JP2010500996A - 選択可能な特性を持つｄｐｐ−ｉｖ耐性ｇｉｐハイブリッドポリペプチド - Google Patents

Abstract

本発明は一般的に、代謝性疾患および病態、例えば血漿グルコースレベル、インスリンレベル、および／またはインスリン分泌の制御、陽性変力効果、異化効果の低減、胃排出の緩徐化により軽減され得るものの処置および予防用の剤として有用な、選択可能な特性を持つ新規ＧＩＰ類似体およびＧＩＰハイブリッドポリペプチドに関する。かかる病態および疾患としては、これらには限定はされないが、高血圧症、異常脂質血症、心血管疾患、摂食障害、救命救急、インスリン抵抗性、肥満、および１型、２型、および妊娠糖尿病を含めた任意の種類の真性糖尿病が挙げられる。

Description

本発明はペプチド化学および医薬品、より詳細には新規胃抑制ポリペプチド（「ＧＩＰ」）類似体および選択可能な特性を備えるＧＩＰ含有ハイブリッドポリペプチドに関する。これはさらに、これらおよび他のＧＩＰ化合物の単独またはグルカゴン様ペプチド１（「ＧＬＰ１」）、エキセンディン−４、またはアミリンポリペプチドなどの他の化合物との併用のいずれかでの、代謝性疾患および病態を処置するための使用に関する。

（関連出願の相互参照）
本出願は、米国仮出願：２００５年２月１１日に出願された米国仮特許出願第６０／６５２，６６２号明細書、２００５年２月１５日に出願された米国仮特許出願第６０／６５３，４３３号明細書、２００５年２月１１日に出願された米国仮特許出願第６０／６５１，６４７号明細書、２００５年８月１１日に出願された米国仮特許出願第６０／７０７，２４４号明細書、２００５年８月１１日に出願された米国仮特許出願第６０／７０７，３６９号明細書、２００５年８月１７日に出願された米国仮特許出願第６０／７０９，３２０号明細書、および２００５年８月１７日に出願された米国仮特許出願第６０／７０９，３１６号明細書の優先権を主張する共同所有され係属中の米国特許出願第１１／５０７，０８１号；ならびに２００６年２月１０日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２００６／００５０２０の優先権を主張し、これらの各々をここに出典明示してその全てを本明細書の一部とみなす。

インクレチンペプチドはグルコースレベルが正常な時、または特にそれが上昇する時に放出されるインスリン量の増加を引き起こすホルモンおよびペプチド模倣物である。これらのインクレチンペプチドはインスリン分泌により規定される当初のインクレチン作用を超える他の作用を有する。例えば、これらはまた、グルカゴン産生を低減するとともに胃排出を遅延する作用も有し得る。加えて、これらはインスリン感受性を改善する作用を有し得るとともに、これらは膵島細胞新生−新しい膵島の形成−を増加させ得る。

インクレチン効果の概念は、インスリンが経口グルコースに対し、等量のグルコースの静脈内投与後に計測されるものを上回って反応するという観察から展開した。消化管由来因子、またはインクレチンが、食後のインスリン放出に影響することが結論づけられた。栄養の胃および近位の胃腸管への流入がインクレチンホルモンの放出を引き起こし、これが次にはインスリン分泌を刺激する。このインスリン指向性、またはインスリン分泌を刺激する能力は、経口グルコース負荷に対するインスリンまたはＣ−ペプチド反応を静脈内のものと比較することにより定量化され得る。このようにして、インクレチン効果が健常人中の経口グルコースに対するインスリン反応の約５０％〜７０％に関与することが示されている。

多くの食後ホルモンがインクレチン様活性を有するが、主要なインクレチンペプチドとしては、胃抑制ポリペプチド（ＧＩＰ）としても知られる、グルコース依存性インスリン分泌刺激ポリペプチド、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−Ｉ）、およびエキセンディンペプチド（これは非内在性インクレチン模倣物である）が挙げられる。ＧＩＰおよびＧＬＰ−Ｉは双方ともグルカゴンペプチドスーパーファミリーに属するとともに、それゆえアミノ酸配列相同性を共有する。ＧＩＰおよびＧＬＰ−Ｉは胃腸管内の特殊化された細胞により分泌されるとともに膵島細胞ならびに他の組織上に位置する受容体を有する。インクレチン同様、双方とも栄養の摂取に反応して腸から分泌され、結果としてインスリン分泌の亢進をもたらす。ＧＩＰおよびＧＬＰ−Ｉのインスリン分泌刺激効果は周囲のグルコースの上昇に依存する。双方とも偏在性酵素ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）により急速に不活性化される。

未変性ヒトＧＩＰは特殊化された腸内分泌Ｋ細胞内で合成されるとともにそれにより分泌される単一の４２アミノ酸ペプチドである。これらの細胞は主に十二指腸および近位の空腸内で濃縮されるが、これらはまた腸の至るところにも所見され得る。ＧＩＰ分泌の主要な刺激物は炭水化物および脂質の豊富な食事の摂取である。摂取後、循環血漿ＧＩＰレベルは１０〜２０倍増加する。インタクトＧＩＰの半減期は健常対象においておよそ７．３分および糖尿病対象において５．２分と推定される。

ＧＩＰ注入プロトコルに加え、ＧＩＰ受容体アンタゴニスト、ＧＩＰペプチドアンタゴニスト、およびＧＩＰ受容体ノックアウトマウスを使用して、ＧＩＰの生理学的効果が解明されてきた。ＧＩＰのその受容体への結合を阻止する結果、ラットおよびマウスにおける経口グルコース負荷後にグルコース依存性インスリン分泌の減弱がもたらされる。同様に、ＧＩＰアンタゴニストまたはＧＩＰ抗血清の投与がラットにおける食後のインスリン放出を顕著に低減させる。ＧＩＰ受容体ノックアウトマウスは経口グルコース負荷後に正常な空腹時グルコースレベルだが軽度のグルコース不耐性を実証する。興味深いことに、これらはまた、数ヶ月の高脂肪摂食後の食餌誘発性肥満に対する耐性も呈する。加えて、レプチン欠損ｏｂ／ｏｂマウスにおいては、ＧＩＰ受容体ノックアウト遺伝子型が出現し、発症する肥満の程度を低下させる。

ＧＩＰ注入は単離されたラット膵島、単離された灌流ラット膵、イヌ、およびヒト中でのインスリン分泌の刺激を一貫して実証している。段階的正常血糖、軽度高血糖（基礎値の５４ｍｇ／ｄＬ超）、および中等度高血糖（基礎値の１４３ｍｇ／ｄＬ超）クランプの間、ＧＩＰ注入は結果として、グルコース濃度上昇の存在下においてのみインスリン分泌をもたらすことが実証されている。さらには、ＧＩＰは正常血糖または高血糖条件のいずれかにおける間も正常ヒト中でグルカゴン分泌性ではないことが実証されている。このように、内因的に放出されるＧＩＰの効果は食後インスリン分泌の重要な機序であると見られるとともに、絶食状態においては役割を果たさないと見られる。

ＧＩＰは多くの非インクレチン効果もまた有する。他のインスリン分泌促進物質と異なり、ＧＩＰはＩＮＳ−Ｉ膵島細胞系試験においβ細胞増殖および細胞生存を刺激する。さらには、動物試験はＧＩＰの、脂肪組織への脂肪酸取り込みを含め、リポタンパク質リパーゼ活性を刺激すること、および脂肪酸合成を刺激することによる、脂質代謝における役割を示唆している。しかしながら、ヒトにおいては、ＧＩＰの脂質代謝に対する効果についての明確な証拠はない。ＧＩＰはまた、単離された灌流ラット膵からのグルカゴン分泌も刺激すると見られるが、ヒト試験はグルカゴン分泌に対する有意な影響は何ら実証していない。さらには、ＧＬＰ−Ｉと異なり、ＧＩＰは胃腸管運動を阻害することによるよりむしろ、胃の排出を加速することにより作用すると見られる。

Ｇタンパク質共役受容体ファミリーのメンバーであるＧＩＰ受容体はＧＩＰへの高い特異性を有するとともにグルカゴンファミリーの他のペプチドは結合しない。このため、ＧＬＰ−１／ＧＩＰキメラペプチドはＧＩＰ受容体への親和性をほとんど示さない。かかる試験から、ＧＩＰ（１−４２）のＧＩＰ（１−３０）配列が受容体を認識するのに十分であると結論づけられている。ＧＩＰ（６−３０）アミドはＧＩＰ（１−４２）の高親和性結合領域を含むが、アンタゴニスト活性を呈する。

本明細書において参照される発行された特許、出願および参考文献は、各々が出典明示して本明細書の一部とみなすように特におよび個々に示され、本明細書に完全に記載されるかのごとき同一範囲まで参照により本出願に援用される。

インスリン分泌のグルコース依存性刺激を通じての強力な糖調節作用にも関わらず、ＧＩＰのインスリン分泌刺激効果は正常人と比べ糖尿病対象において有意に低減する（１６〜１８）。結果的に、ＧＩＰの臨床使用は大幅には進歩していない。さらに、追加的な糖尿病処置様式ならびに代謝性疾患、病態、および障害用処置を開発する必要性が残っている。従って、代謝性疾患、病態、および障害を処置または予防するためのＧＩＰ類似体およびＧＩＰ含有ハイブリッドポリペプチドおよびそれらの使用方法を提供することが本発明の目的である。

糖尿病および糖尿病関連病態などの、血漿グルコースレベル、インスリンレベル、および／またはインスリン分泌の制御により軽減され得るものを含む代謝性疾患および障害、および、これらには限定はされないが、高血圧症、異常脂質血症、心血管疾患、摂食障害、インスリン抵抗性、肥満、および１型、２型、および妊娠糖尿病を含め、任意の種類の真性糖尿病を含む、病態および障害を処置または予防する方法が提供される。本方法は、治療的または予防的に有効量のＧＩＰまたはＧＩＰ類似体、それらの断片または誘導体、または本明細書に記載されるとおりのＧＩＰハイブリッドまたはその誘導体を、単独（単剤治療）もしくは別の薬剤または治療、例えばグルコース降下薬（例えば、抗糖尿病薬）または胃排出を阻害または低減する薬剤または方法（かかる薬剤の例は本明細書に提示される）との組み合わせ（補助治療）で、それらを必要とする対象に投与することを含んでなる。１種または複数の他のホルモン生理活性を有するＧＩＰハイブリッド、例えば、プラムリンチド、エキセンディン、ＢＮＰの一部としてのＧＩＰ生理活性を提供することにより、１個または複数の選択可能な機能を備える化合物は、血漿グルコースの降下、インスリン分泌の増加などの、ＧＩＰ生理活性の特性の追加的な利益を、他のインクレチン分子に付随する副作用なしに、有するであろう。例えば、本発明のＧＩＰ−ｓＣＴハイブリッド化合物は、骨喪失および骨吸収の低下または軟骨代謝回転の低減（軟骨保護）などの、サケカルシトニンの選択可能な特性、および、血漿グルコース降下（本明細書に記載されるとおり抗異化態様に随伴する）および／または骨吸収の阻害および骨密度の維持または増加などの、ＧＩＰの特性を有することができる。かかる選択可能な特性を備えるＧＩＰハイブリッドは、特に、糖尿病または救命救急管理中の対象など、血糖コントロールからも利益を得られる人々において、骨粗鬆症または軟骨高代謝回転の病態の処置を亢進できる。

一実施形態において１個または複数の亢進された特性を有する新規ＧＩＰ類似体が提供される。ＧＩＰ類似体は、ＤＰＰ−ＩＶに対する、またはヒト血漿中および／または腎刷子縁膜上に所見されるものなど、他のプロテアーゼに対する増加した耐性を有し、生体内半減期を増加させる。さらなる実施形態においてＧＩＰ類似体はアミノ酸４−３０に少なくとも１個の置換、修飾、挿入または欠失を有する。これらの改変は、ＧＩＰ受容体結合増加、受容体選択性増加、および／または化学的および／またはタンパク質加水分解手段による分解に対する抵抗性増加などの亢進された特性を提供できる。別の実施形態においてＧＩＰ類似体はさらに未変性ＧＩＰ（１−３０）、未変性ＧＩＰ（１−１４）、未変性ＧＩＰ（１９−３０）または未変性ＧＩＰ（１−４２）に対し各分子の全長にわたり最小５０％の配列同一性、および少なくとも１個のＧＩＰの生物学的特性を有する。特定の実施形態において、新規ＧＩＰ類似体ポリペプチドは、Ｄアミノ酸などの、非天然アミノ酸を含む。さらなる実施形態においてＧＩＰ類似体またはハイブリッドは修飾され、脂肪酸アシル誘導体化によるなどの、低減された腎クリアランスを有する。

別の実施形態において選択可能な特性を備える新規ＧＩＰ含有ハイブリッドポリペプチドが提供される。ハイブリッドポリペプチドは少なくとも１種のホルモン活性を呈する。一実施形態においてＧＩＰハイブリッドポリペプチドは共に共有結合される少なくとも２個の生物学的に活性な（「生理活性」）ペプチドホルモンモジュールを含んでなり、ここで生理活性ペプチドホルモンモジュールの少なくとも１個はＧＩＰポリペプチドを含んでなる。他の生理活性ペプチドホルモンモジュールは、（ａ）未変性成分ペプチドホルモン、（ｂ）ホルモン活性を保持する未変性成分ペプチドホルモンの類似体または誘導体、（ｃ）ホルモン活性を保持する未変性成分ペプチドホルモンの断片、（ｄ）ホルモン活性を保持する未変性成分ペプチドホルモンの類似体または誘導体の断片、（ｅ）所望の化学的安定性、立体構造的安定性、代謝的安定性、生体利用能、器官／組織ターゲティング、受容体相互作用、プロテアーゼ阻害、血漿タンパク質結合、および／または他の薬物動態学的特徴をハイブリッドポリペプチドに対し供与する未変性成分ペプチドホルモンの構造モチーフ、または（ｆ）所望の化学的安定性、立体構造的安定性、代謝的安定性、生体利用能、器官／組織ターゲティング、受容体相互作用、プロテアーゼ阻害、血漿タンパク質結合、および／または他の薬物動態学的特徴をハイブリッドポリペプチドに対し供与する未変性成分ペプチドホルモンの類似体または誘導体の構造モチーフ、であり得る。（ｅ）および（ｆ）の構造モチーフはまとめて「ペプチドエンハンサー」と本明細書中では称されるであろう。ペプチドエンハンサーの例はＴｒｐケージ配列、特にエキセンディン−４に由来するものである。

さらなる実施形態においてＧＩＰハイブリッドポリペプチドは共に共有結合される少なくとも２個の生理活性ペプチドホルモンモジュールを含んでなり、ここで生理活性ペプチドホルモンモジュールの少なくとも１個はＧＩＰポリペプチドからなるとともに、第２のモジュールは成分ペプチドホルモンの少なくとも１種のホルモン活性を呈する。生理活性ペプチドホルモンモジュールは、成分ペプチドホルモン、成分ペプチドホルモンの少なくとも１種のホルモン活性を呈する成分ペプチドホルモンの断片、成分ペプチドホルモンの少なくとも１種のホルモン活性を呈する成分ペプチドホルモンの類似体および誘導体、および成分ペプチドホルモンの少なくとも１種のホルモン活性を呈する成分ペプチドホルモンの類似体および誘導体の断片、より独立して選択される。

一実施形態においてＧＩＰハイブリッドポリペプチドは少なくとも１個の追加的な生理活性ペプチドホルモンモジュールに共有結合される本発明の新規ＧＩＰ類似体ポリペプチドを含んでなる。さらなる実施形態において生理活性ペプチドホルモンモジュールはペプチドエンハンサーである。一実施形態において本発明のＧＩＰハイブリッドポリペプチドは未変性ＧＩＰ（１−３０）、未変性ＧＩＰ（１−１４）、未変性ＧＩＰ（１９−３０）または未変性ＧＩＰ（１−４２）に対しＧＩＰ部分の全長にわたり少なくとも５０％の配列同一性を呈するであろう。特定の実施形態においてＧＩＰ部分は、ｔｒｐケージモチーフなどの、ペプチドエンハンサーをさらに含んでなる新規ＧＩＰ類似体を含んでなることができる。従って、ＧＩＰハイブリッドは、ｔｒｐケージモチーフなどのペプチドエンハンサーを備えるＧＩＰ類似体、その断片または誘導体であるとともに、亢進された特性を有し、別のホルモンまたは成長因子もしくはそれらの断片などの、追加的な生理活性ペプチドホルモンモジュールに共有結合されるＧＩＰ部分を含んでなることができる。

ＧＩＰハイブリッドポリペプチドにおける使用のための成分ペプチドホルモンとしては、アミリン、アドレノメデュリン（ＡＤＭ）、カルシトニン（ＣＴ）、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）、インテルメジン、コレシストキニン（「ＣＣＫ」）、レプチン、ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−Ｉ）、グルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ−２）、オキシントモジュリン（ＯＸＭ）、ナトリウム利尿ペプチド（例えばＡＮＰ、ＢＮＰ、ＣＮＰまたはウロジラチン）、ウロコルチンファミリーペプチド、例えば、Ｕｃｎ−２およびＵｃｎ−３、ニューロメジンファミリーペプチド、例えばニューロメジンＵ２５またはスプライスバリアント、エキセンディン−３およびエキセンディン−４が挙げられる。

他のＧＩＰハイブリッド実施形態においてＧＩＰ部分は、ガストリン／ＣＣＫ受容体リガンド、アミリン受容体リガンド、カルシトニン受容体リガンド、ＣＧＲＰ受容体リガンド、ＰＹＹ受容体リガンド、ＥＧＦ受容体リガンド、グルカゴン様ペプチド１受容体リガンド、グルカゴン様ペプチド２受容体リガンド、胃抑制ポリペプチド（ＧＩＰ）受容体リガンド、ケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）受容体１リガンド、ジペプチジルペプチダーゼＩＶインヒビター、ＲＥＧタンパク質受容体リガンド、成長ホルモン受容体リガンド、プロラクチン（ＰＲＬ）受容体リガンド、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）受容体リガンド、ＰＴＨ関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）受容体リガンド、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）受容体リガンド、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）受容体リガンド、トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ受容体リガンド、ラミニン受容体リガンド、血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）受容体リガンド、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）受容体リガンド、神経成長因子（ＮＧＦ）受容体リガンド、膵島新生関連タンパク質（ＩＮＧＡＰ）受容体リガンド、アクチビン−Ａ受容体リガンド、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体リガンド、エリスロポエチン（ＥＰＯ）受容体リガンド、脳下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド（ＰＡＣＡＰ）受容体リガンド、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）受容体リガンド、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）受容体リガンド、カンナビノイドＣＢ１受容体アンタゴニスト、およびセクレチン受容体リガンド、と組み合わされる。

一実施形態において望ましいＧＩＰハイブリッドポリペプチドは、Ｎ末端ＧＩＰまたは新規ＧＩＰ類似体断片を、グルコース降下活性（例えば、抗糖尿病薬、エキセンディン）または胃排出を阻害または低減する能力を有するＣ末端ポリペプチドまたはその断片と組み合わせて含む。かかる望ましいＧＩＰハイブリッドは、Ｎ末端ＧＩＰ断片もしくは新規ＧＩＰ類似体または誘導体断片を、Ｃ末端エキセンディン、ＧＬＰ１、シムリン（プラムリンチド）、アミリン、ＣＣＫ、ガストリン、ＰＹＹ、セクレチン、ＧＲＰ、ニューロメジン、ウロコルチン、カルシトニン、またはサケカルシトニン、ナトリウム利尿ペプチド（例えば、ＡＮＰ、ＢＮＰ、ＣＮＰ、ウロジラチン）または類似体（例えばアミリン−ｓＣＴ−アミリンキメラ）、それらの誘導体または断片と組み合わせて含む。他の実施形態において望ましいＧＩＰハイブリッドは、Ｃ末端ＧＩＰまたは新規ＧＩＰ類似体断片を、グルコース降下活性（例えば、抗糖尿病薬、エキセンディン）または胃排出を阻害または低減する能力を有するＮ末端ポリペプチドまたはその断片と組み合わせて含む。かかる実施形態において、キメラポリペプチドは、Ｃ末端ＧＩＰ、新規ＧＩＰ類似体、またはそれらの断片を、Ｎ末端エキセンディン、ＧＬＰ１、シムリン（プラムリンチド）、アミリン、ＣＣＫ、ガストリン、ＰＹＹ、セクレチン、ＧＲＰ、ニューロメジン、ウロコルチン、カルシトニン、またはサケカルシトニン、ナトリウム利尿ペプチドまたはそれらの類似体、誘導体または断片と組み合わせて含むことができる。

他の実施形態においてペプチドエンハンサーは、エキセンディン、ヒトＧＬＰ−Ｉ、またはカエルＧＬＰ−Ｉなどの、第２のホルモン由来のテールまたは末端伸長部であるか、もしくは経験的に決定される。一実施形態においてペプチドエンハンサーはＧＩＰ部分と非相同のＣ末端テールまたは末端伸長部である。本明細書に記載される他のＧＩＰハイブリッドと同様、ペプチドエンハンサー含有ハイブリッドの一実施形態において、ＧＩＰ部分は未変性ＧＩＰ、その活性断片、もしくはその類似体または誘導体であり得る。別の態様においてハイブリッドのＧＩＰ部分は、１つまたは複数の亢進された特性、例えばタンパク質消化に対する抵抗性増加（ひいては長期間半減期）、腎クリアランスを低減する脂肪酸アシル誘導体化を提供する少なくとも１個の修飾、置換、欠失または付加を含んでなる。一実施形態においてテールはＴｒｐケージモチーフ配列を含んでなる。別の実施形態においてＧＩＰ類似体ポリペプチド部分はＤアミノ酸などの、非天然アミノ酸を含み、例えばＤＰＰ−ＩＶによるタンパク質分解速度を低減するべく阻害する。

本発明はまた、代謝性疾患および障害、特に、糖尿病および糖尿病関連病態などの、血漿グルコースレベル、インスリンレベル、および／またはインスリン分泌の制御により軽減され得るそれらの、処置および予防を提供する。かかる病態および障害としては、高血圧症、異常脂質血症、心血管疾患、摂食障害、インスリン抵抗性、肥満、および、１型、２型、および妊娠糖尿病を含む、任意の種類の真性糖尿病、糖尿病合併症（例えばニューロパシー（例えばエキセンディンファミリーホルモンモジュールを含むＧＩＰハイブリッドで処置する）、神経因性疼痛（例えばアミリンファミリーホルモンモジュールを含んでなるＧＩＰハイブリッドで処置する）、網膜症、腎症、膵β細胞量不足の病態（例えば、エキセンディン−４およびＧＬＰ−Ｉの膵島新生作用に基づく）が挙げられるが、これらに限定はされない。従って、かかる病態を処置または予防する方法が提供され、ここで該方法は、治療的または予防的に有効量のＧＩＰ、または本発明の新規ＧＩＰ類似体を含む、その類似体または誘導体、またはペプチドエンハンサーを有するものを含む、本発明のＧＩＰハイブリッドを、それらを必要とする対象に投与することを含んでなる。一実施形態において本発明のポリペプチドは単剤治療として提供され得る。別の実施形態においてグルコースレベル上昇に付随する糖尿病または病態を処置するため、ＧＩＰ化合物はグルコース降下薬（例えば、抗糖尿病薬）または胃排出を阻害または低減する薬剤または方法を伴う補助治療において投与され得る。かかる薬剤の例は本明細書に提示される。例えば、一実施形態において対象、例えば、１型、２型または妊娠真性糖尿病を有する者の血糖レベルを低減するための補助治療方法であって、対象に、治療的に有効量のエキセンディンまたはエキセンディンアゴニストがペプチドであるなどのエキセンディンアゴニストを、本発明のＧＩＰまたは新規ＧＩＰ類似体を伴う補助治療において、または有効量のＧＩＰ−エキセンディンハイブリッドを投与することを含んでなる方法が提供される。

本発明の化合物はまた、単独もしくはグルコース降下薬（例えば、抗糖尿病薬）または胃排出を阻害または低減する薬剤または方法との組み合せで、膵臓島または細胞におけるグルコース応答性を増強、誘発、亢進または回復するためにも有用であり得る。これらの作用はまた、上記および全体として参照により本明細書に援用される、米国特許出願公開第２００４／０２２８８４６号明細書に記載されるものなどの代謝障害に付随する病態を処置または予防するためにも使用される。

別の態様において肥満を処置または予防する方法が提供され、ここで該方法は、治療的または予防的に有効量のＧＩＰ、または本発明の新規ＧＩＰ類似体を含む、その類似体または誘導体、またはペプチドエンハンサーを有するものを含む、本発明のＧＩＰハイブリッドを、それらを必要とする対象に投与することを含んでなる。一実施形態において、対象は肥満または過体重対象である。「肥満」は一般的にボディマス指標が３０超として定義されるが、本開示の目的上、ボディマス指標が３０未満の者を含め、体重を低減することを必要とする、または希望する任意の対象が、「肥満」の範囲に含まれる。インスリン抵抗性である、グルコース不耐性である、または真性糖尿病の任意の型（例えば、１型、２型または妊娠糖尿病）を有する対象が本方法から利益を得ることができる。本発明の化合物はまた、脳卒中、癌（例えば、子宮内膜癌、乳癌、前立腺癌、および結腸癌）、胆嚢疾患、睡眠時無呼吸、受胎能低減、および変形性関節症を含む、肥満に付随する他の病態の処置または予防においても有用であり得る（ライツニキ（Ｌｙｚｎｉｃｋｉ）ら、Ａｍ．Ｆａｍ．Ｐｈｙｓ．６３：２１８５頁、２００１年を参照）。病態がグルコース亢進または高血糖に付随する場合、方法は、治療的または予防的に有効量のＧＩＰ化合物を、単独もしくはグルコース降下薬（例えば、抗糖尿病薬）または胃排出を阻害または低減する薬剤または方法と組み合わせて投与することを含んでなる。

さらに別の態様において、ＧＩＰ化合物、特に本発明のＧＩＰハイブリッドが、食物摂取量を低減する、食欲を低減する、満腹感を誘発する、栄養利用性を低減する、カロリー効率を低減する、体重減少を引き起こす、体組成に影響を及ぼす、体エネルギー含量またはエネルギー消費を変える、および脂質プロファイルを改善する（ＬＤＬコレステロールおよびトリグリセリドレベルを低減する、および／またはＨＤＬコレステロールレベルを変化させることを含む）方法において使用されることができ、ここで該方法は対象に、本発明の、有効量のＧＩＰ化合物、特にＧＩＰハイブリッド化合物を投与することを含んでなる。一実施形態において、本発明の方法はそれを必要とする対象において栄養利用性を低減することにより軽減され得る病態または障害を処置または予防するために使用され、前記対象に治療的または予防的に有効量の本発明のＧＩＰ化合物を投与することを含んでなる。病態および障害としては、高血圧症、異常脂質血症、心血管疾患、摂食障害、インスリン抵抗性、肥満、および１型、２型、および妊娠糖尿病を含む、任意の種類の真性糖尿病、糖尿病合併症（ニューロパシー（例えば、エキセンディン−４の神経栄養作用に基づく）、神経因性疼痛（例えば、アミリン作用に基づく）、網膜症、腎症、膵β細胞量不足の病態（例えば、エキセンディン−４およびＧＬＰ−１の膵島新生作用に基づく）が挙げられるが、これらには限定はされない。病態がグルコース上昇または高血糖に付随する場合、本方法は、治療的または予防的に有効量のＧＩＰ化合物を、単独もしくはグルコース降下薬（例えば、抗糖尿病薬）または胃排出を阻害または低減する薬剤または方法と組み合わせて投与することを含んでなる。

本発明の化合物は、それを必要とする対象における食物摂取量低減、体重減少、および／または肥満処置の結果としての高血圧症の寛解に加え、低血圧およびそれに付随する病態を処置または予防するために使用されてもよい。

別の態様においてＧＩＰ類似体およびハイブリッドは骨吸収の低下または阻害および骨密度の維持または増加に有用である。然るべき第２のホルモンモジュールと併用される時、ＧＩＰハイブリッドはそれらの病態を処置するため、ならびに血漿カルシウムの減少、および／または鎮痛効果の誘発に、特に骨減少症および骨粗鬆症などの骨障害を処置するため、および有痛性ニューロパシーの処置に有用である。一実施形態においてかかるハイブリッドはエキセンディン、ＧＬＰ１、アミリンおよび／またはｓＣＴ部分を含む。例えば、本発明のＧＩＰ−ｓＣＴまたはＧＩＰ−アミリン／ｓＣＴハイブリッド化合物は、骨喪失および骨吸収の低下または軟骨代謝回転の低減（軟骨保護）などの、サケカルシトニンまたはアミリン／ｓＣＴ／アミリンキメラの選択可能な特性、および、血漿グルコース降下（本明細書に記載されるとおりの同化態様に随伴する）および／または骨吸収の阻害および骨密度の維持または増加などの、ＧＩＰの特性を有することができる。かかる選択可能な特性を備えるＧＩＰハイブリッドは、骨粗鬆症または軟骨高代謝回転の病態の処置を、特に、糖尿病または救命救急管理中の対象など、血糖コントロールからも利益を得ることのできる人々において、亢進できる。

ＧＩＰ化合物、特にＧＩＰ類似体は、場合により非相同性Ｃ末端テールなどのペプチドエンハンサーをさらに含んでなる長期間半減期ＧＩＰハイブリッド（例えばＤＰＰ−ＩＶ切断抵抗性（Ｄ−Ａｌａ２、Ｎ−アセチルまたはＮ−ピログルタミル類似体など）、および有益な心血管作用を提供することで知られる他のホルモンモジュールを含んでなるＧＩＰハイブリッドであり、心血管疾患および関連病態を処置するために有用である。本明細書において実証されるとおり、ＧＩＰ化合物は心収縮力（ｄｐ／ｄｔ）を増加させ、血圧を低下させ（例えば急性血管拡張により）、収縮期圧を低下させ、拡張期圧を低下させるとともに、心細胞に有益な直接作用を提供できる。ＧＩＰ化合物はまた、代謝作用、例えばグルコース降下、インスリン分泌、β細胞増殖を介して、心機能も改善する。しかしながら、心血管系にも直接作用を提供することにより、ＧＩＰ化合物は驚くべきことにさらにより有益である。

本発明の化合物はまた、過剰な胃分泌、過剰な腸電解質および水分泌ならびに吸収低下に付随するいくつもの胃腸障害、例えば、感染性（例えば、ウイルス性または細菌性）下痢、炎症性下痢、短腸症候群、または外科手技、例えば、回腸造瘻術後に典型的に生じる下痢の処置または予防においても有用であり得る（例えば、「Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ」、ＭｃＧｒａｗ Ｈｉｌｌ Ｉｎｃ．、ニューヨーク、第１２版を参照）。感染性下痢の例としては、限定なしに、急性ウイルス性下痢、急性細菌性下痢（例えば、サルモネラ、カンピロバクター、およびクロストリジウム）または原虫感染による下痢、または旅行者下痢症（例えば、ノーウォークウイルスまたはロタウイルス）が挙げられる。炎症性下痢の例としては、限定なしに、吸収不良症候群、熱帯性スプルー、慢性膵炎、クローン病、下痢、および過敏性腸症候群が挙げられる。ＧＩＰおよび本発明のＧＩＰ化合物は、例えば、手術後の、またはコレラによる胃腸障害に関わる救急の、または生命を脅かす状態を処置または予防するために使用され得る。さらには、化合物は、特に悪液質の間の、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の患者において腸機能障害を処置するために使用され得る。化合物はまた、小腸液および電解質分泌の阻害、および栄養輸送増大、ならびに胃腸管中の細胞増殖増加、例えば、脂肪組織における、脂肪分解の調節および哺乳動物中の血流の調節にも有用であり得る。本発明のＧＩＰ化合物はまた、その胃腸保護作用（例えば、胃分泌の阻害）による上記の病態の処置または予防にも有用であり得る。従って、本発明のＧＩＰ化合物は胃腸または粘膜損傷を処置するために使用されてもよい。例示的な損傷のタイプとしては、炎症性腸疾患、腸萎縮症、腸粘膜または腸粘膜機能の喪失により特徴づけられる病態、および、細胞毒性薬、放射線、毒性、感染および／または傷害への曝露によりもたらされ得るものを含む、胃腸管の他の病態が挙げられるが、これらには限定はされない。その上、本発明のこれらの化合物は、鎮痛薬、抗炎症薬、成長ホルモン、ヘパリン、または炎症性腸疾患または上記に列挙される他の病態を処置するために使用され得る任意の他の治療と併用されてもよい。

別の実施形態においてＧＩＰ化合物は、胃炎、膵炎、バレット食道、胃食道逆流症（ＧＥＲＤ）およびそれらに付随する病態の処置または予防に有用であり得る。かかる病態としては、胸やけ、胃／腸内容物の口または肺への逆流に伴う胸やけ、嚥下困難、咳嗽、間欠性喘鳴および声帯炎症（ＧＥＲＤに付随する病態）、食道糜爛、食道潰瘍、食道狭窄、バレット異形成（正常食道上皮の異常上皮との置換）、および肺吸引が挙げられ得るが、これらには限定はされない。ＧＩＰ化合物は、胃酸の阻害、胆汁酸の阻害、および膵酵素の阻害などの、抗分泌特性を有することができる。その上、ＧＩＰ化合物はまた、胃保護効果も有することができる。従って、本発明のＧＩＰ化合物は、胃炎、膵炎、バレット食道、および／またはＧＥＲＤおよび関連するまたは付随する病態の処置または予防において特に有用であり得る。

本発明はまた、治療的または予防的に有効量の少なくとも１個の新規ＧＩＰ類似体または本発明のＧＩＰハイブリッドポリペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩を、薬学的に許容される希釈剤、保存剤、可溶化剤、乳化剤、アジュバントおよび／またはＧＩＰ化合物の送達において有用な担体と共に含んでなる医薬組成物にも関する。

これらおよび本発明の他の態様は以下の実施形態および詳細な説明への参照を伴いさらに明確に理解されるであろう。

エキセンディン−４Ｔｒｐケージの図を提示する。図１Ａは３０％含水トリフルオロエタノール中のエキセンディン−４のＮＭＲ由来アンサンブル構造を示す。Ｔｒｐケージがエキセンディンの中央領域に向かって折り畳まれているのが確認され得る。 エキセンディン−４Ｔｒｐケージの図を提示する。図１Ｂはエキセンディン−４の溶液状態ＮＭＲ構造アンサンブルからの代表的構造の「Ｔｒｐケージ」モチーフ（残基２１−３８）のＣＰＫ図を示す。 参照配列および本発明の新規ＧＩＰ類似体配列の配列および受容体結合およびグルコース降下（非糖尿病ＮＩＨ／スイスマウスにおける経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ））活性を提示する。 ＯＧＴＴ後のグルコース移動範囲の抑制、およびＮＩＨ／スイスマウスにおけるＧＩＰおよび化合物Ｇの基礎グルコース降下活性を提示する。図３Ａにおいて、棒は平均値±ｓｄを表し、ｎ＝６〜１０である。ペプチドがｔ＝−５に一晩絶食させたＭＨ／スイスマウスに腹腔内注入された。経管栄養（１．５ｇ／ｋｇ）がｔ＝０に与えられた。試料がｔ＝３０分に採取された。血糖がＯｎｅＴｏｕｃｈ（登録商標）Ｕｌｔｒａ（登録商標）（ライフスキャン社（ＬｉｆｅＳｃａｎ，Ｉｎｃ．）、ジョンソン・エンド・ジョンソン社（Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｃｏｍｐａｎｙ）、ミルピタス、カリフォルニア州）で計測された。＊ｐ＜０．０５、対媒体対照；ＡＮＯＶＡ、ダネット検定。化合物番号Ｇは（Ｄ−Ａｌａ２）ＧＩＰ（１−３０）−ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１）アミド形態：配列Ｙ（Ｄ−Ａｌａ）ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１８６）である。化合物ＧはＤＰＰ−ＩＶ耐性を提供するＮ末端修飾およびＣ末端Ｔｒｐケージシールドの双方を有する。 ＯＧＴＴ後のグルコース移動範囲の抑制、およびＮＩＨ／スイスマウスにおけるＧＩＰおよび化合物Ｇの基礎グルコース降下活性を提示する。図３Ｂにおいて、点は平均値±ｓｅｍを表し、ｎ＝８〜１５である。ペプチドがベースライン試料の直後ｔ＝０に２時間絶食させたＮＩＨ／スイスマウスに腹腔内注入された。試料がｔ＝６０、１２０、および１８０分に採取された。血糖がＯｎｅＴｏｕｃｈ（登録商標）Ｕｌｔｒａ（登録商標）（ライフスキャン社（ＬｉｆｅＳｃａｎ，Ｉｎｃ．）、ジョンソン・エンド・ジョンソン社（Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｃｏｍｐａｎｙ）、ミルピタス、カリフォルニア州）で計測された。＊ｐ＜０．０５、対媒体対照；ＡＮＯＶＡ、ダネット検定。化合物番号Ｇは（Ｄ−Ａｌａ２）ＧＩＰ（１−３０）−ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１）アミド形態：配列Ｙ（Ｄ−Ａｌａ）ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１８６）である。化合物ＧはＤＰＰ−ＩＶ耐性を提供するＮ末端修飾およびＣ末端Ｔｒｐケージシールドの双方を有する。 糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスにおける化合物Ｇのグルコース降下作用の完全長ＧＩＰおよびエキセンディン−４との比較を提示する。点は平均値±ｓｅｍを表す。ｎ＝６〜１０。ペプチドがベースライン試料の直後ｔ＝０に２時間絶食させたｄｂ／ｄｂマウスに腹腔内注入された。試料が６０、１２０、および１８０分に採取された。血糖がＯｎｅＴｏｕｃｈ（登録商標）Ｕｌｔｒａ（登録商標）（ライフスキャン社（ＬｉｆｅＳｃａｎ，Ｉｎｃ．）、ジョンソン・エンド・ジョンソン社（Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｃｏｍｐａｎｙ）、ミルピタス、カリフォルニア州）で計測された。＊ｐ＜０．０５、対媒体対照；ＡＮＯＶＡ、ダネット検定。 ＧＩＰおよびアミリン／カルシトニン様類似体ペプチドを含んでなるＧＩＰハイブリッドの例を提示する。化合物はＧＩＰ活性（例えば、グルコース降下）および胃排出の低減の双方を有するであろう。 ＧＩＰおよびアミリン／カルシトニン様類似体ペプチドを含んでなるＧＩＰハイブリッドの例を提示する。化合物はＧＩＰ活性（例えば、グルコース降下）および胃排出の低減の双方を有するであろう。 ＧＩＰおよびアミリン／カルシトニン様類似体ペプチドを含んでなるＧＩＰハイブリッドの例を提示する。化合物はＧＩＰ活性（例えば、グルコース降下）および胃排出の低減の双方を有するであろう。 ＧＩＰおよびアミリン／カルシトニン様類似体ペプチドを含んでなるＧＩＰハイブリッドの例を提示する。化合物はＧＩＰ活性（例えば、グルコース降下）および胃排出の低減の双方を有するであろう。 本明細書中で言及される様々な化学基の構造を示す。 本明細書中で言及される様々な化学的Ｆｍｏｃ誘導体の構造を示す。 新規ＧＩＰ類似体のグルコース降下効果を示す。図は、本明細書の類似体中の位置２位におけるＤ−アラニン置換がグルコース降下能を改善することを実証する。点は平均値±ｓｅｍを表す。ペプチドがベースライン試料の直後ｔ＝０に２時間絶食させたＮＩＨ／スイスマウスに腹腔内注入された。試料がｔ＝６０、１２０、１８０および２４０分に採取された。血糖がＯｎｅＴｏｕｃｈ（登録商標）Ｕｌｔｒａ（登録商標）（ライフスキャン社（ＬｉｆｅＳｃａｎ，Ｉｎｃ．）、ジョンソン・エンド・ジョンソン社（Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｃｏｍｐａｎｙ）、ミルピタス、カリフォルニア州）で計測された。＊ｐ＜０．０５、対媒体対照；ＡＮＯＶＡ、ダネット検定。 新規ＧＩＰ類似体のグルコース降下効果を示す。図は、本明細書の類似体中の位置２位におけるＤ−アラニン置換がグルコース降下能を改善することを実証する。点は平均値±ｓｅｍを表す。ペプチドがベースライン試料の直後ｔ＝０に２時間絶食させたＮＩＨ／スイスマウスに腹腔内注入された。試料がｔ＝６０、１２０、１８０および２４０分に採取された。血糖がＯｎｅＴｏｕｃｈ（登録商標）Ｕｌｔｒａ（登録商標）（ライフスキャン社（ＬｉｆｅＳｃａｎ，Ｉｎｃ．）、ジョンソン・エンド・ジョンソン社（Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｃｏｍｐａｎｙ）、ミルピタス、カリフォルニア州）で計測された。＊ｐ＜０．０５、対媒体対照；ＡＮＯＶＡ、ダネット検定。 新規ＧＩＰ類似体のグルコース降下効果、特にＴｒｐケージの効果を示す。点は平均値±ｓｅｍを表す。ペプチドがベースライン試料の直後ｔ＝０に２時間絶食させたＮＩＨ／スイスマウスに腹腔内注入された。試料がｔ＝６０、１２０、１８０および２４０分に採取された。血糖がＯｎｅＴｏｕｃｈ（登録商標）Ｕｌｔｒａ（登録商標）（ライフスキャン社（ＬｉｆｅＳｃａｎ，Ｉｎｃ．）、ジョンソン・エンド・ジョンソン社（Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｃｏｍｐａｎｙ）、ミルピタス、カリフォルニア州）で計測された。＊ｐ＜０．０５、対媒体対照；ＡＮＯＶＡ、ダネット検定。 様々な類似体のグルコース降下効果を示す。本例において、Ａｃ修飾およびＰｒｏ３置換はグルコース降下能を有意には亢進しなかった。点は平均値±ｓｅｍを表す。ペプチドがベースライン試料の直後ｔ＝０に２時間絶食させたＮＩＨ／スイスマウスに腹腔内注入された。試料がｔ＝６０、１２０、１８０および２４０分に採取された。血糖がＯｎｅＴｏｕｃｈ（登録商標）Ｕｌｔｒａ（登録商標）（ライフスキャン社（ＬｉｆｅＳｃａｎ，Ｉｎｃ．）、ジョンソン・エンド・ジョンソン社（Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｃｏｍｐａｎｙ）、ミルピタス、カリフォルニア州）で計測された。＊ｐ＜０．０５、対媒体対照；ＡＮＯＶＡ、ダネット検定。 様々な類似体のグルコース降下効果を示す。本例において、Ａｃ修飾およびＰｒｏ３置換はグルコース降下能を有意には亢進しなかった。点は平均値±ｓｅｍを表す。ペプチドがベースライン試料の直後ｔ＝０に２時間絶食させたＮＩＨ／スイスマウスに腹腔内注入された。試料がｔ＝６０、１２０、１８０および２４０分に採取された。血糖がＯｎｅＴｏｕｃｈ（登録商標）Ｕｌｔｒａ（登録商標）（ライフスキャン社（ＬｉｆｅＳｃａｎ，Ｉｎｃ．）、ジョンソン・エンド・ジョンソン社（Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｃｏｍｐａｎｙ）、ミルピタス、カリフォルニア州）で計測された。＊ｐ＜０．０５、対媒体対照；ＡＮＯＶＡ、ダネット検定。 例示的ＧＩＰハイブリッドである０６０１ＧＩＰ３７９４の未変性ＧＩＰに対するより優れたプロテアーゼ耐性を実証する。 さらに例示的な類似体および本発明の参照ペプチドを示す。示される様々な修飾および変異体は本発明において使用されるべきものであるとともに、本明細書において考察されるとおり併用されてもよいことが意図される。例えば、用語のエキセンディンテールまたはエキセンディンｔｒｐケージモチーフは描かれる任意のエキセンディンテール変異体を含み、これはシールド配列（ペプチドエンハンサー）として有用である。さらに興味深いのは図に示されるとおりのカエルＧＬＰ１Ｃ末端伸長部であり、これはエキセンディンテールの代わりに使用され得るシールド配列のさらに別の例である。 ＧＩＰハイブリッドによる食物摂取阻害および血糖降下を実証する。 ＧＩＰハイブリッドによる食物摂取阻害および血糖降下を実証する。 食物摂取量アッセイにおけるＧＩＰハイブリッドの効果。 食物摂取量アッセイにおけるＧＩＰハイブリッドの効果。 食物摂取量アッセイにおける化合物１０の効果を実証する。 食物摂取量アッセイにおけるｓＣＴの効果を実証する。 ＧＩＰハイブリッドの血糖降下に対する効果を実証する。 テスト化合物である、ヒトＧＩＰ（１−４２）遊離酸型の変化用量に応じた受容体活性化による全心筋細胞中でのｃＡＭＰ産生を示す。 テスト化合物である、ＧＩＰハイブリッド化合物Ｇの変化用量に応じた受容体活性化による全心筋細胞中でのｃＡＭＰ産生を示す。 覚醒ラットにおいて遠隔測定により測定されるときのＧＩＰ化合物の投与に対する平均動脈圧の反応を示す。平均動脈圧は薬物投与前３０分間にわたり計測される投与前値の％として表示される。 覚醒ラットにおいて遠隔測定により測定されるときのＧＩＰ化合物の投与に対する心拍数の反応を示す。 覚醒ラットにおいて遠隔測定により測定されるときのＧＩＰ化合物の投与に対する血圧における変化率（ｄｐ／ｄｔ）の反応を示す。図１９ＣはＧＩＰ化合物に対する変力反応を反映する。血圧の変化率（ｄｐ／ｄｔ）は心収縮力の指標となる。 覚醒ラットにおいて遠隔測定により測定されるときのＧＩＰ化合物の投与に対する収縮期圧（図１９Ｄ）の反応を示す。 覚醒ラットにおいて遠隔測定により測定されるときのＧＩＰ化合物の投与に対する拡張期圧（図１９Ｅ）の反応を示す。 エキセンディン−４と対照させたＧＩＰ（１−４２）およびＧＩＰ−ＤＰＰ−ＩＶ耐性−類似体／エキセンディン−テールハイブリッドの食物摂取量に対する急性効果の不足を示す。膵ホルモンアミリンは期待どおり有意な効果を生じた。 エキセンディン−４と対照させたＧＩＰ（１−４２）およびＧＩＰ−ＤＰＰ−ＩＶ耐性−類似体／エキセンディン−テールハイブリッドの食物摂取量に対する急性効果の不足を示す。膵ホルモンアミリンは期待どおり有意な効果を生じた。 エキセンディン−４と対照させたＧＩＰ（１−４２）およびＧＩＰ−ＤＰＰ−ＩＶ耐性−類似体／エキセンディン−テールハイブリッドの食物摂取量に対する急性効果の欠如を示す。膵ホルモンアミリンは期待どおり有意な効果を生じた。 エキセンディン−４の効果と対照させ、食餌誘発性肥満マウスにおける体重減少に対する効果の欠如を示す。 哺乳動物および非哺乳動物ＧＩＰのアラインメントを提供する。位置Ｙ１、Ｅ３、Ｄ９、Ｓ１１、Ｄ１５、Ｆ２２、Ｖ２３、Ｌ２６、Ｌ２７およびＫ３２は全種にわたり保存されている。 胃排出の緩徐化および細胞内カルシウムレベルの低減におけるＧＩＰ−アミリン／ｓＣＴ／アミリンハイブリッドの有益な活性を示す。 胃排出の緩徐化および細胞内カルシウムレベルの低減におけるＧＩＰ−アミリン／ｓＣＴ／アミリンハイブリッドの有益な活性を示す。 本発明に有用なさらなるリンカーを示す。 本発明のＧＩＰ−アミリンファミリーハイブリッドによる体重の低下を示す。 本発明のＧＩＰ−アミリンファミリーハイブリッドの除脂肪保存の脂肪低下活性による体組成の改善を示す。 ＧＩＰ類似体の例示的ｐＨ−対−溶解プロフィールおよびｐＨ−対−溶解プロフィールを示す。

胃抑制ポリペプチド（ＧＩＰ）およびグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−Ｉ）はインスリン分泌のそのグルコース依存性刺激を通じて強力な糖調節作用を発揮する消化管ペプチドホルモンである。結果的に、これらのインクレチンホルモンは低血糖症に対するリスクの低減された有望な抗糖尿病薬として大きな関心を集めている。ＧＬＰ−Ｉ、ＧＬＰ−Ｉ類似体および模倣物は２型糖尿病患者におけるグルコースレベルの調節において効果的であることが示されているが、ＧＩＰのインスリン分泌刺激効果は報告によれば、正常人と比較して、糖尿病対象において有意に低減する（１６〜１８）。同一糖尿病対象におけるＧＩＰではなくＧＬＰ−Ｉのインスリン分泌刺激作用の保持は、ＧＩＰシグナル伝達が２型糖尿病において妨害されること示唆する。膵β細胞におけるＧＩＰ受容体発現の低減は糖尿病対象における全体的なインクレチン効果の低減に寄与することが提言されている（１９）。２型糖尿病対象におけるＧＩＰに対するインスリン分泌刺激反応の低減にもかかわらず、ＧＩＰまたは類似体の薬理学的用量の増量投与は治療的有用性を有し得る可能性がある。注目すべきは、ＧＩＰにはＧＬＰ−Ｉペプチドの治療ウィンドウを制限してきたＧＬＰ−Ｉの胃腸効果が欠如しており（２０）、それゆえより高用量の投与レジメンの可能性を容認する（２１）。

これらのインクレチンホルモンの治療開発における主要な障害の１つは生体内酵素分解によるそれらの短い作用持続時間である。酵素のジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）は生体内でのペプチドのＮ末端切断における中心的な役割を果たすとともに、最近では、中性エンドペプチダーゼ２４．１１（ＮＥＰ）もまたその分解に関与しているとされている（２２〜２６）。幾つかの研究が齧歯類糖尿病モデルにおけるＤＰＰ−ＩＶ耐性ＧＩＰ類似体の生体内でのより大きな有効性を報告している（２７〜２８）。

本明細書において提供されるのは新規ＧＩＰ類似体およびＧＩＰ含有ハイブリッドポリペプチド、またはそれらの誘導体であり、これらは亢進されたＤＰＰ−ＩＶ耐性、二重ホルモン活性、および改善された血漿半減期を含む、亢進された、または新規の特性を有する。糖尿病および糖尿病関連病態、および、高血圧症、異常脂質血症、心血管疾患、摂食障害、インスリン抵抗性、肥満、および１型、２型、および妊娠糖尿病を含む、任意の種類の真性糖尿病を含むが、これらには限定はされない、病態および障害などの、血漿グルコースレベル、インスリンレベル、および／またはインスリン分泌のコントロールにより軽減され得るものを含む代謝性疾患および障害を処置または予防する方法もまた提供される。本方法は、治療的または予防的に有効量のＧＩＰまたはＧＩＰ類似体、それらの断片または誘導体もしくは本明細書に記載されるとおりの新規ＧＩＰ類似体またはＧＩＰハイブリッドもしくはそれらの誘導体を、単独（単剤治療）もしくは別の薬剤または治療、例えばグルコース降下薬（例えば、抗糖尿病薬）または胃排出を阻害または低減する薬剤または方法（かかる薬剤の例は本明細書に提示される）との組み合わせ（補助治療）で、それらを必要とする対象に投与することを含んでなる。

新規ＧＩＰ類似体および誘導体に加え、本発明は、糖尿病および糖尿病関連病態などの、血漿グルコースレベル、インスリンレベル、および／またはインスリン分泌のコントロールにより軽減され得る代謝性疾患および障害の処置および予防用薬剤として有用な、新規の、ＧＩＰを含む選択可能なハイブリッドポリペプチドに関する。かかる病態および障害としては、高血圧症、異常脂質血症、心血管疾患、摂食障害、インスリン抵抗性、肥満、および１型、２型、および妊娠糖尿病を含む、任意の種類の真性糖尿病が挙げられるが、これらには限定はされない。

一態様において、本発明は、「生理活性」、例えば、治療有効性、機能の範囲、作用の持続時間、物理化学的特性、および／または他の薬物動態学的特性に基づき選択可能であり得る、生理学的、代謝的、および／または薬物動態学的に活性のペプチドモジュールのモジュール組立てに関する。

理論により限定されることを意図せず、本発明は少なくともある部分「ツールボックス」アプローチに関し、ここで生理活性ペプチドホルモンモジュールは二元、三元またはより高い次元の組み合わせで連結され、選択可能な特性を備える新規の、効果的な治療薬を創製する。「生理活性ペプチドホルモンモジュール」はペプチドホルモン、ホルモン活性を備えるペプチド断片、または化学的、代謝的、および／または薬物動態学的安定性を供与するペプチドホルモンの他の構造モチーフであってもよい。ペプチドホルモンは、未変性ペプチドホルモン、ならびに、当該技術分野において知られた、および本明細書に記載されるとおりの、ペプチドホルモン類似体および誘導体を含み得る。

