CN108660186B - 一种用于检测沙门氏菌的显色培养基及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于检测沙门氏菌的显色培养基及其制备方法，其包括，基础培养基、添加剂，所述添加剂包括酯酶显色底物，所述酯酶显色底物包括6‑氯‑3‑吲哚‑辛酯，所述6‑氯‑3‑吲哚‑辛酯的含量为0.2～0.4g/L。本发明以6‑氯‑3‑吲哚‑辛酯作为显色底物的沙门显色培养基可使沙门氏菌呈现橙红色。相对于其他吲哚酚显色底物，6‑氯‑3‑吲哚‑辛酯合成工艺简单、易获得、得率高、且具有热稳定性，同时，本发明各组分之间相互协同作用，其中，助溶剂的选择及配比使得本发明既不会出现由于乳化剂过多使平板表面出现油状现象，又可使底物完全溶解，且助溶剂的协同作用使得本发明组合酶显色底物的显色效果达到最佳。

Description

一种用于检测沙门氏菌的显色培养基及其制备方法
技术领域
本发明属于微生物检测技术领域，具体涉及一种用于检测沙门氏菌的显色培养基及其制备方法。
背景技术
沙门氏菌(Salmonella)是一种常见的食源性致病菌，肠杆菌科，革兰氏阴性菌。感染沙门氏菌的人或带菌者的粪便污染食品，可使人发生食物中毒。据统计在世界各国的种类细菌性食物中毒中，沙门氏菌引起的食物中毒常列榜首。我国内陆地区也以沙门氏菌为首位。
目前国内沙门氏菌检测中最常用的依然是传统国标方法。国标方法常用的鉴定培养基中以显色培养基选择性好等优点使用效果最佳。沙门氏菌显色培养基是利用沙门氏菌自身代谢产生的酶与相应显色底物反应显色的新型培养基。这些相应的显色底物是由产色基因和微生物部分可代谢物质组成，在特异性酶作用下，游离出产色基因显示一定颜色，直接观察菌落颜色即可对菌种作出鉴定。
目前绝大多数商业化的显色培养基都利用到吲哚酚显色底物，国外内某些沙门显色培养基C8酯酶(辛酯酶)的底物为5-溴-6-氯-3-吲哚-辛酯，其酯键被沙门氏菌的酯酶水解生成有紫色的5-溴-6-氯-吲哚-3-醇。典型颜色为紫色，其中国外品牌中以科玛嘉最有代表性，通过进口方式获得的底物增加了显色培养基的成本，国内大部分的此类底物的合成成本较高，不利于检测行业显色培养基的普及。
发明内容
本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。
鉴于上述的技术缺陷，提出了本发明。
因此，作为本发明其中一个方面，本发明克服现有技术中存在的不足，提供一种用于检测沙门氏菌的显色培养基。
为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种用于检测沙门氏菌的显色培养基，其包括，基础培养基、添加剂，所述添加剂包括酯酶显色底物，所述酯酶显色底物包括6-氯-3-吲哚-辛酯，所述6-氯-3-吲哚-辛酯的含量为0.2～0.4g/L。
作为本发明所述用于检测沙门氏菌的显色培养基的一种优选方案：所述基础培养基包括蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、细菌琼脂粉，其中，所述蛋白胨含量为8～15g/L、所述牛肉膏含量为1～5g/L、所述氯化钠含量为5～6g/L、所述细菌琼脂粉含量为15～18g/L。
作为本发明所述用于检测沙门氏菌的显色培养基的一种优选方案：所述添加剂还包括抑制剂、半乳糖苷酶显色底物、酶诱导剂、助溶剂，其中，所述抑制剂包括脱氧胆酸钠、新生霉素、头孢磺啶钠盐水合物，所述脱氧胆酸钠含量为0.4～0.6g/L、所述新生霉素含量为10～15mg/L、所述头孢磺啶钠盐水合物含量为5～10mg/L。
作为本发明所述用于检测沙门氏菌的显色培养基的一种优选方案：所述半乳糖苷酶显色底物包括5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷，所述5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷含量为0.04～0.1g/L。
作为本发明所述用于检测沙门氏菌的显色培养基的一种优选方案：所述酶诱导剂包括异丙基-β-D-硫代半乳糖苷，所述异丙基-β-D-硫代半乳糖苷的含量为0.03～0.06g/L。
作为本发明所述用于检测沙门氏菌的显色培养基的一种优选方案：所述助溶剂包括二甲基亚砜、吐温20，所述二甲基亚砜含量为1～3ml/L、所述吐温20含量为2～4ml/L。
作为本发明所述用于检测沙门氏菌的显色培养基的一种优选方案：所述助溶剂中，二甲基亚砜体积含量为40％、吐温20体积含量为60％。
作为本发明所述用于检测沙门氏菌的显色培养基的一种优选方案：所述培养基包括蛋白胨10g/L、牛肉膏3g/L、氯化钠5g/L、细菌琼脂粉15g/L、脱氧胆酸钠0.55g/L、新生霉素15mg/L、头孢磺啶钠盐水合物6mg/L、6-氯-3-吲哚-辛酯0.4g/L、5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷0.08g/L、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷0.05g/L、二甲基亚砜2ml/L、吐温20为3ml/L。
作为本发明的另一个方面，本发明克服现有技术中存在的不足，提供权利要求3～8任一所述的用于检测沙门氏菌的显色培养基的制备方法。
为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：权利要求3～8任一所述的用于检测沙门氏菌的显色培养基的制备方法，其包括，配制母液1：称取基础培养基并与脱氧胆酸钠混匀，作为母液1；配制母液2：将酯酶显色底物溶解于助溶剂中，并加入母液1中，煮沸，作为母液2；配制显色培养基：将新生霉素、头孢磺啶钠盐水合物溶于水中，加入母液2中，并将半乳糖甘酶底物和异丙基-β-D-硫代半乳糖苷加入母液2中。
作为本发明所述用于检测沙门氏菌的显色培养基的制备方法的一种优选方案：所述基础培养基并与脱氧胆酸钠混匀，速度为2800rpm，时间为1min，所述配制母液2，其中，所述煮沸后，将所述母液2冷却至45±1℃，将所述抑制剂加入母液2中。
本发明的有益效果：本发明在沙门显色培养基中添加6-氯-3-吲哚-辛酯作为显色底物，为一种含有新型底物的显色培养基。相对于其他吲哚酚显色底物，6-氯-3-吲哚-辛酯合成工艺简单、易获得、得率高、且具有热稳定性，同时，助溶剂的选择及配比使得本发明既不会出现由于乳化剂过多使平板表面出现油状现象，又可使底物完全溶解，且助溶剂的协同作用使得本发明组合酶显色底物的显色效果达到最佳。本发明以6-氯-3-吲哚-辛酯作为显色底物的沙门显色培养基可使沙门氏菌呈现橙红色。而含β-半乳糖苷酶肠杆菌类呈现蓝绿色。橙红色和蓝绿色颜色组合比传统紫色和蓝绿色组合更易区分。本发明的显色培养基用于检测沙门氏菌具有成本低、已获得、灵敏度高，特异性强，辨识度高、检测周期短、易于产业化生产等优点。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。
G+菌抑制剂的选择：
本发明的显色培养基基础以普通营养琼脂为基础，通过添加抑制剂，以完全排除粪肠球菌等革兰氏阳性菌的干扰，为了方便统计分析，采用分数对应菌种在培养基的生长情况和其他影响情况：
G+菌抑制剂最适添加量的选择：
