JP2014506135A - アルデヒド−タグ付き免疫グロブリンポリペプチド及びその使用方法 - Google Patents

アルデヒド−タグ付き免疫グロブリンポリペプチド及びその使用方法 Download PDF

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Abstract

本開示は、ホルミルグリシン生成酵素で変換し、２−ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）修飾型Ｉｇポリペプチドを生産することができるアルデヒド−タグ付き免疫グロブリン（Ｉｇ）ポリペプチドを提供する。ＦＧｌｙ修飾型Ｉｇポリペプチドを共有結合で、かつ、部位特異的に目的の部分に結合させてＩｇ抱合体を提供することができる。本開示はさらに、そのようなアルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチド、ＦＧｌｙ修飾型Ｉｇポリペプチド、及びＩｇ抱合体の製造方法、並びにその使用方法を包含する。
【選択図】図１Ａ

Description

関連出願
本出願は、２０１１年１月１４日に出願の米国仮特許出願第６１／４３３，０４２の優先権を主張し、その全体は参照することにより本明細書に組み入れられる。
抗体は様々な診断法や治療法で使用することができる。また、抗体を薬剤送達に用いることもできる。しかしながら、抗体への薬剤の抱合を制御することは難しい場合があるため、抱合体の混合物は、結合している薬剤分子の数が多様な不均一なものになる。そのため、患者に投与する量の制御が難しくなる可能性がある。
米国特許公開公報第２０１０／０２１０５４３号 国際公開公報第２０１０／０９６３９４号 米国特許公開公報第２００８／０１８７９５６号 国際公開公報第２００９／１２０６１１号
本開示は、ホルミルグリシン生成酵素でホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）修飾型Ｉｇポリペプチドに変換することができる、アルデヒド−タグ付き免疫グロブリン（Ｉｇ）ポリペプチドを提供する。ＦＧｌｙ修飾型Ｉｇポリペプチドを目的の部分に共有結合で、かつ、部位特異的に結合させ、Ｉｇ抱合体を提供することができる。本開示はさらに、そのようなアルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチド、ＦＧｌｙ修飾型Ｉｇポリペプチド、及びＩｇ抱合体の製造方法、及びこれらの使用方法を包含する。
アルデヒドタグ付きＩｇポリペプチドを生成するために修飾が可能な配列上の部位を示している。上段の配列は、ＩｇＧ１軽鎖ポリペプチドに保存されている領域のアミノ酸配列であり（配列番号１）、Ｉｇ軽鎖の中の修飾可能な部位を示している。下段の配列は、Ｉｇ重鎖ポリペプチドに保存されている領域のアミノ酸配列であり（配列番号２２８；ジェンバンク受託番号ＡＡＧ００９０９）、Ｉｇ重鎖の中で修飾可能な部位を示している。重鎖及び軽鎖にふった番号は、完全長の重鎖及び軽鎖に基づくものである。 ＩｇＧ１（配列番号２）、ＩｇＧ２（配列番号４）、ＩｇＧ３（配列番号３）、ＩｇＧ４（配列番号５）、及びＩｇＡ（配列番号６）のを免疫グロブリン重鎖定常領域のアライメントであり、アルデヒドタグを付加することができる免疫グロブリン重鎖中の修飾部位を示している。重鎖及び軽鎖にふった番号は、完全長の重鎖及び軽鎖に基づくものである。 ＩｇＧ１（配列番号２）、ＩｇＧ２（配列番号４）、ＩｇＧ３（配列番号３）、ＩｇＧ４（配列番号５）、及びＩｇＡ（配列番号６）のを免疫グロブリン重鎖定常領域のアライメントであり、アルデヒドタグを付加することができる免疫グロブリン重鎖中の修飾部位を示している。重鎖及び軽鎖にふった番号は、完全長の重鎖及び軽鎖に基づくものである。 免疫グロブリン軽鎖定常領域（配列番号：１及び７〜１０）のアライメントであり、アルデヒドタグを付加することができる免疫グロブリン軽中の修飾部位を示している。 アルデヒド−タグ付き抗体の発現とその後の化学的抱合の模式図を示している。 抗ＣＤ１９の軽鎖（上段の配列（配列番号１１））及び重鎖（下段の配列（配列番号１２））定常領域内の溶媒が接触可能なループ領域を示している。重鎖定常領域にはＬＣＴＰＳＲスルファターゼモチーフが含まれている。シグナルペプチドを小文字で；可変領域を下線で；定常領域内の溶媒が接触可能なループ領域を太字と下線で示している。ＬＣＴＰＳＲ配列は太字かつ二重下線で表している。 アルデヒド−タグ付き抗ＣＤ１９抗体及びアルデヒド−タグ付き抗ＣＤ２２抗体のタンパク質ブロット解析を示している。左側の図は抗体の模式図であり、Ｉｇ重鎖ＣＨ１領域中（「ＣＨ１（Ａ）」、「ＣＨ１（Ｂ）」、「ＣＨ１（Ｃ）」）、Ｉｇ重鎖ＣＨ２領域中（「ＣＨ２（Ａ）」、「ＣＨ２（Ｂ）」、「ＣＨ２（Ｃ）」）、ＣＨ２／３領域中（「ＣＨ２／ＣＨ３」）、及びＣ末端領域（「Ｃ末端」）の、アルデヒドタグで修飾する部位の例の相対的な位置を示している。 アミノオキシ−ＦＬＡＧと化学的に抱合させたアルデヒド−タグ付き抗ＣＤ２２抗体のウェスタンブロット解析を示している。 アミノオキシ−ＦＬＡＧと化学的に抱合させたアルデヒド−タグ付き抗ＣＤ１９抗体及びアルデヒド−タグ付き抗ＣＤ２２抗体ウェスタンブロット解析を示している。 図６Ａは、ＣＤ２２−特異的ＩｇＧ１抗体の重鎖をコードしているヌクレオチド配列（配列番号１３）を示している。図６Ｂは、図６Ａによってコードされているアミノ酸配列を示している（配列番号１４）。シグナル配列の終端を「／」で、可変領域の終端、かつ、定常領域の先端を「／／」で表す。 図７Ａは、アルデヒド−タグ付き抗ＣＤ２２免疫グロブリン（Ｉｇ）重鎖（「ＣＨ１（Ａ）ＬＣＴＰＳＲ」）をコードしているヌクレオチド配列（配列番号１５）を示している。図７Ｂは、図７Ａによってコードされているアミノ酸配列（配列番号１６）を示している。ＣＨ１のＬＣＴＰＳＲ（配列番号１７）スルファターゼモチーフ配列を下線で示す。シグナル配列の終端を「／」で、可変領域の終端、かつ、定常領域の先端を「／／」で表す。 図８Ａは、アルデヒド−タグ付き抗ＣＤ２２免疫グロブリン（Ｉｇ）重鎖（「ＣＨ１（Ｂ）ＬＣＴＰＳＲ」）をコードしているヌクレオチド配列（配列番号１８）を示している。図８Ｂは、図８Ａによってコードされているアミノ酸配列（配列番号１９）を示している。ＣＨ１のＬＣＴＰＳＲ（配列番号１７）スルファターゼモチーフ配列を下線で示す。シグナル配列の終端を「／」で、可変領域の終端、かつ、定常領域の先端を「／／」で表す。 図９Ａは、アルデヒド−タグ付き抗ＣＤ２２免疫グロブリン（Ｉｇ）重鎖（「ＣＨ１（Ｃ）ＬＣＴＰＳＲ」）をコードしているヌクレオチド配列（配列番号２０）を示している。図９Ｂは、図９Ａでコードされているアミノ酸配列（配列番号２１）を示している。ＣＨ１のＬＣＴＰＳＲ（配列番号１７）スルファターゼモチーフ配列を下線で示す。シグナル配列の終端を「／」で、可変領域の終端、かつ、定常領域の先端を「／／」で表す。 図１０Ａは、アルデヒド−タグ付き抗ＣＤ２２Ｉｇ重鎖（「ＣＨ１（Ｃ）ＬＡＴＰＳＲ」）をコードしているヌクレオチド配列（配列番号２２）を示している。図１０Ｂは、図１０Ａでコードされているアミノ酸配列（配列番号２３）を示している。ＣＨ１のＬＡＴＰＳＲ（配列番号２４）スルファターゼモチーフ配列を下線で示す。シグナル配列の終端を「／」で、可変領域の終端、かつ、定常領域の先端を「／／」で表す。 図１１Ａは、アルデヒド−タグ付き抗ＣＤ２２Ｉｇ重鎖（「ＣＨ２（Ａ）ＬＣＴＰＳＲ」）をコードしているヌクレオチド配列（配列番号２５）を示している。図１１Ｂは、図１１Ａでコードされているアミノ酸配列（配列番号２６）を示している。ＣＨ２のＬＣＴＰＳＲ（配列番号１７）スルファターゼモチーフ配列を下線で示す。シグナル配列の終端を「／」で、可変領域の終端、かつ、定常領域の先端を「／／」で表す。 図１２Ａは、アルデヒド−タグ付き抗ＣＤ２２Ｉｇ重鎖（「ＣＨ２（Ｂ）ＬＣＴＰＳＲ」）をコードしているヌクレオチド配列（配列番号２７）を示している。図１２Ｂは、図１２Ａでコードされているアミノ酸配列（配列番号２８）を示している。ＣＨ２のＬＣＴＰＳＲ（配列番号１７）スルファターゼモチーフ配列を下線で示す。シグナル配列の終端を「／」で、可変領域の終端、かつ、定常領域の先端を「／／」で表す。 図１３Ａは、アルデヒド−タグ付き抗ＣＤ２２Ｉｇ重鎖（「ＣＨ２（Ｃ）ＬＣＴＰＳＲ」）をコードしているヌクレオチド配列（配列番号２９）を示している。図１３Ｂは、図１３Ａでコードされているアミノ酸配列（配列番号３０）を示している。ＣＨ２のＬＣＴＰＳＲ（配列番号１７）スルファターゼモチーフ配列を下線で示す。シグナル配列の終端を「／」で、可変領域の終端、かつ、定常領域の先端を「／／」で表す。 図１４は、アルデヒド−タグ付き抗ＣＤ２２Ｉｇ重鎖（「ＣＨ２（Ｃ）」）をコードしているヌクレオチド配列（配列番号３１）を示している。図１４Ｂは、図１４Ａでコードされているアミノ酸配列（配列番号３２）を示している。ＣＨ２のＬＡＴＰＳＲ（配列番号２４）スルファターゼモチーフ配列を下線で示す。 図１５は、アルデヒド−タグ付き抗ＣＤ２２Ｉｇ重鎖（「ＣＨ２／ＣＨ３ＬＣＴＰＳＲ」）をコードしているヌクレオチド配列（配列番号３３）を示している。図１５Ｂは、図１５Ａでコードされているアミノ酸配列（配列番号３４）を示している。ＣＨ２／ＣＨ３のＬＣＴＰＳＲ（配列番号１７）スルファターゼモチーフ配列を下線で示す。シグナル配列の終端を「／」で、可変領域の終端、かつ、定常領域の先端を「／／」で表す。 図１６Ａは、アルデヒド−タグ付き抗ＣＤ２２Ｉｇ重鎖（「ＣＨ２／ＣＨ３ＬＡＴＰＳＲ」）をコードしているヌクレオチド配列（配列番号３５）を示している。図１６Ｂは、図１６Ａでコードされているアミノ酸配列（配列番号３６）を示している。ＣＨ２／ＣＨ３のＬＡＴＰＳＲ（配列番号２４）スルファターゼモチーフ配列を下線で示す。シグナル配列の終端を「／」で、可変領域の終端、かつ、定常領域の先端を「／／」で表す。 図１７Ａは、アルデヒド−タグ付き抗ＣＤ２２Ｉｇ重鎖（「Ｃ末端ＬＣＴＰＳＲ」）をコードしているヌクレオチド配列（配列番号３７）を示している。図１７Ｂは、図１７Ａでコードされているアミノ酸配列（配列番号３８）を示している。Ｃ末端領域のＬＣＴＰＳＲ（配列番号１７）スルファターゼモチーフ配列を下線で示す。シグナル配列の終端を「／」で、可変領域の終端、かつ、定常領域の先端を「／／」で表す。 図１８Ａは、アルデヒド−タグ付き抗ＣＤ２２Ｉｇ重鎖（「Ｃ末端ＬＡＴＰＳＲ」）をコードしているヌクレオチド配列（配列番号３９）を示している。図１８Ｂは、図１８Ａでコードされているアミノ酸配列（配列番号４０）を示している。Ｃ末端領域のＬＡＴＰＳＲ（配列番号２４）スルファターゼモチーフ配列を下線で示す。シグナル配列の終端を「／」で、可変領域の終端、かつ、定常領域の先端を「／／」で表す。 図１９Ａは、ＣＤ２２−特異的ヒトＩｇカッパ軽鎖をコードしている配列（配列番号４１）を示している。図１９Ｂは、図１９Ａでコードされているアミノ酸配列（配列番号４２）を示している。シグナル配列の終端を「／」で、可変領域の終端、かつ、定常領域の先端を「／／」で表す。 図２０Ａは、アルデヒド−タグ付き抗ＣＤ２２Ｉｇカッパ軽鎖をコードしているヌクレオチド配列（配列番号４３）を示している。図２０Ｂは、図２０Ａでコードされているアミノ酸配列（配列番号４４）を示している。ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１７）スルファターゼモチーフ配列を下線で示す。シグナル配列の終端を「／」で、可変領域の終端、かつ、定常領域の先端を「／／」で表す。 図２１Ａは、アルデヒド−タグ付き抗ＣＤ２２Ｉｇカッパ軽鎖をコードしているヌクレオチド配列（配列番号４５）を示している。図２１Ｂは、図２１Ａでコードされているアミノ酸配列（配列番号４６）を示している。ＬＡＴＰＳＲ（配列番号２４）スルファターゼモチーフ配列を下線で示す。シグナル配列の終端を「／」で、可変領域の終端、かつ、定常領域の先端を「／／」で表す。 図２２Ａは、ＣＤ１９−特異的ＩｇＧ１抗体の重鎖をコードしているヌクレオチド配列（配列番号４７）を示している。図２２Ｂは、図２２Ａでコードされているアミノ酸配列（配列番号４８）を示している。シグナル配列の終端を「／」で、可変領域の終端、かつ、定常領域の先端を「／／」で表す。 図２３Ａは、アルデヒド−タグ付き抗ＣＤ１９Ｉｇ重鎖（「ＣＨ１（Ｃ）ＬＣＴＰＳＲ」）をコードしているヌクレオチド配列（配列番号４９）を示している。図２３Ｂは、図２３Ａでコードされているアミノ酸配列（配列番号５０）（ＣＨＩ（Ｃ））を示している。ＣＨ１領域のＬＣＴＰＳＲ（配列番号１７）スルファターゼモチーフ配列を下線で示す。シグナル配列の終端を「／」で、可変領域の終端、かつ、定常領域の先端を「／／」で表す。 図２４Ａは、アルデヒド−タグ付き抗ＣＤ１９Ｉｇ重鎖（「ＣＨ１（Ｃ）ＬＡＴＰＳＲ」）をコードしているヌクレオチド配列（配列番号５１）を示している。図２４Ｂは、図２４Ａでコードされているアミノ酸配列（配列番号５２）を示している。ＣＨ１領域のＬＡＴＰＳＲ（配列番号２４）スルファターゼモチーフ配列を下線で示す。シグナル配列の終端を「／」で、可変領域の終端、かつ、定常領域の先端を「／／」で表す。 図２５Ａは、アルデヒド−タグ付き抗ＣＤ１９Ｉｇ重鎖（「ＣＨ２（Ｂ）ＬＣＴＰＳＲ」）をコードしているヌクレオチド配列（配列番号５３）を示している。図２５Ｂは、図２５Ａでコードされているアミノ酸配列（配列番号５４）を示している。ＣＨ２領域のＬＣＴＰＳＲ（配列番号１７）スルファターゼモチーフ配列を下線で示す。シグナル配列の終端を「／」で、可変領域の終端、かつ、定常領域の先端を「／／」で表す。 図２６Ａは、アルデヒド−タグ付き抗ＣＤ１９Ｉｇ重鎖（「ＣＨ２（Ｂ）ＬＡＴＰＳＲ」）をコードしているヌクレオチド配列（配列番号５５）を示している。図２６Ｂは、図２６Ａでコードされているアミノ酸配列（配列番号５６）を示している。ＣＨ２領域のＬＡＴＰＳＲ（配列番号２４）スルファターゼモチーフ配列を下線で示す。シグナル配列の終端を「／」で、可変領域の終端、かつ、定常領域の先端を「／／」で表す。 図２７Ａは、アルデヒド−タグ付き抗ＣＤ１９Ｉｇ重鎖（「ＣＨ２／ＣＨ３ＬＣＴＰＳＲ」）をコードしているヌクレオチド配列（配列番号５７）を示している。図２７Ｂは、図２７Ａでコードされているアミノ酸配列（配列番号５８）を示している。ＣＨ２／ＣＨ３領域のＬＣＴＰＳＲ（配列番号１７）スルファターゼモチーフ配列を下線で示す。シグナル配列の終端を「／」で、可変領域の終端、かつ、定常領域の先端を「／／」で表す。 図２８Ａは、アルデヒド−タグ付き抗ＣＤ１９Ｉｇ重鎖（「ＣＨ２／ＣＨ３ＬＡＴＰＳＲ」）をコードしているヌクレオチド配列（配列番号５９）を示している。図２８Ｂは、図２８Ａでコードされているアミノ酸配列（配列番号６０）を示している。ＣＨ２／ＣＨ３領域ＬＡＴＰＳＲ（配列番号２４）スルファターゼモチーフ配列を下線で示す。シグナル配列の終端を「／」で、可変領域の終端、かつ、定常領域の先端を「／／」で表す。 図２９Ａは、アルデヒド−タグ付き抗ＣＤ１９Ｉｇ重鎖（「Ｃ末端ＬＣＴＰＳＲ」）をコードしているヌクレオチド配列（配列番号６１）を示している。図２９Ｂは、図２９Ａでコードされているアミノ酸配列（配列番号６２）を示している。Ｃ末端領域のＬＣＴＰＳＲ（配列番号１７）スルファターゼモチーフ配列を下線で示す。シグナル配列の終端を「／」で、可変領域の終端、かつ、定常領域の先端を「／／」で表す。 図３０Ａは、アルデヒド−タグ付き抗ＣＤ１９Ｉｇ重鎖（「Ｃ末端ＬＡＴＰＳＲ」）をコードしているヌクレオチド配列（配列番号６３）を示している。図３０Ｂは、図３０Ａでコードされているアミノ酸配列（配列番号６４）を示している。Ｃ末端領域のＬＡＴＰＳＲ（配列番号２４）スルファターゼモチーフ配列を下線で示す。シグナル配列の終端を「／」で、可変領域の終端、かつ、定常領域の先端を「／／」で表す。 図３１Ａは、ＣＤ１９−特異的ヒトＩｇカッパ軽鎖をコードしているヌクレオチド配列（配列番号６５）を示している。図３１Ｂは、図３１Ａでコードされているアミノ酸配列（配列番号６６）を示している。シグナル配列の終端を「／」で、可変領域の終端、かつ、定常領域の先端を「／／」で表す。 図３２Ａは、アルデヒド−タグ付き抗ＣＤ１９Ｉｇカッパ軽鎖をコードしているヌクレオチド配列（配列番号６７）を示している。図３２Ｂは、図３２Ａでコードされているアミノ酸配列（配列番号６８）を示している。ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１７）スルファターゼモチーフ配列を下線で示す。シグナル配列の終端を「／」で、可変領域の終端、かつ、定常領域の先端を「／／」で表す。 図３３Ａは、アルデヒド−タグ付き抗ＣＤ１９Ｉｇカッパ軽鎖をコードしているヌクレオチド配列（配列番号６９）を示している。図３３Ｂは、図３３Ａでコードされているアミノ酸配列（配列番号７０）を示している。ＬＡＴＰＳＲ（配列番号２４）スルファターゼモチーフ配列を下線で示す。シグナル配列の終端を「／」で、可変領域の終端、かつ、定常領域の先端を「／／」で表す。
定義
本明細書において、用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」は同じ意味で使われ、任意の長さの、重合した形態のアミノ酸を指す。特段の記載のない限り、「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」は、遺伝的にコードされた及びコードされていないアミノ酸、化学的に又は生化学的に修飾された又は誘導されたアミノ酸、及び修飾されたペプチド主鎖をもつポリペプチドペプチドを含み得る。この用語には、融合タンパク質も含まれる。融合タンパク質には、異種アミノ酸配列を有する融合タンパク質、異種及び同種のリーダー配列を有する融合体、Ｎ末端メチオニン残基（例えば、組換え細菌宿主細胞中での生産を促進するための）を少なくとも１つ含むタンパク質、免疫学的タグが付いているタンパク質などが含まれるがこれらには限定されない。
本明細書においては、免疫グロブリンに関する「天然のアミノ酸配列」又は「親アミノ酸配列」は同じ意味で使用され、異種アルデヒドタグを付加するための修飾を行う前の免疫グロブリンのアミノ酸配列を指す。
用語「抗体」は最も広い意味で使用され、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、及び多重特性抗体（例えば、二重特性抗体）、ヒト化抗体、一本鎖抗体、キメラ抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ断片）などを含む。抗体は標的抗原と結合可能である（Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immuno Biology, 5th Ed., Garland Publishing, New York）。標的抗原は、抗体の１つ以上の可変領域で形成されている相補性決定領域（ＣＤＲ）によって認識される１つ以上の結合部位（エピトープとも呼ばれる）を有する場合がある。
本明細書で使用する場合「免疫グロブリンポリペプチド」は、少なくとも軽鎖ポリペプチドの定常領域又は少なくとも重鎖ポリペプチドの定常領域を含むポリペプチドを指す。
免疫グロブリンの軽鎖又は重鎖可変領域を含む免疫グロブリンポリペプチドは、３つの超可変領域（「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」とも呼ばれる）によって分断されているフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。フレームワーク領域とＣＤＲの大きさは明らかになっている（「Sequences of Proteins of Immunological Interest」E. Kabat et al., U.S. Department of Health and Human Services, 1991を参照のこと）。抗体のフレームワーク領域、すなわち構成要素である軽鎖と重鎖のフレームワーク領域の集まりは、ＣＤＲの位置を決め、配列する。抗原エピトープとの結合は主にＣＤＲによって決められている。
用語「天然の抗体」とは、その抗体の重鎖及び軽鎖が多細胞生物の免疫系によって作られ、対合された抗体を指す。天然の抗体を生産する組織の例としては、脾臓、リンパ節、骨髄及び血清が挙げられる。例えば、抗原を使って免疫した第一の動物から単離した抗体産生細胞によって生産された抗体は、天然の抗体である。
本開示全体を通じて、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖中の残基にふった番号は、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)に基づくものであり、特に参照することにより本明細書に組み入れられる。
「親Ｉｇポリペプチド」は、本明細書に記載のアルデヒド−タグ付き定常領域を欠損したアミノ酸配列を含むポリペプチドである。親ポリペプチドは、定常領域の天然の配列を含んでいてもよく、又はアミノ酸の配列に修飾（例えば、付加、欠失及び／又は置換）を行う前の定常領域を含んでいてもよい。
Ｉｇポリペプチドに関連した用語「定常領域」は、当該分野では周知であり、かつ、Ｉｇ重鎖、又はＩｇ軽鎖のＣ末端領域を指す。Ｉｇ重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３ドメイン（重鎖がμ若しくはε重鎖の場合にはＣＨ４ドメインも）を含む。天然のＩｇ重鎖では、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３ドメインは（存在する場合にはＣＨ４ドメインも）、重鎖可変（ＶＨ）領域の直後（Ｃ末端側）から開始され、それぞれの長さは約１００アミノ酸〜約１３０アミノ酸である。天然のＩｇ軽鎖では、定常領域は軽鎖可変（ＶＬ）領域の直後（Ｃ末端側）から開始され、長さは約１００アミノ酸〜１２０アミノ酸である。
いくつかの態様では、「機能性Ｆｃ領域」は、天然の配列Ｆｃ領域の「エフェクター機能」を有する。「エフェクター機能」の例としては、Ｃ１ｑ結合；補体依存性細胞傷害；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えばＢ細胞受容体；ＢＣＲ）の下方制御などが挙げられる。そのようなエフェクター機能には通常、結合ドメイン（例えば抗体可変ドメイン）と結合するＦｃ領域が必要とされ、当該分野で周知の様々なアッセイで評価することができる。
「抗体依存性細胞介在性細胞傷害」及び「ＡＤＣＣ」は、ＦｃＲを発現している非特異的な細胞障害性細胞（例えばナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）が標的細胞に結合した抗体を認識し、それに続いて標的細胞の溶解を引き起こす、細胞介在性応答を指す。ＡＤＣＣに主に介在するＮＫ細胞はＦｃγＲＩＩＩのみを発現しているが、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現している。
用語「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を表すのに用いられる。ＦｃＲに関する総説としては、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457 92 (1991); Capel et al., Immunomethods 4:25 34 (1994)；及びde Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126:330 41 (1995)がある。
用語「ヒト化抗体」又は「ヒト化免疫グロブリン」は、対応する位置にあるヒト抗体に由来するアミノ酸で置換した１つ以上のアミノ酸を（例えばフレームワーク領域、定常領域又はＣＤＲ中に）含む非ヒト（例えば、マウス又はウサギ）抗体を指す。一般的に、ヒト化抗体がヒト宿主で引き起こす免疫応答は同じ抗体の非ヒト化型よりも弱い。当該分野で知られている様々な技術によって、抗体をヒト化することができ、そのような方法には例えば、ＣＤＲ−グラフティング（欧州特許第２３９，４００号明細書；国際公開第９１／０９９６７号；米国特許第５，２２５，５３９号明細書；同第５，５３０，１０１号；及び同第５，５８５，０８９号）、表面処理（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）又は再表面化（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（欧州特許第５９２，１０６号明細書；欧州特許第５１９，５９６号明細書；Padlan, Molecular Immunology 28(4/5):489-498 (1991)；Studnicka et al., Protein Engineering 7(6):805-814 (1994)；Roguska. et al., PNAS 91:969-973 (1994)）、及び鎖シャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号明細書）がある。特定の態様では、ＣＤＲと骨格残基の相互作用をモデル化し、抗原との結合に重要な骨格残基を同定することにより、また、配列を比較して特定の位置にある他とは異なる骨格残基を同定することでフレームワーク置換を確認する（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号明細書；Riechmann et al., Nature 332:323 (1988)を参照のこと）。本発明で使用することが考えられる、抗体をヒト化するためのその他の方法には、米国特許第５，７５０，０７８号明細書；同第５，５０２，１６７号；同第５，７０５，１５４号；同第５，７７０，４０３号；同第５，６９８，４１７号；同第５，６９３，４９３号；同第５，５５８，８６４号；同第４，９３５，４９６号；及び同第４，８１６，５６７号、並びに国際公開第９８／４５３３１号及び同第９８／４５３３２号に記載されている方法がある。特定の態様では、対象となるウサギ抗体を、米国特許公開公報第２００４００８６９７９号明細書及び同第２００５００３３０３１号に示されている方法に従ってヒト化してもよい。従って、上述の抗体を当該分野で周知の方法によってヒト化することができる。
用語「キメラ抗体」とは、その軽鎖の遺伝子と重鎖の遺伝子が、異なる種に属する抗体の可変領域の遺伝子と定常領域の遺伝子から、典型的には遺伝子工学によって、構築された抗体を指す。例えば、マウスモノクローナル抗体由来の可変セグメントの遺伝子を、ヒト定常セグメント、例えばガンマ１やガンマ３と結合させることができる。治療用キメラ抗体の例には、マウス抗体由来の可変又は抗原結合ドメインと、ヒト抗体由来の定常又はエフェクタードメインを含むハイブリッドタンパク質があるが、他の哺乳類種に由来するドメインを使用してもよい。
「アルデヒドタグ」又は「ａｌｄ−タグ」は、スルファターゼモチーフから誘導したアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を意味し、スルファターゼモチーフは、ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）の作用によって２−ホルミルグリシン残基（本明細書では「ＦＧｌｙ」と称する）を含むように変換することができるか、或いは既に変換されたものである。ＦＧＥによって生成されたＦＧｌｙ残基は、文献中では「ホルミルグリシン」と言われることが多い。つまり、本明細書で使用する場合、用語「アルデヒドタグ」は、「未変換型」スルファターゼモチーフ（すなわち、システイン又はセリン残基がＦＧＥによってＦＧｌｙに変換されていないが、変換することができるスルファターゼモチーフ）を含むアミノ酸配列、並びに「変換型」スルファターゼモチーフ（すなわち、システイン又はセリン残基がＦＧＥの作用によってＦＧｌｙに変換されているスルファターゼモチーフ）を含むアミノ酸配列を指す。
スルファターゼモチーフに対するホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）の作用に関して使用される「変換」は、スルファターゼモチーフ中に存在するシステイン又はセリン残基のホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）残基への生化学的な修飾（例えば、システインからＦＧｌｙ、又はセリンからＦＧｌｙ）を指す。
ポリペプチド、ペプチド又はタンパク質のアミノ酸配列に関して使用される「遺伝的にコード化可能な」は、アミノ酸配列が、そのアミノ酸配列をコードしている核酸の転写及び翻訳によって生産することが可能なアミノ酸残基を含むことを意味し、この場合、転写及び／又は翻訳は細胞の中で、又は無細胞のインビトロ転写／翻訳系で起こり得る。
用語「制御配列」とは、特定の発現系、例えば哺乳類細胞、細菌細胞、無細胞系などにおいて、操作可能に連結したコード配列の発現を促進するＤＮＡ配列を指す。原核生物の系に適した制御配列には、例えば、プロモーター、必要に応じてオペレーター配列、及びリボソーム結合部位が挙げられる。真核生物の系は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、及びエンハンサーを使用し得る。
核酸を別の核酸配列と機能的に関連するように配置する場合、核酸は「操作可能に連結」される。例えばプレ配列又は分泌リーダーのＤＮＡは、ポリペプチドが分泌に際して沈殿する前タンパク質として発現する場合、ポリペプチドのＤＮＡに操作可能に連結されており；プロモーター又はエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼす場合、コード配列に操作可能に連結されており；或いは、リボソーム結合部位は、翻訳の開始を促す位置にある場合、コード配列に操作可能に連結されている。通常、「操作可能に連結する」は、連結されるＤＮＡ配列同士が連続していることを意味し、かつ、分泌リーダーの例では、ＤＮＡ配列同士は連続していて、かつ、インフレームである。連結は、ライゲーション又は増幅試薬を介して遂行される。配列の連結には、合成オリゴヌクレオチドアダプター又はリンカーを標準的な実施方法に従って使用することもできる。
本明細書で使用する場合、用語「発現カセット」は、核酸に挿入する（例えば、目的の構築物へのライゲーションに適合する制限酵素部位の使用による、又は目的の構築物若しくは宿主細胞ゲノムへの相同組換えによる）ことが可能な核酸のセグメント、一般的にはＤＮＡ、を指す。一般的に核酸セグメントは、目的のポリペプチド（例えば、アルデヒドタグ付き−Ｉｇタンパク質）をコードしているポリヌクレオチドを含み、かつ、カセットと制限酵素部位は、転写及び翻訳に適した読み枠でのカセットの挿入を促すように設計されている。発現カセットは、目的のポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドの宿主細胞内での発現を促進する配列を含んでいる場合もある。これらの配列には、プロモーター、ミニマルプロモーター、エンハンサー、応答配列、転写終結配列、ポリアデニル化配列等が含まれ得るがこれらには限定されない。
本明細書で使用する場合、用語「単離された」は、目的の化合物が、その化合物が天然に生じる環境とは異なる環境にあること表していることを意味する。「単離された」は、目的の化合物を実質的に濃縮した試料及び／又は目的の化合物を部分的に若しくは実質的に精製した試料の中に含まれる化合物を含むことを意味する。
本明細書で使用する場合、用語「実質的に精製した」とは、天然の環境から取り出した化合物であって、天然では付随する他の構成要素を少なくとも６０％含まない、少なくとも７５％含まない、少なくとも８０％含まない、少なくとも８５％含まない、少なくとも９０％含まない、少なくとも９５％含まない、少なくとも９８％含まない、又は９８％を越えて含まないことを指す。
用語「生理学的条件」とは、生細胞と合致する条件、例えば、生細胞と合致する温度、ｐＨ、塩などの主に水性条件を包含することを意味する。
「反応パートナー」とは、別の反応パートナーと特異的に反応し、反応産物を生産する分子又は分子の部分を意味する。反応パートナーの例としてはスルファターゼモチーフのシステイン又はセリンとＦＧＥがあり、これらは反応して、システイン又はセリンの代わりにＦＧｌｙをモチーフ中に含む反応産物である、変換型アルデヒドタグを形成する。他の反応パートナーの例としては、変換型アルデヒドタグのホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）残基のアルデヒドと、アルデヒド−反応基及び目的の部分を含む「アルデヒド−反応性反応パートナー」があり、これらが反応して、修飾型ＦＧｌｙ残基を介して修飾されたポリペプチドに抱合された目的の部分を有する、修飾型アルデヒドタグ付きポリペプチドの反応産物が形成される。
「Ｎ−末端」とは、遊離したアミン基を有する、ポリペプチドの末端のアミノ酸残基を指し、非Ｎ−末端アミノ酸残基中にあるアミン基は通常、そのポリペプチドの共有結合した主鎖の一部を形成する。
