JP2014507455A - β−セクレターゼ（ＢＡＣＥ）の阻害剤として有用な３，４−ジヒドロ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−１−イルアミン誘導体 - Google Patents

Abstract

【化１】

本発明は、βサイトアミロイド切断酵素、ＢＡＣＥ、ＢＡＣＥ１、Ａｓｐ２、またはメマプシン２としても知られるβ−セクレターゼの阻害剤としての新規な３，４−ジヒドロ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−１−イルアミン誘導体に関する。本発明は、また、このような化合物を含む医薬組成物、このような化合物および組成物の製造方法、ならびに、アルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知障害、老化現象、認知症、レヴィー小体型認知症、ダウン症候群、脳卒中に伴う認知症、パーキンソン病に伴う認知症またはβアミロイドに関連する認知症などの、β−セクレターゼが関与する障害を予防および治療するためのこのような化合物および組成物の使用にも関する。

Description

本発明は、βサイトアミロイド切断酵素、ＢＡＣＥ、ＢＡＣＥ１、Ａｓｐ２、またはメマプシン２としても知られるβ−セクレターゼの阻害剤としての、新規な３，４−ジヒドロ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−１−イルアミン誘導体に関する。本発明は、また、このような化合物を含む医薬組成物、このような化合物および組成物の製造方法、ならびに、アルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知障害、老化現象、認知症、レヴィー小体型認知症、ダウン症候群、脳卒中に伴う認知症、パーキンソン病に伴う認知症、またはβアミロイドに関連する認知症などのβ−セクレターゼが関与する障害を予防および治療するためのこのような化合物および組成物の使用にも関する。

アルツハイマー病（ＡＤ）は、老化に伴う神経変性疾患である。ＡＤ患者は、認知障害および記憶喪失、ならびに不安症などの行動問題を患う。ＡＤに罹患している人の９０％超が散発型の障害を有するが、この症例の１０％未満は家族性または遺伝性である。米国では、６５歳で１０人に約１人がＡＤを有するが、８５歳では２人に１人がＡＤに罹患している。初期診断からの平均寿命は７〜１０年であり、ＡＤ患者は、非常に費用のかかる介護付き生活施設での、または家族による広範な介護を必要とする。人口に占める高齢者の数が増加するにつれ、ＡＤに対する医学的関心が高まっている。現在使用可能なＡＤの治療法は単にこの疾患の症状を治療するに過ぎず、それには認知性を改善するためのアセチルコリンエステラーゼ阻害剤、ならびにこの病気に伴う行動問題をコントロールするための抗不安薬および抗精神病薬が含まれる。

ＡＤ患者の脳における顕著な病理学的特徴は、タウタンパク質の過剰リン酸化によって生じる神経原線維変化と、β−アミロイド１−４２（Ａβ１−４２）ペプチドの凝集によって形成されるアミロイド斑である。Ａβ１−４２は、オリゴマー、次いで原線維を形成し、最終的にはアミロイド斑を形成する。オリゴマーおよび原線維はとりわけ神経毒性があると考えられており、ＡＤに関連する神経損傷の大部分を引き起こし得る。Ａβ１−４２の生成を防止する薬剤は、ＡＤ治療用の疾患緩和剤となる可能性がある。Ａβ１−４２は、７７０個のアミノ酸から構成されるアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）から生成される。Ａβ１−４２のＮ末端がβ−セクレターゼ（ＢＡＣＥ）により切断された後、γ−セクレターゼによりＣ末端が切断される。Ａβ１−４２の他に、γ−セクレターゼは、主要な切断産物であるＡβ１−４０、ならびにＡβ１−３８およびＡβ１−４３も遊離する。これらのＡβ型も凝集して、オリゴマーおよび原線維を形成し得る。従って、ＢＡＣＥの阻害剤は、Ａβ１−４２ならびにＡβ１−４０、Ａβ１−３８およびＡβ１−４３の生成を防止するものと期待され、ＡＤ治療における治療薬となる可能性がある。

本発明は、式（Ｉ）

の化合物、またはその互変異性体もしくは立体異性体の形態
（式中、
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３は、水素、ハロ、シアノ、Ｃ_１〜３アルキル、モノ−およびポリハロ−Ｃ_１〜３アルキル、ならびにＣ_３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択され；
Ｒ^４は、水素、Ｃ_１〜３アルキル、メトキシメチル、Ｃ_３〜６シクロアルキル、モノ−およびポリハロ−Ｃ_１〜３アルキル、ホモアリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され；
Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、Ｘ^４は、独立してＣ（Ｒ^５）またはＮであるが、但し、その中でＮを表すのは２個以下であり；Ｒ^５は、水素、ハロ、シアノ、Ｃ_１〜３アルキル、モノ−およびポリハロ−Ｃ_１〜３アルキル、ならびにＣ_３〜６シクロアルキルからなる群から選択され；
Ｌは、結合または−ＮＨＣＯ−であり；
Ａｒは、ホモアリールまたはヘテロアリールであり；
ここで、ホモアリールは、フェニル、またはハロ、シアノ、Ｃ_１〜３アルキル、Ｃ_１〜３アルキルオキシ、モノ−およびポリハロ−Ｃ_１〜３アルキル、ならびにモノ−およびポリハロ−Ｃ_１〜３アルキルオキシからなる群から選択される１個、２個もしくは３個の置換基で置換されたフェニルであり；
ヘテロアリールは、それぞれ任意選択によりハロ、シアノ、Ｃ_１〜３アルキル、Ｃ_１〜３アルキルオキシ、モノ−およびポリハロ−Ｃ_１〜３アルキル、ならびにモノ−およびポリハロ−Ｃ_１〜３アルキルオキシからなる群から選択される１個、２個または３個の置換基で置換された、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、ピリダジル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、トリアゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、オキサゾリル、およびオキサジアゾリルからなる群から選択される）、または、
その付加塩もしくは溶媒和物に関する。

本発明を例証するものとして、薬学的に許容される担体と前述の化合物のいずれかとを含む医薬組成物がある。本発明の例証として、前述の化合物のいずれかと薬学的に許容される担体とを混合することにより製造される医薬組成物がある。本発明を例証するものとして、前述の化合物のいずれかと薬学的に許容される担体とを混合する工程を含む医薬組成物の製造方法がある。

本発明を例示するものとして、必要とする対象に前述の化合物または医薬組成物のいずれかを治療有効量投与する工程を含む、β−セクレターゼ酵素により媒介される障害の治療方法がある。

本発明をさらに例示するものとして、必要とする対象に前述の化合物または医薬組成物のいずれかを治療有効量投与する工程を含むβ−セクレターゼ酵素の阻害方法がある。

本発明の一例として、必要とする対象に前述の化合物または医薬組成物のいずれかを治療有効量投与する工程を含む、アルツハイマー病、軽度認知障害、老化現象、認知症、レヴィー小体型認知症、ダウン症候群、脳卒中に伴う認知症、パーキンソン病に伴う認知症およびβアミロイドに関連する認知症からなる群から選択される障害、好ましくはアルツハイマー病の治療方法がある。

本発明の別の例として、必要とする対象の（ａ）アルツハイマー病、（ｂ）軽度認知障害、（ｃ）老化現象、（ｄ）認知症、（ｅ）レヴィー小体型認知症、（ｆ）ダウン症候群、（ｇ）脳卒中に伴う認知症、（ｈ）パーキンソン病に伴う認知症、および（ｉ）βアミロイドに関連する認知症の治療に使用される前述の化合物のいずれかがある。

本発明は、前述の式（Ｉ）の化合物ならびにその薬学的に許容される塩および溶媒和物に関する。式（Ｉ）の化合物は、β−セクレターゼ酵素（βサイト切断酵素、ＢＡＣＥ、ＢＡＣＥ１、Ａｓｐ２、またはメマプシン２としても知られる）の阻害剤であり、アルツハイマー病、軽度認知障害、老化現象、認知症、脳卒中に伴う認知症、レヴィー小体型認知症、ダウン症候群、パーキンソン病に伴う認知症、およびβアミロイドに関連する認知症、好ましくはアルツハイマー病、軽度認知障害、または認知症、より好ましくはアルツハイマー病の治療に有用である。

本発明の一実施形態では、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３は、水素、ハロ、シアノ、Ｃ_１〜３アルキル、モノ−およびポリハロ−Ｃ_１〜３アルキル、ならびにＣ_３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択され；
Ｒ^４は、水素、Ｃ_１〜３アルキル、Ｃ_３〜６シクロアルキル、モノ−およびポリハロ−Ｃ_１〜３アルキル、ホモアリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され；
Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、Ｘ^４は、独立してＣ（Ｒ^５）またはＮであるが、但し、その中でＮを表すのは２個以下であり；Ｒ^５は、水素、ハロ、シアノ、Ｃ_１〜３アルキル、モノ−およびポリハロ−Ｃ_１〜３アルキル、ならびにＣ_３〜６シクロアルキルからなる群から選択され；
Ｌは、結合または−ＮＨＣＯ−であり；
Ａｒは、ホモアリールまたはヘテロアリールであり；
ここで、ホモアリールは、フェニル、またはハロ、シアノ、Ｃ_１〜３アルキル、Ｃ_１〜３アルキルオキシ、モノ−およびポリハロ−Ｃ_１〜３アルキル、ならびにモノ−およびポリハロ−Ｃ_１〜３アルキルオキシからなる群から選択される１個、２個もしくは３個の置換基で置換されたフェニルであり；
ヘテロアリールは、それぞれ任意選択によりハロ、シアノ、Ｃ_１〜３アルキル、Ｃ_１〜３アルキルオキシ、モノ−およびポリハロ−Ｃ_１〜３アルキル、ならびにモノ−およびポリハロ−Ｃ_１〜３アルキルオキシからなる群から選択される１個、２個、または３個の置換基で置換された、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、ピリダジル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、トリアゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、オキサゾリル、およびオキサジアゾリルからなる群から選択される；または、
その付加塩もしくは溶媒和物。

本発明の一実施形態では、Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３は、水素およびＣ_１〜３アルキルから独立して選択され；
Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、Ｘ^４は、独立してＣ（Ｒ^５）であり、ここで各Ｒ^５は水素およびハロから選択され；
Ｌは、結合または−ＮＨＣＯ−であり；
Ａｒは、ホモアリールまたはヘテロアリールであり；
ここで、ホモアリールは、フェニル、またはハロ、シアノ、Ｃ_１〜３アルキル、Ｃ_１〜３アルキルオキシ、およびポリハロ−Ｃ_１〜３アルキルオキシからなる群から選択される１個もしくは２個の置換基で置換されたフェニルであり；
ヘテロアリールは、それぞれ任意選択によりハロ、シアノ、Ｃ_１〜３アルキル、Ｃ_１〜３アルキルオキシ、およびポリハロ−Ｃ_１〜３アルキルオキシからなる群から選択される１個または２個の置換基で置換された、ピリジル、ピリミジル、およびピラジニルからなる群から選択される；または、
その付加塩もしくは溶媒和物。

本発明の別の実施形態では、Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３は、水素であり；
Ｘ^１は、ＣＦであり；
Ｘ^２、Ｘ^３、Ｘ^４は、ＣＨであり；
Ｌは、結合または−ＮＨＣＯ−であり；Ａｒは、ホモアリールまたはヘテロアリールであり；
ここで、ホモアリールは、クロロで置換されたフェニルであり；
ヘテロアリールは、それぞれ任意選択によりクロロ、フルオロ、シアノ、メチル、およびメトキシからなる群から選択される１個または２個の置換基で置換された、ピリジルおよびピリミジルからなる群から選択される；または、
その付加塩もしくは溶媒和物。

別の実施形態では、Ｒ４で置換された炭素原子はＲ配置を有する。

本発明の一実施形態では、Ｒ^１およびＲ^３は水素であり、
Ｒ^２は、水素、フルオロ、またはトリフルオロメチルであり；
Ｒ^４は、メチルまたはジフルオロメチルであり；
Ｘ^１は、ＣＨまたはＣＦであり；
Ｘ^２、Ｘ^３、およびＸ^４は、ＣＨであり；
Ｌは、−ＮＨＣＯ−であり；
Ａｒは、５−クロロピリジン−２−イル、５−シアノピリジン−２−イル、５−フルオロピリジン−２−イル、５−シアノ−３−フルオロオロピリジン−２−イル、５−メトキシピラジン−２−イルまたは１−ジフルオロメチルピラゾール−３−イルである；または、
その付加塩もしくは溶媒和物。

定義
「ハロ」は、フルオロ、クロロおよびブロモを意味するものとし；「Ｃ_１〜３アルキル」は、炭素数１、２または３の直鎖または分岐鎖の飽和アルキル基、例えば、メチル、エチル、１−プロピルおよび２−プロピルを意味するものとし；「Ｃ_１〜３アルキルオキシ」は、Ｃ_１〜３アルキルが前述の通りであるエーテル基を意味するものとし；「モノ−およびポリハロＣ_１〜３アルキル」は、１個、２個、３個、または、可能な場合、４個以上の前述のハロ原子で置換された前述のＣ_１〜３アルキルを意味するものとし；「モノ−およびポリハロＣ_１〜３アルキルオキシ」は、モノ−およびポリハロＣ_１〜３アルキルが前述の通りであるエーテル基を意味するものとし；「Ｃ_３〜６シクロアルキル」は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルを意味するものとし；「Ｃ_３〜６シクロアルカンジイル」は、シクロプロパンジイル、シクロブタンジイル、シクロペンタンジイルおよびシクロヘキサンジイルなどの２価の基を意味するものとする。

本明細書で使用する場合、「対象（ｓｕｂｊｅｃｔ）」という用語は、治療、観察、または実験の目的物（ｏｂｊｅｃｔ）となる、または目的物となった動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを指す。

本明細書で使用する場合、「治療有効量」という用語は、治療される疾患または障害の症状の緩和を含む、研究者、獣医、医師または他の臨床医が求める、組織系、動物、またはヒトにおける生物学的または医学的反応を誘発する薬理活性化合物または医薬剤の量を意味する。

本明細書で使用する場合、「組成物」という用語は、特定の成分を特定の量で含む製品、ならびに特定の量の特定の成分の組み合わせから直接または間接的に得られる任意の製品を包含するものとする。上記および以下において、「式（Ｉ）の化合物」という用語は、その付加塩、溶媒和物および立体異性体を含むものとする。

式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ−１）の化合物と動的平衡状態で共存する。

「立体異性体」または「立体化学的異性体の形態」という用語は、上記または下記において、互換的に使用される。
本発明は、式（Ｉ）の化合物の全ての立体異性体を、純粋な立体異性体としてまたは２種以上の立体異性体の混合物として含む。鏡像異性体は、重ね合わせることができない互いの鏡像となっている立体異性体である。１組の鏡像異性体の１：１混合物は、ラセミ体またはラセミ混合物である。ジアステレオマー（またはジアステレオ異性体）は、鏡像異性体ではない立体異性体である、即ち、それらは鏡像の関係にない。化合物が二重結合を含む場合、置換基は、Ｅ配置またはＺ配置となり得る。化合物が二置換シクロアルキル基を含有する場合、置換基は、ｃｉｓ配置またはｔｒａｎｓ配置となり得る。従って、本発明は、鏡像異性体、ジアステレオマー、ラセミ体、Ｅ異性体、Ｚ異性体、ｃｉｓ異性体、ｔｒａｎｓ異性体、およびこれらの混合物を含む。

絶対配置は、カーン−インゴルド−プレログ・システムに従って明記される。不斉原子での配置はＲまたはＳで明記される。絶対配置が未知の分割された化合物は、それらが平面偏光を回転させる方向に応じて、（＋）または（−）で示すことができる。

特定の立体異性体が同定されるとき、これは、前記立体異性体が他の異性体を実質的に含まない、即ち、共存する他の異性体が５０％未満、好ましくは２０％未満、より好ましくは１０％未満、さらにより好ましくは５％未満、特に２％未満、および最も好ましくは１％未満であることを意味する。従って、式（Ｉ）の化合物が、例えば、（Ｒ）と明記されるとき、これは、化合物が（Ｓ）異性体を実質的に含まないことを意味し；式（Ｉ）の化合物が、例えば、Ｅと明記されるとき、これは、化合物がＺ異性体を実質的に含まないことを意味し；式（Ｉ）の化合物が、例えば、ｃｉｓと明記されるとき、これは、化合物がｔｒａｎｓ異性体を実質的に含まないことを意味する。

