JP2012165726A - セリシンペプチドの製造方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】ミネラルを添加した原料セリシンを一次醗酵させたのち二次醗酵させ、さらにこの二次醗酵セリシンを熟成して濾過抽出することを基本とするものであり、具体的には、予め殺菌した原料セリシンにミネラルと浄化水を加えて混合し、つぎにこの原料混合物にアスペルギルス属の麹菌10重量%〜30重量%と糖質を複数回加えるとともに所定温度に保持して一次醗酵させ、この一次発酵セリシンにストレプトコックス属またはラクトバチルス属の乳酸菌、酢酸菌を単独でまたはこれらの混合物10重量%〜20重量%と糖質を複数回を加えて所定温度に保持することにより二次醗酵させ、さらに二次発酵セリシンを35℃〜40℃で熟成したのちこれを濾過抽出する。これにより化粧品、医療品などへの応用が容易となる。
【選択図】図1
Description
ところで、絹繊維における絹らしい優れた光沢や風合いはフィブロインによって発揮されることから、絹糸(絹繊維)や絹織物にする過程においてセリシンはアルカリ、酸、界面活性剤、タンパク質分解酵素、イオン水、熱水などにより抽出廃棄(精錬)され、フィブロインのみが絹織編物の最終製品の成分繊維となっている。
しかしながら、廃棄されるセリシンには30%以上のセリンが含まれているほか、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、アラニン、チロシンといったアミノ酸も豊富に含まれるセリシンポリペプチドとして形成されており、古くから製糸や絹織物工場の従業者たちは冬の水仕事でも手肌がきれいであったなどの理由から、抽出廃棄されたセリシン自体も機能性素材として見直され、近年では生体機能に関連する医薬応用分野や化粧品、食品といった新分野への活用が広く研究されている。
つまり、このような高分子量セリシンは、セリシンが完全には溶解せず白濁して粘度も高いことから取扱いが極めて面倒で外観も悪く、経時的にコロイド状のゲルを形成したり、凝集沈殿してしまう性状があった。
図1において、本発明に係るセリシンペプチドの製造方法で使用する原料セリシン10としては、例えば、絹糸(絹繊維)や絹織物にする工程において公知の手段(アルカリ、酸、界面活性剤、タンパク質分解酵素、イオン水、熱水など)により抽出した高分子量のセリシン(セリシンポリペプチド)、あるいは、従来より提案されている絹タンパク質水溶液のようにある程度は低分子量化されたセリシンを使用することができる
また、“切り繭”は、繭を切り開いて蚕種にする蛹を取り出したあとの繭のことであり、この切り繭は、繭糸が切れていて生糸の原料にできないために安価であり、かつ、他の副蚕糸に見られる汚れや夾雑物の混入が比較的少ないため、原料として極めて好適に使用することができ、さらには、前記副蚕糸を単独でまたはこれらの混合物なども好適に使用することができる。
この場合、原料セリシン10と浄化水16との混合比は、原料セリシン1〜2に対して浄化水8〜9程度にするのが好ましく、またミネラル14の添加量は原料セリシン10と浄化水16の総量に対して10重量%〜20重量%の範囲に設定するのが好適である。
なお、この一次醗酵の際には麹菌の調子によっては良好な醗酵を得られないこともあるので保持温度や醗酵状態を常時観察しながら、必要に応じて麹菌20と糖質22を適宜加えて調整することにより確実に醗酵させる。
なお、前記原料セリシン混合物18に加える麹菌20の量が10重量%未満であると充分な醗酵が難しくなり、また30重量%を超えると量が多すぎて経済性が低下することになるのでこの点に充分留意しながら醗酵を行うのが好ましい。
また、この二次醗酵の際もストレプトコックス属またはラクトバチルス属の乳酸菌、アセトバクター属の酢酸菌あるいはこれらの混合物26による醗酵状態や保持温度を観察しながら、糖質22および乳酸菌、酢酸菌またはこれらの混合物22の投入量を調整することにより確実に二次醗酵させるのが肝要である。
この二次醗酵セリシン混合物28の熟成に際しては、好ましくは、遠赤外線照射下、静電磁場および/またはエレクトロン(−e)の供給雰囲気下において撹拌しながらゆっくりと流動させることにより、二次醗酵セリシン混合物28の液化を促進するとともに乳酸菌、酢酸菌あるいはこれらの混合物26の醗酵により生じる乳酸、酢酸などの有機酸液中にセリシンを解離(イオン化)させる。
