JP2011513427A - c−met及びEGFRアンタゴニストの併用療法 - Google Patents
c−met及びEGFRアンタゴニストの併用療法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2011513427A JP2011513427A JP2010549904A JP2010549904A JP2011513427A JP 2011513427 A JP2011513427 A JP 2011513427A JP 2010549904 A JP2010549904 A JP 2010549904A JP 2010549904 A JP2010549904 A JP 2010549904A JP 2011513427 A JP2011513427 A JP 2011513427A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amine
- ethynylphenyl
- quinazolin
- met
- ethoxy
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
- A61K31/517—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. quinazoline, perimidine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
- A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
- A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1135—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against oncogenes or tumor suppressor genes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
- C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
- C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/12—Type of nucleic acid catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes
- C12N2310/122—Hairpin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/30—Special therapeutic applications
- C12N2320/31—Combination therapy
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
この出願は、米国特許法119(e)に基づき、2008年3月6日に出願の米国仮出願第61/034446号及び2008年4月11日に出願の同第61/044438号の優先権を主張し、出典明記によりここにその内容全体を援用するものである。
本発明は、一般に、分子生物学及び増殖因子調節の分野に関する。具体的には、本発明は、癌などの病態の治療を目的とした併用療法に関する。
癌の治療が大きく進歩したとはいえ、治療法の向上が依然として求められている。
このとき
mは、1、2又は3であり;
各R1は、水素、ハロ、ヒドロキシ、ヒドロキシアミノ、カルボキシ、ニトロ、グアニジノ、ウレイド、シアノ、トリフロロメチル、及びWが単結合、O、S又はNHである−(C1−C4アルキレン)-W-(フェニル)からなる群からそれぞれ選択され;又は、
各R1は、R9及びシアノに置換したC1−C4アルキルからそれぞれ選択され、このR9は、R5、-OR6、-NR6R6、-C(O)R7、-NHOR5、-OC(O)R6、シアノ、A及び-YR5からなる群から選択され;R5はC1−C4アルキルであり;R6はそれぞれ水素又はR5であり;R7はR5、-OR6又は-NR6R6であり;Aはピペリジノ、モルホリノ、ピロリジノ、4−R6−ピペラジン−1−イル、イミダゾール-1-イル、4-ピリドン−1−イル、−(C1−C4アルキレン)(CO2H)、フェノキシ、フェニル、フェニルスルファニル、C2−C4アルケニル、及び-(C1−C4アルキレン)C(O)NR6R6から選択され;そして、YはS、SO又はSO2であり;このとき、R5、-OR6及び、-NR6R6のアルキル部分は場合によって1〜3のハロ置換基に置換され、R5、-OR6、及び-NR6R6のアルキル部分は場合によって1又は2のR9基によって置換され、そして該任意の置換基のアルキル部分は場合によってハロ又はR9によって置換されていてよく、ただし2つの異種原子が同じ炭素原子に結合していない;
各R1はそれぞれ、-NHSO2R5、フタルイミド-(C1-C4)-アルキルスルホニルアミノ、ベンズアミド、ベンゼンスルホニルアミノ、3-フェニルウレイド、2-オキソピロリジン-1-イル、2,5-ジオキソピロリジン-1-イル、及びR10-(C2-C4)-アルカノイルアミノから選択され、R10は、ハロ、-OR6、C2-C4アルカノイルオキシ、-C(O)R7、及び-NR6R6から選択され;前記-NHSO2R5、フタルイミド-(C1-C4-アルキルスルホニルアミノ、ベンズアミド、ベンゼンスルホニルアミノ、3-フェニルウレイド、2-オキソピロリジン-1-イル、2,5-ジオキソピロリジン-1-イル、及びR10-(C2-C4)-アルカノイルアミノのR1基は、ハロ、C1-C4アルキル、シアノ、メタンスルホニル及びC1-C4アルコキシからそれぞれ選択される1又は2の置換基で置換されていてもよく;又は
2のR1基は、それらが結合している炭素と共同して、O、S及びNから選択される1又は2のヘテロ原子を含む、5-8員環を形成し;
R2は、水素、又はハロ、C1-C4アルコキシ、-NR6R6、及び-SO2R5からそれぞれ選択される1から3の置換基で置換されていてもよいC1-C6アルキルであり;
nは1又は2であり、各R3はそれぞれ、水素、ハロ、ヒドロキシ、C1-C6アルキル、-NR6R6、及びC1-C4アルコキシから選択され、該R3基中のアルキル部分は、ハロ、C1-C4アルコキシ、-NR6R6、及び-SO2Rからそれぞれ選択される1から3の置換基で置換されていてもよく;
R4はアジド又は-(エチニル)-R11であり、このR11は、水素、又はヒドロキシ、-OR6又は-NR6R6で置換されていてもよいC1-C6アルキルである。
(6,7-ジメトキシキナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6,7-ジメトキシキナゾリン-4-イル)-[3-(3'-ヒドロキシプロピン-1-イル)フェニル]-アミン;[3-(2'-(アミノメチル)-エチニル)フェニル]-(6,7-ジメトキシキナゾリン-4-イル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-(6-ニトロキナゾリン-4-イル)-アミン;(6,7-ジメトキシキナゾリン-4-イル)-(4-エチニルフェニル)-アミン;(6,7-ジメトキシキナゾリン-4-イル)-(3-エチニル-2-メチルフェニル)-アミン;(6-アミノキナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-(6-メタンスルホニルアミノキナゾリン-4-イル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-(6,7-メチレンジオキシキナゾリン-4-イル)-アミン;(6,7-ジメトキシキナゾリン-4-イル)-(3-エチニル-6-メチルフェニル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-(7-ニトロキナゾリン-4-イル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-[6-(4'-トルエンスルホニルアミノ)キナゾリン-4-イル]-アミン;(3-エチニルフェニル)-{6-[2'-フタルイミド-eth-1'-yl- スルホニルアミノ]キナゾリン-4-イル}-アミン;(3-エチニルフェニル)-(6-グアニジノキナゾリン-4-イル)-アミン;(7-アミノキナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-(7-メトキシキナゾリン-4-イル)-アミン;(6-カルボメトキシキナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(7-カルボメトキシキナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;[6,7-ビス(2-メトキシエトキシ)キナゾリン-4-イル]-(3-エチニルフェニル)-アミン;(3-アジドフェニル)-(6,7-ジメトキシキナゾリン-4-イル)-アミン;(3-アジド-5-クロロフェニル)-(6,7-ジメトキシキナゾリン-4-イル)-アミン;(4-アジドフェニル)-(6,7-ジメトキシキナゾリン-4-イル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-(6-メタンスルホニル-キナゾリン-4-イル)-アミン;(6-エタンスルファニル-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6,7-ジメトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニル-4-フルオロ-フェニル)-アミン;(6,7-ジメトキシ-キナゾリン-4-イル)-[3-(プロピン-1'-イル)-フェニル]-アミン;[6,7-ビス-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-(5-エチニル-2-メチル- フェニル)-アミン;[6,7-ビス-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-(3-エチニル-4-フルオロ- フェニル)-アミン;[6,7-ビス-(2-クロロ-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-(3-エチニル-フェニル)-アミン;[6-(2-クロロ-エトキシ)-7-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-(3- エチニル-フェニル)-アミン;[6,7-ビス-(2-アセトキシ-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-(3-エチニル-フェニル)-アミン;2-[4-(3-エチニル-フェニルアミノ)-7-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-キナゾリン-6-イルオキシ]-エタノール;[6-(2-アセトキシ-エトキシ)-7-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-(3- エチニル-フェニル)-アミン;[7-(2-クロロ-エトキシ)-6-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-(3- エチニル-フェニル)-アミン;[7-(2-アセトキシ-エトキシ)-6-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-(3- エチニル-フェニル)-アミン;2-[4-(3-エチニル-フェニルアミノ)-6-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-キナゾリン-7-イルオキシ]-エタノール;2-[4-(3-エチニル-フェニルアミノ)-7-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-6-イルオキシ]-エタノール;2-[4-(3-エチニル-フェニルアミノ)-6-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-7-イルオキシ]-エタノール;[6-(2-アセトキシ-エトキシ)-7-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-(3- エチニル-フェニル)-アミン;(3-エチニル-フェニル)-{6-(2-メトキシ-エトキシ)-7-[2-(4-メチル-ピペラジン- 1-イル)-エトキシ]-キナゾリン-4-イル}-アミン;(3-エチニル-フェニル)-[7-(2-メトキシ-エトキシ)-6-(2-モルホリン-4-イル)-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-アミン;(6,7-ジエトキシキナゾリン-1-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6,7-ジブトキシキナゾリン-1-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6,7-ジイソプロポキシキナゾリン-1-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6,7-ジエトキシキナゾリン-1-イル)-(3-エチニル-2-メチル-フェニル)-アミン;[6,7-ビス-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-1-イル]-(3-エチニル-2-メチル- フェニル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-[6-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-7-(2-メトキシ-エトキシ)- キナゾリン-1-イル]-アミン;[6,7-ビス-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-キナゾリン-1-イル]-(3-エチニルフェニル)-アミン;2-[4-(3-エチニル-フェニルアミノ)-6-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-7-イルオキシ]-エタノール; (6,7-ジプロポキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニル-フェニル)-アミン;(6,7-ジエトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニル-5-フルオロ-フェニル)-アミン;(6,7-ジエトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニル-4-フルオロ-フェニル)-アミン;(6,7-ジエトキシ-キナゾリン-4-イル)-(5-エチニル-2-メチル-フェニル)-アミン;(6,7-ジエトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニル-4-メチル-フェニル)-アミン;(6-アミノメチル-7-メトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニル-フェニル)-アミン;(6-アミノメチル-7-メトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6-アミノカルボニルメチル-7-メトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3- エチニルフェニル)-アミン;(6-アミノカルボニルエチル-7-メトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3- エチニルフェニル)-アミン;(6-アミノカルボニルメチル-7-エトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3- エチニルフェニル)-アミン;(6-アミノカルボニルエチル-7-エトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3- エチニルフェニル)-アミン;(6-アミノカルボニルメチル-7-イソプロポキシ-キナゾリン-4-イル)-(3- エチニルフェニル)-アミン;(6-アミノカルボニルメチル-7-プロポキシ-キナゾリン-4-イル)-(3- エチニルフェニル)-アミン;(6-アミノカルボニルメチル-7-メトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3- エチニルフェニル)-アミン;(6-アミノカルボニルエチル-7-イソプロポキシ-キナゾリン-4-イル)-(3- エチニルフェニル)-アミン;及び、(6-アミノカルボニルエチル-7-プロポキシ-キナゾリン-4-イル)-(3- エチニルフェニル)-アミン;(6,7-ジエトキシキナゾリン-1-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-[6-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-7-(2-メトキシ-エトキシ)- キナゾリン-1-イル]-アミン;[6,7-ビス-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-キナゾリン-1-イル]-(3-エチニルフェニル)-アミン;[6,7-ビス-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-1-イル]-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6,7-ジメトキシキナゾリン-1-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-(6-メタンスルホニルアミノ-キナゾリン-1-イル)-アミン;及び、(6-アミノ-キナゾリン-1-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン。
一実施態様では、抗c-met抗体とエルロチニブが、非小細胞肺癌などの癌の併用治療に用いられる。
特定の実施態様では、癌はチロシンキナーゼ阻害剤耐性癌ではない。特定の実施態様では、癌は小分子EGFRチロシンキナーゼ阻害剤耐性癌ではない。
ある実施態様では、癌は、c-metおよび/またはEGFRの発現、増幅又は活性化を示す。ある実施態様では、癌は、c-metおよび/またはEGFRの発現、増幅又は活性化を示さない。ある実施態様では、癌はc-met増幅を示す。ある実施態様では、癌はc-met増幅およびEGFR増幅を示す。