「Ｃ−末端」は、遊離したカルボキシル基を有する、ポリペプチドの末端のアミノ酸残基を指し、非Ｃ−末端アミノ酸残基中にあるカルボキシル基は通常、そのポリペプチドの共有結合した主鎖の一部を形成する。
ポリペプチド又はポリペプチドのアミノ酸配列に関して使用される「内側の部位」は、Ｎ−末端又はＣ−末端にはないポリペプチドの領域を意味する。
これ以降本発明をさらに説明するが、当然のことながら、本発明は記載した特定の態様には限定されず、態様は多様になり得る。また、本明細書で使用した用語は、特定の態様を説明することのみを目的としており、限定すること意図しないと理解され、本発明の範囲は添付の請求項によってのみ限定される。
数値範囲が示される場合には、当然のことながら、その範囲の上限と下限の間にある各中間値（そうでないことが文脈に明確に示されていない場合には下限の単位の１０分の１まで）及びその示された範囲にある任意の他の示された値又は中間値が、本発明に包含される。これらのより小さい範囲の上限と下限は独立してそれらのより小さい範囲に含まれる場合があり、かつ、それらもまた本発明に包含され、その示された範囲中で特に除外されたいかなる限定にも依存する。示した範囲が片方又は両方の限定を含む場合、その含まれる範囲の片方又は両方を除いた範囲もまた本発明に含まれる。
当然のことながら、分かりやすくするために別々の態様の文脈で記述されている本発明の特定の特徴を、単一の態様の中で組み合わせて提供してもよい。逆に言えば、簡潔にするために単一の態様の文脈で記述した本発明の様々な特徴を、別々に又は部分的な任意の適切な組み合わせで提供してもよい。本発明に関する態様の全ての組み合わせは、そのような組み合わせが発明の主題、例えば安定な化合物（すなわち、作成し、単離し、特性を明らかにし、生物学的活性に関して試験した化合物）を包含する範囲で具体的に本発明に包含され、かつ、あたかも個々の及び全ての組み合わせが個別にかつ明示的に開示されるように本明細書に開示される。加えて、様々な態様及びその構成要素（例えば、そのような変異型について記載している態様で挙げられた化学基の構成要素）の全ての部分的な組み合わせは、具体的に本発明に包含され、かつ、あたかも個々の及び全ての部分的な組み合わせが個別にかつ明示的に開示されるように本明細書に開示される。
別段に定義がされていない限り、本明細書において使用される全ての技術用語と科学用語は、本発明が属する分野の当業者が一般的に理解するものと同義である。本明細書で記述したものと同様な又は同等ないずれの方法及び材料をも本発明の実施又は試験に用いることができるが、好ましい方法及び材料を以下に記述する。本明細書で言及した全ての出版物は、引用された出版物に関連する方法及び／又は材料を開示かつ記載するために、参照することにより本明細書に組み入れられる。
本明細書及び添付の請求項で使用する場合、単数形「１つ」、「１種」、及び「該」は、そうでないことが文脈から明かでない限り、複数を示していることをも含むことに留意されたい。従って、例えば「１つのアルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチド」への言及は複数のそのようなポリペプチドを含み、「該薬剤抱合Ｉｇポリペプチド」への言及は、１つ以上の薬剤抱合Ｉｇポリペプチド及びその当業者に既知の均等物などへの言及を含む。さらに、請求項はいずれか任意の構成要素を排除するように書かれる場合がある。つまりこの文言は、特許請求する構成要素の記載に関連した「ただ」、「のみ」などのような排除的な用語の使用、又は「負」の限定の使用に対する先行詞として機能することを目的としている。
当然のことながら、分かりやすくするために別々の態様の文脈で記述した本発明の特定の特徴を、単一の態様の中で組み合わせて提供してもよい。逆に言えば、簡潔にするために単一の態様の文脈で記述した本発明の様々な特徴を、別々に又は部分的な任意の適切な組み合わせで提供してもよい。
本明細書で議論した出版物は、単に、本出願の出願日より前の開示を示すためだけに提供される。本発明が先発明の理由でそのような出版物に先行する権限をもたないことを自白しているとして解釈されるべきではない。さらに、示された出版物の日付は実際の出版日とは異なる場合があり、個別に確認する必要がある場合がある。
詳細な説明
本開示は、ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）によって変換し、ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）修飾型Ｉｇポリペプチドを産生することができるアルデヒド−タグ付き免疫グロブリン（Ｉｇ）ポリペプチドを提供する。ＦＧｌｙ修飾型Ｉｇポリペプチドは、アルデヒド反応性反応パートナーとのＩｇ抱合体を提供する反応を介し、共有結合的に、かつ、部位特異的に目的の部分に結合させることができる。本開示はまた、そのようなアルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチド、ＦＧｌｙ修飾型Ｉｇポリペプチド、及びＩｇ抱合体の製造方法、並びにその使用方法をも包含する。
本明細書においてアルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチドは、「ａｌｄ−タグ付きＩｇポリペプチド」、「ａｌｄ−タグ付きＩｇ重鎖」又は「ａｌｄ−タグ付きＩｇ軽鎖」とも呼ばれ得る。そのようなａｌｄ−タグ付きＩｇポリペプチドを、共有結合する目的の分子、例えば薬剤（ペプチド薬、低分子薬など）、水溶性ポリマー、検出可能な標識、合成ペプチドなどで部位特異的に修飾することができる。
本開示の組成物及び方法は、天然に存在する、遺伝的にコード化可能なスルファターゼモチーフを、本明細書では「アルデヒドタグ」又は「ａｌｄタグ」と呼ぶタグとして利用し、Ｉｇポリペプチドを部位特異的に修飾する。スルファターゼの活性部位にあるモチーフに基づくアルデヒドタグのスルファターゼモチーフは、ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）の作用により、インビボでも（例えば、細胞中でａｌｄタグ含有タンパク質を翻訳する時点で）、インビトロでも（例えば、ａｌｄタグ含有タンパク質をＦＧＥと無細胞系で接触させることにより）２−ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）残基に変換（酸化）させることができるセリン又はシステイン残基を含む。得られたＦＧｌｙ残基のアルデヒド部分は、Ｉｇポリペプチドの部位特異的な化学修飾、つまり目的の部分の部位特異的な結合、を促進するための「化学的ハンドル」として使用することができる。例えば、α−求核剤含有部分（例えば、アミノオキシ又はヒドラジド部分）を含む得ように修飾されたペプチドをＦＧｌｙ含有Ｉｇポリペプチドと反応させて抱合体を得ることができ、この抱合体の中では、Ｉｇポリペプチドとペプチドがそれぞれヒドラゾン結合又はオキシム結合で、或いは還元的アミノ化などの別のアルデヒド特異的化学を介して結合している。従って、アルデヒドの反応性によって、生体直交型かつ化学選択的なＩｇポリペプチドの修飾が可能になり、それが化学修飾を行うための部位特異的な手段を提供し、次にこれを、目的の部分を最終的な抱合体に部位特異的に結合させるために利用することができる。
アルデヒドタグ付き免疫グロブリンポリペプチド
本開示は、アルデヒド−タグ付きＩｇ重鎖とアルデヒド−タグ付きＩｇ軽鎖を含む単離されたアルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチドを提供し、アルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチド、アルデヒドタグは、Ｉｇ定常領域の溶媒が接触可能なループ領域中にあるか又はそれに隣接しており、かつ、アルデヒドタグはＩｇポリペプチドのＣ−末端にはない。
一般的にアルデヒドタグは、ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）の作用でホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）を含むように変換することができるスルファターゼモチーフ（「スルファターゼドメイン」とも呼ばれる）に由来する、いかなるアミノ酸配列に基づくものであってもよい。そのようなスルファターゼモチーフを本明細書では、ＦＧＥ修飾部位と呼ぶこともできる。ＦＧＥの作用は配列特異的なものであり、ＦＧＥは、免疫グロブリンポリペプチドの中に位置するスルファターゼモチーフにおいて作用する。
本開示はさらに、アルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチドのライブラリーを提供する。この場合、ライブラリーは複数のメンバー（集団）を含み、かつ、各Ｉｇポリペプチドのメンバーは他のメンバーとは異なる位置にアルデヒドタグを含むものである。
本開示はアルデヒド−タグ付き抗体を提供し、この場合アルデヒド−タグ付き抗体は、１）アルデヒド−タグ付きＩｇ重鎖定常領域；及びアルデヒド−タグ付きＩｇ軽鎖定常領域；２）アルデヒド−タグ付きＩｇ重鎖定常領域；及びアルデヒドタグが付いていないＩｇ軽鎖定常領域；又は３）アルデヒドタグが付いていないＩｇ重鎖定常領域；及びアルデヒド−タグ付きＩｇ軽鎖定常領域を含んでいてもよい。対象アルデヒド−タグ付き抗体はさらに、ＶＨ及び／又はＶＬドメインを含み、かつ、抗原に結合することができる。
アルデヒドタグの例
アルデヒドタグの最小スルファターゼモチーフの長さは一般的には５又は６アミノ酸残基であり、通常長さは６アミノ酸残基以下である。Ｉｇポリペプチド中に提供されるスルファターゼモチーフの長さは少なくとも５又は６アミノ酸残基であり、例えば、５〜１６、６〜１６、５〜１５、６〜１５、５〜１４、６〜１４、５〜１３、６〜１３、５〜１２、６〜１２、５〜１１、６〜１１、５〜１０、６〜１０、５〜９、６〜９、５〜８、又は６〜８アミノ酸残基の長さであってもよく、スルファターゼモチーフの長さは１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８又は７アミノ酸残基未満と規定される。
挿入、欠失、置換（置き換え）又は付加（例えば、Ｎ−末端若しくはＣ−末端に）されるアミノ酸残基の数を最小にするために、通常、標的Ｉｇポリペプチドの天然のアミノ酸配列に加える修飾を最低限にすることが求められる。修飾がＩｇの機能及び／又は構造に及ぼし得る影響を最小限にするために、一般的には、標的Ｉｇポリペプチドに加えるアミノ酸配列の修飾を最小限することが求められる。従って、特に目的とするアルデヒドタグは、標的のポリペプチドのアミノ酸配列に、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３又は２アミノ酸残基未満の必要な修飾（挿入、付加、欠失、置換／置き換え）を必要とするアルデヒドタグを含む。Ｉｇポリペプチドの天然のアミノ酸配列が所望されるスルファターゼモチーフの残基を１つ以上含んでいる場合には修飾する残基の総数を減らすことができ、例えば、天然のアミノ酸残基に隣接しているアミノ酸残基を部位特異的に修飾することで、スルファターゼモチーフ配列を提供することができる。
特に目的とするアルデヒドタグは少なくとも最小スルファターゼモチーフ（「保存スルファターゼモチーフ」とも呼ばれる）を含むものであるが、より長いアルデヒドタグも本開示において考慮され、かつ、本開示に包含され、本発明の組成物及び方法で使用することができることに注意されたい。従ってアルデヒドタグは、５残基又は６残基の最小スルファターゼモチーフを含んでいてもよいし、或いはより長く、かつ、モチーフのＮ末端側及び／又はＣ末端側に別のアミノ酸残基が隣接している場合のある最小スルファターゼモチーフを含んでいてもよい。例えば、５又は６アミノ酸残基の、並びにより長い、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０又はそれ以上のアミノ酸残基のアミノ酸配列のアルデヒドタグが考えられる。
特定の態様では、使用されるスルファターゼモチーフは、
Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（Ｉ）の式で表すことができ、
式中、
Ｚ１はシステイン又はセリンであり（（Ｃ／Ｓ）とも表すことができる）；
Ｚ２はプロリン又はアラニン残基のいずれかであり（（Ｐ／Ａ）とも表すことができる）；
Ｚ３は塩基性のアミノ酸（例えば、アルギニン（Ｒ）であるかリジン（Ｋ）若しくはヒスチジン（Ｈ）であってもよく、一般的にはリジンであり）、又は脂肪族アミノ酸（アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、若しくはプロリン（Ｐ）であるが、一般的にはＡ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、又はＩであり）；
Ｘ１は存在してもしなくてもよく、存在する場合には、いずれのアミノ酸であってもよいが、一般的には脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸、又は極性の非荷電アミノ酸であり（すなわち、芳香族アミノ酸若しくは荷電アミノ酸以外であり）、一般的にはＬ、Ｍ、Ｖ、Ｓ又はＴ、より一般的にはＬ、Ｍ、Ｓ又はＶであり、ただし、スルファターゼモチーフが標的ポリペプチドのＮ末端にある場合にはＸ１は存在し、
Ｘ２及びＸ３は独立していずれのアミノ酸であってもよいが、一般的には脂肪族アミノ酸、極性、非荷電アミノ酸、又は硫黄含有アミノ酸であり（すなわち、芳香族アミノ酸若しくは荷電アミノ酸以外であり）、一般的にはＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｇ又はＣ、より一般的にはＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ又はＧである。
従って本開示は、アルデヒド−タグ付きＩｇ重鎖とアルデヒド−タグ付きＩｇ軽鎖を含む単離されたアルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチドを提供し、ここでアルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチドは、式Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３で表される、少なくとも５残基のアミノ酸配列を提供するように修飾されたＩｇ定常領域のアミノ酸配列を含み、式中、
Ｚ１はシステイン又はセリンであり；
Ｚ２はプロリン又はアラニン残基であり；
Ｚ３は脂肪族アミノ酸又は塩基性アミノ酸であり；
Ｘ１は存在してもしなくてもよく、存在する場合にはいずれのアミノ酸であってもよく、ただし、異種スルファターゼモチーフがポリペプチドのＮ−末端にある場合には、Ｘ１は存在し；
Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立して任意のアミノ酸であり、
この場合、配列は溶媒が接触可能なＩｇ定常領域のループ領域中にあるか又はそれに隣接しており、かつ、配列はＩｇ重鎖のＣ−末端にはない。
スルファターゼモチーフにＦＧＥが作用すると、Ｚ１が酸化されてホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）残基が生成される。さらに、ＦＧＥが介在する変換、及び目的の部分を含む反応パートナーとの反応の両方に続いて、上記式のＺ１の位置にあるＦＧｌｙが目的の部分（例えば、検出可能な標識、水溶性ポリマー、ポリペプチド、薬剤など）に共有結合する。
アルデヒドタグが標的ポリペプチドのＮ−末端以外の位置に存在する場合、上記式のＸ１を、標的ポリペプチドの天然のアミノ酸配列のアミノ酸残基から提供することができる。その結果、いくつかの態様においてアルデヒドタグが標的ポリペプチドのＮ−末端以外の位置に存在する場合、スルファターゼモチーフは、式、
（Ｃ／Ｓ）Ｘ１（Ｐ／Ａ）Ｘ２Ｚ３（ＩＩ）で表され、
式中、Ｘ１及びＸ２は独立していずれのアミノ酸であってもよいが、一般的には脂肪族アミノ酸、極性、非荷電アミノ酸、又は硫黄含有アミノ酸であり（すなわち、芳香族アミノ酸又は荷電アミノ酸以外であり）、一般的にはＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ、又はＣ、より一般的にはＳ、Ｔ、Ａ、又はＶであり；及びＺ３は塩基性アミノ酸であり（例えば、アルギニン（Ｒ）であるか、或いはリジン（Ｋ）若しくはヒスチジン（Ｈ）であってもよいが、一般的にはリジンであり）、又は脂肪族アミノ酸（アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、又はプロリン（Ｐ）、一般的にはＡ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、又はＩ）である。
上述したように、例えばアルデヒドタグがスルファターゼモチーフと「補助的なモチーフ」の両方を含むように、スルファターゼモチーフはその配列のＮ−末端及びＣ−末端の一方又は両方に残基をさらに含む場合もある。一態様では、スルファターゼモチーフはＣ−末端（すなわち、上記式のアルギニン残基の後）に、アミノ酸配列ＡＡＬＬＴＧＲ（配列番号９２）、ＳＱＬＬＴＧＲ（配列番号９３）、ＡＡＦＭＴＧＲ（配列番号９４）、ＡＡＦＬＴＧＲ（配列番号９５）、ＳＡＦＬＴＧＲ（配列番号９６）、ＡＳＩＬＴＧＫ（配列番号９７）、ＶＳＦＬＴＧＲ（配列番号９８）、ＡＳＬＬＴＧＬ（配列番号９９）、ＡＳＩＬＩＴＧ（配列番号１００）、ＶＳＦＬＴＧＲ（配列番号１０１）、ＳＡＩＭＴＧＲ（配列番号１０２）、ＳＡＩＶＴＧＲ（配列番号１０３）、ＴＮＬＷＲＧ（配列番号１０４）、ＴＮＬＷＲＧＱ（配列番号１０５）、ＴＮＬＣＡＡＳ（配列番号１０６）、ＶＳＬＷＴＧＫ（配列番号１０７）、ＳＭＬＬＴＧ（配列番号１０８）、ＳＭＬＬＴＧＮ（配列番号１０９）、ＳＭＬＬＴＧＴ（配列番号１１０）、ＡＳＦＭＡＧＱ（配列番号１１１）、又はＡＳＬＬＴＧＬ（配列番号１１２）、（例えば、Ｄｉｅｒｋｓ ｅｔ ａｌ。（１９９９）ＥＭＢＯＪ１８（８）：２０８４−２０９１を参照のこと）、又はＧＳＬＦＴＧＲ（配列番号１１３）のうち残基が１、２、３、４、５、６、又は７個全てが連続した、補助的なモチーフを含む。しかしながら、そのようなさらなるＣ末端アミノ酸残基は、ＦＧＥが介在する、アルデヒドタグのスルファターゼモチーフの変換には必要ではないため、単に随意選択であり、かつ、本明細書に記載のアルデヒドタグから具体的に除いてもよい。いくつかの態様では、アルデヒドタグはアミノ酸配列ＣＧＰＳＲ（Ｍ／Ａ）Ｓ（配列番号１１４）又はＣＧＰＳＲ（Ｍ／Ａ）（配列番号１１５）を含まず、これらの配列はリン酸モノエステルヒドロラーゼの天然のアミノ酸配列として存在する場合がある。
アルデヒドタグのスルファターゼモチーフは通常、選択したＦＧＥ（例えば、アルデヒドタグ付きポリペプチドが発現している宿主細胞に存在するＦＧＥ又は無細胞のインビトロ法でアルデヒドタグ付きポリペプチドと接触させるＦＧＥ）による変換が可能になるように選択される。
アルデヒドタグ付き標的ＩｇポリペプチドにＦＧｌｙを生成するための好適な反応パートナーを提供するアルデヒドタグとＦＧＥは、当該分野で入手可能な情報を踏まえれば容易に選択することができる。通常、真核生物のＦＧＥによる変換に感受性のあるスルファターゼモチーフは、システイン及びプロリンを含み（すなわち、システイン及びプロリンをそれぞれ、上記式Ｉ（例えば、Ｘ１ＣＸ２ＰＸ３Ｚ３）、上記式ＩＩ（ＣＸ１ＰＸ２Ｚ３）のＺ１及びＺ２、の位置に含み）、「ＳＵＭＦ１−型」のＦＧＥ（Cosma et al. Cell 2003, 113, (4), 445-56；Dierks et al. Cell 2003, 113, (4), 435-44）によって修飾される。原核生物のＦＧＥによる変換に感受性のあるスルファターゼモチーフは、システイン又はセリンのいずれかとプロリンをスルファターゼモチーフ中に含み（すなわち、上記式Ｉ（例えば、Ｘ１（Ｃ／Ｓ）Ｘ２ＰＸ３Ｚ３）のＺ１にシステイン又はセリンを、及び上記式ＩＩ（Ｃ／Ｓ）Ｘ１ＰＸ２Ｚ３）のＺ２にプロリンをそれぞれ含み）、それぞれ、「ＳＵＭＦ１−型」ＦＧＥ又は「ＡｔｓＢ−型」ＦＧＥのどちらかによって修飾される（Szameit et al. J Biol Chem 1999, 274, (22), 15375-81）。原核生物のＦＧＥによる変換に感受性のある他のスルファターゼモチーフは、システイン又はセリンのいずれか、及びプロリン又はアラニンのいずれかをスルファターゼモチーフ中に含み（すなわち、上記式Ｉ又はＩＩ（例えば、Ｘ１ＣＸ２ＰＸ３Ｒ；Ｘ１ＳＸ２ＰＸ２Ｒ；Ｘ１ＣＸ２ＡＸ３Ｒ；Ｘ１ＳＸ２ＡＸ３Ｒ；ＣＸ１ＰＸ２Ｒ；ＳＸ１ＰＸ２Ｒ；ＣＸ１ＡＸ２Ｒ；ＳＸ１ＡＸ２Ｒ、Ｘ１ＣＸ２ＰＸ３Ｚ３；Ｘ１ＳＸ２ＰＸ２Ｚ３；Ｘ１ＣＸ２ＡＸ３Ｚ３；Ｘ１ＳＸ２ＡＸ３Ｚ３；ＣＸ１ＰＸ２Ｚ３；ＳＸ１ＰＸ２Ｚ３；ＣＸ１ＡＸ２Ｚ３；ＳＸ１ＡＸ２Ｚ３）のＺ１にシステイン又はセリンを、Ｚ２にプロリン又はアラニンをそれぞれ含み）、かつ、修飾に感受性を、例えばファーミキューテス（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ、例えば、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ））のＦＧＥによる修飾に感受性をもつ（Berteau et al. J. Biol. Chem..2006; 281:22464-22470を参照のこと）か、或いは結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）のＦＧＥによる修飾に感受性をもつ可能性がある。
そのため、例えば、ＦＧＥが真核生物のＦＧＥ（例えば、ヒトＦＧＥを含む哺乳類のＦＧＥ）の場合、スルファターゼモチーフは一般的には、式、
Ｘ１ＣＸ２ＰＸ３Ｚ３で表され、
式中、
Ｘ１は存在してもしなくてもよく、存在する場合にはいずれのアミノ酸であってもよいが、一般的には脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸、又は極性、非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸又は荷電アミノ酸以外）であり、一般的にはＬ、Ｍ、Ｓ又はＶであり、ただし、スルファターゼモチーフが標的ポリペプチドのＮ−末端にある場合にはＸ１は存在し；
Ｘ２及びＸ３は独立していずれのアミノ酸であってもよいが、一般的には脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸、又は極性、非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸又は荷電アミノ酸以外）であり、一般的にはＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｇ、又はＣ、より一般的にはＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ又はＧであり；及び
Ｚ３は塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン（Ｒ）であるか、或いはリジン（Ｋ）若しくはヒスチジン（Ｈ）であってもよいが、一般的にはリジンであり）、又は脂肪族アミノ酸（アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、又はプロリン（Ｐ）、一般的にはＡ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、又はＩ）である。
スルファターゼモチーフの具体例としては、ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１７）、ＭＣＴＰＳＲ（配列番号１１６）、ＶＣＴＰＳＲ（配列番号１１７）、ＬＣＳＰＳＲ（配列番号１１８）、ＬＣＡＰＳＲ（配列番号１１９）、ＬＣＶＰＳＲ（配列番号１２０）、ＬＣＧＰＳＲ（配列番号１２１）、ＩＣＴＰＡＲ（配列番号１２２）、ＬＣＴＰＳＫ（配列番号１２３）、ＭＣＴＰＳＫ（配列番号１２４）、ＶＣＴＰＳＫ（配列番号１２５）、ＬＣＳＰＳＫ（配列番号１２６）、ＬＣＡＰＳＫ（配列番号１２７）、ＬＣＶＰＳＫ（配列番号１２８）、ＬＣＧＰＳＫ（配列番号１２９）、ＬＣＴＰＳＡ（配列番号１３０）、ＩＣＴＰＡＡ（配列番号１３１）、ＭＣＴＰＳＡ（配列番号１３２）、ＶＣＴＰＳＡ（配列番号１３３）、ＬＣＳＰＳＡ（配列番号１３４）、ＬＣＡＰＳＡ（配列番号１３５）、ＬＣＶＰＳＡ（配列番号１３６）、及びＬＣＧＰＳＡ（配列番号１３７）が挙げられる。他の特定のスルファターゼモチーフも本明細書で提供する開示から明らかである。
ホルミルグリシン修飾型Ｉｇポリペプチド
以下で詳細に説明するように、変換型アルデヒドタグ付きＩｇポリペプチドを目的の部分を含む反応パートナーと反応させると、目的の部分が変換型アルデヒドタグ付きＩｇポリペプチドのＦＧｌｙ残基に抱合され、修飾型ポリペプチドが生成される。修飾型アルデヒドタグを有する修飾型Ｉｇポリペプチドは通常、式、
Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（Ｉ’）の修飾型スルファターゼモチーフを含めることによって表され、
式中、
ＦＧｌｙ’は共有結合した部分を有するホルミルグリシン残基であり、
Ｚ２はプロリン又はアラニン残基のいずれか（（Ｐ／Ａ）とも表すことができる）であり；Ｚ３は塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン（Ｒ）であるか、リジン（Ｋ）若しくはヒスチジン（Ｈ）であってもよいが、一般的にはリジンであり）、又は脂肪族アミノ酸（アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、又はプロリン（Ｐ）、一般的にはＡ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、又はＩ）であり；
Ｘ１は存在してもしなくてもよく、存在する場合にはいずれのアミノ酸であってもよいが、一般的には脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸、又は極性、非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸又は荷電アミノ酸以外）であり、一般的にはＬ、Ｍ、Ｖ、Ｓ又はＴ、より一般的にはＬ、Ｍ又はＶであり、ただし、スルファターゼモチーフが標的ポリペプチドのＮ−末端に位置する場合にはＸ１は存在し、及び
Ｘ２及びＸ３は独立していずれのアミノ酸であってもよいが、一般的には脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸、又は極性、非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸又は荷電アミノ酸以外）であり、一般的にはＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｇ又はＣ、より一般的にはＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ又はＧである。
従って、本開示は、ホルミルグリシン部分を含むように修飾されたＩｇポリペプチドを提供し、ここでＩｇポリペプチドは、式、
Ｘ１（ＦＧｌｙ）Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３で表されるＦＧｌｙ変換型スルファターゼモチーフを含み、
式中、
Ｘ１は存在してもしなくてもよく、存在する場合にはいずれのアミノ酸であってもよく、ただし、スルファターゼモチーフがポリペプチドのＮ−末端にある場合には、Ｘ１は存在し；
Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立して任意のアミノ酸であり；及び
Ｚ３は塩基性アミノ酸であり；かつ、
折り畳まれた状態では、ＦＧｌｙ修飾型Ｉｇポリペプチドは溶媒が接触可能な表面にＦＧｌｙ基を提示する。
本開示はさらに、ＦＧｌｙ−修飾Ｉｇポリペプチドのライブラリーも提供し、この場合、ライブラリーは複数のメンバー（集団）を含み、メンバーであるＦＧｌｙ修飾型ＩｇポリペプチドはそれぞれＦＧｌｙ修飾型アルデヒドタグを含み、かつ、各メンバーＦＧｌｙ修飾型Ｉｇポリペプチドは、他のメンバーとは異なる位置にアルデヒドタグを含む。図２は、ＦＧｌｙ修飾型Ｉｇポリペプチドのライブラリー生成の模式図の例を図示しており、この場合、各メンバーＩｇポリペプチドは、他のメンバーとは異なる位置にアルデヒドタグを含んでいる。図２は、薬剤のＦＧｌｙ修飾型ポリペプチドへの結合を図示している。
本開示は、ＦＧｌｙ修飾型抗体を提供し、ここでＦＧｌｙ修飾型抗体は、１）ＦＧｌｙ修飾型Ｉｇ重鎖定常領域；及びＦＧｌｙ修飾型Ｉｇ軽鎖定常領域；２）ＦＧｌｙ修飾型Ｉｇ重鎖定常領域；及びＦＧｌｙ非修飾型Ｉｇ軽鎖定常領域；又は３）ＦＧｌｙ非修飾型Ｉｇ重鎖定常領域；及びＦＧｌｙ修飾型Ｉｇ軽鎖定常領域を含む可能性がある。対象ＦＧｌｙ修飾型抗体はまた、ＶＨ及び／又はＶＬドメインを含み、かつ、抗原に結合することができる。
変換型スルファターゼモチーフの具体例としては、Ｌ（ＦＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１３８）、Ｍ（ＦＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１３９）、Ｖ（ＦＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１４０）、Ｌ（ＦＧｌｙ）ＳＰＳＲ（配列番号１４１）、Ｌ（ＦＧｌｙ）ＡＰＳＲ（配列番号１４２）、Ｌ（ＦＧｌｙ）ＶＰＳＲ（配列番号１４３）、及びＬ（ＦＧｌｙ）ＧＰＳＲ（配列番号１４４）、Ｉ（ＦＧｌｙ）ＴＰＡＲ（配列番号１４５）、Ｌ（ＦＧｌｙ）ＴＰＳＫ（配列番号１４６）、Ｍ（ＦＧｌｙ）ＴＰＳＫ（配列番号１４７）、Ｖ（ＦＧｌｙ）ＴＰＳＫ（配列番号１４８）、Ｌ（ＦＧｌｙ）ＳＰＳＫ（配列番号１４９）、Ｌ（ＦＧｌｙ）ＡＰＳＫ（配列番号１５０）、Ｌ（ＦＧｌｙ）ＶＰＳＫ（配列番号１５１）、Ｌ（ＦＧｌｙ）ＧＰＳＫ（配列番号１５２）、Ｌ（ＦＧｌｙ）ＴＰＳＡ（配列番号１５２）、Ｍ（ＦＧｌｙ）ＴＰＳＡ（配列番号１５３）、Ｖ（ＦＧｌｙ）ＴＰＳＡ（配列番号１５４）、Ｌ（ＦＧｌｙ）ＳＰＳＡ（配列番号１５５）、Ｌ（ＦＧｌｙ）ＡＰＳＡ（配列番号１５６）、Ｌ（ＦＧｌｙ）ＶＰＳＡ（配列番号１５７）、及びＬ（ＦＧｌｙ）ＧＰＳＡ（配列番号１５８）が挙げられる。
以下で詳細に説明するように、目的の部分は、水溶性ポリマー、検出可能な標識、薬剤、又はＩｇポリペプチドを膜の中に若しくは膜表面に固定するための部分などの、さまざまな部分のいずれであってもよい。アルデヒドタグ付きＩｇポリペプチドに関する上記の検討から明らかなように、そのポリペプチド中の所望される任意の部位に、修飾型ポリペプチドの修飾型スルファターゼモチーフを配置させることができる。従って本開示は、例えば、修飾型ポリペプチドの親の翻訳後修飾部位に修飾型スルファターゼモチーフを有する、修飾型ポリペプチドを提供する（すなわち、翻訳後修飾部位にアルデヒドタグを備えるように標的ポリペプチドを修飾する場合、その後得られる修飾ポリペプチドは、親ポリペプチドのこの翻訳後修飾部位に対応する位置に、ある部分を含むことになる）。次いで、例えば、親標的ポリペプチドで通常グリコシル化が起こる位置に対応する位置に、共有結合した水溶性ポリマーをもつように修飾型ポリペプチドを作成することができる。従って、例えば、天然に存在する親ポリペプチド中の糖残基と同じ又はほぼ同じ位置にＰＥＧ部分を有するＰＥＧ化ポリペプチドを作成することができる。同様に、親標的ポリペプチドが改変され、非天然の翻訳後修飾部位を１つ以上含む場合には、修飾型ポリペプチドは、これら親ポリペプチドの非天然の翻訳後修飾部位に対応する修飾型ポリペプチドの１つ以上の部位に、共有結合した水溶性ポリマーを含む可能性がある。
アルデヒドタグを含めるための標的Ｉｇポリペプチドの修飾
標的Ｉｇポリペプチドに１つ以上のアルデヒドタグを含めるための修飾は、組換え分子遺伝学的技法により、所望のアルデヒドタグ付きＩｇポリペプチドをコードしている核酸を作成することで達成することができる。そのような方法は当該分野で周知であり、クローニング法、部位特異的突然変異生成等などが含まれる（例えば、Sambrookらの「Molecular Cloning: A Laboratory Manual」(Cold Spring Harbor Laboratory Press 1989)；Ausubelら編の「Current Protocols in Molecular Biology」(Greene Publishing Associates, Inc., and John Wiley & Sons, Inc.1990及び付録を参照のこと）。