在《4789.28-2013培养基和试剂的质量要求》6.1.2.2中为定量评估培养基的选择性，应按照规定以适当方法将适量测试菌株的工作培养物接种至选择性培养基和参考培养基中。本专利以普通营养琼脂为基础，通过添加不同剂量的添加剂，制备平板后，按照《4789.28-2013培养基和试剂的质量要求》6.1.2.2中半定量划线方法测定抑制剂对革兰氏阳性菌的选择性。测试菌为：金黄色葡萄球菌ATCC6538和粪肠球菌ATCC29212，观察其受抑制情况。
变形杆菌最适抑制剂的选择：
变形杆菌由于具有鞭毛，在平板上易蔓延生长，且对沙门的检测亦有干扰，故寻找出可抑制其生长的添加剂。将不同的抑制剂加入基础培养基中，按照《4789.28-2013培养基和试剂的质量要求》6.1.2.2中半定量划线方法测定抑制剂对变形杆菌的选择性。培养后按以下方法对培养基计算生长指数G。每条有比较稠密菌落生长，G＝1；仅一半的线有稠密菌落生长，G＝0.5；划线上没有菌落生长、生长量少于划线的一半或菌落生长微弱，G＝0；记录每个平板的得分总和便得到G。
变形杆菌抑制剂最佳浓度的选择：
以普通营养琼脂为基础，通过添加不同剂量的添加剂，制备平板后，按照《4789.28-2013培养基和试剂的质量要求》6.1.2.2中半定量划线方法测定抑制剂对革兰氏阳性菌的选择性。测试菌为：普通变形杆菌CMCC49027和奇异变形杆菌CMCC49005，观察其受抑制情况。
铜绿假单胞菌最适抑制剂的选择：
由于铜绿假单胞菌亦具有酯酶，其对沙门氏菌的选择具有干扰性，故沙门氏显色培养基中需加入可抑制此类菌的抑制剂。将不同的抑制剂加入基础培养基中，按照《4789.28-2013培养基和试剂的质量要求》6.1.2.2中半定量划线方法测定抑制剂对变形杆菌的选择性。
铜绿假单胞菌抑制剂最佳浓度的选择：
以普通营养琼脂为基础，通过添加不同剂量的添加剂，制备平板后，按照《4789.28-2013培养基和试剂的质量要求》6.1.2.2中半定量划线方法测定抑制剂对革兰氏阳性菌的选择性。测试菌为：铜绿假单胞菌ATCC9027，观察其受抑制情况。
结果分析：
G+菌抑制剂的选择
抑制剂对不同指示菌的抑制能力和其他性能结果如下表：
*注：各抑制剂的添加量参考部分商业培养基成分表
十二烷基磺酸钠、三号胆盐和脱氧胆酸钠均可抑制革兰氏阳性菌，由于十二烷基磺酸钠为表面活性剂，培养基中添加的底物为脂溶性，故易在培养基内形成油滴，影响酯酶底物的溶解，且考虑脱氧胆酸钠是胆盐中非常重要的一种,大量研究表明脱氧胆酸钠能够使细胞膜稳定性下降,流动性增强,膜结构的有序性降低，且可抑制菌丝体生长，选择脱盐胆酸钠作为革兰氏阳性菌抑制剂。
不同抑制剂对变形杆菌抑制能力结果：
*注：各抑制剂的添加量参考部分商业培养基成分表
根据上述结果，柠檬酸铵、硫代硫酸钠和结晶紫对变形杆菌的蔓延没有抑制作用，新生霉素对普通变形杆菌CMCC49027和奇异变形杆菌CMCC49005的蔓延有抑制作用。
不同浓度新生霉素对各种目标菌生长的影响：
由上表可见，随着新生霉素含量的增加，当超过20mg/L时，四种目标菌被抑制强度越来越大，生长能力减弱，不过铜绿假单胞菌对新生霉素灵敏度比较小。只有当新生霉素浓度为15mg/L时，既不影响鼠伤寒沙门氏菌和大肠埃希氏菌的生长，又能抑制干扰菌株奇异变形杆菌的蔓延。
不同抑制剂对铜绿假单胞菌生长的抑制能力：
*注：各抑制剂的添加量参考部分商业培养基成分表
有表中结果可以看出，对铜绿假单胞菌无抑制能力，头孢磺啶钠盐水合物有部分抑制能力。需进一步对头孢磺啶钠盐水合物的浓度进行研究。
铜绿假单胞菌抑制剂最佳抑菌含量的确定：
不同含量头孢磺啶钠盐水合物对指示剂的影响：
