RU2812423C1 - Дифференциально-селективная питательная среда для выделения шигелл и сальмонелл сухая (Гектоеновый энтеро-агар) - Google Patents
Дифференциально-селективная питательная среда для выделения шигелл и сальмонелл сухая (Гектоеновый энтеро-агар) Download PDFInfo
- Publication number
- RU2812423C1 RU2812423C1 RU2023115824A RU2023115824A RU2812423C1 RU 2812423 C1 RU2812423 C1 RU 2812423C1 RU 2023115824 A RU2023115824 A RU 2023115824A RU 2023115824 A RU2023115824 A RU 2023115824A RU 2812423 C1 RU2812423 C1 RU 2812423C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- agar
- bile
- shigella
- salmonella
- growth
- Prior art date
Links
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 title claims abstract description 31
- 239000008272 agar Substances 0.000 title claims abstract description 30
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 title claims abstract description 23
- 241000607768 Shigella Species 0.000 title claims abstract description 22
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 title claims abstract description 21
- 238000002955 isolation Methods 0.000 title claims abstract description 7
- NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N Salicin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1)c1c(CO)cccc1 NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N 0.000 claims abstract description 24
- NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N alpha-salicin Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 24
- 229940120668 salicin Drugs 0.000 claims abstract description 24
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 claims abstract description 23
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 claims abstract description 22
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 21
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 claims abstract description 18
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims abstract description 17
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims abstract description 17
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 17
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims abstract description 17
- NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N salicin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N 0.000 claims abstract description 17
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims abstract description 15
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 claims abstract description 15
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 claims abstract description 15
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims abstract description 15
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 claims abstract description 15
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims abstract description 14
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 14
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims abstract description 14
- YJQPYGGHQPGBLI-UHFFFAOYSA-N Novobiocin Natural products O1C(C)(C)C(OC)C(OC(N)=O)C(O)C1OC1=CC=C(C(O)=C(NC(=O)C=2C=C(CC=C(C)C)C(O)=CC=2)C(=O)O2)C2=C1C YJQPYGGHQPGBLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- YJQPYGGHQPGBLI-KGSXXDOSSA-N novobiocin Chemical compound O1C(C)(C)[C@H](OC)[C@@H](OC(N)=O)[C@@H](O)[C@@H]1OC1=CC=C(C(O)=C(NC(=O)C=2C=C(CC=C(C)C)C(O)=CC=2)C(=O)O2)C2=C1C YJQPYGGHQPGBLI-KGSXXDOSSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 229960002950 novobiocin Drugs 0.000 claims abstract description 13
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 13
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 12
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims abstract description 11
- 229960001375 lactose Drugs 0.000 claims abstract description 11
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 7
- ZPLCXHWYPWVJDL-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-1,3-oxazolidin-2-one Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1CC1NC(=O)OC1 ZPLCXHWYPWVJDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- RZUBARUFLYGOGC-MTHOTQAESA-L acid fuchsin Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)(=O)C1=C(N)C(C)=CC(C(=C\2C=C(C(=[NH2+])C=C/2)S([O-])(=O)=O)\C=2C=C(C(N)=CC=2)S([O-])(=O)=O)=C1 RZUBARUFLYGOGC-MTHOTQAESA-L 0.000 claims abstract description 4
- 239000004313 iron ammonium citrate Substances 0.000 claims abstract description 4
- 235000000011 iron ammonium citrate Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims abstract description 3
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- FRHBOQMZUOWXQL-UHFFFAOYSA-L ammonium ferric citrate Chemical compound [NH4+].[Fe+3].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O FRHBOQMZUOWXQL-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 3
- 229960004642 ferric ammonium citrate Drugs 0.000 claims abstract description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 claims description 7
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 claims description 7
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 6
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 6
- AXDJCCTWPBKUKL-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-aminophenyl)-(4-imino-3-methylcyclohexa-2,5-dien-1-ylidene)methyl]aniline;hydron;chloride Chemical compound Cl.C1=CC(=N)C(C)=CC1=C(C=1C=CC(N)=CC=1)C1=CC=C(N)C=C1 AXDJCCTWPBKUKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 claims description 2
- 229960002668 sodium chloride Drugs 0.000 claims description 2
- 229940001474 sodium thiosulfate Drugs 0.000 claims description 2
- VTLYFUHAOXGGBS-UHFFFAOYSA-N Fe3+ Chemical compound [Fe+3] VTLYFUHAOXGGBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 abstract description 3
- 239000012568 clinical material Substances 0.000 abstract description 2
- 208000011140 intestinal infectious disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 46
- 241000974482 Aricia saepiolus Species 0.000 description 28
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 21
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 19