標的免疫グロブリン重鎖及び軽鎖
上で検討したように本開示は、アルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチド、ＦＧｌｙ修飾型アルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチド、及びＩｇ抱合体を提供する。Ｉｇポリペプチドを使用して、少なくともＩｇ定常領域、例えばＩｇ重鎖定常領域を（例えば、少なくともＣＨ１ドメイン；少なくともＣＨ１及びＣＨ２ドメイン；ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３ドメイン；又はＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４ドメインを）又はＩｇ軽鎖定常領域を含む、本開示のアルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチド、ＦＧｌｙ修飾型アルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチド、又はＩｇ抱合体を生成する。本明細書ではそのようなＩｇポリペプチドを「標的Ｉｇポリペプチド」と呼ぶ。
標的Ｉｇポリペプチドは、図１Ｂに図示した重鎖定常領域の連続した約３００アミノ酸〜約３３０アミノ酸のアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む場合がある。例えば、標的Ｉｇポリペプチドは、配列番号２に示す連続した約３００アミノ酸〜約３３０アミノ酸のアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
標的Ｉｇポリペプチドは、図１Ｃに図示した軽鎖定常領域の、連続した約２００アミノ酸〜約２３３アミノ酸、又は約２００アミノ酸〜約２３６アミノ酸のアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％、アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでいてもよい。例えば標的Ｉｇポリペプチドは、配列番号１に示す連続した約２００アミノ酸〜約２３６アミノ酸のアミノ酸配列と、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
上述したように、標的Ｉｇポリペプチドは通常、少なくともＩｇ重鎖定常領域又はＩｇ軽鎖定常領域を含み、かつ、Ｉｇ可変領域（例えば、ＶＬ領域及び／又はＶＨ領域）をさらに含んでいてもよい。Ｉｇ重鎖定常領域は、いずれのアイソタイプの重鎖のＩｇ定常領域、天然に存在しないＩｇ重鎖定常領域（保存されているＩｇ重鎖定常領域など）を含む。Ｉｇ定常領域を修飾してアルデヒドタグを含めることが可能であり、この場合、アルデヒドタグはＩｇ定常領域の溶媒が接触可能なループ領域中にあるか又はそれに隣接している。
１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、又は１６個のアミノ酸、又は１６個以上のアミノ酸を挿入及び／又は置換して、上述したスルファターゼモチーフのアミノ酸配列を提供することで、Ｉｇ定常領域を修飾することができる。
いくつかの例では、本開示のアルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチドは、アルデヒド−タグ付きＩｇ重鎖定常領域（例えば、少なくともＣＨ１ドメイン；少なくともＣＨ１及びＣＨ２ドメイン；ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３ドメイン；又はＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４ドメイン）を含む。アルデヒド−タグ付きＩｇ重鎖定常領域は、ＦＧＥで修飾することでＦＧｌｙ修飾型Ｉｇポリペプチドを生成することができる少なくとも１つのスルファターゼモチーフを含むように修飾された、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプの重鎖又はその任意のアロタイプ変異体の重鎖定常領域配列、例えば、ヒト重鎖定常領域配列又はマウス重鎖定常領域配列、ハイブリッド重鎖定常領域、合成重鎖定常領域、又は保存重鎖定常領域配列などを含んでいてもよい。Ｉｇ重鎖のアロタイプ変異体は当該分野で知られている。例えば、Jefferis and Lefranc (2009) MAbs 1:4を参照のこと。
いくつかの例において本開示のアルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチドは、アルデヒド−タグ付きＩｇ軽鎖定常領域を含む。アルデヒド−タグ付きＩｇ軽鎖定常領域は、カッパ軽鎖、ラムダ軽鎖の定常領域配列、例えば、ＦＧＥで修飾することによって、ＦＧｌｙ修飾型Ｉｇポリペプチドを生成することができる少なくとも１つのスルファターゼモチーフを含むように修飾されたヒトカッパ又はラムダ軽鎖定常領域、ハイブリッド軽鎖定常領域、合成軽鎖定常領域、又は保存軽鎖定常領域配列などを含んでいてもよい。定常領域の例としては、ヒトガンマ１及びガンマ３領域が挙げられる。修飾型定常領域は、スルファターゼモチーフを別として野生型のアミノ酸配列であってもよく、或いは、野生型のアミノ酸配列と少なくとも７０％同一の（例えば、少なくとも８０％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％同一の）アミノ酸配列であってもよい。
上述したように、本開示の単離されたアルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチドは、上に記載した式のアミノ酸が少なくとも５つのスルファターゼモチーフ配列を提供するように修飾されたＩｇ定常領域のアミノ酸配列を含み、この場合この配列は、Ｉｇポリペプチド定常領域の溶媒が接触可能なループ領域の中にあるか又はそれに隣接している。いくつかの態様においてスルファターゼモチーフは、Ｉｇポリペプチド重鎖のＣ−末端以外の位置に、又はＣ−末端以外にもある。
抗体の溶媒が接触可能なループは、分子モデリング又は既知の抗体構造と比較することで同定することができる。アミノ酸残基の相対的な接触可能性はＤＳＳＰの方法によってもまた計算することができ（Dictionary of Secondary Structure in Proteins; Kabsch and Sander 1983 Biopolymers 22: 2577-637）、また、溶媒が接触可能なアミノ酸の表面積は、当該分野において知られているアルゴリズムを使用した、抗体の三次元モデルに基づいて計算してもよい（例えば、Connolly, J. Appl. Cryst. 16, 548 (1983) and Lee and Richards, J. Mol. Biol. 55, 379 (1971)。これらは両方とも、参照することにより本明細書に組み入れられる）。
上述したように、単離されたアルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチドは、上で述べたように、スルファターゼモチーフを含むように修飾された重鎖定常領域を含んでいてもよく、この場合、スルファターゼモチーフは、Ｉｇポリペプチド重鎖定常領域の表面接触可能なループ領域中にあるか又はそれに隣接している。重鎖定常領域の表面接触可能なループ領域の説明のための例を図１Ａ及び１Ｂに示す。
いくつかの例では、上で述べたように標的免疫グロブリンを修飾してスルファターゼモチーフを含める。この場合スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１２２〜１２７；２）アミノ酸１３７〜１４３；３）アミノ酸１５５〜１５８；４）アミノ酸１６３〜１７０；５）アミノ酸１６３〜１８３；６）アミノ酸１７９〜１８３；７）アミノ酸１９０〜１９２；８）アミノ酸２００〜２０２；９）アミノ酸１９９〜２０２；１０）アミノ酸２０８〜２１２；１１）アミノ酸２２０〜２４１；１２）アミノ酸２４７〜２５１；１３）アミノ酸２５７〜２６１；１４）アミノ酸２６９〜２７７；１５）アミノ酸２７１〜２７７；１６）アミノ酸２８４〜２８５；１７）アミノ酸２８４〜２９２；１８）アミノ酸２８９〜２９１；１９）アミノ酸２９９〜３０３；２０）アミノ酸３０９〜３１３；２１）アミノ酸３２０〜３２２；２２）アミノ酸３２９〜３３５；２３）アミノ酸３４１〜３４９；２４）アミノ酸３４２〜３４８；２５）アミノ酸３５６〜３６５；２６）アミノ酸３７７〜３８１；２７）アミノ酸３８８〜３９４；２８）アミノ酸３９８〜４０７；２９）アミノ酸４３３〜４５１；及び３０）アミノ酸４４６〜４５１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖定常領域の領域の中にあるか又はそれに隣接している。アミノ酸にふった番号は、図１Ｂに図示したヒトＩｇＧ１のアミノ酸番号に基づくものである。
ＩｇＧ１重鎖の表面接触可能なループ領域の例としては、図１Ａ及び１Ｂに示したように、１）ＡＳＴＫＧＰ（配列番号７１）；２）ＫＳＴＳＧＧＴ（配列番号７２）；３）ＰＥＰＶ（配列番号７３）；４）ＮＳＧＡＬＴＳＧ（配列番号２０２）；５）ＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬ（配列番号７４）；６）ＱＳＳＧＬ（配列番号２２７）；７）ＶＴＶ；８）ＱＴＹ；９）ＴＱＴＹ（配列番号７５）；１０）ＨＫＰＳＮ（配列番号７６）；１１）ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ（配列番号７７）；１２）ＦＰＰＫＰ（配列番号７８）；１３）ＩＳＲＴＰ（配列番号７９）；１４）ＤＶＳＨＥＤＰＥＶ（配列番号８０）；１５）ＳＨＥＤＰＥＶ（配列番号２２３）；１６）ＤＧ；１７）ＤＧＶＥＶＨＮＡＫ（配列番号８１）；１８）ＨＮＡ；１９）ＱＹＮＳＴ（配列番号８２）；２０）ＶＬＴＶＬ（配列番号８３）；２１）ＧＫＥ；２２）ＮＫＡＬＰＡＰ（配列番号８４）；２３）ＳＫＡＫＧＱＰＲＥ（配列番号８５）；２４）ＫＡＫＧＱＰＲ（配列番号２０６）；２５）ＰＰＳＲＫＥＬＴＫＮ（配列番号８６）；２６）ＹＰＳＤＩ（配列番号８７）；２７）ＮＧＱＰＥＮＮ（配列番号８８）；２８）ＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳ（配列番号８９）；２９）ＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号９０）；及び３０）ＳＬＳＰＧＫ（配列番号１７５）が挙げられる。
いくつかの例では、標的免疫グロブリンを修飾して、上に述べたようにスルファターゼモチーフを含める。この場合、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１〜６；２）アミノ酸１３〜２４；３）アミノ酸３３〜３７；４）アミノ酸４３〜５４；５）アミノ酸５８〜６３；６）アミノ酸６９〜７１；７）アミノ酸７８〜８０；８）８７〜８９；９）アミノ酸９５〜９６；１０）１１４〜１１８；１１）１２２〜１２６；１２）１３４〜１３６；１３）１４４〜１５２；１４）１５９〜１６７；１５）１７５〜１７６；１６）１８４〜１８８；１７）１９５〜１９７；１８）２０４〜２１０；１９）２１６〜２２４；２０）２３１〜２３３；２１）２３７〜２４１；２２）２５２〜２５６；２３）２６３〜２６９；２４）２７３〜２８２；２５）アミノ酸２９９〜３０２の１つ以上に対応するＩｇＧ２重鎖定常領域の領域の中にあるか又はそれに隣接している。アミノ酸にふった番号は、配列番号４（ヒトＩｇＧ２、図１Ｂでも図示する）に示すアミノ酸配列のアミノ酸番号に基づくものである。
ＩｇＧ２重鎖の表面接触可能なループ領域の例としては、図１Ｂに示すように、１）ＡＳＴＫＧＰ（配列番号７１）；２）ＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡ（配列番号９１）；３）ＦＰＥＰＶ（配列番号１６８）；４）ＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰ（配列番号１５９）；５）ＱＳＳＧＬＹ（配列番号１６０）；６）ＶＴＶ；７）ＴＱＴ；８）ＨＫＰ；９）ＤＫ；１０）ＶＡＧＰＳ（配列番号１６１）；１１）ＦＰＰＫＰ（配列番号７８）；１２）ＲＴＰ；１３）ＤＶＳＨＥＤＰＥＶ（配列番号８０）；１４）ＤＧＶＥＶＨＮＡＫ（配列番号８１）；１５）ＦＮ；１６）ＶＬＴＶＶ（配列番号１６２）；１７）ＧＫＥ；１８）ＮＫＧＬＰＡＰ（配列番号１６３）；１９）ＳＫＴＫＧＱＰＲＥ（配列番号１６４）；２０）ＰＰＳ；２１）ＭＴＫＮＱ（配列番号１６５）；２２）ＹＰＳＤＩ（配列番号８７）；２３）ＮＧＱＰＥＮＮ（配列番号８８）；２４）ＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳ（配列番号１６６）；２５）ＧＮＶＦ（配列番号１８２）；及び２６）ＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号９０）が挙げられる。
いくつかの例では、標的免疫グロブリンを修飾して、上で述べたようにスルファターゼモチーフを含める。この場合スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１〜６；２）アミノ酸１３〜２２；３）アミノ酸３３〜３７；４）アミノ酸４３〜６１；５）アミノ酸７１；６）アミノ酸７８〜８０；７）８７〜９１；８）アミノ酸９７〜１０６；９）１１１〜１１５；１０）１４７〜１６７；１１）１７３〜１７７；１６）１８５〜１８７；１３）１９５〜２０３；１４）２１０〜２１８；１５）２２６〜２２７；１６）２３８〜２３９；１７）２４６〜２４８；１８）２５５〜２６１；１９）２６７〜２７５；２０）２８２〜２９１；２１）アミノ酸３０３〜３０７；２２）アミノ酸３１３〜３２０；２３）アミノ酸３２４〜３３３；２４）アミノ酸３５０〜３５２；２５）アミノ酸３５９〜３６５；及び２６）アミノ酸３７２〜３７７の１つ以上に対応するＩｇＧ３重鎖定常領域の領域の中にあるか又はそれに隣接している。アミノ酸にふった番号は、配列番号３（ヒトＩｇＧ３、図１Ｂでも図示する）に示すアミノ酸配列のアミノ酸番号に基づくものである。
ＩｇＧ３重鎖の表面接触可能なループ領域の例としては、図１Ｂに示すように、１）ＡＳＴＫＧＰ（配列番号７１）；２）ＰＣＳＲＳＴＳＧＧＴ（配列番号１６７）；３）ＦＰＥＰＶ（配列番号１６８）；４）ＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧ（配列番号１６９）；５）Ｖ；６）ＴＱＴ；７）ＨＫＰＳＮ（配列番号７６）；８）ＲＶＥＬＫＴＰＬＧＤ（配列番号１７０）；９）ＣＰＲＣＰＫＰ（配列番号１７１）；１０）ＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰＡＰＥＬＬＧＧ（配列番号２２９）；１１）ＦＰＰＫＰ（配列番号７８）；１２）ＲＴＰ；１３）ＤＶＳＨＥＤＰＥＶ（配列番号８０）；１４）ＤＧＶＥＶＨＮＡＫ（配列番号８１）；１５）ＹＮ；１６）ＶＬ；１７）ＧＫＥ；１８）ＮＫＡＬＰＡＰ（配列番号８４）；１９）ＳＫＴＫＧＱＰＲＥ（配列番号１６４）；２０）ＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮ（配列番号１７２）；２１）ＹＰＳＤＩ（配列番号８７）；２２）ＳＳＧＱＰＥＮＮ（配列番号１７３）；２３）ＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳ（配列番号１６６）；２４）ＧＮＩ；２５）ＨＥＡＬＨＮＲ（配列番号１７４）；及び２６）ＳＬＳＰＧＫ（配列番号１７５）が挙げられる。
いくつかの例では、標的免疫グロブリンを修飾して、上で述べたようにスルファターゼモチーフを含める。この場合スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１〜５；２）アミノ酸１２〜２３；３）アミノ酸３２〜３６；４）アミノ酸４２〜５３；５）アミノ酸５７〜６２；６）アミノ酸６８〜７０；７）アミノ酸７７〜７９；８）アミノ酸８６〜８８；９）アミノ酸９４〜９５；１０）アミノ酸１０１〜１０２；１１）アミノ酸１０８〜１１８；１２）アミノ酸１２２〜１２６；１３）アミノ酸１３４〜１３６；１４）アミノ酸１４４〜１５２；１５）アミノ酸１５９〜１６７；１６）アミノ酸１７５〜１７６；１７）アミノ酸１８５〜１８６；１８）アミノ酸１９６〜１９８；１９）アミノ酸２０５〜２１１；２０）アミノ酸２１７〜２２６；２１）アミノ酸２３２〜２４１；２２）アミノ酸２５３〜２５７；２３）アミノ酸２６４〜２６５；２４）２６９〜２７０；２５）アミノ酸２７４〜２８３；２６）アミノ酸３００〜３０３；２７）アミノ酸３９９〜４１７の１つ以上に対応するＩｇＧ４重鎖定常領域の領域の中にあるか又はそれに隣接している。アミノ酸にふった番号は、配列番号５（ヒトＩｇＧ４、図１Ｂでも図示する）に示すアミノ酸配列のアミノ酸番号に基づくものである。
ＩｇＧ４重鎖の表面接触可能なループ領域の例としては、図１Ｂに示すように、１）ＳＴＫＧＰ（配列番号１７６）；２）ＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡ（配列番号９１）；３）ＦＰＥＰＶ（配列番号１６８）；４）ＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰ（配列番号１５９）；５）ＱＳＳＧＬＹ（配列番号１６０）；６）ＶＴＶ；７）ＴＫＴ；８）ＨＫＰ；９）ＤＫ；１０）ＹＧ；１１）ＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳ（配列番号１７７）；１２）ＦＰＰＫＰ（配列番号７８）；１３）ＲＴＰ；１４）ＤＶＳＱＥＤＰＥＶ（配列番号１７８）；１５）ＤＧＶＥＶＨＮＡＫ（配列番号８１）；１６）ＦＮ；１７）ＶＬ；１８）ＧＫＥ；１９）ＮＫＧＬＰＳＳ（配列番号１７９）；２０）ＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰ（配列番号１８０）；２１）ＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮ（配列番号１８１）；２２）ＹＰＳＤＩ（配列番号８７）；２３）ＮＧ；２４）ＮＮ；２５）ＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳ（配列番号８９）；２６）ＧＮＶＦ（配列番号１８２）；及び２７）ＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１８３）が挙げられる。
いくつかの例では、標的免疫グロブリンを修飾して、上で述べたようにスルファターゼモチーフを含める。この場合スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１〜１３；２）アミノ酸１７〜２１；３）アミノ酸２８〜３２；４）アミノ酸４４〜５４；５）アミノ酸６０〜６６；６）アミノ酸７３〜７６；７）アミノ酸８０〜８２；８）アミノ酸９０〜９１；９）アミノ酸１２３〜１２５；１０）アミノ酸１３０〜１３３；１１）アミノ酸１３８〜１４２；１２）アミノ酸１５１〜１５８；１３）アミノ酸１６５〜１７４；１４）アミノ酸１８１〜１８４；１５）アミノ酸１９２〜１９５；１６）アミノ酸１９９；１７）アミノ酸２０９〜２１０；１８）アミノ酸２２２〜２４５；１９）アミノ酸２５２〜２５６；２０）アミノ酸２６６〜２７６；２１）アミノ酸２９３〜２９４；２２）アミノ酸３０１〜３０４；２３）アミノ酸３１７〜３２０；２４）アミノ酸３２９〜３５３の１つ以上に対応するＩｇＡ重鎖定常領域の領域の中にあるか又はそれに隣接している。アミノ酸にふった番号は、配列番号６（ヒトＩｇＡ、図１Ｂでも図示する）に示すアミノ酸配列のアミノ酸番号に基づくものである。
ＩｇＡ重鎖の表面接触可能なループ領域の例としては、図１Ｂに示すように、１）ＡＳＰＴＳＰＫＶＦＰＬＳＬ（配列番号１８４）；２）ＱＰＤＧＮ（配列番号１８５）；３）ＶＱＧＦＦＰＱＥＰＬ（配列番号１８６）；４）ＳＧＱＧＶＴＡＲＮＦＰ（配列番号１８７）；５）ＳＧＤＬＹＴＴ（配列番号１８８）；６）ＰＡＴＱ（配列番号１８９）；７）ＧＫＳ；８）ＹＴ；９）ＣＨＰ；１０）ＨＲＰＡ（配列番号１９０）；１１）ＬＬＧＳＥ（配列番号１９１）；１２）ＧＬＲＤＡＳＧＶ（配列番号１９２）；１３）ＳＳＧＫＳＡＶＱＧＰ（配列番号１９３）；１４）ＧＣＹＳ（配列番号１９４）；１５）ＣＡＥＰ（配列番号１９５）；１６）ＰＥ；１７）ＳＧＮＴＦＲＰＥＶＨＬＬＰＰＰＳＥＥＬＡＬＮＥＬ（配列番号１９６）；１８）ＡＲＧＦＳ（配列番号１９７）；１９）ＱＧＳＱＥＬＰＲＥＫＹ（配列番号１９８）；２０）ＡＶ；２１）ＡＡＥＤ（配列番号１９９）；２２）ＨＥＡＬ（配列番号２００）；及び２３）ＩＤＲＬＡＧＫＰＴＨＶＮＶＳＶＶＭＡＥＶＤＧＴＣＹ（配列番号２０１）が挙げられる。
スルファターゼモチーフは、Ｉｇ重鎖のこのような修飾部位の１つ以上のアミノ酸配列の中に、又はそれに隣接した位置に提供することができる。例えば、これらのアミノ酸配列のうちの１つ以上でＩｇ重鎖ポリペプチドを修飾して、これら修飾部位のＮ末端に隣接して、及び／又はＣ末端に隣接して、スルファターゼモチーフを提供することができる。あるいは又はこれに加えて、これらのアミノ酸配列のうちの１つ以上でＩｇ重鎖ポリペプチドを修飾して、Ｉｇ重鎖修飾部位の任意の２個の残基の間にスルファターゼモチーフを挿入することができる。いくつかの態様では、Ｉｇ重鎖ポリペプチドを修飾して、２つのモチーフを含めてもよく、これらは互いに隣接していても、或いは１、２、３、４又はそれ以上の（例えば、約１〜約２５、約２５〜約５０、又は約５０〜約１００、又はそれ以上）のアミノ酸で隔てられていてもよい。あるいは又はこれに加えて、天然のアミノ酸配列がスルファターゼモチーフ配列の１つ以上のアミノ酸残基を備えている場合には、Ｉｇ重鎖ポリペプチドのアミノ酸配列の修飾部位の選択したアミノ酸残基を修飾して、修飾部位にスルファターゼモチーフを提供してもよい。
従って、表面接触可能なループ領域のアミノ酸配列を修飾してスルファターゼモチーフを提供することができ、この場合修飾には、置換及び／又は挿入が含まれ得る。例えば、修飾がＣＨ１ドメイン中にある場合には、表面接触可能なループ領域のアミノ酸配列はＮＳＧＡＬＴＳＧ（配列番号２０２）となる可能性があり、アルデヒド−タグ付き配列は例えば、ＮＳＧＡＬＣＴＰＳＲＧ（配列番号２０３）となる、例えば、ＮＳＧＡＬＴＳＧ（配列番号２０２）配列の「ＴＳ」残基が「ＣＴＰＳＲ」（配列番号２０４）で置換され、スルファターゼモチーフが配列ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１７）を含むようになる可能性がある。別の例としてＣＨ２ドメインに修飾がある場合、表面接触可能なループ領域のアミノ酸配列はＮＫＡＬＰＡＰ（配列番号８４）となる可能性があり、アルデヒド−タグ付き配列は、例えばＮＬＣＴＰＳＲＡＰ（配列番号２０５）に、例えばＮＫＡＬＰＡＰ（配列番号８４）配列の「ＫＡＬ」残基が「ＬＣＴＰＳＲ」（配列番号１７）で置換されて、スルファターゼモチーフが配列ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１７）を含むようになる可能性がある。別の例として、修飾がＣＨ２／ＣＨ３ドメインにある場合、表面接触可能なループ領域のアミノ酸配列はＫＡＫＧＱＰＲ（配列番号２０６）となる可能性があり、アルデヒド−タグ付き配列は例えば、ＫＡＫＧＬＣＴＰＳＲ（配列番号２０７）に、例えばＫＡＫＧＱＰＲ（配列番号２０６）配列の「ＧＱＰ」残基が「ＬＣＴＰＳ」（配列番号２０８）で置換されて、スルファターゼモチーフが配列ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１７）を含むようになる可能性がある。
上述したように、単離されたアルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチドは、上で記載したように、スルファターゼモチーフを含むように修飾された軽鎖定常領域を含んでいてもよく、この場合スルファターゼモチーフは、Ｉｇポリペプチド軽鎖定常領域の表面接触可能なループ領域の中にあるか又はそれに隣接している。軽鎖定常領域の表面接触可能なループ領域を説明するための例を図１Ａ及び１Ｃに示す。
いくつかの例では、上で記載したように標的免疫グロブリンを修飾して、スルファターゼモチーフを含める。この場合スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１３０〜１３５；２）アミノ酸１４１〜１４３；３）アミノ酸１５０；４）アミノ酸１６２〜１６６；５）アミノ酸１６３〜１６６；６）アミノ酸１７３〜１８０；７）アミノ酸１８６〜１９４；８）アミノ酸２１１〜２１２；９）アミノ酸２２０〜２２５；１０）アミノ酸２３３〜２３６のうちの１つ以上に対応するＩｇ軽鎖定常領域の領域の中にあるか又はそれに隣接しており、アミノ酸にふった番号は、図１Ｃに示すヒトカッパ軽鎖のアミノ酸番号に基づくものである。
Ｉｇ軽鎖（例えば、ヒトカッパ軽鎖）の表面接触可能なループ領域の例としては、図１Ａ及び１Ｃに示すように、１）ＲＴＶＡＡＰ（配列番号２０９）；２）ＰＰＳ；３）Ｇｌｙ（例えば、図１Ｃに示すヒトカッパ軽鎖配列の１５０番目に位置にあるを参照のこと）；４）ＹＰＲＥＡ（配列番号２１０）；５）ＰＲＥＡ（配列番号２２６）；６）ＤＮＡＬＱＳＧＮ（配列番号２１１）；７）ＴＥＱＤＳＫＤＳＴ（配列番号２１２）；８）ＨＫ；９）ＨＱＧＬＳＳ（配列番号２１３）；及び１０）ＲＧＥＣ（配列番号２１４）が挙げられる。
Ｉｇラムダ軽鎖の表面接触可能なループ領域の例としては、図１Ｃに示すように、ＱＰＫＡＡＰ（配列番号２１５）、ＰＰＳ、ＮＫ、ＤＦＹＰＧＡＶ（配列番号２１６）、ＤＳＳＰＶＫＡＧ（配列番号２１７）、ＴＴＰ、ＳＮ、ＨＫＳ、ＥＧ、及びＡＰＴＥＣＳ（配列番号２１８）が挙げられる。
いくつかの例では、標的免疫グロブリンを修飾して、上で記載したようにスルファターゼモチーフを含める。この場合スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１〜６；２）アミノ酸１２〜１４；３）アミノ酸１２１〜２２；４）アミノ酸３１〜３７；５）アミノ酸４４〜５１；６）アミノ酸５５〜５７；７）アミノ酸６１〜６２；８）アミノ酸８１〜８３；９）アミノ酸９１〜９２；１０）アミノ酸１０２〜１０５のうちの１つ以上に対応するラットＩｇ軽鎖定常領域の領域の中にあるか又はそれに隣接しており、アミノ酸にふった番号は、配列番号１０に示す（及び図１Ｃに図示する）ラット軽鎖のアミノ酸番号に基づくものである。
アルデヒド−タグ付きＩｇＧ１重鎖ポリペプチドのアミノ酸配列の非限定的な例を、図７Ｂ、８Ｂ、９Ｂ、１１Ｂ、１２Ｂ、１４、Ｂ、１５Ｂ、１７Ｂ、２３Ｂ、２５Ｂ、２７Ｂ、及び２９Ｂに示す。ＣＨ１ドメイン中（例えば、図７Ｂ、８Ｂ、９Ｂ、及び２３Ｂを参照のこと）、ＣＨ２ドメイン中（図１１Ｂ、１２Ｂ、１４Ｂ、及び２５Ｂ）、ＣＨ２／ＣＨ３ドメイン中（図１５Ｂ、及び２７Ｂ）、及びＣ−末端近く（図１７Ｂ、及び２９Ｂ）のスルファターゼモチーフをＬＣＴＰＳＲ（配列番号１７）として表す。
アルデヒド−タグ付きカッパ軽鎖ポリペプチドのアミノ酸配列の非限定的な例を、図２０Ｂ及び３２Ｂに示す。
スルファターゼモチーフを、Ｉｇ軽鎖のこのような修飾部位の１つ以上のこれらアミノ酸配列の中、又はそれに隣接した位置に提供することができる。例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチドのこれらのアミノ酸配列の１つ以上を修飾して、これら修飾部位のＮ末端に隣接して及び／又はＣ末端に隣接してスルファターゼモチーフを提供することができる。あるいは又はこれに加えて、Ｉｇ軽鎖ポリペプチドをこれらのアミノ酸配列の１つ以上で修飾して、Ｉｇ軽鎖の修飾部位の任意の２個の残基の間にスルファターゼモチーフを提供することができる。あるいは又はこれに加えて、天然のアミノ酸配列がスルファターゼモチーフ配列の１つ以上のアミノ酸残基を備えている場合には、Ｉｇ軽鎖ポリペプチドのアミノ酸配列の修飾部位の選択したアミノ酸残基を修飾して、修飾部位にスルファターゼモチーフを提供することができる。
表面接触可能なループ領域のアミノ酸配列を修飾してスルファターゼモチーフを提供し、この場合修飾には、置換及び／又は挿入が含まれ得る。例えば、修飾がＣＬ領域にある場合、表面接触可能なループ領域のアミノ酸配列は、ＤＮＡＬＱＳＧＮ（配列番号２１１）となる可能性があり、アルデヒド−タグ付き配列は例えば、ＤＮＡＬＣＴＰＳＲＱＳＧＮ（配列番号２１９）となる可能性があり、例えば、スルファターゼモチーフがＬＣＴＰＳＲ（配列番号１７）となるように、配列「ＣＴＰＳＲ」（配列番号２０４）を表面接触可能なループ領域の「ＤＮＡＬ」（配列番号２２０）と「ＱＳＧＮ」（配列番号２２１）配列の間に挿入する。
一態様では、Ｉｇ定常領域の修飾は、実質的に、重鎖定常領域の機能性を変化させない。例えば、Ｆｃ部（例えば、ＩｇＡ又はＩｇＧ抗体のＣＨ２及びＣＨ３ドメイン；並びにＩｇＭ又はＩｇＥ抗体のＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４ドメイン）は様々な結合機能及びエフェクター機能をもつ可能性がある。Ｆｃの結合機能とエフェクター機能の非限定的な例としては例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合、Ｃ１ｑ結合、及び抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性が挙げられる。Ｉｇ定常領域を修飾して本明細書に記載のアルデヒドタグを提供することは、実質的に、Ｆｃ結合機能や重鎖のいかなるエフェクター機能の１つ以上を亢進することも抑制することもない。例えば、修飾を行っても、親Ｉｇポリペプチドと比較して約１％、約２％、約５％、又は約１０％を上回るＦｃＲ結合機能及び／又はエフェクター機能の亢進又は抑制は生じない。
本明細書に記載の、アルデヒドタグを提供するためのＩｇ定常領域の修飾は、実質的に、アルデヒド−タグ付きＩｇ定常領域を含む抗体の抗原結合親和性を低下させない。
本明細書に記載の、アルデヒドタグを提供するためのＩｇ定常領域の修飾は、実質的に、Ｉｇポリペプチドの生産を低下させない。例えば修飾を行っても、アルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチドを宿主細胞中で発現させることができ、かつ、正確に折り畳むことができて機能性ポリペプチドが得られる。
アルデヒド−タグ付きＩｇ重鎖は、Ｉｇ可変領域を含んでいても、或いはＩｇ可変領域を欠損していてもよい。同様に、アルデヒド−タグ付きＩｇ軽鎖はＩｇ可変領域を含んでいても、或いはＩｇ可変領域を欠損していてもよい。Ｉｇ可変領域は当該分野で周知であり、かつ、Ｉｇポリペプチドに抗原−結合特異性を付与することができる。
アルデヒド−タグ付きＩｇ重鎖は、アルデヒドタグに加えて、１つ以上のさらなる修飾、例えばグリコシル化などを含む場合がある。
本開示は、Ｉｇ重鎖及びＩｇ軽鎖を含むアルデヒド−タグ付き抗体を提供し、ここでＩｇ重鎖及び／又はＩｇ軽鎖はアルデヒドタグを含む。アルデヒド−タグ付き抗体は、１つ、２つ、３つ、又はそれ以上のアルデヒドタグを有するＩｇ重鎖、及びアルデヒドタグのないＩｇ軽鎖を含む場合がある。アルデヒド−タグ付き抗体は、アルデヒドタグのないＩｇ重鎖、及び１つ、２つ、３つ、又はそれ以上のアルデヒドタグを有するＩｇ軽鎖を含む場合がある。アルデヒド−タグ付き抗体は、１つ、２つ、３つ、又はそれ以上のアルデヒドタグを有するＩｇ重鎖、及び１つ、２つ、３つ、又はそれ以上のアルデヒドタグを有するＩｇ軽鎖を含む場合がある。
本開示のアルデヒド−タグ付き抗体は、いかなる多様な抗原−結合特異性を有していてもよい。アルデヒド−タグ付き抗体は、例えば、癌細胞に存在する抗原；自己免疫細胞に存在する抗原；病原性微生物に存在する抗原；ウイルスに感染した細胞（例えば、ヒト免疫不全ウイルスに感染した細胞）に存在する抗原、例えば、ＣＤ４又はｇｐ１２０；病気にかかった細胞に存在する抗原などのいかなる多様な抗原にも結合することができる。例えば、アルデヒド−タグ付き抗体は、上述したように、抗原に結合することができ、この場合、抗原は細胞表面に存在する。
例えば、アルデヒド−タグ付き抗体は、癌細胞に存在する抗原に特異的に結合することができる。本開示のアルデヒド−タグ付き抗体が認識し、結合する（例えば、特異的に結合する）ことができる癌抗原の非限定的な例としては、癌腫、前立腺癌細胞、乳癌細胞、結腸直腸癌細胞、黒色腫細胞、Ｔ−細胞性白血病細胞、Ｔ−細胞性リンパ腫細胞、Ｂ−細胞性リンパ腫細胞、非ホジキンリンパ腫細胞などに存在する抗原が挙げられる。
