CN105861623B - 一种用于检测阪崎肠杆菌的显色培养基 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于检测阪崎肠杆菌的显色培养基，其包括，蛋白胨10～25g/L、牛肉浸出粉2～10g/L、NaCl 3～10g/L、细菌琼脂粉15～20g/L、第一抑制剂0.2～1.0g/L、第二抑制剂0.1～1.0g/L、葡萄糖苷酶显色底物0.1g/L～0.3g/L、助溶剂1ml～10ml。本发明的显色培养基用于检测阪崎肠杆菌具有灵敏度高，特异性强，辨识度高、检测周期短、易于产业化生产等优点。

Description

一种用于检测阪崎肠杆菌的显色培养基
技术领域
本发明涉及一种微生物检测用培养基，尤其涉及一种用于检测阪崎肠杆菌的显色培养基。
背景技术
阪崎肠杆菌(E.sakazakii)，为革兰氏阴性无芽孢杆菌，是人和动物肠道正常菌丛中的一种，为条件致病菌。在1980年之前一直被称为黄色阴沟肠杆菌。直到Farmer提出该菌是一个新种，属肠杆菌科肠杆菌属。2008年Iversen建议将阪崎肠杆菌重新分类命名，成为肠杆菌科1个新属。阪崎肠杆菌能引起严重的新生儿脑膜炎、小肠结肠炎和茵血症，死亡率高达50％以上。1961年，Franklin等首次报道了2例由阪崎肠杆菌引起的脑膜炎病例。以后相继在世界范围内报道了一系列新生儿阪崎肠杆菌感染事件。截止2011年，微生物学家尚不清楚阪崎肠杆菌的污染来源，但许多病例报告表明婴儿配方粉是发现的主要感染渠道。随着这一重要条件致病菌频在婴儿配方奶粉中检出，2005年我国出台《奶粉中阪崎肠杆菌检测方法》的行业标准，填补了国内无阪崎肠杆菌检测标准和方法的空白。随后，2008年出台了关于阪崎肠杆菌检验的国家食品安全标准。虽然目前采用分子生物学方法检测致病菌发展的如火如荼，但是传统检测方法因其成本低、使用面广，易实现等有点短期内还是难以被完全取代。
阪崎肠杆菌显色培养基是利用阪崎肠杆菌自身代谢产生的酶与相应显色底物反应显色的原理来检测阪崎肠杆菌的新型培养基。这些相应的显色底物是由产色基因和微生物部分可代谢物质组成，在特异性酶作用下，游离出产色基因显示一定颜色，直接观察菌落颜色即可对菌种作出鉴定。经研究发现a-葡萄糖苷酶是用来快速区分阪崎肠杆菌和其它肠杆菌的可靠方法。
目前，2010版国家食品安全标准中检测阪崎肠杆菌依然沿用的显色培养基和生化鉴定的方法。在DFI琼脂(阪崎肠杆菌显色培养基)上，阪崎肠杆菌产生的a-葡萄糖苷酶和培养基中显色底物反应后形成无色带绿色中心的菌落，但是由于普通变形杆菌亦能在DFI琼脂上形成带绿色中心的菌落，造成干扰；DFI琼脂平板外观为棕黄色，颜色差异较小，不易观察。国内某品牌的阪崎肠杆菌显色培养基低温放置后会出现点结晶，疑似染菌现象，影响外观。法国科玛嘉阪崎肠杆菌显色培养基亦由于奇异变形杆菌可产生蔓延的绿色菌落而影响其特异性。
发明内容
本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。
鉴于上述和/或现有用于检测阪崎肠杆菌的显色培养基中存在的问题，提出了本发明。
因此，本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种用于检测阪崎肠杆菌的显色培养基，其能够有效避免培养基平板表面外观不均一透明以及奇异变形杆菌出现弱阳性的现象。
