JP2013515006A - デオキシコール酸の調製のための方法 - Google Patents

デオキシコール酸の調製のための方法 Download PDF

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Abstract

デオキシコール酸およびその中間体を調製するための合成方法、高純度合成デオキシコール酸、組成物、ならびに使用方法を提供する。さらに、Δ−９，１１−エン、１１−ケトまたは１１−ヒドロキシ−β−ステロイドからの、１２−ケトまたは１２−α−ヒドロキシステロイドの合成のためのプロセスも提供する。本発明は、さらに、合成の間に調製される新規化合物に関する。本発明は、ヒドロコルチゾンから出発するデオキシコール酸の合成にも関する。

Description

関連出願への参照
本願は、２００９年１２月１８日に出願された米国仮特許出願第６１／２８８，１３２号、２０１０年２月１２日に出願された米国仮特許出願第６１／３０３，８１６号、２０１０年５月２５日に出願された英国出願第１００８７２６．０号、および２０１０年５月２６日に出願された米国仮特許出願第６１／３４８，６８６号の利益を主張し、これらの出願のすべては、それらの全体が本明細書中に参考として援用される。
発明の背景
発明の分野
本発明は、デオキシコール酸およびその塩の合成、ならびにデオキシコール酸の合成に有用な中間体に関する。１つの実施形態において、本発明は、ヒドロコルチゾンから出発するデオキシコール酸またはその塩を調製するための合成方法を提供する。本発明は、１２−ケトまたは１２−α−ヒドロキシステロイドのような中間体、ならびにそれらの調製のための新規プロセスにも関する。本発明は、さらに、精製デオキシコール酸組成物、およびデオキシコール酸が少なくとも９６％の純度を有する精製方法も提供する。
技術の現状
体脂肪の迅速除去は長年の理想であり、多くの物質がそのような効果を生じると主張されているが、ほとんどが効果を示していない。「メソセラピー」、または脂肪除去のための注射可能物質の使用は、安全性および有効性に関する懸念から医師に広く認められていないが、ホメオパシー的および美容的主張が１９５０年代からなされている。メソセラピーは、局所医療的および美容的症状の処置用の化合物の混合物を含有する皮膚注射可能物質を使用する方法として、ヨーロッパで最初に考案された。メソセラピーは慣習的に疼痛寛解に使用されていたが、その美容的適用、特に脂肪およびセルライト除去は、最近、米国で注目されている。局所的脂肪減少に関して報告されている１つのそのような処置（ブラジルで普及し、ホスファチジルコリンの注射を使用する）は、誤って、メソセラピーと同義と考えられていた。主張されている「脂肪分解」注射としてのその魅力にも関わらず、これらの美容的処置の安全性および有効性データがほとんど存在しない。参照：Ｒｏｔｕｎｄａ，Ａ．Ｍ．およびＭ．Ｋｏｌｏｄｎｅｙ，Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ｓｕｒｇｅｒｙ ３２：，４６５−４８０（２００６）（「Ｍｅｓｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ：Ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌ Ｃｌａｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｖｉｅｗ」）。
最近公表された文献は、胆汁酸、デオキシコール酸およびそれらの塩が生体内で脂肪沈着物に注射された場合に、脂肪除去特性を有することを報告している。参照：特許文献１および特許文献２、ならびに特許文献３；特許文献４；特許文献５；および特許文献６（それらの全内容は参照により本明細書に組み入れられる）。脂肪組織に注射されたデオキシコレートは、細胞溶解メカニズムによって脂肪細胞を崩壊させる。脂肪に注射されたデオキシコレートは、タンパク質への暴露によって急速に不活性化され、次に、急速に腸内容物になるので、その作用は空間的に抑制される。臨床的安全性を与えるこの減衰作用の結果として、脂肪除去療法は一般に４〜６セッションを必要とする。手術を必要としないこの局所的脂肪除去は、病理学的局所的脂肪沈着物（例えば、ＨＩＶの処置における医療的介入に付随する異脂肪血症）に関係した治療的処置のためだけでなく、手術に特有の付随リスクのない美容的脂肪除去（例えば、脂肪吸引）のためにも有益である。参照：Ｒｏｔｕｎｄａら、Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｓｕｒｇｅｒｙ ３０：１００１−１００８（２００４）（「Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｓｏｄｉｕｍ ｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ ａｒｅ ａ ｍａｊｏｒ ｆｅａｔｕｒｅ ｏｆ ａｎ ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｌｏｃａｌｉｚｅｄ ｆａｔ ｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎ」）およびＲｏｔｕｎｄａら、Ｊ．Ａｍ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．（２００５：９７３−９７８）（「Ｌｉｐｏｍａｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ」）（両方ともその全内容が参照により本明細書に組み入れられる）。
さらに、多くの重要なステロイドは１２−α−ヒドロキシ置換基をステロイドのＣ環上に有する。そのような化合物は、例えば、デオキシコール酸、コール酸、リトコール酸等のような胆汁酸を包含する。これまで、そのような化合物は、一般に、コスト効果ベースで得やすい胆汁酸源であったウシおよびヒツジ源から得ていた。しかし、プリオンのような病原体がそのような源を汚染しうるという最近の発見により、植物源または合成出発物質から胆汁酸を合成する代替的方法がますます重要になっている。例えば、ニュージーランドの動物からのデオキシコール酸は、動物が隔離状態に維持し続けられ、そうでなければ観察可能な病原体を有さない限りにおいて、ＵＳ規制制度下でのヒト使用用の胆汁酸源である。そのような厳しい条件は、好適な哺乳動物由来の胆汁酸の量を制限し、胆汁酸がそのような病原体を含有しない可能性を妨げない。
動物由来成分（または、動物、特に哺乳動物において作用することができ、ヒト使用においてヒトへの有害作用を有しうる病原性成分）、および他の有害物質、例えば、動物または微生物代謝物、毒素（発熱物質のような細菌毒素を包含する）を最初から含まないことが既知の、ヒト用の薬剤として使用するための好適量の有効な胆汁酸、例えばデオキシコール酸が依然として必要とされている。
さらに、他の意図しない胆汁酸を含まない胆汁酸組成物を調製することも必要とされている。これに関して、哺乳動物由来のデオキキシコール酸はコール酸で汚染されていることが既知である。さらに、コール酸は、胆石の形成における必須成分であることも既知である。従って、他の胆汁酸での汚染を生じないデオキシコール酸の調製方法を提供することが現在も必要とされている。
以前、特許文献７は、９α−ヒドロキシアンドロスタ−４−エン−３，１７−ジオンで出発するデオキシコール酸の合成を開示している。その合成において、中間体３α−ヒドロキシ−５β−アンドロスタ−９（１１）−エン−１７−オンが、９α−ヒドロキシアンドロスタ−４−エン−３，１７−ジオンから誘導されることが開示されている。９α−ヒドロキシアンドロスタ−４−エン−３，１７−ジオンは、その特許に開示されているように、デオキシコール酸に効果的に変換されるが、ヒドロコルチゾンは広く入手可能であるので、ヒドロコルチゾンからのデオキシコール酸の合成が特に有用であると考えられる。
コルチゾンおよびヒドロコルチゾンは、デオキシコール酸の１２−α−ヒドロキシ基ではなく、１１−ケトまたは１１−β−ヒドロキシ基をそれぞれ有する。ステロイド主鎖における１１−ケトまたは１１−β−ヒドロキシ基の、対応する１２−α−ヒドロキシまたは１２−ケト基への変換は、変換を行わなければならないだけでなく、それを立体選択的に行わなければならないので、単純ではない。特許文献８は多重反応スキームを記載しており、それにおいて、一例として、３−β−アセトキシ−１１−ケトステロイドが、該ステロイドにおけるΔ−９，１１−エン官能基の形成、次に、三酸化クロムでの１２位におけるアリル酸化によって、３−β−アセトキシ−１２−α−ヒドロキシステロイドに変換されている。三酸化クロムの使用は、あまり高くない収率のΔ−９，１１−エン−１２−オキソ官能基を与え、この反応によって生じる副生成物は所望生成物の精製を妨げる。さらに、三酸化クロムは、高い毒性、腐食性および発癌性である。それは、六価クロム、環境危険物質の主要例である。酸化プロセスにおける三酸化クロムの使用は制限されるべきである。
前記に鑑みて、環境適合性の、より低い毒性の酸化剤を使用して、１１−β−ヒドロキシ／１１−ケトステロイドを、対応するΔ−９，１１−エン、１２−α−ヒドロキシ／１２−ケトステロイドに変換する合成的に効率的な方法を提供する必要がある。
薬学グレード化学物質は、一貫して再現性の純度レベルを必要とする。いくつかの具体例において、精製プロセスは、少なくとも９５％の純度、または少なくとも９９％の純度を与えるべきである。しかし、少なくとも９９％に精製することは、技術的に困難である。例えば、精製プロセスに使用される溶媒が生成物に取り込まれ、それによってその純度が低下する場合があり、他の汚染物質が何らかの精製プロセスによって持ち越される場合がある。
この生成物は、望ましくない脂肪沈着物の除去における美容的使用に関して開示されているので、この問題はデオキシコール酸およびその塩に特に関連している。例えば、特許文献９参照（その全内容は参照により本明細書に組み入れられる）。美容的処置は完全に随意であるので、一般に、より高い安全基準が規制当局によって要求される。
国際公開第２００５／１１７９００号 国際公開第２００５／１１２９４２号 米国特許出願公開第２００５／０２６１２５８号明細書 米国特許出願公開第２００５／０２６７０８０号明細書 米国特許出願公開第２００６／１２７４６８号明細書 米国特許出願公開第２００６０１５４９０６号明細書 英国特許第２４５２３５８号 国際公開第２００８／１５７６３５号 米国特許第７６２２１３０号明細書
発明の概要
本発明は、胆汁酸またはその塩の調製に有用な方法および組成物、ならびにそれによって調製された胆汁酸の精製方法を提供する。
一実施形態において、Δ−９，１１−エンステロイドの１２位におけるアリル酸化の間に使用されるクロム（ＶＩ）酸化剤の量を除去するかまたは制限する酸化プロセスを提供する。酸化は、化合物１、２および３を与える環境適合性の補助酸化剤混合物を使用する：
［式中、Ｐｇはヒドロキシル保護基であり、Ｒは水素、ヒドロキシルまたは−ＯＰｇであり、Ｒ１は胆汁酸の１７−側鎖であり、該胆汁酸はコール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸およびグリココール酸から成る群から選択され、ここで前記側鎖のカルボキシル官能基はＣ１−Ｃ６アルキル基で必要に応じてエステル化され、Ｒ２は水素であり、またはＲ１およびＲ２はそれらに結合している炭素原子と一緒になってケト基またはケト保護基を形成し；Ｒ３、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立にＣ１−Ｃ３アルキルである］。
必要に応じて、付加段階において、前記の混合物をクロム（ＶＩ）酸化剤で処理して、部分酸化生成物を１２位において、対応するケトンに変換する。このプロセスにおいて、使用されるクロム（ＶＩ）酸化剤の量は、三酸化クロムを単一酸化剤として使用している米国特許出願第１２／１５３，４４６号の実施例１０に記載されている量より有意に少ない。
従って、一実施形態において、Δ−９，１１−エンステロイド化合物４：
の１２位においてアリル酸化を行って、対応する１２−ケト化合物３：
を与える方法を提供し；
該方法は、化合物４を、酸化条件下で、アルカリ次亜塩素酸塩およびｔ−アルキルハイドロジェンペルオキシドを含有する補助酸化剤混合物に接触させて、化合物３を得ることを含み；
ここで、Ｐｇはヒドロキシル保護基であり、Ｒは水素、ヒドロキシルまたは−ＯＰｇであり、Ｒ１は胆汁酸の１７−側鎖であり、該胆汁酸はコール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸およびグリココール酸から成る群から選択され、ここで前記側鎖のカルボキシル官能基はＣ１−Ｃ６アルキル基で必要に応じてエステル化され、Ｒ２は水素であり、またはＲ１およびＲ２はそれらに結合している炭素原子と一緒になってケト基またはケト保護基を形成する］。
他の実施形態において、前記補助酸化剤混合物での化合物４の酸化は、下記化合物を与える：
［式中、Ｐｇはヒドロキシル保護基であり、Ｒは水素、ヒドロキシルまたは−ＯＰｇであり、Ｒ１は胆汁酸の１７−側鎖であり、該胆汁酸はコール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸およびグリココール酸から成る群から選択され、ここで前記側鎖のカルボキシル官能基はＣ１−Ｃ６アルキル基で必要に応じてエステル化され、Ｒ２は水素であり、またはＲ１およびＲ２はそれらに結合している炭素原子と一緒になってケト基またはケト保護基を形成し；Ｒ３、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立にＣ１−Ｃ３アルキルである］。
与えられる前記混合物を、必要に応じて、わずかに過剰のクロム酸化剤で処理して、化合物２および必要に応じて化合物１の化合物３への変換を与えることができ、それによって化合物３の全体的収率を向上させることができる。従って、この実施形態において、Δ−９，１１−エンステロイド化合物４：
の１２位におけるアリル酸化を行って、対応する１２−ケト化合物３：
を得る方法を提供し、該プロセスは、化合物４を、酸化条件下で、アルカリ次亜塩素酸塩およびｔ−アルキルハイドロジェンペルオキシド（ＴＢＨＰ）を含む補助酸化剤混合物に接触させて、化合物１、２および３の混合物を得；
さらに、前記混合物を、有効量のクロム（ＶＩ）酸化剤で酸化して、化合物３を与えることを含み、ここで、Ｐｇはヒドロキシル保護基であり、Ｒは水素、ヒドロキシルまたは−ＯＰｇであり、Ｒ１は胆汁酸の１７−側鎖であり、該胆汁酸はコール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸およびグリココール酸から成る群から選択され、ここで、前記側鎖のカルボキシル官能基はＣ１−Ｃ６アルキル基で必要に応じてエステル化され、Ｒ２は水素であり、またはＲ１およびＲ２はそれらに結合している炭素原子と一緒になってケト基またはケト保護基を形成する。
１つの任意実施形態において、化合物１、２および３の混合物を水素化条件下で反応させて、クロム（ＶＩ）酸化剤での酸化の前にΔ−９，１１−エンを水素化する。
前記の任意水素化がクロム（ＶＩ）での酸化の前に行われる場合、式５および６の新規中間体が得られる：
［式中、Ｐｇ、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は先に定義した通りである］。
好ましい実施形態において、酸化段階が完結した後に水素化が行われる。
他の実施形態において、本発明は、Δ−９，１１−エン−１２−ケト化合物７：
を、対応するΔ−９，１１−エン化合物８：
から調製するプロセスを提供し；
ここで、Ｐｇはヒドロキシル保護基であり、Ｒ１は胆汁酸の１７−側鎖であり、該胆汁酸はコール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸およびグリココール酸から成る群から選択され、ここで前記側鎖のカルボキシル官能基はＣ１−Ｃ６アルキル基で必要に応じてエステル化され、Ｒ２は水素であり、またはＲ１およびＲ２はそれらに結合している炭素原子と一緒になってケト基またはケト保護基を形成し；
前記プロセスは、下記を含む：
補助酸化剤の存在下に、式（Ｒ３）（Ｒ４）（Ｒ５）Ｃ−Ｏ−ＯＨ［ここで、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立にＣ１−Ｃ３アルキルである］のｔ−アルキルヒドロペルオキシドとの反応によって、化合物８の１２位におけるアリル酸化を行って、化合物９、１０および７：
の混合物を先ず得；そして、
必要に応じて、次に、化合物１１ｂをクロム（ＶＩ）酸化剤でさらに酸化して、Δ−９，１１−エン−１２−オン化合物７を得る。
１つの任意実施形態において、化合物９、１０および７の混合物を、クロム（ＶＩ）酸化剤での酸化の前に、水素化条件下で反応させてΔ−９，１１−エンを水素化する。
前記の任意水素化がクロム（ＶＩ）酸化剤での酸化の前に行われる場合、式１１ａおよび１１ｂの新規中間体が得られる：
［式中、Ｐｇ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は先に定義した通りである］。
他の実施形態において、本発明は、１１−β−ヒドロキシステロイドを対応する１２−ケトステロイドに変換するプロセスを提供し、前記プロセスは下記を含む：
ａ） 適切に保護された１１−β−ヒドロキシステロイドを選択し；
ｂ） 該１１−β−ヒドロキシステロイドを脱水して、前記ステロイド中にΔ−９，１１−エン官能基を与え；
ｃ） 補助酸化剤の存在下に、前記ｂ）のステロイド生成物をｔ−アルキルヒドロペルオキシドと反応させることによって、１２位におけるアリル酸化を行い；そして
ｄ） Δ−９，１１−エン官能基を水素化して、９−α−ヒドロ−１１−ジヒドロ−１２−ケトステロイドを得；そして、
ｅ） 必要に応じて、前記ｄ）で生成された９−α−ヒドロ−１１−ジヒドロ−１２−ケトステロイドの１２−ケト官能基を、有効量の還元剤で還元して、９−α−ヒドロ−１１−ジヒドロ−１２−α−ヒドロキシステロイドを得る。
他の実施形態において、本発明は、化合物１２：
を調製する方法を提供し、該方法は、化合物１３［ここで、Ｐｇはヒドロキシル保護基である］：
を、脱水条件下で接触させて、化合物１２を得ることを含む。
他の実施形態において、本発明は、式１４の化合物：
を調製する方法を提供し、該方法は下記を含む：
ａ） ヒドロコルチゾン：
を、水素化条件下で、少なくとも１モル当量の水素に接触させて、４，５−ジヒドロヒドロコルチゾン−化合物１５：
を得；
ｂ） 化合物１５を、カルボニル基がアルコール基に還元される条件下で、少なくとも２当量の還元剤に接触させて、化合物１６：
を得；
ｃ） 化合物１６を、酸化条件下で、ビシナルアルコール酸化剤に接触させて、化合物１７：
を得；
ｄ） 化合物１７の３−ヒドロキシル基を選択的に保護して、式１３の化合物：
［式中、Ｐｇはヒドロキシル保護基である］
を得；
ｅ） 式１３の化合物を、脱水条件下で接触させて、式１２の化合物；
を得；そして、
ｆ） ヒドロキシル保護基を除去して、化合物１４を得る。
他の実施形態において、本発明は、式１８の化合物；
を調製する方法を提供し、前記方法は下記を含む：
ａ） ヒドロコルチゾン：
を、水素化条件下で、少なくとも１モル当量の水素に接触させて、４，５−ジヒドロヒドロコルチゾン−化合物１５：
を得；
ｂ） 化合物１５を、カルボニル基がアルコール基に還元される条件下で、少なくとも２当量の還元剤に接触させて、化合物１６：
を得；
ｃ） 化合物１６を、酸化条件下で、ビシナルアルコール酸化剤に接触させて、化合物１７：
を得；
ｄ） 化合物１７の３−ヒドロキシル基を選択的に保護して、化合物１３：
［式中、Ｐｇはヒドロキシル保護基である］
を得；
ｅ） 式１３の化合物を、脱水条件下で接触させて、化合物１２；
を得；そして
ｆ） 化合物１２を、オレフィン形成条件下で変換して、化合物１８：
を形成する。
他の実施形態において、本発明は、デオキシコール酸またはその塩を調製する方法を提供し、前記方法は下記を含む：
ａ） 前記の手順に従って、化合物１８を得；
ｂ） 化合物１８を、ルイス酸の存在下に、アルキルプロピオレートＣＨ≡ＣＣ（Ｏ）ＯＲ’またはアルキルアクリレートＣＨ２＝ＣＨＣ（Ｏ）ＯＲ’［ここでＲ’はアルキルである］と反応させて、化合物１９：
［式中、破線
は単結合または二重結合である］
を形成し；
ｈ） 式１９の化合物を、水素化条件下で、Ｈ２と反応させて、化合物２０：
を形成し；
ｉ） 化合物２０を酸化剤と反応させて、化合物２１：
を得；
ｊ） 化合物２１を、水素化条件下で、Ｈ２と反応させて、化合物２２：
を得；
ｋ） 化合物２２を還元剤と反応させて、化合物２３：
を得；そして
ｌ） 化合物２３を、脱保護および加水分解条件下で接触させて、デオキシコール酸またはその塩を形成する。
他の実施形態において、本発明は、化合物２４：
を調製する方法を提供し、前記方法は下記を含む：
ａ） 化合物２５：
を、高圧に維持されたオートクレーブにおいて、アセトン、イソプロパノール、酢酸エチル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドおよびテトラヒドロフランから成る群から選択される溶媒中で、水素および少なくとも８ｗｔ％の５０％湿潤（安全のために水で湿潤）Ｐｄ炭素を含む水素化条件下で接触させて、化合物２６：
を得；
ｂ） 化合物２６を、硫酸の存在下に、水が除去される条件下で脱水して、化合物２７：
を得；
ｃ） 化合物２７を、−４０℃〜−４５℃の温度を包含する選択的還元条件下で、過剰のリチウムトリ−ｔ−ブトキシアルミニウムハイドライドに接触させて、化合物２８：
を得；
ｄ） 化合物２８を、ウィッティヒ反応条件下で、過剰のエチルトリアリールホスホニウムハライドに接触させて、化合物２９：
を得；
ｅ） 化合物２９の
を、過剰の無水の無水酢酸を包含するアセチル化条件下で保護して、化合物３０：
を得；
ｆ） 化合物３０を、アルキル化条件下で、過剰のＣ１−Ｃ２アルキルアルミニウムジクロリドの存在において、過剰のメチルアクリレートに接触させて、化合物３１：
を形成し；
ｇ） 化合物３１を、高圧に維持されたオートクレーブを包含する水素化条件下で、不活性溶媒中で、水素ならびに白金および乾燥パラジウム炭素から選択される水素化触媒に接触させて、化合物３２：
を得；
ｈ） 不活性溶媒に溶解させた化合物３２を、酸化条件下で第一酸化剤としての過剰のＣ４−Ｃ６ｔ−アルキルヒドロペルオキシドおよび補助酸化剤としての過剰のＮａＯＣｌを包含する補助酸化条件下で接触させ、必要に応じて、それに続いて、わずかに過剰のピリジニウムクロロクロメートでさらに酸化して、化合物２４：
を得、該化合物をメタノールで洗浄する。
本発明の他の実施形態において、デオキシコール酸またはその塩を調製する方法を提供し、該方法は下記を含む：
ａ） 化合物２４：
を、高圧に維持されたオートクレーブにおいて、水素およびＰｄ炭素を含む水素化条件下で、水素およびＰｄ／Ｃに接触させ、必要に応じて、それに続いて、水素化の間に形成された任意の１２−ヒドロキシル基を酸化条件下でピリジニウムクロロクロメートで酸化して、化合物３３：
を得；
ｂ） 化合物３３を、還元条件下で、リチウムトリ−ｔ−アルコキシアルミニウムハイドライドと反応させて、化合物３４：
を得；そして
ｃ） 化合物３４を、脱保護および加水分解条件に暴露して、デオキシコール酸またはその塩を形成する。
他の実施形態において、本発明は、化合物２６：
を調製する方法を提供し、該方法は、化合物２５：
を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、アセトン、イソプロパノール、酢酸エチル、および５％までの水を含む水性アセトンから成る群から選択される溶媒を使用して、水素および１０％Ｐｄ／Ｃを含む水素化条件下で接触させることによって行われる。
他の実施形態において、本発明は、９６％より高い純度を有するデオキシコール酸（ＤＣＡ）またはその塩を調製する方法を提供し、該方法は下記を含む：
（ａ） ＤＣＡ溶液を形成する条件下で、約９５％以下の純度を有するＤＣＡを、ジクロロメタンを含む溶媒に接触させ；
（ｂ） 工程（ａ）で得たＤＣＡ溶液からＤＣＡを結晶化して、結晶性ＤＣＡを含有する溶液を得；
（ｃ） ９６％より高い純度を有する結晶性ＤＣＡを回収する。
他の実施形態において、本発明は、９６％より高い純度を有するデオキシコール酸（ＤＣＡ）を調製する方法を提供し、該方法は下記を含む：
（ａ） ＤＣＡ溶液を形成する条件下で、約９５％以下の純度を有するＤＣＡを、ジクロロメタンおよびメタノールを含む溶媒に接触させ；
（ｂ） 工程（１）で得たＤＣＡ溶液からＤＣＡを結晶化して、結晶性ＤＣＡを含有する溶液を得；
（ｃ） 結晶性ＤＣＡを回収し、回収した結晶性ＤＣＡに９６％より高い純度を与えるのに充分な量のジクロロメタンを除去する。
他の実施形態において、本発明は、合成デオキシコール酸（ＤＣＡ）または薬学的に許容されうるその塩を提供し、該合成ＤＣＡまたは薬学的に許容されうるその塩は、少なくとも９９％の純度を有する。
他の実施形態において、本発明は、少なくとも９９％の純度を有するＤＣＡまたは薬学的に許容されうるその塩、および薬学的に許容されうる賦形剤を含む組成物を提供する。
他の実施形態において、本発明は、局所的脂肪の非外科的除去用の組成物を提供し、前記組成物は、少なくとも９９％の純度を有するＤＣＡまたは薬学的に許容されうるその塩から本質的に成り、該ＤＣＡは、本質的に、前記組成物の単独脂肪除去成分である。
他の実施形態において、本発明はＤＣＡおよび溶媒を含む組成物を提供し、該溶媒はメタノール含有または不含有のジクロロメタンを含み、溶媒に対するＤＣＡの濃度は４０：１〜約１０：１である。
図１は、５００ＭＨｚ計器を使用した化合物９のプロトンＮＭＲスペクトルを示す。 図２は、１２５ＭＨｚ計器を使用した化合物９の１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを示す。 図３は、化合物９の質量スペクトルを示す。
発明の詳細な説明
本開示を通して、種々の刊行物、特許および公開特許明細書が、出典を明記することによって参照される。これらの刊行物、特許および公開特許明細書の開示は、本発明が関係している技術の現状をより充分に記載するために、参照により本開示に組み入れられる。
本明細書に使用されている特定の用語は、以下に定義される意味を有しうる。明細書および特許請求の範囲に使用されている、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈から明らかにそうでないことが示されていなければ、単数および複数のものを包含する。
特に指示しない限り、明細書および特許請求の範囲に使用されている成分の量、反応条件等を表す全ての数値は、全ての場合において、「約」という用語で修飾されるものと理解すべきである。従って、異なる指示がない限り、以下の明細書および添付の特許請求の範囲に記載されている数値パラメーターは概数である。各数値パラメーターは、少なくとも、記載されている有効桁数に照らして、通常の丸め法を適用することによって、解釈すべきである。
本明細書に使用されている「含む」という用語は、化合物および方法が、記載されている要素を包含するが、他のものを排除しないことを意味するものとする。組成物および方法を定義するために使用されている「から本質的に成る」は、化合物または方法に何らかの本質的重要性を持つ他の要素を排除することを意味しうる。「から成る」は、特許請求されている化合物および実質的方法段階に関して、他の成分の痕跡量以上の要素を排除することを意味しうる。これらの変遷用語のそれぞれによって定義される実施形態は、本発明の範囲に含まれる。従って、該方法および該化合物は、付加的段階および成分を包含することができる（含む）かまたは重要でない付加的段階および化合物を包含することができる（から本質的に成る）ことを意図するか、または記載されている方法段階または化合物のみ（から成る）を意図する。
「アルキル」という用語は、１〜１０個の炭素原子または１〜６個の炭素原子を有する一価飽和脂肪族ヒドロカルビル基を指す。「低級アルキル」という用語は、１〜６個の炭素原子または１〜４個の炭素原子のアルキルを指す。この用語は、例として、直鎖および分岐鎖ヒドロカルビル基、例えば、メチル（ＣＨ３−）、エチル（ＣＨ３ＣＨ２−）、ｎ−プロピル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２−）、イソプロピル（（ＣＨ３）２ＣＨ−）、ｎ−ブチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、イソブチル（（ＣＨ３）２ＣＨＣＨ２−）、ｓ−ブチル（（ＣＨ３）（ＣＨ３ＣＨ２）ＣＨ−）、ｔ−ブチル（（ＣＨ３）３Ｃ−）、ｎ−ペンチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、およびネオペンチル（（ＣＨ３）３ＣＣＨ２−）を包含する。
「ｔ−アルキル」または「ｔｅｒｔ−アルキル」という用語は、式Ｒ１Ｒ２Ｒ３Ｃ−の第三級アルキル基を指し、ここでＲ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立に１〜３個の炭素原子を有するアルキルであり、合計１０個の炭素原子を有する。そのような基は、好ましくは、４〜６個以下の炭素原子を有する。
