JP2011509407A - 生きた細胞をフィルタ上で分離して培養するまたはその細胞の遺伝子材料を抽出するための装置と方法 - Google Patents
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Abstract
Description
− フィルタに固定されたフィルタ支持体と、
− 上方開口部と下方開口部を有する区画と、
− フィルタ支持体に力を加えてそのフィルタ支持体を解放するために区画に対して移動する移動手段とを備えることを特徴とする装置を目的とする。
− その特定の細胞と他の細胞の直径の中間の直径の微細孔を持つフィルタを、液体の大半と前記他の細胞を通過させる濾過ステップと、
− 区画内でDNAおよび/またはRNAを溶解させて増幅するステップと、
− 溶解させた細胞の増幅された遺伝子材料をフィルタ上で回収するステップを実施した後に実現することができる。
− フィルタに固定されたフィルタ支持体を、上方開口部と下方開口部を有する区画と一体化するか、その区画に対して移動する移動手段と一体化するステップと、
− フィルタ支持体に力を加えてそのフィルタ支持体を解放するため、移動手段と区画をそれぞれ運動させるステップを含むことを特徴とする方法を目的とする。
− フィルタに固定されたフィルタ支持体と、
− 上方開口部と、フィルタ支持体とフィルタを保持するのに適した下方開口部とを有する区画と、
− 区画の内側からフィルタ支持体に力を加える手段とを備えることを特徴とする装置を目的とする。
− 上方開口部と下方開口部を備えていて内部にフィルタ支持体とフィルタを保持することができる区画にフィルタ支持体を固定するステップと、
− フィルタを通して生きた細胞を含む液体を濾過するステップと、
− 区画の内側からフィルタ支持体に力を加えて区画の外でフィルタを回収するステップを含む方法を目的とする。
− 上方開口部と下方開口部を備えていて、その2つの開口部の間にはフィルタが配置され、そのフィルタの小孔は、特定の細胞と他の細胞の直径の中間の直径を持つ構成にされた区画の上方開口部を通じ、前記生きた細胞を含む液体とフィルタ用パッドをその区画の中に固定剤なしで挿入するステップと、
− 液体の大半と前記他の細胞がフィルタを通過する濾過ステップと
− フィルタと、フィルタ上に残った細胞とを回収するステップを含む方法を目的とする。
− 液体とフィルタパッドを、固定剤なしで、上方開口部と下方開口部を有する区画の中に、その区画の上方開口部を通じて挿入する手段と、
− 直径が特定の細胞と他の細胞の直径の中間である小孔を備えていて、区画の2つの開口部の間に位置するフィルタと、
− 液体の大半と前記他の細胞をフィルタにかけて通過させる濾過手段と、
− フィルタと、そのフィルタ上に残った細胞を回収する手段を備える装置を目的とする。
− フィルタ支持体308は、上部内側において、エッペンドルフ管の上部内側の形状を有する。するとこのフィルタ支持体の上方開口部をエッペンドルフ管の栓で閉じることができる。
− フィルタ支持体308は、下部内側において、エッペンドルフ管の下部内側の形状を有する。するとエッペンドルフ管の下部内面を真似ることができる。
− フィルタ支持体308は、下部外側において、エッペンドルフ管の上部内側の形状を有する。するとこのフィルタ支持体308をエッペンドルフ管の上部の中に挿入することができる。
− 蛍光VICだけの増加は、正常な配列のホモ接合プロファイルを意味する。
− 蛍光FAMだけの増加は、突然変異した配列のホモ接合プロファイルを意味する。
− 蛍光VICとFAM両方の増加は、ヘテロ接合プロファイルを意味する。
− センス・プライマ(または“順”プライマ)AGGCCTGCTGAAAATGACTGAATAT、
− アンチセンス・プライマ(または“逆”プライマ)TCGTCCACAAAATGATTCTGAATTAGCT、
− “野生型”プローブ、色“VIC”TTGGAGCTGGTGGCGT、
− “突然変異した”プローブ、色“FAM”TGGAGCTGATGGCGT。
− センス・プライマ(または“順”プライマ)AGGCCTGCTGAAAATGACTGAATAT、
− アンチセンス・プライマ(または“逆”プライマ)TCGTCCACAAAATGATTCTGAATTAGCT、
− “野生型”プローブ、色“VIC”TTGGAGCTGGTGGCGT、
− “突然変異した”プローブ、色“FAM”TTGGAGCTGTTGGCGT。
− センス・プライマ(または“順”プライマ)AGGCCTGCTGAAAATGACTGAATAT、