为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种用于检测阪崎肠杆菌的显色培养基，其包括，蛋白胨10～25g/L、牛肉浸出粉2～10g/L、NaCl3～10g/L、细菌琼脂粉15～20g/L、第一抑制剂0.2～1.0g/L、第二抑制剂0.1～1.0g/L、葡萄糖苷酶显色底物0.1g/L～0.3g/L、助溶剂1ml～10ml。
作为本发明所述用于检测阪崎肠杆菌的显色培养基的一种优选方案，其中：所述蛋白胨为细菌学蛋白胨、胰蛋白胨、酪蛋白胨及示蛋白胨的一种或几种。
作为本发明所述用于检测阪崎肠杆菌的显色培养基的一种优选方案，其中：所述蛋白胨为胰蛋白胨，且每1000ml培养基含有胰蛋白胨10g。
作为本发明所述用于检测阪崎肠杆菌的显色培养基的一种优选方案，其中：所述第一抑制剂为十二烷基磺酸钠、脱氧胆酸钠或三号胆盐中的一种或几种。
作为本发明所述用于检测阪崎肠杆菌的显色培养基的一种优选方案，其中：所述第一抑制剂为脱氧胆酸钠，且每1000ml培养基含有脱氧胆酸钠0.4g。在此，实验证明：十二烷基磺酸钠在灭菌冷却后的培养基中有结晶析出，影响外观。
作为本发明所述用于检测阪崎肠杆菌的显色培养基的一种优选方案，其中：所述第二抑制剂为柠檬酸钠、硫代硫酸钠、结晶紫或新生霉素中的一种或几种。
作为本发明所述用于检测阪崎肠杆菌的显色培养基的一种优选方案，其中：所述第二抑制剂为硫代硫酸钠，且每1000ml培养基含有硫代硫酸钠0.4g。
作为本发明所述用于检测阪崎肠杆菌的显色培养基的一种优选方案，其中：所述葡萄糖苷酶显色底物为5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-葡萄糖苷，且每1000ml培养基含有5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-葡萄糖苷0.13g。阪崎肠杆菌在α-D-葡萄糖苷酶的作用下水解显色底物，释放出显色基团，是菌落呈现出特有的颜色
作为本发明所述用于检测阪崎肠杆菌的显色培养基的一种优选方案，其中：所述助溶剂为水、乙醇、甲醇和N，N-二甲基甲酰胺的一种或几种。
作为本发明所述用于检测阪崎肠杆菌的显色培养基的一种优选方案，其中：所述助溶剂为N，N-二甲基甲酰胺，且每1000ml培养基含有N，N-二甲基甲酰胺3ml。
本发明的有益效果：本发明的显色培养基用于检测阪崎肠杆菌具有灵敏度高，特异性强，辨识度高、检测周期短、易于产业化生产等优点。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。其中：
图1为蛋白胨种类以及含量对阪崎肠杆菌的影响示意图；
图2为不同营养成分对阪崎肠杆菌的影响示意图；
图3为胰蛋白胨浓度对阪崎肠杆菌显色培养基显色效果的影响示意图。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。
实施例1
一种用于检测阪崎肠杆菌的显色培养基，每1000ml培养基含有胰蛋白胨10g、牛肉浸出粉5g、NaCl 5g、细菌琼脂粉16g、脱氧胆酸钠0.4g、硫代硫酸钠0.4g、5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-葡萄糖苷0.13g、N，N-二甲基甲酰胺3ml。
根据实施例1，共称取本品7.35g加入200ml水中完全溶解，煮沸冷却至50℃左右，倾入无菌平皿，制备好的平板于2-8℃避光保存。
根据实施例1，共称取本品7.35g加入200ml水中完全溶解，121℃高压灭菌15min，冷却至50℃左右，倾入无菌平皿，制备好的平板于2-8℃避光保存。