本発明の一態様において、２個以上のペプチドホルモンの特定の物理化学的性質の単一モダリティへの組み合わせが、機能不全代謝回路中の幾つかの点における介入を促進できることが所見されている。かかるごとく、本発明の一態様において、選択可能な生理活性を単一ポリペプチド薬剤に組み込む、合理的に設計されたハイブリッドポリペプチドが提供される。一実施形態において、本発明の選択可能なハイブリッドポリペプチドは生理活性モジュールを共有結合的に付着する化学的に安定なリンカーの使用に関し得る。別の実施形態において、本発明の選択可能なハイブリッドポリペプチドは切断可能なリンカーの使用に関し得、これはそれ自体が生理活性モジュールの一部であってもよく、またはその一部を形成してもよい。

さらに、理論により限定されることを意図せず、本発明のハイブリッドポリペプチドの設計は一般的に、（１）所望の有効性および治療使用のための生理活性ペプチドホルモンモジュールの同定、選択および対形成、および（２）生理活性モジュール（例えば未変性ペプチドホルモン、ホルモン活性を備えるペプチドホルモン類似体または誘導体、ホルモン活性を備えるペプチドホルモン断片、安定化モチーフ等）の、直接または成分モジュールの生理活性の損失のないリンカー経由のいずれかでの共有結合に関し得る。特定の実施形態において、モジュール選択基準としては、（ａ）相加または相乗効果などの、所望の治療または予防適応症用の所望の生体内有効性、（ｂ）複数の治療または予防適応症用の連結モジュールの任意選択的相乗作用または二重作用、および／または（ｃ）所望の化学的安定性、立体構造的安定性、代謝的安定性、生体利用能、器官／組織ターゲティング、受容体相互作用、プロテアーゼ阻害、血漿タンパク質結合、および／または他の薬物動態学的性質が挙げられ得るが、これらには限定はされない。

ＧＩＰ、ＧＩＰ類似体および新規ＧＩＰ類似体（表頭は本明細書中では構成化目的のみに使用されるとともに、いずれの方法においても記載される主題を限定すると解釈されるべきではない）。参照配列としては、ヒトＧＩＰ、切断ＧＩＰ、ヒトＧＬＰ−Ｉ、エキセンディン−４、例示的Ｔｒｐケージ、および例示的「シールド」配列（例えば短鎖および長鎖「エキセンディンテール」）が挙げられる。

本明細書に開示される治療および本明細書に開示される新規ＧＩＰハイブリッドにおいて有用なものは、未変性ＧＩＰペプチドホルモン、ならびにその機能性ペプチド類似体および誘導体である。特定の例示的未変性ペプチド、ペプチド類似体および誘導体が本明細書に記載されるが、当該技術分野において知られたホルモン活性を呈する任意の既知のＧＩＰペプチドが、本明細書中の新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッドの成分として、または本明細書に開示される新規の補助治療においてのいずれかで使用されてもよいことは認識されるべきである。一実施形態において、ＧＩＰペプチド類似体および誘導体は未変性ＧＩＰペプチドの少なくとも１種のホルモン活性を有する。特定の実施形態において、ＧＩＰペプチド類似体は未変性ＧＩＰペプチドが特異的結合能を有する受容体のアゴニストである。例示的ＧＩＰペプチド類似体および誘導体としては、参照により本明細書によって援用される、本明細書の参考文献中に記載されるものが挙げられる。本出願はＧＩＰポリペプチド化合物を本明細書に記載される方法および治療における使用のためのＧＩＰ類似体、新規ＧＩＰ類似体、および新規ＧＩＰハイブリッドとして記載するが、任意の好適なＧＩＰアゴニストがＧＩＰ化合物の代わりに投与されてもよく、かかるアゴニストとしては、アゴニスト抗体ならびに抗体断片および誘導体、および小分子ＧＩＰ受容体アゴニストが挙げられることがさらに意図される。従って、ＧＩＰ化合物またはポリペプチドが特別な治療方法における使用に適応される時、別の実施形態においてＧＩＰアゴニスト、特にアゴニスト抗体またはその断片もしくは誘導体が使用されることが意図される。

血清において、ＧＩＰはジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）により分解される。結果としてもたらされる短い生物学的半減期（生体内で約２分）はＧＩＰの治療使用を制限する。

以下の参考文献は、本発明の新規ＧＩＰ類似体およびＧＩＰハイブリッド用成分として提供するため、および様々な標的器官に対するそれら機能に基づく本発明の新規治療における使用を見出すために有用である様々なＧＩＰ類似体に関する。

独国特許出願第１９９２１５３７号明細書はインスリン産生β細胞の生存をその増殖の刺激およびそのプログラム細胞死の予防により延長する方法を開示する。具体的な目標は内在性インスリン含有量および血糖レベル上昇に対するインスリン反応を増加させることである。該発明の重要な要素は、インスリン産生β細胞中での、ＧＬＰ−Ｉ、ＧＩＰ、エキセンディン−４またはＧＬＰ−Ｉ受容体アゴニストまたはＧＩＰ受容体アゴニストなどのエフェクターの投与に応答してのプロテインキナーゼＢ／Ａｋｔの活性化である。

欧州特許第０４７９２１０号明細書は、式ＧＩＰ（１−１３）−Ｘ−ＧＩＰ（１５−３０）−Ｙ（ここでＸはＭｅｔ以外のアミノ酸残基、およびＹは、ホモセリン（ホモセリン−ラクトンを含め）（「Ｈｓｅ」と称される）、ホモセリンアミド（Ｈｓｅ−ＮＨ２）、Ｈ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ａｓｎ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−Ｈｓｅ（配列番号８）またはＨ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ａｓｎ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−Ｈｓｅ−ＮＨ２（配列番号９）より選択される）のＧＩＰ類似体を開示する。

２００３年１２月１８日に公表された、ヒンケ（Ｈｉｎｋｅ）らによる米国特許出願公開第２００３／０２３２７６１号明細書はＧＩＰのＣ末端切断断片およびＮ末端修飾類似体ならびに低減されたペプチド結合またはＤＰＰ−ＩＶ耐性および長期間半減期を提供するジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）特異的切断部位に近いアミノ酸の変換を伴う様々なＧＩＰ類似体を報告する。ＧＩＰの有望な受容体結合部位間に異なるリンカーを備える類似体もまた報告されている。

国際公開第９８／２４４６４号パンフレットは、本質的にＧＩＰの配列の位置７−３０位に対応する２４アミノ酸ポリペプチドからなるグルコース依存性インスリン分泌刺激ポリペプチド（ＧＩＰ）のアンタゴニスト、非インスリン依存性真性糖尿病の処置方法および非インスリン依存性真性糖尿病患者におけるグルコース耐性の改善方法を開示する。

国際公開第００／５８３６０号パンフレットおよび欧州特許第１１７１４６５号明細書は、インスリンの放出を刺激するペプチドを開示する。該開示はＧＩＰをＮ末端修飾する方法および糖尿病の処置用ペプチド類似体の使用を提供する。該発明中に開示される特異的ペプチド類似体は、ＧＩＰ（１−４２）のＮ末端側終端由来の少なくとも１５アミノ酸残基を含んでなる。別の実施形態において、Ｔｙｒ１−グルシトールＧＩＰ（１−４２）が開示される。

国際公開第００／２０５９２号パンフレットはＧＩＰもしくは骨密度または骨形成の維持または増加用ＧＩＰ類似体としてのＧＩＰの抗イディオタイプ抗体またはその断片を開示する。

キューン−バッヘ（Ｋｕｈｎ−Ｗａｃｈｅ）ら（２０００年）は増加したジペプチジルペプチダーゼＩＶ耐性を備えるＧＩＰの類似体を開示する（キューン−バッヘ（Ｋｕｈｎ−Ｗａｃｈｅ）ら、「Ｌａｎｇｎｅｒ ＆ Ａｎｓｏｒｇｅ，Ｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｅｐｔｉｄａｓｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｅ Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ２」、Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ／Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１８７−１９５頁）。

オハルト（Ｏ’Ｈａｒｔｅ）らおよびゴールト（Ｇａｕｌｔ）らはＧＩＰ（１−３０）類似体−Ｔｙｒ１−グルシトール−ＧＩＰおよび（Ｐｒｏ３）ＧＩＰ表示ＤＰＰ−ＩＶ耐性および亢進された生理活性を報告した。（オハルト（Ｏ’Ｈａｒｔｅ）ら、「ＮＨ２−ｔｅｒｍｉｎａｌｌｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｇａｓｔｒｉｃ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ｅｘｈｉｂｉｔｓ ａｍｉｎｏ−ｐｅｐｔｉｄａｓｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ ｅｎｈａｎｃｅｄ ａｎｔｉｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ、Ｄｉａｂｅｔｅｓ ４８、７５８−７６５頁（１９９９年）；およびゴールト（Ｇｈａｕｌｔ）ら「Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｅｎｚｙｍｅ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ｏｆ Ｇｌｕｃｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ」、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ２９０、１４２０−１４２６頁（２００２年）を参照）。

当該技術分野において知られた特異的活性ＧＩＰおよびＧＩＰ類似体は次を含む：

特に興味深いのはジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）特異的切断部位において、またはその近くで修飾される類似体であり、これはＤＰＰ−ＩＶ耐性を改善するとともに結果として半減期を延長する。アミノ酸変換としてはＧＩＰの最初の３または４残基の修飾および／または残基２と３との間の結合が挙げられ、これはＤＰＰ−ＩＶにより切断される。修飾および置換としては、Ｎ末端修飾、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、タンパク質新生および非タンパク質新生アミノ酸が挙げられる。タンパク質新生アミノ酸は天然タンパク質由来α−アミノ酸として定義される。非タンパク質新生アミノ酸は、一般の天然タンパク質の構成要素ではない、他の全てのアミノ酸として定義される。

さらに興味深いのは本明細書に記載されるとおりの１つまたは複数の修飾を有するとともに、未変性ＧＩＰ（１−３０）、未変性ＧＩＰ（１−２６）、未変性ＧＩＰ（１−Ｈ）、未変性ＧＩＰ（１−３９）、未変性ＧＩＰ（１９−３０）、未変性ＧＩＰ（１９−２６）、未変性ＧＩＰ（１９−３９）、未変性ＧＩＰ（１９−４２）または未変性ＧＩＰ（１−４２）に対しＧＩＰ部分の全長にわたり、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を呈する新規ＧＩＰ類似体である。

特に興味深いのは、ＧＩＰのＮ末端側終端、例えば、少なくとも１個のアミノ酸置換または修飾を位置１−３位で有するとともに生物学的に活性である、ＧＩＰ（１−４２）由来の少なくとも１１、１２、１３、１４または１５アミノ酸残基を含んでなるＧＩＰ化合物である。これは、いずれも分子中に存在するか、もしくは導入される、少なくとも１個のリジン残基のε−アミノ基での脂肪酸付加による修飾を含む。特定の修飾としては、ＧＩＰのＴｙｒ１−グルシトール、例えばＴｙｒ１−グルシトールＧＩＰ（１−４２）またはＴｙｒ１−グルシトールＧＩＰ（１−３０）が挙げられる。目的のＧＩＰ類似体としては、位置１、２および／または３位におけるＤ−アミノ酸置換および／またはＮ末端糖化、アルキル化、アセチル化またはアシル化、または本明細書に記載される他のＮ末端修飾からなる群より選択される置換または修飾を含んでなるものが挙げられる。さらに興味深いのは、位置２または３位におけるアミノ酸がリジン、セリン、４−アミノ酪酸アミノ酸、Ａｉｂ、Ｄ−アラニン、サルコシンまたはプロリンにより置換される類似体である。位置１、２、または３位における、およびより詳細にはＧＩＰの位置２位におけるさらなる例示的置換は、ｄＡｌａ、Ｖａｌ、ｄノルＶａｌ、ｄＳｅｒ、Ａｂｕ、ｄＡｂｕ、ホモ−Ｓｅｒ、ｄ−ホモＳｅｒ、ｄＰｒｏ、シクロプロピルＡｌａ、ｄ−シクロプロピルＡｌａ、シクロヘキシルＡｌａ、ｄ−シクロヘキシルＡｌａ、Ａ（ＮＭｅ）、Ａｉｂ、およびシクロプロップＧｌｙである。

一実施態様において、ＧＩＰ類似体またはハイブリッドは、受容体結合および活性化を保持しつつ、ＤＰＰ−ＩＶ切断を低下させるために位置２のセリンを有する。かくして、本明細書において特に考えられるのは、本明細書に開示されたＧＩＰ類似体およびハイブリッドの各々のＳｅｒ２類似体である。一例として、位置２のｄＡｌａに代えてセリン置換を有する０６０１ＧＩＰ３７９４の類似体が特に考えられる。

さらに例示的なＧＩＰ類似体化合物はＮ末端において修飾を有し、そのＧＩＰ受容体結合を保持し、ここでＮ末端修飾としては、Ｈ、イソカプ、イソＢｕＯＣＯ、オクチルグリシン、Ｙ（ＮＭｅ）およびサクシノイルが挙げられる。さらに例示的なＧＩＰ化合物としては、そのＧＩＰ受容体結合および受容体活性化活性を保持しながら、脂肪酸修飾または本明細書に記載されるとおりの修飾の組み合わせを備えるものが挙げられる。例えば、Ｎ末端修飾は位置１、２または３位における置換または修飾（これは本明細書に記載されるとおりのＤＰＰ−ＩＶに対する耐性を供与する）または脂肪酸アシル誘導体修飾（これは腎クリアランスを低減できる）と併用され得る。別の例において、位置１、２または３位における置換または修飾は脂肪酸アシル誘導体と併用される。例えばＮ末端オクチルグリシンは位置１、２位でｄ−アミノ酸と、または、特に位置２位でＤ−Ａｌａと併用される。一実施形態において脂肪酸アシル置換は位置１６位のリジンまたは位置１４位のメチオニンに対するオクチルグリシンである。他の実施形態において位置１４位のメチオニンは欠失され、およびこれは、例えば、位置１６または３０位のリジンに対するオクチルグリシンとさらに併用され得る。別の置換は、例えばオクチル基またはパルミトイル基を伴う、位置１６または３０位のリジンのアシル化である。他の実施形態としては、オクチルグリシンが位置１６または３０位のリジンに対して、または位置１４位のメチオニンに対して置換される脂肪酸アシル置換が挙げられる。酸化を除去または低減するため、位置１４位のメチオニンが欠失、または例えばロイシンもしくは他の低分子量疎水性アミノ酸で、置換され、および／または位置２５位のトリプトファンが欠失、または例えばフェニルアラニンで、置換される。

一実施形態としては、ＧＩＰのアミノ酸１−３０において少なくとも１または２個のアミノ酸欠失を有する類似体、アミノ酸４−３０において１または２個の欠失を有する類似体、およびアミノ酸４−１５において１個または複数の欠失を有する類似体、およびＧＩＰのアミノ酸１−３０、４−３０または４−１５において１個のアミノ酸欠失を有する類似体がある。当然ながらかかる修飾は、ＤＰＰ−ＩＶ耐性を供与する、酸化を低減または除去する、腎クリアランスを低減する、受容体結合を改善する、または受容体活性化を改善する改変などの、本明細書に記載されるとおりの少なくとも１個の他の改変と併用され得ることが意図される。

さらに例示的な置換は他の（非ヒト）種のＧＩＰに由来するもの、例えばロイシンにより置き換えられるメチオニン１４、Ｅにより置き換えられる位置９または２１位のＤ、アラニン、アルギニンまたはリジンにより置き換えられるヒスチジン１８、アラニン、アルギニンまたはヒスチジンにより置き換えられる位置３０位のリジン、ロイシンにより置き換えられる位置１３位のアラニン、およびセリンにより置き換えられる位置２８位のアラニンである。

一実施形態においてＧＩＰ類似体は次の修飾の１つまたは複数を有する：Ａｂｕ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、またはＳｅｒに対するｄＡｌａ２；Ｌｅｕに対するＭｅｔ１４；Ａｌａ、Ａｒｇ、またはＬｙｓに対するＨｉｓ１Ｓ；Ｇｌｕに対するＡｓｐ２１；ＡｒｇまたはＨｉｓに対するＬｙｓ３０；および／またはＧｌｙ（Ｏｃｔ）としてＮ末端。

さらに例示的なＧＩＰ修飾および組み合わせが次の化合物中に示される：

従って、本明細書に記載される修飾は、ＤＰＰ−ＩＶ耐性を供与する、酸化を低減または除去する、腎クリアランスを低減する、受容体結合を改善する、または受容体活性化を改善する改変など、本明細書に記載されるとおりの少なくとも１個の他の改変と併用され得ることが意図される。例えば、意図されるのは、同様に位置２５位でのＴｒｐ置換用のＰｈｅを有するＧＩＰ−Ｄ−Ａｌａ２または−Ｌ−Ａｌａ２類似体などの、本明細書に記載される１個または複数の置換または修飾を有する特定の類似体である。

ＧＩＰハイブリッドポリペプチド
生理活性ペプチドホルモンモジュール 本明細書中で考察されるとおり本発明のＧＩＰハイブリッドポリペプチド（「フィブリッド（ｐｈｙｂｒｉｄ）」とも称される）は一般的に、共に共有結合された少なくとも２個の生理活性ペプチドホルモンモジュールを、モジュールの１つとしてのＧＩＰペプチドとともに含んでなる。生理活性ペプチドホルモンモジュールは、（ａ）未変性成分ペプチドホルモン、（ｂ）ホルモン活性を保持する未変性成分ペプチドホルモンの類似体または誘導体、（ｃ）ホルモン活性を保持する未変性成分ペプチドホルモンの断片、（ｄ）ホルモン活性を保持する未変性成分ペプチドホルモンの類似体または誘導体の断片、（ｅ）所望の化学的安定性、立体構造的安定性、代謝的安定性、生体利用能、器官／組織ターゲティング、受容体相互作用、プロテアーゼ阻害、血漿タンパク質結合、および／または他の薬物動態学的性質をハイブリッドポリペプチドに対し供与する未変性成分ペプチドホルモンの構造モチーフ、または（ｆ）所望の化学的安定性、立体構造的安定性、代謝的安定性、生体利用能、器官／組織ターゲティング、受容体相互作用、プロテアーゼ阻害、血漿タンパク質結合、および／または他の薬物動態学的性質をハイブリッドポリペプチドに対し供与する未変性成分ペプチドホルモンの類似体または誘導体の構造モチーフであってもよい。（ｅ）および（ｆ）の構造モチーフはまとめて本明細書においては「ペプチドエンハンサー」と称されるであろう。ペプチドエンハンサーの例はＴｒｐケージ配列、特に、Ｅｘ−４短鎖または長鎖テールなどの、エキセンディン−４由来のものである。

例示的生理活性ペプチドホルモンモジュールとしては、アミリン、ＡＤＭ、ＣＴ、ＣＧＲＰ、インテルメジン、ＣＣＫ（１−３３）、ＣＣＫ−８、レプチン、ＰＹＹ（１−３６）、ＰＹＹ（３−３６）、ＰＹＹ−ＮＰＹキメラ、ＧＬＰ−Ｉ（１−３７）、ＧＬＰ−１（７−３７）、ＧＬＰ−１（７−３６）、ＧＬＰ−２、ＯＸＭ、ＧＩＰ、エキセンディン−３、エキセンディン−４、カテスタチンファミリーペプチド、ナトリウム利尿ペプチドホルモン、ウロコルチンファミリーペプチド、例えば、Ｕｃｎ−２およびＵｃｎ−３、ニューロメジンファミリーペプチド、例えばニューロメジンＵ２５またはスプライス変異体、およびＡＮＰ、ＢＮＰ、ＣＮＰまたはウロジラチンより選択される未変性ペプチドホルモンが挙げられる。

他の例示的生理活性ペプチドホルモンモジュールとしては、アミリン、ＡＤＭ、ＣＴ、ＣＧＲＰ、インテルメジン、ＣＣＫ、レプチン、ＰＹＹ（１−３６）、ＰＹＹ（３−３６）、ＧＬＰ−１（１−３７）、ＧＬＰ−１（７−３７）、ＧＬＰ−１（７−３６）、ＧＬＰ−２、ＯＸＭ、ナトリウム利尿ペプチドホルモン、ウロコルチンファミリーペプチド、例えば、Ｕｃｎ−２およびＵｃｎ−３、ニューロメジンファミリーペプチド、例えばニューロメジンＵ２５またはスプライス変異体、エキセンディン−３、およびエキセンディン−４より選択される成分ペプチドホルモンの類似体および誘導体が挙げられ、ここで該類似体または誘導体は成分ペプチドホルモンの少なくとも１種のホルモン活性を呈する。本明細書中でより完全に記載されるとともに当該技術分野において知られるように、類似体は成分ペプチドホルモンのアミノ酸配列の１つまたは複数の挿入、欠失、または置換を含んでなってもよいとともに、誘導体は類似体または成分ペプチドホルモンのアミノ酸残基の１つまたは複数の化学的修飾を含んでなってもよい。

より具体的には、類似体および誘導体は上記に記載される、および／または当該技術分野において知られた任意のものより選択されてもよい。特に、本発明の生理活性ペプチドホルモンモジュールとして有用な少なくとも１種のホルモン活性を呈する例示的類似体および誘導体は以下を含む：

当該技術分野において知られるように、かかるペプチド化合物は好ましくはアミド化されてもよいが、本発明の文意の範囲内では、別段に定めない限り場合により酸性型であってもよい。

いまだ他の例示的生理活性ペプチドホルモンモジュールとしては、アミリン、ＡＤＭ、ＣＴ、ＣＧＲＰ、インテルメジン、ＣＣＫ、レプチン、ＰＹＹ（１−３６）、ＰＹＹ（３−３６）、ＧＬＰ−１（１−３７）、ＧＬＰ−１（７−３７）、ＧＬＰ−１（７−３６）、ＧＬＰ−２、ＯＸＭ、ナトリウム利尿ペプチド、ウロコルチンファミリーペプチド、例えば、Ｕｃｎ−２およびＵｃｎ−３、ニューロメジンファミリーペプチド、例えばニューロメジンＵ２５またはスプライス変異体、エキセンディン−３、およびエキセンディン−４より選択される成分ペプチドホルモンの断片が挙げられ、ここで該断片は成分ペプチドホルモンの少なくとも１種のホルモン活性を呈する。

さらに他の例示的生理活性ペプチドホルモンモジュールとしては、アミリン、ＡＤＭ、ＣＴ、ＣＧＲＰ、インテルメジン、ＣＣＫ、レプチン、ＰＹＹ（１−３６）、ＰＹＹ（３−３６）、本明細書に開示された特定のＰＹＹ−ＮＰＹキメラ配列、ＧＬＰ−１（１−３７）、ＧＬＰ−１（７−３７）、ＧＬＰ−１（７−３６）、ＧＬＰ−２、ヒトカテスタチン、ＯＸＭ、ＡＮＰ、ＢＮＰ、ＣＮＰ、ウロジラチン、Ｕｃｎ−２およびＵｃｎ−３、ニューロメジンＵ２５またはスプライス変異体、ニューロメジンＳ、エキセンディン−３およびエキセンディン−４より選択される成分ペプチドホルモンの類似体または誘導体の断片が挙げられ、ここで該断片は成分ペプチドホルモンの少なくとも１種のホルモン活性を呈する。さらに、本明細書中でより完全に記載されるとともに当該技術分野において知られるように、類似体は成分ペプチドホルモンのアミノ酸配列の１つまたは複数の挿入、欠失、または置換を含んでなってもよいとともに、誘導体は類似体または成分ペプチドホルモンのアミノ酸残基の１つまたは複数の化学的修飾を含んでなってもよい。

少なくとも１種のホルモン活性を呈する特定の例示的断片としては以下が挙げられる。しかしながら，本明細書に記載される例示的断片を含む、当該技術分野において知られた断片と併用される上述の類似体および誘導体の組み合わせが企図されることは理解されるべきである。

さらに、当該技術分野において知られるように、かかるペプチド化合物は好ましくはアミド化されてもよいが、本発明の文意の範囲内では、別段に定めない限り場合により酸性型であってもよい。さらに、上記の例示的断片は、本明細書中で考察される、または当該技術分野において知られた任意の類似体または誘導体と併用されてもよい。例えば、例示的類似体断片としては、^５Ａｌａ，^１４Ｌｅｕ，^２５Ｐｈｅ−エキセンディン−４（１−２８）、^１４Ｌｅｕ，^２５Ｐｈｅ−エキセンディン−４（１−２７）、^５Ａｌａ，^１４Ｌｅｕ，^２５Ｐｈｅ−エキセンディン−４（１−２８）、^１４Ｌｅｕ，^２５Ｐｈｅ−エキセンディン−４（１−２７）、または開示される断片、類似体、および誘導体の任意の他の組み合わせが挙げられ得る。さらなる実施形態としては、ＮＮ２２１１およびＺＰ−１０が挙げられる。

さらに他の例示的生理活性ペプチドモジュールとしては、「ペプチドエンハンサー」、すなわち、所望の化学的安定性、立体構造的安定性、代謝的安定性、生体利用能、器官／組織ターゲティング、受容体相互作用、プロテアーゼ阻害、血漿タンパク質結合、および／または他の薬物動態学的性質をハイブリッドポリペプチドに対し供与する成分ペプチドホルモン（その類似体および誘導体を含む）の構造モチーフが挙げられる。例示的ペプチドエンハンサーとしては以下が挙げられる。

さらに、本明細書に記載される生理活性ペプチドモジュールと共に併用される上述のＧＩＰ類似体および誘導体の組み合わせが企図されることは理解されるべきである。例えば、当該技術分野において知られた、および／または上述されるアミリンファミリーペプチドホルモン類似体および誘導体の最後の６アミノ酸残基もまた例示的生理活性ペプチドモジュールとして企図される。例えば、さらに本明細書中で考察されるとおり、例示的Ｔｒｐケージ配列である、ペプチドエンハンサーＥｘ−４短鎖テール、またはその類似体が任意のＧＩＰ類似体のＣ末端に付加されるとともに、さらなる実施形態において該ペプチドエンハンサーはリンカーを使用して付着される。

一態様において、新規ＧＩＰハイブリッドは、未変性ＧＩＰ（１−３０）、未変性ＧＩＰ（１−２６）、未変性ＧＩＰ（１−１４）、未変性ＧＩＰ（１−３９）、未変性ＧＩＰ（１９−３０）、未変性ＧＩＰ（１９−２６）、未変性ＧＩＰ（１９−３９）、未変性ＧＩＰ（１９−４２）または未変性ＧＩＰ（１−４２）に対し当該ＧＩＰ部分の全長にわたり、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を呈するＧＩＰ部分を含む。

従って、特定の実施形態においてＧＩＰハイブリッドのＧＩＰ部分はｔｒｐケージモチーフを含んでなることができる。かかる望ましいＧＩＰハイブリッドとしては、Ｎ末端ＧＩＰまたは新規ＧＩＰ類似体断片が、グルコース降下活性（例えば、抗糖尿病薬、エキセンディン）または胃排出を阻害または低減する能力を有するＣ末端ポリペプチドまたはその断片と組み合わせて、挙げられる。かかる望ましいＧＩＰハイブリッドとしては、Ｎ末端ＧＩＰ断片または新規ＧＩＰ類似体断片が、Ｃ末端エキセンディン、ＧＬＰ１、シムリン（プラムリンチド）、アミリン、ＣＣＫ、ガストリン、ＰＹＹ、セクレチン、ＧＲＰ、ニューロメジン、ウロコルチン、カルシトニン、またはサケカルシトニン、またはそれらの断片と組み合わせて、挙げられる。他の実施形態において望ましいＧＩＰハイブリッドとしては、Ｃ末端ＧＩＰまたは新規ＧＩＰ類似体断片が、グルコース降下活性（例えば、抗糖尿病薬、エキセンディン）または胃排出を阻害または低減する能力を有するＮ末端ポリペプチドまたはその断片と組み合わせて、挙げられる。かかる実施形態において、キメラポリペプチドとしては、Ｃ末端ＧＩＰ、新規ＧＩＰ類似体（この場合Ｔｒｐケージ形成配列が存在する）、またはその断片が、Ｎ末端エキセンディン、ＧＬＰ１、シムリン（プラムリンチド）、アミリン、ＣＣＫ、ガストリン、ＰＹＹ、セクレチン、ＧＲＰ、ニューロメジン、ウロコルチン、カルシトニン、またはサケカルシトニン、またはそれらの断片と組み合わせて、挙げられ得る。

他の実施形態においてＧＩＰまたは新規ＧＩＰ類似体は、ガストリン／ＣＣＫ受容体リガンド；アミリン受容体リガンド；カルシトニン受容体リガンド；ＣＧＲＰ受容体リガンド、ＰＹＹ受容体リガンド、ＥＧＦ受容体リガンド；グルカゴン様ペプチド１受容体リガンド；グルカゴン様ペプチド２受容体リガンド；胃抑制ポリペプチド（ＧＩＰ）受容体リガンド；ケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）受容体１リガンド；ジペプチジルペプチダーゼＩＶインヒビター；ＲＥＧタンパク質受容体リガンド；成長ホルモン受容体リガンド；プロラクチン（ＰＲＬ）受容体リガンド；インスリン様成長因子（ＩＧＦ）受容体リガンド；ＰＴＨ関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）受容体リガンド；肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）受容体リガンド；骨形成タンパク質（ＢＭＰ）受容体リガンド、トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ受容体リガンド；ラミニン受容体リガンド；血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）受容体リガンド；線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）受容体リガンド；神経成長因子（ＮＧＦ）受容体リガンド；膵島新生関連タンパク質（ＩＮＧＡＰ）受容体リガンド；アクチビン−Ａ受容体リガンド；血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体リガンド；エリスロポエチン（ＥＰＯ）受容体リガンド；脳下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド（ＰＡＣＡＰ）受容体リガンド；顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）受容体リガンド；顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）；血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）受容体リガンド、およびセクレチン受容体リガンドと併用される。

本発明のポリペプチドは好ましくは、少なくともある部分、未変性ヒトＧＩＰの生物学的活性を保持する、例えば、本発明のポリペプチドは一般的に、ＧＩＰアゴニストまたはアンタゴニストであるだろう。一実施形態において、本発明のポリペプチドは代謝病態および障害の処置および予防において生物学的活性を呈するであろう。さらに、本発明の新規ＧＩＰ類似体ポリペプチドは内部リンカー化合物を含んでもよく、内部アミノ酸残基に化学的修飾を含んでもよく、またはＮ末端またはＣ末端残基で化学的に修飾されてもよい。さらに別の実施形態において、本発明のポリペプチドは天然Ｌアミノ酸残基および／または修飾された天然Ｌアミノ酸残基のみを含む。あるいは、別の実施形態において、本発明のポリペプチドは非天然アミノ酸残基を含まない。

例示的ＧＩＰハイブリッドの実施形態において、ＧＩＰ部分は未変性ＧＩＰのそれより優れたＤＰＰ−ＩＶ耐性を提供するべく修飾または置換されるＧＩＰ−Ｎ末端領域を含んでなる。

例示的ペプチド成分ファミリー
未変性ペプチドホルモンは、その類似体および誘導体と同様、当該技術分野において知られている。参考のため、数個の未変性ペプチドホルモンの配列が本明細書に提供される。

例示的ペプチドホルモン

これらのペプチドは一般的に、生理学的に発現される時Ｃ末端でアミド化されるが、本本発明の目的には必要でない。言い換えれば、これらのペプチドのＣ末端は、本発明のＧＩＰハイブリッドポリペプチドと同様、遊離ＯＨまたはＮＨ２基を有してもよい。これらのペプチドはまた、他の翻訳後修飾を有してもよい。当業者は、本発明のハイブリッドポリペプチドがまたＮ末端メチオニン残基を伴い構築されてもよいことを理解するであろう。

本発明における使用のための例示的ペプチドモジュールは、双方がＡＪＰ受容体で活性なアペリン３６および１３の２形態で存在するアペリン（ＬＶＱＰＲＧＳＲＮＧＰＧＰＷＱＧＧＲＲＫＦＲＲＱＲＰＲＬＳＨＫＧＰＭＰＦ−ＯＨ（配列番号４９３）および ｐＥＲＰＲＬＳＨＫＧＰＭＰＦ−ＯＨ（配列番号４９４））；ＧＰＲ１０（ＳＲＴＨＲＨＳＭＥＩＲＴＰＤＩＮＰＡＷＹＡＳＲＧＩＲＰＶＧＲＦ−ＮＨ２で等しく活性であるＰＲＰ３１およびＰＲＰ２０の２形態で存在するプロラクチン放出ペプチド（配列番号４９５）およびＴＰＤＩＮＰＡＷＹＡＳＲＧＩＲＰＶＧＲＦ−ＮＨ２（配列番号４９６））；ビッグガストリンおよびミニガストリンとして存在し、活性の大部分がペンタガストリン中の残基にあるガストリン（ＱＬＧＰＱＧＰＰＨＬＶＡＤＰＳＫＫＱＧＰＷＬＥＥＥＥＥＡＹＧＷＭＤＦ−ＮＨ２（配列番号４９７）；ｐＥＧＰＷＬＥＥＥＥＥＡＹＧＷＭＤＦ−ＮＨ２（配列番号４９８）；β−ＡＷＭＤＦ−ＮＨ２（配列番号４９９））；ＣＣＫ３３またはＣＣＫ８（中枢−対−末梢；ＫＡＰＳＧＲＭＳＩＶＫＮＬＱＮＬＤＰＳＨＲＩＳＤＲＤＹＭＧＷＭＤＦ−ＮＨ２（配列番号５００）；ＤＹＭＧＷＭＤＦ−ＮＨ２）（配列番号５５）として存在するＣＣＫ；コルチスタチン１７または２９（ＱＥＧＡＰＰＱＱＳＡＲＲＤＲＭＰＣＲＮＦＦＷＫＴＦＳＳＣＫ−ＯＨ（配列番号５０１）およびＤＲＭＰＣＲＮＦＦＷＫＴＦＳＳＣＫ−ＯＨ（配列番号５０２））として存在するコルチスタチン；ソマトスタチン１４または２８（ＳＡＮＳＮＰＡＭＡＰＲＥＲＫＡＧＣＫＮＦＦＷＫＴＦＴＳＣ−ＯＨ（配列番号５０３）；ＡＧＣＫＮＦＦＷＫＴＦＴＳＣ−ＯＨ（配列番号５０４））として存在するソマトスタチン；Ｃ末端の１０個のアミノ酸配列が大部分の活性を所有するＧＲＰ（ＶＰＬＰＡＧＧＧＴＶＬＴＫＭＹＰＲＧＮＨＷＡＶＧＨＬＭ−ＮＨ２（配列番号５０５）；ＧＮＨＷＡＶＧＨＬＭ−ＮＨ２（配列番号５０６））；Ｃ末端の１０個のアミノ酸領域が大部分の活性を所有するニューロメジンＢ（ＬＳＷＤＬＰＥＰＲＳＲＡＳＫＩＲＶＨＳＲＧＮＬＷＡＴＧＨＦＭ−ＮＨ２（配列番号５０７）；ＧＮＬＷＡＴＧＨＦＭ−ＮＨ２（配列番号５０８））；Ｃ末端の９個のアミノ酸領域が大部分の活性を所有するニューロメジンＳ（ＩＬＱＲＧＳＧＴＡＡＶＤＦＴＫＫＤＨＴＡＴＷＧＲＰＦＦＬＦＲＰＲＮ−ＮＨ２（配列番号４９２）；ＰＦＦＬＦＲＰＲＮ−ＮＨ２（配列番号５０９））；Ｃ末端の９個のアミノ酸領域が大部分の活性を所有するニューロメジンＵ（ＦＲＶＤＥＥＦＱＳＰＦＡＳＱＳＲＧＹＦＬＦＲＰＲＮ−ＮＨ２（配列番号４９１）；ＧＹＦＬＦＲＰＲＮ−ＮＨ２（配列番号４９０））；長鎖および短鎖形態として存在するニューロテンシン（ＫＩＰＹＩＬＫＲＱＬＹＥＮＫＰＲＲＰＹＩＬ−ＯＨ（配列番号５１０）；ＱＬＹＥＮＫＰＲＲＰＹＩＬ−ＯＨ）（配列番号５１１）；活性がそのＣ末端に主にあるＫｉｓｓ−１（ＧＴＳＬＳＰＰＰＥＳＳＧＳＰＱＱＰＧＬＳＡＰＨＳＲＱＩＰＡＰＱＧＡＶＬＶＱＲＥＫＤＬＰＮＹＮＷＮＳＦＧＬＲＦ−ＮＨ２（配列番号５１２）；ＥＫＤＬＰＮＹＮＷＮＳＦＧＬＲＦ−ＮＨ２（配列番号５１３））；Ｃ末端断片が活性を所有するＲＦ−アミド−３（ＳＡＧＡＴＡＮＬＰＬＲＳＧＲＮＭＥＶＳＬＶＲＲＶＰＮＬＰＱＲＦ−ＮＨ２（配列番号５１４）；ＶＰＮＬＰＱＲＦ−ＮＨ２（配列番号５１５））；ダイノルフィンＢ（リモルフィン）のビッグダイノルフィン（Ａ）として存在するダイノルフィン（ＹＧＧＦＬＲＲＩＲＰＫＬＫＷＤＮＱＫＲＹＧＧＦＬＲＲＱＦＫＶＶＴ−ＯＨ（配列番号５１６）およびＹＧＧＦＬＲＲＱＦＫＶＶＴ−ＯＨ（配列番号５１７））；Ｃ末端断片がＹ２受容体で活性であるＰＹＹ（ＹＰＩＫＰＥＡＰＧＥＤＡＳＰＥＥＬＮＲＹＹＡＳＬＲＨＹＬＮＬＶＴＲＱＲＹ−ＮＨ２（配列番号４６）；ＳＬＲＨＹＬＮＬＶＴＲＱＲＹ−ＮＨ２（配列番号５１８））；７〜４７領域が活性を保持するＡＦＰ−６（ＴＱＡＱＬＬＲＶＧＣＶＬＧＴＣＱＶＱＮＬＳＨＲＬＷＱＬＭＧＰＡＧＲＱＤＳＡＰＶＤＰＳＳＰＨＳＹ−ＮＨ２（配列番号４０）；ＶＧＣＶＬＧＴＣＱＶＱＮＬＳＨＲＬＷＱＬＭＧＰＡＧＲＱＤＳＡＰＶＤＰＳＳＰＨＳＹ−ＮＨ２（配列番号４１））；アドレノメデュリン、カルシトニンおよびＣＧＲＰを含めたアミリンファミリー；Ｃ末端アミドが活性のために一般的に必要とされ、Ｎ末端伸長を寛容できるオキシトシンを含めたＮ末端伸長可能なペプチドモジュール（およびそれらのアナログおよび断片）をさらに含む。

本発明における使用のための例示的なペプチドモジュールは、さらに、エンドセリンＩ、ＩＩおよびＩＩＩ：ＥＴＩ（ＣＳＣＳＳＬＭＤＫＥＣＶＹＦＣＨＬＤＩＩＷＶＮＴＰＥＨＶＶＰＹＧＬＧＳＰＲＳ−ＯＨ（配列番号５１９）；ＣＳＣＳＳＬＭＤＫＥＣＶＹＦＣＨＬＤＩＩＷ−ＯＨ（配列番号５２９））、ＥＴＩＩ（ＣＳＣＳＳＷＬＤＫＥＣＶＹＦＣＨＬＤＩＩＷＶＮＴＰＥＱＴＡＰＹＧＬＧＮＰＰ−ＯＨ（配列番号５２１）；ＣＳＣＳＳＷＬＤＫＥＣＶＹＦＣＨＬＤＩＩＷ−ＯＨ（配列番号５２２））およびＥＴＩＩＩ（ＣＴＣＦＴＹＫＤＫＥＣＶＹＹＣＨＬＤＩＩＷＩＮＴＰＥＱＴＶＰＹＧＬＳＮＹＲＧＳＦＲ−ＮＨ２（配列番号５２３）；ＣＴＣＦＴＹＫＤＫＥＣＶＹＹＣＨＬＤＩＩＷ−ＯＨ（配列番号５２４））；活性がその最初の１０残基に主にあるグレリ（ＧＳＳＦＬＳＰＥＨＱＲＶＱＱＲＫＥＳＫＫＰＰＡＫＬＱＰ−ＯＨ（配列番号５２５）；ＧＳＳＦＬＳＰＥＨＱ−ＯＨ（配列番号５２６））；グルカゴン様活性を持つＣ末端で伸長されたグルカゴンであるオキシントモジュリンを含めたグルカゴン（ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＫＲＮＲＮＮＩＡ−ＯＨ（配列番号５２７）；ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴ−ＯＨ（配列番号５２８））；その活性がＣ末端アミドの有無で保持されたＧＬＰ−１／ＧＬＰ−２；双方がＧＩＰ受容体で十分に活性であるＧＩＰ１−４２およびＧＩＰ１−３０の２形態で循環するＧＩＰ（ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱ−ＯＨ（配列番号５２９）；ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ−ＮＨ２（配列番号５３０））；ＧＰＲ７および８にて等しく活性であるＮＰＷ２３およびＮＰＷ３０として存在する神経ペプチドＷ（ＷＹＫＨＶＡＳＰＲＹＨＴＶＧＲＡＡＧＬＬＭＧＬＲＲＳＰＹＬＷ−ＯＨ（配列番号５３１）；ＷＹＫＨＶＡＳＰＲＹＨＴＶＧＲＡＡＧＬＬＭＧＬ−ＯＨ（配列番号５３２））；ＰＡＣＡＰ２７および３８の２形態で存在するＰＡＣＡＰ（ＨＳＤＧＩＦＴＤＳＹＳＲＹＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＡＡＶＬＧＫＲＹＫＱＲＶＫＮＫ−ＮＨ２（配列番号５３３）；ＨＳＤＧＩＦＴＤＳＹＳＲＹＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＡＡＶＬ−ＮＨ２（配列番号５３４））；ＰＨＩおよびＰＨＶ（ＨＡＤＧＶＦＴＳＤＦＳＫＬＬＧＱＬＳＡＫＫＹＬＥＳＬＭＧＫＲＶＳＳＮＩＳＥＤＰＶＰＶ−ＯＨ（配列番号５３５）；ＨＡＤＧＶＦＴＳＤＦＳＫＬＬＧＱＬＳＡＫＫＹＬＥＳＬＭ−ＮＨ２（配列番号５３６））；ＧＲＦ２９およびＧＲＦ４０の２形態で存在するＧＲＦ（ＹＡＤＡＩＦＴＮＳＹＲＫＶＬＧＱＬＳＡＲＫＬＬＱＤＩＭＳＲＱＱＧＥＳＮＱＥＲＧＡＲＡＲＬ−ＮＨ２（配列番号５３７）；ＹＡＤＡＩＦＴＮＳＹＲＫＶＬＧＱＬＳＡＲＫＬＬＱＤＩＭＳ−ＯＨ（配列番号５３８））；全長ＰＴＨ１−８４の活性を所有するＰＴＨ１−３４および１−３７形態（ＳＶＳＥＩＱＬＭＨＮＬＧＫＨＬＮＳＭＥＲＶＥＷＬＲＫＫＬＱＤＶＨＮＦＶＡＬＧＡＰＬＡＰＲＤＡＧＳＱＲＰＲＫＫＥＤＮＶＬＶＥＳＨＥＫＳＬＧＥＡＤＫＡＤＶＮＶＬＴＫＡＫＳＱ（配列番号５３９）；ＳＶＳＥＩＱＬＭＨＮＬＧＫＨＬＮＳＭＥＲＶＥＷＬＲＫＫＬＱＤＶＨＮＦＶＡＬ−ＯＨ（配列番号５４０）；ＳＶＳＥＩＱＬＭＨＮＬＧＫＨＬＮＳＭＥＲＶＥＷＬＲＫＫＬＱＤＶＨＮＦ−ＯＨ（配列番号５４１））その１−３６が全長１−８６の活性を所有するＰＴＨ−ＲＰ（ＡＶＳＥＨＱＬＬＨＤＫＧＫＳＩＱＤＬＲＲＲＦＦＬＨＨＬＩＡＥＩＨＴＡＥＩＲＡＴＳＥＶＳＰＮＳＫＰＳＰＮＴＫＮＨＰＶＲＦＧＳＤＤＥＧＲＹＬＴＱＥＴＮＫＶＥＴＹＫＥＱＰＬＫＴＰＧＫＫＫＫＧＫＰ−ＮＨ２（配列番号５４２）；ＡＶＳＥＨＱＬＬＨＤＫＧＫＳＩＱＤＬＲＲＲＦＦＬＨＨＬＩＡＥＩＨＴＡＥＩ−ＯＨ（配列番号５４３）） 短いγ−ＭＳＨ１および長いγ−ＭＳＨ１が類似する活性を有するγ−ＭＳＨ（ＹＶＭＧＨＦＲＷＤＲＦＧＲＲＮＳＳＳＳＧＳＳＧＡＧＱ−ＯＨ（配列番号５４４）；ＹＶＭＧＨＦＲＷＤＲＦ−ＮＨ２（配列番号５４５））；α−ＭＳＨがＡＣＴＨの活性部分であるＭＳＨ（ＳＹＳＭＥＨＦＲＷＧＫＰＶＧＫＫＲＲＰＶＫＶＹＰＮＧＡＥＤＥＳＡＥＡＦＰＬＥＦ−ＯＨ（配列番号５４６）；ＳＹＳＭＥＨＦＲＷＧＫＰＶ−ＮＨ２（配列番号５４７））；およびΑ、Δおよびγエンドルフィンがより大きなβエンドルフィンの活性サブペプチドであるエンドルフィン（ＹＧＧＦＭＴＳＥＫＳＱＴＰＬＶＴＬＦＫＮＡＩＩＫＮＡＹＫＫＧＥ−ＯＨ（配列番号５４８）；ＹＧＧＦＭＴＳＥＫＳＱＴＰＬＶＴＬＦＫＮＡＩＩＫＮＡＹ−ＯＨ（配列番号５４９）；ＹＧＧＦＭＴＳＥＫＳＱＴＰＬＶＴＬ−ＯＨ（配列番号３７３）；ＹＧＧＦＭＴＳＥＫＳＱＴＰＬＶＴ−ＯＨ（配列番号５５０））を含めたＣ末端で伸長可能なペプチドモジュールを含む。

例えば、メラノコルチンは、α−メラニン細胞刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）および副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）を含めたプロ−オピオメラノコルチン遺伝子からのペプチドであり、５つのメラノコルチン受容体ＭＣ１−５Ｒが知られている。ＭＣ４Ｒは、エネルギーバランスおよび肥満において役割を演じるようである。例えば、アンダーソン（Ａｎｄｅｒｓｏｎ）ら， Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ １１：１５８３−１５９２（２００１）， Ｓｐｅａｋｅら， Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ １２：１６３１−１６３８（２００２）， Ｂｅｄｎａｒｅｋら， Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ １４：３２７−３３６（２００４）参照。

ＧＩＰハイブリッドを含んでなることに加え、他の実施形態において本明細書に記載されるホルモンは、本発明のＧＩＰ類似体が同時投与される、補助治療において使用され得ることもまた意図される。

アミリンファミリー 本明細書中で考察されるとおりＧＩＰまたは新規ＧＩＰ類似体を伴う本発明に有用な成分ペプチドホルモンとしては、アミリン、アドレノメデュリン（「ＡＤＭ」）、カルシトニン（「ＣＴ」）、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（「ＣＧＲＰ」）、インテルメジン（「ＡＦＰ−６」としても知られる）および関連ペプチドを含むアミリンファミリーペプチドホルモンが挙げられる。未変性アミリンファミリーペプチドホルモンは、機能性ペプチド類似体および誘導体と同様、当該技術分野において知られている。特定の例示的未変性ペプチド、ペプチド類似体および誘導体が本明細書に記載されるが、当該技術分野において知られたホルモン活性を呈する任意の既知のアミリンファミリーペプチドが本発明と併せて使用されてもよいことは認識されるべきである。当該技術分野において知られた任意のアミリン類似体または誘導体が本発明と併せて使用されてもよい。

代謝性疾患および障害に関与するペプチドホルモンの別のファミリーは、アミリン、カルシトニン、カルシトニン遺伝子関連ペプチド、アドレノメデュリン、およびインテルメジン（「ＡＦＰ−６」としても知られる）を含む、ペプチドホルモンのアミリンファミリーである。アミリンは３７アミノ酸ペプチドホルモンである。これはヒト２型糖尿病の膵島におけるアミロイド沈着の主要成分として単離、精製および化学的にキャラクタライズされた（クーパー（Ｃｏｏｐｅｒ）ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ、８４：８６２８−８６３２頁（１９８７年））。アミリン分子は２個の翻訳後修飾を有する：Ｃ末端がアミド化されるとともに、位置２および７位のシステインがＮ末端ループを形成するべく架橋される。ヒトアミリン遺伝子のオープンリーディングフレーム配列は、ＬｙｓのＮ末端コドンより前の、Ｌｙｓ−Ａｒｇ二塩基性アミノ酸タンパク質分解切断シグナル、およびそのＮ末端位置におけるＬｙｓ−Ａｒｇタンパク質分解シグナルより前のＧｌｙ、タンパク質アミド化酵素のＰＡＭによるアミド化用典型配列の存在を示す（クーパー（Ｃｏｏｐｅｒ）ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、１０１４：２４７−２５８頁（１９８９年））。「アドレノメデュリン」または「ＡＤＭ」とは、ヒトペプチドホルモンおよびその種変異体を意味する。より詳しくは、ＡＤＭは、連続した酵素切断およびアミド化を介して１８５アミノ酸プレプロホルモンから生成される。このプロセスは、５２アミノ酸生理活性ペプチドの遊離において最高に達する。「カルシトニン」または「ＣＴ」とは、サケカルシトニン（「ｓＣＴ」）を含めたヒトペプチドホルモンおよびその種変異体を意味する。より詳しくは、ＣＴはより大きなプロホルモンから切断された３２アミノ酸ペプチドである。それは、アミノ末端がその環の形を担うことを引き起こす一本のジスルフィド結合を含む。カルシトニンプレ−ｍＲＮＡの代替的スプライジングは、カルシトニン遺伝子関連ペプチドをコードするｍＲＮＡを与えることができ；そのペプチドは、神経および血管系において機能するようである。カルシトニン受容体はクローニングされ、７つの膜貫通のＧタンパク質共役型受容体ファミリーのメンバーであることが示されている。「カルシトニン遺伝子関連ペプチド」または「ＣＧＲＰ」とは、いずれかの生理学的形態でのヒトペプチドホルモンおよびその種変異体を意味する。「インターメジン」または「AFP-6」とは、いずれかの生理学的形態でのヒトペプチドホルモンおよびその種変異体を意味する。

アミリンは胃排出を調節するとともに、グルカゴン分泌および食物摂取を抑制し、ひいては血行中のグルコース出現速度を調節すると考えられている。アミリンはインスリンの作用を補完し、血行中からのグルコース消失速度および末梢組織によるその取り込みを調節すると見られる。これらの作用を支持する齧歯類およびヒトにおける実験的所見は、アミリンが食後グルコースコントロールにおけるインスリンの効果を少なくとも３つの独立した機序により補完し、その全てがグルコース出現速度に影響を及ぼすことを示す。第一に、アミリンは食後グルカゴン分泌を抑制する。成人健常者と比較して、１型糖尿病患者は循環アミリンを有さないとともに２型糖尿病患者は低下した食後アミリン濃度を有する。さらには、循環アミリンと結合するアミリン特異的モノクローナル抗体の注入が、対照と比べ結果として大きなグルカゴン濃度上昇をさらにもたらす。これらの結果の双方が内在性アミリンの食後グルカゴン分泌の調節における生理学的役割を指し示す。第二に、アミリンは胃腸管運動および胃排出を緩徐する。最後に、ラットアミリンの視床下部内注射はラットにおいて摂食を低減するとともに神経伝達物質代謝を変化させることを示した。特定の試験において、食物摂取量はラットアミリンおよびラットＣＧＲＰの視床下部内注射後８時間まで有意に低減された。ヒト治験において、アミリン類似体のプラムリンチドは体重または体重増加を低減することを示した。アミリンは糖尿病および肥満などの代謝性病態の処置において有益であり得る。アミリンはまた、疼痛、骨障害、胃炎を処置するため、脂質、特にトリグリセリドを調節するため、または脂肪の優先的減少および除脂肪組織の保存など体組成に影響を及ぼすため使用されてもよい。