特定の癌細胞に存在する抗原の非限定的な例としては、例えば、ＣＡ１２５、ＣＡ１５−３、ＣＡ１９−９、Ｌ６、ルイスＹ、ルイスＸ、アルファフェトプロテイン、ＣＡ２４２、胎盤アルカリホスファターゼ、前立腺特異的抗原、前立腺酸性ホスファターゼ、上皮増殖因子、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＧＥ−４、抗トランスフェリン受容体、ｐ９７、ＭＵＣ１−ＫＬＨ、ＨＥＲ２、ＣＥＡ、ｇｐ１００、ＭＡＲＴ１、前立腺特異的抗原、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、ＩＬ−２受容体、ＥｐｈＢ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ５２、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ムチン、Ｐ２１、ＭＰＧ、及びＮｅｕ腫瘍遺伝子産物が挙げられる。いくつかの態様では、抗原はＣＤ１９である。他の態様では、抗原はＣＤ２２である。
本明細書に記載するように、修飾し、アルデヒドタグを含めることができる抗体の非限定的な例としては抗ＣＤ１９抗体や抗ＣＤ２２抗体があるが、これらに限定されるものではない。
ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）
本明細書では、スルファターゼモチーフ中のシステイン又はセリンをＦＧｌｙに酸化する酵素をホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）と呼ぶ。上で論じたように、本明細書において使用される「ＦＧＥ」は、スルファターゼモチーフ中のシステイン（Ｃ）のＦＧｌｙへの変換に介在するＦＧｌｙ生成酵素、並びにスルファターゼモチーフのセリン（Ｓ）のＦＧｌｙへの変換に介在するＦＧｌｙ生成酵素を指す。文献中では通常、ＦＧＥとしてスルファターゼモチーフ中のＣをＦＧｌｙに変換するＦＧｌｙ生成酵素と、Ａｔｓ−Ｂ様としてスルファターゼモチーフ中のＳをＦＧｌｙに変換する酵素を指すことに注意されたい。本開示の目的で使用される「ＦＧＥ」は通常、両方の型のＦＧｌｙ生成酵素を指し、適切なスルファターゼモチーフを含む標的反応パートナー（すなわち、Ｃ−含有又はＳ−含有標的反応パートナー）に応じて、適切なＦＧＥが選択されると理解される。
活性部位にＦＧｌｙを有するスルファターゼが遍在することからも明らかなように、ＦＧＥは、真核生物と原核生物の双方を含む、様々な型の細胞で見られる。ＦＧＥには少なくとも２つの形態がある。真核生物のスルファターゼはスルファターゼモチーフにシステインを含み、かつ、「ＳＵＭＦ１−型」のＦＧＥによって修飾される（Cosma et al. Cell 2003, 113, (4), 445-56; Dierks et al. Cell 2003, 113, (4), 435-44）。ＦＧｌｙ生成酵素（ＦＧＥ）はＳＵＭＦ１遺伝子によってコードされている。原核生物のスルファターゼは、スルファターゼモチーフ中にシステイン又はセリンのいずれかを含む場合があり、それぞれ、「ＳＵＭＦ１−型」のＦＧＥ又は「ＡｔｓＢ−型」のＦＧＥによって修飾される（Szameit et al. J Biol Chem 1999, 274, (22), 15375-81）。この修飾は、真核生物では翻訳と同時に、又は翻訳のすぐ後に小胞体（ＥＲ）で起こると考えられている（Dierks et al. Proc Natl Acad Sci U S A 1997, 94(22):11963-8）。理論による裏付けはないが、原核生物では、ＳＵＭＦ１−型のＦＧＥはサイトゾルで機能し、ＡｔｓＢ−型のＦＧＥは細胞膜で、若しくは細胞膜の近くで機能すると考えられている。ＳＵＭＦ２型のＦＧＥはまた、脊椎動物及び棘皮動物を含む新口生物に関連しても記述されている（例えば、Pepe et al. (2003) Cell 113, 445-456, Dierks et al. (2003) Cell 113, 435-444; Cosma et al. (2004) Hum. Mutat. 23, 576-581を参照のこと）。
通常、標的ポリペプチドのアルデヒドタグに含まれるスルファターゼモチーフ中のシステイン又はセリンのＦＧｌｙへの変換を促進するために使用されるＦＧＥは、アルデヒドタグに含まれるスルファターゼモチーフに応じて選択される。ＦＧＥは、アルデヒドタグ付きポリペプチドを発現する宿主細胞にとって天然のものであってもよいし、又は宿主細胞を遺伝的に組み換えて、適切なＦＧＥを発現させることもできる。いくつかの態様では、ヒトＦＧＥ（例えば、ＳＵＭＦ１−型ＦＧＥ。例えば、Cosma et al. Cell 113, 445-56 (2003); Dierks et al. Cell 113, 435-44 (2003)を参照のこと）に適合するスルファターゼモチーフを使用し、アルデヒドタグ付きタンパク質を、ＦＧＥを発現しているヒト細胞か、或いは宿主細胞（一般的には、ヒトＦＧＥが発現するように遺伝子組換えされた哺乳類細胞）で発現させることが望まれる場合もある。
通常、本明細書で開示の方法で使用するＦＧＥは、天然に存在する供給源から得たものであっても、合成して製造したものであってもよい。例えば、適切なＦＧＥは、ＦＧＥを天然に生産している、又はＦＧＥをコードしている組換え遺伝子を発現するように遺伝的に組み換えられた、生物学的供給源に由来するものであってもよい。ＦＧＥをコードしている多数の核酸が当該分野で知られており、容易に入手可能である（例えば、Preusser et al. 2005 J. Biol. Chem. 280(15):14900-10 (Epub 2005 Jan 18)；Fang et al. 2004 J Biol Chem. 79(15):14570-8 (Epub 2004 Jan 28)；Landgrebe et al. Gene. 2003 Oct 16;316:47-56；Dierks et al. 1998 FEBS Lett. 423(1):61-5；Dierks et al. Cell. 2003 May 16;113(4):435-44；Cosma et al. (2003 May 16) Cell 113(4):445-56；Baenziger (2003 May 16) Cell 113(4):421-2 (review)；Dierks et al. Cell. 2005 May 20;121(4):541-52；Roeser et al. (2006 Jan 3)Proc Natl Acad Sci USA 103(1):81-6；Sardiello et al. (2005 Nov 1) Hum Mol Genet. 14(21):3203-17；国際公開第２００４／０７２２７５号；同第２００８／０３６３５０号；米国特許公開公報第２００８／０１８７９５６号；及びジェンバンク受託番号ＮＭ＿１８２７６０を参照のこと）。従って本開示は、タグ付き標的ポリペプチドのアルデヒドタグとの使用に適合するＦＧＥを発現するように遺伝的に組み換えられた組換え宿主細胞を提供する。特定の態様では、使用されるＦＧＥは天然に存在する酵素であってもよい（野生型アミノ酸配列を有する場合がある）。他の態様で使用されるＦＧＥは天然に存在しないものであってもよい。この場合、特定の例においてＦＧＥは、野生型酵素のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一の、少なくとも９０％同一の又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有していてもよい。ＦＧＥの構造と機能が解析されており、そのような酵素のいくつかのアミノ酸配列が入手可能であるため、酵素活性を保持した変異体を容易に設計することができる。
無細胞法によってスルファターゼモチーフ含有ポリペプチドを変換する場合には、単離されたＦＧＥを使用することができる。任意の都合のよいタンパク質精製法を利用してＦＧＥを単離することができる。例えば、Guide to Protein Purification、（Deuthser編）（Academic Press、１９９０）を参照のこと。例えば、所望のＦＧＥを産生している細胞から溶解物を調製し、ＨＰＬＣ、排除クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、アフィニティクロマトグラフィーなどで精製することができる。
発現ベクター及び遺伝子組換え宿主細胞
本開示は、ａｌｄ−タグ付きＩｇポリペプチドをコードしている核酸、並びに核酸を含んでいる構築物及び宿主細胞を提供する。そのような核酸は、アルデヒドタグ付きＩｇポリペプチドをコードしているオープンリーディングフレームを含むＤＮＡ配列を含み、大部分の態様では、適切な条件下で発現させることができる。「核酸」には、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、及びそのような核酸を含んでいるベクターが包含される。
本開示は、上述したように、アルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列を含む組換え核酸を提供する。組換え核酸には、
１）アルデヒド−タグ付きＩｇ重鎖定常領域をコードしているヌクレオチド配列（かつＩｇ重鎖可変領域ではない。すなわち、この組換え核酸はＩｇのＶＨドメインをコードしているヌクレオチド配列を欠損している）；
２）ＩｇポリペプチドがＩｇのＶＨドメインとアルデヒド−タグ付きＩｇ重鎖定常領域を含むアルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列；
３）アルデヒド−タグ付きＩｇ軽鎖定常領域をコードしているヌクレオチド配列（かつＩｇ軽鎖可変領域ではない。すなわち、この組換え核酸はＩｇのＶＬドメインをコードしているヌクレオチド配列を欠損している）；
４）ＩｇポリペプチドがＩｇのＶＬドメインとアルデヒド−タグ付きＩｇ軽鎖定常領域を含むアルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列；
５）アルデヒド−タグ付きＩｇ重鎖定常領域をコードしているヌクレオチド配列（かつＩｇ重鎖可変領域ではない。すなわちこの組換え核酸は、ＩｇのＶＨドメインをコードしているヌクレオチド配列を欠損している）；及びアルデヒド−タグ付きＩｇ軽鎖定常領域をコードしているヌクレオチド配列（かつＩｇ軽鎖可変領域ではない。すなわちこの組換え核酸は、ＩｇのＶＬドメインをコードしているヌクレオチド配列を欠損している）；
６）アルデヒド−タグ付きＩｇ重鎖定常領域をコードしているヌクレオチド配列（かつＩｇ重鎖可変領域ではない。すなわちこの組換え核酸は、ＩｇのＶＨドメインをコードしているヌクレオチド配列を欠損している）；及びアルデヒドタグが付いていないＩｇ軽鎖定常領域をコードしているヌクレオチド配列（かつＩｇ軽鎖可変領域ではない。すなわちこの組換え核酸は、ＩｇのＶＬドメインをコードしているヌクレオチド配列を欠損している）；
７）アルデヒドタグが付いていないＩｇ重鎖定常領域をコードしているヌクレオチド配列（かつＩｇ重鎖可変領域ではない。すなわちこの組換え核酸はＩｇのＶＨドメインをコードしているヌクレオチド配列を欠損している）；及びアルデヒド−タグ付きＩｇ軽鎖定常領域をコードしているヌクレオチド配列（かつＩｇ軽鎖可変領域ではない。すなわちこの組換え核酸はＩｇのＶＬドメインをコードしているヌクレオチド配列を欠損している）；
８）ＩｇＶＨドメインとアルデヒド−タグ付きＩｇ重鎖定常領域を含む第一のアルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列；及びＩｇＶＬドメイン及びアルデヒド−タグ付きＩｇ軽鎖定常領域を含む第二のアルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列；
９）ＩｇＶＨドメイン及びアルデヒド−タグ付きＩｇ重鎖定常領域を含み、アルデヒドタグが付いている第一のＩｇポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列；及びＩｇＶＬドメインとアルデヒドタグが付いていないＩｇ軽鎖定常領域を含む第二のＩｇポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列；又は
１０）ＩｇＶＨドメインとアルデヒドタグが付いていないＩｇ重鎖定常領域を含む第一のＩｇポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列；及びＩｇＶＬドメインとアルデヒド−タグ付きＩｇ軽鎖定常領域を含み、アルデヒドタグが付いている第二のＩｇポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列、が含まれ得る。
本開示は、上述の核酸を含む組換え発現ベクターを提供し、この場合、Ｉｇポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列はプロモーターに操作可能に連結されている。対象組換え発現ベクターがＩｇ重鎖及び軽鎖の両方（Ｉｇ可変領域を含む又は含まない）をコードしているいくつかの態様では、重鎖及び軽鎖をコードしている配列を同じプロモーターに、或いは別のプロモーターに操作可能に連結することができる。
組換え発現ベクターが、重鎖可変（ＶＨ）領域及び／又は軽鎖可変（ＶＬ）領域をコードしているヌクレオチド配列を含む場合には、当該分野で知られている数多くのＶＨ及びＶＬアミノ酸配列、並びにそれらをコードしているヌクレオチド配列を使用することができる。例えば、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)を参照のこと。
組換え発現ベクターが、可変領域の配列を含まないＩｇ重鎖又はＩｇ軽鎖をコードしているヌクレオチド配列を含む例では、ベクターは、Ｉｇポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列の５’に、Ｉｇ可変領域を挿入するための部位を有していてもよい。例えば組換え発現ベクターは５’から３’方向に、
１）ＶＨドメインをコードしているヌクレオチド配列を挿入するための部位；及びアルデヒド−タグ付きＩｇ重鎖定常領域をコードしているヌクレオチド配列；
２）ＶＬドメインをコードしているヌクレオチド配列を挿入するための部位；及びアルデヒド−タグ付きＩｇ軽鎖定常領域をコードしているヌクレオチド配列、を含み得る。
本開示はさらに、組換え発現ベクターのライブラリーも提供し、ここでライブラリーは複数の組換え発現ベクターのメンバー、例えば：
１）５’から３’方向に、ＶＨドメインをコードしているヌクレオチド配列を挿入するための部位；及び第一の表面接触可能なループ領域の中、又はそれに隣接した位置にアルデヒドタグを有している第一のアルデヒド−タグ付きＩｇ重鎖定常領域をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる、第一の組換え発現ベクター；
２）５’から３’方向に、ＶＨドメインをコードしているヌクレオチド配列を挿入するための部位；及び第二の表面接触可能なループ領域の中、又はそれに隣接した位置に、アルデヒドタグを有する第二のアルデヒド−タグ付きＩｇ重鎖定常領域をコードしているヌクレオチド配列を含む、第二の組換え発現ベクター；
３）５’から３’方向に、ＶＨドメインをコードしているヌクレオチド配列を挿入するための部位；及び第三の表面接触可能なループ領域の中、又はそれに隣接した位置に、アルデヒドタグを有する第三のアルデヒド−タグ付きＩｇ重鎖定常領域をコードしているヌクレオチド配列を含む、第三の組換え発現ベクター；
及びこれらの組み合わせ、この場合、組換え発現ベクターのそれぞれのメンバーは、別の表面接触可能なループ領域の中、又はそれに隣接した位置にアルデヒドタグを有するアルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列を含む可能性がある、を含み得る。
いくつかの例では、ライブラリーに含まれる組換え発現ベクターは、Ｉｇ軽鎖をコードしているヌクレオチド配列をさらに含み、Ｉｇ軽鎖は、可変領域を含んでいても若しくは含んでいなくても、又はアルデヒドタグが付いていても若しくは付いていなくでもよい。
本開示はさらに、組換え発現ベクターのライブラリーを提供し、この場合ライブラリーは、複数の組換え発現ベクターのメンバー、例えば、
１）、５’から３’方向に、ＶＬドメインをコードしているヌクレオチド配列を挿入するための部位；及び第一の表面接触可能なループ領域の中、又はそれに隣接した位置にアルデヒドタグを有する第一のアルデヒド−タグ付きＩｇ軽鎖定常領域をコードしているヌクレオチド配列を含む、第一の組換え発現ベクター；
２）５’から３’方向に、ＶＬドメインをコードしているヌクレオチド配列を挿入するための部位；及び第二の表面接触可能なループ領域の中、又はそれに隣接した位置にアルデヒドタグを有する第二のアルデヒド−タグ付きＩｇ軽鎖定常領域をコードしているヌクレオチド配列を含む、第二の組換え発現ベクター；
３）５’から３’方向に、ＶＬドメインをコードしているヌクレオチド配列を挿入するための部位；及び第三の表面接触可能なループ領域の中、又はそれに隣接した位置にアルデヒドタグを有する第三のアルデヒド−タグ付きＩｇ軽鎖定常領域をコードしているヌクレオチド配列を含む、第三の組換え発現ベクター；
及びこれらの組み合わせ、この場合、組換え発現ベクターのそれぞれのメンバーが、別の表面接触可能なループ領域の中、又はそれに隣接した位置にアルデヒドタグを有するアルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列を含む場合がある、を含み得る。
いくつかの例では、ライブラリーに含まれる組換え発現ベクターはさらに、Ｉｇ重鎖をコードしているヌクレオチド配列をさらに含み、Ｉｇ重鎖は、可変領域を含んでいても若しくは含んでいなくても、又はアルデヒドタグが付いていても若しくは付いていなくでもよい。
図２に、アルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチドライブラリーの作成に関する模式図の一例を図示する。ここでは、Ｉｇポリペプチドのそれぞれのメンバーは、互いに他のメンバーとは別の位置にアルデヒドタグを含んでいる。例えば、Ｉｇ重鎖又はＩｇ軽鎖、すなわち「タグ付きカセット」をアルデヒドタグで修飾し、これをさらに化学的に精巧なものへと作り上げることができる。これらのカセットは、抗体−薬剤抱合体を生産するための様々なＦｖに応用することができる。
本明細書で検討する核酸は、ベクター（構築物とも呼ばれる）の一部として提供することができる。当該分野では様々なベクターが知られており、本明細書で構築する必要はない。ベクターの例としては、これらには限定されないが、プラスミド；コスミド；ウイルスベクター（例えば、レトロウイルスベクター）；非ウイルスベクター；人工染色体（酵母人工染色体（ＹＡＣ）、ＢＡＣなど）；ミニ染色体などが挙げられる。ベクターは、増殖に望ましい細胞型や増殖の目的などの様々な要因に応じて選択される。
ベクターによって核酸が宿主細胞の染色体外で維持される、又は宿主細胞のゲノム中に統合される可能性がある。ベクターに関しては、例えば、「Short Protocols in Molecular Biology」(1999) F. Ausubelら編、Wiley & Sonsなどの、当該分野で周知の多数の出版物に詳細に記載されている。ベクターによって、目的のポリペプチド（例えば、アルデヒドタグ付きポリペプチド、ＦＧＥなど）をコードしている核酸の発現、対象核酸の増殖、又はその両方が提供され得る。
使用することができるベクターの例としては、これらには限定されないが、組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ又はコスミドＤＮＡに由来するものが挙げられる。例えば、プラスミドベクター、例えばｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１９／１８、ｐＵＣ１１８、１１９及びＭ１３ｍｐシリーズのベクターを使用することができる。バクテリオファージベクターには、λｇｔ１０、λｇｔ１１、λｇｔ１８〜２３、λＺＡＰ／Ｒ及びＥＭＢＬシリーズのバクテリオファージベクターが含まれ得る。使用可能なコスミドベクターとしては、これらには限定されないが、ｐＪＢ８、ｐＣＶ１０３、ｐＣＶ１０７、ｐＣＶ１０８、ｐＴＭ、ｐＭＣＳ、ｐＮＮＬ、ｐＨＳＧ２７４、ＣＯＳ２０２、ＣＯＳ２０３、ｐＷＥ１５、ｐＷＥ１６及びカロミド（ｃｈａｒｏｍｉｄ）９シリーズのベクターが挙げられる。あるいは、ヘルペスウイルス、レトロウイルス、ワクチニアウイルス、ポックスウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、又はウシ乳頭腫ウイルスなどを含むがこれらには限定されない組換えウイルスベクターを改変してもよい。
目的のタンパク質（例えば、アルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチド又はＦＧＥ）を発現させるためには、発現カセットを使用してもよい。従って本発明は、対象核酸を含む組換え発現ベクターを提供する。発現ベクターは、転写制御配列と翻訳制御配列を提供し、かつ、コード領域が転写開始領域並びに転写及び翻訳終結領域の転写制御下に操作可能に連結されている場合、誘導可能な又は構成的な発現を提供することができる。これらの制御領域は、ポリペプチド（例えば、Ｉｇポリペプチド又はＦＧＥ）をコードしている遺伝子にとって天然のものであっても、或いは外生の提供源に由来するものであってもよい。通常、転写及び翻訳制御配列には、これらには限定されないが、プロモーター配列、リボソーム結合部位、転写開始配列及び転写終結配列、翻訳開始配列及び翻訳終結配列、並びにエンハンサー又はアクチベーター配列が含まれ得る。構成的及び誘導性のプロモーターに加えて、強力なプロモーター（例えば、Ｔ７、ＣＭＶなど）が、特にインビボ（細胞を用いた）発現系又はインビトロ発現系において高い発現レベルが望まれる場合に、本明細書に記載の構築物に使用できる。その他のプロモーターの例としては、マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、アデノウイルスプロモーター、ヒトＣＭＶの最初期（ｉｍｍｅｄｉａｔｅｅａｒｌｙ）遺伝子由来のプロモーター（Boshart et al., Cell 41:521-530, 1985）、及びＲＳＶの末端反復配列（ＬＴＲ）由来のプロモーター（Gorman et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 79:6777-6781, 1982）が挙げられる。また、例えばレトロウイルスの５’ＵＴＲからプロモーターを準備することもできる。
発現ベクターは一般的に、目的のタンパク質をコードしている核酸配列を挿入するために便利な制限酵素部位をプロモーター配列の近くに有している。ベクターを含んでいる細胞の選抜を容易にするために、発現宿主内で操作可能な選択マーカーが含まれていてもよい。加えて、発現構築物はその他の構成要素を含んでいてもよい。例えば、発現ベクターは１つ又は２つの複製システムを含んでいてもよく、このことによって、生物、例えば発現用の哺乳類又は昆虫の細胞、並びにクローニングや増幅のための原核細胞での発現ベクターの維持が可能になる。さらに、発現構築物は形質転換した宿主細胞の選抜を可能にするための選択マーカー遺伝子を含んでいてもよい。選択遺伝子は当該分野で周知であり、使用される宿主細胞に応じて変化する。
アルデヒドタグ付きＩｇポリペプチドをコードしている発現構築物は、増幅法（例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ））によっても生成することができ、この場合、少なくとも１つの増幅プライマー（すなわち、フォワードプライマー又はリバースプライマーのうちの少なくとも１つ）はアルデヒドタグをコードしている核酸配列を含む。例えば、アルデヒドタグをコードしている配列を含む増幅プライマーを設計し、Ｉｇポリペプチドをコードしている核酸を増幅する。アルデヒドタグ含有フォワードプライマーを使用したポリメラーゼ介在性合成によって得られた伸長産物は、アルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチドを含む融合タンパク質をコードしている核酸増幅産物を生成する。その後増幅産物を選択した発現構築物に挿入してアルデヒドタグ付きポリペプチド発現構築物を得る。
宿主細胞
本開示は、対象核酸を含む遺伝的に組み換えた宿主細胞、例えば上述した組換え発現ベクターを含む遺伝的に組み換えた宿主細胞などを提供する。アルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチドを産生するには、多数の好適な宿主細胞のうちのいずれを使用してもよい。アルデヒドタグ付きＩｇポリペプチドの生産に使用される宿主細胞は必要に応じて、生産されたＩｇポリペプチドが、発現及びＦＧＥによる修飾の後にＦＧｌｙ含有アルデヒドタグを含むように、ＦＧＥ介在性変換を提供することができる。あるいは、宿主細胞は未変換型アルデヒドタグ付きＩｇポリペプチド（例えば、アルデヒドタグの変換を促すＦＧＥを発現していないことによる）を生産することができる。
変換型アルデヒドタグのアルデヒド部分は様々な用途に使用可能であり、様々な用途としては、これらには限定されないが、蛍光又はエピトープ標識を用いた可視化（例えば、アルデヒド反応基をもつ金粒子を用いた電子顕微鏡）；タンパク質の固定（例えば、タンパク質マイクロアレイの製造）；タンパク質の動力学的研究及び局在解析並びに応用；及びタンパク質と目的の部分（例えば、親タンパク質の半減期を伸ばす部分（例えば、ポリ（エチレングリコール））、標的化部分（例えば、作用部位への送達を高める）、及び生物学的に活性な部分（例えば、治療部分）との抱合などが挙げられる。
本明細書に記載のポリペプチドは通常、発現させる目的に応じて、原核生物又は真核生物の中で標準的な方法によって発現させることができる。従って本発明は、宿主細胞、例えば、アルデヒドタグ付きポリペプチドをコードしている核酸を含む、遺伝的に組み換えられた宿主細胞をさらに提供する。宿主細胞は必要に応じて、組換えＦＧＥをさらに含む場合があり、組換えＦＧＥは宿主細胞の内生のものであっても異種のものであってもよい。
未変換型アルデヒドタグ付きＩｇポリペプチド又は（宿主細胞が好適なＦＧＥを発現している場合には）変換型アルデヒドタグ付きＩｇポリペプチドを生産するため（大規模生産を含む）、又はＦＧＥ（例えば、無細胞法で使用するための）を生産するための宿主細胞は、入手可能な様々な宿主細胞のいずれから選択することもできる。宿主細胞の例としては、原核性又は真核性の単細胞宿主、例えば細菌（例えば、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）株、バシラス属（例えば、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）など）酵母又は真菌（例えば、出芽酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、ピキア属など）があり、他のそのような宿主細胞を用いることもできる。そもそもは高等生物（例えば昆虫、脊椎動物、特に哺乳類、（例えばＣＨＯ、ＨＥＫなど））に由来する典型的な宿主細胞を、発現宿主細胞として使用してもよい。
好適な哺乳類の細胞株には、これらには限定されないが、ＨｅＬａ細胞（例えば、アメリカタイプカルチュアコレクション（ＡＴＣＣ）受託番号受託番号ＣＣＬ−２）、ＣＨＯ細胞（例えば、ＡＴＣＣ受託番号受託番号ＣＲＬ９６１８及びＣＲＬ９０９６）、ＣＨＯＤＧ４４細胞（Urlaub(1983)Cell 33:405）、ＣＨＯ−Ｋ１細胞（ＡＴＣＣ、ＣＣＬ−６１）、２９３細胞（例えば、ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ−１５７３）、Ｖｅｒｏ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞（例えば、ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ−１６５８）、Ｈｕｈ−７細胞、ＢＨＫ細胞（例えば、ＡＴＣＣ受託番号ＣＣＬ１０）、ＰＣ１２細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ１７２１）、ＣＯＳ細胞、ＣＯＳ−７細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ１６５１）、ＲＡＴ１細胞、マウスＬ細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＣＣＬＩ．３）、ヒト胎児由来腎臓（ＨＥＫ）細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ１５７３）、ＨＬＨｅｐＧ２細胞などが含まれる。
特定の目的の発現系には、細菌、酵母、昆虫細胞、及び哺乳類細胞由来の発現系が含まれる。これら各分類の代表的な系を以下に示す。
産物は、当該分野で知られているいかなる適切な方法によっても回収することができる。さらに、タンパク質を精製するためのいかなる好適な方法を使用してもよく、好適なタンパク質の精製方法は、Guide to Protein Purification、（Deuthser編）（Academic Press、１９９０）に記載されている。例えば、ａｌｄ−タグ付きＩｇポリペプチドを発現している発現ベクターを含む細胞の溶解物を調製し、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、排除クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、アフィニティクロマトグラフィーなどで精製することができる。
アルデヒドタグの変換方法及び修飾方法
アルデヒドタグ付きＩｇポリペプチドに含まれるアルデヒドタグは、細胞を用いた方法（インビボ）又は細胞を使わない方法（インビトロ）で変換することができる。同様に、アルデヒドタグ付きポリペプチドの変換型アルデヒドタグを、細胞を用いた方法（インビボ）又は細胞を使わない方法（インビトロ）によって修飾することができる。これらについては以下で詳細に記述する。
宿主細胞を用いた「インビボ」での変換と修飾
好適なＦＧＥを含む細胞中でアルデヒドタグ付きポリペプチドを発現させることにより、アルデヒドタグ付きポリペプチドのアルデヒドタグを変換することができる。この態様では、宿主細胞で翻訳されている最中に、又は翻訳後に、アルデヒドタグのシステイン又はセリンは変換される。宿主細胞のＦＧＥは宿主細胞の内生のものである場合もあるし、又は宿主細胞にとって異種の好適なＦＧＥ用に、宿主細胞を組換えることもできる。ＦＧＥは、ＦＧＥ遺伝子にとって内生の発現系（例えば、宿主細胞の天然のＦＧＥ遺伝子に含まれるプロモーターや他の制御要素によって発現される）又は、構成的に若しくは誘導的に発現させるように、ＦＧＥのコード配列を異種プロモーターに操作可能に連結した組換え発現系によって発現させることができる。
反応パートナー部分をアルデヒドタグ付きポリペプチドに抱合させるのに適した条件は、Mahal et al. (1997 May 16) Science 276(5315):1125-8に記載されている条件と同様である。
例えば、方法を細胞内で行う場合、細胞はインビトロである。例えば、細胞が単細胞懸濁液として又は接着細胞としてインビトロで培養されている場合には、細胞は例えば、インビトロ培養細胞中にある。
「インビトロ」（無細胞）での変換と修飾
アルデヒドタグのスルファターゼモチーフのシステイン又はセリンをＦＧｌｙに変換するのに適した条件下でアルデヒドタグ付きポリペプチドとＦＧＥを接触させることにより、アルデヒドタグ付きＩｇポリペプチドのアルデヒドタグをインビトロ（無細胞）で変換することができる。例えば、好適なＦＧＥ存在下で、アルデヒドタグ付きＩｇポリペプチドをコードしている核酸をインビトロ転写／翻訳系で発現させ、変換型アルデヒドタグ付きＩｇポリペプチドを生産させることができる。
あるいは、好適なＦＧＥを欠損している宿主細胞内で生産した後、又は人工的に合成した後に、単離された、未変換型アルデヒドタグ付きＩｇポリペプチドを単離することができる。その後、アルデヒドタグを変換するための条件で、単離されたアルデヒドタグ付きＩｇポリペプチドと好適なＦＧＥを接触させる。アルデヒドタグ付きＩｇポリペプチドを、当該分野で知られている方法（例えば、熱、ｐＨの調整、カオトロピック剤、（例えば、尿素など）、有機溶媒（例えば、炭化水素：オクタン、ベンゼン、クロロホルム）など）で展開し、変性したタンパク質を好適なＦＧＥと接触させることができる。その後、適した条件でａｌｄ−タグ付きＩｇポリペプチドを再度折り畳むことができる。