特定の実施態様では、癌は野生型EGFR遺伝子を示す。特定の実施態様では、癌は、野生型EGFR遺伝子とc−met増殖及び/又はc−met変異を示す。
特定の実施態様では、癌は恒常的なc−met及び/又はEGFRの活性化を示す。幾つかの実施態様では、恒常的EGFRは、チロシンキナーゼドメインに変異を含む。特定の実施態様では、癌は、恒常的なc−met及び/又はEGFRの活性化を示さない。
特定の実施態様では、癌は、リガンド依存性のc−met及び/又はEGFRの活性化を示す。特定の実施態様では、癌は、リガンド依存性のc−met及び/又はEGFRの活性化を示さない。
I.定義
本明細書中で用いる「肝細胞増殖因子」又は「HGF」なる用語は、特に別途示されない限り、HGF/c-metシグナル伝達過程を起こす条件下においてこの経路を活性化しうる任意の(天然に生じるもの又は合成のもののいずれにせよ)天然の又は変異形のHGFポリペプチドを指す。「野生型HGF」なる用語は、一般に、天然に生じるHGFタンパク質のアミノ酸配列を含有してなるポリペプチドを指す。「野生型HGF配列」なる用語は、一般に、天然に生じるHGFにおいてみられるアミノ酸配列を指す。c-metは、そのレセプターによってHGF細胞内シグナル伝達が生物学的に達成されるHGFの公知のレセプターである。
「c−met及び/又はEGFRの発現、増幅、又は活性化を示さない」癌又は生体試料は、診断試験において、c−met及び/又はEGFRを発現(過剰発現を含む)しない、c−met及び/又はEGFR遺伝子を増幅していない、及び/又はc−met及び/又はEGFRの活性化又はリン酸化を示さないものである。
「c−met及び/又はEGFR活性化を示す」癌又は生体試料は、診断試験において、c−met及び/又はEGFRの活性化又はリン酸化を示すものである。このような活性化は、直接的に(例えば、ELISAによりc−met及び/又はEGFRのリン酸化を測定することにより)、或いは間接的に、確認することができる。
「c−met及び/又はHGFR活性化を示さない」癌又は生体試料は、診断試験において、c−met及び/又はHGFRの活性化又はリン酸化を示さないものである。このような活性化は、直接的に(例えば、ELISAによりc−met及び/又はHGFRのリン酸化を測定することにより)、或いは間接的に、確認することができる。
「c-metおよび/またはEGFRの増幅を示さない」癌又は生物学的試料は、診断検査において、c-metおよび/またはEGFRの遺伝子を増幅しないものである。
「c-metおよび/またはEGFRの増幅を示す」癌又は生物学的試料は、診断検査において、c-metおよび/またはEGFRの遺伝子を増幅するものである。
「恒常的c-metおよび/またはEGFRの活性化を示さない」癌又は生物学的試料は、診断検査において、c-metおよび/またはEGFRの恒常的活性化又はリン酸化を示さないものである。このような活性化は直接的に(例えば、c-metおよび/またはEGFRのリン酸化をELISAで測定することによって)又は間接的に測定されうる。
「リガンド非依存性のc-metおよび/またはEGFRの活性化を示さない」癌又は生物学的試料は、診断検査において、c-metおよび/またはEGFRのリガンド非依存性の活性化又はリン酸化を示すものである。このような活性化は直接的に(例えば、c-metおよび/またはEGFRのリン酸化をELISAで測定することによって)又は間接的に測定されうる。
タンパク質の「発現」とは、遺伝子にコードされた情報のメッセンジャーRNA(mRNA)への転換と、それに続くタンパク質への転換とを指す。
本明細書では、対象のタンパク質(例えばHERレセプター又はHERリガンド)を「発現する」試料又は細胞は、そのようなタンパク質をコードするmRNA、又はその断片を含むタンパク質が、試料又は細胞中に存在することが確認されているものである。
「腫瘍数」とは腫瘍の数を意味する。
本発明は、併用療法においてc−metアンタゴニストとEGFRアンタゴニストとを使用することにより、腫瘍などの対象の病態を治療することを特徴とする。
本発明の方法に有用なc−metアンタゴニストは、c−metに特異的に結合するポリペプチド、抗c−met抗体、c−met小分子、c−metに特異的に結合するレセプター分子及び誘導体、並びに融合タンパク質を含む。c−metアンタゴニストは、c−metポリペプチドの拮抗性変異体、RNAアプタマー、並びにc−met及びHGFに対するペプチボディも含む。本発明の方法に有用なc−metアンタゴニストとして、更に、抗HGF抗体、抗HGFポリペプチド、c−metレセプター分子、及びHGFに特異的に結合する誘導体が含まれる。これらの各々の例について後述する。
EGFRアンタゴニストには、ニモツズマブ(YM Biosciences)として知られるヒト化モノクローナル抗体、完全長ヒトABX-EGF(パニツムマブ、Abgenix Inc.)、並びにE1.1、E2.4、E2.5、E6.2、E6.4、E2.11、E6. 3およびE7.6. 3として知られ、米国特許第6235883号に記載される完全長ヒト抗体;MDX-447 (Medarex Inc)といった抗体が含まれる。パーツズマブ(2C4)は、HER2に直接結合するが、HER2−EGFR二量体化に干渉し、これによってEGFRシグナル伝達を阻害するヒト化抗体である。EGFRに結合する抗体の他の例には、MAb579(ATCC CRL HB8506)、MAb455(ATCC CRL HB8507)、MAb225(ATCC CRL 8508)、MAb528(ATCC CRL 8509)(米国特許第4943533号、Mendelsohn et al.を参照)およびこれらの変異体、例えばキメラ化225(C225又はセツキシマブ;ERBUTIX(登録商標))及び再成形ヒト225(H225)(国際公開96/40210、Imclone Systems Inc.を参照);IMC-11F8、完全長ヒト、EGFR標的抗体(Imclone);II型変異体EGFRを結合する抗体(米国特許第5212290号);米国特許第5891996号に記載される、EGFRを結合するヒト化及びキメラ抗体;及び、ABX-EGF(国際公開98/50433、Abgenixを参照)などのEGFRを結合するヒト抗体;EMD55900 (Stragliotto et al. Eur. J. Cancer 32A: 636-640 (1996));EGFR結合についてEGFおよびTGF-αと競合する、EGFRに対するEMD7200(マツズマブ)ヒト化EGFR抗体;及び、mAb806又はヒト化mAb806 (Johns et al., J. Biol. Chem. 279(29): 30375-30384 (2004))が含まれる。抗EGFR抗体は、細胞障害性剤とコンジュゲートして、イムノコンジュゲートを生成しうる(例として欧州特許第659439号A2、Merck Patent GmbHを参照)。
このとき
mは、1、2又は3であり;
各R1は、水素、ハロ、ヒドロキシ、ヒドロキシアミノ、カルボキシ、ニトロ、グアニジノ、ウレイド、シアノ、トリフロロメチル、及びWが単結合、O、S又はNHである−(C1−C4アルキレン)-W-(フェニル)からなる群からそれぞれ選択され;又は、
各R1は、R9及びシアノに置換したC1−C4アルキルからそれぞれ選択され、このR9は、R5、-OR6、-NR6R6、-C(O)R7、-NHOR5、-OC(O)R6、シアノ、A及び-YR5からなる群から選択され;R5はC1−C4アルキルであり;R6はそれぞれ水素又はR5であり;R7はR5、-OR6又は-NR6R6であり;Aはピペリジノ、モルホリノ、ピロリジノ、4−R6−ピペラジン−1−イル、イミダゾール-1-イル、4-ピリドン−1−イル、−(C1−C4アルキレン)(CO2H)、フェノキシ、フェニル、フェニルスルファニル、C2−C4アルケニル、及び-(C1−C4アルキレン)C(O)NR6R6から選択され;そして、YはS、SO又はSO2であり;このとき、R5、-OR6及び、-NR6R6のアルキル部分は場合によって1〜3のハロ置換基に置換され、R5、-OR6、及び-NR6R6のアルキル部分は場合によって1又は2のR9基によって置換され、そして該任意の置換基のアルキル部分は場合によってハロ又はR9によって置換されていてよく、ただし2つの異種原子が同じ炭素原子に結合していない;
各R1はそれぞれ、-NHSO2R5、フタルイミド-(C1-C4)-アルキルスルホニルアミノ、ベンズアミド、ベンゼンスルホニルアミノ、3-フェニルウレイド、2-オキソピロリジン-1-イル、2,5-ジオキソピロリジン-1-イル、及びR10-(C2-C4)-アルカノイルアミノから選択され、R10は、ハロ、-OR6、C2-C4アルカノイルオキシ、-C(O)R7、及び-NR6R6から選択され;前記-NHSO2R5、フタルイミド-(C1-C4-アルキルスルホニルアミノ、ベンズアミド、ベンゼンスルホニルアミノ、3-フェニルウレイド、2-オキソピロリジン-1-イル、2,5-ジオキソピロリジン-1-イル、及びR10-(C2-C4)-アルカノイルアミノのR1基は、ハロ、C1-C4アルキル、シアノ、メタンスルホニル及びC1-C4アルコキシからそれぞれ選択される1又は2の置換基で置換されていてもよく;又は
2のR1基は、それらが結合している炭素と共同して、O、S及びNから選択される1又は2のヘテロ原子を含む、5-8員環を形成し;
R2は、水素、又はハロ、C1-C4アルコキシ、-NR6R6、及び-SO2R5からそれぞれ選択される1から3の置換基で置換されていてもよいC1-C6アルキルであり;
nは1又は2であり、各R3はそれぞれ、水素、ハロ、ヒドロキシ、C1-C6アルキル、-NR6R6、及びC1-C4アルコキシから選択され、該R3基中のアルキル部分は、ハロ、C1-C4アルコキシ、-NR6R6、及び-SO2Rからそれぞれ選択される1から3の置換基で置換されていてもよく;
R4はアジド又は-(エチニル)-R11であり、このR11は、水素、又はヒドロキシ、-OR6又は-NR6R6で置換されていてもよいC1-C6アルキルである。
(6,7-ジメトキシキナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6,7-ジメトキシキナゾリン-4-イル)-[3-(3'-ヒドロキシプロピン-1-イル)フェニル]-アミン;[3-(2'-(アミノメチル)-エチニル)フェニル]-(6,7-ジメトキシキナゾリン-4-イル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-(6-ニトロキナゾリン-4-イル)-アミン;(6,7-ジメトキシキナゾリン-4-イル)-(4-エチニルフェニル)-アミン;(6,7-ジメトキシキナゾリン-4-イル)-(3-エチニル-2-メチルフェニル)-アミン;(6-アミノキナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-(6-メタンスルホニルアミノキナゾリン-4-イル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-(6,7-メチレンジオキシキナゾリン-4-イル)-アミン;(6,7-ジメトキシキナゾリン-4-イル)-(3-エチニル-6-メチルフェニル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-(7-ニトロキナゾリン-4-イル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-[6-(4'-トルエンスルホニルアミノ)キナゾリン-4-イル]-アミン;(3-エチニルフェニル)-{6-[2'-フタルイミド-eth-1'-イル- スルホニルアミノ]キナゾリン-4-イル}-アミン;(3-エチニルフェニル)-(6-グアニジノキナゾリン-4-イル)-アミン; (7-アミノキナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-(7-メトキシキナゾリン-4-イル)-アミン;(6-カルボメトキシキナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(7-カルボメトキシキナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;[6,7-ビス(2-メトキシエトキシ)キナゾリン-4-イル]-(3-エチニルフェニル)-アミン; (3-アジドフェニル)-(6,7-ジメトキシキナゾリン-4-イル)-アミン;(3-アジド-5-クロロフェニル)-(6,7-ジメトキシキナゾリン-4-イル)-アミン;(4-アジドフェニル)-(6,7-ジメトキシキナゾリン-4-イル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-(6-メタンスルホニル-キナゾリン-4-イル)-アミン;(6-エタンスルファニル-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン; (6,7-ジメトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニル-4-フルオロ-フェニル)-アミン;(6,7-ジメトキシ-キナゾリン-4-イル)-[3-(プロピン-1'-イル)-フェニル]-アミン;[6,7-ビス-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-(5-エチニル-2-メチル-フェニル)-アミン;[6,7-ビス-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-(3-エチニル-4-フルオロ-フェニル)-アミン;[6,7-ビス-(2-クロロ-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-(3-エチニル-フェニル)-アミン;[6-(2-クロロ-エトキシ)-7-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-(3-エチニル-フェニル)-アミン;[6,7-ビス-(2-アセトキシ-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-(3-エチニル-フェニル)-アミン;2-[4-(3-エチニル-フェニルアミノ)-7-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-キナゾリン-6-イルオキシ]-エタノール;[6-(2-アセトキシ-エトキシ)-7-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-(3-エチニル-フェニル)-アミン; [7-(2-クロロ-エトキシ)-6-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-(3-エチニル-フェニル)-アミン;[7-(2-アセトキシ-エトキシ)-6-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-(3-エチニル-フェニル)-アミン;2-[4-(3-エチニル-フェニルアミノ)-6-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-キナゾリン-7-イルオキシ]-エタノール;2-[4-(3-エチニル-フェニルアミノ)-7-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-6-イルオキシ]-エタノール;2-[4-(3-エチニル-フェニルアミノ)-6-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-7-イルオキシ]-エタノール;[6-(2-アセトキシ-エトキシ)-7-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-(3-エチニル-フェニル)-アミン;(3-エチニル-フェニル)-{6-(2-メトキシ-エトキシ)-7-[2-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-エトキシ]-キナゾリン-4-イル}-アミン;(3-エチニル-フェニル)-[7-(2-メトキシ-エトキシ)-6-(2-モルホリン-4-イル)-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-アミン;(6,7-ジエトキシキナゾリン-1-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6,7-ジブトキシキナゾリン-1-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6,7-ジイソプロポキシキナゾリン-1-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6,7-ジエトキシキナゾリン-1-イル)-(3-エチニル-2-メチル-フェニル)-アミン;[6,7-ビス-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-1-イル]-(3-エチニル-2-メチル-フェニル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-[6-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-7-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-1-イル]-アミン; [6,7-ビス-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-キナゾリン-1-イル]-(3-エチニルフェニル)-アミン;2-[4-(3-エチニル-フェニルアミノ)-6-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-7-イルオキシ]-エタノール;(6,7-ジプロポキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニル-フェニル)-アミン;(6,7-ジエトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニル-5-フルオロ-フェニル)-アミン;(6,7-ジエトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニル-4-フルオロ-フェニル)-アミン;(6,7-ジエトキシ-キナゾリン-4-イル)-(5-エチニル-2-メチル-フェニル)-アミン;(6,7-ジエトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニル-4-メチル-フェニル)-アミン;(6-アミノメチル-7-メトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニル-フェニル)-アミン;(6-アミノメチル-7-メトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6-アミノカルボニルメチル-7-メトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6-アミノカルボニルエチル-7-メトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6-アミノカルボニルメチル-7-エトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6-アミノカルボニルエチル-7-エトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6-アミノカルボニルメチル-7-イソプロポキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6-アミノカルボニルメチル-7-プロポキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6-アミノカルボニルメチル-7-メトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6-アミノカルボニルエチル-7-イソプロポキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;及び(6-アミノカルボニルエチル-7-プロポキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6,7-ジエトキシキナゾリン-1-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-[6-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-7-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-1-イル]-アミン;[6,7-ビス-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-キナゾリン-1-イル]-(3-エチニルフェニル)-アミン;[6,7-ビス-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-1-イル]-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6,7-ジメトキシキナゾリン-1-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-(6-メタンスルホニルアミノ-キナゾリン-1-イル)-アミン;及び(6-アミノ-キナゾリン-1-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミンからなる群から選択される式Iの化合物である。
立体障害のアミン4(例えば、2-アルキル-3-エチニルアニリン)又は非常に反応性の4-ハロキナゾリンが使用される化合物に対しては、溶媒としてDMF又はN-メチルピロリジン-2-オン等の極性非プロトン性溶媒又はt-ブチルアルコールを使用することが好ましい。
還元は、このような転換に対して知られている多くの手順の何れかにより、簡便に実施することができる。還元は、例えば適切な金属触媒、例えばパラジウム、白金又はニッケルの存在下、反応不活性な溶媒中におけるニトロ化合物の水素化によって、実施されうる。さらなる適切な還元剤は、例えば活性化鉄(塩酸等の酸の希釈液で鉄粉を洗浄することにより生成)等の活性化金属である。よって、例えば還元は、水とアルコール、例えばメタノール又はエタノールとの混合物のような溶媒中において、例えば50℃〜150℃の範囲の温度、簡便には70℃又はその近傍で、濃塩酸を用い、ニトロ化合物と活性化金属の混合物を加熱することにより、実施されうる。他の適切なクラスの還元剤は、アルカリ金属の亜ジチオン酸塩、例えばジチオン酸ナトリウムであり、これは、(C1-C4)アルカン酸、(C1-C6)アルカノール、水又はそれらの混合物中で使用されうる。
いくつかのよく知られている窒素保護基を使用することができる。このような基には、(C1-C6)アルコキシカルボニル、置換されていてもよいベンジルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、トリチル、ビニルオキシカルボニル、O-ニトロフェニルスルホニル、ジフェニルホスフィニル、p-トルエンスルホニル、及びベンジルが含まれる。窒素保護基の添加は、第3級アミン塩基、例えばトリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン又はピリジン、好ましくはトリエチルアミンの存在又は不在下で、約0℃〜約50℃、好ましくはほぼ周囲温度で、塩化炭化水素溶媒、例えば塩化メチレン又は1,2-ジクロロエタン、又はエーテル溶媒、例えばグリム、ジグリム又はTHF中において実施することができる。あるいは、保護基は、ショッテン-バウマン(Schotten-Baumann)条件を使用して簡便に結合させる。
保護基及びそれらの使用についての記載は、T. W. Greene及びP. G. M. Wuts, 「Protective Groups in Organic Synthesis」, 第2版, John Wiley & Sons, New York, 1991を参照のこと。
開裂反応は、このような転換に対して知られている多くの手順の任意のものにより、簡便に実施することができる。150℃〜175℃での、溶融ピリジンヒドロクロリド(20-30当量)を用いての保護された式I誘導体の処理を、O-脱アルキル化に対して用いることができる。あるいは、開裂反応は、例えば、保護されたキナゾリン誘導体をアルカリ金属(C1-C4)アルキルスルフィド、例えばエタンチオラートナトリウムで処理するか、又はアルカリ金属ジアリールホスフィド、例えばジフェニルホスフィドリチウムで処理することにより、実施することができる。また開裂反応は、簡便には、三ハロゲン化ホウ素又はアルミニウム、例えば三臭化ホウ素を用いて、保護されたキナゾリン誘導体を処理することにより、実施することができる。このような反応は、好ましくは、反応不活性な溶媒の存在下で適切な温度で実施される。
[上式中;
mは1、2又は3であり;
各R1は独立して、6-ヒドロキシ、7-ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、カルバモイル、ウレイド、(1-4C)アルコキシカルボニル、N-(1-4C)アルキルカルバモイル、N,N-ジ-[(1-4C)アルキル]カルバモイル、ヒドロキシアミノ、(1-4C)アルコキシアミノ、(2-4C)アルカノイルオキシアミノ、トリフルオロメトキシ、(1-4C)アルキル、6-(1-4C)アルコキシ、7-(1-4C)アルコキシ、(1-3C)アルキレンジオキシ、(1-4C)アルキルアミノ、ジ-1[(1-4C)アルキル]アミノ、ピロリジン-1-イル、ピペリジノ、モルホリノ、ピペラジン-1-イル、4-(1-4C)アルキルピペラジン-1-イル、(1-4C)アルキルチオ、(1-4C)アルキルスルフィニル、(1-4C)アルキルスルホニル、ブロモメチル、ジブロモメチル、ヒドロキシ-(1-4C)アルキル、(2-4C)アルカノイルオキシ-(1-4C)アルキル、(1-4C)アルコキシ-(1-4C)アルキル、カルボキシ-(1-4C)アルキル、(1-4C)アルコキシカルボニル-(1-4C)アルキル、カルバモイル-(1-4C)アルキル、N-(1-4C)アルキルカルバモイル-(1-4C)アルキル、N,N-ジ-[(1-4C)アルキル]カルバモイル-(1-4C)アルキル、アミノ-(1-4C)アルキル、(1-4C)アルキルアミノ-(1-4C)アルキル、ジ-[(1-4C)アルキル]アミノ-(1-4C)アルキル、ピペリジノ-(1-4C)アルキル、モルホリノ-(1-4C)アルキル、ピペラジン-1-イル-(1-4C) アルキル、4-(1-4C)アルキルピペラジン-1-イル-(1-4C) アルキル、ヒドロキシ-(2-4C)アルコキシ-(1-4C)アルキル、(1-4C)アルコキシ-(2-4C)アルコキシ-(1-4C)アルキル、ヒドロキシ-(2-4C)アルキルアミノ-(1-4C)アルキル、(1-4C)アルコキシ-(2-4C)アルキルアミノ-(1-4C)アルキル、(1-4C)アルキルチオ-(1-4C)アルキル、ヒドロキシ-(2-4C)アルキルチオ-(1-4C)アルキル、(1-4C)アルコキシ-(2-4C)アルキルチオ-(1-4C)アルキル、フェノキシ-(1-4C)アルキル、アニリノ-(1-4C)アルキル、フェニルチオ-(1-4C)アルキル、シアノ-(1-4C)アルキル、ハロゲノ-(2-4C)アルコキシ、ヒドロキシ-(2-4C)アルコキシ、(2-4C)アルカノイルオキシ-(2-4C)アルコキシ、(1-4C)アルコキシ-(2-4C)アルコキシ、カルボキシ-(1-4C)アルコキシ、(1-4C)アルコキシカルボニル-(1-4C)アルコキシ、カルバモイル-(1-4C)アルコキシ、N-(1-4C)アルキルカルバモイル-(1-4C)アルコキシ、N,N-ジ-[(1-4C)アルキル]カルバモイル-(1-4C)アルコキシ、アミノ-(2-4C)アルコキシ、(1-4C)アルキルアミノ-(2-4C)アルコキシ、ジ-[(1-4C)アルキル]アミノ-(2-4C)アルコキシ、(2-4C)アルカノイルオキシ、ヒドロキシ-(2-4C)アルカノイルオキシ、(1-4C)アルコキシ-(2-4C)アルカノイルオキシ、フェニル-(1-4C)アルコキシ、フェノキシ-(2-4C)アルコキシ、アニリノ-(2-4C)アルコキシ、フェニルチオ-(2-4C)アルコキシ、ピペリジノ-(2-4C)アルコキシ、モルホリノ-(2-4C)アルコキシ、ピペラジン-1-イル-(2-4C)アルコキシ、4-(1-4C)アルキルピペラジン-1-イル-(2-4C)アルコキシ、ハロゲノ-(2-4C)アルキルアミノ、ヒドロキシ-(2-4C)アルキルアミノ、(2-4C)アルカノイルオキシ-(2-4C)アルキルアミノ、(1-4C)アルコキシ-(2-4C)アルキルアミノ、カルボキシ-(1-4C)アルキルアミノ、(1-4C)アルコキシカルボニル-(1-4C)アルキルアミノ、カルバモイル-(1-4C)アルキルアミノ、N-(1-4C)アルキルカルバモイル-(1-4C)アルキルアミノ、N,N-ジ-[(1-4C)アルキル]カルバモイル-(1-4C)アルキルアミノ、アミノ-(2-4C)アルキルアミノ、(1-4C)アルキルアミノ-(2-4C)アルキルアミノ、ジ-1(1-4C)アルキル]アミノ-(2-4C)アルキルアミノ、フェニル-(1-4C)アルキルアミノ、フェノキシ-(2-4C)アルキルアミノ、アニリノ-(2-4C)アルキルアミノ、フェニルチオ-(2-4C)アルキルアミノ、(2-4C)アルカノイルアミノ、(1-4C)アルコキシカルボニルアミノ、(1-4C)アルキルスルホニルアミノ、ベンズアミド、ベンゼンスルホンアミド、3-フェニルウレイド 2-オキソピロリジン-1-イル、2,5-ジオキソピロリジン-1-イル、ハロゲノ-(2-4C)アルカノイルアミノ、ヒドロキシ-(2-4C)アルカノイルアミノ、(1-4C)アルコキシ-(2-4C)アルカノイルアミノ、カルボキシ-(2-4C)アルカノイルアミノ、(1-4C)アルコキシカルボニル-(2-4C)アルカノイルアミノ、カルバモイル-(2-4C)アルカノイルアミノ、N-(1-4C)アルキルカルバモイル-(2-4C)アルカノイルアミノ、N,N-ジ-[(1-4C)アルキル]カルバモイル-(2-4C)アルカノイルアミノ、アミノ-(2-4C)アルカノイルアミノ、(1-4C)アルキルアミノ-(2-4C)アルカノイルアミノ又はジ-[(1-4C)アルキル]アミノ-(2-4C)アルカノイルアミノであり、ここで前記ベンズアミド又はベンゼンスルホンアミド置換基、又はR1基における任意のアニリノ、フェノキシ又はフェニル基は、一又は二のハロゲノ、(1-4C)アルキル又は(1-4C)アルコキシ置換基を担持していてもよく;
nは1又は2であり;
各R2は独立して、水素、ヒドロキシ、ハロゲノ、トリフルオロメチル、アミノ、ニトロ、シアノ、(1-4C)アルキル、(1-4C)アルコキシ、(1-4C)アルキルアミノ、ジ-[(1-4C)アルキル]アミノ、(1-4C)アルキルチオ、(1-4C)アルキルスルフィニル又は(1-4C)アルキルスルホニル;又はその製薬的に許容可能な塩である]
を有し、4-(4'-ヒドロキシアニリノ)-6-メトキシキナゾリン、4-(4,-ヒドロキシアニリノ)-6,7-メチレンジオキシキナゾリン、6-アミノ-4-(4'-アミノアニリノ)キナゾリン、4-アニリノ-6-メチルキナゾリン、又はその塩酸塩を除き、4-アニリノ-6,7-ジメトキシキナゾリン又はその塩酸塩を除く。
4-(3'-クロロ-4'-フルオロアニリノ)-6,7-ジメトキシキナゾリン;4-(3',4'-ジクロロアニリノ)-6,7-ジメトキシキナゾリン;6,7-ジメトキシ-4-(3'-ニトロアニリノ)-キナゾリン;6,7-ジエトキシ-4-(3'-メチルアニリノ)-キナゾリン;6-メトキシ-4-(3'-メチルアニリノ)-キナゾリン;4-(3'-クロロアニリノ)-6-メトキシキナゾリン;6,7-エチレンジオキシ-4-(3'-メチルアニリノ)-キナゾリン;6-アミノ-7-メトキシ-4-(3'-メチルアニリノ)-キナゾリン;4-(3'-メチルアニリノ)-6-ウレイドキナゾリン;6-(2-メトキシエトキシメチル)-4-(3'-メチルアニリノ)-キナゾリン;6,7-ジ-(2-メトキシエトキシ)-4-(3'-メチルアニリノ)-キナゾリン;6-ジメチルアミノ-4-(3'-メチルアニリノ)キナゾリン;6-ベンズアミド-4-(3'-メチルアニリノ)キナゾリン;6,7-ジメトキシ-4-(3'-トリフルオロメチルアニリノ)-キナゾリン;6-ヒドロキシ-7-メトキシ-4-(3'-メチルアニリノ)-キナゾリン;7-ヒドロキシ-6-メトキシ-4-(3'-メチルアニリノ)-キナゾリン;7-アミノ-4-(3'-メチルアニリノ)-キナゾリン;6-アミノ-4-(3'-メチルアニリノ)キナゾリン;6-アミノ-4-(3'-クロロアニリノ)-キナゾリン;6-アセトアミド-4-(3'-メチルアニリノ)-キナゾリン;6-(2-メトキシエチルアミノ)-4-(3'-メチルアニリノ)-キナゾリン;7-(2-メトキシアセトアミド)-4-(3'-メチルアニリノ)-キナゾリン;7-(2-ヒドロキシエトキシ)-6-メトキシ-4-(3'-メチルアニリノ)-キナゾリン;7-(2-メトキシエトキシ)-6-メトキシ-4-(3'-メチルアニリノ)-キナゾリン;6-アミノ-4-(3'-メチルアニリノ)-キナゾリンからなる群から選択される式IIの化合物である。
適切な置換可能な基Zは、例えばハロゲノ、アルコキシ、アリールオキシ又はスルホニルオキシ基、例えばクロロ、ブロモ、メトキシ、フェノキシ、メタンスルホニルオキシ又はトルエン-p-スルホニルオキシ基である。
切断反応は、このような変換に対して知られている多くの手順の何れかにより、簡便に実施されうる。反応は、例えばアルカリ金属の(1-4C)アルキル硫化物、例えばエタンチオラートナトリウムでキナゾリン誘導体を処理するか、又は例えばアルカリ金属のジアリールリン化物、例えばジフェニルホスフィドリチウムで処理することにより実施することができる。また切断反応は、例えばホウ素又はアルミニウムのトリハロゲン化物、例えば三臭化ホウ素でキナゾリン誘導体を処理することにより、簡便に実施することができる。このような反応は、好ましくは上述したような適切で不活性な溶媒又は希釈剤下、適切な温度で実施される。
適切な酸化剤は、チオのスルフィニル及び/又はスルホニルへの酸化に対して当該技術分野で知られている任意の薬剤、例えば、白金の存在下、過酸化水素、過酸(例えば3-クロロペルオキシ安息香酸又はペルオキシ酢酸)、アルカリ金属ペルオキシ硫酸塩(例えばペルオキシ一硫酸カリウム)、三酸化クロム又は酸素ガスである。酸化は、一般的に過剰な酸化及び他の官能基へダメージを与える危険性を低減するために、必要な化学量論的量の酸化剤を用い、できるかぎり穏やかな条件下で実施される。一般的に、反応は適切な溶媒又は希釈剤、例えば塩化メチレン、クロロホルム、アセトン、テトラヒドロフラン又はtert-ブチルメチルエーテル中において、例えば−25℃〜50℃、簡便には周囲温度又はその近傍、すなわち15℃〜35℃の範囲の温度で実施される。スルフィニル基を担持する化合物が必要とされる場合、簡便には、酢酸又はエタノール等の極性溶媒中において、メタ過ヨウ素酸ナトリウム又はカリウム等、より穏和な酸化剤を使用することができる。(1-C4)アルキルスルホニル基を含む式IIの化合物が必要とされる場合、それは、対応する(1-4C)アルキルスルフィニル化合物、並びに対応する(1-4C)アルキルチオ化合物の酸化により得ることができることが理解される。
還元は、このような変換で公知の任意の多くの手順により、便宜的に実施されてよい。還元は、パラジウム又は白金等の適切な金属触媒の存在下、上述した不活性な溶媒又は希釈液において、ニトロ化合物溶液を水素化することにより実施されてよい。さらなる適切な還元剤は、例えば活性化金属、例えば活性化鉄(塩酸等の酸の希釈液で鉄粉を洗浄することにより生成)である。よって、例えば還元は、適切な溶媒又は希釈液、例えば水とアルコール、例えばメタノール又はエタノールとの混合物において、例えば50℃〜150℃の範囲の温度、便宜的には70℃又はその近傍で、ニトロ化合物と活性化金属の混合物を加熱することにより実施されてもよい。
適切なアシル化剤は、アシルアミノにアミノをアシル化させるための当該技術分野で知られている任意の薬剤、例えば、アシルハロゲン化物、例えば簡便には上述した適切な塩基の存在下での、(2-4C)アルカノイルクロリド又はブロミド又はベンゾイルクロリド又はブロミド、無水アルカン酸又は混合無水物、例えば(2-4C)アルカン酸無水物、例えばアルカン酸と例えば(1-4C)アルコキシカルボニルクロリド等の(1-4C)アルコキシカルボニルハライドとを、上述した適切な塩基の存在下で反応させることにより形成される無水酢酸又は混合無水物である。R1がウレイド又は3-フェニルウレイドである式IIの化合物の製造に対しては、適切なアシル化剤は、例えばシアナート、特にシアン酸ナトリウム等のアルカリ金属シアナート、又はイソシアナート、例えばイソシアン酸フェニルである。一般的に、アシル化は、上述した適切で不活性な溶媒又は希釈剤中において、例えば−30℃〜120℃の範囲、便宜的には周囲温度又はその近傍の温度で実施される。
適切なアルキル化剤は、アルコキシ又は置換アルコキシへのヒドロキシのアルキル化に対して、又はアルキルアミノ又は置換アルキルアミノへのアミノのアルキル化に対して当該技術分野で知られている任意の薬剤、例えば上述した適切な塩基の存在下、上述した適切で不活性な溶媒又は希釈剤中において、例えば10℃〜140℃の範囲、簡便には周囲温度又はその近傍の温度での、アルキル又は置換アルキルハロゲン化物、例えば(1-4C)アルキルの塩化物、臭化物又はヨウ化物、又は置換(1-4C)アルキルの塩化物、臭化物又はヨウ化物である。