「酸化剤」という用語は、酸化−還元反応において電子を受容する試薬を指す。このようにして、酸素が分子に付加されることができ、または水素が分子から除去されることができる。酸化剤は、単に例として、ジョーンズ試薬、ｔ−ブチルヒドロペルオキシド、次亜塩素酸ナトリウム、ピリジニウムクロロクロメートおよびＣｒＯ３を包含する。一例において、酸化剤は、ビシナル（１，２）アルコールに特定され、過ヨウ素酸化合物を包含する。そのような酸化剤は、「ビシナルアルコール酸化剤」と呼ばれることがある。
「クロム酸化剤」という用語は、酸化を行うことができるクロムＶＩ化合物を指す。一実施形態において、クロム酸化剤は、第一級アルコールをアルデヒドに、第二級アルコールをケトンに、酸化することができる。そのような選択的クロム酸化剤は、一般に、ピリジンのような塩基で錯体化されている。１つの特に好ましいクロム酸化剤は、ピリジニウムクロロクロメートである。他の実施形態において、クロム酸化剤は、ビニル不飽和にアルファ位のメチレン基を酸化して、アリルケトンを形成することができる。その実施形態において、好ましいクロム酸化剤は、三酸化クロム、ならびにＮａＯＣｌおよびｔ−アルキルハイドロジェンペルオキシド、例えばｔ−ブチルハイドロジェンペルオキシド（ＴＢＨＰ）の補助酸化剤混合物を包含する。
「ヒドロキシ保護基」という用語は、化合物のヒドロキシ（−ＯＨ）基を保護し、好適な脱保護条件下でヒドロキシ基を離すことができる基を指す。一般的なそのような基は、アシル（ヒドロキシ基の酸素原子とエステルを形成する）、例えば、アセチル、ベンゾイル、およびヒドロキシ基の酸素原子とエーテルを形成する基、例えば、ベンジルおよびメトキシメチル等を包含する。ヒドロキシ保護基は、有機合成の分野において周知である。
「脱離条件」という用語は、小分子、例えば、Ｈ２Ｏ、ＨＣｌまたはＨＢｒ等が、ヒドロキシル、クロロまたはブロモ基等を含む化合物から失われて、アルケニル基を含む対応する化合物を形成する反応条件を指す。一例において、脱離条件は脱水条件を包含し、該条件において、ヒドロキシル基およびビシナル水素原子が脱離してビニル基（「ｅｎｅ」）基を形成する。脱水条件は、ヒドロキシル基を、脱離基、例えば、クロロ、ブロモ、トシル、メシル、−ＯＳ（Ｏ）Ｃｌに変換することを含みうる。
「Ａｃ」という用語は、式ＣＨ３Ｃ（Ｏ）−を有するアセチル基を指す。
「ケト」という用語は、基（＞Ｃ＝Ｏ）を指す。
「ケト保護基」は、化合物のケト基を保護し、好適な脱保護条件下でケト基を離すことができる基を指す。一般的なそのような基は、ケタールおよびアシラールを包含する。ケト保護基は、有機合成の分野において周知である。
使用しうる好適なヒドロキシまたはケト保護基および他の保護基、ならびにそれらの除去の条件は、書籍、例えばＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ ｏｒｇａｎｉｃ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第３版、Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ編集、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９９９（その全内容は参照により本明細書に組み入れられる）に記載されており、当業者に周知であると考えられる。
「ケタール」という用語は、分子中の同じ炭素原子に結合した２個の−ＯＲ２２基を有する基を指し、ここで、Ｒ２２はアルキル基を表すか、または２個のＲ２２基がそれらに結合している炭素原子および２個の酸素原子と共に環構造を形成する。２個の−ＯＲ２２基は、同じでも異なってもよい。
「アシラール」という用語は、分子中の同じ炭素原子に結合した２個の−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ２３基を有する基を指し、ここで、Ｒ２３はアルキル基を表すか、または２個のＲ２３基がそれらに結合している炭素原子および２個の−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−基と共に環構造を形成する。２個の−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ２３基は、同じでも異なってもよい。
「還元剤」という用語は、酸化−還元反応において電子を供与することができ、水素を分子に付加することを可能にする試薬を指す。好適な還元剤は、水素化アルミニウムリチウム、水素化ホウ素ナトリウム、シアノ水素化ホウ素ナトリウム等を包含する。
「アセチル化試薬」という用語は、分子のアルコール成分にアセチル（Ａｃ）基ＣＨ３Ｃ（Ｏ）−を付加することができる試薬を指す。
「酸」という用語は、Ｈ＋を供与することができる試薬を指す。
「ルイス酸」という用語は、電子対受容体を指す。ルイス酸は、有機金属試薬、例えば、ハロゲン化アルキルアルミニウム（例えば、Ｅｔ２ＡｌＣｌおよびＭｅＡｌＣｌ２）を包含する。
「水素化条件」という用語は、１個以上の二重結合を横切ってＨ２を導入するのに好適な条件および触媒を指す。水素化触媒は、白金族金属（白金、パラジウム、ロジウムおよびルテニウム）に基づく触媒、例えばＰｄ／ＣおよびＰｔＯ２を包含する。
「オレフィン化試薬」という用語は、ケトンと反応して、対応するオレフィンを形成する試薬を指す。「オレフィン形成条件」という用語は、そのような変換を行うのに好適な条件を指す。そのような試薬の例は、ウィッティヒ試薬およびウィッティヒオレフィン化条件を包含する。
「還流条件」という用語は、液体が沸騰し、沸騰液体の蒸気が凝縮し、液体に戻る条件を指す。
「薬学的に許容されうる塩」という用語は、デオキシコール酸の薬学的に許容されうる塩を指し、該塩は、種々の有機および無機対イオン（当分野において周知であり、単に例として、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウムおよびテトラアルキルアンモニウムを包含する）から誘導される。
本明細書において使用されるステロイド骨格の番号付けは、一般記法に従う：
他に規定されない限り、骨格は、炭素原子の位置を表すにすぎないものと理解すべきである。２個の隣接炭素原子間の１個以上の結合が二重結合であってもよく、１個以上の炭素原子が必要に応じて置換されてもよい。
本明細書において使用される「Δ−９，１１−エンステロイド」または「Δ−９，１１−エン化合物」という用語は、９および１１炭素原子間に二重結合を有するステロイド化合物を指し、該化合物は下記の骨格で表すことができる：
本明細書において使用される「１１−β−ヒドロキシステロイド」または「１１−β−ヒドロキシ化合物」という用語は、１１位の炭素原子上にヒドロキシ置換基を有するステロイド化合物を指し、該化合物は下記の骨格で表すことができる：
本明細書において使用される「１１−ケトステロイド」または「１１−ケト化合物」という用語は、１１位の炭素原子上にケト置換基を有するステロイド化合物を指し、該化合物は下記の骨格で表すことができる：
本明細書において使用される「１２−ケトステロイド」または「１２−ケト化合物」という用語は、１２位の炭素原子上にケト置換基を有するステロイド化合物を指し、該化合物は下記の骨格で表すことができる：
本明細書において使用される「１２−アルファ−ヒドロキシステロイド」または「１２−アルファ−ヒドロキシ化合物」という用語は、１２位の炭素原子上にヒドロキシ置換基を有するステロイド化合物を指し、該化合物は下記の骨格で表すことができる：
「胆汁酸の１７−側鎖」という用語は、１７位の炭素原子上の置換基を指す。
合成プロセス
Ａ． ヒドロコルチゾンからのＤＣＡの合成
一実施形態において、本発明は、デオキシコール酸（ＤＣＡ）または薬学的に許容されうるその塩を合成するための中間体である化合物１４の合成を提供する。
スキーム１． ヒドロコルチゾンからの３α−ヒドロキシ−５β−アンドロスタ−９（１１）−エン−１７−オン（１４）の合成
［式中、Ｐｇは保護基である］。
この方法は、化合物１３（その合成は下記に記載する）：
［式中、Ｐｇはヒドロキシル保護基である］
を、脱水条件に暴露して、化合物１２：
を得、ヒドロキシル保護基を除去することを含む。
いくつかの実施形態において、Ｐｇは−Ｃ（Ｏ）Ｒ１であり、ここでＲ１は低級アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｐｇは−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である。
一実施形態において、脱水条件は、式１３の化合物のヒドロキシル基を−Ｌに変換することを含み、ここで、−Ｌは、下記のような脱離基である：−ＯＳ（Ｏ）Ｃｌ、−ＯＳＯ２Ｒ２（ここで、Ｒ２は、低級アルキル、またはフェニル、またはアルキルで置換されたフェニル、例えば、−ＣＨ３または−Ｃ６Ｈ５ＣＨ３である）、または−ＯＰＸ２（ここでＸはブロモまたはＯＲ３であり、ここでＲ３は低級アルキルである）。いくつかの実施形態において、脱水条件は、塩化チオニルおよびピリジンを含む。
いくつかの実施形態において、化合物１３は、化合物１７：
の３−ヒドロキシル基を選択的に保護することを含む方法によって調製される。
一実施形態において、保護基Ｐｇは−Ｃ（Ｏ）−低級アルキル、例えば−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である。いくつかの実施形態において、化合物１７をアシル化条件に暴露して３５を形成する（例えば、１７を、無水酢酸および有機塩基、例えば、トリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ）、ピリジンおよび／またはジメチルアミノピリジンで処理することによって行う）。
いくつかの実施形態において、化合物１７は、化合物１６：
を、酸化条件下で、ビシナルアルコール酸化剤に接触させることを含む方法によって調製される。
いくつかの実施形態において、ビシナルアルコール酸化剤は、四酢酸鉛（Ｐｂ（ＯＡｃ）４）または過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）である。
いくつかの実施形態において、化合物１６は、化合物１５：
を、カルボニル基がアルコール基に還元される条件下で、少なくとも２当量の還元剤に接触させることを含む方法によって調製される。
いくつかの実施形態において、還元剤は、水素化ホウ素ナトリウム、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、水素化アルミニウムリチウム等を含む。
いくつかの実施形態において、化合物１５は、ヒドロコルチゾン：
を、水素化条件下で、少なくとも１モル当量の水素と反応させることを含む方法によって調製される。
いくつかの実施形態において、水素化条件は、Ｐｄ／Ｃを触媒として含む。
いくつかの実施形態において、水素化条件は、ＤＭＦを溶媒として含む。
いくつかの実施形態において、化合物１２を調製する方法は、下記を含む：
ａ） ヒドロコルチゾン
を、水素化条件下で、少なくとも１モル当量の水素に接触させて、４，５−β−ジヒドロヒドロコルチゾン−化合物１５：
を得；
ｂ） 化合物１５を、カルボニル基がアルコール基に還元される条件下で、少なくとも２当量の還元剤に接触させて、化合物１６：
を得；
ｃ） 化合物１６を、酸化条件下で、ビシナルアルコール酸化剤に接触させて、化合物１７：
を得；
ｄ） 化合物１７の３−ヒドロキシル基を選択的に保護して、化合物１３：
［式中、Ｐｇはヒドロキシル保護基である］
を得；
ｅ） 化合物１３を、脱水条件に付して、化合物１２：
を得る。
他の態様において、本発明は、化合物１２を脱保護条件に暴露することを含む化合物２８の調製方法を提供する。いくつかの実施形態において、Ｐｇは−Ｃ（Ｏ）低級アルキルであり、脱保護条件は加水分解条件を含む。いくつかの実施形態において、加水分解条件は、アルカリ金属水酸化物またはアルカリ金属アルコキシドおよび水を含む。
いくつかの実施形態において、本発明は、ＤＣＡまたはその塩を調製する方法を提供し、前記方法は下記を含む：
ａ〜ｅ） 化合物１２：
を前記のように調製し；
ｆ） 化合物１２を、オレフィン形成条件下で変換して、化合物１８：
を形成し；
ｇ） 化合物１８を、ルイス酸の存在下に、アルキルプロピオレートＣＨ≡ＣＣ（Ｏ）ＯＲまたはアルキルアクリレートＣＨ２＝ＣＨＣ（Ｏ）ＯＲ［ここで、Ｒはアルキルである］と反応させて、化合物１９：
［式中、破線
は、単結合または二重結合である］
を形成し；
ｈ） 式１９の化合物を、水素化条件下で、Ｈ２と反応させて、化合物２０：
を形成し；
ｉ） 化合物２０を、酸化剤と反応させて、化合物２１：
を形成し；
ｊ） 化合物２１を、水素化条件下で、Ｈ２と反応させて、化合物２２：
を形成し；
ｋ） 化合物２２を、還元剤と反応させて、化合物２３：
を形成し；そして、
ｌ） 化合物２３を、脱保護および加水分解条件に暴露して、デオキシコール酸またはその塩を形成する。
一実施形態において、パートａ）の水素化条件は、Ｐｄ／Ｃ触媒を含む。
いくつかの実施形態において、水素化条件は、溶媒ＤＭＦを溶媒として含む。
一実施形態において、パートｂ）の還元剤は、ＮａＢＨ４である。
一実施形態において、パートｃ）のビシナルアルコール酸化剤は、ＮａＩＯ４である。
一実施形態において、式１３〜２３の化合物の保護基Ｐｇは、−Ｃ（Ｏ）−低級アルキル、例えば、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である。いくつかの実施形態において、化合物１７をアシル化条件に暴露して３５を形成する（例えば、１７を、無水酢酸および有機塩基、例えば、Ｅｔ３Ｎ、ピリジンおよび／またはジメチルアミノピリジンで処理することによって行う）。
一実施形態において、工程ｅ）の脱水条件は、式１３の化合物のヒドロキシル基を−Ｌに変換することを含み、ここで、−Ｌは、下記のような脱離基である：−ＯＳ（Ｏ）Ｃｌ、−ＯＳＯ２Ｒ２（ここで、Ｒ２は、低級アルキル、またはフェニル、またはアルキルで置換されたフェニル、例えば、−ＣＨ３、−Ｃ６Ｈ５ＣＨ３である）、−ＯＰＸ２（ここでＸはブロモまたはＯＲ３であり、ここでＲ３は低級アルキルである）。いくつかの実施形態において、脱水条件は、塩化チオニルおよびピリジンを含む。
一実施形態において、パートｆ）のオレフィン形成条件は、ウィッティヒ試薬、例えばＰｈ３ＰＣＨ２ＣＨ３ ＋Ｂｒ−を含む。
一実施形態において、パートｇ）のルイス酸は、ＥｔＡｌＣｌ２である。
一実施形態において、パートｇ）のアルキルプロピオレートは、メチルプロピオレートである。
一実施形態において、パートｇ）のアルキルアクリレートは、メチルアクリレートである。
一実施形態において、パートｈ）の水素化条件は、ＰｔＯ２またはＰｄ／Ｃ触媒を含む。
一実施形態において、パートｉ）の酸化剤は、ＣｒＯ３である。
一実施形態において、パートｉ）の酸化剤は、ｔ−ブチルヒドロペルオキシドを含む。一実施形態において、パートｉ）の酸化剤は、低温（例えば、約０〜５℃）において、過剰のｔ−ブチルヒドロペルオキシド（例えば、約３５当量）、および過剰の次亜塩素酸ナトリウム（例えば、約７当量）を含む。他の実施形態において、パートｉ）の酸化剤は、ジクロロメタン（ＤＣＭ）中の、パラジウム試薬（例えば、Ｐｄ／Ｃ）、過剰のｔ−ブチルヒドロペルオキシド（例えば、約５当量）および炭酸カリウムを含む。
一実施形態において、パートｊ）の水素化条件は、Ｐｄ／Ｃ触媒を含む。
一実施形態において、パートｋ）の還元剤は、ＬｉＡｌ（ＯｔＢｕ）３Ｈである。
一実施形態において、Ｐｇが−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である場合のパートｌ）の脱保護および加水分解条件は、化合物３８を、アルカリ金属水酸化物、アルカリ金属アルコキシド、またはその両方の混合物と反応させることを含む。
一実施形態において、アルカリ金属水酸化物は、ＬｉＯＨまたはＮａＯＨである。
一実施形態において、デオキシコール酸の塩を、アルカリ金属アルコキシドまたは水酸化物との反応によって調製することができる。デオキシコール酸の塩は、ナトリウム（Ｎａ＋）、カリウム（Ｋ＋）およびリチウム（Ｌｉ＋）塩を包含する。
一実施形態において、本発明は、実施例３に示されるように副生成物を生じ、これは、化学修飾によって再循環させて、本明細書に記載されている方法における中間体として使用することができる。
Ｂ． １１−β−ヒドロキシ／１１−ケトステロイドの、対応する１２−α−ヒドロキシ／１２−ケトステロイドへの変換
他の実施形態において、本発明は、１１−β−ヒドロキシ／１１−ケトステロイドの、対応する１２−α−ヒドロキシ／１２−ケトステロイド（この化合物は、胆汁酸の合成に有用である）への効率的変換のための合成プロセスを提供する。該プロセスは、好ましくは、９−ＨＡＤ、コルチゾンまたはヒドロコルチゾンのようなステロイドを使用し、該ステロイドは、米国仮特許出願第６１／３０３，８１６号（出願日：２０１０年２月１２日；発明の名称：「Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ Ａｃｉｄ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓ Ｔｈｅｒｅｏｆ」；該出願の全内容は参照により本明細書に組み入れられる）に記載されている方法によって、合成的に調製し、化合物４に変換してもよい。
そのプロセス態様の１つにおいて、本出願は、Δ−９，１１−エン化合物４：
を、対応する１２−ケト化合物３：
に変換するプロセスに関し；
ここで、Ｐｇはヒドロキシル保護基であり、Ｒは水素、ヒドロキシルまたは−ＯＰｇであり、Ｒ１は胆汁酸の１７−側鎖であり、該胆汁酸はコール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸およびグリココール酸から成る群から選択され、ここで前記側鎖のカルボキシル官能基はＣ１−Ｃ６アルキル基で必要に応じてエステル化され、Ｒ２は水素であり、またはＲ１およびＲ２はそれらに結合している炭素原子と一緒になってケト基またはケト保護基、例えばケタールを形成し；
前記プロセスは、下記を含む：
補助酸化剤の存在下に、式（Ｒ３）（Ｒ４）（Ｒ５）Ｃ−Ｏ−ＯＨ［ここで、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立にＣ１−Ｃ３アルキルである］のｔ−アルキルヒドロペルオキシドとの反応によって、化合物４の１２位におけるアリル酸化を行って、化合物１、２および３：
の混合物を先ず得；
そして、化合物１および／または２を、必要に応じて、さらに変換して、Δ−９，１１−エン−１２−オン化合物３を得る。
いくつかの実施形態において、ｔ−アルキルヒドロペルオキシドは、ｔ−ブチルヒドロペルオキシドである。
補助酸化剤は一般に、酸化が前記式１、２および３に示されているアリルケト、アリルアルコールまたはアリルペルオキシドのいずれを与えるかにかかわらず、アルキルヒドロペルオキシドと協力して作用して、１２位における酸化を行う任意の酸化剤である。いくつかの実施形態において、補助酸化剤は、水性次亜塩素酸ナトリウム（ＮａＯＣｌ）である。一実施形態において、化合物４の１２位におけるアリル酸化は、低温（例えば、２２℃以下、１０℃以下、および約０〜５℃）において、過剰のｔ−ブチルヒドロペルオキシド（例えば、１．５当量以上、６当量以上、１０当量以上、または約３５当量）、および過剰の次亜塩素酸ナトリウム（例えば、約７当量）によって行われる。ｔ−ブチルヒドロペルオキシドは、例えば約７０％の濃度で、水溶液として添加しうる。次亜塩素酸ナトリウムは、例えば約２．５％〜１３％、約５％または１０％の濃度で、水溶液として添加しうる。いくつかの実施形態において、アリル酸化は、水、酢酸エチル、ヘキサン、ヘプタン、トルエン、ｔ−ブチルアルコール、ジメトキシプロパン、石油エーテルおよびジクロロエタンから成る群から選択される溶媒、またはそれらの組合せにおいて行われる。いくつかの実施形態において、相間移動触媒を使用することができる。これらの補助酸化剤の使用は、毒性クロムＶＩ酸化剤を使用せずに酸化を与える。
いくつかの実施形態において、補助酸化剤は、ＣｕＩのような金属化合物である。
いくつかの実施形態において、アリル酸化は、パラジウム炭および塩基の存在下に行われる。他の実施形態において、化合物４の１２位におけるアリル酸化は、ＤＣＭのような溶媒中で、パラジウム試薬（例えば、Ｐｄ／Ｃ、Ｐｄ（ＯＡｃ）２・ＢＩＮＡＰ、Ｐｄ（ＯＣＯＣＦ３）２またはＰｄ（ＯＡｃ）２／炭）、過剰のｔ−ブチルヒドロペルオキシド（例えば、約５当量）および炭酸カリウムまたはリン酸ナトリウムによって行われる。
いくつかの実施形態において、化合物１から化合物３への変換は、ＤＣＭのような溶媒中における、パラジウム試薬（例えば、Ｐｄ／Ｃ、Ｐｄ（ＯＡｃ）２・ＢＩＮＡＰ、Ｐｄ（ＯＣＯＣＦ３）２またはＰｄ（ＯＡｃ）２／炭）、過剰のｔ−ブチルヒドロペルオキシド（例えば、約５当量）および炭酸カリウムまたはリン酸ナトリウムの添加を含む。
いくつかの実施形態において、化合物２の酸化は、アルコール官能基（−ＯＨ）をケト官能基（＝Ｏ）に酸化することができる酸化剤の添加を含み、該酸化剤は、当分野において既知であり、例えばピリジニウムクロロクロメート（ＰＣＣ）である。そのように使用される場合、使用されるピリジニウムクロロクロメートの量は、三酸化クロム［ＶＩ］の使用より有意に少ない。例えば、好ましい実施形態において、ピリジニウムクロロクロメートは、化合物２に対して約１〜１．５のモル比、好ましくは約１．１のモル比で使用される。これは、酸化を行うために以前に使用されていた三酸化クロムの量（約４倍多い）と比較して有利である。
いくつかの実施形態において、先ず、化合物１を混合物から分離し、次に、例えば、アルミニウムアマルガムのような還元剤または接触水素化による還元によって、化合物２に変換する。
他のそのプロセス態様において、本発明は、化合物１、２および３：
の混合物を、対応する１２−ケト化合物３９：
［式中、Ｐｇ、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ先に定義した通りである］
に変換する２段階プロセスに関し；
前記プロセスは、下記を含む：
先ず、前記混合物を水素化条件下で反応させ；そして
次に、それによって形成された生成物を、酸化条件下で反応させる。
いくつかの実施形態において、化合物１、２および３の混合物の水素化は、化合物５、６および３９：
を含む化合物の混合物を形成する。
いくつかの実施形態において、水素化条件は、水素ガス、触媒および溶媒を含む。いくつかの実施形態において、触媒は、白金（Ｐｔ）、パラジウム（Ｐｄ）、ロジウム（Ｒｈ）およびルテニウム（Ｒｕ）に基づく触媒、例えば、Ｐｄ／Ｃ、ＲｈＣｌ（ＰＰｈ３）３およびＰｔＯ２から成る群から選択される。いくつかの実施形態において、溶媒は酢酸エチル（ＡｃＯＥｔ）である。
いくつかの実施形態において、酸化条件は、アルコール官能基（−ＯＨ）をケト官能基（＝Ｏ）に酸化することができる当分野において既知の酸化剤を含む。
当分野において既知の酸化条件は、コーリー・キム酸化（Ｎ−クロロスクシンイミドおよび硫化ジメチルを使用）、デス・マーチン酸化（２−ヨードキシ安息香酸またはデス・マーチンペルヨージナンを使用）、ジョーンズ酸化（ＣｒＯ３を使用）、およびスワーン酸化（ジメチルスルホキシドおよび塩化オキサリルを使用）を包含するが、それらに限定されない。
いくつかの実施形態において、酸化剤は、ピリジニウムクロロクロメート（ＰＣＣ）である。他の酸化剤は、ピリジニウムジクロメート、過炭酸ナトリウム、ヨードキシ安息香酸、Ｖ２Ｏ５、Ｎａ２Ｃｒ２Ｏ７、ＣｒＯ３、過炭酸ナトリウム、尿素・過酸化水素、およびオキソン等を包含しうるが、それらに限定されない。
Ｒ１およびＲ２がそれらに結合している炭素原子と一緒になってケト基を形成する場合、ケト基は、ＷＯ２００８／１５７６３５（その全内容は参照により本明細書に組み入れられる）に記載されているような、当分野において既知の方法によって、胆汁酸の１７位側鎖に変換されることができる。
そのプロセス態様の１つにおいて、該プロセスは、化合物３９を還元して、化合物４０：
を与えることをさらに含む。
いくつかの実施形態において、化合物４０を与える化合物３９の還元は、立体選択的、好ましくは立体特異的に、ケト官能基（＝Ｏ）をアルコール官能基（−ＯＨ）に還元することができる還元剤、例えばリチウムトリ−ｔ−ブトキシアルミニウムハイドライドの添加を含む。
いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２は、それらに結合している炭素原子と一緒になって、ケト基を形成する。
いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２は、それらに結合している炭素原子と一緒になって、ケト保護基、例えば、
［式中、ｎは１、２または３であり、波線
は分子の残部への結合点を表す］
を形成する。
いくつかの実施形態において、Ｒ１は胆汁酸の１７−側鎖であり、該胆汁酸はコール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸およびグリココール酸から成る群から選択される。いくつかの実施形態において、前記側鎖のカルボキシル官能基は、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、例えばＣ１−Ｃ４アルキル基、例えばメチル基で、必要に応じてエステル化される。
いくつかの実施形態において、Ｒ１は下記から成る群から選択される：
［式中、Ｒ６は低級アルキルであり、波線
はステロイド骨格の１７位への結合点を表す］。
いくつかの実施形態において、Ｐｇは−Ｃ（Ｏ）Ｒ１２であり、ここで、Ｒ１２は低級アルキルであって、該低級アルキルは、ハロ、−ＯＲ１３およびフェニル（該フェニルは、ハロ、低級アルキルおよび−ＯＲ１３から成る群から選択される１〜５個の置換基で必要に応じて置換されている）から成る群から選択される１〜５個の置換基で必要に応じて置換されており；ここで、Ｒ１３は水素または低級アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｐｇは、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３または−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３である。いくつかの実施形態において、Ｐｇは、
である。
いくつかの実施形態において、Ｐｇは−Ｒ１４であり、ここで、Ｒ１４は下記から成る群から選択され：フェニル、−ＯＲ１３またはビニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）で必要に応じて置換された低級アルキル；−Ｓｉ（Ｒ１５）３；ヘテロシクロアルキル；ならびに、ハロ、低級アルキルおよび−ＯＲ１３から成る群から選択される１〜５個の置換基で必要に応じて置換されたフェニル；ここで、Ｒ１３は水素または低級アルキルであり、各Ｒ１５は、独立に、低級アルキルおよびフェニルから成る群から選択される。いくつかの実施形態において、Ｐｇは、下記から成る群から選択される：
本発明のプロセスは、１１−β−ヒドロキシステロイド（これは、対応する１１−ケトステロイドから、ケト基の従来の還元反応によって調製しうる）の変換、それに続く脱水を使用して、Δ−９，１１−エンステロイドを与え、これをアルキルヒドロペルオキシドによって対応する１２−ケトステロイドに酸化する。このプロセスは、ＣｒＯ３のような酸化剤を使用してΔ−９，１１−エンステロイドを１２−ケトステロイドに変換する以前から既知のプロセスと比較して、予想外に高い収率を与える。下記の実施例２の表に示されるように、デオキシコール酸の調製の間にＣｒＯ３を使用した場合の収率は、一般に、５０％未満、または４０％未満であった。本発明のプロセスを使用した場合、６０％を超える予想外に高い収率が一貫して得られた。さらに、ＮａＯＣｌ（漂白剤）およびＴＢＨＰの使用は、クロム（ＶＩ）酸化剤より有意に高い環境適合性である。
他のそのプロセス態様において、本発明は、１１−β−ヒドロキシステロイドを、対応する１２−ケトステロイドに変換するプロセスに関し、前記プロセスは下記を含む：
ａ） 適切に保護された１１−β−ヒドロキシステロイドを選択し；
ｂ） １１−β−ヒドロキシステロイドを脱水して、前記ステロイド中にΔ−９，１１−エン官能基を与え；
ｃ） 補助酸化剤の存在下に、前記ｂ）のステロイド生成物をアルキルヒドロペルオキシドと反応させることによって、１２位におけるアリル酸化を行い；そして
ｄ） Δ−９，１１−エン官能基を水素化して、９−α−ヒドロ−１１−ジヒドロ−１２−ケトステロイドを得；そして、
ｅ） 必要に応じて、前記ｄ）で生成された９−α−ヒドロ−１１−ジヒドロ−１２−ケトステロイドの１２−ケト官能基を、有効量の還元剤で還元して、９−α−ヒドロ−１１−ジヒドロ−１２−α−ヒドロキシステロイドを得る。
いくつかの実施形態において、アルキルヒドロペルオキシドは、ｔ−ブチルヒドロペルオキシドである。補助酸化剤は、本明細書に記載されている酸化剤の１つであってよい。
いくつかの実施形態において、１１−β−ヒドロキシステロイドは、対応する１１−ケトステロイドを、少なくとも化学論量の還元剤で還元して、１１−β−ヒドロキシステロイドを与えることによって調製される。