さらに、本発明の化合物の結晶形の幾つかは多形として存在することがあり、このようなものとして本発明に含まれるものとする。さらに、本発明の化合物の幾つかは、水（即ち、水和物）または一般的な有機溶媒と溶媒和物を形成することができ、このような溶媒和物も本発明の範囲内に包含されるものとする。

医薬に使用される場合、本発明の化合物の塩は、無毒の「薬学的に許容される塩」を指す。しかし、他の塩も、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩の製造に有用な場合がある。本化合物の好適な薬学的に許容される塩としては、例えば、化合物の溶液を、塩酸、硫酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、安息香酸、クエン酸、酒石酸、炭酸、またはリン酸などの薬学的に許容される酸の溶液と混合することにより生成し得る酸付加塩が挙げられる。さらに、本発明の化合物が酸性部分を有する場合、その好適な薬学的に許容される塩としては、アルカリ金属塩、例えば、ナトリウム塩またはカリウム塩；アルカリ土類金属塩、例えば、カルシウム塩またはマグネシウム塩；および好適な有機配位子と共に形成された塩、例えば、四級アンモニウム塩を挙げることができる。

薬学的に許容される塩の製造に使用され得る代表的な酸としては、以下：酢酸、２，２−ジクロロ酢酸、アシル化アミノ酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、Ｌ−アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４−アセトアミド安息香酸、（＋）−樟脳酸、樟脳スルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、ケイ皮酸、クエン酸、シクラミン酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチジン酸、グルコヘプトン酸、Ｄ−グルコン酸、Ｄ−グルコロン酸（Ｄ−ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、Ｌ−グルタミン酸、β−オキソ−グルタル酸、グリコール酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、（＋）−Ｌ−乳酸、（±）−ＤＬ−乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、（−）−Ｌ−リンゴ酸、マロン酸、（±）−ＤＬ−マンデル酸、メタンスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ニコチン酸、硝酸、オレイン酸、オロト酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、リン酸、Ｌ−ピログルタミン酸、サリチル酸、４−アミノ−サリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、硫酸、タンニン酸、（＋）−Ｌ−酒石酸、チオシアン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロメチルスルホン酸、およびウンデシレン酸が挙げられるが、これらに限定されるものではない。薬学的に許容される塩の製造に使用され得る代表的な塩基としては、以下：アンモニア、Ｌ−アルギニン、ベネタミン、ベンザチン、水酸化カルシウム、コリン、ジメチルエタノールアミン、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、２−（ジエチルアミノ）−エタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチル−グルカミン、ヒドラバミン、１Ｈ−イミダゾール、Ｌ−リシン、水酸化マグネシウム、４−（２−ヒドロキシエチル）−モルホリン、ピペラジン、水酸化カリウム、１−（２−ヒドロキシエチル）−ピロリジン、第二級アミン、水酸化ナトリウム、トリエタノールアミン、トロメタミン、および水酸化亜鉛が挙げられるが、これらに限定されるものではない。

本発明の化合物の化学名は、ケミカル・アブストラクト・サービスにより合意された命名法に従って命名された。

Ａ．最終化合物の製造
実験手順１
式（Ｉ）の最終化合物は、式（ＩＩ）の中間化合物を、例えば塩化アンモニウムまたはアンモニア水などの適切なアンモニア源と、反応スキーム（１）に従って反応させること、即ち、例えば水またはメタノールなどの好適な反応不活性溶媒中で、例えば、反応混合物を６０〜９０℃で、例えば４〜１００時間加熱することなどの熱条件下で行われる反応により製造することができる。反応スキーム（１）中、変数は全て式（Ｉ）に記載の通り
である。

実験手順２
さらに、式（Ｉ−ａ）（式中、Ｌは−ＮＨＣＯ−である）の最終化合物は、式（ＩＩＩ−ａ）の中間化合物を式（ＩＶ）の中間体と、反応スキーム（２）に従って反応させること、即ち、例えばジクロロメタンなどの好適な反応不活性溶媒中で、例えば４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライドなどの縮合剤の存在下、例えば、反応混合物を２５℃で、例えば２時間加熱することなどの熱条件下で行われる反応により製造することができる。反応スキーム（２）中、変数は全て式（Ｉ）に記載の通りである。

実験手順３
式（Ｉ−ｂ）（式中、Ｌは結合である）の最終化合物は、式（ＩＩＩ−ｂ）の中間化合物を式（Ｖ）の中間体と、反応スキーム（３）に従って反応させること、即ち、好適な反応不活性溶媒、または、例えば１，４−ジオキサン／エタノールなどの不活性溶媒の混合物中で、例えば炭酸カリウムなどの好適な塩基、例えばテトラキス（トリフェニル−ホスフィン）パラジウム（０）などのＰｄ錯体触媒の存在下、例えば、反応混合物を８０℃で、例えば２０時間加熱すること、または、例えば、反応混合物にマイクロ波を照射し１５０℃で１０分間〜３０分間加熱することなどの熱条件下で行われる反応により製造することができる。反応スキーム（３）中、変数は全て式（Ｉ）に記載の通りであり、Ｗはハロである。Ｒ^６およびＲ^７は水素もしくはアルキルであってもよく、または、Ｒ^６とＲ^７は一緒に、例えば式−ＣＨ_２ＣＨ_２−、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−、もしくは−Ｃ（ＣＨ_３）
_２Ｃ（ＣＨ_３）_２−の２価の基を形成してもよい。

前述の製造中の多くの中間体および出発物質は、当該技術分野で公知の前記または類似の化合物の製造方法に従って製造することができる既知の化合物であり、幾つかの中間体は新規である。多くのこのような製造方法について以下により詳細に説明する。

Ｂ．中間化合物の製造
実験手順４
式（ＩＩＩ−ａ）の中間体は、式（ＩＩＩ−ｂ）の対応する中間化合物から、反応スキーム（４）に従い、当該技術分野で公知のブッフバルト・ハートウィッグ型カップリング法の後、酸加水分解を行うことにより製造することができる。前記カップリングは、式（ＩＩＩ−ｂ）の中間化合物をベンゾフェノンイミンで、例えばトルエンなどの好適な反応不活性溶媒中で、例えばナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシドなどの好適な塩基、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）などのＰｄ錯体触媒の存在下、例えば、反応混合物を１００℃で、例えば２時間加熱することなどの熱条件下で処理することにより行うことができる。次いで、得られた式（ＶＩ）の中間化合物を、例えば塩酸などの強酸で、例えばイソプロピルアルコールなどの好適な反応不活性溶媒中、例えば２５℃で、例えば１時間などの熱条件下で処理することにより、式（ＩＩＩ−ａ）の中間化合物に変換する。あるいは、式（ＩＩＩ−ｂ）の中間体から出発し、アジ化ナトリウム、ならびにＮ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミンなどの銅の配位子、炭酸ナトリウムなどの好適な塩基の存在下、ＤＭＳＯなどの反応不活性溶媒中で、反応混合物を１１０℃で２５時間加熱することなどの熱条件下で銅触媒カップリングを行うことにより、１段階で式（ＩＩＩ−ａ）の中間体を得ることができる。反応スキーム（４）中、変数は全て式（Ｉ）に記載の通りであり、Ｗはハロである。

実験手順５
式（ＶＩＩ）の中間体は、式（ＶＩＩＩ−ｃ）の対応する中間体から、反応スキーム（５）による当該技術分野で公知のニトロからアミノへの還元法に従って製造することができる。例えば、前記還元は、水素雰囲気下、例えばパラジウム炭素などの適切な触媒の存在下で、反応物を撹拌するまたはそれらを流動反応器を通過させることにより、行うことができる。好適な溶媒としては、例えば、水、例えばメタノールおよびエタノール等のアルカノール、例えば酢酸エチル等のエステルがある。前記還元反応の速度を向上させるために、反応混合物の温度および／または圧力を上昇させることが有利な場合がある。例えば、チオフェン等の触媒毒を反応混合物に添加することにより、反応物および反応生成物中の特定の官能基の望ましくないさらなる水素化を防止することができる。反応スキーム（５）中、変数は全て式（Ｉ）に記載の通りである。

実験手順６
式（ＩＩＩ−ａ）の中間化合物は、式（ＶＩＩ）の中間化合物から、反応スキーム（６）に従って製造することができる。前記変換は、好都合には、前記中間体を、例えば塩化アンモニウムおよびエタノール性アンモニアなどのアンモニア源で、例えば、反応混合物を８０℃で、例えば７２時間加熱することなどの熱条件下で処理することにより行うことができる。反応スキーム（６）中、変数は全て式（Ｉ）に記載の通りである。

実験手順７
式（ＩＸ）（式中、Ｌは−ＮＨＣＯ−である）の中間体は、式（ＶＩＩ）の中間化合物を式（ＩＶ）の中間体と、反応スキーム（７）に従って反応させること、即ち、例えばメタノールなどの好適な反応不活性溶媒中で、例えば４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライドなどの縮合剤の存在下、例えば、反応混合物を２５℃で、例えば３時間加熱することなどの熱条件下で行われる反応により製造することができる。反応スキーム（７）中、変数は全て式（Ｉ）に記載の通りである。

実験手順８
式（ＩＩＩ−ｂ）および（ＩＩＩ−ｃ）の中間化合物は、一般に、下記の反応スキーム（８）および（９）に示す反応工程に従って製造することができる。

上記反応スキーム（８）中のアミジン誘導体は、好都合には、対応するチオアミド誘導体から、当該技術分野で公知のチオアミドからアミジンへの変換法に従って製造することができる（反応工程Ａ）。前記変換は、好都合には、前記チオアミドを、例えば塩化アンモニウムまたはアンモニア水などのアンモニア源で、例えば水またはメタノール等の好適な反応不活性溶媒中で、例えば、反応混合物を６０〜９０℃で、例えば６〜１００時間加熱することなどの熱条件下で処理することにより行うことができる。類似の条件で、メチ
ル化中間体（ＶＩＩＩ−ｂ）および（ＶＩＩＩ−ｃ）も所望のアミジンに変換することができる（反応工程Ａ’）。中間体（ＶＩＩＩ−ｂ）および（ＶＩＩＩ−ｃ）は、好都合には、対応するチオアミドから出発し、アセトンなどの好適な溶媒に溶解し、炭酸カリウムなどの塩基、およびヨウ化メチルなどのメチル化剤の存在下、室温で３時間などの熱条件下で製造することができる（反応工程Ｂ）。

上記反応スキーム（８）中のチオアミド誘導体は、アミド誘導体から当該技術分野で公知の加硫法に従って製造することができる（反応工程Ｃ）。前記変換は、好都合には、前記アミドを、例えば五硫化リンまたは２，４−ビス−（４−メトキシ−フェニル）−１，３−ジチア−２，４−ジホスフェタン２，４−ジスルフィド［ローソン試薬］などの加硫剤で、例えばテトラヒドロフランまたは１，４−ジオキサン等の反応不活性溶媒中、ピリジンのような好適な塩基の存在下、例えば、反応混合物を５０〜１００℃で、例えば２４時間加熱することなどの熱条件下で処理することにより、行うことができる。

上記反応スキーム（８）中の式（ＸＩ−ｂ）および（ＸＩ−ｃ）のアミド誘導体は、式（ＸＩＩ−ｂ）および（ＸＩＩ−ｃ）の対応する中間化合物から、当該技術分野で公知の環化法に従って製造することができる（反応工程Ｄ）。前記環化は、好都合には、式（ＸＩＩ−ｂ）および（ＸＩＩ−ｃ）の中間化合物を酢酸カリウムまたはナトリウムメトキシドなどの好適な塩基で、例えばエタノール等の好適な反応溶媒中、５５℃〜１００℃で、確実に反応が終了する時間、処理することにより行うことができる。

上記反応スキーム（８）中の式（ＸＩＩ−ｂ）および（ＸＩＩ−ｃ）の中間化合物は、式（ＸＩＩＩ−ｂ）および（ＸＩＩ−ｃ）の対応する中間化合物から、当該技術分野で公知の方法に従って行われる保護基の除去により、製造することができる。

実験手順９

上記反応スキーム（９）中の式（ＸＩＩＩ−ｂ）および（ＸＩＩＩ−ｃ）の中間体は、式（ＸＶ−ｂ）および（ＸＶ−ｃ）（式中、Ｚ^１は、例えばｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基などのアミンの保護基である）の対応する中間化合物から、当該技術分野で公知のアルキル化法に従って製造することができる（反応工程Ｆ）。前記アルキル化は、好都合には、(ＸＶ−ｂ）および（ＸＶ−ｃ）をそれぞれ式（ＸＩＶ）の対応する中間化合物と共に、例えば炭酸ナトリウムまたは炭酸セシウムなどの好適な塩基の存在下で、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはジメトキシスルホキシドなどの好適な不活性溶媒中、例えば０℃などの低温で３０分間、次いで、例えば１００℃などの適度の高温で２４時間〜
１００時間処理すること、または、例えば、反応混合物にマイクロ波を照射し１３０℃で、例えば３０分間〜４５分間加熱することにより行うことができる。

上記反応スキーム（９）中の式（ＸＶ−ｂ）および（ＸＶ−ｃ）の中間体は、式（ＸＶＩ−ｂ）および（ＸＶＩ−ｃ）の中間化合物を当該技術分野で公知の酸化法に従って反応させることにより製造することができる（反応工程Ｇ）。前記酸化は、好都合には、式（ＸＶＩ−ｂ）および（ＸＶＩ−ｃ）の対応する中間化合物を、例えば過ヨウ素酸ナトリウムなどの酸化剤で、例えばアセトニトリル／水などの好適な不活性溶媒中、塩化ルテニウム（ＩＩＩ）の存在下、例えば２５℃などの適度の高温で、例えば２時間処理することにより行うことができる。

上記反応スキーム（９）中の式（ＸＶＩ−ｂ）および（ＸＶＩ−ｃ）の中間体は、式（ＸＶＩＩ−ｂ）および（ＸＶＩＩ−ｃ）の中間化合物を当該技術分野で公知のスルファミン酸エステル生成法に従って反応させることにより製造することができる（反応工程Ｈ）。前記変換は、好都合には、式（ＸＶＩＩ−ｂ）および（ＸＶＩＩ−ｃ）の対応する中間化合物を塩化チオニルと、例えばピリジンなどの塩基の存在下、例えばアセトニトリルなどの好適な反応不活性溶媒中、例えば−４０℃などの低温で、例えば３０分間、次いで、例えば２５℃などの適度の高温で、例えば２４〜７２時間処理することにより行うことができる。

式（ＸＶＩＩ−ｂ）および（ＸＶＩＩ−ｃ）（式中、Ｚ^１は、例えばｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基などのアミンの保護基である）の中間体化合物は、一般に、文献に記載されている当該技術分野で公知のストレッカー型の方法に従って製造することができる。

実験手順１０
式（ＸＶＩＩＩ）の中間化合物（式中、Ｑはハロまたはニトロである）は、式（ＸＩ−ｂ）または（ＸＩ−ｃ）の中間化合物から、反応スキーム（１４）、即ち、例えば、ジクロロメタンなどの好適な反応不活性溶媒中で、例えばトリメチル−オキソニウムテトラフルオロボレートなどのメチル化剤の存在下、例えば２５℃で、例えば４日間などの熱条件下で行われる反応に従って製造することができる。次いで、中間体（ＸＶＩＩＩ）を、例えば塩化アンモニウムおよびエタノール性アンモニアなどのアンモニア源と、例えば、反応混合物を８０℃で、例えば３６時間加熱することなどの熱条件下で反応させることにより、アミジン（ＩＩＩ−ｂ）および（ＩＩＩ−ｃ）にさらに変換することができる。反応スキーム（１０）中、変数は全て式（Ｉ）に記載の通りであり、Ｑはハロまたはニトロである。

薬理学
本発明の化合物およびその薬学的に許容される組成物はＢＡＣＥを阻害し、従って、ア
ルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知障害（ＭＣＩ）、老化現象、認知症、レヴィー小体型認知症、脳アミロイド血管症、多発梗塞性認知症、ダウン症候群、パーキンソン病に伴う認知症、およびβアミロイドに関連する認知症の治療または予防に有用となり得る。