将阪崎肠杆菌标准菌株ATCC29544和ATCC51392分别划线接种于两种灭菌方式制得的阪崎肠杆菌显色平板上，结果表明差异不显著，培养基各组分热稳定性较好，故选用121℃高压灭菌15min以保证充分灭菌，延长培养基固体平板使用保质期。
特异性实验：
将阪崎肠杆菌ATCC29544、阪崎肠杆菌ATCC51392、大肠埃希氏菌ATCC25922、鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028、弗氏柠檬酸杆菌ATCC43864、铜绿假单胞菌ATCC9027、福氏志贺氏菌CMCC51572、产气肠杆菌ATCC13048、阴沟肠杆菌CMCC45301、粘质沙雷伯菌CMCC41002、普通变形杆菌CMCC49027、奇异变形杆菌CMCC49005、金黄色葡萄球菌ATCC25923和粪肠球菌ATCC29212等14种标准菌株和9种收集到的阪崎肠杆菌阳性菌株制成适当浓度的菌悬液(浓度为108-109CFU/ml),分别划线接种到实施例1制成的显色培养基上(简称SWM)、DFI琼脂(阪崎显色培养基)、科玛嘉阪崎显色培养基以及国内某品牌阪崎显色培养基上，37℃培养24h，检测结果见表1。
表1几种显色培养基特异性检测结果
Figure BDA0000974091620000041
Figure BDA0000974091620000051
结果见表1，两株阪崎肠杆菌标准菌株和9种阳性菌株在SWM上均生长良好，阳性菌落为蓝绿色，颜色鲜亮易区分，易辨性优于DFI和国内某品牌。特异性方面，几种品牌均能显示阳性菌落特有的色泽，SWM与其它品牌相差不大，金黄色葡萄球菌和粪肠球菌等菌落在这几种品牌培养基上均受抑制，其它菌株为无色或淡黄色菌落。对阪崎肠杆菌检测有干扰的菌株主要有普通变形杆菌和奇异变形杆菌，普通变形杆菌在DFI平板上亦为无色菌落带绿色中心，不可以与阪崎肠杆菌相区分，奇异变形杆菌在科玛嘉显色平板上为淡绿色且有轻微蔓延，对阪崎肠杆菌的检测有一定的干扰。另外DFI显色平板为衬色，颜色为黄棕色，阪崎肠杆菌菌落为无色带绿色中心，不易观察；国内某品牌平板经冷藏后，培养基中会出现结晶，类似染菌现象，给客户带来困扰。SWM阪崎显色培养基在研制过程中克服以上问题，冷藏后不结晶，具有目标菌呈现特有颜色，变形杆菌为无色菌落，平板外观为白色透明等优点。
将有代表性及干扰性强的阪崎肠杆菌ATCC29544、普通变形杆菌CMCC49027、大肠埃希氏菌ATCC25922、奇异变形杆菌CMCC49005，粪肠球菌ATCC29212制成混合菌悬液，取一环混合增菌液划线接种于SWM、DFI和科玛嘉显色培养基平板上，结果见表2。
表2混合菌悬液在各品牌上的分离结果
Figure BDA0000974091620000061
由表2可知，SWM和国内某品牌对于其它干扰杂菌易分离，平板上只出现两种颜色的菌落，无色和特征颜色；DFI中无色带绿心菌落经鉴定有普通变形杆菌的干扰；科玛嘉显色平板对于变形杆菌不易区分，奇异变形对阪崎检测造成干扰。
生长率：
将上述阪崎肠杆菌标准菌株ATCC29544和ATCC51392制成适宜浓度的菌悬液(浓度为108-109CFU/ml)，取稀释度为10-5和10-6的菌悬液0.1ml均匀涂布于SWM、DFI、科玛嘉、国内某品牌阪崎显色培养基以及胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)上，36℃培养24h。取接种水平为20CFU～200CFU的平板进行计数，计算各自的生长率。
表3显色培养基对阪崎肠杆菌灵敏度和菌落形态的比较
