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6.2. 結果
表6は、研究した3つの抗体に認識されるエピトープを示す。
表6
Figure 2011527429
かっこ内の数字はPDIアミノ酸配列上のエピトープの位置に対応する。番号付けは始めのメチオニンから始まる。
3つの抗−PDIモノクローナル抗体は、タンパク質の3つのエピトープを認識する。それは表6で1から3の番号をつけられた。抗体12H3B6のエピトープはSpotscan技術を使用して決定さできず、それはそれが線形でないことを示す。ペプチド・ライブラリー・スクリーニングにより、抗体と反応する4つの配列、DRAFFESMLW、DRALAESGLW、DVAWHESRKW及びPRAMAESLRWを選択することをができた。これらの4つの配列のアラインメントとPDIの配列の調査により、抗体の結合性にとって不可欠な下線を施されたアミノ酸の領域AAESL(142−149)を同定することができた。最後のトリプトファン(W)は調べた各モティーフに存在しており、そのエピトープに抗体が結合するためには、そこに芳香族アミノ酸(F、W、Y)が必要であることを示す。タンパク質の三次元構造において近い任意の芳香族アミノ酸は、この役割を演ずることができる。利用可能な3Dモデルによれば、関与するアミノ酸は、位置209のフェニルアラニン、位置206のフェニルアラニンまたは位置196のチロシンであってもよい

Claims (9)

  1. 結腸直腸癌のインビトロ分析方法であって、該方法は、
    配列番号1に記載の配列を有するエピトープ、
    プロテイン・ジスルフィド・イソメラーゼ(PDI)A1のアミノ酸配列中の位置206のフェニルアラニン(F)、位置209のフェニルアラニン(F)、及び位置196のチロシン(Y)から選択される1つの芳香族アミノ酸を伴う配列番号2に記載の配列を有するエピトープ、及び
    配列番号3に記載の配列を有するエピトープ
    から選択されるPDI A1エピトープに対する少なくとも一つの抗PDI A1モノクローナル抗体を使用して、結腸直腸癌を有することが疑われる患者から得られた生物学的試料において、PDI A1の発現のレベルを分析する工程を含み、
    正常対照レベルと比較して、PDI A1の増大した発現レベルは、前記患者が結腸直腸癌を有することを示す、方法。
  2. 生物学的試料が腫瘍から離れた試料であることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
  3. i)配列番号3に記載の配列を有するエピトープに対する少なくとも一つの抗-PDI A1モノクローナル抗体と、
    ii)配列番号1に記載の配列を有するエピトープ、及びPDI A1のアミノ酸配列中の位置206のフェニルアラニン(F)、位置209のフェニルアラニン(F)、及び位置196のチロシン(Y)から選択される1つの芳香族アミノ酸を伴う配列番号2に記載の配列を有するエピトープから選択されるPDI A1エピトープに対する少なくとも一つの別のモノクローナル抗体
    とを使用することを特徴とする、請求項1又は2に記載の方法。
  4. 配列番号1に記載の配列を有するエピトープに対する少なくとも一つの抗-PDI A1モノクローナル抗体及び配列番号3に記載の配列を有するエピトープに対する少なくとも一つの別の抗体を使用することを特徴とする、請求項3に記載の方法。
  5. 白血球エラスターゼインヒビター、エズリン、アミノアシラーゼ1、肝臓脂肪酸結合タンパク質、腸脂肪酸結合タンパク質、アポリポタンパク質AI、アポリポタンパク質AIIおよびI-プラスチンマーカーから選択される少なくとも一つの他の腫瘍マーカーの存在の決定を更に含むことを特徴とする請求項1から4の何れか一項に記載の方法。
  6. β2-ミクログロブリン、プロテアソーム20S、ガレクチン-3、L-乳酸脱水素酵素B鎖、カルレティキュリン、再生膵島由来タンパク質3α、腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー1、II型ケラチンCytoskeletal8、I型ケラチンCytoskeletal18、I型ケラチンCytoskeletal19、上皮カドヘリン、CEA、ビリン、CA19-9、CA242、CA50、CA72-2、テストステロン、TIMP-1、Cripto-1、インテレクチン-1、サイトケラチン20、Fortilin、(プロ)デフェンシン-A5、血液中のAXL4遺伝子のメチル化DNAまたはセプチン-9遺伝子のメチル化DNAの検出、K−rasとAPCとp53遺伝子に位置する21の突然変異の検出、及びヒト糞便のヘモグロビンの検出からなる群から選択される少なくとも一の分析を更に含むことを特徴とする、請求項1から5の何れか一項に記載の方法。
  7. 結腸直腸癌に関する早期診断、スクリーニング、フォローアップ治療、予後診断及び再発診断のために使用される、請求項1から6の何れか一項に記載の方法。
  8. 結腸直腸癌の診断用キットであって、
    配列番号1に記載の配列を有するエピトープ、
    プロテイン・ジスルフィド・イソメラーゼ(PDI) A1のアミノ酸配列中の位置206のフェニルアラニン(F)、位置209のフェニルアラニン(F)、及び位置196のチロシン(Y)から選択される1つの芳香族アミノ酸を伴う配列番号2に記載の配列を有するエピトープ、及び
    配列番号3に記載の配列を有するエピトープ
    から選択されるPDI A1エピトープに対する少なくとも一つの抗PDI A1モノクローナル抗体を含む、キット。
  9. 結腸直腸癌用の腫瘍マーカーであるプロテイン・ジスルフィド・イソメラーゼ(PDI) A1を検出するための検出試薬であって、
    配列番号1に記載の配列を有するエピトープ、
    PDI A1のアミノ酸配列中の位置206のフェニルアラニン(F)、位置209のフェニルアラニン(F)、及び位置196のチロシン(Y)から選択される1つの芳香族アミノ酸を伴う配列番号2に記載の配列を有するエピトープ、及び
    配列番号3に記載の配列を有するエピトープ
    から選択されるPDI A1エピトープに対する少なくとも一つの抗PDI A1モノクローナル抗体を含む、検出試薬。
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