いくつかの実施形態において、１１−β−ヒドロキシステロイドは、ヒドロコルチゾン、またはヒドロコルチゾン誘導体、例えば保護ヒドロコルチゾンである。
本明細書に記載されているプロセスにおける個々の段階は、記載されているように順次に行うことができるが、必ずしも順次に行われるものではないと理解すべきである。１つ以上の段階を、より大きいスキームの一部として行うことができる。当業者は、本明細書に記載されている化合物の他の部分を容易に反応させて、これらの化合物の類似体を作製することができる。
Ｃ． 化合物２５からの化合物２４の合成
他の実施形態において、本発明は、化合物２４：
を調製する方法を提供し、前記方法は下記を含む：
ａ） 化合物２５：
を、高圧に維持されたオートクレーブにおいて、アセトン、イソプロパノール、酢酸エチル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドおよびテトラヒドロフランから成る群から選択される溶媒中で、水素および少なくとも８ｗｔ％の５０％湿潤Ｐｄ炭素を含む水素化条件下で接触させて、化合物２６：
を得；
ｂ） 化合物２６を、硫酸の存在下に、水が除去される条件下で脱水して、化合物２７：
を得；
ｃ） 化合物２７を、−４０℃〜−４５℃の温度を包含する選択的還元条件下で、過剰のリチウムトリ−ｔ−ブトキシアルミニウムハイドライドに接触させて、化合物２８：
を得；
ｄ） 化合物２８を、ウィッティヒ反応条件下で、過剰のエチルトリアリールホスホニウムハライドに接触させて、化合物２９：
を得；
ｅ） 化合物２９の
を、過剰の無水の無水酢酸を包含するアセチル化条件下で保護して、化合物３０：
を得；
ｆ） 化合物３０を、アルキル化条件下で、過剰のＣ１−Ｃ２アルキルアルミニウムジクロリドの存在において、過剰のメチルアクリレートに接触させて、化合物３１：
を形成し；
ｇ） 化合物３１を、高圧に維持されたオートクレーブを包含する水素化条件下で、不活性溶媒中で、水素ならびに白金および乾燥パラジウム炭素から選択される水素化触媒に接触させて、化合物３２；
を得；
ｈ） 不活性溶媒に溶解させた化合物３２を、酸化条件下で第一酸化剤としての過剰のＣ４−Ｃ６ｔ−アルキルヒドロペルオキシドおよび補助酸化剤としての過剰のＮａＯＣｌを包含する補助酸化条件下で接触させ、必要に応じて、それに続いて、わずかに過剰のピリジニウムクロロクロメートでさらに酸化して、化合物２４：
を得、該化合物をメタノールで洗浄する。
代替的実施形態において、本発明は、化合物３１：
を調製する方法を提供し、該方法は、化合物３０：
を、ルイス酸の存在下に、メチルアクリレートに接触させることによって行われる。
他の実施形態において、ルイス酸はＥｔＡｌＣｌ２である。
他の実施形態において、本発明は、化合物２６：
を調製する方法を提供し、該方法は、化合物２５：
を、水素および１０％Ｐｄ／Ｃを含む水素化条件下で接触させることによって行われ、該水素化条件において、水素化はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはアセトンの存在下に行われる。
他の実施形態において、水素化は、アセトンの存在下に行われる。
他の実施形態において、本発明は、化合物２４を調製する方法を提供し、該方法は下記を含む：
ａ） 化合物２５：
を、高圧に維持されたオートクレーブにおいて、アセトン、イソプロパノール、酢酸エチル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドおよびテトラヒドロフランから成る群から選択される溶媒中で、水素および少なくとも８ｗｔ％の５０％湿潤Ｐｄ炭素を含む水素化条件下で接触させて、化合物２６：
を得；
ｂ） 化合物２６を、硫酸の存在下に、水が除去される条件下で脱水して、化合物２７：
を得；
ｃ） 化合物２７を、−４０℃〜−４５℃の温度を包含する選択的還元条件下で、過剰のリチウムトリ−ｔ−ブトキシアルミニウムハイドライドに接触させて、化合物２８：
を得；
ｄ） 化合物２８を、ウィッティヒ反応条件下で、過剰のエチルトリアリールホスホニウムハライドに接触させて、化合物２９：
を得；
ｅ） 化合物２９の
を、過剰の無水の無水酢酸を包含するアセチル化条件下で保護して、化合物３０：
を得；
ｆ） 化合物３０を、アルキル化条件下で、過剰のＣ１−Ｃ２アルキルアルミニウムジクロリドの存在において、過剰のメチルアクリレートに接触させて、化合物３１：
を形成し；
ｇ） 化合物３１を、高圧に維持されたオートクレーブを包含する水素化条件下で、不活性溶媒中で、水素、ならびに白金および乾燥パラジウム炭素から成る群から選択される水素化触媒に接触させて、化合物３２：
を得；
ｈ） 不活性溶媒に溶解させた化合物３２を、酸化条件下で第一酸化剤としての過剰のＣ４−Ｃ６ｔ−アルキルヒドロペルオキシドおよび補助酸化剤としての過剰のＮａＯＣｌを包含する補助酸化条件下で接触させ、必要に応じて、それに続いて、わずかに過剰のピリジニウムクロロクロメートでさらに酸化して、化合物２４：
を得；そして
ｉ） 必要に応じて、化合物２４をメタノールで洗浄する。
他の実施形態において、
工程ａ）は、アセトンを溶媒として含み；
工程ｂ）は、ジクロロメタンを溶媒として含み；
工程ｃ）は、不活性雰囲気において、無水テトラヒドロフランを溶媒として含み；
工程ｄ）のウィッティヒ反応条件は、不活性雰囲気において、溶媒としての無水テトラヒドロフラン中に、カリウムｔ−ブトキシドを含み；
工程ｅ）は、トリエチルアミンおよび４−ジメチルアミノピリジンを含み；
工程ｆ）のＣ１−Ｃ２アルキルアルミニウムジクロリドは、０〜５℃における、不活性雰囲気中の、溶媒としての無水ジクロロメタン中の、エチルアルミニウムジクロリドを含み；
工程ｇ）の水素化触媒は、溶媒としての酢酸エチル中の、乾燥パラジウム炭素を含み；そして、
工程ｈ）のＣ４−Ｃ６ｔ−アルキルヒドロペルオキシドは、５℃未満の温度における、溶媒としての水中の、ｔ−ブチルヒドロペルオキシドを含む。
他の実施形態において、本発明は、デオキシコール酸またはその塩を調製する方法を提供し、該方法は下記を含む：
ａ） 化合物２４：
を、水素およびＰｄ炭素を含む水素化条件下で、水素およびＰｄ／Ｃに接触させ、必要に応じて、それに続いて、水素化の間に形成された任意の１２−ヒドロキシル基を酸化条件下でピリジニウムクロロクロメートで酸化して、化合物３３：
を得；
ｂ） 化合物３３を、還元条件下で、リチウムトリ−ｔ−アルコキシアルミニウムハイドライドと反応させて、化合物３４：
を得；そして
ｃ） 化合物３４を、脱保護および加水分解条件に暴露して、デオキシコール酸またはその塩を形成する。
化合物
他の態様において、本発明は、式１または５の化合物に関する：
［式中、
Ｐｇは、ヒドロキシル保護基であり；
Ｒは、水素、ヒドロキシルまたは−ＯＰｇであり；
Ｒ１は、コール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸およびグリココール酸から成る群から選択される胆汁酸の１７−側鎖であり、ここで、前記側鎖のカルボキシル官能基は、Ｃ１−Ｃ６アルキル基またはベンジル基で必要に応じてエステル化され；
Ｒ２は、水素であり；または
Ｒ１およびＲ２は、それらに結合している炭素原子と一緒になって、ケト基またはケト保護基を形成し；
Ｒ３、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立に、Ｃ１−Ｃ３アルキルである］。
いくつかの実施形態において、Ｒ１は、下記から成る群から選択される：
［式中、Ｒ６は低級アルキルであり、波線
はステロイド骨格の１７位への結合点を表す］。
いくつかの実施形態において、Ｒ１は、コール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸およびグリココール酸から成る群から選択される胆汁酸の１７−側鎖である。
いくつかの実施形態において、前記側鎖のカルボキシル官能基は、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、例えば、メチル、エチルまたはｔ−ブチルで必要に応じてエステル化される。
いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２は、それらに結合している炭素原子と一緒になって、ケト基を形成する。
いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２は、それらに結合している炭素原子と一緒になって、下記のようなケト保護基を形成する：
［式中、ｎは１、２または３であり、波線
は分子の残部への結合点を表す］
いくつかの実施形態において、式１の化合物は、化合物４１である：
いくつかの実施形態において、式１の化合物は、化合物４２、４３、４４、４５および４６から成る群から選択される：
いくつかの実施形態において、式５の化合物は、化合物４７である：
いくつかの実施形態において、式５の化合物は、化合物４８、４９、５０、５１および５２から成る群から選択される：
いくつかの実施形態において、式６の化合物は、化合物４８ａ、４９ａ、５０ａ、５１ａおよび５２ａから成る群から選択される：
Ｄ． 化合物５３からのＤＣＡの合成
他の実施形態において、デオキシコール酸（ＤＣＡ）または薬学的に許容されうるその塩を調製する方法を提供し、前記方法は下記を含む：
（１） 式５３の化合物：
を、還元剤と反応させて、式５４の化合物：
［式中、Ｐｇは保護基であり、Ｒはアルキルである］
を形成し；そして
（２） 式５４の化合物を、脱保護および加水分解条件に暴露して、デオキシコール酸または薬学的に許容されうるその塩を形成する。
いくつかの実施形態において、Ｐｇは−Ｃ（Ｏ）Ｒ１であり、ここでＲ１は低級アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｐｇは−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である。いくつかの実施形態において、加水分解条件は、アルカリ金属水酸化物、アルカリ金属アルコキシド、またはそれらの混合物を含む。いくつかの実施形態において、アルカリ金属水酸化物は、ＬｉＯＨまたはＮａＯＨである。
いくつかの実施形態において、式５３の化合物は、式３３の化合物（これはメチル３α−アセトキシ−５β−コラン−１２−オン−２４−オエートである）：
であり、式５４の化合物は、式３４の化合物（これはメチル３α−アセトキシ−１２α−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オエートである）：
である。
いくつかの実施形態において、本発明は、式２６の化合物（これは９α−ヒドロキシ−５β−アンドロスタン−３，１７−ジオンである）：
を調製する方法を提供し、該方法は下記を含む：
９α−ヒドロキシアンドロスタ−４−エン−３，１７−ジオン１２０：
を、水素化条件下で、Ｈ２と反応させて、９α−ヒドロキシ−５β−アンドロスタン−３，１７−ジオンを形成する。
いくつかの実施形態において、水素化条件は溶媒を含み、該溶媒は、ＤＭＦ、アセトン、酢酸エチル等である。
いくつかの実施形態において、本発明は、式２７の化合物（これは５β−アンドロスタ−９（１１）−エン−３，１７−ジオンである）：
を調製する方法を提供し、該方法は下記を含む：
式２６の化合物：
を、酸と反応させて、式２７の化合物を形成する。
いくつかの実施形態において、本発明は、式２９の化合物（これは（Ｚ）−３α−ヒドロキシ−５β−プレグナ−９（１１），１７（２０）−ジエンである）：
を調製する方法を提供し、該方法は下記を含む：
式２８の化合物：
を、オレフィン形成条件下で、二炭素オレフィン化試薬と反応させて、（Ｚ）−３α−ヒドロキシ−５β−プレグナ−９（１１），１７（２０）−ジエンを形成する。
いくつかの実施形態において、式２８の化合物は、式２７の化合物：
を、還元剤と反応させて、式２８の化合物を形成することによって調製される。
いくつかの実施形態において、本発明は、式１８の化合物：
を調製する方法を提供し、該方法は下記を含む：
式２９の化合物：
を、式１８［式中、Ｐｇは保護基である］の化合物に変換する。
いくつかの実施形態において、Ｐｇは−Ｃ（Ｏ）Ｒ１であり、ここでＲ１は低級アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｐｇは−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である。
いくつかの実施形態において、式１８の化合物は、式３０の化合物（これは（Ｚ）−３α−アセトキシ−５β−プレグナ−９（１１），１７（２０）−ジエンである）：
であり、その方法は、式５５の化合物を、アシル化条件に暴露して、（Ｚ）−３α−アセトキシ−５β−プレグナ−９（１１），１７（２０）−ジエンを形成することを含む。
いくつかの実施形態において、本発明は、式１９の化合物：
［式中、Ｒはアルキルであり、Ｐｇは保護基であり、破線
は単結合または二重結合である］
を調製する方法を提供し、該方法は下記を含む：
式１８の化合物：
を、ルイス酸の存在下に、アルキルプロピオレートＣＨ≡ＣＣ（Ｏ）ＯＲまたはアルキルアクリレートＣＨ２＝ＣＨＣ（Ｏ）ＯＲと反応させて、式１９の化合物を形成する。
いくつかの実施形態において、Ｐｇは−Ｃ（Ｏ）Ｒ１であり、ここでＲ１は低級アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｐｇは−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である。いくつかの実施形態において、ＰｇはＣＨ３Ｃ（Ｏ）であり、ＲはＣＨ３である。
いくつかの実施形態において、式１９の化合物は、式３１の化合物（これは、メチル３α−アセトキシ−５β−コラ−９（１１），１６−ジエン−２４−オエートである）：
であり、その方法は下記を含む：
式３０の化合物：
を、ルイス酸の存在下に、ＣＨ２ＣＨＣ（Ｏ）ＯＣＨ３と反応させて、メチル３α−アセトキシ−５β−コラ−９（１１），１６−ジエン−２４−オエートを形成する。
いくつかの実施形態において、本発明は、式２１の化合物：
［式中、Ｐｇは保護基であり、Ｒはアルキルである］
を調製する方法を提供し、該方法は下記を含む：
式２０の化合物：
を、酸化剤と反応させて、式２１の化合物を形成する。
いくつかの実施形態において、式２０の化合物は、式１９の化合物：
を、水素化条件下で、Ｈ２と反応させて、式２０の化合物を形成することによって調製され、ここで、破線
は単結合または二重結合である。
いくつかの実施形態において、式２１の化合物は、式２４の化合物（これは、メチル３α−アセトキシ−５β−コラ−９（１１）−エン−１２−オン−２４−オエートである）：
であり、その方法は下記を含む：
式５６の化合物：
を、酸化剤と反応させて、式２４の化合物を形成する。
いくつかの実施形態において、本発明は、式５３の化合物：
［式中、Ｐｇは保護基であり、Ｒはアルキルである］
を調製する方法を提供し、該方法は下記を含む：
式５７の化合物：
を、水素化条件下で、Ｈ２と反応させて、式５３の化合物を形成する。
いくつかの実施形態において、Ｐｇは−Ｃ（Ｏ）Ｒ１であり、ここでＲ１は低級アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｐｇは−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である。
いくつかの実施形態において、式５３の化合物は、式３３の化合物（これは、メチル３α−アセトキシ−５β−コラン−１２−オン−２４−オエートである）：
であり、その方法は下記を含む：
式５８の化合物：
を、水素化条件下で、Ｈ２と反応させて、メチル３α−アセトキシ−５β−コラン−１２−オン−２４−オエートを形成する。
いくつかの実施形態において、その方法は下記を含む：
（ａ） 式２１の化合物：
を、水素化条件下で、Ｈ２と反応させて、式５３の化合物と式５９の化合物との混合物：
を形成し；
（ｂ） 式５３の化合物と式５９の化合物との混合物を、式５７の化合物と式５３の化合物との混合物を形成する条件下で、酸化剤に接触させて；そして、
（ｃ） 式５７の化合物と式５３の化合物との混合物を、水素化条件下で、Ｈ２に接触させて、式５３の化合物を形成する。
いくつかの実施形態において、酸化剤は、ピリジニウムクロロクロメートである。
好ましい実施形態の化合物は、下記の一般的方法および手順を使用して、容易に入手できる出発物質から調製することができる。一般的なまたは好ましいプロセス条件（即ち、反応温度、時間、反応物のモル比、溶媒、圧力等）が示されている場合、別段の記載がない限り、他のプロセス条件を使用することもできるものと理解される。最適反応条件は、使用される特定の反応物または溶媒によって変化しうるが、そのような条件は、日常最適化手順により当業者によって決めることができる。
さらに、当業者に明らかであるように、特定の官能基が望ましくない反応を受けないようにするために、従来保護基が必要とされる場合がある。種々の官能基用の好適な保護基、ならびに特定の官能基を保護および脱保護する好適な条件は、当分野において周知である。例えば、多くの保護基が、Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＧ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第３版、Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９９、およびそれに引用されている参考文献に記載されている。
本明細書に記載されている反応用の出発物質および試薬は、一般に、既知の化合物であるか、または既知の方法またはその明らかな改変法によって調製することができる。例えば、多くの出発物質および試薬が、商業的供給会社、例えば、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，ＵＳＡ）、Ｂａｃｈｅｍ（Ｔｏｒｒａｎｃｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）、Ｅｍｋａ−ＣｈｅｍまたはＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉ，ＵＳＡ）から入手可能である。その他のものは、下記のような標準参照テキストに記載されている方法またはその明らかな改変法によって調製しうる：Ｆｉｅｓｅｒ ａｎｄ Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第１〜１５巻（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，１９９１）、Ｒｏｄｄ’ｓ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｃａｒｂｏｎ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、第１〜５巻およびＳｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｌｓ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９８９）、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ、第１〜４０巻（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，１９９１）、Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、第４版）、およびＬａｒｏｃｋ’ｓ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ（ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｉｎｃ．，１９８９）。例えば、ヒドロコルチゾンは、従来の還元法を使用して、コルチゾンから調製することができる。
好ましい実施形態の種々の出発物質、中間体および化合物は、適切な場合に、従来法、例えば、沈殿、濾過、結晶化、蒸発、蒸留およびクロマトグラフィーを使用して、分離し、精製しうる。これらの化合物の特性決定は、従来の方法を使用して、例えば、融点、質量スペクトル、核磁気共鳴、および種々の他の分光分析によって行いうる。
方法
本発明の精製方法は、約９５％以下の純度、ある場合には約８０％以下の純度を有するデオキシコール酸（ＤＣＡ）を使用する。これらの方法は、これらのＤＣＡ組成物の純度を、少なくとも約９６％、または少なくも９９％に高める。
一態様において、本発明は、９６％より高いまたは少なくとも９９％の純度を有するＤＣＡを与えるために、デオキシコール酸（ＤＣＡ）を精製する方法を提供する。一実施形態において、該方法は下記を含む：
（ａ） ＤＣＡ溶液を形成する条件下で、約９５％以下の純度を有するＤＣＡを、ジクロロメタンを含む溶媒に接触させ；
（ｂ） 工程（ａ）で得たＤＣＡ溶液からＤＣＡを結晶化して、結晶性ＤＣＡを含有する溶液を得；
（ｃ） 結晶性ＤＣＡを回収し、回収した結晶性ＤＣＡに９６％より高い純度を与えるのに充分な量のジクロロメタンを除去する。
いくつかの実施形態において、本発明は、９６％より高いまたは少なくとも９９％の純度を有するＤＣＡを与えるために、デオキシコール酸（ＤＣＡ）を精製する方法を提供する。一実施形態において、該方法は下記を含む：
（ａ） ＤＣＡ溶液を形成する条件下で、約９５％以下の純度を有するＤＣＡを、ジクロロメタンおよびメタノールを含む溶媒に接触させ；
（ｂ） 工程（ａ）で得たＤＣＡ溶液からＤＣＡを結晶化して、結晶性ＤＣＡを含有する溶液を得；
（ｃ） 結晶性ＤＣＡを回収し、回収した結晶性ＤＣＡに９６％より高い純度を与えるのに充分な量のジクロロメタンを除去する。
いくつかの実施形態において、前記プロセスのどちらかが繰り返される。
一実施形態において、約９５％以下の純度を有するＤＣＡを、ジクロロメタンとメタノールとの混合物に溶解させる。必要であれば、溶媒を加熱還流させることによって、溶解を促進することができる。さらに、必要に応じて、任意の不溶性不純物を、濾過によって（一般に、例えば約５μｍ以下の孔径を有するフィルターを使用して、高温で溶液を濾過する）、除去することができる。
本発明の方法の溶媒系において最初に使用されるジクロロメタンおよびメタノールの量は、約１００：１〜約３：１、または約５０：１〜約４：１、または約２０：１〜１０：１の、ジクロロメタン／メタノールの重量比によって最良に規定される。
最初に使用される溶媒の総量に対して使用されるＤＣＡの量は、約４０：１〜約１０：１、または約３０：１〜約１５：１、または約１９：１の、溶媒／ＤＣＡの比率によって最良に規定される。
他の実施形態において、追加のジクロロメタンが還流温度で添加される。追加のジクロロメタンの量は、溶媒系に組み入れられたジクロロメタンの初期量の約２０〜１００容量パーセントである。いくつかの実施形態において、追加のジクロロメタンの量は、使用された初期量の約３０〜７０容量パーセントまたは約５０容量パーセントである。
溶解および任意の濾過後に、実質的に全てのメタノールが、大気圧における共沸蒸留によって除去されて、主にジクロロメタンを含む溶液が残る。ジクロロメタンからのＤＣＡの結晶化は、少なくとも９６％または少なくとも９９％の純度を有するＤＣＡを与える。
一実施形態において、ＤＣＡは哺乳動物源から誘導され、一般に商業的に入手可能である。
他の実施形態において、ＤＣＡは合成的に誘導される。合成ＤＣＡを調製する方法は、本明細書、ならびに米国特許出願第１２／０３５，３３９号（ＵＳ ２００８−０３１８８７０ Ａ１として公開）、および米国特許出願第１２／１５３，４４６号（ＵＳ ２００９−０２７０６４２ Ａ１として公開）（それらの全内容は参照により本明細書に組み入れられる）に記載されている。
組成物
その組成物態様の１つにおいて、本発明は、合成デオキシコール酸（ＤＣＡ）または薬学的に許容されうるその塩である化合物を提供し、該合成ＤＣＡまたは薬学的に許容されうるその塩は、少なくとも９９％の純度を有する。
他のその組成物態様において、本発明は、ＤＣＡおよび溶媒（該溶媒は、ジクロロメタンおよびメタノールを含む）を含む溶液を提供し、該溶液において、溶媒／ＤＣＡの濃度は４０：１〜約１０：１であり、さらに、ジクロロメタン／メタノールの比率は約１００：１〜約３：１である。
本発明は、さらに、少なくとも９９％の純度を有するＤＣＡまたは薬学的に許容されうるその塩および許容されうる賦形剤を含む組成物を提供する。本発明は、さらに、少なくとも９９％の純度を有するＤＣＡまたは薬学的に許容されうるその塩から本質的に成る組成物を提供し、該組成物において、ＤＣＡは本質的に、該組成物の単独脂肪除去成分である。
該組成物は、少なくとも１つの許容されうる賦形剤または薬学的に許容されうる賦形剤と組み合わせた本発明のＤＣＡから成ることができる。そのような賦形剤は、当業者に一般に入手可能な、任意の、固体、液体、半固体、またはエーロゾル組成物の場合は気体の、賦形剤であってよい。
固体賦形剤は、デンプン、セルロース、タルク、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、白亜、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク等を包含する。液体および半固体賦形剤は、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノールおよび種々の油（石油、植物または合成由来の油を包含し、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油等）から選択しうる。特に注射可能溶液用の、液体担体の例は、水、生理食塩水、水性デキストロース、およびグリコールを包含する。
組成物中のＤＣＡは、約０．００１〜１０、０．０１〜５、または０．１〜２％ ｗ／ｗ、ｗ／ｖ、またはｖ／ｖの濃度であることができる。いくつかの実施形態において、ＤＣＡは、約０．１〜５％ ｗ／ｗまたは約１％ ｗ／ｗであることができる。いくつかの実施形態において、脂肪溶解溶液は、１００、５０、２０、１０、５、２、１、０．５、０．２、０．０５、０．０２、または０．０１グラムまでの１つ以上の界面活性剤、胆汁酸および／または胆汁酸塩、デオキシコール酸またはその塩またはデオキシコール酸ナトリウムを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書における組成物は、脂質、リン脂質またはホスファチジルコリンを含まない。いくつかの実施形態において、本明細書における組成物は、５％ ｗ／ｗ、ｗ／ｖまたはｖ／ｖまでの脂質、リン脂質またホスファチジルコリンを含む。
いくつかの実施形態において、該組成物は、下記から成る群から選択される第二治療剤をさらに含みうる：抗微生物剤、血管収縮剤、抗血栓剤、抗凝血剤、泡抑制剤、抗炎症剤、鎮痛剤、分散剤、抗分散剤、透過促進剤、ステロイド、精神安定剤、筋弛緩剤、および止瀉剤。いくつかの実施形態において、溶液は、５００ｍＬまでの溶液を含有する容器に入っている。そのような容器は、シリンジまたはシリンジ装填可能容器であることができる。
使用方法
好ましくは少なくとも９９％の純度を有する本発明のＤＣＡまたは薬学的に許容されうるその塩または組成物は、例えば、米国特許第７，６２２，１３０号ならびに米国特許出願第２００５−０２６７０８０ Ａ１号および第２００６−０１２７４６８ Ａ１号（それらの全内容は参照により本明細書に組み入れられる）に記載されているように、種々の薬学的または美容的用途に有用である。
一実施形態において、本発明は、対象における皮下脂肪沈着物を減少させる方法に関する。そのような方法は、下記物質：（ｉ）脂肪溶解有効量の、好ましくは少なくとも９９％の純度を有するデオキシコール酸またはその塩、例えばデオキシコール酸ナトリウム；（ｉｉ）薬学的、獣医学的または美容的賦形剤；を含む組成物を、対象における皮下脂肪沈着物に局所投与する工程を含み；それにおいて、ＤＣＡまたはその塩は、本質的に、組成物の唯一の脂肪除去成分である。いくつかの実施形態において、脂肪沈着物は美容的に魅力がなく、その除去は対象の外見を向上させる。いくつかの実施形態において、脂肪沈着物は、下記から成る群から選択される症状に関連している：肥満、脂肪再分配症候群、眼瞼脂肪ヘルニア、脂肪腫、ダーカム病、脂肪異栄養症、バッファローハンプ脂肪異栄養症、頚背部脂肪、内臓脂肪過多症、乳房腫大、脂肪過剰症、胴および腕まわりの拡散体脂肪、ならびにセリュライトに関連した脂肪沈着物。いくつかの実施形態において、前記の方法は、前記対象において手術を行うことを包含しない。
本明細書に開示されている実施形態の前記および他の態様は、下記の実施例に照らして、より深く理解しうる。
下記の実施例および本明細書の他の箇所において、下記の略語は、示されている意味を有する。略語が定義されていない場合、それはその一般的に容認されている意味を有する。
一般： 酸素−および湿分−感受性物質の全ての操作は、アルゴンまたは窒素雰囲気下に、標準二口火炎乾燥フラスコを用いて行った。カラムクロマトグラフィーは、シリカゲル（６０〜１２０メッシュ）を使用して行った。分析的薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、Ｍｅｒｃｋ Ｋｉｅｓｉｎｇｅｒ ６０ Ｆ２５４（０．２５ｍｍ）プレート上で行った。スポットの可視化は、ＵＶ線（２５４ｎｍ）によるか、またはエタノール中の硫酸（５％）およびｐ−アニスアルデヒド（３％）の溶液を装填することによって行った。
