CN103547678B - 沙门氏菌检测物品及其使用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供用于检测沙门氏菌微生物的物品。该物品包含高度选择性营养培养基和多个指示剂系统。还提供使用该物品检测沙门氏菌微生物的方法。

Description

沙门氏菌检测物品及其使用方法
背景技术
沙门氏菌(Salmonella)微生物是食源性疾病的显著致病因子。这些微生物可在未煮过的肉类、蔬菜、乳制品和加工食品例如花生酱中发现。沙门氏菌感染可导致小肠结肠炎症状例如发热、腹痛和腹泻，以及偶发性恶心和呕吐。大型食物制造设施是可分布至大量消费者的污染食物产品来源，所述消费者中的许多可变得由该细菌感染。
发明内容
一般来讲，本发明涉及用于检测微生物的物品、系统和方法。具体地，该系统和方法可用于检测属于沙门氏菌属的微生物。本发明的物品包括营养培养基和高度选择性的试剂组合，所述试剂基本上防止大多数微生物的生长，同时允许沙门氏菌微生物的生长。该物品还包括最高至三个指示剂系统，每个指示剂系统发挥独特功能，以指示沙门氏菌微生物的可能存在。当本发明的物品指示沙门氏菌微生物的可能存在时，第四独特指示剂系统还可用于指示沙门氏菌微生物的存在。有利地，该系统和方法可用于指示在该方法起始后的几小时内沙门氏菌微生物的存在。
在一个方面，本公开内容提供用于检测靶微生物的培养装置。该培养装置可包括选择性生长培养基，所述选择性生长培养基包括有利于靶微生物生长的营养物质和多种选择试剂，所述多种选择试剂包括头孢磺啶、萘啶酸、链霉素、甲氧西林和胆汁盐。该培养装置还可包括第一区别性指示剂系统和胶凝剂。
在任何实施例中，该培养装置还可包括非区别性指示剂系统，以指示靶微生物的存在。在上述实施例的任何一个中，该第一区别性指示剂系统可包含pH指示剂。在上述实施例的任何一个中，该培养装置还可包括第二区别性指示剂系统，以指示非靶微生物的存在。在上述实施例的任何一个中，该第二区别性指示剂可包含显色β-半乳醣苷酶酶底物。在上述实施例的任何一个中，选择性生长培养基可包含干燥的可再水合的选择性生长培养基，其中所述胶凝剂包含干燥的冷水溶解性胶凝剂。在上述实施例的任何一个中，该培养装置可以是薄膜培养装置。
在又一方面，本公开内容提供检测沙门氏菌微生物的方法。该方法可包括提供液体样品、上述培养装置中的任何一个和第三区别性指示剂系统。该方法还可包括在培养装置中使预定体积的样品与如下物质接触以形成经接种的培养装置：选择性生长培养基；第一指示剂系统；非区别性指示剂系统，如果存在的话；第二区别性指示剂系统，如果存在的话；和胶凝剂。该方法还可包括将经接种的培养装置温育第一时间段；观察生长培养基，以检测样品中靶微生物的可能存在的指示；当存在靶微生物的可能存在的指示时，使第三区别性与水合的生长培养基接触；并且就靶微生物的存在的指示观察水合的生长培养基中的第三区别性指示剂系统。
在又一方面，本公开内容提供检测沙门氏菌微生物的方法。该方法可包括提供样品、上述薄膜培养装置中的任何一个和第三区别性指示剂系统。该方法还可包括在培养装置中使预定体积的无沙门氏菌的含水液体与如下物质接触以形成水合的生长培养基：选择性生长培养基；第一区别性指示剂系统；非区别性指示剂系统，如果存在的话；第二区别性指示剂系统，如果存在的话；和胶凝剂。该方法还可包括用样品接种水合的生长培养基，以形成经接种的培养装置；将经接种的培养装置温育第一时间段；观察水合的生长培养基，以检测样品中靶微生物的可能存在的指示；当存在靶微生物的可能存在的指示时，使第三区别性与水合的生长培养基接触；并且就靶微生物的存在的指示观察水合的生长培养基中的第三区别性指示剂系统。
在上述方法实施例的任何一个中，检测靶微生物的可能存在的指示还可包括观察这样的菌落，其与非区别性指示剂系统和第一区别性指示剂系统反应而不与第二区别性指示剂系统反应。在上述实施例的任何一个中，在使第二组分与水合的生长培养基接触后，该方法还可包括将培养装置温育第二时间段。在上述方法实施例的任何一个中，将经接种的培养装置温育第一时间段可包括将经接种的培养装置温育约0.5小时至约24小时。在上述方法实施例的任何一个中，将经接种的培养装置温育第二时间段可包括将经接种的培养装置温育约30分钟至约360分钟。
