JP2014094901A - ストレス改善用組成物 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】S−1−プロペニル−L−システインスルフォキシド、S−プロピル−L−システインスルフォキシド、S−メチル−L−システインスルフォキシドおよびS−アリル−L−システインスルフォキシドからなる群より選択される少なくとも1種の含硫アミノ酸を有効成分とするストレス予防または改善剤。
【選択図】なし
Description
タマネギ(北もみじ2000)5000gを洗浄、脱皮した後に、切断せず丸ごと95℃の湯浴中にて20分間加熱処理した。
加熱処理後のタマネギを、ミキサー(Oster社製)を用いて破砕し、ここにタマネギ1g当たり1mLの水を添加し分散させた。得られた分散液に、グルタミナーゼ(グルタミナーゼSD-C100S;天野エンザイム製)を液中のタマネギの全量に対して0.025質量%の量で添加し、60℃にて2時間反応させ、反応終了後90℃で15分間加熱して酵素を失活させた。得られた反応液を6,000rpm、30分間遠心分離し、吸引ろ過し、その後凍結乾燥して、含硫アミノ酸約3質量%を含むタマネギ粗抽出物約500gを得た。
上記タマネギ粗抽出物に蒸留水を添加して30%(w/v)水溶液を得た。この水溶液1000mLを試料溶液として、塩酸により再生した強酸性陽イオン交換樹脂(ダイヤイオンSK1B、三菱化学製)500mLに通液した。次いで、蒸留水3000mLによりカラム内に残留した試料溶液を洗い出した。その後、5%水酸化ナトリウム溶液(pH=14)1000mLをカラムに通液し、イオン交換樹脂に吸着した含硫アミノ酸を溶出させた。さらに蒸留水2000mLを添加し、カラム内に残留した液を溶出させた。水酸化ナトリウム溶液により溶出した溶出液と蒸留水により溶出した溶出液とを合一し、エバポレーター(東京理科機械製)により濃縮後、脱塩処理を行って、含硫アミノ酸含有溶液を得た。これを凍結乾燥し、含硫アミノ酸を含む組成物を約40g得た。高速液体クロマトグラフィー(HPLC)分析の結果、当該組成物は、S−1−プロペニル−L−システインスルフォキシドおよびS−メチル−L−システインスルフォキシドを合計で約28質量%含有していた。
生体がストレス環境下に置かれると、副腎皮質の機能が亢進し、副腎皮質ホルモンであるコルチコステロンの産生が増加することにより、種々のストレス反応が惹起されることが知られている(ストレスの事典、河野友信・石川俊男編、朝倉書店、2005年10月)。そこで、夜間拘束ストレスモデル動物(J of Andrology, 1989, Vol.10, No.3:210-213を参照)を用いて、含硫アミノ酸含有組成物の抗ストレス効果を調べた。すなわち、動物に拘束ストレスを負荷し、このストレスにより生じるコルチコステロンの血中量増加に対する含硫アミノ酸含有組成物の効果を測定した。
動物はマウス(雄性ddy、11週齢)を用い、検疫期間中に異常の認められない個体を、体重に偏りの無いように1群4匹ずつに群分けして試験に供した。動物は、昼12時間、夜12時間の照明条件で飼育及び試験を行った。予備飼育として5週間、S−1−プロペニル−L−システインスルフォキシド(PCSO;日本ケミカル交易株式会社製)を2質量%含有する水、および飼料(CE−2;日本クレア株式会社製)を自由摂取させた。その後1週間、1日あたり18時間(夜間)、50mLプラスチックチューブに呼吸口を加工した拘束ストレスホルダーにて各動物に拘束ストレスを負荷した。ストレス負荷期間の飲水(PCSO 2質量%含有水)および飼料の摂取は自由とした。なお対照群には、PCSO 2質量%含有水の代わりにPCSOを添加しない水を与え、同じ拘束ストレスを負荷した。ストレス期間1週間を含む投与期間6週間の後、各動物から採血を行って、下記のELISA法により血中のコルチコステロン量を測定した。
(1)試薬
標準抗原:コルチコステロン(SIGMA製)。
標識抗原:コルチコステロン(SIGMA製)をビオチンヒドラジドと反応させ、ビオチン化コルチコステロンを調製した。
抗血清:コルチコステロン(SIGMA製)をフロイント完全アジュバント化したものをウサギに免疫し、抗コルチコステロン血清を調製した。
希釈液:0.04%Tween20、0.5%BSA、25mMEDTAを含有するリン酸緩衝液を用いた。
(2)測定
マイクロプレート(Nunc製)をヤギ抗ウサギγグロブリン抗体(2mg/Well)にて固相化し、1%BSA−リン酸緩衝液にてブロッキングを行った。採血後の血液から血漿サンプルを調製した。希釈液で希釈した血漿サンプル、標識抗原および抗血清をウェルに添加して室温で1時間反応させた。反応終了後、各ウェルを洗浄し、ストレプトアビジン結合ペルオキシダーゼ(Jackson immunoresearch製)を添加して30分間反応させた。反応終了後、ウェルを洗浄し、o−フェニレンジアミン/過酸化水素水溶液を添加して発色させ、プレートリーダーを用いて各ウェルの吸光度を測定した。測定結果を用いて、標準抗原であるコルチコステロンの検量線から血中コルチコステロン量を算出した。
実施例1と同様の手順で、ただしPCSOの代わりに製造例1で調製した含流アミノ酸含有組成物を8質量%含有する水を与え、投与6週間後の血中のコルチコステロン量を測定した。結果を表2に示す。製造例1の組成物の摂取により、血中コルチコステロン量が顕著に低下し、動物のストレスが低減されたことが示された。
Claims (4)
- S−1−プロペニル−L−システインスルフォキシド、S−プロピル−L−システインスルフォキシド、S−メチル−L−システインスルフォキシドおよびS−アリル−L−システインスルフォキシドからなる群より選択される少なくとも1種の含硫アミノ酸を有効成分とするストレス予防または改善剤。
- 前記含硫アミノ酸がネギ属植物に由来する、請求項1記載のストレス予防または改善剤。
- 前記含硫アミノ酸を25質量%以上含有する組成物である、請求項1又は2記載のストレス予防または改善剤。
- (i)ネギ属植物を加熱し、(ii)加熱されたネギ属植物をγ−グルタミル結合切断酵素で処理し、次いで(iii)得られた酵素処理物をイオン交換クロマトグラフィーに供することによって調製された、請求項1〜3のいずれか1項記載のストレス予防または改善剤。
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