ホルモンカルシトニン（ＣＴ）は誘発された高カルシウム血症に応答したその分泌およびその急速なカルシウム低下効果にちなんで名づけられた。これは、それ以来Ｃ細胞と呼ばれている甲状腺内の神経内分泌細胞中で産生されるとともにそこから分泌される。最研究の進んだＣＴ（１−３２）の作用は破骨細胞に対するその効果である。試験管内でのＣＴの効果としては、波状縁の急速な消失およびリソソーム酵素の放出低下が挙げられる。究極的には、ＣＴによる破骨細胞機能の阻害は結果として骨吸収の低下をもたらす。しかしながら、甲状腺摘除の症例における血清ＣＴの慢性的な低減および甲状腺髄様癌において所見される血清ＣＴ増加のいずれも、血清カルシウムまたは骨量における変化に付随しないと見られる。それゆえ、ＣＴ（１−３２）の主要機能は救急状態における急性高カルシウム血症に効くこと、および／または成長、妊娠、および授乳などの「カルシウムストレス」の期間中に骨格を保護することである可能性が最も高い。（ベッカー（Ｂｅｃｋｅｒ）、ＪＣＥＭ、８９（４）：１５１２−１５２５頁（２００４年）およびセクストン（Ｓｅｘｔｏｎ）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ６：１０６７−１０９３頁（１９９９年）に概説される）。これと一致するのは、カルシトニンおよびＣＧＲＰ−Ｉペプチドの双方を取り除くカルシトニン遺伝子ノックアウトマウスからの最近のデータであり、マウスが正常レベルの基礎カルシウム関連値だが増加した血漿カルシウム反応を有したことを明らかにした（クリハラ・Ｈ（Ｋｕｒｉｈａｒａ Ｈ）ら、Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ Ｒｅｓ．２００３ Ｆｅｂ；２６補遺：Ｓ１０５−８頁）。

ＣＴは血漿カルシウムレベルに対し効果を有するとともに破骨細胞機能を阻害し、骨粗鬆症の処置に広く使用される。治療的に、サケＣＴ（ｓＣＴ）は最小の有害作用で骨密度を増加させるとともに骨折率を低下させると見られる。ＣＴはまた、慢性骨障害であり結果として１つまたは複数の骨格領域において肥大または変形した骨をもたらす、骨パジェット病の治療としても過去２５年間にわたり成功裏に使用されてきた。ＣＴはまた、骨粗鬆症を被る間の骨痛に対するその鎮痛効果からも広く使用されるが、この効果についての機序は明確には理解されていない。

カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）は、その受容体が神経系および心血管系を含め体内に広く分布する神経ペプチドである。このペプチドは感覚神経伝達を調節すると思われるとともに今日までに発見された最も強力な内在性血管拡張ペプチドの１つである。ＣＧＲＰについて報告された生物学的効果としては、炎症におけるサブスタンスＰの調節、神経筋接合部でのニコチン受容体活性、膵酵素分泌の刺激、胃酸分泌の低減、末梢血管拡張、心促進、神経調節、カルシウム代謝の制御、骨形成刺激、インスリン分泌、体温上昇および食物摂取量低下が挙げられる。（ウィマラワンサ（Ｗｉｍａｌａｗａｎｓａ）、「アミリン，ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ ｇｅｎｅ−ｒｅｌａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ，ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ ａｎｄ ＡＤＭ：ａ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ」、Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．１９９７；ＩＩ（２−３）：１６７−２３９頁）。ＣＧＲＰの重要な役割は、α−ＣＧＲＰの静脈内投与後の平均動脈圧の減少により証明されるとおり、様々な器官に対しその強力な血管拡張作用により血流を制御することである。血管拡張作用はまた、ホモ接合体ノックアウトＣＧＲＰマウスの最近の分析により支持され、これは末梢交換神経活性の増加により引き起こされる末梢血管耐性上昇および高血圧を実証した（クリハラ・Ｈ（Ｋｕｒｉｈａｒａ Ｈ）ら、「Ｔａｒｇｅｔｅｄ ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｏｆ ＡＤＭ ａｎｄ αＣＧＲＰ ｇｅｎｅｓ ｒｅｖｅａｌｓ ｔｈｅｉｒ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｏｌｅｓ」 Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ Ｒｅｓ．２００３ Ｆｅｂ；２６補遺：Ｓ１０５−８頁）。このように、ＣＧＲＰは他の作用のなかでもとりわけ、血管拡張効果、降圧効果および心拍数の増加を誘発するようである。

ＣＧＲＰのうっ血性心不全患者への持続注入は有害作用なしに血行動態機能に対し有益な持続効果を示しており、心不全における使用を示唆する。ＣＧＲＰ使用の他の適応症としては、腎不全、急性および慢性冠動脈虚血、不整脈の処置、レイノー現象などの他の末梢血管疾患、くも膜下出血、高血圧症、および肺高血圧症が挙げられる。妊娠中毒症および早産もまた、潜在的に処置可能である。（ウィマラワンサ（Ｗｉｍａｌａｗａｎｓａ）、１９９７年）。最近の治療使用としては、片頭痛の処置用ＣＧＲＰアンタゴニストの使用が挙げられる。

アドレノメデュリン（ＡＤＭ）はペプチドを含む組織で非含有組織よりさらに多くほぼ偏在的に発現される。ＡＤＭの公表されたレビュー、（ヒンソン，Ｊ．Ｐ．（Ｈｉｎｓｏｎ，Ｊ．Ｐ．）ら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ（２０００年）２１（２）：１３８−１６７頁）は、血管拡張、細胞増殖、ホルモン分泌の調節、およびナトリウム利尿を含む生物学的作用の範囲内の、心血管系、細胞増殖、中枢神経系および内分泌系に対するその効果を詳述する。ラット、ネコ、ヒツジ、およびヒトにおける試験ではＡＤＭの静脈内注入が結果として強力で持続的な低血圧をもたらすとともに、ＣＧＲＰと比較可能であることが確認される。しかしながら、麻酔下ラットにおけるＡＤＭの平均動脈圧に対する降圧効果はＣＧＲＰアンタゴニストＣＧＲＰ８−３７により阻害されず、この効果がＣＧＲＰ受容体を介しては媒介されないことを示唆する。麻酔下、意識下または高血圧のラットへのヒトＡＤＭの急性または慢性投与は、結果として、心拍数、心拍出量および一回拍出量の同時上昇とともに、血圧の低下に伴い全末梢抵抗性に有意な低下をもたらす。

ＡＤＭはまた、胚形成および分化における重要な因子として、およびラット内皮細胞のアポトーシス生存因子としても提言されている。これは最近のマウスＡＤＭノックアウト試験により支持され、ここでＡＤＭ遺伝子の欠失したマウスホモ接合体は胚形成期の不完全血管形成を実証し、それゆえ妊娠中期で死亡した。ＡＤＭ＋／−ヘテロ接合体マウスは組織傷害に対する感受性とともに高血圧を有したことが報告された（クリハラ・Ｈ（Ｋｕｒｉｈａｒａ Ｈ）ら、Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ Ｒｅｓ．２００３年 Ｆｅｂ；２６補遺：Ｓ１０５−８頁）。

ＡＤＭは下垂体、副腎、生殖器官および膵などの内分泌器官に影響を及ぼす。ペプチドは下垂体からのＡＣＴＨ放出の阻害において役割を有すると見られる。副腎において、これはラットおよびヒトの双方における副腎皮質の分泌活性に影響を及ぼすと見られるとともに副腎の血流を増加させ、インタクトラットの副腎血管床中で血管拡張薬として作用する。ＡＤＭは雌性生殖管の至るところに存在することが示されているとともに血漿レベルは正常妊娠において上昇する。子癇前症ラットモデルにおける試験は、ＡＤＭが妊娠後期にラットに投与されると高血圧症を逆進させ得るとともに仔死亡率を低下し得ることを示す。妊娠初期の動物または子癇前症モデルの非妊娠ラットにおいては同様の効果を有しなかったことから、これはＡＤＭが子宮胎盤心血管系において重要な調節役割を果たし得ることを示唆する。膵中で、ＡＤＭは経口グルコース負荷に対するインスリン反応を減弱および遅延させることから抑制役割を果たす可能性が最も高く、結果として初期のグルコースレベル上昇をもたらす。ＡＤＭはまた、腎機能にも影響を及ぼし得る。末梢投与されたボーラスは平均動脈圧を有意に降下し得るとともに腎血流、糸球体濾過速度および尿流量を上昇させ得る。ある場合においては、Ｎａ＋排泄の増加もまたある。

ＡＤＭはまた骨および肺に対する他の末梢効果も有する。骨については、試験は心血管系および体液恒常性を超える役割を支持しているとともにＡＤＭがトランスフォーミング成長因子αなどの既知の骨芽細胞成長因子のものと比較可能な胎仔および成体齧歯類骨芽細胞に対し細胞増殖を増加させるべく作用することを実証している。骨粗鬆症研究における主要課題の１つは骨芽細胞刺激を介して骨量を増加させる治療を開発することであるためこれは臨床的に重要である。肺においては、ＡＤＭは肺血管拡張を引き起こすだけでなく、ヒスタミンまたはアセチルコリンにより誘発される気管支収縮を阻害しもする。ラットモデルにおいて肺高血圧症を処置するためのエアロゾル化ＡＤＭを使用する最近の試験は、平均肺動脈圧および全肺抵抗性がＡＤＭ処置ラットにおいて生理食塩水を投与されたラットより顕著に降下したという事実により証明されるとおり、この病態の吸入処置が有効であることを示す。この結果は全身動脈圧または心拍数における変化なしに実現された（ナガヤ・Ｎ（Ｎａｇａｙａ Ｎ）ら、Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒｃ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２００３；２８５：Ｈ２１２５−３１頁）。

健常な対象において、ＡＤＭの静脈内注入は動脈圧を低減するとともに心拍数、心拍出量、ｃＡＭＰの血漿レベル、プロラクチン、ノルエピネフリンおよびレンニンを刺激することが示されている。これらの患者において、観察される尿量またはナトリウム排出はほとんどまたは全く増加しなかった。心不全または慢性腎不全患者において、静脈内ＡＤＭは健常対象において観察されるものと同様の効果を有したとともに、投与される用量に応じて、利尿およびナトリウム利尿もまた誘発した（ニコルス，ＭＧ（Ｎｉｃｈｏｌｌｓ，ＭＧ）ら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ．２００１；２２：１７４５−１７５２頁）。実験的ＡＤＭ処置はまた、動脈および肺高血圧症、敗血症性ショックおよび虚血／再灌流傷害においても有益であることが示されている（ベルトゥスキ・Ｊ（Ｂｅｌｔｏｗｓｋｉ Ｊ．）、Ｐｏｌ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００４；５６：５−２７頁）。ＡＤＭ処置の他の適応症としては、末梢血管疾患、くも膜下出血、高血圧症、妊娠中毒症および早産、ならびに骨粗鬆症が挙げられる。

ＡＦＰ−６（すなわち、インテルメジン）の発現は主に下垂体および胃腸管内である。ＡＦＰ−６に特異的な受容体は報告されていないが、結合試験はＡＦＰ−６がアミリンファミリーの全ての既知の受容体に結合することを示す。ＡＦＰ−６はＳＫ−Ｎ−ＭＣおよびＬ６細胞発現内在性ＣＧＲＰ受容体中のｃＡＭＰ産生を増加させるとともに該細胞中でその受容体への結合において標識ＣＧＲＰと競合することが示されている。公表された生体内試験において、ＡＦＰ−６投与は、最も可能性の高いＣＲＬＲ／ＲＡＭＰ受容体との相互作用を介し、正常および自発発症高血圧ラットの双方において血圧効果を導いた。マウスへの生体内投与は、胃排出および食物摂取量の抑制を導いた。（ロウ（Ｒｏｈ）ら、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００４ Ｆｅｂ ２０；２７９（８）：７２６４−７４頁）。

アミリンファミリーペプチドホルモンの生物学的作用は一般的に、２個の密接に関連したＩＩ型Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）、カルシトニン受容体（ＣＴＲ）およびカルシトニン受容体様受容体（ＣＲＬＲ）への結合を介して媒介されることが報告されている。クローニングおよび機能性試験は、ＣＧＲＰ、ＡＤＭ、およびアミリンがＣＴＲまたはＣＲＬＲおよび受容体活性修飾タンパク質（ＲＡＭＰ）の異なる組み合わせと相互作用することを示している。多くの細胞が複数のＲＡＭＰを発現する。ＲＡＭＰおよびＣＴＲまたはＣＲＬＲのいずれかの同時発現がカルシトニン、ＣＧＲＰ、ＡＤＭ、およびアミリンの機能性受容体を生成するため必要とされると考えられる。ＲＡＭＰファミリーは３０％未満の配列同一性を共有する３つのメンバー（ＲＡＭＰ１、−２、および−３）を含んでなるが、共通のトポロジカルな構成を有する。ＣＲＬＲおよびＲＡＭＰ１の同時発現はＣＧＲＰ受容体の形成を導く。ＣＲＬＲおよびＲＡＭＰ２の同時発現はＡＤＭ受容体の形成を導く。ＣＲＬＲおよびＲＡＭＰ３の同時発現はＡＤＭおよびＣＧＲＰ受容体の形成を導く。ｈＣＴＲ２およびＲＡＭＰ１の同時発現はアミリンおよびＣＧＲＰ受容体の形成を導く。ｈＣＴＲ２およびＲＡＭＰ３の同時発現はアミリン受容体の形成を導く。

このようにアミリンファミリーホルモンモジュールを含んでなるＧＩＰハイブリッドは、ＧＩＰ機能に加え、考察されるとおりの、アミリンファミリーモジュール、例えば、アミリン、アミリン／ｓＣＴ／アミリン、ＡＤＭ、ＣＧＲＰに付随する機能および使用を提供できる。

一実施形態において、アミリン類似体および誘導体は未変性アミリンの少なくとも１種のホルモン活性を有する。特定の実施形態において、アミリン類似体は未変性アミリンが特異的結合能を有する受容体のアゴニストである。例示的アミリン類似体および誘導体としては、参照により本明細書によって援用される、米国特許出願公開第２００３／００２６８１２Ａ１号明細書に記載されるものが挙げられる。

例示的アミリン類似体としては以下のものが挙げられる：

当該技術分野において知られるように、かかるアミリン類似体は好ましくはアミド化されてもよいが、本発明の文意の範囲内では、別段に定めない限り場合により酸性型であってもよい。

当該技術分野において知られた任意のＡＤＭ類似体または誘導体が本発明と併せて使用されてもよい。一実施形態において、ＡＤＭ類似体および誘導体は未変性ＡＤＭの少なくとも１種のホルモン活性を有する。特定の実施形態において、ＡＤＭ類似体は未変性ＡＤＭが特異的結合能を有する受容体のアゴニストである。

当該技術分野において知られた任意のＣＴ類似体または誘導体が本発明と併せて使用されてもよい。一実施形態において、ＣＴ類似体および誘導体は未変性ＣＴの少なくとも１種のホルモン活性を有する。特定の実施形態において、ＣＴ類似体は未変性ＣＴが特異的結合能を有する受容体のアゴニストである。例示的ＣＴ類似体および誘導体としては、参照により本明細書によって援用される、米国特許第４，６５２，６２７号明細書、同第４，６０６，８５６号明細書、同第４，６０４，２３８号明細書、同第４，５９７，９００号明細書、同第４，５３７，７１６号明細書、同第４，４９７，７３１号明細書、同第４，４９５，０９７号明細書、同第４，４４４，９８１号明細書、同第４，４１４，１４９号明細書、同第４，４０１，５９３号明細書、および同第４，３９７，７８０号明細書に記載されるものが挙げられる。

例示的ＣＴ類似体としては以下のものが挙げられる：

当該技術分野において知られるように、かかるＣＴ類似体は好ましくはアミド化されてもよいが、本発明の文意の範囲内では、別段に定めない限り場合により酸性型であってもよい。

当該技術分野において知られた任意のＣＧＲＰ類似体または誘導体が本発明と併せて使用されてもよい。一実施形態において、ＣＧＲＰ類似体および誘導体は未変性ＣＧＲＰの少なくとも１種のホルモン活性を有する。特定の実施形態において、ＣＧＲＰ類似体は未変性ＣＧＲＰが特異的結合能を有する受容体のアゴニストである。例示的ＣＧＲＰ類似体および誘導体としては、参照により本明細書によって援用される、米国特許第４，６９７，００２号明細書、および同第４，６８７，８３９号明細書に記載されるものが挙げられる。

例示的ＣＧＲＰ類似体としては以下のものが挙げられる：

当該技術分野において知られた任意のＡＦＰ−６類似体または誘導体が本発明と併せて使用されてもよい。一実施形態において、ＡＦＰ−６類似体および誘導体は未変性ＡＦＰ−６の少なくとも１種のホルモン活性を有する。特定の実施形態において、ＡＦＰ−６類似体は未変性ＡＦＰ−６が特異的結合能を有する受容体のアゴニストである。例示的ＡＦＰ−６類似体および誘導体としては、参照により本明細書によって援用される、国際公開第２００３／０２２３０４号パンフレットに記載されるものが挙げられる。

例示的ＡＦＰ−６類似体としては以下のものが挙げられる：

当該技術分野において知られるように、かかるＡＦＰ−６類似体は好ましくはアミド化されてもよいが、本発明の文意の範囲内では、別段に定めない限り場合により酸性型であってもよい。

ＣＣＫファミリー ｈＣＣＫ（コレシストキニン）および種変異体を含むＣＣＫ、およびその様々な類似体が当該技術分野において知られている。一般に、ＣＣＫは、最初にヒトにおいて同定された３３アミノ酸配列を有するとともに、報告によればブタ、ラット、ニワトリ、チンチラ、イヌおよびヒトにおいて実証されている生体内８アミノ酸Ｃ末端断片（「ＣＣＫ−８」）を含む。他の種変異体としては、ブタ、イヌおよびモルモットにおいて所見される３９アミノ酸配列、およびネコ、イヌおよびヒトにおいて所見される５８アミノ酸、およびＣＣＫおよびガストリンの双方と相同な４７アミノ酸配列が挙げられる。Ｃ末端硫酸化チロシンオクタペプチド配列（ＣＣＫ−８）が種間にわたり比較的保存されているとともに、齧歯類の末梢における生物学的活性の最小配列であり得る。このように、用語ＣＣＫ−３３は一般的にヒトＣＣＫ（１−３３）を参照するであろう一方、ＣＣＫ−８（ＣＣＫ（２６−３３））は別段に定めない限り硫酸化および非硫酸化の双方において総称的にＣ末端オクタペプチドを参照するであろう。さらに、ペンタガストリンまたはＣＣＫ−５はＣ末端ペプチドＣＣＫ（２９−３３）を参照するであろうとともに、ＣＣＫ−４はＣ末端テトラペプチドＣＣＫ（３０−３３）を参照するであろう。

ＣＣＫは報告によれば１９２８年に胆嚢収縮を刺激するその能力による腸抽出物の調製から同定された。それ以来ＣＣＫの他の生物学的作用が、膵分泌の刺激、胃排出遅延、腸運動の刺激およびインスリン分泌の刺激を含め、報告されている。リーベルス（Ｌｉｅｖｅｒｓｅ）ら、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７１３：２６８−２７２頁（１９９４年）を参照されたい。ＣＣＫの作用としては、同様に報告によれば、心血管機能、呼吸機能、神経毒性および発作、癌細胞増殖、無痛覚、睡眠、性および生殖行動、記憶、不安およびドーパミン介在性行動に対する効果も挙げられる。クローリーおよびコルウィン（Ｃｒａｗｌｅｙ ａｎｄ Ｃｏｒｗｉｎ）、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ １５：７３１−７５５頁（１９９４年）。ＣＣＫの他の報告された効果としては、膵増殖の刺激、胆嚢収縮の刺激、胃酸分泌の阻害、膵ポリペプチド放出および蠕動の収縮成分が挙げられる。ＣＣＫの追加的な報告された効果としては血管拡張が挙げられる。ウォルシュ（Ｗａｌｓｈ）、「Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｈｏｒｍｏｎｅｓ」『Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｔｒａｃｔ』（第３版、１９９４年；Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク）。

グルカゴン、ＣＣＫおよびボンベシンの組み合わせの注射が非絶食ラットにおける練乳テスト食の摂取の阻害を個々の化合物に伴い観察される阻害を上回って増大させたことが報告されている。ヒントン（Ｈｉｎｔｏｎ）ら、Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．Ｂｕｌｌ．１７：６１５−６１９頁（１９８６年）。グルカゴンおよびＣＣＫがラットにおける偽摂食を相乗的に阻害することもまた報告されている。ルソテールおよびギアリー（ＬｅＳａｕｔｅｒ ａｎｄ Ｇｅａｒｙ）、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２５３：Ｒ２１７−２２５頁（１９８７年）；スミスおよびギブス（Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｇｉｂｂｓ）、Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７１３：２３６−２４１頁（１９９４年）。エストラジオールおよびＣＣＫが満腹感に対し相乗効果を有し得ることもまた示唆されている。デュラワ（Ｄｕｌａｗａ）ら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ １５：９１３−９１８頁（１９９４年）；スミスおよびギブス（Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｇｉｂｂｓ）、上記。その中の栄養に反応して小腸から生じるシグナルが相乗的にＣＣＫと相互作用して食物摂取量を低減し得ることもまた提言されている。コックス（Ｃｏｘ）、Ｂｅｈａｖ．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．３８：３５−４４頁（１９９０年）。加えて、ＣＣＫが数種において満腹感を誘発することが報告されている。例えば、ラットにおいて腹腔内に、ブタにおいて動脈内に、ネコおよびブタにおいて静脈内に、サル、ラット、イヌおよびヒツジにおいて脳室内に、および肥満および非肥満ヒトにおいて静脈内に注射されたＣＣＫにより摂食抑制が引き起こされたことが報告されている。リーベルス（Ｌｉｅｖｅｒｓｅ）ら、上記を参照されたい。報告によればいくつかの研究室からの試験は、摂食における阻害に対する低用量のＣＣＫの挙動特異性を、サルおよびラットの双方において食物に対する反応を非食物強化因子に対する反応と比較することにより、およびＣＣＫが通常は食事摂取後に観察される挙動の配列（すなわち、食後満腹配列）を誘発することを示すことにより、確認した。加えて、ＣＣＫ後の挙動の食物摂取後の挙動との比較は報告によれば、単独またはＣＣＫと組み合わせて、ＣＣＫと食物摂取との間の挙動類似性を明らかにしている。クローリーおよびコルウィン（Ｃｒａｗｌｅｙ ａｎｄ Ｃｏｒｗｉｎ）、上記。生理学的血漿濃度におけるＣＣＫが非肥満および肥満ヒトの双方において食物摂取を阻害するとともに満腹感を増加させることもまた報告されている。リーベルス（Ｌｉｅｖｅｒｓｅ）ら、上記を参照されたい。

ＣＣＫは１９６６年に３３アミノ酸ペプチドとしてキャラクタライズされた。クローリーおよびコルウィン（Ｃｒａｗｌｅｙ ａｎｄ Ｃｏｒｗｉｎ）、上記。ＣＣＫのアミノ酸配列の種特異的分子変異体が同定されている。報告によれば３３アミノ酸配列および切断ペプチド、その８アミノ酸Ｃ末端配列（ＣＣＫ−８）が、ブタ、ラット、ニワトリ、チンチラ、イヌおよびヒトにおいて同定されている。報告によれば３９アミノ酸配列が、ブタ、イヌおよびモルモットにおいて所見された。５８アミノ酸配列が、ネコ、イヌおよびヒトにおいて所見されていることが報告された。報告によればカエルおよびカメはＣＣＫおよびガストリンの双方と相同な４７アミノ酸配列を示す。極めて新鮮なヒト腸は、ＣＣＫ−８３と呼ばれる、少量のさらに大きな分子を含むと報告されている。ラットにおいては、報告によれば主な中間型が同定されているとともに、ＣＣＫ−２２と呼ばれる。ウォルシュ（Ｗａｌｓｈ）、「Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｈｏｒｍｏｎｅｓ」『Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｔｒａｃｔ』（第３版 １９９４年；Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク）。非硫酸化ＣＣＫ−８およびテトラペプチド（ＣＣＫ−４（ＣＣＫ（３０−３３）と呼ばれる）がラット脳において報告されている。Ｃ末端ペンタペプチド（ＣＣＫ−４（ＣＣＫ（２９−３３）と呼ばれる）はＣＣＫの構造的相同性、および神経ペプチドとの相同性も保存する。報告によればＣ末端硫酸化オクタペプチド配列のＣＣＫ−８は種間にわたり比較的保存されている。報告によれば、ラット甲状腺癌、ブタ脳、およびブタ腸由来のプレプロコレシストキニンをコードするｃＤＮＡのクローニングおよび配列解析はＣＣＫに対する前駆物質をコードする３４５ヌクレオチドを明らかにしたが、これは１１５アミノ酸であるとともに以前単離されたとして報告された全てのＣＣＫ配列を含む。クローリーおよびコルウィン（Ｃｒａｗｌｅｙ ａｎｄ Ｃｏｒｗｉｎ）、上記。

ＣＣＫは中枢神経系の至るところに、ならびに内分泌細胞および上部小腸の腸管神経内に分布すると言われる。ＣＣＫアゴニストとしては、ＣＣＫそれ自体（ＣＣＫ−３３とも称される）、ＣＣＫ−８（ＣＣＫ（２６−３３））、非硫酸化ＣＣＫ−８、ペンタガストリン（ＣＣＫ−５またはＣＣＫ（２９−３３））、およびテトラペプチド、ＣＣＫ−４（ＣＣＫ（３０−３３））が挙げられる。膵ＣＣＫ受容体において、ＣＣＫ−８は報告によれば非硫酸化ＣＣＫ−８またはＣＣＫ−４より１０００〜５０００大きい力価で結合を置換し、かつＣＣＫ−８は膵アミラーゼ分泌の刺激において非硫酸化ＣＣＫ−８またはＣＣＫ−４よりおよそ１０００倍強力であることが報告されている。クローリーおよびコルウィン（Ｃｒａｗｌｅｙ ａｎｄ Ｃｏｒｗｉｎ）、上記。大脳皮質由来のホモジネートにおいて、ＣＣＫ受容体結合は非硫酸化ＣＣＫ−８およびＣＣＫ−４により等モルであった濃度において硫酸化ＣＣＫ−８より１０倍または１００倍多く置換されると言われた。同文献。報告によればＣＣＫ受容体は様々な組織中で同定されているとともに、２種の主なサブタイプ、Ａ型受容体およびＢ型受容体が記載されている。Ａ型受容体は、膵、胆嚢、幽門括約筋および求心性迷走神経線維を含む末梢組織、および脳の別々の領域において報告されている。Ａ型受容体サブタイプ（ＣＣＫＡ）は硫酸化オクタペプチドに対し選択性であることが報告されている。Ｂ型受容体サブタイプ（ＣＣＫＢ）は脳の至るところで、および胃中で同定されているとともに、報告によれば硫酸化または全８アミノ酸を必要としない。レイデルベルガー（Ｒｅｉｄｅｌｂｅｒｇｅｒ）、Ｊ．Ｎｕｔｒ．１２４（８補遺）１３２７Ｓ−１３３３Ｓ頁（１９９４年）；クローリーおよびコルウィン（Ｃｒａｗｌｅｙ ａｎｄ Ｃｏｒｗｉｎ）、上記を参照されたい。

ＣＣＫ類似体用の様々な生体内および試験管内スクリーニング方法が当該技術分野において知られている。例としては、ＣＣＫ様活性についてテストされるべき化合物の急速静脈内注射後のイヌまたはモルモット胆嚢の収縮に関する生体内アッセイ、およびウサギ胆嚢の条片を使用する試験管内アッセイが挙げられる。ウォルシュ（Ｗａｌｓｈ）、「Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｈｏｒｍｏｎｅｓ」『Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｔｒａｃｔ』（第３版 １９９４年；Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク）を参照されたい。

特定の例示的ＣＣＫおよびＣＣＫ活性を備えるＣＣＫ類似体としては以下のものが挙げられる：

当該技術分野において知られるように、かかるＣＣＫペプチドは好ましくはアミド化されてもよいが、本発明の文意の範囲内では、別段に定めない限り場合により酸性型であってもよい。

レプチンファミリー 本発明に有用な成分ペプチドホルモンとしてはまた、レプチンファミリーペプチドホルモンも挙げられる。未変性レプチンファミリーペプチドホルモンは、機能性ペプチド類似体および誘導体と同様、当該技術分野において知られている。特定の例示的未変性ペプチド、ペプチド類似体および誘導体が本明細書に記載されるが、当該技術分野において知られたホルモン活性を呈する任意の既知のレプチンファミリーペプチドが本発明と併せて使用されてもよいことは認識されるべきである。

このようにレプチンファミリーホルモンモジュールを含んでなるＧＩＰハイブリッドは、ＧＩＰ機能に加え、考察されるとおりの、レプチンファミリーモジュール、例えば、レプチン、レプチン断片に付随する機能および使用を提供できる。

当該技術分野において知られた任意のレプチン類似体または誘導体が本発明と併せて使用されてもよい。一実施形態において、レプチン類似体および誘導体は未変性レプチンの少なくとも１種のホルモン活性を有する。特定の実施形態において、レプチン類似体は未変性レプチンが特異的結合能を有する受容体のアゴニストである。好ましいレプチン類似体および誘導体としては、例えば、その全てが参照により本明細書によって援用される、国際公開第２００４／０３９８３２号パンフレット、国際公開第９８／５５１３９号パンフレット、国際公開第９８／１２２２４号パンフレット、および国際公開第９７／０２００４号パンフレットに記載されるものが挙げられる。

一実施態様において、レプチンペプチドには、ＷＯ９７０４６５８５に開示されたＭＶＰＩＱＫ（配列番号５５１）、ＶＱＤＤＴＫ（配列番号５５２）、ＴＬＩＫ（配列番号５５３）、ＴＩＶＴＲ（配列番号５５４）、ＩＮＤＩＳＨＴＱＳＶＳＳＫ（配列番号５５５）、ＶＴＧＬＤＦＩＰＧＬＨＰＩＬＴＬＳＫ（配列番号５５６）、ＮＶＩＱＩＳＮＤＬＥＮＬＲ（配列番号５５７）、ＤＬＬＨＶＬＡＦＳＫ（配列番号５５８）、ＳＣＨＬＰＷＡＳＧＬＥＴＬＤＳＬＧＧＶＬＥＡＳＧＹＳＴＥＶＶＡＬＳＲ（配列番号５５９）およびＬＱＧＳＬＱＤＭＬＷＱＬＤＬＳＰＧＣ（配列番号５６０）が挙げられる。

一実施態様において、レプチンペプチドは、アミノ酸配列Ｘａａｎ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｘａａ１−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａｎ（配列番号５６１）を有することもでき、ここに、Ｘａａｎは、長さがゼロであり得るか、またはＣ末端もしくはＮ末端のいずれかの１〜７個の間のストレッチの全長ヒトもしくはマウスレプチン配列から誘導された近接ストレッチのペプチド残基であり得るか、またはレプチンペプチドは、長さが合計１５個以下のアミノ酸である。別の実施態様において、Ｘａａ１、Ｘａａ２またはＸａａ３はいずれのアミノ酸置換でも有り得る。まだ別の実施態様において、Ｘａａ１、Ｘａａ２またはＸａａ３は全長のマウスまたはヒトレプチンにおける各残基のいずれの保存的アミノ酸置換でも有り得る。さらなる実施態様において、Ｘａａ１は、ＨｉｓおよびＳｅｒよりなる群から選択でき、Ｘａａ２またはＸａａ３は、いずれかのアミノ酸置換である。別の実施態様において、Ｘａａ２は、ＴｒｐおよびＧｌｎよりなる群から選択でき、Ｘａａ１またはＸａａ３は、いずれかのアミノ酸置換である。まだ別の実施態様において、Ｘａａ３は、ＡｌａおよびＴｈｒよりなる群から選択でき、Ｘａａ１またはＸａａ２は、いずれかのアミノ酸置換である。別の実施態様において、Ｘａａ１は、ＨｉｓおよびＳｅｒよりなる群から選択され、Ｘａａ２は、ＴｒｐおよびＧｌｎよりなる群から選択され、Ｘａａ３はＡｌａおよびＴｈｒよりなる群から選択される。ＷＯ０４０３９８３２参照。

一実施態様において、レプチンペプチドは、ｉ．ｐ．（腹腔内）投与に際して、テスト動物における体重恒常性を変調する能力を所有する天然の全長ヒトまたはマウスレプチンのＣ末端アミノ酸残基（それらの成熟形態の位置９５〜１０１に対応する）およびそのＤ−アイソフォーム、断片、誘導体、類似体および相同体を含む。配列ＳＣＳＬＰＱＴの特定のマウスＤ置換ペプチドには、［Ｄ−Ｓｅｒ−ｌ］−、［Ｄ−Ｃｙｓ−２］−、［Ｄ−Ｓｅｒ−３］−、［Ｄ−Ｌｅｕ−４］−、［Ｄ−Ｐｒｏ−５］−、［Ｄ−Ｇｌｎ−６］−、［Ｄ−Ｔｈｒ−７］−ＳＣＳＬＰＱＴおよびすべての［Ｄ］ＳＣＳＬＰＱＴが挙げられる。ＳＣＨＬＰＷＡの特定のヒトＤ−置換ペプチドには、［Ｄ−Ｓｅｒ−ｌ］−、［Ｄ−Ｃｙｓ−２］−、［Ｄ−Ｈｉｓ−３］−、［Ｄ−Ｌｅｕ−４］−、［Ｄ− Ｐｒｏ−５］−、［Ｄ−Ｔｒｐ−６］−、［Ｄ−Ａｌａ−７］−ＳＣＨＬＰＷＡおよびすべての［Ｄ］−ＳＣＨＬＰＷＡが挙げられる。加えて、そのＳＣＨＬＰＷＡおよびＳＣＳＬＰＱＴペプチドは、いずれかの２、３、４、５または６個の位置についてのＤ−アミノ酸置換を含み得る。また開示されるのは、天然のレプチンならびに、その断片、誘導体、類似体および相同体のＮ末端アミノ酸２１−３５、３１−４５、４１−５５および５１−６５を含むレプチン関連ペプチドである。本発明の追加のレプチンペプチドは、マウスおよび／またはヒト全長レプチンのアミノ酸配列６１−７５、７１−８５、８１−９５、９１−１０５、１０６−１２０、１１６−１３０、１２６−１４０、１３６−１５０、１４６−１６０および１５６−１６７を含む。ＷＯ０４０３９８３２参照。

一実施態様において、レプチンは、配列Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｘａａ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｖａｌ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｘａａ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｘａａ Ａｓｐ Ｘａａ Ｌｅｕ Ｘａａ Ｘａａ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｃｙｓ（配列番号５６４）［式中、位置６のＸａａはＴｒｐまたはＧｌｎ；位置３６のＸａａはＧｌｎまたはＧｌｕ；位置４０のＸａａはＧｌｎまたはＧｌｕ；位置４２のＸａａは、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔまたはメチオニンスルホキシド；位置４４のＸａａはＴｒｐまたはＧｌｎ；および位置４５のＸａａはＧｌｎまたはＧｌｕである］である。別の実施態様において、前記のレプチンは、位置６のＸａａはＴｒｐ；位置３６のＸａａはＧｌｎ；位置４０のＸａａはＧｌｎ；位置４２のＸａａはＭｅｔ；位置４４のＸａａはＴｒｐ；および位置４５のＸａａはＧｌｎである場合である。米国特許第５５２１２８３号明細書参照。

一実施態様において、レプチンは、以下を含めた天然配列である。
マウスレプチン：Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｔｈｒ Ｘａａ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｐｒｏ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｍｅｔ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｍｅｔ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｇｌｎ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｖａｌ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｃｙｓ（配列番号５６５）［式中、位置２８のＸａａは、Ｇｌｎまたは不存在である］；
ブタレプチン：Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｉｌｅ Ｔｒｐ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｍｅｔ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｍｅｔ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｔｙｒ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｇｌｎ Ａｌａ Ａｒｇ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｖａｌ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｃｙｓ（配列番号５６６）；
ウシレプチン：Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｉｌｅ Ｃｙｓ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｔｈｒ Ｘａａ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｍｅｔ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｔｙｒ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ａｌａ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｇｌｎ Ｖａｌ Ａｒｇ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｖａｌ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｃｙｓ（配列番号５６７）［式中、位置２８のＸａａは、Ｇｌｎまたは不存在である］；
ヒトレプチン：Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｘａａ Ｘａａ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｐｒｏ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｍｅｔ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｍｅｔ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｔｒｐ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｖａｌ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｔｒｐ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｃｙｓ（配列番号５６８）［式中、位置２７のＸａａは、ＴｈｒまたはＡｌａであって；位置２８のＸａａは、Ｇｌｎまたは不存在である］；
アカゲザルレプチン：Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｔｈｒ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｔｙｒ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｖａｌ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｔｒｐ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｃｙｓ（配列番号５６９）；；および
ラットレプチン：Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｉｌｅ Ｈｉｓ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｔｈｒ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ａｌａ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｐｒｏ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｍｅｔ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ａｌａ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｖａｌ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｃｙｓ（配列番号５７０）。

別の実施態様において、レプチンペプチド成分は、配列：Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｘａａ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｘａａ Ｘａａ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｐｒｏ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｘａａ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｘａａ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｘａａ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｘａａ Ａｓｎ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｔｒｐ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｘａａ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｖａｌ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｔｒｐ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｃｙｓ（配列番号５７１）［式中：位置２２のＸａａはＡｓｎ、ＡｓｐまたはＧｌｕ；位置２７のＸａａはＴｈｒまたはＡｌａ；位置２８のＸａａはＧｌｎ、Ｇｌｕまたは不存在；位置５４のＸａａはＭｅｔまたはＡｌａ；位置６８のＸａａはＭｅｔまたはＬｅｕ；位置７２のＸａａはＡｓｎ、ＡｓｐまたはＧｌｕ；位置７７のＸａａはＳｅｒまたはＡｌａ；位置１１８のＸａａはＧｌｙまたはＬｅｕ；該蛋白質は、以下のものよりなる群から選択される少なくとも１つの置換を有する：位置９７のＨｉｓはＳｅｒまたはＰｒｏと置換される；位置１００のＴｒｐは、 Ｇｌｎ、ＡｌａまたはＬｅｕと置換される；位置１０１のＡｌａは、ＴｈｒまたはＶａｌと置換される；位置１０２のＳｅｒは、Ａｒｇと置換される；位置１０３のＧｌｙはＡｌａと置換される；位置１０５のＧｌｕは、Ｇｌｎと置換される；位置１０６のＴｈｒは、ＬｙｓまたはＳｅｒと置換される；位置１０７のＬｅｕは、Ｐｒｏと置換される；位置１０８のＡｓｐは、Ｇｌｕと置換される；または位置１１１のＧｌｙは、Ａｓｐと置換される］
である。

別の実施態様において、レプチンは、配列：Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｘａａ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｐｒｏ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｍｅｔ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｍｅｔ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｘａａ Ａｓｎ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｔｒｐ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｘａａ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｖａｌ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｔｒｐ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｃｙｓ（配列番号５７２）［式中、前記蛋白質は、少なくとも１つの置換、好ましくは１〜５個の置換、最も好ましくは、位置２７のＸａａはＴｈｒまたはＡｌａ；位置７７のＸａａ はＳｅｒまたはＡｌａ；位置１１８のＸａａはＧｌｙまたはＬｅｕであり；該蛋白質は、位置９７のＨｉｓはＳｅｒと置換される；位置１００のＴｒｐはＧｌｎと置換される；位置１０１のＡｌａはＴｈｒと置換される；位置１０５のＧｌｕはＧｌｎと置換される；位置１０６のＴｈｒは、Ｌｙｓと置換される；位置１０７のＬｅｕはＰｒｏと置換される；位置１０８のＡｓｐはＧｌｕと置換される；または位置１１１のＧｌｙはＡｓｐと置換されるよりなる群から選択される１〜２個の置換を有する］である。前記配列の追加の実施態様において、位置２７のＸａａはＴｈｒ；位置７７のＸａａはＳｅｒ；位置１１８のＸａａはＧｌｙであって；位置９７、１００、１０１、１０５、１０６、１０７、１０８および１１１のアミノ酸残基は、以下の表の通りである：

一実施態様において、レプチンは、配列：Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｐｒｏ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｘａａ Ａｓｐ Ｘａａ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ｘａａ Ｘａａ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｘａａ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｘａａ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｘａａ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｘａａ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｘａａ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｘａａ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｖａｌ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｘａａ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｘａａ Ａｓｐ Ｘａａ Ｌｅｕ Ｘａａ Ｘａａ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｃｙｓ（配列番号：５７３）［式中、位置１３のＸａａはＩｌｅ， Ｌｅｕ， Ｍｅｔまたはメチオニンメチオニンスルホキシド；位置１５のＸａａはＧｌｎまたはＧｌｕ；位置２１のＸａａはＧｌｎまたはＧｌｕ；位置２２のＸａａはＧｌｎまたはＧｌｕ；位置２７のＸａａはＩｌｅ、Ｌｅｕ， Ｍｅｔまたはメチオニンスルホキシド；位置３１のＸａａはＡｓｎ、ＡｓｐまたはＧｌｎ；位置３４のＸａａはＧｌｎまたはＧｌｕ；位置３７のＸａａはＡｓｎ， ＡｓｐまたはＧｌｎ；位置４１のＸａａはＡｓｎ、ＡｓｐまたはＧｌｎ；位置５９のＸａａはＴｒｐまたはＧｌｎ；位置８９のＸａａはＧｌｎまたはＧｌｕ；位置９３のＸａａはＧｌｎまたはＧｌｕ；位置９５のＸａａはＩｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔまたはメチオニンスルホキシド；位置９７のＸａａはＴｒｐまたはＧｌｎであって；位置９８のＸａａはＧｌｎまたはＧｌｕである］である。別の実施態様において、前記式のレプチンは、位置１３のＸａａはＭｅｔ；位置１５のＸａａはＧｌｎ；位置２１のＸａａはＧｌｎ；位置２２のＸａａはＧｌｎ；位置２７のＸａａはＭｅｔ；位置３１のＸａａはＡｓｎ；位置３４のＸａａはＧｌｎ；位置３７のＸａａはＡｓｎ；位置４１のＸａａはＡｓｎ；位置５９のＸａａはＴｒｐ；位置８９のＸａａはＧｌｎ；位置９３のＸａａはＧｌｎ；位置９５のＸａａはＭｅｔ；位置９７のＸａａはＴｒｐであって；位置９８のＸａａはＧｌｎを有する。米国特許第５５３２３３６号明細書参照。

例示的レプチン類似体としては、位置４３のアミノ酸がＡｓｐまたはＧｌｕで置換される、位置４８がＡｌａで置換される、位置４９がＧｌｕで置換されるか、または不在である、位置７５がＡｌａで置換される、位置８９がＬｅｕで置換される、位置９３がＡｓｐまたはＧｌｕで置換される、位置９８がＡｌａで置換される、位置１１７がＳｅｒで置換される、位置１３９がＬｅｕで置換される、位置１６７がＳｅｒで置換される、およびそれらの任意の組み合わせの場合のものが挙げられる。

特定の例示的レプチンおよびレプチン活性を持つレプチン類似体としては以下のものが挙げられる：

ＰＰＦまたはＰＹＹファミリー 本発明に有用な成分ペプチドホルモンとしては、ＰＹＹ、およびＰＹＹ−ＮＰＹのキメラを含む、膵ポリペプチドファミリー（ＰＰＦ）ペプチドホルモンもまた挙げられる。未変性ＰＰＦペプチドホルモンは、機能性ペプチド類似体および誘導体と同様、当該技術分野において周知である。特定の例示的未変性ペプチド、ペプチド類似体および誘導体が本明細書に記載されるが、当該技術分野において知られたホルモン活性を呈する任意の既知のＰＹＹファミリーペプチドが本発明と併せて使用されてもよいことは認識されるべきである。

代謝性疾患および障害に関与するペプチドホルモンのさらに別のファミリーは膵ポリペプチドファミリー（「ＰＰＦ」）である。膵ポリペプチド（「ＰＰ」）はインスリン抽出物の混入物として発見され、機能的重要性よりむしろ起源であるその器官によって名づけられた（キメル（Ｋｉｍｍｅｌ）ら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ ８３：１３２３−３０頁（１９６８年））。ＰＰは特有の構造モチーフを含む３６アミノ酸ペプチドである。関連ペプチドがその後腸の抽出物中で発見され、ＮおよびＣ末端チロシンからペプチドＹＹ（「ＰＹＹ」）と名づけられた（タテモト（Ｔａｔｅｍｏｔｏ）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７９：２５１４−８頁（１９８２年））。第３の関連ペプチドが後に脳の抽出物中に見出され、神経ペプチドＹ（「ＮＰＹ」）と名づけられた（タテモト（Ｔａｔｅｍｏｔｏ）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７９：５４８５−９頁（１９８２年）；タテモト（Ｔａｔｅｍｏｔｏ）ら、Ｎａｔｕｒｅ ２９６：６５９−６０頁（１９８２年））。

これら３個の関連ペプチドは様々な生物学的効果を発揮することが報告されている。ＰＰの効果としては膵分泌の阻害および胆嚢の弛緩が挙げられる。中枢投与されたＰＰは視床下部および脳幹に局在する受容体により媒介され得る摂食に中程度の増加を生じさせる（ゲレルト（Ｇｅｈｌｅｒｔ）、Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．２１８：７−２２頁（１９９８年）に概説される）。

ＰＹＹの放出は食事後に起こる。ＰＹＹの代替の分子型はＰＹＹ（３−３６）である（エバーレイン（Ｅｂｅｒｌｅｉｎ）ら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ １０：７９７−８０３頁（１９８９年）；グラント（Ｇｒａｎｄｔ）ら、Ｒｅｇｕｌ．Ｐｅｐｔ．５１：１５１−９頁（１９９４年））。この断片はヒトおよびイヌ腸抽出物中の全ＰＹＹ様免疫応答のおよそ４０％および絶食状態における全血漿ＰＹＹ免疫応答の約３６％から食事後わずかに５０％を超えるまでを構成する。これは明らかにＰＹＹのジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶ（ＤＰＰ４）切断産物である。ＰＹＹ（３−３６）は報告によればＹ２およびＹ５受容体における選択的リガンドであり、これはＮ末端切断ＮＰＹ類似体（すなわち、ＮＰＹ類似体のＣ末端断片）を選好する点において薬理学的に固有のように見える。ＰＹＹの末梢投与は報告によれば胃酸分泌、胃運動性、膵外分泌（ヨシナガ（Ｙｏｓｈｉｎａｇａ）ら、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６３：Ｇ６９５−７０１頁（１９９２年）；グアン（Ｇｕａｎ）ら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １２８：９１１−６頁（１９９１年）；パパス（Ｐａｐｐａｓ）ら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ９１：１３８６−９頁（１９８６年））、胆嚢収縮および腸運動（サバージュ（Ｓａｖａｇｅ）ら、Ｇｕｔ ２８：１６６−７０頁（１９８７年））を低減する。ＰＹＹの胃排出、胃運動性および胃酸分泌に対する中枢注射の効果は、後脳／脳幹中またはその周囲への直接注射後に見られるとおり（チェンおよびロジャース（Ｃｈｅｎ ａｎｄ Ｒｏｇｅｒｓ）、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６９：Ｒ７８７−９２頁（１９９５年）；チェン（Ｃｈｅｎ）ら、Ｒｅｇｕｌ．Ｐｅｐｔ．６１：９５−９８頁（１９９６年）；ヤングおよびタッシュ（Ｙａｎｇ ａｎｄ Ｔａｃｈｅ）、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６８：Ｇ９４３−８頁（１９９５年）；チェン（Ｃｈｅｎ）ら、Ｎｅｕｒｏｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｍｏｔｉｌ．９：１０９−１６頁（１９９７年））、末梢注射後に観察されるそれらの効果とは異なり得る。例えば、中枢注射されたＰＹＹは、胃酸分泌が刺激され、阻害はされなかった点において、末梢注射されたＰＹＹ（３−３６）について本明細書に記載されるものとは反対のある効果を有した。胃運動性はＴＲＨ刺激との併用においてのみ抑制されたが、単独投与時にはされなかったとともに、実際にＰＰ受容体との推定される相互作用を通じて高容量で刺激性であった。ＰＹＹは中枢投与後に食物および水分摂取を刺激することが示されている（モルリー（Ｍｏｒｌｅｙ）ら、Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．３４１：２００−３頁（１９８５年）；コープ（Ｃｏｒｐ）ら、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２５９：Ｒ３１７−２３頁（１９９０年））。

当該技術分野において知られた任意のＰＰＦ類似体または誘導体が本発明におけるＧＩＰ成分と併せて使用されてもよい。一実施形態において、ＰＰＦ類似体および誘導体は未変性ＰＰＦポリペプチドの少なくとも１種のホルモン活性を有する。特定の実施形態において、ＰＰＦ類似体は未変性ＰＰＦポリペプチドが特異的結合能を有する受容体のアゴニストである。例示的ＰＰＦ類似体および誘導体としては、それらの全体が参照により本明細書に援用される、国際公開第０３／０２６５９１号パンフレットおよび国際公開第０３／０５７２３５号パンフレットに記載されるものが挙げられる。

一実施形態において、少なくとも１個のＰＰＦホルモン活性を呈する好ましいＰＰＦ類似体および誘導体は一般的に、ポリプロリンモチーフおよびＣ末端テールモチーフを含む少なくとも２個のＰＹＹモチーフを含んでなる。かかる類似体は一般的に、ここに出典明示して本明細書の一部とみなす、２００４年２月１１日に出願され、２００６年６月２２日にＵＳ２００６／０１３５４７Ａ１として公開された米国仮特許出願第６０／５４３，４０６号明細書に記載される。他の好ましいＰＰＦ類似体は、ここに出典明示して本明細書の一部とみなす、２００５年８月２５日にＷＯ２００５／０７７０９４として公開された、「Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ Ｆａｍｉｌｙ Ｍｏｔｉｆｓ ａｎｄ Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ Ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ ｔｈｅ Ｓａｍｅ」と題される、ＰＣＴ／ＵＳ第２００５／００４３５１号明細書に記載される。他の好ましいＰＰＦ類似体は、ここに出典明示して本明細書の一部とみなす、２００６年６月２２日にＷＯ２００６／０６６０２４として公開された、「Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ Ｆａｍｉｌｙ Ｍｏｔｉｆｓ， Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ ｔｈｅ Ｓａｍｅ」と題される、ＰＣＴ／ＵＳ第２００５／０４５４７１号明細書に記載される。背景を踏まえ、ＰＹＹファミリーペプチドが結合する受容体は一般的にＹ受容体と称されるとともに、研究はＹ受容体結合親和性における差異が二次および三次構造的差異と相関していることを示唆する。例えば、キエール（Ｋｅｉｒｅ）ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２０００、３９、９９３５−９９４２頁を参照されたい。未変性ブタＰＹＹは残基２３、２４、および２５での捻れ、残基１２−１４を中心とした反転、および残基３０および３１の近辺で折り畳まれるＮ末端により分離される残基１７−２２および２５〜３３由来の２個のＣ末端らせん状セグメントを含むものとして特徴づけられている。さらに、完全長ブタＰＹＹは、ＮおよびＣ末端中の残基間の疎水性相互作用により安定化されるＰＰフォールドを含むものとして特徴づけられている。同文献参照。

「ＰＹＹモチーフ」は一般的に、生物学的活性に必須である、すなわち、生物学的活性がモチーフの不在下または妨害下で実質的に減少する未変性ＰＰファミリーポリペプチドの、一次、二次、または三次の、構造的要素である。好ましいＰＹＹモチーフとしては、未変性ＰＰファミリーポリペプチドのＮ末端ポリプロリンＩＩ型モチーフ、未変性ＰＰファミリーポリペプチドのＩＩ型β反転モチーフ、未変性ＰＰファミリーポリペプチドのＣ末端側終端でのαらせんモチーフ、および未変性ＰＰファミリーポリペプチドのＣ末端テールモチーフが挙げられる。より詳細には、Ｎ末端ポリプロリン領域において、未変性ＰＰファミリーポリペプチドの残基５および８に対応するアミノ酸は一般的にプロリンとして保存されている。ＩＩ型β反転モチーフは一般的に未変性ＰＰファミリーポリペプチドの残基１２−１４に対応するアミノ酸を含むであろう。αらせんモチーフは一般的に未変性ＰＰファミリーポリペプチドのおよそ残基１４に対応するアミノ酸からＣ末端側終端に至るとともにそれを含む任意の箇所まで、αらせんモチーフが溶液中でαらせん反転が形成されるのに十分な数のアミノ酸残基を含む限り、伸長できる。αらせんモチーフはまた、αらせん反転が溶液中でなお形成される限り、未変性ＰＰファミリー配列に対するアミノ酸置換、挿入および欠失も含むことができる。Ｃ末端テールモチーフは一般的に、未変性ＰＰファミリーポリペプチドの最後のおよそ１０残基、より好ましくは未変性ＰＰファミリーポリペプチドの最後の７、６、または５残基、およびより好ましくはアミノ酸残基３２−３５に対応するアミノ酸を含む。