在另一方面，本公开内容提供用于检测沙门氏菌微生物的系统。该系统可包括培养装置，该培养装置包括对于沙门氏菌微生物是高度选择性的营养培养基和至少两个区别性指示剂系统，其中第一区别性指示剂系统是沙门氏菌微生物的阳性指示剂，并且第二区别性指示剂系统是沙门氏菌微生物的阴性指示剂。该系统还可包括包含第三区别性指示剂系统的检测物品，其中所述第三区别性指示剂系统是沙门氏菌微生物的阳性指示剂。
在系统的任何实施例中，第二和第三区别性指示剂系统各自可包含显色酶底物，其中每种显色酶底物包含碳水化合物组分和发色团。在系统的任何实施例中，第二和第三区别性指示剂系统各自可包含相同的发色团。在系统的任何实施例中，第二区别性指示剂系统可包含β-半乳醣苷酶酶活性的显色指示剂。在系统的任何实施例中，第三区别性指示剂系统包含α-半乳醣苷酶酶活性的显色指示剂。
词语“优选的”和“优选地”是指在某些情况下可提供某些有益效果的本发明实施例。然而，在相同的情况或其他情况下，其他实施例也可以是优选的。此外，对一个或多个优选实施例的表述并不暗示其他实施例不是可用的，并且不意在将其他实施例从本发明的范围排除。
如本文所用，术语“非区别性指示剂系统”是指例如不区别不同类型的微生物的一般指示剂系统，例如指示剂染料。
如本文所用，术语“区别性指示剂系统”是指区别两个或更多个类型的微生物的指示剂系统。在一些实施例中，区别性指示剂系统可包含例如碳水化合物和pH指示剂，其中所述系统可区分将碳水化合物发酵为酸性终末产物的微生物和不将碳水化合物发酵为酸性终末产物的微生物。在一些实施例中，区别性指示剂系统可包含显色或荧光酶底物，其中所述系统可区分包含与酶底物反应的酶的微生物和不包含与酶底物反应的酶的微生物。
当术语“包括/包含”及其变型在说明书和权利要求书中出现时，这些术语的确不具有限制性含义。
本文所用的“一种（个）”、“所述（该）”、“至少一种（个）”以及“一种或多种（一个或多个）”可互换使用。因此，例如，微生物可解释为意指“一种或多种”微生物。
术语“和/或”意指所列要素的一个或全部，或所列要素的任何两个或两个以上的组合。
另外，本文通过端点表述的数值范围包括在所述范围内包含的所有数值（例如，1到5包括1、1.5、2、2.75、3、3.80、4、5等）。
本发明的上述发明内容并不意在描述本发明的每个公开的实施例或每一种实施方式。以下描述更具体地例示了示例性实施例。在本申请全文的若干地方，通过实例列表提供指导，其实例可用于多种组合中。在每一种情形下，所列举的列表仅仅作为代表性群组，而不应被理解为排他性列表。
这些及其他实施例的更多细节在下文附图和描述中示出。通过描述、附图和权利要求书，其他特征、目标和优点将变得明显。
附图说明
图1是根据本公开内容检测沙门氏菌微生物的培养装置的一个实施例的顶部透视图。
图2是图1的培养装置的顶视图，其显示处于用于接种该装置的“开放”位置的培养装置。
具体实施方式
检测食物样品中的沙门氏菌微生物的目前方法包括使用选择性富集工序，以相对于非靶微生物（例如非沙门氏菌肠杆菌科(Enterobacteriaceae)：柠檬酸杆菌属(Citrobacter)、大肠杆菌(E.coli)、变形杆菌属(Proteus)/摩根菌属(Morganella)/普罗威登斯菌属(Providencia)，非肠杆菌科：气单胞菌属(Aeromonas)等），增加靶（沙门氏菌）微生物的数目和/或浓度。在一般持续16-48小时的富集工序后，所得的培养物可通过多种技术测试沙门氏菌微生物的存在，所述多种技术是本领域已知的，例如铺平板技术、免疫诊断技术（例如ELISA、免疫色谱法）、和遗传学技术（例如PCR、rt-PCR、杂交技术）。所述技术各自需要额外的时间以鉴定沙门氏菌微生物，需要受过高度训练的操作者以执行技术和/或解释结果，并且通常需要昂贵的试剂、装置和或设备。
本公开内容提供用于检测沙门氏菌微生物的培养装置。图1显示根据本公开内容的部分开放的培养装置110的一个实施例的顶部透视图。培养装置110在构造上类似于公开于美国专利号4,565,783中的干膜培养装置，所述专利以引用的方式全文并入本文。