本発明は、医薬として使用される、一般式（Ｉ）の化合物、その立体異性体の形態、またはその薬学的に許容される酸付加塩もしくは塩基付加塩、またはその溶媒和物に関する。

本発明は、また、ＡＤ、ＭＣＩ、老化現象、認知症、レヴィー小体型認知症、脳アミロイド血管症、多発梗塞性認知症、ダウン症候群、パーキンソン病に伴う認知症、およびβアミロイドに関連する認知症からなる群から選択される疾患または症状の治療または予防に使用される、一般式（Ｉ）の化合物、その立体異性体の形態、またはその薬学的に許容される酸付加塩もしくは塩基付加塩、またはその溶媒和物にも関する。

本発明は、また、前述の疾患の症状のいずれか１つを治療または予防する医薬を製造するための、一般式（Ｉ）の化合物、その立体異性体の形態、またはその薬学的に許容される酸付加塩もしくは塩基付加塩、またはその溶媒和物の使用にも関する。

式（Ｉ）の化合物の有用性に鑑みて、前述の疾患のいずれか１つに罹患している、ヒトを含む温血動物の治療方法、またはヒトを含む温血動物が前述の疾患のいずれか１つに罹患することを予防する方法を提供する。

前記方法は、一般式（Ｉ）の化合物、その立体異性体の形態、その薬学的に許容される付加塩またはその溶媒和物を有効量、ヒトを含む温血動物に投与すること、即ち、全身投与または局所投与すること、好ましくは経口投与することを含む。

治療方法は、また、有効成分を１日当たり１〜４回摂取する投与計画で投与することを含んでもよい。これらの治療方法では、本発明の化合物は、好ましくは投与前に製剤化される。後述のように、好適な医薬製剤は、周知の容易に入手可能な成分を使用して公知の方法で製造される。

アルツハイマー病またはその症状を治療または予防するのに好適な可能性がある本発明の化合物は、単独で投与されても、または１種以上の追加の治療薬と併用投与されてもよい。併用療法には、式（Ｉ）の化合物と１種以上の追加の治療薬とを含有する単一の医薬投与製剤を投与すること、ならびに式（Ｉ）の化合物と各追加の治療薬をそれ自体の別々の医薬投与製剤として投与することが含まれる。例えば、式（Ｉ）の化合物と治療薬を錠剤もしくはカプセルなどの単一の経口投与組成物として一緒に患者に投与してもよく、または各薬剤を別々の経口投与製剤として投与してもよい。

医薬組成物
本発明は、また、アルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知障害、老化現象、認知症、レヴィー小体型認知症、ダウン症候群、脳卒中に伴う認知症、パーキンソン病に伴う認知症、およびβアミロイドに関連する認知症などの、β−セクレターゼの阻害が有益である疾患を予防または治療するための組成物も提供する。治療有効量の式（Ｉ）の化合物と薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む前記組成物。

有効成分を単独で投与することも可能であるが、それを医薬組成物として提供することが好ましい。従って、本発明は、本発明の化合物を薬学的に許容される担体または希釈剤と共に含む医薬組成物をさらに提供する。担体または希釈剤は、組成物の他の成分と適合性があり、そのレシピエントに有害でないという意味で「許容される」ものでなければな
らない。

本発明の医薬組成物は、薬学の分野で周知の任意の方法により製造することができる。有効成分として塩基の形態または付加塩の形態の特定の化合物を治療有効量、薬学的に許容される担体と完全に混合して組み合わせるが、それは投与に望ましい製剤の形態に応じて非常に様々な形態を取り得る。望ましくは、これらの医薬組成物は、好ましくは、経口投与、経皮投与、もしくは非経口投与などの全身投与；または吸入、点鼻スプレー、点眼液による、もしくはクリーム、ゲル、もしくはシャンプー等による局所投与に好適な単位剤形である。例えば、経口剤形の組成物の製造において、懸濁剤、シロップ、エリキシル剤、および液剤などの経口液体製剤の場合、例えば、水、グリコール、油、およびアルコール等；または、散剤、丸剤、カプセル、および錠剤の場合、デンプン、糖類、カオリン、滑沢剤、結合剤、および崩壊剤等の固体担体などの、通常の医薬媒体のいずれかを使用することができる。投与が容易であるため、錠剤およびカプセルが最も有利な経口単位剤形であり、この場合、明らかに固体医薬担体が使用される。非経口組成物では、担体は、通常、少なくとも大部分、滅菌水を含むことになるが、例えば、溶解性を補助する他の成分が含まれてもよい。例えば、担体が生理食塩水、グルコース溶液、または生理食塩水とグルコース溶液との混合物を含む注射用液剤を製造してもよい。また、注射用懸濁剤を製造してもよく、この場合、適切な液体担体、および懸濁化剤等を使用してもよい。経皮投与に好適な組成物では、担体は、任意選択により浸透促進剤および／または好適な湿潤剤を含み、それに任意選択により、皮膚に顕著な有害作用を引き起こさない任意の種類の好適な添加剤が少量、組み合わせられる。前記添加剤は皮膚への投与を促進し得るおよび／または所望の組成物の製造に有用となり得る。これらの組成物は、様々な方法で、例えば、経皮パッチとして、スポット・オン製剤（ｓｐｏｔ−ｏｎ）として、または軟膏として投与することができる。

投与の容易さと投与の均一性のため、前述の医薬組成物を単位剤形で製剤化することがとりわけ有利である。本明細書および特許請求の範囲で使用する場合、単位剤形とは、単位投与量として好適な物理的に別個の単位を指し、各単位は、所望の治療効果を生じるように計算された所定量の有効成分を、必要な医薬担体と共に含有する。このような単位剤形の例としては、錠剤（割線入り錠剤およびコーティング錠を含む）、カプセル、丸剤、散剤分包、カシェ剤、注射用液剤または懸濁剤、ティースプーン量、およびテーブルスプーン量等、ならびにこれらのそれぞれの倍数がある。

正確な投与量および投与頻度は、当業者に周知のように、使用される式（Ｉ）の特定の化合物、治療される特定の症状、治療される症状の重症度、特定の患者の年齢、体重、性別、障害の程度および全身健康状態、ならびにその個体が摂取している可能性がある他の医薬に依存する。さらに、治療される対象の反応に応じておよび／または本発明の化合物を処方する医師の評価に応じて、前記有効な一日量を増減し得ることが明らかである。

投与方法に応じて、医薬組成物は、有効成分を０．０５〜９９重量％、好ましくは０．１〜７０重量％、より好ましくは０．１〜５０重量％、および薬学的に許容される担体を１〜９９．９５重量％、好ましくは３０〜９９．９重量％、より好ましくは５０〜９９．９重量％含むことになり、パーセンテージは全て組成物の全重量に基づく。

本化合物は、経口投与、経皮投与、もしくは非経口投与などの全身投与；または吸入、点鼻スプレー、点眼液による、もしくはクリーム、ゲル、もしくはシャンプー等による局所投与に使用することができる。化合物は、好ましくは経口投与される。正確な投与量および投与頻度は、当業者に周知のように、使用される式（Ｉ）の特定の化合物、治療される特定の症状、治療される症状の重症度、特定の患者の年齢、体重、障害の程度および全身健康状態、ならびにその個体が摂取している可能性がある他の医薬に依存する。さらに
、治療される対象の反応に応じておよび／または本発明の化合物を処方する医師の評価に応じて、前記有効な一日量を増減し得ることが明らかである。

単一剤形を製造するために担体物質と組み合わせることができる式（Ｉ）の化合物の量は、治療される疾患、哺乳動物種、および特定の投与方法に応じて変わることになる。しかし、一般的指針として、本発明の化合物の好適な単位用量は、例えば、好ましくは薬理活性化合物を０．１ｍｇ〜約１０００ｍｇ含有することができる。好ましい単位用量は、１ｍｇ〜約５００ｍｇである。より好ましい単位用量は、１ｍｇ〜約３００ｍｇである。さらにより好ましい単位用量は、１ｍｇ〜約１００ｍｇである。７０ｋｇの成体に対する全投与量が１回の投与当たり対象の体重１ｋｇ当たり０．００１〜約１５ｍｇの範囲となるように、このような単位用量を１日２回以上、例えば、１日に２回、３回、４回、５回または６回、しかし、好ましくは１日当たり１回または２回投与することができる。好ましい投与量は、１回の投与当たり対象の体重１ｋｇ当たり０．０１〜約１．５ｍｇであり、このような療法は、何週間または何ヶ月間、場合によっては何年間にもわたり得る。しかし、任意の特定の患者に対する特定の用量レベルは、当業者に十分理解されるように、使用される特定の化合物の活性；治療される個体の年齢、体重、全身健康状態、性別および食事；投与の時間および経路；排泄速度；以前投与された他の薬物；ならびに治療を受ける特定の疾患の重症度を含む様々な要因に依存することになることが理解されるであろう。

当業者に明らかになるように、場合によっては、これらの範囲外の投与量を使用することが必要なことがある。さらに、臨床医または治療する医師は、個々の患者の反応に関して、療法を開始、中断、調節、または停止する方法および時を承知しているものとすることに留意されたい。

以下の実施例は、説明を目的とするものであって、本発明の範囲を制限するものではない。

実験部分
以下、「ＡｃＯＨ」という用語は酢酸を意味し、「ＡｃＯＥｔ」は酢酸エチルを意味し、「ＤＣＭ」はジクロロメタンを意味し、「ＤＩＰＥ」はジイソプロピルエーテルを意味し、「ＤＭＦ」はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを意味し、「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを意味し、「Ｅｔ_２Ｏ」はジエチルエーテルを意味し、「Ｅｔ_３Ｎ」はトリエチルアミンを意味し、「ＥｔＯＨ」はエタノールを意味し、「ＭｅＣＮ」はアセトニトリルを意味し、「ＤＣＥ」は１，２−ジクロロエタンを意味し、「ＭｅＯＨ」はメタノールを意味し、「ｍ．ｐ．」は融点を意味し、「ｒａｃ」はラセミ体を意味し、「Ｒ_ｔ」は保持時間を意味し、「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを意味し、「Ｋ_２ＣＯ_３」は炭酸カリウムを意味し、「ＮＨ_３」はアンモニアを意味し、「ＮＨ_４Ｃｌ」は塩化アンモニウムを意味し、「ＨＣｌ」は塩酸を意味し、「Ｎａ_２ＳＯ_４」は硫酸ナトリウムを意味し、「ＮａＨＣＯ_３」は炭酸水素ナトリウムを意味し、「ＫＨＳＯ_４」は硫酸水素カリウムを意味し、「ＭｇＳＯ_４」は硫酸マグネシウムを意味し、「Ｈ_２Ｏ」は水を意味し、「ＴＦＡ」はトリフルオロ酢酸を意味し、「ｓａｔ．」は飽和を意味し、「ａｑ．」は水性を意味し、「ｍｉｎ」は分を意味し、「Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３」はトリ（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）を意味し、「Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４」はテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）を意味し、「ＢＩＮＡＰ」は２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチルを意味し、「ＴＢＡＦ」はテトラブチルアンモニウムフルオライドを意味し、「ＮａＨ」は水素化ナトリウムを意味し、「ＤＤＱ」は２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノンを意味し、「ＤＢＵ」は１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エンを意味する。

マイクロ波補助反応は、単一モード反応器：Ｅｍｒｙｓ（商標）Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒマイクロ波反応器（Ｐｅｒｓｏｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａ．Ｂ．、現Ｂｉｏｔａｇｅ）内で行った。

水素化反応は、ＴｈａｌｅｓＮａｎｏ Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．製の連続流水素化装置Ｈ−ＣＵＢＥ（登録商標）内で行った。

薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、試薬用溶媒を使用してシリカゲル６０ Ｆ２５４プレート（Ｍｅｒｃｋ）で行った。オープンカラムクロマトグラフィーは、粒径６０Å、メッシュ＝２３０〜４００の（Ｍｅｒｃｋ）のシリカゲルで、標準的技術で行った。フラッシュカラムクロマトグラフィーは、Ｍｅｒｃｋ製のすぐに接続できるカートリッジを使用し、粒径１５〜４０μｍの不規則なシリカゲル（順層使い捨てフラッシュカラム）で、Ａｒｍｅｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ製のＳＰＯＴまたはＬＡＦＬＡＳＨシステムで行った。

ナトリウムランプを有するＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ ３４１旋光計で旋光を測定し、次のように報告した：［α］°（λ、ｃｇ／１００ｍｌ、溶媒、Ｔ℃）。

Ａ．中間体の製造
実施例Ａ１
中間体Ａ１：

３−ブロモ−アセトフェノン（２０ｇ、１００ｍｍｏｌ）とＮＨ_４Ｃｌ（１１ｇ、２００ｍｏｌ）をＮＨ_３／ＭｅＯＨ（４００ｍＬ）に溶解し、その撹拌溶液にトリメチルシリルシアニド（２０ｇ、２００ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を室温で４日間撹拌した。次に、溶媒を減圧蒸発させ、残留物をＡｃＯＥｔ（１００ｍＬ）に溶解した。固体を濾別し、濾液を減圧蒸発させて、中間体Ａ１（２０ｇ、収率８６％）を得、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。

実施例Ａ２
中間体Ａ２の製造：

中間体Ａ１（２０ｇ、８８．９ｍｍｏｌ）をＨＣｌ／ＭｅＯＨ（５００ｍＬ）に溶解した。この混合物を４日間還流した。室温に冷却した後、ＡｃＯＥｔ（１００ｍＬ）およびＨ_２Ｏ（１００ｍＬ）を添加し、混合物をＡｃＯＥｔ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合
わせた水層をＮＨ_３水溶液でｐＨ＝８になるまで塩基性化し、ＡｃＯＥｔ（５×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体Ａ２（１０．６ｇ、収率４６％）を油状物として得た。

実施例Ａ１〜Ａ２に記載の合成手順に従って次の中間体を製造した：

実施例Ａ３
中間体Ａ３の製造：

ｒａｃ−２−アミノ−２−（３−ニトロ−フェニル）−プロピオニトリルから製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔ／石油エーテル、１／１０〜１／４）で、中間体３（収率６３％）を得た。

実施例Ａ４
中間体Ａ４の製造：

中間体Ａ２（７．５ｇ、２９．１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２００ｍＬ）に溶解し、その撹拌溶液に−１５℃で水素化リチウムアルミニウム（１Ｍ ＴＨＦ溶液；２２ｍＬ、２２ｍｍｏｌ）を滴下した。この混合物を１時間の間に０℃にゆっくり加温した。ＴＨＦ（１５０ｍＬ）をさらに添加し、それ以上水素が生成しなくなるまで飽和Ｎａ_２ＳＯ_４溶液を滴下した。無水Ｎａ_２ＳＯ_４を添加し、反応を室温で終夜撹拌した。混合物を珪藻土で濾過し、ＴＨＦで洗浄し、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ_３の７Ｍ ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ、０／１００〜３／９７）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体Ａ４（５．７０ｇ、収率８５％）を油状物として得た。

実施例Ａ５
中間体Ａ５の製造：

中間体Ａ３（４８．３ｇ、２１４．７ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５００ｍＬ）に溶解し、
その撹拌溶液に水素化ホウ素ナトリウム（１６．３ｇ、４２９．４ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を室温で１０時間撹拌した。溶媒を減圧蒸発させた。残留物を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液でｐＨ＝９になるまで塩基性化し、ＡｃＯＥｔ（３×２００ｍＬ）で抽出した。有機層を乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体Ａ５（３０．２６ｇ、収率７２％）を得た。

実施例Ａ６
中間体Ａ６の製造：

中間体Ａ４（５ｇ，２１．７３ｍｍｏｌ）を飽和ＮａＨＣＯ_３（１０ｍＬ）とＴＨＦ（１０ｍＬ）との混合物に溶解し、その撹拌溶液に０℃で塩化ベンゾイル（４．６６ｍＬ、３２．６ｍｍｏｌ）を少量ずつ添加した。混合物を０℃で１０分間、室温で１５時間撹拌した。混合物を氷／Ｈ_２Ｏ浴中で冷却し、撹拌しながらＫＨＳＯ_４でｐＨ＝１〜２になるまで酸性化した。有機層を分離し、水層をさらにＡｃＯＥｔで抽出した。合わせた有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濾過し、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔ／ＤＣＭ、０／１００〜２０／８０）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、中間体Ａ６（７．８ｇ、収率９８％）を無色油状物として得た。

