JP2014012645A - キューティクル細胞分化促進剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】エスクレチン、クエルセチン及びバイカレインから選ばれる少なくとも1種のポリフェノール関連化合物を有効成分とするキューティクル細胞分化促進剤。
【選択図】なし
Description
<1>エスクレチン、クエルセチン及びバイカレインから選ばれる少なくとも1種のポリフェノール関連化合物阻害剤を有効成分とするキューティクル細胞分化促進剤。
<2>エスクレチン、クエルセチン及びバイカレインから選ばれる少なくとも1種のポリフェノール関連化合物阻害剤を有効成分とするキューティクル生成促進剤。
<3>エスクレチン、クエルセチン及びバイカレインから選ばれる少なくとも1種のポリフェノール関連化合物を有効成分とする美髪剤。
<4>エスクレチン、クエルセチン及びバイカレインから選ばれる少なくとも1種のポリフェノール関連化合物を含有する毛髪化粧料。
<6>植物抽出物がヨモギの抽出物である<1>〜<5>の毛髪化粧料等。
<7>美髪化粧料である<1>〜<6>の毛髪化粧料等。
<8>エスクレチン、クエルセチン及びバイカレインから選ばれる少なくとも1種のポリフェノール関連化合物の含有量が、毛髪化粧料等を基準として下限が0.00001%以上、好ましくは0.0001%以上、より好ましくは0.001%以上であり、上限が1%以下、好ましくは0.5%以下、より好ましくは0.1%以下である<1>〜<7>の毛髪化粧料。
<9>アルメリア・マリチマ(Armeria maritima)から得られる抽出物、マトリカリア・マリチマ(Matricaria maritima)から得られる抽出物及びルイボス(Aspalathus linearis)から得られる抽出物から選ばれる少なくとも1種の抽出物をさらに含有する<4>〜<8>の毛髪化粧料。
<10>前記抽出物の含有量が、毛髪化粧料の総量を基準として、抽出物中の乾燥固形分換算で、0.00001%以上、好ましくは0.0001%以上、より好ましくは0.01%以上であり、1%以下、好ましくは0.5%以下、より好ましくは0.1%以下である<9>の毛髪化粧料。
SW480細胞を、10%FBS含有DMEM培地にて、CO2インキュベータ中、37℃で前培養した。24穴プレートに播種して培養し、50%コンフルエントになった段階で1%FBS含有DMEM培地に培地交換した。翌日、評価試料を所定濃度で含有する培地に交換して培養を続けた。2日後、PBSで2回細胞を洗浄した後、細胞を回収し、蛋白質を抽出した。蛋白質は、50mmol/Lのジチオスレイトール(DTT)と1mmol/LのEDTAを含有する0.1mol/L Tris−HCl(pH7.6)1mLにより抽出した。抽出液は、Ultracel−3k(アミコン社製)を用いて100μL以下まで遠心濃縮した後、その蛋白質量を定量(CBBG)した。抽出液をモノヨード酢酸処理し、蛋白質量で250μg相当を2次元電気泳動した。次いで泳動ゲルからPVDF膜に蛋白質を電気転写し、ウェスタンブロッティングに供した。常法に従って、最初にS100A3蛋白質に対するウサギ抗体、次いでAlexaFluor488標識ヤギ抗ウサギIgGと反応させた後、タイフーンシステム(GEヘルスケア社製)を用いて蛍光スポットを検出した。これにより、S100A3蛋白質に相当するpI4.5とpI4.3の2つのスポットが検出された。
S100A3蛋白質は、シトルリン化の対象となるアルギニンを4つ含むが、このうちSW480細胞ではArg51のみがシトルリン化され、ここがシトルリン化されることで等電点pIは4.5から4.3に低下する。
S100A3蛋白質のシトルリン化率は、ウェスタンブロッティングした2次元電気泳動ゲル上における、S100A3蛋白質のpI4.5とpI4.3のスポットの強度の比率から算出した。具体的には、pI4.5とpI4.3の2つのスポットの強度(IpI4.5、IpI4.3)を、画像解析ソフトウエア(Scion Image)で数値化し、次式に従ってA100A3のArg51のシトルリン化率(Cit51化率)を計算した。シトルリン化促進効果は、このCit51化率を指標として評価した。
上記のシトルリン化率測定方法により、エスクレチン(東京化成社製)、クエルセチン(シグマアルドリッチ社製)、バイカレイン(シグマアルドリッチ社製)のS100A3蛋白質シトルリン化促進効果を評価した。