好ましいＰＹＹ類似体としては、ポリプロリンモチーフおよび／またはＣ末端テールモチーフに対応しないＰＹＹ分子の範囲に内部欠失、挿入、および置換を伴うものが挙げられる。例えば、位置４、６、７、９、または１０位での内部欠失が想定される。

特に注目される別の実施態様において、成分ホルモンは、少なくともＮ末端ポリプロリンＰＰＦモチーフおよびＣ末端テールＰＰＦモチーフを含む、少なくとも２つのＰＰＦモチーフを含むＰＰＦポリペプチドである。本明細書に用いた「モチーフ」とは、特定の生化学的機能の特徴であるか、または独立して折り畳まれたドメインを規定するアミノ酸配列をいう。追加のＰＰＦモチーフは、ＰＰ、ＰＹＹおよびＮＰＹを含めたいずれかのＰＰファミリーポリペプチドのモチーフ、例えば、ＰＹＹのタイプＩＩβターン領域モチーフまたはＰＹＹのＣ末端のα−らせんモチーフに対応できる。

まだ別の実施態様において、ＰＰＦファミリー成分モジュールは、第２のＰＰ、ＰＹＹまたはＮＰＹポリペプチドの少なくとも１つの追加の断片に共有結合したＰＰ、ＰＹＹまたはＮＰＹポリペプチドの断片を含むＰＰＦキメラポリペプチドであり、ここに、各ＰＰ、ＰＹＹまたはＮＰＹ断片はＰＰＦモチーフを含む。あるいは、ＰＰＦキメラは、１、２、３または４個のポリペプチドセグメントに連結したＰＰファミリーポリペプチドの断片を含むことができ、ここに、少なくとも１つの連結したポリペプチドセグメントは、第２のＰＰファミリーポリペプチドの断片である。ある実施態様において、ＰＰＦポリペプチドは、Ｃ末端ＮＰＹ断片を持つＮ末端ＰＰ断片を含まない。ＰＰＦキメラポリペプチド成分モジュールは、全長のＰＹＹ（３−３６）にわたり、未変性ＰＹＹ（３−３６）に少なくとも５０％の配列同一性を示すであろう。いくつかの実施態様において、かかるキメラポリペプチドは、全長のＰＹＹ（３−３６）にわたり、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％または少なくとも９７％の配列同一性を示すことができる。かかるＰＰＦキメラポリペプチドは、未変性のＰＰに少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％または少なくとも９７％の配列同一性を示すことができる。まだ別の実施態様において、かかるＰＰＦキメラポリペプチドは、未変性のＮＰＹに少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％または少なくとも９７％の配列同一性を示すことができる。いくつかの実施態様において、ＰＰＦキメラポリペプチドは、Ｎ末端ポリプロリンＰＰＦモチーフおよびＣ末端テールＰＰＦモチーフを含むことができる。これらのＰＰＦキメラならびに他のＰＹＹおよびＰＰ類似体は、２００６年６月２２日に公開されたＵＳ２００６／０１３５４７Ａ１に記載されている。一実施態様において、ＰＰＦファミリーペプチドのいずれも、ハイブリッド成分として含有されないならば、第２の剤、例えば、第２の抗肥満剤として本明細書に記載したハイブリッドで提供できる。

さらに、ＰＰＦキメラポリペプチドは、少なくとも部分的に、未変性のヒトＰＰ、ＰＹＹまたはＮＰＹの生物学的活性を一般的に保持するであろう。いくつかの実施態様において、ＰＰＦキメラポリペプチドは、代謝性疾患および障害の治療および予防における生物学的活性を示す。

ＰＰＦキメラのポリペプチド断片は、限定されるものではないが、直接的なアミド結合または化学的リンカー基を含めた当該技術分野において知られたいずれの方法においても一緒に共有結合できる。化学的リンカー基は、ポリペプチド立体構造を誘導または安定化するポリペプチド模倣物を含み得る。ＰＰＦキメラポリペプチドは、ＰＹＹ−ＰＰ、ＰＹＹ−ＮＰＹ、ＰＰ−ＰＹＹ、ＰＰ−ＮＰＹ、ＮＰＹ−ＰＰまたはＮＰＹ−ＰＹＹキメラを含む。

ＰＰＦキメラは、長さが少なくとも２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３または３４個のアミノ酸で有り得る。いくつかの実施態様において、ＰＹＹ類似体ペプチドは、天然Ｌ−アミノ酸残基および／または修飾された天然のＬ−アミノ酸残基だけを含む。いくつかの実施態様において、ＰＹＹ類似体ポリペプチドは、非天然のアミノ酸残基を含まない。

いくつかの実施態様において、ＰＰＦキメラポリペプチドには、ｈＰＰ（１−７）−ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１−１７）−ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１９−２３）−ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１９−２３）−Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１９−２３）−Ｈｉｓ^３４ｐＮＰＹ、ｒＰＰ（１９−２３）−ｐＮＰＹ、ｒＰＰ（１９−２３）−Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、ｒＰＰ（１９−２３）−Ｈｉｓ^３４ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１−１７）−Ｈｉｓ^３４ｐＮＰＹ、ｐＮＰＹ（１−７）−ｈＰＰ、ｐＮＰＹ（１−７、１９−２３）−ｈＰＰ、ｃＰＰ（１−７）−ｐＮＰＹ（１９−２３）−ｈＰＰ、ｃＰＰ（１−７）−ＮＰＹ（１９−２３）−Ｈｉｓ^３４ｈＰＰ、ｈＰＰ（１−１７）−Ｈｉｓ^３４ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１９−２３）−ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１９−２３）−Ｐｒｏ^３４ｐＮＰＹ、ｐＮＰＹ（１−７）−ｈＰＰ、ｐＮＰＹ（１９−２３）−ｈＰＰ、ｐＮＰＹ（１９−２３）−Ｇｌｎ^３４ｈＰＰ、ｐＮＰＹ（１９−２３）−Ｈｉｓ^３４ｈＰＰ、ｐＮＰＹ（１９−２３）−Ｐｈｅ^６Ｇｌｎ^３４ｈＰＰ、ｐＮＰＹ（１９−２３）−Ｐｈｅ^６Ｈｉｓ^３４ｈＰＰ、ｐＮＰＹ（１−７，１９−２３）−ｈＰＰ、ｐＮＰＹ（１−７，１９−２３）−Ｇｌｎ^３４ｈＰＰ、ｃＰＰ（２０−２３）−Ｐｒｏ^３４−ｐＮＰＹ、ｃＰＰ（２１−２３）−Ｐｒｏ^３４−ｐＮＰＹ、ｃＰＰ（２２−２３）−Ｐｒｏ^３４−ｐＮＰＹ、ｃＰＰ（１−７）−Ｐｒｏ^３４−ｐＮＰＹ、ｃＰＰ（２０−２３）−Ｐｒｏ^３４−ｐＮＰＹ、ｃＰＰ（１−７，２０−２３）−Ｐｒｏ^３４−ｐＮＰＹ、ｃＰＰ（１−７）−ｐＮＰＹ（１９−２３）−ｈＰＰ、ｃＰＰ（１−７）−ｐＮＰＹ（１９−２３）−Ｈｉｓ^３４ｈＰＰ、ｃＰＰ（１−７）−ｇＰＰ（１９−２３）−ｈＰＰ、ｃＰＰ（１−７）−ｐＮＰＹ（１９−２３）−Ａｌａ^３１Ａｉｂ^３２Ｇｌｎ^３４−ｈＰＰ、ｃＰＰ（１−７）−ｐＮＰＹ（１９−２３）−Ａｌａ^３１Ａｉｂ^３２Ｈｉｓ^３４−ｈＰＰ ｈＰＰ（１−７）−Ａｌａ^３１Ａｉｂ^３２−ｐＮＰＹ、ｈＰＰ（１−１７）−Ａｌａ^３１Ａｉｂ^３２−ｐＮＰＹ、ｐＮＰＹ（１−７）−Ａｌａ^３１Ａｉｂ^３２Ｇｌｎ^３４−ｈＰＰまたはｐＮＰＹ（１−７、１９−２３）−Ａｌａ^３１Ａｉｂ^３２Ｇｌｎ^３４−ｈＰＰが挙げられる。

いくつかの実施態様において、ＰＰＦキメラポリペプチドは、ＰＰファミリー類似体ポリペプチドの断片を含むことができる。例えば、ＰＰＦキメラポリペプチドは、本明細書に記載されたＰＰＦ類似体ポリペプチドならびにＰＰ類似体ポリペプチドおよびＮＰＹ類似体ポリペプチドを含み得る。

本発明のＧＩＰハイブリッドに用いる、または第２の剤としてＧＩＰハイブリッドと投与されるＰＹＹ類似体ポリペプチドは、（食物摂取、胃排出、膵臓分泌、体組成または体重低下アッセイを含めた）本明細書に記載されたアッセイの一つにおける効力を有するものであり、それは、その同一アッセイ方法において、ＮＰＹ、ＰＹＹまたはＰＹＹ（３−３６）の効力に等しいまたはその効力より大きい。いくつかの実施態様において、ＧＩＰハイブリッド成分に用いるＰＰＹ類似体ポリペプチドは、例えば、肥満、インスリン抵抗性症候群（シンドロームＸ）または真性糖尿病のごとき代謝性疾患の処置に有用で有り得る。いくつかの実施態様において、ＧＩＰハイブリッドに用いるＰＹＹ類似体ポリペプチドは、ＰＰ、ＮＰＹ、ＰＹＹまたはＰＹＹ（３−３６）に比較して、製造の容易さ、安定性および／または処方の容易さの改善を示し得る。

いくつかの実施態様において、ＰＰＦキメラポリペプチド成分部分は、栄養利用性の低下、食物摂取の低下、体重増加の効果、および／または代謝性疾患および障害の治療および予防に関して未変性のヒトＰＹＹの生物学的活性の少なくとも約２５％、または約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９８％、約９９％パーセントからを保持する。別の実施態様において、ＧＩＰハイブリッドに用いるＰＰＦキメラポリペプチドは、ＰＹＹアゴニスト活性の改善を示す。いくらかの実施態様において、ＰＰＦキメラポリペプチドは、栄養利用性の低下、食物摂取の低下、体重増加の効果、および／または代謝性疾患および障害の治療および予防に関して未変性のヒトＰＹＹの生物学的活性の少なくとも約１１０％、約１２５％、約１３０％、約１４０％、約１５０％、約２００％またはそれを超える生物活性を示す。

より詳しくは、一態様において、ＰＰＦキメラポリペプチドは、ＰＹＹの断片に連結したＰＰの断片を含む。一実施態様において、ＰＰＦキメラポリペプチドは、そのＣ末端終端にてＰＹＹまたはＰＹＹ類似体ポリペプチドのＣ末端断片に連結したＰＰまたはＰＰ類似体ポリペプチドのＮ末端断片を含む。別の実施態様において、ＰＰＦキメラポリペプチドは、そのＣ末端終端にてＰＰまたはＰＰ類似体ポリペプチドのＣ末端断片に連結したＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）またはＰＹＹ類似体ポリペプチドのＮ末端断片を含む。

いくつかの実施態様において、ＰＰＦキメラポリペプチドは、ＮＰＹの断片に連結したＰＹＹの断片を含む。一実施態様において、ＰＰＦキメラポリペプチドは、そのＣ末端終端にてＰＹＹまたはＰＹＹ類似体ポリペプチドのＣ末端断片に連結したＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）またはＰＹＹ類似体ポリペプチドのＮ末端断片を含む。別の実施態様において、ＰＰＦキメラポリペプチドは、そのＣ末端終端にてＰＹＹまたはＰＹＹ類似体ポリペプチドのＣ末端断片に連結したＮＰＹまたはＮＰＹ類似体ポリペプチドのＮ末端断片を含む。

いくつかの具体例において、ＰＰＦキメラポリペプチドは、ＮＰＹの断片に連結したＰＰの断片を含む。一実施態様において、ＰＰＦキメラポリペプチドは、そのＣ末端終端にてＮＰＹまたはＮＰＹ類似体ポリペプチドのＣ末端断片に連結したＰＰまたはＰＰ類似体ポリペプチドのＮ末端断片を含む。別の実施態様において、ＰＰＦキメラポリペプチドは、そのＣ末端終端にてＰＰまたはＰＰ類似体ポリペプチドのＣ末端断片に連結したＮＰＹまたはＮＰＹ類似体ポリペプチドのＮ末端断片を含む。

いくらかの実施態様において、ＰＰ、ＰＰ類似体ポリペプチド、ＰＹＹ、ＰＹＹ(３−３６)、ＰＹＹ類似体ポリペプチド、ＮＰＹまたはＮＰＹ類似体ポリペプチドの断片は、ＰＰ、ＰＰ類似体ポリペプチド、ＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６)、ＰＹＹ類似体ポリペプチド、ＮＰＹ、またはＮＰＹ類似体ポリペプチドの４〜２０個のアミノ酸残基をいずれかに含む断片である。いくつかの実施態様において、断片の長さが、長さが少なくとも３４個のアミノ酸の最終ＰＰＦキメラポリペプチドを得るように選択される。

また、ＧＩＰハイブリッドに用いた場合のＰＰＦキメラポリペプチドは、限定されるものではないが、かかるＰＰＦキメラポリペプチドのアミノ酸配列に対する置換、欠失および挿入ならびにそのいずれかの組合せを含めたさらなる修飾を含み得る。いくつかの実施態様において、ＰＰＦキメラポリペプチドは、「非必須の」アミノ酸残基の１またはそれを超える修飾を含む。「非必須の」アミノ酸残基は、注目する活性を消滅または実質的に低下させることなく、未変性のヒトアミノ酸配列において改変できる、すなわち、欠失または置換できる残基である。

また、ＰＰＦキメラポリペプチドの誘導体は、ＧＩＰハイブリッドに有用である。かかる誘導体には、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）または種々の長さ（例えば、ステアリル、パルミトイル、オクタノイル、オレオイル等）の脂肪酸鎖のごとき１またはそれを超える水可溶ポリマー分子にコンジュゲートしたか、またはポリ−ｈｉｓ，ポリ−ａｒｇ、ポリ−ｌｙｓおよびポリ−ａｌａのごときポリアミノ酸の付加によるＰＰＦキメラポリペプチドが挙げられる。また、ＰＰＦキメラポリペプチドに対する修飾は、短鎖アルキルおよび拘束アルキル（例えば、分岐、環状、縮合、アダマンチル）ならびに芳香族基ごとき小分子置換を含むことができる。いくつかの実施態様において、水可溶性ポリマー分子は、約５００〜約２０，０００ダルトンの範囲の分子量を有するであろう。

かかるポリマー−コンジュゲーションおよび小分子置換修飾は、アミノ酸残基のＮもしくはＣ末端またはその側鎖にて特に生じてもよく、それはＰＰＦキメラポリペプチドの配列内のハイブリッドの形成に関与しない。あるいは、ＰＰＦキメラポリペプチドに沿った誘導体化の複数の部位が存在し得る。１またはそれを超えるアミノ酸のリジン、アスパラギン酸、グルタミン酸またはシステインの置換は、誘導体化の追加の部位を提供し得る。例えば、米国特許第５，８２４，７８４号および第５，８２４，７７８号明細書参照。いくらかの実施態様において、ＰＰＦキメラポリペプチドは、１、２または３個のポリマー分子にコンジュゲートし得る。

いくつかの実施態様において、水可溶性ポリマー分子は、アミノ、カルボキシルまたはチオール基に連結され、ＮまたはＣ末端によりまたはリジン、アスパラギン酸またはシステインの側鎖にて連結し得る。別法として、水可溶性ポリマー分子は、ジアミンおよびジカルボキシル基と連結し得る。いくつかの実施態様において、ＰＰＦキメラポリペプチドは、１、２または３個のＰＥＧ分子にリジンアミノ酸のイプシロン基を介してコンジュゲートされる。

また、ＰＰＦキメラポリペプチドには、１またはそれを超えるアミノ酸残基に対する化学的改変を含むＰＰＦキメラポリペプチドが挙げられる。かかる化学的改変には、アミド化、グリコシル化、アシル化、硫酸化、リン酸化、アセチル化および環化が挙げられる。化学的改変は、ＰＰＦキメラポリペプチドの配列内のアミノ酸残基のＮまたはＣ末端または側鎖にて特に生じ得る。一実施態様において、これらのペプチドのＣ末端は、遊離−ＯＨまたは−ＮＨ_２基を有し得る。別の実施態様において、Ｎ末端は、イソブチルオキシカルボニル基、イソプロピルブチルオキシカルボニル基、ｎ−ブトキシオキシカルボニル基、エトキシオキシカルボニル基、イソカプロイル基（ｉｓｏｃａｐ）、オクタニル基、オクチルグリシン基（Ｇ（Ｏｃｔ））または８−アミノオクタン酸基でキャップし得る。いくつかの実施態様において、環化は、ジスルフィド架橋の形成を介することができる。別法として、ＰＹＹ類似体ポリペプチドに沿った複数の部位の化学的改変が存在し得る。

いくつかの実施態様において、ＰＰＦキメラポリペプチドには、ＵＳ２００６／０１３５４７Ａ１の配列番号２３８〜３４７のアミノ酸配列を有するものが挙げられる。

例示的ＰＰＦキメラポリペプチドは、式（ＶＩ）：
Ｘａａ_１ Ｘａａ_２ Ｘａａ_３ Ｘａａ_４ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｘａａ_７ Ｐｒｏ Ｘａａ_９ Ｇｌｕ
Ａｓｐ Ｘａａ_１２ Ｘａａ_１３ Ｘａａ_１４ Ｇｌｕ Ｘａａ_１６ Ｘａａ_１７ Ｘａａ_１８ Ｘａａ_１９ Ｔｙｒ Ｘａａ_２１ Ｘａａ_２２ Ｘａａ_２３ Ｌｅｕ Ｘａａ_２５ Ｘａａ_２６ Ｔｙｒ Ｘａａ_２８ Ａｓｎ Ｘａａ_３０ Ｘａａ_３１ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｘａａ_３５ Ｘａａ_３６（配列番号５７４）
［式中、Ｘａａ_１はＴｙｒまたは不存在；
Ｘａａ_２はＩｌｅ、Ｐｒｏまたは不存在；
Ｘａａ_３はＩｌｅ、ＢＨ−修飾Ｌｙｓ、Ｌｙｓ、ＶａｌまたはＰｒｏ；
Ｘａａ_４はＬｙｓ、ＢＨ−修飾Ｌｙｓ、Ａｌａ、ＳｅｒまたはＡｒｇ；
Ｘａａ_７はＡｌａ、ＧｌｙまたはＨｉｓ；
Ｘａａ_９はＧｌｙまたはＡｌａ；
Ｘａａ_１２はＡｌａまたはＰｒｏ；
Ｘａａ_１３はＳｅｒまたはＰｒｏ；
Ｘａａ_１４はＰｒｏ、ＡｌａまたはＳｅｒ；
Ｘａａ_１６はＧｌｕまたはＡｓｐ；
Ｘａａ_１７はＬｅｕまたはＩｌｅ；
Ｘａａ_１８はＡｓｎまたはＡｌａ；
Ｘａａ_１９はＡｒｇ、Ｌｙｓ、ＢＨ−修飾Ｌｙｓ、ＧｌｎまたはＮ（Ｍｅ）Ａｌａ；
Ｘａａ_２１はＴｙｒ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、ＬｙｓまたはＢＨ−修飾Ｌｙｓ；
Ｘａａ_２２はＡｌａまたはＳｅｒ；
Ｘａａ_２３はＳｅｒ、ＡｌａまたはＡｓｐ；
Ｘａａ_２５はＡｒｇ、ＬｙｓまたはＢＨ−修飾Ｌｙｓ；
Ｘａａ_２６はＨｉｓ、ＡｌａまたはＡｒｇ；
Ｘａａ_２８はＬｅｕまたはＩｌｅ；
Ｘａａ_３０はＬｅｕまたはＭｅｔ；
Ｘａａ_３１はＶａｌ、ＩｌｅまたはＬｅｕ；
Ｘａａ_３５はＬｙｓ、ＢＨ−修飾ＬｙｓまたはＡｒｇ；および
Ｘａａ_３６はＴｙｒ、ＴｒｐまたはＰｈｅである］
のポリペプチドを含む。

一実施態様において、式ＶＩのＰＰＦポリペプチドは、未変性のＰＰＦポリペプチド、ＰＹＹ（２−３６）、Ｖａｌ３ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ２５ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ２５Ｉｌｅ２８ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ２５Ｉｌｅ３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ２５Ｌｅｕ３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｙｓ２５Ｐｈｅ３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ２８ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｉｌｅ３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｅｕ３１ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｐｈｅ３６ｈＰＹＹ（３−３６）、Ｌｅｕ３１Ｐｈｅ３６ｈＰＹＹ（３−３６）またはＰｒｏ１３Ａｌａ１４ｈＰＹＹであることができる。

当業者により認識されるように、式（ＶＩ）のポリペプチドは、遊離酸形態で有り得るか、またはＣ末端でアミド化し得る。

いくつかの実施態様において、ＰＰＦポリペプチドは、未変性ヒトＮＰＹ（Ｔｙｒ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ａｓｐ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ａｌａ Ｐｒｏ Ａｌａ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｍｅｔ Ａｌａ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｔｙｒ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ｔｙｒ）（配列番号５７７）のアミノ酸残基１８〜３６より実質的になるＣ末端断片に連結した未変性ヒトＰＹＹ（Ｔｙｒ Ｐｒｏ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ｔｙｒ）（配列番号４６）の最初の１７アミノ酸残基より実質的になるＮ末端断片を含むこともでき、ここに、そのＰＹＹ断片のＮ末端の１またはそれを超えるアミノ酸残基が欠失または不存在で有り得、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換は、ＰＹＹおよびＮＰＹ断片の各々になし得る。いくつかの実施態様において、ＰＰＦポリペプチドの最初の１７個のアミノ酸より実質的になるＮ末端断片は、未変性ＰＹＹの最初の１７個のアミノ酸に少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％または少なくとも９７％の配列同一性を示し得る。いくつかの実施態様において、アミノ酸残基１８〜３６より実質的になるＰＰＦポリペプチドのＣ末端断片は、未変性ＮＰＹのアミノ酸残基１８〜３６に少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％または少なくとも９７％の配列同一性を示し得る。いくつかの実施態様において、ＰＹＹのＮ末端断片中のアミノ酸（例えば、位置５および８のプロリン、位置６、１０および１５のグルタミン酸塩、または位置１１のアスパラギン酸塩）、および／またはＮＰＹのＣ末端断片中のアミノ酸（例えば、位置２０および２７のチロシン、位置２４のロイシン、または位置２９のアスパラギン、位置３２のトレオニン、位置３３のアルギニンまたは位置３４のグルタミン）が置換される。いくつかの実施態様において、ＰＰＦポリペプチドは、ＵＳ２００６／０１３５４７Ａ１の配列番号２６６、２６７、２７４、２８２、３２０および４３６〜４８０のアミノ酸配列を有するものを含む。いくつかの実施態様において、ＰＰＦポリペプチドは、Ｎ末端キャップをさらに含む。これらのＰＰＦポリペプチドの例は、ＵＳ２００６／０１３５４７Ａ１の配列番号２８２、３２０、４３７、４４１、４４４、４４５〜４４７、４５２、４５４〜４５９、４６１〜４６４、４６６、４６８〜４７０および４７２〜４８０を含む。

他のＰＰＦポリペプチドは、式（ＶＩＩ）：
Ｘａａ_１ Ｘａａ_２ Ｐｒｏ Ｘａａ_４ Ｐｒｏ Ｘａａ_６ Ｈｉｓ Ｐｒｏ Ｘａａ_９ Ｘａａ_１０
Ｘａａ_１１ Ｘａａ_１２ Ｘａａ_１３ Ｘａａ_１４ Ｘａａ_１５ Ｘａａ_１６ Ｘａａ_１７ Ａｌａ Ｘａａ_１９ Ｔｙｒ
Ｘａａ_２１ Ｘａａ_２２ Ｘａａ_２３ Ｌｅｕ Ｘａａ_２５ Ｘａａ_２６ Ｘａａ_２７ Ｘａａ_２８ Ｘａａ_２９ Ｘａａ_３０
Ｘａａ_３１ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ｔｙｒ（配列番号５７５），
［式中、Ｘａａ_１はＴｙｒまたは不存在；
Ｘａａ_２はＩｌｅ、Ｐｒｏまたは不存在；
Ｘａａ_４はＬｙｓ、ＢＨ−修飾Ｌｙｓ、Ａｌａ、ＳｅｒまたはＡｒｇ；
Ｘａａ_６はＧｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｌａ、Ａｓｎ、ＡｓｐまたはＶａｌ；
Ｘａａ_９はＧｌｙまたはＡｌａ；
Ｘａａ_１０はＧｌｕ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、ＰｒｏまたはＡｉｂ；
Ｘａａ_１１はＧｌｕ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、ＰｒｏまたはＡｉｂ；
Ｘａａ_１２はＡｌａまたはＰｒｏ；
Ｘａａ_１３はＳｅｒまたはＰｒｏ；
Ｘａａ_１４はＰｒｏ、ＡｌａまたはＳｅｒ；
Ｘａａ_１５はＧｌｕ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、ＰｒｏまたはＡｉｂ；
Ｘａａ_１６はＧｌｕまたはＡｓｐ；
Ｘａａ_１７はＬｅｕまたはＩｌｅ；
Ｘａａ_１９はＡｒｇ、Ｌｙｓ、ＢＨ−修飾Ｌｙｓ、ＧｌｎまたはＮ（Ｍｅ）Ａｌａ；
Ｘａａ_２１はＴｙｒ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、ＬｙｓまたはＢＨ−修飾Ｌｙｓ；
Ｘａａ_２２はＡｌａまたはＳｅｒ；
Ｘａａ_２３はＳｅｒ、ＡｌａまたはＡｓｐ；
Ｘａａ_２５はＡｒｇ、ＬｙｓまたはＢＨ−修飾Ｌｙｓ；
Ｘａａ_２６はＨｉｓ、ＡｌａまたはＡｒｇ；
Ｘａａ_２７はＴｙｒまたはＰｈｅ；
Ｘａａ_２８はＬｅｕまたはＩｌｅ；
Ｘａａ_２９はＡｓｎまたはＧｌｎ；
Ｘａａ_３０はＬｅｕまたはＭｅｔ；および
Ｘａａ_３１はＶａｌ、ＩｌｅまたはＬｅｕである］のポリペプチドを含む。

当業者により認識されるように、式ＶＩＩのポリペプチドは、ＧＩＰハイブリッド中のＧＩＰまたは他のペプチドファミリー成分への結合に依存して、遊離酸形態で有り得るか、またはＣ末端でアミド化し得る。

いくつかの実施態様において、ＰＰＦポリペプチドは、未変性ヒトＮＰＹ（ＵＳ２００６／０１３５４７Ａ１の配列番号４）のアミノ酸残基１８〜３６より実質的になるＣ末端断片に連結した未変性ヒトＰＹＹ（ＵＳ２００６／０１３５４７Ａ１の配列番号２）の最初の１７個のアミン酸残基より実質的になるＮ末端断片を含むこともでき、ここに、そのＰＹＹ断片のＮ末端の１またはそれを超えるアミノ酸残基が欠失または不存在で有り得、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換は、ＰＹＹおよびＮＰＹ断片の各々になし得る。いくつかの実施態様において、ＰＰＦポリペプチドの最初の１７個のアミノ酸より実質的になるＮ末端断片は、未変性ＰＹＹの最初の１７個のアミノ酸に少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％または少なくとも９７％の配列同一性を示し得る。いくつかの実施態様において、アミノ酸残基１８〜３６より実質的になるＰＰＦポリペプチドのＣ末端断片は、未変性ＮＰＹのアミノ酸残基１８−３６に少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％または少なくとも９７％の配列同一性を示し得る。いくつかの実施態様において、ＰＹＹのＮ末端断片中のアミノ酸（例えば、位置３、５および８のプロリンまたは位置７のヒスチジン）、および／またはＮＰＹのＣ末端断片中のアミノ酸（例えば、位置１８のアラニン、位置２０および３６のチロシン、位置２４のロイシン、位置３２のトレオニン、位置３３のアルギニン、位置３４のグルタミンまたは位置３５のアルギニン）は置換されない。いくつかの実施態様において、ＰＰＦポリペプチドは、ＵＳ２００６／０１３５４７Ａ１の配列番号２６６、４３７、４３８、４３９、４４２、４６２、４６９、４７０、４７１および４７２のごときＰＹＹ−ＮＰＹキメラのアミノ酸配列を有するもの、またはアミノ酸配列Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｕ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、Ａｌａ、Ｔｙｒ、Ｉｌｅ、Ａｓｎ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｔｙｒ−ＮＨ２（配列番号４５６）を持つＰＹＹ−ＮＰＹキメラ化合物を含む。いくつかの実施態様において、ＰＰＦポリペプチドは、Ｎ末端キャップをさらに含む。これらのＰＰＦポリペプチドの例は、ＵＳ２００６／０１３５４７Ａ１の配列番号４３７、４６２、４６９、４７０および４７２を含む。例えば、ＵＳ２００６／０１３５４７Ａ１の配列４３８は、Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｈｉｓ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ａｌａ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ａｌａ Ｔｙｒ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ｔｙｒ（配列番号５７６）である。一実施態様において、本発明のハイブリッドは、特に、肥満を処置する、体重を低下させる、脂肪を低下または再分布する、およびカロリー摂取を低下させるのに有用なＧＩＰハイブリッドにおいて、一つの成分として、ＵＳ２００６／０１３５４７Ａ１の配列４３８またはアミノ酸配列Ｉｌｅ，Ｌｙｓ，Ｐｒｏ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｐｒｏ，Ｇｌｙ，Ｇｌｕ，Ａｓｐ，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，Ｇｌｕ，Ｇｌｕ，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ａｒｇ，Ｔｙｒ，Ｔｙｒ，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ａｌａ，Ｔｙｒ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｔｈｒ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ａｒｇ，Ｔｙｒ（配列番号４５６）を持つＰＹＹ−ＮＰＹキメラを含む。かかるＧＩＰハイブリッドはまた、アミリノミメティック成分またはレプチン成分あるいは双方をさらに含有できる。

ＰＰＦポリペプチドまたはＰＰＦキメラ成分を含むＧＩＰハイブリッドは、対象の体組成を改変することを含めた方法における使用を見出し、それはそのハイブリッドを対象に投与することを含み、ここに、ハイブリッドは、脂肪−対−除脂肪（ｌｅａｎ）比を改変し、それにより、体組成を改変および改善する。一実施態様において、ＰＰＦポリペプチドは、アミノ酸配列Ｉｌｅ，Ｌｙｓ，Ｐｒｏ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｐｒｏ，Ｇｌｙ，Ｇｌｕ，Ａｓｐ，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，Ｇｌｕ，Ｇｌｕ，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ａｒｇ，Ｔｙｒ，Ｔｙｒ，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ａｌａ，Ｔｙｒ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｔｈｒ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ａｒｇ，Ｔｙｒ（配列番号４５６）を持つ、ならびにＵＳ２００６／０１３５４７Ａ１からの以下の配列：配列番号２６６、２６７、２７４、２８２、３２０、４３６、４３７、４３８、４３９、４４０、４４１、４４２、４４３、４４４、４４５、４４６、４４７、４４８、４４９、４５０、４５１、４５２、４５３、４５４、４５５、４５６、４５７、４５８、４５９、４６０、４６１、４６２、４６３、４６４、４６５、４６６、４６７、４６８、４６９、４７０、４７１、４７２、４７３、４７４、４７５、４７６、４７７、４７８、４７９および４８０のＰＹＹ−ＮＰＹキメラ化合物よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含むことができる。一実施態様において、体脂肪を低下させ、除脂肪体量を維持または増加させる。一実施態様において、体脂肪および除脂肪体量は、各々、パーセント体脂肪およびパーセント除脂肪体量として測定される。一つのさらなる実施態様において、体重を低下させる。別の実施態様において、体重を維持または増加させる。その化合物は末梢投与できる。ＰＰＦポリペプチドまたはＰＰＦキメラまたはＰＰＦ含有ＧＩＰハイブリッドは、アミリン、アミリンアゴニストもしくはアミリン類似体アゴニスト、サケカルシトニン、コレシストキニン（ＣＣＫ）もしくはＣＣＫアゴニスト、レプチン（ＯＢ蛋白質）もしくはレプチンアゴニスト、エキセンディンもしくはエキセンディン類似体アゴニスト、ＧＬＰ−１、ＧＬＰ−１アゴニストもしくはＧＬＰ−１類似体アゴニスト、ＣＣＫもしくはＣＣＫアゴニスト、カルシトニン、カルシトニンアゴニスト、小分子カンナビノイドＣＢ１受容体アゴニスト、リモナバン、１１β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ−１インヒビター、シブトラミンおよびフェンテルミンよりなる群から選択される少なくとも１つの他剤を対象に投与することをさらに含む方法に用いることができる。一実施態様において、対象は体重超過または肥満である。まだ別の実施態様において、ＰＰＦポリペプチドまたはＰＰＦキメラ成分を含むＧＩＰハイブリッドは、対象における血漿中トリグリセリドレベルを優先的に低下させるための方法を含めた方法における使用を見出し、それは、血漿中トリグリセリドレベルを低下させるのに有効な化合物の量を対象に投与することを含み、ここに、コレステロールレベルは、より少ない範囲まで低下させる。さらなる実施態様において、トリグリセリドレベルを低下させ、コレステロールレベルを低下させない。さらなる実施態様において、トリグリセリドレベルを低下させ、ＬＤＬコレステロールレベルを低下させない。さらなる実施態様において、トリグリセリドレベルを低下させ、ＬＤＬコレステロールレベルをより小さな範囲まで低下させる。まださらなる実施態様においてまた、アミラーゼレベルも低下させる。さらなる別の実施態様において、ＰＰＦポリペプチドまたはＰＰＦキメラを含むＧＩＰハイブリッドは、除脂肪体量を維持または増加しつつ、対象における体脂肪または体脂肪増加を低下させる方法を含めた方法における使用を見出し、それは、除脂肪体量を維持または増加しつつ、体脂肪または体脂肪増加を低下させるのに有効な化合物の量を対象に投与するこを含む。別の実施態様において、ＰＰＦポリペプチドまたはＰＰＦキメラを含むＧＩＰハイブリッドは、対象における内臓体脂肪を低下させる方法を含めた方法における使用を見出し、それは、内臓体脂肪を低下させ、除脂肪体量を維持または増加させるのに有効な化合物の量を対象に投与するこを含む。他の実施態様において、ＰＰＦポリペプチドまたはＰＰＦキメラを含むＧＩＰハイブリッドは、対象における脂肪分布を改変する方法を含めた方法における使用を見出す。一態様において、改変は、対象における内臓または異所性脂肪、またはその双方の代謝の増加から起因する。別の実施態様において、ＰＰＦポリペプチドまたはＰＰＦキメラを含むＧＩＰハイブリッドは、対象において除脂肪量を保存および増加しつつ、脂肪酸β−酸化を増加させる方法を含めた方法における使用を見出し、それは、除脂肪体量を保存または増加しつつ脂肪酸β−酸化を増加させるのに有効な化合物の量を対象に投与することを含む。別の実施態様において、ＰＰＦポリペプチドまたはＰＰＦキメラを含むＧＩＰハイブリッドは、対象において非アルコール性脂肪性肝炎または脂肪萎縮症を処置する方法を含めた方法における使用を見出し、それは、非アルコール性脂肪性肝炎または脂肪萎縮症を処置するのに有効な化合物の量を対象に投与することを含む。前記の使用において特に注目されるＧＩＰハイブリッドは、さらにアミリン−ｓＣＴ−アミリンハイブリッドのごときレプチンファミリーまたはアミリンファミリーあるいはその双方からの成分と組み合わせて、本明細書に記載されたＰＰＦキメラを含有できる。ＧＩＰ／ＰＰＦ−キメラ／レプチンハイブリッドまたはＧＩＰ／ＰＰＦ−キメラ／アミリン−ｓＣＴ−アミリンハイブリッドは、いずれの親化合物単独にも優れた効果を提供するであろう。まださらなる実施態様において、ＧＩＰ／ＰＰＦ−キメラ／レプチンハイブリッドは、アミリン−ｓＣＴ−アミリンキメラのごときアミリノミメティックと投与され、あるいはＧＩＰ／ＰＰＦ−キメラ／アミリン−ｓＣＴ−アミリンハイブリッドは、レプチンと共に投与される。

インクレチンおよびインクレチン模倣物 本発明に有用な成分ペプチドホルモンとしてはまた、ＧＬＰ−Ｉペプチドホルモンも挙げられる。未変性ＧＬＰ−Ｉペプチドホルモンは、ＧＬＰ−Ｉ（１−３７）、ＧＬＰ−１（７−３７）、およびＧＬＰ−Ｉ（７−３６）アミドを含め、機能性ペプチド類似体および誘導体と同様、当該技術分野において周知である。本明細書で使用されるとき、ＧＬＰ−ＩはＧＬＰ−Ｉペプチドホルモンの全ての未変性型を参照する。特定の例示的未変性ペプチド、ペプチド類似体および誘導体が本明細書に記載されるが、当該技術分野において知られたホルモン活性を呈する任意の既知のＧＬＰ−Ｉペプチドが本発明と併せて使用されてもよいことは認識されるべきである。

多くの代謝性疾患および障害の中枢はインスリンレベルおよび血糖レベルの調節にある。インスリン分泌はある部分、インクレチンと称される、分泌促進ホルモンにより調節され、これは腸内分泌細胞により産生される。インクレチンホルモン、グルカゴン様ペプチド−１（「ＧＬＰ−Ｉ」）は腸細胞により分泌されるペプチドホルモンであり、インスリン分泌に対し亢進効果を生むことが複数の試験で示されている。ＧＬＰ−Ｉはプログルカゴンから腸中でプロセシングされるとともに栄養誘発性インスリン放出を亢進する（クルシマン・Ｂ（Ｋｒｃｙｍａｎｎ Ｂ）ら、Ｌａｎｃｅｔ、２：１３００−１３０３頁（１９８７年））。ＧＬＰ−Ｉの様々な切断形態が、インスリン分泌（インスリン分泌刺激作用）およびｃＡＭＰ形成を刺激することが知られている（例えば、モイソフ・Ｓ（Ｍｏｊｓｏｖ，Ｓ．）、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐ．Ｐｒｏ．Ｒｅｓ．、４０：３３３−３４３頁（１９９２年））。様々な試験管内研究室実験と、哺乳動物、特にヒトの、ＧＬＰ−Ｉ、ＧＬＰ−１（７−３６）アミド、およびＧＬＰ−１（７−３７）酸の外因性投与に対するインスリン分泌刺激反応との間の関係が確立されている（例えば、ノーク，Ｍ．Ａ．（Ｎａｕｃｋ，Ｍ．Ａ．）ら、Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ、３６：７４１−７４４頁（１９９３年）；グトニアック，Ｍ．（Ｇｕｔｎｉａｋ，Ｍ．）ら、Ｎｅｗ Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ Ｍｅｄ．、３２６（２０）：１３１６−１３２２頁（１９９２年）；ノーク，Ｍ．Ａ．（Ｎａｕｃｋ，Ｍ．Ａ．）ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ、９１：３０１−３０７頁（１９９３年）；およびトレンズ，Ｂ．（Ｔｈｏｒｅｎｓ，Ｂ．）ら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、４２：１２１９−１２２５頁（１９９３年）を参照）。

ＧＬＰ−Ｉ（７−３６）アミドは、インスリン感受性を刺激することにより、および生理濃度でグルコース誘発性インスリン放出を亢進することにより、インスリン依存性糖尿病において明白な抗糖尿病誘発効果を発揮する（グトニアック・Ｍ．（Ｇｕｔｎｉａｋ Ｍ．）ら、Ｎｅｗ Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３２６：１３１６−１３２２頁（１９９２年））。非インスリン依存性糖尿病者に対し投与されると、ＧＬＰ−１（７−３６）アミドはインスリン放出を刺激し、グルカゴン分泌を降下させ、胃排出を亢進し、およびグルコース利用性を亢進する（ノーク（Ｎａｕｃｋ）、１９９３年；グトニアック（Ｇｕｔｎｉａｋ）、１９９２年；ノーク（Ｎａｕｃｋ）、１９９３年）。しかしながら、ＧＬＰ−Ｉ型分子の糖尿病の長期治療への使用は、かかるペプチドの血清半減期がかなり短いため、複雑化されている。

より詳細には、ＧＬＰ−Ｉは、１６０アミノ酸プロホルモンであるプログルカゴン由来の３０アミノ酸ペプチドである。膵および腸内の異なるプロホルモンコンバターゼの作用は結果としてグルカゴンおよび他の明確に定義されていないペプチドの産生をもたらす一方、プログルカゴンの切断は結果としてＧＬＰ−ＩおよびＧＬＰ−２ならびに２個の他のペプチドの産生をもたらす。ＧＬＰ−Ｉのアミノ酸配列は全ての哺乳動物試験においてこれまで１００％相同であり、決定的な生理学的役割を示唆する。ＧＬＰ−Ｉ（７−３７）酸はＣ末端で切断されるとともにアミド化されてＧＬＰ−Ｉ（７−３６）ＮＨ２を形成する。遊離酸ＧＬＰ−Ｉ（７−３７）ＯＨ、およびアミドであるＧＬＰ−Ｉ（７−３６）ＮＨ２の生物学的効果および代謝回転は区別できない。慣例により、アミノ酸のナンバリングはプログルカゴン由来のプロセシングされたＧＬＰ−Ｉ（１−３７）ＯＨに基づく。生物学的に活性のＧＬＰ−Ｉはさらなるプロセシングの結果、ＧＬＰ−Ｉ（Ｊ−３６）ＮＨ２である。それゆえＧＬＰ−Ｉ（７−３７）ＯＨまたはＧＬＰ−Ｉ（７−３６）ＮＨ２の第１のアミノ酸は７Ｈｉｓである。

胃腸管において、ＧＬＰ−Ｉは腸、結腸および直腸粘膜のＬ細胞により、腔内グルコースによる刺激に反応して産生される。活性ＧＬＰ−Ｉの血漿半減期は５分未満であるとともに、その代謝クリアランス速度は約１２〜１３分である（ホルスト（Ｈｏｉｓｔ）、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ １０７（６）：１８４８−５５頁（１９９４年））。ＧＬＰ−Ｉの代謝に関する主要なプロテアーゼはＮ末端Ｈｉｓ−Ａｌａジペプチドを切断するジペプチジルペプチダーゼ（ＤＰＰ）ＩＶ（ＣＤ２６）であり、ひいてはＧＬＰ−Ｉ受容体の不活性な、弱いアゴニストまたはアンタゴニストとして様々に記載される、代謝産物のＧＬＰ−Ｉ（９−３７）ＯＨまたはＧＬＰ−Ｉ（９−３６）ＮＨ２を産生する。ＧＬＰ−Ｉ受容体（ＧＬＰ−ＩＲ）は４６３アミノ酸の受容体に結合されるＧタンパク質であるとともに膵β細胞中、肺中、およびより少ない程度で脳、脂肪組織および腎中に局在する。ＧＬＰ−Ｉ（７−３７）ＯＨまたはＧＬＰ−Ｉ（７−３６）ＮＨ２によるＧＬＰ−ＩＲの刺激は結果としてアデニル酸シクラーゼ活性化、ｃＡＭＰ合成、膜脱分極、細胞内カルシウムの上昇およびグルコース誘発性インスリン分泌の増加をもたらす（ホルツ（Ｈｏｌｚ）ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０（３０）：１７７４９−５７頁（１９９５年））。

ＧＬＰ−Ｉは、食物摂取に反応して腸粘膜から分泌される強力なインスリン分泌促進物質である。ＧＬＰ−Ｉの著明なインクレチン効果はＧＬＰ−ＩＲノックアウトマウスがグルコース不耐性であるという事実によって強調される。静脈内注入されたＧＬＰ−Ｉのインクレチン反応は糖尿病対象において保たれるが、これらの患者における経口グルコースに対するインクレチン反応は損なわれる。注入または皮下注射によるＧＬＰ−Ｉ投与は糖尿病患者における空腹時グルコースレベルを制御するとともに、インスリン分泌のグルコース閾値を維持する（グトニアック（Ｇｕｔｎｉａｋ）ら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２６：１３１６−２２頁（１９９２年）；ノーク（Ｎａｕｃｋ）ら、Ｄｉａｂｅｔ．Ｍｅｄ．１３：（９ 補遺５）：Ｓ３９−Ｓ４３頁（１９９６年）；ノーク（Ｎａｕｃｋ）ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．７６：９１２−９１７頁（１９９３年））。ＧＬＰ−Ｉは、スルホニル尿素薬に付随する低血糖症を回避しつつ生理学的様式でインスリン分泌の増大能を有する治療薬として驚異的な可能性を示している。

ＧＬＰ−Ｉのグルコース恒常性に対する他の重要な効果はグルカゴン分泌の抑制および胃運動性の阻害である。グルカゴンの膵α細胞分泌に対するＧＬＰ−Ｉ抑制作用は糖新生およびグリコーゲン分解の低減を介して肝グルコース産生の減少を導く。ＧＬＰ−Ｉのこの抗グルカゴン効果は糖尿病患者において保たれる。

胃運動性および胃分泌が阻害される、ＧＬＰ−Ｉのいわゆる回腸制動効果は、迷走神経遠心性受容体を介して、または腸平滑筋に対する直接作用により効果が及ぼされる。胃酸分泌のＧＬＰ−Ｉによる低減は栄養利用性における誘導期に寄与し、ひいては急速なインスリン反応の必要性を除去する。要約すれば、ＧＬＰ−Ｉの胃腸効果は有意にグルコースおよび脂肪酸吸収の遅延に寄与するとともにインスリン分泌およびグルコース恒常性を調節する。

ＧＬＰ−Ｉはまた、ＧＬＵＴ−Ｉトランスポーター、インスリン（インスリン遺伝子プロモーターとのＰＤＸ−Ｉの相互作用を介して）、およびヘキソキナーゼ−１などの、β細胞特異的遺伝子を誘発することも示されている。このようにＧＬＰ−Ｉは潜在的に、齧歯類実験により実証されるとおり、通常加齢に付随するグルコース不耐性を逆進させ得るであろう。加えて、ＧＬＰ−Ｉは、β細胞不足の状態の間にβ細胞機能を回復することに加え、β細胞新生およびβ細胞量増加に寄与し得る。

ＧＬＰ−Ｉの中枢効果としては食物摂取量の減少と結びつく満腹感増加が挙げられ、視床効果は下部ＧＬＰ−ＩＲの作用を介して及ぼされる。ＩＩ型糖尿病対象におけるＧＬＰ−Ｉの４８時間連続皮下注入では、空腹感および食物摂取量を減少させたとともに満腹感を増加させた。これらの食欲減退効果はＧＬＰ−ＩＲノックアウトマウスにはなかった。

このようにインクレチンファミリーホルモンモジュールを含んでなるＧＩＰハイブリッドは、ＧＩＰ機能を有することに加え、考察されるとおりの、インクレチンファミリーモジュール、例えばエキセンディン−４、ＧＬＰ１、ＧＬＰ２に付随する機能および使用を提供できる。

当該技術分野において知られた任意のＧＬＰ−Ｉペプチド類似体または誘導体が本発明と併せて使用されてもよい。一実施形態において、ＧＬＰ−Ｉペプチド類似体および誘導体は未変性ＧＬＰ−Ｉペプチドの少なくとも１種のホルモン活性を有する。特定の実施形態において、ＧＬＰ−Ｉペプチド類似体は未変性ＧＬＰ−Ｉペプチドが特異的結合能を有する受容体のアゴニストである。例示的ＧＬＰ−Ｉペプチド類似体および誘導体としては、例えば、参照により本明細書によって援用される、国際公開第９１／１１４５７号パンフレットに記載されるものが挙げられる。

当該技術分野において知られたＧＬＰ−Ｉ類似体としては以下のものが挙げられる：

当該技術分野において知られるように、かかるＧＬＰ−Ｉ類似体は好ましくはアミド化されてもよいが、本発明の文意の範囲内では、別段に定めない限り場合により酸性型であってもよい。

他のＧＬＰ−Ｉ類似体および誘導体が、参照により本明細書に援用される米国特許第５，５４５，６１８号明細書に記載される。ＧＬＰ−Ｉ類似体および誘導体の例示的な群としては、全体として参照により本明細書に援用される、米国特許第６，７４７，００６号明細書に記載されるものが挙げられる。明示的に参照により援用される、米国特許第５，１８８，６６６号明細書に記載される分子の本発明における使用もまた企図される。本発明における使用のための分子の別の群としては、明示的に参照により本明細書に援用される、米国特許第５，５１２，５４９号明細書に記載される化合物が挙げられる。本発明における使用のためのＧＬＰ−Ｉ化合物の別の例示的な群は、参照により本明細書に援用される、国際公開第９１／１１４５７号パンフレットに開示される。

別の実施形態においてＧＩＰまたは新規ＧＩＰ類似体に伴い有用なのは、Ｔｒｐケージテール（例えば、トリプトファン（または同様の残基）（これは場合により記載されるとおり、例えば自然発生であるか、置換またはリンカーの一部として添加されるかのいずれかのホルモン中に有利に位置するトリプトファンの存在により、提供され得る）を伴うまたは伴わないエキセンディンＣ末端配列）を伴うＧＬＰ１類似体である。これには以下のものが挙げられる：
ＧＬＰ１（７−２６）Ｇｌｙ８Ｅｘ−４（２１−３９）：
ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧ ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号７４）；
ＧＬＰ１（７−３３）（Ｇ８，Ｅ３０，Ｋ３３）［Ｅｘ−４（２８−３９）］：ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号７５）；
ＧＬＰ１（７−３３）（Ｇ８，Ｋ３３）［ＥＸ４（２８−３９）］：ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号７６）；
ＧＬＰ１（７−３３）Ｇ８［Ｅｘ−４（２８−３９）］：ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号７７）；および
ＧＬＰ１（７−３５）Ｇ８［Ｅｘ−４（３０−３９）］：ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号７８）。

本発明のＧＩＰハイブリッドに有用な成分ペプチドホルモンとしてはまた、ＧＬＰ−２ペプチドホルモンも挙げられる。未変性ＧＬＰ−２ペプチドホルモン、例えば、ラットＧＬＰ−２および、雄ウシＧＬＰ−２、ブタＧＬＰ−２、デグーＧＬＰ−２、ウシＧＬＰ−２、モルモットＧＬＰ−２、ハムスターＧＬＰ−２、ヒトＧＬＰ−２、ニジマスＧＬＰ−２、およびニワトリＧＬＰ−２を含むその相同体が、機能性ペプチド類似体および誘導体と同様、当該技術分野において周知である。特定の例示的未変性ペプチド、ペプチド類似体および誘導体が本明細書に記載されるが、当該技術分野において知られたホルモン活性を呈する任意の既知のＧＬＰ−２ペプチドが本発明と併せて使用されてもよいことは認識されるべきである。

当該技術分野において知られた任意のＧＬＰ−２ペプチド類似体または誘導体が本発明と併せて使用されてもよい。一実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチド類似体および誘導体は未変性ＧＬＰ−２ペプチドの少なくとも１種のホルモン活性を有する。特定の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチド類似体は未変性ＧＬＰ−２ペプチドが特異的結合能を有する受容体のアゴニストである。例示的ＧＬＰ−２ペプチド類似体および誘導体としては、例えば、その双方が参照により本明細書によって援用される、米国特許出願第０８／６６９，７９１号明細書およびＰＣＴ出願のＰＣＴ／ＣＡ第９７／００２５２号明細書に記載されるものが挙げられる。当該技術分野において知られた特異的ＧＬＰ−２類似体としては以下のものが挙げられる：Ａｌａに対するＧｌｙの置換によりＤＰＰ−ＩＶ耐性を供するべく位置２位が改変されるラットまたはヒトＧＬＰ−２。

本発明に有用な成分ペプチドホルモンとしてはまた、オキシントモジュリン（ＯＸＭ）ペプチドホルモンも挙げられる。未変性ＯＸＭペプチドホルモンは、機能性ペプチド類似体および誘導体と同様、当該技術分野において周知である。特定の例示的未変性ペプチド、ペプチド類似体および誘導体が本明細書に記載されるが、当該技術分野において知られたホルモン活性を呈する任意の既知のＯＸＭペプチドプチドが本発明と併せて使用されてもよいことは認識されるべきである。

当該技術分野において知られた任意のＯＸＭペプチド類似体または誘導体が本発明と併せて使用されてもよい。一実施形態において、ＯＸＭペプチド類似体および誘導体は未変性ＯＸＭペプチドの少なくとも１種のホルモン活性を有する。特定の実施形態において、ＯＸＭペプチド類似体は未変性ＯＸＭペプチドが特異的結合能を有する受容体のアゴニストである。