− アンチセンス・プライマ(または“逆”プライマ)TCGTCCACAAAATGATTCTGAATTAGCT、
− “野生型”プローブ、色“VIC”TTGGAGCTGGTGGCGT、
− “突然変異した”プローブ、色“FAM”TTGGAGCTGGTTGCGT。
− センス・プライマ(または“順”プライマ)GCAGCATGTCAAGATCACAGATTT、
− アンチセンス・プライマ(または“逆”プライマ)CCTCCTTCTGCATGGTATTCTTTCT、
− “野生型”プローブ、色“VIC”CAGTTTGGCCAGCCCA、
− “突然変異した”プローブ、色“FAM”CAGTTTGGCCCGCCCA。
− 第1の袋は、図2Aまたは図6Aに示したような組み立てられた装置を含んでおり、
− 第2の袋は、培養ウエルと円形板および/またはエッペンドルフ管、またはこの装置を実現する上で役に立つ他のあらゆる付属品を含んでいる。
Claims (18)
- フィルタ上で生きた細胞を分離するための装置であって、
− フィルタに固定されたフィルタ支持体(108、308)と、
− 上方開口部と下方開口部を有する区画(102、302)と、
− 前記フィルタ支持体に力を加えてそのフィルタ支持体を解放するために前記区画に対して移動する移動手段(110、310)とを備えることを特徴とする装置。 - 気密かつ取外し可能に固定されていて、前記力を加えて前記フィルタ支持体(108、308)を解放することを可能にする相対運動を前記移動手段(110、310)と前記区画(102、302)に禁じる取外し可能な先端部(104、304)を備えることを特徴とする、請求項1に記載の装置。
- 前記先端部(104、304)が、吸引システムの圧力低下室に合った下方開口部を有することを特徴とする、請求項2に記載の装置。
- 前記フィルタ支持体(108)がワッシャの形態を取ることを特徴とする、請求項1〜3のいずれか1項に記載の装置。
- 前記フィルタ支持体(108)がPVCからなることを特徴とする、請求項4に記載の装置。
- 前記フィルタ支持体(108)が堅固なPVCからなることを特徴とする、請求項5に記載の装置。
- 前記フィルタ支持体(108)が、カバーガラスの形態を取ることを特徴とする、請求項4〜6のいずれか1項に記載の装置。
- 前記フィルタ支持体(108)が、カバーガラスと同じかそれよりも大きなサイズであることを特徴とする、請求項4〜7のいずれか1項に記載の装置。
- 前記フィルタ支持体(108)の厚さが0.4mm以下であり、0.3mm以下であることが好ましいことを特徴とする、請求項4〜8のいずれか1項に記載の装置。
- 前記フィルタ支持体(308)が、エッペンドルフ管(330)の少なくとも一部の形態を取ることを特徴とする、請求項1〜3のいずれか1項に記載の装置。
- 前記フィルタ支持体(308)が、上部内側において、エッペンドルフ管(330)の上部内側の形態を再現していることを特徴とする、請求項10に記載の装置。
- 前記フィルタ支持体(308)が、下部内側において、エッペンドルフ管(330)の下部内側の形態を再現していることを特徴とする、請求項10または11に記載の装置。
- 前記フィルタ支持体(308)が、上部外側において、エッペンドルフ管(330)の上部内側の形態を再現していることを特徴とする、請求項10〜12のいずれか1項に記載の装置。
- 前記フィルタ支持体(308)がポリカーボネートを含むことを特徴とする、請求項10〜13のいずれか1項に記載の装置。
- 前記フィルタ支持体(108、308)が、前記力が加えられるまで前記区画(102、302)にメカニカルに接続されていることを特徴とする、請求項1〜14のいずれか1項に記載の装置。
- 前記フィルタ支持体(108、308)が、前記力が加えられるまで前記移動手段にメカニカルに接続されていることを特徴とする、請求項1〜14のいずれか1項に記載の装置。
- 生きた細胞をフィルタ上で分離するか、その細胞の遺伝子材料を抽出するための方法であって、
− フィルタに固定されたフィルタ支持体を、上方開口部と下方開口部を有する区画と一体化するか、その区画に対して移動する移動手段と一体化するステップと、
− 前記フィルタ支持体に力を加えてそのフィルタ支持体を解放するため、前記移動手段と前記区画をそれぞれ運動させるステップを含むことを特徴とする方法。 - 前記運動ステップにおいて前記フィルタ支持体を培養ウエル(130)に直接移行させることを特徴とする、請求項17に記載の方法。
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