装置： 陽子および炭素−１３核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ ＮＭＲおよび１３Ｃ ＮＭＲ）は、Ｖａｒｉａｎ Ｍｅｒｃｕｒｙ−Ｇｅｍｉｎｉ ２００（１Ｈ ＮＭＲ、２００ＭＨｚ；１３Ｃ ＮＭＲ、５０ＭＨｚ）またはＶａｒｉａｎ Ｍｅｒｃｕｒｙ−Ｉｎｏｖａ ５００（１Ｈ ＮＭＲ、５００ＭＨｚ；１３Ｃ ＮＭＲ、１２５ＭＨｚ）スペクトロメーターにおいて、溶媒共鳴を内部標準として（１Ｈ ＮＭＲ、ＣＨＣｌ３、７．２６ｐｐｍ、またはＤＭＳＯ、２．５ｐｐｍおよびＤＭＳＯ−Ｈ２Ｏ、３．３３ｐｐｍ；１３Ｃ ＮＭＲ、ＣＤＣｌ３、７７．０ｐｐｍ、またはＤＭＳＯ、３９．５ｐｐｍ）、記録した。１Ｈ ＮＭＲデータは、下記のように記載される：化学シフト（δ，ｐｐｍ）、多重度（ｓ ＝一重項、ｄ＝二重項、ｔ＝三重項、ｑ＝四重項、ｂｒ＝幅広、ｍ＝多重項）、結合定数（Ｈｚ）、および積分。赤外線スペクトル（ＦＴ−ＩＲ）は、ＪＡＳＣＯ−４６０＋モデルで動作させた。質量スペクトルは、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ ＡＰＩ−２０００スペクトロメーターによって、ＥＳ＋モードを使用して得た。融点は、ＬＡＢ−ＩＮＤＩＡ融点測定装置を使用して測定し、補正していない。ＨＰＬＣクロマトグラムは、ＰＤＡ検出器付きＳＨＩＭＡＤＺＵ−２０１０モデルを使用して記録した。比旋光度は、ＪＡＳＣＯ−１０２０を使用して５８９ｎｍで測定し、補正していない。
化学物質： 他に断らない限り、商業的に入手可能な試薬を、精製せずに使用した。ジエチルエーテルおよびＴＨＦは、ナトリウム／ベンゾフェノンから蒸留した。実験室グレードの無水ＤＭＦ、商業的に入手可能なＤＣＭ、酢酸エチルおよびヘキサンを使用した。
実施例１
ヒドロコルチゾンからの３α−アセトキシ−５β−アンドロスタン−９，１１−エン−１７−オン（３６）の合成
工程１
ＤＭＦ（１５０ｍＬ）中のヒドロコルチゾン（２５．０ｇ）の溶液に、１０％のＰｄ／Ｃ（１．５ｇ、６ｗｔ％）を添加し、得られたスラリーを、オートクレーブ（６０ｐｓｉ）において２５〜３５℃で６時間水素化した。ＴＬＣ（ＤＣＭ中３０％のＥｔＯＡｃ）によって確認された出発物質の完全消失後に、粗反応混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）（８ｇ）床で濾過し、ＤＭＦ（１００ｍＬ）で洗浄した。溶媒を、６５℃未満における真空蒸留によって完全に除去して、化合物１５を白色固形物として得た（２３．０ｇ、９１．５％）。
工程２
エタノール（３５０ｍＬ）およびＤＣＭ（３５０ｍＬ）中の化合物１５（２３．０ｇ）の溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（２．４ｇ）を添加し、得られた溶液を２５〜３５℃で３時間撹拌した。この時点で、５０％の水性アセトン（２００ｍＬ）を添加して、過剰の試薬をクエンチし、次に、過ヨウ素酸ナトリウム（３３．７ｇ）を添加した。得られた溶液を、２５〜３５℃で１６時間撹拌した。ＴＬＣによって中間体の完全消失が確認された（ＤＣＭ中４０％のＥｔＯＡｃ）。水（４００ｍＬ）を反応混合物に添加した。相を分離し、水性層をＤＣＭ（６００ｍＬ）で抽出した。有機層を集め、次に、飽和ブライン溶液（２００ｍＬ）で洗浄した。溶媒を真空蒸発させて、粗化合物１６を白色固形物として得た（２３．０ｇ）。粗生成物をヘキサン（２００ｍＬ）中において３０℃で１時間撹拌し、濾過し、ヘキサン（５０ｍＬ）で洗浄して、化合物１６を白色固形物として得た（１９．０ｇ、９８％）。
工程３
ＤＣＭ（３４０ｍＬ）中の化合物１６（１９．３ｇ）の溶液に、トリエチルアミン（１２．７ｇ）、ＤＭＡＰ（０．７６ｇ）および無水酢酸（１２．９ｇ）を２５〜３５℃で添加した。２５〜３５℃で２時間撹拌した後、ＴＬＣ分析（ヘキサン中６０％のＥｔＯＡｃ）によって、反応の完結が確認された。反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液（２００ｍＬ）で洗浄し、次に、ブライン溶液（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４（５０ｇ）上で乾燥し、濾過した。濾液を真空蒸留によって濃縮して、化合物３５を灰色がかった白色の固形物として得た（１８．０ｇ、８２％）。
工程４
ピリジン（１００ｍＬ）中の化合物３５（１８．０ｇ）の溶液に、塩化チオニル（６．０ｍＬ）を２５〜３５℃で添加し、得られた溶液を２５〜３５℃で１時間撹拌した。この時点で、ＴＬＣ（ヘキサン中３０％のＥｔＯＡｃ）によって反応の完結が確認された。ピリジンを６０℃未満での真空蒸発によって除去した。粗物質を、水（１００ｍＬ）と酢酸エチル（１８０ｍＬ）との混合物に溶解させ、相を分離した。水性相を酢酸エチル（１８０ｍＬ）で抽出し、有機相を集めた。集めた有機相を２Ｎ ＨＣｌ（１００ｍＬ）および飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４（４０ｇ）上で乾燥後、混合物を濾過し、濾液を真空蒸留によって濃縮乾固して、化合物３６を白色固形物として得た（１５．０ｇ、８８％）。
実施例２
（Ｚ）−３α−アセトキシ−５β−プレグナ−９（１１），１７（２０）−ジエン（３０）
化合物３０は、実施例８に記載されているのと同様の手順で調製することができ、化合物２８を化合物３０に変換する。
化合物６０からＤＣＡを調製し精製する方法および実施例は、ＧＢ２４５２３５８および米国仮特許出願第６１／２８８，１３２号（発明の名称：「ＭＥＴＨＯＤＳ ＦＯＲ ＴＨＥ ＰＵＲＩＦＩＣＡＴＩＯＮ ＯＦ ＤＥＯＸＹＣＨＯＬＩＣ ＡＣＩＤ」、出願日：２００９年１２月１８日）に記載されており、その両方の全内容は参照により本明細書に組み入れられる。
実施例３
ＤＣＡまたはその中間体の調製の間に分離される不純物
下記の化合物は、本明細書に記載されている合成の間に、不純物として回収された：
前記の化合物は、化合物１８を生じる反応スキームに再循環させることができる中間体としての有用性を持つ。例えば、化合物６１および６２を、従来法によって脱水素して、４，５−エン化合物を得ることができ、これを再水素化して、５位における適切な立体化学を得ることができる。
化合物６３および６５の１７−ケト基を、従来法、例えばケタール形成によって、保護することができる。次に、両化合物６３および６５の３−ヒドロキシル基を酸化して、３−ケト基を形成することができる。化合物６３については、４，５位における脱水素、それに続く水素化によって、５位における適切な立体化学が得られる。両化合物６３および６５について、３−ケト基の還元、それに続く１７−ケト基の脱保護によって、化合物１８が得られる。
化合物６４を、３−ヒドロキシル基において選択的に保護することができ、次に、１７−ヒドロキシル基を酸化することができ、それに続いて３−ヒドロキシルにおいて脱保護して、化合物１８を得ることができる。
３，１７ジ−アリル化合物６６を酸化して、３，１７ジ−ケト化合物を得ることができ、これを従来法によって還元して、３，１７−ジヒドロキシル化合物、例えば化合物６４を得ることができる。
化合物６７を、３位で酸化し、次に還元し、３−ヒドロキシル基を保護して、化合物１８を得ることができる。
同様に、残りの化合物も、修飾して、本発明の方法に使用される１つ以上の中間体を生じることができる。
実施例４
本発明の方法による化合物７９からの化合物８０の合成
化合物７９（１２０．０ｇ）を、水中の７０％ｔ−ブチルヒドロペルオキシド（（ＣＨ３）３Ｃ−Ｏ−ＯＨ）（３５当量）および酢酸エチル中の１０％次亜塩素酸ナトリウム（ＮａＯＣｌ）（７．０当量；７時間にわたって添加）を使用して０〜５℃で酸化した。ワークアップ後、有機層を亜硫酸ナトリウム、次にＰＣＣ（１．０当量）で処理して、１８５ｇの残渣を得た。残渣を２０％の水性メタノール（２ｖｏｌ）でスラリー精製して、７５．２ｇ（６０．６％収率）の純粋化合物８０を得た。
ＣｒＯ３を使用した化合物７９からの化合物８０の合成の比較手順
清浄乾燥フラスコにおいて、ＣｒＯ３（６５ｇ、５９９ｍｍｏｌ）を、ＡｃＯＨ（９７５ｍＬ）中の化合物７９（６５ｇ、１３９ｍｍｏｌ）の溶液に、２回に分けて（４０ｇおよび２５ｇ）添加した（注意：高発熱性；必要に応じて氷水冷却で５０℃未満の温度に調節すべきである）。得られた混合物を３０〜３５℃で３時間加熱した。２５〜３５℃の、より低い温度を使用してもよい。ＴＬＣによって反応の完結が確認されたら（ヘキサン中３０％のＥｔＯＡｃ、２％以下（ＮＭＴ）の化合物７９）、イソプロピルアルコール（１０８ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌し、次に、溶媒を６０℃未満で真空蒸発させた。残留物質に、水（１２００ｍＬ）およびＭＴＢＥ（６５０ｍＬ）を添加した。２相を分離し、水性層をＭＴＢＥ（２ｘ６５０ｍＬ）で抽出した。集めた有機層を水（７５０ｍＬ）およびブライン溶液（３３２ｍＬ）で洗浄した。溶媒を、５０℃未満において真空下に完全に除去した。残渣にメタノール（１９５ｍＬ）を添加し、溶媒を５０℃未満での真空蒸留によって完全に除去した。メタノール（１３０ｍＬ）を再び添加し、混合物を１０〜１５℃に冷却し、１０〜１５℃で１時間撹拌し、濾過し、ケークを冷却（０〜５℃）メタノール（６５ｍＬ）で洗浄した。白色固形物を、乾燥減量（ＬＯＤ）が０．５％以下（ＮＭＴ）になるまで、熱風乾燥機において５０〜５５℃で乾燥させて、化合物８０を得た（３６ｇ、５３．７％収率）。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ＝５．７１ （ｓ， １Ｈ）， ４．７１−４．７５ （ｍ， １Ｈ）， ３．６６ （ｓ， ３Ｈ）， ２．３７−２．４２ （ｍ， ３Ｈ）， ２．０２−２．３１ （ｍ， ２Ｈ）， ２．０ （ｓ， ３Ｈ）， １．６７−１．９８ （ｍ， ９Ｈ）， １．２４−１．５６ （ｍ， ９Ｈ）， １．１９ （ｓ， ３Ｈ）， １．０１−１．０２ （ｄ， Ｊ＝６．５ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．９０ （ｓ， ３Ｈ）．
１３Ｃ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ＝２０４．９， １７４．５， １７０．４， １６３．８， １２３．６， ７３．７， ５３．４， ５３．０， ５１．３， ４７．２， ４１．７， ３９．８， ３７．７， ３５．２， ３５．０， ３３．９， ３１．４， ３０．５， ２９．６， ２７．６， ２７．３， ２６．４， ２６．１， ２４．１， ２１．２， １９．４， １０．６．
質量（ｍ／ｚ）＝４４５．０ ［Ｍ＋＋１］， ４６２．０ ［Ｍ＋＋１８］．
ＩＲ＝３４３７， ３０４５， ２９４６， ２８７０， １７２９， １６８０， １２５２， １１６８， １０２０， ｃｍ−１．
融点＝１３７−１３９ ｏＣ （ＥｔＯＡｃ／ヘキサン混合物から）．
［α］Ｄ＝＋９３ （ｃ＝ＣＨＣｌ３中１％）。
実施例５
下記の表は、ＣｒＯ３または（ＣＨ３）３Ｃ−Ｏ−ＯＨおよびＮａＯＣｌを酸化剤として使用して、化合物７９から化合物８０を調製した結果を示す。
＊ 化合物ピーク面積／全ピーク面積の比率に基づく純度
＊＊ 化合物ピーク面積／既知対照標準のピーク面積の比率に基づく純度。
実施例６
ペルオキシド化合物８１の同定
純粋化合物８０の濾過後に、濾過母液（不純物に富む；３．１４分の滞留時間で約３０％）を採集した。３．１４分不純物を、カラムクロマトグラフィーによって分離して、１００ｍｇの純粋生成物を油状物として得た。図１〜３に示されているＮＭＲおよび質量データは、不純物が１２−ｔ−ブチルペルオキシ化合物８１であることを示した。
実施例７
１２−ｔ−ブチルペルオキシ化合物８１（５０ｍｇ）を、ジクロロメタン（１０部）中において、Ｐｄ／Ｃ（１２ｗｔ％）、ｔ−ブチルヒドロペルオキシド（５当量）および炭酸カリウム（０．０２５当量）で、室温で２４時間処理し、ＨＰＬＣ分析によって８９％の未反応化合物１２−ｔ−ブチルペルオキシ８１がまだ存在していることが確認され、わずか１１％の化合物８０が観測された。
化合物８０（１０．０ｇ）を、酢酸エチル（２５部）中で、市販の乾燥１０％Ｐｄ／Ｃ（２５ｗｔ％）を使用して４５〜５０℃で水素圧力下に１８時間水素化して、約２５％のアリルアルコールを得、これをＰＣＣ（１．２当量）で室温において２時間処理し、次に、水およびブライン溶液で洗浄した。半分の有機層を真空蒸留し、次に、新しいＰｄ／Ｃ（２５ｗｔ％）を使用して４５〜５０℃において５０ｐｓｉ水素圧力下に１８時間にわたって水素化に再度かけて、９．５ｇの化合物８２を得た（９５％収率、８７％ＨＰＬＣ−ＲＩ純度）。
実施例８
下記のスキーム２において、デオキシコール酸の全合成のためのスキームを示す。
スキーム２
化合物２５の化合物２６への変換：
溶媒の選択
いくつかの溶媒を、この工程の改変法において試験した：下記の実験を、前記の溶媒を使用して行い、結果を下記の表に示す。
ジクロロメタン、メタノールまたは酢酸エチルを、化合物２５の水素化における溶媒として使用した場合、出発物質の完全消費が観測された（ＴＬＣによる）。生成物の分離およびＨＰＬＣ−ＲＩによる分析後に、化合物２６の５α−および５β−異性体の両方が、約１：１の比率で形成された。アセトンを、化合物２５の水素化における溶媒として使用した場合、出発物質の完全消費が観測された（ＴＬＣによる）。生成物の分離およびＨＰＬＣ−ＲＩによる分析後に、化合物２６の５β−異性体がほぼ排他的に形成され、５α−異性体の形成は１０％未満であった。従って、アセトンは、この工程において、９０％より高い選択性、および８５％より高い収率を与えた。
アセトン（３６００ｍＬ）中の９α−ヒドロキシアンドロスタ−４−エン−３，１７−ジオン（１５０．０ｇ）の溶液に、１０％のＰｄ／Ｃ（１２ｇ、８ｗｔ％、５０％湿潤）を添加し、得られたスラリーをオートクレーブ（５０ｐｓｉ）において２５〜２５℃で５時間水素化した。ＴＬＣ（ＤＣＭ中３０％のＥｔＯＡｃ）によって確認された出発物質の完全消失後に、粗反応混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）床（２０ｇ）で濾過し、ジクロロメタン（１５００ｍＬ）で洗浄した。濾液を真空除去し、粗生成物（１４５．０ｇ）を白色固形物として得た。この粗生成物を、（１４５．０ｇ）アセトン（３００ｍＬ）と０℃で合わし、１時間撹拌し、次に、濾過し、冷却アセトン（１５０ｍＬ）で洗浄し、５０℃で真空乾燥した。これによって、化合物２６（１２９ｇ、８５％）を白色固形物として得た。
ＴＬＣ：ｐ−アニスアルデヒド 黒焼き、化合物２６のＲｆ＝０．４８、および化合物２５のＲｆ＝０．３。溶離剤は、ＤＣＭ中３０％のＥｔＯＡｃであった。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ＝２．４０−２．３７ （ｍ， １Ｈ）， ２．１１−．２．０２ （ｍ， ２Ｈ）， １．９１−１．３１ （ｍ， １９Ｈ）， ０．９６ （ｓ， ３Ｈ）， ０．８４ （ｓ， ３Ｈ）．
１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ＝２２１．０， ９５．７， ８０．１， ４７．０， ４３．６， ３８．６， ３８．５， ３７．１， ３５．９， ３３．４１， ３２．９， ３２．０， ２７．９， ２６．９， ２１．５， ２０．２， ２０．０， １２．６．
質量（ｍ／ｚ）＝３０５．０［Ｍ＋＋１］， ３２２．０ ［Ｍ＋＋１８］．
ＩＲ （ＫＢｒ）＝３４４３， ２９３８， １７２２， １４４９， １３３１， １１３８ ｃｍ−１．
融点＝ ２１３−２１６ ｏＣ （アセトンから）．
［α］Ｄ＝＋１１６ （ｃ＝ＣＨＣｌ３中１％）．
ＨＰＬＣ／ＲＩ 純度： ９９．０％。
化合物２６の化合物２７への変換：
ＤＣＭ（１８１５ｍＬ）中の化合物２６（１２１ｇ）の溶液に、硫酸（１９．１ｍＬ）を、不活性雰囲気中において５〜１０℃で１５分間にわたって添加した。温度を２５〜３５℃に上げ、混合物を２時間撹拌した。この時点で、反応が完結したことを確認した（ＴＬＣ、ＤＣＭ中３０％のＥｔＯＡｃ）。混合物を水（６００ｍＬ）で洗浄し、次に、１０％のＮａＨＣＯ３水溶液（６００ｍＬ）で洗浄した。有機層を、水（２００ｍＬ）、次に飽和ブライン溶液（２００ｍＬ）で再び洗浄した。次に、溶媒を真空蒸留して、化合物２７（１０８．２ｇ、９５％）を灰色がかった白色の固形物として得た。粗生成物を、さらに精製せずに次の工程に使用した。
ＴＬＣ：ｐ−アニスアルデヒド 黒焼き、化合物２７のＲｆ＝０．７６、および化合物２５のＲｆ＝０．４４。溶離剤は、ＤＣＭ中３０％のＥｔＯＡｃであった。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）： δ＝５．６１ （ｓ，１Ｈ ）， ２．５７−２．４７（ｍ， ２Ｈ）， ２．４２−２．２４ （ｍ， ４Ｈ）， ２．２０−２．０５ （ｍ， ３Ｈ）， １．９９−１．８６ （ｍ， ２Ｈ）， １．８５−１．８４ （ｄ， Ｊ＝６ Ｈｚ １Ｈ）， １．６３−１．５７ （ｍ， ５Ｈ）， １．４０−１．３７（ｄ， Ｊ＝１３．５ Ｈｚ， １Ｈ） １．２８−１．２５ （ｄｄ， Ｊ＝４．０， １３．５ Ｈｚ， １Ｈ）， １．１７ （ｓ， ３Ｈ） ０．８５ （ｓ， ３Ｈ）．
１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ＝２２１．３， ２１２．８， １４０．１， １１８．５， ４８．５， ４５．９， ４４．３， ４３．５， ３９．０， ３８．０， ３７．３， ３６．１， ３５．８， ３３．３， ２８．８， ２６．０， ２５．５， ２２．５， １３．９．
質量（ｍ／ｚ）＝２８７ ［Ｍ＋＋１ ］， ３０４ ［ Ｍ＋＋１８ ］．
ＩＲ （ＫＢｒ） ＝３４５０， ２９１３， １７３７， １７０７，１４１３， １４０３，１２０７ ｃｍ−１．
融点＝１４３．４−１４５．９ ｏＣ （ＤＣＭから）．
［α］Ｄ＝＋１４２ （ｃ＝ＣＨＣｌ３中１％）．
ＨＰＬＣ／ ＲＩ 純度： ９６．７％。
化合物２７の化合物３０への変換：
ＴＨＦ（１０８０ｍＬ）中の化合物２７（１０８．０ｇ）の溶液に、リチウムトリ−ｔ−ブトキシアルミニウムハイドライド（７００ｍＬ）を、−４０〜−４５℃で不活性雰囲気下に添加した。得られた反応混合物を、−４０〜−４５℃で２時間撹拌した。ＴＬＣ（ＤＣＭ中３０％のＥｔＯＡｃ）によって確認した反応の完結後に、反応混合物を２Ｎ ＨＣｌ溶液の添加によってクエンチした。相を分離し、得られた水性層をジクロロメタン（６４８ｍＬ）で抽出した。有機画分を集め、水（６４８ｍＬ）、次に飽和ブライン溶液（５４０ｍＬ）で洗浄した。有機層を真空蒸発させて、化合物２８を得、ＴＨＦ（５４０ｍＬ）に溶解させた。
ＴＨＦ（２１６ｍＬ）中のエチルトリフェニルホスホニウムブロミド（４１７ｇ）の溶液に、カリウムｔ−ブトキシド（１０８６ｍＬ、ＴＨＦ中の１Ｍ溶液）を、窒素下に２５〜３５℃で２０分間にわたって滴下した。得られた暗赤色反応混合物を、前記温度でさらに１時間撹拌した。前記の化合物２８の溶液を、前記の懸濁液に２５〜３５℃において３０〜４０分間でゆっくり添加した。反応混合物をさらに３〜５時間撹拌し、出発物質を完全に消費させた（ＴＬＣによって確認；ＤＣＭ中３０％のＥｔＯＡｃ）。反応混合物を氷水（１．０８０Ｌ）に入れてクエンチした。水性層をＭＴＢＥ（２ｘ５４０ｍＬ）で抽出し、集めた有機抽出物を飽和ブライン溶液（５４０ｍＬ）で洗浄し、有機層を真空濃縮し、粗物質をＭＴＢＥ（２ｘ５４０ｍＬ）で精製し、濾過し、濾液を真空下に蒸留して溶媒２５％を除去した。２５℃に冷却した化合物２９の溶液に、トリエチルアミン（１０５．２ｍＬ）、ＤＭＡＰ（４．５ｇ）および無水酢酸（５３．５ｍＬ）を、２５〜３５℃で窒素下に添加した。２５〜３５℃で２時間撹拌した後、反応が完結したことをＴＬＣ（ヘキサン中１０％のＥｔＯＡｃ）によって確認した。反応混合物を水（１０８０ｍＬ）、次にブライン溶液（３２４ｍＬ）で洗浄した。有機層を真空濃縮して、粗化合物３０（２２５ｇ）を得、残渣を２％水性メタノール中で再結晶して、８５ｇの純粋化合物３０（６３．５％収率、９６％ＨＰＬＣ−ＲＩ純度）を得た。
ＴＬＣ：ｐ−アニスアルデヒド 黒焼き、化合物３０のＲｆ＝０．５、および化合物２９のＲｆ＝０．１５。溶離剤＝ヘキサン中１０％のＥｔＯＡｃ。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ＝５．３８ （ ｓ， １Ｈ）， ５．２０−５．１８ （ｄ， Ｊ＝６．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．７６−４．７２ （ｍ， １Ｈ）， ２．４０−２．３５ （ｍ， ３Ｈ）， ２．２５−２．２２ （ｍ， １Ｈ）， ２．０９−２．０３ （ｍ， ３Ｈ）， ２．０１ （ｓ， ３Ｈ）， １．９８−１．４９ （ｍ， １０Ｈ）， １．４１−１．３１ （ｍ， ２Ｈ）， １．２７−１．１６ （ｍ， ３Ｈ）， １．０７ （ｓ， ３Ｈ）， ０．７９ （ｓ， ３Ｈ）．
１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ＝１７０．５， １５０．０， １４０．４， １１９．６， １１４．３， ７４．７， ５３．５， ４２．０， ４１．７， ３９．６， ３８．６， ３５．６， ３５．３， ３３．８， ３１．９， ２９．５， ２７．８， ２６．７， ２６．６， ２５．５， ２１．３， １６．９， １３．２
質量（ｍ／ｚ）＝３４２．９ ［Ｍ＋＋１］， ３６０ ［Ｍ＋＋１８］．
ＩＲ （ＣＨＣｌ３）＝３４４０， ３０３５， １７３０， １４５１， １３６７， １２５８， １０２８ｃｍ−１．
融点＝９３．９−９７．８ ｏＣ．
［α］Ｄ＝＋１０９ （ｃ＝ＣＨＣｌ３中１％）．
ＨＰＬＣ／ ＲＩ 純度： ９６．０％。
化合物８４を介する化合物３０の化合物３２への変換
ＤＣＭ（５６０ｍＬ）中の化合物３０（５６ｇ）の溶液に、メチルアクリレート（３５．１３ｍＬ）を、０〜５℃で不活性雰囲気下に撹拌しながら６０分間にわたって添加し、溶液を０〜５℃に冷却し、エチルアルミニウムジクロリド（２７２．９ｍＬ；トルエン中１．８Ｍ）を６０分間にわたって添加した。次に、温度を２５〜３５℃に上げ、混合物を約１８時間撹拌した。この時点で、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％のＥｔＯＡｃ）による分析によって反応が完結したことを確認し、従って、混合物を氷冷水（１１２０ｍＬ）に注いだ。相を分離し、水性層をＤＣＭ（２ｘ２５５ｍＬ）で抽出した。有機層を集め、水（５６０ｍＬ）およびブライン溶液（５６０ｍＬ）で順次に洗浄し、有機層を真空蒸発させて、化合物８４（６６ｇ）を油状物として得た。
酢酸エチル（５５０ｍＬ）中の化合物８４の溶液に、酢酸エチル（１１０ｍＬ）中のＰｄ／Ｃ（６．７ｇ）スラリーを、２５〜３５℃で添加した。得られたスラリーを、約７０ｐｓｉ水素圧力下に約１６時間撹拌した。反応の進行をＨＰＬＣによって監視した。触媒をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）床（２５ｇ）で濾過し、ケークを酢酸エチル（９９０ｍＬ）で洗浄した。濾液を真空蒸発させて、化合物３２（５９ｇ、８５％）を固形物として得た。
ＴＬＣ：ｐ−アニスアルデヒド 黒焼き、化合物３２のＲｆ＝０．３２、および化合物８４のＲｆ＝０．３０。溶離剤＝ヘキサン中１０％のＥｔＯＡｃ。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ＝５．３１ （ｓ， １Ｈ）， ４．７３（ｍ， １Ｈ）， ３．６６ （ｓ， ３Ｈ）， ２．３７−２．０３ （ｍ， ７Ｈ）， ２．０１ （ｓ， ３Ｈ）， １．９８−１．０９（ｍ， １８Ｈ）， １．０６ （ｓ， ３Ｈ）， ０．９２−０．９１ （ｄ， Ｊ＝６．０ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．５９ （ｓ， ３Ｈ）．
１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ＝１７４．６， １７０．５， １３９．８， １１９．５， ７４．８， ５６．０， ５３．３， ５１．４， ４１．９， ４１．７， ４０．９， ３８．５， ３６．４， ３５．４， ３５．２， ３３．８， ３１．０， ３０．９， ２９．５， ２８．２， ２７．８， ２６．８， ２６．７， ２５．２， ２１．４， １７．９， １１．５
質量（ｍ／ｚ）＝４４８．２ ［Ｍ＋＋１８］．
ＩＲ （ＫＢｒ）＝３４３５， ３０３９， ２９４１， １７２９， １４４８， １４３５， １２５２， １０２２ ｃｍ−１．
融点＝１２２．１−１２３．９ ｏＣ．
［α］Ｄ＝＋５６ （ｃ＝ＣＨＣｌ３中１％）．
ＨＰＬＣ／ ＲＩ 純度： ９３．０％。
化合物８５を介する化合物３０の化合物３２への変換
エチルアルミニウムジクロリド（１０４．５ｍＬ、１９２ｍｍｏｌ、トルエン中１．８Ｍ）を、ＤＣＭ（１００ｍＬ）中のメチルプロピオレート（１３．５８ｍＬ、１５３ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃で不活性雰囲気下に添加した。得られた溶液を１５分間撹拌し、次に、化合物３０（２２ｇ、６４．３ｍｍｏｌ）を添加した。０℃でさらに２０分間撹拌した後、温度を２５℃に上げ、さらに１８時間その温度に維持した。この時点で、ＴＬＣによって反応が完結したことを確認し、混合物を冷却（０℃）水（２００ｍＬ）に注いだ。相を分離し、水性層をＤＣＭ（１５０ｍＬ）で抽出した。有機層を集め、水（２００ｍＬ）および飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で順次に洗浄した。次に、それを無水Ｎａ２ＳＯ４（４０ｇ）上で乾燥し、濾過した。濾液を真空濃縮し、得られた固形物を、メタノール（２８０ｍＬ）中でのスラリー化によって精製して、化合物８５（１７．５ｇ、６８％）を白色固形物として得た。
ＴＬＣ：ｐ−アニスアルデヒド 黒焼き、８５のＲｆ＝０．３２、および３０のＲｆ＝０．５。
ＴＬＣ移動相：ヘキサン中１０％のＥｔＯＡｃ。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ＝６．９２−６．９２６ （ｑ， Ｊ＝７．５， １５．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．８０−５．８３ （ ｄ， Ｊ＝１６ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．３７−５．４３ （ｍ， ２Ｈ）， ４．７３−４．７５ （ｍ， １Ｈ）， ３．７３ （ｓ， ３Ｈ）， ３．０２−３．０４ （ｔ， Ｊ＝６．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．１５−２．２３ （ｍ， ３Ｈ）， ２．０５−２．０８ （ｍ， ３Ｈ）， ２．０１ （ｓ， ３Ｈ）， １．４８−１．９９ （ｍ， ８Ｈ）， １．２４−１．３４ （ｍ， ２Ｈ）， １．２０−１．２１ （ｄ， Ｊ＝５ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．１１−１．１７ （ｍ， １Ｈ）， １．０７ （ｓ， ３Ｈ）， ０．６７ （ｓ， ３Ｈ）．
１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝１７０．５， １６７．２， １５５．０， １５３．７， １４１．６， １２４．０， １１８．８， １１８．７， ７４．６， ５３．９， ５１．３， ４５．７， ４１．７， ３８．８， ３７．１， ３５．５， ３５．３， ３４．６， ３３．７， ３１．８， ２９．５， ２７．７， ２６．５， ２６．５， ２１．３， １９．７， １５．７．
質量（ｍ／ｚ）＝４４４．０ ［Ｍ＋＋１８］．
ＩＲ （ＫＢｒ）＝３４４３， ３０３０， ２９３０，１７１９，１６５０，１２４７， １３５９， １０３２， １１７０ ｃｍ−１．
融点＝１１４−１１６ ｏＣ （メタノールから）
［α］Ｄ＝＋１０２ （ｃ＝ＣＨＣｌ３中１％）．
ＥＬＳＤ 純度： ９９．７％， 滞留時間＝１９．５７， （Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ ３Ｖ ２５０ × ４．６ ｍｍ， ５ｕｍ）， ＡＣＮ： 水中０．１％ ＴＦＡ （９０：１０）。
ＥｔＯＡｃ（３５０ｍＬ）中の化合物８５（１７．５ｇ、４１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰｔＯ２（４．３７ｇ）を添加し、得られたスラリーをＰａｒｒ装置（７０ｐｓｉ）において１４〜１６時間水素化した。この時点で、ＴＬＣによって反応が完結したことが確認された。混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）の小プラグで濾過し、溶媒を真空除去して、化合物３２（１７．０ｇ、９６．０％）を白色固形物として得た。前記生成物を、さらに精製せずに次の工程に使用した。
ＴＬＣ：ｐ−アニスアルデヒド 黒焼き、３２のＲｆ＝０．３２、および８５のＲｆ＝０．３０。
