JP2014504874A - 新規フコシルトランスフェラーゼおよびそれらの用途 - Google Patents
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Abstract
Description
a)添付の配列表の配列番号1;
b)配列番号1に相補的な核酸配列;
c)a)およびb)で定義した核酸配列またはそれらの相補鎖にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸配列。
(a)配列番号2で示されるアミノ酸配列;
(b)配列番号2で示されるアミノ酸配列の対立遺伝子変異体のアミノ酸配列であって、上記対立遺伝子変異体が、配列番号1で示される核酸分子の反対の鎖にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸分子によってコードされているものであるアミノ酸配列;
(c)配列番号2で示されるアミノ酸配列のオルソログのアミノ酸配列であって、上記オルソログが、配列番号1で示される核酸分子の反対の鎖にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸分子によってコードされているものであるアミノ酸配列;および
(d)配列番号2で示されるアミノ酸配列の断片であって、少なくとも10個の連続するアミノ酸を含み、α−1,2−フコシルトランスフェラーゼ活性を有する断片。
a.本発明によるα−1,2−フコシルトランスフェラーゼ活性を有するポリペプチドを提供する段階、
b.段階aのα−1,2−フコシルトランスフェラーゼ活性を有するポリペプチドを、フコース残基を含むドナー基質、および単糖、オリゴ糖、(糖)タンパク質または(糖)脂質を含むアクセプター基質と、該ポリペプチドが、該ドナー基質から該アクセプター基質へのフコース残基の転移を触媒する条件下で接触させ、それによってフコシル化オリゴ糖、(糖)タンパク質または(糖)脂質を生産する段階。
a.フコシル化オリゴ糖、(糖)タンパク質および/または(糖)脂質の生産が可能かつα−1,2−フコシルトランスフェラーゼ活性を有するポリペプチドの発現が可能な適する栄養条件下で、上記したような宿主細胞を増殖させる段階;
b.段階aと同時にまたは段階aの後に、フコース残基を含むドナー基質と、オリゴ糖、(糖)タンパク質または(糖)脂質を含むアクセプター基質とを提供する段階であって、その結果、上記宿主細胞において発現されたα−1,2−フコシルトランスフェラーゼが、該ドナー基質から該アクセプター基質へのフコース残基の転移を触媒し、それによってフコシル化オリゴ糖、(糖)タンパク質または(糖)脂質を生産する段階;および
c.上記宿主細胞またはその増殖培地から、上記フコシル化オリゴ糖、(糖)タンパク質および/または(糖)脂質を単離する段階。
a)i)添付の配列表からの配列番号1、ii)配列番号1に相補的な核酸配列、ならびにiii)i)およびii)で定義した核酸配列またはそれらの相補鎖にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸配列から選択される核酸配列を含むように形質転換またはトランスフェクトされた宿主細胞を適する栄養条件下で増殖させる段階であって、その結果、i)、ii)およびiii)から選択される上記核酸配列が、α−1,2−フコシルトランスフェラーゼ活性を有するペプチドとして発現されることとなる段階;
b)段階aと同時にまたは段階aの後に、フコース残基を含むドナー基質と、オリゴ糖、(糖)タンパク質または(糖)脂質を含むアクセプター基質とを提供する段階であって、その結果、上記宿主細胞において発現されたα−1,2−フコシルトランスフェラーゼが、該ドナー基質から該アクセプター基質へのフコース残基の転移を触媒し、それによってフコシル化オリゴ糖、(糖)タンパク質または(糖)脂質を生産する段階;および
c)上記宿主細胞またはその増殖培地から上記フコシル化オリゴ糖、(糖)タンパク質および/または(糖)脂質を単離する段階。
Claims (18)
- α−1,2−フコシルトランスフェラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、
a)添付の配列表の配列番号1;
b)配列番号1に相補的な核酸配列;
c)a)およびb)で定義した核酸配列またはそれらの相補鎖にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸配列
から成る群より選択される配列を含むポリヌクレオチド。 - α−1,2−フコシルトランスフェラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする配列番号1から成る、請求項1に記載のポリヌクレオチド。
- α−1,2−フコシルトランスフェラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする請求項1または2に記載の核酸配列を含有するベクターであって、該核酸配列が、該ベクターで形質転換された宿主細胞によって認識される制御配列に作動可能に連結されているものであるベクター。
