JP2014223082A5 - - Google Patents
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Description
このデバイスは、周知のように電極アレイを備え、さらに、1つの主マイクロチャンバ(CHM)と複数の補助マイクロチャンバ(CHJ)とを備えることを特徴とする。各補助マイクロチャンバは、活性化可能な電極アレイを備える単一のチップあるいは分離した複数のチップにより、少なくとも1つの面上で区切られている。入口(IM1)および出口(OM1)を介して、少なくとも1つの細胞を含む検体を主マイクロチャンバに入れる。各補助マイクロチャンバ(CHJ)の大きさは、1つの細胞の大きさとほぼ同等で、かつ、少しだけ大きいことが望ましい。分析を行っている間に検体が分散して他の補助マイクロチャンバに拡散し、これを汚染することがないような(分散を防ぐあるいは少なくとも抑制する)構造(長さおよび/あるいは形状)のチャネルで、各補助マイクロチャンバを主マイクロチャンバに接続することが望ましい。図示した例では、複数の溶解用補助マイクロチャンバを、たとえば、十字型継手で、オンチップのキャピラリー電気泳動用チャネルに接続する。あるいは、周知のように、キャピラリー電気泳動用の一組のチャネルを2重T字型接合するようにしてもよい。また、キャピラリー電気泳動用チャネルの端部にインピーダンス測定および/あるいは光測定型の集積センサーを設置して、分析対象化合物の交点(十字型あるいは2重T字型の交点)からセンサーまでの移動時間に基づく電気泳動図を作成するようにしてもよい。図10に示す例では、複数のマイクロチャンバの各々が、各補助マイクロチャンバの流体出口(OJ)を介して、電気泳動用キャピラリー(CAPJ)に接続される。
Claims (27)
- 非侵襲的出生前診断のためのシステムの操作方法であって、
前記システムは、アレイ状に配置された複数の部位を有するマイクロ流体デバイスを備え、
前記方法は、
a.胎児有核細胞を含有する可能性の高い妊婦由来の有機流体検体を前記マイクロ流体デバイス内に取り込む工程と、
b.前記有機流体検体の濃縮を行い、少なくとも1種類の胎児有核細胞を含む少なくとも1つの細胞集団を得る工程と、
c.前記マイクロ流体デバイスによって、前記少なくとも1種類の胎児有核細胞から少なくとも1つの細胞を単離する工程と、
d.前記少なくとも1種類の胎児有核細胞から単離した前記少なくとも1つの細胞に対して遺伝子解析を行い、前記診断に適した少なくとも1つの胎児有核細胞の遺伝的特徴を明らかにする工程と、を備え、
前記工程c)は、
i)胎児細胞を母体細胞から区別するのに適した胎児細胞用特異抗体で胎児細胞を標識する段階を備え、
ii)前記マイクロ流体デバイスを用いて、前記マイクロ流体デバイスの前記複数の部位において単一細胞を採取することにより、単一細胞を個別に選別して実行され、
iii)前記マイクロ流体デバイスにおいて採取された単一細胞が個別に選択され、あらかじめ前記特異抗体で標識されることにより実行され、
前記工程(i)は、
第1波長の光を放出する蛍光マーカーであって、細胞核に特異的な第1マーカーで、前記有機流体検体の有核細胞を標識し、
前記第1波長とは異なる第2波長の光を放出する蛍光マーカーであって、前記第1マーカーと識別可能であり、前記胎児細胞を前記母体細胞から区別するのに適した前記胎児の胎児有核細胞を含む少なくとも1つの細胞集団を標識する処理を含み、
前記工程(ii)は、前記有機流体検体中の細胞の自家蛍光により放出される第3波長の光の放出を検出して、前記第1波長の光と前記第2波長の光を両方とも放出すると同時に前記第3波長の光を放出しない細胞のみを選別することにより実行される、方法。 - 請求項1記載の方法であって、
前記少なくとも1種類の胎児有核細胞から少なくとも1つの細胞を単離する工程は、
前記マイクロ流体デバイスにおける複数の部位の中の所定部位から、単一細胞を採取した後、
前記マイクロ流体デバイスの内部あるいは外部のセンサーにより検出可能な少なくとも1つのパラメータに基づいて、前記採取した細胞から単一細胞を選別する、ことによって実行される、方法。 - 請求項1あるいは2のいずれかに記載の方法であって、