本発明に有用な成分ペプチドホルモンとしてはまた、エキセンディンペプチドホルモンも挙げられる。未変性エキセンディンペプチドホルモンは、機能性ペプチド類似体および誘導体と同様、当該技術分野において周知である。特定の例示的未変性ペプチド、ペプチド類似体および誘導体が本明細書に記載されるが、当該技術分野において知られたホルモン活性を呈する任意の既知のエキセンディンペプチドが本発明と併せて使用されてもよいことは認識されるべきである。

エキセンディンはインスリン分泌に関与するペプチドの別のファミリーである。エキセンディンは、アリゾナに固有のトカゲであるヒーラ・モンスター（Ｇｉｌａ−ｍｏｎｓｔｅｒ）、およびメキシコドクトカゲ（Ｍｅｘｉｃａｎ Ｂｅａｄｅｄ Ｌｉｚａｒｄ）の唾液中に所見される。エキセンディン−３はヘロデルマ・ホルリドゥム（Ｈｅｌｏｄｅｒｍａ ｈｏｒｒｉｄｕｍ）の唾液中に存在し、およびエキセンディン−４はヘロデルマ・サスペクタム（Ｈｅｌｏｄｅｒｍａ ｓｕｓｐｅｃｔｕｍ）の唾液中に存在する（エング，Ｊ．（Ｅｎｇ，Ｊ．）ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６５：２０２５９−６２頁、１９９０年；エング，Ｊ．（Ｅｎｇ，Ｊ．）ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６７：７４０２−０５頁（１９９２年））。エキセンディンはグルカゴン様ペプチドファミリーの数メンバーといくらかの配列類似性を有し、最高の同一性はＧＬＰ−Ｉに対し５３％である（ゴーク（Ｇｏｋｅ）ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６８：１９６５０−５５頁（１９９３年））。

エキセンディン−４はＧＬＰ−Ｉ受容体を、インスリン分泌ＴＣ１細胞上で、モルモット膵由来の散在する腺房細胞において、および胃由来の壁細胞において結合する；ペプチドはまた単離された胃中でソマトスタチン放出も刺激するとともにガストリン放出も阻害する（ゴーク（Ｇｏｋｅ）ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６８：１９６５０−５５頁（１９９３年）；スケップ（Ｓｃｈｅｐｐ）ら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、６９：１８３−９１頁（１９９４年）；エイゼル（Ｅｉｓｓｅｌｅ）ら、Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．、５５：６２９−３４頁（１９９４年））。エキセンディン−３およびエキセンディン−４は、膵腺房細胞上でＧＬＰ−Ｉ受容体を結合すること、膵腺房細胞中でｃＡＭＰ産生を刺激すること、および膵腺房細胞からのアミラーゼ放出が所見された（マロトラ，Ｒ（Ｍａｌｈｏｔｒａ，Ｒ）ら、Ｒｅｌｕｌａｔｏｒｙ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、４１：１４９−５６頁（１９９２年）；ロフマン（Ｒａｕｆｍａｎ）ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６７：２１４３２−３７頁（１９９２年）；シング（Ｓｉｎｇｈ）ら、Ｒｅｇｕｌ．Ｐｅｐｔ、５３：４７−５９頁（１９９４年））。真性糖尿病の処置および高血糖の予防のためのエキセンディン−３およびエキセンディン−４のインスリン分泌刺激活性の使用が提言されている（エング（Ｅｎｇ）、米国特許第５，４２４，２８６号明細書）。

エキセンディン［９−３９］、カルボキシアミド化分子、および断片３−３９から９−３９などの切断されたエキセンディンペプチドがＧＬＰ−Ｉの強力な、かつ選択的アンタゴニストであると報告されている（ゴーク（Ｇｏｋｅ）ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６８：１９６５０−５５頁（１９９３年）；ロフマン，Ｊ．Ｐ．（Ｒａｕｆｍａｎ，Ｊ．Ｐ．）ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６６：２８９７−９０２頁（１９９１年）；スケップ，Ｗ．（Ｓｃｈｅｐｐ，Ｗ．）ら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．、２６９：１８３−９１頁（１９９４年）；モントローズ−ラフィザデ（Ｍｏｎｔｒｏｓｅ−Ｒａｆｉｚａｄｅｈ）ら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、４５（補遺２）：１５２Ａ頁（１９９６年））。エキセンディン［９−３９］が内在性ＧＬＰ−Ｉを生体内で妨害する結果として、インスリン分泌の低減がもたらされる（ワング（Ｗａｎｇ）ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ、９５：４１７−２１頁（１９９５年）；ダレッジオ（Ｄ’Ａｌｅｓｓｉｏ）ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ、９７：１３３−３８頁（１９９６年））。明らかにＧＬＰ−Ｉのインスリン分泌刺激効果の原因である受容体がラット膵島細胞からクローニングされている（トレンズ，Ｂ．（Ｔｈｏｒｅｎｓ，Ｂ．）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｄ．ＵＳＡ ８９：８６４１−８６４５頁（１９９２年））。エキセンディンおよびエキセンディン［９−３９］はクローン化ＧＬＰ−Ｉ受容体に結合する（ラット膵細胞ＧＬＰ−Ｉ受容体：フェフマン・ＨＣ（Ｆｅｈｍａｎｎ ＨＣ）ら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、１５（３）：４５３−６頁（１９９４年）；ヒトＧＬＰ−Ｉ受容体：トレンズ・Ｂ（Ｔｈｏｒｅｎｓ Ｂ）ら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、４２（１１）：１６７８−８２頁（１９９３年））。クローン化ＧＬＰ−Ｉ受容体をトランスフェクトされる細胞において、エキセンディン−４はアゴニストである、すなわち、ｃＡＭＰを増加させるが、一方エキセンディン［９−３９］はアンタゴニストである、すなわち、エキセンディン−４およびＧＬＰ−Ｉの刺激作用を妨害する。同文献。

より詳細には、エキセンディン−４は、ヒーラ・モンスター（Ｇｉｌａ Ｍｏｎｓｔｅｒ）（ヘロデルマ・サスペクタム（Ｈｅｌｏｄｅｒｍａ ｓｕｓｐｅｃｔｕｍ））の唾液中に所見される３９アミノ酸Ｃ末端アミド化ペプチドであり、ＧＬＰ−Ｉペプチド配列に対し５３％のアミノ酸配列同一性を備える。例えば、エング，Ｊ．（Ｅｎｇ，Ｊ．）ら、「Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｘｅｎｄｉｎ−４，ａｎｄ Ｅｘｅｎｄｉｎ−３ Ａｎａｌｏｇｕｅ ｆｒｏｍ Ｈｅｌｏｄｅｒｍａ ｓｕｓｐｅｃｔｕｍ Ｖｅｎｏｍ」、Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．、２６７：１１、７４０２−７４０５頁（１９９２年）、ヤング，Ａ．Ａ．（Ｙｏｕｎｇ，Ａ．Ａ．）ら、「Ｇｌｕｃｏｓｅ−Ｌｏｗｅｒｉｎｇ ａｎｄ Ｉｎｓｕｌｉｎ−Ｓｅｎｓｉｔｉｚｉｎｇ Ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｅｘｅｎｄｉｎ−４」、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、第４８巻、１０２６−１０３４頁、１９９９年５月を参照されたい。その活性の点では、エキセンディン−４はＧＬＰ−Ｉ受容体の極めて特異的なアゴニストであるとともに、ＧＬＰ−Ｉと同様、インスリン分泌を刺激することができる。それゆえ、ＧＬＰ−Ｉと同様、エキセンディン−４はインスリン分泌刺激ペプチドと見なされる。

しかしながら、ＧＬＰ−Ｉと異なり、エキセンディン−４は、ＧＬＰ−Ｉ配列を生体内で急速に分解するジペプチジルペプチダーゼＩＶに対するその耐性により、ヒトにおいて比較的長い半減期を有する。さらには、ＧＬＰ−Ｉと比較したとき、エキセンディン−４がより強いインスリン分泌刺激能を有するとともに、より低濃度のエキセンディン−４がかかる刺激活性を得るため使用され得ることが示されている。例えば、参照により本明細書に援用される、米国特許第５，４２４，２８６号明細書を参照されたい。それゆえエキセンディン−４ペプチドまたはその誘導体（かかる誘導体の例について、例えば、参照により本明細書に援用される、米国特許第６，５２８，４８６号明細書およびその対応する国際出願の国際公開第０１／０４１５６号パンフレットを参照）はインスリンレベルの調節不全に関する病態（例えば、糖尿病などの病態）の処置について、インスリンまたはＧＬＰ−Ｉのいずれよりも高い潜在的利用性を有する。このようにエキセンディンファミリーホルモンモジュールを含んでなるＧＩＰハイブリッドは、ＧＩＰ機能を有することに加え、考察されるとおり、エキセンディンファミリーモジュール、例えば、エキセンディン−４、エキセンディンテールに付随する機能および使用を提供できる。

当該技術分野において知られた任意のエキセンディンペプチド類似体または誘導体が本発明と併せて使用されてもよい。一実施形態において、エキセンディンペプチド類似体および誘導体は未変性エキセンディンペプチドの少なくとも１種のホルモン活性を有する。特定の実施形態において、エキセンディンペプチド類似体は未変性エキセンディンペプチドが特異的結合能を有する受容体のアゴニストである。

例示的エキセンディン類似体としては以下のものが挙げられる：

当該技術分野において知られるように、かかるエキセンディン類似体は好ましくはアミド化されてもよいが、本発明の文意の範囲内では、別段に定めない限り場合により酸性型であってもよい。

追加的な例示的エキセンディン類似体および誘導体が、１９９７年８月８日に出願された米国仮特許出願第６０／０５５，４０４号明細書の利益を主張する、「Ｎｏｖｅｌ Ｅｘｅｎｄｉｎ Ａｇｏｎｉｓｔ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ」と題される、１９９８年８月６日に出願されたＰＣＴ出願のＰＣＴ／ＵＳ第９８／１６３８７号明細書に記載され、これらの双方が参照により本明細書に援用される。他のエキセンディン類似体および誘導体が、１９９７年１１月１４日に出願された米国仮特許出願第６０／０６５，４４２号明細書の利益を主張する、「Ｎｏｖｅｌ Ｅｘｅｎｄｉｎ Ａｇｏｎｉｓｔ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ」と題される、１９９８年１１月１３日に出願されたＰＣＴ出願のＰＣＴ／ＵＳ第９８／２４２１０号明細書に記載され、これらの双方が参照により本明細書に援用される。いまだ他のエキセンディン類似体および誘導体が、１９９７年１１月１４日に出願された米国仮特許出願第６０／０６６，０２９号明細書の利益を主張する、「Ｎｏｖｅｌ Ｅｘｅｎｄｉｎ Ａｇｏｎｉｓｔ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ」と題される、１９９８年１１月１３日に出願されたＰＣＴ出願のＰＣＴ／ＵＳ第９８／２４２７３号明細書に記載され、これらの双方が参照により本明細書に援用される。いまだ他のエキセンディン類似体および誘導体が、１９９６年８月８日に出願された米国特許出願第０８／６９４，９５４号明細書の一部継続である、「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ」と題される、１９９７年８月８日に出願されたＰＣＴ出願のＰＣＴ／ＵＳ第９７／１４１９９号明細書に記載され、これらの双方が参照により本明細書に援用される。いまだ他のエキセンディン類似体および誘導体が、１９９７年１月７日に出願された米国仮特許出願第６０／０３４，９０５号明細書に対する優先権を主張する、「Ｕｓｅ ｏｆ Ｅｘｅｎｄｉｎｓ ａｎｄ アゴニスト Ｔｈｅｒｅｏｆ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｉｎｔａｋｅ」と題される、１９９８年１月７日に出願されたＰＣＴ出願のＰＣＴ／ＵＳ第９８／００４４９号明細書に記載され、これらの双方が参照により本明細書に援用される。さらに他のエキセンディン類似体および誘導体が、「Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ」と題される、２００３年１２月１９日に出願された米国特許出願公開第２００４／０２０９８０３Ａ１号明細書に記載され、ここに出典明示して本明細書の一部とみなす。

カテスタチンファミリー クロモグラニンＡのカテスタチン断片はニコチン性コリン作動性伝達の内在性インヒビターであり、カテコラミン分泌のネガティブフィードバック制御において機能する。我々はカテスタチンのアミノ酸配列における天然の多型を調査した。３種のヒト変異体が同定された：Ｇｌｙ３６４Ｓｅｒ、Ｐｒｏ３７０Ｌｅｕ、およびＡｒｇ３７４Ｇｌｎ。

ヒトカテスタチンにおける配列変異体（ヒトクロモグラニンＡ３５２−３７２）およびヒトおよび他の哺乳動物における種間相同性が以下に示される。ヒトカテスタチンにおける変異位置のアミノ酸は太字で示される。カテスタチンのカルボキシ末端側における典型二塩基性タンパク質分解性切断部位が括弧［ＲＲ］に与えられる。ヒトクロモグラニンＡについて、この［ＲＲ］部位はＡｒｇ３７３Ａｒｇ３７４である。さらなる実施形態において、一方または双方のアルギニンが不在の変異体が含まれる。カテスタチンファミリーメンバー、その類似体、誘導体または断片を含むＧＩＰハイブリッドが本発明の処置方法に使用を見出される。例えば、かかるハイブリッドは、高血圧症およびうっ血性心不全および関連病態を含む、本明細書中で考察されるとおりの心血管疾患および病態の処置に使用を見出されるであろう。活性ＧＩＰホルモンモジュールと組み合わせて、化合物は本明細書に記載される救命救急病態に使用を見出されるであろう。カテスタチン種変異体としては以下のものが挙げられる：

ナトリウム利尿ペプチド ナトリウム利尿ペプチドは心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）、脳性ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）、およびＣ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）で構成されるホルモンのファミリーである。これらは３個の異なる前駆体プロホルモン、１２６アミノ酸ＡＮＰ、１０８アミノ酸ＢＮＰ、および１０４アミノ酸ＣＮＰとして合成されるとともに保存される。これらは別個の遺伝子により各々コードされるとともに異なる合成部位および調節機序を有する。ナトリウム利尿ペプチド親配列としては以下のものが挙げられる：

ＡＮＰプロホルモン合成の主要部位はそれが１５１アミノ酸プレプロホルモンとして合成される心房筋細胞である。２５アミノ酸シグナルペプチドのそのＮ末端側終端からの除去が小胞体中で起こり、ＡＮＰの心内での主要な貯蔵形態である１２６アミノ酸ＡＮＰプロホルモン（ＰｒｏＡＮＰ）が離れる。プロホルモンは４つの生物学的に活性なペプチドセグメントで構成される：アミノ酸１−３０（ＰｒｏＡＮＦ１−３０、長時間作用性Ｎａ刺激剤としても知られる）、３１−６７（ＰｒｏＡＮＦ３１−６７、血管拡張剤としても知られる）、７９−９８（ＰｒｏＡＮＦ７９−９８、カリウム排出剤としても知られる）、および９９−１２６（ＡＮＦ、心房性ナトリウム利尿因子としても知られる）。

ＢＮＰは元来ブタ脳から単離されたが、ヒトにおいては左心室から合成されるとともに分泌される。配列解析はプレプロＢＮＰが１３４残基から構成されるとともに切断されて１０８アミノ酸プロＢＮＰになることを明らかにする。プロＢＮＰのＣ末端側終端由来の３２アミノ酸配列の切断は結果として、血漿中で生理学的活性型であるヒトＢＮＰ（７７−１０８）をもたらす。

ＣＮＰはナトリウム利尿ペプチド系の第３のメンバーであるとともに主にヒト血管内皮細胞、腎、およびブタ脳中に所見される。高濃度のＣＮＰもまたヒト視床下部および中脳中に所見される。ヒトにおいて、プレプロＣＮＰは２３残基のそのＮ末端側終端からの切断によりプロＣＮＰにプロセシングされる１２６アミノ酸前駆体である。この２３アミノ酸配列はシグナルペプチドとして働く。末端２２（１０５−１２６）アミノ酸はプロＣＮＰから切断されてＣＮＰの生物学的活性型を産生する。

ウロジラチンはナトリウム利尿ペプチドファミリーの腎由来メンバーであるとともに同一のＡＮＰプロホルモンから形成され、およびアミノ酸９５−１２６で構成される。４アミノ酸Ｎ末端伸長部を除き、これはＡＮＦ（９９−１２６）と同一である。ウロジラチンは腎中のナトリウムおよび水分処理の重要な調節因子、ならびにうっ血性心不全（ＣＨＦ）患者におけるナトリウム排出の介在物質であると見られる。

ナトリウム利尿ペプチドは高親和性受容体に標的細胞の表面上で結合することによりその生物学的効果を発揮する。ＮＰＲの３種のサブタイプ、ＮＰＲ−Ａ、ＮＰＲ−Ｂ、およびＮＰＲＣが単離されている。結果的に、一実施形態においてナトリウム利尿受容体結合用および／または活性化用ハイブリッドをスクリーニングする方法が提供される。プロホルモン変異体を含むナトリウム利尿ペプチドは多数のナトリウム利尿ペプチドホルモン活性を本発明のハイブリッドに供与できる。他の実施形態において興味深いのは、ナトリウム利尿アンタゴニストハイブリッドである。ナトリウム利尿とは過剰に多量のナトリウムの尿への排出である。ナトリウム利尿は、ナトリウム利尿において尿がことのほか塩気を含むことを除き、利尿（異常に大量の尿の排出）と同様である。ナトリウム利尿はある利尿薬および疾患（副腎の）に伴い起こるとともに、脱水症、嘔吐、低血圧、および突然死のリスクにより特徴づけられる塩類喪失症候群を導き得る。ＡＮＰプロホルモン（１−３０、３１−６７、７９−９８、および９９−１２６）の４個の独立した循環ペプチドの外因性投与は、生体内血管拡張、利尿、レニン・アンジオテンシン・アルドステロン系の抑制およびナトリウム利尿および／またはカリウム尿亢進を生じさせる。ＰｒｏＡＮＦ１−３０、ＰｒｏＡＮＦ３１−６７およびＡＮＦ９９−１２６の各々が、血圧に対し最大の影響を有するＰｒｏＡＮＦ３１−６７およびＡＮＦ９９−１２６に伴うナトリウム利尿、血圧降下および利尿特性を有する。ＡＮＰペプチドにはカリウム恒常性に対する様々な効果がある：ＰｒｏＡＮＦ７９−９８はカリウム排出を刺激するが、ＰｒｏＡＮＦ３１−６７は髄質集合管細胞中でのＮａ／Ｋ−ＡＴＰアーゼの阻害によりカリウム消失を免れる。ＡＮＦ９９−１２６に対し特異的であるのはアンジオテンシンＩＩ介在性アルドステロン分泌の用量依存性阻害であるが、ｐｒｏＡＮＦ３１−６７はプロスタグランジンを介してナトリウム利尿を誘発する特性を有する。

ＢＮＰは正常ヒト中のＡＮＦと同様の生物学的効果を生む。ＢＮＰの正常男性への注入は、ナトリウム排出の２倍増加、血漿レニン、アンジオテンシンＩＩおよびアルドステロン分泌の５０％低減、ならびに血漿量の低減を生じた。

ＣＮＰは他のナトリウム利尿ペプチドと同様の心血管作用を誘発するがいかなる腎降下も媒介しないと見られる。ＣＮＰが麻酔下イヌにＡＮＦと等量で注入されると、血漿ｃＧＭＰは平均動脈圧、右房圧および心拍出量の同時低減に伴い上昇したが、糸球体濾過速度、腎血流およびナトリウム排出は減少した。

ナトリウム利尿ペプチドは心不全における治療上の利益を提供できる。うっ血性心不全（ＣＨＦ）はバソプレッシン、エンドセリンの増加に、およびレニン・アンジオテンシン・アルドステロン系、および交換神経系の活性化に付随し、血管収縮、ナトリウムおよび水分貯留、ならびに血管および心臓のネガティブリモデリングを媒介する。これらの効果は心不全患者中でナトリウム利尿ペプチドのレベル上昇にもかかわらず生じる。本発明の一実施形態としては、ＣＨＦを含む、心関連疾患および病態の処置または予防のためのナトリウム利尿ペプチド活性の増加した、または治療的血清レベルを提供するハイブリッドがある。正常人へのＡＮＦ注入は結果としてナトリウム排出および尿流速の持続的増加をもたらすことができるが、心不全患者においては腎反応における著しく有益な低減を得ることができる。ＢＮＰ注入は心不全患者においてナトリウム排出を著しく増加させるとともに有意に有益な血行動態効果を発揮する。ＡＮＰと比較したとき、ＢＮＰの利尿およびナトリウム利尿効果は有意に高まる。ＢＮＰはＡＮＰより緩徐にクリアランスされるとともにアルドステロン分泌の抑制およびＡＮＰの血清レベルの増加を含む他の効果を発揮する。ＢＮＰペプチドはまた、症候性ＣＨＦ入院患者において、肺毛細血管楔入圧、体血管抵抗、右房圧および収縮期血圧の有益な低下を、心係数上昇を伴い提供できる。非代償性心不全患者において、ナトリウム利尿ペプチドハイブリッドは有益な肺毛細血管楔入圧低下および呼吸困難スコア改善を提供できる。（呼吸困難は呼吸における困難の不快な感覚であり、典型的には心不全の初期に付随する）。１、２または３種のナトリウム利尿ホルモン機能を含むハイブリッドは、ＣＨＦ患者、好ましくは非代償性であるＣＨＦ患者、慢性ＣＨＦ患者、および高血圧症患者の予防的および治療的の双方の処置に有用である薬剤的に活性な組成物の投与方法を提供する。ハイブリッドのナトリウム利尿部分は、治療的に有効量で治療的に有効な期間にわたり投与される時、治療的に有効量のナトリウム利尿ペプチドをかかる患者に提供するのに十分である。

本明細書中で考察されるとおり治療的に有効なナトリウム利尿ペプチドまたはその類似体の任意のファミリーがＧＩＰハイブリッドの成分として使用され得る。有用なナトリウム利尿ペプチドとしては、例えば、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）、脳性ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰまたはＢ型ナトリウム利尿ペプチド）およびＣ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）が挙げられる。ナトリウム利尿ペプチドの有用な型の配列は、参照により本明細書に援用される、米国特許出願公開第２００１／００２７１８１号明細書に開示される。ＡＮＰの例としては、ヒトＡＮＰ（カンガワ（Ｋａｎｇａｗａ）ら、ＢＢＲＣ １１８：１３１頁（１９８４年））、またはブタおよびラットＡＮＰを含む、様々な種由来のもの（カンガワ（Ｋａｎｇａｗａ）ら、ＢＢＲＣ １２１：５８５頁（１９８４年））が挙げられる。かかるＡＮＰは２８アミノ酸を含んでなる。かかるＡＮＰは環状構造のＡＮＰ（Ｃｙｓに基づくジスルフィド結合の形成）、および該環状構造に続くＣ末端部分を有するペプチドとして投与されてもよい。かかるペプチドの例はＡＮＰの７位から２８位でアミノ酸残基を有するペプチドであり、米国特許出願公開第２００１／００２７１８１号明細書に提供される。別の例はカエルＡＮＰである。本発明の方法に使用され得るＢＮＰの特異例としては、ヒトＢＮＰ（ｈＢＮＰ）が挙げられる。ヒトＢＮＰは３２アミノ酸を含んでなるとともにジスルフィド結合の形成に関わり（スドウ（Ｓｕｄｏｈ）ら、ＢＢＲＣ １５９：１４２０頁（１９８９年））、および米国特許第５，１１４，９２３号明細書、同第５，６７４，７１０号明細書、同第５，６７４，７１０号明細書、および同第５，９４８，７６１号明細書の各々が参照により援用される。ヒト以外の起源の様々なＢＮＰが、ブタＢＮＰおよびラットＢＮＰを含め、当該技術分野において周知であるとともに、使用され得る。さらなる例はニワトリＢＮＰである。本発明の方法に使用され得るＣＮＰの例としては、ブタＣＮＰが挙げられる。ブタＣＮＰは２２アミノ酸を含んでなるとともに、上述のＡＮＰおよびＢＮＰ（スドウ（Ｓｕｄｏｈ）ら、ＢＢＲＣ １６８：８６３頁（１９９０年））（ヒトおよびラットは同一のアミノ酸配列を有する）、ニワトリＣＮＰ（アリムラ（Ａｒｉｍｕｒａ）ら、ＢＢＲＣ １７４：１４２頁（１９９１年））と同様、ジスルフィド結合の形成に関わる。カエルＣＮＰ（ヨシハラ（Ｙｏｓｈｉｈａｒａ）ら、ＢＢＲＣ １７３：５９１頁（１９９０年））もまた使用され得る。本明細書中で考察されるとおり、当業者は、既知の方法により、欠失、置換、添加または挿入などの修飾、および／または化学的修飾を、所望どおりの既知のナトリウム利尿ペプチドのアミノ酸配列内のアミノ酸残基に対し、適用できる。結果として生じる化合物は出発ＡＮＰ、ＢＮＰまたはＣＮＰの受容体に対し作用する活性を有する。それゆえ、この活性を有する類似体は本発明の方法に従う使用のためのハイブリッドに含まれる。

別の実施形態において、１つまたは複数のナトリウム利尿機能を含むハイブリッドは高血圧症の処置に使用され得る。一実施形態においてナトリウム利尿ハイブリッドは心拍数に対し何ら有害効果を有さないであろうとともに不整脈は付随しない。一実施形態においてハイブリッドは少なくとも１、２または３種のナトリウム利尿ペプチド機能、例えば、ＡＮＰおよびＢＮＰ活性の双方を含んでなるであろう。１つまたは複数のナトリウム利尿ホルモン機能は、本明細書に記載されるとおりの、任意の他のホルモン機能またはペプチドエンハンサーと併用され得る。別の実施形態においてナトリウム利尿部分は、未変性ナトリウム利尿ペプチドのそれと比較した時、長時間の生体内半減期を有するより安定な類似体である。ＮＥＰなどの内在性酵素により望ましくない切断を防止する類似体もまた想定される。ハイブリッドを含むナトリウム利尿はさらにまた、高血圧症低減、利尿誘因、ナトリウム利尿誘因、血管伝導拡張または弛緩、ナトリウム利尿ペプチド受容体（ＮＰＲ−Ａなど）結合、腎からのレニン分泌抑制、副腎からのアルドステロン分泌抑制、心血管疾患および障害の処置、うっ血性心不全における心リモデリングの低減、阻止または逆進、腎疾患および障害の処置；虚血性脳卒中の処置または予防、および喘息の処置にも関する。ハイブリッドは患者に投与され得るが、これはナトリウム利尿、利尿および血管拡張を誘発することから有益であろう。ハイブリッドは単独または１つもしくは複数の次のタイプの化合物と組み合わせて投与され得る：ＡＣＥインヒビター、β遮断薬、利尿薬、スピロノラクトン、ジゴキシン、抗凝固および抗血小板薬、およびアンジオテンシン受容体遮断薬。追加的な疾患または病態としては、腎障害および疾患、喘息、高血圧症および肺高血圧症が挙げられる。ハイブリッドはまた、炎症関連疾患、勃起不全および高コレステロール血症を処置するためにも有用である。

ペプチドモジュール選択の考察、スペーサー、および連結基
本発明のＧＩＰハイブリッドポリペプチドは一般的に、本発明の少なくとも２個の生理活性ペプチドホルモンモジュールを含んでなり、ここで該生理活性ペプチドホルモンモジュールの少なくとも１個は、典型的にはＧＩＰモジュールであるが、少なくとも１種のホルモン活性を呈する。本発明の文意の範囲内において、生理活性ペプチドホルモンモジュールの少なくとも１個は、ＧＩＰペプチドホルモン、類似体、誘導体、断片、またはペプチドエンハンサーからなるであろう。少なくとも１種のホルモン活性を呈する生理活性ペプチドホルモンモジュールは、ハイブリッドポリペプチドのＮ末端側終端、ハイブリッドポリペプチドのＣ末端側終端に位置してもよく、またはハイブリッドポリペプチドが３個以上の生理活性ペプチドホルモンモジュールを含んでなる場合、ハイブリッドポリペプチドの内部に位置してもよい。

特定の実施形態において、少なくとも１種のホルモン活性を呈する生理活性ペプチドホルモンモジュールは、生理活性ペプチドホルモンモジュールのＣ末端側終端がアミド化されるよう位置することが好ましくあり得る。生理活性ペプチドホルモンモジュールのＣ末端側終端のアミド化は、モジュールをハイブリッドペプチドのＣ末端側終端に位置させることにより、またはモジュールをＣ末端からＮ末端の方向にハイブリッドポリペプチドのＮ末端側終端で構成することにより、達成されてもよい。双方の構成において、生理活性ペプチドホルモンモジュールのＣ末端側終端はアミド化に利用可能である。具体的な成分ペプチドホルモンとして好ましくは、Ｃ末端アミド化の場合、アミリンファミリーペプチドホルモン、ＣＣＫ、ＰＹＹ、ｈＧＬＰ−１（７−３６）およびｈＧＬＰ−２が挙げられ得る。具体的な成分ペプチドホルモンとしては、Ｃ末端アミド化が必ずしも例示的である必要のない場合（モジュールのＣ末端側終端での伸長が容易に耐容性を示す場合、別段に定められる）、エキセンディン−４、エキセンディン−４（１−２８）、ＧＩＰ、ＧＬＰ−１（７−３７）、カエルＧＬＰ−１（７−３６）、およびカエルＧＬＰ−２が挙げられる。しかしながら、これらの成分ペプチドホルモンがハイブリッドポリペプチドのＣ末端側終端に位置する場合、それらは場合によりなおアミド化されてもよいとともに、好ましくは場合により実際にアミド化されてもよい。

生理活性ペプチドホルモンモジュールは当該技術分野において知られた任意の様式で共有結合されてもよい。安定な結合が使用されてもよく、または切断可能な結合が使用されてもよい。一実施形態において、第１のモジュールのカルボキシ基は第２のモジュールのアミノ基に直接連結されてもよい。別の実施形態において、連結基がモジュールを付着するため使用されてもよい。さらに、所望であれば、結合を安定化するため当該技術分野において知られたスペーサーまたは反転インデューサが用いられてもよい。例として、Ｎ末端に位置する生理活性ペプチドホルモンモジュールのＣ末端側終端のアミド化が所望でない場合、モジュールは第２のモジュールに直接、または、アルキル基；ＰＥＧ；アミノ酸、例えば、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、β−Ａｌａ；ポリアミノ酸、例えば、ポリｈｉｓ、ポリａｒｇ、ポリｌｙｓ、ポリａｌａ、Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ（ＧＫＲ）等；二官能性リンカー（例えば、ピアス（Ｐｉｅｒｃｅ）のカタログ、ロックフォード、ＩＩを参照）；アミノカプロイル（「Ａｃａ」）、β−アラニル、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタノイル、または当該技術分野において知られた他の切断可能および切断不可能なリンカーなどの、当該技術分野において知られた任意の然るべき連結基を使用して、付着されてもよい。各々が明示的に描き出されるかのごとく、本明細書に具体的に記載されるのは、例示される各リンカー含有ハイブリッド中のリンカーがＧｌｙリンカーにより置き換えられる、特異的ハイブリッドの実施形態、特にＧｌｙリンカーがＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙである実施形態である。一例として、例示されるＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ−リンカー−ＫＣＮＴＡＴＣＶＬＧＲＬＳＱＥＬＨＲＬＱＴＹＰＲＴＮＴＧＳＥＴＦ（配列番号９２）（本明細書の表を参照）について、そのＧｌｙリンカー種類似体もまた具体的に意図されるとともに開示される：この種はＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＫＣＮＴＡＴＣＶＬＧＲＬＳＱＥＬＨＲＬＱＴＹＰＲＴＮＴＧＳＥＴＦ（配列番号９２）である。一実施形態においてリンカーまたはスペーサーは１〜３０残基長、別の実施形態においては２〜３０残基、およびさらに別では３〜３０残基長、および全２〜３０からの任意の整数長である；各整数単位、例えば２、３、４、５、６、７等が企図される。一実施形態においてＧｌｙリンカーが、および詳細な実施形態においては３残基リンカーＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙが使用される。

一実施形態において、リンカーは、例えば、０６０１ＧＩＰ４６１９：

において用いたＫ（Ｎ−イプシロン）リンカーである。

一実施形態において本明細書中で考察されるとおりＧＩＰは第２の生理活性ホルモンモジュールにＣ末端においてＣ末端方向に付着される。ＧＩＰのＣ末端は、場合によりリンカーで、第２の生理活性ホルモンモジュールのＣ末端に連結される。直交性化学反応が使用され、場合により本明細書に記載されるとおりのリンカーで、機能性ペプチドモジュールを連結してもよい。例えば、未変性の化学的連結化学反応が使用されてもよい。以下に示されるとおり、Ｒが適当な脱離基である場合、ハイブリッドはＣｙｓ−Ｌｙｓ結合を伴い生成され得る：

さらなる例においてハイブリッドは機能性モジュール：

を用いて調製して、

を生成できる。

同様のアプローチを用いて、リジンリンカーを有するハイブリッドが創製され得る：

追加のリンカーを図２４に示す。そのリンカーは、特にＮ末端連結に対するＮ末端に有用であるが、しかしながら、これらのリンカーの一方または両終端はＧＩＰ化合物のＣ末端に反応するように容易に適合できる。ＧＩＰ化合物のＣ末端は、モジュールが生体内で切断されない限りは、本明細書に示すように、ＧＩＰのＮ末端へのペプチドモジュールを連結する結果、受容体活性化を欠くために、ＧＩＰ類似体または誘導体をＧＩＰ含有ハイブリッドの別のペプチド成分に連結するのに好ましい末端である。かかるＮ末端伸長は、血漿または膜プロテアーゼにより除去されない限りは、ＧＩＰ化合物の血漿半減期を伸ばし、受容体活性化を防止または低下させるように作用することが知られている。

特に興味深いのは、Ｃ末端がＣ末端に連結され、それらのそれぞれの受容体活性化Ｎ末端を妨げられないまま保つ、ＧＩＰ−エキセンディンファミリーハイブリッドである。双方の分子の受容体活性化領域が、例えば本明細書中の任意のＧＩＰおよびエキセンディンおよびＧＬＰ１ファミリーペプチドおよび類似体、活性断片および誘導体を使用する、かかるハイブリッド中に存在する。例えばｄＡｌａ（２）−ＧＩＰ（１−３０）類似体はテール・トゥ・テールの様式で、好適な連結化学反応を介し、エキセンディン−４に連結され得る。

さらに、当業者により認識されるであろうとおり、本発明のペプチドはＣ末端でアミド化されてもよく、または遊離酸として存在してもよい。例示的実施形態において本発明のペプチドはＣ末端でアミド化される。Ｎ末端に位置する生理活性ペプチドホルモンモジュールのＣ末端側終端のアミド化が望ましい場合、モジュールはさらに当該技術分野において知られた任意の然るべき連結基を使用して第２のモジュールに付着されてもよい。より具体的には、少なくとも１種のホルモン活性を呈する生理活性ペプチドホルモンモジュールがＣ末端からＮ末端方向に構成されていた場合、結果としてアミノ基からアミノ基への結合をもたらし、例示的連結基としては、ジカルボン酸、アルキル基、ＰＥＧ、およびＬｙｓ、Ｃｙｓ、ならびにＧｌｕなどのアミノ酸が挙げられる。

上述されるとおり、ハイブリッドポリペプチドはまた好ましくはスペーサーも含み、さらに生理活性ペプチドホルモンモジュールの結合を安定化してもよい。当該技術分野において知られた任意のスペーサーまたは反転インデューサが使用されてもよい。例として、参照されるβ反転模倣物としては、本明細書で説明される模倣体Ａおよび模倣体Ｂ、またＡｌａ−ＡｉｂおよびＡｌａ−Ｐｒｏジペプチドも挙げられる。これらのＩＵＰＡＣ名は模倣体Ａ：Ｎ−（３Ｓ，６Ｓ，９Ｓ）−２−オキソ−３−アミノ−１−アザビシクロ［４．３．０］−ノナン−９−カルボン酸、模倣体Ｂ：Ｎ−（３Ｓ，６Ｓ，９Ｒ）−２−オキソ−３−アミノ−７−チア−１−アザビシクロ［４．３．０］−ノナン−９−カルボン酸である。

アゴニストとは未変性ヒトホルモンの生物学的活性を誘発する化合物を意味する。例示的実施形態において、該用語はグルコース降下または未変性ヒトＧＩＰの他の活性において生物学的効果を誘発する化合物を参照する。新規ＧＩＰ類似体は例えば、グルコース降下アッセイ、胃分泌阻害アッセイ、ｄＰ／ｄｔアッセイ、血圧アッセイ、インスリン分泌アッセイ、骨密度アッセイ、または血漿安定性アッセイにおいて、好ましくは未変性ヒトＧＩＰと同様の、またはそれより優れた、および／またはＧＩＰ受容体アッセイにおいて、または標識ＧＩＰを伴う競合的結合アッセイにおいて特異的に結合する、活性を有する。一実施形態において、アゴニストはかかるアッセイにおいて、１μＭより高い親和性で、およびより好ましくは１〜５ｎｍより高い親和性で、結合するであろう。別の実施形態においてアゴニスト（または場合によってはアンタゴニスト）ＩＣ５０は、１００マイクロモル未満または前後、５０マイクロモル未満または前後、２０マイクロモル未満または前後、および１０マイクロモル未満または前後であるだろう。かかるアゴニストはＴｒｐケージモチーフ（例えばエキセンディンテールＰＳＳＧＡＰＳ（配列番号９３）もしくは変異体）またはカエルＧＬＰ−１テールあるいはそのテールの類似体または誘導体を持つＧＩＰ配列を有するポリペプチドを含み得る。

「アミノ酸」および「アミノ酸残基」とは、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、および修飾アミノ酸を意味する。異なる定めのない限り、アミノ酸に対する任意の参照は、一般的にまたは具体的に名前によって、それらの構造がかかる立体異性体を許容する場合、ＤおよびＬの双方の立体異性体への参照を含む。天然アミノ酸としては、アラニン（Ａｌａ）、アルギニン（Ａｒｇ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、システイン（Ｃｙｓ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、リジン（Ｌｙｓ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、プロリン（Ｐｒｏ）、セリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）およびバリン（Ｖａｌ）が挙げられる。非天然アミノ酸としては、ホモリジン、ホモアルギニン、カルボン酸アゼチジン、２−アミノアジピン酸、３−アミノアジピン酸、β−アラニン、アミノプロピオン酸、２−アミノ酪酸、４−アミノ酪酸、６−アミノカプロン酸、２−アミノヘプタン酸、２−アミノイソ酪酸、３−アミノイソ酪酸、２−アミノピメリン酸、第三級ブチルグリシン、２，４−ジアミノイソ酪酸、デスモシン、２，２’−ジアミノピメリン酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、Ｎ−エチルグリシン、Ｎ−エチルアスパラギン、ホモプロリン、ヒドロキシリジン、アロヒドロキシリジン、３−ヒドロキシプロリン、４−ヒドロキシプロリン、イソデスモシン、アロイソロイシン、Ｎ−メチルアラニン、Ｎ−メチルグリシン、Ｎ−メチルイソロイシン、Ｎ−メチルペンチルグリシン、Ｎ−メチルバリン、ナフトアラニン、ノルバリン、ノルロイシン、オルチニン、ペンチルグリシン、ピペコリン酸、チオプロリン、サルコシンおよびシトルリンが挙げられるが、これらには限定はされない。追加的な非天然アミノ酸としては、可逆的または不可逆的に、化学的に遮断されるか、またはそのＮ末端アミノ基もしくはその側鎖基上で化学的に修飾される修飾アミノ酸残基が挙げられ、例としては、側鎖官能基が別の官能基に化学的に修飾されるＮ−メチル化ＤおよびＬアミノ酸または残基である。例えば、修飾アミノ酸としては、メチオニンスルホキシド；メチオニンスルホン；アスパラギン酸−（β−メチルエステル）、アスパラギン酸の修飾アミノ酸；Ｎ−エチルグリシン、グリシンの修飾アミノ酸；またはアラニンカルボキサミド、アラニンの修飾アミノ酸が挙げられる。組み込まれ得る追加的な残基は、サンドバーグ（Ｓａｎｄｂｅｒｇ）ら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４１：２４８１−９１頁、１９９８年に記載される。

「Ａｈｘ」とは６−アミノヘキサン酸を意味する。本明細書において使用されるとき：「５Ａｐａ」は５アミノ−ペンタノイルを意味し、「１２Ａｄｏ」は１２−アミノドデカノイルを意味し、「ＰＥＧ（８）」は３，６，−ジオキシオクタノイルを意味し、および「ＰＥＧ（１３）」は１−アミノ−４，７，１０−トリオキサ−１３−トリデカンアミンサクシニモイルを意味する。加えて、次の略記がある：「ＡＣＮ」または「ＣＨ３ＣＮ」はアセトニトリルを参照する。「Ｂｏｃ」、「ｔＢｏｃ」または「Ｔｂｏｃ」はｔ−ブトキシカルボニルを参照する。「ＤＣＵ」はＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミドを参照する。「Ｆｍｏｃ」はフルオレニルメトキシカルボニルを参照する。「ＨＢＴＵ」は２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾル−１−イル）−１，１，３，３，−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸を参照する。「ＨＯＢｔ」は１−ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物を参照する。「ＨｏｍｏＰ」または「ＨＰｒｏ」はホモプロリンを参照する。「ＭｅＡＩａ」または「Ｎｍｅ」はＮ−メチルアラニンを参照する。「Ｎａｐｈ」はナフチルアラニンを参照する。「ｐＧ」または「ｐＧｌｙ」はペンチルグリシンを参照する。「ｔＢｕＧ」は第三級ブチルグリシンを参照する。「ＴｈｉｏＰ」または「ｔＰｒｏ」はチオプロリンを参照する。「３Ｈｙｐ」は３−ヒドロキシプロリンを参照する。「４Ｈｙｐ」は４−ヒドロキシプロリンを参照する。「ＮＡＧ」はＮ−アルキルグリシンを参照する。「ＮＡＰＧ」はＮ−アルキルペンチルグリシンを参照する。「Ｎｅｒｖａｌ」はノルバリンを参照する。「Ｎｏｒｌｅｕ」はノルロイシンを参照する。「ＯｃｔＧｌｙ」はグリシンアミノ酸側基Ｈが８炭素飽和脂肪鎖で置き換えられるオクチル−グリシンを参照する。

さらに例示的な組み合わせおよび具体的実施形態
本発明のＧＩＰハイブリッドポリペプチドを形成するための生理活性ペプチドホルモンモジュールの例示的組み合わせとしては、未変性ペプチドホルモン、少なくとも１種のホルモン活性を呈するペプチドホルモンの類似体および誘導体、少なくとも１種のホルモン活性を呈する未変性ペプチドホルモンの断片、少なくとも１種のホルモン活性を呈するペプチドホルモンの類似体および誘導体の断片、およびペプチドエンハンサーより選択される２個以上の生理活性ペプチドホルモンモジュールの組み合わせが挙げられ、ただし少なくとも１個のモジュールが少なくとも１種のホルモン活性を呈する。

本発明のハイブリッドポリペプチドは少なくとも２個の生理活性ペプチドホルモンモジュールを含むであろうが、ここで少なくとも１個のモジュールは、ＧＩＰペプチドホルモン、類似体、誘導体、断片またはペプチドエンハンサーからなる。一実施形態において、成分ペプチドホルモンの少なくとも２個は異なるペプチドホルモンファミリー、例えば、アミリンファミリー、ＣＣＫ、レプチンファミリー、ＰＰＦ、プログルカゴンファミリー、ナトリウム利尿ペプチドファミリー、およびエキセンディンファミリーに由来する。例えば、ＧＩＰハイブリッドは、ＧＩＰ部分を、テール配列を伴い、または伴わず、エキセンディン−アミリン／ｓＣＴハイブリッドなどの２個以上のホルモンモジュール（非ＧＩＰホルモンハイブリッド）またはアミリン−ｓＣＴキメラなどのホルモンキメラを含んでなる生理活性モジュールと併用され、含んでなることができる。

特定の実施形態において、本発明のハイブリッドポリペプチドは少なくとも１種のホルモン活性を呈する２個以上のモジュールを含んでなってもよい。例えば、ハイブリッドポリペプチドは、少なくとも１個の追加的なペプチドホルモン類似体の断片に共有結合される、少なくとも１種のホルモン活性を呈する第１のペプチドホルモンまたは類似体の断片を含んでなってもよい。追加的な断片は場合により少なくとも１種のホルモン活性を呈してもよい。第１のペプチドホルモンは追加的なペプチドホルモンと同じであっても、または異なってもよく、ただし追加的なペプチドホルモンの少なくとも１つは第１のペプチドホルモンと異なるとともに、第１のホルモン活性は任意選択の追加的なホルモン活性と同じであっても、または異なってもよい。

他の実施形態において、本発明のハイブリッドポリペプチドは少なくとも１種のホルモン活性を呈する１つまたは複数のモジュールを１つまたは複数のペプチドエンハンサーモジュールと組み合わせて含んでなってもよい。例えば、少なくとも１種のホルモン活性を呈する第１のペプチドホルモンの断片はペプチドエンハンサーに共有結合されてもよく、または少なくとも１種のホルモン活性を呈する第１のペプチドホルモンの断片は少なくとも１種のホルモン活性を呈する第２のペプチドホルモンに共有結合されてもよく、これもやはりペプチドエンハンサーに反転結合される。あるいは、ペプチドエンハンサーは安定化スペーサーとして２個のペプチドホルモンモジュールの間に位置してもよい。さらに、第１のペプチドホルモンは第２のペプチドホルモンと同じであっても、または異なってもよいとともに、第１のホルモン活性は第２のホルモン活性と同じであっても、または異なってもよい。

別の実施形態において、本発明のハイブリッドポリペプチドは２、３、４、またはそれ以上の生理活性ペプチドホルモンモジュールを含んでなってもよい。例示的組み合わせとしては、ホルモン活性を備えるモジュールを１、２、または３個のペプチドエンハンサーと組み合わせて；ホルモン活性を備える２個のモジュールを１または２個のペプチドエンハンサーと組み合わせて；ホルモン活性を備える３個のモジュールを１個のペプチドエンハンサーと組み合わせて、等が挙げられる。

成分ペプチドホルモンは好ましくは、アミリン、アドレノメデュリン、カルシトニン、カルシトニン遺伝子関連ペプチド、インテルメジン、コレシストキニン、レプチンペプチドＹＹ、グルカゴン様ペプチド−１、グルカゴン様ペプチド２、オキシントモジュリン、ＡＮＰ、ＢＮＰ、ＣＮＰ、ウロジラチン、ＧＩＰ、ＧＬＰ１またはエキセンディン−４より選択される。

より詳細には、例示的モジュールの組み合わせとしては、少なくともＧＩＰおよびアミリン（および／またはｓＣＴ）、ＢＮＰ、ＣＧＲＰ、ＣＴ、ＣＣＫ、レプチン、ＰＹＹ、ＧＬＰ１、およびエキセンディン−４の組み合わせに関するものが挙げられる。

例示的実施形態において、ＧＩＰペプチドを含んでなる第１のモジュールは、少なくとも１種のホルモン活性を呈するアミリンペプチドを含んでなる第２の生理活性ペプチドホルモンモジュールに連結される。別の実施形態において、第２のモジュールはさらに、少なくとも１種のホルモン活性を呈するカルシトニンペプチドを含んでなる第３の生理活性ペプチドホルモンモジュールに連結される。さらに別の実施形態において、第３のモジュールはさらに、アミリンペプチドより選択されるペプチドエンハンサーを含んでなる第４の生理活性ペプチドホルモンモジュールに連結されてもよい。一実施形態において、第１のモジュールはハイブリッドポリペプチドのＣ末端側終端に位置してもよい。あるいは、第１のモジュールはハイブリッドポリペプチドのＮ末端側終端に位置してもよい。特定の実施形態において、βＡｌａまたはＧｌｙなどのスペーサーまたはリンカーが、モジュールを連結することが所望であれば、挿入されてもよい。

例示的エキセンディン−４ペプチドとしては、エキセンディン−４、エキセンディン−４（１−２７）、エキセンディン−４（１−２８）、^１４Ｌｅｕ、^２５Ｐｈｅ−エキセンディン−４（１−２８）、および^５Ａｌａ、^１４Ｌｅｕ、^２５Ｐｈｅ−エキセンディン−４（１−２８）が挙げられる。エキセンディン（７−１５）およびそのＳｅｒ２類似体、ＨＳＥＧＴＦＴＳＤ（配列番号９４）もまた有用である。少なくとも１種のホルモン活性を呈する例示的アミリンペプチドとしては、アミリン、アミリン（１−１７）、アミリン（１−１６）、アミリン（１−１５）、およびアミリン（１−７）などのアミリン断片、およびプラムリンチド、^２Ａｌａ−ｈ−アミリン、^２，７Ａｌａ−ｈ−アミリンなどのアミリン類似体、およびそれらの断片が挙げられる。少なくとも１種のホルモン活性を呈する例示的カルシトニンペプチドとしては、ｓＣＴ、ｓＣＴ（８−１０）、ｓＣＴ（８−２７）などのｓＣＴ断片、および^{１１，１８}Ａｒｇ−ｓＣＴ、^１８Ａｒｇ−ｓＣＴ、^１４Ｇｌｕ，^１８Ａｒｇ−ｓＣＴ、^１４Ｇｌｕ，^{１１，１８}Ａｒｇ−ｓＣＴなどのカルシトニン類似体、およびそれらの断片が挙げられる。例示的アミリンペプチドエンハンサーとしては、アミリン（３２−３７）、アミリン（３３−３７）、およびアミリン（３４−３７）、およびそれらの類似体が挙げられる。本発明との関連で有用なアミリン／ｓＣＴの組み合わせとしては、参照により本明細書に援用される、代理人ドケット第１８５２８．８３５号、ＰＣＴ／ＵＳ第２００５／００４６３１号明細書「アミリン Ｆａｍｉｌｙ Ａｇｏｎｉｓｔ」に開示されるものが挙げられる。ＧＩＰを備える本発明のハイブリッドを創製するのに特に有用なアミリン／ｓＣＴキメラはアミリン−ｓＣＴ−アミリンキメラ、例えばｈアミリン（１−７）−^{１１，１８}Ａｒｇ−ｓＣＴ（８−２７）−アミリン（３３−３７）であり、これは配列ＫＣＮＴＡＴＣＶＬＧＲＬＳＱＥＬＨＲＬＱＴＹＰＲＴＮＴＧＳＮＴＹ（配列番号９５）を有するとともに、好ましくはそのＣ末端においてアミド型およびその類似体ならびに誘導体である（本明細書およびＰＣＴ／ＵＳ第２００５／００４６３１号明細書に記載される）。

一態様において、モジュールの組み合わせとしては、ＧＩＰ、少なくとも１種のホルモン活性を呈するＧＩＰの断片、少なくとも１種のホルモン活性を呈するＧＩＰ類似体または誘導体、または少なくとも１種のホルモン活性を呈するＧＩＰ類似体の断片を含んでなる第１のモジュールを、ＣＣＫ、少なくとも１種のホルモン活性を呈するＣＣＫの断片、少なくとも１種のホルモン活性を呈するＣＣＫ類似体または誘導体、または少なくとも１種のホルモン活性を呈するＣＣＫ類似体の断片を含んでなる第２のモジュールと組み合わせて含むものが挙げられる。例示的ＣＣＫ化合物としては、ＣＣＫ−８、およびＣＣＫ−８（Ｐｈｅ（ＣＨ_２ＳＯ_３））が挙げられる。一実施形態において、第１のモジュールはハイブリッドポリペプチドのＣ末端側終端に位置するとともに第２のモジュールはハイブリッドポリペプチドのＮ末端側終端に位置する。あるいは、第１のモジュールがハイブリッドポリペプチドのＮ末端側終端に位置してもよいとともに第２のモジュールがハイブリッドポリペプチドのＣ末端側終端に位置してもよい。特定の実施形態において、β−ＡｌａまたはＧｌｙなどのスペーサーまたはリンカーが、モジュールを付着することが所望であれば、挿入されてもよい。

一態様において、例示的モジュールの組み合わせとしては、ＧＩＰ、少なくとも１種のホルモン活性を呈するＧＩＰの断片、少なくとも１種のホルモン活性を呈するＧＩＰ類似体または誘導体、または少なくとも１種のホルモン活性を呈するＧＩＰ類似体の断片を含んでなる第１のモジュールを、アミリン、少なくとも１種のホルモン活性を呈するアミリンの断片、少なくとも１種のホルモン活性を呈するアミリン類似体または誘導体、または少なくとも１種のホルモン活性を呈するアミリン類似体の断片を含んでなる第２のモジュールと組み合わせて含むものが挙げられる。アミリンモジュールは本明細書に記載されるとおりのアミリン／ｓＣＴキメラであり得る。一実施形態において、第１のモジュールはハイブリッドポリペプチドのＣ末端側終端に位置するとともにペプチドエンハンサーはハイブリッドポリペプチドのＮ末端側終端に位置する。あるいは、第１のモジュールがハイブリッドポリペプチドのＮ末端側終端に位置するとともに第２のモジュールがハイブリッドポリペプチドのＣ末端側終端に位置する。特定の実施形態において、βＡｌａまたはＧｌｙなどのスペーサーまたはリンカーが、モジュールを付着することが所望であれば、挿入されてもよい。