実施例Ａ７
中間体Ａ７の製造：

塩化チオニル（４．０１ｍＬ、５４．９ｍｍｏｌ）を無水ＭｅＣＮ（１００ｍＬ）に溶解し、−４０℃に冷却した撹拌溶液に、窒素雰囲気下で中間体Ａ６（８ｇ、２１．９ｍｍｏｌ）の無水ＭｅＣＮ（２０ｍＬ）溶液を滴下した。反応混合物を６０分間−４０℃で撹拌した後、ピリジン（８．８４ｍＬ、１０９．８ｍｍｏｌ）を添加した。反応を室温に加温し、１４時間撹拌した。溶媒を減圧蒸発させた。残留物をＥｔ_２Ｏで処理して、固体を濾別し、濾液を減圧濃縮し、中間体Ａ７（８ｇ、収率８９％）を淡黄色油状物として得た。生成物をさらに精製することなく次の反応に使用した。

実施例Ａ８
中間体Ａ８の製造：

中間体Ａ７（８ｇ、１９．５ｍｍｏｌ）をＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（１：１）（２１０ｍＬ）に混合し、その混合物に０℃で塩化ルテニウム（ＩＩＩ）（４１ｍｇ、０．１９５ｍｍｏｌ）を添加した後、過ヨウ素酸ナトリウム（６．２６ｇ、２９．２５ｍｍｏｌ）を添加した。反応を室温に加温し、２時間撹拌した。混合物をＡｃＯＥｔで希釈し、珪藻土で濾過し、ＡｃＯＥｔで洗浄した。Ｈ_２ＯおよびＡｃＯＥｔを濾液に添加した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、中間体Ａ８（８ｇ、収率９６％）を淡黄色油状物として得た。

実施例Ａ９
中間体Ａ９の製造：

中間体Ａ５（３ｇ、１５．２９ｍｍｏｌ）を飽和ＮａＨＣＯ_３（５０ｍＬ）とＴＨＦ（５０ｍＬ）の混合物に溶解し、その撹拌溶液に０℃で二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１０ｇ、４５．８７ｍｍｏｌ）を少量ずつ添加した。混合物を０℃で１０分間、室温で１５時間撹拌した。混合物を氷／Ｈ_２Ｏ浴中で冷却し、撹拌しながらＫＨＳＯ_４でｐＨ＝１〜２になるまで酸性化した。有機層を分離し、水層をさらにＡｃＯＥｔで抽出した。合わせた有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濾過し、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔ／ＤＣＭ、０／１００〜１００／０）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、中間体Ａ６（４．５ｇ、収率９９％）を淡黄色油状物として得、これは静置すると凝固した。

実施例Ａ１０
中間体Ａ１０の製造：

塩化チオニル（２．７７１ｍＬ、３７．９６ｍｍｏｌ）を無水ＭｅＣＮ（８０ｍＬ）に溶解し、−４０℃に冷却した撹拌溶液に、窒素雰囲気下で中間体Ａ９（４．５ｇ、１５．１８ｍｍｏｌ）の無水ＭｅＣＮ（２０ｍＬ）溶液を滴下した。反応混合物を３０分間−４０℃で撹拌した後、ピリジン（６．１２ｍＬ、７５．９３ｍｍｏｌ）を添加した。反応を室温に加温し、１８時間撹拌した。溶媒を減圧蒸発させた。残留物をＥｔ_２Ｏで処理した。固体を濾別し、濾液を減圧濃縮して、中間体Ａ１０（４．８ｇ、収率９２％）を油状物として得た。生成物をさらに精製することなく次の反応に使用した。

実施例Ａ１１
中間体Ａ１１の製造：

中間体Ａ１０（４．８ｇ、１４．０２ｍｍｏｌ）をＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（１：１）（１００ｍＬ）に混合し、その混合物に０℃で塩化ルテニウム（ＩＩＩ）（２９．５ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を添加した後、過ヨウ素酸ナトリウム（４．５ｇ、２１．０３ｍｍｏｌ）を添加した。反応を室温に加温し、２時間撹拌した。混合物をＡｃＯＥｔで希釈し、珪藻土で濾過し、ＡｃＯＥｔで洗浄した。Ｈ_２Ｏおよび飽和食塩水を濾液に添加した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、中間体Ａ１１（４．９ｇ、収率９７％）を淡黄色油状物として得た。

実施例Ａ９〜Ａ１１に記載の合成手順に従って中間体Ａ１２を製造した：

実施例Ａ１２
中間体Ａ１２：（Ｒ）−［３−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−４−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−４−メチル−［１，１，３］オキサチアゾリジン−２，２−ジオキサイドの製造

（Ｒ）−［３−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−４−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−４−メチル−［１，１，３］オキサチアゾリジン−２−オキサイド（１４．５ｇ、３６．７９ｍｍｏｌ）から製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ）で、中間体Ａ１２を白色固体として得た（１１．６ｇ、収率７７％）。

実施例Ａ１３
中間体Ａ１３の製造：

中間体Ａ８（２ｇ、４．６９ｍｍｏｌ）および１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸エチルエステル（７６３ｍｇ、６．１ｍｍｏｌ）をＭｅＣＮ（１６ｍＬ）に混合し、その混合物に室温で炭酸セシウム（３．０６ｇ、９．８３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物にマイクロ波を照射し１３０℃で３０分間撹拌した。混合物をＤＣＭで希釈し、Ｈ_２Ｏで洗浄した。有機相を分離し、Ｈ_２Ｏ（１０ｍＬ）で処理し、ＤＣＭ（２×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体Ａ１３（１．７ｇ、収率７７％）を無色油状物として得た。

実施例Ａ１４
中間体Ａ１４の製造：

封管内で、０℃で中間体Ａ１３（１．７ｇ、３．６１ｍｍｏｌ）に三フッ化ホウ素−ジエチルエーテル錯体（４．５３ｍＬ、３６．１ｍｍｏｌ）を添加した後、エタンチオール（８．０１ｍＬ、１０８．２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温に加温し、６０℃で３時間撹拌した。溶媒を減圧蒸発させ、残留物をＤＣＭに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ_３で洗浄した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔ／ＤＣＭ、０／１００〜５０／５０）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体Ａ１４（９５０ｍｇ、収率７８％）を無色油状物として得た。

実施例Ａ１５
中間体Ａ１５の製造：

ナトリウムメトキシドの２５重量％ＭｅＯＨ溶液（１．２８４ｍＬ，５．３６ｍｍｏｌ）を、中間体Ａ１４（９５０ｍｇ、２．８２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ溶液（８ｍＬ）に室温で添加した。混合物を５５℃で１８時間撹拌した。溶媒を減圧蒸発させた。残留物を飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液で処理し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させ、中間体Ａ１５（８５０ｍｇ、収率９９％）を白色固体として得、さらに精製することなく次の工程に使用した。

実施例Ａ１６
中間体Ａ１６の製造：

五硫化リン（９４０ｍｇ、４．２３ｍｍｏｌ）を中間体Ａ１５（８６０ｍｇ、２．８２ｍｍｏｌ）のピリジン（７ｍＬ）溶液に添加し、その混合物を１１０℃で３８時間加熱した。溶媒を減圧蒸発させ、粗生成物をショートカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔ／ＤＣＭ、０／１００〜１００／０）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体Ａ１６（８３０ｍｇ、収率９２％）を黄色固体として得た。

実施例Ａ１７
中間体Ａ１７の製造：

ヨウ化メチル（０．２６７ｍＬ、４．２９６ｍｍｏｌ）およびＫ_２ＣＯ_３（０．５９ｇ、４．２９６ｍｍｏｌ）を、中間体Ａ１６（６９０ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ）のアセトン（１０ｍＬ）溶液に添加し、混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を減圧蒸発させ、粗生成物をＤＣＭ（２５ｍＬ）およびＨ_２Ｏ（２５ｍＬ）に溶解した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濾過し、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔ／ＤＣＭ、０／１００〜５０／５０）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体Ａ１７（７００ｍｇ、収率９７％
）を淡黄色固体として得た。

実施例Ａ１８
中間体Ａ１８の製造：

中間体Ａ１７（７００ｍｇ、２．０９ｍｍｏｌ）をＮＨ_３の２Ｍ ＥｔＯＨ溶液（３９．６７ｍＬ、７９．３４ｍｍｏｌ）に懸濁し、その懸濁液にＮＨ_４Ｃｌ（４４７ｍｇ、８．３５ｍｍｏｌ）を添加し、その混合物を９０℃で２４時間加熱した。溶媒を減圧蒸発させ、残留物をＮＨ_３の２Ｍ ＥｔＯＨ溶液（２０ｍＬ、４０ｍｍｏｌ）に懸濁した。ＮＨ_４Ｃｌ（４４７ｍｇ、８．３５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を９０℃で２日間加熱した。溶媒を減圧蒸発させ、残留物をＤＣＭに懸濁し、Ｈ_２Ｏで洗浄した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濾過し、溶媒を減圧蒸発させた。生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ_３の７Ｍ ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ、０／１００〜２０／８０）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体Ａ１８（５５０ｍｇ、収率８６％）を淡黄色固体として得た。

実施例Ａ１９
中間体Ａ１９の製造：

中間体Ａ１１（１．５ｇ、４．１８６ｍｍｏｌ）および１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸エチルエステル（６８１ｍｇ、５．４４１ｍｍｏｌ）をＭｅＣＮ（１６ｍＬ）に混合し、その混合物に炭酸セシウム（２．７３ｇ、８．３７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物にマイクロ波を照射し１３０℃で３０分間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、ＨＣｌ水溶液（１Ｎ）で洗浄した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体Ａ１９（１．５ｇ、収率８９％）無色油状物として得た。

実施例Ａ２０
中間体Ａ２０の製造：

ＨＣｌ（９．２９５ｍＬ、３７．１８１ｍｍｏｌ、４Ｍ １，４−ジオキサン溶液）を中間体Ａ１９（１．５ｇ、３．７１８ｍｍｏｌ）に添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を減圧蒸発させ、残留物をＤＣＭに懸濁し、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液で洗浄した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させ、中間体Ａ２０（１．１ｇ、収率９７％）を得、さらに精製することなく次の反応工程に使用した。

実施例Ａ２１
中間体Ａ２１の製造：

ナトリウムメトキシドの２５重量％ＭｅＯＨ溶液（０．９０９ｍＬ、３．９９ｍｍｏｌ）を、中間体Ａ２０（１．１ｇ、３．６３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）溶液に室温で添加した。混合物を６５℃１８時間撹拌した。溶媒を減圧蒸発させた。残留物を飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液で処理し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、得られた残留物をＤＩＰＥでトリチュレートし、中間体Ａ２１（６５０ｇ、収率６６％）を白色固体として得た。

実施例Ａ２２
中間体Ａ２２の製造：

五硫化リン（７９９ｍｇ、３．５９ｍｍｏｌ）を、中間体Ａ２１（６５０ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）のピリジン（１０ｍＬ）溶液に添加し、混合物を１００℃で１８時間加熱した。溶媒を減圧蒸発させ、粗生成物をショートカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；Ａ
ｃＯＥｔ／ＤＣＭ、０／１００〜１００／０）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体Ａ２２（５３５ｍｇ、収率７８％）を黄色固体として得た。

実施例Ａ２３
中間体Ａ２３の製造：

ヨウ化メチル（０．２３２ｍＬ、３．７２４ｍｍｏｌ）およびＫ_２ＣＯ_３（０．５１５ｇ、３．７２４ｍｍｏｌ）を中間体Ａ２２（５３５ｍｇ、１．８６ｍｍｏｌ）のアセトン（１０ｍＬ）溶液に添加し、その混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を減圧蒸発させ、粗生成物をＤＣＭ（２５ｍＬ）およびＨ_２Ｏ（２５ｍＬ）に溶解した。有機層を分離し、水層をＤＣＭ（３×２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濾過し、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔ／ＤＣＭ、０／１００〜５０／５０）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体Ａ２３（４９０ｍｇ、収率８７％）を淡黄色固体として得た。

実施例Ａ２４
中間体Ａ２４の製造：

中間体Ａ２３（４９０ｍｇ、１．６２６ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（２８ｍＬ）溶液を、Ｈ−ｃｕｂｅ反応器（１ｍＬ／分、３０ｍｍ Ｐｄ／Ｃ ５％カートリッジ、全Ｈ_２モード、室温、２サイクル）内で水素化した。次いで、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ_３の７Ｍ ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ、０／１００〜１０／９０）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体Ａ２４（１００ｍｇ、収率２３％）を無色油状物として得た。

実施例Ａ２５
中間体Ａ２５の製造：

中間体Ａ２４（１００ｍｇ、０．３６８ｍｍｏｌ）をＮＨ_３の２Ｍ ＥｔＯＨ溶液（７ｍＬ、１４ｍｍｏｌ）に溶解し、その溶液にＮＨ_４Ｃｌ（７８．８ｍｇ、１．４７４ｍｍｏｌ）を添加し、その混合物を８０℃で３日間加熱した。溶媒を減圧蒸発させ、残留物をＤＣＭに懸濁し、Ｈ_２Ｏで洗浄した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ_３の７Ｍ ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ、０／１００〜２０／８０）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体Ａ２５（８０ｍｇ、収率９０％）を淡黄色固体として得た。

実施例Ａ２６
中間体Ａ２６の製造：

５−クロロ−ピリジン−２−カルボン酸（１７２ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）を、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライド（３３０ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）溶液に添加した。その混合物を室温で５分間撹拌した。次いで、混合物を０℃に冷却し、中間体Ａ２４（２７０ｍｇ、０．９９５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）溶液を添加した。混合物を室温に加温し、３時間撹拌した。混合物をＮａ_２ＣＯ_３とＨ_２Ｏとの飽和溶液で処理し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔ／ヘプタン、５０／５０）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させ、中間体Ａ２６（２００ｍｇ、収率４９％）を白色固体として得た。

実施例Ａ２７
中間体Ａ２７の製造：

中間体Ａ１２（１１．５ｇ、２８．０１ｍｍｏｌ）と１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸エチルエステル（４．５６ｇ、３６．４４ｍｍｏｌ）をＭｅＣＮ（４０ｍＬ）に混合し、その混合物に室温で炭酸セシウム（１８．２７ｇ、５６．０６ｍｍｏｌ）を、添加した。混合物を室温で２０分間撹拌した後、それにマイクロ波を照射し１３０℃で３０分間加熱した。混合物をＤＣＭで希釈し、Ｈ_２Ｏで洗浄した。有機層を乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シ
リカゲル；ＤＣＭ／ヘプタン、９０／１０）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させ、中間体Ａ２７（１０．７ｇ、収率８３％）を粘性の固体として得た。

実施例Ａ２８
中間体Ａ２８の製造：

ＨＣｌ（１５ｍＬ、６０ｍｍｏｌ、４Ｍ １，４−ジオキサン溶液）を中間体Ａ２７（９．５ｇ、２０．８６４ｍｍｏｌ）に添加し、混合物を室温で９０分間撹拌した。溶媒を減圧蒸発させて、中間体Ａ２８（１０ｇ、不純含有、収率１２２％）を得、さらに精製することなく次の反応工程に使用した。

実施例Ａ２９
中間体Ａ２９の製造：

ナトリウムメトキシドの２５重量％ＭｅＯＨ溶液（１５．７１４ｍＬ、６８．９３ｍｍｏｌ）を、中間体Ａ２８（９５０ｍｇ、２．８２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（３０ｍＬ）溶液に室温で添加した。その混合物を６０℃１８時間撹拌した。溶媒を減圧蒸発させた。残留物を飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液で処理し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔ／ＤＣＭ、０／１００〜２０／８０）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体Ａ２９（１．５ｇ、収率１８％）を白色固体として得た。

実施例Ａ３０
中間体Ａ３０の製造：

トリメチルオキソニウムテトラフルオロボレート（２．５６ｇ、１７．３３ｍｍｏｌ）を、中間体Ａ２９（１．４ｇ、４．３３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）溶液に室温で添加した。その混合物を室温で４日間撹拌した。反応混合物を希釈した後、冷飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液で処理した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させ、中間体Ａ３０（９１０ｍｇ、収率６２％）をオフホワイトの固体として得、さらに精製することなく次の反応工程に使用した。