加水分解は、簡便には、例えば塩基性条件下で実施されうる。
反応は、好ましくは上述した適切で不活性な溶媒又は希釈剤中において、例えば10℃〜100℃、簡便には周囲温度又はその近傍の温度で実施される。
式IIのキナゾリン誘導体の製薬的に許容可能な塩が必要とされる場合、例えば前記化合物を、例えば一般的な手順を使用して適切な酸と反応させることにより、得ることができる。
[上式中、
nは1、2又は3であり;
各R2は独立して、ハロゲノ又はトリフルオロメチルであり;
R3は(1-4C)アルコキシであり;及び
R1は、ジ-[(1-4C)アルキル]アミノ-(2-4C)アルコキシ、ピロリジン-1-イル-(2-4C)アルコキシ、ピペリジノ-(2-4C)アルコキシ、モルホリノ-(2-4C)アルコキシ、ピペラジン-1-イル-(2-4C)アルコキシ、4-(1-4C)アルキルピペラジン-1-イル-(2-4C)アルコキシ、イミダゾール-1-イル-(2-4C)アルコキシ、ジ-[(1-4C)アルコキシ-(2-4C)アルキル]アミノ-(2-4C)アルコキシ、チアモルホリノ-(2-4C)アルコキシ、1-オキソチアモルホリノ-(2-4C)アルコキシ又は1,1-ジオキソチアモルホリノ-(2-4C)アルコキシであり、N又はO原子に結合していないCH2(メチレン)基を有する上述したR1置換基の任意のものは、該CH2基上にヒドロキシ置換基を担持していてもよい]
の化合物、又はその製薬的に許容可能な塩である。
4-(3'-クロロ-4'-フルオロアニリノ)-7-メトキシ-6-(2-ピロリジン-1-イルエトキシ)-キナゾリン;4-(3'-クロロ-4'-フルオロアニリノ)-7-メトキシ-6-(2-モルホリノエトキシ)-キナゾリン;4-(3'-クロロ-4'-フルオロアニリノ)-6-(3-ジエチルアミノプロポキシ)-7-メトキシキナゾリン;4-(3'-クロロ-4'-フルオロアニリノ)-7-メトキシ-6-(3-ピロリジン-1-イルプロポキシ)-キナゾリン;4-(3'-クロロ-4'-フルオロアニリノ)-6-(3-ジメチルアミノプロポキシ)-7-メトキシキナゾリン;4-(3',4'-ジフルオロアニリノ)-7-メトキシ-6-(3-モルホリノプロポキシ)-キナゾリン;4-(3'-クロロ-4'-フルオロアニリノ)-7-メトキシ-6-(3-ピペリジノプロポキシ)-キナゾリン;4-(3'-クロロ-4'-フルオロアニリノ)-7-メトキシ-6-(3-モルホリノプロポキシ)-キナゾリン;4-(3'-クロロ-4'-フルオロアニリノ)-6-(2-ジメチルアミノエトキシ)-7-メトキシキナゾリン;4-(2',4'-ジフルオロアニリノ)-6-(3-ジメチルアミノプロポキシ)-7-メトキシキナゾリン;4-(2',4'-ジフルオロアニリノ)-7-メトキシ-6-(3-モルホリノプロポキシ)-キナゾリン;4-(3'-クロロ-4'-フルオロアニリノ)-6-(2-イミダゾール-1-イルエトキシ)-7-メトキシキナゾリン;4-(3'-クロロ-4'-フルオロアニリノ)-6-(3-イミダゾール-1-イルプロポキシ)-7-メトキシキナゾリン; 4-(3'-クロロ-4'-フルオロアニリノ)-6-(2-ジメチルアミノエトキシ)-7-メトキシキナゾリン;4-(2',4'-ジフルオロアニリノ)-6-(3-ジメチルアミノプロポキシ)-7-メトキシキナゾリン;4-(2',4'-ジフルオロアニリノ)-7-メトキシ-6-(3-モルホリノプロポキシ)-キナゾリン;4-(3'-クロロ-4'-フルオロアニリノ)-6-(2-イミダゾール-1-イルエトキシ)-7-メトキシキナゾリン;及び4-(3'-クロロ-4'-フルオロアニリノ)-6-(3-イミダゾール-1-イルプロポキシ)-7-メトキシキナゾリンからなる群から選択される式II'の化合物である。
式II'のキナゾリン誘導体又はその製薬的に許容可能な塩は、化学的に関連した化合物の調製に適用可能なことが知られている任意のプロセスにより調製することができる。適切なプロセスには、例えば米国特許第5616582号、米国特許第5580870号、米国特許第5475001号及び米国特許第5569658号に例証されているものが含まれる。特に記載しない限りは、n、R2、R3及びR1は、式II'のキナゾリン誘導体に対して上述した意味の何れかを有する。必須の出発物質は商業的に入手可能であるか、又は有機化学の標準的手順により得ることができる。
適切な置換可能な基Zは、例えばハロゲノ、アルコキシ、アリールオキシ又はスルホニルオキシ基、例えばクロロ、ブロモ、メトキシ、フェノキシ、メタンスルホニルオキシ又はトルエン-p-スルホニルオキシ基である。
適切なアルキル化剤は、例えばアミノ置換アルコキシへのヒドロキシのアルキル化に対して当該分野で知られている任意の薬剤、例えばアミノ置換アルキルハロゲン化物、例えば上述した適切な塩基の存在下、上述した適切で不活性な溶媒又は希釈剤中において、例えば10℃〜140℃の範囲、簡便には80℃又はその近傍の温度での、アミノ置換(2-4C)アルキルの塩化物、臭化物又はヨウ化物である。
R1がヒドロキシ-(2-4C)アルコキシ基である式II'の化合物の適切な反応性誘導体は、例えばハロゲノ-又はスルホニルオキシ-(2-4C)アルコキシ基、例えばブロモ-又はメタンスルホニルオキシ-(2-4C)アルコキシ基である。
反応は、好ましくは、上述した適切で不活性な溶媒又は希釈剤の存在下、例えば10℃〜150℃の範囲、簡便には50℃又はその近傍の温度で実施される。
反応は、好ましくは、上述した適切で不活性な溶媒又は希釈液の存在下で、例えば10℃〜150℃の範囲、簡便には70℃又はその近傍の温度で実施される。
式II'のキナゾリン誘導体の製薬的に許容可能な塩、例えば式II'のキナゾリン誘導体の一酸又は二酸との付加塩が必要とされる場合、それは、例えば一般的な手順を使用して適切な酸と、前記化合物を反応させることにより、得ることができる。
[上式中;
XはN又はCHであり;
YはCR1であり、かつVはNであり;又は
YはNであり、かつVはCR1であり;又は
YはCR1であり、かつVはCR2であり;又は
YはCR2であり、かつVはCR1であり;
R1は基CH3SO2CH2CH2NHCH2-Ar-を表し、このときArはフェニル、フラン、チオフェン、ピロール及びチアゾールから選択され、この各々は場合によって1又は2のハロ、Cl-4アルキル又はCl-4アルコキシ基によって置換されていてよく;
R2は、ヒドロゲン、ハロ、ヒドロキシ、Cl-4アルキル、C1-4アルコキシ、Cl-4アルキルアミノ及びジ[C1-4アルキル]アミノを含む基から選択され;
Uは、R3基によって置換され、場合によって少なくとも1のそれぞれ選択されたR4基によって置換された、フェニル、ピリジル、3H-イミダゾールイル、インドールイル、イソインドールイル、インドリンイル、イソインドリンイル、1H-インダゾールイル、2,3-ジヒドロ-1H-インダゾールイル、1H-ベンズイミダゾールイル、2,3-ジヒドロ-1H-ベンズイミダゾールイル又は1H-ベンゾトリアゾールイル基を表し;
R3は、ベンジル、ハロ-、ジハロ-及びトリハロベンジル、ベンゾイル、ピリジルメチル、ピリジルメトキシ、フェノキシ、ベンジルオキシ、ハロ-、ジハロ-及びトリハロベンジルオキシ、及びベンゼンスルホニルを含む基から選択され;又はR3はトリハロメチルベンジル又はトリハロメチルベンジルオキシを表し;又は
R3は以下の式の基を表し、
上式中
各R5はそれぞれ、ハロゲン、Cl-4アルキル及びCl-4アルコキシから選択され;nは0〜3であり;
各R4はそれぞれ、ヒドロキシ、ハロゲン、Cl-4アルキル、C2-4アルケニル、C2-4アルキニル、C1-4アルコキシ、アミノ、Cl-4アルキルアミノ、ジ[C1-4アルキル]アミノ、Cl-4アルキルチオ、Cl-4アルキルスルフィンイル、C1-4アルキルスルホニル、C1-4アルキルカルボニル、カルボキシ、カルバモイル、C1-4アルコキシカルボニル、C1-4 アルカノイルアミノ、N-(C1-4アルキル)カルバモイル、N,N-ジ(C1-4アルキル)カルバモイル、シアノ、ニトロ及びトリフルオロメチルである。
上式中、
mは1から3の整数であり;
R1はハロゲノ又はC1−3アルキルを表し;
X1は-0-を表し;
R2は、以下の3つの基のうちの1から選択され:
1) C1−5アルキルR3(このときR3は、ヒドロキシ、ハロゲノ、C1−4アルキル、C1−4ヒドロキシアルキルおよびC1−4アルコキシから選択される1又は2の置換基を持ってよいピペリジン-4-イルである);
2) C2−5アルケニルR3(このときR3は本明細書中に定義する通りである);
3) C2−5アルキニルR3(このときR3は本明細書中に定義する通りである)、
そして、何れかのアルキル、アルケニル又はアルキニル基は、ヒドロキシ、ハロゲノおよびアミノから選択される一又は複数の置換基を持っていてよい。
具体的な実施態様では、EGFRアンタゴニストは、4-(4-ブロモ-2-フルオロアニリノ)-6-メトキシ-7-(I-メチルピペリジン-4-イルメトキシ)キナゾリン(ザクチマ)及びその塩類である。
本発明は、特定の治療計画の一部としてc−metアンタゴニストとEGFRアンタゴニストとを併用することにより、これらの治療薬の活性の組み合わせによる薬効を提供することを特徴とする。このような併用の薬効には、限定されないが、治療薬の併用による薬物動態学的又は薬力学的同時作用が含まれる。本発明は、様々な段階における様々な種類の癌の治療に特に有用である。
上皮内: それが生じた細胞の層にのみ存在する早期癌
限局: 転移の証拠は無く、それが生じた器官に限定されている癌
隣接転移: 最初の(原発)部位を越えて近くのリンパ節又は器官及び組織に広がった癌
遠隔転移: 原発部位から遠隔器官又は遠隔リンパ節に広がった癌
不明: ステージを示す十分な情報がない症例を表わすために使用される。
(直接的に又は間接的に)癌におけるc−met及び/又はEGFRの発現又は増幅を決定することができる。様々な診断/予後判定アッセイが、このために利用可能である。一実施態様では、c−met及び/又はEGFR過剰発現は、IHCによって分析することができる。腫瘍生検由来のパラフィン包埋組織切片に対してIHCアッセイを行い、次のようなEGFRタンパク質染色強度基準と合致させてもよい:
スコア0:染色が観察されないか、又は膜染色が腫瘍細胞の10%未満で観察される。
スコア1+:わずかに/弱く認知できる程度の膜染色が10%を上回る腫瘍細胞に検出される。細胞膜の一部のみが染色される。
スコア2+:弱いないしは中程度の完全な膜染色が腫瘍細胞の10%を越えて観察される。
スコア3+:中程度から強い完全な膜染色が10%を上回る腫瘍細胞に観察される。
0=0〜10,000コピー/細胞
1+=少なくとも約200,000コピー/細胞
2+=少なくとも約500,000コピー/細胞
3+=少なくとも約2,000,000コピー/細胞
本発明の併用療法は、更に、一又は複数の化学療法剤を含むことができる。併用投与は、別個の製剤又は単一の医薬的製剤を用いた同時投与又は同時発生的投与と、好ましくは両方(又は全て)の活性剤の生物学的活性が同時に発揮される期間を提供する、順序を問わない継続的投与とを含む。
本発明に使用される治療薬の製剤、用量、及び投与は、良質な医療慣行(good medical practice)に則って決定される。この文脈で考慮すべき要素には、治療対象となる特定の障害、特定の治療対象、個々の患者の臨床的状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与計画、併用される薬剤同士の相互作用、及び医療従事者に既知のその他の要素が含まれる。
材料および方法
マイクロアレイ試験。 NSCLC細胞株および原発性腫瘍の基礎遺伝子発現分析は、Affymetrix (Santa Clara, CA)マイクロアレイプラットフォーム(HGU133Plus_2.0チップ)上で、コンフルエント未満の細胞培養物又は凍結腫瘍溶解物から抽出したRNAを使用して行った。基本的にHoffman EP et al., Nat Rev Genet 5:229-37 (2004)にて記載されるように、相補的RNAの調製、アレイハイブリダイゼーションおよびその後のデータ分析は、製造業者のプロトコールを使用して実施した。
NSCLC試料において発現される他のレセプターチロシンキナーゼ(RTK)の発現とc−met発現との相関性を評価するために、変動フィルターを用いて、分析する試料全体にわたって変動が極小さい遺伝子を除外した。発現が極小さい遺伝子(試料全体の絶対的な変動(最大−最小)が1000未満であったもの)は、更なる分析から除いた。さらに、1つの遺伝子を表すために単一プローブを選択した。スピアマン順位相関係数(ρ)は、MET mRNA(プローブID、203510_at)又はc−metタンパク質(IHC)に対する各々の遺伝子について決定した。
RPL19:フォワードプライマー、5'-ACCCCAATGAGACCAATGAAATC-3'(配列番号:26)、リバースプライマー、5'-ATCTTTGATGAGCTTCCGGATCT-3'(配列番号:27)、
プローブ、5'(VIC)- AATGCCAACTCCCGTCAG-(MGBNFQ)-3'(配列番号:28);
MET:フォワードプライマー、5'- CATTAAAGGAGACCTCACCATAGCTAAT-3'(配列番号:29)、
リバースプライマー、5'- CCTGATCGAGAAACCACAACCT-3'(配列番号:30)、
プローブ、5'(FAM)- CATGAAGCGACCCTCTGATGTCCCA-(BHQ-1)-3'(配列番号:31)。
EGFRのためのプライマー/プローブ対は、Applied Biosystems (カタログ番号4331182、Hs00193306; Foster City, CA)から購入した。
表1:実施例で使用される細胞株
* アメリカ培養細胞系統保存機関。
** Japanese Health Sciences Resources。
*** National Cancer Institute Division of Cancer Treatment and Diagnosis。
NSCLC細胞株においてMET mRNA発現はEGFR mRNA発現と相関する
NSCLC細胞株においてc−metの発現がEGFRおよび他のレセプターチロシンキナーゼ(RTK)の発現と相関するか否かを評価するために、スピアマン順位相関係数を、表1に示す50のNSCLC細胞株から生成されるマイクロアレイに基づく遺伝子発現データから決定した。EGFRとMETのmRNAレベルは、細胞株においてポジティブに相関しており(ρ=0.54、p<0.0001)、EGFR発現はMET発現と非常に相関していた(表2)。
表2 NSCLC細胞株におけるRTK mRNA発現とMET mRNA発現との相関性。
免疫組織化学(IHC)によって決定されるc-metタンパク質発現が、NSCLC細胞株においてEGFRおよび他のレセプターチロシンキナーゼ(RTK)の発現と相関するか否かを評価するために、スピアマン順位相関係数を、表1に示される50のNSCLC細胞株において生成されるマイクロアレイに基づく遺伝子発現データから決定した。この細胞株においてEGFR mRNAとc−metタンパク質レベルはポジティブに相関しており(ρ=0.50、p=0.002)、EGFR発現はc−metタンパク質の発現と非常に相関していた(表3)。
表3 NSCLC細胞株におけるRTK mRNA発現とc−METタンパク質発現(IHC)との相関性。
表1に示すNSCLC細胞株において、c-met mRNA発現が、EGFRおよび他のレセプターチロシンキナーゼ(RTK)の発現と相関するか否かを評価するために、スピアマン順位相関係数を、78のNSCLC腫瘍から生成されるマイクロアレイに基づく遺伝子発現データから決定した。NSCLC腫瘍においてEGFR mRNAとMET mRNAの発現はポジティブに相関した(ρ=0.26、p=0.02)(表4)。
表4 NSCLC腫瘍におけるRTK mRNA発現とMET mRNA発現との相関性
NSCLC細胞株及び原発性腫瘍試料においてc−metとEGFRが同時発現されるか否かを評価するために、EGFRおよびMETのmRNAの発現を、NSCLC細胞株(表1示す)又は凍結原発性NSCLC腫瘍溶解物のパネルでの定量的RT−PCRにより測定した。EGFRおよびMETのmRNAレベルは、細胞株(ρ=0.59、p<0.0001)(図1、左パネル)および原発性NSCLC試料(ρ=0.48、p=0.0003)(図1、右パネル)においてポジティブに相関していた。これらのデータは、NSCLC細胞株および原発性腫瘍試料においてMETとEGFRの発現にオーバーラップがあることを示す。
47の非小細胞肺癌(NSCLC)細胞株(表1に示す)および138の原発性NSCLC試料(ジェネンテック貯蔵)を、IHCによってc-metおよびEGFRのIHC発現について調べた。発現のレベルは、陰性(−)、弱い(+)、中程度(++)又は強い(+++)とスコア化し、弱いか、中程度であるか、又は強い染色を示す腫瘍細胞を10%より多く含む細胞株又は腫瘍試料を陽性と判断した。
細胞株の79%(37/47)およびNSCLC腫瘍の68%(94/138)はEGFRについてポジティブの染色を示した(表5)。さらに、EGFR陽性試料(79%の細胞株および68%の原発性腫瘍)を、それらのc-met発現レベルに基づいて階層化した(表5)。EGFR陽性細胞株は、弱い(22%)、中程度(57%)、及び強い(19%)c−met発現を表し、EGFR陽性原発性腫瘍試料は弱い又は中程度の陽性のみであった。腺癌サブタイプは、扁平細胞サブタイプよりc-met染色について共通して陽性度が高く(70%対40%)、より多くの試料が中程度の染色であった(30%対7%)。これらのデータは、NSCLC細胞株および腫瘍試料、特に腺癌腫瘍サブタイプにおいて、c-metとEGFR間の発現に有意なオーバーラップがあることを示す。
*EGFRについて陽性に染色された79%(37/47)のNSCLC細胞株。
**EGFRについて陽性に染色された68%(94/138)のNSCLC細胞株。
材料および方法
レトロウイルスshRNAコンストラクト。 c−metに対するオリゴヌクレオチドコードshRNA配列(5'-GATCCCCGAACAGAATCACTGACATATTCAAGAGATATGTCAGTGATTCTGTTCTTTTTTGGAAA-3'(配列番号:32)(shMet3)、及び、5'GATCCCCGAAACTGTATGCTGGATGATTCAAGAGATCATCCAGCATACAGTTTCTTTTTTGGAAA (配列番号:33)(shMet4))をH1プロモーター(David Davis, GNE)の下流のpShuttle-H1ベクターのBglII/HindIII部位にクローニングした。下線部は標的のハイブリダイズ配列を示す。これらのコンストラクトは、クロナーゼII酵素(Invitrogen)を用いてレトロウイルスpHUSH-GWベクター(Gray D et al BMC Biotechnology. 2007; 7:61)に再結合させ、shRNA発現が誘導性プロモーターの制御下にあるコンストラクトを生成した。テトラサイクリンアナログドキシサイクリンによる処置によりshRNA発現が生じる。GFPに対するshRNAを含むshGFP2コントロールレトロウイルスコンストラクト(Hoeflich et al. Cancer Res. (2006) 66(2): 999-1006)は、David Davis, Genentech, Incから提供を受けた。shGFP2は以下のオリゴヌクレオチドを含む:
(EGFP) shRNA
(センス鎖) 5'-GATCCCCAGATCCGCCACAACATCGATTCAAGAGATCGATGTTGTGGCGGATCTTGTTTTTTGGAAA-3 (配列番号:34)。
細胞株EBCクローン4.5、EBCクローン4.12はコンストラクトshMet4を含み、細胞株H441クローン3.1、H441クローン3.11およびEBCクローン3.15はコンストラクトshMet3を含んだ。
c−metを標的とするテトラサイクリン誘導性短型ヘアピンRNA(shRNA)を保持するレトロウイルスを用いて、c-met発現をノックダウンするためにshRNAを発現するように誘導されうるNSCLC細胞安定株クローンを生成した。NSCLC細胞株EBC1におけるEGFRファミリメンバーの発現とリン酸化に対するc-metノックダウンの影響を調べるために、metに対する誘導性shRNA又はGFPに対するコントロールshRNAを含むEBC1 shMet4.12細胞を、コントロール培地又は0.1ug/mlのDoxを含む培地中で48時間生育させた。2時間の血清欠乏の後に、細胞を、TGFα又はヘレグリンb1にて20分間処置したものと処置しないものにした。示したように、全細胞溶解物は合計およびリン-タンパク質の発現について評価した。
c-metタンパク質発現がshRNAを用いてノックダウンされたDox処置EBC1細胞(図2;EBCshMet4.12、Dox、左パネル)は、TGFa処置に応答してpEGFR及びpHer2の増加とヘレグリン処置に応答してpHer3の増加、並びにTGFa又はヘレグリン処置によるpAKTの増加を示したが、Dox処置コントロールEBC1細胞(図2;shGFP2、右パネル)では示さなかった。Dox処置EBC shMet4.12細胞(リガンド刺激なし)は、総Her2及び総Her3の増加と、pEGFR及びpHer3の低減を示した。EBC1細胞は、c−metノックダウンの非存在下では、TGFa又はヘレグリン処置に応答してpEGFR、pHer2、pHer3又はpAKTの強力な誘導を示さなかった。
c-metがshRNAを用いてノックダウンされたH441細胞(図3;Dox処置shMet3.1、左パネル、Dox処置shMet3.11、中パネル)はヘレグリン処置に応答してpHer2およびpHer3の亢進を示したが、Dox処置コントロールH441細胞(図3;shGFP1、右パネル)は示さなかった。Dox処置shMet3.1及びshMet3.11細胞もまた総Her3の増加およびpEGFRの低減を示す。EBC1細胞とは異なり、H441細胞は、c−metノックダウンのない場合、TGFα(pEGFR)およびヘレグリン(pHer2およびpHer3)にわずかに応答する。EBC1細胞は、H441細胞より高いc−metレベルを有する。
これらの実験は、NSCLC細胞株におけるc−met発現の低減により、EGFR(pEGFR)の基礎活性化の低減とHer2およびHer3のリガンド誘導性活性化の増加が生じることを示したことから、Met阻害がEGFファミリのリガンドに対する感度を上げることが示唆される。
c−met機能が部分的に阻害されている細胞においてEGFRが腫瘍生存の維持に役割を有するか否かを試験するために、EBC-1 shMet-4.5腫瘍保持動物を、エルロチニブ(TarcevaTM)とDoxの組合せにて処置した。
材料および方法
腫瘍細胞を移植したマウスをランダムに10匹のマウスの4つのグループに分け、各処置を開始した(表6にまとめる)。グループ1のマウス(コントロール群)は、100μLのベヒクルコントロール、メチルセルローストゥイーン(MCT)にて、毎日(QD)、経口経管栄養(PO)により処置し、5%スクロースを含む飲料水に切り替えた。グループ2のマウス(c-metノックダウン群)は、100μLのMCT、QD、POで処置し、5%スクロース中の0.5mg/mLのドキシサイクリン(Dox)を含む飲料水に切り替えた。グループ3のマウス(エルロチニブ処置群)は、MCTに調製した100μL容量の100mg/kgのエルロチニブにて、QD、POで処置し、5%スクロースを含む飲料水に切り替えた。グループ4のマウス(c-metノックダウンとエルロチニブ処置群)は、MCTに調製した100μL容量の100mg/kgのエルロチニブにて、QD、POで処置し、5%スクロース中の1mg/mLのドキシサイクリン(Dox)を含む飲料水に切り替えた。Doxおよびスクロース水は2〜3日ごとに交換した。エルロチニブおよびMCTは14日間投与し、6日間止めた後、残りの試験期間(20日)再開した。腫瘍が1000mm3超に達するか又は壊死病変の兆候を示す場合、動物を試験対象から外した。何れかのグループから4匹以上の動物が試験から外された場合、そのグループの処置を中断し、すべての動物を試験から外した。マウスのすべての研究および取扱いは、Institutional Animal Care and Use Committee(IACUC)ガイドラインに従った。
*米国特許出願61/034446では、Dox用量は1mg/mlであると誤って記載された。上記のように、正しい用量は0.5mg/mlである。
腫瘍体積(mm3)=(長さ×幅2)×0.5
%Ihn=100×[腫瘍サイズ(ベヒクル)−{腫瘍サイズ(MetMAb)/腫瘍サイズ(ベヒクル)}]
腫瘍発生(TI)は、17日目の各グループの測定可能な腫瘍の数によって決定した。部分的な退縮(PR)は、研究の間の何れかの日での開始腫瘍体積の50%超かつ100%未満の腫瘍退縮として定められる。完全な退縮(CR)は、研究の間の何れかの日での開始腫瘍体積からの100%の腫瘍退縮として定められる。
平均腫瘍体積および平均値の標準誤差(SEM)は、JMPソフトウェア、バージョン5.1.2(SAS Institute; Cary, NC))を使用して算出した。データ分析およびスチューデントt検定又はダネットt検定用いたp値の生成もまた、JMPソフトウェア、バージョン5.1.2を使用して行った。
c−metノックダウンとエルロチニブ処置の組合せは異種移植片モデルの腫瘍増殖を有意に阻害した
EBC-1モデルにおける腫瘍増殖の制御時のc−metの役割を調査するために、c−met発現をノックダウンするためにshRNAを発現するように誘導されうるEBC-1安定クローンを、c−metを標的とするテトラサイクリン誘導性短型ヘアピンRNA(shRNA)を保持するレトロウイルスを使用して生成した。EBC-1非小細胞肺癌(NSCLC)細胞株はc-metについて高度に増幅され、リガンド非依存性様式で細胞及び腫瘍の増殖を制御するように働くc-metレセプターを大量に発現する。EGFR遺伝子はEBC-1細胞株の野生型である。
テトラサイクリンアナログドキシサイクリンによるshRNA発現の誘導の後に、クローンEBC-1shMet-3.15は、c−met発現の効率的な、ほぼ完全なノックダウンを示した。また、Cell Titer Glo又はアラマーブルー細胞生存率アッセイにおいて分析されるように、shRNAの誘導はこれらの細胞の増殖を妨げた。続いてアポトーシスが起こる増殖静止は、shRNA誘導の24〜72時間後のEBC1 shMet3.15細胞において観察された。同じ細胞株クローンは、(動物がエルロチニブにて処置されなかったことを除いて)基本的に上記の通りに動物モデルに移植され、腫瘍形成させた。これらの動物の腫瘍形成後にshRNA発現を誘導すると、インビボで腫瘍退縮が生じた。これらの結果は、c−met発現がインビトロ及びインビボでのEBC-1細胞の増殖および生存に必須であることを示した。
EBC-1shMet-4.5クローンは、DoxによるshRNA発現の誘導後にc−met発現の部分的なノックダウンを示した。また、c−met発現の低減により、このクローンの細胞増殖および生存に対して以下のような効果が生じた。インビトロ細胞生存率アッセイにてアッセイした場合、shRNA発現の誘導により細胞数が減少し、異種移植片モデルの腫瘍形成の後にshRNA発現を誘導すると腫瘍増殖が阻害されたが、腫瘍退縮は生じなかった。
EBC-1shMet-4.5NSCLC細胞株をヌードマウスに接種し、次いで移植した細胞がおよそ300mm3の腫瘍を形成するまで、動物の腫瘍増殖をモニターした。次いでマウスを以下の4つの処置アームに分けた;グループ1:ベヒクル、グループ2:ドキシサイクリン(Dox)、グループ3:エルロチニブ(100mg/kg)、およびグループ4:エルロチニブ+Dox(表6を参照)。
19日目に、エルロチニブによるマウスの処置は腫瘍増殖に対して効果がなかった(−6%の腫瘍阻害;図4)のに対して、Dox(met発現を阻害する)による処置はベヒクルコントロールと比較して腫瘍増殖が38%低減し(図4;スチューデントt検定、p=0.084)、これは統計学的な有意差に僅かに足りない。しかしながら、腫瘍増殖の低減は、エルロチニブのみ群と比較して統計学的に有意であった(スチューデントt検定、p=0.004;図4)。エルロチニブとDoxの組合せにより有効性が劇的に改善され、19日目にベヒクルコントロールと比較して腫瘍増殖の68%が低減された(スチューデントt検定、p=0.001;図4)。エルロチニブとDoxの組合せによる処置により、Doxのみによる処置(スチューデントt検定、p=0.03)又はエルロチニブのみによる処置(スチューデントt検定、p<0.0001)と比較して、腫瘍増殖が統計学的に有意に低減された。
Doxとエルロチニブによる処置により、部分的な応答(PR;研究の間の何れかの日での開始腫瘍体積の50%超かつ100%未満の腫瘍退縮として定められる)と、完全な応答(CR;研究の間の何れかの日での開始腫瘍体積からの100%の腫瘍退縮として定められる)の値が高くなった。具体的には、エルロチニブとDoxの組合せにより1PRと3CRが生じたのに対して、エルロチニブによる処置によりPR又はCRは生じず、そしてDoxによる処置(c-Metノックダウン)により2PRと1CRが生じた。これらのデータは、たとえ個々の動物腫瘍データの分析によりすべての腫瘍がc−met阻害とエルロチニブの組合せに強く応答するわけではないことが明らかにされている場合であっても、met阻害(Dox処置)とEGFR阻害(エルロチニブ処置)の組合せは、c−met又はEGFR単独の阻害より、完全な腫瘍退縮を誘導するようであることを示す。
材料および方法
試験材料。 抗c-met一価性モノクローナル抗体MetMAb(rhuOA5D5v2)は、Genentech, Inc.のAntibody Engineering部門によって、10.6mg/mlの透明な液体状態で提供された。ベヒクルは、10mM ヒスチジン琥珀酸塩、4%トレハロース二水和物、0.02%ポリソルベート20、pH5.7とした。エルロチニブ(TarcevaTM)は、GenentechのOSI Pharmaceuticals to the Formulations部門から提供を受け、十分な量のベヒクル(メチルセルローストゥイーン(MCT))と共に計量した。すべての材料は、Genentech, Inc.からVan Andel Research Institute (VARI; Grand Rapids, MI)へ出荷され、動物処置の前に調製された。材料は、4℃〜8℃の温度範囲に維持するように設定された冷蔵庫に保存した。NCI−H596細胞株はAmerican Type Culture collection (Manassas, VA)から入手した。
マウスは、クリッパーにて背面領域を剃り、接種のために準備した。次の日、各マウスの右肩甲下領域に、5×105のNCI-H596細胞を皮下注射した。100mm3の平均体積に達するまで、腫瘍をモニターした。
マウスの取扱い及びすべての試験は、Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC)ガイドラインに従った。
腫瘍体積(mm3)=(長さ×幅2)×0.5
%Ihn=100×[腫瘍サイズ(ベヒクル)−{腫瘍サイズ(MetMAb)/腫瘍サイズ(ベヒクル)}]
腫瘍発生(TI)は、17日目の各グループの測定可能な腫瘍の数によって決定した。部分的な退縮(PR)は、研究の間の何れかの日での開始腫瘍体積の50%超かつ100%未満の腫瘍退縮として定められる。完全な退縮(CR)は、研究の間の何れかの日での開始腫瘍体積からの100%の腫瘍退縮として定められる。
平均腫瘍体積および平均値の標準誤差(SEM)は、JMPソフトウェア、バージョン5.1.2(SAS Institute; Cary, NC))を使用して算出した。データ分析およびスチューデントt検定又はダネットt検定用いたp値の生成もまた、JMPソフトウェア、バージョン5.1.2を使用して行った。
カプラン-マイアー生存曲線は、各グループについて腫瘍倍加時間について描いた。グループ間のペアワイズ比較を行った。統計的な比較はログ-ランク検定にて行った。データ分析はJMPソフトウェアを使用して実行した。
NCI−H596 NSCLC細胞株をhu−HGF−Tg−C3H−SCID動物に接種し、移植した細胞がおよそ100mm3の腫瘍を形成するまで、動物の腫瘍増殖をモニターした。次いでマウスを4つの処置アームに分類した;グループ1:ベヒクル、グループ2:エルロチニブ、グループ3:MetMAb、およびグループ4:エルロチニブ+MetMAb(表7を参照)。MetMAbにて処置したグループは1回のみ投与したのに対して、エルロチニブにて処置したグループは2週間毎日投与し、その後処置を停止し、週に2〜3回腫瘍増殖をモニターした。また、C3H-SCIDコントロールマウスも接種し、ヒトHGFに曝されないNCI−H596腫瘍の増殖についてモニターした。
20日目に、MetMAbによるマウスの処置により、ベヒクルコントロールと比較して、腫瘍増殖の67%が減少し(図5;スチューデントt検定、p=0.0044)、これは先のNCI−H596モデルにおけるMetMAbの試験と一致していた。20日目に、エルロチニブによるNCI−H596腫瘍保持マウスの処置により、ベヒクルコントロールと比較して、腫瘍増殖の統計学的に有意な減少が生じた(図5;スチューデントのt検定、p=0.165)。20日目に、MetMAbとエルロチニブの組合せによる処置により何れかの薬剤単独よりも有効性の劇的な改善が示され、ベヒクルコントロールと比較して、腫瘍増殖の89%が減少した(図5;スチューデントt検定;MetMAb+エルロチニブ対ベヒクル、20日目−p=0.0035;MetMAb+エルロチニブ対エルロチニブ単独、26日目−p=0.0009;MetMAb+エルロチニブ対MetMAb単独、48日目p=0.0149)。
材料および方法
マイクロアレイ分析: 3つのマイクロアレイ実験は、Affymetrix HGU133Plus2.0アレイを使用して実施した。いずれの場合においても、相補的RNAの調製、アレイハイブリダイゼーションおよびその後のデータ分析は、基本的にHoffman EP et al., Nat Rev Genet 5:229-37 (2004)に記載されるように、製造業者のプロトコールを使用して実施した。Partek GS6.3bソフトウェアパッケージ(Partek, Saint Louis, MO)において実行されるように、Affymetrix CELファイルの形式の生の発現データを、一つのグループとして正規化(Irizarry, Biostatistics, 2003, PubMed ID 12925520)し、正規化RMA方法を使用して個々の試料についてのデータ間の生物源でない変化を除いた。結果として生じた正規化したlog2スケール発現値は以下の通りに分析し、プロットのために線状スケールに移した。
抗TGF-αポリクローナル抗体(R&D Systems, Minneapolis, MN)をリン酸緩衝生理食塩水(PBS)に1μg/mlに希釈し、4℃で一昼夜インキュベートして、ELISAプレート(25μL/ウェル、MaxiSorp表面を有する384ウェルプレート、Nunc, Neptune, NJ)にコートした。洗浄バッファ(PBS/0.05%ツイーン20)にて6回洗浄した後、プレートをPBS/0.5%ウシ血清アルブミン(BSA)にて1〜2時間ブロックした。この及び今後すべてのインキュベートは軌道シェーカー上で室温で行った。試料は、試料バッファ(PBS/0.5%BSA/0.5%ツイーン20/0.2%ウシγグロブリン/0.25%CHAPS/5mM EDTA/10ppm プロクリン)を使用して希釈した。同じバッファを使用して、組換えヒトTGF-α(R&D Systems)の段階希釈液を調製し、標準曲線範囲を400〜12.5pg/mlとした。標準曲線の高、中、低領域で定量化するために予め希釈した凍結コントロール試料を解凍した。プレートを6回洗浄し、試料、標準物質およびコントロールを加え(25μL/ウェル)、2時間インキュベートした。プレートを12回洗浄した後、試料バッファ中に1μg/mlに希釈したビオチン化ヤギ抗TGFαポリクローナル抗体(R&D Systems)(25μL/ウェル)を加えた。1時間のインキュベートの後、プレートを12回洗浄した。次いで、試料バッファ中に1/4000に希釈したストレプトアビジン-西洋ワサビペルオキシダーゼ(GE Healthcare, Piscataway, NJ)を加えた(25μL/ウェル)。最後に30分間インキュベートした後、プレートを12回洗浄し、テトラメチルベンジジン(TMB、Kirkegaard & Perry Laboratories, Gaithersburg, MD)を加えた。室温で、6〜8分間発色させ、1M リン酸の添加によって反応を止めた。マイクロプレート読み取り機(450nm、620対照)にて吸光度の値を求め、標準曲線の4-パラメーターフィットから試料濃度を算出した。
HGF処置によってc−metを活性化すると、リガンド反応性NSCLC細胞株Hop-92およびNCI−H596においてEGFRリガンド(HB-EGF、エピレギュリン、アンフィレギュリン、TGFα)のmRNA発現が増えた(図9A)。これに対して、リガンド非依存性NSCLC細胞株EBC1細胞ではshRNAを用いてc−met発現を阻害すると、それらEGFRリガンドのmRNA発現が低減された(図9B)。dox処置したEBC1shMet細胞株4−12をHGF処置すると、EGFRリガンドの発現が回復した(図9C)。EGFRリガンドの低減は、GFPに対するsiRNAを発現したコントロールEBC-1細胞では起こらなかった(図9D)。EBC-1-shMet異種移植片腫瘍においてc−met発現が減少すると、処置後3日目に腫瘍TGFαタンパク質レベルが減少した(図9E)。