根据上表实验结果，当头孢磺啶钠盐水合物大于10mg/L时，铜绿假单胞菌受到抑制，可初步确定最适头孢磺啶钠盐水合物浓度范围在5～10mg/L5～10mg/L头孢磺啶钠盐水合物对指示剂的影响：
从上表可知以及成本角度考虑，确定头孢磺啶钠盐水合物浓度范围在6mg/L。
实施例1：
一种用于检测沙门氏菌的显色培养基，每1000ml培养基含有培养基成分表如下：
称取基础培养基33g，脱氧胆酸钠0.55g加入1000ml水中混匀，作为母液1。辛酯酶底物按照比例与助溶剂中完全溶解，加入母液1中，摇匀后煮沸溶解，作为母液2。新生霉素和头孢磺啶钠盐水合物盐水合物于无菌水中充分溶解，过滤除菌，加入上述煮沸冷却至45±1℃母液2中；半乳糖甘酶底物和异丙基-β-D-硫代半乳糖苷分别于溶剂中溶解，过滤除菌后，加入上述煮沸冷却至45±1℃母液2。摇匀后倾入无菌平皿，制备好的平板于2-8℃避光保存。
上述制备过程中，2ml二甲基亚砜和3ml吐温20以2800rpm震荡1min混匀后，将辛酯酶底物加入混合溶剂，2800rpm震荡1min混匀。完全溶解后加入母液1，摇匀后煮沸。此辛酯酶底物具有热稳定性，加入母液1后需加热煮沸，有助于6-氯-3-吲哚-辛酯的溶解。若直接将此底物加入到冷却至45±1℃的基础培养基中而不经煮沸，已溶解的底物易再次析出。根据实施例1，为了方便操作和保持抑制剂效用，新生霉素和头孢磺啶钠盐水合物盐水合物按照合适比例溶于无菌水中配成溶液，过滤除菌，加入煮沸冷却至45±1℃母液2中。
本发明中，为了方便操作和保持抑制剂效用，新生霉素和头孢磺啶钠盐水合物盐水合物按照合适比例溶于无菌水中配成溶液，过滤除菌，加入煮沸冷却至45±1℃母液2中
以不影响沙门氏菌和抑制革兰氏阳性菌生长为目标筛选获，进一步对变形杆菌、沙雷氏菌和铜绿假单胞菌进行抑菌实验，本发明在十二烷基磺酸钠、脱氧胆酸钠、三号胆盐、柠檬酸钠、硫代硫酸钠、结晶紫、新生霉素、哌拉西林钠、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星、头孢磺啶钠盐水合物等抑制剂中，最终确定3种选择性添加剂，分别是：脱氧胆酸钠、新生霉素和头孢磺啶钠盐水合物盐水合物。脱氧胆酸钠可抑制革兰氏阳性菌和霉菌菌丝的生长，且可增加微生物的膜通透性；新生霉素在不影响沙门氏菌和大肠杆菌的生长同时可抑制变形杆菌的蔓延生长；头孢磺啶钠盐水合物盐水合物可抑制假阳性菌铜绿假单胞菌的生长。实验证明，每1000ml培养基含有脱氧胆酸钠0.55g时，脱氧胆酸钠可抑制革兰氏阳性菌和霉菌菌丝的生长，且可增加微生物的膜通透性，有利于代谢产物运输到膜外，每1000ml培养基含有新生霉素15mg时，既不影响沙门氏菌和大肠杆菌的生长又且可抑制变形杆菌的蔓延生长，每1000ml培养基含有头孢磺啶钠盐水合物6mg时，既不影响沙门氏菌和大肠杆菌的生长又且可抑制假阳性菌铜绿假单胞菌的生长，大肠菌群在-β-半乳糖苷酶的作用下水解显色底物，释放出显色基团，使菌落呈现出特有的蓝绿色。
6-cl-3-吲哚-辛酯为脂溶性，难以溶解，进而影响显色效果，故寻求适合其溶解并能更好呈色的助溶剂和溶解方式非常重要。采用二甲基亚砜(DMSO)和吐温20(Twin-20)混合溶解的方式，最适配比实验结果如下表：
当40％二甲基亚砜和60％吐温混溶后溶解辛酯酶底物，既不会出现由于乳化剂过多使平板表面出现油状现象，又可使底物完全溶解，且此种组合酶显色底物的显色效果最佳。
实施例2：
一种用于检测沙门氏菌的显色培养基，每1000ml培养基含有基础培养基成分表如下：