変換型アルデヒドタグ付きの修飾に関して言えば、通常、修飾はインビトロで行う。変換型アルデヒドタグ付きＩｇポリペプチドを生産源（例えば、組換え宿主細胞での生産、人工合成）から単離し、その後、反応パートナーを含む薬剤又は他の部分と、その薬剤又は他の部分をアルデヒドタグのＦＧｌｙに抱合させるのに適した条件下で接触させる。
例えば、細胞を用いた変換と無細胞での変換を組み合わせて行い、変換型アルデヒドタグを生成し、その後、変換型アルデヒドタグを無細胞で修飾する。いくつかの態様では、無細胞の変換と細胞を用いた変換を組み合わせて行った。
免疫グロブリンポリペプチドを修飾する部分
アルデヒドタグ付き、ＦＧｌｙ含有Ｉｇポリペプチドを修飾して、様々な部分を結合させることができる。目的の分子の例としては、これらに限定する必要はないが、薬剤、検出可能な標識、低分子、水溶性ポリマー、合成ペプチドなどが挙げられる。
従って、本開示はＩｇポリペプチド抱合体（本明細書では、「Ｉｇ抱合体」とも呼ぶ）を提供し、Ｉｇ抱合体は、
Ｉｇポリペプチド（例えば、Ｉｇ重鎖若しくはＩｇ軽鎖、又は重鎖及び軽鎖両方を含むＩｇ）及び共有的に抱合した部分を含み、ここでＩｇポリペプチドは、
Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３の式の修飾型スルファターゼモチーフを含み、
ここでＦＧｌｙ’は、
の式で表され、
式中、Ｊ１は共有結合した部分であり；
Ｌ１はそれぞれ、アルキレン、置換されたアルキレン、アルケニレン、置換されたアルケニレン、アルキニレン、アルキニレン、アリーレン、置換されたアリーレン、シクロアルキレン、置換されたシクロアルキレン、ヘテロアリーレン、置換されたヘテロアリーレン、ヘテロサイクレン（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｎｅ）、置換されたヘテロサイクレン、アクリル、アミド、アシルオキシ、ウレタニレン（ｕｒｅｔｈａｎｙｌｅｎｅ）、チオエステル、スルホニル、スルホンアミド、スルホニルエステル、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、及び置換されたアミンから独立して選択される二価の部分であり；
ｎは０〜４０から選択される数であり；
Ｚ２はプロリン又はアラニン残基であり；
Ｘ１は存在してもしなくてもよく、存在する場合にはいずれのアミノ酸であってもよく、ただし、スルファターゼモチーフがポリペプチドのＮ−末端にある場合には、Ｘ１は存在し；
Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立して任意のアミノ酸であり；及び
Ｚ３は脂肪族アミノ酸又は塩基性アミノ酸であり；かつ、
折り畳まれている状態では、Ｉｇ抱合体は、共有結合している部分を溶媒が接触可能な表面に提示する。
本開示は、目的の部分を抱合した抗体を提供し、ここで目的の部分を抱合している抗体を「抗体抱合体」と呼ぶ。本開示の抗体抱合体は、１）目的の部分を抱合しているＩｇ重鎖定常領域；及び目的の部分を抱合しているＩｇ軽鎖定常領域；２）目的の部分を抱合しているＩｇ重鎖定常領域；及び目的の部分を抱合していないＩｇ軽鎖定常領域；又は３）目的の部分を抱合していないＩｇ重鎖定常領域；及び目的の部分を抱合しているＩｇ軽鎖定常領域を含み得る。対象抗体抱合体はさらに、ＶＨ及び／又はＶＬドメインを含む場合がある。
目的の部分は、タグ付きＩｇポリペプチドの変換型アルデヒドタグのＦＧｌｙ残基のアルデヒドと反応させるための反応パートナーの構成要素として提供される。タグ付きＩｇポリペプチドの修飾方法が標準的な化学反応と適合するため、本開示の方法は、様々な市販の試薬を利用して、目的の部分をアルデヒドタグ付きＩｇポリペプチドのＦＧｌｙ残基に結合させることができる。例えば、多くの目的の部分のアミノオキシ、ヒドラジド、又はチオセミカルバジド誘導体は好適な反応パートナーであり、かつ、容易に入手可能であるか、或いは標準的な化学手法によって生成することができる。
例えば、タグ付きＩｇポリペプチドにポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）部分を結合させるには、１アミノ−ＰＥＧとアミノオキシグリシン（ａｍｉｎｏｏｘｙｇｌｙｃｉｎｅ）から、標準的な手順でアミノオキシ−ＰＥＧを生成することができる。アミノオキシ−ＰＥＧを次に変換型（例えば、ＦＧｌｙ修飾型）アルデヒドタグ付きＩｇポリペプチドと反応させて、ＰＥＧ部分を結合させることができる。アミノオキシビオチン、ビオチンヒドラジド又は２，４ジニトロフェニルヒドラジンを使用することで、変換型アルデヒドタグ付きポリペプチドにビオチン部分を結合させることができる。
本明細書で検討したように、本開示を踏まえると当業者は、様々な部分をアルデヒドタグ付きポリペプチドに抱合させるための反応パートナーとして容易に適応させることができる。ｐＨ及び立体障害（すなわち、アルデヒドタグが目的の反応パートナーと反応するための接触性）などの要因が重要であることを当業者は理解するだろう。最適な結合条件となる修飾反応の条件は、当業者には周知であり、かつ、当該分野では慣例となっている。通常、７より低いｐＨで、約５．５、約６、約６．５のｐＨで結合反応を行うことが一般的には望ましく、一般的には約５．５のｐＨが最適である。生細胞の中又は生細胞の表面上に存在するアルデヒドタグ付きポリペプチドとの抱合を行う場合には、生理学的に合致するように条件を選択する。例えば、反応を起こすのに十分な時間であって、アルデヒドタグを含む細胞が許容できる時間内で（例えば、約３０分〜１時間）、ｐＨを一時的に下げることができる。細胞表面にあるアルデヒドタグ付きポリペプチドを修飾するための生理学的条件は、細胞表面にアジ化物を有する細胞の修飾に用いられるケトン−アジ化物反応の条件と同様なものになる場合がある（例えば、米国特許第６，５７０，０４０号を参照のこと）。
通常、部分は、１つ以上の様々な機能又は特性を提供することができる。部分の例としては、検出可能な標識（例えば、色素標識（例えば、発色団、蛍光団）、生物物理学的なプローブ（スピン標識、核磁気共鳴（ＮＭＲ）プローブ）、フェルスター共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）型の標識（例えば、蛍光団／消光剤対のメンバーの少なくとも１つを含む、ＦＲＥＴ対のメンバーの少なくとも１つ）、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）−型の標識（例えば、ＢＲＥＴ対のメンバーの少なくとも１つ）、免疫検出可能なタグ（例えば、ＦＬＡＧ、Ｈｉｓ（６）など）、局在タグ（例えば、タグ付きポリペプチドの組織又は分子細胞レベルでの関連（例えば、組織型、特に細胞膜との関連）を同定するための）など）；光によって活性化される動的部分（例えば、アゾベンゼン介在性細孔閉鎖、アゾベンゼン介在性構造変化、フォトディケージング（ｐｈｏｔｏｄｅｃａｇｉｎｇ）認識モチーフ）；水溶性ポリマー（例えば、ペグ化）；精製用タグ（例えば、アフィニティクロマトグラフィーによる単離を促進するため（例えば、ＦＬＡＧエピトープ、例えば、ＤＹＫＤＤＤＤＫ（配列番号２２２）の結合）；膜局在ドメイン（例えば、脂質又はグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）−型アンカー）；固定用タグ（例えば、選択的な結合を含む、ポリペプチドの表面への結合を促進するための）；薬剤（例えば、薬剤を抗体に結合させることを介した、例えば薬剤標的を促進するための薬剤）；標的送達部分、（例えば、リガンドを標的受容体に結合させるための部分（例えば、ウイルスの結合を、リポソーム上にある標的タンパク質への結合促進するためなど））などが挙げられる。
非限定的な具体例を以下に示す。
検出可能な標識
本開示の組成物及び方法は、検出可能な標識をアルデヒドタグ付きＩｇに届けるために使用することができ、例えばこの場合、Ｊ１が検出可能な標識である。検出可能な標識の例としては、これらに限定する必要はないが、蛍光分子（例えば、自家蛍光分子、試薬に接触すると蛍光を発する分子など）、放射性標識（例えば、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、２１２Ｂ、９０Ｙ、１８６Ｒｈなど）；ビオチン（例えば、ビオチンとアビジンの反応を介して検出するための）；蛍光タグ；画像化剤などが挙げられる。検出可能な標識にはさらに、抗体結合、例えば、検出可能に標識した抗体との結合、又は結合した抗体のサンドイッチ型のアッセイを介した検出によって検出することが可能なペプチド又はポリペプチドも含まれる。
標的分子の支持体への接着
方法により、アルデヒドタグ付き免疫グロブリンを、免疫グロブリンが固体支持層に接着するのを促進する部分（例えば、アッセイを促進するための）、又は分離を容易にするための部分（例えば、磁気ビーズに結合した抗体によって認識されるハプテン）を抱合させることができる。一態様では、本発明の方法を使用して、タンパク質を決められた配向で、アレイ（例えばチップ）に接着する。例えば、選択した部位（例えば、Ｎ−末端或いはそれに隣接した位置）にアルデヒドタグを有するポリペプチドを生成し、本発明の方法及び組成物を使用して、変換型アルデヒドタグに部分を届けることができる。この部分をその後、ポリペプチドを支持体（例えば、個体又は半固体支持体、特に高処理系でのマイクロチップとして使用するのに適した支持体）に結合させるための接着部位として使用することができる。
標的部位へ送達するための分子の接着
アルデヒドタグ付きポリペプチドの反応パートナーにとしては、低分子薬、毒素、又は細胞に送達するためのものであって、かつ、薬理学的活性を提供することができる他の分子、又は他の分子の送達標的として役立つ可能性がある分子を挙げることができる。
また、結合パートナーの対の一方を含む反応パートナーの使用も考えられる（例えば、リガンド、受容体のリガンド結合部、リガンドの受容体結合部など）。例えば反応パートナーとしては、ウイルスの受容体となり、ウイルスの外被タンパク質若しくはウイルスのカプシドタンパク質が結合すると、修飾型アルデヒドタグ付きタンパク質が発現している細胞の表面へのウイルスの接着を促すポリペプチドを挙げることができる。あるいは、反応パートナーとしては、抗体（例えば、モノクローナル抗体）が特異的に結合し、修飾型アルデヒドタグ付きポリペプチドを発現している宿主細胞の検出及び／又は分離を促進する抗原が挙げられる。
水溶性ポリマー
いくつかの例においてＩｇ抱合体は、共有結合した水溶性ポリマーを含み、例えばこの場合、Ｊ１が水溶性ポリマーである。特に目的とする部分は水溶性ポリマーである。「水溶性ポリマー」とは、水に可溶性のポリマーであって、一般的には実質的に非免疫原性であり、かつ、一般的には約１，０００ダルトンを上回る原子分子量をもつポリマーを指す。本明細書に記載の方法及び組成物を使用して、アルデヒドタグ付きポリペプチドに１つ以上の水溶性ポリマーを接着することができる。ポリペプチド、特に薬剤的に活性の（治療用）ポリペプチドの水溶性ポリマー（例えば、ＰＥＧ）の接着は、そのような修飾によってタンパク質分解の安定性が高くなり及び／又は腎クリアランスが低下する結果、血清半減期が長くなって治療係数が高くなる可能性があるため、望ましい場合がある。加えて、１つ以上のポリマーの接着（例えば、ペグ化）は、タンパク質製剤の免疫原性を下げる可能性がある。
いくつかの態様において水溶性ポリマーは、約１０，０００Ｄａを上回る、約２０，０００〜５００，０００Ｄａを上回る、約４０，０００Ｄａ〜３００，０００Ｄａを上回る、約５０，０００Ｄａ〜７０、０００Ｄａを上回る、一般的には約６０，０００Ｄａを上回る、有効な流体力学的分子量をもつ。いくつかの態様において水溶性ポリマーは、約１０ｋＤａ〜約２０ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜約２５ｋＤａ、約２５ｋＤａ〜約３０ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜約５０ｋＤａ、又は約５０ｋＤａ〜約１００ｋＤａの、有効な流体力学的分子量をもつ。「有効な流体力学的分子量」とは、水性溶媒を用いたサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定した、有効な、水で溶媒和された大きさのポリマー鎖を意味する。水溶性ポリマーが、ポリアルキレンオキシド繰り返し単位、例えばエチレンオキシド繰り返し単位を有するポリマー鎖を含む場合、それぞれの鎖は、約２００Ｄａ〜約８０，０００Ｄａ、又は約１，５００Ｄａ〜約４２，０００Ｄａの原子分子量をもつ可能性があり、特に目的とするものは、２，０００〜約２０，０００Ｄａの鎖である。特に明示されない限り、分子量は原子分子量を指す。特に目的とするものは、線形、分岐、及び末端が帯電した、水性のポリマー（例えば、ＰＥＧ）である。
アルデヒドタグ付きポリペプチドに結合させる部分として有用なポリマーの分子量は多様になる可能性があり、また、ポリマーサブユニットを含む場合もある。これらのサブユニットには、生体高分子、合成ポリマー、又はそれらの組み合わせが含まれ得る。そのような水溶性ポリマーの例としては、デキストラン及びデキストラン誘導体（硫酸デキストラン、Ｐ−アミノ架橋デキストリン、及びカルボキシメチルデキストリンなど）、セルロース及びセルロース誘導体（メチルセルロース及びカルボキシメチルセルロースなど）、デンプン及びデキストリン類並びにデンプンの誘導体及び加水分解物、ポリアルキレングリコール及びその誘導体（ポリエチレングリコール、メトキシポリエチレングリコール、ポリエチレングリコールホモポリマー、ポリプロピレングリコールホモポリマー、エチレングリコールとプロピレングリコールの共重合体などであって、前記ホモポリマー及び共重合体は、置換されていないか、或いは一端がアルキル基で置換されている）、ヘパリン及びヘパリン断片、ポリビニルアルコール及びポリビニルエチルエーテル、ポリビニルピロリドン、アスパルタミド、並びにデキストラン及びデキストラン誘導体、デキストリン及びデキストリン誘導体を含むポリオキシエチル化ポリオール類が挙げられる。具体的に挙げた水溶性ポリマーの様々な誘導体も考えられることが理解されよう。
上述したような水溶性ポリマー、特にポリアルキレンオキシド系のポリマー、例えばポリエチレングリコール「ＰＥＧ」は周知である（例えば、「Poly(ethylene glycol) Chemistry: Biotechnical and Biomedical Applications」、J. M. Harris編, Plenum Press, New York, N.Y. (1992)；及び「Poly(ethylene glycol) Chemistry and Biological Applications」、J. M. Harris and S. Zalipsky編、ACS (1997)；及び国際公開第９０／１３５４０号、国際公開第９２／００７４８号、国際公開第９２／１６５５５号、国際公開第９４／０４１９３号、国際公開第９４／１４７５８号、国際公開第９４／１７０３９号、国際公開第９４／１８２４７号、国際公開第９４／２８９３７号、国際公開第９５／１１９２４号、国際公開第９６／０００８０号、国際公開第９６／２３７９４号、国際公開第９８／０７７１３号、国際公開第９８／４１５６２号、国際公開第９８／４８８３７号、国際公開第９９／３０７２７号、国際公開第９９／３２１３４号、国際公開第９９／３３４８３号、国際公開第９９／５３９５１号、国際公開第０１／２６６９２号、国際公開第９５／１３３１２号、国際公開第９６／２１４６９号、国際公開第９７／０３１０６号、国際公開第９９／４５９６４、及び米国特許第４，１７９，３３７号；同第５，０７５，０４６号；同第５，０８９，２６１号；同第５，１００，９９２号；同第５，１３４，１９２号；同第５，１６６，３０９号；同第５，１７１，２６４号；同第５，２１３，８９１号；同第５，２１９，５６４号；同第５，２７５，８３８号；同第５，２８１，６９８号；同第５，２９８，６４３号；同第５，３１２，８０８号；同第５，３２１，０９５号；同第５，３２４，８４４号；同第５，３４９，００１号；同第５，３５２，７５６号；同第５，４０５，８７７号；同第５，４５５，０２７号；同第５，４４６，０９０号；同第５，４７０，８２９号；同第５，４７８，８０５号；同第５，５６７，４２２号；同第５，６０５，９７６号；同第５，６１２，４６０号；同第５，６１４，５４９号；同第５，６１８，５２８号；同第５，６７２，６６２号；同第５，６３７，７４９号；同第５，６４３，５７５号；同第５，６５０，３８８号；同第５，６８１，５６７号；同第５，６８６，１１０号；同第５，７３０，９９０号；同第５，７３９，２０８号；同第５，７５６，５９３号；同第５，８０８，０９６号；同第５，８２４，７７８号；同第５，８２４，７８４号；同第５，８４０，９００号；同第５，８７４，５００号；同第５，８８０，１３１号；同第５，９００，４６１号；同第５，９０２，５８８号；同第５，９１９，４４２号；同第５，９１９，４５５号；同第５，９３２，４６２号；同第５，９６５，１１９号；同第５，９６５，５６６号；同第５，９８５，２６３号；同第５，９９０，２３７号；同第６，０１１，０４２号；同第６，０１３，２８３号；同第６，０７７，９３９号；同第６，１１３，９０６号；同第６，１２７，３５５号；同第６，１７７，０８７号；同第６，１８０，０９５号；同第６，１９４，５８０号；同第６，２１４，９６６を参照のこと）。
目的のポリマーの例としては、ポリアルキレンオキシド、ポリアミドアルキレンオキシド、又はそれらの誘導体（式−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）−のエチレンオキシド繰り返し単位を含むポリアルキレンオキシド及びポリアミドアルキレンオキシドなど）が挙げられる。目的のポリマーのその他の例としては、分子量が約１，０００ダルトンを上回る、式−［Ｃ（Ｏ）−Ｘ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｙ−ＮＨ］ｎ−又は−［ＮＨ−Ｙ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｘ−Ｃ（Ｏ）］ｎ−で表されるポリアミドが挙げられる。式中、Ｘ及びＹは同じであっても異なっていてもよく、分岐していても直鎖であってもよい二価のラジカルであり、ｎは２〜１００、一般的には２〜５０の整数であり、Ｘ及びＹの片方または両方が、直鎖であっても分岐していてもよい、生体適合性の、実質的に非抗原性の水溶性繰り返し単位を含む。水溶性繰り返し単位のその他の例としては、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）−又は−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）−で表されるエチレンオキシドが挙げられる。このような水溶性繰り返し単位の数は大きく変わることがあるが、そのような単位の数は通常、２〜５００、２〜４００、２〜３００、２〜２００、２〜１００であり、最も一般的には２〜５０である。例として示す態様では、Ｘ及びＹの片方又は両方が、−（（ＣＨ２）ｎ１−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ２−（ＣＨ２）−又は−（（ＣＨ２）ｎ１−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ２−（ＣＨ２）ｎ−１−）から選択され、式中、ｎ１は１〜６、１〜５、１〜４、最も一般的には１〜３であり、ｎ２は２〜５０、２〜２５、２〜１５、２〜１０、２〜８、最も一般的には２〜５である。例として示すその他の態様では、Ｘは−（ＣＨ２−ＣＨ２）−であり、かつ、Ｙは−（ＣＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）３−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２）−又は−（ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）３−ＣＨ２）−である。
ポリマーは、１つ以上のスペーサー又はリンカーを含む場合がある。スペーサー又はリンカーの例としては、水溶性ポリマー中に使用されている繰り返し単位、ジアミノ及び／又は二塩基酸単位、天然の若しくは非天然のアミノ酸又はその誘導体を１つ以上含む直線状の又は分岐している部分、及び脂肪族部分（例えば、１８個までの炭素原子、さらには別のポリマー鎖を含む場合のある、アルキル、アリール、ヘテロアルキル、ヘテロアリール、アルコキシなど）が挙げられる。
ポリマー部分、又はポリマー部分の１つ以上のスペーサー若しくはリンカーは、存在する場合には生体内安定性の又は生分解性のポリマー鎖又はポリマー単位を含み得る。例えば、反復結合を有するポリマーの生理学的条件での安定度は、結合の不安定さに応じて、多様になる。そのような結合を含むポリマーは、低分子類似物の既知の加水分解速度に基づき、生理学的条件でのポリマーの相対的な加水分解速度に応じて、例えば、安定性が低い方から高い方へ、例えば、ポリウレタン（−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−）＞ポリオルトエステル（−Ｏ−Ｃ（（ＯＲ）（Ｒ’））−Ｏ−）＞ポリアミド（−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−）に分類することができる。同様に、水溶性ポリマーを標的分子に結合させる結合系は生体内安定性であっても生分解性であってもよく、例えば、安定性が低い方から高い方へ、カーボネート（−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−）＞エステル（−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−）＞ウレタン（−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−）＞オルトエステル（−Ｏ−Ｃ（（又は）（Ｒ’））−Ｏ−）＞アミド（−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−）であってもよい。一般的には、硫酸化多糖類の使用は避けることが望ましい場合があり、これは硫酸基が不安定なためである。加えて、ポリカーボネート及びポリエステルの使用もあまり望ましくない場合がある。これらの結合は例として提供されるもので、本明細書で開示した修飾型アルデヒドタグ付きポリペプチドに有用な水溶性ポリマーのポリマー鎖または結合系に使用できる結合の様式を制限するものではない。
合成ペプチド
いくつかの例においてＩｇ抱合体は、共有結合したペプチドを含み、例えばこの場合、Ｊ１がペプチドである。好適なペプチドとしては、これらには限定されないが、細胞傷害性ペプチド；血管原性ペプチド；血管新生阻害性ペプチド；Ｂ細胞を活性化するペプチド；Ｔ細胞を活性化するペプチド；抗ウイルス性ペプチド；ウイルス融合を阻害するペプチド；１種類以上のリンパ球集団の産生を高めるペプチド；抗菌性ペプチド；成長因子；成長ホルモン放出因子；血管作動性ペプチド；抗炎症性ペプチド；グルコース代謝を制御するペプチド；抗血栓性ペプチド；抗侵害受容性ペプチド；血管拡張性ペプチド；血小板凝集阻害剤；剤などが挙げられる。
Ｊ１がペプチドの場合、ペプチドを化学的に合成して、変換型ＦＧｌｙ含有Ｉｇポリペプチドと反応する基を含めることができる。好適な合成ペプチドの長さは約５アミノ酸〜約１００アミノ酸、又は１００アミノ酸を上回る。例えば、好適なペプチドの長さは、約５アミノ酸（ａａ）〜約１０ａａ、約１０ａａ〜約１５ａａ、約１５ａａ〜約２０ａａ、約２０ａａ〜約２５ａａ、約２５ａａ〜約３０ａａ、約３０ａａ〜約４０ａａ、約４０ａａ〜約５０ａａ、約５０ａａ〜約６０ａａ、約６０ａａ〜約７０ａａ、約７０ａａ〜約８０ａａ、約８０ａａ〜約９０ａａ、又は約９０ａａ〜約１００ａａである。
ペプチドを修飾して、α−求核基含有部分（例えば、アミノオキシ又はヒドラジド部分）を含めることができる。例えば、ペプチドをＦＧｌｙ含有Ｉｇポリペプチドと反応させて、アルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチドとペプチドがそれぞれヒドラゾン結合又はオキシム結合で結合している抱合体を得ることができる。変換型アルデヒドタグと反応する反応基を含む合成ペプチドなどのペプチドの合成方法の例を上述した。
適したペプチドとしては、これらには限定されないが、ｈＬＦ−１１（ラクトフェリンの１１個のアミノ酸のＮ末端断片）、抗菌性ペプチド；グラニュリシン、抗菌性ペプチド；プレクタシン（ＮＺ２１１４；ＳＡＲ２１５５００）、抗菌性ペプチド；ウイルス融合阻害剤、例えばフゼオン（エンフビルチド）、ＴＲＩ−１２４９（Ｔ−１２４９；例えば、Matos et al. (2010) PLoS One 5:e9830を参照のこと）、ＴＲＩ−２６３５（Ｔ−２６３５；例えば、Eggink et al. (2009) J. Biol. Chem. 284:26941を参照のこと）、Ｔ６５１、及びＴＲＩ−１１４４；Ｃ５ａ受容体阻害剤、例えばＰＭＸ−５３、ＪＰＥ−１３７５、及びＪＳＭ−７７１７；ＰＯＴ−４、ヒト補体因子Ｃ３阻害剤；パンクリエイト（Ｐａｎｃｒｅａｔｅ、ＩＮＧＡＰ派生配列、ＨＩＰ、ヒト膵島タンパク質）；ソマトスタチン；ソマトスタチン類似体、例えばデビオ（ＤＥＢＩＯ）８６０９（サンバール、Ｓａｎｖａｒ）、オクトレチド、オクトレチド（Ｃ２Ｌ）、オクトレチドＱＬＴ、オクトレチドＬＡＲ、サンドスタチンＬＡＲ、ＳｏｍａＬＡＲ、ソマチュリン（ランレオチド）、例えば、Deghenghi et al. (2001) Endocrine 14:29を参照のこと；ＴＨ９５０７（テサモレリン、成長ホルモン放出因子）；ＰＯＬ７０８０（プロテグリン類似体、抗菌性ペプチド）；リラキシン；コルチコトロピン放出因子作動薬、例えばウロテンシン、ソーバジンなど；熱ショックタンパク質誘導体、例えばＤｉａＰｅｐ２７７；ヒト免疫不全ウイルス侵入阻害剤；熱ショックタンパク質２０模倣物、例えばＡＺＸ１００；トロンビン受容体活性化ペプチド、例えばＴＰ５０８（クリサリン、Ｃｈｒｙｓａｌｉｎ）；ウロコルチン２模倣物（例えば、ＣＲＦ２作動薬）ウロコルチン−２など；免疫賦活剤、例えばザダキシン（チマルファシン；チモシン−α１）、例えば、Sjogren (2004) J. Gastroenterol. Hepatol. 19:S69を参照のこと；Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）侵入阻害剤Ｅ２ペプチド、例えばＨＣＶ３；心房性ナトリウム利尿ペプチド、例えばＨＡＮＰ（Ｓｕｎ４９３６；カルペリチド）；アネキシンペプチド；デフェンシン（抗菌性ペプチド）、例えばｈＢＤ２−４；デフェンシン（抗菌性ペプチド）、例えばｈＢＤ−３；デフェンシン（抗菌性ペプチド）、例えばＰＭＸ−３００６３；ヒスタチン（抗菌性ペプチド）、例えばヒスタチン−３、ヒスタチン−５、ヒスタチン−６、及びヒスタチン−９；ヒスタチン（抗菌性ペプチド）、例えばＰＡＣ−１１３；インドリシジン（抗菌性ペプチド）、例えばＭＸ−５９４ＡＮ（オムニガニン、Ｏｍｎｉｇａｎｉｎ；ＣＬＳ００１）；インドリシジン（抗菌性ペプチド）、例えばオムニガード（Ｏｍｎｉｇａｒｄ、ＭＢＩ−２２６；ＣＰＩ−２２６）；抗菌性ペプチド、例えば昆虫セクロピン；抗菌性ペプチド、例えばタラクトフェリン（ｔａｌａｃｔｏｆｅｒｒｉｎ）；ＬＬ−３７／カテリシジン誘導体（抗菌性ペプチド）、例えばＰ６０．４（ＯＰ−１４５）；マガイニン（抗菌性ペプチド）、例えばペキシガナン（ＭＳＩ−７８；スポネックス（Ｓｕｐｏｎｅｘ））；プロテグリン（抗菌性ペプチド）、例えばＩＢ−３６７（イセガナン）；アガン（ａｇａｎ）ペプチド；β−ナトリウム利尿ペプチド、例えばナトレコール（Ｎａｔｒｅｃｏｒ）、又はノラタク（Ｎｏｒａｔａｋ）（ネシリチド）、又はウラリチド（ｕｌａｒｉｔｉｄｅ）；ビバラルジン（ｂｉｖａｌａｒｕｄｉｎ）（アンジオマックス、Ａｎｇｉｏｍａｘ）、トロンビン阻害剤；Ｃペプチド誘導体；カルシトニン、例えばミアカルシン（フォーチカル、Ｆｏｒｔｉｃａｌ）；エンケファリン誘導体；赤血球形成刺激ペプチド、例えばヘマタイド；ギャップ結合調節因子、例えばダネガプチド（ＺＰ１６０９）；ガストリン放出ペプチド；グレリン；グルカゴン様ペプチド；グルカゴン様ペプチド２類似物、例えばＺＰ１８４６又はＺＰ１８４８；グルコサミニルムラミルジペプチド（ｍｕｒａｍｙｌｄｉｐｅｐｔｉｄｅ）、例えばＧＭＤＰ；グリコペプチド系抗生物質、例えばオリタバシン；テイコプラニン誘導体、例えばダルババシン；ゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）、例えばゾラデックス（ルポン、Ｌｕｐｏｎ）又はトリプトレピン；ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤デシペプチド、例えばＰＭ０２７３４（Ｉｒｖａｌｅｃ）；インテグリン、例えばエプチフィバド；インスリン類似体、例えばＨｕｍｕｌｏｇ；カハラリド（ｋａｈａｌａｌｉｄｅ）デシペプチド、例えばＰＭ０２７３４；カリクレイン阻害剤、例えばＫａｌｂｉｔｏｒ（エカランチド）；抗生物質、例えばテラバンシン；リポペプチド、例えばキュビシン又はＭＸ−２４０１；黄体ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）、例えばゴセレリン；ＬＨＲＨ合成デカペプチド作動薬類似体、例えばトレイスタル（Ｔｒｅｉｓｔａｒ、パモ酸トリプトレリン）；ＬＨＲＨ、例えばエリガード；Ｍ２タンパク質チャネルペプチド阻害剤；メトレレプチン；メラノコルチン受容体作動薬ペプチド、例えばブレメラノチド／ＰＴ−１４１；メラノコルチン；ムラミルトリペプチド、例えばメパクト（ミファムルチド）；ミエリン塩基性タンパク質ペプチド、例えばＭＢＰ８２９８（ジルコチド）；Ｎ−型電位開口型カルシウムチャネル阻害薬、例えばジコノチド（Ｐｒｉａｌｔ）；副甲状腺ホルモンペプチド；副甲状腺類似体、例えば７６８９７４；ペプチドホルモン類似体、例えばＵＧＰ２８１；プロスタグランジンＦ２−α受容体阻害剤、例えばＰＤＣ３１；プロテアーゼ阻害剤、例えばＰＰＬ−１００；サーファクシン；トロンボスポンジン−１（ＴＳＰ−１）模倣物、例えばＣＶＸ−０４５又はＡＢＴ５１０；血管作動性腸ペプチド；バソプレッシン；Ｙ２Ｒアゴニストペプチド、例えばＲＧ７０８９；オビネペプチド（ｏｂｉｎｅｐｅｐｔｉｄｅ）；及びＴＭ３０３３９が挙げられる。
アルデヒド−タグ付き免疫グロブリンポリペプチドに抱合させるための薬剤
多数の薬剤はいずれも、ａｌｄ−タグ付き−Ｉｇポリペプチドに抱合させるための反応パートナーとして使用に適しているか、或いは使用に適したものになるように修飾することができる。薬剤の例には、低分子薬及びペプチド製剤が含まれる。従って、本開示は薬剤−抗体抱合体を提供する。
本明細書で使用する場合「低分子薬」は、化合物、例えば有機化合物を指す。これらの化合物は目的の医薬活性を示し、かつ、その分子量は通常、約８００Ｄａ以下又は２０００Ｄａ以下であるが、５ｋＤａまでの分子が含まれ、また、約１０ｋＤａの大きさであってもよい。無機低分子とは炭素原子を含まない分子を指し、有機低分子は炭素原子を少なくとも１つ含む化合物を指す。
本明細書で使用する場合「ペプチド製剤」とは、アミノ酸を含む重合化合物を指し、かつ、天然に存在するペプチド及び天然に存在しないペプチド、オリゴペプチド、環状ペプチド、ポリペプチド、及びタンパク質、並びにペプチド模倣物を包含する。ペプチド製剤は、化学合成によって得ることも、又は遺伝的にコード化された供給源（例えば、組換え供給源）から生産することもできる。ペプチド製剤の分子量は様々であってもよく、また、その分子量は２００Ｄａ〜１０ｋＤａ、若しくはそれ以上であってもよい。
いくつかの例において薬剤は、癌の化学療法薬である。例えば、抗体が腫瘍細胞に特異性をもつ場合、抗体を本明細書に記載したように修飾してアルデヒドタグを含めることができ、次いでＦＧｌｙ修飾型抗体に変換することができ、その後、癌の化学療法薬と抱合させることができる。癌の化学療法薬には、癌細胞の増殖を抑制する非ペプチド性（すなわち、非タンパク質性）の化合物が含まれ、また、細胞毒及び細胞分裂阻害剤も包含される。化学療法薬の非限定的な例としては、アルキル化剤、ニトロソウレア、代謝拮抗剤、抗腫瘍性抗生物質、植物（ビンカ）アルカロイド、及びステロイドホルモンが挙げられる。ペプチド性化合物も使用することができる。
適した癌化学療法薬には、ドラスタチン及び活性をもつ類似体及びその誘導体；並びにアウリスタチン及び活性をもつ類似体及びその誘導体が含まれる。例えば、国際公開第９６／３３２１２号、国際公開第９６／１４８５６号、及び米国特許第６，３２３，３１５号を参照のこと。例えば、ドラスタチン１０又はアウリスタチンＰＥを本開示の抗体−薬剤抱合体に含めることができる。適した癌化学療法薬にはまた、メイタンシノイド及び活性をもつ類似体及びその誘導体（例えば、欧州特許第１３９１２１３号明細書；及びLiu et al (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:8618-8623を参照のこと）；並びにデュオカルマイシン及び活性をもつ類似体及びその誘導体（例えば、合成類似体であるＫＷ−２１８９やＣＢ１−ＴＭ１など）が含まれる。