さらに他の例示的モジュールの組み合わせとしては、第三級およびテトラハイブリッド分子としてのＧＩＰ、アミリンおよびカルシトニンの組み合わせを含むものが挙げられる。例示的組み合わせとしては、スペーサーまたは連結基を伴う、および伴わない、ＧＩＰ／アミリン／カルシトニン；ＧＩＰ／アミリン／カルシトニン／アミリン；アミリン／カルシトニン／ＧＩＰ；およびアミリン／カルシトニン／アミリン／ＧＩＰの組み合わせが挙げられる。各モジュールは独立してペプチドエンハンサーであってもよく、またはハイブリッドポリペプチドの所望の特性に応じて、ホルモン活性を呈してもよい。

別の実施形態において、少なくとも１種のホルモン活性を呈する生理活性ペプチドホルモンモジュールの１個はＧＬＰ−Ｉまたはその類似体もしくは断片であるとともに、第２の生理活性ペプチドホルモンモジュールはＧＩＰを含んでなる。さらに別のかかるハイブリッドにおいて、ハイブリッドポリペプチドは第３の生理活性ペプチドホルモンモジュールを含んでなる。例示的第３の生理活性ペプチドホルモンモジュールとしては、アミリン（その類似体、誘導体および断片を含む）およびアミリン−ｓＣＴキメラ、ＰＹＹ（その類似体、誘導体および断片を含む）およびＣＣＫ（その類似体、誘導体および断片を含む）が挙げられる。

ＧＩＰ−ニューロメジンペプチドハイブリッドの例示的化合物としては、
ＹａＧＩＰ（１−３０）−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−ＦＮ−３８：ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−ＦＬＦＨＹＳＫＴＱＫＬＧＫＳＮＶＶＥＥＬＱＳＰＦＡＳＱＳＲＧＹＦＬＦＲＰＫＮ−ＮＨ２（配列番号９６）；
ＹａＧＩＰ（１−３０）−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−ニューロメジン（Ｕ２５）：ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−ＦＲＶＤＥＥＦＱＳＰＦＡＳＱＳＲＧＹＦＬＦＲＰＲＮ−ＮＨ２（配列番号９７）；および
ＹａＧＩＰ（１−３０）−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−ニューロメジン（ＴＪ−９）：ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−ＧＹＦＬＦＲＰＲＮ−ＮＨ２（配列番号９８）、が挙げられる。

β−Ａｌａ−β−Ａｌａスペーサーは任意選択であるとともに、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、ミニＰＥＧ基、または当該技術分野において知られた他のリンカー、特に本明細書に記載されるものと置き換えられ得る。

ＧＩＰおよびナトリウム利尿ペプチドの例示的化合物としては、ＧＩＰ−ｈＢＮＰペプチドハイブリッドが、ＹａＧＩＰ（１−３０）−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−ｈＢＮＰ（ここでｈＢＮＰはＳＰＫＭＶＱＧＳＧＣＦＧＲＥＭＤＲＩＳＳＳＳＧＬＧＣＫＶＬＲＲＨ（配列番号９９））およびＹａＧＩＰ（１−３０）−エキセンディン（３１−３９）−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−ｈＢＮＰ（ここでｈＢＮＰはＳＰＫＭＶＱＧＳＧＣＦＧＲＫＭＤＲＩＳＳＳＳＧＬＧＣＫＶＬＲＲＨ（配列番号９９））を含め、挙げられる。β−Ａｌａ−β−Ａｌａスペーサーは任意選択であるとともに、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、ミニＰＥＧ基、または当該技術分野において知られた他のリンカー、特に本明細書に記載されるものと置き換えられ得る。

実施形態としては以下のものが挙げられる：

さらなる例示的ＧＩＰハイブリッドは、ＧＩＰおよびニューロメジンハイブリッド、例えば、ｄＡｌａ２−ＧＩＰ（１−３０）−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−ＦＮ−３８：
ＹａＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−ＦＬＦＨＹＳＫＴＱＫＬＧＫＳＮＶＶＥＥＬＱＳＰＦＡＳＱＳＲＧＹＦＬＦＲＰＲＮ−ＮＨ２（配列番号４５９）；
ｄＡｌａ２−ＧＩＰ（１−３０）−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−ニューロメジン（Ｕ２５）：
ＹａＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−ＦＲＶＤＥＥＦＱＳＰＦＡＳＱＳＲＧＹＦＬＦＲＰＲＮ−ＮＨ２（配列番号４６０）；および
ｄＡｌａ２−ＧＩＰ（１−３０）−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−ニューロメジン（Ｕ−９）：
ＹａＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−ＧＹＦＬＦＲＰＲＮ−ＮＨ２（配列番号４６１）を含む。
例えば、β−Ａｌａ−β−Ａｌａスペーサーは任意であり、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、ミニ−ＰＥＧ 基、または当該技術分野において知られた他のリンカー、特に本明細書に記載されたもので置換できる。

例示的なＧＩＰおよびナトリウム利尿ペプチドハイブリッドは、ｄＡｌａ２−ＧＩＰ（１−３０）−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−ｈＢＮＰ：
ＹａＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−ＳＰＫＭＶＱＧＳＧＣＦＧＲＫＭＤＲＩＳＳＳＳＧＬＧＣＫＶＬＲＲＨ（配列番号４６２）； および
ｄＡｌａ２−ＧＩＰ（１−３０）− β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−ｈＢＮＰ：ＹａＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−ＳＰＫＭＶＱＧＳＧＣＦＧＲＫＭＤＲＩＳＳＳＳＧＬＧＣＫＶＬＲＲＨ（配列番号４６３）を含めたＧＩＰ−ｈＢＮＰを含む。

全体を通じて考察されているとおり、上記のハイブリッドを含む、本明細書の任意の実施形態において、考察されるとおりの追加的な改変が含まれ得る。例えば、上記のハイブリッドを含む、本明細書の任意の実施形態において、ＤＰＰ−ＩＶ耐性を供与するべく位置１（Ｎ末端を含む）、２または３位が修飾され得る。例えば、本明細書に具体的に例示されるのは、本明細書の各実施形態のＤ−Ａｌａ２類似体ならびに上記の種の各々である。

ＧＩＰおよびペプチドエンハンサーハイブリッド
ハイブリッドの一実施形態において、ＧＩＰはＣ末端でペプチドエンハンサー、例えば、エキセンディンまたはＧＬＰ−Ｉなどの、別のホルモンのテールまたはＣ末端部分により伸長され、亢進された生体内有効性を有する類似体を提供する。エキセンディン−４（図１）はＧＬＰ−Ｉと５３％の相同性を共有する強力なインクレチン模倣物であるとともに、ＧＬＰ−Ｉの多くの重要な生物学的作用を反映する。ＧＬＰ−Ｉと異なり、エキセンディン−４はＤＰＰ−ＩＶペプチダーゼおよびＮＥＰへのタンパク質分解切断に対しはるかに耐性が高い。これはＧＬＰ−Ｉと比較してより大きく亢進された薬物動態を供するとともにヒトにおける生体内有効性を改善する。水性培地中および有機共溶媒を含有する培地中でのエキセンディン−４の円偏光二色性（ＣＤ）およびＮＭＲ試験は配列ＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１８３）（残基２１−３９）を含むＣ末端セグメントがＰｒｏ３７のＰｈｅ２２との、およびＰｒｏ３８のＴｒｐ２５との相互作用の結果として生じる固有の疎水性Ｔｒｐケージクラスターを形成することを明らかにする（２９〜３１）。このＴｒｐケージクラスターモチーフはペプチドにより表されるタンパク質様三次構造の第１の例であるとともに、生体内分子中でプロテアーゼ感受性部位を遮蔽することによりさらに高い代謝的安定性の供与に関与することができるであろう（３２）。

従って、一態様において、例示的モジュールの組み合わせとしては、ＧＩＰ、少なくとも１種のホルモン活性を呈するＧＩＰの断片、少なくとも１種のホルモン活性を呈するＧＩＰ類似体または誘導体、または少なくとも１種のホルモン活性を呈するＧＩＰ類似体の断片を含んでなる第１のモジュールを、ペプチドエンハンサーと組み合わせて含むものが挙げられる。有用なペプチドエンハンサーは、本明細書に記載されるとおりの、エキセンディン−４およびカエルＧＬＰテール、ならびにＰＹＹ（２５−３６）、ＰＹＹ（３０−３６）およびＰＹＹ（３１−３６）である。一実施形態において、第１のモジュールはハイブリッドポリペプチドのＣ末端側終端に位置するとともにペプチドエンハンサーはハイブリッドポリペプチドのＮ末端側終端に位置する。あるいは、第１のモジュールがハイブリッドポリペプチドのＮ末端側終端に位置してもよいとともにペプチドエンハンサーがハイブリッドポリペプチドのＣ末端側終端に位置してもよい。特定の実施形態において、βＡｌａまたはＧｌｙなどのスペーサーまたはリンカーが、モジュールを付着することが所望であれば、挿入されてもよい。

特定の目的の化合物はＹａＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（化合物０６０１ＧＩＰ３７９４；Ｄ−Ａｌａを位置２位で有するとともに、アミド型である）である。修飾を位置２位（すなわち残基２）または位置２および３（例えば、２位にてＳｅｒおよび３位にてＡｓｐ）に有する例示的化合物ならびにそのＧＩＰ受容体結合および受容体活性化活性としては、Ｙ−残基２−ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（ここで残基２および／または３が表に示される）が挙げられる（および図１２を参照）：

修飾をＮ末端に有するさらに例示的な化合物ならびにそのＧＩＰ受容体結合および受容体活性化活性としては、Ｎ末端−ＹａＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１８６）（ここでＮ末端修飾が表に示される）が挙げられる（および図１２を参照）：

様々なリンカーまたは脂肪酸修飾を備えるさらに例示的な化合物、または本明細書に記載されるとおりの修飾の組み合わせ、ならびにそのＧＩＰ受容体結合および受容体活性化活性が表に示される（および図１２を参照）。ＯｃｇおよびＯｃｔＧの双方が、オクチルグリシンを示すことに注目されたし。ＤＮａ１は、Ｄ−２−ナフチルアラニンアミノ酸を示す。

前記化合物のいくつかの別法の表現は以下の通りである：

他の実施態様において、ＧＩＰ化合物は、１またはそれを超える修飾または誘導体化を組み込む。例えば、０６０１ＧＩＰ４２９４は、オクチルグリシルＮ-末端修飾およびβ-Ａｌａリンカーの双方を含む。さらなる例示的化合物には以下が挙げられる：

さらに例示的な化合物が他の（非ヒト）種由来の修飾の組み込み、または本明細書に記載されるとおりの修飾の組み合わせを示し、およびそれらのＧＩＰ受容体結合および受容体活性化活性が表に示される（化合物０６０１ＧＩＰ３７９４からの改変が太字のイタリック体で強調表示される；および図１２もまた参照）。

一実施形態においてＧＩＰハイブリッドまたはそのＧＩＰ部分は１つまたは複数の以下の修飾（式、Ｎ末端−ＹａＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ−リンカー−ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号６５２）の参照用としてのみ）を有する：Ａｂｕ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、またはＳｅｒに対するｄＡｌａ２；Ｌｅｕに対するＭｅｔ１４；Ａｌａ、Ａｒｇ、またはＬｙｓに対するＨｉｓ１８；Ｇｌｕに対するＡｓｐ２１；ＡｒｇまたはＨｉｓに対するＬｙｓ３０；Ｇｌｙ（Ｏｃｔ）としてＮ末端；および／またはｂＡｌａ−ｂＡｌａまたはＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙリンカー。さらなる実施形態においてかかる変更の１つまたは複数が化合物０６０１ＧＩＰ３７９４に対しなされる。

一実施態様において、ハイブリッドのＧＩＰ類似体またはＧＩＰ部分は、いずれかの１またはそれを超える以下の位置：Ｔｙｒ１、Ｔｙ１０、Ｖａｌ２３、Ｌｅｕ２７および／またはＰｈｅ２２での置換、修飾および／または置換を有しない。以下の表に示すように、０６０１ＧＩＰ３７９４中の１またはそれを超えるこれらの位置でのアラニンにより置換の結果、（１０ｎＭペプチド濃度にて）受容体結合の２５％未満の阻害を有する類似体を生じる。まだ別の実施態様において、ＧＩＰ類似体およびハイブリッドは、１またはそれを超えるＴｙｒ１、Ｔｙ１０、Ｖａｌ２３、Ｌｅｕ２７および／またはＰｈｅ２２でのアラニン置換を含有しない。

まださらなる実施態様において、ＧＩＰ類似体またはハイブリッドは、０６０１ＧＩＰ３７９４に比較して１またはそれを超える位置でのアラニン置換を有することができ、以下の表に示された受容体結合を保持する。また、そのデータは、本明細書に記載された置換および修飾に対する寛容性であることを示す。

本発明の化合物のＧＩＰ部分に使用され得るさらに例示的な修飾（０６０１ＧＩＰ３７９４と比較して）、およびそれらを含む例示的化合物が、表に示される（および図１２を参照）：

例示的類似体としてはまた、酸化を除去または低減するアミノ酸修飾も挙げられる。かかる置換としては、欠失またはメチオニン１４のロイシンとの、および／またはトリプトファン２５のフェニルアラニンとの置換が挙げられる。従って、具体的な例示的類似体としては１つまたは複数のかかる置換を有することによる本明細書に記載される各類似体の変異体が挙げられる。一例としては、Ｔｒｐ置換として位置２５位でＰｈｅを有する０６０１ＧＩＰ３７９４のＤ−Ａｌａ２およびＬ−Ａｌａ２類似体である化合物ＡＡＡＡおよびＢＢＢＢである。

さらなる例示的な「テール」修飾（０６０１ＧＩＰ３７９４（配列番号１８６）と比較して）、例えば、単独または他の修飾および誘導体化と組み合わせたカエルＧＬＰ−１テール（ＰＫＫＩＲＹＳ）（配列番号４２１）を有するものおよびそれらを有する例示的化合物が、受容体結合および活性化データとともに、以下の表に示される（および図１２を参照）。Ａｄｏは、８−アミノ ３，６ ジオキサオクタン酸であり、Ａｕｎは、１１−アミノウンデカン酸である。

単独でまたは他の修飾および誘導体化と組み合わせて用いることができるさらにさらなる例示的「テール」修飾（カエルＧＬＰ１テールＰＫＫＩＲＹＳ（配列番号４２１）を組込む０６０１ＧＩＰ４２３３に比較する）ならびにそれらを含む例示的なＧＩＰ化合物を種々の活性と共に以下の表に示す。類似体０６０１ＧＩＰ４２３３は、驚くべき高溶解度（例えば、ｐＨ４〜８の３０ｍＭヒスチジン緩衝液中の５ｍｇ／ｍｌを超える溶解度）を有するＧＩＰ類似体の例であり、それはカエルＧＬＰ−１のＣ末端テールを含む。それが組込まれるＧＩＰ類似体またはハイブリッドの溶解度を改善するさらなるかかるテール修飾は、０６０１ＧＩＰ４９５１に見出されるカエルテールおよびエキセンディンテール：ＰＫＫＩＰＰＰＳ（配列番号＿＿＿＿＿ ）のキメラである。このキメラテールは、溶解度を改善するために本明細書に開示された他のＧＩＰ類似体およびハイブリッドに組込むことができる。また、以下の表に示すさらなる修飾および誘導体化は、ＧＩＰ類似体またはハイブリッドに組込まれる場合に、例えば、ラットＩＶＧＴＴアッセイ中にテストされる作用期間、および血漿安定性を改善できる。生体内試験において、そのカエルテールを有する類似体の主要な切断部位は、Ｉｌｅ３４−Ａｒｇ３５ペプチド結合であった。結果的に、一実施態様において、親ペプチドに比較して試験管内切断を低下させるためのこれらの２つの一方または双方での修飾、置換または誘導体化を有するＧＩＰ類似体またはハイブリッドである。（０６０１ＧＩＰ４２３３に比較した）かかる修飾の例を以下の表に示し、本明細書に示したその他のＧＩＰ類似体およびハイブリッドのいずれかと共に用いることが考えられる。

結果的に、一実施態様において、少なくとも１日、少なくとも３日または少なくとも７日間の４０℃の加速安定性下のｐＨ４〜９、ｐＨ５〜７、またはさらにｐＨ６〜７での２５％未満、１５％未満、１０％未満または約５％未満の効力損失を有するＧＩＰ類似体である。まださらなる実施態様において、ＧＩＰ類似体は、少なくとも１またはそれを超える約ｐＨ４、５、６、７、８または９で、およびさらに少なくとも３またはそれを超えるこれらのｐＨ、さらにこれらのすべてのｐＨでさえ、少なくとも約１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約２ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約３ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約４ｍｇ／ｍｌまたは少なくとも約５ｍｇ／ｍｌを超える溶解度を有する。一実施態様において、ＧＩＰ化合物は、ｐＨ６の３０ｍＭヒスチジン緩衝液中で少なくとも約２.０ｍｌ／ｍｌおよび／またはｐＨ６の３０ｍＭヒスチジン緩衝液中で少なくとも５.０ｍｌ／ｍｌの溶解度を有する。まださらなる実施態様において、ＧＩＰ化合物は、４０℃にて少なくとも７日間、ｐＨ６の３０ｍＭヒスチジン緩衝液中で少なくとも約８０％活性、少なくとも約９０％活性、少なくとも約９５％活性を保持する。

ＧＩＰ類似体の溶解度を増加させる（０６０１ＧＩＰ３７９４に比較して、Ｌｅｕ１４、Ａｌａ１８およびＧｌｕ２１置換を有する０６０１ＧＩＰ４２８５（配列番号＿＿＿＿）に比較した）さらなる例示的な「テール」修飾は、０６０１ＧＩＰ４２８５に比較したそれらの作用期間を改善および／またはグルコース低下を増加させ、それは、単独で用いるまたは他の修飾および誘導体化と組み合わせることができ、それらを含むその例示的なＧＩＰ化合物をそれらの受容体結合および活性化データと共に以下の表に示す。例えば、０６０１ＧＩＰ４２８５に比較した０６０１ＧＩＰ４９７４のテール領域、より詳細には修飾テール領域中のＰについてのＮの置換は、他のＧＩＰ化合物に取り込むことができるかかる修飾である。（以下の「Ｏｃｇ」は、オクチルグリシンを意味する）。

さらなる例示的テール修飾を以下の表に記載する。その修飾は、血漿安定性の増加を提供する。一実施態様において、カエルＧＬＰ−１テール領域は、蛋白質分解切断を防止または低下させるための「ＫＫ」配列でまたはその付近で置換または修飾される。かかる修飾テール領域は以下の表中に特定のＧＩＰ類似体の文脈において示されるが、結合したＧＩＰ部分の血漿安定性を増加させるかかる修飾テール配列は、血漿安定性およびより長い半減期の増強を提供するように本明細書に開示されたものを含めたいずれのＧＩＰ類似体または誘導体と用いられるものであることを意図する。修飾テールは、本明細書に記載された１またはそれを超えるＧＩＰ修飾または誘導体化と組み合わせることができる。さらに、修飾−カエル−テール含有ＧＩＰ化合物は、ＧＩＰハイブリッドの特に有用な成分である。さらなる実施態様において、安定性を増強するカエルＧＬＰ１テールおよびその類似体および誘導体は、本明細書に記載されたＧＩＰ、エキセンディン、ＧＬＰ１または他のペプチドホルモンと共に用いるエキセンディンテールに対する代替物として特に注目される。

ヒトＧＩＰまたは０６０１ＧＩＰ４２８８に比較したＧＩＰ類似体の溶解度、作用期間またはグルコース低下を改善し、単独で用いるまたは本明細書に開示した他の修飾および誘導体化と組み合わせた（０６０１ＧＩＰ３７９４に比較したＬｅｕ１４、Ｇｌｕ１５およびＡｒｇ１８およびＧｌｕ２１置換を有する０６０１ＧＩＰ４２８８（配列番号＿＿＿＿）に比較した）さらなる例示的な「テール」修飾、ならびにそれらを含む例示的な化合物を種々の活性と共に以下の表に示す。（以下の「Ｏｃｇ」は、オクチルグリシンを意味する）。

溶解度、作用期間および／またはグルコース低下活性を改善でき、単独で用いるまたは本明細書に開示した他の修飾および誘導体化と組み合わせた（エキセンディンテールＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号＿＿＿＿）を組込む０６０１ＧＩＰ３７９４に比較した）まださらにさらなる例示的な「テール」修飾、ならびにそれらを含む例示的な化合物を以下の表に示す。例えば、一実施態様において、ＧＩＰアナログまたはハイブリッドは、（そのＣ末端で）以下の表中のＰＳＳＧＡＰＰＮＳのごときテール配列のいずれか１つを組込み、親化合物に比較してより大きな溶解度、作用期間の改善またはグルコース低下の改善を達成するであろう。別の実施態様において、ＧＩＰ類似体またはハイブリッドは、（０６０１ＧＩＰ３７９４に比較した）以下の表からのいずれかの１またはそれを超える非テールアミノ酸置換を組込み、溶解度、作用期間の改善またはグルコース低下の改善を達成できる。

まだ他の実施態様において、特にエキセンディンテール修飾と組み合わせた場合に溶解度の増加を提供するための以下の表に記載された修飾および特定のＧＩＰ化合物である。ＦＶＮＷＬＬＡ領域に対する修飾は、エキセンディンテール自体に対する変更であるので溶解度を改善するために特に注目される。他の実施態様において、溶解度は、本明細書に示された、末端アミノ酸または内部アミノ酸、例えば、リジンのいずれかへの水可溶性ポリマー、例えば、ＰＥＧの付加により増強される。

いくつかの前記化合物の代替的表示は以下の通りである：

まださらなる実施態様は、ヒトＧＩＰに比較した、およびいくらかの実施態様において０６０１ＧＩＰ３７９４より大きいかまたは等しい、溶解度、グルコース低下または作用期間を提供し得る以下の表に記載された修飾および特定のＧＩＰ配列を含む。修飾は、以下の表に示された化合物のテール領域（ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ）または他の部分あるいは双方で存在し得る。修飾ＧＩＰ配列および修飾テール配列は、他のＧＩＰ類似体またはハイブリッドに用いることができる。ＯＧＴＴを介する受容体結合およびグルコース低下活性を示す。

一実施態様において、驚くべき高溶解度を持つＧＩＰ類似体であり、さらなる実施態様において、以下の表に示すように、ヒトＧＩＰより大きく、または０６０１ＧＩＰ３７９４および０６０１ＧＩＰ４８５０のいずれかまたは双方にぼぼ等しいまたはより良好にグルコース低下を保持つつ、約ｐＨ５〜７で測定された０６０１ＧＩＰ３７９４および０６０１ＧＩＰ４８５０のいずれかまたは双方よりも驚くべき大きな溶解度を持つ。一実施態様において、その類似体は、３０ｍＭヒスチジンで緩衝されたｐＨ６．０または３０ｍＭヒスチジンで緩衝されたｐＨ７．０での０６０１ＧＩＰ３７９４および０６０１ＧＩＰ４８５０のいずれかまたは双方より大きな溶解度を有する。一実施態様において、溶解度および生理活性を供する０６０１ＧＩＰ３７９４に比較した、類似体０６０１ＧＩＰ５０７５、０６０１ＧＩＰ５０７６、０６０１ＧＩＰ５０８０、０６０１ＧＩＰ５０８１、０６０１ＧＩＰ５０８２および０６０１ＧＩＰ４８５０の各々における１またはそれを超えるあるいはすべての修飾を含むＧＩＰ類似体またはハイブリッドである。一実施態様において、溶解度および生理活性を供する０６０１ＧＩＰ４２８８に比較した、類似体０６０１ＧＩＰ５０７０、１６５０７１、０６０１ＧＩＰ５０７２、０６０１ＧＩＰ５０７３の各々における１またはそれを超えるあるいはすべての修飾を含むＧＩＰ類似体またはハイブリッドである。一実施態様において、溶解度および生理活性を供する０６０１ＧＩＰ４２３３に比較した、類似体０６０１ＧＩＰ４９０４における１またはそれを超えるあるいはすべての修飾を含むＧＩＰ類似体またはハイブリッドである。一実施態様において、類似体は、約５ｍｇ／ｍｌまたはそれを超える溶解度を有し、ヒトＧＩＰ、０６０１ＧＩＰ３７９４および／または０６０１ＧＩＰ４８５０ｍを超えるまたはほぼそれを超えるグルコース低下をさらに保持する。一実施態様において、ＧＩＰ類似体またはハイブリッドは、０６０１ＧＩＰ４９０４、０６０１ＧＩＰ５０７２、０６０１ＧＩＰ５０７５、０６０１ＧＩＰ５０８０、０６０１ＧＩＰ５０８１、０６０１ＧＩＰ５０８２、０６０１ＧＩＰ５０７０、０６０１ＧＩＰ５０７１、０６０１ＧＩＰ５０７３または０６０１ＧＩＰ５０７６であるか、またはそれらを含む。別の実施態様において、ＧＩＰ類似体は、０６０１ＧＩＰ４９０４、０６０１ＧＩＰ５０７２、０６０１ＧＩＰ５０７５、０６０１ＧＩＰ５０８０、０６０１ＧＩＰ５０８１、０６０１ＧＩＰ５０８２であるか、またはそれらを含み、その類似体は、例えば、少なくとも３日間または少なくとも７日間、４０℃での加速安定性試験により決定された溶液中での優れた安定性を示す。一つのかかる実施態様において、類似体０６０１ＧＩＰ５０８０、０６０１ＧＩＰ５０８１、０６０１ＧＩＰ５０８２または０６０１ＧＩＰ５０７２、あるいはこれらの配列を含む類似体またはハイブリッドである。（本明細書中の表において、「７９４」とは０６０１ＧＩＰ３７９４を意味する。）

さらなる実施態様において、前記の表およびさらに本明細書中の表および図の各々におけるＧＩＰ化合物のその類似体または誘導体あるいはハイブリッドであり、それは５個以下、４個以下、３個以下、２個以下、１個以下の本明細書に記載された置換、修飾および／または誘導体を有し、および／または親ＧＩＰ化合物の全長にわたり前記の表または本明細書中の他の表または図の親ＧＩＰ類似体に少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を示す。

図１２．１５〜１２．６５は本発明のさらに例示的な類似体および参照ペプチドを示す。示された様々な修飾および変異体が本発明に使用されるものであるとともに、本明細書中で考察されるとおり併用されてもよいことが意図される。例えば、用語エキセンディンテールまたはエキセンディンｔｒｐケージモチーフは、シールド配列（ペプチドエンハンサー）として有用である、示される任意のエキセンディンテール変異体を含む。さらに興味深いのは図に示されるとおりのカエルＧＬＰ１Ｃ末端伸長部であり、これはエキセンディンテールの代わりに使用され得るシールド配列のさらに別の例である。例えば、一実施形態において本発明のＧＩＰ化合物はカエルＧＬＰ１「テール」配列を本明細書に記載されるとおりのペプチドエンハンサーとして含んでなる（および図１２を参照）。特に興味深いのは化合物０６０１ＧＩＰ４１７９、０６０１ＧＩＰ４２３３、０６０１ＧＩＰ４２８５、０６０１ＧＩＰ４１７８、０６０１ＧＩＰ４４６７である。他の実施態様において、「Ｓ」もしくはシールド領域またはＣ末端テールは、例えば、ＰＳＳＧＱＰＰＱＳＫ、ＰＳＳＧＡＰＰＱＳＫ、ＰＳＳＧＡＰＰＫＳＫ、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ、ＰＳＳＧＡＰＰＫＳ、ＰＳＳＧＡＲＰＰＳ、ＰＳＳＧＡＫＰＰＳ、ＰＳＳＧＡＰＫＰＳ、ＰＳＳＧＡＰＤＰＳまたはＰＫＧＫＩＲＹＳを含めた本明細書に示したいずれのテールでも有り得る。さらに、「Ｓ」もしくはシールド領域またはＣ末端テールは、ＧＩＰ化合物０６０１ＧＩＰ３７９４、０６０１ＧＩＰ４８５０、０６０１ＧＩＰ５０７５、０６０１ＧＩＰ５０７６、０６０１ＧＩＰ５０８０、０６０１ＧＩＰ５０８１、０６０１ＧＩＰ５０８２、０６０１ＧＩＰ５０７０、０６０１ＧＩＰ５０７１、０６０１ＧＩＰ５０７２、０６０１ＧＩＰ５０７３または０６０１ＧＩＰ４９０４からのものを含めた本明細書に示されたＧＩＰ類似体のいずれにおいても見出されるいずれのテールでも有り得る。

さらに本明細書の任意のＧＩＰモジュールのさらなる実施形態としては、セリン２、アスパラギン酸３（すなわち、Ｓ２，Ｄ３）、ＧＩＰのＮ末端の位置２および３位での二重置換がある。このように、本明細書に示される種および式の各々については、各Ｓ２，Ｄ３類似体が、それが記載されていたかのごとく、明示的に本明細書に開示されることが明確に意図される。本明細書に記載される他のＤＰＰ−ＩＶ耐性修飾と同様、Ｓ２，Ｄ３は１または２個またはそれ以上の他の修飾、例えば血漿減少（例えば腎クリアランス）および／または作用の持続時間増加のための脂肪酸アシル誘導体化と、および／またはＣ末端シールド配列と、および／またはＧＩＰ種アミノ酸置換と、併用され得る。当然ながらこれらのＧＩＰ類似体は直接またはＧＩＰハイブリッドのＧＩＰ部分として使用され得る。

約１０ｎｍ未満で例外的なＧＩＰ受容体結合活性を示す例示的化合物（例えば図１２を参照）としては、３．８ｎＭでの０６０１ＧＩＰ３７９４、０．４１ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４２８３、１．８ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４２８４、０．５８ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４２８５、０．２８ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４２８８、０．５８ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４２８９、０．３５ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４２９０、７．４ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４１４７、１．５ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４１７８、０．１２ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４２９３、０．１７ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４２９２、４．２ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４２３８、３．３ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４１７９、０．９２ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４２９４、５．６ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４２５２、３．８ｎＭでの０６０１ＧＩＰ３７９４、２．４ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４１９０、２．３ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４１５２、１．６ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４１５０、０．５３ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４１５３、１．５ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４１４９、４．８ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４１７６、２．９ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４１７７、７．９ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４２１３、４．５ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４２１５、０．６６ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４２６３、０．２４ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４２７８、０．４ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４２６４、２．１ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４２７９、０．１ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４２３３、３．４ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４２３４、０．６２ｎＭでの０６０１ＧＩＰ４２３６が挙げられる。これらの化合物はまたＧＩＰ受容体活性化および然るべき受容体特異性（例えば、然るべきハイブリッドモジュール不在下におけるＧＬＰ１−Ｒまたはグルカゴン受容体への結合の欠如）も表す。

本明細書に実証されるとおり、本発明のＤＰＰ−ＩＶ耐性ハイブリッドは未変性ＧＩＰと比較して血漿安定性の増加を有する。例えば、０６０１ＧＩＰ３７９６アミド型は５時間後のヒト血漿中に、ＧＩＰ（１−４２）酸性型の約６０％とは対照的に、本質的に１００％存在する。

さらに、以下の表は、本発明のＧＩＰペプチドならびにそれらの類似体および誘導体が本明細書に言及された所望の治療効果に直接的に関連する生体内活性を有することを示す。太字でマークされた化合物は、特に注目されるもので、それらは修飾および／または誘導体であり、本明細書中の他の修飾または誘導体と組み合わせてまたは他の修飾または誘導体と共に用いることができる。これらの化合物は、本発明のＧＩＰハイブリッドにおいて特定の使用を見出す。太字化合物は、非常に有効な活性を示す。

本発明の実施形態はさらに以下を含む。また、以下は、各々の種およびそれから誘導できる亜属の記載を簡易表記方法で提供する。

一実施形態において、新規ＧＩＰ類似体またはＧＩＰハイブリッドは式Ｄ−Ｌ−Ｃ−Ｓを含んでなるポリペプチドを含んでなり、ここで、
ＤはジペプチジルペプチダーゼＩＶ耐性ＧＩＰ−Ｎ末端領域を含んでなり、
Ｌはリンカーを含んでなり、
ＣはＧＩＰ−Ｃ末端領域を含んでなり、および
Ｓはシールド領域を含んでなり；および
ここでＬは場合により存在するとともにＤまたはＣの少なくとも１個が存在し、およびここでＣが存在する時ひいてはＣ−ＳがＴｒｐケージモチーフを含んでなるか、もしくはＣが不在である時ひいてはＬ−ＳがさらにＴｒｐケージモチーフを含んでなるとともに、ポリペプチドがＧＩＰ受容体結合および／または活性化活性を有する。ＤまたはＣの少なくとも１個が存在する時、少なくとも１個の当該ＤまたはＣはＧＩＰ受容体活性化および／または結合活性を有する。別の実施形態においてはＤおよびＣの双方が存在する。ＤおよびＣの一方または双方がＧＩＰ受容体活性化および／または結合活性を有し得る。一実施形態においてポリペプチドはＧＩＰ受容体を特異的に結合できる。典型的にはこの結合はインクレチン受容体などの別の受容体、例えば、ＧＬＰ１Ｒへの結合より少なくとも２倍高いであろう。結合はインクレチン受容体などの別の受容体、例えば、ＧＬＰ１Ｒへの結合より少なくとも５、１０、５０、または１００倍さえ高くあり得る。一実施形態において新規ＧＩＰ類似体はＧＩＰアゴニスト活性を含んでなる。一実施形態においてポリペプチドはＧＩＰ受容体を特異的に活性化できる。典型的にはこの活性化はインクレチン受容体などの別の受容体、例えば、ＧＬＰ１Ｒの活性化より少なくとも２倍高いであろう。活性化はインクレチン受容体などの別の受容体、例えば、ＧＬＰ１Ｒの活性化より少なくとも３、４、５、１０、５０、または１００倍さえ高くあり得る。

別の実施形態においてポリペプチドは未変性ＧＩＰの少なくとも１個の所望の活性を含んでなる。新規ＧＩＰハイブリッドの所望の活性が未変性型のものより高い時、活性は少なくとも２倍高くあり得る。さらなる実施形態において所望の活性は未変性ＧＩＰと比較した活性より少なくとも３、４、５、１０、５０、または１００倍さえ高くあり得る。活性は、試験管内、生体外、または生体内での、受容体結合、受容体活性化、受容体アンタゴニズム、グルコース降下、胃分泌の阻害または低減、または任意の他の活性であってもよく、当該技術分野において周知であり得るか、または本明細書中に提供される。

さらなる実施形態において新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッドのＤ領域は未変性ＧＩＰの１１Ｎ末端アミノ酸配列または未変性ＧＩＰの１４Ｎ末端アミノ酸配列を含んでなる。他の実施形態においてＤ領域は修飾または置換されたＧＩＰのＮ末端部分を含んでなり、例えば国際公開第００／５８３６０号パンフレット、欧州特許第１１７１４６５号明細書または米国特許出願公開第２００３／０２３２７６１号明細書を参照されたい。

さらなる実施形態において領域Ｃは未変性ＧＩＰのＣ末端アミノ酸１９−２６、未変性ＧＩＰのＣ末端アミノ酸１９−３０、未変性ＧＩＰのＣ末端アミノ酸１９−３９または未変性ＧＩＰのＣ末端アミノ酸１９−４２を含んでなる。１つのかかる実施形態において領域Ｃはヒト、マウス、ブタまたはラットＧＩＰのアミノ酸１９−２６、１９−３０、１９−３９または１９−４２を含んでなることができる。他の実施形態においてＣ領域は修飾または置換されたＧＩＰのＣ末端部分を含んでなり、例えば米国特許出願公開第２００３／０２３２７６１号明細書を参照されたい。

一実施形態においてＬは、ＤＫＩＨまたはＤＫＩＨを含む、未変性ＧＩＰ由来の配列を含んでなる。さらなるかかる実施形態において新規ＧＩＰ類似体のＤ−Ｌ−Ｃ部分は未変性ＧＩＰのアミノ酸１−２６、１−３０、１−３９、または１−４２を含んでなる。１つのかかる実施形態において領域Ｄ−Ｌ−Ｃはヒト、マウス、ブタまたはラットＧＩＰのアミノ酸１−２６、１−３０、１−３９または１−４２を含んでなる（例えばリー（Ｌｉ）ら、Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ １２１（１−３） １０７−１１２頁（２００４年）を参照）。いまださらなるかかる実施形態において新規ＧＩＰ類似体のＤ−Ｌ−Ｃ部分は、ＤＰＰ−ＩＶ耐性を含んでなるＮ末端で修飾または置換されたＧＩＰ（１−４位の任意の位置）のアミノ酸１−２６、１−３０、１−３９、または１−４２を含んでなり、例えば国際公開第００／５８３６０号パンフレット、欧州特許第１１７１４６５号明細書または米国特許出願公開第２００３／０２３２７６１号明細書を参照されたい。

式Ｄ−Ｌ−Ｃ−Ｓの新規ＧＩＰ化合物は、配列
ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１８６）、
（Ｔｙｒ１−グルシトール）ＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１８７）、
（Ｔｙｒ１−ピログルタミル）ＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１８８）、
（Ｔｙｒ１−グルシトール）ＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１８７）、
（Ｔｙｒ１−９−フルオレニルメトキシカルボニル）ＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１８９）、
（Ｔｙｒ１−パルミチン酸）ＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１９０）、
ＹＳＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１９１）、または
ＹＧＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１９２）を含んでなることができる。

別の実施形態において新規ＧＩＰ化合物は、配列
ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１９３）、
（Ｔｙｒ１−グルシトール）ＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１９４）、
（Ｔｙｒ１−ピログルタミル）ＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１９５）、
（Ｔｙｒ１−グルシトール）ＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１９４）、
（Ｔｙｒ１−９−フルオレニルメトキシカルボニル）ＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＬＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１９６）、
（Ｔｙｒ１−パルミチン酸）ＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＬＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１９７）、
ＹＳＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫｍＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１９８）、または
ＹＧＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１９９）を含んでなる。

新規ＧＩＰ化合物はまた、配列
Ｙ（Ｄ−Ａｌａ）ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１８６）、
ＹＡｂｕＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２００）、または
ＹＳａｒＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２０１）も含んでなることができる。

さらに別の実施形態において新規ＧＩＰハイブリッドは、配列
Ｙ（Ｄ−Ａｌａ）ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１９３）、
ＹＡｂＵＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２０２）、または
ＹＳａｒＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２０３）を含んでなる。

新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッドの一実施形態において、Ｄは配列Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４（配列番号４６５）を含んでなり、ここでＸ１、Ｘ２、およびＸ３の少なくとも１個はＤＰＰ−ＩＶ耐性を提供するアミノ酸置換または修飾である。さらなるかかる実施形態においてＤＰＰ−ＩＶ耐性はＸ２とＸ３との間のペプチド模倣物結合を含んでなる修飾により提供される。かかる結合は、例えばＸ１−Ｘ２−Ｘ３がＴｙｒ１−ＡｌａΨ（ＣＨ２ＮＨ）−Ｇｌｕであるときのような、式Ψ（ＣＨ２ＮＨ）の低減されたペプチド結合として提供され得る。さらなる実施形態において新規ＧＩＰ類似体の任意の結合は式Ψ（ＣＨ２ＮＨ）の低減されたペプチド結合、特にプロテアーゼまたはペプチダーゼ分解を受けやすいとして同定されるものである。さらなる実施形態において置換または修飾は、Ｘ１、Ｘ２および／またはＸ３におけるＤ−アミノ酸置換および／またはＮ末端の糖化、アルキル化、アセチル化またはアシル化を含んでなる。位置Ｘ１−Ｘ１４は独立して選択され得る。他の実施形態において任意のまたはより多くのＸ１２−Ｘ１４が場合により不在である。

興味深いのは新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッドであり、ここでＸ２およびＸ３はＬｙｓ、Ｓｅｒ、４−アミノ酪酸アミノ酸、Ａｉｂ、Ｄ−Ａｌａ、サルコシンまたはＰｒｏである。Ｎ末端修飾は、糖化、アルキル化、アセチル化、アルキルオキシカルボニル化またはアリールアルコキシカルボニル化からなる群より独立して選択され得る。

さらに別の実施形態においてＸ１はＴｙｒ、脱アミノ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ａｌａ、Ｄ−アミノ酸、Ｔｙｒ−グルシトール、Ｎ−メチル化アミノ酸であり、および／またはＮ末端糖化、アルキル化、アセチル化、アルキルオキシカルボニル化、アリールアルコキシカルボニル化またはアシル化を含んでなる。さらなる実施形態においてＸ１がＴｙｒである時、ひいてはチロシン残基のＮ末端は、アルキル化、アルキルオキシカルボニル化、アリールアルコキシカルボニル化、スルホニル化、糖化、ホモセリン形成、ピログルタミン酸形成、アシル化、メチル化、ｔ−ブチル化、ｔ−ブチルオキシカルボニル化、４−メチルベンジル化、ベンジルオキシメチル化、ベンジルオキシカルボニル化、４−トルエンスルホニル化、ジフェニルメチル化、２−ブロモベンジルオキシカルボニル化、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル化、アシル化、ホルミル化、アセチル化、ベンジル化、ベンゾイル化、リン酸化、硫酸化、ペントース、デオキシヘキソース、グルコサミン、またはＮ−アセチルグルコサミンを伴う解糖化、ファルネシル化、ビオチン化、パルミトイル化、ステアロイル化、ゲラニルゲラニル化、グルタチオン化、およびリポ酸を伴う修飾により修飾され得る。いまださらなる実施形態においてＸ１残基のＮ末端は、アルキル化、アルキルオキシカルボニル化、アリールアルコキシカルボニル化、スルホニル化、糖化、ホモセリン形成、ピログルタミン酸形成、アシル化、メチル化、ｔ−ブチル化、ｔ−ブチルオキシカルボニル化、４−メチルベンジル化、ベンジルオキシメチル化、ベンジルオキシカルボニル化、４−トルエンスルホニル化、ジフェニルメチル化、２−ブロモベンジルオキシカルボニル化、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル化、アシル化、ホルミル化、アセチル化、ベンジル化、ベンゾイル化、リン酸化、硫酸化、ペントース、デオキシヘキソース、グルコサミン、またはＮ−アセチルグルコサミンを伴う解糖化、ファルネシル化、ビオチン化、パルミトイル化、ステアロイル化、ゲラニルゲラニル化、グルタチオン化、およびリポ酸を伴う修飾により修飾され得る。

さらに別の実施形態においてＸ２は、Ａｌａ、ＡｌａΨ（ＣＨ２ＮＨ）、Ｓｅｒ、Ｄ−アミノ酸、Ｌｙｓ、４−アミノ酪酸アミノ酸、Ａｉｂ、Ｄ−Ａｌａ、サルコシン、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、リン酸化Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、またはＮ−メチル化アミノ酸である。さらなる実施形態においてＸ２は、未変性残基由来または本明細書に提供されるＸ２残基由来の保存されたアミノ酸改変である。さらに別の実施形態においてＸ２は任意の自然発生的アミノ酸である。なおさらなる実施形態においてＸ２は、任意の非タンパク質新生アミノ酸である。

さらに別の実施形態においてＸ３は、Ｇｌｕ、Ｄ−Ｇｌｕ、Ｌ−Ｐｒｏ、（Ｎ−Ｍｅ）Ｇｌｕ、Ｐｒｏ、Ｄ−アミノ酸、Ｌｙｓ、Ｓｅｒ、４−アミノ酪酸アミノ酸、Ａｉｂ、Ｄ−Ａｌａ、サルコシン、Ｐｒｏ、またはＮ−メチル化アミノ酸である。さらなる実施形態においてＸ３は、未変性残基由来または本明細書に提供されるＸ３残基由来の保存されたアミノ酸改変である。さらに別の実施形態においてＸ３は任意の自然発生的アミノ酸である。なおさらなる実施形態においてＸ３は、任意の非タンパク質新生アミノ酸である。

さらに別の実施形態においてＸ４は、ＧｌｙまたはＡｌａである。さらなる実施形態においてＸ４は、未変性残基由来または本明細書に提供されるＸ４残基由来の保存されたアミノ酸改変である。

さらに別の実施形態においてＸ５は、ＴｈｒまたはＳｅｒである。

さらに別の実施形態においてＸ６は、ＰｈｅまたはＡｌａである。さらなる実施形態においてＸ６は、未変性残基由来または本明細書に提供されるＸ６残基由来の保存されたアミノ酸改変である。

さらに別の実施形態においてＸ７は、ＩｌｅまたはＡｌａである。さらなる実施形態においてＸ７は、未変性残基由来または本明細書に提供されるＸ７残基由来の保存されたアミノ酸改変である。

さらに別の実施形態においてＸ８は、ＳｅｒまたはＡｌａである。さらなる実施形態においてＸ８は、未変性残基由来または本明細書に提供されるＸ８残基由来の保存されたアミノ酸改変である。

さらに別の実施形態においてＸ９は、ＡｓｐまたはＡｌａである。さらなる実施形態においてＸ９は、未変性残基由来または本明細書に提供されるＸ９残基由来の保存されたアミノ酸改変である。

さらに別の実施形態においてＸ１０は、ＴｙｒまたはＡｌａである。さらなる実施形態においてＸ１０は、未変性残基由来または本明細書に提供されるＸ１０残基由来の保存されたアミノ酸改変である。

さらに別の実施形態においてＸ１１は、ＳｅｒまたはＡｌａである。さらなる実施形態においてＸ１１は、未変性残基由来または本明細書に提供されるＸ１１残基由来の保存されたアミノ酸改変である。

さらに別の実施形態においてＸ１２は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、またはＬｙｓである。さらなる実施形態においてＸ１２は、未変性残基由来または本明細書に提供されるＸ１２残基由来の保存されたアミノ酸改変である。さらに別の実施形態においてＸ１２は任意の自然発生的アミノ酸である。なおさらなる実施形態においてＸ１２は不在である。

さらに別の実施形態においてＸ１３は、Ａｌａ、Ｔｙｒ、グルタミン、またはＡｓｐである。さらなる実施形態においてＸ１３は、未変性残基由来または本明細書に提供されるＸ１３残基由来の保存されたアミノ酸改変である。さらに別の実施形態においてＸ１３は任意の自然発生的アミノ酸である。なおさらなる実施形態においてＸ１３は不在である。

さらに別の実施形態においてＸ１４は、Ｍｅｔ、Ａｌａ、またはＬｅｕである。さらなる実施形態においてＸ１４は、未変性残基由来または本明細書に提供されるＸ１４残基由来の保存されたアミノ酸改変である。さらに別の実施形態においてＸ１４は任意の自然発生的アミノ酸である。なおさらなる実施形態においてＸ１４は不在である。

特定の実施形態において新規ＧＩＰ類似体およびハイブリッドの修飾されたＤ領域は配列Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ（配列番号２０４）を含んでなる。

特定の実施形態においてＤは、配列
Ａｌａ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｍｅｔ（配列番号２０５）；
Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｍｅｔ（配列番号２０６）；
Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｍｅｔ（配列番号２０７）；
Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｍｅｔ（配列番号２０８）；
Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｍｅｔ（配列番号２０９）；
Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−ＡＳｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｍｅｔ（配列番号２１０）；
Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｍｅｔ（配列番号２１１）；
Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｍｅｔ（配列番号２１２）；
Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｍｅｔ（配列番号２１３）；
Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｍｅｔ（配列番号２１４）；
Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｍｅｔ（配列番号２１５）；または
Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ａｌａ（配列番号２１６）を含んでなる。

なおさらなる実施形態においてＤは、配列
ＴｙｒＳｅｒＧｌｕＧｌｙＴｈｒＰｈｅＩｌｅＳｅｒＡｓｐＴｙｒＳｅｒＩｌｅＡｌａＭｅｔ（配列番号２１７）；ＴｙｒＧｌｙＧｌｕＧｌｙＴｈｒＰｈｅＩｌｅＳｅｒＡｓｐＴｙｒＳｅｒＩｌｅＡｌａＭｅｔ（配列番号２１８）；またはＴｙｒ−ＤＡｌａ−ＧｌｕＧｌｙＴｈｒＰｈｅＩｌｅＳｅｒＡｓｐＴｙｒＳｅｒＩｌｅＡｌａＭｅｔを含んでなる。

さらなる実施形態においてＤは、配列
ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭ（配列番号１４）、（Ｔｙｒ１−グルシトール）ＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭ（配列番号２１９）、（Ｔｙｒ１−ピログルタミル）ＡＥＧＴＦＩＳＤ（配列番号２２０）、（Ｔｙｒ１−グルシトール）ＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭ（配列番号２１９）、（Ｔｙｒ１−９−フルオレニルメトキシカルボニル）ＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭ（配列番号２２１）、（Ｔｙｒ１−パルミチン酸）ＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭ（配列番号２２２）、ＹＳＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭ（配列番号２２３）、またはＹＧＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭ（配列番号２２４）を含んでなる。

さらに他の実施形態においてＤは配列Ｙ（Ｄ−Ａｌａ）ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭ、ＹＡｂｕＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭ（配列番号２２５）、またはＹＳａｒＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭ（配列番号２２６）を含んでなる。

なおさらなる実施形態において新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッド領域Ｄは、未変性ＧＩＰ、例えば未変性ＧＩＰのアミノ酸１−１１、１−１２、１−１３または１−１４、好ましくはヒトＧＩＰの対応する領域に対し、対応する各配列の全長にわたり、少なくとも６０％、６５％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または１００％の配列同一性を呈する。さらには、新規ＧＩＰ類似体の領域Ｄはまた、修飾または置換されたＧＩＰに対し、少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％までもの配列同一性も呈し、例えば国際公開第００／５８３６０号パンフレット、欧州特許第１１７１４６５号明細書または米国特許出願公開第２００３／０２３２７６１号明細書を参照されたい。パーセント同一性は手作業で、またはベクターＮＴＩ（Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩ）（インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）；カリフォルニア州カールズバッド）におけるアラインＸ（ＡｌｉｇｎＸ）モジュールもしくはグローバルアラインメント用のクラスタルＷ（ＣｌｕｓｔａｌＷ）アルゴリズムを用いる解析により決定され得る。未変性領域ＤＧＩＰ配列としては、ヒト、マウス、ラット、ブタまたはウシＧＩＰに由来するものが挙げられる。未変性ＧＩＰ配列としては、ヒトＧＩＰ（１−４２）（ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＬＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱ）（配列番号２）、マウスＧＩＰ（１−４２）（ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＲＧＫＫＳＤＷＫＨＮＩＴＱ）（配列番号１０）、ラットＧＩＰ（１−４２）（ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＬＴＱ）（配列番号１１）、ブタＧＩＰ（１−４２）（ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＳＤＷＫＨＮＩＴＱ）（配列番号１２）、またはウシＧＩＰ（１−４２）（ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＳＤＷＩＨＮＩＴＱ）（配列番号１３）が挙げられる。さらに別の実施形態において領域Ｄは、ヒト、マウス、ラット、ブタまたはウシＧＩＰのアミノ酸１−１１、１−１２、１−１３または１−１４を含んでなり、例えばここで領域ＤはＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳ（配列番号２２７）、ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩ（配列番号２２８）、ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡ（配列番号２２９）またはＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭ（配列番号１４）を含んでなる。なおさらなる実施形態において領域Ｄアミノ酸配列はさらに、位置Ｘ１、Ｘ２またはＸ３位の任意の１箇所に加え、修飾または置換されたアミノ酸を含んでなる。

新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッドのある実施形態においてＬは不在であり得る。他の実施形態においてＬは、
ａ）Ａｈａ、
ｂ）Ａｈａ−Ａｌｉａ、
ｃ）Ａｈａ−Ａｈａ−Ａｈａ、
ｄ）アミノアルカン酸（Ｃ５−Ｃ１２）、
ｅ）Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ（配列番号２３０）、
ｆ）Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ（配列番号２３１）、
ｇ）アミノ酸残基、Ｄ−アミノ酸および非タンパク質新生アミノ酸からなる群より選択される１２アミノ酸残基を含んでなるリンカーペプチド、
ｈ）Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ（配列番号２３２）、
ｉ）ω−ＮＨ２−（ＣＨｘ）ｎ−ＣＯＯＨ（式中ｎ＝１０〜３４）のω−アミノ脂肪酸（飽和または不飽和）；または
ｊ）配列Ｘ１５−Ｘ１６−Ｘ１７−Ｘ１８（配列番号４６６）（配列中Ｘ１５〜Ｘ１８の各々は、独立して任意の自然発生的アミノ酸、非タンパク質新生アミノ酸、Ｄ−アミノ酸であるか、または不在である）を含んでなる。