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 7
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 7
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 7
- 241000156692 Shigella flexneri 1a Species 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 241000305071 Enterobacterales Species 0.000 description 4
- 239000006155 Hektoen enteric agar Substances 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 208000004429 Bacillary Dysentery Diseases 0.000 description 3
- 241000164287 Enterococcus faecalis ATCC 19433 Species 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 241000588915 Klebsiella aerogenes Species 0.000 description 3
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 3
- 206010039438 Salmonella Infections Diseases 0.000 description 3
- 241001354013 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis Species 0.000 description 3
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 3
- 206010040550 Shigella infections Diseases 0.000 description 3
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 208000001848 dysentery Diseases 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 206010039447 salmonellosis Diseases 0.000 description 3
- 201000005113 shigellosis Diseases 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical class N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 241001360526 Escherichia coli ATCC 25922 Species 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 2
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 2
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- CONKBQPVFMXDOV-QHCPKHFHSA-N 6-[(5S)-5-[[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]methyl]-2-oxo-1,3-oxazolidin-3-yl]-3H-1,3-benzoxazol-2-one Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)C[C@H]1CN(C(O1)=O)C1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1 CONKBQPVFMXDOV-QHCPKHFHSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000588923 Citrobacter Species 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 101100001670 Emericella variicolor andE gene Proteins 0.000 description 1
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 239000006154 MacConkey agar Substances 0.000 description 1
- 241000607361 Salmonella enterica subsp. enterica Species 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- PLKYGPRDCKGEJH-UHFFFAOYSA-N azane;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;iron Chemical compound N.[Fe].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O PLKYGPRDCKGEJH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GLMQHZPGHAPYIO-UHFFFAOYSA-L azanium;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylate;iron(2+) Chemical compound [NH4+].[Fe+2].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O GLMQHZPGHAPYIO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000005567 fecaloral disease transmission Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000000074 intestinal pathogen Species 0.000 description 1
- 150000002505 iron Chemical class 0.000 description 1
- 239000006101 laboratory sample Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Chemical class 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 108010009004 proteose-peptone Proteins 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000019086 sulfide ion homeostasis Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. Предложена селективная питательная среда гектоеновый энтеро-агар сухая для выделения шигелл и сальмонелл, содержащая пептон, дрожжевой экстракт, лактозу, сахарозу и салицин, смесь желчных солей - желчные соли N3 и желчь очищенную сухую, натрий хлористый, натрий тиосульфат, железа аммонийного цитрат, фуксин кислый, бромтимоловый синий, натрий углекислый, агар бактериологический и селективную добавку новобиоцин при заданном содержании исходных компонентов. Изобретение обеспечивает расширение арсенала селективных питательных сред для проведения исследований клинического материала с целью выделения и дифференциации шигелл и сальмонелл - возбудителей кишечных инфекционных заболеваний человека. 2 табл., 5 пр.
Description
Изобретение относится к санитарной и клинической микробиологии и может быть использовано для выделения и дифференциации шигелл и сальмонелл при исследовании объектов окружающей среды, а также различного биологического материала при подозрении на шигеллез и сальмонеллез.
Сальмонеллы (Salmonella spp.) - патогенные микроорганизмы, которые вызывают инфекционные заболевания (сальмонеллезы) у человека и животных. Одной из этиологических особенностей современных сальмонеллезов является увеличение числа циркулирующих серологических вариантов возбудителя. Такая тенденция отмечается во всех экономически развитых странах. Распространению сальмонелл на территориях, где они раньше не встречались, в значительной степени способствуют социально-экономические факторы: расширение международных связей и туризма, а также торговля животными, птицей, пищевыми продуктами, кормами для животных и птиц, которые часто оказываются контаминированы сальмонеллами.
Шигеллы (Shigella spp.) - возбудители бактериальной дизентерии (шигеллезов) человека - антропонозного инфекционного заболевания с фекально-оральным механизмом передачи. Характерным синдромальным признаком является гемоколит. В настоящее время в 50% случаев заболевания протекают как острый колит, без примеси крови в испражнениях, который клинически невозможно отличить от диареи, вызванной другими патогенными энтеробактериями. Естественным хозяином и источником инфекции является человек (больной острой или хронической формой дизентерии, реконвалесцент или транзиторный носитель). Наибольшую опасность представляют больные с легкой и стертой формами дизентерии, работающие в пищевой промышленности, и приравненные к ним декретированные группы населения. Шигеллы часто встречаются в воде открытых водоемов, пищевых продуктах, на поверхности объектов внешней среды. Пути передачи инфекции различные: пищевой, дополнительные - водный и контактный. Пищевой путь передачи инфекции при шигеллезах является ведущим.