Figure BDA0000974091620000062
由表3可知，几种品牌的灵敏度都比较高，生长率方面SWM高于科玛嘉和国内某品牌，且远高于GB4789.28-2013中PR≥0.5的规定。DFI生长率虽然高于其它品牌，但由于其培养基呈棕色，显色不易观察等缺点并不就有优势。菌落大小方面，两株阪崎标准菌株在SWM上比DFI和国内某品牌显色平板上大。
人工污染样品中阪崎肠杆菌的检测：
1.菌种：将阪崎肠杆菌ATCC29544和ATCC51329等2株标准菌株接种营养肉汤中制成适标准菌悬液，制备含有目标菌10CFU-100CFU和1-10CFU的菌悬液，备用。
2.前增菌和增菌：称取乳粉样品100g，加入900mlBPW增菌液中，混合均匀。将制备好的菌悬液接种于此样品悬液中，36℃培养18h。移取1ml转种于10ml mLST-Vm肉汤，44.5℃培养24h。
3.接种培养：各区一环培养后的增菌液，划线接种于实施例1(简称SWM)显色培养基平板上，36℃培养18～24h，根据在划线区域生长情况记录菌落颜色和形态，见表4。
表4 SWM对人工污染样品的检测
Figure BDA0000974091620000071
由表4可知，阪崎肠杆菌接种量越多，划线生长区域越大，接种量＞100CFU时，4区全部有目标菌生长，菌落为典型蓝绿色；接种量为10-100CFU时在第一区和第二区生长，菌落为典型蓝绿色；接种量在1-10CFU时，亦能检出，可达到10CFU的检出限。蓝绿色典型菌落经鉴定后即为阪崎肠杆菌，样品对照中的无色杂菌经鉴定为其他肠杆菌，非阪崎肠杆菌。
实际样品中阪崎肠杆菌的检测：
1.采集样品
从超市以及原料供应商处采集奶粉和乳粉共50份
2.增菌培养
称取乳粉样品100g，加入900mlBPW增菌液中，混合均匀，36℃培养18h。移取1ml转种于10ml mLST-Vm肉汤，44.5℃培养24h。
3.接种培养
取一环培养后的增菌液，划线接种于实施例1制成的阪崎显色培养基平板上，37℃培养18-24h，观察菌落颜色和形态。
4.结果观察和分析
50份样品中有3份样品检出阪崎肠杆菌，同时使用GB4789.40-2010和API20E生化鉴定系统检测比对样品，与显色培养基结果一致，两种方法检测结果均与预期结果一致。
实施例2
一种用于检测阪崎肠杆菌的显色培养基，每1000ml培养基含有胰蛋白胨15g、牛肉浸出粉7g、NaCl 5g、细菌琼脂粉18g、脱氧胆酸钠0.6g、硫代硫酸钠1.0g、5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-葡萄糖苷0.1g、N，N-二甲基甲酰胺1ml。
根据实施例2，共称取本品7.35g加入200ml水中完全溶解，煮沸冷却至50℃左右，倾入无菌平皿，制备好的平板于2-8℃避光保存。
根据实施例2，共称取本品7.35g加入200ml水中完全溶解，121℃高压灭菌15min，冷却至50℃左右，倾入无菌平皿，制备好的平板于2-8℃避光保存。
将阪崎肠杆菌标准菌株ATCC29544和ATCC51392分别划线接种于两种灭菌方式制得的阪崎肠杆菌显色平板上，结果表明差异不显著，培养基各组分热稳定性较好，故选用121℃高压灭菌15min以保证充分灭菌，延长培养基固体平板使用保质期。
特异性实验：