培养装置110包括自支承防水基材112和覆盖片124。在关闭位置中，覆盖片124位于基材112附近。
基材112优选是材料例如聚酯、聚丙烯或聚苯乙烯的相对刚性的膜，所述材料不吸收水或不以其他方式受水影响。已发现厚约0.004至0.007英寸的聚酯膜、厚约0.004至0.008英寸的聚丙烯膜和厚约0.015英寸的聚苯乙烯膜极为奏效。其他合适的基材包括带聚乙烯涂层或其他防水涂层的纸张。基材12可为透明的或不透明的，这取决于是否希望透过该基材观察细菌菌落。为了有利于细菌菌落的计数，基材12优选具有在其上印刷的正方形网格图案。
基材12在其上表面上涂布有一层粘合剂116，该层粘合剂起到保持粉末114的作用，所述粉末包含在均一单层中的干燥胶凝剂和/或营养物质以便水合。粘合剂116必须是水不溶性的并对微生物的生长是非抑制性的。优选地，粘合剂116在润湿时是充分透明的，以允许透过涂布有粘合剂116的膜观察细菌菌落。优选粘合剂116是压敏的。然而，还可使用热活化粘合剂，其中较低熔点物质涂布于较高熔点物质上。
诸如粘胶之类的水活化粘合剂也可能是有用的。粘合剂116应以优选小于粉末状胶凝剂和/或营养物质的粒子直径的厚度涂布到基材112上。目的是涂覆足够的粘合剂116以将粒子粘附到基材，但又不太多而造成粒子完全嵌入粘合剂116中。
均一单层的粉末114具有足够的表面积暴露于水合作用是期望的。一般来讲，厚度范围0.0002至0.0005英寸的粘合剂层是合适的。优选的粘合剂116是丙烯酸异辛酯/丙烯酰胺共聚物（摩尔比为94/6）。可使用的其他压敏粘合剂包括丙烯酸异辛酯/丙烯酸共聚物（摩尔比为95/5或94/6）和硅橡胶。暴露于水时变成乳状的粘合剂是次优选的，但可结合不透明基材使用或在不要求菌落显现的情况下使用。
将单层冷水溶解性粉末114均一地粘附至粘合剂层116。粉末114包含选自下述的至少一种成分：胶凝剂、一种或多种用于培养微生物的营养物质、以及胶凝剂与一种或多种用于培养微生物的营养物质的混合物。如说明书和权利要求书中所用，术语“粉末”指平均直径小于400微米的细分颗粒物质。如说明书和权利要求书中所用，术语“冷水溶性”指可在室温下形成水溶液的材料。
本发明的装置中所采用的粉末的“冷水溶解性”可由例如在这些粉末中包括适当的胶凝剂而引起。用于包括在粉末114中的合适胶凝剂包括在室温下的水中形成溶液的天然胶凝剂和合成胶凝剂两者。胶凝剂例如羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、聚丙烯酰胺、刺槐豆胶和褐藻胶在室温下的水中形成溶液，并且是用于提供“冷水溶解性”粉末的合适胶凝剂。
如所示的，粉末114可仅包含胶凝剂。当装置在制造时含有仅包含胶凝剂的粉末时，最终使用者可添加为希望培养的微生物类型“所定制的”专用营养物质。例如，可将干燥粉末状营养物质悬浮于诸如乙醇或“氟利昂”之类的快速蒸发液体中。在其他情况下，可将干燥粉末状营养物质悬浮或溶解于水溶液中。将液体的等分试样添加至基材112的表面，所述表面已预先涂布有粘合剂和胶凝剂。允许液体蒸发，留下充足的营养物质连同胶凝剂。
当在粉末114中包括胶凝剂时，足够量的胶凝剂粘附到基材112，使得置于基材上预定数量的水或例如1-3毫升的含水样品将形成凝胶，当用博勒飞(Brookfield)型号LVF粘度计在25℃下以60rpm测量时，所述凝胶具有约1500厘泊或更多的粘度。这个粘度的凝胶将允许方便的处理和叠加且提供明显的菌落鉴定。在大多数情况下，3.14平方英寸表面积上的0.025至0.050克瓜耳胶在与1-3毫升含水样品水合时将形成充分粘稠的凝胶。粉末粒子的粒度可用于控制每单位面积的涂层重量。例如，大约100目瓜耳胶涂层对应约0.05克的重量/2英寸直径盘；而400目瓜耳胶涂层对应约0.025克的重量/2英寸直径盘。如果需要额外量的胶凝剂和/或营养物质，则如本文描述的，还可涂布这个实施例的覆盖片124。