Для выделения и дифференциации патогенных энтеробактерий, в частности, сальмонелл и шигелл при проведении бактериологических исследований в клинической и санитарной микробиологии обязательны к использованию дифференциально-диагностические питательные среды. Питательные среды Эндо, агар Плоскирева, SS-агар обеспечивают дифференциацию лактозоотрицательных шигелл и сальмонелл от лактозоположительных бактерий, но на средах наблюдается рост протея в виде роения, либо очагового роения. Агар МакКонки с лактозой также позволяет провести дифференциацию микроорганизмов по признаку ферментации лактозы, но на среде возможен рост грамположительной микрофлоры. Более селективная питательная среда XLD-агар обеспечивают четкую дифференциацию сальмонелл, шигелл, от других энтеробактерий, но на среде обильно растет кишечная палочка.
Действующие нормативные документы ГОСТ ISO 21567:2004 «Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных - Горизонтальный метод выявления Shigella spp.» и ГОСТ 32010- 2013 «Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Shigella» регламентируют использование селективно-диагностической питательной среды-Энтероагар гектоеновый.
Прототипом предлагаемой питательной среды является коммерческая среда Hektoen Enteric Agar,
Дифференциально-селективная питательная среда для выделения шигелл и сальмонелл сухая (Гектоеновый энтеро-агар) предназначена для проведения исследований клинического материала с целью выделения и дифференциации шигелл и сальмонелл - возбудителей кишечных инфекционных заболеваний человека. Среда обеспечивает хороший рост бактерий родов Salmonella и Shigella и их четкую дифференциацию не только между собой, но и от других представителей энтеробактерий.
В процессе ферментации микроорганизмами специфических углеводов: лактозы, сахарозы и салицина происходит образование кислоты, что приводит к изменению цвета индикаторов: бромтимолового синего и кислого фуксина на Гектоеновом энтеро-агаре.
Присутствие в среде тиосульфата натрия и цитрата аммонийного железа приводит к почернению колоний в результате роста сероводород-положительных штаммов сальмонелл и протеев. Соли желчных кислот и новобиоцин подавляют рост большинства сопутствующих микроорганизмов.
| №п\п | Состав | г/л |
| 1. | Протеозопептон | 12,00 |
| 2. | Дрожжевой экстракт | 3,00 |
| 3. | Лактоза | 12,00 |
| 4. | Сахароза | 12,00 |
| 5. | Салицин | 2,00 |
| 6. | Смесь желчных солей | 9,00 |
| 7. | Натрия хлорид | 5,00 |
| 8. | Натрия тиосульфат | 5,00 |
| 9. | Железа аммонийного цитрат | 1,50 |
| 10. | Фуксин кислый | 0,10 |
| 11. | Бромтимоловый синий | 0,065 |
| 12. | Агар-агар | 15,00 |
| Конечное значение рН (при 25°С) 7,5±0,2 | ||
В настоящее время в России такая питательная среда не производится.
Недостатком коммерческой среды является:
- слабые селективные свойства в отношении кишечной палочки;
- ограниченная доступность;
- высокая стоимость
- Техническим результатом предлагаемого изобретения является создание отечественной сухой питательной среды для выделения и дифференциации шигелл и сальмонелл, обладающей стабильностью результатов по ростовым и ингибирующим свойствам, обеспечивающей доступность получения объективных результатов бактериологического контроля.
Технический результат достигается тем, что предлагаемая Селективная питательная среда Гектоеновый энтеро-агар сухая, содержащая пептон, дрожжевой экстракт, лактозу, сахарозу и салицин, смесь желчных солей, натрий хлористый, натрий тиосульфат, железа аммонийного цитрат, фуксин кислый, бромтимоловый синий, агар бактериологический и отличающаяся тем, что содержит уменьшенную концентрацию салицина и комбинацию желчных солей импортных с желчью очищенной сухой отечественного производства, дополнительно содержит натрий углекислый при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:
| - Пептон мясной или пептон ферментативный для бактериологических целей | 11,0-13,0 |
| - Дрожжевой экстракт | 2,5-3.5 |
| - α-Д- Лактоза, 1-водная | 11,0-13,0 |
| - Сахароза | 11,0-13,0 |
| - Салицин | 0,4-0,6 |
| - Желчные соли № 3 | 4,0-5,0 |
| - Желчь очищенная сухая | 4,0-5,0 |
| - Натрий хлористый | 4,5-5,5 |
| - Натрий серноватистокислый (натрия тиосульфат) б/в | 4,5-5,5 |
| - Железо (III) лимонноаммиачное | 1,4-1,6 |
| - Фуксин кислый | 0,09-0,11 |
| - Бромтимоловый синий | 0,06-0,07 |
| - Натрий углекислый | 0,4-1,0 |
| - Агар бактериологический | (8,0-12,0)*) |
СД, г/л новобиоцин 0,015
Предложенная питательная среда содержит в качестве источника азотистого питания мясной или ферментативный пептон, дрожжевой экстракт - источник витаминов. Высокие концентрации лактозы и сахарозы с пептоном и салицином смягчают подавляющий эффект желчных солей, при этом рост сальмонелл и шигелл хорошо заметен, а рост нормальной кишечной микрофлоры подавляется. Лактоза способствует более четкому выявлению кишечных патогенов. В присутствии тиосульфата натрия и соли железа колонии микроорганизмов, продуцирующих сероводород, имеют черный центр. С целью повышения селективности среды и подавления роста цитробактеров и протеев в среду вводят 15 мг/л новобиоцина.