ＴＬＣ移動相：ヘキサン中１０％のＥｔＯＡｃ。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ＝５．３１ （ｓ， １Ｈ）， ４．７３ （ｍ， １Ｈ）， ３．６６ （ｓ， ３Ｈ）， ２．０３−２．３７ （ｍ， ７Ｈ）， ２．０１ （ｓ， ３Ｈ）， １．０９−１．９８ （ｍ， １８Ｈ）， １．０６ （ｓ， ３Ｈ）， ０．９１−０．９２ （ｄ， Ｊ＝６．０ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．５９ （ｓ， ３Ｈ）．
１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ＝１７４．６， １７０．５， １３９．８， １１９．５， ７４．８， ５６．０， ５３．３， ５１．４， ４１．９， ４１．７， ４０．９， ３８．５， ３６．４， ３５．４， ３５．２， ３３．８， ３１．０， ３０．９， ２９．５， ２８．２， ２７．８， ２６．８， ２６．７， ２５．２， ２１．４， １７．９， １１．５
質量（ｍ／ｚ）＝４４８．２ ［Ｍ＋＋１８］．
ＩＲ （ＫＢｒ）＝３４３５， ３０３９， ２９４１， １７２９， １４４８， １４３５， １２５２， １０２２ ｃｍ−１．
融点 ＝１２２．１−１２３．９ ｏＣ （ＥｔＯＡｃから）．
［α］Ｄ＝＋５６ （ｃ＝ＣＨＣｌ３中１％）
ＥＬＳＤ 純度： ９７．７％： 滞留時間＝１４．５７ （ＺＯＲＢＡＸ ＳＢ Ｃ−１８ １５０ × ４．６ ｍｍ， ５ｕｍ， ＡＣＮ： 水中０．１％ ＴＦＡ （９０：１０）。
化合物３２の化合物２４への変換：
酢酸エチル（２００ｍＬ）中の化合物３２（２０ｇ）の溶液に、水（２００ｍＬ）中の７０％ＴＢＨＰを添加し、反応溶液を０℃に冷却し、１０％次亜塩素酸ナトリウムを０〜５℃で約６〜７時間にわたってゆっくり添加し、前記温度で２〜３時間撹拌した。ＴＬＣ（溶離剤＝ヘキサン中２０％のＥｔＯＡｃ）によって化合物３２の完全消失を確認した後、有機層を分離し、水性層を酢酸エチル（６０ｍＬ）で抽出し、集めた有機層を水（２ｘ４００ｍＬ）で洗浄し、次に、２０％亜硫酸ナトリウムゾル（２２０ｍＬ）で５０〜５５℃において２時間処理し、２層を分離し、有機層をピリジニウムクロロクロメート（１０．９ｇ）で６〜８時間にわたって２５〜３０℃で処理した。ＴＬＣ（溶離剤＝ヘキサン中２０％のＥｔＯＡｃ）によってアリルアルコールの完全消失を確認した後、有機層を、熱水（４ｘ５００ｍＬ）、次に飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を４５〜５０℃で真空蒸発させた。得られた粗物質を、２０％水性メタノール（４０ｍＬ）と共に５〜１０℃において１時間撹拌することによって精製し、濾過し、ケークを２０％水性メタノール（２０ｍＬ）で洗浄し、次に、４５〜５０℃で真空乾燥して、化合物２４（１３ｇ）を淡黄色固形物として得た。
ＴＬＣ：ｐ−アニスアルデヒド 黒焼き、化合物２４のＲｆ＝０．２８、および化合物３２のＲｆ＝０．５２。溶離剤＝ヘキサン中２０％のＥｔＯＡｃ。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ＝５．７１ （ｓ， １Ｈ）， ４．７５−４．７１ （ｍ， １Ｈ）， ３．６６ （ｓ， ３Ｈ）， ２．４２−２．３７（ｍ， ３Ｈ）， ２．３１−２．０２（ｍ， ２Ｈ）， ２．０ （ｓ， ３Ｈ）， １．９８−１．６７ （ｍ， ９Ｈ）， １．５６−１．２４ （ｍ， ９Ｈ）， １．１９ （ｓ， ３Ｈ）， １．０２−１．０１ （ｄ， Ｊ＝６．５ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．９０ （ｓ， ３Ｈ）．
１３Ｃ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ＝２０４．９， １７４．５， １７０．４， １６３．８， １２３．６， ７３．７， ５３．４， ５３．０， ５１．３， ４７．２， ４１．７， ３９．８， ３７．７， ３５．２， ３５．０， ３３．９， ３１．４， ３０．５， ２９．６， ２７．６， ２７．３， ２６．４， ２６．１， ２４．１， ２１．２， １９．４， １０．６．
質量（ｍ／ｚ）＝４４５．０ ［Ｍ＋＋１］， ４６２．０ ［Ｍ＋＋１８］．
ＩＲ＝３４３７， ３０４５， ２９４６， ２８７０， １７２９， １６８０， １２５２， １１６８， １０２０， ｃｍ−１．
融点＝１４１〜１４２ ｏＣ．
［α］Ｄ＝＋１０２ （ｃ＝ＣＨＣｌ３中１％）．
ＨＰＬＣ／ ＲＩ 純度： ９６．２％。
化合物２４の化合物３３への変換：
１０．０ｇ規模の化合物２４の水素化において、酢酸エチル（２０部）中の乾燥１０％Ｐｄ／Ｃ（１５ｗｔ％）を添加し、約５０ｐｓｉの水素圧力を適用し、温度を７０℃に上げた。７０℃の温度に達した後、水素圧力の約６０ｐｓｉへの増加を観測し、これらの条件で６０時間維持した。６０時間後、０．６％の化合物２４および２．７５％のアリルアルコールが依然として観測され、従って、さらに１２時間撹拌した（０．１６％のアリルアルコールおよび０．０５％の化合物２４が観測された）。ワークアップ後、その反応は９．５ｇの残渣を生じた。
前記条件で７６時間にわたる２５ｇの化合物２４における他の水素化反応は、２４．５ｇの残渣を生じた。
方法Ａ
１０％Ｐｄ／Ｃ（９００ｍｇ）を、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）中の化合物２４（２．０ｇ、４．５ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、得られたスラリーを、Ｐａｒｒ装置（５０ｐｓｉ）において５０℃で１６時間水素化した。この時点で、ＴＬＣによって反応が完結したことを確認した。混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）の小プラグで濾過し、溶媒を真空除去して、化合物３３（１．６ｇ、８０％収率）を白色固形物として得た。
ＴＬＣ：ｐ−アニスアルデヒド 黒焼き、３３のＲｆ＝０．３６、および２５のＲｆ＝０．３２。
ＴＬＣ移動相：ヘキサン中２０％のＥｔＯＡｃ。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ＝ ４．６７−４．７１ （ｍ， １Ｈ）， ３．６６ （ｓ， ３Ｈ）， ２．４５−２．５０ （ｔ， Ｊ＝１５ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．２２−２．４０ （ｍ， １Ｈ）， ２．０１ （ｓ， ３Ｈ）， １．６９−１．９６ （ｍ， ９Ｈ）， １．５５ （ｓ， ４Ｈ）， １．２５−１．５０ （ｍ， ８Ｈ）， １．０７−１．１９ （ｍ， ２Ｈ）， １．０１ （ｓ， ６Ｈ）， ０．８４−０．８５ （ｄ， Ｊ＝７．０ Ｈｚ， ３Ｈ）．
１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ＝２１４．４， １７４．５， １７０．４， ７３．６， ５８．５， ５７．４， ５１．３， ４６．４， ４３．９， ４１．２， ３８．０， ３５．６， ３５．５， ３５．２， ３４．８， ３２．０， ３１．２， ３０．４， ２７．４， ２６．８， ２６．２， ２５．９， ２４．２， ２２．６， ２１．２， １８．５，１１．６，
質量（ｍ／ｚ）＝４４７．０ ［Ｍ＋＋１］， ４６４．０ ［Ｍ＋＋１８］．
ＩＲ （ＫＢｒ）＝３４４５， ２９５３， ２８６８， １７３１， １６９８， １２５７， １０２９ ｃｍ−１．
融点＝１４２．２〜１４４．４ｏＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン混合物から）．
［α］Ｄ＝＋９２ （ｃ＝ＣＨＣｌ３中１％）．
ＥＬＳＤ 純度： ９６．６％： 滞留時間＝９．９３ （Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ ３Ｖ， ２５０ × ４．６ ｍｍ， ５ｕｍ， ＡＣＮ： 水中０．１％ ＴＦＡ（９０：１０）。
方法Ｂ
１０％Ｐｄ／Ｃ（１８０ｍＬの酢酸エチル中９ｇ）のスラリーを、ＥｔＯＡｃ（７２０ｍＬ）中の化合物２４（３６ｇ、８１ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、得られたスラリーを水素ガス（５０ｐｓｉ）で４５〜５０℃において１６時間処理した（合計１０８０ｍＬの溶媒を使用しうる）。この時点で、ＨＰＬＣにより反応が完結したことを確認した（１％以下（ＮＭＴ）の化合物２４）。混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）（１０ｇ）で濾過し、酢酸エチル（９００ｍＬ）で洗浄した。濾液を、５０℃未満での真空蒸留によって、その量の５０％に濃縮した。濃縮溶液に、ピリジニウムクロロクロメート（２０．８ｇ）を２５〜３５℃で添加し、混合物を２時間にわたって２５〜３５℃で撹拌し、その時点で、ＨＰＬＣによって反応の完結を確認した（アリルアルコール含有量は１％以下（ＮＭＴ）である）。
化合物２４の含有量が５％より多い場合、下記のプロセスを行うことができる。反応素材をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）（１０ｇ）で濾過し、酢酸エチル（３６０ｍＬ）で洗浄する。濾液を、水（３ｘ４６０ｍＬ）、次に飽和ブライン（３６０ｍＬ）で洗浄する。有機相を硫酸ナトリウム（１８０ｇ）上で乾燥させ、濾過し、酢酸エチル（１８０ｍＬ）で洗浄する。５０℃未満での真空蒸留によって、その量を５０％濃縮する。その溶液を、清浄乾燥オートクレーブに移す。１０％パラジウム炭素（１８０ｍＬの酢酸エチル中９ｇ）のスラリーを添加する。水素で５０ｐｓｉに加圧し、反応混合物を４５〜５０℃で１６時間撹拌する。
ＨＰＬＣによって化合物２４の完全消費（化合物２４の含有量が１％以下（ＮＭＴ））が確認されたら、反応混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）（１０ｇ）で濾過し、ケークを酢酸エチル（９００ｍＬ）で洗浄した。溶媒を、５０℃未満における真空蒸留によって濃縮乾固した。メタノール（１５０ｍＬ）を添加し、５０℃未満における真空蒸留によって濃縮乾固した。メタノール（７２ｍＬ）を残渣に添加し、混合物を１０〜１５℃で１５〜２０分間撹拌し、濾過し、ケークをメタノール（３６ｍＬ）で洗浄した。白色固形物を熱風乾燥機において４５〜５０℃で８時間にわたって、１％以下（ＮＭＴ）の乾燥減量（ＬＯＤ）まで乾燥させて、化合物３３（３０ｇ、８３．１％収率）を得た。
化合物３３の化合物３４への変換：
方法Ａ
リチウムトリ−ｔ−ブトキシアルミニウムハイドライドのＴＨＦ溶液（１Ｍ、２２．４ｍＬ、２２．４ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（２５ｍＬ）中の化合物３３（２．５ｇ、５．６ｍｍｏｌ）の溶液に、周囲温度で滴下した。さらに４〜５時間撹拌した後、反応が完結したことをＴＬＣによって確認した。反応を、ＨＣｌ水溶液（１Ｍ、１０ｍＬ）の添加によってクエンチし、混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で希釈した。相を分離し、有機相を、水（１５ｍＬ）および飽和ブライン溶液（１０ｍＬ）で順次に洗浄した。次に、有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４（３ｇ）上で乾燥させ、濾過した。濾液を真空濃縮し、得られた固形物を、カラムクロマトグラフィー［２９ｍｍ（Ｗ）ｘ５００ｍｍ（Ｌ）、６０〜１２０メッシュシリカ、５０ｇ］にかけ、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（２：８）で溶離して、精製した［５ｍＬ画分、ｐ−アニスアルデヒド黒焼きを用いるＴＬＣによって監視］。生成物を含有する画分を集め、真空濃縮して、化合物３４（２．３ｇ、９１％）を白色固形物として得た。
ＴＬＣ：ｐ−アニスアルデヒド 黒焼き、３４のＲｆ＝０．４５、および３３のＲｆ＝０．５５。
ＴＬＣ移動相：ヘキサン中３０％のＥｔＯＡｃ。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ＝４．６８−４．７３ （ｍ， １Ｈ）， ３．９８ （ｓ， １Ｈ）， ３．６６ （ｓ， ３Ｈ）， ２．３４−２．４０ （ｍ， １Ｈ）， ２．２１−２．２６ （ｍ， １Ｈ）， ２．０１ （ｓ， ３Ｈ）， １．７５−１．８９ （ｍ， ６Ｈ）， １．３９−１．６８ （ｍ， １６Ｈ）， １．００−１．３８ （ｍ， ３Ｈ）， ０．９６−０．９７ （ｄ， Ｊ＝５．５ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．９３ （ｓ， ３Ｈ）， ０．６８ （ｓ， ３Ｈ）．
１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ＝１７４．５， １７０．５， ７４．１， ７２．９， ５１．３， ４８．１， ４７．２， ４６．４， ４１．７， ３５．８， ３４．９， ３４．７， ３４．０， ３３．５， ３２．０， ３０．９， ３０．８， ２８．６， ２７．３， ２６．８， ２６．３， ２５．９， ２３．４， ２２．９， ２１．３， １７．２， １２．６
質量（ｍ／ｚ）＝４４９．０ ［Ｍ＋＋１］， ４６６．０ ［Ｍ＋＋１８］．
ＩＲ （ＫＢｒ）＝３６２１， ２９３８， ２８６６， １７４２， １７３０， １２６２， １１６２， １０４１， ｃｍ−１．
融点＝１０４．２〜１０７．７ｏＣ（ＥｔＯＡｃから）．
［α］Ｄ＝＋５６ （ｃ＝ＣＨＣｌ３中１％）．
ＥＬＳＤ 純度： ９７．０％： 滞留時間＝１２．７５ （Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ ３Ｖ， ２５０ × ４．６ ｍｍ， ５ｕｍ， ＡＣＮ：水 （６０：４０）。
方法Ｂ
リチウムトリ−ｔ−ブトキシアルミニウムハイドライドのＴＨＦ溶液（１Ｍ、１０７．６ｍＬ、１０７．６ｍｍｏｌ）を、１時間にわたって、乾燥ＴＨＦ（３００ｍＬ）中の化合物３３（３０．０ｇ、６７ｍｍｏｌ）の溶液に、０〜５℃で添加した。さらに４時間にわたって５〜１０℃で撹拌した後、ＨＰＬＣによって反応が完結したことを確認した（１％以下（ＮＭＴ）の化合物３３）。反応を０〜５℃に冷却し、４Ｎ ＨＣｌ（４７３ｍＬ）を添加することによってクエンチした。相を分離した。水性層をＤＣＭ（２ｘ２２５ｍＬ）で抽出し、集めた有機相を、水（３００ｍＬ）および飽和ブライン溶液（３００ｍＬ）で順次に洗浄した。次に、有機相を、５０℃未満での真空蒸留によって濃縮乾固した。メタノール（１５０ｍＬ）を残渣に添加し、５０℃未満での真空蒸留によって、濃縮乾固した。次に、水（４５０ｍＬ）を残渣に添加し、混合物を１５〜２０分間撹拌し、濾過し、ケークを水（２４０ｍＬ）で洗浄した。白色固形物を、熱風乾燥機において３５〜４０℃で６時間乾燥させて、化合物３４（３０ｇ、９９．６％）を得た。
化合物３４の粗ＤＣＡへの変換：
方法Ａ
Ｈ２Ｏ（２．０ｍＬ）中のＬｉＯＨ（１８７ｍｇ、４．４ｍｍｏｌ）の溶液を、ＴＨＦ（８ｍＬ）およびＭｅＯＨ（８ｍＬ）中の化合物３４（５００ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。得られた混合物を、３〜４時間にわたって５０℃で撹拌した。ＴＬＣによって出発物質の完全消失を確認したら、反応混合物を真空濃縮した。水（１０ｍＬ）および３Ｎ ＨＣｌ（１ｍＬ）の混合物を合わし、０℃に冷却し、次に、粗生成物に添加した。１時間にわたって０℃で撹拌した後、沈殿した固形物を濾過し、次に、水（１０ｍＬ）およびヘキサン（２０ｍＬ）で洗浄した。室温で真空乾燥して、デオキシコール酸（ＤＣＡ、４００ｍｇ、９１％収率）を白色固形物として得た。
ＴＬＣ：ｐ−アニスアルデヒド 黒焼き、ＤＣＡのＲｆ＝０．３２、および２．１ａのＲｆ＝０．８２。
ＴＬＣ移動相：ＤＣＭ中１０％のメタノール。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ＝１１．９２ （ｓ， １Ｈ）， ４．４４ （ｓ， １Ｈ）， ４．１９ （ｓ， １Ｈ）， ３．７７ （ｓ， １Ｈ）， ３．３５−３．３６ （ｍ， １Ｈ）， ２．１９−２．２１ （ｍ， １Ｈ）， ２．０８−２．１０ （ｍ， １Ｈ）， １．７３−１．８０ （ｍ， ４Ｈ）， １．４３−１．６３ （ｍ， ６Ｈ）， １．１５−１．３５ （ｍ， １２Ｈ）， ０．９８−１．０５ （ｍ， ２Ｈ）， ０．８９−０．９０ （ｄ， Ｊ＝６．０ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．８３ （ｓ， ３Ｈ）， ０．５８ （ｓ， ３Ｈ）．
１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ ＝１７４．８， ７１．０， ６９．９， ４７．４， ４６．１， ４６．０， ４１．６， ３６．３， ３５．６， ３５．１， ３４．９， ３３．８， ３２．９， ３０．８， ３０．７， ３０．２， ２８．６， ２７．１， ２７．０， ２６．１， ２３．５， ２３．０， １６．９， １２．４．
質量（ｍ／ｚ）＝３９３ ［Ｍ＋，＋１］．
ＩＲ＝３３６３， ２９３３， ２８６３， １６９４， １４５３， １３７２， １０４２，ｃｍ−１．
融点＝１７１．４〜１７３．６ｏＣ（エタノールから）； １７４−１７６ ｏＣ （Ａｌｆａ Ａｅｓａｒ） および １７１−１７４ ｏＣ （Ａｌｄｒｉｃｈ）
［α］Ｄ＝＋４７ （ｃ＝ＥｔＯＨ中１％）， ＋５４ｏ （ｃ＝エタノール中２％） ［Ａｌｆａ Ａｅｓａｒ］
ＥＬＳＤ 純度： ９９．７％： 滞留時間＝５．２５ （Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ ３Ｖ， ２５０ × ４．６ ｍｍ， ５ｕｍ， ＡＣＮ：水中０．１％ ＴＦＡ （９０：１０）。
方法Ｂ
Ｈ２Ｏ（５４ｍＬ）中のＮａＯＨ（４０ｇ、２７０ｍｍｏｌ）の２０％溶液を、ＴＨＦ（１２０ｍＬ）およびＭｅＯＨ（１２０ｍＬ）中の化合物３４（３０ｇ、６７ｍｍｏｌ）の溶液に、０〜５℃で添加した。得られた混合物を４時間にわたって２５〜３５℃で撹拌した。ＨＰＬＣによって反応の完結を確認したら（０．５％以下（ＮＭＴ）の化合物３４および中間体）、溶媒を５０℃未満での真空蒸留によって除去した。残渣を水（３００ｍＬ）に溶解し、ＤＣＭ（２ｘ１５０ｍＬ）で洗浄した。水性層のｐＨを、２Ｎ ＨＣｌ（約１７３ｍＬ）で１〜２に調節した。固形物を濾過し、水（３Ｌ）で充分に洗浄し、湿分が２％未満になるまで、熱風乾燥機によって７０〜７５℃で乾燥させて、デオキシコール酸（ＤＣＡ、２６ｇ、９９％収率）を白色固形物として得た。
実施例９
デオキシコール酸（ＤＣＡ）精製
１．溶媒選択
２つの溶媒系を、ＤＣＡのさらなる精製に関して調査した：
・ＥｔＯＡｃ中１０％のヘキサン
・ＤＣＭ
下記の実験を行い、実験結果を下記の表に示す。
＊精製すべきＤＣＡを、メタノールとＤＣＭとの混合物に溶解させ、次に、メタノールを共沸蒸留によって除去した。粗ＤＣＡを溶解させるために必要なメタノールの量は、それが最初にどれくらい純粋であるかによる。一般的な粗物質は、約７５％の純度であり、１０％メタノール−ＤＣＡ（容量による）を使用し、１グラム当たり約２０ｍＬを使用して、還流させながら溶解させることができた。より純粋なＤＣＡについては、メタノールのパーセンテージを１５％に増加させる必要があった。
有効な精製は、ＤＣＭからの生成物の結晶化、次に、メタノールとＤＣＭとの混合物への溶解、および常圧蒸留によるメタノールの共沸除去によって、達成できた。
２．溶媒量
種々の溶媒量を使用して実験を行い、実験結果を下記の表に示す。
優れた回収率および生成物品質が、全ての溶媒レベルにおいて得られた。
３．分離温度
分離温度を変化させることによって下記の実験を行い、結果を下記の表に示す。
１０〜１５℃と比較して、２５〜３０℃で分離を行う場合に、より高品質の生成物が得られた。
１００ｇ規模におけるＤＣＡの精製
この工程の最終精製手順を下記に示す：
粗ＤＣＡ（１１０ｇ）を、ＤＣＭ（２．５Ｌ）中の１０％メタノールに還流温度で溶解させた。この透明溶液に、２．５Ｌのジクロロメタンを還流温度で添加し、次に、約３．０Ｌの溶媒を大気圧下に蒸留させた（反応素材上澄みのＧＣ分析により、約３％のメタノールの存在が確認された）。反応スラリーを２０〜２５℃に冷却し、次に、３〜４時間撹拌した。混合物を濾過し、固形物をＤＣＭ（３００ｍＬ）で洗浄した。生成物を、熱風炉において５０〜５５℃で６〜８時間乾燥させた。
前記の乾燥ＤＣＡを、水（１．０Ｌ）に添加し、次に、１０％水酸化ナトリウム溶液（１２２ｍＬ）を添加して、透明溶液を得た。この溶液を５μ濾紙で濾過した。濾液を水（２．０Ｌ）で希釈し、ｐＨを２Ｎ ＨＣｌ溶液（２０４ｍＬ）で１〜２に調節した。沈殿した固形物を１時間撹拌し、濾過し、固形物を追加の水（７．０Ｌ）で洗浄した。熱風炉において７０〜７５℃で１６〜２０時間乾燥させたのち、精製ＤＣＡ（約６６ｇ；ＨＰＬＣ ＲＩ検出により９９％より高い純度）を白色固形物として得た。
ＴＬＣ：ｐ−アニスアルデヒド 黒焼き、ＤＣＡのＲｆ＝０．３２、および化合物３４のＲｆ＝０．８２。
溶離剤＝ＤＣＭ中１０％のメタノール。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ＝１１．９２（ｓ， １Ｈ），４．４４（ｓ， １Ｈ）， ４．１９（ｓ， １Ｈ）， ３．７７ （ｓ， １Ｈ）， ３．３６−３．３５ （ｍ， １Ｈ）， ２．２１−２．１９ （ｍ， １Ｈ）， ２．１０−２．０８ （ｍ， １Ｈ）， １．８０−１．７３ （ｍ， ４Ｈ）， １．６３−１．４３（ｍ， ６Ｈ）， １．３５−１．１５（ｍ， １２Ｈ）， １．０５−０．９８（ｍ， ２Ｈ）， ０．９０−０．８９ （ｄ， Ｊ＝６．０ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．８３ （ｓ， ３Ｈ）， ０．５８ （ｓ， ３Ｈ）．
１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ ＝１７４．８， ７１．０， ６９．９， ４７．４， ４６．１， ４６．０， ４１．６， ３６．３， ３５．６， ３５．１， ３４．９， ３３．８， ３２．９， ３０．８， ３０．７， ３０．２， ２８．６， ２７．１， ２７．０， ２６．１， ２３．５， ２３．０， １６．９， １２．４．
質量（ｍ／ｚ）＝３９３ ［Ｍ＋，＋１］．
ＩＲ＝３３６３， ２９３３， ２８６３， １６９４， １４５３， １３７２， １０４２， ｃｍ−１．
融点＝１７１．４〜１７３．６ｏＣ（エタノールから）； １７４−１７６ ｏＣ （Ａｌｆａ Ａｅｓａｒ） および １７１−１７４ ｏＣ （Ａｌｄｒｉｃｈ）。
デオキシコール酸（ＤＣＡ）の再結晶
前記の方法Ｂで得たＤＣＡ（２６ｇ）を、清浄乾燥フラスコに装填した。メタノール（６５ｍＬ）およびＤＣＭ（５８５ｍＬ）を添加した。混合物を加熱還流して、透明溶液を得た。ＤＣＭ（６５０ｍＬ）をその溶液に添加し、７８０ｍＬの溶媒が採集されるまで、溶媒を大気圧下に蒸留した。混合物をＧＣによって分析して、溶媒組成を決定した。メタノール含有量が２％より高い場合、ＤＣＭ（２００ｍＬ）を添加し、２００ｍＬの留出液が採集されるまで大気圧下に蒸留した（ＧＣによりメタノール含有量を調べる）。反応混合物を１〜２時間にわたって２０〜２５℃に冷却し、この温度で３〜４時間撹拌した。生成物を濾過し、ＤＣＭ（８１ｍＬ）で洗浄し、熱風乾燥機において５０〜５５℃で８時間乾燥させた。純度をＨＰＬＣによって測定した。単独最大不純物が０．１％より高い場合、前記のプロセスを繰り返す。
前記からの乾燥物質を、清浄フラスコに装填した。水（１９０ｍＬ）、次に１０％ＮａＯＨ水溶液（３１．８ｍＬの水中３．１８ｇ）を添加した。溶液を５μ濾紙で濾過し、濾液を追加の水（３８０ｍＬ）で希釈した。ｐＨを、２Ｎ ＨＣｌ（５３ｍＬ）で１〜２に調節した。得られた固形物を濾過し、水（１．９Ｌ）で充分に洗浄し、水分が１％未満になるまで熱風乾燥機において７０〜７５℃で乾燥させて、ＤＣＡを白色固形物として得た（１７ｇ、回収の％：６５）。
実施例１０
化合物３３からのＤＣＡの合成および精製の代替的方法
工程 １ａ： メチル３α−アセトキシ−１２−オキソ−５β−コラ−９（１１）−エン−２４−オエート（２４）の水素化
乾燥Ｐｄ／Ｃ（７５．０ｇ、２５ｗｔ％）を、ＥｔＯＡｃ（７．５Ｌ、２５ｖｏｌ）中の２４（３００．０ｇ、０．７ｍｏｌ）に添加した。反応混合物を４５〜５０℃に加熱し、５０ｐｓｉのＨ２で加圧した。２１時間後のＨＰＬＣ分析により、＜１．０％曲線下面積（ＡＵＣ）の２４が残留し；４．６％ＡＵＣのアリルアルコール不純物８６および１１．１％ＡＵＣの８７が形成されたことが示された。反応混合物を３０〜３５℃に冷却し、Ｈｙｆｌｏ（登録商標）（３００ｇ）で濾過し、ＥｔＯＡｃ（７．５Ｌ）で洗浄して、触媒を除去した。得られた濾液を約６Ｌに濃縮し、さらに操作せずに先に進めた（ＨＰＬＣにより６７．８％ＡＵＣ、５．５％ＡＵＣのアリルアルコール不純物８６、および１３．０％ＡＵＣの８７）。
工程１ｂ／ｃ： アリルアルコール８６および８７の酸化、ならびに２４のメチル３α−アセトキシ−１２−オキソ−５β−コラン−２４−オエート（３３）への再水素化
工程１ｂ： アリルアルコール８６および８７のＰＣＣ酸化
ＥｔＯＡｃ（１．５Ｌ）中のＰＣＣ（１４９．１ｇ、１．０３当量）のスラリーを、前記の３３溶液に、２０〜２５℃で添加した。反応を３．５時間進め、その時点で、ＨＰＬＣ分析により、＜１％ＡＵＣのアリルアルコール８６および＜１％ＡＵＣの８７が残留していることが示された。反応混合物を、Ｈｙｆｌｏ（登録商標）（３００ｇ）で濾過し、ＥｔＯＡｃ（３．０Ｌ）で洗浄した。ＥｔＯＡｃ濾液を、脱イオン（ＤＩ）水（２ｘ３．６Ｌ）およびブライン（３．６Ｌ）で洗浄し、Ｈｙｆｌｏ（登録商標）（３００ｇ）で濾過し、ＥｔＯＡｃ（３．０Ｌ）で洗浄した。得られた濾液を約７．５Ｌに濃縮し、さらに操作せずに先に進めた（ＨＰＬＣにより７７．７％ＡＵＣ；５．３％ＡＵＣの２４を含有）。
工程１ｃ： ２４の３３への再水素化
粉末活性炭ＤＡＲＣＯ（６０ｇ、２０ｗｔ％）を、２４を含有する前記の粗３３溶液に添加した。得られたスラリーを４５〜５０℃に４時間加熱し、３０〜３５℃に冷却し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）で濾過した。濾過ケークを、ＥｔＯＡｃ（７．５Ｌ）で洗浄し、約７．５Ｌに濃縮し、乾燥Ｐｄ／Ｃ（６０．０ｇ、２０ｗｔ％）に添加した。反応混合物を４５〜５０℃に加熱し、５０ｐｓｉのＨ２に６時間加圧した。ＨＰＬＣ分析により、＜１．０％ＡＵＣの２４が残留し；１．１％ＡＵＣの８６不純物および＜１．０％ＡＵＣの８７が形成されたことが示された。反応が完結したとみなし、３０〜３５℃に冷却し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）で濾過し、ＥｔＯＡｃ（７．５Ｌ）で洗浄した。ＥｔＯＡｃ濾液を約５ボリュームに濃縮し、ＭｅＯＨ（２ｘ４．５Ｌ）と共に共沸して、約５ボリュームに戻した。得られたスラリーをＤＩ水（２．４Ｌ）で希釈し、２０〜２５℃に維持した。スラリーを濾過し、ＤＩ水（２ｘ６００ｍＬ）で洗浄し、４０〜５０℃で真空乾燥して、２６６ｇ（８８％）の３３（ＨＰＬＣにより６６．２％ＡＵＣ）を得た。
工程２： ３４の合成
ＴＨＦ（２．５Ｌ）中の３３（２４５ｇ、０．５ｍｏｌ）の溶液を、０〜５℃に冷却し、温度を５℃未満に維持しながらＬｉ（ｔ−ＢｕＯ）３ＡｌＨ（８２２．９ｍＬ、１．５当量）の１Ｍ溶液を添加した。反応混合物を５〜１０℃で２２時間撹拌した。反応は２〜４時間で完結しうる。ＨＰＬＣ分析により、反応が完結し、＜１％の３３が残留していることが示された。温度を２０℃未満に維持しながら、反応を４Ｍ ＨＣｌ（３．７Ｌ）でクエンチした。反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ２．５Ｌ）で抽出し、集めた有機相をＤＩ水（２ｘ２．５Ｌ）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２相を濃縮して、３００ｇ（１２２％）の３４（ＨＰＬＣにより７３．５％ＡＵＣ）を得た。１Ｈ ＮＭＲ分析により、９．７ｗｔ％のＴＨＦ、および０．８ｗｔ％のＣＨ２Ｃｌ２が残留していることが示された。
工程３： ＤＣＡの合成
ＤＩ水（４３８．６ｍＬ）中のＮａＯＨ溶液（８７．６ｇ、４当量）を、ＭｅＯＨ（９８０ｍＬ）およびＴＨＦ（４７５ｍＬ）中の３４（２４５ｇ、０．５ｍｏｌ）の溶液に、０〜５℃で添加した。反応混合物を２０〜２５℃に温めた。ＨＰＬＣ分析により、１時間後に反応が完結し、＜０．５％の３４および＜０．５％の加水分解中間体が残留していることが示された。反応をＤＩ水（２．５Ｌ）で希釈し、約１０ボリュームに濃縮した。水溶液をＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ１．３Ｌ）で洗浄し、２Ｍ ＨＣｌ（１．６Ｌ）を使用してｐＨ１．７〜２．０に調節した。白色スラリーが形成され、２０〜２５℃で１時間撹拌した。スラリーを濾過し、ＤＩ水（７ｘ１Ｌ）で洗浄し、真空乾燥して、１９５ｇ（９１％）のＤＣＡ（ＨＰＬＣにより８２．２％ＡＵＣ）を得た。
工程４： ＤＣＡの精製