将阪崎肠杆菌ATCC29544、阪崎肠杆菌ATCC51392、大肠埃希氏菌ATCC25922、鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028、弗氏柠檬酸杆菌ATCC43864、铜绿假单胞菌ATCC9027、福氏志贺氏菌CMCC51572、产气肠杆菌ATCC13048、阴沟肠杆菌CMCC45301、粘质沙雷伯菌CMCC41002、普通变形杆菌CMCC49027、奇异变形杆菌CMCC49005、金黄色葡萄球菌ATCC25923和粪肠球菌ATCC29212等14种标准菌株和9种收集到的阪崎肠杆菌阳性菌株制成适当浓度的菌悬液(浓度为108-109CFU/ml),分别划线接种到实施例2制成的显色培养基上(简称SWM)、DFI琼脂(阪崎显色培养基)、科玛嘉阪崎显色培养基以及国内某品牌阪崎显色培养基上，37℃培养24h，检测结果见表5。
表5几种显色培养基特异性检测结果
Figure BDA0000974091620000081
Figure BDA0000974091620000091
结果见表5，两株阪崎肠杆菌标准菌株和7种阳性菌株在SWM上阳性菌落为蓝绿色，而3号和8号阳性菌株在SWM上阳性菌落为深蓝绿色，易辨性优于DFI和国内某品牌。特异性方面，几种品牌均能显示阳性菌落特有的色泽，SWM与其它品牌相差不大，金黄色葡萄球菌和粪肠球菌等菌落在这几种品牌培养基上均受抑制，其它菌株为无色或淡黄色菌落。对阪崎肠杆菌检测有干扰的菌株主要有普通变形杆菌和奇异变形杆菌，普通变形杆菌在DFI平板上亦为无色菌落带绿色中心，不可以与阪崎肠杆菌相区分，奇异变形杆菌在科玛嘉显色平板上为淡绿色且有轻微蔓延，对阪崎肠杆菌的检测有一定的干扰。
将有代表性及干扰性强的阪崎肠杆菌ATCC29544、普通变形杆菌CMCC49027、大肠埃希氏菌ATCC25922、奇异变形杆菌CMCC49005，粪肠球菌ATCC29212制成混合菌悬液，取一环混合增菌液划线接种于SWM、DFI和科玛嘉显色培养基平板上，结果见表6。
表6混合菌悬液在各品牌上的分离结果
Figure BDA0000974091620000101
由表6可知，SWM和国内某品牌对于其它干扰杂菌较易分离，平板上出现三种颜色的菌落：无色和两种特征颜色；DFI中无色带绿心菌落经鉴定有普通变形杆菌的干扰；科玛嘉显色平板对于变形杆菌不易区分，奇异变形对阪崎检测造成干扰。
生长率：
将上述阪崎肠杆菌标准菌株ATCC29544和ATCC51392制成适宜浓度的菌悬液(浓度为108-109CFU/ml)，取稀释度为10-5和10-6的菌悬液0.1ml均匀涂布于SWM、DFI、科玛嘉、国内某品牌阪崎显色培养基以及胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)上，36℃培养24h。取接种水平为20CFU～200CFU的平板进行计数，计算各自的生长率。
表7显色培养基对阪崎肠杆菌灵敏度和菌落形态的比较
Figure BDA0000974091620000102
由表7可知，几种品牌的灵敏度都比较高，生长率方面SWM低于科玛嘉，而高于国内某品牌。DFI生长率最高。
实施例3
一种用于检测阪崎肠杆菌的显色培养基，每1000ml培养基含有胰蛋白胨20g、牛肉浸出粉10g、NaCl 5g、细菌琼脂粉20g、脱氧胆酸钠0.2g、硫代硫酸钠0.2g、5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-葡萄糖苷0.08g、N，N-二甲基甲酰胺10ml。
根据实施例3，共称取本品7.35g加入200ml水中完全溶解，煮沸冷却至50℃左右，倾入无菌平皿，制备好的平板于2-8℃避光保存。