これらのデータは、c-met活性は、c-met増幅HGF非依存性細胞(EBC1)並びにHGF依存性細胞株(Hop92およびNCI-H596)においてEGFRシグナル伝達を制御しうることを示す。より具体的には、c-metシグナル伝達はEGFRファミリのリガンドの発現を増やし、維持した。そして、これらのリガンドが自己分泌様式で自身のEGFRファミリのレセプターを刺激しうる。これに対して、c−metシグナル伝達が阻害されると、EGFRリガンドの発現が低減した。この自己分泌ループに対する干渉はおそらく、実施例2に記載の、c−metノックダウン後のEBC1細胞において観察されるpEGFRの低減(図10)と、c-metノックダウン後のEGFRのリガンド誘導性活性化への感度の増加の原因である。これらの結果から、EGFR活性は、HGF依存性及びHGF非依存性の腫瘍においてc−metシグナル伝達活性の喪失を補いうることが示唆され、これは腫瘍がEGFRとc−met阻害薬の組合せで処置される場合に観察される異種移植片腫瘍有効性の劇的な増加と一致している(実施例4)。
材料および方法
pEGFRおよびHer3タンパク質のウエスタンブロット分析: 細胞は1×106の密度でプレーティングし、RPMI 1640中10%Tet認可FBS中で37℃で18時間インキュベートした。次の日に、培地を取り除き、0.1ug/mlのDox有無の新鮮通常培地と交換した。培地交換の24、48および72時間後に、タンパク質は、冷温のTBSにてすすいだ後に、1%NP−40/TBS/ロッシュの完全プロテアーゼインヒビター反応混液/シグマのホスファターゼ阻害剤反応混液1および2にて抽出した。15ugの総タンパクは、MOPSバッファを有するインビトロゲンの4−12%ビス-トリスNUPADEゲルに流し、インビトロゲンのiBlotによってPVDFに転写した。メンブランは、リン酸化されたタンパク質(5%BSA/TBST中1:1000の希釈のpEGFR(Y1173) Upstate04−341)についてイムノブロットし、ピアスのリストアストリッピングバッファにて剥離し、次いで、総タンパク(5%脱脂粉ミルク及びTBST中、1:10000希釈のc-met:SCBT sc-10;1:2000希釈のHer3:SCBT sc-285)について再プローブした。タンパク質は、製造業者の指示に従ってアマシャムのECLプラス化学発光キットを用いて、アマシャムのHRPコンジュゲート二次抗体(Amersham 抗ウサギHRP、#NA934V;Amersham抗マウスHRP)により検出した。
shRNAによるc−met発現のノックダウンによりpEGFRレベルが低減し、HER3タンパク質レベルが有意に増加した(図10A)。FACS分析により、c−metノックダウン後の表面HER3レベルの増加が明らかになった(図10B)。EBC-1shMet-4.12異種移植片腫瘍でのC-metノックダウンによりHER3タンパク質レベルが増加した(図10C)。
これらのデータは、c−met活性がHER3発現レベルを制御しうることを示す。具体的には、c-metが阻害されると、HER3タンパク質レベルの増加とpEGFRレベルの減少が起こった。c−met阻害後のpEGFRの減少はおそらくEGFRリガンドによる自己分泌シグナル伝達の減少によるためであり(図9参照)、HER3レベルの増加はエルロチニブ感度を増しうる。これは他者によっても示されている(例としてYauch et al. Clin Cancer Res (2005) 11:8686-98)。これらの結果からHER3活性(例えばHER2によるシグナル伝達)がc-metシグナル伝達のその後の阻害を増やしうることが示唆され、さらにc-metとHER3阻害薬による併用療法の癌治療への使用を裏付けるものである。
材料および方法
EBC-1shMet細胞を、RPMI1640培地(Clontechカタログ番号631107の10%TetフリーFBSを含む)中に5000/ウェルで、黒色壁の96ウェルプレートに播き、プレートを終夜インキュベートした。培地を新鮮培地+/−100ng/ml doxに置き換え、プレートを48時間インキュベートした。次いで、EGFRリガンドを下記の終濃度で添加し、プレートをさらに48時間インキュベートし、その後、本明細書中に記載のようにCell TiterGlo(Promega#G7570)を用いて細胞数を決定した:Dox+100ng/ml HGF;Dox+50nM TGFα;Dox+5ng/ml HGF;及びDox+1nM TGFα。
shRNAによるc-met発現のノックダウンにより細胞数が有意に減少したことから、細胞生存率と増殖の減少が示唆される。EGFRリガンドHGFおよびTGFαは、用量依存的に細胞数を救出することができたが、HGFはTGFαより多少多くの細胞数を救出したようであった。これらの結果は、EGFR経路活性化が、c−metシグナル伝達活性が阻害されている細胞の細胞増殖および細胞生存率を回復させうることを示した。ゆえに、EGFR(および/または他のHERファミリメンバー)シグナル伝達は、c−metシグナル伝達活性の喪失を補った。これらの結果は、c−metとEGFR阻害薬による併用療法の使用を裏付けるものであり、腫瘍がEGFRとc−met阻害薬の組合せにより処置される場合に観察される、異種移植片腫瘍有効性の劇的な増加と一致している(実施例4)。
材料および方法
細胞: NCI-H596細胞は、アメリカ培養細胞保存機関(ATCC)から入手し、10%ウシ胎児血清(FBS;Sigma, St. Louis, MO)及び2mM L-グルタミンを添加したRPMI1640中で維持した。細胞アッセイ培地は、実験に応じて後述するように変えた。
細胞溶解物は、直接ゲルに流すか(図12、40μg/レーンの等価溶解物濃度)、又は免疫沈降した(図13、1.6mg/試料の等価溶解物濃度)。免疫沈降は、アガロースコンジュゲートcMET:(Santa Cruz Biotechnology カタログ番号SC-161AC)、EGFR(Neomarkers MS−609−P)+プロテインAセファロースFastFlowビーズといった各々の抗体を用いて行った。試料を4℃の180°ローターに一昼夜置き、その後、溶解バッファにて3回洗浄し、続いて、β-メルカプトエタノールを含むSDS試料バッファ中で変性させた。試料を95℃で5分間熱し、その後、4−12%勾配ゲルに流し、標準的なウェスタンブロット手順を用いてニトロセルロースメンブランに転写した。文書中に示されるように、メンブランは5%ミルク/TBST中で室温で1時間ブロックし、次いで、以下のホスホ-抗体にて4℃で一昼夜プローブした:p−c−met:pTyr 4G10(Upstate カタログ番号05-777);pEGFR(Cell Signaling Technologies カタログ番号2264)。メンブランはリストアストリッピングバッファ(Pierce カタログ番号21059)にて剥離し、総タンパク質に対する抗体:cMET DL-21(Upstate Biotech カタログ番号05-238);EGFR(MBL カタログ番号MI-12-1);βアクチン(Santa Cruz Biotechnologies カタログ番号SC-1616)にて再プローブした。二次抗体はJackson Laboratoriesから入手した。イムノブロットは製造業者の推奨に従って、ECL法を用いて検出した。
HGFによるc-metの活性化によりEGFRの活性化が起こる
c−metの活性化によりNCI−H596細胞の多数のEGFRリガンドの上方制御が起こったので、我々は、c−met活性化によりEGFR経路のトランス活性化が生じることを仮定した。この仮説を試験するために、NCI−H596 NSCLC細胞をインビトロでHGFのある場合とない場合で処置し、EGFR経路活性化を調べるために細胞溶解物を10分、24、48および72時間目に分析した。c−metシグナル伝達が活性化されるとEGFRシグナル伝達の活性化が生じた(図12)。pEGFRレベルの誘導はHGF刺激の10分後という早い時期に観察されたことから、c−met活性化が直接EGFRシグナル伝達をトランス活性化することが示唆される(図12)。pEGFRレベルの増加は遅い時期に観察された(HGF刺激の24、48および72時間後)(図12)。遅発型のpEGFR活性化動態は、c−met活性によりEGFRリガンドの発現が増加することを示すデータと一致しており、遅発型(24時間超)のEGFR経路活性化の原因となりうる。このモデルにおいて、ここで示されるデータと一致して、EGFRの活性化は遅い時点で増加し、比較的高く維持することが予測される。
共免疫沈降実験(co−IP)は、c−metおよび/またはEGFR活性によりEGFRとc−metとが物理的に会合しうるか否かを決定するために実施した。NCI-H596細胞を、リガンド無し、TGFα単独、HGF単独、又はTGF-a+HGFにて10分間又は24時間処置した。この処置の後、c−metを免疫沈降し、その後、ホスホチロシン(4G10)、EGFR又はc−met何れかについてウェスタンブロッティングを行った。
何れのリガンドも存在しない場合、及びpc−metおよびpEGFRレベルが低下する遅い時点では、C-met免疫沈降はEGFRを下げたことから、c−metがc−met又はEGFR経路活性化状態とは無関係にEGFRと相互作用したことを示す(図13)。ホスホチロシンについてブロットしたc−met IPsにより、EGFRとc−metの活性化はリガンド依存性であり、24時間後に減弱したことが明らかになった。HGFによるc−metの活性化によりpEGFRの共免疫沈降が起こった。しかしながら、pEGFRレベルは、細胞がTGFα単独により又はHGFとの組合せにより刺激されたときに観察されるpEGFRより非常に低かった。これらそれぞれのリガンドによるc−met又はEGFRの活性化は、各々の経路が互いに独立して活性化されることを示した。
TGFαの存在下にて生育されたNCI-H596細胞は、EGFR阻害薬エルロチニブ(TARCEVATM)に感受性がある。これは、エルロチニブおよびTGFαの存在下で生育した場合に細胞生存率が下がったことによって示された。c−met経路の活性化によりエルロチニブに対するNCI−N596細胞の応答が変化するか否かを決定するために、細胞をTGFαにて刺激し、エルロチニブおよび/またはHGFにて処置し、その後、細胞生存率を分析した。
低レベルのHGFは、エルロチニブに対する細胞感度に対して適度な効果を示した。しかしながら、HGF濃度の増加につれて、用量依存的にエルロチニブへの感度が劇的に低減した(図14)。これは、これらの条件下において細胞生存率が増加することによって明らかになった。これらのデータは、Met経路のHGF活性化がエルロチニブに対するNCI−H596細胞の応答を減弱するために十分であることを示す。
c−met阻害薬とEGFR阻害薬の組合せにより、HGFおよびTGFαによって同時活性化される細胞株の細胞生存率が低減したか否かを決定するために、NCI−H596細胞生存率アッセイを、HGF、TGFα、および様々な用量のエルロチニブおよび/またはc−metアンタゴニスト抗体MetMAb(1uM)の存在下で実施した。
HGFの存在によりエルロチニブに対するNCI−H596細胞の応答が減弱された(図15)。MetMAbによってc−met経路が阻害されるとエルロチニブ感度が劇的に回復したので(図15)、c−metとEGFR阻害薬による処置はNCI−H596細胞株における細胞生存率に影響を与える組合せ効果を有しうることが示唆される。
材料および方法
NCI−H596 hu−HGF−Tg−SCID異種移植片腫瘍: NCI-H596異種移植片は、実施例4に記載したように、hu−HGF−Tg−SCIDマウスに定着させた。腫瘍は処置までに200〜300mm3にまで成長させた。投与は表8に記載のように行った。簡単に言うと、MetMAb(30mg/kg)又はMetMAbバッファを0時間目(0hr)に投与し、メチルセルローストゥイーンベヒクル(MCT)又はエルロチニブ(150mg/kg)を18時間目(18hr)に投与した。マウスを安楽死させ、腫瘍および血漿を24時間目(24hr)に採取した。腫瘍を液体窒素中でパリパリに凍結し、次いで、免疫沈降及びイムノブロッティングのための処理まで−70℃に保存した。
c−metおよびEGFR経路活性化は、NCI−H596 hu−HGF−Tg−SCIDマウス異種移植片モデルにおいて生成され、EGFR阻害薬、c−met阻害薬およびEGFRとc−met阻害薬の組合せにより処置した異種移植片腫瘍において調べた。前述したように、20のhu-HGF-Tg-SCIDマウスにNCI−H596細胞を接種し、腫瘍を定着させた。一旦腫瘍が200〜300mm3のサイズに達すると、マウスを、腫瘍体積に基づいて4つのグループに均等に分類し、投与を開始した(表8)。MetMAbは腫瘍採取の24時間前に投与したのに対して、エルロチニブは採取の6時間前に投与した。投与時間は、各治療薬の相対的な半減期に基づいて選択した。24時間目に、マウスを安楽死させ、腫瘍を採取して、腫瘍を、リン酸化及び総Met、EGFR、AktおよびERK-1/2に対する免疫沈降(IP)および/またはイムノブロットのために処理した。
MetMAb単独による処置により、ベヒクルコントロールの12%(+/−3.6%)までc−metリン酸化が阻害され(図16)、MetMAbとエルロチニブによる併用処置によりベヒクルコントロールの6%(+/−3.5%)までc−metリン酸化が阻害された(図16)(p=0.039)。エルロチニブ単独による処置により(図16)c−metリン酸化は減少しなかった。エルロチニブ単独による処置により、ベヒクルコントロールの16%(+/−7.9%)までEGFRのリン酸化が阻害され、エルロチニブとMetMAbによる併用処置によりベヒクルコントロールの19%(+/−15%)までEGFRのリン酸化が阻害された(図16)。また、MetMAb単独による処置により、ベヒクルコントロールの62%(+/−21.6%)までpEGFRがやや阻害された(p=0.006)。
これらの結果は、MetMAbおよびエルロチニブがそれぞれ各々の標的の活性化を効率よく阻害することそして、c−metの遮断はNCI−H596 hu−HGF−Tg−SCIDモデルにおけるpEGFR応答を阻害しうることを示した。
MetMAb単独による処置により、ベヒクルコントロールの72%(+/−27.9%)にまでpAktが阻害され、そしてベヒクルコントロールの72%(+/−40.3%)にまでpERK-1/2が阻害された(図15、表9)。エルロチニブ処置により、ベヒクルコントロールの45%(+/−25.7%)にまでpAktが、39%(+/−8.9%)にまでERK-1/2がそれぞれ強力に阻害された(図16、表9)。MetMAbとエルロチニブの組合せによる処置により、ベヒクルコントロールの24%(+/−13.8%)にまでpAktが、ベヒクルコントロールの29%(+/−2.9%)にまでpERK-1/2がそれぞれ向上した阻害を示した(図15、表9)。これらの結果は、MetMAbとエルロチニブによる併用処置は、MetMAb単独又はエルロチニブ単独による処置よりも効果的に下流のシグナル伝達経路を阻害したことを示した。
(1) c−metおよびEGFRは、NSCLC細胞株および腫瘍において同時発現した。
(2) c-met活性はEGFRリガンドおよびpEGFRの発現をポジティブに制御した。
(3) c-met活性はHER3の発現をネガティブに制御した。
(4) TGFα処置は、c−met阻害によって引き起こされる生存率の喪失から、リガンドとは無関係にc−metが活性化された細胞を救出した。
(5) c−met活性化は、インビトロ及びインビボでのエルロチニブへの応答を低減した。
Bhargava, M, Joseph, A, Knesel, J, Halaban, R, Li, Y, Pang, S, Goldberg, I, Setter, E, Donovan, MA, Zarnegar, R, Michalopoulos, GA, Nakamura, T, Faletto, D. and Rosen, E. (1992). Scatter factor and hepatocyte growth factor: activities, properties, and mechanism. Cell Growth Differ., 3(1); 11-20.
Kong-Beltran, M., Seshagiri, S., Zha, J., Zhu, W., Bhawe, K., Mendoza, N., Holcomb, T., Pujara, K., Stinson, J., Fu, L., Severin, C., Rangell, L., Schwall, R., Amler, L., Wickramasinghe, D., Yauch, R. (2006). Somatic Mutations Lead to an Oncogenic Deletion of Met in Lung Cancer. Cancer Res, 66 (1); 283-289.
Peschard, P., .Fournier, T.M., Lamorte, L, Naujokas, M.A., Band, H., Langton, W.Y., Park, M. (2001). Mutation of the c-Cbl TKB domain binding site on the Met receptor tyrosine kinase converts it into a transforming protein. Mol Cell., 8(5); 995-1004.
Ridgeway, J.B.B., Presta, L.G., Carter, P. (1996). ‘Knobs-into-holes’engineering of antibody CH3 domains for heavy chain heterodimerization. Protein Engin. 9 (7): 617-621.
Rong, S., Bodescot, M., Blair, D., Dunn, J., Nakamura, T., Mizuno, K., Park, M., Chan, A., Aaronson, S., Vande Woude, G.F. (1992). Tumorigenicity of the met proto-oncogene and the gene for the hepatocyte growth factor. Mol Cell Biol., 12(11); 5152-5158.
Zhang, Y-W., Su, Y., Lanning, N., Gustafson, M., Shinomiya, N., Zhao, P., Cao, B., Tsarfaty, G., Wang, L-M, Hay, R., Vande Woude, G.F. (2005). Enhanced growth of human met-expressing xenografts in a new strain of immunocompromised mice transgenic for human hepatocyte growth factor/scatter factor. Oncogene, 24; 101-106.