ＭｅＯＨ（４７５ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（４２７５ｍＬ）中の、前記で得たＤＣＡ（１９０ｇ、０．４８ｍｏｌ）の溶液を、３５〜４０℃に加熱した。ＣＨ２Ｃｌ２（４７４０ｍＬ）を添加して蒸留速度を適合させながら、ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を蒸留によって混合物から除去した。１Ｈ ＮＭＲによる溶媒組成の分析により、ＣＨ２Ｃｌ２に対して４．５ｍｏｌ％のＭｅＯＨが残留していることが示された。スラリーを２０〜２５℃に冷まし、１６時間維持した。固形物を濾過によって分離し、ＣＨ２Ｃｌ２（６００ｍＬ）で洗浄し、真空乾燥して、１０４ｇ（５５％）のＤＣＡを得た（ＨＰＬＣ−ＲＩＤにより＞９９％ＡＵＣ、およびＨＰＬＣ−ＣＡＤにより９８．７％ＡＵＣ）。
ＭｅＯＨ（３５９ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（１７５１ｍＬ）中のＤＣＡ（１０３ｇ、０．３ｍｏｌ）の混合物を３５〜４０℃に加熱することによって、再結晶を繰り返した。ＣＨ２Ｃｌ２（３７６０ｍＬ）を添加して蒸留速度を適合させながら、ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を蒸留によって混合物から除去した。１Ｈ ＮＭＲによる溶媒組成の分析により、ＣＨ２Ｃｌ２に対して４．７ｍｏｌ％のＭｅＯＨが残留していることが示された。スラリーを２０〜２５℃に冷ました。１時間後、固形物を濾過によって分離し、ＣＨ２Ｃｌ２（３０９ｍＬ）で洗浄し、真空乾燥して、８２ｇ（７９％）のＤＣＡを得た（ＨＰＬＣ−ＲＩＤにより＞９９％ＡＵＣ、およびＨＰＬＣ−ＣＡＤにより９９．３％ＡＵＣ）。
追加の精製および再処理の効果を評価するために、通常の最終水分離工程の前に、生成物を３度目の再結晶に付した。ＭｅＯＨ（２４０ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（１４００ｍＬ）中の、前記ＤＣＡ試料（８０ｇ、０．２ｍｏｌ）を、３５〜４０℃に加熱した。ＣＨ２Ｃｌ２（２０００ｍＬ）を添加して蒸留速度を適合させながら、ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を蒸留によって混合物から除去した。１Ｈ ＮＭＲによる溶媒組成の分析により、ＣＨ２Ｃｌ２に対して６．７ｍｏｌ％のＭｅＯＨが残留していることが示された。スラリーを２０〜２５℃に冷ました。１時間後、固形物を濾過によって分離し、ＣＨ２Ｃｌ２（２４０ｍＬ）で洗浄し、真空乾燥して、７２ｇ（８９％）のＤＣＡを得た（ＨＰＬＣ−ＣＡＤにより９９．７％ＡＵＣ）。
試料をＤＩ水（８４０ｍＬ）中でスラリー化し、ＤＩ水（１４０ｍＬ）中のＮａＯＨ（１４．０ｇ）の溶液で希釈した。得られた溶液をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）で濾過し、ＤＩ水（１．４Ｌ）で洗浄した。濾液を、２Ｍ ＨＣｌ（約３００ｍＬ）でｐＨ１．６に調節し、白色沈殿物を生じ、これを２０〜２５℃で１時間維持した。生成物を濾過によって分離し、ＤＩ水（９．０°Ｌ）で洗浄し、真空乾燥して、６３ｇ（８７％）のＤＣＡを得た（ＨＰＬＣ−ＣＡＤにより９９．７％ＡＵＣ）。
実施例１１
デオキシコール酸主要出発物質化合物２４の調製プロセスを、改変し、大規模調製に適するようにした。該調製プロセスは、安全、経済的であり、環境に優しく、一貫して仕様を満たす高品質最終生成物を生じる。
該調製プロセスは下記を含む：
・ 主要出発物質（即ち、メチル３α−アセトキシ−１２−オキソ−５β−コラ−９（１１）−エン−２４−オエート）化合物２４の調製。
該主要出発物質は、９−α−ヒドロキシアンドロスタ−４−エン−３，１７−ジオン（９−ＨＡＤ）から、８つの化学工程で調製される。いくつかの中間体は分離されないので、プロセスのこの部分は、ステージＩ〜ステージＶに対応する。全ての中間体の構造指定は、ＮＭＲおよび質量スペクトルデータと一致している。最終プロセスの詳細手順、ならびに各工程からの生成物のスペクトルデータは、プロセスセクションに示されている。
不純物の一覧表、ならびに、それらの状況（分離されている、同定されている、観測されない等）、原材料のリスト、および臨界プロセスパラメーターの記述は全て、レポートの最終セクションに示されている。
プロセス改変およびデモンストレーションバッチの結果に基づいて、調製プロセスは、その意図する目的に適している。
スキーム１： ９α−ヒドロキシアンドロステンジオンから出発する合成スキーム
最終プロセスの改変
・提示プロセス工程の初期実施の欠点
ＤＣＡを調製するプロセスは、初期実施において提示経路を経て適度によく操作され、我々は、かなり高い純度を有する多グラム量の合成ＤＣＡを調製することができたが、欠点は、工場規模に適さない主要出発物質純度、収率およびウィッティヒステージカラムクロマトグラフィーであり、これらの事項は、水性メタノール中での結晶化方法を使用してうまく回避され、アリル酸化反応も化合物２４の良好な収率および純度を向上させ、初期実験手順および各工程の結果を下記に示す。
新しいプロセス改変法の各工程の改変を行った。これらの改変試験は、このセクションに記載されている。ワークアップおよび分離を最小限にして、効率の増加が得られるように、工程を組み合わせる試みがなされた。得られたプロセスは、合計８工程であり、５つの工程は規定出発物質（主要出発物質、化合物２４）の調製に関係し、３つの工程はそのＤＣＡへの変換に関係している。最終精製に関して１つの付加的工程も存在する。
工程１の改変試験
生成物の化学名： ９α−ヒドロキシ−５β−アンドロスタン−３，１７−ジオン
合成スキーム：
工程１の改変プラン
・溶媒の選択
・溶媒の量
・反応時間
・触媒の量
溶媒の選択
下記の溶媒を、この工程の改変において試験した：
・Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）
・アセトン
・水性アセトン
・ジクロロメタン（ＤＣＭ）
・メタノール（ＭｅＯＨ）
・エタノール（ＥｔＯＨ）
・イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）
・ｎ−ブタノール
・テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）
・メチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）
・１，４−ジオキサン
・酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）
前記の溶媒を使用して下記の実験を行い、その結果を下記の表に示す。
所見：
ジクロロメタン、メタノールまたは酢酸エチルを、２５の水素化における溶媒として使用した場合、出発物質の完全消費が観測された（ＴＬＣによる）。生成物の分離およびＨＰＬＣ−ＲＩによる分析後に、化合物２６の５α−および５β−異性体の両方が、約１：１の比率で形成された。
アセトンを、２５の水素化における溶媒として使用した場合、出発物質の完全消費が観測された（ＴＬＣによる）。生成物の分離およびＨＰＬＣ−ＲＩによる分析後に、化合物２６の５β−異性体のほぼ排他的形成、および５α−異性体の１０％未満の形成が観測された。
結論： 前記の実験結果に基づいて、アセトンが好ましい溶媒として選択され、この難しい工程において９０％より高い選択性および８５％より高い収率を与えた。
溶媒の量
好ましい溶媒の量を決定するために、種々の量のアセトンを使用して反応を行った。下記の実験を行い、その結果を下記の表に示す。
所見：
・生成物の収率および質は、全ての濃度において同様である。
・生成物品質を、ＨＰＬＣ（ＲＩ検出）、ＮＭＲおよびＭＡＳＳによって監視した。
結論： 収率および生成物品質は、全ての濃度において、本質的に同じであったので、２４ｍＬ／ｇが最も生産的であると考えられ、より少ない量の場合、出発物質が溶解しないので、その量が選択された。
反応時間
最も好適な反応時間を決定するために下記の実験を行い、その結果を下記の表に示す。
結論： 実験結果に基づき、反応時間を４〜５時間（２５〜３５℃）に設定した。
触媒の量
Ｐｄ／Ｃの量を変更するために下記の実験を行い、実験結果を下記の表に示す。全ての場合において使用した触媒は、５０％湿潤パラジウム炭素であった。
所見： ７ｗｔ％の触媒を使用して実験を行った場合、反応は、５時間の反応時間後でも完結していなかった。
結論： 出発物質の完全消費を確実に得るために、少なくとも８ｗｔ％の触媒を使用すべきである。
工程１の最終改変プロセス：
この工程の最終改変プロセスを下記に示す。
原材料投入量の詳細：
実験手順： アセトン（３６００ｍＬ）中の９α−ヒドロキシアンドロスタ−４−エン−３，１７−ジオン（１５０．０ｇ）の溶液に、１０％のＰｄ／Ｃ（１２ｇ、８ｗｔ％、５０％湿潤）を添加し、得られたスラリーを、オートクレーブ（５０ｐｓｉ）において２５〜２５℃で５時間にわたって水素化した。ＴＬＣ（ＤＣＭ中３０％のＥｔＯＡｃ）によって出発物質の完全消失が確認されたら、粗反応混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）床（２０ｇ）で濾過し、ジクロロメタン（１５００ｍＬ）で洗浄した。濾液を真空除去し、粗生成物（１４５．０ｇ）を白色固形物として得た。この粗生成物を（１４５．０ｇ）アセトン（３００ｍＬ）と０℃で合わし、１時間撹拌し、次に、濾過し、冷却アセトン（１５０ｍＬ）で洗浄し、５０℃で真空乾燥した。これによって、化合物２６（１２９ｇ、８５％）を白色固形物として得た。
ＴＬＣ：ｐ−アニスアルデヒド 黒焼き、化合物２６のＲｆ＝０．４８、および化合物２５のＲｆ＝０．３。溶離剤は、ＤＣＭ中３０％のＥｔＯＡｃであった。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ＝２．４０−２．３７ （ｍ， １Ｈ）， ２．１１−．２．０２ （ｍ， ２Ｈ）， １．９１−１．３１ （ｍ， １９Ｈ）， ０．９６ （ｓ， ３Ｈ）， ０．８４ （ｓ， ３Ｈ）．
１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ＝２２１．０， ９５．７， ８０．１， ４７．０， ４３．６， ３８．６， ３８．５， ３７．１， ３５．９， ３３．４１， ３２．９， ３２．０， ２７．９， ２６．９， ２１．５， ２０．２， ２０．０， １２．６．
質量（ｍ／ｚ）＝３０５．０［Ｍ＋＋１］， ３２２．０ ［Ｍ＋＋１８］．
ＩＲ （ＫＢｒ）＝３４４３， ２９３８， １７２２， １４４９， １３３１， １１３８ ｃｍ−１．
融点＝２１３〜２１６ｏＣ（アセトンから）．
［α］Ｄ＝＋１１６ （ｃ＝ＣＨＣｌ３中１％）．
ＨＰＬＣ／ＲＩ 純度： ９９．０％。
工程２の改変試験
生成物の化学名： ５β−アンドロスタ−９（１１）−エン−３，１７−ジオン
合成スキーム：
工程２の改変プラン
・試薬の選択
試薬の選択
下記の実験を行い、その結果を下記の表に示す。
結論： 硫酸が脱離用の好ましい試薬として選択され、酸性樹脂においては、反応が完結しなかった。
工程２の最終改変プロセス：
この工程の最終改変プロセスを下記に示す。
基準実施例番号：ＢＤＡ−０９−００８−ＩＩ−０２
実験手順： ＤＣＭ（１８１５ｍＬ）中の化合物２６（１２１ｇ）の溶液に、硫酸（１９．１ｍＬ）を、１５分間にわたって、不活性雰囲気下に５〜１０℃で添加した。温度を２５〜３５℃に上げ、混合物を２時間撹拌した。この時点で、反応が完結していることを確認した（ＴＬＣ、ＤＣＭ中３０％のＥｔＯＡｃ）。混合物を、水（６００ｍＬ）で洗浄し、次に、１０％のＮａＨＣＯ３水溶液（６００ｍＬ）で洗浄した。有機層を、水（２００ｍＬ）、次に飽和ブライン溶液（２００ｍＬ）で再び洗浄した。次に、溶媒を真空蒸留して、化合物２７（１０８．２ｇ、９５％）を灰色がかった白色の固形物として得た。粗生成物を、さらに精製せずに次の工程に使用した。
ＴＬＣ：ｐ−アニスアルデヒド 黒焼き、化合物２７のＲｆ＝０．７６、および化合物２５のＲｆ＝０．４４。溶離剤は、ＤＣＭ中３０％のＥｔＯＡｃであった。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３ ）： δ＝５．６１ （ｓ，１Ｈ ）， ２．５７−２．４７（ｍ， ２Ｈ）， ２．４２−２．２４ （ｍ， ４Ｈ）， ２．２０−２．０５ （ｍ， ３Ｈ）， １．９９−１．８６ （ｍ， ２Ｈ）， １．８５−１．８４ （ｄ， Ｊ＝６ Ｈｚ １Ｈ）， １．６３−１．５７ （ｍ， ５Ｈ）， １．４０−１．３７（ｄ， Ｊ＝１３．５ Ｈｚ， １Ｈ） １．２８−１．２５ （ｄｄ， Ｊ＝４．０， １３．５ Ｈｚ， １Ｈ）， １．１７ （ｓ， ３Ｈ） ０．８５ （ｓ， ３Ｈ）．
１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ＝２２１．３， ２１２．８， １４０．１， １１８．５， ４８．５， ４５．９， ４４．３， ４３．５， ３９．０， ３８．０， ３７．３， ３６．１， ３５．８， ３３．３， ２８．８， ２６．０， ２５．５， ２２．５， １３．９．
質量（ｍ／ｚ）＝２８７ ［Ｍ＋＋１ ］， ３０４ ［ Ｍ＋＋１８ ］．
ＩＲ （ＫＢｒ） ＝３４５０， ２９１３， １７３７， １７０７，１４１３， １４０３，１２０７ ｃｍ−１．
融点＝１４３．４〜１４５．９ｏＣ（ＤＣＭから）．
［α］Ｄ＝＋１４２ （ｃ＝ＣＨＣｌ３中１％）．
ＨＰＬＣ／ ＲＩ 純度： ９６．７％。
工程３の改変試験
生成物の化学名：（Ｚ）−３α−アセトキシ−５β−プレグ−９（１１），１７（２０）−ジエン（化合物３０）
反応スキーム：
工程３の最終改変プロセス：
この工程の最終改変手順を下記に示す。
工程３の改変プラン
・溶媒の量
溶媒の量
ＭＴＢＥ溶媒量の評価を行うために、下記の実験を行い、その結果を下記の表に示す。
結論： この反応は、基質１グラム当たり１２ｍＬの溶媒において、等しくよく機能する。１２ｍＬ／ｇにおいてより高い処理量であるので、これを好ましい量として選択した。
精製溶媒の選択：
いくつかの溶媒系を、この最終精製に関して調査した。それらは下記の溶媒である：
・メタノール
・水性メタノール
・エタノール
・イソプロピルアルコール
・アセトン
下記の実践を行い、その実験結果を下記の表に示す。
結論： 極めて有効な精製、純度および収率が、２％水性メタノールからの生成物の結晶化によって達成された。
溶媒の量
種々の溶媒量を使用して実験を行い、その実験結果を下記の表に示す。
結論： 優れた回収率および生成物品質が、全ての溶媒レベルにおいて観察され、従って４ボリュームが最も生産的であるので、それを選択した。
分離温度
分離温度を変化させることによって、下記の実験を行い、その結果を下記の表に示す。
結論： １５〜２０℃における生成物の分離が、良好な品質および収率を与えた。
工程３の最終改変プロセス：
この工程の最終改変手順を下記に示す。
実験手順： ＴＨＦ（１０８０ｍＬ）中の化合物２７（１０８．０ｇ）の溶液に、リチウムトリ−ｔ−ブトキシアルミニウムハイドライド（７００ｍＬ）を、−４０〜−４５℃で不活性雰囲気下に添加した。得られた反応混合物を、−４０〜−４５℃で２時間撹拌した。ＴＬＣ（ＤＣＭ中３０％のＥｔＯＡｃ）によって確認した反応の完結後に、反応混合物を２Ｎ ＨＣｌ溶液の添加によってクエンチした。相を分離し、得られた水性層をジクロロメタン（６４８ｍＬ）で抽出した。有機画分を集め、水（６４８ｍＬ）、次に飽和ブライン溶液（５４０ｍＬ）で洗浄した。有機層を真空蒸発させて、化合物２８を得、ＴＨＦ（５４０ｍＬ）に溶解させた。
ＴＨＦ（２１６ｍＬ）中のエチルトリフェニルホスホニウムブロミド（４１７ｇ）の溶液に、カリウムｔ−ブトキシド（１０８６ｍＬ、ＴＨＦ中の１Ｍ溶液）を、窒素下に２５〜３５℃で２０分間にわたって滴下した。得られた暗赤色反応混合物を、前記温度でさらに１時間撹拌した。前記の化合物２８の溶液を、前記の懸濁液に２５〜３５℃において３０〜４０分間でゆっくり添加した。反応混合物をさらに３〜５時間撹拌し、出発物質を完全に消費させた（ＴＬＣによって確認；ＤＣＭ中３０％のＥｔＯＡｃ）。反応混合物を氷水（１．０８０Ｌ）でクエンチした。水性層をＭＴＢＥ（２ｘ５４０ｍＬ）で抽出し、集めた有機抽出物を飽和ブライン溶液（５４０ｍＬ）で洗浄し、有機層を真空濃縮し、粗物質をＭＴＢＥ（２ｘ５４０ｍＬ）で精製し、濾過し、濾液を真空下に蒸留して溶媒２５％を除去した。２５℃に冷却した化合物２９の溶液に、トリエチルアミン（１０５．２ｍＬ）、ＤＭＡＰ（４．５ｇ）および無水酢酸（５３．５ｍＬ）を、２５〜３５℃で窒素下に添加した。２５〜３５℃で２時間撹拌した後、反応が完結したことをＴＬＣ（ヘキサン中１０％のＥｔＯＡｃ）によって確認した。反応混合物を水（１０８０ｍＬ）、次にブライン溶液（３２４ｍＬ）で洗浄した。有機層を真空濃縮して、粗化合物３０（２２５ｇ）を得、残渣を２％水性メタノール中で再結晶して、８５ｇの純粋化合物３０（６３．５％収率、９６％ＨＰＬＣ−ＲＩ純度）を得た。
ＴＬＣ：ｐ−アニスアルデヒド 黒焼き、化合物３０のＲｆ＝０．５、および化合物２９のＲｆ＝０．１５。溶離剤＝ヘキサン中１０％のＥｔＯＡｃ。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ＝５．３８ （ ｓ， １Ｈ）， ５．２０−５．１８ （ｄ， Ｊ＝６．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．７６−４．７２ （ｍ， １Ｈ）， ２．４０−２．３５ （ｍ， ３Ｈ）， ２．２５−２．２２ （ｍ， １Ｈ）， ２．０９−２．０３ （ｍ， ３Ｈ）， ２．０１ （ｓ， ３Ｈ）， １．９８−１．４９ （ｍ， １０Ｈ）， １．４１−１．３１ （ｍ， ２Ｈ）， １．２７−１．１６ （ｍ， ３Ｈ）， １．０７ （ｓ， ３Ｈ）， ０．７９ （ｓ， ３Ｈ）．
１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ＝１７０．５， １５０．０， １４０．４， １１９．６， １１４．３， ７４．７， ５３．５， ４２．０， ４１．７， ３９．６， ３８．６， ３５．６， ３５．３， ３３．８， ３１．９， ２９．５， ２７．８， ２６．７， ２６．６， ２５．５， ２１．３， １６．９， １３．２
質量（ｍ／ｚ）＝３４２．９ ［Ｍ＋＋１］， ３６０ ［Ｍ＋＋１８］．
ＩＲ （ＣＨＣｌ３）＝３４４０， ３０３５， １７３０， １４５１， １３６７， １２５８， １０２８ｃｍ−１．
融点＝９３．９〜９７．８ ｏＣ．
［α］Ｄ＝＋１０９ （ｃ＝ＣＨＣｌ３中１％）．
ＨＰＬＣ／ ＲＩ 純度： ９６．０％。
工程４の改変試験
生成物の化学名： メチル３α−アセトキシ−５β−コラ−９（１１），１６−ジエン−２４−オエート（化合物８４）
合成スキーム：
工程６の改変プラン
・ルイス酸の選択
・ルイス酸の量
・触媒の選択
・触媒の量
ルイス酸の選択
この工程における触媒としての代替的ルイス酸を調査するために、下記の実験を行い、その結果を下記の表に示す。
ルイス酸の量
エチルアルミニウムジクロリドが、この工程に有効であることが分かった。我々は、エチルアルミニウムジクロリドのモル比を試験し、その結果を下記の表に示す。
結論： ３．０当量のエチルアルミニウムジクロリドを使用した場合に、充分に反応した。
触媒の選択
酸化白金をこの工程における触媒として最初に使用した。パラジウム炭素は、それほど高価格ではなく、一般的な水素化触媒でもあるので、これも調査した。下記の実験を行い、その結果を下記の表に示す。
結論： 市販の乾燥パラジウム触媒を使用した５０％湿潤パラジウム／炭素は、小規模において酢酸エチル媒質中で作用した。
工程４の最終改変プロセス：
この工程の最終改変（ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ）手順を下記に示す。
実験手順： ＤＣＭ（５６０ｍＬ）中の化合物３０（５６ｇ）の溶液に、メチルアクリレート（３５．１３ｍＬ）を、０〜５℃で不活性雰囲気下に撹拌しながら６０分間にわたって添加し、溶液を０〜５℃に冷却し、エチルアルミニウムジクロリド（２７２．９ｍＬ；トルエン中１．８Ｍ）を６０分間にわたって添加した。次に、温度を２５〜３５℃に上げ、混合物を約１８時間撹拌した。この時点で、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％のＥｔＯＡｃ）による分析によって反応が完結したことを確認し、従って、混合物を氷冷水（１１２０ｍＬ）に注いだ。相を分離し、水性層をＤＣＭ（２ｘ２５５ｍＬ）で抽出した。有機層を集め、水（５６０ｍＬ）およびブライン溶液（５６０ｍＬ）で順次に洗浄し、有機層を真空蒸発させて、化合物８４（６６ｇ）を油状物として得た。
酢酸エチル（５５０ｍＬ）中の化合物８４の溶液に、酢酸エチル（１１０ｍＬ）中のＰｄ／Ｃ（６．７ｇ）スラリーを、２５〜３５℃で添加した。得られたスラリーを、約７０ｐｓｉ水素圧力下に約１６時間撹拌した。反応の進行をＨＰＬＣによって監視した。触媒をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）床（２５ｇ）で濾過し、ケークを酢酸エチル（９９０ｍＬ）で洗浄した。濾液を真空蒸発させて、化合物３２（５９ｇ、８５％）を固形物として得た。
ＴＬＣ：ｐ−アニスアルデヒド 黒焼き、化合物３２のＲｆ＝０．３２、および化合物８４のＲｆ＝０．３０。溶離剤＝ヘキサン中１０％のＥｔＯＡｃ。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ＝５．３１ （ｓ， １Ｈ）， ４．７３（ｍ， １Ｈ）， ３．６６ （ｓ， ３Ｈ）， ２．３７−２．０３ （ｍ， ７Ｈ）， ２．０１ （ｓ， ３Ｈ）， １．９８−１．０９（ｍ， １８Ｈ）， １．０６ （ｓ， ３Ｈ）， ０．９２−０．９１ （ｄ， Ｊ＝６．０ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．５９ （ｓ， ３Ｈ）．
１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ＝１７４．６， １７０．５， １３９．８， １１９．５， ７４．８， ５６．０， ５３．３， ５１．４， ４１．９， ４１．７， ４０．９， ３８．５， ３６．４， ３５．４， ３５．２， ３３．８， ３１．０， ３０．９， ２９．５， ２８．２， ２７．８， ２６．８， ２６．７， ２５．２， ２１．４， １７．９， １１．５
質量（ｍ／ｚ）＝４４８．２ ［Ｍ＋＋１８］．
ＩＲ （ＫＢｒ）＝３４３５， ３０３９， ２９４１， １７２９， １４４８， １４３５， １２５２， １０２２ ｃｍ−１．
融点 ＝１２２．１〜１２３．９ ｏＣ．
［α］Ｄ＝＋５６ （ｃ＝ＣＨＣｌ３中１％）．
ＨＰＬＣ／ ＲＩ 純度： ９３．０％．
工程５の改変試験
生成物の化学名： メチル３α−アセトキシ−１２−オキソ−５β−コラ−９（１１）−エン−２４−オエート（化合物２４）
合成スキーム：
工程８の改変プラン
・試薬の選択
・試薬の化学量
・溶媒の選択
・溶媒の量
・反応温度
・反応時間
・生成物分離溶媒
・生成物再結晶
試薬の選択
多くの代替的酸化剤を使用して、反応を試験した。下記の実験を行い、その結果を下記の表に示す。
・注： ＤＤＨＴ：ジブロモジメチルヒダントイン、ＤＭＰ：ジメチルピラゾール、ＤＭＢ：３，３−ジメチル１−ブテン、ＴＢＨＰ：ｔ−ブチルヒドロペルオキシド。
いくつかの他の試薬、例えば、ＣｒＯ３／ＴＢＨＰ、ＮａＣｌＯ２／ＴＢＨＰ等も試験した。
結論： ＴＢＨＰ／ＮａＯＣｌに関して、三酸化クロム以外の代替的酸化剤は充分に作用しなかったことが分かる。従って、ＴＢＨＰ／ＮａＯＣｌを酸化試薬として選択した。
溶媒の選択
この工程の実施の間に、酢酸を溶媒として使用した。下記の溶媒を代替物として選択し、その結果を比較した：
・ジクロロメタン
・酢酸エチル
・水
・多くの他の溶媒を、種々の酸化条件で試験した。いくつかの他の溶媒は、ＡＣＮ、アセトンおよびＡｃＯＨであるが、他の溶媒も組み込みうる。
下記の実験を行い、その結果を表に示す。
結論： ＤＣＭと比較して、ＥｔＯＡｃを溶媒として使用した場合に、よい結果であった。従って、酢酸エチルを好ましい溶媒として選択した。
溶媒の量
２０ボリュームの酢酸エチルを、この工程の初期実施において使用した。より少ない溶媒を使用しうるかを調べるために、下記の実験を行った。結果を下記の表に示す。
結論： １０ボリュームの溶媒を好ましい量として選択した。
試薬の化学量
この工程の初期実施は、より少ない当量のＴＢＨＰを使用してなされた。この試薬のこの量を変更するために、下記の実験を行い、その結果を下記の表に示す。
結論： ３４当量の試薬を使用した場合に反応が完結したが、より少ない当量を使用した２つの実験においては完結しなかった。従って、３４当量を好ましい量として選択した。
試薬の化学量
この工程の初期実施は、より少ない当量のＮａＯＣｌを使用してなされた。この試薬のこの量を変更するために、下記の実験を行い、その結果を下記の表に示す。
結論： ７．０当量の試薬を使用した場合に反応が完結したが、より少ない当量を使用した２つの実験においては完結しなかった。従って、７．０当量を好ましい量として選択した。
反応温度
反応温度を変更するために、下記の実験を行い、その結果を下記の表に示す。
結論： ０〜５℃の全ての温度で反応が完結し、従って、より低い温度においてより選択性になると予期され、収率がより高くなることが観測されたので、０〜１０℃を選択した。
反応時間
初期実施の間に、反応を０〜５℃で行った（２４時間）。反応時間を変更すべきかを確かめるために、下記の実験を行い、その結果を下記の表に示す。
結論： 反応は０〜５℃において８時間で完結すると考えられ、従って、これを好ましい反応時間として選択した。
生成物分離溶媒の選択
この最終精製に関して、２つの溶媒系を調査した。それらは下記の溶媒である：
・メタノール
・水性メタノール
下記の実験を行い、その実験結果を下記の表に示す。
結論： 極めて有効な精製、純度および収率が、２０％水性メタノールからの生成物の分離によって達成された。または、シリカゲルおよび勾配溶媒系（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を用いるカラム精製を使用する。
精製溶媒の選択
この最終精製に関して、２つの溶媒系を調査した。それらは下記の溶媒である：
・メタノール
・水性メタノール
下記の実験を行い、その実験結果を下記の表に示す。
結論： 極めて有効な精製、純度および収率が、１３％水性メタノールからの生成物の再結晶によって達成された。または、シリカゲルおよび勾配溶媒系（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を用いるカラム精製を使用する。
工程８の最終改変プロセス：
この工程の最終改変手順を下記に示す。
実験手順： 酢酸エチル（２００ｍＬ）中の化合物３２（２０ｇ）の溶液に、水（２００ｍＬ）中の７０％ＴＢＨＰを添加し、反応溶液を０℃に冷却し、１０％次亜塩素酸ナトリウムを０〜５℃で約６〜７時間にわたってゆっくり添加し、前記温度で２〜３時間撹拌した。ＴＬＣ（溶離剤＝ヘキサン中２０％のＥｔＯＡｃ）によって化合物３２の完全消失を確認した後、有機層を分離し、水性層を酢酸エチル（６０ｍＬ）で抽出し、集めた有機層を水（２ｘ４００ｍＬ）で洗浄し、次に、２０％亜硫酸ナトリウムゾル（２２０ｍＬ）で５０〜５５℃において２時間処理し、２層を分離し、有機層をピリジニウムクロロクロメート（１０．９ｇ）で６〜８時間にわたって２５〜３０℃で処理した。ＴＬＣ（溶離剤＝ヘキサン中２０％のＥｔＯＡｃ）によってアリルアルコールの完全消失を確認した後、有機層を、熱水（４ｘ５００ｍＬ）、次に飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を４５〜５０℃で真空蒸発させた。得られた粗物質を、２０％水性メタノール（４０ｍＬ）と共に５〜１０℃において１時間撹拌することによって精製し、濾過し、ケークを２０％水性メタノール（２０ｍＬ）で洗浄し、次に、４５〜５０℃で真空乾燥した。有機層を濃縮し、シリカ（１．５当量）に吸収させた。別に、シリカゲル（ヘキサン）カラムに７当量のシリカを装入し、得られた生成物含有混合物をそのカラムに装填した。次に、生成物をヘキサン／ＥｔＯＡｃ勾配混合物で溶離して、化合物２４を含有するカラム画分を得た。各画分を採取し、純度について試験した。所望の純度を有する全ての画分を集め、真空濃縮した。次に、得られた混合物を、ヘキサンから沈殿させ、次に、４５〜５０℃で真空乾燥して、化合物２４（１３ｇ）を淡黄色固形物として得た。
ＴＬＣ：ｐ−アニスアルデヒド 黒焼き、化合物２４のＲｆ＝０．２８、および化合物３２のＲｆ＝０．５２。溶離剤＝ヘキサン中２０％のＥｔＯＡｃ。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ＝５．７１ （ｓ， １Ｈ）， ４．７５−４．７１ （ｍ， １Ｈ）， ３．６６ （ｓ， ３Ｈ）， ２．４２−２．３７（ｍ， ３Ｈ）， ２．３１−２．０２（ｍ， ２Ｈ）， ２．０ （ｓ， ３Ｈ）， １．９８−１．６７ （ｍ， ９Ｈ）， １．５６−１．２４ （ｍ， ９Ｈ）， １．１９ （ｓ， ３Ｈ）， １．０２−１．０１ （ｄ， Ｊ＝６．５ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．９０ （ｓ， ３Ｈ）．