さらなる実施形態においてＸ１５は、Ｄ、Ｅ、またはそれらもしくは未変性Ｘ１５残基の保存されたアミノ酸改変である。さらなる実施形態においてＸ１６は、Ｋ、Ｇ、Ｅ、またはそれらもしくは未変性Ｘ１６残基の保存されたアミノ酸改変である。さらなる実施形態においてＸ１７は、Ｉ、Ｑ、Ｅ、またはそれらもしくは未変性Ｘ１７残基の保存されたアミノ酸改変である。さらなる実施形態においてＸ１８は、Ｈ、Ｒ、Ａまたはそれらもしくは未変性Ｘ１８残基の保存されたアミノ酸改変である。新規ＧＩＰ類似体においてＬは、配列Ｄ−Ｋ−Ｉ−ＨまたはＤ−Ｋ−Ｉ−Ｒを含んでなることができる。さらなる実施形態においてＬは修飾または置換されたアミノ酸を含んでなる。１つのかかる実施形態においてＬは、第１の位置（例えばＸ１６）において（ヘテロ）アリール基（双方とも場合により置換される）または３−７Ｃシクロアルキル基、１−１０Ｃ（ヘテロ）アルキレン基、２−１０Ｃ（ヘテロ）アルケニレン基、２−１０Ｃ（ヘテロ）アルキニレン基またはフェニル基を、および第２のＣ末端に隣接する位置（例えばＸ１７）において、１−１０Ｃ（ヘテロ）アルキレン基、２−１０Ｃ（ヘテロ）アルケニレン基、２−１０Ｃ（ヘテロ）アルキニレン基、またはアミノ酸骨格中で−ＣＯ−を介して次の残基に連結されるフェニル基を含んでなる。なおさらなる実施形態において領域Ｌアミノ酸配列はさらに修飾または置換されたアミノ酸を含んでなる。

本発明の一実施形態において領域Ｃは配列Ｘ１９−Ｘ２０−Ｘ２１−Ｘ２２−Ｘ２３−Ｘ２４−Ｘ２５−Ｘ２６−Ｘ２７−Ｘ２８−Ｘ２９−Ｘ３０（配列番号４６７）を含んでなり、各位置は独立して選択され、配列中、
Ｘ１９は、Ｑまたはその保存されたアミノ酸置換であり、
Ｘ２０は、Ｑまたはその保存されたアミノ酸置換であり、
Ｘ２１は、Ｄまたはその保存されたアミノ酸置換であり、
Ｘ２２は、Ｆ、Ｙまたはそれらの保存されたアミノ酸置換であり、
Ｘ２３は、Ｖ、Ｉ、Ａ、またはそれらのアミノ酸置換であり、
Ｘ２４は、Ｎ、Ｑまたはそれらの保存されたアミノ酸置換であり、
Ｘ２５は、Ｗ、Ｆ、Ｙ、ナフチルアラニンまたはそれらの保存されたアミノ酸置換であり、
Ｘ２６は、Ｌ、Ａまたはそれらの保存されたアミノ酸置換であり、
Ｘ２７は、Ｌ、Ｋ、Ｒ、Ｖ、Ａ、Ｉもしくはそれらの保存されたアミノ酸置換であるか、または不在であり、
Ｘ２８は、Ａ、Ｎ、Ｄ、Ｋ、Ｒ、Ｅもしくはそれらの保存されたアミノ酸置換であるか、または不在であり
Ｘ２９は、Ｑ、Ｇもしくはそれらの保存されたアミノ酸置換であるかまたは不在であり、および
Ｘ３０は、Ｋ、Ｇ、Ｒ、Ｇ、Ｐ、Ｒもしくはそれらの保存されたアミノ酸置換であるかまたは不在である。

さらなる態様においてＸ２６〜Ｘ３０の任意の１、２、または３個が領域Ｃにおいて不在である。

さらに別の実施形態において新規ＧＩＰ類似体領域Ｃは、ＧＩＰの８〜２４個のＣ末端アミノ酸（ヒトＧＩＰ中の位置Ｘ１９位（Ｇｌｎ）に対応するＧＩＰ中の位置から始まる）、少なくとも最初のかかる８アミノ酸（例えば、Ｘ１９−２７、Ｘ１９−Ｘ２８、Ｘ１９−２９など、位置Ｘ１９〜Ｘ２６位を含んでなる）、少なくとも最初の１２個のかかるアミノ酸（例えば、Ｘ１９−Ｘ３１、Ｘ１９−Ｘ３２、Ｘ１９−Ｘ３３、Ｘ１９−Ｘ３４、Ｘ１９−Ｘ３５、Ｘ１９−Ｘ３６、Ｘ１９−Ｘ３７、Ｘ１９−Ｘ３８など、位置Ｘ１９〜Ｘ３０位を含んでなる）、少なくとも最初の２１個のかかるアミノ酸（例えば、Ｘ１９−Ｘ４０、Ｘ１９−Ｘ４１など、位置Ｘ１９〜Ｘ３９位を含んでなる）または少なくとも２４個のかかるアミノ酸を含んでなる。とりわけこれらの実施形態においてＸ２７〜Ｘ３０は独立して存在しても、または不在であってもよい。例えば、領域ＣはさらにＧＩＰまたは未変性ＧＩＰの残基３１〜３９を含んでなることができるとともに、Ｘ２７〜Ｘ３０は場合により不在であってもよい。

なおさらなる実施形態において新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッド領域Ｃは、未変性ＧＩＰの対応する領域、例えば未変性ＧＩＰのアミノ酸１９−３０、１９−２６、１９−２６または１９−４２に対し、各対応する配列の全長にわたり、少なくとも６０％、６５％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または１００％の配列同一性を呈してもよい。さらには、新規ＧＩＰ類似体の領域Ｃはまた、修飾または置換されたＧＩＰに対し、少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または１００％までもの配列同一性を呈してもよく、例えば国際公開第００／５８３６０号パンフレット、欧州特許第１１７１４６５号明細書または米国特許出願公開第２００３／０２３２７６１号明細書を参照されたい。未変性領域ＣのＧＩＰ配列としては、ヒト、マウス、ラット、ブタまたはウシＧＩＰ由来のものが挙げられる。未変性ＧＩＰ配列としては、ヒトＧＩＰ（１−４２）（ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱ）（配列番号２）、マウスＧＩＰ（１−４２）（ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＲＧＫＫＳＤＷＫＨＮＩＴＱ）（配列番号１０）、ラットＧＩＰ（１−４２）（ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＬＴＱ）（配列番号１１）、ブタＧＩＰ（１−４２）（ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＳＤＷＫＨＮＩＴＱ）（配列番号１２）、またはウシＧＩＰ（１−４２）（ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＳＤＷＩＨＮＩＴＱ）（配列番号１３）が挙げられる。さらに別の実施形態において領域Ｃは、ヒト、マウス、ラット、ブタまたはウシＧＩＰのアミノ酸１９〜３０、１９〜２６、１９〜２６または１９〜４２を含んでなり、例えば領域ＣはＧｌｎＧｌｎＡｓｐＰｈｅＶａｌＡｓｎＴｒｐＬｅｕＬｅｕＡｌａＧｌｎＬｙｓ（配列番号２３３）またはＧｌｎＧｌｎＡｓｐＰｈｅＶａｌＡｓｎＴｒｐＬｅｕＬｅｕＡｌａＧｌｎＡｒｇ（配列番号２３４）を含んでなる。なおさらなる実施形態において領域Ｃアミノ酸配列は修飾または置換されたアミノ酸をさらに含んでなる。

新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッドの一実施形態において領域Ｓは配列Ｘ３１−Ｘ３２−Ｘ３３−Ｘ３４−Ｘ３５−Ｘ３６−Ｘ３７−Ｘ３８−Ｘ３９（配列番号４６８）を含んでなり、各々は独立して選択され、配列中、
Ｘ３１は、Ｐｒｏ、ホモプロリン、３Ｈｙｐ、４Ｈｙｐ、チオプロリン、Ｎ−アルキルグリシン、Ｎ−アルキルペンチルグリシンまたはＮ−アルキルアラニン、Ｇ、Ｓであり；
Ｘ３２は、Ｓｅｒ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、ホモプロリン、３Ｈｙｐ、４Ｈｙｐ、チオプロリン、Ｎ−アルキルグリシン、Ｎ−アルキルペンチルグリシンまたはＮ−アルキルアラニンであり；
Ｘ３３は、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｌｙｓであり；
Ｘ３４は、Ｇｌｙ、Ｓｅｒであり；
Ｘ３５は、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙであり；
Ｘ３６は、Ｐｒｏ、ホモプロリン、３Ｈｙｐ、４Ｈｙｐ、チオプロリン、Ｎ−アルキルグリシン、Ｎ−アルキルペンチルグリシンまたはＮ−アルキルアラニン、Ａ、不在であり；
Ｘ３７は、Ｐｒｏ、ホモプロリン、３Ｈｙｐ、４Ｈｙｐ、チオプロリン、Ｎ−アルキルグリシン、Ｎ−アルキルペンチルグリシンまたはＮ−アルキルアラニン、Ａ、不在であり；
Ｘ３８は、Ｐｒｏ、ホモプロリン、３Ｈｙｐ、４Ｈｙｐ、チオプロリン、Ｎ−アルキルグリシン、Ｎ−アルキルペンチルグリシンまたはＮ−アルキルアラニン、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓであるか、または不在であり；および
Ｘ３９は、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｇｌｙ、または不在であり、
ここでアミノ酸が不在の場合、ひいては全ての後続位置は不在である。

さらなる実施形態においてＸ３１−Ｘ３９の少なくとも１個は、領域Ｓの実施形態について本明細書に列挙されるアミノ酸の保存された置換を含む。さらなる実施形態において領域ＳはＰｒｏＳｅｒＳｅｒＧｌｙＡｌａＰｒｏＰｒｏＰｒｏＳｅｒ（配列番号１）、ＰｒｏＳｅｒＳｅｒＧｌｙＡｌａＰｒｏＰｒｏＰｒｏ（配列番号２３５）、ＰｒｏＳｅｒＳｅｒＧｌｙＡｌａＰｒｏＰｒｏ（配列番号２３６）、ＰｒｏＳｅｒＳｅｒＧｌｙＡｌａＰｒｏ（配列番号２３７）、ＰｒｏＳｅｒＳｅｒＧｌｙＡｌａ（配列番号２３８）、ＰｒｏＳｅｒＳｅｒＧｌｙ（配列番号２３９）、またはＰｒｏＳｅｒＳｅｒを含んでなる。いまださらなる実施形態において領域ＳはＣ末端アミドを含んでなる。なおさらなる実施形態において領域Ｓは、Ｘ３７が、Ｐｒｏ、ホモプロリン、３Ｈｙｐ、４Ｈｙｐ、チオプロリン、Ｎ−アルキルグリシン、Ｎ−アルキルペンチルグリシンまたはＮ−アルキルアラニンである、Ｔｒｐケージを形成するべく領域Ｃ内のＴｒｐまたはＴｒｐ様残基との相互作用能を有する配列を含んでなる。なお別の実施形態において領域Ｓは、Ｘ３１が、Ｐｒｏ、ホモプロリン、３Ｈｙｐ、４Ｈｙｐ、チオプロリン、Ｎ−アルキルグリシン、Ｎ−アルキルペンチルグリシンまたはＮ−アルキルアラニンである、Ｔｒｐケージを形成するべく領域Ｃ内のＴｒｐまたはＴｒｐ様残基との相互作用能を有する配列を含んでなる。いまださらなる実施形態において領域ＳはＸ３１およびＸ３７が双方ともＰｒｏ、ホモプロリン、３Ｈｙｐ、４Ｈｙｐ、チオプロリン、Ｎ−アルキルグリシン、Ｎ−アルキルペンチルグリシンまたはＮ−アルキルアラニンであるとともにＴｒｐケージを形成するべく領域Ｃ内のＴｒｐまたはＴｒｐ様残基との相互作用能を有する配列を含んでなる。ある実施形態において領域Ｓは、領域Ｃを伴うＴｒｐケージの形成能を有する５〜１４アミノ酸、５〜１０アミノ酸、または６〜９アミノ酸の配列を含んでなる。

他の実施態様において、Ｓ領域はカエルＧＬＰ１テール領域を含むか、または代替的に含む。ＧＩＰ類似体０６０１ＧＩＰ４６７３は、かかる化合物の例であり、また、それは溶解性を増加させるために疎水性を低下させるＤＰＰＰ−ＩＶ耐性Ｎ末端および修飾を有する。結果的に、さらなる実施態様において、ＧＬＰ−１カエルテール含有ＧＩＰ化合物およびハイブリッドは、本明細書に言及および例示された親化合物の溶解度を増加させる少なくとも１、２または３個の修飾をさらに含む。特に注目されるのは、カエルＧＬＰ−１テールがＰＫＫＩＲＹＳ（配列番号４２１）またはその類似体もしくは誘導体である実施態様である。一実施態様において、ＧＩＰ類似体および誘導体、ならびにかかるＧＩＰ化合物を含むＧＩＰハイブリッドは、レビー（Ｌｅｖｙ）らのＰＣＴ／ＵＳ２００６／００５０２０に特に例示されたカエルＧＬＰ−１テールを含まないが、本明細書に開示された新規類似体および誘導体を含むであろう。本明細書に例示された各ＧＩＰ類似体および誘導体について、第２の化合物が、本明細書に開示された新規なカエルテール領域が置換されるか、または本明細書に教示されたＧＩＰ化合物のＣ末端領域に付加される場合を明らかに意図することを明らかに意図する。この態様により、０６０１ＧＩＰ４６４５のＣ末端ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ領域は、ＰＫＫＩＲＹＳ（配列番号４２１）またはその新規な類似体もしくは誘導体で置換され、単独またはＧＩＰハイブリッド成分のいずれかとして有用な新しいＧＩＰ化合物を生成するであろう。かかる特定の分子は、これにより明らかに意図され、各々が本明細書に個々にリストされるように記載される。

一実施態様において、テールにおけるいずれか１つの位置をアラニンで置換したＰＫＫＩＲＹＳテール（配列番号４２１）の類似体または誘導体、例えば、ＰＡＫＩＲＹＳ（配列番号４２２）を有するＧＩＰ化合物である。一実施態様において、ＰＫＫＩＲＹＳテール（配列番号４２１）類似体は、プロリンおよびリジン間に挿入されたセリン−プロリンジペプチドを有する。一実施態様において、ＧＩＰ化合物は、位置３、４および６のいずれか１、２または３個が、各々、セリン、アラニンおよびプロリンで置換されたＰＫＫＩＲＹＳテール（配列番号４２１）類似体を有する。一実施態様において、ＰＫＫＩＲＹＳテール（配列番号４２１）類似体は、各々、リジン、ロイシンおよびプロリンで置換された位置４、５および７のいずれか１、２または３個を有する。ＰＫＫＩＲＹＳテール（配列番号４２１）を有する一実施態様において、位置２および３の少なくとも１または２個がアルパラギン、グルタミンまたはその双方で置換され、それは２〜３個の結合にて蛋白質分解切断を有効に低下させるテール類似体である。ＰＫＫＩＲＹＳテール（配列番号４２１）を有する一実施態様において、位置２および３の少なくとも１または２個が置換または誘導体化されて、２〜３個の結合にて蛋白質分解切断を有効に低下させるテール類似体である。かかる置換または誘導体は、ＫＫ結合の切断を防止することが知られたものであり、本明細書に教示された容易に決定されるペプチド機能を維持するであろう。ＰＫＫＩＲＹＳテール（配列番号４２１）を有する一実施態様において、位置４および７の少なくとも１または２個がオクチルグリシンで置換され、それは２〜３個の結合にて蛋白質分解切断を有効に低下させるテール類似体である。さらに他の実施態様において、ＰＫＫＩＲＹＳ テール（配列番号４２１）またはその類似体もしくは誘導体を、ＧＩＰ類似体の親水性を増加させる修飾と組み合わせる。一実施態様において、位置Ｎ２４、Ｗ２５、Ｌ２６またはＬ２７の少なくとも１、２または３個は、より親水性のアミノ酸と置換される。一つのかかる実施態様において、より親水性のアミノ酸は、Ｅ、Ｐ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｋ、ＲまたはＱでから選択される。一つのかかる実施態様において、Ｎ２４は、Ｅ、ＰまたはＱで置換される。一つのかかる実施態様において、Ｗ２５は、Ｅ、Ｐ、ＮまたはＱと置換される。一つのかかる実施態様において、Ｌ２６またはＬ２７のいずれかまたは双方は、Ｅ、Ｐ、Ｑ、Ｎ、Ｓ、ＴまたはＫと置換される。一つのかかる実施態様において、Ｗ２５は、Ｅ、Ｐ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、ＫまたはＱと置換される。

一実施形態において新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッドは修飾される。新規ＧＩＰハイブリッドは少なくとも１個のリジン残基のεアミノ基での脂肪酸付加による修飾を含んでなることができる。

一実施形態において新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッドはＧＩＰ受容体アゴニストである。新規ＧＩＰハイブリッドはサイクリックＡＭＰ産生を増強できる。別の実施形態において新規ＧＩＰハイブリッドはＧＩＰ受容体アンタゴニストである。本明細書に開示されたＧＩＰ化合物およびハイブリッドはＧＩＰ受容体を結合し得るが、ＧＩＰ受容体をかなりには活性化しないかもしれないと出願人は理解する。かかるＧＩＰ受容体アンタゴニストは、例えば、慢性的な投与において、おそらくインスリン抵抗性の増加により肥満関連糖尿病を処置するのに有用である（ガウルト（Ｇａｕｌｔ）ら Ｄｉａｂｅｔｅｓ（２００５） ５４（８）：２４３６−３４４６ 参照）。

一実施形態において新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッドは式Ｄ−Ｌ−Ｃ−Ｓ（式中ＤはＸ２にＤ−アミノ酸アラニンを含んでなり、ならびに式中Ｄ、Ｌ、ＣおよびＳは本明細書に定義されるとおりであるとともに本明細書の任意の他の実施形態である）の配列を含んでなる。例えば、さらなるかかる実施形態において領域ＣはＧＩＰ、特にヒトＧＩＰのアミノ酸１９−３０を含んでなり、さらにより詳細には配列ＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ（配列番号１５）を含んでなる。さらなるかかる実施形態においてＬは、未変性ＧＩＰ、特にヒトＧＩＰ由来の自然発生的配列Ｘ１５−Ｘ１８である。さらに例示的な実施形態においてＳは、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１）、ＰＳＳＧＡＰＰＰ（配列番号２３５）、ＰＳＳＧＡＰＰ（配列番号２３６）、ＰＳＳＧＡＰ（配列番号２３７）、ＰＳＳＧＡ（配列番号２３８）、またはＰＳＳＧ（配列番号２３９）を含んでなる配列である。さらに別の実施形態において新規ＧＩＰハイブリッドは、配列：
Ｙ（Ｄ−Ａｌａ）ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号４６９）；
Ｙ（Ｄ−Ａｌａ）ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＲＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号４７０）；
Ｙ（Ｄ−Ａｌａ）ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号４７１）；
Ｙ（Ｄ−Ａｌａ）ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号４７２）；または
Ｙ（Ｄ−Ａｌａ）ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号４７３）を含んでなる。

さらなる例において、かかる新規Ｄ−Ａｌａ２含有ＧＩＰ類似体またはハイブリッドの実施形態は上記の類似体の１個に対し少なくとも５０％の配列同一性を呈するとともにＤ−Ａｌａを位置Ｘ２位に含んでなる。追加的な実施形態において、該実施形態はさらに配列ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１）またはＫＮＧＧＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２４０）を含んでなる。

新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッドの一実施形態において領域Ｄは式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４（配列番号４７４）（式中Ｘ１およびＸ２は不在である）を含んでなる。さらなる実施形態において領域Ｄは式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４（配列番号５７８）（式中Ｘ１およびＸ２は不在であるとともにＸ３、Ｘ４またはＸ５の少なくとも１個は、例えば修飾もしくは置換または本明細書に定義されるとおりの結合の低減を伴う、ＤＰＰ−ＩＶ耐性を提供するアミノ酸置換または修飾である。他のアミノ酸位置は本明細書に定義されるとおりである。新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッドの典型的なかかる実施形態はＧＩＰアンタゴニスト活性を有する。

一実施形態においてＤは不在である。別の実施形態においてＤが不在である時、新規ＧＩＰ類似体はＬ−Ｃ−ＳまたはＣ−Ｓ（配列中、領域ＬまたはＣは、プロテアーゼ耐性、特にＤＰＰ−ＩＶ耐性を提供するＮ末端修飾、置換または修飾を含んでなる）を含んでなることができる。いまださらなる実施形態としては、Ｘ１８−Ｘ１９−Ｃ−Ｓ（配列中、Ｘ１８およびＸ１９の一方または双方が不在であることで、Ｘ１８−Ｘ１９−Ｘ２０、Ｘ１９−Ｘ２０−Ｘ２１、およびＸ２０−Ｘ２１−Ｘ２２について、Ｘ１８、Ｘ１９、Ｘ２０、Ｘ２１またはＸ２２の少なくとも１個のアミノ酸置換もしくは修飾またはＮ末端修飾がＤＰＰ−ＩＶ耐性を提供する）がある。

追加的な実施形態としては、配列
Ｙ（ＤＡｌａ）ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１８６）、
Ｙ（ｐＳｅｒ）ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２４１）、
ＹＡ（Ｎ−ＭｅＧｌｕ）ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２４２）、
ＹＰＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２４３）、
ＹＶＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２４４）、
（Ｄ−Ｔｙｒ）ＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号４７５）、または
ＹＡＰＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２４５）を含んでなる化合物が挙げられる。

さらなる実施形態としては、配列
Ｙ（ＤＡｌａ）ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫｍＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１９３）、
Ｙ（ｐＳｅｒ）ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２４６）、
ＹＡ（Ｎ−ＭｅＧｌｕ）ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＴＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２４７）、
ＹＰＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＯＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２４８）、
ＹＶＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２４９）、
（Ｄ−Ｔｙｒ）ＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号４７６）、または
ＹＡＰＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＪＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２５０）を含んでなる化合物が挙げられる。

さらなる実施形態において任意のＧＩＰポリペプチドは、Ｎ末端Ｈｉｓ、Ｄ−ヒスチジン、脱アミノ−ヒスチジン、２−アミノ−ヒスチジン、β−ヒドロキシ−ヒスチジン、ホモヒスチジン、α−フルオロメチル−ヒスチジン、α−メチルヒスチジンを含んでなる。追加的な実施形態としては、配列ＨＧＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２５１）またはＨＧＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２５２）を含んでなる化合物が挙げられる。

新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッドの一実施形態において、領域Ｌおよび／またはＣは修飾または置換されたアミノ酸を含んでなる。特定の実施形態において新規ＧＩＰ類似体は、Ｃｙｓ、Ｄ−Ｃｙｓ、ホモＣｙｓまたはペニシラミンを含んでなる。さらなる実施形態においてリンカーＬおよび／または領域Ｃは、Ｃｙｓ、Ｄ−Ｃｙｓ、ホモＣｙｓまたはペニシラミンを含んでなる。これらのアミノ酸はｐｅｇ分子、脂質または他のペプチドもしくは反応分子などの他のＳＨ含有分子との連結を付加するための修飾用部位として挿入される。別の実施形態において少なくとも１個のＣｙｓ、Ｄ−Ｃｙｓ、ホモＣｙｓまたはペニシラミンは脂質またはｐｅｇ分子または反応基で修飾される。典型的には、０、１、２または３個のかかる残基が存在する。

１つのかかる実施形態において領域Ｌおよび／またはＣは少なくとも１個のＣｙｓ、Ｄ−Ｃｙｓ、ホモｃｙｓまたはペニシラミン残基を含んでなる。新規ＧＩＰ類似体の１つのかかる実施形態においてＸ１５〜Ｘ１８またはＸ３１〜Ｘ４０の少なくとも１個が、Ｃｙｓ、Ｄ−Ｃｙｓ、ホモｃｙｓまたはペニシラミンである。さらなるかかる実施形態において、Ｘ１５〜Ｘ１８またはＸ３１〜Ｘ４０の２個以下が、Ｃｙｓ、Ｄ−Ｃｙｓ、ホモｃｙｓまたはペニシラミンである。さらなる実施形態においてＸ１５〜Ｘ１８またはＸ３１〜Ｘ４０の１個以下が、Ｃｙｓ、Ｄ−Ｃｙｓ、ホモｃｙｓまたはペニシラミンである。さらなるかかる実施形態においてＸ１５〜Ｘ１８またはＸ３１〜Ｘ４０の少なくとも１個が、Ｃｙｓ、Ｄ−Ｃｙｓ、ホモＣｙｓまたはペニシラミンであるとともに前記残基の少なくとも１個が脂質により修飾される。

ある実施形態において新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッドはペグ化アミノ酸を含んでなる。少なくとも１個のＰＥＧ分子がポリペプチドに付着され得る。１つのかかる実施形態において各ｐｅｇ分子は化合物にＤ−Ｃｙｓ、ホモｃｙｓもしくはペニシラミンまたはＬｙｓアミノ酸において、またはカルボキシル末端アミノ酸に付着される。さらなるかかる実施形態において少なくとも１個のＰＥＧ分子は領域Ｌおよび／またはＣ内のアミノ酸に付着される。さらなる実施形態においてペグ化された新規ＧＩＰ類似体は少なくとも１時間の排出半減期を有する。さらなる新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッドは１、２、または３個のｐｅｇ分子を含んでなることができる。さらなる実施形態においてＸ１５〜Ｘ１８またはＸ３１〜Ｘ４０の少なくとも１個が、Ｃｙｓ、Ｄ−Ｃｙｓ、ホモｃｙｓまたはペニシラミンであるとともに前記残基の少なくとも１個がｐｅｇ分子に付着される。さらにはＸ１５〜Ｘ１８またはＸ３１〜Ｘ４０の少なくとも１、２または３個が、Ｃｙｓ、Ｄ−Ｃｙｓ、ホモｃｙｓまたはペニシラミンであるとともに前記残基の少なくとも１、２または３個がｐｅｇ分子に付着される。

本発明のＧＩＰ化合物は、反応基を付着または結合することにより修飾され得る。それによりＧＩＰ化合物は反応基を通じた血液成分への共有結合能を有する。反応基は典型的には、血液成分上のアミノ基、ヒドロキシル基、またはチオール基と共有結合し、それによりＧＩＰペプチドを血液成分に共有結合的に連結するであろう。一実施態様において、反応基は血液成分上のチオール基と反応するであろう。より好ましくは、反応基は血清アルブミン上のチオール基と反応するであろう。反応基は、共有結合の形成能を有する任意の数の化学反応体を含有してもよい。一実施態様において、反応基は血液成分上のチオール基との反応能を有しジスルフィド結合を形成するであろう。かかる反応基は、例えば、米国特許第６，５９３，２９５号明細書に見出される。特に注目される一実施態様において、ＧＩＰ化合物は、徐放性放出に適した組成物を形成するためにアルブミンのごとき長命な血液成分とエクス・ビボにて反応させる。血液の他の適当な長命な成分には、免疫グロブリン、ヒト血清アルブミン、赤血球および血小板が挙げられる。

チオール基を伴うジスルフィド結合の形成能を有する反応基としては、活性化ジスルフィド結合またはスルホン化Ｓを有するものが挙げられる。活性化ジスルフィド結合を有する反応基は、２，２’−ジチオジピリジン（ＤＴＤＰ）、２，２’−ジチオビス（５−ニトロピリジン）（ＮＰＹＳ）、５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）（エルマン試薬）、または６，６’−ジチオジニコチン酸などの活性化基を備えるＧＩＰペプチドシステイン（またはシステイン類似体）を共役することにより得ることができる。活性化ジスルフィド結合を含む反応基は本明細書中では活性化ジスルフィド結合基と称される。加えて、活性化ジスルフィド結合基はメルカプト活性化カルボン酸を備えるＧＩＰペプチドのリジン側鎖をアシル化することにより得ることができる。本発明の別の例示的実施形態は、血液成分上のチオール基との反応能を有しチオエーテル結合を形成する反応基を利用することである。一実施態様において、かかる反応基は、γ−マレイミド−ブチリルアミド（ＧＭＢＡ）、マレイミド−ベンゾイル−サクシニミド（ＭＢＳ）、γ−マレイミド−ブチリルオキシサクシニミドエステル（ＧＭＢＳ）、およびマレイミドプロピオン酸（ＭＰＡ）などの、マレイミド含有基由来の化学反応体を備えるＧＩＰペプチドを共役することにより得られるであろう。これらおよび他のマレイミド含有基は本明細書中でマレイミド基と称される。本発明の代替の実施形態において、ＧＩＰ化合物の反応基は血液成分上の一級アミンへの共有結合能を有し、アミド結合を形成するであろう。一実施態様において、かかる反応基は、ＮＨＳまたはスルホ−ＮＨＳエステルを形成するＮ−ヒドロキシサクシニミド（ＮＨＳ）またはＮ−ヒドロキシスルホサクシニミド（スルホ−ＮＨＳ）を備えるＧＩＰペプチドを共役することにより得られるであろう。これらのサクシニミジル基は潜在的に血液成分タンパク質のＮ末端上のα−アミン基と、かかるアミン基が反応基にとって到達または利用可能であるならば、反応し得る。一実施態様において、リジンのε−アミンはＮＨＳエステルと有意に反応する唯一のアミノ酸側鎖であることから、これらのサクシニミジル基は血液成分タンパク質中のリジンのε−アミンと反応するであろう。さらに別の実施形態において本発明のＧＩＰ化合物は血液成分上のチオール基と共有結合するよう設計される反応基を含む。チオール基は生体内でアミノ基より少量であるため、チオール基への結合は典型的にはアミノ基への結合を上回る。これにより、アミノ基への結合と比較してチオール基への結合を介して標的とされる血液成分はより少なく、結果としてより高い結合特異性をもたらす。従って、例示的ＧＩＰ化合物はマレイミド基または一実施態様において、スルホン化Ｓまたは活性化ジスルフィド結合基で修飾されるＧＩＰペプチドを含むであろう。本発明のＧＩＰ化合物は遊離チオール基を含む任意の数個の血液成分に結合してもよいが、ＧＩＰ化合物は好ましくは血清アルブミン上のチオール基と共有結合するであろう。血清アルブミンは最も豊富な血液タンパク質であるとともに、タンパク質中のアミノ酸残基３４（Ｃｙｓ３４）に位置する単一のチオール基を含有し、これは種間で高度に保存されている。ＧＩＰ化合物の血清アルブミンへの結合は結合の特異性を提供するだけでなく、ＧＩＰ化合物の血清アルブミンへの１：１結合を有する抱合体の再現可能な形成をも提供する。ＧＩＰ化合物および血清アルブミンの再現可能な抱合体はＧＩＰ化合物の投与に応じた結果であろうことから、この比１：１の再現性はＧＩＰ化合物の治療法としての使用に望ましい。さらには、ＧＩＰ化合物および血清アルブミンの１：１抱合体の再現性は治療用抱合体を形成する生体外または試験管内アプローチに望ましい。抱合体は本発明のＧＩＰ化合物を血液と組み合わせることにより生体外で形成され、抱合体の形成、およびひいては抱合体含有血液の宿主への投与を可能にし得る。あるいは、ＧＩＰ化合物−血清アルブミン抱合体は、ＧＩＰ化合物を組換え血清アルブミンと組み合わせて投与され得る抱合体を形成することにより、試験管内で形成され得る。ＧＩＰ化合物および血清アルブミンの１：１抱合体の再現性は、生体外投与または試験管内でのバッチごとの調製から再現可能な抱合体を提供する。

別の実施形態において提供されるのは、ポリエチレングリコール（ｐｅｇ）の１つまたは複数の分子、またはその誘導体に共有結合的に付着されるＧＩＰ化合物であって、ここで各ｐｅｇはＣｙｓまたはＬｙｓアミノ酸またはペプチドのカルボキシ末端で付着され、結果として少なくとも１時間、少なくとも４、６、１０、１５、２０または２４時間の半減期を備えるペグ化ＧＩＰ化合物がもたらされる。一実施形態においてペグ化ＧＩＰ化合物は、１、２または３残基で共有結合的に付着されるｐｅｇ分子を備える本明細書に教示される任意の新規ＧＩＰ化合物配列を含んでなる。

いまださらに企図される実施形態において上記または本明細書に提示される該実施形態は任意の整合的な組み合わせにおいて併用される。例えば領域Ｄについて記載する実施形態が領域Ｌについて記載する実施形態と併用され、領域Ｄおよび領域Ｌにおける併用された改変を有する新規ＧＩＰ類似体の実施形態を記載し得る。類似体はさらに第２のホルモンモジュールと併用され、ＧＩＰハイブリッドを形成し得る。

別の実施形態において、本発明の新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドは少なくとも２５アミノ酸長のアミノ酸である。他の実施形態において、ポリペプチドは少なくとも２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、および５４アミノ酸長までの各整数（例えばＧＩＰ（１−４２）＋長鎖エキセンディンテール（２７−３９））であってもよい。さらに、一実施形態において、本発明のポリペプチドは天然Ｌアミノ酸残基および／または修飾された天然Ｌアミノ酸残基のみを含む。あるいは、別の実施形態において、本発明のポリペプチドは非天然アミノ酸残基を含まない。

さらに別の実施形態において、新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッドは、未変性ＧＩＰ（１−４２）、ＧＩＰ（１−３０）、ＧＩＰ（１−２６）、ＧＩＰ（１−３９）、ＧＩＰ（１９−３０）、ＧＩＰ（１９−２６）、ＧＩＰ（１９−３９）、ＧＩＰ（１９−４２）、ＧＩＰ（１−１１）、またはＧＩＰ（１−１４）に対し、各対応する配列の全長にわたり、少なくとも６０％、６５％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％の配列同一性を呈してもよい。本発明のかかるポリペプチドはまた、修飾または置換されたＧＩＰに対し、少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％の配列同一性を呈してもよく、例えば国際公開第００／５８３６０号パンフレット、欧州特許第１１７１４６５号明細書または米国特許出願公開第２００３／０２３２７６１号明細書を参照されたい。さらに別の実施形態において新規ＧＩＰ類似体のＤ−Ｌ−Ｃ領域は、未変性ＧＩＰ（１−４２）、ＧＩＰ（１−３０）、ＧＩＰ（１−２６）、ＧＩＰ（１−３９）、ＧＩＰ（１９−３０）、ＧＩＰ（１９−２６）、ＧＩＰ（１９−３９）、ＧＩＰ（１９−４２）、ＧＩＰ（１−１１）、またはＧＩＰ（１−１４）に対し、各対応する配列の全長にわたり、少なくとも６０％、６５％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％の配列同一性を呈してもよい。未変性ＧＩＰ配列としては、ヒトＧＩＰ（１−４２）（ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱ；配列番号２）、ヒトＧＩＰ（１−２６）（ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬ；配列番号２５３）、
ヒトＧＩＰ（１−３０）（ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ；配列番号３）、
ヒトＧＩＰ（１−３９）（ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮ；配列番号２５４）、マウスＧＩＰ（１−４２）（ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＲＧＫＫＳＤＷＫＨＮＩＴＱ；配列番号１０）、マウスＧＩＰ（１−２６）（ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＪＲＱＱＤＦＶＮＷＬ；配列番号２５５）、
マウスＧＩＰ（１−３０）（ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫｍＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＲ；配列番号２５６）、
マウスＧＩＰ（１−３９）（ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＲＧＫＫＳＤＷＫＨＮ；配列番号２５７）、
ラットＧＩＰ（１−４２）ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＬＴＱ（配列番号１１）、
ラットＧＩＰ（１−２６）ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬ（配列番号２５８）、
ラットＧＩＰ（１−３０）ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ（配列番号２５９）、
ラットＧＩＰ（１−３９）ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮ（配列番号２６０）、
ブタＧＩＰ（１−４２）ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＳＤＷＫＨＮＩＴＱ（配列番号１２）、
ブタＧＩＰ（１−２６）ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬ（配列番号２６１）、
ブタＧＩＰ（１−３０）ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ（配列番号２６２）、
ブタＧＩＰ（１−３９）ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＪＶＩＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＳＤＷＫＨＮ（配列番号２６３）、
ウシＧＩＰ（１−４２）ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＳＤＷＩＨＮＩＴＱ（配列番号１３）、
ウシＧＩＰ（１−２６）ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬ（配列番号２６４）、
ウシＧＩＰ（１−３０）ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ（配列番号２６５）、または
ウシＧＩＰ（１−３９）ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＳＤＷＩＨＮ（配列番号２６６）に由来するものが挙げられる。

さらに別の実施形態において、本発明の新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッドのＳ領域は、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１）などの未変性Ｔｒｐケージ配列に対し、少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％の配列同一性を呈してもよい。

さらなる実施形態において本発明の新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドは、本明細書に開示される新規ＧＩＰ類似体配列に対し、少なくとも６０％、６５％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％の配列同一性を含んでなる配列を含んでなる。配列比較にも有用である、かかる新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッド配列としては、
ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＪＡＭＤＫＪＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱＰＰＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２６７）（ヒトＧＩＰ（１−４２）コア）、
ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１８６）（ヒトＧＩＰ（１−３０）コア）、
ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＲＧＫＫＳＤＷＫＨＮＩＴＱＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２６８）（マウスＧＩＰ（１−４２）コア）、
ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＲＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２６９）（マウスＧＩＰ（１−３０）コア）、
ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＬＴＱＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２７０）（ラットＧＩＰ（１−４２）コア）、
ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２７１）（ラットＧＩＰ（１−３０）コア）、
ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＳＤＷＫＨＮＩＴＱＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２７２）（ブタＧＩＰ（１−４２）コア）、
ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２７３）（ブタＧＩＰ（１−３０）コア）、
ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＳＤＷＩＨＮＩＴＱＰＰＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２７４）（ウシＧＩＰ（１−４２）コア）、またはＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＰＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２７５）（ウシＧＩＰ（１−３０）コア）が挙げられる。

上述される配列比較にも有用である、さらなる新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッド配列としては、
ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２７６）（ヒトＧＩＰ（１−２６）コア）、
ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（マウスＧＩＰ（配列番号２７７）（１−２６）コア）、
ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２７８）（ラットＧＩＰ（１−２６）コア）、
ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２７９）（ブタＧＩＰ（１−２６）コア）、またはＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＫＮＧＧＰＰＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２８０）（ウシＧＩＰ（１−２６）コア）が挙げられる。

上述される配列比較にも有用である、さらなる新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッド配列としては、
ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＰＰＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２８１）（ヒトＧＩＰ（１−３９）コア）、ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＲＧＫＫＳＤＷＫＨＮＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２８２）（マウスＧＩＰ（１−３９）コア）、ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２８３）（ラットＧＩＰ（１−３９）コア）、ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＳＤＷＫＨＮＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２８４）（ブタＧＩＰ（１−３９）コア）、またはＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＲＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＳＤＷＩＨＮＰＰＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２８５）（ウシＧＩＰ（１−３９）コア）が挙げられる。

さらに適用可能な考察および意図
本明細書に記載される組み合わせの各々の範囲内で、成分ペプチドホルモンまたはモジュールに対する参照は、類似体、誘導体、断片、ならびにそれらに関連するペプチドエンハンサーに対する参照を含むことが理解される。

記述されるとおり、新規ＧＩＰ類似体は好ましくはＣ末端でアミド化されるが、本発明の目的である必要はない。言い換えれば、これらのペプチドのＣ末端は、遊離ＯＨまたはＮＨ２基を有してもよい。これらのペプチドはまた、他の翻訳後修飾を有してもよい。当業者は、本発明の新規ＧＩＰ類似体ポリペプチドがまた、Ｎ末端メチオニン残基を伴い構築されてもよいことを理解するであろう。

さらに他の実施形態において想定されるのは配列の各々の変異体であり、ここでＧＩＰ部分は本明細書に記載されるとおりの１、２または３個の修飾により修飾される。例示的修飾は、未変性ＧＩＰのものより優れたＤＰＰ−ＩＶ耐性を供与するＧＩＰの第１（末端ＮＨ２を含む）、第２または第３のＮ末端アミノ酸におけるものである。特に興味深いのは、少なくともＤ−Ａｌａ置換を位置２位に有する本明細書に記載されるとおりのＧＩＰ化合物である。

より詳細には、一態様において、本発明は１つまたは複数のアミノ酸配列修飾を含む新規ＧＩＰ類似体ポリペプチドに関する。かかる修飾は、置換、挿入、および／または欠失を、単独または組み合わせで含む。一態様において、ＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドは、「非必須」アミノ酸残基の１つまたは複数の修飾を含む。本発明の文意において、「非必須」アミノ酸残基は、未変性ヒトアミノ酸配列内でＧＩＰ類似体またはハイブリッドのＧＩＰまたは成分ペプチドホルモン受容体アゴニスト活性を無効にする、または実質的に低減することなく改変され得る、すなわち、欠失または置換され得る残基である。

置換 一実施形態において、本発明のＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドは、ＧＩＰ、ＧＩＰ（１−３０）、ＧＩＰ（１−１４）、ＧＩＰ（１−２６）、ＧＩＰ（１−３９）、ＧＩＰ（１９−２６）、ＧＩＰ（１９−３０）、ＧＩＰ（１９−３９）またはＧＩＰ（１９−４２）のアミノ酸配列または領域Ｓ内に、単独または１つもしくは複数の挿入または欠失と組み合わせて、１つまたは複数の置換を有してもよい。一実施態様において、置換はＧＩＰ類似体ポリペプチドのＧＩＰアゴニスト活性を無効にせず、または実質的に低減しない。一態様において、本発明は、単一の置換、または未変性ヒトＧＩＰのアミノ酸配列内の２個以上のアミノ酸残基の連続的または非連続的置換を有するＧＩＰ類似体ポリペプチドに関する。一実施態様において、本発明のＧＩＰ類似体ポリペプチドは、１、２、または３個のアミノ酸置換を含む。一実施形態において未変性ＧＩＰはヒト、ラット、マウス、ブタまたはウシである。

特に有用な置換としては、保存されたアミノ酸置換が挙げられる。「保存されたアミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、同様の側鎖、または物理化学的性質（例えば、静電気的、水素結合、等比体積、疎水性の特徴）を有するアミノ酸残基と置き換えられるものである。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当該技術分野において周知である。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、無電荷極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、メチオニン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン）、β−分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を備えるアミノ酸を含む。さらに他の実施形態において例示的な保存された置換が、以下の表中の列「例示的置換」のもとに示される。なお他の実施形態において保存された置換は、表頭「好ましい置換」の列に列挙されるアミノ酸より選択される。

場合により、新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッドは、比較されている配列と比較したとき、１個以下の保存されたアミノ酸置換を、あるいは、比較されている配列と比較したとき、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個以下の保存されたアミノ酸置換を有するであろう。

別の実施形態において、本発明のＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドは１つまたは複数の非天然および／または非アミノ酸、例えば、アミノ酸模倣物の置換を、ＧＩＰの配列内に含んでもよい。例示的実施形態において、ＧＩＰの配列内に挿入される非アミノ酸は、−ＮＨ−Ｘ−ＣＯ−［式中Ｘ＝（ＣＨ_２）_ｎ（式中、ｎは２〜２０）または−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２（−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２−Ｏ−）_ｍ−ＣＨ_２−ＣＯ−（式中、ｍ＝１〜５）］などの、β反転模倣物またはリンカー分子であってもよい。例示的リンカー分子としては、アミノカプロイル（「Ａｃａ」）、β−アラニル、および８−アミノ−３，６−ジオキサオクタノイルが挙げられる。β反転模倣物は市販されている（バイオクアドラント社（ＢｉｏＱｕａｄｒａｎｔ Ｉｎｃ）、ケベック州、カナダ）とともに文献に記載されている（ヘインジアン（Ｈａｎｅｓｓｉａｎ）ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １２７８９−８５４頁（１９９７年）；グー（Ｇｕ）ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ ４４：５８６３−６頁（２００３年）；ブルゲット（Ｂｏｕｒｇｕｅｔ）ら、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ １３：１５６１−４頁（２００３年）；グリエコ（Ｇｒｉｅｃｏ）ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ ４３：６２９７−９頁（２００２年）；スール（Ｓｏｕｅｒｓ）ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ５７：７４３１−４８頁（２００１年）；ツァイ（Ｔｓａｉ）ら、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ７：２９−３８頁（１９９９年）；ヴィルジリオ（Ｖｉｒｇｉｌｉｏ）ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ５３：６６３５−４４頁（１９９７年））。例示的β反転模倣物としては、本明細書に示される模倣体Ａおよび模倣体Ｂが挙げられる。これらのＩＵＰＡＣ名は模倣体Ａ：Ｎ−（３Ｓ，６Ｓ，９Ｓ）−２−オキソ−３−アミノ−１−アザビシクロ［４．３．０］−ノナン−９−カルボン酸である。模倣体Ｂ：Ｎ−（３Ｓ，６Ｓ，９Ｒ）−２−オキソ−３−アミノ−７−ミア−１−アザビシクロ［４．３．０］−ノナン−９−カルボン酸である。

アミノ酸配列β反転模倣物置換を含んでなる例示的ＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドは未変性ヒトＧＩＰを含み、ここで位置ｘおよびｘ＋１位のアミノ酸が模倣体Ａおよび模倣体Ｂからなる群より選択されるβ反転模倣物と置換され、ここでｘは未変性ヒトＧＩＰのアミノ酸位置８〜１４位のアミノ酸より選択される。（模倣体ＡおよびＢに加え、Ａｌａ−ＡｉｂおよびＡｌａ−Ｐｒｏジペプチドが良好な反転インデューサである）。これらのリンカーは特に、本発明のＤ−Ｌ−Ｃ−Ｓ新規ＧＩＰ類似体の領域、領域「Ｌ」を含んでなるために有用である。

欠失および切断 別の実施形態において、本発明のＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドは未変性ＧＩＰのアミノ酸配列、または領域Ｓから欠失させた１つまたは複数のアミノ酸残基を、単独もしくは１つまたは複数の挿入または置換と組み合わせて、有してもよい。一態様において、本発明のＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドは未変性ＧＩＰのＮ末端またはＣ末端から欠失させた１つまたは複数のアミノ酸残基を有してもよい。別の実施形態において、本発明のＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドは、未変性ＧＩＰ、ＧＩＰ（１−１４）、ＧＩＰ（１−２６）、ＧＩＰ（１−３０）、ＧＩＰ（１−３９）、ＧＩＰ（１９−２６）、ＧＩＰ（１９−３０）、ＧＩＰ（１９−３９）またはＧＩＰ（１９−４２）のアミノ酸位置１〜４２または領域Ｓで欠失させた１つまたは複数のアミノ酸残基を有してもよい。かかる欠失は２個以上の連続的または非連続的欠失を含んでもよい。例示的実施形態において１個以下、２個以下、３個以下、４個以下、または５個以下のアミノ酸が未変性ＧＩＰから、ＧＩＰ（１−３０）、ＧＩＰ（１−１４）、ＧＩＰ（１−２６）、ＧＩＰ（１−３９）、ＧＩＰ（１９−３０）、ＧＩＰ（１９−２６）、ＧＩＰ（１９−３９）またはＧＩＰ（１９−４２）から、もしくは例えば領域がエキセンディン（３１−３９）またはエキセンディン（２７−３９）である時などの領域Ｓから、欠失される。一実施形態において未変性ＧＩＰはヒト、ラット、マウス、ブタまたはウシである。

一実施態様において、アゴニストとしての使用を意図する場合のＧＩＰ化合物、いずれの類似体、誘導体またはハイブリッドも、ＧＩＰのＣ末端配列の位置ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤ（配列番号４７７）に対応する位置１〜１５のいずれか一つでの欠失を含まない。換言すれば、ＧＩＰの対応する１〜１５位置の各々は、それらが置換または誘導体化し得るが、存在であろう。さらなる実施態様において、アゴニストＧＩＰは、ＧＩＰのＣ末端配列のＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤ（配列番号４７８）に対応する位置４〜１５のいずれか一つでの欠失を含まない。換言すれば、ＧＩＰの対応する４〜１５位置の各々は、それらが置換または誘導体化されるが、存在するであろう。結果的に、アゴニストＧＩＰ化合物の実施態様において、１〜１５または４〜１５の各々が存在し、天然に発生したＧＩＰ種のその位置に存在するアミノ酸あるいはその置換または誘導体により占有されるであろう。アゴニストＧＩＰ化合物のさらに別の実施態様において、本明細書に記載された種々の実施態様から排除されるのは、示された適当な受容体結合活性または受容体活性化活性を示さないＧＩＰ化合物である。

一実施態様において、アゴニストとしての使用を意図する場合のＧＩＰ化合物、いずれの類似体、誘導体またはハイブリッドも、ＧＩＰのＣ末端配列の位置ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤ（配列番号４７７）に対応する位置１〜１５のいずれか一つでの欠失を含まない。換言すれば、ＧＩＰの対応する１〜１５位置の各々は、それらが置換または誘導体化し得るが、存在であろう。さらなる実施態様において、アゴニストＧＩＰは、ＧＩＰのＣ末端配列のＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤ（配列番号４７８）に対応する位置４〜１５のいずれか一つでの欠失を含まない。換言すれば、ＧＩＰの対応する４〜１５位置の各々は、それらが置換または誘導体化されるが、存在するであろう。

挿入 別の実施形態において、本発明のＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドは、ＧＩＰ（１−３０）、ＧＩＰ（１−１４）、ＧＩＰ（１−２６）、ＧＩＰ（１−３９）、ＧＩＰ（１９−３０）、ＧＩＰ（１９−２６）、ＧＩＰ（１９−３９）もしくはＧＩＰ（１９−４２）由来の未変性ＧＩＰまたは領域Ｓのアミノ酸配列内に挿入される１つまたは複数のアミノ酸残基を、単独または１つまたは複数の欠失および／または置換と組み合わせて、有してもよい。一態様において、本発明は、単一の挿入、または２個以上のアミノ酸残基の、未変性ＧＩＰ、ＧＩＰ（１−３０）、ＧＩＰ（１−１４）、ＧＩＰ（１−２６）、ＧＩＰ（１−３９）、ＧＩＰ（１９−３０）、ＧＩＰ（１９−２６）、ＧＩＰ（１９−３９）もしくはＧＩＰ（１９−４２）、または領域Ｓ、例えばエキセンディン（２７−３９）およびエキセンディン（３１−３９）のアミノ酸配列への連続的または非連続的挿入を有するＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドに関する。一実施形態において未変性ＧＩＰはヒト、ラット、マウス、ブタまたはウシである。

別の実施形態において、本発明のＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドは、１つまたは複数の非天然アミノ酸および／または非アミノ酸の、ＧＩＰ、ＧＩＰ（１−３０）、ＧＩＰ（１−１４）、ＧＩＰ（１−２６）、ＧＩＰ（１−３９）、ＧＩＰ（１９−３０）、ＧＩＰ（１９−２６）、ＧＩＰ（１９−３９）もしくはＧＩＰ（１９−４２）、または領域Ｓ、例えばエキセンディン（２７−３９）およびエキセンディン（３１−３９）の配列への挿入を含んでもよい。例示的実施形態において、ＧＩＰ、ＧＩＰ（１−３０）、ＧＩＰ（１−１４）、ＧＩＰ（１−２６）、ＧＩＰ（１−３９）、ＧＩＰ（１９−３０）、ＧＩＰ（１９−２６）、ＧＩＰ（１９−３９）もしくはＧＩＰ（１９−４２）または領域Ｓ、例えばエキセンディン（２７−３９）およびエキセンディン（３１−３９）の配列内に挿入される非天然アミノ酸はβ反転模倣物またはリンカー分子であってもよい。さらなるかかる実施形態において未変性ＧＩＰはヒト、ラット、マウス、ブタまたはウシであり得る。ある実施形態において領域Ｓは、Ｔｒｐケージ形成を選好するＴｒｐ（またはＴｒｐ類似体）と相互作用するため、少なくともプロリン（またはプロリン類似体）をＸ３７に保持する。さらに例示的な実施形態においてＰｒｏは、同様にＴｒｐとＸ２５で相互作用するため、位置Ｘ３１位に保持される。Ｎ末端で切断されたエキセンディン−４類似体（Ｔｒｐケージ）の場合、ヘリックスはＴｒｐ２５／Ｐｒｏ３１疎水性ステープルまたはＴｒｐケージの完全形成のいずれかによりキャッピングされない限り、有意には装着されないことが確立されている。後者の、完全Ｔｒｐケージ形成は、非常に有効なヘリックスＣ−キャップとして働く。また、ＰｒｏがＸ３６、Ｘ３７、Ｘ３８ユニットで結合されていない、部分的に融解されたＴｒｐケージ種である、半ケージ構造の寄与についての証拠もある。

従って、化合物は任意選択の連結基とともに示されるが、本明細書の配列の一実施形態において、リンカーはＧｌｙリンカー、例えばＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、またはβＡｌａリンカー、例えばβＡｌａ−βＡｌａ（これらの全てが具体的に想定される）である。特定の目的のリンカー分子としては、アミノカプロイル（「Ａｃａ」）、β−アラニル、および８−アミノ−３，６−ジオキサオクタノイルが挙げられる。さらなる他の実施形態においてβ反転模倣物が使用され、これとしては、模倣体Ａ：Ｎ−（３Ｓ，６Ｓ，９Ｓ）−２−オキソ−３−アミノ−１−アザビシクロ［４．３．０］−ノナン−９−カルボン酸、模倣体Ｂ：Ｎ−（３Ｓ，６Ｓ，９Ｒ）−２−オキソ−３−アミノ−７−チア−１−アザビシクロ［４．３．０］−ノナン−９−カルボン酸、ならびにＡｌａ−ＡｉｂおよびＡｌａ−Ｐｒｏジペプチドも挙げられる。