細胞増殖を抑制する働きをする薬剤が当該分野では知られており、かつ、広く用いられている。このような薬剤としては、アルキル化剤、例えばナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、エチレンイミン誘導体、スルホン酸アルキル、及びトリアゼンがあり、例えば、これらには限定されないが、メクロレタミン、シクロホスファミド（シトキサン（商標））、メルファラン（Ｌ−サルコリシン）、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、セムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）、ストレプトゾシン、クロロゾトシン、ウラシルマスタード、クロルメチン、イホスファミド、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレンメラミン、トリエチレンチオホスホラミン（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｎｅ）、ブスルファン、ダカルバジン、及びテモゾロミドなどが含まれる。
代謝拮抗剤としては、葉酸類似体、ピリミジン類似体、プリン類似体、及びアデノシンデアミナーゼ阻害剤があり、例えば、これらには限定されないが、シタラビン（ＣＹＴＯＳＡＲ−Ｕ）、シトシンアラビノシド、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フロクスウリジン（ＦｕｄＲ）、６−チオグアニン、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）、ペントスタチン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、メトトレキサート、１０−プロパルギル−５、８−ジデアザ葉酸（ＰＤＤＦ、ＣＢ３７１７）、５、８−ジデアザテトラヒドロ葉酸（ＤＤＡＴＨＦ）、ロイコボリン、リン酸フルダラビン、ペントスタチン、及びゲムシタビンが含まれる。
適した天然物及びそれらの誘導体（例えば、ビンカアルカロイド、抗腫瘍性抗生物質、酵素、リンホカイン、及びエピポドフィロトキシン）には、これらには限定されないが、Ａｒａ−Ｃ、パクリタキセル（タキソール（登録商標））、ドセタキセル（タキソテール（登録商標））、デオキシコホルマイシン、マイトマイシン−Ｃ、Ｌ−アスパラギナーゼ、アザチオプリン；ブレキナル；アルカロイド、例えばビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシンなど；ポドフィロトキシン、例えばエトポシド、テニポシドなど；抗生物質、例えばアントラサイクリン、塩酸ダウノルビシン（ダウノマイシン、ルビドマイシン、セルビジン（ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ））、イダルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン及びモルホリノ誘導体など；フェノキシゾンビスシクロペプチド（ｐｈｅｎｏｘｉｚｏｎｅｂｉｓｃｙｃｌｏｐｅｐｔｉｄｅｓ）、例えばダクチノマイシン；塩基性糖ペプチド、例えばブレオマイシン；アントラキノン配糖体、例えば、プリカマイシン（ミトラマイシン）；アントラセンジオン、例えばミトキサントロン；アジリノピロロインドールジオン（ａｚｉｒｉｎｏｐｙｒｒｏｌｏｉｎｄｏｌｅｄｉｏｎｅ）、例えば、マイトマイシン；大環状免疫抑制薬、例えば、シクロスポリン、ＦＫ−５０６（タクロリムス、プログラフ）、ラパマイシンなどが含まれる。
他の抗増殖性の細胞毒としては、ナベルベン（ｎａｖｅｌｂｅｎｅ）、ＣＰＴ−１１、アナストラゾール（ａｎａｓｔｒａｚｏｌｅ）、レトラゾール（ｌｅｔｒａｚｏｌｅ）、カペシタビン、レロキサフィン（ｒｅｌｏｘａｆｉｎｅ）、シクロホスファミド、イホスアミド（ｉｆｏｓａｍｉｄｅ）、及びドロロキサフィン（ｄｒｏｌｏｘａｆｉｎｅ）がある。
抗増殖性活性をもつ微小管作用薬もまた使用に適しており、これらには限定されないが、アロコルヒチン（ＮＳＣ４０６０４２）、ハリコンドリンＢ（ＮＳＣ６０９３９５）、コルヒチン（ＮＳＣ７５７）、コルヒチン誘導体（例えば、ＮＳＣ３３４１０）、ドルスタチン１０（ＮＳＣ３７６１２８）、メイタンシン（ＮＳＣ１５３８５８）、リゾキシン（ｒｈｉｚｏｘｉｎ）（ＮＳＣ３３２５９８）、パクリタキセル（タキソール（登録商標））、タキソール（登録商標）誘導体、ドセタキセル（タキソテール（登録商標））、チオコルヒチン（ＮＳＣ３６１７９２）、トリチルシステリン（ｔｒｉｔｙｌｃｙｓｔｅｒｉｎ）、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、天然及び合成のエポチロン（エポチロンＡ、エポチロンＢ、ディスコデルモリドを含むがこれらには限定されない）；エストラムスチン、ノコダゾールなどが含まれる。
使用に適したホルモン調節物質及びステロイド（合成類似体を含む）としては、アドレノコルチコステロイド、例えば、プレドニゾン、デキサメタゾンなど；エストロゲン及びプレゲスチン（ｐｒｅｇｅｓｔｉｎ）、例えば、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、エストラジオール、クロミフェン、タモキシフェンなど；並びに副腎皮質抑制薬、例えば、アミノグルテチミド；１７α−エチニルエストラジオール；ジエチルスチルベストロール、テストステロン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、テストラクトン、メチルプレドニゾロン、メチル−テストステロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、酢酸メドロキシプロゲステロン、ロイプロリド、フルタミド（ドロゲニル）、トレミフェン（ファレストン）、及びゾラデックス（登録商標）が挙げられるが、これらには限定されない。エストロゲンは、増殖や分化を刺激する。そのため、エストロゲン受容体に結合する化合物は、この活性を遮断するために使用される。コルチコステロイドは、Ｔ細胞の増殖を阻害する可能性がある。
他の適した化学療法薬には、金属複合体、例えば、シスプラチン（シス−ＤＤＰ）、カルボプラチンなど；尿素、例えば、ヒドロキシ尿素；及びヒドラジン、例えば、Ｎ−メチルヒドラジン；エピドフィロトキシン（ｅｐｉｄｏｐｈｙｌｌｏｔｏｘｉｎ）；トポイソメラーゼ阻害剤；プロカルバジン；ミトキサントロン；ロイコボリン；テガフールなどが含まれる。他の目的の抗増殖剤としては、免疫抑制薬、例えば、ミコフェノール酸、サリドマイド、デソキシスペルガリン（ｄｅｓｏｘｙｓｐｅｒｇｕａｌｉｎ）、アザスポリン（ａｚａｓｐｏｒｉｎｅ）、レフルノミド、ミゾリビン、アザスピラン（ＳＫＦ１０５６８５）；イレッサ（登録商標）（ＺＤ１８３９、４−（３−クロロ−４−フルオロフェニルアミノ）−７−メトキシ−６−（３−（４−モルホリニル）プロポキシ）キナゾリン）などが挙げられる。
タキサンは使用に適している。「タキサン」は、パクリタキセル、及びいかなる活性タキサン誘導体又はプロドラッグを含む。「パクリタキセル」（本明細書では、例えばドセタキセル、タキソール（商標）、タキソテール（商標）（ドセタキセルの製剤）、パクリタキセルの１０−デスアセチル類似体、及びパクリタキセルの３’Ｎ−デスベンゾイル−３’Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル類似体などの、類似体、製剤、及び誘導体を含むと理解される）は、当業者に公知の技術（国際公開第９４／０７８８２号、同第９４／０７８８１号、同第９４／０７８８０号、同第９４／０７８７６号、同第９３／２３５５５号、同第９３／１００７６号；米国特許第５，２９４，６３７号；同第５，２８３，２５３号；同第５，２７９，９４９号；同第５，２７４，１３７号；同第５，２０２，４４８号；同第５，２００，５３４号；同第５，２２９，５２９号；及び欧州特許第５９０，２６７号明細書も参照されたい）を利用して容易に調製することができ、又は例えば、シグマ社（セントルイス、ミズーリ）（タイヘイヨウイチイ（Ｔａｘｕｓ ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ）由来のＴ７４０２；または雲南イチイ（Ｔａｘｕｓ ｙａｎｎａｎｅｎｓｉｓ）由来のＴ−１９１２）などの様々な業者から取得してもよい。
パクリタキセルは、パクリタキセルの化学的に利用可能な一般的な形態のものだけでなく、類似体及び誘導体（例えば、上述のタキソテール（商標）ドセタキセル）及びパクリタキセル抱合体（例えば、パクリタキセル−ＰＥＧ、パクリタキセル−デキストラン、またはパクリタキセル−キシロース）も指すと理解される。
用語「タキサン」には、親水性誘導体、及び疎水性誘導体の療法を含む、様々な既知の誘導体も含まれる。タキサン誘導体には、これらには限定されないが、国際特許出願国際公開第９９／１８１１３号に記載のガラクトース誘導体及びマンノース誘導体；国際公開第９９／１４２０９号に記載のピペラジノ誘導体及び他の誘導体；国際公開第９９／０９０２１号、国際公開第９８／２２４５１号、及び米国特許第５，８６９，６８０号に記載のタキサン誘導体；国際公開第９８／２８２８８号に記載の６−チオ誘導体；米国特許第５，８２１，２６３号に記載のスルフェンアミド誘導体；並びに米国特許第５，４１５，８６９号に記載のタキソール誘導体が含まれる。さらに、パクリタキセルのプロドラッグも含まれ、このようなプロドラッグとしては、国際公開第９８／５８９２７号；国際公開第９８／１３０５９号；及び米国特許第５，８２４，７０１号に記載されているものが挙げられるが、これらには限定されない。
使用に適した生体応答修飾因子としては、（１）チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）活性阻害剤；（２）セリン／トレオニンキナーゼ活性阻害剤；（３）腫瘍関連抗原アンタゴニスト（腫瘍抗原に特異的に結合する抗体など）；（４）アポトーシス受容体作動薬；（５）インターロイキン−２；（６）ＩＦＮ−α；（７）ＩＦＮ−γ（８）コロニー刺激因子；及び（９）血管新生阻害剤を含むが、これらには限定されない。
薬剤を修飾して、２−ホルミルグリシンと反応させる反応パートナーを含める方法
ａｌｄ−タグ付きＩｇポリペプチドに抱合させるペプチド製剤を修飾して、ａｌｄ−タグ付きＩｇポリペプチドのＦＧｌｙ残基のアルデヒドと反応させるための反応パートナーを組み入れる。ａｌｄ−タグ付きポリペプチドの修飾方法は標準的な化学反応と両立するため、抱合は、市販されている多数の試薬のいずれを用いて行うこともできる。例えば、数多くの目的の部分のアミノオキシ、ヒドラジド、ヒドラジン、又はチオセミカルバジド誘導体が反応パートナーとして適しており、かつ、容易に入手可能であるか又は標準的な化学反応によって生成することができる。
薬剤がペプチド製剤の場合、反応部分（例えば、アミノオキシ又はヒドラジド）は、ペプチドのＮ末端領域、Ｎ−末端、Ｃ末端領域、Ｃ−末端に位置している、又はペプチドの内部に位置している可能性がある。例えば、典型的な方法には、アミノオキシ基を有するペプチド製剤を合成する工程が含まれる。この例では、ペプチドは、Ｂｏｃが保護された前駆物質から合成される。ペプチドのアミノ基は、カルボン酸基とオキシ−Ｎ−Ｂｏｃ基を含む化合物と反応することができる。一例として、ペプチドのアミノ基は、３−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）プロパン酸と反応する。カルボン酸基とオキシ−Ｎ−保護基を含む化合物の他の変異型には、アルキレンリンカーとアルキレンの置換基に含まれる炭素の数が異なる化合物が含まれ得る。ペプチドのアミノ基とカルボン酸基及びオキシ−Ｎ保護基を含む化合物との反応は、標準的なカップリング化学を介して生じる。使用可能なペプチドカップリング試薬の例としては、これらには限定されないが、ＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）、ＤＩＣ（ジイソプロピルカルボジイミド）、ジ−ｐ−トルオイルカルボジイミド、ＢＤＰ（１−ベンゾトリアゾールジエチルホスフェート−１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリニルエチル）カルボジイミド）、ＥＤＣ（１−（３−ジメチルアミノプロピル−３−エチル−カルボジイミド塩酸塩）、フッ化シアヌル、塩化シアヌル、ＴＦＦＨ（テトラメチル−フルオロ−ホルムアミジニウムヘキサフルオロホスファート）、ＤＰＰＡ（ジフェニルリン酸アジド）、ＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート）、ＨＢＴＵ（Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート）、ＴＢＴＵ（Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラート）、ＴＳＴＵ（Ｏ−（Ｎ−スクシンイミジル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラート）、ＨＡＴＵ（Ｎ−［（ジメチルアミノ）−１−Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５，６］−ピリジン−１−イルメチレン］−Ｎ−メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスファートＮ−オキシド）、ＢＯＰ−Ｃｌ（ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド）、ＰｙＢＯＰ（（１−Ｈ−１，２，３−ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）−トリス（ピロリジノ）ホスホニウムテトラフルオロホスファート）、ＢｒＯＰ（ブロモトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート）、ＤＥＰＢＴ（３−（ジエトキシホスホリルオキシ）−１，２，３−ベンゾトリアジン−４（３Ｈ）−オン）、ＰｙＢｒＯＰ（ブロモトリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート）が挙げられる。非限定的な例として、ＨＯＢｔとＤＩＣをペプチドカップリング試薬として使用することができる。
Ｎ−保護基を含むペプチドについて脱保護を行い、アミノ−オキシ作用性を露出させた。Ｎ−オキシスクシンイミド基の脱保護は、例えば、環状アミド基の標準的な脱保護条件に従って起こる。脱保護の条件は、Greene and Wuts「Protective Groups in Organic Chemistry」第三版、1999, John Wiley & Sons, NY及びHarrisonら「Certain deprotection conditions include a hydrazine reagent, amino reagent, or sodium borohydride」に見ることができる。Ｂｏｃ保護基は、ＴＦＡを用いて脱保護することができる。脱保護のための他の試薬としては、これらには限定されないが、ヒドラジン、メチルヒドラジン、フェニルヒドラジン、水素化ホウ素ナトリウム、及びメチルアミンが挙げられる。生成物や中間体を標準的な方法、例えばＨＰＬＣで精製することができる。
当業者は、ｐＨ及び立体障害（すなわち、アルデヒドタグが反応する目的の反応パートナーとの接触可能性）などの要因が重要であることを理解するだろう。最適な抱合条件をもたらす修飾反応の条件は、当業者には周知であり、当該分野では慣習となっている。通常、抱合反応を７より低いｐＨ、約５．５、約６、約６．５のｐＨで行うことが望ましいことが一般的であり、一般的には約５．５のｐＨが最適である。生細胞中に含まれる又は生細胞の表面にあるアルデヒドタグ付きポリペプチドとの抱合を実施する場合には、生理学的に合致するように条件を選択する。例えば、反応を起こすのに十分な時間であって、アルデヒドタグを含む細胞が許容できる時間内で（例えば、約３０分〜１時間）、ｐＨを一時的に下げることができる。細胞表面にあるアルデヒドタグ付きポリペプチドを修飾するための生理学的条件は、細胞表面にアジ化物を有する細胞の修飾に用いられるケトン−アジ化物反応の条件と同様なものになる場合がある（例えば、米国特許第６、５７０、０４０号を参照のこと）。
ａｌｄタグのＦＧｌｙのアルデヒドの反応パートナーとなるα−求核基を含む低分子化合物は、又はそのようなα−求核基を含むように修飾した低分子化合物も、本開示のＩｇ薬剤抱合体に使用する薬剤として考えられる。目的の化合物の合成に有用な化学合成法や条件の標準的な方法は、当該分野で公知である（例えば、Smith and March, March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, Fifth Edition, Wiley-Interscience, 2001; or Vogel, A Textbook of Practical Organic Chemistry, Including Qualitative Organic Analysis, Fourth Edition, New York: Longman, 1978を参照のこと）。
従って、ａｌｄ−タグ付きＩｇポリペプチドのＦＧｌｙのアルデヒドと反応するアミノオキシ基又はヒドラゾン基を有する低分子が利用可能でるか、又は容易に合成することができる。標準的な合成化学的手法によって、アミノオキシ基又はヒドラゾン基を低分子に組み込むことができる。
Ｉｇ抱合体
いくつかの態様では、対象Ｉｇ−抱合体は抗体抱合体である。例えば本開示は、対象Ｉｇ抱合体を含む抗体抱合体を提供し、この場合、抗体抱合体は抗原に結合する。抗体抱合体は、Ｉｇ重鎖定常領域のみと共有結合したＪ１部分、Ｉｇ軽鎖定常領域のみと共有結合したＪ１部分、又は、Ｉｇ重鎖定常領域と共有結合したＪ１部分とＩｇ軽鎖定常領域と共有結合したＪ１部分を含む場合がある。
抗体抱合体は上述したように、様々な抗原、例えば、癌細胞に存在する抗原；自己免疫細胞に存在する抗原；病原性微生物に存在する抗原；ウイルスが感染した細胞（例えば、ヒト免疫不全ウイルスに感染した細胞）に存在する抗原、例えば、ＣＤ４又はｇｐ１２０；病気の細胞に存在する抗原などへの、任意の結合特性を示し得る。例えば抗体抱合体は、上述したように抗原に結合することができ、この場合、抗原は細胞表面に存在する。
本開示の抗体抱合体は、上述の様々な化合物のいずれか、例えば、薬剤（例えば、ペプチド製剤、低分子薬など）、水溶性ポリマー、検出可能な標識、合成ペプチドなどを、Ｊ１部分として含む場合がある。
本開示の抗体抱合体は、抗原と適した結合親和性で、例えば、約５×１０−６Ｍ〜約１０−７Ｍ、約１０−７Ｍ〜約５×１０−７Ｍ、約５×１０−７Ｍ〜約１０−８Ｍ、約１０−８Ｍ〜約５×１０−８Ｍ、約５×１０−８Ｍ〜約１０−９Ｍ、又は１０−９Ｍ以上の結合親和性で、結合することができる。
非限定的な例として対象抗体抱合体は、癌細胞に存在する抗原（例えば、腫瘍特異的抗原；癌細胞で過剰発現している抗原など）に結合することができ、かつ、Ｊ１部分は細胞傷害性化合物（例えば、細胞傷害性低分子、細胞傷害性合成ペプチドなど）である。例えば、対象抗体抱合体は、ＣＤ１９に特異的である可能性があり、この場合、Ｊ１部分は細胞傷害性化合物（例えば、細胞傷害性低分子、細胞傷害性合成ペプチドなど）である。別の例では、対象抗体抱合体がＣＤ２２に特異的である可能性があり、この場合、Ｊ１部分は細胞傷害性化合物（例えば、細胞傷害性低分子、細胞傷害性合成ペプチドなど）であってもよい。
別の非限定的な例として、対象抗体抱合体は、ウイルスが感染した細胞に存在する抗原（例えば、抗原がウイルスによってコードされている場合；ウイルスが感染した細胞型で抗原が発現している場合など）に結合することができ、かつ、Ｊ１部分はウイルス融合阻害剤であってもよい。例えば、対象抗体抱合体はＣＤ４に結合することができ、かつ、Ｊ１部分がウイルス融合阻害剤である場合がある。別の例としては、対象抗体抱合体はｇｐ１２０に結合することができ、かつ、Ｊ１部分がウイルス融合阻害剤であってもよい。
処方物
本開示のＩｇ抱合体（抗体抱合体を含む）は、様々な異なる方法で処方することができる。Ｉｇ抱合体がＩｇ薬剤抱合体である場合には、Ｉｇ抱合体は通常、Ｉｇに抱合されている薬剤、治療される状態、及び用いられる投与経路に合致する方法で処方される。
Ｉｇ抱合体（例えば、Ｉｇ薬剤抱合体）は、任意の適した形態で、例えば薬学上許容可能な塩の形態で提供することができ、また、任意の適した投与経路用に、例えば、経口、局所又は非経口投与用に処方することができる。Ｉｇ抱合体を、液体の注入可能な剤形（それらを静脈投与する、又は組織に直接投与する態様でのものなど）で提供する場合、Ｉｇ抱合体をすぐに使用可能な剤形で提供しても、或いは、薬学上許容可能な担体や賦形剤を含む、再構成可能な保存に安定な粉末又は液体として提供することもできる。
Ｉｇ抱合体を処方するための方法は、当該分野で利用可能な方法から作成することができる。例えば、有効量のＩｇ抱合体と薬学上許容可能な担体（例えば、生理食塩水）を含む医薬組成物として、Ｉｇ抱合体を提供することができる。医薬組成物は随意、他の添加物（例えば、緩衝剤、安定剤、防腐剤など）を含んでいてもよい。いくつかの態様では、特に目的とする製剤は、哺乳類への投与に適したもの、特にヒトへの投与に適したものである。
治療方法
本開示のＩｇ薬剤抱合体は、親薬剤（すなわち、Ｉｇと抱合させる前の薬剤）の投与による治療に感受性のある、対象の状態又は疾患の治療に使用できる。「治療」とは、宿主を苦しめている状態に関連した症状のが少なくとも回復することを意味し、ここで回復とは、少なくとも、治療される状態に関連する指標の低下、例えば症状の度合の低下を指す、広い意味で使われる。そのため、治療には、病状若しくは少なくともそれに伴う症状が完全に阻害される（例えば発症が阻害される）こと、又は停止する（例えば、その状態若しくは少なくともその状態の特徴となる症状に宿主がもう苦しんでいないように終わる）状況も含まれる。従って治療には、（ｉ）予防、すなわち臨床症状の発症のリスクを低減すること（臨床症状が進行しないようにすること、例えば疾患の有害な段階への進行を予防することを含む）；（ｉｉ）阻害、すなわち、臨床症状の発症又は進行を停止させること（例えば、活動性疾患を緩和させる又は完全に阻害すること）；及び／又は（ｉｉｉ）軽減、すなわち臨床症状を退行させること、が含まれる。
癌に関連した用語「治療する」は、固形腫瘍の成長を抑制すること、癌細胞の複製を阻害すること、全身腫瘍組織量を低下させること、及び癌に関連した症状の１つ以上を回復させること、のいずれか又は全てを含む。
治療を受ける対象は、治療を必要としている対象であってよく、この場合治療を受ける宿主は、親薬剤を使用した治療に感受性をもつ宿主である。従って、多くの対象が、本明細書で開示のＩｇ薬剤抱合体を使用した治療に感受性をもつ可能性がある。そのような対象は、通常「哺乳類であり」、特に目的とする対象はヒトである。他の対象としては、ペット（例えば、イヌやネコ）、家畜（例えば、ウシ、ブタ、ヤギ、ウマなど）、齧歯類（例えば、マウス、モルモット、及びラット、例えば、疾患の動物モデルとして）、並びに非ヒト霊長類（例えば、チンパンジーやサル）が含まれ得る。
投与するＩｇ薬剤抱合体の量は、最初、親薬剤の用量及び／又は投与計画の指針に基づいて、決定することができる。Ｉｇ薬剤抱合体とすることで、一般的には、標的送達すること及び／又は結合した薬剤の血清半減期を伸ばすことが可能になり、このことによって、用量を減らすこと又は投与計画中の投与回数を減らすことの少なくとも１つが提供される。従ってＩｇ薬剤抱合体は、本開示のＩｇ薬剤抱合体として抱合させる前の親薬剤と比較して、用量を減少させること及び／又は投与計画中での投与回数を減少させることができる。
さらに、上述したように、Ｉｇ薬剤抱合体は薬剤送達の化学量論を制御することができるため、Ｉｇ薬剤抱合体１つ当たりに供給された薬剤分子の数に基づいて、Ｉｇ薬剤抱合体の用量を計算することができる。
いくつかの態様では、Ｉｇ薬剤抱合体を複数回投与する。Ｉｇ薬剤抱合体の投与頻度は、様々な要因、例えば症状の重篤度など、のいずれかによって変わり得る。例えば、いくつかの態様では、Ｉｇ薬剤抱合体は、１ヶ月に１回、１ヶ月に２回、１ヶ月に３回、１週間おきに（ｑｏｗ）、１週間に１回（ｑｗ）、１週間に２回（ｂｉｗ）、１週間に３回（ｔｉｗ）、１週間に４回、１週間に５回、１週間に６回、１日おきに（ｑｏｄ）、毎日（ｑｄ）、１日２回（ｑｉｄ）、又は１日３回（ｔｉｄ）投与される。
癌の治療方法
本開示は、癌に罹っている患者に、癌化学療法薬を送達する方法を提供する。この方法は、癌腫、肉腫、白血病、及びリンパ腫を含む様々な癌の治療に有用である。
対象方法を用いて治療することができる癌腫には、これらには限定されないが、食道癌、肝細胞癌、基底細胞癌（皮膚癌の形態）、扁平上皮細胞癌（様々な組織）、膀胱癌（膀胱の悪性新生物である移行上皮癌腫を含む）、気管支原性癌、結腸癌、結腸直腸癌、胃癌、肺癌（肺の小細胞癌及び非小細胞癌を含む）、副腎皮質癌、甲状腺癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、腎細胞癌、腺管上皮内癌又は胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、子宮癌、精巣癌、骨形成性癌、上皮癌、及び咽頭癌などが含まれる。
対象方法を用いて治療することができる肉腫には、これらには限定されないが、繊維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、脊索腫、骨原性肉腫、骨肉腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、及び他の軟部組織肉腫が含まれる。
対象方法を用いて治療することができる他の固形腫瘍には、これらには限定されないが、神経膠腫、星細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、希突起神経膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、及び網膜芽細胞腫が含まれる。
対象方法を用いて治療することができる白血病には、これらには限定されないが、ａ）慢性の骨髄増殖性疾患（多能性造血幹細胞の腫瘍性障害）；ｂ）急性骨髄性白血病（多能性造血幹細胞又は核細胞種に系列決定された造血細胞の悪性転換）；ｃ）慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ；免疫学的に未成熟で、機能をもたない小リンパ球のクローン性の増殖）、Ｂ細胞ＣＬＬ、Ｔ細胞ＣＬＬ前リンパ性白血病、及び有毛細胞白血病を含む；及びｄ）急性リンパ芽球性白血病（リンパ芽球性の蓄積を特徴とする）が含まれる。対象方法を用いて治療することができるリンパ腫には、これらには限定されないが、Ｂ細胞リンパ腫（例えば、バーキットリンパ腫）；ホジキンリンパ腫；非ホジキンＢ細胞リンパ腫、などが含まれる。
以下の実施例は、完全な開示と本発明をどのように作成・使用するかを当業者に示すためのものであり、かつ、発明者らが発明だと見なしている範囲を限定する目的のものでも、以下に示す実験が行った実験の全て又は行った実験のみだということを示す目的のものでもない。使用した数（例えば量、温度など）に関しては、正確さを確保するように努めたが、多少の実験誤差及び偏差も含まれる。特段の記載のない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏であり、圧力は大気圧か或いは大気圧に近い。標準的な略語、例えば、ｂｐ、塩基対；ｋｂ、キロベース；ｐｌ、ピコリットル；ｓ又はｓｅｃ、秒；ｍｉｎ、分；ｈ又はｈｒ、時間；ａａ、アミノ酸；ｋｂ、キロベース；ｂｐ、塩基対；ｎｔ、ヌクレオチド；ｉ．ｍ．、筋内；ｉ．ｐ．、腹腔内；ｓ．ｃ．、皮下なども使用し得る。
実施例１：ＣＤ１９特異的抗体及びＣＤ２２特異的抗体のクローニング
ＣＤ１９及びＣＤ２２に特異的な可変軽鎖領域をコードしている遺伝子を合成し、ＮｃｏＩ及びＢｓｉＷＩ制限酵素部位を使って、ヒトＩｇＧカッパ軽鎖定常領域を含むプラスミドにクローニングした。軽鎖定常領域プラスミドは野生型又はＬＣＴＰＳＲ（配列番号１７）若しくはＬＡＴＰＳＲ（配列番号２４）を含むもののいずれかで、これを、Ｑｕｉｋｃｈａｎｇｅ突然変異生成を使用してプラスミドに挿入した。
ＣＤ１９及びＣＤ２２に特異的な可変重鎖領域をコードしている遺伝子を合成し、ＥｃｏＲＩ及びＮｈｅＩ制限酵素部位を使って、ヒトＩｇＧ重鎖定常領域を含むプラスミドにクローニングした。重鎖定常領域プラスミドは野生型又はＬＣＴＰＳＲ（配列番号１７）若しくはＬＡＴＰＳＲ（配列番号２４）を含むものであり、これを、Ｑｕｉｋｃｈａｎｇｅ突然変異生成を使用してプラスミドに挿入した。
図３は、抗ＣＤ１９の軽鎖（上段の配列）及び重鎖（下段の配列）定常領域のアミノ酸配列を示しており、重鎖定常領域はＬＣＴＰＳＲスルファターゼモチーフを含んでいる。シグナルペプチドを小文字で；可変領域を下線で；定常領域中の溶媒が接触可能なループ領域を太字かつ下線で示している。ＬＣＴＰＳＲ配列は太字かつ二重線で示した。開始メチオニン（Ｍ）は、発現を促進する目的で重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に含まれており、必要に応じて、本明細書に記載のこれら及び全ての重鎖及び軽鎖アミノ酸配列に含まれ得る。
抗ＣＤ１９及び抗ＣＤ２２の野生型配列
図６Ｂ及び１９Ｂに、野生型（アルデヒドタグが付いていない）抗ＣＤ２２の重鎖及び軽鎖それぞれのアミノ酸配列を示す。野生型（アルデヒドタグが付いていない）抗ＣＤ２２の重鎖及び軽鎖をコードしているヌクレオチド配列を図６Ａ及び１５Ａそれぞれに示す。
図１９Ｂ及び３１Ｂに、野生型（アルデヒドタグが付いていない）抗ＣＤ１９の重鎖及び軽鎖それぞれのアミノ酸配列を示す。野生型（アルデヒドタグが付いていない）抗ＣＤ１９の重鎖及び軽鎖をコードしているヌクレオチド配列をそれぞれ、図１９Ａ及び３１Ａに示す。
修飾し、ＬＣＴＰＳＲを含めた抗ＣＤ１９及び抗ＣＤ２２重鎖の配列
修飾し、アルデヒドタグ配列ＬＣＴＰＳＲ（ＦＧＥによって認識・変換される）を含めた抗ＣＤ２２重鎖定常領域のアミノ酸配列を図７Ｂ、８Ｂ、及び９Ｂに示す。この場合、アルデヒドタグはＣＨ１ドメインにあり；図１１Ｂ、１２Ｂ及び１３ＢではアルデヒドタグはＣＨ２ドメインにあり；図１５ＢではアルデヒドタグはＣＨ２／ＣＨ３領域にあり；図１７ＢではアルデヒドタグはＣ−末端付近にある。図７Ａ、８Ｂ、９Ｂ、１１Ｂ、１２Ｂ、１３Ｂ及び１５Ｂで示したアミノ酸配列をコードしているヌクレオチド配列をそれぞれ、図７Ａ、８Ａ、９Ａ、１１Ａ、１２Ａ、１３Ａ、及び１５Ａで提供する。
修飾し、アルデヒドタグ配列ＬＣＴＰＳＲ（ＦＧＥによって認識・変換される）を含めた抗ＣＤ１９重鎖定常領域のアミノ酸配列を図２３Ｂに示す。この場合、アルデヒドタグはＣＨ１ドメインにあり；図２５ＢではアルデヒドタグはＣＨ２ドメインにあり；図２７ＢではアルデヒドタグはＣＨ２／ＣＨ３領域にあり；図２９ＢではアルデヒドタグはＣ−末端付近にある。図１９Ｂ、２１Ｂ、２３Ｂ、及び２５Ｂで示したアミノ酸配列をコードしているヌクレオチド配列をそれぞれ、図１９Ａ、２１Ａ、２３Ａ、及び２５Ａで提供する。
修飾してＬＡＴＰＳＲを含めた抗ＣＤ１９及び抗ＣＤ２２重鎖の配列
修飾し、制御配列ＬＡＴＰＳＲ（ＦＧＥには認識されない）を含めた抗ＣＤ２２重鎖定常領域のアミノ酸配列を図１０Ｂに示す。この場合、制御配列はＣＨ１ドメインにあり；図１４Ｂでは制御配列はＣＨ２ドメインにあり；図１６Ｂでは制御配列はＣＨ２／ＣＨ３領域にあり；図１８Ｂでは制御配列はＣ−末端付近にある。図１０Ｂ、１４Ｂ、１６Ｂ、及び１８Ｂで示したアミノ酸配列をコードしているヌクレオチド配列をそれぞれ、図１０Ａ、１４Ａ、１６Ａ、及び１８Ａで提供する。
修飾し、制御配列ＬＡＴＰＳＲ（ＦＧＥには認識されない）を含めた抗ＣＤ１９重鎖定常領域アミノ酸配列を図２４Ｂに示す。この場合、制御配列はＣＨ１ドメインにあり；図２６Ｂでは制御配列はＣＨ２ドメインにあり；図２８Ｂでは制御配列はＣＨ２／ＣＨ３領域にあり；図３０Ｂでは制御配列はＣ−末端付近にある。
修飾し、ＬＣＴＰＳＲを含めた抗ＣＤ１９及び抗ＣＤ２２軽鎖の配列
