JP2010524904A - トリアゾロピリジンカルボキサミド誘導体およびトリアゾロピリミジンカルボキサミド誘導体、これらの調製、ならびにこれらの治療的使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、一般式（Ｉ）

（式中、ＡおよびＸは、互いに独立して、窒素原子またはＣＨ基であり、Ｒ_１は、ＮＲ_３Ｒ_４基（式中、Ｒ_３およびＲ_４がこれらを持つ窒素原子とともに、酸素原子もしくは硫黄原子を組み入れることができる３環員から７環員を含むヘテロ環状基を形成する。）、ＮＲ基またはＮＲ’−ＣＯ基であり、前記環は、ハロゲン原子、または（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルコキシ基、ハロ（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基もしくはハロ（Ｃ_１−Ｃ_６）アルコキシ基から選択される１つまたは複数の基で場合によって置換されており、Ｒ_２は、ハロゲン原子、またはメチル基、トリフルオロメチル基、メトキシ基もしくはトリフルオロメトキシ基から選択される、１つまたは複数の基で場合によって置換されているアリール基である。）のトリアゾロピリジンカルボキサミド誘導体およびトリアゾロピリミジンカルボキサミド誘導体に関する。これらの調製方法およびこれらの治療的使用。

Description

本発明は、トリアゾロピリジンカルボキサミド誘導体およびトリアゾロピリミジンカルボキサミド誘導体、これらの調製、ならびにこれらの治療的使用に関する。

本発明の対象は、式（Ｉ）

（式中、
ＡおよびＸは、互いに独立して、窒素原子またはＣＨ基であり、
Ｒ_１は、ＮＲ_３Ｒ_４基（式中、Ｒ_３およびＲ_４が、これらを持つ窒素原子とともに、酸素原子もしくは硫黄原子を組み入れることができる３環員から７環員を含むヘテロ環状基を形成する。）、ＮＲ基またはＮＲ’−ＣＯ基であり、前記環は、ハロゲン原子、または（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルコキシ基、ハロ（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基もしくはハロ（Ｃ_１−Ｃ_６）アルコキシ基から選択される、１つまたは複数の基で場合によって置換されており、
Ｒ_２は、ハロゲン原子、またはメチル基、トリフルオロメチル基、メトキシ基もしくはトリフルオロメトキシ基から選択される、１つまたは複数の基で場合によって置換されているアリール基であり、
Ｒは、水素原子、または（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、（Ｃ_３−Ｃ_７）シクロアルキル基、（Ｃ_３−Ｃ_７）シクロアルキル（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ’基、ＣＯ_２Ｒ’基、ＳＯ_２Ｒ’基、ＣＯＮＲ’Ｒ’’基もしくはＳＯ_２ＮＲ’Ｒ’’基から選択される基であり、
Ｒ’およびＲ’’は、互いに独立して、水素原子、または（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、（Ｃ_３−Ｃ_７）シクロアルキル基もしくは（Ｃ_３−Ｃ_７）シクロアルキル（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基から選択される、１つまたは複数の基である。）
に対応する化合物である。

式（Ｉ）の化合物は、１個または複数の不斉炭素原子を含むことができる。これらは、したがって、エナンチオマーまたはジアステレオマーの形態で存在することができる。エナンチオマーおよびジアステレオマーならびにラセミ混合物を含めたこれらの混合物も、本発明の一部である。

式（Ｉ）の化合物は、塩基の形態または酸との付加塩の形態で存在することができる。こうした付加塩は本発明の一部である。

これらの塩は、薬学上許容される酸で調製することができるが、例えば式（Ｉ）の化合物を精製または単離するために有用である他の酸の塩も本発明の一部である。

式（Ｉ）の化合物は、水和物または溶媒和物の形態で、即ち１個または複数の水の分子または溶媒との会合または組合せの形態で存在することもできる。こうした水和物および溶媒和物も本発明の一部である。

