CN104372066A - 出血性大肠杆菌o157:h7选择性显色培养基及其检测试纸 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种出血性大肠杆菌O157：H7选择性显色培养基，其中每1000mL培养基含有如下重量的组分：结晶紫中性红胆盐琼脂15-25g、特异性酶显色底物5-25g、二甲基甲酰胺0.05-20g、酵母粉1-5g、山梨醇1-8g、头孢克肟15-25g、鼠李糖2-8g、亚碲酸钾2-7g、水杨苷1-5g、氯化钠5-10g、月桂基硫酸钠0.1-0.3g、万古霉素0.02-0.05g、余量为水。本发明还提供了一种含有所述出血性大肠杆菌O157：H7选择性显色培养基的检测试纸。本发明在CT-SMAC培养基基础上添加水杨苷、万古霉素，进一步提高选择性和特异性，检出率高、检出时间短。
Description
技术领域
本发明涉及一种适用于出血性大肠杆菌O157：H7的选择性显色培养基，以及采用该选择性显色培养基的检测试纸。
背景技术
产志贺毒素大肠杆菌(shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)也称为产vero毒素大肠杆菌，是近来新出现的最重要的食源性病原菌。STEC主要引起胃肠炎和一系列并发症，如出血性腹泻(HC)和导致儿童肾衰竭的溶血性尿毒综合征(HUs)。肠出血性大肠杆菌(enterohaemorrhagic Escherichiacoli，EHEC)O157：H7是其中一种。反刍动物，特别是牛、山羊和绵羊已被认定是其重要宿主。它通过被污染的未煮熟的肉类、未消毒的牛奶和被粪便污染的蔬菜和水等传播，人-人之间的密切接触传播也有报道。大部分引起HC和HUS的爆发和散发病例与O157：H7有关。
O157可以迅速的分解乳糖，因此在麦康凯琼脂培养基上无法和其他大肠杆菌相区别。然而不像大约80％的其他大肠杆菌，大部分O157经过培养后，不分解山梨醇。因此利用这个特性建立了山梨醇-康凯琼脂(SMAC)培养方法，用山梨醇取代麦康凯琼脂中的乳糖，便可制备SMAC。已证明SMAC对分离O157是很有效的选择性培养基之一，目前被广泛用于实验室临床诊断。然而，近几年在世界各地发现了分解山梨醇的O157菌株，因此分离过程中应注意山梨醇发酵阳性菌株的挑取，以防漏检。
一些非O157血清型的大肠埃希菌也不发酵山梨醇；同时一些其他种属的非发酵山梨醇细菌也存在于人和动物的粪便中，特别是变形杆菌属和气单胞菌属细菌。基于这种情况，这就需要发展能抑制粪便中不发酵山梨醇的细菌生长的培养基。头孢克肟能抑制变形杆菌的生长而不抑制大肠杆菌，O157不发酵鼠李糖，而大部分不发酵山梨醇的大肠杆菌发酵鼠李糖。于是，人们就制备了头孢克肟-鼠李糖-山梨醇麦康凯培养基(CR-SMAC)。亚碲酸钾80年前就被用于病原菌的分离，包括棒状杆菌、白喉杆菌、金黄色葡萄球菌、霍乱弧菌和志贺氏菌。它对O157也具有选择性，于是发展了头孢克肟-亚碲酸钾-山梨醇麦康凯培养基(CT-SMAC)。然而，仍然有某些细菌能在CT-SMAC上形成与O157相似的菌落，使得在CT-SMAC平板上选择O157的困难增加。
发明内容
本发明提供一种适用于出血性大肠杆菌O157：H7的选择性显色培养基，以及采用该选择性显色培养基的检测试纸，以克服现有技术存在的上述缺陷。
本发明首先涉及一种出血性大肠杆菌O157：H7选择性显色培养基，其中每1000mL培养基含有如下重量的组分：
所述特异性酶显色底物是5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-葡萄糖苷。
本发明还涉及一种采用该选择性显色培养基制作的检测试纸，其至少含有一吸附有上述出血性大肠杆菌O157：H7选择性显色培养基的吸水滤纸。
本发明在CT-SMAC培养基基础上添加水杨苷、万古霉素，进一步提高选择性和特异性，检出率高、检出时间短。
具体实施方式
下面给出本发明较佳实施例，以详细说明本发明的技术方案。
实施例1