前記有機流体検体の濃縮を行う工程は、
細胞の選別であって、
a.密度
b.形態
c.電気的特性
d.化学的特性
e.機械的特性
f.表面抗原の発現
g.細胞質内抗原の発現
h.誘電特性
i.磁気特性
からなるパラメータ群から選択される少なくとも1つのパラメータあるいはその組み合わせに基づいて行われる、細胞の選別を含む、方法。 - 請求項3に記載の方法であって、
前記有機流体検体の濃縮を行い、前記少なくとも1種類の胎児有核細胞を含む少なくとも1つの細胞集団を得る工程は、
前記有機流体検体を処理することにより、前記有核細胞を分離し、濃縮の結果としての有核細胞を得る工程を含む、方法。 - 請求項4に記載の方法であって、
前記有機流体検体を処理することにより、前記有核細胞を分離し、濃縮の結果としての有核細胞を得る工程は、前記有機流体検体を密度勾配に基づいて遠心分離する工程を含む、方法。 - 請求項1から5のいずれか1項に記載の方法であって、
前記濃縮工程は、選別であって、少なくとも1種類の胎児有核細胞を含む前記細胞集団が有する以下の特性:すなわち、
a.CD71表面抗原の発現
b.CD34表面抗原の発現
c.GPA表面抗原の発現
d.CD14表面抗原の非発現
e.CD15表面抗原の非発現
f.CD45表面抗原の非発現
のうちの少なくとも1つに基づいた選別を含む、方法。 - 請求項1から6のいずれか1項に記載の方法であって、
前記濃縮工程の後で、かつ、前記少なくとも1種類の胎児有核細胞から少なくとも1つの細胞を単離する工程の前に、前記有機流体検体を希釈する工程を備え、
前記希釈は、前記濃縮工程の直後に前記有機流体検体から分けた前記検体の所定体積の部分に存在する有核細胞の計数値に基づいて、行われる、方法。 - 請求項1から7のいずれか1項に記載の方法であって、
前記濃縮工程と前記遺伝子解析を行う工程のいずれか1つあるいは両方の工程は、前記単離工程で用いた前記マイクロ流体デバイスと同一の前記マイクロ流体デバイス内で、前記単離工程と組み合わせて行われる、方法。 - 請求項8に記載の方法であって、
前記マイクロ流体デバイスは、相互に分離される一方で油圧で接続される複数の異なったチャンバを備え、前記複数の異なったチャンバは、活性化可能な電極アレイを備える単一のチップあるいは分離した複数のチップにより、少なくとも1つの側で区切られている、方法。 - 請求項1から9のいずれか1項に記載の方法であって、
前記胎児細胞を前記母体細胞から区別するのに適した胎児細胞用特異抗体で前記胎児細胞を標識する工程は、
*胎児トロホブラスト抗原を認識する抗体と、
*胎児表面抗原を認識する抗体と、
*胎児細胞内抗原を認識する抗体と、
から成る抗体群から選択される特異抗原に対するさまざまな抗体を使用して、行われる、方法。 - 請求項10に記載の方法であって、
前記胎児トロホブラスト抗原は、HLA−Gであり、
前記胎児表面抗原は、i抗原であり、
前記胎児細胞内抗原は、ヘモグロビン鎖γおよびεである、方法。 - 請求項10あるいは11のいずれか1項に記載の方法であって、
前記胎児細胞を前記母体細胞から区別するのに適した胎児細胞用特異抗体は、蛍光抗体である、方法。 - 請求項10から12のいずれか1項に記載の方法であって、
前記胎児細胞を前記母体細胞から区別するのに適した胎児細胞用特異抗体は、蛍光ビーズと接合されている、方法。 - 請求項11から13のいずれか1項に記載の方法であって、
前記有機流体検体は、少なくとも1種類の胎児有核細胞を含む少なくとも1つの細胞集団を含む血液検体である、方法。 - 請求項14に記載の方法であって、
前記第1波長と前記2波長は、それぞれ青色波長と緑色波長である、方法。 - 請求項15に記載の方法であって、
前記第3波長は、赤色波長である、方法。 - 請求項10から16のいずれか1項に記載の方法であって、
細胞を標識後、標識した細胞の固定および透過処理を行って、細胞質内抗体を用いて胎児細胞を識別する工程をさらに備える、方法。 - 請求項1から17のいずれか1項に記載の方法であって、
前記遺伝子解析を行う工程は、
QC−PCRにより行われ、
前記少なくとも1つの胎児有核細胞の遺伝情報と少なくとも1つの母体有核細胞の遺伝子情報とを比較する工程を含む、方法。 - 請求項1から18のいずれか1項に記載の方法であって、