在任何实施例中，本公开内容的培养装置可包括非区别性指示剂例如氯化三苯基四唑(TTC)。在一些实施例中，可能期望将非区别性指示剂系统掺入粉末114内。作为另外一种选择，可将非区别性指示剂系统（例如染料）掺入粘合剂116内。合适的染料是可由任何生长微生物代谢以及引起菌落着色以更易于显现的那些。此类染料的例子包括氯化三苯基四唑(TTC)、对甲苯基四唑红、四唑紫、藜芦基四唑蓝和相关染料。
对于一些用途，可能期望形成足够坚硬以允许通过划线培养接种微生物的培养基。为了形成可划线培养的培养基，可能期望在粉末114中包括少量交联剂，其中粉末114包括胶凝剂。例如，对于瓜耳胶，交联剂例如四硼酸钾、铝或钙盐可以小于粉末114的1.0重量百分比的量添加。必须小心选择基本上不影响预期微生物生长的交联剂。
覆盖片124优选为透明的以有利于菌落的显现和任选的计数，并且是细菌和水蒸汽基本上不可渗透的。如说明书和权利要求所用，“细菌和湿蒸气基本上不可渗透的”指这样的覆盖片：在装置运输、存储和使用期间其能防止不希望有的脱水培养基污染，并且其提供将在温育期间支持微生物生长的环境。一般来讲，覆盖片124具有与基材112相同的性质，但无需与基材112一样是刚性的。用于覆盖片124的优选材料是1.6密耳的双轴取向聚丙烯膜。覆盖片124可涂布有任选的粘合剂层（未显示）。在某些优选实施例中，覆盖片124可例如经由双面粘合带126或仅压敏粘合剂粘附到基材112。
在覆盖片124的至少部分表面上涂布的是涂层120，所述涂层是基本上无水的，并且基本上由包含选自下述的组分的冷水重构的材料组成：胶凝剂、一种或多种选择试剂、一种或多种用于培养微生物的营养物质、非区别性指示剂系统、一种或多种区别性指示剂系统、和前述组分中的任何两种或更多种的组合。如说明书和权利要求所用，短语“基本上无水的”指这样的涂层，一旦已允许所述涂层与周围环境平衡，它的含水量就不大于脱水涂层的大致含水量。
在涂层120中采用的材料是冷水重构的。如说明书和权利要求所用，“冷水重构的”指在室温下的水中形成溶液、溶胶或凝胶的材料。适于包括在该实施例的涂层中的胶凝剂（如果涂层中包含胶凝剂的话）包括在室温下的水中形成溶液的上述胶凝剂。此外，已发现在琼脂已溶解于沸水中且作为涂层沉积后，它是“冷水重构的”材料。
优选的涂层混合物通过混合下述成分进行制备：
本领域普通技术人员应当理解上述混合物包括至少两种选择试剂（例如氯化钠和胆汁盐3号）。本领域普通技术人员还应当理解上述混合物包括至少两种组分（例如酚红和5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-β-D-吡喃半乳糖苷），其可充当区别性指示剂或区别性指示剂系统的部分。例如，酚红可在具有可代谢化合物（例如2-脱氧-D-核糖或尿素）的制剂中用于形成区别性指示剂系统，以指示微生物例如沙门氏菌微生物的存在。沙门氏菌微生物可将2-脱氧-D-核糖发酵为酸性副产物，从而产生在存在pH指示剂的情况下可在视觉上检测的酸区。沙门氏菌微生物还可与5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-α-D-吡喃半乳糖苷反应，以形成黑色着色的菌落。非沙门氏菌微生物（例如大肠杆菌类微生物）可与5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-β-D-吡喃半乳糖苷反应，形成蓝绿色着色的菌落。令人惊讶的是，即使上述显色酶底物均包含相同的发色团（5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-），但在本公开内容的本发明物品中，它们通过微生物水合而产生视觉上不同的着色产物。指示剂系统可掺入培养装置内的粘合剂层、粉末层和/或干燥的可再水合的涂层中。
除了上述混合物中列出的选择成分外，涂层混合物还可包含高度选择性的抗生素组合，其允许沙门氏菌微生物的生长，同时基本上防止多种其他（例如“非靶”）微生物的生长。此类组合的非限制性例子包括头孢磺啶钠盐（约12mg/L）、萘啶酸钠盐（约4mg/L）、链霉素硫酸盐（约4mg/L）和甲氧西林钠盐（约45mg/L）的混合物。