一种出血性大肠杆菌O157：H7选择性显色培养基，每1000mL培养基含有：结晶紫中性红胆盐琼脂15g、5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-葡萄糖苷5g、二甲基甲酰胺0.05g、酵母粉1g、氯化钠5g、月桂基硫酸钠0.3g、山梨醇1g、头孢克肟15g、鼠李糖2g、亚碲酸钾2g、水杨苷1g、万古霉素0.02g。
将上述成分溶于水至1000mL，加热煮沸，120℃灭菌15min，即可使用。
实施例2
一种出血性大肠杆菌O157：H7选择性显色培养基，每1000mL培养基含有：结晶紫中性红胆盐琼脂25g、5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-葡萄糖苷25g、二甲基甲酰胺20g、酵母粉5g、氯化钠10g、月桂基硫酸钠0.1g、月桂基硫酸钠0.3g、山梨醇8g、头孢克肟25g、鼠李糖8g、亚碲酸钾7g、水杨苷5g、万古霉素0.05g。
将上述成分溶于水至1000mL，加热煮沸，120℃灭菌15min，即可使用。
实施例3
一种出血性大肠杆菌O157：H7选择性显色培养基，每1000mL培养基含有：结晶紫中性红胆盐琼脂20g、5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-葡萄糖苷15g、二甲基甲酰胺5g、酵母粉3g、氯化钠8g、月桂基硫酸钠0.2g、山梨醇3g、头孢克肟20g、鼠李糖5g、亚碲酸钾3g、水杨苷2g、万古霉素0.03g。
将上述成分溶于水至1000mL，加热煮沸，120℃灭菌15min，即可使用。
实施例4
出血性大肠杆菌O157：H7选择性显色培养基试纸的制备：将选定的吸水滤纸浸入出血性大肠杆菌O157：H7选择性显色培养基中浸渍10-15分钟后取出烘干，冷却至室温后裁成一定规格试纸备用。
实施例5
在实施例4得到的试纸上下两面分别盖覆一层聚丙烯保护膜。
实施例6
将标准菌株分别制成100cfu/mL的标准菌悬液，吸取1mL菌液进行检测，37℃培养18小时。结果如表1，“+”表示阳性结果，“一”表示阴性结果。
表1 显色培养基特异性检验结果
由上表可以看出，除出血性大肠杆菌O157：H7以外的志贺氏菌属、弧菌、沙门氏菌属等主要食品致病菌在培养基上培养18h时进行观察，并没有菌落出现。特别是可选择性鉴别大肠埃希氏菌O26，具有十分重要的实用价值。可见本发明培养基对出血性大肠杆菌O157：H7初筛检测具有较好的选择性及特异性。
Claims (3)
1.一种出血性大肠杆菌O157：H7选择性显色培养基，其特征在于，其中每1000mL培养基含有如下重量的组分：
2.如权利要求1所述的出血性大肠杆菌O157：H7选择性显色培养基，其特征在于，所述特异性酶显色底物是5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-葡萄糖苷。
3.一种出血性大肠杆菌O157：H7选择性显色培养基检测试纸，其特征在于，其中至少含有一吸附有权利要求1或2所述出血性大肠杆菌O157：H7选择性显色培养基的吸水滤纸。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108129530A (zh) * | 2018-01-24 | 2018-06-08 | 广东优尼德生物科技有限公司 | 检测β-D-葡萄糖醛酸苷酶的底物及其制备方法和试剂盒 |
| CN113293193A (zh) * | 2021-06-01 | 2021-08-24 | 上海市食品药品检验研究院 | 一种检测大肠埃希菌o157的分离培养基及其制备方法 |
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2014
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Non-Patent Citations (4)
| Title |
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