JP5878751B2 - 毛髪化粧料 - Google Patents
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従って、本発明の課題は、キューティクル細胞の分化過程に密接に関わるS100A3蛋白質を評価する系を確立し、毛髪自体の外観や特性を根元から好ましい状態に導くことが可能な美髪有効成分を見い出し、これを含む毛髪化粧料を提供することにある。
また、トロポロン関連化合物がS100A3蛋白質のシトルリン化を促進する作用を有し、前記のアルメリア・マリチマ抽出物、マトリカリア・マリチマ抽出物とトロポロン関連化合物を併用すれば、キューティクルの生成促進効果がさらに向上し、美髪効果に優れた毛髪化粧料が得られることを見い出した。
また、本発明の美髪剤、キューティクル生成促進剤及びキューティクル細胞分化促進剤におけるアルメリア・マリチマ抽出物及びマトリカリア・マリチマ抽出物の含有量は、抽出物中の乾燥固形分換算量で、0.00001〜100%が好ましく、0.01〜10%がより好ましく、0.01〜1%がさらに好ましい。
SW480細胞(DSファーマバイオメディカル社より購入)を、10%FBS含有DMEM培地にて、CO2インキュベータ中、37℃で前培養した。24穴プレートに播種して培養し、50%コンフルエントになった段階で1%FBS含有DMEM培地に培地交換した。翌日、評価試料を乾燥固形分として1〜100μg/mLに相当する量を含有する培地に交換して培養を続けた。2日後、PBSで2回洗浄した後、細胞を回収し、市販のRNAキット(RNAeasy Mini kit、Qiagen社製)を用いて全RNAを精製した。
得られたRNAから逆転写酵素(SuperScript II、Invitrogen社製)により相補DNA(cDNA)を作製した。次いで、アプライド・バイオシステム社製のuniversal PCR polymerase mix並びに各目的遺伝子に特異的にハイブリッド形成するTaqManプローブを混合して定量PCR反応を行った。反応は、50℃(2min)の後、95℃(10min)で反応させた後、95℃(15sec)と60℃(1min)のサイクルを40サイクル繰り返した。反応は、アプライド・バイオシステム社製のStepOnePlus Reak-Time PCR systemを用いて行った。
目的とする遺伝子の発現量は、ハウスキーピング遺伝子であるG3PDH遺伝子の発現量を基準として標準化し、試料無添加群をコントロール群として、コントロールに対する相対的な発現量を指標として評価した。
上記のS100A3遺伝子発現解析法により、植物抽出物のS100A3遺伝子発現促進効果を評価した。評価には、アルメリア・マリチマから得られる抽出物として、Biotech Marine社製の「Armeria Maritima BG40」(40%1,3−ブチレングリコール水溶液抽出液、固形分含量1.2%)を、マトリカリア・マリチマから得られる抽出物として、Biotech Marine社製の「Anthemis Maritima」(水抽出液、固形分含量1.3%)を供した。
SW480細胞を、10%FBS含有DMEM培地にて、CO2インキュベータ中、37℃で前培養した。24穴プレートに播種して培養し、50%コンフルエントになった段階で1%FBS含有DMEM培地に培地交換した。翌日、評価試料を乾燥固形分として1〜100μg/mLに相当する量を含有する培地に交換して培養を続けた。3日後、PBSで2回細胞を洗浄した後、細胞を回収し、蛋白質を抽出した。蛋白質は、50mmol/LのDTTと1mmol/LのEDTAを含有する0.1mol/L Tris−HCl(pH7.6)2mLにより抽出した。抽出液は、Ultrace−3k(アミコン社製)を用いて100μL以下まで遠心濃縮した後、その蛋白質量を定量(CBBG)した。抽出液をモノヨード酢酸処理し、蛋白質量で250μg相当を2次元電気泳動した。次いで泳動ゲルを銀染色し、シトルリン化率の測定に供した(尚、2次元電気泳動のゲルは、予めS100A3蛋白質に対する抗体を用いたウェスタンブロッティングにより、銀染色で検出されるスポットのうち、どれがS100A3蛋白質に相当するかを確認しておいた。)。
S100A3蛋白質は、シトルリン化の対象となるアルギニンを4つ含むが、このうちSW480細胞ではArg51のみがシトルリン化され、ここがシトルリン化されることで等電点pIは4.5から4.3に低下する。シトルリン化率は銀染色した2次元電気泳動ゲル上における、S100A3蛋白質のpI4.5とpI4.3のスポットの強度の比率から算出した。
銀染色した2次元電気泳動のゲルをスキャナーで画像取り込みし、S100A3蛋白質に相当するpI4.5とpI4.3の2つのスポットの強度(IpI4.5、IpI4.3)を、画像解析ソフトウエア(Scion Image)で数値化した。A100A3のArg51のシトルリン化率(Cit51化率)を次式で計算した。シトルリン化促進効果は、このCit51化率を指標として評価した。