根据实施例3，共称取本品7.35g加入200ml水中完全溶解，121℃高压灭菌15min，冷却至50℃左右，倾入无菌平皿，制备好的平板于2-8℃避光保存。
将阪崎肠杆菌标准菌株ATCC29544和ATCC51392分别划线接种于两种灭菌方式制得的阪崎肠杆菌显色平板上，结果表明差异不显著，培养基各组分热稳定性较好，故选用121℃高压灭菌15min以保证充分灭菌，延长培养基固体平板使用保质期。
特异性实验：
将阪崎肠杆菌ATCC29544、阪崎肠杆菌ATCC51392、大肠埃希氏菌ATCC25922、鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028、弗氏柠檬酸杆菌ATCC43864、铜绿假单胞菌ATCC9027、福氏志贺氏菌CMCC51572、产气肠杆菌ATCC13048、阴沟肠杆菌CMCC45301、粘质沙雷伯菌CMCC41002、普通变形杆菌CMCC49027、奇异变形杆菌CMCC49005、金黄色葡萄球菌ATCC25923和粪肠球菌ATCC29212等14种标准菌株和9种收集到的阪崎肠杆菌阳性菌株制成适当浓度的菌悬液(浓度为108-109CFU/ml),分别划线接种到实施例3制成的显色培养基上(简称SWM)、DFI琼脂(阪崎显色培养基)、科玛嘉阪崎显色培养基以及国内某品牌阪崎显色培养基上，37℃培养24h，检测结果见表8。
表8几种显色培养基特异性检测结果
Figure BDA0000974091620000111
Figure BDA0000974091620000121
结果见表8，两株阪崎肠杆菌标准菌株和5种阳性菌株在SWM上阳性菌落为蓝绿色，而3号和6～8号阳性菌株在SWM上阳性菌落为深蓝绿色，易辨性优于DFI和国内某品牌。特异性方面，几种品牌均能显示阳性菌落特有的色泽，SWM与其它品牌相差不大，金黄色葡萄球菌和粪肠球菌等菌落在这几种品牌培养基上均受抑制，其它菌株为无色或淡黄色菌落。对阪崎肠杆菌检测有干扰的菌株主要有普通变形杆菌和奇异变形杆菌，普通变形杆菌在DFI平板上亦为无色菌落带绿色中心，不可以与阪崎肠杆菌相区分，奇异变形杆菌在实施例3和科玛嘉显色平板上为淡绿色且有轻微蔓延，对阪崎肠杆菌的检测有一定的干扰。
将有代表性及干扰性强的阪崎肠杆菌ATCC29544、普通变形杆菌CMCC49027、大肠埃希氏菌ATCC25922、奇异变形杆菌CMCC49005，粪肠球菌ATCC29212制成混合菌悬液，取一环混合增菌液划线接种于SWM、DFI和科玛嘉显色培养基平板上，结果见表9。
表9混合菌悬液在各品牌上的分离结果
Figure BDA0000974091620000122
由表9可知，SWM和科玛嘉显色平板对于变形杆菌不易区分，奇异变形对阪崎检测造成干扰。
生长率：
将上述阪崎肠杆菌标准菌株ATCC29544和ATCC51392制成适宜浓度的菌悬液(浓度为108-109CFU/ml)，取稀释度为10-5和10-6的菌悬液0.1ml均匀涂布于SWM、DFI、科玛嘉、国内某品牌阪崎显色培养基以及胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)上，36℃培养24h。取接种水平为20CFU～200CFU的平板进行计数，计算各自的生长率。
表10显色培养基对阪崎肠杆菌灵敏度和菌落形态的比较
Figure BDA0000974091620000131
由表10可知，几种品牌的灵敏度都比较高，生长率方面SWM高于DFI、科玛嘉和国内某品牌。
由此可见，
(1)蛋白胨种类以及含量对阪崎肠杆菌的影响