実施例Ａ３１
中間体Ａ３１の製造：

中間体Ａ３０（９１０ｍｇ、２．７ｍｍｏｌ）をＮＨ_３の２Ｍ ＥｔＯＨ溶液（５ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）に溶解し、その溶液にＮＨ_４Ｃｌ（５７７ｍｇ、１０．７９ｍｍｏｌ）を添加し、その混合物を８０℃で３６時間加熱し封管に入れた。混合物を室温に冷却し、ＮＨ_４Ｃｌ（４３２ｍｇ、８．１ｍｍｏｌ）およびＮＨ_３の２Ｍ ＥｔＯＨ溶液（５ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を８０℃で３６時間加熱し封管に入れた。混合物を室温に冷却し、ＮＨ_４Ｃｌ（４３２ｍｇ、８．１ｍｍｏｌ）およびＮＨ_３の２Ｍ ＥｔＯＨ（５ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）溶液を添加し、混合物を８０℃で４８時間加熱し封管に入れた。溶媒を減圧蒸発させ、残留物をＤＣＭに懸濁し、Ｈ_２Ｏ（４〜５ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濾過し、溶媒を減圧蒸発させた。得られた粗生成物をＤＣＭに溶解し、沈殿した固体を濾別し、中間体Ａ３１（４５８ｍｇ、収率５３％）を白色固体として得た。

実施例Ａ３２
中間体Ａ３２の製造：

中間体Ａ３１（０．４１ｇ、１．１４３ｍｍｏｌ）をトルエン（８．７ｍＬ）に混合し、その混合物にナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．３２９ｇ、３．４３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を５分間撹拌した後、ｒａｃ−ＢＩＮＡＰ（０．２１３ｇ、０．３４３ｍｍｏｌ）およびＰｄ_２（ｄｂａ）_３（１０５ｍｇ、０．１１４ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下、室温で添加した。混合物を数分間窒素通気した後、ベンゾフェノンイミン（０．３８３ｍＬ、２．２８６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１００℃で２時間撹拌した。室温に冷却した後、混合物をＨ_２Ｏで希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濾過し、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ_３の７Ｍ ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ、０／１００〜５０／５０）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、粗製物を得、これをＨＣｌ（６ｍＬ、３６ｍｍｏｌ、６Ｍイソプロピルアルコール溶液）に溶解し、混合物を室温で１時
間撹拌した。溶媒を減圧蒸発させた。次いで、残留物をＤＣＭおよびイソプロピルアルコールに溶解し、固体のＮａＨＣＯ_３を添加し、混合物を室温で２時間撹拌した。固体を濾別し、濾液を減圧蒸発させ、中間体Ａ３２（４００ｍｇ、収率１３６％）を粘性の油状物として得、これをさらに精製することなく次の反応工程に使用した。

実施例Ａ３３
中間体Ａ３３の製造：

中間体Ａ１２（７．５ｇ、１８．２８１ｍｍｏｌ）とメチル４−フルオロ−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート（２．９ｇ、２０．２６３ｍｍｏｌ）をＭｅＣＮ（１５０ｍＬ）に混合し、その混合物にＤＢＵ（５．５ｍＬ、３６．８１４ｍｍｏｌ）を室温で添加した。混合物を９０℃で１６時間撹拌した。冷却後、溶媒を大部分蒸発させ、残留物をＤＣＭに溶解し、０．５Ｍ ＨＣｌで洗浄した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、減圧濃縮した。残留物をＤＣＭ（１００ｍＬ）に溶解し、ＴＦＡ（１５ｍＬ）を添加した。混合物を室温で２時間撹拌した。溶媒を減圧蒸発させた。混合物を飽和Ｎａ_２ＣＯ_３で塩基性化し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０／１００〜１／９９）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、中間体Ａ３３（４．７８ｇ、収率７０％）をオフホワイトの固体として得た。

実施例Ａ３４
中間体Ａ３４の製造：

中間体Ａ３３から実施例Ａ１５に記載の合成手順に従って中間体３４を製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０／１００〜１／９９）で、中間体Ａ３４をオフホワイトの固体として得た（４．３ｇ、収率９８％）。

実施例Ａ３５
中間体Ａ３５の製造：

五硫化リン（１４ｇ、６３．０２１ｍｍｏｌ）を、中間体Ａ３４（４．３ｇ、１２．６０４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５０ｍＬ）溶液に添加し、混合物を７０℃で２４時間加熱した。反応をセライトで濾過し、ＴＨＦで洗浄した。濾液を減圧濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、中間体Ａ３５（３．６５ｇ、収率８１％）を淡黄色固体として得た。

実施例Ａ３６
中間体Ａ３６の製造：

中間体３５（１．３５０ｇ、３．７７９ｍｍｏｌ）をＮＨ_３の７Ｎ ＭｅＯＨ溶液（４０ｍＬ）に溶解し、その溶液にｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド（７０％、５．４０６ｍＬ、３８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で４０時間撹拌した。溶媒を一部、減圧蒸発させ、残留物をＤＣＭで処理し、希Ｎａ_２ＣＯ_３溶液で洗浄した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ_３の７Ｍ ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ，０／１００〜２／９８）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、中間体Ａ３６（９９０ｍｇ、収率７７％）を黄色固体として得た。

実施例Ａ３７
中間体Ａ３７の製造：

中間体Ａ３６（４００ｍｇ、１．１７６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３（０．１０８ｇ、０．１１８ｍｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（０．２２ｇ、０．３５３ｍｍｏｌ）およびナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．２０３ｇ、２．１７７ｍｍｏｌ）の混合物に窒素下、室温でトルエン（２０ｍＬ）を添加した。混合物を数分間窒素通気した後、ベンゾフェノンイミン（０．３５９ｍＬ、２．３５２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を９０℃で１６時間撹拌した。冷却後、混合物をＨ_２Ｏで希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、溶媒を減圧濃縮した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ_３の７Ｎ ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ、０／１００〜１／９９〜５／９５）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、中間体Ａ３７（４４０ｍｇ、収率８５％）を黄色泡状物として得た。

実施例Ａ３８
中間体Ａ３８の製造：

ＨＣｌ（３７％Ｈ_２Ｏ溶液；５００μＬ、１６．１８２ｍｍｏｌ）を、中間体Ａ３７（９２０ｍｇ、２．０８９ｍｍｏｌ）のイソプロパノール（２０ｍＬ）溶液に添加した。混合物を室温で２０分間撹拌した後、減圧濃縮し、イソプロパノール２５ｍＬに再溶解した。次いで、ＮａＨＣＯ_３を添加し、混合物を１時間室温で撹拌した。混合物を濾過し、濾液を減圧濃縮した。生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ_３の７Ｎ ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ、１／９９〜１０／９０）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、中間体Ａ３８（４７０ｍｇ、収率８１％）をオフホワイトの泡状物として得た。

実施例Ａ３９
中間体Ａ３９の製造：

塩化オキサリル（５．１７５ｍＬ、６１．１６ｍｍｏｌ）を、ＤＭＳＯ（４．６６８ｍＬ、６５．２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０３ｍＬ）溶液に−７８℃、窒素雰囲気下で滴下した。混合物を１５分間−７８℃で撹拌した。次いで、Ｎ−ｂｏｃ−ｔｒａｎｓ−４−ヒドロキシ−ｌ−プロリンメチルエステル（１０ｇ、４０．７７ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を−４０℃で２時間撹拌した。次いで、Ｅｔ_３Ｎ（１７ｍＬ、１２２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温にゆっくり加温し、終夜撹拌した。次いで、混合物を１０％クエン酸溶液で希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機層を乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、減圧
濃縮し、中間体Ａ３９（１０ｇ）を褐色油状物として得た。
粗製物をさらに精製することなく次の工程に使用した。

実施例Ａ４０
中間体Ａ４０の製造：

（トリフルオロメチル）トリメチルシラン（８．７６８ｇ、６１．６６３ｍｍｏｌ）を、中間体Ａ３９（１０ｇ）のＴＨＦ（１１４ｍＬ）溶液に０℃で添加した後、ＴＢＡＦ（１Ｍ ＴＨＦ溶液、２．４７ｍＬ、２４７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で加温し、１８時間撹拌した。混合物を飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液で反応停止した。混合物を１５分間撹拌した後、ＴＢＡＦ（１Ｍ ＴＨＦ溶液、５ｍＬ、５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を３０分間撹拌した。有機層を分離し、水層をＥｔ_２Ｏで抽出した。合わせた有機相をＨ_２Ｏおよび飽和食塩水で洗浄した後、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、減圧濃縮した。
粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ヘプタン／ＡｃＯＥｔ、０／１００〜９０／１０）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、中間体Ａ４０（７．８ｇ、収率６１％）を得た。

実施例Ａ４１
中間体Ａ４１の製造：

中間体Ａ４０（７．７ｇ、２４．５７９ｍｍｏｌ）をピリジン（１８８ｍＬ）に入れ、これに塩化チオニル（１４．３５２ｍＬ、１９６．６３３ｍｍｏｌ）を添加した。その混合物を８０℃、窒素雰囲気下で１時間撹拌した。混合物をＨ_２Ｏで反応停止した後、Ｅｔ_２Ｏで抽出した。有機層を１Ｍ ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、減圧濃縮した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ヘプタン／ＡｃＯＥｔ、０／１００〜８０／２０）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、中間体Ａ４１（４．６ｇ、収率６３％）を黄色油状物として得た。

実施例Ａ４２
中間体Ａ４２の製造：

中間体Ａ４１（７．２ｇ、２４．３８５ｍｍｏｌ）をジオキサン（４５ｍＬ）に入れ、これにＤＤＱ（１６．６０７ｇ、７３．１６ｍｍｏｌ）を添加した。その混合物を８５℃で１０４時間撹拌した。混合物を濾別し、濾液を減圧濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ／ヘプタン、４０／６０）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、中間体Ａ４２（４ｇ、収率８５％）を、褐色味を帯びたペーストとして得た。

実施例Ａ４３
中間体Ａ４３の製造：

中間体Ａ１２（６．０７ｇ、１４．８４ｍｍｏｌ）と中間体Ａ４２（２ｇ、１０．３５６ｍｍｏｌ）をＭｅＣＮ（４０ｍＬ）に混合し、その混合物にＤＢＵ（２．８５ｍＬ、１９ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、混合物を９０℃で１８時間加熱した。反応をＤＣＭで希釈し、１Ｎ ＨＣｌ溶液で洗浄した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、溶媒を減圧蒸発させた。生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、中間体Ａ４３を粘性の固体として得た（４．６ｇ、収率５９％）。

実施例Ａ４４
中間体Ａ４４の製造：

中間体Ａ４３から実施例Ａ２０〜Ａ２３に記載の合成手順に従って中間体Ａ４４を製造した。化合物を粗製物のまま次の反応に使用し、収率は定量と仮定した。

実施例Ａ４５
中間体Ａ４５の製造：

反応は３つのバッチで行った。材料の全量を報告する。ＮＨ_３（２Ｍ ＥｔＯＨ溶液、４７ｍＬ、９４ｍｍｏｌ）を中間体Ａ４４（２．３ｇ、５．４６ｍｍｏｌ）およびＮＨ_４Ｃｌ（２．３１５ｇ、４３．７ｍｍｏｌ）に添加した。混合物にマイクロ波を照射し１７０℃で４５分間加熱した後、減圧濃縮した。ＮＨ_３（２Ｍ ＥｔＯＨ溶液）をさらに４５ｍＬ添加し、混合物にマイクロ波を照射し１７０℃で４５分間加熱した。混合物を濾過し、減圧濃縮した。粗製物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０／１００〜３／９７）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、中間体Ａ４５（２．１ｇ、収率９９％）を得た。

実施例Ａ３７〜Ａ３８に記載の手順に従って中間体Ａ４６を製造した：

実施例Ａ４６
中間体Ａ４６の製造：

中間体Ａ４５から製造した。ＤＣＭを使用して、粗反応混合物から化合物を沈殿させた（収率８９％）。

実施例Ａ９〜Ａ１１に記載の合成手順に従って中間体Ａ４７を製造した：

実施例Ａ４７
中間体Ａ４７の製造：

カルバミン酸、Ｎ−［１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２，２−ジフルオロ−１−（ヒドロキシメチル）エチル］−， １，１−ジメチルエチルエステルから製造した。粗生成物をヘプタンでトリチュレートし、濾過した。灰色固体をＤＣＭに溶解し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、中間体Ａ４７（収率７８％）を白色固体として得た。

実施例Ａ４８
中間体Ａ４８の製造：

メチル２−ピロールカルボキシレート（８４１ｍｇ、６．７２３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２０ｍＬ）に混合し、その混合物に０℃、窒素下でＮａＨ（６０％鉱油分散液、２６９ｍｇ、６．７２３ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、混合物を１０分間０℃で撹拌した後、中間体Ａ４７（２ｇ、４．４８２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液を添加し、混合物を室温で２０時間撹拌した。反応を飽和ＮＨ_４Ｃｌ溶液で反応停止し、ＡｃＯＥｔで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濾過し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体Ａ４８（２．２ｇ、収率１００％）を油状物として得、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。

実施例Ａ２０に記載の合成手順に従って中間体Ａ４９を製造した：

実施例Ａ４９
中間体Ａ４９の製造：

中間体Ａ４８から製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔ／ヘプタン、０／１００〜１５／８５）で、中間体Ａ４９（収率１００％）を得た。

実施例Ａ５０
中間体Ａ５０の製造：

封管内で、ＴＨＦ（２０ｍＬ）に中間体Ａ４９（１．７５ｇ、４．４７ｍｍｏｌ）を混合し、その撹拌混合物に０℃でトリメチルアルミニウム（２Ｍトルエン溶液；４．４７ｍＬ、８．９ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１００℃で２時間撹拌した。混合物を室温に冷却し、フラスコに注ぎ、０℃で冷却し、硫酸ナトリウム１０水和物で反応停止した。混合物を１５分間撹拌した後、濾過し、濾液を減圧蒸発させ、中間体Ａ４９（１．６５７ｇ、収率１０３％）を固体として得、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。

実施例Ａ１６に記載の合成手順に従って中間体Ａ５１を製造した：

実施例Ａ５１
中間体Ａ５１の製造：

中間体５０から製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０／１００〜０５／９５）で、中間体Ａ５１（収率５２％）を淡黄色固体として得た。

実施例Ａ５２
中間体Ａ５２の製造：

中間体Ａ５１（７００ｍｇ、１．８６６ｍｍｏｌ）をＮＨ_３の７Ｎ ＭｅＯＨ溶液（７ｍＬ）に溶解し、その溶液にＮＨ_３水溶液（７ｍＬ）を添加し、封管内で混合物を９０℃で２１時間加熱した。次いで、溶媒を蒸発させ、さらにＮＨ_３水溶液およびＮＨ_３の７Ｎ
ＭｅＯＨ溶液を添加した。混合物を９０℃で２４時間撹拌した。溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０／１００〜０３／９７）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、中間体Ａ５２を
得た（４６４ｍｇ、収率６９％）。

実施例Ａ３７〜Ａ３８に記載の合成手順に従って中間体Ａ５３を製造した：

実施例Ａ５３
中間体Ａ５３の製造：

中間体Ａ５２から製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ_３の７Ｎ ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ、０／１００〜１０／９０）。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、中間体Ａ５３を得た（収率６９％）。

実施例Ａ５４
中間体Ａ５４の製造：

２−アミノ−２−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−１，３−プロパンジオール（４．２ｇ、１５．９ｍｍｏｌ）およびオルトプロピオン酸トリエチル（３．５２ｍＬ、１７．５ｍｍｏｌ）をＤＣＥ（８０ｍＬ）に溶解し、その撹拌溶液に室温でＡｃＯＨを１滴添加した。混合物を８０℃で９０分間加熱した後、飽和Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液で処理し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濾過し、溶媒を減圧蒸発させて、油状物を得（４．６３ｇ）、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。

実施例Ａ５５
中間体Ａ５５の製造：

ＮａＨ（６０％鉱油分散液、７３５ｍｇ、１８．４ｍｍｏｌ）を、中間体Ａ５４（４．６３ｇ、１５．３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４０ｍＬ）溶液に０℃、窒素下で添加した。混合物を１０分間０℃で撹拌した後、ヨウ化メチル（１．９１ｍＬ、３０．６５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で９０分間撹拌した後、飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液で反応停止し、ヘプタンで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濾過し、溶媒を減圧蒸発させ、中間体Ａ５５を油状物として得（４．７３ｇ）、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。