上記のシトルリン化率測定方法により、トロポロン関連化合物のS100A3蛋白質シトルリン化促進効果を評価した。評価にはトロポロン(シグマ アルドリッチ社製)、ヒノキチオールSP(高砂香料工業社製)及びウェスタンレッドシーダー蒸留抽出液(ステリライザー社製)を供した。
処方成分 配合量
POE(2)ラウリルエーテル硫酸ナトリウム 7.0
ラウリル硫酸アンモニウム 5.0
ラウロイルメチル−β−アラニンナトリウム液 1.0
ラウリン酸アミドプロピルベタイン液 4.0
グリセリン 0.5
ジプロピレングリコール 0.5
ジステアリン酸グリコール 2.0
ヤシ油脂肪酸モノエタノールアミド 1.0
ジメチコンエマルジョン 2.0
(BY22−050A;東レ・ダウコーニング社製)
アルメリア・マリチマ抽出物 0.1
(Armeria Maritima BG40;Biotech Marine社製)
マトリカリア・マリチマ抽出物 0.1
(Anthemis Maritima;Biotech Marine社製)
ヒドロキシプロピルトリモニウムハニー 0.1
(ハニーコート50PF;Arch Personal Products L.P.社製)
ヒノキチオール 0.02
(ヒノキチオールSP;高砂香料工業社製)
ウェスタンレッドシーダー蒸留抽出液 0.02
(ウェスタンレッドシーダー;ステリライザー社製)
カチオン化セルロース誘導体 0.5
(カチナールHC−200;東邦化学社製)
ジメチルジアリルアンモニウムクロライド・ 1.0
アクリルアミドコポリマー (マーコート550;NALCO社製)
EDTA・2Na 0.1
安息香酸ナトリウム 0.1
メチルパラベン 0.1
フェノキシエタノール 0.2
クエン酸 適 量
香料 適 量
精製水 残 余
処方成分 配合量
ステアリルアルコール 4.5
セタノール 0.5
グリセリン 1.0
プロピレングリコール 2.0
アルメリア・マリチマ抽出物 0.1
(Armeria Maritima BG40;Biotech Marine社製)
マトリカリア・マリチマ抽出物 0.1
(Anthemis Maritima;Biotech Marine社製)
ヒノキチオール 0.02
(ヒノキチオールSP;高砂香料工業社製)
ウェスタンレッドシーダー蒸留抽出液 0.02
(ウェスタンレッドシーダー;ステリライザー社製)
ローズヒップ油 0.1
オリーブ油 0.1
ハチミツ 0.1
加水分解ダイズタンパク液(プロモイスWS;成和化成社製) 0.1
ポリオキシプロピレン(5)フィトステロール 0.1
セバシン酸ジエチル 0.1
ヒドロキシプロピルトリモニウムハニー 0.1
(ハニーコート50PF;Arch Personal Products L.P.社製)
ダイマージリノール酸(フィトステリル/イソステアリル 0.1
/セチル/ステアリル/ベヘニル)(Plandool−L;日本精化社製)
ビスジグリセリルポリアシルアジペート−2 0.1
(ソフチザン649;SASOL社製)
ラウロイルグルタミン酸ジ(フィトステリル/オクチドデシル) 0.1
(エルデュウPS−203;味の素社製)
ビスセテアリルアモジメチコン 0.2
(SILSOFT AX;モメンティブ・パフォーマンス
・マテリアルズ・ジャパン社製)
高重合ジメチルポリシロキサンエマルジョン 1.0
(XS65−B7116;モメンティブ・パフォーマンス
・マテリアルズ・ジャパン社製)
アラニン 0.1
グルタミン酸 0.05
グルタミン酸ナトリウム 0.05
ラミナリアオクロロイカエキス 0.1
(LAMINAINE−BG;Biotech Marine社製)
メチルパラベン 0.1
フェノキシエタノール 0.2
香料 適 量
イオン交換水 残 余
処方成分 配合量
ベヘニルアルコール 1.0
ステアリルアルコール 5.5
セタノール 0.5
ジプロピレングリコール 1.0
ベヘナミドプロピルジメチルアミン 0.5
ベヘントリモニウムクロリド 1.0
ポリオキシプロピレン(5)フィトステロール 0.1
セバシン酸ジエチル 0.1
アルメリア・マリチマ抽出物 0.1
(Armeria Maritima BG40;Biotech Marine社製)
マトリカリア・マリチマ抽出物 0.1
(Anthemis Maritima;Biotech Marine社製)
ヒノキチオール 0.02
(ヒノキチオールSP;高砂香料工業社製)
ウェスタンレッドシーダー蒸留抽出液 0.02
(ウェスタンレッドシーダー;ステリライザー社製)
加水分解コンキオリン液 0.1
(真珠たん白抽出液;丸善製薬株式会社製)
加水分解コラーゲン液 0.1
(プロモイスWU−32R;成和化成社製)
加水分解シルク液(フィブロイン溶液[KBセーレン社製]) 0.1
アモジメチコンエマルション 0.1
(FZ−4672;東レ・ダウコーニング社製)
高重合ジメチコノールエマルジョン 1.0
(XS65−C2173;モメンティブ・パフォーマンス
・マテリアルズ・ジャパン社製)
乳酸 0.2
ソルビトール 1.0
メチルパラベン 0.1
フェノキシエタノール 0.3
香料 適 量
イオン交換水 残 余
処方成分 配合量