本発明の文脈において：
−ｔおよびｚが１から７の値をとることができる「Ｃ_ｔ−ｚ」という表現は、ｔ個からｚ個の炭素原子を含有することができる炭素系鎖または炭素系環を意味することを意図され、例えば、Ｃ_１−３は、１個から３個の炭素原子を含有する炭素系鎖を特徴とすることができる；
−「ハロゲン原子」という用語は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味することを意図される；
−「アルキル基」という用語は、直鎖または分枝の飽和脂肪族基を意味することを意図される。例として、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基などを挙げることができる；
−「シクロアルキル基」という用語は、飽和した環状脂肪族基を意味することを意図される。例として、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基などを挙げることができる；
−「ハロアルキル基」という用語は、１個または複数の水素原子がハロゲン原子で置換されたアルキル基を意味することを意図される；
−「アルコキシ基」という用語は、アルキル基が上記で定義した通りである−Ｏ−アルキル基を意味することを意図される；
−「ハロアルコキシ基」という用語は、１個または複数の水素原子がハロゲン原子で置換されたアルコキシ基を意味することを意図される；
−「アリール基」という用語は、６個と１４個との間の炭素原子を含有する環状芳香族基を意味することを意図される。アリール基の例として、フェニルまたはナフチルを挙げることができる；
−「ヘテロ環状基」という用語は、窒素原子、酸素原子もしくは硫黄原子などの１個または複数のヘテロ原子を含む５環員から７環員を含む飽和環状基を意味することを意図される。例として、ピロリジニル基、ピペリジニル基、イミダゾリジン基、ピラゾリジン基、ジオキサン基、テトラヒドロピラニル基、ピペリドニル基、モルホリニル基、ピペラジニル基、アゼチジン基、アゼピン基、チオモルホリニル基、Ｎ−メチルピペラジニル基またはホモピペラジン基を挙げることができる；
−硫黄原子は、酸化状態（スルホキシド、スルホン）で存在することができる。

下記で定義した通りの様々な基において、Ｒ_１基およびＲ_２基、ＡならびにＸは、これらが定義されていない場合、上記したものと同じ定義を有する。

本発明の対象である式（Ｉ）の化合物の中で、第１群の化合物は：
Ａが窒素原子であり、
ＸがＣＨ基である
化合物で構成される。

本発明の対象である式（Ｉ）の化合物の中で、第２群の化合物は：
ＡおよびＸが、ＣＨ基である
化合物で構成される。

本発明の対象である式（Ｉ）の化合物の中で、第３群の化合物は：
Ｒ_１が、ハロゲン原子もしくはハロアルキル基から選択される１つまたは複数の基で場合によって置換されているヘテロ環状基である
化合物で構成される。

本発明の対象である式（Ｉ）の化合物の中で、第４群の化合物は：
Ｒ_１が、ハロゲン原子もしくはトリフルオロメチル基から選択される１つまたは複数の基で場合によって置換されている、モルホリニル基、ピロリジニル基またはピペリジニル基である
化合物で構成される。

上記の１つから４つの基の組合せも、本発明の一部である。

本発明の対象である式（Ｉ）の化合物の中で、以下の化合物を挙げることができる：
−（５−モルホリン−４−イル［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イル）［４−（３−トリフルオロメチル−フェニル）ピペラジン−１−イル］メタノン；
−［４−（４−メトキシフェニル）ピペラジン−１−イル］（５−ピロリジン−１−イル［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イル）メタノン；
−［５−（３，３−ジフルオロピロリジン−１−イル）［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イル）［４−（４−トリ−フルオロメチルフェニル）ピペラジン−１−イル］メタノン；
−（５−ピロリジン−１−イル［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イル）［４−（３−トリフルオロメチル−フェニル）ピペラジン−１−イル］メタノン；
−（４−フェニルピペリジン−１−イル［５−（４−トリフルオロメチルピペリジン−１−イル）［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イル］メタノン；
これに続く文脈において、「保護基Ｐｇ」という用語は、一方では合成中にヒドロキシルまたはアミンなどの反応性官能基を保護することを可能にし、他方では合成の最後に無傷の反応性官能基を再生することを可能にする基を意味することを意図される。保護基の例ならびに保護および脱保護の方法も、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」Ｇｒｅｅｎら、第２版（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）、１９９１年に示されている。

これに続く文脈において、「脱離基」という用語は、一対の電子の離脱で不均一結合を切ることによって、分子から容易に切断することができる基を意味することを意図される。この基は、したがって、例えば置換反応中に別の基で容易に置き換えることができる。こうした脱離基は、例えば、ハロゲンである、またはメタンスルホネート、ベンゼンスルホネート、ｐ−トルエンスルホネート、トリフレート、酢酸塩等などの活性化ヒドロキシル基である。脱離基の例、およびこれらの調製の参考文献も、「Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」Ｊ．Ｍａｒｃｈ、第３版、Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、１９８５年、３１０−３１６頁に示されている。

本発明によると、一般式（Ｉ）の化合物は、次に続くスキーム１の方法に従って調製することができる：
第１段階において、Ｘが上記で定義した通りである一般式（ＩＩ）の化合物は、ＸおよびＲ_１が上記で定義した通りである一般式（ＩＩＩ）の化合物に変換される。変換は、イソプロパノールもしくはジメチルスルホキシドなどの溶媒中またはこれらの溶媒の混合物中、炭酸カリウムまたはジイソプロピルエチルアミンなどの塩基の存在下で、Ｒ_３およびＲ_４が上記で定義した通りである一般式（ＩＶ）のアミンとのアミノリシス反応の手段によって行われる。