実施例Ａ５６
中間体Ａ５６の製造：

中間体Ａ５５（４．９５ｇ、１５．７ｍｍｏｌ）をＨＣｌ（６Ｍ Ｈ_２Ｏ溶液、４０ｍＬ）に溶解し、その溶液を１００℃で１時間加熱した。次いで、溶媒を蒸発させ、中間体Ａ５６を油状物として得（４．３ｇ）、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。

実施例Ａ９〜Ａ１１、Ａ４３、Ａ２０、Ａ５０、Ａ３５、Ａ３６に記載の合成手順に従って中間体Ａ５７を製造した：

実施例Ａ５７
中間体Ａ５７の製造：

中間体Ａ５６から製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ_３の７Ｎ ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ、０／１００〜５／９５）で、中間体Ａ５７を得た（収率６８％）。

実施例Ａ５８
中間体Ａ５８の製造：

中間体Ａ５７（６１７ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（２４２ｍｇ、３．６７ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミン（１４２μＬ、１．３２ｍｍｏｌ）、およびＮａ_２ＣＯ_３（４４７ｍｇ、４．４１ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（１３ｍＬ）に懸濁し、その懸濁液にヨウ化銅（８４ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）を添加し、反応を脱気した。混合物を１１０℃で２５時間加熱した後、１Ｍ ＨＣｌで反応停止し、水層をＮＨ_４ＯＨで塩基性化し、ＡｃＯＥｔ（３×）で抽出した。合わせた有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ
_４）、濾過し、濃縮した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＮＨ_３の７Ｎ ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ、０／１００〜５／９５）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、中間体Ａ５８（４８０ｍｇ、収率９２％）を得た。

最終化合物の製造
実施例Ｂ１
化合物１：ｒａｃ−３−メチル−３−（３−ピリミジン−５−イル−フェニル）−３，４−ジヒドロ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−１−イルアミンの製造

封管内で、１，４−ジオキサン（４ｍＬ）とＥｔＯＨ（０．４ｍＬ）との混合物に中間体Ａ１８（３００ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）、ピリミジン−５−ホウ酸（３６７ｍｇ、２．９６ｍｍｏｌ）およびＫ_２ＣＯ_３（４０９ｍｇ、２．９６ｍｍｏｌ）を懸濁し、その撹拌懸濁液にＰｄ（ＰＰｈ_３）_４（５７ｍｇ、０．０４９ｍｍｏｌ）を添加した。混合物にマイクロ波を照射し１５０℃で３０分間加熱した。室温に冷却した後、混合物をＨ_２Ｏで希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濾過し、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をショートカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ_３の７Ｍ ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ、０／１００〜３／９７）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮して固体を得、これをＥｔ_２Ｏでトリチュレートし、音波処理し、濾過し、５０℃で減圧乾燥して固体を得、これを逆相ＨＰＬＣ（ＴＦＡの０．１％Ｈ_２Ｏ溶液８０％、ＭｅＣＮ２０％から、ＴＦＡの０．１％Ｈ_２Ｏ溶液０％、ＭｅＣＮ１００％への勾配）でさらに精製し、化合物１（９０．３ｍｇ、収率２２％）を固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ １．７４（ｓ，３Ｈ），４．４０（ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，１Ｈ），５．０３（ｄ，Ｊ＝１３．４Ｈｚ，１Ｈ），６．２６（ｄｄ，Ｊ＝４．２，２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．１９（ｄｄ，Ｊ＝４．２，１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｔ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．５４（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．９１（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），８．３８（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），９．１６（ｓ，２Ｈ），９．２１（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），９．２２（ｓ，１Ｈ），１０．２３（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）．

実施例Ｂ２
化合物２：ｒａｃ−３−（３’，５’−ジクロロ−ビフェニル−３−イル）−３−メチル−３，４−ジヒドロ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−１−イルアミンの製造

封管内で、１，４−ジオキサン（４ｍＬ）とＥｔＯＨ（０．４ｍＬ）との混合物に中間体Ａ１８（１６０ｍｇ、０．５２６ｍｍｏｌ）、２，３−ジクロロフェニル−ホウ酸（１
２０．４ｍｇ、０．６３１ｍｍｏｌ）およびＫ_２ＣＯ_３（２１８ｍｇ、１．５８ｍｍｏｌ）を懸濁し、その撹拌懸濁液にＰｄ（ＰＰｈ_３）_４（３０．４ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）を添加した。その混合物を６０℃で１８時間加熱した。室温に冷却した後、混合物をＨ_２ＯおよびＮＨ_４Ｃｌ（飽和水溶液）で希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をショートカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０／１００〜３／９７）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、固体を得、これをＤＩＰＥでトリチュレートし、濾過し、５０℃で減圧乾燥して、化合物２（１３６ｍｇ、収率７０％）を固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ｐｐｍ １．５６（ｓ，３Ｈ），４．１１（ｂｒ．ｓ，２Ｈ），４．０５（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．１０（ｄ，Ｊ＝１２．７Ｈｚ，１Ｈ），６．１８（ｄｄ，Ｊ＝３．８，２．６Ｈｚ，１Ｈ），６．４３（ｄｄ，Ｊ＝３．８，１．４Ｈｚ，１Ｈ），６．７５（ｄｄ，Ｊ＝２．３，１．４Ｈｚ １Ｈ），７．３２（ｔ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．３６−７．４２（ｍ，２Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，２Ｈ），７．５３（ｄｔ，Ｊ＝６．９，１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．６５−７．７１（ｍ，１Ｈ）．

実施例Ｂ３
化合物３：ｒａｃ−５−クロロ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（１−アミノ−３−メチル−３，４−ジヒドロ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）−フェニル］−アミドの製造

中間体Ａ２６（１８０ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）をＮＨ_３の２Ｍ ＥｔＯＨ溶液（８．２３ｍＬ）に懸濁し、その懸濁液にＮＨ_４Ｃｌ（９４ｍｇ、１．７５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を８０℃で６日間加熱した。溶媒を減圧蒸発させ、残留物をＤＣＭに懸濁し、Ｈ_２Ｏで洗浄した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濾過し、溶媒を減圧蒸発させた。生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ_３の７Ｍ ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ、０／１００〜１０／９０）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、化合物３（２８ｍｇ、収率１７％）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ｐｐｍ １．５６（ｓ，３Ｈ），２．９６（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），４．０６（ｄ，Ｊ＝１２．７Ｈｚ，１Ｈ），４．１４（ｄ，Ｊ＝１３．３Ｈｚ，１Ｈ），６．１７（ｄｄ，Ｊ＝３．８，２．６Ｈｚ，１Ｈ），６．４６（ｄｄ，Ｊ＝３．８，１．２Ｈｚ，１Ｈ），６．７５（ｄｄ，Ｊ＝２．３，１．４Ｈｚ １Ｈ），７．３０（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．６８−７．７３（ｍ，１Ｈ），７．８８（ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．９１（ｔ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），８．２５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．５７（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），９．８６（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．

実施例Ｂ４
化合物４：ｒａｃ−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（１−アミノ−３−メチル−３，４−ジヒドロ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）−フェニル］−アミドの製造

５−メトキシ−ピラジン−２−カルボン酸（５６．４ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライド（１１１ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（４ｍＬ）溶液に添加した。混合物を室温で５分間撹拌した。次いで、混合物を０℃に冷却し、中間体Ａ２５（８０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）溶液を添加した。混合物を室温に加温し、３時間撹拌した。混合物をＮａ_２ＣＯ_３とＨ_２Ｏとの飽和溶液で処理し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をＥｔ_２Ｏでトリチュレートした後、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔ／ヘプタン、５０／５０）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、化合物４（６５ｍｇ、収率５２％）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ １．３６（ｓ，３Ｈ），４．０３（ｓ，３Ｈ），３．９９−４．１１（ｍ，２Ｈ），６．０６（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），６．０２（ｄｄ，Ｊ＝３．５，２．６Ｈｚ，１Ｈ），６．５２（ｄｄ，Ｊ＝３．５，１．２Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｔ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２８−７．３３（ｍ，１Ｈ），７．７２（ｄｔ，Ｊ＝７．５，１．７Ｈｚ，１Ｈ），８．０２（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），８．４３（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），８．９０（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），１０．３３（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．

実施例Ｂ５
化合物５：（Ｒ）−５−クロロ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（１−アミノ−３−メチル−３，４−ジヒドロ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの製造

５−クロロ−ピリジン−２−カルボン酸（１２２ｍｇ、０．７７４ｍｍｏｌ）を、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライド（２１４ｍｇ、０．７７４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（４ｍＬ）溶液に添加した。混合物を室温で５分間撹拌した。次いで、混合物を０℃に冷却し、中間体Ａ３２（２００ｍｇ、０．７７４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（３ｍＬ）溶液を添加した。混合物を室温に加温し、９０分間撹拌した。混合物を冷浴中で減圧濃縮した後、それをＮａ_２ＣＯ_３とＨ_２Ｏとの飽和溶液で処理し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濾過し、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ_３の７Ｎ ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ、０／１００〜２／９８）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、残留物を得、これをＥｔ_２Ｏでトリチュレートし、化合物５（６５ｍｇ、収率２１％）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ｐｐｍ １．５６（ｓ，３Ｈ），４．２０（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１
２．７Ｈｚ，１Ｈ），４．２８（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．５９（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），６．１６（ｄｄ，Ｊ＝３．５，２．６Ｈｚ，１Ｈ），６．４３（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），６．７４−６．７８（ｍ，１Ｈ），７．０６（ｄｄ，Ｊ＝１１．７，８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｄｄ，Ｊ＝６．９，２．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８７（ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．３Ｈｚ，１Ｈ），８．０２（ｄｄｄ，Ｊ＝９．０，４．０，３．２Ｈｚ，１Ｈ），８．２３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．５６（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），９．８２（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．

実施例Ｂ６
化合物６：（Ｒ）−５−シアノ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（１−アミノ−３−メチル−３，４−ジヒドロ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの製造

５−シアノ−ピリジン−２−カルボン酸（１１５ｍｇ、０．７７４ｍｍｏｌ）を、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライド（２１４ｍｇ、０．７７４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ溶液に添加した。混合物を室温で５分間撹拌した。次いで、混合物を０℃に冷却し、中間体Ａ３２（２００ｍｇ、０．７７４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ溶液を添加した（ＭｅＯＨの合計量４ｍＬ）。混合物を室温に加温し、３時間撹拌した。混合物を冷浴中で減圧濃縮した後、それをＮａ_２ＣＯ_３とＨ_２Ｏとの飽和溶液で処理し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濾過し、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ_３の７Ｎ ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ、０／１００〜２／９８）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、残留物を得、これをＥｔ_２Ｏでトリチュレートし、化合物７（１１０ｍｇ、収率３７％）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ｐｐｍ １．５７（ｓ，３Ｈ），４．２１（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．２８（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１２．７Ｈｚ，１Ｈ），４．３７（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），６．１６（ｄｄ，Ｊ＝３．８，２．６Ｈｚ，１Ｈ），６．４３（ｄｄ，Ｊ＝３．８，１．２Ｈｚ，１Ｈ），６．７７（ｄｄ，Ｊ＝２．５，１．３Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｄｄ，Ｊ＝１１．７，８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８３（ｄｄ，Ｊ＝６．９，２．９Ｈｚ，１Ｈ），８．０１（ｄｄｄ，Ｊ＝８．７，４．０，２．９Ｈｚ，１Ｈ），８．１８（ｄｄ，Ｊ＝８．１，２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．４０（ｄｄ，Ｊ＝８．１，０．６Ｈｚ，１Ｈ），８．８５（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），９．８５（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．

実施例Ｂ７
化合物７：（Ｒ）−５−フルオロ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（１−アミノ−７−フルオロ−３−メチル−３，４−ジヒドロ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの製造

５−フルオロ−ピリジン−２−カルボン酸（１２３ｍｇ、０．８６９ｍｍｏｌ）を、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライド（２４０ｍｇ、０．８６９ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（４ｍＬ）溶液に添加した。混合物を室温で５分間撹拌した。次いで、混合物を０℃に冷却し、中間体Ａ３８（２００ｍｇ、０．７２４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）溶液を添加した。混合物を室温に加温し、２時間撹拌した。混合物をＮａ_２ＣＯ_３とＨ_２Ｏとの飽和溶液で処理し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ_３の７Ｎ ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ、０／１００〜４／９６）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて残留物を得、これをヘプタンでトリチュレートし、化合物８（１９６ｍｇ、収率６８％）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ
ｐｐｍ １．４１（ｓ，３Ｈ），３．９８（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１２．７Ｈｚ，１Ｈ），４．１０（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，１Ｈ），６．１６（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），６．４１（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），６．９４（ｄｄ，Ｊ＝３．４，２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ＝１２．０，８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｄｄｄ，Ｊ＝８．８，４．２，２．８Ｈｚ，１Ｈ），７．９７（ｔｄ，Ｊ＝８．７，２．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１１（ｄｄ，Ｊ＝７．５，２．７Ｈｚ，１Ｈ），８．２１（ｄｄ，Ｊ＝８．８，４．６Ｈｚ，１Ｈ），８．７３（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），１０．５１（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）．

実施例Ｂ８
化合物８：（Ｒ）−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（１−アミノ−７−フルオロ−３−メチル−３，４−ジヒドロ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの製造

５−メトキシ−ピラジン−２−カルボン酸（１３４ｍｇ、０．８６９ｍｍｏｌ）を、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライド（２４０ｍｇ、０．８６９ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（４ｍＬ）溶液に添加した。混合物を室温で５分間撹拌した。次いで、混合物を０℃に冷却し、中間体Ａ３８（２００ｍｇ、０．７２４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）溶液を添加した。混合物を室温に加温し、２時間撹拌した。混合物をＮａ_２ＣＯ_３とＨ_２Ｏとの飽和溶液で処理し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ_３の７Ｎ ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ、０／１００〜４／９６）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて残留物を得、これをヘプタンでトリチュレートし、化合物８（２１３ｍｇ、収率７１％）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ
ｐｐｍ １．４１（ｓ，３Ｈ），３．９７（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１２．９Ｈｚ，１Ｈ），４
．０２（ｓ，３Ｈ），４．０９（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，１Ｈ），６．１２（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），６．４０（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），６．９３（ｄｄ，Ｊ＝３．２，１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄｄ，Ｊ＝１２．０，８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７２（ｄｄｄ，Ｊ＝８．８，４．２，３．０Ｈｚ，１Ｈ），８．１２（ｄｄ，Ｊ＝７．４，２．８Ｈｚ，１Ｈ），８．４１（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），８．８７（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），１０．４０（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）．

実施例Ｂ９
化合物９：（Ｒ）−５−シアノ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（１−アミノ−３−メチル−７−トリフルオロメチル−３，４−ジヒドロ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの製造

５−シアノ−ピリジン−２−カルボン酸（８２ｍｇ，０．５５１ｍｍｏｌ）を、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライド（１６８ｍｇ、０．６０６ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（３ｍＬ）溶液に添加した。混合物を室温で５分間撹拌した。次いで、混合物を０℃に冷却し、中間体Ａ４６（２００ｍｇ、０．５５１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）溶液を添加した。混合物を室温に加温し、１８時間撹拌した。混合物を冷浴中で減圧濃縮した後、それを飽和Ｎａ_２ＣＯ_３溶液で処理し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、減圧濃縮した。
粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０／１００〜４／９６）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させた。化合物をＥｔ_２Ｏでトリチュレートして混合物を得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０／１００〜４／９６）で再精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、不純物を含む画分を得、これを、（Ｃ１８ Ｓｕｎｆｉｒｅ ３０×１００ ５ｕｍ）、移動相（ＴＦＡの０．１％Ｈ_２Ｏ溶液８０％、ＭｅＣＮ２０％から、ＴＦＡの０．１％Ｈ_２Ｏ溶液０％、ＭｅＣＮ１００％への勾配）でのＲＰ ＨＰＬＣにより精製し、化合物９（１２１．３ｍｇ、収率３９％）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ １．７９（ｓ，３Ｈ），４．５０（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，１Ｈ），４．９２（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１３．３Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄｄ，Ｊ＝１１．８，８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），７．８６−７．９３（ｍ，２Ｈ），７．９５（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），８．２５（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），８．５８（ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．８７（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），９．２０（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），９．５５（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），１０．６７（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），１０．９９（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）．