培养基基础配方：蛋白胨类10g/l、牛肉浸粉5g/L、氯化钠5g/L、琼脂1.6g/L、水1000ml，其中蛋白胨类包括(胰蛋白胨、细菌学蛋白胨、酪蛋白胨以及示蛋白胨)，将标准菌株ATCC29544制成适当浓度菌悬液，测其在含有不同氮源基础培养上的生长率，如图1所示。
结果显示，以胰蛋白胨为氮源的培养基平板为无色透明，生长率最高，而且菌落生长良好，菌落较大，另外以细菌学蛋白胨和示蛋白胨为原料的培养基平板为淡黄色，不利于后期观察菌落颜色；以酪蛋白胨为原料的培养基平板为绿色，且有不可容颗粒，故不采用。所以氮源以胰蛋白胨最佳。
(2)不同营养成分对阪崎肠杆菌的影响
培养基基础配方：胰蛋白胨10g/l、某营养成分5g/L、氯化钠5g/L、琼脂1.6g/L、水1000ml，其中某营养成分类包括(酵母粉、牛肉浸粉、牛心浸粉)，将标准菌株ATCC29544制成适当浓度菌悬液，测其在含有不同碳源基础培养上的生长率，如图2所示。
由图2可知，阪崎肠杆菌在以牛肉浸粉和酵母粉为原料制成的培养基上的生长率较高要比牛心浸粉高，但是，阪崎肠杆菌在牛肉浸粉为原料的培养基上易生成黄色素，推测牛肉浸粉可以促进阪崎肠杆菌分泌代谢产物，故以牛肉浸粉为最优营养成分。
(3)胰蛋白胨浓度对阪崎肠杆菌显色培养基显色效果的影响
其它成分不变，底物添加量为0.1g/L，胰蛋白胨浓度分别为10g/L、15g/L、20g/L和25g/L，观察其上菌落的颜色，以及各培养基的生长率，如图3所示。
由图3可知，胰蛋白胨含量不同时阪崎肠杆菌菌落大小差异很小，但胰蛋白胨含量为10g/L时生长率最高，且此时阪崎肠杆菌显色最明显，随着蛋白胨含量的增加，颜色并没有加深反倒减弱，推测蛋白胨含量的多少会影响α-D-葡萄糖苷酶的产生，故以胰蛋白胨含量为10g/L时为最佳。
(4)抑制剂浓度对阪崎肠杆菌显色培养基中菌落生长率以及显色效果的影响
胆盐表面活性剂类抑菌剂，是一类与钠盐、胆酸和甘氨酸的钠盐以及少量去氧胆酸钠的混合物，其可以抑制大多数革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性菌，在加入胆盐的培养基中，虽然抑制了其他杂菌而加强了对阪崎肠杆菌的选择性，但同时对阪崎肠杆菌的生长有一定的影响，延缓或部分抑制其生长。同时，抑制剂量的选择，还需要考虑其对阪崎肠杆菌产生α-D-葡萄糖苷酶的影响。实验证明，本发明实施例1中每1000ml培养基含有脱氧胆酸钠0.4g和硫代硫酸钠0.4g，效果最佳。
(5)不同组溶剂对阪崎肠杆菌显色培养基显色效果的影响
5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-葡萄糖苷不能完全溶于水，故选用水、乙醇、甲醇和N，N-二甲基酰胺为助溶剂，实验证明不同浓度的助溶剂对阪崎肠杆菌产生α-D-葡萄糖苷酶有影响，本发明优选用NN-二甲基酰胺为助溶剂，且阪崎肠杆菌在其为组溶剂制成的培养基上生长良好。
应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (1)

1.一种用于检测阪崎肠杆菌的显色培养基，其特征在于：每1000ml培养基由胰蛋白胨10g、牛肉浸出粉5g、NaCl 5g、细菌琼脂粉16g、脱氧胆酸钠0.4g、硫代硫酸钠0.4g、5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-葡萄糖苷0.13g、N，N-二甲基甲酰胺3ml制成。
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