第２段階において、ＸおよびＲ_１が上記で定義した通りである一般式（ＩＩＩ）の化合物は、一般構造（ＶＩ）のカルバモイルクロリドとの反応によって、Ｘ、Ｒ_１、Ｒ_２およびＡが上記で定義した通りである一般式（Ｖ）の化合物に変換される。反応は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはＮ−メチルピロリドンなどの溶媒中、水素化ナトリウム、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシドまたはカリウムｔｅｒｔ−ペントキシドなどの塩基の存在下で行われる。

第３段階において、一般式（Ｖ）の化合物は、ニトロ基のアミノ基への還元によって、Ｘ、Ｒ_１、Ｒ_２およびＡが上記で定義した通りである一般式（ＶＩＩ）の化合物に変換される。反応は、文献に記載されているまたは当業者に知られている様々な方法、例えばパラジウム、白金またはニッケル、およびこれらの変異形に基づく触媒の存在下における水素化によって行うことができる。

第５段階において、一般式（ＶＩＩ）の化合物は、ジアゾ化／閉環反応の手段によって、一般式（Ｉ）の化合物に変換される。反応は、亜硝酸塩、例えば酸性媒質中の亜硝酸ナトリウムもしくは亜硝酸カリウム、または亜硝酸イソアミルまたは亜硝酸ｔｅｒｔ−ブチルを使用し、水もしくはテトラヒドロフランなどの溶媒中またはこれらの混合物中で行うことができる。

一般式（ＩＩ）の化合物は市販されている。一般式（ＩＶ）のアミン類および一般式（ＶＩ）のカルバモイルクロリドは、これらが市販されていない場合、該文献に記載されているまたは当業者に知られている任意の方法によって調製することができる。

次に続く実施例で、本発明の一部の化合物の調製を例証する。これらの実施例は、本発明を限定しているのではなく、例証しているにすぎない。微量分析、ＩＲスペクトルおよびＮＭＲスペクトル、ならびにＬＣ−ＭＳで、得られる化合物の構造および純度を確認する。融点（Ｍｐ）は、摂氏温度で表示される。