Дифференциально-селективная питательная среда для выделения шигелл и сальмонелл сухая (Гектоеновый энтеро-агар) представляет собой смесь сухих компонентов из расчета, г/л:
| - Пептон мясной или пептон ферментативный для бактериологических целей | 11,0-13,0 |
| - Дрожжевой экстракт | 2,5-3.5 |
| - α-Д- Лактоза, 1-водная | 11,0-13,0 |
| - Сахароза | 11,0-13,0 |
| - Салицин | 0,4-0,6 |
| - Желчные соли № 3 | 4,0-5,0 |
| - Желчь очищенная сухая | 4,0-5,0 |
| - Натрий хлористый | 4,5-5,5 |
| - Натрий серноватистокислый (натрия тиосульфат) б/в | 4,5-5,5 |
| - Железо (III) лимонноаммиачное | 1,4-1,6 |
| - Фуксин кислый | 0,09-0,11 |
| - Бромтимоловый синий | 0,06-0,07 |
| - Натрий углекислый | 0,4-1,0 |
| - Агар бактериологический | (8,0-12,0)*) |
СД, г/л новобиоцин 0,015
Отличием предлагаемой среды от прототипа является: дополнительное содержание натрия углекислого, уменьшенная концентрация дорогостоящего салицина по сравнению со средой-прототипом и использование комбинация импортных желчных солей с желчью очищенной сухой отечественного производства, позволяющие снизить стоимость среды.
В Гектоеновом энтеро-агаре пептон и дрожжевой экстракт являются источниками питательных веществ, необходимых для роста микроорганизмов: азота, витаминов, минеральных солей и аминокислот. Лактоза, сахароза и салицин являются ферментируемыми и дифференцирующими субстратами. Среда обеспечивает селективность в отношении грамположительной и грамотрицательной сопутствующей микрофлоры за счет присутствия в среде желчных солей № 3 и желчи очищенной крупного рогатого скота, а также новобиоцина. В составе среды прототипа желчных солей 9,0 г/л, содержащих холевой и дезоксихолевой кислот- 45-55%. В отечественной очищенной желчи (ЖОГ) - содержание желчных кислот - не менее 40-45%. Наиболее оптимальной в данной среде является концентрация желчных солей №3 и ЖОГ в количествах по 4,5 г/л соответственно. Замена дорогостоящего компонента (желчные соли №3) в Гектоеновом энтеро-агаре не ухудшает качества среды, но значительно ее удешевляет.
Пример 1. Способ получения питательной среды предусматривает смешивание сухих компонентов. Для приготовления среды берут навески следующих ингредиентов, г/л:
| - Пептон мясной | 11,0 |
| - Дрожжевой экстракт | 2,5 |
| - α-Д- Лактоза, 1-водная | 11,0 |
| - Сахароза | 11,0 |
| - Салицин | 0,4 |
| - Желчные соли № 3 | 4,0 |
| - Желчь очищенная сухая | 4,0 |
| - Натрий хлористый | 4,5 |
| - Натрия тиосульфат | 4,5 |
| - Железо (III) лимонноаммиачное | 1,4 |
| - Фуксин кислый | 0,09 |
| - Бромтимоловый синий | 0,06 |
| - Натрий углекислый | 0,4 |
| - Агар бактериологический | 8,0 |
Состав СД, г/л новобиоцин 0,015
Навески размешивают в 1 л дистиллированной воды, кипятят при постоянном помешивании не более 2 мин до полного расплавления агара. Питательную среду не автоклавируют. Содержимое флакона с селективной добавкой растворяют в 5 мл стерильной дистиллированной воды, тщательно перемешивают, вносят в стерильную, охлажденную до температуры 50-55°С питательную среду из расчета 5 мл на 1 л среды и разливают в стерильные чашки Петри.
Готовая питательная среда с СД зеленого цвета.
Для контроля полученной среды использовали тест-штаммы микроорганизмов из Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКПМ-Оболенск».