称取基础培养基43g，脱氧胆酸钠0.6g加入1000ml水中混匀，煮沸溶解，作为母液1。辛酯酶底物按照比例与助溶剂中完全溶解，加入母液1中，摇匀后煮沸溶解，作为母液2。新生霉素和头孢磺啶钠盐水合物盐水合物于无菌水中充分溶解，过滤除菌，加入上述煮沸冷却至45±1℃母液2中；半乳糖甘酶底物和异丙基-β-D-硫代半乳糖苷分别于溶剂中溶解，过滤除菌后，加入上述煮沸冷却至45±1℃母液2。摇匀后倾入无菌平皿，制备好的平板于2-8℃避光保存。
辛酯酶底物于1ml二甲基亚砜和4ml吐温20混合溶剂中完全溶解后加入却至45±1℃母液1。
实施例3：
一种用于检测沙门氏菌的显色培养基，每1000ml培养基含有基础培养基成分表：
称取基础培养基30g，脱氧胆酸钠0.4g加入1000ml水中混匀，作为母液1。辛酯酶底物按照比例与助溶剂中完全溶解，加入母液1中，摇匀后煮沸溶解，作为母液2。新生霉素和头孢磺啶钠盐水合物盐水合物于无菌水中充分溶解，过滤除菌，加入上述煮沸冷却至45±1℃母液2中；半乳糖甘酶底物和异丙基-β-D-硫代半乳糖苷分别于溶剂中溶解，过滤除菌后，加入上述煮沸冷却至45±1℃母液2。摇匀后倾入无菌平皿，制备好的平板于2-8℃避光保存。
辛酯酶底物于4ml二甲基亚砜和1ml吐温20混合溶剂中完全溶解后加入母液1，摇匀后煮沸。
对比例1：
特异性实验：
根据实验证明，实施例1为最佳实施例，配制的平板为淡黄色半透明外观，易于观察。将鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028、猪霍乱沙门氏菌ATCC 13312、肠炎沙门氏菌ATCC13076、乙型副伤寒沙门氏菌CM50094、伤寒沙门氏菌CM50071、甲型副沙门氏菌CM50093、鸭沙门氏菌ATCC9150、大肠埃希氏菌ATCC25922、阪崎肠杆菌ATCC25944、弗氏柠檬酸杆菌ATCC43864、铜绿假单胞菌ATCC9027、福氏志贺氏菌CMCC51572、宋氏志贺氏菌、产气肠杆菌ATCC13048、阴沟肠杆菌CMCC45301、粘质沙雷伯菌CMCC41002、普通变形杆菌CMCC49027、奇异变形杆菌CMCC49005、金黄色葡萄球菌ATCC25923和粪肠球菌ATCC29212等20种标准菌株和5种收集到蒙得维的亚沙门氏菌、阿贡纳沙门氏菌、纽波特沙门氏菌、沙门氏菌1#和沙门氏菌2#的沙门氏菌阳性菌株，营养琼脂活化后，分别划线接种到实施例1制成的沙门显色培养基上(简称S1)、科玛嘉显色培养基上，37℃培养24h，检测结果见表1。
表1S1显色培养基特异性检测结果
结果见表1，特异性方面，七株沙门氏菌标准菌株和五株阳性菌株在S1上均生长良好，阳性菌落为橙红色，颜色鲜亮易区分，在科玛嘉上目标菌落为浅紫色到紫色。两种品牌均能显示阳性菌落特有的色泽，大肠杆菌和其他含有半乳糖甘酶的菌种呈现蓝绿色、金黄色葡萄球菌和粪肠球菌等菌落在这两种品牌培养基上均受抑制，其它菌株为无色。对沙门氏菌检测有干扰的菌株主要铜绿假单胞菌等经特异性抑制剂受到抑制，粘质沙雷氏菌呈现蓝色菌落，周围有橙红色晕圈且有结晶出现，易区分，部分受抑制。
将有代表性及干扰性强的鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028、奇异变形杆菌CMCC49005、大肠埃希氏菌ATCC25922、，金黄色葡萄菌ATCC6538制成混合菌悬液，取一环混合增菌液划线接种于S1和科玛嘉显色培养基平板上，结果见表2。
表2混合菌悬液在各品牌上的分离结果
由表2可知，S1和科玛嘉对于其它干扰杂菌都易分离，平板上出现三种颜色的菌落，无色、特征颜色和蓝绿色；其中在S1培养基上橙红色和蓝绿色颜色差异更大，更易区分。
对比例2：
生长率：
