 마이크로리터 루프를 겔 상의 브로쓰 표면 상에 획선하였다. 상기 커버를 닫고, 플레이트를 37℃에서 하룻밤 인큐베이션하였다. 플레이트들을 콜로니 계수치에 대하여 분석하였다. 콜로니를 지시하는 적색 도트가 명백하였다.
실시예 3. 살모넬라 미생물을 검출하기 위한 지시용품의 사용
전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된 미국 특허 출원 제61/428,722호의 실시예 1 및 2에 기재된 디스크를 콜로니의 상부 상에 두고, 상기 디스크를 37˚C에서 인큐베이션한다. 디스크를 3시간, 4시간 및 5시간 후에 성장에 대하여 조사한다.
모든 특허, 특허 출원, 및 공보, 그리고 전자적으로 입수가능한 본 명세서에서 언급된 자료의 완전한 개시가 참고로 포함되었다. 본 출원의 개시 내용과 본 명세서에 참고로 포함된 임의의 문서의 개시 내용(들) 사이에 임의의 모순이 존재하는 경우, 본 출원의 개시 내용이 좌우할 것이다. 상기 상세한 설명 및 예들은 단지 명확한 이해를 위해 주어졌다. 이로부터 어떠한 불필요한 제한 사항도 이해되지 않을 것이다. 당업자에게 자명한 변화가 청구의 범위에 의해 한정되는 본 발명의 범주 내에 포함될 것이므로, 본 발명은 도시되고 설명된 정확한 상세 사항으로 제한되지 않는다.
모든 표제는 독자의 편리함을 위한 것이며, 그렇게 특정되지 않는 한 표제 이후의 본문의 의미를 한정하기 위하여 사용되어서는 안된다. 본 발명의 사상 및 범주로부터 벗어남이 없이 다양한 변경이 이루어질 수 있다. 이들 및 다른 실시 형태가 이하의 특허청구범위의 범주 내에 속한다.

Claims (20)

  1. 표적 미생물을 검출하기 위한 배양 장치로서,
    상기 표적 미생물의 성장을 촉진하는 영양소; 및 세프설로딘(Cefsulodin), 날리딕스산(Nalidixic Acid), 스트렙토마이신(Streptomycin), 메티실린(Methicillin) 및 담즙산염을 포함하는 복수의 선택제(selective agent)를 포함하는 선택 성장 배지;
    제1 식별 지시 시스템(differential indicator system); 및
    겔화제를 포함하는, 배양 장치.
  2. 제1항에 있어서, 상기 표적 미생물의 존재를 지시하는 비식별 지시 시스템(nondifferential indicator system)을 추가로 포함하는, 배양 장치.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 제1 식별 지시 시스템은 pH 지시제(indicator)를 포함하는, 배양 장치.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 비표적(nontarget) 미생물의 존재를 지시하는 제2 식별 지시 시스템을 추가로 포함하는, 배양 장치.
  5. 제4항에 있어서, 상기 제2 식별 지시 시스템은 발색성 β-갈락토시다아제 효소 기질을 포함하는, 배양 장치.
  6. 제4항 또는 제5항에 있어서, 미생물 β-갈락토시다아제 효소 활성의 유도제(inducer)를 추가로 포함하는, 배양 장치.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 선택 성장 배지는 건조된 재수화성(rehydratable) 선택 성장 배지를 포함하며, 상기 겔화제는 건조된 냉수 용해성 겔화제를 포함하는, 배양 장치.
  8. 제7항에 있어서, 상기 배양 장치는 박막 배양 장치를 포함하는, 배양 장치.
  9. 살모넬라(Salmonella) 미생물을 검출하기 위한 시스템으로서,
    살모넬라 미생물에 대하여 높은 선택성을 갖는 영양 배지 및 2가지 이상의 식별 지시 시스템 - 여기서, 제1 식별 지시 시스템은 상기 살모넬라 미생물의 양성 지시제이며, 제2 식별 지시 시스템은 상기 살모넬라 미생물의 음성 지시제임 - 을 포함하는 배양 장치; 및
    상기 살모넬라 미생물의 양성 지시제인 제3 식별 지시 시스템을 포함하는 검출용품(detection article)을 포함하는, 시스템.
