CN107723336A - 金黄色葡萄球菌荧光显色培养基 - Google Patents

金黄色葡萄球菌荧光显色培养基 Download PDF

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Abstract

本发明公布了一种用于检测金黄色葡萄球菌的荧光显色培养基，含有氮源、碳源、氯化钠、杂菌生长抑制剂，其特征在于，还包括金黄色葡萄球菌显色底物4‑甲基伞型酮‑对硝基β‑D‑葡萄糖苷、β‑D‑葡萄糖苷，非金黄色葡萄球菌显色底物对硝基酚‑α‑D‑吡喃半乳糖，非金黄色葡萄球菌显色底物对硝基苯酚β‑D‑葡萄糖醛酸苷。本发明公布的荧光显色培养基在助显色剂不存在的情况下，为区分金黄色葡萄球菌和其他葡萄球菌的提供更简便的显色方案，能有效区分黄色葡萄球菌与部分非金黄色葡萄球菌及其他杂菌，对黄色葡萄球菌具有较好的选择性。

Description

金黄色葡萄球菌荧光显色培养基
技术领域
本发明涉及一种微生物检测的培养基，尤其涉及一种用于检测金黄色葡萄球菌的荧光显色培养基。
背景技术
金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus ) 为条件致病菌，是人类化脓感染中最常见的病原菌，也是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属（Staphylococcus），有“嗜肉菌"的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至引起败血症、脓毒症等全身感染。当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如牛奶盒奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经8-10小时即可产生相当数量的肠毒素，从而引发不同程度的急性胃肠炎症状。
金黄色葡萄球菌主要通过Barid-Parker琼脂选择性培养基显色培养。在该培养基上金黄色葡萄球菌呈现黑色菌落，周围有透明圈。但是研究发现，一些非金黄色葡萄球菌比如腐生葡萄球菌、缓慢葡萄球菌及赛氏葡萄球菌同样表现出上述特征，造成假阳性。发明专利CN201310603799.9公布了一种用于区分金黄色葡萄球菌和其他葡萄球菌的显色培养基，同时为了达到更好的选色效果，选用特定助显色剂帮助显色。
发明内容
本发明的目的在于提供一种检测金黄色葡萄球菌的荧光显色培养基，在助显色剂不存在的情况下，为区分金黄色葡萄球菌和其他葡萄球菌的提供更简便的显色方案。
本发明的所采用的技术方案为：
一种用于检测金黄色葡萄球菌的显色培养基，含有氮源、碳源、氯化钠、杂菌生长抑制剂，还包括金黄色葡萄球菌显色底物4-甲基伞型酮-对硝基β-D-葡萄糖苷、β-D-葡萄糖苷，非金黄色葡萄球菌显色底物对硝基酚-α-D-吡喃半乳糖，非金黄色葡萄球菌显色底物对硝基苯酚β-D-葡萄糖醛酸苷。
优选的，所述4-甲基伞型酮-β-D-葡萄糖苷为0.5-5 g/L。
优选的，所述4-甲基伞型酮-β-D-葡萄糖苷为1-2 g/L。
优选的，所述对硝基β-D-葡萄糖苷为1-6 g/L。
优选的，所述对硝基β-D-葡萄糖苷为3 g/L。
优选的，所述硝基酚-α-D-吡喃半乳糖的含量为2-5g/L。
优选的，所述硝基苯酚β-D-葡萄糖醛酸苷为0.6-1.5g/L。
优选的，上述显色培养基，每1000mL培养基含有牛肉膏3-10g，蛋白胨5-15g，琼脂10-30g，氯化钠10-20g，牛胆盐1- 5g、头孢克肟0.01 - 0.06mg，丙酮酸钠5-15g。
优选的，所述培养基还含有金黄色葡萄球菌生长促进剂丙酮酸钠。
牛肉膏、蛋白胨、琼脂、氯化钠为葡萄球菌生长提供适宜的生长环境，利于其快速增长。高盐条件可以促进金黄色葡萄球菌生长，同时抑制杂菌生长。
丙酮酸钠是金黄色葡萄球菌的生长促进剂。
头孢克肟可以抑制大部分革兰氏阴性菌的生长，牛胆盐可以抑制大部分革兰氏阳性菌的生长。
硝基酚-α-D-吡喃半乳糖为α-D-半乳糖苷酶的显色底物，可以被非金黄色葡萄球菌降解，产生对硝基酚。
硝基苯酚β-D-葡萄糖醛酸为β-D-葡萄糖醛酸酶的显色底物，可以被非金黄色葡萄球菌降解，产生对硝基苯酚。
金黄色葡萄球菌和其他葡萄球菌可以作用于4-甲基伞型酮-β-D-葡萄糖苷，生成具有强烈荧光的4-甲基伞型酮，产生荧光显微镜下可见菌落。金黄色葡萄球菌和其他葡萄球菌产生的碱性磷酸酶作用于对硝基β-D-葡萄糖苷，生成对硝基苯，产生黄色菌落。但是金黄色葡萄球菌不能分解硝基酚-α-D-吡喃半乳糖、硝基苯酚β-D-葡萄糖醛酸。而其他葡萄球菌可以分解硝基酚-α-D-吡喃半乳糖或硝基苯酚β-D-葡萄糖醛酸，产生黄色产物，从而产生与金黄色葡萄球菌一样的表观菌落颜色。