Готовили стандартную взвесь культуры каждого тест-штамма, соответствующую 10 единицам по стандартному образцу мутности ОСО 42-28-85 П, с использованием стерильного 0,9% раствора натрия хлористого. Полученные взвеси культур десятикратными разведениями (4,5 мл 0,9 % раствора натрия хлорида с 0,5 мл микробной взвеси) доводили до разведения 10-6 (для E. coli ATCC 25922 и E. faecalis 19433- до разведения 10-4)
Для определения ростовых свойств засев производили по 0,1 мл микробной взвеси каждого тест-штамма S.enterica subsp. enterica serovar Enteritidis 11272, S. enterica subsp. enterica serovar Typhimurium 79, S. flexneri 1а 8516 и E. aerogenes АТСС 13048 NCTC 10006 из разведений 10-6 соответственно на две чашки Петри с приготовленной питательной средой и стерильным шпателем распределяли взвесь по поверхности среды. Через 18-24 ч инкубации посевов при температуре (37±1)°С визуально учитывали наличие и характер роста:
- S.enterica subsp. enterica serovar Enteritidis 11272, S. enterica subsp. enterica serovar Typhimurium 79 - обильный рост зеленовато-голубых колоний, с черным центром (продуцирование сероводорода);
- S. flexneri 1а 8516 - обильный рост зеленовато-голубых колоний;
- E. aerogenes АТСС 13048 NCTC 10006 - рост колоний от желтого до оранжево цвета.
Питательная среда ингибирует рост тест-штаммов E. coli ATCC 25922 и E. faecalis АТСС19433 из разведения 10-4.
Результаты биологического контроля лабораторных образцов Гектоенового энтеро-агара на наборе тест-штаммов представлены в таблице 1.
Пример 2. Среду готовят в соответствии с примером 1.
| - Пептон ферментативный для бактериологических целей | 12,0 |
| - Дрожжевой экстракт | 3,0 |
| - α-Д- Лактоза, 1-водная | 12,0 |
| - Сахароза | 12,0 |
| - Салицин | 0,5 |
| - Желчные соли № 3 | 4,5 |
| - Желчь очищенная сухая | 4,5 |
| - Натрий хлористый | 5,0 |
| - Натрий серноватистокислый (натрия тиосульфат) б/в | 5,0 |
| - Железо (III) лимонноаммиачное | 1,5 |
| - Фуксин кислый | 0,1 |
| - Бромтимоловый синий | 0,065 |
| - Натрий углекислый | 0,7 |
| - Агар бактериологический | 10,0 |
СД, г/л новобиоцин 0,015
Результаты биологического контроля, представленные в таблице 1, аналогичны результатам проверки по примеру 1.
Пример 3. Среду готовят в соответствии с примером 1.
| - Пептон мясной | 13,0 |
| - Дрожжевой экстракт | 3,5 |
| - α-Д- Лактоза, 1-водная | 13,0 |
| - Сахароза | 13,0 |
| - Салицин | 0,5 |
| - Желчные соли № 3 | 4,5 |
| - Желчь очищенная сухая | 4,5 |
| - Натрий хлористый | 5,0 |
| - Натрий серноватистокислый (натрия тиосульфат) б/в | 5,0 |
| - Железо (III) лимонноаммиачное | 1,5 |
| - Фуксин кислый | 0,1 |
| - Бромтимоловый синий | 0,065 |
| - Натрий углекислый | 0,7 |
| - Агар бактериологический | 12,0 |
СД, г/л новобиоцин 0,015
Результаты биологического контроля, представленным в таблице 1, аналогичны результатам проверки по примеру 1.
Пример 4. Среду готовят в соответствии с примером 1.
СД, г/л:
| - Пептон ферментативный для бактериологических целей | 10,0 |
| - Дрожжевой экстракт | 2,0 |
| - α-Д- Лактоза, 1-водная | 10,0 |
| - Сахароза | 10,0 |
| - Салицин | 0,35 |
| - Желчные соли № 3 | 3,5 |
| - Желчь очищенная сухая | 3,5 |
| - Натрий хлористый | 4,0 |
| - Натрий серноватистокислый (натрия тиосульфат) б/в | 4,0 |
| - Железо (III) лимонноаммиачное | 1,35 |
| - Фуксин кислый | 0,08 |
| - Бромтимоловый синий | 0,055 |
| - Натрий углекислый | 0,35 |
| - Агар бактериологический | 6,0 |
СД, г/л новобиоцин 0,015
Нарушение количественного соотношения ингредиентов среды в примере 4 ведет к ухудшению ростовых свойств в отношении шигелл и ингибирующих свойств к микробам ассоциантам.
Результаты биологического контроля представлены в таблице 1.