- α−1,2−フコシルトランスフェラーゼ活性を有するポリペプチドであって、
(a)配列番号2で示されるアミノ酸配列;
(b)配列番号2で示されるアミノ酸配列の対立遺伝子変異体のアミノ酸配列であって、前記対立遺伝子変異体が、配列番号1で示される核酸分子の反対の鎖にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸分子によってコードされているものであるアミノ酸配列;
(c)配列番号2で示されるアミノ酸配列のオルソログのアミノ酸配列であって、前記オルソログが、配列番号1で示される核酸分子の反対の鎖にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸分子によってコードされているものであるアミノ酸配列;および
(d)配列番号2で示されるアミノ酸配列の断片であって、少なくとも10個の連続するアミノ酸を含む断片
から成る群より選択されるアミノ酸配列から成るポリペプチド。 - 宿主細胞であって、請求項3に記載のベクターを含有するものである、または請求項1もしくは2に記載のポリヌクレオチドから成る配列を含有し、該配列が該宿主細胞にとって外来の配列であり、該配列が該宿主細胞のゲノムに組み込まれているものである宿主細胞。
- 真菌(酵母を含む)、細菌、昆虫、動物および植物細胞から成る群より選択されることを特徴とする、請求項5に記載の宿主細胞。
- 大腸菌細胞であることを特徴とする、請求項5または6に記載の宿主細胞。
- α−1,2−フコシルトランスフェラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸が、それぞれの細胞のコドン使用頻度に適合していることを特徴とする、請求項5から7のいずれかに記載の宿主細胞。
- フコシル化オリゴ糖、(糖)タンパク質および/または(糖)脂質の生産のための、請求項1もしくは2のいずれかに記載のポリヌクレオチドの、または請求項3に記載のベクターの、または請求項4に記載のポリペプチドの使用。
- 前記フコシル化オリゴ糖、(糖)タンパク質および/または(糖)脂質の生産が、α−1,2−フコシルトランスフェラーゼをコードするポリヌクレオチドの異種または同種発現によって行われることを特徴とする、請求項9に記載の使用。
- フコシル化オリゴ糖が、人乳から既知のオリゴ糖である、請求項9または10に記載の使用。
- フコシル化オリゴ糖が、2’−フコシルラクトースであることを特徴とする、請求項11に記載の使用。
- フコシル化オリゴ糖、(糖)タンパク質および(糖)脂質を生産するための方法であって、
a.請求項4に記載のα−1,2−フコシルトランスフェラーゼ活性を有するポリペプチドを提供する段階、
b.段階aのα−1,2−フコシルトランスフェラーゼ活性を有するポリペプチドを、フコース残基を含むドナー基質と単糖、オリゴ糖、(糖)タンパク質または(糖)脂質を含むアクセプター基質とを含む混合物と、該ポリペプチドが、該ドナー基質からの該アクセプター基質へのフコース残基の転移を触媒する条件下で接触させ、それによってフコシル化オリゴ糖、(糖)タンパク質または(糖)脂質を生産する段階
を含む方法。 - フコシル化オリゴ糖、(糖)タンパク質および(糖)脂質を生産するための方法であって、
a.フコシル化オリゴ糖、(糖)タンパク質および/または(糖)脂質の生産が可能かつα−1,2−フコシルトランスフェラーゼ活性を有するポリペプチドの発現が可能な適する栄養条件下で、請求項5から8に記載の宿主細胞を増殖させる段階;
b.段階aと同時にまたは段階aの後に、フコース残基を含むドナー基質と、単糖もしくはオリゴ糖、(糖)タンパク質または(糖)脂質を含むアクセプター基質とを提供する段階であって、その結果、α−1,2−フコシルトランスフェラーゼポリペプチドが、該ドナー基質から該アクセプター基質へのフコース残基の転移を触媒し、それによってフコシル化オリゴ糖、(糖)タンパク質または(糖)脂質を生産する段階;および
c.宿主細胞またはその増殖培地から、前記フコシル化オリゴ糖、(糖)タンパク質および/または(糖)脂質を単離する段階
を含む方法。 - ドナー基質がGDP−フコースであることを特徴とする、請求項12または13に記載の方法。
- GDP−フコースが、宿主細胞において同時に発現される酵素によって、または宿主細胞の代謝によって提供されることを特徴とする、請求項12から14のいずれかに記載の方法。
- 請求項9から11のいずれかに記載の使用によってまたは請求項12から15のいずれかに記載の方法によって得られる、フコシル化オリゴ糖、(糖)タンパク質および/または(糖)脂質。
- 単離されている、組み換え型のものであるまたは合成のものであることを特徴とする、請求項1もしくは2に記載のポリヌクレオチドまたは請求項4に記載のポリペプチド。
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