エタノール 15.0
グリセリン 2.0
ジプロピレングリコール 2.0
1,3−ブチレングリコール 0.5
ポリオキシプロピレン(5)フィトステロール 0.5
セバシン酸ジエチル 0.2
アルメリア・マリチマ抽出物 0.1
(Armeria Maritima BG40;Biotech Marine社製)
マトリカリア・マリチマ抽出物 0.1
(Anthemis Maritima;Biotech Marine社製)
ヒノキチオール 0.02
(ヒノキチオールSP;高砂香料工業社製)
ウェスタンレッドシーダー蒸留抽出液 0.02
(ウェスタンレッドシーダー;ステリライザー社製)
ジメチコン 0.2
ベヘニルアルコール 0.05
フェノキシエタノール 0.2
香料 0.05
イオン交換水 残 余
処方成分 配合量
グリセリン 1.0
プロピレングリコール 5.0
1,3−ブチレングリコール 2.0
ポリオキシプロピレン(5)フィトステロール 0.1
セバシン酸ジエチル 0.1
ジメチコン 0.4
ポリシリコーン−13 0.1
ステアリン酸スクロース 2.0
カルボマー 0.4
トリエタノールアミン 0.35
アルメリア・マリチマ抽出物 0.1
(Armeria Maritima BG40;Biotech Marine社製)
マトリカリア・マリチマ抽出物 0.1
(Anthemis Maritima;Biotech Marine社製)
ヒノキチオール 0.02
(ヒノキチオールSP;高砂香料工業社製)
ウェスタンレッドシーダー蒸留抽出液 0.02
(ウェスタンレッドシーダー;ステリライザー社製)
エデト酸ナトリウム 0.01
フェノキシエタノール 0.3
エタノール 8.0
香料 0.1
イオン交換水 残 余
処方成分 配合量
セトステアリルアルコール 1.5
ベヘントリモニウムクロリド 0.1
ステアラミドプロピルジメチルアミン 0.1
ポリオキシプロピレン(5)フィトステロール 0.2
セバシン酸ジエチル 0.1
アルメリア・マリチマ抽出物 0.1
(Armeria Maritima BG40;Biotech Marine社製)
マトリカリア・マリチマ抽出物 0.1
(Anthemis Maritima;Biotech Marine社製)
ヒノキチオール 0.02
(ヒノキチオールSP;高砂香料工業社製)
ウェスタンレッドシーダー蒸留抽出液 0.02
(ウェスタンレッドシーダー;ステリライザー社製)
ビスセテアリルアモジメチコン 0.1
(SILSOFT AX;モメンティブ・パフォーマンス
・マテリアルズ・ジャパン社製)
グリセリン 3.0
ジメチコン 1.5
フェニルトリメチコン 0.5
マカデミアナッツ脂肪酸フィトステリル 1.3
PEG−10水添ヒマシ油 0.7
ヒドロキシプロピルメチルセルロース 0.3
安息香酸ナトリウム 0.2
クエン酸 0.05
フェノキシエタノール 0.5
香料 0.3
イオン交換水 残 余
処方成分 配合量
エタノール 45
PEG−60水添ヒマシ油 0.5
ジプロピレングリコール 3.0
アルメリア・マリチマ抽出物 0.1
(Armeria Maritima BG40;Biotech Marine社製)
マトリカリア・マリチマ抽出物 0.1
(Anthemis Maritima;Biotech Marine社製)
ヒノキチオール 0.02
(ヒノキチオールSP;高砂香料工業社製)
ウェスタンレッドシーダー蒸留抽出液 0.02
(ウェスタンレッドシーダー;ステリライザー社製)
パンテノール 0.2
アラニン 0.01
アスコルビン酸硫酸二ナトリウム 0.001
クエン酸ナトリウム 0.08
クエン酸 0.02
メントール 0.05
香料 0.1
イオン交換水 残 余
Claims (8)
- アルメリア・マリチマ(Armeria maritima)から得られる抽出物及びマトリカリア・マリチマ(Matricaria maritima)から得られる抽出物から選ばれる少なくとも1種を含有する毛髪化粧料。
- トロポロン関連化合物がトロポロン及び/又はヒノキチオールである、請求項2記載の毛髪化粧料。
- トロポロン関連化合物として、トロポロン関連化合物を含有する植物抽出物を含有する、請求項2又は3記載の毛髪化粧料。
- トロポロン関連化合物を含有する植物抽出物が、ウェスタンレッドシーダー蒸留抽出液である、請求項4記載の毛髪化粧料。
- 美髪化粧料である請求項1〜5のいずれか1項記載の毛髪化粧料。
- アルメリア・マリチマ(Armeria maritima)から得られる抽出物及びマトリカリア・マリチマ(Matricaria maritima)から得られる抽出物から選ばれる少なくとも1種を有効成分とする美髪剤。
- アルメリア・マリチマ(Armeria maritima)から得られる抽出物及びマトリカリア・マリチマ(Matricaria maritima)から得られる抽出物から選ばれる少なくとも1種を有効成分とするキューティクル細胞分化促進剤。
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