将鼠沙门氏菌ATCC14028和肠炎沙门氏菌ATCC13076制成适宜浓度的菌悬液(浓度为108-109CFU/ml)，取稀释度为10-5和10-6的菌悬液0.1ml均匀涂布于S1、科玛嘉以及胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)上，36℃培养24h。取接种水平为20CFU～200CFU的平板进行计数，计算各自的生长率。
表3显色培养基对沙门氏菌灵敏度和菌落形态的比较
由表3可知，S1和科玛嘉灵敏度都比较高，鼠伤寒沙门氏菌在S1的生长率高于科玛嘉，肠炎沙门氏菌在S1的生长率和科玛嘉相当，且远高于GB4789.28-2013中PR≥0.5的规定。菌落大小方面，鼠伤寒沙门氏菌在S1上和科玛嘉显色平板相差不大，肠炎沙门氏菌的菌落直径在S1平板上大于在科玛嘉平板上。
对比例3：
沙门氏菌检出限的检测：
1.菌种：将鼠沙门氏菌ATCC14028接种营养肉汤中制成标准菌悬液，制备含有目标菌10CFU-100CFU和1-10CFU的菌悬液，备用。同时用TSA计数用。
2.前增菌和后增菌：称取乳粉样品25g，加入225mlBPW增菌液中，混合均匀。将制备好的菌悬液接种于此样品悬液中，36℃培养8h-18h。轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1mL，
3.接种培养：各取一环培养后的增菌液，四区划线接种于实施例1(简称S1)显色培养基平板、XLD、HE和科玛嘉显色培养基上，36℃培养18～24h，根据在划线区域生长情况记录菌落颜色和形态，见表4。
表4检出限的检测
由表4可知，沙门氏菌接种量越多，划线生长区域越大，接种量在1～100CFU时，4区全部有目标菌生长，但由于细菌对营养成分的竞争关系，XLD培养基上在第三、四区才能出现可区分的典型菌落。在S1平板上，菌落只要为橙红色即为目标菌，辨识度大，易识别和检出；接种量为1-10CFU时，XLD和S1都能3区生长，XLD在第三区出现典型菌落，S1在全部区间都可出现橙红色菌落。由此可见，S1在低污染区亦能检出沙门氏菌，可达到1-10CFU的检出限，与科玛嘉检出限相当。
对比例4：
实际样品中沙门氏菌的检测：
1.采集样品
从超市以及原料供应商处采集各种食品共110份
2.增菌培养
称取样品25g，加入225mlBPW增菌液中，混合均匀，36℃培养18h。
3.接种培养
取一环培养后的增菌液，划线接种于实施例1制成的沙门显色培养基平板上，37℃培养18-24h，观察菌落颜色和形态。轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1mL，转种于10mLTTB内，于42℃±1℃培养18h～24h；同时，另取1mL，转种于10mL SC内，于36℃±1℃培养18h～24h。
4.结果观察和分析
110份样品中有13份样品检出沙门氏菌，同时使用GB4789.4-2010和API20E生化鉴定系统检测比对样品，与显色培养基结果一致，两种方法检测结果均与预期结果一致。
综上，本发明在沙门显色培养基中添加6-氯-3-吲哚-辛酯作为显色底物，为一种含有新型底物的显色培养基。相对于其他吲哚酚显色底物，6-氯-3-吲哚-辛酯合成工艺简单、易获得、得率高、且具有热稳定性，同时，本发明各组分之间相互协同作用，其中，助溶剂的选择及配比使得本发明既不会出现由于乳化剂过多使平板表面出现油状现象，又可使底物完全溶解，且助溶剂的协同作用使得本发明组合酶显色底物的显色效果达到最佳。
本发明以6-氯-3-吲哚-辛酯作为显色底物的沙门显色培养基可使沙门氏菌呈现橙红色。而含β-半乳糖苷酶肠杆菌类呈现蓝绿色。橙红色和蓝绿色颜色组合比传统紫色和蓝绿色组合更易区分。亦具有较高的特异性和灵敏度，且合成路线简单、成本更低，为沙门氏菌检测提供更多更佳的选择。同时，添加多种抑制剂可避免假阳性菌-铜绿假单胞菌、沙雷氏菌、念珠菌和变形杆菌等干扰菌，5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷，可区分肠杆菌属如大肠杆菌和含有β-半乳糖苷酶的大肠菌群。