  10. 제9항에 있어서, 상기 제2 및 제3 식별 지시 시스템은 각각 발색성 효소 기질을 포함하며, 각각의 발색성 효소 기질은 탄수화물 성분 및 발색단을 포함하는, 시스템.
  11. 제10항에 있어서, 상기 제2 및 제3 식별 지시 시스템은 각각 동일한 발색단을 포함하는, 시스템.
  12. 제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 식별 지시 시스템은 β-갈락토시다아제 효소 활성의 발색성 지시제를 포함하는, 시스템.
  13. 제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제3 식별 지시 시스템은 α-갈락토시다아제 효소 활성의 발색성 지시제를 포함하는, 시스템.
  14. 살모넬라 미생물을 검출하는 방법으로서,
    액체 샘플, 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 배양 장치 및 제3 식별 지시 시스템을 제공하는 단계;
    상기 배양 장치에서 소정 부피의 상기 샘플을, 선택 성장 배지; 제1 식별 지시 시스템; 존재할 경우, 비식별 지시 시스템; 존재할 경우, 제2 식별 지시 시스템; 및 겔화제와 접촉시켜 접종된 배양 장치를 형성하는 단계;
    상기 접종된 배양 장치를 제1 기간 동안 인큐베이션하는 단계;
    접종된 성장 배지를 관찰하여 상기 샘플 내에 상기 표적 미생물의 존재 가능성에 대한 지시를 검출하는 단계;
    상기 표적 미생물의 존재 가능성에 대한 지시가 있을 때, 제3 식별 지시 시스템을 수화된 성장 배지와 접촉시키는 단계; 및
    상기 수화된 성장 배지 중 상기 표적 미생물의 존재의 지시에 대하여 상기 제3 식별 지시 시스템을 관찰하는 단계를 포함하는, 방법.
  15. 살모넬라 미생물을 검출하는 방법으로서,
    샘플, 제8항의 배양 장치 및 제3 식별 지시 시스템을 제공하는 단계;
    상기 배양 장치에서, 소정 부피의 살모넬라 무함유 수성 액체를, 선택 성장 배지; 제1 식별 지시 시스템; 존재할 경우, 비식별 지시 시스템; 존재할 경우, 제2 식별 지시 시스템; 및 겔화제와 접촉시켜 수화된 성장 배지를 형성하는 단계;
    상기 수화된 성장 배지에 상기 샘플을 접종하여 접종된 배양 장치를 형성하는 단계;
    상기 접종된 배양 장치를 제1 기간 동안 인큐베이션하는 단계;
    상기 수화된 성장 배지를 관찰하여 상기 샘플 내의 상기 표적 미생물의 존재 가능성에 대한 지시를 검출하는 단계;
    상기 표적 미생물의 존재 가능성에 대한 지시가 있을 때, 상기 제3 식별 지시 시스템을 상기 수화된 성장 배지와 접촉시키는 단계; 및
    상기 수화된 성장 배지 중 상기 표적 미생물의 존재의 지시에 대하여 상기 제3 식별 지시 시스템을 관찰하는 단계를 포함하는, 방법.
  16. 제14항 또는 제15항에 있어서, 상기 표적 미생물의 존재 가능성에 대한 지시를 검출하는 단계는 상기 비식별 지시 시스템 및 상기 제1 식별 지시 시스템과는 반응하지만 상기 제2 식별 지시 시스템과는 반응하지 않는 콜로니를 관찰하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  17. 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 성분을 상기 수화된 성장 배지와 접촉시킨 후, 상기 방법은 상기 배양 장치를 제2 기간 동안 인큐베이션하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  18. 제14항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 접종된 배양 장치를 제1 기간 동안 인큐베이션하는 단계는 상기 접종된 배양 장치를 약 0.5시간 내지 약 24시간 동안 인큐베이션하는 것을 포함하는, 방법.
  19. 제18항에 있어서, 상기 접종된 배양 장치를 제1 기간 동안 인큐베이션하는 단계는 상기 접종된 배양 장치를 약 0.5시간 내지 약 6시간 동안 인큐베이션하는 것을 포함하는, 방법.
  20. 제14항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 접종된 배양 장치를 제2 기간 동안 인큐베이션하는 단계는 상기 접종된 배양 장치를 약 30분 내지 약 360분 동안 인큐베이션하는 것을 포함하는, 방법.
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