重新参考图1，覆盖片124包括涂覆到覆盖片124表面，面对基材112的间隔元件118。间隔元件118包括洞穿中心的圆形洞122，以暴露覆盖片124上的干燥的可再水合的涂层120。洞122的壁提供预定大小和形状的凹槽以限定水合后的培养基。间隔元件118应足够厚以形成所需体积例如1、2或3毫升的凹槽。闭孔聚乙烯泡沫或聚苯乙烯泡沫是用于间隔元件118的优选材料，但可使用其为疏水性的（不可润湿的）、对微生物惰性的并且能够承受消毒的任何材料。
图1中还显示的是穿过覆盖片124的穿孔126。穿孔126有利于打开培养装置110，并且在一些实施例中，可保持培养装置110开放，如图2中所示。
图2显示本公开内容的开放培养装置110的顶视图。图2中显示的是基材112、覆盖片124、间隔元件118、洞122和穿孔126。在这个位置，可将液体样品（未显示）置于基材112上或由间隔元件118形成的凹槽中，以接种平板。
本公开内容的薄膜培养装置可用于就沙门氏菌微生物的存在测试样品。样品材料包括怀疑含有沙门氏菌微生物的样品材料。样品材料可以是液体、固体、悬浮或分散在液体中的固体、水凝胶。在实施例的任何一个中，样品可包含已实施一种或多种样品制备技术的微生物和/或材料（例如食物、饮料），所述技术包括但不限于浓缩（例如，通过过滤、沉淀、凝聚、离心、吸收和/或吸附）、富集（例如，选择性生长富集）和纯化（例如，色谱纯化）。
在一个实施例中，可使预定体积的液体样品与覆盖片上的涂层和基材上的粉末接触，以水合培养装置且形成经接种的培养装置。在可供选择的实施例中，培养装置的水重构涂层可用含水液体（例如无菌水）水合，并且样品可任选使用划线培养平板技术涂覆（例如通过吸管、拭子、套环）到水合的培养装置。优选地，培养装置中的涂层包含第一指示剂系统（例如2-脱氧-D-核糖和pH指示剂例如酚红）、非区别性指示剂系统（例如TTC）和第二指示剂系统（例如5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-β-D-吡喃半乳糖苷，“X-gal”）。任选地，培养装置可包括关于与指示剂系统中的一种或多种相关的微生物活性的诱导物，例如异丙基-β-D-硫代半乳糖苷，β-半乳糖苷酶酶活性的诱导物。用于指示沙门氏菌微生物的存在的另一区别性指示剂系统包含尿素和pH指示剂例如酚红。
在接种培养装置后，培养装置可温育一段时间，以有利于沙门氏菌微生物的生长。本领域普通技术人员应认识到有利于沙门氏菌生长的最适温度。培养装置可温育约0.5至约48小时，优选约0.5至约24小时，更优选约0.5小时至约6小时。
在温育期后，经接种的培养基可观察沙门氏菌微生物的可能存在的指示。一个指示是由于来自TTC的甲臜(formazan)染料形成的红色菌落的出现。甚至进一步地，围绕红色菌落的酸区指示菌落中的细菌将2-脱氧-D-核糖发酵为酸性副产物，这是可指示菌落包含沙门氏菌微生物的反应。如果菌落具有与X-gal反应相关的蓝绿色着色的区带，则这指示该菌落很可能不是沙门氏菌微生物。
由酸区（例如当pH指示剂是酚红时的黄色区）围绕的红色菌落的存在显示培养装置中沙门氏菌微生物的存在。这个推测的结果还可通过使另一区别性指示剂（例如5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-α-D-吡喃半乳糖苷）与菌落接触得到支持。在一些实施例中，这可通过开放平板且将5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-α-D-吡喃半乳糖苷溶液涂覆到生长培养基来完成。作为另外一种选择，这可通过开放平板且涂覆干燥的可再水合的物品来完成，所述干燥的可再水合的物品包含包括5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-α-D-吡喃半乳糖苷的涂层。该物品可如美国专利号6,022,682中所述进行制备，所述专利以引用的方式全文并入。使5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-α-D-吡喃半乳糖苷与培养装置的生长区接触一段时间，例如约30分钟至约360分钟。任选地，接触可在升高温度（例如37℃）下进行。