１３Ｃ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ＝２０４．９， １７４．５， １７０．４， １６３．８， １２３．６， ７３．７， ５３．４， ５３．０， ５１．３， ４７．２， ４１．７， ３９．８， ３７．７， ３５．２， ３５．０， ３３．９， ３１．４， ３０．５， ２９．６， ２７．６， ２７．３， ２６．４， ２６．１， ２４．１， ２１．２， １９．４， １０．６．
質量（ｍ／ｚ）＝４４５．０ ［Ｍ＋＋１］， ４６２．０ ［Ｍ＋＋１８］．
ＩＲ＝３４３７， ３０４５， ２９４６， ２８７０， １７２９， １６８０， １２５２， １１６８， １０２０， ｃｍ−１．
融点 ＝１４１〜１４２ ｏＣ．
［α］Ｄ＝＋１０２ （ｃ＝ＣＨＣｌ３中１％）．
ＨＰＬＣ／ ＲＩ 純度： ９６．２％。
スキーム３： ２５からの最終合成
概要
ステージＩ： ９α−ヒドロキシ−５β−アンドロスタン−３，１７−ジオン
ステージＩＩ： ５β−アンドロスタ−９（１１）−エン−３，１７−ジオン
ステージＩＩＩ： （Ｚ）−３α−アセトキシ−５β−プレグナ−９（１１），１７（２０）−ジエン
ステージＩＶ： メチル３α−アセトキシ−５β−コラ−９（１１）−エン−２４−オエート
ステージＶ： メチル３α−アセトキシ−１２−オキソ−５β−コラ−９（１１）−エン−２４−オエート
ステージＩ： ９α−ヒドロキシ−５β−アンドロスタン−３，１７−ジオン
原材料：
実験手順：
０１． アセトン（２２００ｍＬ）を、清浄乾燥オートクレーブに装填する。
０２． ９−ＨＡＤ（１００ｇ）を、前記オートクレーブに装填する。
０３． 反応混合物を２５℃（室温）で撹拌し、アセトン（２００ｍＬ）中のＰｄ／Ｃ（８．０ｇ）のスラリーを添加する。
０４． 窒素で不活性化した後、水素ガスで６０ｐｓｉに加圧する。
０５． 反応混合物を、２５〜３５℃（室温）および６０ｐｓｉで４〜５時間撹拌する。
０６． ＨＰＬＣにより完結を確認する（ＤＣＭ中３０％のＥｔＯＡｃ；０．５％以下（ＮＭＴ）の２５）。
０７． 反応混合物を、ジクロロメタン（３００ｍＬ）で希釈する。
０８． Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）床（２０ｇ）で濾過し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）をジクロロメタン（９００ｍＬ）で洗浄する。
０９． 濾液を、４５℃未満での全溶媒の真空蒸留によって、濃縮する。
１０． アセトン（３００ｍＬ）を装填し、溶媒を、真空下に６５℃未満で完全に除去する。
１１． アセトン（２００ｍＬ）を装填し、０〜５℃に冷却する。
１２． 得られたスラリーを０〜５℃で２時間維持し、次に、濾過する。
１３． 湿潤ケークを、冷却（０〜１０℃）アセトン（１００ｍＬ）で洗浄する。
１４． 得られた白色固形物を、乾燥減量（ＬＯＤ）が１％以下（ＮＭＴ）になるまで、熱風炉において４５〜５０℃で乾燥させる。
湿潤重量： １０５ｇ
乾燥重量： ８６ｇ
収率： ８５．４％
乾燥減量（ＬＯＤ）＜１．０％
融点範囲： ２１８〜２１９．７℃
ＳＯＲ： ＋１２６．４（ｃ＝ＣＨＣｌ３中１％）
ＨＰＬＣ／ＲＩ純度： ９９．０％
注： 水素化の代替的プロセス。
原材料：
実験手順：
１５． ＤＭＦ（５００ｍＬ）を、清浄乾燥オートクレーブに装填する。
１６． ９−ＨＡＤ（１００ｇ）を、前記オートクレーブに装填する。
１７． 反応混合物を２５℃（室温）で撹拌し、ＤＭＦ（２００ｍＬ）中のＰｄ／Ｃ（７．０ｇ）のスラリーを添加する。
１８． 窒素で不活性化した後、水素ガスで６０ｐｓｉに加圧する。
１９． 反応混合物を、２５〜３５℃（室温）および６０ｐｓｉで３時間撹拌する。
２０． ＴＬＣにより完結を確認する（ＤＣＭ中３０％のＥｔＯＡｃ；２％以下（ＮＭＴ）の２５）。
２１． 反応混合物を、ジクロロメタン（３００ｍＬ）で希釈する。
２２． Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）床（２０ｇ）で濾過し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）をジクロロメタン（９００ｍＬ）で洗浄する。
２３． 濾液を、６５℃未満での全溶媒の真空蒸留によって、濃縮する。
２４． アセトン（３００ｍＬ）を装填し、溶媒を、真空下に６５℃未満で完全に除去する。
２５． アセトン（２００ｍＬ）を装填し、０〜５℃に冷却する。
２６． 得られたスラリーを、０〜５℃で２時間維持し、次に、濾過する。
２７． 湿潤ケークを、冷却（０〜１０℃）アセトン（１００ｍＬ）で洗浄する。
２８． 得られた白色固形物を、乾燥減量（ＬＯＤ）が１％以下（ＮＭＴ）になるまで、熱風炉において４５〜５０℃で乾燥させる。
湿潤重量： １０５ｇ
乾燥重量： ８８ｇ
収率： ８７．４％
乾燥減量（ＬＯＤ）＜１．０％
融点範囲： ２１８〜２１９．７℃
ＳＯＲ： ＋１２６．４（ｃ＝ＣＨＣｌ３中１％）。
ステージＩＩ： ５β−アンドロスタ−９（１１）−エン−３，１７−ジオン
原材料：
実験手順：
０１． ジクロロメタン（１２７５ｍＬ）およびステージＩ生成物を、清浄乾燥フラスコに装填する。
０２． 混合物を１０℃に冷却し、次に、硫酸（１３．５ｍＬ）を１０〜１５℃で１５分間にわたってゆっくり添加する。
０３． 反応溶液温度を２５〜３５℃に上げ、２５〜３５℃で２時間撹拌する。
０４． ＴＬＣによって完結を確認する（ＤＣＭ中３０％のＥｔＯＡｃ；１％以下（ＮＭＴ）のステージＩ生成物）。
０５． 反応混合物を水（３００ｍＬ）で洗浄する。
０６． 水性層をＤＣＭ（２ｘ２１２ｍＬ）で逆抽出し、次に、有機層を集める。
０７． 有機層を、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（４２５ｍＬ）で洗浄する。
０８． 有機層を、水（５５０ｍＬ）、次にブライン溶液（４２５ｍＬ）で洗浄する。
０７． 真空下に４５℃未満で蒸留することによって、溶媒を完全に除去する。
０８． ヘキサン（３４０ｍＬ）を添加し、真空下に５０℃未満で蒸留することによって、溶媒を完全に除去する。
０９． 水（６１６ｍＬ）を添加し、室温で１５分間撹拌し、次に、濾過し、ケークを水（２５５ｍＬ）で洗浄する。
１０． 白色固形物を、熱風乾燥機において５５〜６０℃で、湿分が０．５％以下（ＮＭＴ）になるまで乾燥させる。
湿潤重量： 約１９０ｇ
乾燥重量： ７６ｇ
収率： ９５％
湿分＜０．５％
融点範囲： １４８．５〜１５０．１℃
ＳＯＲ： ＋１４４．４（ｃ＝ＣＨＣｌ３中１％）
ＨＰＬＣ／ＲＩ純度： ９６．０％。
ステージＩＩＩ： （Ｚ）−３α−アセトキシ−５β−プレグ−９（１１），１７（２０）−ジエン（化合物３０）
原材料：
実験手順：
０１． 乾燥ＴＨＦ（７６０ｍＬ）およびステージＩＩ生成物（７６ｇ）を、窒素下に、清浄乾燥フラスコに装填する。
０２． −３５〜−４５℃に冷却し、次に、リチウムトリ−ｔ−ブトキシアルミニウムハイドライドの溶液を−３５〜−４５℃で１時間にわたって添加する。
０３． 反応温度物を、−３５〜−４５℃で２〜３時間撹拌する。
０４． ＨＰＬＣによって反応を監視する（ＤＣＭ中３０％のＥｔＯＡｃ；３％以下（ＮＭＴ）のステージＩＩ生成物）。
０５． ２Ｎ ＨＣｌ溶液（４７４ｍＬ）を反応混合物に添加し、温度を＜０℃に維持する。
０６． 層を分離し、水性層をジクロロメタン（２ｘ３８０ｍＬ）で２回、逆抽出する。
０７． 集めた有機層を、水（３８０ｍＬ）、次にブライン溶液（３８０ｍＬ）で洗浄する。
０８． 溶媒を、６０℃未満での常圧蒸留によって、完全に除去する。
０９． 残渣の水分量を調べる。それが＞０．５％である場合、ＤＣＭ（１５６ｍＬ）を添加し、再び６０℃未満で大気圧下に蒸留する。
１０． 残渣を乾燥ＴＨＦ（３８０ｍＬ）に溶解させ、溶液を窒素雰囲気下に維持する。これはステージＩＩＩＡ生成物である。
１１． エチルトリフェニルホスホニウムブロミド（２９５ｇ）および乾燥ＴＨＦ（２５０ｍＬ）を、窒素下に、清浄乾燥フラスコに装填する。
１２． カリウムｔ−ブトキシド（ＴＨＦ中１Ｍ、７６９ｍＬ）の溶液を１０分間にわたって添加し、次に、得られた赤色溶液を２５〜３５℃で１時間撹拌する。
１３． 工程１０のＴＨＦ溶液を、１／２時間にわたって添加し、次に、さらに３時間、２５〜３５℃で撹拌する。
１４． ＴＬＣによって完結を確認する（ＤＣＭ中３０％のＥｔＯＡｃ；１％以下（ＮＭＴ）のステージＩＩＩＡ生成物）。
１５． 氷水（７８０ｍＬ）を、反応混合物に２５〜３５℃で添加する（５〜８℃により発熱）。
１６． 層を分離し、水性相をＭＴＢＥ（２ｘ３８０ｍＬ）で逆抽出する。
１７． 有機層を集め、水（３８０ｍＬ）、次にブライン（３８０ｍＬ）で洗浄する。
１８． 真空下に５０℃未満で蒸留することによって、溶媒を完全に除去する。
１９． ＭＴＢＥ（２６４ｍＬ）を添加し、真空下に５０℃未満で蒸留することによって完全に除去する。
２０． ＭＴＢＥ（３８０ｍＬ）を再び添加し、２５〜３５℃で２時間撹拌する。
２１． 不所望の塩を濾過し、それをＭＴＢＥ（３８０ｍＬ）で洗浄し、濾液を集める。
２２． 真空下に５０℃未満で蒸留することによって、溶媒を完全に除去する。
２３． 新しいＭＴＢＥ（３８０ｍＬ）を添加し、次に、真空下に蒸留することによってそれを完全に除去する。
２４． ＭＴＢＥ（３８０ｍＬ）を再び添加し、２５〜３５℃で２時間撹拌する。
２５． 不所望の塩を濾過し、それをＭＴＢＥ（３８０ｍＬ）で洗浄し、濾液を集め、真空下に２０％まで蒸留し、新しいＭＴＢＥ（１８０ｍＬ）を添加する。
２６． 濾液（７６０ｍＬ）ステージＩＩＩＢ生成物を、清浄乾燥フラスコに装填する。
２７． ＤＭＡＰ（３．２ｇ）を装填する。
２８． トリエチルアミン（７３．８ｍＬ）を添加する。
２９． 無水酢酸（３７．５８ｍＬ）を、２５〜３５℃で１５分間にわたってゆっくり添加する。
３０． 反応混合物を、２５〜３５℃で２〜３時間撹拌する。
３１． ＴＬＣによって完結を確認する（ヘキサン中１０％のＥｔＯＡｃ；１％以下（ＮＭＴ）のステージＩＩＩＢ生成物）。
３２． 反応混合物を水（７６０ｍＬ）で洗浄し、次に、水性層をＭＴＢＥ（３８０ｍＬ）で抽出し、集めた有機層を飽和ブライン溶液（３８０ｍＬ）で洗浄する。
３３． 有機層を、５０℃未満での完全常圧蒸留によって、濃縮する。
３４． メタノール（１５２ｍＬ）を装填し、真空下に５０℃未満で溶媒を完全に除去する。
３５． ２％の水性メタノール（３０４ｍＬ）を装填し、６０〜６５℃に加熱する。
３６． 得られた透明溶液を６０〜６５℃で１時間維持し、次に、１５〜２０℃にゆっくり冷却し、その温度に２時間維持し、次に、濾過する。
３７． 湿潤ケークを、冷却（１０〜１５℃）の２％水性メタノール（７６ｍＬ）で洗浄する。
３８． 得られた白色固形物を、熱風炉において４５〜５０℃で、乾燥減量（ＬＯＤ）が１％以下（ＮＭＴ）になるまで乾燥させる。
湿潤重量： 約７０ｇ
乾燥重量： ５５ｇ
収率： ６３％
湿分＜０．５％
ＨＰＬＣ／ＲＩ純度： ９５．０％。
ステージＩＶ： メチル３α−アセトキシ−５β−コラ−９（１１）−エン−２４−オエート
原材料：
実験手順：
０１． ジクロロメタン（１０００ｍＬ）およびステージＩＩＩ生成物（１０２ｇ）を装填し、反応素材を０℃に冷却する。
０２． メチルアクリレート（６１ｍＬ）を、０〜５℃で１／２時間にわたって添加する。
０３． ０〜５℃で１時間撹拌し、次に、エチルアルミニウムジクロリドの溶液（トルエン中１．８Ｍ、４９６ｍＬ）を、０〜５℃で１時間にわたって添加する（注意：この試薬は水と激しく反応する）。
０４． ０〜５℃で１／２時間撹拌し、温度を２５〜３５℃に上げ、１６時間撹拌する。
０５． ＴＬＣによって完結を確認する（ヘキサン中１０％のＥｔＯＡｃ；５％以下（ＮＭＴ）のステージＩＩＩ生成物）。
０６． 反応素材を、氷水（２０００ｍＬ）に１０〜１５分間でゆっくり注ぎ、相を分離する。
０７． 水性層をＤＣＭ（５００ｍＬ）で抽出する。
０８． 有機相を集め、水（１０００ｍＬ）、続いて飽和バイカーボネート溶液（１０００ｍＬ）、次にブライン溶液（１０００ｍＬ）で洗浄する。
０９． 有機相を、真空下に５０℃未満で濃縮乾固する。これはステージＩＶＡ生成物である。
１０．残渣をヘキサン（１０００ｍＬ）に溶解させ、シリカ床ブフナー漏斗に通し、床をヘキサン中１０％の酢酸エチル（３０００ｍＬ）で洗浄する。
１１． 全濾液を採集し、真空下に５０℃未満で乾燥させる。これはステージＩＶＡ生成物である。
１２． フラスコから出し、酢酸エチル中の４０％メタノール（８００ｍＬ）で濯ぎ、この濯ぎ液を次の工程用に取っておく。
１３． 前記からの酢酸エチル中４０％メタノールの濯ぎ液（２００ｍＬ）中のステージＩＶＡ生成物を、乾燥オートクレーブに装填する。
１４． １０％パラジウム炭素のスラリー（２００ｍＬの酢酸エチル中１２ｇ）を装填する。
１５． 水素（７０ｐｓｉ）で加圧し、混合物を２５〜３５℃で１６時間撹拌する。
１６． ＨＰＬＣによって完結を確認する（１％以下（ＮＭＴ）のステージＩＶＡ生成物）。
１７． 反応混合物を、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）（３０ｇ）で濾過し、ケークを酢酸エチル（１０００ｍＬ）で洗浄する。
１８． ６０℃未満における真空蒸留によって、濾液を濃縮乾固する。
１９． メタノール（２００ｍＬ）を添加し、６０℃未満における真空蒸留によって濃縮乾固する。
２０． ３％水性メタノール（３００ｍＬ）を添加し、０〜５℃で１５分間撹拌し、濾過し、ケークを３％水性メタノール（１００ｍＬ）で洗浄する。
２１． 白色固形物を、熱風乾燥機において５０〜５５℃で、湿分が０．５％以下（ＮＭＴ）になるまで乾燥させる。
湿潤重量： 約８０ｇ
乾燥重量： ６０ｇ
収率： ８５％
湿分＜０．５％
融点範囲： １３１．７〜１３３．１℃
ＳＯＲ： ＋５７．４（ｃ＝ＣＨＣｌ３中１％）
ＨＰＬＣ／ＲＩ純度： ９３．０％。
ステージＶ： メチル３α−アセトキシ−１２−オキソ−５β−コラ−９（１１）−エン−２４−オエート
原材料：
実験手順：
０１． 酢酸エチル（６００ｍＬ）およびステージＩＶ生成物（６０ｇ）を、清浄乾燥フラスコに装填する。
０２． ２５〜３５℃で１０分間撹拌する
０３． 水（６１０ｍＬ）中の７０％ＴＢＨＰを、２５〜３５℃で添加し、次に、０〜５℃に冷却する。
０４． １０％次亜硫酸ナトリウム（６６０ｍＬ）を、０〜５℃で７時間にわたって添加する。
０５． 反応混合物を、０〜５℃で３時間撹拌する。
０６． ＨＰＬＣ−ＲＩによって完結を確認する（ヘキサン中２０％のＥｔＯＡｃ；１％以下（ＮＭＴ）のステージＩＶ生成物）。
０７． 有機層を分離し、水性層を酢酸エチル（３００ｍＬ）で抽出する。
０８． 集めた有機層を、水（２ｘ６００ｍＬ）で洗浄する。
０９． 酢酸エチル層および２０％水性亜硫酸ナトリウム（６００ｍＬ）を装填し、５５℃で２時間維持する。
１０． 有機層を分離し、水（２ｘ６００ｍＬ）で洗浄する。
１１． 有機層をＲ．Ｂ．フラスコに装填し、ＰＣＣ（３２．８ｇ）を２５〜３０℃で装填する。
１２． 反応混合物を、２５〜３０℃で６〜８時間撹拌する。
１３． ＨＰＬＣ−ＲＩによって完結を確認する（ヘキサン中２０％のＥｔＯＡｃ；２％以下（ＮＭＴ）のアリルアルコール）。
１４． ＤＭ水（１２００ｍＬ）を装填し、１５分間撹拌し、有機層を分離する。
１５． 有機層を、ＤＭ水（３ｘ６００ｍＬ）およびブライン溶液（３００ｍＬ）で洗浄する。
１６． 溶媒を、５０℃未満での真空蒸留下に、完全に除去する。
１７． メタノール（２４０ｍＬ）を添加し、５０℃未満での真空蒸留によって、溶媒を完全に除去する。
１８． ２０％水性メタノール（１８０ｍＬ）を添加し、次に、０〜５℃に冷却する。
１９． ０〜５℃で２時間撹拌し、濾過し、ケークを、冷却（０〜５℃）２０％水性メタノール（３０ｍＬ）で洗浄する。
２０． 固形物を、熱風乾燥機において５０〜５５℃で８時間、粗重量約３８ｇに乾燥させる。
２１． 粗重量３８ｇのステージＶ物質を、新しい乾燥ＲＢＦに装填する。
２２． メタノール３８３ｍＬを装填する。
２３． 反応素材を還流させて、透明溶液を得る。
２４． 還流下にＤＭ水を５７ｍＬ滴下し、還流を３０分間継続する（固形物の沈殿が観察される）。
２５． 反応素材を、２０〜２５℃、次に１０〜１５℃に、ゆっくり冷却し、１時間撹拌する。
２６． 濾過し、吸引乾燥し、１３％水性メタノール（４０ｍＬ）で洗浄する。
２７． 化合物を、熱風炉において６０〜６５℃で、ＬＯＤ（乾燥減量）＜０．５％まで乾燥させる。
湿潤重量： ３８ｇ
乾燥重量： ３２ｇ
収率： ５１．６％
融点範囲： １４２〜１４３．１℃
ＳＯＲ： ＋１０２．４（ｃ＝アセトン中１％）
ＨＰＬＣ／ＲＩ純度： ９４．０％。
０５． 原材料および溶媒のリスト
下記の原材料および溶媒のリストは、前記のプロセスの詳細に基づく。
０６． 臨界パラメーター
プロセス改変の間に、下記の工程が臨界パラメーターとして特定され、それらは品質または収率に有意な作用を示しうる。
ステージＩＩＩ
操作： 窒素雰囲気下における、リチウムトリ−ｔ−ブトキシアルミニウムハイドライド溶液の化合物への−４０〜−４５℃での添加。
説明：
還元剤、リチウムトリ−ｔ−ブトキシアルミニウムハイドライドの化学量の調節は、この工程における有利な結果にとって重要である。少なすぎる還元剤を使用した場合、反応が完結しない。多すぎる還元剤を使用した場合は、より多くの副生成物、化合物８３が形成される。
化学量の調節は、還元剤が感湿性であるために、より困難である。従って、無水溶媒を使用し、反応を窒素雰囲気下に行うことが重要である。湿分が反応を汚染した場合、いくらかのリチウムトリ−ｔ−ブトキシアルミニウムハイドライドがクエンチされる。
操作： 窒素雰囲気下における、カリウムｔ−ブトキシド溶液の化合物への２５〜３５℃での添加。
説明：
強塩基がこの反応に必要とされる。カリウムｔ−ブトキシドは、充分に強い塩基であり、よく作用する。水に暴露された場合、その塩基はクエンチされ、代わりに水酸化カリウムを形成し、それは所望の反応を生じるのに充分に強い塩基ではない。この理由から、無水溶媒を使用し、この反応を窒素雰囲気下に行うことが重要である。
ステージＩＶ
操作： 窒素雰囲気下における、０〜５℃でのエチルアルミニウムジクロリド溶液の添加。
説明：
エチルアルミニウムジクロリドは、この反応に特に良好な触媒である。他のそれほど高価でない触媒が試されたが、これらを用いた反応はうまくいかない。水がエチルアルミニウムジクロリドと反応し、この反応を触媒するその能力を消失させる。この理由から、この反応に無水溶媒および窒素雰囲気を使用することが重要である。反応が少量の水に暴露された場合でも、反応はうまくいかない。
ステージＶ：
操作：
次亜塩素酸ナトリウムの添加は、６〜７時間にわたって行うべきであり、温度を５℃未満に調節する必要がある。
根拠：
５℃より高い温度はこの反応においてあまり良くない結果を生じ、次亜塩素酸ナトリウムの添加の間に温度がこの限度より高くなる可能性がある。従って、適切な温度および時間調節を可能にするのに充分に遅い速度で次亜塩素酸ナトリウムを添加することが重要である。これは、大規模の場合に、さらに大きい問題となりうる。
０７． 洗浄手順
洗浄手順を規定するために、デオキシコール酸中間体について試験を行った。デオキシコール酸中間体は、ジクロロメタン、それに続いて水およびメタノールに溶けやすいと結論づけられる。
０８． ＤＣＡ中間体における不純物：
プロセス開発中に多くの不純物が分離され同定され、またはある場合には、疑わしい不純物が独立して合成された。そのような化合物ならびに各化合物に関する入手可能データのリストを、下記の表に示す。
実施例１２
スキーム２に示されている化合物２４からのデオキシコール酸の合成の調製プロセスを、大規模調製に適するようにした。該調製プロセスは、安全、経済的であり、環境に優しく、一貫して仕様を満たす高品質最終生成物を生じる。
化合物３３の調製
化合物３３の形成を、４０グラム規模で行った。１０．０ｇ（２５ｗｔ％）の乾燥１０％パラジウム炭素（Ｐｄ／Ｃ）に、化合物２４（４０．０ｇ、９０．０ｍｍｏｌ、ＨＰＬＣにより９８．２％ＡＵＣ）、次に、６００ｍＬの酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）を添加した。反応混合物を、６０ｐｓｉの水素（Ｈ２）に加圧し、７０℃で反応させた。１３時間後のＨＰＬＣ分析により、＜１％ＡＵＣ（ＨＰＬＣによる）の化合物２４が残留し、＜１％ＡＵＣのアリルアルコールが形成され、１４．５％ＡＵＣの化合物２４ ３４のジアステレオマーが形成されたことが示された。反応が完結したものとみなし、３０〜３５℃に冷却し、Ｃｅｌｉｔｅで濾過した。ＣｅｌｉｔｅケークをＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）で洗浄し、得られた濾液を約２５ボリュームに濃縮し、さらに操作せずに先に進めた。
前記のＥｔＯＡｃ中の化合物３３の試料（２５ｖｏｌ）を使用して、ＰＣＣ酸化を行った。ＥｔＯＡｃ中の化合物３３（９０．０ｍｍｏｌ）の試料（２５ｖｏｌ）に、ＰＣＣ（１９．４ｇ、１．０当量、Ａｌｄｒｉｃｈロット＃Ｓ３７８７４−０５８）を添加した。反応混合物を、２０〜２５℃で２５時間維持した。ＨＰＬＣ分析により、１．１％ＡＵＣの化合物３４のジアステレオマーが示された。反応混合物が完結したものとみなし、ＤＩ水（４００ｍＬ）で希釈し、Ｃｅｌｉｔｅで濾過した。濾過ケークをＥｔＯＡｃ（２ｘ２００ｍＬ）で洗浄した。得られた濾液をＤＩ水（２ｘ４００ｍＬ）で洗浄し、ＤＡＲＣＯ ＫＢ−Ｇ（８．０ｇ）で処理した。混合物を４５〜５０℃に４時間加熱し、次に、２０〜２５℃に冷却した。スラリーをＣｅｌｉｔｅで濾過し、濾過ケークをＥｔＯＡｃ（２ｘ２００ｍＬ）で洗浄した。ＥｔＯＡｃ濾液を約５ボリュームに濃縮し、ＭｅＯＨ（２ｘ６００ｍＬ）と共に共沸させ、約５ボリュームに戻した。得られたスラリーを、１Ｈ ＮＭＲによって分析したところ、６．４ｍｏｌ％のＥｔＯＡｃが残留していることが示された。スラリーをＤＩ水（３２０ｍＬ）で希釈し、２０〜２５℃で１時間維持した。スラリーを濾過し、ＤＩ水（２ｘ２００ｍＬ）で洗浄し、３５〜４５℃で真空乾燥させて、２７．４ｇ（６８％）の化合物３３を得た（ＨＰＬＣにより９７．９％ＡＵＣ；０．８％ＡＵＣの化合物３４のジアステレオマーを含有）。ＫＦ分析により、０．０２ｗｔ％の水が示された。予想より低い収率は、沈殿の間に存在する高レベルのＥｔＯＡｃに起因する可能性が最も高いと考えられた。
化合物３４の調製
下記の分離条件を満たして、化合物３３の前記試料の１０ｇ部分を、化合物３４の形成に進めた。６０ｍＬのテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中の化合物３３（１０．０ｇ、２２．４ｍｍｏｌ）の溶液に、４〜６℃で、ＴＨＦ中の３３．６ｍＬ（１．５当量、Ａｌｄｒｉｃｈ ロット＃００４１９ＴＨ）の１Ｍ リチウムトリ−ｔ−ブトキシアルミニウムハイドライド（Ｌｉ（ｔ−ＢｕＯ）３ＡｌＨ）を添加し、その間、温度を６℃未満に維持した。１８時間後のＨＰＬＣ分析により、＜１％ＡＵＣの化合物３３が残留し、５．５％ＡＵＣの化合物３４のジアステレオマーが形成されていることが示された。反応が完結したものとみなし、温度を２０℃未満に維持しながら４Ｍ ＨＣｌ（１５０ｍＬ）でクエンチした。反応混合物をヘプタン（２ｘ１００ｍＬ）で抽出した。集めた有機相を、１Ｍ ＨＣｌ（１００ｍＬ）およびＤＩ水（２ｘ１００ｍＬ）で洗浄した。透明溶液を蒸留して約１０ボリュームにし、ヘプタン（２ｘ１００ｍＬ）と共に共沸させて約１０ボリュームにした。いくらかのスケール付着が観察され、試料をヘプタン（１００ｍＬ）およびＭＴＢＥ（２．５ｍＬ）で希釈した。次に、試料を７０〜７５℃で加熱して溶解させ、１時間にわたって約５２℃に徐々に冷まし、その際、固形物が沈殿した。希薄スラリーを５２℃で１時間、４８℃で１時間、および４２℃で１時間維持し、次に、加熱を止め、スラリーを２０〜２５℃に一晩ゆっくり冷ました。スラリーを濾過し、ヘプタン（２ｘ２５ｍＬ）で洗浄し、３５〜４５℃で真空乾燥して、６．８ｇ（６８％）の化合物３４（９６．０％ＡＵＣ；２．８％ＡＵＣの化合物３４のジアステレオマーを含有）を、白色固形物として得た。濾過後に、いくらかのスケール付着がフラスコにおいて観察された。固形物をＣＨ２Ｃｌ２に溶解させ、濃縮して、１．３ｇ（１３％）の化合物３４（９６．５％ＡＵＣ：１．９％ＡＵＣの化合物３４のジアステレオマーを含有）を得た。母液および洗浄液を濃縮して、１．６ｇ（１６％）の化合物３４を得た。
沈殿からの予想より低い収率により、１．２５％ＭＴＢＥ／ヘプタンの代わりに１００％ヘプタンを使用して、手順を繰り返した。化合物３４の試料（１０ｇ、２２．４ｍｍｏｌ、ＨＰＬＣにより９３．４％ＡＵＣ）を、ヘプタン（２００ｍＬ）で希釈し、８０〜８５℃で加熱して溶解させた。溶液を１時間にわたって約６５℃にゆっくり冷まし、その際、固形物が沈殿した。希薄スラリーを６５℃で１時間維持し、２時間にわたって５℃刻みで３０℃に冷却した。スラリーを３０℃で濾過し、ヘプタン（２ｘ２５ｍＬ）で洗浄し、３５〜４５℃で真空乾燥して、７．５ｇ（７５％回収率）の化合物３４（９５．７％ＡＵＣ；０．１％ＡＵＣの化合物３４のジアステレオマーを含有）を、白色固形物として得た。濾過後に、いくらかのスケール付着がフラスコにおいて観察された。反応器濯ぎ液および母液についてのＨＰＬＣ分析が進行中である。
ＤＣＡ−粗製物の調製
水性ＤＣＡ−粗（３４０ｍＬ）の試料を、２−ＭｅＴＨＦ（２ｘ３４０ｍＬ）で洗浄した。水性相をＨＰＬＣによって分析したところ、０．１％ＡＵＣの不明不純物（ＲＲＴ＝１．１２を有する）が示された。水性相を、２−ＭｅＴＨＦ（３４０ｍＬ）で希釈し、４Ｍ ＨＣｌ（６０ｍＬ）を使用してｐＨ＝１．７〜２．０に調節した。相を分離し、２−ＭｅＴＨＦ相をＤＩ水（２ｘ４００ｍＬ）で洗浄した。２−ＭｅＴＨＦ相を、約５ボリュームに濃縮し、ヘプタン（３ｘ３２０ｍＬ）と共に共沸させて、約５ボリュームに戻した。５ボリュームスラリーを、１Ｈ ＮＭＲによって分析したところ、ヘプタンに対して２．０ｍｏｌ％の２−ＭｅＴＨＦが残留していることが示された。スラリーをヘプタン（３２０ｍＬ）で希釈し、２０〜２５℃で１時間維持した。スラリーを濾過し、ヘプタン（２ｘ１５０ｍＬ）で洗浄し、３５〜４５℃で真空乾燥して、２４．２ｇ（９６％）のＤＣＡ−粗を得た（９５．７％ＡＵＣ；０．４％ＡＵＣのＤＣＡ−粗のジアステレオマー、１．８％ＡＵＣの不明不純物（ＲＲＴ＝０．５）、および０．０４％ＡＵＣの不明不純物（ＲＲＴ＝１．１２）を含有）。
ＤＣＡの調製
ＤＣＡ−粗の一連のスラリー精製を、２．０ｇにおいて試験し、純度および回収率の評価を行った。ＤＣＡ−粗の試料（２．０ｇ、５．１ｍｍｏｌ）を、２５ボリュームのＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（表１参照）で希釈し、得られたスラリーを特定温度（表１参照）で１時間維持した。スラリーを特定温度（表１参照）に冷まし、濾過した。濾過ケークをＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ３ｖｏｌ）で洗浄し、３５〜４０℃で一晩真空乾燥させて、ＤＣＡ（表１参照）を得た。結果を下記の表１に要約する。
表１：ＤＣＡの結果
項目１〜３の結果は、スラリー精製を、２０〜２５℃で１ｍｏ１％のＭｅＯＨを使用して行った場合、より高い回収率を与え、３５〜３７℃で２ｍｏｌ％のＭｅＯＨを使用したスラリー精製に匹敵する結果であることを示した。ＤＣＡの試料を１Ｈ ＮＭＲによって分析したところ、＜１ｗｔ％のＣＨ２Ｃｌ２が乾燥後に存在していることが示された。
（項目１） 化合物２および３および必要に応じて１：
の混合物を、対応する１２−ケト化合物３９：
［式中、
Ｐｇはヒドロキシル保護基であり、
Ｒは水素、ヒドロキシルまたは−ＯＰｇであり、
Ｒ１は胆汁酸の１７−側鎖であり、該胆汁酸はコール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸およびグリココール酸から成る群から選択され、ここで該側鎖のカルボキシル官能基はＣ１−Ｃ６アルキル基で必要に応じてエステル化され、そして
Ｒ２は水素であるか、あるいは
Ｒ１およびＲ２はそれらに結合している炭素原子と一緒になってケト基またはケト保護基を形成し；そして
Ｒ３、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立にＣ１−Ｃ３アルキルである］
に変換するプロセスであって；
該プロセスが、
先ず、該混合物を水素化条件下で反応させる工程；および
次に、該工程によって形成された生成物を、酸化条件下で反応させる工程；
を含むプロセス。
（項目２） 前記混合物が２、３および１を含む、項目１に記載のプロセス。
（項目３） Ｒ１およびＲ２が、それらに結合している炭素原子と一緒になって、
［式中、ｎは１、２または３であり、波線
は分子の残部への結合点を表す］
を形成する、項目１に記載のプロセス。
（項目４） Ｒ１が、胆汁酸の１７−側鎖であり、該胆汁酸が、コール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸およびグリココール酸から成る群から選択される、項目１に記載のプロセス。
（項目５） 前記側鎖のカルボキシル官能基が、Ｃ１−Ｃ６アルキル基でエステル化されている、項目１または４に記載のプロセス。
（項目６） Ｒ２が水素であり、Ｒ１が、