Пример 5. Среду готовят в соответствии с примером 1.
| - Пептон мясной | 14,0 |
| - Дрожжевой экстракт | 4,0 |
| - α-Д- Лактоза, 1-водная | 14,0 |
| - Сахароза | 14,0 |
| - Салицин | 0,7 |
| - Желчные соли № 3 | 5,5 |
| - Желчь очищенная сухая | 5,5 |
| - Натрий хлористый | 6,0 |
| - Натрий серноватистокислый (натрия тиосульфат) б/в | 6,0 |
| - Железо (III) лимонноаммиачное | 1,7 |
| - Фуксин кислый | 0,12 |
| - Бромтимоловый синий | 0,075 |
| - Натрий углекислый | 1,3 |
| - Агар бактериологический | 14,0 |
СД, г/л новобиоцин 0,015
Результаты биологического контроля представлены в таблице 1.
Нарушение количественного соотношения ингредиентов среды в большую сторону на примере 5 ведет к значительному повышению ингибирующих свойств, что негативно сказывается на специфической активности среды.
Из таблицы видно, что предлагаемая питательная среда в соответствии с примерами 1, 2, 3 обладает хорошими ростовыми свойствами, эффективна в накоплении представителей родов шигелл и сальмонелл и подавляет рост ряда грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов.
Визуальный учет результатов выявления бактерий и их дифференциации по способности ферментировать углеводы по окончании срока инкубации посевов показал идентичные результаты в испытуемых (Гектоеновый энтеро-агар) и контрольной (Hektoen Enteric Agar М 467) средах.
Изменение количественного соотношения компонентов среды ведет к нарушению биологических показателей качества предложенной среды.
Так, в случае приготовления среды в соответствии с примерами 4, 5 наблюдается снижение специфической активности и изменение ингибирующей способности среды:
- при концентрации компонентов ниже минимальных пределов наблюдался рост E. faecalis АТСС19433 и E. coli ATCC 25922.
- при концентрации компонентов выше максимальных пределов
подавляется рост S. flexneri 1а 8516 (наличие мелких колоний):
- ингибирующий эффект среды более значительный.
Предварительно были проведены исследования по оптимизации салицина: были изучены варианты Гектоенового энтеро-агара с концентрациями салицина от 0,5 до 2,0 г/л (по аналогии со средой-прототипом). Результаты биологического контроля представлены в таблице 2.
Как видно из таблицы, увеличенная концентрация салицина до значения 2,0 г/л не влияет на специфическую активность и ингибирующую способность Гектоенового энтеро-агара.
Таким образом, разработана сухая отечественная конкурентоспособная питательная среда Гектоеновый энтеро-агар;
Преимуществом отечественной предлагаемой среды, является:
- доступность для потребителей;
- стабильность ростовых свойств в отношении шигелл и сальмонелл при высокой селективности в отношении кишечной палочки;
- снижение концентрации дорогостоящего салицина и частичная замена коммерческих импортных желчных солей на желчь очищенную сухую отечественного производства позволили снизить стоимость среды на 15-20% в сравнении с прототипом.
| Таблица 1. | |||||||||
| Биологические показатели | |||||||||
| № п/п | Наименование тест-штамма | Разведение | Гектоеновый энтеро-агар | Контроль (Hektoen Enteric Agar М 467) |
Контроль посевной дозы на среде ГРМ-агар (среднее значение) |
||||
| Пример 1 | Пример 2 | Пример 3 | Пример 4 | Пример 5 | |||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |
| 1 | S.enterica subsp. enterica serovar Enteritidis 11272 | 10-6 | Круглые зеленовато-голубые колонии, с черным центром (продуцирование сероводорода)/ 78 | Круглые зеленовато-голубые колонии, с черным центром (продуцирование сероводорода)/ 81 |
Круглые зеленовато-голубые колонии, с черным центром (продуцирование сероводорода)/ 85 |
Круглые зеленвато-голубые колонии, с черным центром (продуцирование сероводорода)/ 83 |
Круглые зеленовато-голубые колонии, с черным центром (продуцирование сероводорода)/ 76 |
Рост зеленовато-голубых колоний, с черным центром (продуцирование сероводорода)/ 72 |
79 (типичная морфология) |
| 2 | S. enterica subsp. enterica serovar Typhimurium 79 | 10-6 | Круглые зеленовато-голубые колонии, с черным центром (продуцирование сероводорода)/ 69 | Круглые зеленовато-голубые колонии, с черным центром (продуцирование сероводорода)/ 78 |
Круглые зеленовато-голубые колонии, с черным центром (продуцирование сероводорода)/ 84 |
Круглые зеленовато-голубые колонии, с черным центром (продуцирование сероводорода)/ 74 |
Круглые зеленовато-голубые колонии, с черным центром (продуцирование сероводорода)/ 79 |
Рост зеленовато-голубых колоний, с черным центром (продуцирование сероводорода)/ 58 |
71 (типичная морфология) |
Продолжение таблицы 1.