在使5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-α-D-吡喃半乳糖苷与生长培养基接触后，可就与菌落相关的极深色（例如接近黑色）观察培养装置。与酸区相关的任何红色菌落和来自5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-α-D-吡喃半乳糖苷水解的极深色（例如接近黑色）非常可能是沙门氏菌微生物。
实施例
实施例1是用于检测靶微生物的培养装置，其包括
选择性生长培养基，所述选择性生长培养基包括有利于靶微生物生长的营养物质和多种选择试剂，所述多种选择试剂包括头孢磺啶、萘啶酸、链霉素、甲氧西林和胆汁盐；
第一区别性指示剂系统；和
胶凝剂。
实施例2是实施例1的培养装置，其还包括非区别性指示剂系统，以指示靶微生物的存在。
实施例3是前述实施例中任何一个的培养装置，其中所述第一区别性指示剂系统包含pH指示剂。
实施例4是前述实施例中任何一个的培养装置，其还包括第二区别性指示剂系统，以指示非靶微生物的存在。
实施例5是实施例4的培养装置，其中所述第二区别性指示剂包含显色β-半乳糖苷酶酶底物。
实施例6是实施例4或实施例5的培养装置，其还包括微生物β-半乳糖苷酶酶活性的诱导物。
实施例7是前述实施例中任何一个的培养装置，其中所述选择性生长培养基包含干燥的可再水合的选择性生长培养基，其中所述胶凝剂包含干燥的冷水溶解性胶凝剂。
实施例8是实施例7的培养装置，其中所述培养装置包括薄膜培养装置。
实施例9是用于检测沙门氏菌微生物的系统，其包括：
培养装置，该培养装置包括对于沙门氏菌微生物是高度选择性的营养培养基和至少两个区别性指示剂系统，其中第一区别性指示剂系统是沙门氏菌微生物的阳性指示剂，其中第二区别性指示剂系统是沙门氏菌微生物的阴性指示剂；和
包含第三区别性指示剂系统的检测物品，其中所述第三区别性指示剂系统是沙门氏菌微生物的阳性指示剂。
实施例10是实施例9的系统，其中所述第二和第三区别性指示剂系统各自包含显色酶底物，其中每种显色酶底物包含碳水化合物组分和发色团。
实施例11是实施例10的系统，其中所述第二和第三区别性指示剂系统各自包含相同的发色团。
实施例12是实施例9到11中任何一个的系统，其中所述第二区别性指示剂系统包含β-半乳糖苷酶酶活性的显色指示剂。
实施例13是实施例9到11中任何一个的系统，其中所述第三区别性指示剂系统包含α-半乳糖苷酶酶活性的显色指示剂。
实施例14是检测沙门氏菌微生物的方法，其包括：
提供液体样品、实施例1到8中任何一个的培养装置和第三区别性指示剂系统；
在所述培养装置中使预定体积的样品与如下物质接触以形成经接种的培养装置：选择性生长培养基；第一指示剂系统；非区别性指示剂系统，如果存在的话；第二区别性指示剂系统，如果存在的话；和胶凝剂；
将所述经接种的培养装置温育第一时间段；
观察所述经接种的生长培养基，以检测所述样品中靶微生物的可能存在的指示；
当存在所述靶微生物的可能存在的指示时，使第三区别性与水合的生长培养基接触；和
就所述靶微生物的存在的指示观察所述水合的生长培养基中的所述第三区别性指示剂系统。
实施例15是检测沙门氏菌微生物的方法，其包括：
提供样品、实施例8的培养装置和第三区别性指示剂系统；
在所述培养装置中使预定体积的无沙门氏菌的含水液体与如下物质接触以形成水合的生长培养基：选择性生长培养基；第一区别性指示剂系统；非区别性指示剂系统，如果存在的话；第二区别性指示剂系统，如果存在的话；和胶凝剂；
用样品接种所述水合的生长培养基，以形成经接种的培养装置；
将所述经接种的培养装置温育第一时间段；
观察所述水合的生长培养基，以检测所述样品中靶微生物的可能存在的指示；
当存在所述靶微生物的可能存在的指示时，使第三区别性与所述水合的生长培养基接触；和
就所述靶微生物的存在的指示观察所述水合的生长培养基中的所述第三区别性指示剂系统。
实施例16是实施例14或实施例15的方法，其中检测靶微生物的可能存在的指示还包括观察这样的菌落，其与非区别性指示剂系统和第一区别性指示剂系统反应而不与第二区别性指示剂系统反应。