（実施例１）
（表の化合物Ｎｏ．２）
［４−（４−メトキシフェニル）ピペラジン−１−イル］（５−ピロリジン−１−イル［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］−ピリジン−３−イル）メタノン
１．１ ３−ニトロ−６−ピロリジン−１−イルピリジン−２−イルアミン
２−アミノ−６−クロロ−３−ニトロピリジン１．７３５ｇ（１０ｍｍｏｌ）、ピロリジン１．６６ｍｌ（２０ｍｍｏｌ）ならびにジイソプロピルエチルアミン１．６６ｍｌ（１０ｍｍｏｌ）の、ジメチルスルホキシド１ｍｌとイソプロパノール５ｍｌとの混合物中懸濁液を、封管中で２０時間撹拌しながら６０℃で加熱する。混合物を周囲温度に冷却し、次いで、イソプロパノール１０ｍｌで希釈する。固体をろ過によって回収し、次いで、イソプロパノール２×５ｍｌで洗浄する。固体を水２０ｍｌで溶かす。懸濁液を３０分間撹拌する。固体をろ過し、次いで、水２×５ｍｌおよびエーテル２×５ｍｌで洗浄し、真空下にて五酸化リンの存在下で乾燥して、生成物１．９１ｇ（９．１７ｍｍｏｌ）を鮮明な黄色粉末の形態で得る。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，δ ｐｐｍ）：８．１５（ｄ，１Ｈ）、７．９５（ｍ，２Ｈ）、６．１５（ｄ，１Ｈ）、３．６０（ｍ，４Ｈ）、２．００（ｍ，４Ｈ）。
１．２ ４−（４−メトキシフェニル）ピペラジン−１−カルボン酸、（３−ニトロ−６−ピロリジン−１−イルピリジン−２−イル）アミド
アルゴン雰囲気下、油中６０％の水素化ナトリウム０．２５ｇ（６．２５ｍｍｏｌ）を、１．１．段階において得られる３−ニトロ−６−ピロリジン−１−イルピリジン−２−イルアミン０．５２０ｇ（２．５０ｍｍｏｌ）および（１−（４−メトキシフェニル）ピペラジンおよびトリホスゲンを使用する）４−（４−メトキシフェニル）−１−ピペラジンカルボニルクロリド０．７６４ｇ（１．２０ｍｍｏｌ）の、氷浴で冷却されたジメチルホルムアミド８．５ｍｌ中溶液に、少量ずつ添加する。反応混合物の撹拌を、氷浴の温度で１時間、および次いで周囲温度で２時間続ける。反応混合物を氷浴および塩化アンモニウム１Ｍ水溶液５０ｍｌで冷却し、次いで、酢酸エチル２０ｍｌを少量ずつ添加する。混合物を１５分間激しく撹拌する。固体をろ過し、次いで、酢酸エチル１０ｍｌ、水５ｍｌおよびエーテル２×５ｍで洗浄する。これを真空下にて五酸化リンの存在下で乾燥し、生成物０．７９ｇ（１．８５ｍｍｏｌ）を鮮明な黄色粉末の形態で得る。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，δ ｐｐｍ）：８．１５（ｄ，１Ｈ）、６．９５（ｄ，２Ｈ）、６．８５（ｄ，２Ｈ）、６．２５（ｄ，１Ｈ）、３．７０（ｓ，３Ｈ）、３．６５（ｍ，４Ｈ）、３．５５（ｍ，４Ｈ）、３．０５（ｍ，４Ｈ）、１．９５（ｍ，４Ｈ）。
１．３． ［４−（４−メトキシフェニル）ピペラジン−１−イル］（５−ピロリジン−１−イル［１，２，３］トリアゾロ−［４，５−ｂ］ピリジン−３−イル）メタノン
１．２．段階において得られる４−（４−メトキシフェニル）ピペラジン−１−カルボン酸、（３−ニトロ−６−ピロリジン−１−イルピリジン−２−イル）アミド０．７３０ｇ（１．７１ｍｍｏｌ）を、塩酸（５．１４ｍｍｏｌ）のイソプロパノール中５Ｎ溶液１．０ｍｌとメタノール６８ｍｌとの混合物中に溶解する。炭素上１０％の白金（０．１７ｍｍｏｌ）０．３３３ｇを添加する。混合物を水素雰囲気下にて３０Ｐｓｉ（２バール）の圧力で２．５時間撹拌する。生じる生成物をろ過し、ろ液を蒸発させ、生成物０．９７ｇを固体のすみれ色の気泡体の形態で得て、これをこのままそれに続く段階で使用する。
１．４． 該固体をテトラヒドロフラン８．５ｍｌ中に懸濁し、次いで、亜硝酸イソアミル０．３０ｍｌ（２．２１ｍｍｏｌ）および酢酸ナトリウム三水和物０．６９４ｇ（５．１０ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を１８時間周囲温度で撹拌する。酢酸エチル５０ｍｌおよび炭酸カリウムの０．５Ｍ水溶液２５ｍｌを添加する。沈降させることによって有機相を分離し、炭酸カリウムの０．５Ｍ水溶液２５ｍｌ、次いで水２５ｍｌおよび塩化ナトリウムの飽和水溶液２５ｍｌで洗浄する。生じる生成物を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発乾固する。酢酸エチルおよびシクロヘキサンの４０：６０、次いで５０：５０および６０：４０混合物で溶出が行われるシリカゲルクロマトグラフィーによって、生成物を精製する。ジクロロメタンおよび酢酸エチルの９５：５、次いで９０：１０、８５：１５および８０：２０混合物で溶出が行われるシリカゲルクロマトグラフィーによって、得られる生成物を再精製する。生成物をイソプロパノールから再結晶させて、生成物０．１７５ｇ（０．４３ｍｍｏｌ）を桃色がかった結晶の形態で得る。
融点（℃）：１３８−１４０
ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：４０８（ＭＨ＋）、３８０（ＭＨ＋−Ｎ_２）
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ^−１）：１７０４、１６１２
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，δ ｐｐｍ）：８．０５（ｄ，１Ｈ）、６．９５（ｄ，２Ｈ）、６．９０（ｄ，２Ｈ）、６．５５（ｄ，１Ｈ）、４．０５（ｍ，２Ｈ）、３．８０（ｍ＋ｓ，５Ｈ）、３．６０（ｍ，４Ｈ）、３．２５（ｍ，４Ｈ）、２．０５（ｍ，４Ｈ）。

次に続く表１で、本発明による化合物の一部の例の化学構造および物性を例証する。この表において：
−縦の列「塩」において、「−」は遊離塩基の形態における化合物を表す一方、「ＨＣｌ」は、塩酸塩の形態における化合物を表し、
−ＰＨはフェニル基を表し、
−Ｍｐは摂氏温度における化合物の融点を表す。

本発明による化合物は、驚くべきことに、ＭＧＬ（モノアシルグリセロールリパーゼ）酵素に阻害効果を示す。ＭＧＬ酵素は、様々な脂肪酸のモノグリセリドエステルの内因性誘導体の加水分解を触媒し（ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ １９９８年、４２９、１５２−１５６頁）、特に２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）および１（３）−アラキドノイルグリセロール（１（３）−ＡＧ）の加水分解を触媒する（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９８７年、２７２（４８）、２７２１８−２７２２３頁；Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ２００２年、９９（１６）、１０８１９−１０８２４頁；Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００４年、６７、１３８１−１３８７頁；Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００４年、６６（５）、１２６０−１２６４頁）。２−ＡＧ誘導体および１−（３）−ＡＧ誘導体は、特に、カンナビノイド受容体と相互作用する（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９９年、２７４（５）、２７９４−２８０１頁；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０００年、２７５（１）、６０５−６１２頁；Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００１年、１３４、６６４−６７２頁）。