Claims (17)
- 被検体に治療的有効量のc−metアンタゴニストとEGFRアンタゴニストを投与することを含む、被検体の癌の治療方法。
- EGFRアンタゴニストが、出典明記によって本明細書中に援用される米国特許第5757498号に記載の以下の一般式Iを有し、
上式中、
mは、1、2又は3であり;
各R1は、水素、ハロ、ヒドロキシ、ヒドロキシアミノ、カルボキシ、ニトロ、グアニジノ、ウレイド、シアノ、トリフロロメチル、及びWが単結合、O、S又はNHである−(C1−C4アルキレン)-W-(フェニル)からなる群からそれぞれ選択され;又は、
各R1は、R9及びシアノに置換したC1−C4アルキルからそれぞれ選択され、このR9は、R5、-OR6、-NR6R6、-C(O)R7、-NHOR5、-OC(O)R6、シアノ、A及び-YR5からなる群から選択され;R5はC1−C4アルキルであり;R6はそれぞれ水素又はR5であり;R7はR5、-OR6又は-NR6R6であり;Aはピペリジノ、モルホリノ、ピロリジノ、4−R6−ピペラジン−1−イル、イミダゾール-1-イル、4-ピリドン−1−イル、−(C1−C4アルキレン)(CO2H)、フェノキシ、フェニル、フェニルスルファニル、C2−C4アルケニル、及び-(C1−C4アルキレン)C(O)NR6R6から選択され;そして、YはS、SO又はSO2であり;このとき、R5、-OR6及び、-NR6R6のアルキル部分は場合によって1〜3のハロ置換基に置換され、R5、-OR6、及び-NR6R6のアルキル部分は場合によって1又は2のR9基によって置換され、そして該任意の置換基のアルキル部分は場合によってハロ又はR9によって置換されているが、ただし2つの異種原子が同じ炭素原子に結合しておらず;
各R1はそれぞれ、-NHSO2R5、フタルイミド-(C1-C4)-アルキルスルホニルアミノ、ベンズアミド、ベンゼンスルホニルアミノ、3-フェニルウレイド、2-オキソピロリジン-1-イル、2,5-ジオキソピロリジン-1-イル、及びR10-(C2-C4)-アルカノイルアミノから選択され、このR10は、ハロ、-OR6、C2-C4アルカノイルオキシ、-C(O)R7、及び-NR6R6から選択され;前記-NHSO2R5、フタルイミド-(C1-C4-アルキルスルホニルアミノ、ベンズアミド、ベンゼンスルホニルアミノ、3-フェニルウレイド、2-オキソピロリジン-1-イル、2,5-ジオキソピロリジン-1-イル、及びR10-(C2-C4)-アルカノイルアミノR1基は、ハロ、C1-C4アルキル、シアノ、メタンスルホニル及びC1-C4アルコキシからそれぞれ選択される1又は2の置換基で置換されていてもよく;又は
2のR1基は、それらが結合している炭素と共同して、O、S及びNから選択される1又は2のヘテロ原子を含む、5-8員環を形成し;
R2は、水素、又は、ハロ、C1-C4アルコキシ、-NR6R6、及び-SO2R5からそれぞれ選択される1から3の置換基で置換されていてもよいC1-C6アルキルであり;
nは1又は2であり、各R3はそれぞれ、水素、ハロ、ヒドロキシ、C1-C6アルキル、-NR6R6、及びC1-C4アルコキシから選択され、該R3基中のアルキル部分は、ハロ、C1-C4アルコキシ、-NR6R6、及び-SO2Rからそれぞれ選択される1から3の置換基で置換されていてもよく;R4はアジド又は-(エチニル)-R11であり、このR11は、水素、又は、ヒドロキシ、-OR6又は-NR6R6で置換されていてもよいC1-C6アルキルである、
請求項1に記載の方法。 - EGFRアンタゴニストが、(6,7-ジメトキシキナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6,7-ジメトキシキナゾリン-4-イル)-[3-(3'-ヒドロキシプロピン-1-イル)フェニル]-アミン;[3-(2'-(アミノメチル)-エチニル)フェニル]-(6,7-ジメトキシキナゾリン-4-イル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-(6-ニトロキナゾリン-4-イル)-アミン;(6,7-ジメトキシキナゾリン-4-イル)-(4-エチニルフェニル)-アミン;(6,7-ジメトキシキナゾリン-4-イル)-(3-エチニル-2-メチルフェニル)-アミン;(6-アミノキナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-(6-メタンスルホニルアミノキナゾリン-4-イル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-(6,7-メチレンジオキシキナゾリン-4-イル)-アミン;(6,7-ジメトキシキナゾリン-4-イル)-(3-エチニル-6-メチルフェニル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-(7-ニトロキナゾリン-4-イル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-[6-(4'-トルエンスルホニルアミノ)キナゾリン-4-イル]-アミン;(3-エチニルフェニル)-{6-[2'-フタルイミド-eth-1'-イル-スルホニルアミノ]キナゾリン-4-イル}-アミン;(3-エチニルフェニル)-(6-グアニジノキナゾリン-4-イル)-アミン;(7-アミノキナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-(7-メトキシキナゾリン-4-イル)-アミン;(6-カルボメトキシキナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(7-カルボメトキシキナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;[6,7-ビス(2-メトキシエトキシ)キナゾリン-4-イル]-(3-エチニルフェニル)-アミン;(3-アジドフェニル)-(6,7-ジメトキシキナゾリン-4-イル)-アミン;(3-アジド-5-クロロフェニル)-(6,7-ジメトキシキナゾリン-4-イル)-アミン;(4-アジドフェニル)-(6,7-ジメトキシキナゾリン-4-イル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-(6-メタンスルホニル-キナゾリン-4-イル)-アミン;(6-エタンスルファニル-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6,7-ジメトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニル-4-フルオロ-フェニル)-アミン;(6,7-ジメトキシ-キナゾリン-4-イル)-[3-(プロピン-1'-イル)-フェニル]-アミン;[6,7-ビス-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-(5-エチニル-2-メチル- フェニル)-アミン;[6,7-ビス-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-(3-エチニル-4-フルオロ- フェニル)-アミン;[6,7-ビス-(2-クロロ-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-(3-エチニルフェニル)-アミン;[6-(2-クロロ-エトキシ)-7-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-(3- エチニルフェニル)-アミン;[6,7-ビス-(2-アセトキシ-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-(3-エチニルフェニル)-アミン;2-[4-(3-エチニルフェニルアミノ)-7-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-キナゾリン-6-イルオキシ]-エタノール;[6-(2-アセトキシ-エトキシ)-7-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-(3- エチニルフェニル)-アミン;[7-(2-クロロ-エトキシ)-6-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-(3- エチニルフェニル)-アミン;[7-(2-アセトキシ-エトキシ)-6-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-(3-エチニルフェニル)-アミン;2-[4-(3-エチニルフェニルアミノ)-6-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-キナゾリン-7-イルオキシ]-エタノール;2-[4-(3-エチニルフェニルアミノ)-7-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-6-イルオキシ]-エタノール;2-[4-(3-エチニルフェニルアミノ)-6-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-7-イルオキシ]-エタノール;[6-(2-アセトキシ-エトキシ)-7-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-(3-エチニルフェニル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-{6-(2-メトキシ-エトキシ)-7-[2-(4-メチル-ピペラジン- 1-イル)-エトキシ]-キナゾリン-4-イル}-アミン;(3-エチニルフェニル)-[7-(2-メトキシ-エトキシ)-6-(2-モルホリン-4-イル)-エトキシ)-キナゾリン-4-イル]-アミン;(6,7-ジエトキシキナゾリン-1-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6,7-ジブトキシキナゾリン-1-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6,7-ジイソプロポキシキナゾリン-1-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6,7-ジエトキシキナゾリン-1-イル)-(3-エチニル-2-メチル-フェニル)-アミン;[6,7-ビス-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-1-イル]-(3-エチニル-2-メチル- フェニル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-[6-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-7-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-1-イル]-アミン;[6,7-ビス-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-キナゾリン-1-イル]-(3-エチニルフェニル)-アミン;2-[4-(3-エチニルフェニルアミノ)-6-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-7-イルオキシ]-エタノール; (6,7-ジプロポキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6,7-ジエトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニル-5-フルオロ-フェニル)-アミン;(6,7-ジエトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニル-4-フルオロ-フェニル)-アミン;(6,7-ジエトキシ-キナゾリン-4-イル)-(5-エチニル-2-メチル-フェニル)-アミン;(6,7-ジエトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニル-4-メチル-フェニル)-アミン;(6-アミノメチル-7-メトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6-アミノメチル-7-メトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6-アミノカルボニルメチル-7-メトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6-アミノカルボニルエチル-7-メトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6-アミノカルボニルメチル-7-エトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6-アミノカルボニルエチル-7-エトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6-アミノカルボニルメチル-7-イソプロポキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6-アミノカルボニルメチル-7-プロポキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6-アミノカルボニルメチル-7-メトキシ-キナゾリン-4-イル)-(3- エチニルフェニル)-アミン;(6-アミノカルボニルエチル-7-イソプロポキシ-キナゾリン-4-イル)-(3- エチニルフェニル)-アミン;及び、(6-アミノカルボニルエチル-7-プロポキシ-キナゾリン-4-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6,7-ジエトキシキナゾリン-1-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-[6-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-7-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-1-イル]-アミン;[6,7-ビス-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-キナゾリン-1-イル]-(3-エチニルフェニル)-アミン;[6,7-ビス-(2-メトキシ-エトキシ)-キナゾリン-1-イル]-(3-エチニルフェニル)-アミン;(6,7-ジメトキシキナゾリン-1-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミン;(3-エチニルフェニル)-(6-メタンスルホニルアミノ-キナゾリン-1-イル)-アミン;及び、(6-アミノ-キナゾリン-1-イル)-(3-エチニルフェニル)-アミンからなる群から選択される式Iに記載の化合物である、請求項2に記載の方法。
- 式IのEGFRアンタゴニストが、N-(3-エチニルフェニル)-6,7-ビス(2-メトキシエトキシ)-4-キナゾリンアミンである、請求項2に記載の方法。
- EGFRアンタゴニストであるN-(3-エチニルフェニル)-6,7-ビス(2-メトキシエトキシ)-4-キナゾリンアミンがHCl塩の形態である、請求項4に記載の方法。
- EGFRアンタゴニストであるN-(3-エチニルフェニル)-6,7-ビス(2-メトキシエトキシ)-4-キナゾリンアミンが、およそ6.26、12.48、13.39、16.96、20.20、21.10、22.98、24.46、25.14および26.91に2-θ度で表される特徴的なピークを有するX線粉体回折パターンを表す実質的に均質な結晶多形体形態である、請求項4に記載の方法。
- c−metアンタゴニストが抗体である、請求項1に記載の方法。
- 抗体が一価抗体である、請求項7に記載の方法。
- 抗体が一価性で、Fc領域を含み、このとき該Fc領域は第一および第二のポリペプチドを含み、該第一ポリペプチドは図7(配列番号:17)に示されるFc配列を含み、該第二ポリペプチドは図8(配列番号:18)に示される配列を含む、請求項7に記載の方法。
- 抗体が、(a) 配列:QVQLQQSGPELVRPGASVKMSCRASGYTFTSYWLHWVKQRPGQGLEWIGMIDPSNSDTRFNPNFKDKATLNVDRSSNTAYMLLSSLTSADSAVYYCATYGSYVSPLDYWGQGTSVTVSS(配列番号:19)、図7(配列番号:16)に示されるCH1配列、及び図7(配列番号:17)に示されるFc配列を有する重鎖可変ドメインを含む第一ポリペプチドと、(b) 配列:DIMMSQSPSSLTVSVGEKVTVSCKSSQSLLYTSSQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTITSVKADDLAVYYCQQYYAYPWTFGGGTKLEIK(配列番号:20)、及び図7(配列番号:8)に示されるCL1配列を有する軽鎖可変ドメインを含む第二ポリペプチドと、(c) 図8(配列番号:18)に示されるFc配列を含む第三ポリペプチドとを含む、請求項7に記載の方法。
- 癌が、乳癌、結腸直腸癌、直腸癌、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、腎臓細胞癌、前立腺癌、肝癌、膵癌、軟組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイドカルチノーマ、頭頸部癌、胃癌、メラノーマ、卵巣癌、中皮腫および多発性骨髄腫からなる群から選択される、請求項1に記載の方法。
- 癌が非小細胞肺癌である、請求項11に記載の方法。
- 癌がEGFRアンタゴニスト耐性癌でない、請求項1に記載の方法。
- 被検体に化学療法剤を投与することを更に含む、請求項1に記載の方法。
- EGFRアンタゴニストが、4-(3'-クロロ-4'-フルオロアニリノ)-7-メトキシ-6-(3-モルホリノプロポキシ)キナゾリンである、請求項1に記載の方法。
- EGFRアンタゴニストが、N-[3-クロロ-4-[(3-フルオロフェニル)メトキシ]フェニル]-6-[5-[[[2-(メチルスルホニル)エチル]アミノ]メチル]-2-フラニル]-4-キナゾリンアミンである、請求項1に記載の方法。
- EGFRアンタゴニストが、4-(4-ブロモ-2-フルオロアニリノ)-6-メトキシ-7-(I-メチルピペリジン-4-イルメトキシ)キナゾリンである、請求項1に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US3444608P | 2008-03-06 | 2008-03-06 | |
US4443808P | 2008-04-11 | 2008-04-11 | |
PCT/US2009/036314 WO2009111691A2 (en) | 2008-03-06 | 2009-03-06 | Combination therapy with c-met and egfr antagonists |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2011513427A true JP2011513427A (ja) | 2011-04-28 |
JP2011513427A5 JP2011513427A5 (ja) | 2012-04-19 |
Family
ID=40688402
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010549904A Pending JP2011513427A (ja) | 2008-03-06 | 2009-03-06 | c−met及びEGFRアンタゴニストの併用療法 |
Country Status (20)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US20090226443A1 (ja) |
EP (1) | EP2257293A2 (ja) |
JP (1) | JP2011513427A (ja) |
KR (2) | KR20160095186A (ja) |
CN (1) | CN102014913A (ja) |
AR (1) | AR070861A1 (ja) |
AU (1) | AU2009221808A1 (ja) |
BR (1) | BRPI0906099A2 (ja) |
CA (1) | CA2716851A1 (ja) |
CL (1) | CL2009000542A1 (ja) |
CR (1) | CR11717A (ja) |
EC (1) | ECSP10010527A (ja) |
IL (1) | IL207777A0 (ja) |
MA (1) | MA32177B1 (ja) |
MX (1) | MX2010009669A (ja) |
RU (1) | RU2601892C2 (ja) |
SG (1) | SG188802A1 (ja) |
TW (1) | TW200940064A (ja) |
WO (1) | WO2009111691A2 (ja) |
ZA (1) | ZA201006028B (ja) |
Families Citing this family (62)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8768629B2 (en) | 2009-02-11 | 2014-07-01 | Caris Mpi, Inc. | Molecular profiling of tumors |
MX2008014608A (es) | 2006-05-18 | 2009-03-31 | Molecular Profiling Inst Inc | Sistema y metodo para determinar la intervencion medica individualizada para un estado de enfermedad. |
US20090226455A1 (en) * | 2008-03-06 | 2009-09-10 | Genentech, Inc. | Combination therapy with c-met and her antagonists |
WO2010039248A1 (en) * | 2008-10-01 | 2010-04-08 | Ludwig Institute For Cancer Research | Methods for the treatment of cancer |
MX338038B (es) * | 2008-10-01 | 2016-03-30 | Amgen Res Munich Gmbh | Anticuerpo de una sola cadena bis-especifico de pscaxcd3, cd19xcd3, c-metxcd3, endosialinaxcd3, epcamxcd3, igf-1rxcd3 o fapalfaxcd3 de especies cruzadas. |
EP2344543A2 (en) * | 2008-10-17 | 2011-07-20 | Genentech, Inc. | Treatment method |
AU2010233993A1 (en) | 2009-04-07 | 2011-09-08 | Roche Glycart Ag | Bispecific anti-ErbB-1/anti-c-Met antibodies |
AU2010233994A1 (en) | 2009-04-07 | 2011-09-22 | Roche Glycart Ag | Bispecific anti-ErbB-3/anti-c-Met antibodies |
US8361744B2 (en) | 2009-11-05 | 2013-01-29 | Genentech, Inc. | Methods and composition for secretion of heterologous polypeptides |
TWI518325B (zh) | 2010-02-04 | 2016-01-21 | 自治醫科大學 | 對alk抑制劑具有先抗性或後抗性癌症的識別、判斷和治療 |
EP2545077B1 (en) * | 2010-03-10 | 2018-10-31 | Genmab A/S | Monoclonal antibodies against c-met |
EP2554993A4 (en) * | 2010-04-02 | 2013-12-25 | Fujirebio Kk | MARKER FOR THE DIAGNOSIS OF THE EFFECT OF ANTICREMULATION |
US20130315895A1 (en) * | 2010-07-01 | 2013-11-28 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | COMBINATION OF A cMET INHIBITOR AND AN ANTIBODY TO HGF AND/OR cMET |
MX2013002084A (es) | 2010-08-31 | 2013-05-09 | Genentech Inc | Biomarcadores y metodos de tratamiento. |
WO2012064967A2 (en) * | 2010-11-10 | 2012-05-18 | Cedars-Sinai Medical Center | Cancer cell-derived receptor activator of the nf-kb ligand drives bone and soft tissue metastases |
AU2012225735B2 (en) | 2011-03-04 | 2016-03-10 | Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited | Amino-quinolines as kinase inhibitors |
CN102796109B (zh) * | 2011-05-23 | 2015-10-07 | 复旦大学 | 4-氨基喹唑啉化合物及其制备方法和用途 |
US20140222443A1 (en) * | 2011-06-07 | 2014-08-07 | Kathleen Danenberg | Molecular profiling for cancer |
WO2013003680A1 (en) | 2011-06-30 | 2013-01-03 | Genentech, Inc. | Anti-c-met antibody formulations |
TWI547494B (zh) | 2011-08-18 | 2016-09-01 | 葛蘭素史克智慧財產發展有限公司 | 作為激酶抑制劑之胺基喹唑啉類 |
US20140234328A1 (en) * | 2011-09-09 | 2014-08-21 | Amgen Inc. | Use of c-met protein for predicting the efficacy of anti-hepatocyte growth factor ("hgf") antibodies in esophageal and gastric cancer patients |
TWI594986B (zh) * | 2011-12-28 | 2017-08-11 | Taiho Pharmaceutical Co Ltd | Antineoplastic agent effect enhancer |
WO2013152252A1 (en) | 2012-04-06 | 2013-10-10 | OSI Pharmaceuticals, LLC | Combination anti-cancer therapy |
TWI592417B (zh) | 2012-09-13 | 2017-07-21 | 葛蘭素史克智慧財產發展有限公司 | 胺基喹唑啉激酶抑制劑之前藥 |
US9695228B2 (en) | 2012-11-21 | 2017-07-04 | Janssen Biotech, Inc. | EGFR and c-Met fibronectin type III domain binding molecules |
EP3447069B1 (en) | 2012-11-21 | 2020-09-23 | Janssen Biotech, Inc. | Bispecific egfr/c-met antibodies |
ES2654100T3 (es) | 2013-02-21 | 2018-02-12 | Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited | Quinazolinas como inhibidores de quinasa |
CN103113365B (zh) * | 2013-02-22 | 2015-06-17 | 苏州大学 | 罗丹宁喹唑啉胺复合物及其制备方法和用途 |
KR102029137B1 (ko) | 2013-03-27 | 2019-10-08 | 삼성전자주식회사 | EGFR 길항제 및 항 c-Met 항체를 포함하는 병용 투여용 약학 조성물 |
KR102049991B1 (ko) | 2013-03-28 | 2019-12-02 | 삼성전자주식회사 | 항 c-Met/항 Her2 이중 특이 항체 |
US20160058751A1 (en) * | 2013-03-28 | 2016-03-03 | Cellworks Group, Inc. | Composition and method for treating cancer |
KR20140119396A (ko) * | 2013-03-29 | 2014-10-10 | 삼성전자주식회사 | 단백질 약물의 액상 제형 |
KR102074421B1 (ko) | 2013-03-29 | 2020-02-10 | 삼성전자주식회사 | 항 c-Met/항 EGFR 이중 특이 항체 |
KR102060540B1 (ko) | 2013-04-03 | 2019-12-31 | 삼성전자주식회사 | 항 c-Met 항체 및 항 Ang2 항체를 포함하는 병용 투여용 약학 조성물 |
CA2923667A1 (en) * | 2013-09-09 | 2015-03-12 | Triact Therapeutics, Inc. | Cancer therapy |