［式中、Ｒ６は低級アルキルであり、波線
はステロイド骨格の１７位への結合点を表す］
から成る群から選択される、項目１に記載のプロセス。
（項目７） 前記水素化条件が、化合物の前記混合物を、白金、パラジウム、ロジウムおよび／またはルテニウムを含む白金族金属触媒に接触させる工程を含む、項目１に記載のプロセス。
（項目８） 前記触媒がＰｄ／ＣまたはＰｔＯ２である、項目７に記載のプロセス。
（項目９） 前記酸化条件が、ＥｔＯＡｃ中のピリジニウムクロロクロメート（ＰＣＣ）の使用を含む、項目１に記載のプロセス。
（項目１０） 化合物３９を還元して、化合物４０：
を得る工程をさらに含む、項目１に記載のプロセス。
（項目１１） １２−ケト化合物３：
を、対応するΔ−９，１１−エン化合物４：
［式中、
Ｐｇはヒドロキシル保護基であり、
Ｒは水素、ヒドロキシルまたは−ＯＰｇであり、
Ｒ１は胆汁酸の１７−側鎖であり、該胆汁酸はコール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸およびグリココール酸から成る群から選択され、ここで該側鎖のカルボキシル官能基はＣ１−Ｃ６アルキル基で必要に応じてエステル化され、そして
Ｒ２は水素であり、または
Ｒ１およびＲ２はそれらに結合している炭素原子と一緒になってケト基またはケト保護基を形成する］
から調製するプロセスであって；
該プロセスが、
補助酸化剤の存在下、式（Ｒ３）（Ｒ４）（Ｒ５）Ｃ−Ｏ−ＯＨ［ここで、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立にＣ１−Ｃ３アルキルである］のアルキルヒドロペルオキシドとの反応によって、化合物４の１２位においてアリル酸化を行って、化合物１、２および３：
の混合物を先ず得る工程；および、
必要に応じて、化合物２をさらに酸化して、Δ−９，１１−エン−１２−オン化合物３を得る工程；
を含むプロセス。
（項目１２） １１−β−ヒドロキシステロイドを、対応する１２−ケトステロイドに変換するプロセスであって、該プロセスは：
ａ） 適切に保護された１１−β−ヒドロキシステロイドを選択する工程；
ｂ） 該１１−β−ヒドロキシステロイドを脱水して、該ステロイド中にΔ−９，１１−エン官能基を与える工程；
ｃ） 補助酸化剤の存在下、該ｂ）のステロイド生成物をアルキルヒドロペルオキシドと反応させることによって、１２位におけるアリル酸化を行う工程；および
ｄ） Δ−９，１１−エン官能基を水素化して、９−α−ヒドロ−１１−ジヒドロ−１２−ケトステロイドを得る工程；および
ｅ） 必要に応じて、該ｄ）で生成された９−α−ヒドロ−１１−ジヒドロ−１２−ケトステロイドの１２−ケト官能基を、有効量の還元剤で還元して、９−α−ヒドロ−１１−ジヒドロ−１２−α−ヒドロキシステロイドを得る工程
を含む、プロセス。
（項目１３） 前記１１−β−ヒドロキシステロイドが、対応する１１−ケトステロイドを少なくとも化学論量の還元剤で還元して１１−β−ヒドロキシステロイドを得ることによって調製される、項目１２に記載のプロセス。
（項目１４） 前記１１−β−ヒドロキシステロイドが、ヒドロコルチゾンまたはヒドロコルチゾン誘導体である、項目１２に記載のプロセス。
（項目１５） 前記アリル酸化が、１当量または１当量より多い当量のｔ−ブチルヒドロペルオキシドによってＣｕＩの存在下で行われる、項目１１および１２のいずれか一項に記載のプロセス。
（項目１６） 前記補助酸化剤が、水性次亜塩素酸ナトリウム、パラジウム炭素、Ｐｄ（ＯＣＯＣＦ３）２、Ｐｄ（ＯＡｃ）２およびＣｕＩから成る群から選択される、項目１１および１２のいずれか一項に記載のプロセス。
（項目１７） 式１の化合物：
［式中、
Ｐｇは、ヒドロキシル保護基であり；
Ｒは、水素、ヒドロキシルまたは−ＯＰｇであり；
Ｒ１は、コール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸およびグリココール酸から成る群から選択される胆汁酸の１７−側鎖であり、ここで、該側鎖のカルボキシル官能基は、Ｃ１−Ｃ６アルキル基で必要に応じてエステル化され；
Ｒ２は、水素であり；または
Ｒ１およびＲ２は、それらに結合している炭素原子と一緒になって、ケト基またはケト保護基を形成し；
Ｒ３、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立に、Ｃ１−Ｃ３アルキルである］。
（項目１８） 式２の化合物が、化合物４２、４３、４４、４５および４６：
から成る群から選択される、項目１７に記載の化合物。
（項目１９） 式５の化合物：
［式中、
Ｐｇは、ヒドロキシル保護基であり；
Ｒは、水素、ヒドロキシルまたは−ＯＰｇであり；
Ｒ１は、コール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸およびグリココール酸から成る群から選択される胆汁酸の１７−側鎖であり、ここで、該側鎖のカルボキシル官能基は、Ｃ１−Ｃ６アルキル基で必要に応じてエステル化され；
Ｒ２は、水素であり；または
Ｒ１およびＲ２は、それらに結合している炭素原子と一緒になって、ケト基またはケト保護基を形成し；
Ｒ３、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立に、Ｃ１−Ｃ３アルキルである］。
（項目２０） 式５の化合物が、化合物４８、４９、５０、５１および５２：
から成る群から選択される、項目１９に記載の化合物。
（項目２１） 式６の化合物：
［式中、
Ｐｇは、ヒドロキシル保護基であり；
Ｒは、水素、ヒドロキシルまたは−ＯＰｇであり；
Ｒ１は、コール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸およびグリココール酸から成る群から選択される胆汁酸の１７−側鎖であり、ここで、該側鎖のカルボキシル官能基は、Ｃ１−Ｃ６アルキル基で必要に応じてエステル化され；
Ｒ２は、水素であり；または
Ｒ１およびＲ２は、それらに結合している炭素原子と一緒になって、ケト基またはケト保護基を形成する］。
（項目２２） 式６の化合物が、化合物４８ａ、４９ａ、５０ａ、５１ａおよび５２ａ：
から成る群から選択される、項目２１に記載の化合物。
（項目２３） Ｒ１が、
［式中、Ｒ６は低級アルキルであり、波線
はステロイド骨格の１７位への結合点を表す］
から成る群から選択される、項目１７、１９または２１のいずれか一項に記載の化合物。
（項目２４） Ｒ１およびＲ２が、それらに結合している炭素原子と一緒になってケト基を形成する、項目１７、１９または２１のいずれか一項に記載の化合物。
（項目２５） Ｒ１およびＲ２が、それらに結合している炭素原子と一緒になって、
［式中、ｎは１、２または３であり、波線
は分子の残部への結合点を表す］
を形成する、項目１７、１９または２１のいずれか一項に記載の化合物。
（項目２６） 化合物１２：
を調製する方法であって、化合物１３：
［式中、Ｐｇはヒドロキシル保護基である］
を、脱水条件下で接触させて、化合物１２を得る工程を含む方法。
（項目２７） 前記脱水条件が、塩化チオニルおよびピリジンを含む、項目２６に記載の方法。
（項目２８） 化合物１３が、化合物１７：
の３−ヒドロキシル基を選択的に保護する工程を含む方法によって調製される、項目２６に記載の方法。
（項目２９） 化合物１７が、化合物１６：
を、酸化条件下でビシナルアルコール酸化剤に接触させる工程を含む方法によって調製される、項目２８に記載の方法。
（項目３０） 前記ビシナルアルコール酸化剤がＮａＩＯ４である、項目２９に記載の方法。
（項目３１） 化合物１６が、化合物１５：
を、カルボニル基がアルコール基に還元される条件下で、少なくとも２当量の還元剤に接触させる工程を含む方法によって調製される、項目３０に記載の方法。
（項目３２） 前記還元剤がＮａＢＨ４を含む、項目３１に記載の方法。
（項目３３） 化合物１５が、ヒドロコルチゾン：
を、水素化条件下で、少なくとも１モル当量の水素に接触させる工程を含む方法によって調製される、項目３２に記載の方法。
（項目３４） 前記水素化条件が、Ｐｄ／Ｃを触媒として含み、ＤＭＦを溶媒として含む、項目３３に記載の方法。
（項目３５） 式１４の化合物：
の調製方法であって：
ａ） ヒドロコルチゾン：
を、水素化条件下で、少なくとも１モル当量の水素に接触させて、４，５−ジヒドロ−ヒドロコルチゾン−化合物１５：
を得る工程；
化合物１５を、カルボニル基がアルコール基に還元される条件下で、少なくとも２当量の還元剤に接触させて、化合物１６：
を得る工程；
ｃ） 化合物１６を、酸化条件下で、ビシナルアルコール酸化剤に接触させて、化合物１７：
を得る工程；
ｄ） 化合物１７の３−ヒドロキシル基を選択的に保護して、式１３の化合物：
［式中、Ｐｇはヒドロキシル保護基である］
を得る工程；
ｅ） 式１３の化合物を、脱水条件下で接触させて、式１２の化合物；
を得る工程；および、
ｆ） ヒドロキシル保護基を除去して、化合物１４を得る工程
を含む、方法。
（項目３６） 式１８の化合物：
を調製する方法であって：
ａ） ヒドロコルチゾン：
を、水素化条件下で、少なくとも１モル当量の水素に接触させて、４，５−ジヒドロ−ヒドロコルチゾン−化合物１５：
を得る工程；
化合物１５を、カルボニル基がアルコール基に還元される条件下で、少なくとも２当量の還元剤に接触させて、化合物１６：
を得る工程；
ｃ） 化合物１６を、酸化条件下で、ビシナルアルコール酸化剤に接触させて、化合物１７：
を得る工程；
ｄ） 化合物１７の３−ヒドロキシル基を選択的に保護して、化合物１３：
［式中、Ｐｇはヒドロキシル保護基である］
を得る工程；
ｅ） 式１３の化合物を、脱水条件下で接触させて、化合物１２；
を得る工程；および
ｆ） 化合物１２を、オレフィン形成条件下で変換して、化合物１８：
を形成する工程
を含む、方法。
（項目３７） デオキシコール酸またはその塩を調製する方法であって：
ａ） ヒドロコルチゾン：
を、水素化条件下で、少なくとも１モル当量の水素に接触させて、４，５β−ジヒドロ−ヒドロコルチゾン−化合物１５：
を得る工程；
化合物１５を、カルボニル基がアルコール基に還元される条件下で、少なくとも２当量の還元剤に接触させて、化合物１６：
を得る工程；
ｃ） 化合物１６を、酸化条件下で、ビシナルアルコール酸化剤に接触させて、化合物１７：
を得る工程；
ｄ） 化合物１７の３−ヒドロキシル基を選択的に保護して、化合物１３：
［式中、Ｐｇはヒドロキシル保護基である］
を得る工程；
ｅ） 化合物１３を、脱水条件下で接触させて、化合物１２；
を得る工程；
ｆ） 化合物１２を、オレフィン形成条件下で変換して、化合物１８：
を形成する工程；
ｇ） 化合物１８を、ルイス酸の存在下に、アルキルプロピオレートＣＨ≡ＣＣ（Ｏ）ＯＲまたはアルキルアクリレートＣＨ２＝ＣＨＣ（Ｏ）ＯＲ［ここでＲはアルキルである］と反応させて、化合物１９：
［式中、破線
は単結合または二重結合である］
を形成する工程；
ｈ） 式１９の化合物を、水素化条件下で、Ｈ２と反応させて、化合物２０：
を形成する工程；
ｉ） 化合物２０を酸化剤と反応させて、化合物２１：
を形成する工程；
ｊ） 化合物２１を、水素化条件下で、Ｈ２と反応させて、化合物２２：
を形成する工程；
ｋ） 化合物２２を還元剤と反応させて、化合物２３：
を形成する工程；ならびに
ｌ） 化合物２３を、脱保護および加水分解条件に暴露して、デオキシコール酸またはその塩を形成する工程
を含む、方法。
（項目３８） 化合物２４：
を調製する方法であって、下記：
ａ） 化合物２５：
を、高圧に維持されたオートクレーブにおいて、アセトン、イソプロパノール、酢酸エチル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドおよびテトラヒドロフランから成る群から選択される溶媒中で、水素および少なくとも８ｗｔ％の５０％湿潤Ｐｄ炭素を含む水素化条件下で接触させて、化合物２６：
を得る工程；
ｂ） 化合物２６を、硫酸の存在下に、水が除去される条件下で脱水して、化合物２７：
を得る工程；
ｃ） 化合物２７を、−４０℃〜−４５℃の温度を包含する選択的還元条件下で、過剰のリチウムトリ−ｔ−ブトキシアルミニウムハイドライドに接触させて、化合物２８：
を得る工程；
ｄ） 化合物２８を、ウィッティヒ反応条件下で、過剰のエチルトリアリールホスホニウムハライドに接触させて、化合物２９：
を得る工程；
ｅ） 化合物２９の
を、過剰の無水の無水酢酸を包含するアセチル化条件下で保護して、化合物３０：
を得る工程；
ｆ） 化合物３０を、アルキル化条件下で、過剰のＣ１−Ｃ２アルキルアルミニウムジクロリドの存在下で、過剰のメチルアクリレートに接触させて、化合物３１：
を形成する工程；
ｇ） 化合物３１を、高圧に維持されたオートクレーブを包含する水素化条件下で、不活性溶媒中で、水素、ならびに白金および乾燥パラジウム炭素から成る群から選択される水素化触媒に接触させて、化合物３２：
を得る工程；
ｈ） 不活性溶媒に溶解させた化合物３２を、酸化条件下、第一酸化剤としての過剰のＣ４−Ｃ６ｔ−アルキルヒドロペルオキシドおよび補助酸化剤としての過剰のＮａＯＣｌを包含する補助酸化条件下で接触させ、必要に応じて、それに続いて、わずかに過剰のピリジニウムクロロクロメートでさらに酸化して、化合物２４：
を得る工程；および
ｉ） 必要に応じて、化合物２４をメタノールで洗浄する工程
を含む、方法。
（項目３９） 項目３８に記載の方法であって：
工程ａ）が、アセトンを溶媒として含み；
工程ｂ）が、ジクロロメタンを溶媒として含み；
工程ｃ）が、不活性雰囲気において、無水テトラヒドロフランを溶媒として含み；
工程ｄ）のウィッティヒ反応条件が、不活性雰囲気において、溶媒としての無水テトラヒドロフラン中に、カリウムｔ−ブトキシドを含み；
工程ｅ）が、トリエチルアミンおよび４−ジメチルアミノピリジンを含み；
工程ｆ）のＣ１−Ｃ２アルキルアルミニウムジクロリドが、０〜５℃で、不活性雰囲気中、溶媒としての無水ジクロロメタン中に、エチルアルミニウムジクロリドを含み；
工程ｇ）の水素化触媒が、溶媒としての酢酸エチル中に、乾燥パラジウム炭素を含み；そして、
工程ｈ）のＣ４−Ｃ６ｔ−アルキルヒドロペルオキシドが、５℃未満の温度において、溶媒としての水中に、ｔ−ブチルヒドロペルオキシドを含む、方法。
（項目４０） デオキシコール酸またはその塩を調製する方法であって、下記：
ａ） 化合物２４：
を、水素およびＰｄ炭素を含む水素化条件下で、水素およびＰｄ／Ｃに接触させ、必要に応じて、それに続いて、水素化の間に形成された任意の１２−ヒドロキシル基を酸化条件下でピリジニウムクロロクロメートで酸化して、化合物３３：
を得る工程；
ｂ） 化合物３３を、還元条件下で、リチウムトリ−ｔ−アルコキシアルミニウムハイドライドと反応させて、化合物３４：
を得る工程；および
ｃ） 化合物３４を、脱保護および加水分解条件に暴露して、デオキシコール酸またはその塩を形成する工程
を含む、方法。
（項目４１） 化合物３０：
を、ＥｔＡｌＣｌ２の存在下に、メチルアクリレートに接触させる工程による、化合物３１：
を調製する方法。
（項目４２） 化合物２５：
を、アセトンを溶媒として使用して、水素および１０％Ｐｄ／Ｃを含む水素化条件下で接触させる工程による、化合物２６：
を調製する方法。
（項目４３） ９６％より高い純度を有するデオキシコール酸（ＤＣＡ）、またはその塩を調製する方法であって：
（ａ） ＤＣＡ溶液を形成する条件下、約９５％以下の純度を有するＤＣＡを、ジクロロメタンを含む溶媒に接触させる工程；
（ｂ） 工程（ａ）で得たＤＣＡ溶液からＤＣＡを結晶化して、結晶性ＤＣＡを含有する溶液を得る工程；および
（ｃ） ９６％より高い純度を有する結晶性ＤＣＡを回収する工程
を含む、方法。
（項目４４） 前記溶媒がメタノールをさらに含む、項目４３に記載の方法。
（項目４５） ジクロロメタン／メタノールの比率が、約１００：１〜約３：１である、項目４４に記載の方法。
（項目４６） 溶媒／ＤＣＡの比率が、約４０：１〜約１０：１である、項目４３に記載の方法。
（項目４７） 前記接触が還流条件下での接触である、項目４３に記載の方法。
（項目４８） 工程（ｃ）において充分量のジクロロメタンを除去することによって、ＤＣＡが結晶化される、項目４３に記載の方法。
（項目４９） 前記溶媒の一部を除去し、前記溶液の温度を下げることによって、前記ＤＣＡが結晶化される、項目４３に記載の方法。
（項目５０） 前記結晶化されたＤＣＡを濾過によって回収する、項目４３に記載の方法。
（項目５１） 前記ＤＣＡを、薬学的に許容されうる塩に変換する工程をさらに含む、項目４３に記載の方法。
（項目５２） 前記純度が少なくとも９９％である、項目４３に記載の方法。
（項目５３） ９６％より高い純度を有するデオキシコール酸（ＤＣＡ）を調製する方法であって：
（ａ） ＤＣＡ溶液を形成する条件下で、約９５％以下の純度を有するＤＣＡを、ジクロロメタンおよびメタノールを含む溶媒に接触させる工程；
（ｂ） 工程（１）で得たＤＣＡ溶液からＤＣＡを結晶化して、結晶性ＤＣＡを含有する溶液を得る工程；および
（ｃ） 該結晶性ＤＣＡを回収し、回収した該結晶性ＤＣＡに９６％より高い純度を与えるのに充分な量のジクロロメタンを除去する工程
を含む、方法。
（項目５４） ジクロロメタン／メタノールの比率が、約１００：１〜約３：１である、項目５３に記載の方法。
（項目５５） 溶媒／ＤＣＡの比率が、約４０：１〜約１０：１である、項目５３に記載の方法。
（項目５６） 前記接触が還流条件下での接触である、項目５３に記載の方法。
（項目５７） 前記溶媒の一部を除去し、前記溶液の温度を下げることによって、前記ＤＣＡが結晶化される、項目５３に記載の方法。
（項目５８） 前記結晶化されたＤＣＡを濾過によって回収する、項目５３に記載の方法。
（項目５９） 前記ＤＣＡを、薬学的に許容されうる塩に変換する工程をさらに含む、項目５３に記載の方法。
（項目６０） 前記純度が少なくとも９９％である、項目５３に記載の方法。
（項目６１） 少なくとも９９％の純度を有する完全合成デオキシコール酸（ＤＣＡ）または薬学的に許容されうるその塩。
（項目６２） 少なくとも９９％の純度を有するＤＣＡ、または薬学的に許容されうるその塩、ならびに薬学的に許容されうる賦形剤を含む、組成物。
（項目６３） 局所的脂肪の非外科的除去用の組成物であって、該組成物が、少なくとも９９％の純度を有するＤＣＡまたは薬学的に許容されうるその塩から本質的になり、該ＤＣＡが、該組成物の本質的に単独の脂肪除去成分である、組成物。
（項目６４） ＤＣＡおよび溶媒を含む組成物であって、該溶媒がメタノールを含むか、または含まないジクロロメタンを含み、溶媒に対するＤＣＡの濃度が４０：１〜約１０：１である、組成物。

Claims (22)

  1. １２−ケト化合物３：
    を、対応するΔ−９，１１−エン化合物４：
    ［式中、
    Ｐｇはヒドロキシル保護基であり、
    Ｒは水素、ヒドロキシルまたは−ＯＰｇであり、
    Ｒ１は胆汁酸の１７−側鎖であり、該胆汁酸はコール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸およびグリココール酸から成る群から選択され、ここで該側鎖のカルボキシル官能基はＣ１−Ｃ６アルキル基で必要に応じてエステル化され、そして
    Ｒ２は水素であり、または
    Ｒ１およびＲ２はそれらに結合している炭素原子と一緒になってケト基またはケト保護基を形成する］
    から調製するプロセスであって；
    該プロセスが、
    補助酸化剤の存在下、式（Ｒ３）（Ｒ４）（Ｒ５）Ｃ−Ｏ−ＯＨ［ここで、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立にＣ１−Ｃ３アルキルである］のアルキルヒドロペルオキシドとの反応によって、化合物４の１２位においてアリル酸化を行って、化合物１、２および３：
    の混合物を先ず得る工程；および、
    必要に応じて、化合物２をさらに酸化して、Δ−９，１１−エン−１２−オン化合物３を得る工程；
    を含むプロセス。
  2. １１−β−ヒドロキシステロイドを、対応する１２−ケトステロイドに変換するプロセスであって、該プロセスは：
    ａ） 適切に保護された１１−β−ヒドロキシステロイドを選択する工程；
    ｂ） 該１１−β−ヒドロキシステロイドを脱水して、該ステロイド中にΔ−９，１１−エン官能基を与える工程；
    ｃ） 補助酸化剤の存在下、該ｂ）のステロイド生成物をアルキルヒドロペルオキシドと反応させることによって、１２位におけるアリル酸化を行う工程；および
    ｄ） Δ−９，１１−エン官能基を水素化して、９−α−ヒドロ−１１−ジヒドロ−１２−ケトステロイドを得る工程；および
    ｅ） 必要に応じて、該ｄ）で生成された９−α−ヒドロ−１１−ジヒドロ−１２−ケトステロイドの１２−ケト官能基を、有効量の還元剤で還元して、９−α−ヒドロ−１１−ジヒドロ−１２−α−ヒドロキシステロイドを得る工程
    を含む、プロセス。
  3. 前記１１−β−ヒドロキシステロイドが、対応する１１−ケトステロイドを少なくとも化学論量の還元剤で還元して１１−β−ヒドロキシステロイドを得ることによって調製される、請求項２に記載のプロセス。
  4. 前記１１−β−ヒドロキシステロイドが、ヒドロコルチゾンまたはヒドロコルチゾン誘導体である、請求項２に記載のプロセス。
  5. 前記アリル酸化が、１当量または１当量より多い当量のｔ−ブチルヒドロペルオキシドによってＣｕＩの存在下で行われる、請求項１および２のいずれか一項に記載のプロセス。
  6. 前記補助酸化剤が、水性次亜塩素酸ナトリウム、パラジウム炭素、Ｐｄ（ＯＣＯＣＦ３）２、Ｐｄ（ＯＡｃ）２およびＣｕＩから成る群から選択される、請求項１および２のいずれか一項に記載のプロセス。
  7. 式１の化合物：
    ［式中、
    Ｐｇは、ヒドロキシル保護基であり；
    Ｒは、水素、ヒドロキシルまたは−ＯＰｇであり；
    Ｒ１は、コール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸およびグリココール酸から成る群から選択される胆汁酸の１７−側鎖であり、ここで、該側鎖のカルボキシル官能基は、Ｃ１−Ｃ６アルキル基で必要に応じてエステル化され；
    Ｒ２は、水素であり；または
    Ｒ１およびＲ２は、それらに結合している炭素原子と一緒になって、ケト基またはケト保護基を形成し；
    Ｒ３、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立に、Ｃ１−Ｃ３アルキルである］。
  8. 式２の化合物が、化合物４２、４３、４４、４５および４６：
    から成る群から選択される、請求項７に記載の化合物。
  9. 式５の化合物：
    ［式中、
    Ｐｇは、ヒドロキシル保護基であり；
    Ｒは、水素、ヒドロキシルまたは−ＯＰｇであり；
    Ｒ１は、コール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸およびグリココール酸から成る群から選択される胆汁酸の１７−側鎖であり、ここで、該側鎖のカルボキシル官能基は、Ｃ１−Ｃ６アルキル基で必要に応じてエステル化され；
    Ｒ２は、水素であり；または
    Ｒ１およびＲ２は、それらに結合している炭素原子と一緒になって、ケト基またはケト保護基を形成し；
    Ｒ３、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立に、Ｃ１−Ｃ３アルキルである］。
  10. 式５の化合物が、化合物４８、４９、５０、５１および５２：
    から成る群から選択される、請求項９に記載の化合物。
  11. Ｒ１が、
    ［式中、Ｒ６は低級アルキルであり、波線
    はステロイド骨格の１７位への結合点を表す］
    から成る群から選択される、請求項７または９のいずれか一項に記載の化合物。
  12. Ｒ１およびＲ２が、それらに結合している炭素原子と一緒になってケト基を形成する、請求項７または９のいずれか一項に記載の化合物。
  13. Ｒ１およびＲ２が、それらに結合している炭素原子と一緒になって、
    ［式中、ｎは１、２または３であり、波線
    は分子の残部への結合点を表す］
    を形成する、請求項７または９のいずれか一項に記載の化合物。
  14. 化合物１２：
    を調製する方法であって、化合物１３：
    ［式中、Ｐｇはヒドロキシル保護基である］
    を、脱水条件下で接触させて、化合物１２を得る工程を含み、ここで、化合物１３は、化合物１７：
    の３−ヒドロキシル基を選択的に保護する工程を含む方法によって調製され、ここで、化合物１７が、化合物１６：
    を、酸化条件下でビシナルアルコール酸化剤に接触させる工程を含む方法によって調製される、方法。
  15. 前記ビシナルアルコール酸化剤がＮａＩＯ４である、請求項１４に記載の方法。
  16. 化合物１６が、化合物１５：
    を、カルボニル基がアルコール基に還元される条件下で、少なくとも２当量の還元剤に接触させる工程を含む方法によって調製される、請求項１５に記載の方法。
  17. 前記還元剤がＮａＢＨ４を含む、請求項１６に記載の方法。
  18. 化合物１５が、ヒドロコルチゾン：
    を、水素化条件下で、少なくとも１モル当量の水素に接触させる工程を含む方法によって調製される、請求項１７に記載の方法。
  19. 前記水素化条件が、Ｐｄ／Ｃを触媒として含み、ＤＭＦを溶媒として含む、請求項１８に記載の方法。
  20. 式１４の化合物：
    の調製方法であって：
    ａ） ヒドロコルチゾン：
    を、水素化条件下で、少なくとも１モル当量の水素に接触させて、４，５−ジヒドロ−ヒドロコルチゾン−化合物１５：
    を得る工程；
    化合物１５を、カルボニル基がアルコール基に還元される条件下で、少なくとも２当量の還元剤に接触させて、化合物１６：
    を得る工程；
    ｃ） 化合物１６を、酸化条件下で、ビシナルアルコール酸化剤に接触させて、化合物１７：
    を得る工程；
    ｄ） 化合物１７の３−ヒドロキシル基を選択的に保護して、式１３の化合物：
    ［式中、Ｐｇはヒドロキシル保護基である］
    を得る工程；
    ｅ） 式１３の化合物を、脱水条件下で接触させて、式１２の化合物；
    を得る工程；および、
    ｆ） ヒドロキシル保護基を除去して、化合物１４を得る工程
    を含む、方法。
  21. 式１８の化合物：
    を調製する方法であって：
    ａ） ヒドロコルチゾン：
    を、水素化条件下で、少なくとも１モル当量の水素に接触させて、４，５−ジヒドロ−ヒドロコルチゾン−化合物１５：
    を得る工程；
    化合物１５を、カルボニル基がアルコール基に還元される条件下で、少なくとも２当量の還元剤に接触させて、化合物１６：
    を得る工程；
    ｃ） 化合物１６を、酸化条件下で、ビシナルアルコール酸化剤に接触させて、化合物１７：
    を得る工程；
    ｄ） 化合物１７の３−ヒドロキシル基を選択的に保護して、化合物１３：
    ［式中、Ｐｇはヒドロキシル保護基である］
    を得る工程；
    ｅ） 式１３の化合物を、脱水条件下で接触させて、化合物１２；
    を得る工程；および
    ｆ） 化合物１２を、オレフィン形成条件下で変換して、化合物１８：
    を形成する工程
    を含む、方法。
  22. デオキシコール酸またはその塩を調製する方法であって：
    ａ） ヒドロコルチゾン：
    を、水素化条件下で、少なくとも１モル当量の水素に接触させて、４，５β−ジヒドロ−ヒドロコルチゾン−化合物１５：
    を得る工程；
    化合物１５を、カルボニル基がアルコール基に還元される条件下で、少なくとも２当量の還元剤に接触させて、化合物１６：
    を得る工程；
    ｃ） 化合物１６を、酸化条件下で、ビシナルアルコール酸化剤に接触させて、化合物１７：
    を得る工程；
    ｄ） 化合物１７の３−ヒドロキシル基を選択的に保護して、化合物１３：
    ［式中、Ｐｇはヒドロキシル保護基である］
    を得る工程；
    ｅ） 化合物１３を、脱水条件下で接触させて、化合物１２；
    を得る工程；
    ｆ） 化合物１２を、オレフィン形成条件下で変換して、化合物１８：
    を形成する工程；
    ｇ） 化合物１８を、ルイス酸の存在下に、アルキルプロピオレートＣＨ≡ＣＣ（Ｏ）ＯＲまたはアルキルアクリレートＣＨ２＝ＣＨＣ（Ｏ）ＯＲ［ここでＲはアルキルである］と反応させて、化合物１９：
    ［式中、破線
    は単結合または二重結合である］
    を形成する工程；
    ｈ） 式１９の化合物を、水素化条件下で、Ｈ２と反応させて、化合物２０：
    を形成する工程；
    ｉ） 化合物２０を酸化剤と反応させて、化合物２１：
    を形成する工程；
    ｊ） 化合物２１を、水素化条件下で、Ｈ２と反応させて、化合物２２：
    を形成する工程；
    ｋ） 化合物２２を還元剤と反応させて、化合物２３：
    を形成する工程；ならびに
    ｌ） 化合物２３を、脱保護および加水分解条件に暴露して、デオキシコール酸またはその塩を形成する工程
    を含む、方法。
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