本発明の化合物は、この分解経路を遮断し、これらの誘導体、および特に２−ＡＧおよび／または１（３）−ＡＧの組織濃度を増加させる。この点において、本発明の化合物は２−ＡＧおよび／または１（３）−ＡＧ、特に、および／またはＭＧＬ酵素によって代謝される任意の他の基質が関与する病態の予防および治療に使用することができる（Ｐｒｏｇｒｅｓｓ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００６年、４５、４０５−４４６頁）。

本発明による化合物は、ＦＡＡＨ（脂肪酸アミドヒドロラーゼ）酵素に対する阻害効果をさらに有することもあり得る。ＦＡＡＨ酵素（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ ｏｆ Ｌｉｐｉｄｓ、（２０００年）、１０８、１０７−１２１頁）は、Ｎ−アラキドノイルエタノールアミン（アナンダミド）、Ｎ−パルミトイルエタノールアミン、Ｎ−オレオイルエタノールアミンまたはオレアミドなど、様々な脂肪酸のアミドおよびエステルの内因性誘導体の加水分解を触媒する。これらの誘導体は、とりわけカンナビノイド受容体およびバニロイド受容体と相互作用することによって、様々な薬理活性を発揮する。

本発明の化合物は分解経路を遮断し、これらの内因性物質の組織濃度を増加させる。この点において、本発明の化合物は、内因性カンナビノイドおよび／またはＦＡＡＨ酵素によって代謝される任意の他の基質が関与する病態の予防および治療に使用することができる。

試験には、ＭＧＬ酵素に対する本発明の化合物のインビトロにおける活性を測定することを含めた。

ＭＧＬによる２−オレオイルグリセロール（［^３Ｈ］２−ＯＧ）の加水分解の生成物を測定することに基づく放射酵素アッセイで、阻害活性を測定した。グリセロール上に標識された、［^３Ｈ］２−ＯＧの加水分解の生成物は、オレイン酸および［^３Ｈ］グリセロールであり、ＭＧＬ酵素の供給源は、小脳および延髄が除去されたマウス脳ホモジネートである。マウス脳を除去し、これらを使用するまで、またはプリセリーズ装置を使用し、５０００ｒｐｍ（バーティン）にて、１０ｍＭ トリス−ＨＣｌ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡの緩衝液（ｐＨ８）中４℃にて、２回５秒間で直ちにホモジネートするまで、−８０℃で貯蔵する。ホモジネートの濃度を、次いで、７．５μｇ／μｌに調節する。

化合物の希釈系列は、１００％ＤＭＳＯ中２０ｍＭで原液から調製する。この系列の第１希釈物を１００％ＤＭＳＯ中で調製し、次いで、第２を酵素反応緩衝液（５０ｍＭ ホスフェート、０．１％ＢＳＡ）中で調製し、１０倍濃縮の濃度範囲の調製物にする。試験化合物を、選択濃度にて２０分間、マウス脳ホモジネート調製物でプレインキュベートする。酵素反応におけるＤＭＳＯの最終濃度は、０．１％を超えることはない。

ＭＧＬ活性のアッセイを、９６ウェルマイクロプレート中、１００μｌの最終反応体積で行う。簡潔には、試験化合物でプレインキュベートされたタンパク質７５μｇを、ＢＳＡ ０．１％を含有するリン酸緩衝液５０ｍＭに希釈し、２０分間周囲温度で、［^３Ｈ］２−ＯＧを０．０２７μＣｉ／ウェル（２０Ｃｉ／ｍｍｏｌの比活性）の量で含有する２−ＯＧ ５０μＭの存在下でインキュベートする。反応を停止させ、形成される生成物を、クロロホルム／メタノール（１／１）１００μｌを添加および混合することによって分離する。１０分間撹拌した後、マイクロプレートを１５分間４０００ｇで遠心分離し、生成される［^３Ｈ］グリセロールを含有する水性相の３０μｌのアリコットを除去し、次いで、液体シンチレーション（ワラック１４５０マイクロベータ）によって５分間カウントする。