实施例17是实施例14到16中任何一个的方法，其中在使第二组分与水合的生长培养基接触后，所述方法还包括将培养装置温育第二时间段。
实施例18是实施例14到17中任何一个的方法，其中将经接种的培养装置温育第一时间段包括将所述经接种的培养装置温育约0.5小时至约24小时。
实施例19是实施例18的方法，其中将经接种的培养装置温育第一时间段包括将所述经接种的培养装置温育约0.5小时至约6小时。
实施例20是实施例14到19中任何一个的方法，其中将经接种的培养装置温育第二时间段包括将所述经接种的培养装置温育约30分钟至约360分钟。
实例
本发明不应被认为仅限于下文所述的具体实例，相反，应被理解为覆盖所附权利要求书中所明确提出的本发明的各个方面。对于本发明所涉及的领域的技术人员来说，一旦阅读本说明书后，本发明适用的多种修改形式、等同工艺和多种结构将是显而易见的。除非另有说明，所有百分比和份均按重量计。除非另有说明，材料可从美国马里兰州巴尔的摩的AlphaBiosciences公司(AlphaBiosciences,Baltimore,MD)商购获得。
材料
实例1：沙门氏菌检测物品的制备。
根据美国专利号5,409,838的实例4制备用于薄膜培养平板的基座构件，除了将粘合剂涂布到在其上具有0.5平方英寸网格线的防水聚乙烯涂布的纸张上之外。通过将按重量计的2份2-脱氧-D-核糖(2DR)和98份瓜耳胶（M150瓜耳MEYPROGAT胶，MeyhallChemicalAG）混合来制备粉末组合物。根据处理需要，添加少量（小于0.5%）二氧化硅（CAB-O-SIL二氧化硅，美国马萨诸塞州波士顿的卡博特有限公司(CabotCorp.,BostonMA)）。随后将粉末混合物喷洒到被粘合剂涂布的纸张上，并且倾斜且轻轻敲打以去除过量粉末。
通过将表1中列出的材料添加到容器中的1升去离子水来制备肉汤混合物，并且根据美国专利号6,022,682的实例1中所述的方法混合。
表1
材料 量-克
眎蛋白胨3号 50
猪蛋白胨 14
酵母提取物 6
氯化钠 10
MOPS，酸（3-[N-吗啉代]丙磺酸） 3.2
MOPS，钠盐 5.2
酚红，钠盐 1.0
胆汁盐3号 2.0
*5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-β-D-吡喃半乳糖苷 0.8
瓜耳 13
*来自瑞士的宝欧信特公司(BiosynthAG,Switzerland)
通过将12mg头孢磺啶钠盐（美国伊利诺斯州芝加哥的ResearchProductsInternational公司(ResearchProductsInternational,Chicago,IL)）、4mg萘啶酸钠盐（美国密苏里州圣路易斯的西格玛奥德里奇公司(SigmaAldrich,St.LouisMO)）、4mg链霉素硫酸盐（西格玛公司）、45mg甲氧西林钠盐（西格玛公司）、0.4mg异丙基-B-D-吡喃半乳糖苷（西格玛公司）、和2g尿素(EMD)添加到20ml无菌去离子水来制备选择试剂混合物，并且在玻璃烧瓶中涡旋直至完全溶解。使肉汤冷却至约40℃，并且伴随剧烈混合添加选择混合物。
如美国专利号6,022,682实例VI中所述制备覆盖膜和薄膜培养平板，除了对于覆盖膜将选择性肉汤涂布到2.9密耳浓稠的聚酯膜的电晕处理侧面上之外。平板测量约7.6cm乘以10.2cm，其中从泡沫中切割5cm直径圆圈，以在平板的中心附近提供凹槽。
实例2：检测沙门氏菌微生物的方法。
将沙门氏菌细菌的纯培养物（从肉类混合物中分离的3M培养物指名FSDCCSAL140）接种到缓冲蛋白胨水（德国达姆施塔特的默克公司(Merck,Darmstadt,Germany)）内，并且在37℃下温育过夜。所得的肉汤具有约1×109菌落形成单位/ml(cfu/ml)的浓度。将肉汤在无菌缓冲蛋白胨水中稀释至约1×106cfu/ml的最终浓度。
通过将1.5mLButterfield缓冲液添加到粉末涂层上的凹槽位置中间附近，制备实例1的薄膜培养平板用于划线培养。关闭覆盖膜，并且允许凝胶水合约一小时。当覆盖膜打开时，肉汤涂层已转移至凝胶表面。将10微升的最终浓度套环在凝胶上的肉汤表面上划线培养。关闭覆盖，并且将平板在37℃下温育过夜。就菌落计数分析平板。指示菌落的红点是显而易见的。