修飾し、アルデヒドタグ配列ＬＣＴＰＳＲを含めた抗ＣＤ２２軽鎖定常領域のアミノ酸配列を図２０Ｂに示す。図２０Ｂに示したアミノ酸配列をコードしているヌクレオチド配列を図２０Ａで提供する。修飾し、制御配列ＬＡＴＰＳＲを含めた抗ＣＤ２２軽鎖定常領域のアミノ酸配列を図２１Ｂに、図２１Ｂに示したアミノ酸配列をコードしているヌクレオチド配列を図２１Ａに示す。
修飾し、アルデヒドタグ配列ＬＣＴＰＳＲを含めた抗ＣＤ１９軽鎖定常領域のアミノ酸配列を図３２Ｂに示す。図３２Ｂに示したアミノ酸配列をコードしているヌクレオチド配列を図３２Ａで提供する。修飾し、制御配列ＬＡＴＰＳＲを含めた抗ＣＤ２２軽鎖定常領域のアミノ酸配列を図３３Ｂに、図３３Ｂに示したアミノ酸配列をコードしているヌクレオチド配列を図３３Ａに示す。
実施例２：ＣＤ１９特異的抗体及びＣＤ２２特異的抗体の発現と精製
ＣＤ１９又はＣＤ２２に特異的な重鎖及び軽鎖をコードしている遺伝子を含むプラスミドを、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００遺伝子導入試薬を使用して、ヒトＦＧＥを安定に発現しているＣＨＯ−Ｋ１細胞に導入した。使用したＯｐｔｉ−ＭＥＭ血清を含まない培地１０ｍＬにつき、１２μｇの重鎖及び軽鎖プラスミドを使用した。３７℃に５時間おいた後、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭを除去し、Ｅｘ−Ｃｅｌｌ３２５タンパク質を含まない培地を加えた。３７℃に７２時間おいた後、培地を回収し、細胞残渣を取り除いた。清澄化した培地をプロテインＡ結合緩衝液及びプロテインＡ樹脂と混合し、回転させながら室温（ＲＴ）で１時間インキュベートした。混合物をカラムに負荷し、結合しない成分を素通りさせた。樹脂をプロテインＡ結合緩衝液で洗浄し、その後、プロテインＡ溶出緩衝液で５回溶出した。
抗ＣＤ１９及び抗ＣＤ２２の重鎖定常領域を修飾し、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、又はＣＨ３ドメインにアルデヒドタグを含めた。抗ＣＤ１９及び抗ＣＤ２２の軽鎖もまた修飾し、アルデヒドタグを含めた。アルデヒド−タグ付き抗ＣＤ１９及びアルデヒド−タグ付き抗ＣＤ２２抗体をタンパク質ブロット解析にかけた。結果を図４に示す。
図４に示すように、アルデヒドタグを含めても、タンパク質の発現、折り畳み、又は分泌は妨害されなかった。「Ａｌｄ」は、定常領域を修飾して、ＦＧＥによって認識される配列であるＬＣＴＰＳＲを含めることを指す。「Ｃ２Ａ」は、定常領域を修飾して、ＦＧＥによって認識されない配列である「ＬＡＴＰＳＲ」を含めることを指す。
アルデヒド−タグ付き抗ＣＤ１９及び抗ＣＤ２２抗体は、重鎖及び軽鎖の両方にアルデヒドタグを含む。
実施例３：アミノオキシＦＬＡＧペプチドと精製したアルデヒド−タグ付き抗体の抱合
精製した抗体と、１ｍＭのアミノオキシＦＬＡＧペプチド及び１００ｍＭのＭＥＳ緩衝液（ｐＨ５．５）を室温（ＲＴ）で１６時間混合した。試料をドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）ゲルに流し、その後、ウェスタンブロット解析にかけた。抗ＦＬＡＧ抗体を使用して、ＦＬＡＧペプチドの抗体への抱合を検出した。
結果を図５に示す。図５は、化学的にアミノオキシ−ＦＬＡＧと抱合させたアルデヒド−タグ付き抗ＣＤ１９及びアルデヒド−タグ付き抗ＣＤ２２抗体のタンパク質ブロット解析を図示している。
図５Ａに、タンパク質発現とその後のアルデヒド特異的な化学抱合の模式図を図示する。ヤギ抗ヒトＩｇＧ又は抗ＦＬＡＧ抗体で探索したウェスタンブロットで、タンパク質抱合の一例を示す。Ｃ２Ａ（ＬＡＴＰＳＲ）−タグ付き抗体（下段）を用いた場合には、標識は観察されなかった。
図５Ｂに、アミノオキシＦＬＡＧを用いたタグ付き抗ＣＤ１９ＩｇＧ及び抗ＣＤ２２ＩｇＧの標識を図示する。タンパク質の負荷及び標識をウェスタンブロットで監視した。「ＣｔｏＡ」は、修飾してＬＡＴＰＳＲ配列を含めた抗体を指す。
特定の態様を参照しながら本発明を説明してきたが、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、様々な変更を加えることができること、及び均等物で置換してもよいことを、当業者は理解されよう。加えて、特定の状況、材料、目的の組成物、方法、工程段階又は工程に合わせるために、本発明の目的、精神及び範囲に多数の修正を行ってもよい。そのような修正は全て、添付の請求項の範囲内であると見なされる。

Claims (74)

  1. スルファターゼモチーフのアミノ酸配列を含むＩｇ定常領域のアミノ酸配列を含む、単離されたアルデヒド−タグ付き免疫グロブリン（Ｉｇ）ポリペプチドであって、
    ここで前記スルファターゼモチーフが前記Ｉｇポリペプチド定常領域の溶媒が接触可能なループ領域の中にあるか又はそれに隣接しており、かつ、前記スルファターゼモチーフが前記Ｉｇポリペプチド鎖のＣ−末端にはない、単離されたアルデヒド−タグ付き免疫グロブリン（Ｉｇ）ポリペプチド。
  2. 前記スルファターゼモチーフが式Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離されたアルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチドであって、式中、
    Ｚ１はシステイン又はセリンであり；
    Ｚ２はプロリン又はアラニン残基であり；
    Ｚ３は脂肪族アミノ酸又は塩基性アミノ酸であり；
    Ｘ１は存在してもしなくてもよく、存在する場合にはいずれのアミノ酸であってもよく、ただし、異種スルファターゼモチーフが前記ポリペプチドのＮ−末端にある場合にはＸ１は存在し；
    Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立して任意のアミノ酸である、請求項１に記載の単離されたＩｇポリペプチド。
  3. Ｚ３がアルギニン（Ｒ）である、請求項２に記載の単離されたＩｇポリペプチド。
  4. 存在する場合にはＸ１が、並びにＸ２及びＸ３がそれぞれ独立して脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸、又は極性をもつ非荷電アミノ酸である、請求項２に記載の単離されたＩｇポリペプチド。
  5. 存在する場合にはＸ１がＬ、Ｍ、Ｖ、Ｓ又はＴである、請求項２に記載の単離されたＩｇポリペプチド。
  6. Ｘ２及びＸ３がそれぞれ独立してＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｇ、又はＣである、請求項２に記載の単離されたＩｇポリペプチド。
  7. 前記ＩｇポリペプチドがＩｇ重鎖定常領域を含む、請求項２に記載の単離されたＩｇポリペプチド。
  8. 前記Ｉｇ重鎖定常領域がＩｇＧ１の重鎖定常領域である、請求項７に記載の単離されたＩｇポリペプチド。
  9. 前記ＩｇポリペプチドがＩｇ軽鎖定常領域を含む、請求項１に記載の単離されたＩｇポリペプチド。
  10. 前記Ｉｇ軽鎖定常領域がカッパ軽鎖の定常領域である、請求項９に記載の単離されたＩｇポリペプチド。
  11. 前記Ｉｇポリペプチドが２つ以上のスルファターゼモチーフを含む、請求項１に記載の単離されたＩｇポリペプチド。
  12. ２−ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）部分を含むように修飾された単離された免疫グロブリン（Ｉｇ）ポリペプチドであって、ここで前記ＦＧｌｙ修飾型スルファターゼモチーフは前記Ｉｇポリペプチドの溶媒が接触可能なループ領域の中にあるか又はそれに隣接しており、前記ＦＧｌｙ修飾型Ｉｇは折り畳まれた状態では溶媒が接触可能な表面上に前記ＦＧｌｙ基を提示し、かつ、前記スルファターゼモチーフは前記Ｉｇポリペプチド鎖のＣ−末端にはない、前記ポリペプチド。
  13. 前記ＦＧｌｙ変換型スルファターゼモチーフが式Ｘ１（ＦＧｌｙ）Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３を含む請求項１２に記載の単離されたＩｇポリペプチドであって、
    式中、
    Ｘ１は存在してもしなくてもよく、存在する場合にはいずれのアミノ酸であってもよく、ただし、前記スルファターゼモチーフが前記ポリペプチドのＮ−末端にある場合にはＸ１は存在し；
    Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立して任意のアミノ酸であり；及び
    Ｚ３は塩基性アミノ酸である、前記ポリペプチド。
  14. 前記ＦＧｌｙ修飾型Ｉｇポリペプチドが２つ以上のＦＧｌｙ変換型スルファターゼモチーフを含む、請求項１２に記載のＦＧｌｙ修飾型Ｉｇポリペプチド。
  15. 前記ＦＧｌｙ修飾型ＩｇポリペプチドがＩｇ重鎖定常領域を含む、請求項１２に記載のＦＧｌｙ修飾型Ｉｇポリペプチド。
  16. 前記Ｉｇ重鎖定常領域がＩｇＧ１の重鎖定常領域である、請求項１５に記載のＦＧｌｙ修飾型Ｉｇポリペプチド。
  17. 前記ＦＧｌｙ修飾型ＩｇポリペプチドがＩｇ軽鎖定常領域を含む、請求項１２に記載のＦＧｌｙ修飾型Ｉｇポリペプチド。
  18. 前記Ｉｇ軽鎖定常領域がＩｇカッパの軽鎖定常領域である、請求項１７に記載のＦＧｌｙ修飾型Ｉｇポリペプチド。
  19. Ｚ３がアルギニン（Ｒ）である、請求項１３に記載のＦＧｌｙ修飾型Ｉｇポリペプチド。
  20. 存在する場合にはＸ１が、並びにＸ２及びＸ３がそれぞれ独立して脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸、又は極性をもつ非荷電アミノ酸である、請求項１３に記載のＦＧｌｙ修飾型Ｉｇポリペプチド。
  21. 存在する場合には前記Ｘ１がＬ、Ｍ、Ｖ、Ｓ又はＴである、請求項１３に記載のＦＧｌｙ修飾型Ｉｇポリペプチド。
  22. Ｘ２及びＸ３がそれぞれ独立してＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｇ、又はＣである、請求項１３に記載のＦＧｌｙ修飾型Ｉｇポリペプチド。
  23. Ｉｇポリペプチド及び共有結合した部分を含む免疫グロブリン（Ｉｇ）抱合体であって、
    ここで前記ＩｇポリペプチドはＦＧｌｙ’を含む修飾型スルファターゼモチーフを含み、
    ＦＧｌｙ’は
    の式で表され、
    式中、Ｊ１は前記共有結合した部分であり；
    Ｌ１はそれぞれ、アルキレン、置換されたアルキレン、アルケニレン、置換されたアルケニレン、アルキニレン、アルキニレン、アリーレン、置換されたアリーレン、シクロアルキレン、置換されたシクロアルキレン、ヘテロアリーレン、置換されたヘテロアリーレン、ヘテロサイクレン（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｎｅ）、置換されたヘテロサイクレン、アシル、アミド、アシルオキシ、ウレタニレン（ｕｒｅｔｈａｎｙｌｅｎｅ）、チオエステル、スルホニル、スルホンアミド、スルホニルエステル、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、及び置換されたアミンから独立して選択される二価の部分であり；及び
    ｎは０〜４０から選択される数であり；
    ここで前記スルファターゼモチーフは前記Ｉｇポリペプチドの溶媒が接触可能なループ領域の中にあるか又はそれに隣接しており、前記スルファターゼモチーフは前記ＩｇポリペプチドのＣ−末端にはなく、かつ、前記Ｉｇ抱合体は折り畳まれた状態では、溶媒が接触可能な表面に前記共有結合した部分を提示している、前記包合体。
  24. 前記スルファターゼモチーフが式Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３を含む請求項２３に記載のＩｇ抱合体であって、
    式中、
    Ｚ２はプロリン又はアラニン残基であり；
    Ｘ１は存在してもしなくてもよく、存在する場合にはいずれのアミノ酸であってもよく、ただし、前記スルファターゼモチーフが前記ポリペプチドのＮ−末端にある場合には、Ｘ１は存在し；
    Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立して任意のアミノ酸であり；及び
    Ｚ３は脂肪族アミノ酸又は塩基性アミノ酸である、前記抱合体。
  25. Ｊ１が薬剤、検出可能な標識、水溶性ポリマー、及び合成ペプチドから選択される、請求項２３に記載のＩｇ抱合体。
  26. 前記Ｉｇ抱合体が２つ以上の修飾型スルファターゼモチーフを含む、請求項２３に記載のＩｇ抱合体。
  27. Ｊ１が低分子薬である、請求項２５に記載のＩｇ抱合体。
  28. 前記低分子薬が癌化学療法薬である、請求項２７に記載のＩｇ抱合体。
  29. 前記癌化学療法薬がアルキル化剤、ニトロソウレア、代謝拮抗薬、抗腫瘍性抗生物質、ビンカアルカロイド、又はステロイドホルモンである、請求項２８に記載のＩｇ抱合体。
  30. Ｊ１が水溶性ポリマーである、請求項２５に記載のＩｇ抱合体。
  31. 前記水溶性ポリマーがポリ（エチレングリコール）である、請求項３０に記載のＩｇ抱合体。
  32. Ｊ１が検出可能な標識である、請求項２５に記載のＩｇ抱合体。
  33. 前記検出可能な標識が画像化剤である、請求項３２に記載のＩｇ抱合体。
  34. 前記ＩｇポリペプチドがＩｇ重鎖定常領域を含む、請求項２３に記載のＩｇ抱合体。
  35. 前記Ｉｇ重鎖定常領域がＩｇＧ１の重鎖定常領域である、請求項３４に記載のＩｇ抱合体。
  36. 前記ＦＧｌｙ修飾型ＩｇポリペプチドがＩｇ軽鎖定常領域を含む、請求項２３に記載のＩｇ抱合体。
  37. 前記Ｉｇ軽鎖定常領域がＩｇカッパ軽鎖定常領域である、請求項３６に記載のＩｇ抱合体。
  38. Ｚ３がアルギニン（Ｒ）である、請求項２４に記載のＩｇ抱合体。
  39. 存在する場合にはＸ１が、並びにＸ２及びＸ３がそれぞれ独立して脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸、又は極性をもつ非荷電アミノ酸である、請求項２４に記載のＩｇ抱合体。
  40. 存在する場合には前記Ｘ１がＬ、Ｍ、Ｖ、Ｓ又はＴである、請求項２４に記載のＩｇ抱合体。
  41. Ｘ２及びＸ３がそれぞれ独立してＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｇ、又はＣである、請求項２４に記載のＩｇ抱合体。
  42. 請求項１に記載のアルデヒド−タグ付き免疫グロブリン（Ｉｇ）ポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列を含む組換え核酸。
  43. 前記ＩｇポリペプチドがＩｇ重鎖定常領域を含む、請求項４２に記載の核酸。
  44. 前記ＩｇポリペプチドがＩｇ可変領域をさらに含む、請求項４３に記載の核酸。
  45. 前記ＩｇポリペプチドがＩｇ軽鎖定常領域を含む、請求項４２に記載の核酸。
  46. 前記ＩｇポリペプチドがＩｇ可変領域をさらに含む、請求項４５に記載の核酸。
  47. 前記アルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列がプロモーターに操作可能に連結されている、請求項４２に記載の核酸を含む組換え発現ベクター。
  48. 前記ＩｇポリペプチドがＩｇ重鎖定常領域を含む、請求項４７に記載の組換え発現ベクター。
  49. 前記ベクターが、前記アルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列の５’にＩｇ可変領域を挿入するための部位を含んでいる、請求項４８に記載の組換え発現ベクター。
  50. 前記ＩｇポリペプチドがＩｇ軽鎖定常領域を含む、請求項４７に記載の組換え発現ベクター。
  51. 前記ベクターが、前記アルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列の５’にＩｇ可変領域を挿入するための部位を含む、請求項５０に記載の組換え発現ベクター。
  52. 組換え発現ベクターのライブラリーであって、前記ライブラリーは請求項４７に記載の組換え発現ベクターの集団を含み、
    ここで前記集団の各メンバーは、それぞれ別の位置にアルデヒド−タグが付いた免疫グロブリンポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列を含んでいる、前記ライブラリー。
  53. アルデヒド−タグ付き免疫グロブリン（Ｉｇ）ポリペプチドのライブラリーであって、前記ライブラリーは請求項１に記載のアルデヒド−タグ付きＩｇポリペプチドの集団、又は請求項１２に記載のＦＧｌｙ修飾型免疫グロブリンポリペプチドを含み、
    ここで前記集団は、それぞれ別の位置にアルデヒド−タグが付いたＩｇポリペプチドを有するメンバーを含んでいる、前記ライブラリー。
  54. ａ）請求項２３に記載のＩｇ抱合体；及び
    ｂ）薬学上許容可能な賦形剤、を含む製剤。
  55. 免疫グロブリン−薬剤抱合体の製造方法であって、
    反応混合物中で、
    Ｚ１が２−ホルミル−グリシン（ＦＧｌｙ）残基である、請求項１２に記載のＦＧｌｙ修飾型アルデヒド−タグ付き免疫グロブリン（Ｉｇ）ポリペプチドと
    アミノオキシ反応基又はヒドラジド反応基を含む、前記ＦＧｌｙ修飾型Ｉｇポリペプチドと抱合させるための薬剤とを混合する工程、
    ここで前記薬剤は、Ｉｇポリペプチドに対する薬剤の割合を望ましくするのに十分な量で反応混合物中に供給され、前記混合は、Ｉｇポリペプチド−薬剤抱合体を生成するための前記Ｉｇポリペプチドのアルデヒドと前記薬剤の反応基との間の反応を促進するのに適した条件で行われ；及び、
    反応混合物から前記Ｉｇポリペプチド−薬剤抱合体を単離する工程を含む、免疫グロブリン−薬剤抱合体の製造方法。
  56. 有効量の請求項２３に記載のＩｇ抱合体を患者に投与する工程を含む、それを必要とする前記患者に薬剤を送達する方法。
  57. 対象の癌の治療方法であって、前記方法は有効量の請求項２３に記載の免疫グロブリン−薬剤抱合体を、癌を患っている対象に投与する工程を含み、前記投与は、前記対象の前記癌の治療に有効である、前記治療方法。
  58. 請求項１に記載のアルデヒド−タグ付き免疫グロブリン（Ｉｇ）ポリペプチドを含むアルデヒド−タグ付き抗体。
  59. 前記抗体がアルデヒド−タグ付きＩｇ重鎖定常領域を含む、請求項５８に記載のアルデヒド−タグ付き抗体。
  60. 前記抗体がアルデヒド−タグ付きＩｇ軽鎖定常領域を含む、請求項５８に記載のアルデヒド−タグ付き抗体。
  61. 前記抗体がアルデヒド−タグ付きＩｇ重鎖定常領域及びアルデヒド−タグ付きＩｇ軽鎖定常領域を含む、請求項５８に記載のアルデヒド−タグ付き抗体。
  62. ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）部分を含む抗体であって、前記抗体は、請求項１２に記載のＦＧｌｙ修飾型Ｉｇポリペプチドを含む、前記抗体。
  63. 前記抗体がＦＧｌｙ修飾型重鎖定常領域を含む、請求項６２に記載のＦＧｌｙ修飾型抗体。
  64. 前記抗体がＦＧｌｙ修飾型軽鎖定常領域を含む、請求項６２に記載のＦＧｌｙ修飾型抗体。
  65. 前記抗体がＦＧｌｙ修飾型重鎖定常領域及びＦＧｌｙ修飾型軽鎖定常領域を含む、請求項６２に記載のＦＧｌｙ修飾型抗体。
  66. 請求項２１に記載の免疫グロブリン（Ｉｇ）抱合体を含む抗体抱合体。
  67. 前記抗体抱合体が、Ｉｇ重鎖定常領域に共有結合したＪ１部分を含む、請求項６６に記載の抗体抱合体。
  68. 前記抗体抱合体が、Ｉｇ軽鎖定常領域に共有結合したＪ１部分を含む、請求項６６に記載の抗体抱合体。
  69. 前記抗体抱合体が、Ｉｇ重鎖定常領域に共有結合したＪ１部分及びＩｇ軽鎖定常領域に共有結合したＪ１部分を含む、請求項６６に記載の抗体抱合体。
  70. 前記抗体が癌細胞の腫瘍抗原に特異的に結合する、請求項６６に記載の抗体抱合体。
  71. 前記Ｊ１部分が細胞毒物である、請求項７０に記載の抗体抱合体。
  72. 前記抗体が、ウイルスが感染した細胞の抗原に特異的に結合する、請求項６６に記載の抗体抱合体。
  73. 抗原がウイルスによってコードされている、請求項７２に記載の抗体抱合体。
  74. 前記Ｊ１部分がウイルス融合阻害剤である、請求項７２に記載の抗体抱合体。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2020506685A (ja) * 2017-01-18 2020-03-05 ビステラ， インコーポレイテッド 抗体分子−薬物コンジュゲートおよびその使用

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9238878B2 (en) 2009-02-17 2016-01-19 Redwood Bioscience, Inc. Aldehyde-tagged protein-based drug carriers and methods of use
US9540438B2 (en) 2011-01-14 2017-01-10 Redwood Bioscience, Inc. Aldehyde-tagged immunoglobulin polypeptides and methods of use thereof
EP2916835A4 (en) * 2012-11-12 2016-07-27 Redwood Bioscience Inc COMPOUNDS AND METHOD FOR PRODUCING A CONJUGATE
US9353150B2 (en) 2012-12-04 2016-05-31 Massachusetts Institute Of Technology Substituted pyrazino[1′,2′:1 ,5]pyrrolo[2,3-b]-indole-1,4-diones for cancer treatment
EP3151830A4 (en) 2014-06-06 2018-02-07 Redwood Bioscience, Inc. Anti-her2 antibody-maytansine conjugates and methods of use thereof
KR102638596B1 (ko) 2015-02-05 2024-02-21 알.피.쉐러 테크놀러지즈 엘엘씨 활성화된 포르밀글리신-생성 효소 및 그것의 생산 및 사용 방법
US11254744B2 (en) 2015-08-07 2022-02-22 Imaginab, Inc. Antigen binding constructs to target molecules
RU2744895C2 (ru) * 2015-11-09 2021-03-16 Р.П. Шерер Текнолоджиз, Ллк Конъюгаты анти-cd22 антитело-майтансин и способы их применения
CN108473559A (zh) 2015-11-10 2018-08-31 威特拉公司 特异性结合脂多糖的抗体分子-药物共轭物及其应用
US11208632B2 (en) 2016-04-26 2021-12-28 R.P. Scherer Technologies, Llc Antibody conjugates and methods of making and using the same
WO2017197045A1 (en) 2016-05-11 2017-11-16 Movassaghi Mohammad Convergent and enantioselective total synthesis of communesin analogs
WO2018147960A1 (en) * 2017-02-08 2018-08-16 Imaginab, Inc. Extension sequences for diabodies
US11466096B2 (en) * 2017-03-17 2022-10-11 R.P. Scherer Technologies, Llc Antibody conjugates and methods of making and using the same
WO2018209239A1 (en) 2017-05-11 2018-11-15 Massachusetts Institute Of Technology Potent agelastatin derivatives as modulators for cancer invasion and metastasis
TW201920249A (zh) 2017-09-07 2019-06-01 美商信號生物製藥公司 具有結合位點之t細胞調節多聚體多肽及其使用方法
WO2019063958A1 (en) 2017-09-27 2019-04-04 The University Of York BIOCONJUGATION OF POLYPEPTIDES
US10640508B2 (en) 2017-10-13 2020-05-05 Massachusetts Institute Of Technology Diazene directed modular synthesis of compounds with quaternary carbon centers
CN108610415A (zh) * 2018-05-15 2018-10-02 大连理工大学 一种抗体复合物的制备方法
SG11202013217PA (en) 2018-07-03 2021-01-28 Catalent Pharma Solutions Llc Multifunctional protein molecules comprising decorin and use thereof
WO2020081493A1 (en) 2018-10-16 2020-04-23 Molecular Templates, Inc. Pd-l1 binding proteins
US11535634B2 (en) 2019-06-05 2022-12-27 Massachusetts Institute Of Technology Compounds, conjugates, and compositions of epipolythiodiketopiperazines and polythiodiketopiperazines and uses thereof
US11918649B2 (en) 2019-09-18 2024-03-05 Molecular Templates, Inc. PD-L1-binding molecules comprising Shiga toxin a subunit scaffolds
CN114641283A (zh) 2019-10-04 2022-06-17 R.P.谢勒技术有限责任公司 抗cd25抗体-美登素偶联物及其使用方法
CA3213295A1 (en) 2021-03-17 2022-09-22 Molecular Templates, Inc. Pd-l1 binding proteins comprising shiga toxin a subunit scaffolds and cd8+ t cell antigens
AU2022283289A1 (en) * 2021-05-27 2023-12-07 R.P. Scherer Technologies, Llc Methods of controlling cleavage of formylglycine-containing polypeptides

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008514201A (ja) * 2004-09-24 2008-05-08 アムジエン・インコーポレーテツド 修飾Ｆｃ分子
WO2009120611A2 (en) * 2008-03-27 2009-10-01 The Regents Of The University Of California Aldehyde tags, uses thereof in site-specific protein modification
JP2010504095A (ja) * 2006-09-21 2010-02-12 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア アルデヒドタグ、部位特異的タンパク質修飾におけるその使用
WO2010096394A2 (en) * 2009-02-17 2010-08-26 Redwood Biosciences, Inc. Aldehyde-tagged protein-based drug carriers and methods of use

Family Cites Families (246)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4342832A (en) 1979-07-05 1982-08-03 Genentech, Inc. Method of constructing a replicable cloning vehicle having quasi-synthetic genes
JPS5630925A (en) 1979-08-21 1981-03-28 Sumitomo Chem Co Ltd Purification of human growth hormone
US4671958A (en) 1982-03-09 1987-06-09 Cytogen Corporation Antibody conjugates for the delivery of compounds to target sites
EP0307434B2 (en) 1987-03-18 1998-07-29 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Altered antibodies
US6710169B2 (en) 1987-10-02 2004-03-23 Genentech, Inc. Adheson variants
US4952394A (en) 1987-11-23 1990-08-28 Bristol-Myers Company Drug-monoclonal antibody conjugates
US5981485A (en) 1997-07-14 1999-11-09 Genentech, Inc. Human growth hormone aqueous formulation
US5681566A (en) 1988-10-24 1997-10-28 3I Research Exploitation Limited Antibody conjugates with two or more covalently linked FC regions
GB8824869D0 (en) 1988-10-24 1988-11-30 Stevenson G T Synthetic antibody
US5225538A (en) 1989-02-23 1993-07-06 Genentech, Inc. Lymphocyte homing receptor/immunoglobulin fusion proteins
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
CS89491A3 (en) 1990-04-09 1992-01-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Hybrid calcitonin
RU2145233C1 (ru) * 1990-07-02 2000-02-10 Дзе Аризона Борд оф Риджентс Неупорядоченная библиотека пептидов, способ ее получения и способ идентификации пептида, синтезированного твердофазным синтезом
US5506107A (en) 1991-05-10 1996-04-09 Genentech, Inc. Selecting ligand agonists and antagonists
US6329509B1 (en) 1991-08-14 2001-12-11 Genentech, Inc. Anti-IgE antibodies
AU667503B2 (en) 1991-12-20 1996-03-28 Novo Nordisk Health Care Ag A stabilized pharmaceutical formulation comprising growth hormone and histidine
FR2686899B1 (fr) 1992-01-31 1995-09-01 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant.