ＭＧＬに関する阻害活性は、ＭＧＬの活性の５０％を阻害する濃度によって起こる。

これらの条件下、本発明の最も活性な化合物は、０．００１μＭと０．１μＭとの間のＩＣ_５０（ＭＧＬの対照酵素活性の５０％を阻害する濃度）を示す。

例えば、化合物Ｎｏ．１は、０．００４μＭのＩＣ_５０を示した。

試験には、ＦＡＡＨ酵素に対する本発明の化合物のインビトロにおける活性を測定することを含めた。

ＦＡＡＨ（Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９５年）、５６、１９９９−２００５頁およびＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｅｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（１９９７年）、２８３、７２９−７３４頁）によってアナンダミドの加水分解の生成物（エタノールアミン［１−３Ｈ］）を測定することに基づく放射酵素アッセイで、阻害活性を測定した。エタノールアミン上に標識された、［^３Ｈ］アナンダミドの加水分解の生成物は、アラキドン酸および［^３Ｈ］エタノールアミンであり、ＦＡＡＨ酵素の供給源は、小脳および延髄が除去されたマウス脳ホモジネートである。マウス脳を除去し、これらを使用するまで、またはプリセリーズ装置を使用し、５０００ｒｐｍ（バーティン）で、１０ｍＭ トリス−ＨＣｌ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡの緩衝液（ｐＨ８）中４℃にて、２回５秒間で直ちにホモジネートするまで、−８０℃で貯蔵する。ホモジネートの濃度を、次いで、２０μｇ／μｌに調節する。

化合物の希釈系列を、１００％ＤＭＳＯ中２０ｍＭで原液から調製する。この系列の第１希釈物を１００％ＤＭＳＯ中で調製し、次いで、第２を酵素反応緩衝液（１０ｍＭ トリス−ＨＣｌ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ８）、０．１％ ＢＳＡ）中で調製し、１０倍濃縮の濃度範囲の調製物にする。試験化合物を、選択濃度にて２０分間、マウス脳ホモジネート調製物でプレインキュベートする。酵素反応においてＤＭＳＯの最終濃度は、０．１％を超えることはない。

ＦＡＡＨ活性のアッセイは、９６ウェルマイクロプレート中、７０μｌの最終反応体積で行われる。簡潔には、試験化合物でプレインキュベートされたマウス脳ホモジネートの２００μｇを、ＢＳＡ ０．１％を含有する１０ｍＭ トリス−ＨＣｌ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡの緩衝液（ｐＨ８）に希釈し、２０分間周囲温度にて、［^３Ｈ］−アナンダミドを０．０１μＣｉ／ウェル（６０Ｃｉ／ｍｍｏｌの比活性）の量で含有するアナンダミド１０μＭの存在下でインキュベートする。反応を停止させ、形成された生成物を、クロロホルム／メタノール（２／１）１４０μｌを添加および混合することによって分離する。１０分間撹拌した後、マイクロプレートを１５分間４０００ｇで遠心分離し、生成される［^３Ｈ］エタノールアミンを含有する水性相のアリコット３０μｌを除去し、次いで、液体シンチレーション（ワラック１４５０マイクロベータ）によって５分間カウントする。

これらの条件下、本発明の最も活性な化合物は、０．００１μＭと０．１μＭの間のＩＣ_５０（ＦＡＡＨの対照酵素活性の５０％を阻害する濃度）を示す。

例えば、化合物Ｎｏ．１は、０．０１μＭのＩＣ_５０を示した。

したがって、本発明による化合物が、ＭＧＬに対して選択的であるまたはＭＧＬおよびＦＡＡＨに関して選択的混合である阻害活性を有することは明らかである。

本発明による化合物は、したがって、薬物、特にＭＧＬ酵素、またはＭＧＬ酵素およびＦＡＡＨ酵素を阻害する薬物の調製に使用することができる。

したがって、この別の態様によると、本発明の対象は、式（Ｉ）の化合物、または薬学上許容される酸との後者の付加塩、でなければ式（Ｉ）の化合物の水和物もしくは溶媒和物を含む薬物である。