SW480細胞(DSファーマバイオメディカル社より購入)を、10%FBS含有DMEM培地にて、CO2インキュベータ中、37℃で前培養した。24穴プレートに播種して培養し、50%コンフルエントになった段階で1%FBS含有DMEM培地に培地交換した。翌日、評価試料を乾燥固形分として1〜100μg/mLに相当する量を含有する培地に交換して培養を続けた。2日後、PBSで2回洗浄した後、細胞を回収し、市販のRNAキット(RNAeasy Mini kit、Qiagen社製)を用いて全RNAを精製した。
得られたRNAから逆転写酵素(SuperScript II、Invitrogen社製)により相補DNA(cDNA)を作製した。次いで、アプライド・バイオシステム社製のuniversal PCR polymerase mix並びに各目的遺伝子に特異的にハイブリッド形成するTaqManプローブを混合して定量PCR反応を行った。反応は、50℃(2min)の後、95℃(10min)で反応させた後、95℃(15sec)と60℃(1min)のサイクルを40サイクル繰り返した。反応は、アプライド・バイオシステム社製のStepOnePlus Reak-Time PCR systemを用いて行った。
目的とする遺伝子の発現量は、ハウスキーピング遺伝子であるG3PDH遺伝子の発現量を基準として標準化し、試料無添加群をコントロール群として、コントロールに対する相対的な発現量を指標として評価した。
上記のS100A3遺伝子発現解析法により、植物抽出物のS100A3遺伝子発現促進効果を評価した。評価には、アルメリア・マリチマから得られる抽出物として、Biotech Marine社製の「Armeria Maritima BG40」(40%1,3−ブチレングリコール水溶液抽出液、固形分含量1.2%)を、マトリカリア・マリチマから得られる抽出物として、Biotech Marine社製の「Anthemis Maritima」(水抽出液、固形分含量1.3%)を、ルイボスから得られる抽出物として、一丸ファルコス社製の「ファルコレックス ルイボスB(N)」(50%1,3−ブチレングリコール水溶液抽出液、固形分含量0.5%)を供した。
処方成分 配合量
POE(2)ラウリルエーテル硫酸ナトリウム 7.0
ラウリル硫酸アンモニウム 5.0
ラウロイルメチル−β−アラニンナトリウム液 1.0
ラウリン酸アミドプロピルベタイン液 4.0
グリセリン 0.5
ジプロピレングリコール 0.5
ジステアリン酸グリコール 2.0
ヤシ油脂肪酸モノエタノールアミド 1.0
ジメチコンエマルジョン 2.0
(BY22−050A;東レ・ダウコーニング社製)
ヨモギ葉エキス(ガイヨウ抽出液BG;丸善製薬社製) 0.1
カミツレ花エキス(カミツレ抽出液BG−J;丸善製薬社製) 0.1
エスクレチン(東京化成社製) 0.02
クエルセチン(シグマアルドリッチ社製) 0.02
アンテミス・マリチマ抽出液 0.1
(Anthemis Maritima;Biotech Marine社製)
ルイボス抽出液 0.1
(ファルコレックス ルイボスB(N);一丸ファルコス社製)
ヒドロキシプロピルトリモニウムハニー 0.1
(ハニーコート50PF;Arch Personal Products L.P.社製)
カチオン化セルロース誘導体 0.5
(カチナールHC−200;東邦化学社製)
ジメチルジアリルアンモニウムクロライド・ 1.0
アクリルアミドコポリマー(マーコート550;NALCO社製)
EDTA・2Na 0.1
安息香酸ナトリウム 0.1
メチルパラベン 0.1
フェノキシエタノール 0.2
クエン酸 適 量
香料 適 量
精製水 残 余
処方成分 配合量
ステアリルアルコール 4.5
セタノール 0.5
グリセリン 1.0
プロピレングリコール 2.0
ヨモギ葉エキス(ガイヨウ抽出液BG;丸善製薬社製) 0.1
カミツレ花エキス(カミツレ抽出液BG−J;丸善製薬社製) 0.1
エスクレチン(東京化成社製) 0.02
クエルセチン(シグマアルドリッチ社製) 0.02
アルメリア・マリチマ抽出液 0.1
(Armeria Maritima BG40;Biotech Marine社製)
アンテミス・マリチマ抽出液 0.1
(Anthemis Maritima;Biotech Marine社製)
ローズヒップ油 0.1