CA2076465C (en) 1992-03-25 2002-11-26 Ravi V. J. Chari Cell binding agent conjugates of analogues and derivatives of cc-1065
US5686072A (en) 1992-06-17 1997-11-11 Board Of Regents, The University Of Texas Epitope-specific monoclonal antibodies and immunotoxins and uses thereof
US6284727B1 (en) 1993-04-07 2001-09-04 Scios, Inc. Prolonged delivery of peptides
US5359030A (en) 1993-05-10 1994-10-25 Protein Delivery, Inc. Conjugation-stabilized polypeptide compositions, therapeutic delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same
US5484892A (en) 1993-05-21 1996-01-16 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Monoclonal antibodies that block ligand binding to the CD22 receptor in mature B cells
US5885573A (en) 1993-06-01 1999-03-23 Arch Development Corporation Methods and materials for modulation of the immunosuppressive activity and toxicity of monoclonal antibodies
IL114909A (en) 1994-08-12 1999-10-28 Immunomedics Inc Immunoconjugates and humanized antibodies specific for b-cell lymphoma and leukemia cells
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5698672A (en) 1995-04-04 1997-12-16 Zymogenetics, Inc. Synthetic calcitonin mimetics
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
JP3871713B2 (ja) 1995-05-10 2007-01-24 協和醗酵工業株式会社 新規毒素複合体
US5980895A (en) 1995-10-13 1999-11-09 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Immunotoxin containing a disulfide-stabilized antibody fragment joined to a Pseudomonas exotoxin that does not require proteolytic activation
ATE267610T1 (de) 1996-03-20 2004-06-15 Immunomedics Inc Glykosylierte igg antikörper
US6268343B1 (en) 1996-08-30 2001-07-31 Novo Nordisk A/S Derivatives of GLP-1 analogs
US6653104B2 (en) 1996-10-17 2003-11-25 Immunomedics, Inc. Immunotoxins, comprising an internalizing antibody, directed against malignant and normal cells
EP1629849B2 (en) 1997-01-07 2017-10-04 Amylin Pharmaceuticals, LLC Pharmaceutical compositions comprising exendins and agonists thereof
US6548644B1 (en) 1997-03-10 2003-04-15 Immunex Corporation Site protected protein modification
EP0970227B1 (en) 1997-03-20 2008-01-09 THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA as represented by THE SECRETARY OF THE DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES Recombinant antibodies and immunoconjugates targeted to cd-22 bearing cells and tumors
US6183744B1 (en) 1997-03-24 2001-02-06 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
US5981488A (en) 1997-03-31 1999-11-09 Eli Lillly And Company Glucagon-like peptide-1 analogs
AU751898B2 (en) 1997-07-14 2002-08-29 Bolder Biotechnology, Inc. Derivatives of growth hormone and related proteins
EP1056775B1 (en) 1998-02-27 2010-04-28 Novo Nordisk A/S Glp-1 derivatives of glp-1 and exendin with protracted profile of action
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
US6576744B1 (en) 1998-09-23 2003-06-10 Zymogenetics, Inc. Cytokine receptor zalpha11
US6803451B2 (en) 1998-09-23 2004-10-12 Zymogenetics, Inc. Cytokine receptor zalpha11 polypeptides
US7488590B2 (en) 1998-10-23 2009-02-10 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
US6660843B1 (en) 1998-10-23 2003-12-09 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
US7425541B2 (en) 1998-12-11 2008-09-16 Medarex, Inc. Enzyme-cleavable prodrug compounds
US7183387B1 (en) 1999-01-15 2007-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
KR100940380B1 (ko) 1999-01-15 2010-02-02 제넨테크, 인크. 효과기 기능이 변화된 폴리펩티드 변이체
US6897044B1 (en) 1999-01-28 2005-05-24 Biogen Idec, Inc. Production of tetravalent antibodies
US7258869B1 (en) 1999-02-08 2007-08-21 Alza Corporation Stable non-aqueous single phase viscous vehicles and formulations utilizing such vehicle
US6307024B1 (en) 1999-03-09 2001-10-23 Zymogenetics, Inc. Cytokine zalpha11 Ligand
US6395226B1 (en) 1999-04-06 2002-05-28 Medtronic, Inc. Alkoxysilane/alkysilane copolymer coating of medical devices
DE19926475A1 (de) 1999-06-10 2000-12-14 Ktb Tumorforschungs Gmbh Träger-Pharmaka-Konjugate
EP1229934B1 (en) 1999-10-01 2014-03-05 Immunogen, Inc. Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents
US6824780B1 (en) 1999-10-29 2004-11-30 Genentech, Inc. Anti-tumor antibody compositions and methods of use
AU2253301A (en) 1999-12-03 2001-06-12 Zymogenetics Inc. Human cytokine receptor
CA2400034A1 (en) 2000-02-17 2001-08-23 Incyte Genomics, Inc. Human kinases
ATE329925T1 (de) 2000-03-16 2006-07-15 Univ California Chemoselektive anknüpfung durch verwendung eines phosphins
US7097840B2 (en) 2000-03-16 2006-08-29 Genentech, Inc. Methods of treatment using anti-ErbB antibody-maytansinoid conjugates
AU2001253127A1 (en) 2000-04-05 2001-10-23 Zymogenetics Inc. Soluble zalpha11 cytokine receptors
US6756480B2 (en) 2000-04-27 2004-06-29 Amgen Inc. Modulators of receptors for parathyroid hormone and parathyroid hormone-related protein
ATE279390T1 (de) 2000-05-02 2004-10-15 Tietze Lutz F Prof Dr Neue prodrugs von 6-hydroxy-2,3-dihydro-1h- indolen, 5-hydroxy-1,2-dihydro-3h-pyrrolo 3,2- e)indolen und 5-hydroxy-1,2-dihydro-3h-benzo e)indolen sowie von 6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydro- benzo f)chinolin-derivaten für eine selektive krebstherapie
WO2001090192A2 (en) 2000-05-24 2001-11-29 Imclone Systems Incorporated Bispecific immunoglobulin-like antigen binding proteins and method of production
JP2004510702A (ja) 2000-06-14 2004-04-08 メダレックス，インコーポレイティド イソロイシンを有するプロドラッグ化合物
JP2004501875A (ja) 2000-06-14 2004-01-22 メダレックス，インコーポレイティド トリペプチドプロドラッグ化合物
JP5015404B2 (ja) 2000-08-08 2012-08-29 ザイモジェネティクス， インコーポレイテッド 可溶性ｚｃｙｔｏｒ１１サイトカイン受容体
US7402556B2 (en) 2000-08-24 2008-07-22 Medarex, Inc. Prodrugs activated by plasmin and their use in cancer chemotherapy
US7118737B2 (en) 2000-09-08 2006-10-10 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Polymer-modified synthetic proteins
AU2002213357A1 (en) * 2000-10-20 2002-05-06 Idec Pharmaceuticals Corporation Variant igg3 rituxan r and therapeutic use thereof
JP2004516826A (ja) 2000-11-07 2004-06-10 ザイモジェネティクス，インコーポレイティド ヒト腫瘍壊死因子受容体
GB0029154D0 (en) 2000-11-30 2001-01-17 Lee Helen Signal enhancement with multiple labelled-antibodies
EA005584B1 (ru) 2000-12-07 2005-04-28 Эли Лилли Энд Компани Слитые белки glp-1
EP1370676A4 (en) 2001-03-02 2004-09-22 Zymogenetics Inc CYTOKIN RECEPTOR FROM MOUSE
AU2002254400B2 (en) 2001-03-23 2007-08-09 Napro Biotherapeutics, Inc. Molecular conjugates for use in treatment of cancer
EP1373508B1 (en) 2001-03-27 2013-04-24 ZymoGenetics, Inc. Human cytokine receptor
DK1456360T3 (en) 2001-04-19 2015-08-31 Scripps Research Inst Methods and Composition for Preparation of Orthogonal TRNA-Aminoacyl-TRNA Synthetase Pairs
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
US7256257B2 (en) 2001-04-30 2007-08-14 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
CA2446136C (en) 2001-05-03 2011-07-05 Galileo Pharmaceuticals, Inc. Pyruvate derivatives
US6608196B2 (en) 2001-05-03 2003-08-19 Galileo Pharmaceuticals, Inc. Process for solid supported synthesis of pyruvate-derived compounds
US20030103985A1 (en) 2001-05-18 2003-06-05 Boehringer Ingelheim International Gmbh Cytotoxic CD44 antibody immunoconjugates
US6978243B2 (en) 2001-05-22 2005-12-20 International Flavors & Fragrances Inc. Method for the analysis of sensory perception
PL403488A1 (pl) 2001-05-24 2013-07-08 Zymogenetics, Inc. Zastosowanie bialka fuzyjnego TACI-immunoglobulina, bialko fuzyjne, czasteczka kwasu nukleinowego kodujaca bialko fuzyjne, kompozycja farmaceutyczna i sposób wytwarzania bialka fuzyjnego TACI-immunoglobulina
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
AU2002303929B9 (en) 2001-05-31 2007-01-25 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Cytotoxins, prodrugs, linkers and stabilizers useful therefor
ATE535258T1 (de) 2001-06-01 2011-12-15 Cornell Res Foundation Inc Modifizierte antikörper gegen prostata- spezifisches membranantigen und ihre verwendungen
US7803915B2 (en) 2001-06-20 2010-09-28 Genentech, Inc. Antibody compositions for the diagnosis and treatment of tumor
US7321026B2 (en) 2001-06-27 2008-01-22 Skytech Technology Limited Framework-patched immunoglobulins
US7176278B2 (en) 2001-08-30 2007-02-13 Biorexis Technology, Inc. Modified transferrin fusion proteins
US20030109682A1 (en) 2001-09-07 2003-06-12 Daniel Santi Maytansines and maytansine conjugates
US6770625B2 (en) 2001-09-07 2004-08-03 Nobex Corporation Pharmaceutical compositions of calcitonin drug-oligomer conjugates and methods of treating diseases therewith
US7091186B2 (en) 2001-09-24 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. p-Amidobenzylethers in drug delivery agents
ATE468348T1 (de) 2001-09-26 2010-06-15 Government Of The Us Secretary Mutierte anti-cd22-antikörper mit erhöhter affinität zu cd22-exprimierenden leukämiezellen
US6864069B2 (en) 2001-10-05 2005-03-08 Bayer Pharmaceuticals Corporation Peptides acting as both GLP-1 receptor agonists and glucagon receptor antagonists and their pharmacological methods of use
ES2606840T3 (es) 2001-10-10 2017-03-28 Ratiopharm Gmbh Remodelación y glicoconjugación de factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF)
CN100423777C (zh) 2001-10-25 2008-10-08 杰南技术公司 糖蛋白组合物
US20030171285A1 (en) 2001-11-20 2003-09-11 Finn Rory F. Chemically-modified human growth hormone conjugates
WO2003060071A2 (en) 2001-12-21 2003-07-24 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
US6716821B2 (en) 2001-12-21 2004-04-06 Immunogen Inc. Cytotoxic agents bearing a reactive polyethylene glycol moiety, cytotoxic conjugates comprising polyethylene glycol linking groups, and methods of making and using the same
GB0130947D0 (en) 2001-12-24 2002-02-13 Lee Helen Improved sample preparation for the detection of infectious agents
JP2005526044A (ja) 2002-02-21 2005-09-02 デューク ユニバーシティ 抗ｃｄ２２抗体を使用した治療方法
US20070148171A1 (en) 2002-09-27 2007-06-28 Xencor, Inc. Optimized anti-CD30 antibodies
US20100311954A1 (en) 2002-03-01 2010-12-09 Xencor, Inc. Optimized Proteins that Target Ep-CAM
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US20090162382A1 (en) 2002-03-01 2009-06-25 Bernett Matthew J Optimized ca9 antibodies and methods of using the same
US20080152649A1 (en) 2002-03-01 2008-06-26 Xencor, Inc. Optimized igf-1r antibodies and methods of using the same
US8093357B2 (en) 2002-03-01 2012-01-10 Xencor, Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
US20080199471A1 (en) 2002-03-01 2008-08-21 Bernett Matthew J Optimized cd40 antibodies and methods of using the same
US20090042291A1 (en) 2002-03-01 2009-02-12 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
PL373567A1 (en) 2002-03-01 2005-09-05 The Administrators Of The Tulane Educational Fund Conjugates of therapeutic or cytotoxic agents and biologically active peptides
US20080254027A1 (en) 2002-03-01 2008-10-16 Bernett Matthew J Optimized CD5 antibodies and methods of using the same
US20080260731A1 (en) 2002-03-01 2008-10-23 Bernett Matthew J Optimized antibodies that target cd19
US8188231B2 (en) 2002-09-27 2012-05-29 Xencor, Inc. Optimized FC variants
US20080206242A1 (en) 2002-03-01 2008-08-28 Xencor, Inc. Method of treatment of th2-mediated conditions using optimized anti-cd30 antibodies
WO2003074679A2 (en) 2002-03-01 2003-09-12 Xencor Antibody optimization
US20080219974A1 (en) 2002-03-01 2008-09-11 Bernett Matthew J Optimized antibodies that target hm1.24
US6756397B2 (en) 2002-04-05 2004-06-29 Immunogen, Inc. Prodrugs of CC-1065 analogs
GB0210121D0 (en) 2002-05-02 2002-06-12 Celltech R&D Ltd Biological products
WO2005056606A2 (en) 2003-12-03 2005-06-23 Xencor, Inc Optimized antibodies that target the epidermal growth factor receptor
BR0311471A (pt) 2002-05-30 2007-04-27 Macrogenics Inc anticorpo anti-cd16a, e, métodos de redução de uma resposta imune deletéria em um mamìfero e de tratamento de uma resposta imune deletéria em um mamìfero
US7456260B2 (en) 2002-06-17 2008-11-25 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Humanized antibody
HUE027549T2 (hu) 2002-07-31 2016-10-28 Seattle Genetics Inc Hatóanyagot tartalmazó konjugátumok és alkalmazásuk rák, autoimmun betegség vagy fertõzéses betegség kezelésére
JP2006500364A (ja) 2002-08-16 2006-01-05 イムノージェン インコーポレーテッド 高い反応性と溶解度を有する架橋剤および小分子薬物の標的化送達用コンジュゲートの調製におけるそれらの使用
US7189811B2 (en) 2002-09-06 2007-03-13 National Institute Of Immunology Process for solubilization of recombinant proteins expressed as inclusion body
US20060235208A1 (en) 2002-09-27 2006-10-19 Xencor, Inc. Fc variants with optimized properties
US6927042B2 (en) 2002-10-16 2005-08-09 The Scripps Research Institute Glycoprotein synthesis
US7534427B2 (en) 2002-12-31 2009-05-19 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B cell malignancies and autoimmune diseases using unconjugated antibodies and conjugated antibodies and antibody combinations and fusion proteins
US7960512B2 (en) 2003-01-09 2011-06-14 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
JP4773947B2 (ja) 2003-01-09 2011-09-14 マクロジェニクス，インコーポレーテッド 細菌細胞及び哺乳動物細胞における抗体発現のための二重発現ベクター系
US7355008B2 (en) 2003-01-09 2008-04-08 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
MX345056B (es) 2003-02-11 2017-01-16 Transkaryotic Therapies Inc Diagnóstico y tratamiento de deficiencia de sulfatasa múltiple y otras deficiencias de sulfatasa.
CA2516455C (en) 2003-02-20 2012-05-01 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd70 antibody-drug conjugates and their use for the treatment of cancer and immune disorders
US20090010920A1 (en) 2003-03-03 2009-01-08 Xencor, Inc. Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb
US20070275460A1 (en) 2003-03-03 2007-11-29 Xencor.Inc. Fc Variants With Optimized Fc Receptor Binding Properties
US8388955B2 (en) 2003-03-03 2013-03-05 Xencor, Inc. Fc variants
US8084582B2 (en) 2003-03-03 2011-12-27 Xencor, Inc. Optimized anti-CD20 monoclonal antibodies having Fc variants
US20070041987A1 (en) 2003-03-19 2007-02-22 Daniel Carter Fragments or polymers of albumin with tunable vascular residence time for use in therapeutic delivery and vaccine development
WO2004108885A2 (en) 2003-05-06 2004-12-16 Syntonix Pharmaceuticals, Inc. Fc chimeric proteins with anti-hiv drugs
SI1624891T2 (sl) 2003-05-06 2013-09-30 Biogen Idec Hemophilia Inc. Strjevalni faktor-FC himerni proteini za zdravljenje hemofilije
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
WO2004110498A2 (en) 2003-05-14 2004-12-23 Immunogen, Inc. Drug conjugate composition
US7276497B2 (en) 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
SI1641823T1 (sl) 2003-06-12 2011-12-30 Lilly Co Eli Fuzijski proteini analogni glp-1
CN102618605B (zh) 2003-06-18 2015-09-02 斯克利普斯研究院 非天然活性氨基酸遗传密码增加
AU2004252171B2 (en) 2003-06-27 2011-04-21 Biogen Ma Inc. Modified binding molecules comprising connecting peptides
NZ580855A (en) * 2003-07-21 2012-03-30 Immunogen Inc A CA6 antigen-specific cytotoxic conjugate and methods of using the same
EP1651768A2 (en) 2003-07-30 2006-05-03 ZymoGenetics, Inc. Pichia methanolica secretory signal
US20060134105A1 (en) 2004-10-21 2006-06-22 Xencor, Inc. IgG immunoglobulin variants with optimized effector function
US8101720B2 (en) 2004-10-21 2012-01-24 Xencor, Inc. Immunoglobulin insertions, deletions and substitutions
AU2004278747B2 (en) 2003-09-30 2011-04-28 Sterrenbeld Biotechnologie North America, Inc. A process for producing exogenous protein in the milk of transgenic mammals and a process for purifying proteins therefrom
EP2322569B1 (en) 2003-10-09 2020-08-26 Ambrx, Inc. Polymer derivatives for the selective modification of proteins
KR101192496B1 (ko) 2003-11-06 2012-10-18 시애틀 지네틱스, 인크. 리간드에 접합될 수 있는 모노메틸발린 화합물
ES2378167T3 (es) 2003-11-13 2012-04-09 Hanmi Holdings Co., Ltd Complejo de proteína que utiliza fragmento de inmunoglobulina y el método para su preparación
WO2005052006A2 (en) 2003-11-25 2005-06-09 The Government Of The United States, As Represented By The Secretary Of Health And Human Services Mutated anti-cd22 antibodies and immunoconjugates
EP1697741A4 (en) 2003-12-04 2008-02-13 Xencor Inc PROCESS FOR PRODUCING PROTEIN VARIANTS WITH INCREASED HOST STRUCTURE CONTENT AND COMPOSITIONS THEREOF
CN1893980A (zh) 2003-12-18 2007-01-10 诺沃挪第克公司 与白蛋白样物质相连的新glp－1类似物
US20050249723A1 (en) 2003-12-22 2005-11-10 Xencor, Inc. Fc polypeptides with novel Fc ligand binding sites
WO2006069220A2 (en) 2004-12-22 2006-06-29 Ambrx, Inc. Modified human growth hormone
JP4896745B2 (ja) 2004-02-02 2012-03-14 アンブレツクス・インコーポレイテツド 修飾されたヒトインターフェロンポリペプチドおよびこれらの使用
US7422696B2 (en) 2004-02-20 2008-09-09 Northwestern University Multicomponent nanorods
JP5064037B2 (ja) 2004-02-23 2012-10-31 ジェネンテック， インコーポレイテッド 複素環式自壊的リンカーおよび結合体
WO2005084390A2 (en) 2004-03-02 2005-09-15 Seattle Genetics, Inc. Partially loaded antibodies and methods of their conjugation
WO2005092925A2 (en) 2004-03-24 2005-10-06 Xencor, Inc. Immunoglobulin variants outside the fc region
US20050260711A1 (en) 2004-03-30 2005-11-24 Deepshikha Datta Modulating pH-sensitive binding using non-natural amino acids
US7662936B2 (en) 2004-04-07 2010-02-16 Genentech, Inc. Mass spectrometry of antibody conjugates
WO2005110474A2 (en) 2004-05-10 2005-11-24 Macrogenics, Inc. HUMANIZED FcϜRIIB SPECIFIC ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF
BRPI0510909A2 (pt) 2004-05-19 2008-12-16 Medarex Inc composto de ligaÇço fÁrmaco-ligante citotàxico, formulaÇço farmacÊutica, mÉtodo para matar uma cÉlula e mÉtodo para retardar ou interromper o crescimento de tumor
US7691962B2 (en) 2004-05-19 2010-04-06 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
CN114053429A (zh) 2004-06-01 2022-02-18 健泰科生物技术公司 抗体-药物偶联物和方法
JP2008503217A (ja) 2004-06-18 2008-02-07 アンブレツクス・インコーポレイテツド 新規抗原結合ポリペプチド及びそれらの使用
KR20070039593A (ko) 2004-07-21 2007-04-12 암브룩스, 인코포레이티드 비천연적으로 코딩된 아미노산을 이용한 생합성 폴리펩티드
US7126393B2 (en) 2004-08-20 2006-10-24 Micron Technology, Inc. Delay circuit with reset-based forward path static delay
MX2007002883A (es) 2004-09-13 2007-06-15 Macrogenics Inc Anticuerpos humanizados contra el virus de nilo occidental y usos terapeuticos y profilacticos del mismo.
RU2412947C2 (ru) 2004-09-23 2011-02-27 Дженентек, Инк. Антитела, сконструированные на основе цистеинов, и их конъюгаты
EA200602097A1 (ru) 2004-11-09 2007-04-27 Ю Эс Ви ЛИМИТЕД Новый способ очистки гормона роста человека
CA2587766A1 (en) 2004-11-10 2007-03-01 Macrogenics, Inc. Engineering fc antibody regions to confer effector function
US8802820B2 (en) 2004-11-12 2014-08-12 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US20070135620A1 (en) 2004-11-12 2007-06-14 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
BRPI0517837A (pt) 2004-11-12 2008-10-21 Xencor Inc variantes fc com ligação alterada a fcrn
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US7255012B2 (en) 2004-12-01 2007-08-14 Rosemount Inc. Process fluid flow device with variable orifice
KR20070100299A (ko) 2004-12-22 2007-10-10 암브룩스, 인코포레이티드 재조합 인간 성장 호르몬의 발현 및 정제 방법
WO2006068802A2 (en) 2004-12-22 2006-06-29 Ambrx, Inc. COMPOSITIONS OF AMINOACYL-tRNA SYNTHETASE AND USES THEREOF
US7638491B2 (en) 2004-12-22 2009-12-29 Ambrx, Inc. Therapies using non-natural amino acids and polypeptides
MX2007007587A (es) 2004-12-22 2007-12-11 Ambrx Inc Formulaciones de la hormona del crecimiento humano que comprenden un aminoacido codificado de manera no natural.
DK1841793T3 (da) 2005-01-07 2010-07-19 Diadexus Inc Ovr110-antistofsammensætninger og fremgangsmåder til anvendelse deraf
WO2006086733A2 (en) 2005-02-11 2006-08-17 Immunogen, Inc. Process for preparing maytansinoid antibody conjugates
US7466406B2 (en) 2005-03-14 2008-12-16 Northwestern University Analyte detection using nanowires produced by on-wire lithography
US9963510B2 (en) 2005-04-15 2018-05-08 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
US9296816B2 (en) 2005-04-15 2016-03-29 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
WO2006133089A2 (en) 2005-06-03 2006-12-14 Ambrx, Inc. Improved human interferon molecules and their uses
WO2006132969A2 (en) 2005-06-03 2006-12-14 Ambrx, Inc. Incorporation of non-naturally encoded amino acids into proteins
JP2007037018A (ja) 2005-07-29 2007-02-08 Nec Electronics Corp スイッチ回路
SI2573114T1 (sl) 2005-08-10 2016-08-31 Macrogenics, Inc. Identifikacija in inženiring protiteles z variantnimi fc regijami in postopki za njih uporabo
US8008453B2 (en) 2005-08-12 2011-08-30 Amgen Inc. Modified Fc molecules
JP4829969B2 (ja) 2005-08-18 2011-12-07 アンブルックス，インコーポレイテッド ｔＲＮＡ組成物、およびその使用
EP1931709B1 (en) 2005-10-03 2016-12-07 Xencor, Inc. Fc variants with optimized fc receptor binding properties
JP2009512443A (ja) 2005-10-20 2009-03-26 ザ スクリップス リサーチ インスチチュート 免疫染色及び免疫標的化のためのＦｃ標識化
EP1940789B1 (en) 2005-10-26 2011-11-23 Medarex, Inc. Methods and compounds for preparing cc-1065 analogs
JP2009514533A (ja) 2005-11-02 2009-04-09 アンブルックス，インコーポレイテッド 生合成ポリペプチド融合阻害剤
DE602006020480D1 (de) 2005-11-08 2011-04-14 Ambrx Inc Beschleuniger für die modifikation nichtnatürlicher aminosäuren und nichtnatürlicher aminosäurepolypeptide
JP2009520949A (ja) 2005-11-16 2009-05-28 アンブルックス，インコーポレイテッド 非天然アミノ酸を含んでいる組成物および方法
CN101448512B (zh) 2005-12-14 2015-11-25 Ambrx公司 含有非天然氨基酸和多肽的组合物、涉及非天然氨基酸和多肽的方法以及非天然氨基酸和多肽的用途
EP1978989A4 (en) 2005-12-30 2009-03-18 Ambrx Inc AMINO ACIDS AND NON-NATURAL POLYPEPTIDES, COMPOSITIONS CONTAINING THEM, METHODS INVOLVING THEM AND USES THEREOF
CA2636797A1 (en) 2006-01-19 2007-08-23 Ambrx, Inc. Non-natural amino acid polypeptides having modulated immunogenicity
US20070198996A1 (en) 2006-02-09 2007-08-23 Ziep Software Inc. System and method for driving peripheral devices
ATE467640T1 (de) 2006-02-10 2010-05-15 Zymogenetics Inc Lösliches il-17rcx4 und verfahren zu dessen anwendung bei entzündungen
US7750116B1 (en) 2006-02-18 2010-07-06 Seattle Genetics, Inc. Antibody drug conjugate metabolites
AU2007223903B2 (en) 2006-03-06 2013-09-05 Medimmune, Llc Humanized anti-CD22 antibodies and their use in treatment of oncology, transplantation and autoimmune disease
AU2007226752A1 (en) 2006-03-10 2007-09-20 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant heavy chains and methods of using same
EP2021029B1 (en) 2006-05-26 2014-06-11 MacroGenics, Inc. Humanized fc gamma riib-specific antibodies and methods of use thereof
KR101328756B1 (ko) 2006-05-30 2013-11-18 제넨테크, 인크. 항체 및 면역접합체 및 이들의 용도
CN100388056C (zh) 2006-06-02 2008-05-14 上海微电子装备有限公司 一种投影物镜光学系统
WO2008019199A2 (en) 2006-06-26 2008-02-14 Macrogenics, Inc. FCγRIIB-SPECIFIC ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF
WO2008011446A2 (en) 2006-07-18 2008-01-24 Centocor, Inc. Human glp-1 mimetibodies, compositions, methods and uses
AU2007292892B9 (en) 2006-09-08 2013-02-28 Ambrx, Inc. Hybrid suppressor tRNA for vertebrate cells
CN104328086A (zh) 2006-09-08 2015-02-04 Ambrx公司 通过脊椎动物细胞位点特异性并入非天然氨基酸
AU2007292903B2 (en) 2006-09-08 2012-03-29 Ambrx, Inc. Modified human plasma polypeptide or Fc scaffolds and their uses
CN101511856B (zh) 2006-09-08 2016-01-20 Ambrx公司 脊椎动物细胞中抑制因子trna的转录
US20080112961A1 (en) 2006-10-09 2008-05-15 Macrogenics, Inc. Identification and Engineering of Antibodies with Variant Fc Regions and Methods of Using Same
US7476555B2 (en) 2006-11-15 2009-01-13 Airdio Wireless Inc. Method of chip manufacturing
CN103172743B (zh) 2006-12-01 2015-04-08 梅达雷克斯有限责任公司 结合cd22的人抗体及其用途
WO2008140603A2 (en) 2006-12-08 2008-11-20 Macrogenics, Inc. METHODS FOR THE TREATMENT OF DISEASE USING IMMUNOGLOBULINS HAVING FC REGIONS WITH ALTERED AFFINITIES FOR FCγR ACTIVATING AND FCγR INHIBITING
CA2672205A1 (en) 2006-12-18 2008-06-26 Ambrx, Inc. Compositions containing, methods involving, and uses of non-natural amino acids and polypeptides
JP4467557B2 (ja) 2006-12-25 2010-05-26 富士通株式会社 光スイッチング方法及び光スイッチ
WO2008083346A1 (en) 2006-12-28 2008-07-10 Ambrx, Inc. Phenazine and quinoxaline substituted amino acids and polypeptides
JP5163642B2 (ja) * 2007-03-29 2013-03-13 コニカミノルタホールディングス株式会社 有機エレクトロルミネセンス素子
CA2682147C (en) 2007-03-30 2017-08-08 Ambrx, Inc. Modified fgf-21 polypeptides and their uses
US20080244222A1 (en) 2007-03-30 2008-10-02 Intel Corporation Many-core processing using virtual processors
NZ580686A (en) 2007-05-02 2012-11-30 Ambrx Inc Modified interferon beta polypeptides and their uses
PE20090245A1 (es) 2007-05-08 2009-03-17 Genentech Inc Anticuerpos anti-muc16 disenados con cisteina y conjugados de anticuerpos y farmacos
CA2693053C (en) 2007-05-30 2021-01-05 Xencor, Inc. Methods and compositions for inhibiting cd32b expressing cells
EP2175983A2 (en) 2007-06-20 2010-04-21 Northwestern University Matrix assisted ink transport
JP5496897B2 (ja) 2007-10-04 2014-05-21 ザイモジェネティクス， インコーポレイテッド Ｂ７ファミリーメンバーのｚＢ７Ｈ６ならびに関連する組成物および方法
WO2009117030A2 (en) 2007-12-19 2009-09-24 Macrogenics, Inc. Improved compositions for the prevention and treatment of smallpox
US7722865B2 (en) 2008-01-18 2010-05-25 Biomarin Pharmaceutical Inc. Manufacture of active highly phosphorylated human lysosomal sulfatase enzymes and uses thereof
WO2009124109A1 (en) 2008-04-04 2009-10-08 The Government Of The U.S. A. As Represented By The Secretary Of The Dept. Of Health &Human Services Human monoclonal antibodies specific for cd22
WO2009158432A2 (en) 2008-06-27 2009-12-30 Amgen Inc. Ang-2 inhibition to treat multiple sclerosis
JP2012509663A (ja) 2008-11-21 2012-04-26 コーニング インコーポレイテッド 細胞培養のための、突起間隔を開けた基板および装置
US9540438B2 (en) 2011-01-14 2017-01-10 Redwood Bioscience, Inc. Aldehyde-tagged immunoglobulin polypeptides and methods of use thereof
US9310374B2 (en) 2012-11-16 2016-04-12 Redwood Bioscience, Inc. Hydrazinyl-indole compounds and methods for producing a conjugate
CA2927806C (en) 2013-11-27 2023-01-10 Redwood Bioscience, Inc. Hydrazinyl-pyrrolo compounds and methods for producing a conjugate
EP3151830A4 (en) 2014-06-06 2018-02-07 Redwood Bioscience, Inc. Anti-her2 antibody-maytansine conjugates and methods of use thereof

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008514201A (ja) * 2004-09-24 2008-05-08 アムジエン・インコーポレーテツド 修飾Ｆｃ分子
JP2010504095A (ja) * 2006-09-21 2010-02-12 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア アルデヒドタグ、部位特異的タンパク質修飾におけるその使用
WO2009120611A2 (en) * 2008-03-27 2009-10-01 The Regents Of The University Of California Aldehyde tags, uses thereof in site-specific protein modification
WO2010096394A2 (en) * 2009-02-17 2010-08-26 Redwood Biosciences, Inc. Aldehyde-tagged protein-based drug carriers and methods of use

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PROC. NATL. ACAD. SCI., USA, vol. 106, no. 9, JPN6015050728, 2009, pages 3000 - 3005, ISSN: 0003218259 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2020506685A (ja) * 2017-01-18 2020-03-05 ビステラ， インコーポレイテッド 抗体分子−薬物コンジュゲートおよびその使用
JP7303110B2 (ja) 2017-01-18 2023-07-04 ビステラ， インコーポレイテッド 抗体分子－薬物コンジュゲートおよびその使用

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