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |
| 3 | S. flexneri 1а 8516 | 10-6 | Круглые зеленовато-голубые колонии/ 78 |
Круглые зеленовато-голубые колонии/ 84 |
Круглые зеленовато-голубые колонии/ 86 |
Мелкие круглые зеленовато-голубые колонии/ 36 |
Единичные мелкие круглые зеленовато-голубые колонии/ 27 |
Рост зеленовато-голубых колоний/73 | 80 (типичная морфология) |
| 4 | E. aerogenes АТСС 13048 NCTC 10006 | 10-6 | гладкие круглые колонии желто-оранжевого цвета /81 | гладкие круглые колонии желто-оранжевого цвета / 85 |
гладкие круглые колонии желто-оранжевого цвета / 92 |
Гладкие круглые колонии желто-оранжевого цвета / 53 |
Гладкие круглые колонии желто-оранжевого цвета / 68 |
Рост круглых колоний желто-оранжевого цвета /71 | 85 (типичная морфология) |
| 5 | E. coli ATCC 25922 | 10-4 | Нет роста | Нет роста | Нет роста | Обильный рост мелких круглых колоний | Нет роста | Обильный рост мелких колоний желто-оранжевого цвета | сливной рост |
| 6 | E. faecalis АТСС19433 | 10-4 | Нет роста | Нет роста | Нет роста | Обильный рост мелких круглых колоний | Нет рост | Нет роста | сливной рост |
| Таблица 2 | ||||||
| Биологические показатели с пограничными концентрациями салицина. | ||||||
| № п/п | Наименование тест-штамма | Разведение | Гектоеновый энтеро-агар С концентрацией салицина 0,5 г/л |
Гектоеновый энтеро-агар С концентрацией салицина 2,0 г/л |
Контроль (Hektoen Enteric Agar М 467) |
Контроль посевной дозы на среде ГРМ-агар (среднее значение) |
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
| 1. 1 | S.enterica subsp. enterica serovar Enteritidis 11272 | 10-6 | Круглые зеленовато-голубые колонии, с черным центром (продуцирование сероводорода)/ 75 | Круглые зеленовато-голубые колонии, с черным центром (продуцирование сероводорода)/ 77 | Рост зеленовато-голубых колоний, с черным центром (продуцирование сероводорода)/ 71 |
71 (типичная морфология) |
| 2. 2 | S. enterica subsp. enterica serovar Typhimurium 79 | 10-6 | Круглые зеленовато-голубые колонии, с черным центром (продуцирование сероводорода)/ 80 | Круглые зеленовато-голубые колонии, с черным центром (продуцирование сероводорода)/ 78 | Рост зеленовато-голубых колоний, с черным центром (продуцирование сероводорода)/ 78/ |
83 (типичная морфология) |
| S. flexneri 1а 8516 | 10-6 | Круглые зеленовато-голубые колонии/81 | Круглые зеленовато-голубые колонии/79 | Рост зеленовато-голубых колоний /78 | 79 (типичная морфология) | |
| E. aerogenes АТСС 13048 NCTC 10006 | 10-6 | гладкие круглые колонии желто-оранжевого цвета /83 | гладкие круглые колонии желто-оранжевого цвета /80 | Рост круглых колоний желто-оранжевого цвета /71 | 84 (типичная морфология) | |
| E. coli ATCC 25922 | 10-4 | Нет роста | Нет роста | Обильный рост мелких колоний желто-оранжевого цвета | сливной рост | |
| E. faecalis АТСС19433 | 10-4 | Нет роста | Нет роста | Нет роста | сливной рост | |
Claims (2)
- Селективная питательная среда Гектоеновый энтеро-агар сухая для выделения шигелл и сальмонелл, содержащая пептон, дрожжевой экстракт, лактозу, сахарозу и салицин, смесь желчных солей, натрий хлористый, натрий тиосульфат, железа аммонийного цитрат, фуксин кислый, бромтимоловый синий, и агар бактериологический отличающаяся тем, что в качестве смеси желчных кислот содержит желчные соли N3 и дополнительно содержит желчь очищенную сухую, натрий углекислый и селективную добавку (СД) новобиоцин при следующем содержании исходных компонентов, г/л:
-
Пептон мясной или пептон ферментативный для бактериологических целей 11,0-13,0 Дрожжевой экстракт 2,5-3.5 α-Д- Лактоза, 1-водная 11,0-13,0 Сахароза 11,0-13,0 5 Салицин 0,4-0,6 Желчные соли N3 4,0-5,0 Желчь очищенная сухая 4,0-5,0 Натрий хлористый 4,5-5,5 Натрий серноватистокислый (натрия тиосульфат) б/в 4,5-5,5 Железо (III) лимонноаммиачное 1,4-1,6 Фуксин кислый 0,09-0,11 Бромтимоловый синий 0,06-0,07 Натрий углекислый 0,4-1,0 Агар бактериологический 8,0-12,0 СД новобиоцин 0,015