因此本发明公布的荧光显色培养基中，非葡萄球菌显菌落本身的颜色，葡萄球菌显示黄色菌落颜色，金黄色葡萄球菌显示黄色菌落颜色并在荧光显微镜下可见。
本发明的有益效果是：
本发明的显色培养基为金黄色葡萄球菌的检测提供了一种荧光显色方案，在助显色剂不存在的情况下亦能有效的区分部分葡萄球菌与非葡萄球菌、金黄色葡萄球菌与非金黄色葡萄球菌，简化细菌显色培养过程。
具体实施方式
一种用于检测金黄色葡萄球菌的显色培养基，含有氮源、碳源、氯化钠、杂菌生长抑制剂，还包括金黄色葡萄球菌显色底物4-甲基伞型酮-对硝基β-D-葡萄糖苷、β-D-葡萄糖苷，非金黄色葡萄球菌显色底物对硝基酚-α-D-吡喃半乳糖，非金黄色葡萄球菌显色底物对硝基苯酚β-D-葡萄糖醛酸苷。
4-甲基伞型酮-β-D-葡萄糖的可选含量范围为0.5-5 g/L。
4-甲基伞型酮-β-D-葡萄糖苷的可选含量范围为1-2 g/L。
对硝基β-D-葡萄糖苷的可选含量范围为1-6 g/L。
对硝基β-D-葡萄糖苷的可选含量范围为3 g/L。
硝基酚-α-D-吡喃半乳糖的含量的可选含量范围为2-5g/L。
硝基苯酚β-D-葡萄糖醛酸苷的可选含量范围为0.6-1.5g/L。
上述显色培养基，每1000mL培养基含有牛肉膏3-10g，蛋白胨5-15g，琼脂10-30g，氯化钠10-20g，牛胆盐1- 5g、头孢克肟0.01 - 0.06mg，丙酮酸钠5-15g。
上述培养基还含有金黄色葡萄球菌生长促进剂丙酮酸钠。
本发明的显色培养基用于检测金黄色葡萄球菌的方法，包括如下步骤：
（1）制备显色平板：每1000mL 去离子水中加入上述显色培养基除硝基酚-α-D-吡喃半乳糖、硝基苯酚β-D-葡萄糖醛酸苷、头孢克肟外的原料，搅拌，加热煮沸至完全溶解，待冷至约50℃，加入过滤除菌的硝基酚-α-D-吡喃半乳糖、硝基苯酚β-D-葡萄糖醛酸苷、头孢克肟，混匀，倒平板，备用；
（2）接种培养：将样品或含样品的增菌液接种到显色平板上，37℃培养过夜培养 ；
（3）可能的显色结果：黄色荧光显微镜下不显色，黄色且荧光显微镜下显色，菌落本身颜色。
上述三种颜色结果对比鲜明，易区分。
下面结合具体的实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限如此。
实施例1
一种用于检测金黄色葡萄球菌的荧光显色培养基，每1000mL培养基含有牛肉膏3g，蛋白胨10g，琼脂15g，氯化钠10g，牛胆盐1.5g、头孢克肟0.04mg，4-甲基伞型酮-β-D-葡萄糖苷2g/L，对硝基β-D-葡萄糖苷3 g/L，硝基酚-α-D-吡喃半乳糖的含量为3.5g/L，硝基苯酚β-D-葡萄糖醛酸苷为1g/L，丙酮酸钠10g。
实施例2
一种用于检测金黄色葡萄球菌的荧光显色培养基，每1000mL培养基含有牛肉膏3g，蛋白胨10g，琼脂15g，氯化钠10g，牛胆盐1.5g、头孢克肟0.04mg，4-甲基伞型酮-β-D-葡萄糖苷3g/L，对硝基β-D-葡萄糖苷2 g/L，硝基酚-α-D-吡喃半乳糖的含量为2g/L，硝基苯酚β-D-葡萄糖醛酸苷为1.5g/L，丙酮酸钠8g。
实施例3
一种用于检测金黄色葡萄球菌的荧光显色培养基，每1000mL培养基含有牛肉膏3g，蛋白胨10g，琼脂15g，氯化钠15g，牛胆盐1.5g、头孢克肟0.04mg，，4-甲基伞型酮-β-D-葡萄糖苷5g/L，对硝基β-D-葡萄糖苷6 g/L，硝基酚-α-D-吡喃半乳糖的含量为5g/L，硝基苯酚β-D-葡萄糖醛酸苷为0.6g/L，丙酮酸钠5g。
实施例4
将表1所列7种标准菌株分别制成适当浓度的标准菌悬液（浓度为107 ～ 108cfu/mL），分别划线接种到用实施例1荧光显色培养基制成的平板上，37℃过夜培养。特异性实验结果见表1。表1中菌落生长情况用生长几区来表示，4区表示生长良好，菌落大小正常，1-3区表示生长受抑制，菌落偏小或生长少于4区。
表1金黄色葡萄球菌显色培养基的特异性显色试验结果
菌株 显色效果（黄色+荧光显微镜下不显色，黄色+荧光显微镜下显色，菌落本身颜色）
金黄色葡萄球菌 ATCC25923 4区 黄色+荧光显微镜下显色
金黄色葡萄球菌 ATCC26112 4区 黄色+荧光显微镜下显色
金黄色葡萄球菌 ATCC43300 4区 黄色+荧光显微镜下显色
金黄色葡萄球菌 ATCC29213 4区 黄色+荧光显微镜下显色
赛氏葡萄球菌FSCC（I）11 4区 黄色+荧光显微镜下不显色
缓慢葡萄球菌FSCC（I）02 4区 菌落本身颜色
腐生葡萄球菌FSCC（I）04 4区 菌落本身颜色
实验结果表明，在发明公布的荧光显色培养基上，金黄色葡萄球菌显黄色且在荧光显微镜下显色，非金黄色葡萄球菌显示菌落本身颜色或仅仅显示黄色可见光颜色。
由此可见，本发明公布的显色培养基能很好的区分金黄色葡萄球菌与非金黄色葡萄球菌，对检测金黄色葡萄球菌有较好特异性。