これらの薬物は、治療法、特に：
疼痛、特に神経原性型の急性または慢性の疼痛：片頭痛、ヘルペスウイルスおよび糖尿病に伴う形態を含めた神経因性疼痛；
炎症性疾患に伴う急性または慢性の疼痛：関節炎、関節リウマチ、骨関節炎、脊椎炎、痛風、血管炎、クローン病、過敏性腸症候群；
急性または慢性の末梢疼痛；
特に化学療法に続く眩暈、嘔吐、吐き気；
摂食障害、特に、様々な性質の拒食症および悪液質；
肥満症を含めた、メタボリック症候群およびこの症状；
アテローム性動脈硬化症および冠疾患を含めた、異脂肪血症およびこの症状；
神経性および精神的病態：振盪、ジスキネジー、ジストニー、痙直、強迫性行動、トゥレット症候群、任意の性質および起源のうつ病および不安の全形態、気分障害、精神病；
急性および慢性の神経変性疾患：パーキンソン病、アルツハイマー病、老年痴呆、ハンチントン舞踏病、脳虚血ならびに頭蓋および延髄性外傷に伴う病変部、筋萎縮性側索硬化症；
てんかん；
睡眠時無呼吸を含めた睡眠障害；
循環器疾患、特に、高血圧症、心不整脈、動脈硬化症、心臓発作、心虚血；
腎虚血；
癌：良性の皮膚腫瘍、脳腫瘍および乳頭腫、前立腺腫瘍、脳腫瘍（神経膠芽腫、髄上皮腫、髄芽腫、神経芽細胞腫、胚起源の腫瘍、星状細胞腫、星状芽細胞腫、上衣細胞腫、乏突起神経膠腫、神経叢腫瘍、神経上皮腫、松果体腫、上衣芽細胞腫、悪性髄膜腫、肉腫症、悪性黒色腫、シュワン腫）；
免疫系障害、特に自己免疫疾患：乾癬、エリテマトーデス、結合組織疾患またはコラーゲン疾患の疾病、シェーグレン症候群、強直性脊椎関節炎、未分化型脊椎関節炎、ベーチェット病、自己免疫性溶血貧血、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、穀粉症、移植拒絶反応、形質細胞系に発症する疾患；
アレルギー性疾患：即時型または遅延型過敏症、アレルギー性の鼻炎または結膜炎、接触性皮膚炎；
寄生虫性、ウイルス性または細菌性の感染症：ＡＩＤＳ、髄膜炎；
炎症性疾患、特に関節の疾患：関節炎、関節リウマチ、骨関節炎、脊椎炎、痛風、血管炎、クローン病、過敏性腸症候群；
骨粗鬆症；
眼症状：高眼圧症、緑内障；
肺症状：呼吸器疾患、気管支痙攣、咳嗽、喘息、慢性気管支炎、慢性閉塞性気道疾患、肺気腫；
胃腸系疾患：過敏性腸症候群、炎症性腸管障害、潰瘍、下痢；
尿失禁および膀胱の炎症
の治療および予防において使用される。

この別の態様によると、本発明は、活性成分として本発明による化合物を含む医薬組成物に関する。これらの医薬組成物は、本発明による少なくとも１種の化合物、または前記化合物の薬学上許容される塩、水和物もしくは溶媒和物の有効量、および少なくとも１種の薬学上許容される賦形剤も含有する。

前記賦形剤は、医薬品形態および所望の投与方法に従って、当業者に知られている通常の賦形剤から選択される。

経口、舌下、皮下、筋肉内、静脈内、局所的、局所性、気管内、鼻腔内、経皮的または直腸投与のための本発明の医薬組成物において、上記の式（Ｉ）の活性成分またはこの可能な塩、溶媒和物もしくは水和物は、従来の医薬品賦形剤との混合物として、上記の障害もしくは疾患の予防または治療のために動物およびヒトに単位投与形態で投与することができる。

適当な単位投与形態には、錠剤、軟または硬ゲルカプセル、粉末、顆粒および経口の液剤または懸濁液などの経口形態、舌下、バッカル、気管内、眼内、および鼻腔内の投与形態、吸入による投与のための形態、局所的、経皮的、皮下、筋肉内または静脈内の投与形態、直腸投与形態、ならびにインプラントが含まれる。局所適用に関して、本発明による化合物は、クリーム、ゲル、軟膏剤またはローション中に使用することができる。

例として、錠剤形態における本発明による化合物の単位投与形態は、以下の成分を含むことができる：
本発明による化合物 ５０．０ｍｇ
マンニトール ２２３．７５ｍｇ
クロスカルメロースナトリウム ６．０ｍｇ
コーンスターチ １５．０ｍｇ
ヒドロキシプロピルメチルセルロース ２．２５ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ３．０ｍｇ

この別の態様によると、本発明は、本発明による化合物、またはこの薬学上許容される塩または水和物もしくは溶媒和物の有効量の患者への投与を含む、上記に示した病態を治療するための方法にも関する。

Claims (13)

1. 塩基の形態または酸との付加塩の形態、さらに水和物または溶媒和物の形態の式（Ｉ）
   

   