KR20160067966A (ko) | 2013-10-14 | 2016-06-14 | 얀센 바이오테크 인코포레이티드 | 시스테인 조작된 피브로넥틴 iii형 도메인 결합 분자 |
US9717715B2 (en) * | 2013-11-15 | 2017-08-01 | Samsung Electronics Co., Ltd. | Method of combination therapy using an anti-C-Met antibody |
TW201609805A (zh) | 2013-12-23 | 2016-03-16 | 美國禮來大藥廠 | 結合egfr及met之多功能抗體 |
KR102194142B1 (ko) * | 2014-01-20 | 2020-12-23 | 삼성전자주식회사 | 항 c-Met/항 EGFR 이중 특이 항체 및 c-Src 저해제를 포함하는 병용 투여용 약학 조성물 |
KR102291465B1 (ko) * | 2014-01-24 | 2021-08-18 | 삼성전자주식회사 | c-Met 저해제의 효능 예측을 위한 바이오마커 TFF1 |
WO2015139046A1 (en) | 2014-03-14 | 2015-09-17 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides |
JP2017516458A (ja) | 2014-03-24 | 2017-06-22 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | c−met拮抗剤による癌治療及びc−met拮抗剤のHGF発現との相関 |
KR102223502B1 (ko) | 2014-05-09 | 2021-03-05 | 삼성전자주식회사 | 항 c-Met/항 EGFR/항 Her3 다중 특이 항체 및 이의 이용 |
KR102309881B1 (ko) | 2014-11-21 | 2021-10-06 | 삼성전자주식회사 | c-Met 및 EGFR의 이중 저해제 및 IGF-1R 저해제를 포함하는 병용 투여용 약학 조성물 |
IL260937B2 (en) * | 2016-02-06 | 2024-07-01 | Epimab Biotherapeutics Inc | FABS antibodies one by one and their uses |
WO2017201156A1 (en) * | 2016-05-18 | 2017-11-23 | Duke University | Method of treating kras wild-type metastatic colorectal cell carcinoma using cabozantinib plus panitumumab |
AU2017281083B2 (en) | 2016-06-21 | 2022-01-27 | Janssen Biotech, Inc. | Cysteine engineered fibronectin type III domain binding molecules |
TWI782930B (zh) | 2016-11-16 | 2022-11-11 | 美商再生元醫藥公司 | 抗met抗體,結合met之雙特異性抗原結合分子及其使用方法 |
CA3046963A1 (en) | 2016-12-14 | 2018-06-21 | Janssen Biotech, Inc. | Cd8a-binding fibronectin type iii domains |
US10597438B2 (en) | 2016-12-14 | 2020-03-24 | Janssen Biotech, Inc. | PD-L1 binding fibronectin type III domains |
US10611823B2 (en) | 2016-12-14 | 2020-04-07 | Hanssen Biotech, Inc | CD137 binding fibronectin type III domains |
WO2018114776A1 (en) | 2016-12-19 | 2018-06-28 | Merck Patent Gmbh | Combination of a protein kinase inhibitor and an additional chemotherapeutic agent |
CA3053739C (en) | 2017-02-15 | 2023-02-14 | Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. | Pharmaceutical composition |
CN108324990A (zh) * | 2018-02-11 | 2018-07-27 | 温州优墨生物科技有限公司 | 一种骨材料脱细胞的方法及制备脱细胞骨粉的方法 |
MX2020010110A (es) | 2018-03-28 | 2020-11-06 | Mitsubishi Tanabe Pharma Corp | Conjugados de farmacos de agentes de union monoclonales de cmet, y usos de los mismos. |
EP3788079A4 (en) | 2018-05-03 | 2022-12-21 | Shanghai Epimab Biotherapeutics Co., Ltd. | HIGH AFFINITY ANTIBODIES AGAINST PD-1 AND LAG-3 AND B-SPECIFIC BINDING PROTEINS PRODUCED FROM THEM |
MA55978A (fr) * | 2019-05-14 | 2022-03-23 | Janssen Biotech Inc | Polythérapies avec des anticorps anti-egfr/c-met bispécifiques et des inhibiteurs de tyrosine kinase egfr de troisième génération |
CN114340684A (zh) | 2019-09-16 | 2022-04-12 | 瑞泽恩制药公司 | 用于免疫pet成像的放射性标记的met结合蛋白 |
US11781138B2 (en) | 2019-10-14 | 2023-10-10 | Aro Biotherapeutics Company | FN3 domain-siRNA conjugates and uses thereof |
CN114786682B (zh) | 2019-10-14 | 2024-07-16 | Aro生物疗法公司 | 结合cd71的纤维粘连蛋白iii型结构域 |
JP2023553532A (ja) * | 2020-12-11 | 2023-12-21 | エラスカ,インク. | 癌の処置のための併用療法 |
AU2022258566A1 (en) | 2021-04-14 | 2023-10-12 | Aro Biotherapeutics Company | Cd71 binding fibronectin type iii domains |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006015371A2 (en) * | 2004-08-05 | 2006-02-09 | Genentech, Inc. | Humanized anti-cmet antagonists |
JP2007501013A (ja) * | 2003-08-04 | 2007-01-25 | ファイザー プロダクツ インコーポレイティッド | c−Metに対する抗体 |
WO2007115049A2 (en) * | 2006-04-01 | 2007-10-11 | Galaxy Biotech, Llc | Humanized monoclonal antibodies to hepatocyte growth factor |
WO2007126799A2 (en) * | 2006-03-30 | 2007-11-08 | Novartis Ag | Compositions and methods of use for antibodies of c-met |
Family Cites Families (34)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU4128089A (en) * | 1988-09-15 | 1990-03-22 | Rorer International (Overseas) Inc. | Monoclonal antibodies specific to human epidermal growth factor receptor and therapeutic methods employing same |
US6524832B1 (en) * | 1994-02-04 | 2003-02-25 | Arch Development Corporation | DNA damaging agents in combination with tyrosine kinase inhibitors |
US5731168A (en) * | 1995-03-01 | 1998-03-24 | Genentech, Inc. | Method for making heteromultimeric polypeptides |
US5686292A (en) * | 1995-06-02 | 1997-11-11 | Genentech, Inc. | Hepatocyte growth factor receptor antagonist antibodies and uses thereof |
US5747498A (en) * | 1996-05-28 | 1998-05-05 | Pfizer Inc. | Alkynyl and azido-substituted 4-anilinoquinazolines |
UA74803C2 (uk) * | 1999-11-11 | 2006-02-15 | Осі Фармасьютікалз, Інк. | Стійкий поліморф гідрохлориду n-(3-етинілфеніл)-6,7-біс(2-метоксіетокси)-4-хіназолінаміну, спосіб його одержання (варіанти) та фармацевтичне застосування |
US7087613B2 (en) * | 1999-11-11 | 2006-08-08 | Osi Pharmaceuticals, Inc. | Treating abnormal cell growth with a stable polymorph of N-(3-ethynylphenyl)-6,7-bis(2-methoxyethoxy)-4-quinazolinamine hydrochloride |
IL151853A0 (en) * | 2000-04-11 | 2003-04-10 | Genentech Inc | Multivalent antibodies and uses therefor |
US7332580B2 (en) * | 2002-04-05 | 2008-02-19 | The Regents Of The University Of California | Bispecific single chain Fv antibody molecules and methods of use thereof |
US7220410B2 (en) * | 2003-04-18 | 2007-05-22 | Galaxy Biotech, Llc | Monoclonal antibodies to hepatocyte growth factor |
EP2093570A1 (en) * | 2003-06-06 | 2009-08-26 | Genentech, Inc. | Modulating the interaction between HGF beta chain and c-met |
EP1692178A1 (en) * | 2003-12-11 | 2006-08-23 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for inhibiting c-met dimerization and activation |
AU2005249396B2 (en) * | 2004-05-05 | 2011-10-20 | Merrimack Pharmaceuticals, Inc. | Bispecific binding agents for modulating biological activity |
JP2008504809A (ja) * | 2004-06-04 | 2008-02-21 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | Egfr突然変異 |
AU2005327973A1 (en) * | 2005-02-23 | 2006-08-31 | Merrimack Pharmaceuticals, Inc. | Bispecific binding agents for modulating biological activity |
US8383357B2 (en) * | 2005-03-16 | 2013-02-26 | OSI Pharmaceuticals, LLC | Biological markers predictive of anti-cancer response to epidermal growth factor receptor kinase inhibitors |
WO2006101925A2 (en) * | 2005-03-16 | 2006-09-28 | Osi Pharmaceuticals, Inc. | Biological markers predictive of anti-cancer response to epidermal growth factor receptor kinase inhibitors |
US20060216288A1 (en) * | 2005-03-22 | 2006-09-28 | Amgen Inc | Combinations for the treatment of cancer |
ZA200707953B (en) * | 2005-03-25 | 2009-06-24 | Genenthech Inc | Methods and compositions for modulating hyperstabilized c-met |
TW200806675A (en) * | 2006-01-30 | 2008-02-01 | Array Biopharma Inc | Heterobicyclic thiophene compounds and methods of use |
US7723330B2 (en) * | 2006-03-07 | 2010-05-25 | Array Biopharma Inc. | Heterobicyclic pyrazole compounds and methods of use |
US20110053931A1 (en) * | 2006-06-08 | 2011-03-03 | John Gaudino | Quinoline compounds and methods of use |
US10118970B2 (en) * | 2006-08-30 | 2018-11-06 | Genentech, Inc. | Multispecific antibodies |
AU2007353412A1 (en) * | 2006-11-21 | 2008-11-20 | Fox Chase Cancer Center | Anti-EGFR family antibodies, bispecific anti-EGFR family antibodies and methods of use thereof |
ES2529790T3 (es) * | 2007-04-13 | 2015-02-25 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Métodos de tratamiento de cáncer resistente a agentes terapéuticos de ERBB |
WO2009033084A1 (en) * | 2007-09-06 | 2009-03-12 | Array Biopharma Inc. | Pyrazolo-pyridines as tyrosine kinase inhibitors |
MX2011002082A (es) * | 2008-08-29 | 2011-06-20 | Genentech Inc | Diagnostico y tratamientos para los tumores independientes del vegf. |
EP2344543A2 (en) * | 2008-10-17 | 2011-07-20 | Genentech, Inc. | Treatment method |
ES2572728T3 (es) * | 2009-03-20 | 2016-06-02 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anticuerpos anti-HER biespecíficos |
AU2010233993A1 (en) * | 2009-04-07 | 2011-09-08 | Roche Glycart Ag | Bispecific anti-ErbB-1/anti-c-Met antibodies |
US8361744B2 (en) * | 2009-11-05 | 2013-01-29 | Genentech, Inc. | Methods and composition for secretion of heterologous polypeptides |
US20110287003A1 (en) * | 2010-05-14 | 2011-11-24 | Genentech, Inc. | Treatment methods |
US8580764B2 (en) * | 2010-07-01 | 2013-11-12 | Arqule, Inc. | Combinational compositions and methods for treatment of cancer |
MX2013002084A (es) * | 2010-08-31 | 2013-05-09 | Genentech Inc | Biomarcadores y metodos de tratamiento. |
-
2009
- 2009-03-06 KR KR1020167020709A patent/KR20160095186A/ko not_active Application Discontinuation
- 2009-03-06 KR KR1020107022230A patent/KR20100135780A/ko not_active Application Discontinuation
- 2009-03-06 BR BRPI0906099-5A patent/BRPI0906099A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2009-03-06 AR ARP090100815A patent/AR070861A1/es unknown
- 2009-03-06 RU RU2010140795/15A patent/RU2601892C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2009-03-06 SG SG2013013255A patent/SG188802A1/en unknown
- 2009-03-06 CN CN2009801164913A patent/CN102014913A/zh active Pending
- 2009-03-06 MX MX2010009669A patent/MX2010009669A/es not_active Application Discontinuation
- 2009-03-06 TW TW098107445A patent/TW200940064A/zh unknown
- 2009-03-06 US US12/399,866 patent/US20090226443A1/en not_active Abandoned
- 2009-03-06 AU AU2009221808A patent/AU2009221808A1/en not_active Abandoned
- 2009-03-06 JP JP2010549904A patent/JP2011513427A/ja active Pending
- 2009-03-06 CA CA2716851A patent/CA2716851A1/en not_active Abandoned
- 2009-03-06 EP EP09716498A patent/EP2257293A2/en not_active Withdrawn
- 2009-03-06 WO PCT/US2009/036314 patent/WO2009111691A2/en active Application Filing
- 2009-03-06 CL CL2009000542A patent/CL2009000542A1/es unknown
-
2010
- 2010-08-24 IL IL207777A patent/IL207777A0/en unknown
- 2010-08-24 ZA ZA2010/06028A patent/ZA201006028B/en unknown
- 2010-09-30 MA MA33214A patent/MA32177B1/fr unknown
- 2010-10-05 CR CR11717A patent/CR11717A/es not_active Application Discontinuation
- 2010-10-06 EC EC2010010527A patent/ECSP10010527A/es unknown
-
2014
- 2014-03-05 US US14/198,359 patent/US20150056207A1/en not_active Abandoned
-
2015
- 2015-12-17 US US14/973,459 patent/US20160303127A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007501013A (ja) * | 2003-08-04 | 2007-01-25 | ファイザー プロダクツ インコーポレイティッド | c−Metに対する抗体 |
WO2006015371A2 (en) * | 2004-08-05 | 2006-02-09 | Genentech, Inc. | Humanized anti-cmet antagonists |
WO2007126799A2 (en) * | 2006-03-30 | 2007-11-08 | Novartis Ag | Compositions and methods of use for antibodies of c-met |
WO2007115049A2 (en) * | 2006-04-01 | 2007-10-11 | Galaxy Biotech, Llc | Humanized monoclonal antibodies to hepatocyte growth factor |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
INTERNATIONAL JOURNAL OF CANCER, vol. 118, no. 6, JPN6013034028, 2006, pages 1545 - 1555, ISSN: 0002580031 * |
PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA, vol. 104, no. 31, JPN6013034024, 31 July 2007 (2007-07-31), pages 12867 - 12872, ISSN: 0002580029 * |
SCIENCE, vol. 316, no. 5827, JPN6013034025, 18 May 2007 (2007-05-18), pages 1039 - 1043, ISSN: 0002580030 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AR070861A1 (es) | 2010-05-12 |
RU2010140795A (ru) | 2012-04-20 |
KR20100135780A (ko) | 2010-12-27 |
IL207777A0 (en) | 2010-12-30 |
CL2009000542A1 (es) | 2010-11-05 |
WO2009111691A3 (en) | 2009-11-12 |
ECSP10010527A (es) | 2010-11-30 |
US20150056207A1 (en) | 2015-02-26 |
RU2601892C2 (ru) | 2016-11-10 |
EP2257293A2 (en) | 2010-12-08 |
AU2009221808A1 (en) | 2009-09-11 |
CA2716851A1 (en) | 2009-09-11 |
WO2009111691A2 (en) | 2009-09-11 |
CN102014913A (zh) | 2011-04-13 |
MA32177B1 (fr) | 2011-03-01 |
KR20160095186A (ko) | 2016-08-10 |
BRPI0906099A2 (pt) | 2015-07-21 |
US20160303127A1 (en) | 2016-10-20 |
ZA201006028B (en) | 2011-11-30 |
SG188802A1 (en) | 2013-04-30 |
US20090226443A1 (en) | 2009-09-10 |
MX2010009669A (es) | 2010-09-22 |
CR11717A (es) | 2010-11-26 |
TW200940064A (en) | 2009-10-01 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20160303127A1 (en) | Combination therapy with c-met and egfr antagonists | |
ES2850428T3 (es) | Procedimientos de monitorización y tratamiento del cáncer | |
US20110262436A1 (en) | Treatment method | |
RU2689760C2 (ru) | Способы лечения рака с применением антагонистов аксиального связывания pd-1 и vegf антагонистов | |
US20180256711A1 (en) | Methods of treating cancer using anti-ox40 antibodies and pd-1 axis binding antagonists | |
US20160355597A1 (en) | Methods of treating cancer using anti-ox40 antibodies | |
US20090226455A1 (en) | Combination therapy with c-met and her antagonists | |
US20180282415A1 (en) | Combination of a PD-1 Axis Binding Antagonist and an ALK Inhibitor for Treating ALK-Negative Cancer | |
WO2010045344A1 (en) | Combination therapy comprising a c-met antagonist and a vegf antagonist | |
TW202011991A (zh) | 用pd-1軸結合拮抗劑、抗代謝劑及鉑劑治療肺癌之方法 | |
US20220041734A1 (en) | Methods of treating cancer with an anti-pd-l1 antibody | |
JP2010540653A (ja) | Nlrr−1アンタゴニスト及びその使用 | |
AU2015213411A1 (en) | Combination therapy with c-met and EGFR antagonists |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120302 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20120302 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130716 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20131015 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20131022 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20131118 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20131128 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20131216 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20131224 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20140430 |