実施例Ｂ１０
化合物１０：（Ｒ）−１−ジフルオロメチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸［３−（１−アミノ−３−メチル−７−トリフルオロメチル−３，４−ジヒドロ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの製造

１−ジフルオロメチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（３１ｍｇ、０．１９３ｍｍｏｌ）を、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライド（５９ｍｇ、０．２１２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（３ｍＬ）溶液に添加した。混合物を室温で５分間撹拌した。混合物を０℃に冷却し、中間体Ａ４６（７０ｍｇ、０．１９３ｍｍｏｌ、遊離塩基を生成するようにＮＨ_３のＭｅＯＨ溶液で予め処理した）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）溶液を添加した。次いで、混合物を室温で１８時間撹拌した。
混合物を冷浴中で減圧濃縮した後、飽和Ｎａ_２ＣＯ_３溶液で処理し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、減圧濃縮した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０／１００〜４／９６）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させた。化合物をＥｔ_２Ｏでトリチュレートし、化合物１０（５６ｍｇ、収率６２％）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ １．４０（ｓ，３Ｈ），４．１３（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２９（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１２．７Ｈｚ，１Ｈ），６．２５（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），６．８７（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ＝１１．８，９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），７．６３−７．６９（ｍ，１Ｈ），７．９２（ｔ，Ｊ＝５８．７Ｈｚ，１Ｈ），８．０５−８．１０（ｍ，１Ｈ），８．４１（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），１０．３４（ｓ，１Ｈ）．

実施例Ｂ１１
化合物１１：ｒａｃ−５−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（１−アミノ−３−ジフルオロメチル−３，４−ジヒドロ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミド、化合物１２：（Ｒ^＊）−５−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（１−アミノ−３−ジフルオロメチル−３，４−ジヒドロ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミド、および化合物１３：（Ｓ^＊）−５−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（１−アミノ−３−ジフルオロメチル−３，４−ジヒドロ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの製造

４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライド（２３３ｍｇ、０．８４１ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（４ｍＬ）に混合し、その混合物に５−メトキシ−ピラジン−２−カルボン酸（１３０ｍｇ、０．８４１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で５分間撹拌した後、０℃に冷却し、中間体Ａ５３（２２５ｍｇ、０．７６５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（４ｍＬ）溶液を添加した。混合物を室温で１６時間撹拌した後、飽和Ｎａ_２ＣＯ_３で処理し、数分間撹拌した。溶媒を濃縮し、Ｈ_２Ｏを添加し、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９：１）の混合物で抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濾過し、減圧濃縮した。粗生成物をＤＣＭでトリチュレートし、濾過して、化合物１１の第１のバッチを得た。濾液を蒸発させ、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０／１００〜７／９３）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、化合物１１の第２のバッチを得、これを以前のものと合わせた。ラセミ化合物を、ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ（ＯＤ−Ｈ ５μｍ、２５０×２０ｍｍ）、移動相（ＣＯ_２６０％、ＥｔＯＨ４０％）でのキラルＳＦＣにより精製し、化合物１２（５７ｍｇ、収率１７％）、^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ ４．０２（ｓ，３Ｈ）４．２８（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，１Ｈ）４．６１（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，１Ｈ）６．０１（ｄｄ，Ｊ＝３．３，２．７Ｈｚ，１Ｈ）６．１６（ｔ，Ｊ＝５５．５Ｈｚ，１Ｈ）６．４０（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ）６．５３（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ）６．９８（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）７．１１−７．１９（ｍ，１Ｈ）７．７３−７．７８（ｍ，１Ｈ）８．１１（ｄｄ，Ｊ＝７．１，２．７Ｈｚ，１Ｈ）８．４１（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ）８．８７（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ）１０．４２（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、および、^１Ｈ ＮＭＲスペクトルが化合物１２のものと一致した化合物１３（７２ｍｇ、収率２１％）を得た。

Ｃ．分析部分
ＬＣＭＳ：
本発明の化合物を（ＬＣ）ＭＳで特性評価するため、次の方法を使用した。

一般的手順Ａ
ＵＰＬＣ（超高速液体クロマトグラフィー）測定は、サンプラーオーガナイザー、脱気装置を有するバイナリポンプ、４本のカラムを収容するオーブン、ダイオードアレイ検出器（ＤＡＤ）および各方法で明記するカラムを備えるＡｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ）システムを使用して行った。ＭＳ検出器は、エレクトロスプレーイオン源と共に構成された。質量スペクトルは、０．０８秒のチャンネル間遅延を使用して０．１秒で１００〜１０００の走査を行うことにより、シングル四重極型ＳＱＤ検出器（Ｗａｔｅｒｓ）で取得した。キャピラリーニードル電圧は３．０ｋＶであった。コーン電圧は、正イオン化モードでは２５Ｖ、および負イオン化モードでは３０Ｖであった。イオン源温度は１４０℃に維持した。窒素をネブライザーガスとして用いた。データ取得は、ＭａｓｓＬｙｎｘ−Ｏｐｅｎｌｙｎｘソフトウェアで行った。

方法１：
一般的方法Ａに加えて：逆相ＵＰＬＣを、ＭＳ検出器に分岐することなく、Ａｇｉｌｅｎｔ製のＲＲＨＤ Ｅｃｌｉｐｓｅ Ｐｌｕｓ−Ｃ１８（１．８μｍ、２．１×５０ｍｍ）で、流速１．０ｍＬ／分、５０℃で行った。使用した勾配条件は次の通りであった：Ａ（ＮＨ_４ＡｃＯの６．５ｍＭ Ｈ_２Ｏ溶液／ＭｅＣＮ、９５／５）９５％、Ｂ（ＭｅＣＮ）５％から、３．８分でＡ４０％、Ｂ６０％に、４．６分でＡ５％、Ｂ９５％に変化させ、５．０分まで維持した。注入量２μＬ。

一般的手順Ｂ
ＨＰＬＣ測定は、脱気装置付きポンプ（クォータナリまたはバイナリ）、オートサンプラー、カラムオーブン、ダイオード−アレイ検出器（ＤＡＤ）および各方法で明記するカラムを備える、ＨＰ １１００（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）システムを使用して行った。ＭＳ検出器（ＳＱＤ、ＴＯＦ）は、エレクトロスプレーイオン源と共に構成された。窒素をネブライザーガスとして使用した。イオン源温度は１４０℃に維持した。データ取得は、ＭａｓｓＬｙｎｘ−Ｏｐｅｎｌｙｎｘソフトウェアで行った。
Ｂ１：質量スペクトルは、シングル四重極型ＳＱＤ検出器で、０．０８秒のチャンネル間遅延を使用し、０．１秒で１００〜１０００の走査を行うことにより取得した。キャピラリーニードル電圧は３．０ｋＶであった。コーン電圧は、正イオン化モードでは２０Ｖ、および負イオン化モードでは３０Ｖであった。
Ｂ２：質量スペクトルは、飛行時間（ＴＯＦ）型検出器で、０．３秒のデータ収集時間（
ｄｗｅｌｌ ｔｉｍｅ）を使用し、０．５秒で１００〜７５０の走査を行うことにより取得した。キャピラリーニードル電圧は、正イオン化モードでは２．５ｋＶ、負イオン化モードでは２．９ｋＶであった。コーン電圧は、正イオン化モードと負イオン化モードの両方で２０Ｖであった。ロイシン−エンケファリンをロックマス（ｌｏｃｋ ｍａｓｓ）校正に使用する標準物質とした。

方法２：
一般的方法Ｂ１に加えて：逆相ＨＰＬＣを、Ａｇｉｌｅｎｔ製のＥｃｌｉｐｓｅ Ｐｌｕｓ−Ｃ１８カラム（３．５μｍ、２．１×３０ｍｍ）で、流速１．０ｍＬ／分、６０℃で行った。使用した勾配条件は次の通りである：Ａ（ＮＨ_４ＡｃＯの６．５ｍＭ Ｈ_２Ｏ溶液／ＭｅＣＮ、９５／５）９５％、Ｂ（ＭｅＣＮ／ＭｅＯＨ、１／１）５％から、５．０分でＢ１００％に変化させ、５．１５分まで維持し、５．３０分の時点で初期条件に平衡化させ、７．０分まで継続した。注入量２μＬ。

方法３：
一般的方法Ｂ２に加えて：逆相ＨＰＬＣを、Ａｇｉｌｅｎｔ製のＥｃｌｉｐｓｅ Ｐｌｕｓ−Ｃ１８カラム（３．５μｍ、２．１×３０ｍｍ）で、流速１．０ｍＬ／分、６０℃で行った。使用した勾配条件は次の通りである：Ａ（ＮＨ_４ＡｃＯの６．５ｍＭ Ｈ_２Ｏ溶液／ＭｅＣＮ、９５／５）９５％、Ｂ（ＭｅＣＮ／ＭｅＯＨ、１／１）５％から、５．０分でＢ１００％に変化させ、５．１５分まで維持し、５．３分の時点で初期条件に平衡化させ、７．０分まで継続した。注入量２μＬ。

方法４：
一般的方法Ｂ２に加えて：逆相ＨＰＬＣを、Ａｇｉｌｅｎｔ製のＥｃｌｉｐｓｅ Ｐｌｕｓ−Ｃ１８カラム（３．５μｍ、２．１×３０ｍｍ）で、流速１．０ｍｌ／分、６０℃で行った。使用した勾配条件は次の通りである：Ａ（ＮＨ_４ＡｃＯの６．５ｍＭ Ｈ_２Ｏ溶液／ＭｅＣＮ、９５／５）９５％、Ｂ（ＭｅＣＮ）５％（０．２分維持）から、３．０分でＢ１００％に変化させ、３．１５分まで維持し、３．３分の時点で初期条件に平衡化させ、５．０分まで継続した。注入量２μＬ。

一般的手順Ｃ
ＬＣ測定は、脱気装置付きバイナリポンプ、オートサンプラー、ダイオード−アレイ検出器（ＤＡＤ）および下記の各方法で明記するカラムを備え、カラムが４０℃の温度に維持されるＵＰＬＣ（超高速液体クロマトグラフィー）Ａｃｑｕｉｔｙ（Ｗａｔｅｒｓ）システムを使用して行った。ＭＳ検出器は、エレクトロスプレーイオン源と共に構成された。質量スペクトルは、トリプル四重極型Ｑｕａｔｔｒｏ検出器（Ｗａｔｅｒｓ）で、０．１秒のスキャン間遅延を使用して、０．２秒で１００〜１０００の走査を行うことにより取得した。キャピラリーニードル電圧は３ｋＶであり、イオン源温度は１３０℃に維持した。コーン電圧は、正イオン化モードと負イオン化モードで２０Ｖであった。窒素をネブライザーガスとして使用した。データ取得は、ＭａｓｓＬｙｎｘ−Ｏｐｅｎｌｙｎｘソフトウェア（Ｗａｔｅｒｓ）で行った。

方法５：
一般的手順に加えて：逆相ＵＰＬＣを、Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＢＥＨ（架橋エチルシロキサン／シリカハイブリッド）Ｐｈｅｎｙｌ−Ｈｅｘｙｌカラム（１．７μｍ、２．１×１００ｍｍ）で、流速０．３４３ｍＬ／分で行った。２種の移動相（移動相Ａ：７ｍＭ ＮＨ_４ＡｃＯ９５％／ＭｅＣＮ５％；移動相Ｂ：ＭｅＣＮ１００％）を使用して、Ａ８４．２％およびＢ１５．８％（０．４９分間維持）から、２．１８分でＡ１０．５％およびＢ８９．５％に変化させ、１．９４分間維持し、０．７３分で初期条件に戻し、０．７３分間維持する勾配条件を実施した。注入量２ｍｌを使用した。

融点
値はピーク値または溶融範囲のいずれかであり、得られた値は、一般にこの分析方法に伴う実験的不確かさを有する。

Ｍｅｔｔｌｅｒ ＦＰ８１ＨＴ／ＦＰ９０またはＦＰ６２装置
多くの化合物について、Ｍｅｔｔｌｅｒ ＦＰ６２またはＭｅｔｔｌｅｒ ＦＰ８１ＨＴ／ＦＰ９０装置のいずれかでオープンキャピラリー内で融点を測定した。融点は、１、３、５または１０℃／分の温度勾配で測定した。最高温度は３００℃であった。融点は、デジタル表示装置から読み取った。
多くの化合物について、Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ａｎｄ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏ．Ｌｔｄ．から購入したＷＲＳ−２Ａ融点測定装置で融点（ｍ．ｐ．）を測定した。融点は、０．２〜５．０℃／分の直線的加熱速度で測定した。報告する値は融点範囲である。最高温度は３００℃であった。

ＳＦＣ−ＭＳ方法：
ＳＦＣ−ＭＳ方法に関する一般的手順：
ＳＦＣ測定は、二酸化炭素（ＣＯ_２）と調節剤を供給するためのＦＣＭ−１２００デュアルポンプ流体制御モジュール、ＣＴＣ Ａｎａｌｙｔｉｃｓ自動流体サンプラー、室温〜８０℃のカラム加熱用ＴＣＭ−２００００熱制御モジュールを備えるＢｅｒｇｅｒ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ製のＡｎａｌｙｔｉｃａｌ ＳＦＣシステムを使用して行った。４００バールまで耐える高圧フローセルを備えるＡｇｉｌｅｎｔ １１００ ＵＶフォトダイオードアレイ検出器を使用した。カラムからの流れをＭＳ分光計に分岐した。ＭＳ検出器は、大気圧イオン源と共に構成された。イオン化後のＷａｔｅｒｓ ＺＱ質量分光計のパラメータは：コロナ：９μａ、イオン源温度：１４０℃、コーン：３０Ｖ、プローブ温度４５０℃、抽出器３Ｖ，脱溶媒ガス４００Ｌ／時間、コーンガス７０Ｌ／時間である。窒素をネブライザーガスとして使用した。データ取得は、Ｗａｔｅｒｓ−Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＭａｓｓＬｙｎｘ−Ｏｐｅｎｌｙｎｘデータシステムで行った。

方法１：
一般的手順に加えて：ＳＦＣでのキラル分離を、ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ ＯＤ−Ｈ ＤＡＩＣＥＬカラム（５μｍ、４．６×２５０ｍｍ）で、３５℃、流速３．０ｍＬ／分で行った。移動相はＣＯ_２、エタノール（＋ｉＰｒＮＨ_２０．３％）４０％、７分維持、定組成モードである。

方法２：
一般的手順に加えて：ＳＦＣでのキラル分離を、ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＡＤ−Ｈ ＤＡＩＣＥＬカラム（１０μｍ、４．６×２５０ｍｍ）で、３５℃、流速３．０ｍＬ／分で行った。移動相はＣＯ_２、ＥｔＯＨ１５％、イソプロパノール（＋ｉＰｒＮＨ_２０．３％）１５％、７分維持、定組成モードである。

旋光：
旋光は、ナトリウムランプを有するＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ ３４１旋光計で測定し、次のように報告した：［α］_λ ^ｔ℃（ｃｇ／１００ｍＬ、溶媒）。

薬理学的実施例
本発明で提供される化合物は、β部位ＡＰＰ切断酵素１（ＢＡＣＥ１）の阻害剤である。ＢＡＣＥ１、即ち、アスパラギン酸プロテアーゼの阻害は、アルツハイマー病（ＡＤ）の治療に密接に関連していると考えられる。β−アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）からのβ−アミロイドペプチド（Ａβ）の産生および蓄積は、ＡＤの発症および進行に重要な役割を果たすものと考えられる。Ａβは、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）から、それぞれβ−セクレターゼおよびγ−セクレターゼでＡβドメインのＮ末端側およびＣ末端側を連続的に切断することにより産生される。

式（Ｉ）の化合物は、酵素活性を阻害する能力があるため、ＢＡＣＥ１に対してかなり効果があるものと期待される。このような化合物、特に式（Ｉ）の化合物の同定に好適な後述の、生化学的蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）に基づくアッセイおよびＳＫＮＢＥ２細胞での細胞αｌｉｓａアッセイを使用して試験したこのような阻害剤の特性を表１に示す。