脱氧胆酸钠可抑制革兰氏阳性菌和霉菌菌丝的生长，且可增加微生物的膜通透性，有利于代谢产物运输到膜外。
本发明的显色培养基用于检测沙门氏菌具有成本低、已获得、灵敏度高，特异性强，辨识度高、检测周期短、易于产业化生产等优点。
应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (4)

1.一种用于检测沙门氏菌的显色培养基，其特征在于：由基础培养基、添加剂组成，所述添加剂包括酯酶显色底物，所述酯酶显色底物为6-氯-3-吲哚-辛酯，所述6-氯-3-吲哚-辛酯的含量为0.2～0.4g/L；
所述添加剂还包括抑制剂、半乳糖苷酶显色底物、酶诱导剂、助溶剂，其中，所述抑制剂由脱氧胆酸钠、新生霉素、头孢磺啶钠盐水合物组成，所述脱氧胆酸钠含量为0.4～0.6g/L、所述新生霉素含量为10～15mg/L、所述头孢磺啶钠盐水合物含量为5～10mg/L；
所述助溶剂由二甲基亚砜、吐温20组成，所述二甲基亚砜含量为1～3ml/L、所述吐温20含量为2～4ml/L；
所述基础培养基由蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、细菌琼脂粉组成，其中，所述蛋白胨含量为8～15g/L、所述牛肉膏含量为1～5g/L、所述氯化钠含量为5～6g/L、所述细菌琼脂粉含量为15～18g/L；
所述半乳糖苷酶显色底物为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷，所述5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷含量为0.04～0.1g/L；
所述酶诱导剂为异丙基-β-D-硫代半乳糖苷，所述异丙基-β-D-硫代半乳糖苷的含量为0.03～0.06g/L；
所述助溶剂中，二甲基亚砜体积含量为40％、吐温-20体积含量为60％。
2.如权利要求1所述的用于检测沙门氏菌的显色培养基，其特征在于：所述培养基包括蛋白胨10g/L、牛肉膏3g/L、氯化钠5g/L、细菌琼脂粉15g/L、脱氧胆酸钠0.55g/L、新生霉素15mg/L、头孢磺啶钠盐水合物6mg/L、6-氯-3-吲哚-辛酯0.4g/L、5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷0.08g/L、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷0.05g/L、二甲基亚砜2ml/L、吐温20为3ml/L。
3.权利要求1或2所述的用于检测沙门氏菌的显色培养基的制备方法，其特征在于：包括，
配制母液1：称取基础培养基并与脱氧胆酸钠混匀，作为母液1；
配制母液2：将酯酶显色底物溶解于助溶剂中，并加入母液1中，煮沸，作为母液2；
配制显色培养基：将新生霉素、头孢磺啶钠盐水合物溶于水中，加入母液2中，并将半乳糖甘酶底物和异丙基-β-D-硫代半乳糖苷加入母液2中。
4.如权利要求3所述的用于检测沙门氏菌的显色培养基的制备方法，其特征在于：所述基础培养基并与脱氧胆酸钠混匀，速度为2800rpm，时间为1min，所述配制母液2，其中，所述煮沸后，将所述母液2冷却至45±1℃，将所述抑制剂加入母液2中。
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