   （式中、
   ＡおよびＸは、互いに独立して、窒素原子またはＣＨ基であり、
   Ｒ_１は、ＮＲ_３Ｒ_４基（式中、Ｒ_３およびＲ_４が、これらを持つ窒素原子とともに、酸素原子もしくは硫黄原子を組み入れることができる３環員から７環員を含むヘテロ環状基を形成する。）、ＮＲ基またはＮＲ’−ＣＯ基であり、前記環は、ハロゲン原子、または（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルコキシ基、ハロ（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基もしくはハロ（Ｃ_１−Ｃ_６）アルコキシ基から選択される、１つまたは複数の基で場合によって置換されており、
   Ｒ_２は、ハロゲン原子、またはメチル基、トリフルオロメチル基、メトキシ基もしくはトリフルオロメトキシ基から選択される、１つまたは複数の基で場合によって置換されているアリール基であり、
   Ｒは、水素原子、または（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、（Ｃ_３−Ｃ_７）シクロアルキル基、（Ｃ_３−Ｃ_７）シクロアルキル（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ’基、ＣＯ_２Ｒ’基、ＳＯ_２Ｒ’基、ＣＯＮＲ’Ｒ’’基もしくはＳＯ_２ＮＲ’Ｒ’’基から選択される基であり、
   Ｒ’およびＲ’’は、互いに独立して、水素原子、または（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、（Ｃ_３−Ｃ_７）シクロアルキル基もしくは（Ｃ_３−Ｃ_７）シクロアルキル（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基から選択される、１つまたは複数の基である。）
   に対応する化合物。
2. Ａが窒素原子であり、
   ＸがＣＨ基である
   ことを特徴とする、塩基の形態または酸との付加塩の形態、さらに水和物または溶媒和物の形態の、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
3. ＡおよびＸが、ＣＨ基である
   ことを特徴とする、塩基の形態または酸との付加塩の形態、さらに水和物または溶媒和物の形態の、請求項１および２のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物。
4. Ｒ_１が、ハロゲン原子もしくはハロアルキル基から選択される１つまたは複数の基で場合によって置換されているヘテロ環状基である
   ことを特徴とする、塩基の形態または酸との付加塩の形態、さらに水和物または溶媒和物の形態の、請求項１から３の一項に記載の式（Ｉ）の化合物。
5. Ｒ_１が、ハロゲン原子もしくはトリフルオロメチル基から選択される１つまたは複数の基で場合によって置換されている、モルホリニル基、ピロリジニル基またはピペリジニル基である
   ことを特徴とする、塩基の形態または酸との付加塩の形態、さらに水和物または溶媒和物の形態の、請求項１から４の一項に記載の式（Ｉ）の化合物。
6. 化合物が
   −（５−モルホリン−４−イル［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イル）［４−（３−トリフルオロメチル−フェニル）ピペラジン−１−イル］メタノン；
   −［４−（４−メトキシフェニル）ピペラジン−１−イル］（５−ピロリジン−１−イル［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イル）メタノン；
   −［５−（３，３−ジフルオロピロリジン−１−イル）［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イル）［４−（４−トリ−フルオロメチルフェニル）ピペラジン−１−イル］メタノン；
   −（５−ピロリジン−１−イル［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イル）［４−（３−トリフルオロメチル−フェニル）ピペラジン−１−イル］メタノン；
   −（４−フェニルピペリジン−１−イル［５−（４−トリフルオロメチルピペリジン−１−イル）［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イル］メタノン。
   から選択されることを特徴とする、請求項１から５の一項に記載の式（Ｉ）の化合物。
7. 一般式（ＶＩＩ）
   

   

   （式中、
   Ｒ_１、Ｒ_２、ＸおよびＡは、請求項１に記載した式（Ｉ）において定義した通りである。）
   の化合物を、亜硝酸塩の作用下でジアゾ化／閉環反応の手段によって一般式（Ｉ）の化合物に変換することを特徴とする、請求項１から６のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物を調製する方法。
8. 請求項１から６のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物、またはこの化合物の薬学上許容される酸との付加塩、または別法として式（Ｉ）の化合物の水和物もしくは溶媒和物を含むことを特徴とする薬物。
9. 請求項１から６のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物、またはこの化合物の薬学上許容される塩、水和物もしくは溶媒和物、および少なくとも１種の薬学上許容される賦形剤も含むことを特徴とする医薬組成物。
10. 内在性２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）および内在性１（３）−アラキドノイルグリセロール、および／またはＭＧＬ酵素によって代謝される任意の他の基質が関与する病態の治療および予防において使用する薬物の調製のための、請求項１から６のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
11. 内因性アナンダミドおよび／またはＦＡＡＨ酵素によって代謝される任意の他の基質が関与する病態の治療および予防において使用する薬物の調製のための、請求項１から６のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
12. 急性または慢性疼痛、眩暈、嘔吐、吐き気、摂食障害、メタボリック症候群、異脂肪血症、神経性および精神的病態、急性または慢性神経変性疾患、てんかん、睡眠障害、循環器疾患、腎虚血、癌、免疫系障害、アレルギー性疾患、寄生虫性、ウイルス性または細菌性感染症、炎症性疾患、骨粗鬆症、眼症状、肺症状、胃腸系疾患、尿失禁ならびに膀胱の炎症を予防または治療する際に使用する薬物の調製のための、薬学上許容される塩基、水和物または溶媒和物の形態における、請求項１から６のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
13. 急性または慢性疼痛、眩暈、嘔吐、吐き気、摂食障害、メタボリック症候群、異脂肪血症、神経性および精神的病態、急性または慢性神経変性疾患、てんかん、睡眠障害、循環器疾患、腎虚血、癌、免疫系障害、アレルギー性疾患、寄生虫性、ウイルス性または細菌性感染症、炎症性疾患、骨粗鬆症、眼症状、肺症状、胃腸系疾患、尿失禁ならびに膀胱の炎症の予防または治療のための、薬学上許容される塩基、水和物または溶媒和物の形態における、請求項１から６のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物。