オリーブ油 0.1
ハチミツ 0.1
加水分解ダイズタンパク液(プロモイスWS;成和化成社製) 0.1
ポリオキシプロピレン(5)フィトステロール 0.1
セバシン酸ジエチル 0.1
ヒドロキシプロピルトリモニウムハニー 0.1
(ハニーコート50PF;Arch Personal Products L.P.社製)
ダイマージリノール酸(フィトステリル/イソステアリル 0.1
/セチル/ステアリル/ベヘニル)(Plandool-L;日本精化社製)
ビスジグリセリルポリアシルアジペート−2 0.1
(ソフチザン649;SASOL社製)
ラウロイルグルタミン酸ジ(フィトステリル/オクチドデシル) 0.1
(エルデュウPS−203;味の素社製)
ビスセテアリルアモジメチコン 0.2
(SILSOFT AX;モメンティブ・パフォーマンス
・マテリアルズ・ジャパン合同会社製)
高重合ジメチルポリシロキサンエマルジョン 1.0
(XS65−B7116;モメンティブ・パフォーマンス
・マテリアルズ・ジャパン合同会社製)
アラニン 0.1
グルタミン酸 0.05
グルタミン酸ナトリウム 0.05
ラミナリアオクロロイカエキス 0.1
(LAMINAINE−BG;Biotech Marine社製)
メチルパラベン 0.1
フェノキシエタノール 0.2
香料 適 量
イオン交換水 残 余
処方成分 配合量
ベヘニルアルコール 1.0
ステアリルアルコール 5.5
セタノール 0.5
ジプロピレングリコール 1.0
ベヘナミドプロピルジメチルアミン 0.5
ベヘントリモニウムクロリド 1.0
ポリオキシプロピレン(5)フィトステロール 0.1
セバシン酸ジエチル 0.1
ヨモギ葉エキス(ガイヨウ抽出液BG;丸善製薬社製) 0.1
セイヨウトチノキ種子エキス 0.1
(マロニエ抽出液BG−J;丸善製薬社製)
カミツレ花エキス(カミツレ抽出液BG−J;丸善製薬社製) 0.1
エスクレチン(東京化成社製) 0.02
クエルセチン(シグマアルドリッチ社製) 0.02
アンテミス・マリチマ抽出液 0.1
(Anthemis Maritima;Biotech Marine社製)
ルイボス抽出液 0.1
(ファルコレックス ルイボスB(N);一丸ファルコス社製)
加水分解コンキオリン液 0.1
(真珠たん白抽出液;丸善製薬株式会社製)
加水分解コラーゲン液 0.1
(プロモイスWU−32R;成和化成社製)
加水分解シルク液(フィブロイン溶液[KBセーレン社製]) 0.1
アモジメチコンエマルション 0.1
(FZ−4672;東レ・ダウコーニング社製)
高重合ジメチコノールエマルジョン 1.0
(XS65−C2173;モメンティブ・パフォーマンス
・マテリアルズ・ジャパン合同会社製)
乳酸 0.2
ソルビトール 1.0
メチルパラベン 0.1
フェノキシエタノール 0.3
香料 適 量
イオン交換水 残 余
処方成分 配合量
エタノール 15.0
グリセリン 2.0
ジプロピレングリコール 2.0
1,3−ブチレングリコール 0.5
ポリオキシプロピレン(5)フィトステロール 0.5
セバシン酸ジエチル 0.2
ヨモギ葉エキス(ガイヨウ抽出液BG;丸善製薬社製) 0.1
ハイビスカスエキス 0.1
(ハイビスカスエキスA;Greentech S.A社製)
カミツレ花エキス(カミツレ抽出液BG−J;丸善製薬社製) 0.1
エスクレチン(東京化成社製) 0.02
クエルセチン(シグマアルドリッチ社製) 0.02
アルメリア・マリチマ抽出液 0.1
(Armeria Maritima BG40;Biotech Marine社製)
アンテミス・マリチマ抽出液 0.1
(Anthemis Maritima;Biotech Marine社製)
ルイボス抽出液 0.1
(ファルコレックス ルイボスB(N);一丸ファルコス社製)
ジメチコン 0.2
ベヘニルアルコール 0.05
フェノキシエタノール 0.2
香料 0.05
イオン交換水 残 余
処方成分 配合量
グリセリン 1.0
プロピレングリコール 5.0
1,3−ブチレングリコール 2.0
ポリオキシプロピレン(5)フィトステロール 0.1
セバシン酸ジエチル 0.1
ジメチコン 0.4
ポリシリコーン−13 0.1
ステアリン酸スクロース 2.0
カルボマー 0.4
トリエタノールアミン 0.35
ヨモギ葉エキス(ガイヨウ抽出液BG;丸善製薬社製) 0.1