生化学的ＦＲＥＴに基づくアッセイ
本アッセイは、蛍光共鳴エネルギー移動アッセイ（ＦＲＥＴ）に基づくアッセイである。このアッセイの基質は、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）β−セクレターゼ切断部位の「スウェーデン」Ｌｙｓ−Ｍｅｔ／Ａｓｎ−Ｌｅｕ突然変異を含有するＡＰＰ由来の１３個のアミノ酸からなるペプチドである。この基質は２つのフルオロフォアも含有し：（７−メトキシクマリン−４−イル）酢酸（Ｍｃａ）は３２０ｎｍの励起波長と４０５
ｎｍの発光とを有する蛍光ドナーであり、２，４−ジニトロフェニル（Ｄｎｐ）は専有の（ｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ）消光剤アクセプターである。これらの２つの基の間の距離は、光励起時に、共鳴エネルギー移動により、ドナー蛍光エネルギーがアクセプターにより著しく消光されるように選択されている。ＢＡＣＥ１による切断時に、フルオロフォアＭｃａは消光基Ｄｎｐから分離され、ドナーの全蛍光収量を回復する。蛍光の増加は、タンパク質分解速度と比例関係がある（Ｋｏｉｋｅ Ｈ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９９９，１２６，２３５−４２）。
簡潔に言えば、３８４ウェルのフォーマットで、最終濃度１μｇ／ｍｌの組換えＢＡＣＥ１タンパク質を化合物の非存在下もしくは存在下、インキュベーションバッファー（４０ｍＭクエン酸バッファーｐＨ５．０、０．０４％ＰＥＧ、４％ＤＭＳＯ）中１０μｍの基質と共に室温で１２０分間インキュベートする。次に、タンパク質分解量をＴ＝０およびＴ＝１２０での蛍光測定により直接測定する（励起３２０ｎｍおよび発光４０５ｎｍ）。結果を、Ｔ１２０とＴ０間との差としてＲＦＵで表す。
最良適合曲線を、最小二乗法により％Ｃｏｎｔｒｏｌｍｉｎ対化合物濃度のプロットに適合させる。これからＩＣ５０値（活性の５０％阻害を引き起こす阻害濃度）を得ることができる。

ＬＣ＝低コントロール値の中央値
＝低コントロール：酵素なしの反応
ＨＣ＝高コントロール値の中央値
＝高コントロール：酵素を用いた反応
％効果＝１００−［（サンプル−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）^＊１００］
％コントロール＝（サンプル／ＨＣ）^＊１００
％Ｃｏｎｔｒｏｌｍｉｎ＝（サンプル−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）^＊１００

以下に例示する化合物は本質的に前述のように試験され、以下の活性を示した：

ＳＫＮＢＥ２細胞での細胞αｌｉｓａアッセイ
２つのαｌｉｓａアッセイでは、産生され、ヒト神経芽細胞腫ＳＫＮＢＥ２細胞の培地中に分泌される全ＡβおよびＡβ４２の濃度を定量する。アッセイは、野生型アミロイド前駆体タンパク質（ｈＡＰＰ６９５）を発現するヒト神経芽細胞腫ＳＫＮＢＥ２に基づく。化合物を希釈してこれらの細胞に添加し、１８時間インキュベートした後、Ａβ４２および全Ａβの測定を行う。全ＡβおよびＡβ４２は、サンドイッチαｌｉｓａで測定する。αｌｉｓａは、それぞれ全ＡβおよびＡβ４２を検出するための、ストレプトアビジン被覆ビーズに結合したビオチン化抗体ＡｂＮ／２５および抗体Ａｂ４Ｇ８またはｃＡｂ４２／２６結合アクセプタービーズを使用するサンドイッチアッセイである。全ＡβまたはＡβ４２の存在下でビーズは近接する。ドナービーズの励起により一重項酸素分子の放出が起こり、それによりアクセプタービーズで一連のエネルギー移動が起こり、その結果、発光が生じる。発光は１時間インキュベートした後に測定する（励起６５０ｎｍおよび発光６１５ｎｍ）。

最良適合曲線を、最小二乗法により％Ｃｏｎｔｒｏｌｍｉｎ対化合物濃度のプロットに適合させる。これからＩＣ５０値（活性の５０％阻害を引き起こす阻害濃度）を得ることができる。

ＬＣ＝低コントロール値の中央値
＝低コントロール：αｌｉｓａにビオチン化Ａｂを用いることなく、化合物なしで予備インキュベートされた細胞
ＨＣ＝高コントロール値の中央値
＝高コントロール：化合物なしで予備インキュベートされた細胞
％効果＝１００−［（サンプル−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）^＊１００］
％コントロール＝（サンプル／ＨＣ）^＊１００
％Ｃｏｎｔｒｏｌｍｉｎ＝（サンプル−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）^＊１００

以下に例示する化合物は本質的に前述のように試験し、以下の活性を示した：

ｉｎ ｖｉｖｏ有効性の実証
本発明のＡβペプチド低下剤は、ヒトなどの哺乳動物のＡＤを治療するために使用することができる、または、あるいは、以下に限定されるものでないが、マウス、ラットもしくはモルモットなどの動物モデルで有効性を示す。哺乳動物はＡＤと診断されていなくてもよく、またはＡＤに関する遺伝的素因を有していなくてもよいが、しかし、ＡＤに罹患しているヒトに見られるものと同様にＡβを過剰産生し、最終的にそれを沈着するようなトランスジェニックとすることができる。

Ａβペプチド低下剤は、任意の標準的形態で任意の標準的方法を使用して投与することができる。例えば、以下に限定されるものでないが、Ａβペプチド低下剤は、経口でまたは注射により摂取される液剤、錠剤またはカプセル剤の形態であってもよい。Ａβペプチド低下剤は、血液、血漿、血清、脳脊髄液（ＣＳＦ）または脳中のＡβペプチドの濃度を著しく低下させるのに十分な任意の用量で投与することができる。

Ａβ４２ペプチド低下剤の急性投与によりｉｎ ｖｉｖｏでＡβペプチド濃度が低下するかどうかを確認するため、非トランスジェニックげっ歯類、例えばマウスまたはラットを使用した。Ａβペプチド低下剤で処置した動物を検査し、非処置のものまたは溶媒で処置したものと比較し、可溶性Ａβ４２および全Ａβの脳内濃度を標準的な方法により、例えばＥＬＩＳＡを使用して定量した。処置期間は数時間（ｈ）から数日までの範囲とし、効果の現れる時間経過を確認できた後、Ａβ４２低下の結果に基づいて調節した。

ｉｎ ｖｉｖｏでのＡβ４２低下を測定する典型的プロトコルを示すが、それは検出可能なＡβの濃度を最適化するのに使用し得る多くの変法の１つに過ぎない。例えば、Ａβペプチド低下化合物を２０％ヒドロキシプロピルβシクロデキストリン中で製剤化した。Ａβペプチド低下剤を、一晩絶食した動物に単一経口用量（ｐ．ｏ．）としてまたは単一皮下用量（ｓ．ｃ．）として投与した。一定時間後、通常、２時間後または４時間後（表７に示す）に動物を犠牲にし、Ａβ４２濃度を分析した。

断頭し、ＥＤＴＡ処理採血管に全血を採取することにより採血した。血液を１９００ｇで１０分（ｍｉｎ）間、４℃で遠心分離し、血漿を回収し、後で分析するために急速凍結した。脳を頭蓋および後脳から取り出した。小脳を除去し、左半球と右半球を分離した。左半球は、試験化合物濃度を定量分析するために−１８℃で保存した。右半球は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）緩衝液で洗浄し、直ぐにドライアイス上で凍結させ、生化学的アッセイのためホモジナイズするまで−８０℃で保存した。

非トランスジェニック動物からのマウス脳を、組織１グラム当たり、プロテアーゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ−１１８７３５８０００１若しくは０４６９３１５９００１）を含有する０．４％ＤＥＡ（ジエチルアミン）／５０ｍＭ ＮａＣｌ、８容量に再懸濁させた、例えば、脳０．１５８ｇに対して、０．４％ＤＥＡを１．２６４ｍｌ添加する。溶解マトリックスＤ（ＭＰＢｉｏ ＃６９１３−１００）を使用し、ＦａｓｔＰｒｅｐ−２４システム（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）内で全サンプルを６ｍ／ｓで２０秒間、ホモジナイズした。ホモジネートを２２１．３００×ｇで５０分間、遠心分離した。次いで、得られた高速上清を新しいエッペンドルフ管に移した。上清９部を０．５Ｍトリス−ＨＣｌ ｐＨ６．８、１部で中和し、全ＡβおよびＡβ４２の定量に使用した。

脳ホモジネートの可溶性画分中の全ＡβおよびＡβ４２の量を定量するために、酵素結合免疫吸着検定法を使用した。簡潔に言えば、標準物質（合成Ａβ１−４０およびＡβ１−４２の希釈物、Ｂａｃｈｅｍ）を、最終濃度が１００００〜０．３ｐｇ／ｍｌの範囲と
なるように、Ｕｌｔｒａｃｕｌｔｕｒｅ内の１．５ｍｌエッペンドルフ管内で製造した。サンプルおよび標準物質を、Ａβ４２検出用のＨＲＰＯ標識Ｎ末端抗体および全Ａβ検出用のビオチン化中央ドメイン抗体４Ｇ８と一緒に共インキュベートした。次いで、５０μｌのコンジュゲート／サンプルまたはコンジュゲート／標準物質混合物を、抗体でコーティングしたプレートに添加した（捕獲抗体は、Ａβ４２のＣ末端を選択的に認識するＡβ４２検出用の抗体ＪＲＦ／ｃＡβ４２／２６と、ＡβのＮ末端を選択的に認識する全Ａβ検出用の抗体ＪＲＦ／ｒＡβ／２であった）。抗体−アミロイド複合体を形成させるため、このプレートを４℃で終夜インキュベートした。このインキュベーションおよびその後の洗浄工程の後、Ａβ４２を定量するためのＥＬＩＳＡを、製造業者の指示（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｏｒｐ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌ）に従いＱｕａｎｔａ Ｂｌｕ蛍光原ペルオキシダーゼ基質を添加することにより終了した。読み取りは１０分〜１５分後に行った（励起３２０ｎｍ／発光４２０ｎｍ）。

全Ａβ検出のため、ストレプトアビジン−ペルオキシダーゼコンジュゲートを添加し、６０分後に、追加の洗浄工程を行い、製造業者の指示（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｏｒｐ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌ）に従いＱｕａｎｔａ Ｂｌｕ蛍光原ペルオキシダーゼ基質を添加した。読み取りは１０分〜１５分後に行った（励起３２０ｎｍ／発光４２０ｎｍ）。

このモデルでは、未処置動物と比較して少なくとも２０％のＡβ４２低下が有利であろう。

例示する以下の化合物は本質的に前述のように試験され、次の活性を示した：

Claims (9)

1. 式（Ｉ）
   

   

   
   の化合物、またはその互変異性体もしくは立体異性体の形態
   （式中、
   Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３は、水素、ハロ、シアノ、Ｃ_１〜３アルキル、モノ−およびポリハロ−Ｃ_１〜３アルキル、ならびにＣ_３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択され；
   Ｒ^４は、水素、Ｃ_１〜３アルキル、メトキシメチル、Ｃ_３〜６シクロアルキル、モノ−およびポリハロ−Ｃ_１〜３アルキル、ホモアリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され；
   Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、Ｘ^４は、独立してＣ（Ｒ^５）またはＮであるが、但し、その中でＮを表すのは２個以下であり；Ｒ^５は、水素、ハロ、シアノ、Ｃ_１〜３アルキル、モノ−およびポリハロ−Ｃ_１〜３アルキル、ならびにＣ_３〜６シクロアルキルからなる群から選択され；
   Ｌは、結合または−ＮＨＣＯ−であり；
   Ａｒは、ホモアリールまたはヘテロアリールであり；
   ここで、ホモアリールは、フェニル、またはハロ、シアノ、Ｃ_１〜３アルキル、Ｃ_１〜３アルキルオキシ、モノ−およびポリハロ−Ｃ_１〜３アルキル、ならびにモノ−およびポリハロ−Ｃ_１〜３アルキルオキシからなる群から選択される１個、２個または３個の置換基で置換されたフェニルであり；
   ヘテロアリールは、それぞれ任意選択によりハロ、シアノ、Ｃ_１〜３アルキル、Ｃ_１〜３アルキルオキシ、モノ−およびポリハロ−Ｃ_１〜３アルキル、ならびにモノ−およびポリハロ−Ｃ_１〜３アルキルオキシからなる群から選択される１個、２個または３個の置換基で置換された、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、ピリダジル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、トリアゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、オキサゾリル、およびオキサジアゾリルからなる群から選択される）、または、
   その付加塩もしくは溶媒和物。
2. Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３が、水素およびＣ_１〜３アルキルから独立して選択され；
   Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、Ｘ^４が、独立してＣ（Ｒ^５）であり、ここで各Ｒ^５は水素およびハロから選択され；
   Ｌが、結合または−ＮＨＣＯ−であり；
   Ａｒが、ホモアリールまたはヘテロアリールであり；
   ここで、ホモアリールは、フェニル、またはハロ、シアノ、Ｃ_１〜３アルキル、Ｃ_１〜３アルキルオキシ、およびポリハロ−Ｃ_１〜３アルキルオキシからなる群から選択される１個または２個の置換基で置換されたフェニルであり；
   ヘテロアリールは、それぞれ任意選択によりハロ、シアノ、Ｃ_１〜３アルキル、Ｃ_{１
   〜３}アルキルオキシ、およびポリハロ−Ｃ_１〜３アルキルオキシからなる群から選択される１個または２個の置換基で置換された、ピリジル、ピリミジル、およびピラジニルからなる群から選択される；
   請求項１に記載の化合物、または、
   その付加塩もしくは溶媒和物。
3. Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３が、水素であり；
   Ｘ^１が、ＣＦであり；
   Ｘ^２、Ｘ^３、Ｘ^４が、ＣＨであり；
   Ｌが、結合または−ＮＨＣＯ−であり；
   Ａｒが、ホモアリールまたはヘテロアリールであり；
   ここで、ホモアリールは、クロロで置換されたフェニルであり；
   ヘテロアリールは、それぞれ任意選択によりクロロ、フルオロ、シアノ、メチル、およびメトキシからなる群から選択される１個または２個の置換基で置換された、ピリジルおよびピリミジルからなる群から選択される；
   請求項１に記載の化合物、または、
   その付加塩もしくは溶媒和物。
4. 前記Ｒ^４で置換された炭素原子がＲ配置を有する、請求項１に記載の化合物。
5. Ｒ^１およびＲ^３が水素であり、Ｒ^２が水素、フルオロ、またはトリフルオロメチルであり；
   Ｒ^４が、メチルまたはジフルオロメチルであり；
   Ｘ^１が、ＣＨまたはＣＦであり；
   Ｘ^２、Ｘ^３、およびＸ^４が、ＣＨであり；
   Ｌが、−ＮＨＣＯ−であり；
   Ａｒが、５−クロロピリジン−２−イル、５−シアノピリジン−２−イル、５−フルオロピリジン−２−イル、５−シアノ−３−フルオロオロピリジン−２−イル、５−メトキシピラジン−２−イルまたは１−ジフルオロメチルピラゾール−３−イルである；
   請求項１に記載の化合物、または、
   その付加塩もしくは溶媒和物。
6. 治療有効量の請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
7. 薬学的に許容される担体が、治療有効量の請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物と完全に混合されることを特徴とする、請求項６に記載の医薬組成物の製造方法。
8. アルツハイマー病、軽度認知障害、老化現象、認知症、レヴィー小体型認知症、ダウン症候群、脳卒中に伴う認知症、パーキンソン病に伴う認知症、またはβアミロイドに関連する認知症の治療または予防に使用される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
9. 必要とする対象に、治療有効量の請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物または請求項６に記載の医薬組成物を投与することを含む、アルツハイマー病、軽度認知障害、老化現象、認知症、レヴィー小体型認知症、ダウン症候群、脳卒中に伴う認知症、パーキンソン病に伴う認知症、およびβアミロイドに関連する認知症からなる群から選択される障害の治療方法。