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2812423C1 true RU2812423C1 (ru) | 2024-01-30 |
Family
ID=
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2233885C2 (ru) * | 2002-07-22 | 2004-08-10 | Научно-производственное объединение "Питательные среды" | Питательная среда для выделения шигелл и сальмонелл |
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2233885C2 (ru) * | 2002-07-22 | 2004-08-10 | Научно-производственное объединение "Питательные среды" | Питательная среда для выделения шигелл и сальмонелл |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Hectoen Enteric Agar M467, Technical Data, HIMEDIA Laboratories, 2018; найдено в интернет: https://exodocientifica.com.br/_technical-data/M467. ШЕПЕЛИН А.П., ПОЛОСЕНКО О.В. "Новая отечественная питательная среда для выявления шигелл и сальмонелл-Гектоенагар", Справочник заведующего КДЛ, 2021, N 9, с.13-24. * |
| ШЕПЕЛИН А.П. и др. "Клинические испытания питательных сред для накопления сальмонелл"; Клиническая лабораторная диагностика, 2018, N 63(9), с.557-563. ПОЛОСЕНКО О.В., ШЕПЕЛИН А.П. "Сравнительный анализ питательных сред для определения биохимических свойств энтеробактерий"; Бактериология, 2020, т.5,N 1, с.41-47. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5951977A (en) | Competitive exclusion culture for swine | |
| Mossel et al. | Oxytetracycline‐glucose‐yeast extract agar for selective enumeration of moulds and yeasts in foods and clinical material | |
| FI98379C (fi) | Elatusaine ja menetelmä salmonellojen tunnistamiseksi | |
| SK281141B6 (sk) | Probiotikum na inhibíciu kolonizácie vtákov mikroorganizmom rodu salmonella, spôsob jeho izolácie a krmivo s jeho obsahom | |
| DESMASURES et al. | Monitoring the microbiology of high quality milk by monthly sampling over 2 years | |
| VURAL et al. | The examination of the microbiologic quality in Orgu cheese (braided cheese) samples | |
| Abdullah et al. | Characterization of bacterial pathogens isolated from calf diarrhoea in Panchagarh district of Bangladesh | |
| CN101970682B (zh) | 检测和/或鉴别艰难梭状芽孢杆菌的方法 | |
| JP6033290B2 (ja) | チャノキ葉から分離した新規なラクトバチルス・プランタラム | |
| HENDRATI et al. | Characterization of Bifidobacteria from infant feces with different mode of birth at Purwokerto, Indonesia | |
| Elbagory et al. | Impact of probiotic strains on growth of some food poisoning bacteria from milk and soft cheese | |
| RU2812423C1 (ru) | Дифференциально-селективная питательная среда для выделения шигелл и сальмонелл сухая (Гектоеновый энтеро-агар) | |
| Walker et al. | A comparison of media and methods for the recovery of Yersinia enterocolitica and Yersinia enterocolitica‐like bacteria from milk containing simulated raw milk microfloras | |
| Moats | Update on Salmonella in foods: selective plating media and other diagnostic media | |
| Domermuth et al. | A medium for isolation and tentative identification of fecal streptococci, and their role as avian pathogens | |
| RU2701343C1 (ru) | Питательная среда для выявления молочнокислых бактерий (варианты) | |
| SURAJ | ENUMERATION AND DETECTION OF ANTIBIOTIC SUSCEPTIBILITY PATTERN OF COLIFORM BACTERIA FROM MILK SAMPLES IN KATHMANDU. | |
| KR20020025395A (ko) | 된장에서 분리한 바실러스 메가테리움 ｐｓ352 | |
| Azam | Isolation and identification of coliform bacteria from spicy yogurt milk and plain butter milk sold in different markets of Dhaka City | |
| US6165776A (en) | Selective and differential medium for isolation of Listeria Monocytogenes | |
| Sharma et al. | Evaluation of culture media for the isolation of salmonellae from feces | |
| RU2795907C1 (ru) | Селективная питательная среда для выделения аэромонад из водных объектов | |
| RU2709136C1 (ru) | Питательная среда для выделения Pseudomonas aeruginosa | |
| CN107723336A (zh) | 金黄色葡萄球菌荧光显色培养基 | |
| RU2792438C1 (ru) | Селективная питательная среда с маннитом, желчью и полимиксином для выявления бактерий родов Proteus, Morganella, Providencia сухая |