ハイビスカスエキス 0.1
(ハイビスカスエキスA;Greentech S.A社製)
カミツレ花エキス(カミツレ抽出液BG−J;丸善製薬社製) 0.1
エスクレチン(東京化成社製) 0.02
クエルセチン(シグマアルドリッチ社製) 0.02
アンテミス・マリチマ抽出液 0.1
(Anthemis Maritima;Biotech Marine社製)
ルイボス抽出液 0.1
(ファルコレックス ルイボスB(N);一丸ファルコス社製)
エデト酸ナトリウム 0.01
フェノキシエタノール 0.3
エタノール 8.0
香料 0.1
イオン交換水 残 余
処方成分 配合量
セトステアリルアルコール 1.5
ベヘントリモニウムクロリド 0.1
ステアラミドプロピルジメチルアミン 0.1
ポリオキシプロピレン(5)フィトステロール 0.2
セバシン酸ジエチル 0.1
ヨモギ葉エキス(ガイヨウ抽出液BG;丸善製薬社製) 0.1
セイヨウトチノキ種子エキス 0.1
(マロニエ抽出液BG−J;丸善製薬社製)
ハイビスカスエキス 0.1
(ハイビスカスエキスA;Greentech S.A社製)
エスクレチン(東京化成社製) 0.02
クエルセチン(シグマアルドリッチ社製) 0.02
アンテミス・マリチマ抽出液 0.1
(Anthemis Maritima;Biotech Marine社製)
ルイボス抽出液 0.1
(ファルコレックス ルイボスB(N);一丸ファルコス社製)
ビスセテアリルアモジメチコン 0.1
(SILSOFT AX;モメンティブ・パフォーマンス
・マテリアルズ・ジャパン合同会社製)
グリセリン 3.0
ジメチコン 1.5
フェニルトリメチコン 0.5
マカデミアナッツ脂肪酸フィトステリル 1.3
PEG−10水添ヒマシ油 0.7
ヒドロキシプロピルメチルセルロース 0.3
安息香酸ナトリウム 0.2
クエン酸 0.05
フェノキシエタノール 0.5
香料 0.3
イオン交換水 残 余
処方成分 配合量
エタノール 45
PEG−60水添ヒマシ油 0.5
ジプロピレングリコール 3.0
ヨモギ葉エキス(ガイヨウ抽出液BG;丸善製薬社製) 0.1
セイヨウトチノキ種子エキス 0.1
(マロニエ抽出液BG−J;丸善製薬社製)
ハイビスカスエキス 0.1
(ハイビスカスエキスA;Greentech S.A社製)
カミツレ花エキス(カミツレ抽出液BG−J;丸善製薬社製) 0.1
エスクレチン(東京化成社製) 0.02
クエルセチン(シグマアルドリッチ社製) 0.02
アルメリア・マリチマ抽出液 0.1
(Armeria Maritima BG40;Biotech Marine社製)
アンテミス・マリチマ抽出液 0.1
(Anthemis Maritima;Biotech Marine社製)
ルイボス抽出液 0.1
(ファルコレックス ルイボスB(N);一丸ファルコス社製)
パンテノール 0.2
アラニン 0.01
アスコルビン酸硫酸二ナトリウム 0.001
クエン酸ナトリウム 0.08
クエン酸 0.02
メントール 0.05
香料 0.1
イオン交換水 残 余
Claims (7)
- エスクレチン、クエルセチン及びバイカレインから選ばれる少なくとも1種のポリフェノール関連化合物を有効成分とするキューティクル細胞分化促進剤。
- エスクレチン、クエルセチン及びバイカレインから選ばれる少なくとも1種のポリフェノール関連化合物を有効成分とするキューティクル生成促進剤。
- エスクレチン、クエルセチン及びバイカレインから選ばれる少なくとも1種のポリフェノール関連化合物を有効成分とする美髪剤。
- エスクレチン、クエルセチン及びバイカレインから選ばれる少なくとも1種のポリフェノール関連化合物を含有する毛髪化粧料。
- アルメリア・マリチマ(Armeria maritima)から得られる抽出物、マトリカリア・マリチマ(Matricaria maritima)から得られる抽出物及びルイボス(Aspalathus linearis)から得られる抽出物から選ばれる少なくとも1種の抽出物をさらに含有する請求項4記載の毛髪化粧料。
- エスクレチン、クエルセチン又はバイカレインが含まれる植物抽出物を含有する、請求項4又は5記載の毛髪化粧料。
- 美髪化粧料である請求項4〜6いずれか1項記載の毛髪化粧料。
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