Claims (9)

1.一种用于检测金黄色葡萄球菌的荧光显色培养基，含有氮源、碳源、氯化钠、杂菌生长抑制剂，其特征在于，还包括金黄色葡萄球菌显色底物4-甲基伞型酮-对硝基β-D-葡萄糖苷、β-D-葡萄糖苷，非金黄色葡萄球菌显色底物对硝基酚-α-D-吡喃半乳糖，非金黄色葡萄球菌显色底物对硝基苯酚β-D-葡萄糖醛酸苷。
2.根据权利要求1所述的荧光显色培养基，其特征在于，所述4-甲基伞型酮-β-D-葡萄糖苷为0.5-5 g/L。
3.根据权利要求2所述的荧光显色培养基，其特征在于，所述4-甲基伞型酮-β-D-葡萄糖苷为1-2 g/L。
4.根据权利要求1所述的荧光显色培养基，其特征在于，所述对硝基β-D-葡萄糖苷为1-6 g/L。
5.根据权利要求1所述的荧光显色培养基，其特征在于，所述对硝基β-D-葡萄糖苷为3g/L。
6.根据权利要求1所述的荧光显色培养基，其特征在于，所述硝基酚-α-D-吡喃半乳糖的含量为2-5g/L。
7.根据权利要求1所述的荧光显色培养基，其特征在于，所述硝基苯酚β-D-葡萄糖醛酸苷为0.6-1.5g/L。
8.根据权利要求1-7所述的荧光显色培养基，其特征在于，每1000mL培养基含有牛肉膏3-10g，蛋白胨5-15g，琼脂10-30g，氯化钠10-20g，牛胆盐1- 5g、头孢克肟0.01 - 0.06mg，丙酮酸钠5-15g。
9.根据权利要求8所述的荧光显色培养基，其特征在于，还含有金黄色葡萄球菌生长促进剂丙酮酸钠。
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