なお、これらの醗酵・熟成作用によって、セリシン混合物はセリシンを構成する特異的アミノ酸残基間のペプチド結合が適宜切断され、この際、これらの末端にはカルシウムなどの二価のミネラルが適宜結合し、その結果、室温でもゲル状を呈さない低分子量化された(セリシンが分散した)発酵熟成セリシンペプチド水溶液として好適に保持されることになる。
使用装置;AXIMA−Performance (株式会社島津製作所製)
レーザーイオン化飛行時間型質量分析装置(MALDI−TOFMS)
引き出し電圧;20kv
飛行モード ;Linear
検出イオン ;正イオン
マトリックス;Sinapinic acid(SA)
10mg/ml in0.1%TFA,50%MeCNsolution
サンプル前処理;セリシンペプチド32を遠心分離して上澄液9μlを分取し、1%T FAを加え、0.1%TFA溶液を調製した。このサンプル溶液をZ ipTipC18により精製を行い(操作はZipTip添付のプロ トコルに従った)、精製サンプルを直接MALDIプレートにアプラ イし、風乾後にマトリックス溶液を重層し、さらに風乾後、質量分析 装置にプレートを搭載し質量分析を行った。
このように分子量が凡そ2800の低分子量化されたセリシンペプチドを得られるのは、麹菌、乳酸菌、酢酸菌などによる熟成を含む発酵作用によってセリシンを構成する特異的アミノ酸残基間のペプチド結合が適宜切断され、その際、これらの末端に、例えば、カルシウムなど二価のミネラルが適宜結合してこの状態がバランスよく保持されるからである。
また、髪等のケラチン組織にゲル状セリシンや低分子ケラチンを使用しても組織には入らなかったり、沈殿を起してしまう従来のものに対し、本発明方法で得られたセリシンペプチド32はケラチン組織にカルシウムなどの二価のイオンで低分子量化されたセリシンを架橋させるので、シャンプーリンスしても溶脱することがなく髪質の向上を図ることができ、カラーリング、パーマなどによる損毛の修復なども好適に行うことができるなど少量で所望の効果を充分得ることができた。
12・・容器、
14・・ミネラル、
16・・浄化水、
18・・セリシン原料混合物(分散液)、
20・・アスペルギルス属の麹菌または麹菌の混合物
22・・砂糖などの糖質、
24・・一次醗酵セリシン混合物、
26・・乳酸菌、酢酸菌またはこれらの混合物、
28・・二次醗酵セリシン混合物、
30・・醗酵熟成セリシンペプチド水溶液、
32・・セリシンペプチド、
Claims (7)
- ミネラルを添加した原料セリシンを一次醗酵させたのちこれを二次醗酵させ、さらにこの二次醗酵セリシンを熟成して濾過抽出することを特徴とするセリシンペプチドの製造方法。
- 原料セリシンにミネラルと浄化水を加えて混合し、この原料セリシン混合物にアスペルギルス属の麹菌10重量%〜30重量%と糖質を加えるとともに所定温度に保持して一次醗酵させ、次にこの一次発酵セリシンにストレプトコックス属またはラクトバチルス属の乳酸菌、酢酸菌を単独でまたはこれらの混合物10重量%〜20重量%と糖質を加えて所定温度に保持することにより二次醗酵させ、さらに二次発酵セリシンを35℃〜40℃で所定期間熟成したのちこれを濾過抽出することを特徴とする請求項1に記載のセリシンペプチドの製造方法。
- ミネラルとして、あらかじめイオン化(解離)したミネラルを使用することからなる請求項1または2に記載のセリシンペプチドの製造方法。
- あらかじめイオン化(解離)したミネラルは、澱粉および/もしくは穀類と種子と卵殻とを所定の割合で混合した原料を粉砕し、次いで浄化水と麹菌を加えて醗酵熟成することにより原料中に含まれているカルシウム、マグネシウム、ナトリウム、カリウム、鉄、銅、亜鉛、マンガンなどのミネラルを解離させ、さらに濾過することにより得られた醗酵熟成液である請求項3に記載のセリシンペプチドの製造方法。
- アスペルギルス属の麹菌として、アスペルギルス・オリゼー、アスペルギルスソーエ、アスペルギルス・ニガー、アスペルギルス・アワモリ、アスペルギルス・レベンスを単独でまたはこれらの混合物を使用することからなる請求項1〜4いずれかに記載のセリシンペプチドの製造方法。
- 二次醗酵セリシンの熟成は、遠赤外線照射および/またはエレクトロン供給雰囲気において流動させながら行うことからなる請求項1〜5のいずれかに記載のセリシンペプチドの製造方法。
- 請求項1〜6のいずれかに記載の方法により得られたセリシンペプチド。
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