前記有機流体検体の濃縮を行い、少なくとも1種類の胎児有核細胞を含む少なくとも1つの細胞集団を得る工程は、
前記少なくとも1種類の胎児有核細胞を含む少なくとも1つの細胞集団が得られた濃縮された前記有機流体検体を培養液に入れて、前記検体について濃縮する工程を繰り返す工程、を含む、方法。 - 請求項1から19のいずれか1項に記載の方法であって、
前記有機流体検体は、子宮細胞、経頸管細胞、もしくは頸管内細胞、または母体末梢血から選択される細胞を含むように選択される、方法。 - 請求項1から20のいずれか1項に記載の方法であって、
単一細胞の選別に用いられる前記マイクロ流体デバイスは、使い捨て可能なデバイスである、方法。 - 非侵襲的出生前診断のためのマイクロ流体デバイスの使用であって、
前記マイクロ流体デバイスを用いて、少なくとも1種類の胎児有核細胞から単一細胞を個別に選別し、
前記胎児有核細胞は、胎児細胞を母体細胞から区別するのに適した胎児細胞用特異抗体であらかじめ標識され、
前記少なくとも1種類の胎児有核細胞は、胎児有核細胞を含有する可能性の高い有機流体から濃縮され、
前記有機流体は、妊婦由来のものであって、前記少なくとも1種類の胎児有核細胞を含む少なくとも1つの細胞集団が得られるように濃縮され、
前記マイクロ流体デバイスを用いて、あらかじめ前記特異抗体で標識された前記少なくとも1種類の胎児有核細胞から少なくとも1つの細胞を単離した後に、前記少なくとも1種類の胎児有核細胞から単離された前記少なくとも1つの細胞に対して遺伝子解析を行い、前記診断に適した少なくとも1つの胎児有核細胞の少なくとも1つの遺伝的特徴を明らかにし、
前記マイクロ流体デバイスは、
i)前記マイクロ流体デバイスにおける複数の部位であって、前記マイクロ流体デバイス内においてアレイ状に配置された複数の部位の中の所定部位から単一細胞を採取する手段であって、少なくとも1つのパラメータに基づいて、前記採取された細胞から前記単一細胞を選別して、胎児細胞のみを遺伝子解析の対象とする手段と、
ii)あらかじめ前記特異抗体で標識され前記マイクロ流体デバイス内に存在する前記単一細胞を個別に選別することにより少なくとも1つの胎児細胞を単離する手段であって、あらかじめ前記特異抗体で標識された前記少なくとも1種類の胎児有核細胞から少なくとも1つの細胞を単離する手段と、を備え、
前記有機流体の有核細胞は、第1波長の光を放出する蛍光マーカーであって、細胞核に特異的な第1マーカーで標識され、
前記少なくとも1種類の胎児有核細胞を含む前記少なくとも1つの細胞集団は、前記第1波長とは異なる第2波長の光を放出する蛍光マーカーであって、前記第1マーカーと識別可能であり、前記胎児細胞を前記母体細胞から区別するのに適した前記胎児細胞用特異抗体である第2マーカーで標識され、
前記少なくとも1つの胎児細胞を単離する際の前記マイクロ流体デバイスによる前記単一細胞の個別の選別は、前記有機流体中の細胞の自家蛍光により放出される第3波長の光の放出を検出して、前記第1波長の光と前記第2波長の光を両方とも放出すると同時に前記第3波長の光を放出しない細胞のみを選別することにより実行される、使用。 - 請求項22に記載の使用であって、
前記胎児細胞を前記母体細胞から区別するのに適した前記胎児細胞用特異抗体による前記胎児細胞の標識は、
*胎児トロホブラスト抗原を認識する抗体と、
*胎児表面抗原を認識する抗体と、
*胎児細胞内抗原を認識する抗体と、
から成る抗体群から選択される特異抗原に対するさまざまな抗体を使用して、行なわれる、使用。 - 請求項23に記載の使用であって、
前記胎児トロホブラスト抗原は、HLA−Gであり、
前記胎児表面抗原は、i抗原であり、
前記胎児細胞内抗原は、ヘモグロビン鎖γおよびεである、使用。 - 請求項23に記載の使用であって、
前記有機流体は、少なくとも1種類の胎児有核細胞を含む少なくとも1つの細胞集団を含有する血液検体である、使用。 - 請求項25に記載の使用であって、
前記第1波長と前記第2波長は、それぞれ青色波長と緑色波長である、使用。 - 請求項25に記載の使用であって、
前記第3波長は赤色波長である、使用。
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