实例3：使用指示剂物品检测沙门氏菌微生物。
将美国专利申请号61/428,722的实例1和2中所述的盘置于菌落之上，并且在37℃下温育该盘，所述专利申请以引用的方式全文并入本文。在3、4和5小时后就生长检查该盘。
本文引用的所有专利、专利申请和专利公开的全部公开内容以及可供使用电子版材料均以引用方式并入。在本专利申请的公开内容和以引用方式并入本文的任何文件的公开内容之间存在任何矛盾的情况下，应以本专利申请的公开内容为准。给出上述详细说明及实例仅为清楚地理解本发明。这些说明和实例不应被理解成对本发明进行不必要的限制。本发明不限于所示和所述的具体细节，对本领域的技术人员显而易见的变型形式也将包含在由权利要求书所限定的本发明中。
所有的标题是为了阅读者方便，而不应该被用于限制该标题后面的正文的含义，除非是这么规定的。在不脱离本发明的精神和范围的前提下，可进行各种修改。这些和其他实施例均在所附权利要求书的范围内。

Claims (7)

1.一种用于检测靶微生物的培养装置，所述靶微生物是沙门氏菌微生物，所述培养装置包括：
选择性生长培养基，所述选择性生长培养基包括有利于所述靶微生物生长的营养物质和多种选择试剂，所述多种选择试剂包含头孢磺啶、萘啶酸、链霉素、甲氧西林和胆汁盐；
第一区别性指示剂系统，该第一区别性指示剂系统是所述沙门氏菌微生物的阳性指示剂；
非区别性指示剂系统，该非区别性指示剂系统是不区别不同类型的微生物的一般指示剂系统，并且选自可由任何生长微生物代谢以及引起菌落着色以更易于显现的染料，和
胶凝剂，该胶凝剂可在室温下在水中形成溶液，
其中所述第一区别性指示剂系统包含pH指示剂。
2.根据权利要求1所述的培养装置，其还包括第二区别性指示剂系统，以指示非靶微生物的存在。
3.根据权利要求1所述的培养装置，其中所述选择性生长培养基包含干燥的可再水合的选择性生长培养基，其中所述胶凝剂包含干燥的冷水溶解性胶凝剂。
4.根据权利要求3所述的培养装置，其中所述培养装置包括薄膜培养装置。
5.一种用于非诊断目的的检测沙门氏菌微生物的方法，其包括：
提供液体样品、根据权利要求2所述的培养装置和第三区别性指示剂系统，其中所述第三区别性指示剂系统是所述沙门氏菌微生物的阳性指示剂；
在所述培养装置中使预定体积的样品与如下物质接触以形成经接种的培养装置：所述选择性生长培养基；所述第一区别性指示剂系统；所述非区别性指示剂系统；所述第二区别性指示剂系统；以及所述胶凝剂；
将所述经接种的培养装置温育第一时间段；
观察所述生长培养基，以检测所述样品中所述靶微生物的可能存在的指示；
当存在所述靶微生物的可能存在的指示时，使所述第三区别性指示剂系统与所述生长培养基接触；和
就所述靶微生物的存在的指示观察所述生长培养基中的所述第三区别性指示剂系统。
6.一种用于非诊断目的的检测沙门氏菌微生物的方法，其包括：
提供样品、根据权利要求2所述的培养装置和第三区别性指示剂系统，其中所述第三区别性指示剂系统是所述沙门氏菌微生物的阳性指示剂；
在所述培养装置中使预定体积的无沙门氏菌的含水液体与如下物质接触以形成水合的生长培养基：所述选择性生长培养基；所述第一区别性指示剂系统；所述非区别性指示剂系统；所述第二区别性指示剂系统；以及所述胶凝剂；
用所述样品接种所述水合的生长培养基，以形成经接种的培养装置；
将所述经接种的培养装置温育第一时间段；
观察所述水合的生长培养基，以检测所述样品中所述靶微生物的可能存在的指示；
当存在所述靶微生物的可能存在的指示时，使所述第三区别性指示剂系统与所述水合的生长培养基接触；和
就所述靶微生物的存在的指示观察所述水合的生长培养基中的所述第三区别性指示剂系统。
7.根据权利要求5或权利要求6所述的方法，其中检测所述靶微生物的可能存在的指示还包括观察这样的菌落，所述菌落与所述非区别性指示剂系统和所述第一区别性指示剂系统反应而不与所述第二区别性指示剂系统反应。
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