別の実施形態において、本発明のＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドはポリアミノ酸配列（例えば、ポリ−ｈｉｓ、ポリ−ａｒｇ、ポリ−ｌｙｓ、ポリ−ａｌａ等）の挿入を、「伸長部」または「テール」として知られる、ポリペプチドの末端のいずれかに含んでもよい。

ある実施形態においてアミノ酸配列挿入を含んでなる新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドはアラニン置換を、未変性ＧＩＰ、ＧＩＰ（１−３０）、ＧＩＰ（１−１４）、ＧＩＰ（１−２６）、ＧＩＰ（１−３９）、ＧＩＰ（１９−３０）、ＧＩＰ（１９−２６）、ＧＩＰ（１９−３９）もしくはＧＩＰ（１９−４２）、または領域Ｓ、例えばエキセンディン（２７−３９）およびエキセンディン（３１−３９）の長さに沿った各アミノ酸位置で含む。

誘導体 本発明はまた、ＧＩＰ類似体およびハイブリッドポリペプチドの誘導体にも関する。かかる誘導体としては、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）または様々な長さの脂肪酸鎖（例えば、ステアリル、パルミトイル、オクタノイル等）などの１つまたは複数の水溶性ポリマー分子に抱合されるか、またはポリ−ｈｉｓ、ポリ−ａｒｇ、ポリ−ｌｙｓ、およびポリ−ａｌａなどのポリアミノ酸の付加による、ＧＩＰ類似体およびハイブリッドポリペプチドが挙げられる。ポリペプチドへの修飾としてはまた、短鎖アルキル基および制限付きのアルキル基（例えば、分枝、環状、融合、アダマンチル基）、および芳香族基などの小分子置換基が挙げられ得る。水溶性ポリマー分子は好ましくは約５００〜約２０，０００ダルトンの範囲をとる分子量を有するであろう。

かかるポリマー抱合および小分子置換基修飾は、ＮもしくはＣ末端において、またはＧＩＰ類似体およびハイブリッドポリペプチドの配列内のアミノ酸残基の側鎖において、単独で起こってもよい。あるいは、ＧＩＰ類似体およびハイブリッドポリペプチドに沿って誘導体化の複数の部位があってもよい。１つまたは複数のアミノ酸の、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、またはシステインとの置換が誘導体化のための追加的な部位を提供してもよい。例えば、米国特許第５，８２４，７８４号明細書および第５，８２４，７７８号明細書を参照されたい。一実施態様において、ＧＩＰ類似体およびハイブリッドポリペプチドは、１、２、または３個のポリマー分子に抱合されてもよい。

水溶性ポリマー分子は好ましくは、アミノ基、カルボキシ基、またはチオール基に連結されるとともに、ＮもしくはＣ末端により、またはリジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、またはシステインの側鎖で、連結されてもよい。あるいは、水溶性ポリマー分子はジアミン基およびジカルボキシル基と連結されてもよい。例示的実施形態において、本発明のＧＩＰ類似体およびハイブリッドポリペプチドは、リジンアミノ酸上のεアミノ基を介して１、２、または３個のＰＥＧ分子に抱合される。

本発明のＧＩＰ類似体およびハイブリッドポリペプチド誘導体はまた、１つまたは複数のアミノ酸残基に対し化学変換を伴うＧＩＰ類似体およびハイブリッドポリペプチドも含む。かかる化学変換としては、アミド化、グリコシル化、アシル化、硫酸化、リン酸化、アセチル化、および環化が挙げられる。化学変換は、ＮもしくはＣ末端またはＧＩＰ類似体およびハイブリッドポリペプチドの配列内のアミノ酸残基の側鎖において単独で起こってもよい。一実施形態において、これらのペプチドのＣ末端は遊離ＯＨまたはＮＨ２基を有してもよい。別の実施形態において、Ｎ末端側終端は、イソブチルオキシカルボニル基、イソプロピルオキシカルボニル基、Ｎ−ブチルオキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、イソカプロイル基（イソカプ）、オクタニル基、オクチルグリシン基（Ｇ（Ｏｃｔ））、または８−アミノオクタン酸基またはＦｍｏｃ基でキャッピングされてもよい。例示的実施形態において、環化はジスルフィド架橋の形成を介し得る。あるいは、ＧＩＰ類似体およびハイブリッドポリペプチドに沿った化学変換の複数の部位があってもよい。

多くの擬ペプチド結合は一般にペプチド構造および生物学的活性に影響を及ぼさないことが記載されている。このアプローチの一例はレトロインバーソ擬ペプチド結合を置換することである（「Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ ａｃｔｉｖｅ ｒｅｔｒｏｉｎｖｅｒｓｏ ａｎａｌｏｇｕｅｓ ｏｆ ｔｈｙｍｏｐｅｎｔｉｎ」、シスト・Ａ（Ｓｉｓｔｏ Ａ．）ら、Ｒｉｖｉｅｒ，Ｊ．Ｅ．およびマーシャル，Ｇ．Ｒ．（Ｍａｒｓｈａｌｌ，Ｇ．Ｒ．）編 「Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｅｓｃｏｍ、ライデン（１９９０年）、７２２−７７３頁）およびダルポッゾ（Ｄａｌｐｏｚｚｏ）ら（１９９３年）、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ．、４１：５６１−５６６頁、参照により本明細書に援用される）。この修飾に従えば、ペプチドのアミノ酸配列は、ペプチド結合の１つまたは複数がレトロインバーソ擬ペプチド結合により置き換えられることを除き、本明細書に記載されるＧＩＰの配列と同一であってもよい。かかる置換はＮ末端に作用するエキソペプチダーゼによりタンパク質分解に対する耐性を供するであろうことから、好ましくはほとんどのＮ末端ペプチド結合が置換される。さらなる修飾もまた、同様の構造の他の化学基を備えるアミノ酸の化学基を置き換えることによりなされ得る。別の好適な擬ペプチド結合は、生物学的活性の消失を全くまたはほとんど伴わない酵素的切断に対する安定性を亢進することで知られ、低減したアイソスター擬ペプチド結合である（クデール（Ｃｏｕｄｅｒ）ら（１９９３年）、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ．、４１：１８１−１８４頁、全体として参照により本明細書に援用される）。

このように、これらのペプチドのアミノ酸配列は、ペプチド結合の１つまたは複数がアイソスター擬ペプチド結合により置き換えられることを除き、新規ＧＩＰ類似体およびハイブリッドペプチドの配列と同一であってもよい。かかる置換はＮ末端に作用するエキソペプチダーゼによりタンパク質分解に対する耐性を供するであろうことから、好ましくはほとんどのＮ末端ペプチド結合が置換される。１つまたは複数の低減されたアイソスター擬ペプチド結合を伴うペプチドの合成は当該技術分野において周知である（クデール（Ｃｏｕｄｅｒ）ら（１９９３年）、前掲）。他の例としては、ペプチド結合に置き換わるケトメチレンまたは硫化メチル結合の導入が挙げられる。

別の実施形態においてＤＰＰ−ＩＶによる切断の標的である第２および第３の残基間の結合が、本明細書に記載されるペプチダーゼ耐性結合に置き換えられる。

ＧＩＰ類似体およびハイブリッドペプチドのペプチド誘導体はペプチド模倣物の別のクラスを代表し、生物学的活性の重要な構造決定要因を保持するが、ペプチド結合を排除し、それによりタンパク質分解に対する耐性を供する（シモン（Ｓｉｍｏｎ）ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：９３６７−９３７１頁（１９９２年）、全体として参照により本明細書に援用される）。ペプチドはＮ置換グリシンのオリゴマーである。多くのＮ−アルキル基が記載されており、各々が天然アミノ酸の側鎖に対応する（シモン（Ｓｉｍｏｎ）ら（１９９２年）、前掲）。ＧＩＰペプチドのアミノ酸の一部または全てが、置換されたアミノ酸に対応するＮ置換グリシンに置き換えられてもよい。

一実施形態において新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドは、上述された修飾、すなわち、欠失、挿入、および置換の組み合わせを含む。

同様に本発明の範囲内に含まれるのは、式中で示されるアミノ酸残基が化学修飾または誘導体化（例えば、脂肪酸誘導体化、ペグ化、アミド化、グリコール化等を介した）される式のＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドである。例示的実施形態としては、リジン残基、特に位置１６または３０位の誘導体化が挙げられる。同様に本発明の範囲内で企図されるのは、示されるアミノ酸のＤ−アミノ酸残基である。別の実施形態において、例示的ＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドとしては、特に本明細書に記載されるとおりの活性部位に対応しない領域内に、内部欠失を備える式のポリペプチドが挙げられる。

非天然アミノ酸の置換を含んでなる例示的ＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチド。本発明のＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドの例示的誘導体としては、ポリマー抱合ＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドが挙げられ、ここでＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドは任意の上述の挿入、欠失、置換、またはそれらの組み合わせを含むとともに、ポリマー分子はリジン残基で抱合される。かくして、一実施態様において、ＧＩＰ類似体またはＧＩＰ含有ハイブリッドは、位置１４でのメチオニンの誘導体または置換であり、ヒトＧＩＰまたは親類似体に比較してより長い作用期間を有する。例えば、０６０１ＧＩＰ４７５５におけるごとくメチオニン位置１４でのオクチル−グリシンは、生体内での化合物の作用期間を増加させる。作用期間は、この修飾により少なくとも４時間まで増加した。結果的に、一実施態様において、種々の長さのポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）または脂肪酸鎖（例えば、ステアリル、パルミトイル、オクタノイル等）のごとき、１またはそれを超える水可溶ポリマー分子に対するこの位置での、あるいはポリ−ｈｉｓ、ポリ−ａｒｇ、ポリ−ｌｙｓ、ポリ−ｇｌｕおよびポリ−ａｌａのごときポリアミノ酸の付加によりコンジュゲートしたＧＩＰ類似体およびハイブリッドポリペプチドである。また、ポリペプチドに対する修飾は、短いアルキルおよび拘束アルキル（例えば、分岐、環状、縮合、アダマンチル）のごとき小分子置換、および芳香族基を含むことができる。

さらに具体的に想定されるのは、本明細書の各ＧＩＰ配列のＤ−Ａｌａ２変異体である（例えば、表を参照）。さらに他の実施形態において想定されるのは、ＧＩＰ部分が本明細書に記載されるとおりの１、２または３個の修飾により修飾される上記の配列の各々の変異体である。例示的修飾は、未変性ＧＩＰより優れたＤＰＰ−ＩＶ耐性を供与するＧＩＰの第１、第２または第３のＮ末端アミノ酸におけるものである。いまださらなる実施形態において新規ＧＩＰ化合物はＣ末端アミドを含んでなる。

さらなる実施形態において新規ＧＩＰ類似体またはＧＩＰハイブリッドはヒトＧＩＰ（１−３０）アミドの少なくとも２倍の半減期を含んでなる。さらなる半減期は少なくとも６時間であり得る。

別の実施形態としては、薬学的に許容される新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッドの塩がある。新規ＧＩＰ類似体およびハイブリッドは、薬学的に許容される担体を含んでなる組成物中に調合され得る。

一実施形態において位置１４位でＭｅｔに置換されるロイシンを備えるエクセナチドの類似体が、ハイブリッド成分として、またはＧＩＰハイブリッドのＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号２８６）を伴う補助治療においてのいずれかで使用される。

一実施形態において、本発明のＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドは、グルコース降下に関して未変性ヒトＧＩＰの生物学的活性の、少なくとも約２５％、好ましくは約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または９９％の割合を保持する。別の実施形態において、本発明のＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドは改善されたＧＩＰアゴニスト活性を呈する。一実施形態において、本発明のＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドは、未変性ヒトＧＩＰの、少なくとも約１１０％、１２５％、１３０％、１４０％、１５０％、２００％、またはそれ以上の生物学的活性を呈する。逆に、新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッドはアンタゴニストであり得る。

例示的ＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドは、同一のアッセイ中でＧＩＰ（１−４２）またはＧＩＰ（１−３０）の効力と同等またはそれより高い効力を有するものである。あるいは、本発明の例示的ＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドは、ＧＩＰ（１−４２）またはＧＩＰ（１−３０）と比較して、改善された製造の容易さ、安定性、および／または製剤の容易さを呈してもよい。

本発明の新規ＧＩＰ類似体、ならびにＧＩＰ類似体が、場合に応じて、本明細書に記述されるペプチドホルモンおよび成長因子用のアゴニストまたはアンタゴニストである小分子または抗体などの薬剤を伴い投与され得ることも企図される。

エキセンディン−４の自然発生的Ｃ末端アミノ酸配列、特に本明細書に記載されるＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１）配列を有するＧＩＰハイブリッドのさらなる実施形態および使用において、具体的に除外されるのは、国際公開第２００４／１０３３９０号パンフレットに記載されるとおりの「Ｐ’１」位置に修飾を有するものである。

本発明の類似体およびハイブリッドポリペプチドのさらなる例が、配列表、表および実施例の欄に提供される。

疾患病態または障害の処置または予防におけるハイブリッドポリペプチドのさらなる使用
代謝性疾患および障害は、肥満、糖尿病、異常脂質血症、インスリン抵抗性、細胞アポトーシス等を含め、多くの形態をとる。肥満およびその関連障害は、米国内および世界中で一般的であるとともに非常に深刻な公衆の健康問題である。上半身肥満は２型真性糖尿病として知られる最も強力な危険因子であるとともに、心血管疾患の強力な危険因子である。肥満は、高血圧症、アテローム性動脈硬化症、うっ血性心不全、脳卒中、胆嚢疾患、変形性関節症、睡眠時無呼吸、多嚢胞性卵巣症候群などの生殖障害、乳癌、前立腺癌、および結腸癌といった癌、および全身麻酔の合併症の発症率増加について認知されている危険因子である（例えば、コペルマン（Ｋｏｐｅｌｍａｎ）、Ｎａｔｕｒｅ ４０４：６３５−４３頁（２０００年）を参照）。これは寿命を短くするとともに上記の併存症に加え、感染、静脈瘤、黒色表皮腫、湿疹、運動不耐性、インスリン抵抗性、高血圧症高コレステロール血症、胆石症、整形外科的傷害、および血栓塞栓性疾患などの障害の深刻なリスクを保有する（リッサネン（Ｒｉｓｓａｎｅｎ）ら、Ｂｒ．Ｍｅｄ．Ｊ．３０１：８３５−７頁（１９９０年））。肥満はまた、インスリン抵抗性症候群、または「症候群Ｘ」と呼ばれる病態群についての危険因子でもある。肥満および関連障害の医療費についての最近の推定は、世界で１５００億ドルである。肥満の病因は多因子であると考えられるが基本的な問題は肥満対象においては栄養利用性およびエネルギー消費が、脂肪組織が過剰になるまで均衡にならないことである。肥満は現在、不十分にしか処置可能でない、慢性的な、本質的に難治性の代謝性疾患である。肥満者の体重減少に有用な治療薬は彼らの健康に対し重大で有益な効果を有し得るであろう。

糖尿病は、不十分なインスリンの産生または利用の結果生じる高血糖および糖尿により特徴づけられる炭水化物代謝の障害である。糖尿病は先進諸国の大部分の人々の生活の質に重大な影響を及ぼす。不十分なインスリンの産生は１型糖尿病として特徴づけられるとともに不十分なインスリンの利用は２型糖尿病である。しかしながら、患者が顕性糖尿病を有すると診断されるよりはるか以前の発病を有する多くの異なる糖尿病関連疾患があることが今日広く認知されている。また、糖尿病におけるグルコース代謝の準最適なコントロールによる影響は、広域型の関連脂質および心血管障害も生じさせる。

異常脂質血症、または血漿中のリポタンパク質の異常レベルは、糖尿病者間で頻繁に起こる。異常脂質血症は典型的には、血漿トリグリセリド上昇、低ＨＤＬ（高密度リポタンパク質）コレステロール、正常〜上昇レベルのＬＤＬ（低密度リポタンパク質）コレステロールおよび低密度の血中ＬＤＬ（低密度リポタンパク質）粒子のレベル上昇により特徴づけられる。異常脂質血症は、糖尿病対象間の冠動脈イベントおよび死亡の発生率上昇の主要な要因の１つである。疫学的試験は、糖尿病対象間の冠動脈血栓による死亡について非糖尿病対象と比較した時数倍の増加を示すことにより、これを確認している。糖尿病対象間の数個のリポタンパク質異常が記載されている。

インスリン抵抗性は広範囲の濃度にわたりその生物学的作用を発揮するインスリンの能力の低下である。インスリン抵抗性において、体は異常に多量のインスリンを分泌してこの欠陥およびグルコース耐性発生障害の状態を補正する。欠陥インスリン作用の補正に失敗すると、血漿グルコース濃度は不可避的に上昇し、結果として糖尿病の臨床状態をもたらす。インスリン抵抗性および関連高インスリン血症は、肥満、高血圧症、アテローム性動脈硬化症および２型糖尿病の一因となる役割を有することが認知されている。インスリン抵抗性の肥満、高血圧症および狭心症との関連は、共通の病因関連性としてインスリン抵抗性を有する症候群の症候群Ｘとして記載されている。

アポトーシスは、正常な発達において生じる外因性および内因性シグナルにより調節される細胞自己破壊の活性プロセスである。アポトーシスが膵内分泌β細胞の調節において中心的な役割を果たすことは十分に考証されている。成体哺乳動物においてβ細胞量は動的変化に供されることでインスリン産生を適応させて妊娠および肥満などの特別な病態において正常血糖を維持するという証拠は増加している。β細胞量のコントロールは細胞増殖、成長およびプログラム細胞死（アポトーシス）の間の微妙な均衡に依存する。この均衡の妨害は、グルコース恒常性の障害を導き得る。例えば、グルコース不耐性は加齢に伴いβ細胞複製率が低減されると発症することは注目に値するとともに、ヒト剖検は非糖尿病対象と比較して非インスリン依存性真性糖尿病患者におけるβ細胞量の４０−６０％の低下を繰り返し示した。インスリン抵抗性は肥満の不変の付随物であるが、正常血糖は、その時点で２型糖尿病が始まる、β細胞がインスリンの需要増加に合致できなくなるまで、代償性高インスリン血症により維持されることが、一般的に合意されている。

糖尿病に付随する複数の異常を処置する試みでは、異なる患者におけるこれらの異常性に対処するため、数種の抗糖尿病薬物の投与が促進されてきた。しかしながら、本明細書中で考察されるとおりのＧＩＰ類似体、ＧＩＰハイブリッドおよびＧＩＰＲアゴニストは、治療的に有効量で投与される時、単剤治療または補助治療のいずれかで、全体を通じて考察されるこれらおよび他の疾患および病態の処置または予防において、使用を見出す。

胃抑制ポリペプチド（ＧＩＰ）およびグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−Ｉ）は、強力な糖調節作用をそのインスリン分泌のグルコース依存性刺激を通じ発揮する消化管ペプチドホルモンである。試験は、ＧＩＰおよびＧＬＰ−Ｉが伴って作用し、それらのインクレチン効果を発揮することを示している［１〜３］。結果的に、これらのインクレチンホルモンは、低血糖症のリスクを低減する有望な抗糖尿病薬として魅力的なかなりの利益を有する。ＧＬＰ−Ｉ、ＧＬＰ−Ｉ類似体およびエクセナチドなどの模倣物が、２型糖尿病患者においてグルコースレベルを調節するのに効果的であることが示されている一方、ＧＩＰのインスリン分泌効果は、正常人と比較して、糖尿病対象において有意に低減される［４〜６］。同一の糖尿病対象におけるＧＩＰではなくＧＬＰ−Ｉのインスリン分泌作用の保持は、ＧＩＰシグナル伝達が２型糖尿病において障害されることを示唆する。膵β細胞中のＧＩＰ受容体発現の低減は、糖尿病対象においてインクレチン効果の全体的な低減に寄与することが提言されている［７］。この仮説は、ズッカー糖尿病肥満ラットにおいてβ細胞上のＧＩＰ受容体発現の減少および２型糖尿病患者の第一度近親者に見られるＧＩＰインクレチン効果の低減を示す齧歯類試験により支持される［８−９］。しかしながら、最近の試験は、ＧＩＰのボーラス静脈内投与に対する２型糖尿病者における血漿インスリンレベルの有意な上昇を示しており、これは持続ＧＩＰ注入に伴うインスリン分泌の弱い上昇と顕著な対照をなす［１０］。２型糖尿病患者および健常対照対象におけるＧＩＰボーラスに対する同様の相対的β細胞感受性は、特異的ＧＩＰ受容体欠陥が起こりそうにないと見られることを示唆する［１０］。それどころか、急性投与後および持続ＧＩＰ投与中のインスリン分泌における差異は２型糖尿病患者におけるＧＩＰによるグルコースに対する後期インスリン反応の増幅障害を示すが、一方初期の反応はほぼ保持されている［１１−１２］。理論によって制約されないながら、ＧＩＰのインクレチン効果が持続性高血糖の間に弱まる一方、ＧＩＰまたはその類似体には、グルコースコントロールが糖尿病患者において改善されると、それらの個体中で健常対象におけるそれらの作用と同様の効力で作用する潜在能力があると考えられる。

アミリン・ファーマシューティカルズ社（アミリン Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）は、単独のメトホルミン、単独のスルホニル尿素を使用して、またはメトホルミンとスルホニル尿素との組み合わせを使用して、標的血糖濃度を達成しない２型糖尿病患者におけるエクセナチドの効果を評価する３件の極めて重要な臨床試験を実施している。３件全ての試験が、ＨｂＡ１ｃにより測定されるとき主要なグルコースコントロールのエンドポイントに達した。最高用量のエクセナチド（１０μｇを１日２回）に関する試験を完了する患者における第３相プログラムにわたるＨｂＡ１ｃの平均減少はおよそ１パーセントであった。加えて、これらの患者のおよそ４０パーセントが７パーセント以下のＨｂＡ１ｃ測定値を達成した。臨床データは、エクセナチドの有効性にもかかわらず、一部の糖尿病個体は正常グルコース濃度に到達できないことを示す。

本発明の実施形態において、処置糖尿病患者における高血糖の低下（例えば、エクセナチドによるなど）はＧＩＰ介入の発端となる。２型糖尿病患者における慢性高血糖病態がＧＩＰのインスリン分泌反応を弱める一方、エクセナチド処置の結果生じる改善された血糖コントロールが膵β細胞のＧＩＰ刺激に対する応答性を回復するであろう。それゆえ補助治療、例えば、ＧＩＰまたは新規ＧＩＰ類似体もしくはハイブリッドの薬理学的用量のＧＩＰハイブリッドの、エクセナチド（または他のグルコース降下薬もしくは薬剤または胃排出を低減もしくは阻害する方法）との同時投与により、糖尿病患者またはグルコース上昇に付随する病態を患う患者において所望の正常血糖を導くであろう。注目すべきは、ＧＩＰにはＧＬＰ−ＩのＧＬＰ−Ｉ処置中の悪心の発症に対し可能性のある寄与因子である胃排出効果が欠如している［１３〜１４］とともに、これはペプチドの治療ウィンドウを制限する［１５］。従って、より高用量のＧＩＰ投薬レジメンの使用が認められるべきである。

現在、様々な程度の血糖コントロールを処方抗糖尿病薬（メトホルミン、スルホニル尿素、ＴＺＤ等）が達成することができることから、ＧＩＰもしくは新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッドの、任意のこれらの治療との組み合わせもまたグルコースレベルの正常化を導く改善された反応を誘発するはずである。

従って、一実施形態において本発明の方法は、患者が、ＧＬＰ−Ｉ、ＧＬＰ−Ｉ類似体またはエキセンディン−４もしくは他の薬剤、例えばメトホルミン、スルホニル尿素、チアゾリジンジオン（ＴＺＤ）、プラムリンチド、インスリン、アカルボース、ジペプチジルペプチダーゼ（ＤＰＰ−ＩＶ）インヒビターなどの他の抗糖尿病薬による事前のグルコース降下を通じてＧＩＰ治療で準備刺激され得るという概念に基づく。ＤＰＰ−ＩＶインヒビターは周知であるとともに、例えば、それらの化合物について参照により本明細書に援用される、米国特許出願公開第２００５０００４１１７号明細書、米国特許第６７１００４０号明細書、および米国特許第６６４５９９５号明細書に記載される。膵組織上で作用してインスリンを産生するスルホニル尿素（ＳＦＵ）の例としては、グリメピリドである。

代謝的に安定なＧＩＰ類似体もしくはハイブリッドまたは新規ＧＩＰ類似体もしくはハイブリッドのエクセナチド（または他の抗糖尿病薬）との補助治療は、いずれかの単独よりも増加したインスリン分泌反応を、２型糖尿病患者などの、グルコース上昇に付随する病態を伴う患者に提供するであろう。かかる処置レジメンはグルコース濃度の正常化、β細胞機能の改善を導くとともに、β細胞上のその栄養活性を通じ疾患の進行を緩徐してインスリン治療の必要性を除去または低減するであろう。

本発明のＧＩＰハイブリッドは、食物摂取量を低減する、食欲を低減する、カロリー摂取量を低減する、満腹感を誘発する、栄養利用性を低減する、体重減少を引き起こす、体組成に影響を及ぼす、体エネルギー含量またはエネルギー消費を変える、脂質プロファイルを改善する（ＬＤＬコレステロールおよびトリグリセリドレベルを低減すること、および／またはＨＤＬコレステロールレベルを変化させることを含む）、胃腸管運動を緩徐化する、胃排出を遅延させる、食後血糖移動範囲を加減する、グルカゴン分泌を予防または阻害する、および血圧を低下させるために有用であり得る。一実施形態においてかかるＧＩＰハイブリッドは、エキセンディン、ＧＬＰ１、アミリンおよび／またはｓＣＴ部分を含む。

抗肥満、体重低下、食物低下、代謝速度増加および体脂肪低下および／または脂肪再分布ハイブリッドとして特に注目されるのは、有効に食物摂取を低下できる、体組成を変更できる、脂肪を再分布できるおよび／または体重を低下できるエキセンディン、アミリン（例えば、アミリン−ｓＣＴ−アミリンキメラ）、レプチンまたはＰＹＹ（例えば、ＰＹＹ−ＮＰＹキメラ）ファミリーモジュールを含むそれらのＧＩＰ含有ハイブリッドである。本明細書に言及された肥満および関連した病気および疾患を処置するために特に注目される実施態様において、例えば、エキセンディン−４またはその類似体もしくは誘導体、プラムリンチドのごときアミリン成分またはアミリン−ｓＣＴ−アミリンキメラ、ＦＮ３８のごときＦＮ３８ファミリーメンバーまたはその類似体または誘導体、US 2006/013547A1の配列番号２６６、４３７、４３８、４３９、４４２、４６２、４６９、４７０、４７１および４７２のごときＰＹＹ-ＮＰＹキメラまたはアミノ酸配列Ile, Lys, Pro, Glu, His, Pro, Gly, Glu, Asp, Ala, Ser, Pro, Glu, Glu, Leu, Ala, Arg, Tyr, Tyr, Ala, Ser, Leu, Arg, Ala, Tyr, Ile, Asn, Leu, Ile, Thr, Arg, Gln, Arg, Tyr (配列番号456)とのＰＹＹ-ＮＰＹキメラ化合物を含むＧＩＰハイブリッドである。別の実施態様において、ＧＩＰハイブリッドは、少なくとも１つ、好ましくは２つの成分を有することができ、それはＣＮＳに作用する。前脳（脳の終脳および間脳由来構成物）および後脳または脳幹（中脳、脳橋および髄質を含む）の特定の領域は、エネルギーバランスの制御に関与すると同定された。食物摂取および／または体重調節に関与する視床下部にある前脳構造または核は、例えば、弓状核（ＡＲＣ）、室傍核（ＰＶＮ）、視床下部背内側（ＤＭＨ）、腹内側核（ＶＭＨ）および視床下部外側野核（ＬＨＡ）を含む。食物摂取および／または体重調節に関与する脳幹にある後脳構造または核は、例えば、孤束核（ＮＳＴ）、最後野（ＡＰ）および外側傍小脳脚核(ｌＰＢＮ)を含む。完了運動制御系の要素を制御する脳幹核は、ＮＳＴ、ＡＰおよびｌＰＢＮのような後脳領域からの一次または二次投射により制御されるようである。ＮＳＴ、ＡＰおよびｌＰＢＮのすべては、それら自身の統合能力を（集合的および独立して）所有することが示されたことは注目されるべきである。ＣＮＳ指令抗肥満剤は、食物摂取および／または体重調節に関与する脳幹にある後脳構造に作用する。かかる抗肥満剤の例は本明細書に記載されている。ＧＩＰ化合物と組み合わせて抗肥満剤ハイブリッドを形成でき、ＧＩＰ化合物と組み合わせて前脳および後脳の双方に対して活性を持つ抗肥満ハイブリッドを形成できるペプチドファミリーモジュールのさらなる例につき以下の表を参照されたし。かかる成分は、例えば、本明細書に記載されたものを含めた、神経ペプチド（ＮＰＹ１）受容体アンタゴニスト、ＮＰＹ５受容体アンタゴニスト、レプチンおよびレプチンアゴニスト、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）およびＣＮＴＦアゴニスト、ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）およびＰＹＹアゴニスト、エキセンディンおよびエキセンディンアゴニスト、ＧＬＰ−１およびＧＬＰ−１アゴニスト、グレリンおよびグレリンアンタゴニスト、コレシストキニン（ＣＣＫ）およびＣＣＫアゴニスト、ならびにアミリンおよびアミリンアゴニストを含む。さらなるペプチドファミリー成分および臨床ガイダンスは、ここに出典明示して本明細書の一部とみなす出願人らの同時係属特許出願PCT/US06/17529に見出すことができる。

ある実施態様において、ＧＩＰハイブリッドは、ＧＩＰ化合物に加えて１またはそれを超える主に前脳に作用するペプチドファミリー成分を含むことができる抗肥満剤である。他の実施態様において、ハイブリッドは、１またはそれを超える主に後脳に作用する抗肥満剤を含むことができる抗肥満剤である。例示的ペプチドファミリーおよび成分は、ＮＰＹ１受容体アンタゴニスト、ＮＰＹ５受容体アンタゴニスト、レプチンおよびレプチンアゴニストもしくは類似体、ＣＮＴＦ、ＮＰＹ２受容体アゴニスト（例えば、ＰＹＹ（３−３６）またはＰＹＹ（３−３６）アゴニスト）、エキセンディンおよびエキセンディンアゴニストもしくは類似体、ＧＬＰ−１およびＧＬＰ−１アゴニストもしくは類似体、グレリンアンタゴニスト、ＣＣＫおよびＣＣＫアゴニストもしくは類似体、ならびにアミリンまたはアミリンアゴニストもしくは類似体を含む。

ある実施態様において、ＧＩＰハイブリッドおよびその使用方法は、ＡＲＣ、ＰＶＮ、ＶＭおよびＬＨのごとき視床下部のエネルギーバランスセンターを主に標的とする第１の成分を含む。一実施態様において、ＧＩＰハイブリッドは、第１の成分とは異なる作用の位置でまたは異なる作用機序を介して視床下部を標的ともする１またはそれを超える他のペプチドファミリー成分をさらに含有する。ＧＩＰハイブリッドが、１を超える他のペプチドファミリー成分を含有し、また、これらが視床下部を標的とする場合に、１を超える他のペプチドファミリーは、相互に同一の作用機序を介して同一の位置を標的とし得るか、またはそれらが、作用の異なる位置および／または異なる機序を標的とし得る。次いで、別の実施態様において、ＧＩＰハイブリッドは、第１の成分とはおよび相互に異なる作用の位置または機序を介して抗肥満効果を含めた所望の１またはそれを超える追加の有利な治療効果、血液中グルコースの制御、心臓保護および／または高血圧の制御を提供する１またはそれを超える他のペプチドファミリー成分を含む。ある実施態様において、追加のペプチドファミリー成分は、ＮＳＴ、ＡＰおよびｌＰＢＮのごとき後脳のエネルギーバランスセンターを主に標的とするものである。

ある実施態様において、ＧＩＰおよびその使用方法は、ＮＳＴ、ＡＰおよびｌＰＢＮのごとき後脳のエネルギーバランスセンターを主に標的とする第１の成分を含む。一実施態様において、ＧＩＰハイブリッドは、第１の成分とはおよび相互に異なる作用の位置にて、または異なる作用の機序を介して視床下部を標的ともする１またはそれを超える他のペプチドファミリー成分さらに含有する。次いで、別の実施態様において、ＧＩＰハイブリッドは、第１の成分とはおよび相互に異なる作用の位置または機序を介して抗肥満効果を含めた所望の１またはそれを超える追加の有利な治療効果、血液中グルコースの制御、心臓保護および／または高血圧の制御を提供する１またはそれを超える他のペプチドファミリー成分を含む。ある実施態様において、追加のペプチドファミリー成分は、ＡＲＣ、ＰＶＮ、ＶＭおよびＬＨのごとき視床下部のエネルギーバランスセンターを主に標的とするものである。

本明細書に用いた「食物摂取および／または体重調節に関与する前脳構造に対して作用する」抗肥満剤は、前脳における特定の領域、例えば、特定の核および／または神経回路の活性を刺激または抑制する。この前脳の刺激または抑制は、身体に対する栄養利用能における低下に導く。本明細書に用いた「食物摂取および／または体重調節に関与する後脳構造に対して作用する」抗肥満剤は、後脳における特定の領域、例えば、特定の核および／または神経回路の活性を刺激または抑制する。この後脳の刺激または抑制の結果、身体に対する栄養利用能を低下させる。

別の態様において、対象における代謝速度を増加させることによる脂肪量を低下させる方法が提供され、その方法は、対象の代謝速度を増加させることにより脂肪量を低下させるのに有効な量の抗肥満ＧＩＰハイブリッドを投与することを含む。脂肪量は、合計体重のパーセンテージとして表すことができる。いくつかの態様において、脂肪量は、処置の経過にわたり、少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％または少なくとも２５％だけ低下する。一の態様において、対象の除脂肪量は、処置の経過にわたり減少しない。別の態様において、対象の除脂肪量は、処置の経過にわたり維持または増加する。別の態様において、対象は、カロリーダイエットの軽減またはダイエットの制限にある。「カロリーダイエットの軽減」とは、同一対象の通常のダイエットに比較してより少ない１日当たりのカロリーを摂取していることを意味する。一つの例において、対象は、１日当たり少なくとも５０だけより少ないカロリーを消費している。他の例において、対象は、１日当たり少なくとも１００、１００、１５０、２００、２５０、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００または１０００だけより少ないカロリーを消費している。

一つの実施態様において、対象における脂肪分布の改変、脂肪量の低下またはその双方における使用方法が提供される。結果的に、体組成の改変が利益になる対象も、当該方法から利益を得ることができる。本明細書において意図される体組成の改変は、除脂肪体量の損失、維持または増加の最小化での体脂肪の損失または維持を含む。かかる状況において、体重は、増加ならびに減少し得る。結果的に、対象は、これらの用語が当該技術分野において一般的に用いられるように、除脂肪、過体重または肥満で有り得る。また、提供される方法は、除脂肪量を保存しつつ、非脂肪組織中の脂肪を低下させることを含み得る。この方法についての使用は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）またはリポジストロフィー（lipodystrophy）のごとき疾患の処置を含む。

一実施態様において、対象における脂肪分布を改変する方法が提供され、当該方法は、対象における脂肪分布を改変するのに有効な量の抗肥満ＧＩＰハイブリッドを投与することを含む。一態様において、改変は、対象における内臓もしくは異所性脂肪、または双方の代謝の増加に起因する。「脂肪分布」とは、身体における脂肪沈着の位置を意味する。脂肪沈着のかかる位置は、例えば、皮下、内臓および異所性脂肪沈着を含む。「皮下脂肪」とは、皮膚表面直下の脂質の沈着を意味する。対象における皮下脂肪の量は、皮下脂肪の測定に利用可能ないずれかの方法を用いて測定できる。皮下脂肪の測定方法、例えば、ここに出典明示してその全てを本明細書の一部とみなす米国特許第6,530,886号に記載されたものは、当該技術分野において知られている。「異所性脂肪貯蔵」とは、除脂肪体量を構成する組織および器官内またはそれらの周囲の脂質沈着を意味する（例えば、骨格筋、心臓、肝臓、膵臓、腎臓、血管）。一般的に、異所性脂肪貯蔵は、体内の古典的な脂肪組織沈着の外の脂肪の蓄積である。「内臓脂肪」とは、腹腔内脂肪組織としての脂肪の沈着を意味する。内臓脂肪は、重要な器官の周囲にあり、肝臓により代謝されて、血中コレステロールを生成できる。内臓脂肪は、多嚢胞性卵巣症候群、代謝性症候群および心血管疾患のごとき疾患のリスク増大と関連している。いくつかの実施態様において、方法は、皮下脂肪についてよりも少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％または５０％大きい割合にて、内臓または異所性脂肪あるいは双方の代謝を含む。一態様において、この方法の結果、好ましい脂肪分布を生じる。一実施態様において、好ましい脂肪分布は、皮下脂肪−対−内臓脂肪、異所性脂肪または双方の割合の増加である。一態様において、方法は、例えば、筋肉細胞量における増加の結果としての除脂肪体量における増加を含む。

別の実施態様において、対象における皮下脂肪の量を低下させる方法が提供され、当該方法は、対象における皮下脂肪の量を低下させるのに有効な量で抗肥満ＧＩＰハイブリッドをそれを必要とする対象に投与することを含む。一例において、皮下脂肪の量は、少なくとも約５％だけ対象において低下させる。他の例において、皮下脂肪の量は、抗肥満ハイブリッドの投与に先立ち、対象に比較して少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％または５０％だけ低下させる。

本明細書に記載された方法を用いて、対象における内臓脂肪の量を低下させることができる。一例において、内臓脂肪は、少なくとも約５％だけ対象において低下させる。他の例において、内臓脂肪は、抗肥満ＧＩＰの投与に先立ち、対象に比較して少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％または５０％だけ対象において低下させる。内臓脂肪は、対象における内臓脂肪の量を決定するにに利用可能ないずれかの手段を介して測定できる。かかる方法は、例えば、ＣＴスキャンおよびＭＲＩにより腹腔断層法を含む。内臓脂肪を決定する他の方法は、例えば、米国特許第6，８６４，４１５号、第６，８５０，７９７号および第６，４８７，４４５号に記載されている。

一実施態様において、対象における異所性脂肪の蓄積を予防する、または異所性脂肪の量を低下させる方法が提供され、当該方法は、対象における異所性脂肪の蓄積を予防するまたは異所性脂肪の量を低下させるのに有効な量で抗肥満ＧＩＰハイブリッドをそれを必要とする対象に投与することを含む。一例において、異所性脂肪の量は、抗肥満ハイブリッドの投与に先立ち、少なくとも約５％だけ対象において低下させる。他の例において、異所性脂肪の量は、少なくとも約１０％、または少なくとも１５％、２０％、２５％、３０％、４０％または５０％だけ対象において低下させる。別法として、異所性脂肪の量は、対象における皮下脂肪に比較して、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％比例して低下させる。異所性脂肪は、異所性脂肪を測定するために利用可能ないずれかの方法を用いて対象において測定できる。

別の実施態様において、方法は、対象におけるより好ましい脂肪分布を生成するために提供され、当該方法は、好ましい脂肪分布を生成するのに有効な量で抗肥満剤として有効であるＧＩＰハイブリッドを対象に投与することを含む。一実施態様において、抗肥満ＧＩＰハイブリッドの投与は、対象における内臓脂肪または異所性脂肪、またはその双方の量を低下させる。一実施態様において、食物摂取もしくは体重調節または双方に関与する後脳構造に作用する少なくとも１つのファミリーモジュールと組み合わせた食物摂取もしくは体重調節または双方に関与する前脳構造に作用する少なくとも１つのファミリーモジュールを含む抗肥満ハイブリッドが投与される。一実施態様において、方法は、皮下脂肪における低下にわたり、内臓または異所性脂肪、あるいは双方の組合せの量を優先的に低下させる。かかる方法の結果、皮下脂肪−対−内臓脂肪または異所性脂肪のより高い割合を生じる。かかる改善された割合の結果、心血管疾患、嚢胞性卵巣症候群、代謝性症候群またはそのいずれかの組合せの発生のリスクを低下させる。一実施態様において、内臓または異所性脂肪は、皮下脂肪より５％多い割合にて代謝される。他の実施態様において、異所性または内臓脂肪は、皮下脂肪より少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％ ５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％の割合にて代謝される。

抗肥満につき特に注目されるのは、本明細書に言及された体重および脂肪組成関連処置が、エキセンディン、アミリン（例えば、アミリン−ｓＣＴ−アミリンキメラ）、レプチンおよび／またはＰＰＦ（例えば、ＰＹＹアナログまたはＰＰＹ／ＮＰＹキメラ）ファミリーモジュールを含むＧＩＰハイブリッドである。まださらなる実施態様において、ＧＩＰハイブリッドは、これらのペプチドファミリーモジュールの少なくとも２つを含む。ＧＩＰハイブリッドは、単独または、アミリン、レプチン、ＰＹＹまたはエキセンディンファミリーペプチドのごとき第２の抗肥満剤と組み合わせて投与できる。

依然として別の態様において、糖質コルチコステロイドと組み合わせて投与された抗肥満剤として有用なＧＩＰハイブリッドの治療上有効量の投与のための方法が提供される。糖質コルチコステロイドは、脂肪量を増加し、除脂肪量を減少する有害作用を有する。結果的に、抗肥満剤の組合せは、糖質コルチコステロイドの有害作用に対抗するために、糖質コルチコステロイド使用が有益である条件下で糖質コルチコステロイドと組み合わせて用いることができると考えられる。

本明細書に言及したように、本発明のＧＩＰハイブリッドは、追加の利益を得る、あるいはハイブリッドまたは他の剤のいずれかの効果を増強するために、１またはそれを超える他の剤と別々にまたは一緒に投与できる。例えば、抗肥満ＧＩＰハイブリッドは、処置および所望の処置結果を必要とする対象に適切なリスク因子に依存して、抗肥満剤または心保護もしくは抗高血圧剤と共に投与できる。ハイブリッドとの（別々または混合して；先立ち、同時または後の）投与用の例示的な抗肥満剤は、限定されるものではないが、パロキセチン、フルオキセチン、ヘンフルラミン、フルボキサミン、セルトラリンおよびイミプラミンを含めたセロトニン（５ＨＴ）輸送インヒビターを含む。また、抗肥満剤は、限定されるものではないが、デクスフェンフルラミン、フルオキセチン、シブトラミン（例えば、ＭＥＲＩＤＩＡ^Ｒ）およびここに出典明示してその全てを本明細書の一部とみなす米国特許第６，３６５，６３３号およびＰＣＴ特許出願公開ＷＯ０１／２７０６０およびＷＯ０１／１６２３４１に記載されたものを含めた選択的セロトニン再取込みインヒビターを含む。かかる５ＨＴ輸送インヒビターおよびセロトニン再取込みインヒビター、アナログ、誘導体、調製物、処方、医薬組成物、用量、および投与経路は、従前に記載されている。

また、抗肥満剤は、限定されるものではないが、ここに出典明示してそのすべてを本明細書の一部とみなす米国特許第３，９１４，２５０号；およびＰＣＴ出願公開ＷＯ０２／３６５９６、ＷＯ０２／４８１２４、ＷＯ０２／１０１６９、ＷＯ０１／６６５４８、ＷＯ０２／４４１５２；ＷＯ０２／５１８４４、ＷＯ０２／４０４５６およびＷＯ０２／４０４５７を含めた選択的セロトニンアゴニストおよび選択的５−ＨＴ２Ｃ受容体アゴニストを含む。かかる選択的セロトニンアゴニストおよび選択的５−ＨＴ２Ｃ受容体アゴニスト、かかるアゴニストを含む組成物、およびその方法における使用に適当な投与経路は当該技術分野において知られている。例えば、ハルフォード（Ｈａｌｆｏｒｄ）ら（２００５） Ｃｕｒｒ．Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ ６：２０１−２１３ およびバイントラウ（Ｗｅｉｎｔｒａｕｂ）ら（１９８４） Ａｒｃｈ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．１４４：１１４３−１１４８参照。

また、抗肥満剤は、限定されるものではないが、リモナバン（Ｓａｎｏｆｉ Ｓｙｎｔｈｅｌａｂｏ）およびＳＲ−１４７７７８（Ｓａｎｏｆｉ Ｓｙｎｔｈｅｌａｂｏ）を含めた中枢カンナビノイド受容体（そのＣＢ−１受容体）のアンタゴニスト／インバースアゴニストを含む。ＣＢ−１アンタゴニスト／インバースアゴニスト、誘導体、調製物、処方、医薬組成物、用量および投与経路は、例えば、ここに出典明示してその全てを本明細書の一部とみなす米国特許第６，３４４，４７４号、第６，０２８，０８４号、第５，７４７，５２４号、第５，５９６，１０６号、第５，５３２，２３７号、第４，９７３，５８７号、第５，０１３，８３７号、第５，０８１，１２２号、第５，１１２，８２０号、第５，２９２，７３６号、第５，６２４，９４１；欧州特許出願第ＥＰ−６５６ ３５４号および第ＥＰ−６５８５４６号；ならびにＰＣＴ出願公開番号ＷＯ９６／３３１５９、ＷＯ９８／３３７６５、ＷＯ９８／４３６３６、ＷＯ９８／４３６３５、ＷＯ０１／０９１２０、ＷＯ９８／３１２２７、ＷＯ９８／４１５１９、ＷＯ９８／３７０６１、ＷＯ００／１０９６７、ＷＯ００／１０９６８、ＷＯ９７／２９０７９、ＷＯ９９／０２４９９、ＷＯ０１／５８８６９およびＷＯ０２／０７６９４９に従前に記載されている。

また、抗肥満剤は、メラノコルチンおよびメラノコルチンアゴニストを含む。受容体ＭＣ４Ｒは、エネルギーバランスおよび肥満における役割を演じるようである。例えば、アンダーソン（Ａｎｄｅｒｓｏｎ）ら， Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ １１：１５８３−１５９２（２００１），スピーク（Ｓｐｅａｋｅ）ら．Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ １２：１６３１−１６３８（２００２），ベドナレク（Ｂｅｄｎａｒｅｋ）ら，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ １４：３２７−３３６（２００４）参照。限定されるものではないが、ＭＣ４Ｒアゴニストを含めたメラノコルチンアゴニストおよび提供された方法における使用に適当なかかるアゴニストを含む組成物は、当該技術分野において知られている。ＭＣＲアゴニスト、ＭＣ４Ｒアゴニスト、誘導体、調製物、処方、医薬組成物、用量および投与経路は、例えば、ここに出典明示してその全てを本明細書の一部とみなす以下のＰＣＴ特許出願：ＷＯ０３／００７９４９、ＷＯ０２／０６８３８８、ＷＯ０２／０６８３８７、ＷＯ０２／０６７８６９、ＷＯ０３／０４０１１７、ＷＯ０３／０６６５８７、ＷＯ０３／０６８７３８、ＷＯ０３／０９４９１８およびＷＯ０３／０３１４１０に従前に記載されている。

また、抗肥満剤は、限定されるものではないが、２−メチル−６−（フェニルエチニル）−ピリジン（ＭＰＥＰ）および（３−［（２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）エチニル］ピリジン）（ＭＴＥＰ）のごとき化合物、およびアンダーゾン（Ａｎｄｅｒｓｏｎ）ら Ｊ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４７３：３５−４０（２００３）；ＣｏｓｆｏｒｄらＢｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１３（３）：３５１−４（２００３）；およびアンダーゾン（Ａｎｄｅｒｓｏｎ）ら Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．３０３：１０４４−１０５１（２００２）に記載されたそれらの化合物を含めた代謝型グルタミン酸サブタイプ５受容体（ｍＧｌｕＲ５）アンタゴニストを含む。

また、抗肥満剤は、抗痙攣薬および体重損失を増加させることも示された抗痙攣薬として示されたトピラマート（ＴＯＰＩＭＡＸ^Ｒ（Ｏｒｔｈｏ ＭｃＮｅｉｌ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ））を含む。

また、抗肥満剤は、神経ペプチドＹ１（ＮＰＹ１）アンタゴニストおよびＮＰＹ５アンタゴニストを含む。ＮＰＹ１およびＮＰＹ５アンタゴニストは当該技術分野において知られている。例えば、Ｄｕｈａｕｌｔら（２０００） Ｃａｎ．Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．７８：１７３−１８５および米国特許第６，１２４，３３１号、第６，２１４，８５３号および第６，３４０，６８３参照。ＮＰＹ１およびＮＰＹ５アンタゴニスト、誘導体、調製物、処方、医薬組成物、用量および投与経路は従前に記載されている。提供される組成物および方法に有用なＮＰＹ１アンタゴニストは、ここに出典明示してその全てを本明細書の一部とみなす米国特許第６，００１，８３６号；およびＰＣＴ出願公開番号ＷＯ９６／１４３０７、ＷＯ０１／２３３８７、ＷＯ９９／５１６００、ＷＯ０１／８５６９０、ＷＯ０１／８５０９８、ＷＯ０１／８５１７３およびＷＯ０１／８９５２８を含む。本明細書に提供される組成物および方法に有用なＮＰＹ５アンタゴニストは、限定されるものではないが、米国特許第６，１４０，３５４号、第６，１９１，１６０号、第６，２５８，８３７号、第６，３１３，２９８号、第６，３３７，３３２号、第６，３２９，３９５号、第６，３４０，６８３号、第６，３２６，３７５号および第６，３３５，３４５号；欧州特許第ＥＰ−０１０１０６９１号および第ＥＰ−０１０４４９７０号；ならびにＰＣＴ特許公開番号ＷＯ９７／１９６８２、ＷＯ９７／２０８２０、ＷＯ９７／２０８２１、ＷＯ９７／２０８２２、ＷＯ９７／２０８２３、ＷＯ９８／２７０６３、ＷＯ００／６４８８０、ＷＯ００／６８１９７、ＷＯ００／６９８４９、ＷＯ０１／０９１２０、ＷＯ０１／８５７１４、ＷＯ０１／８５７３０、ＷＯ０１／０７４０９、ＷＯ０１／０２３７９、ＷＯ０１／０２３７９、ＷＯ０１／２３３８８、ＷＯ，０１／２３３８９、ＷＯ０１／４４２０１、ＷＯ０１／６２７３７、ＷＯ０１／６２７３８、ＷＯ０１／０９１２０、ＷＯ０２／２２５９２、ＷＯ０２４８１５２、ＷＯ０２／４９６４８およびＷＯ０１／１４３７６に記載される化合物を含む。

また、抗肥満剤は、Ｔ−２２６２９６（Ｔａｋｅｄａ）のごときメラニン凝集ホルモン１受容体（ＭＣＨ１Ｒ）アンタゴニストならびにメラニン凝集ホルモン２受容体（ＭＣＨ２Ｒ）アンタゴニストを含めたメラニン凝集ホルモン（ＭＣＨ）アンタゴニストを含む。ＭＣＨ受容体アンタゴニスト、誘導体、調製物、処方、医薬組成物、用量および投与経路は、例えば、ここに出典明示してその全てを本明細書の一部とみなす米国特許出願公開番号２００５／０００９８１５、２００５／００２６９１５、２００４／０１５２７４２、２００４／０２０９８６５；ＰＣＴ特許出願公開番号ＷＯ０１／８２９２５、ＷＯ０１／８７８３４、ＷＯ０２／０６２４５、ＷＯ０２／０４４３３およびＷＯ０２／５１８０９；ならびに日本特許出願第ＪＰ １３２２６２６９号に従前に記載されている。

また、抗肥満剤は、限定されるものではないが、ＰＣＴ出願番号ＷＯ００／２１５０９に記載されたものを含めて、オピオイドアンタゴニストを含む。本明細書に提供される組成物および方法に有用な特定のオピオイドアンタゴニストは、限定されるものではないが、ナルメフェン（ＲＥＶＥＸ^Ｒ）、３−メトキシナルトレキソン ナロキソン、ナルトレキソン、ナロキソナジン、β−フナルトレキサミン、デルタ１（［Ｄ−Ａｌａ２，Ｌｅｕ５，Ｃｙｓ６］−エンケファリン（ＤＡＬＣＥ）、ナルトリンドールイソチアシネートおよびノル−ビナルトルファミンを含む。

また、抗肥満剤は、限定されるものではないが、ＰＣＴ特許出願番号ＷＯ０１／９６３０２、ＷＯ０１／６８６０９、ＷＯ０２／５１２３２およびＷＯ０２／５１８３に記載されたものを含めたオレキシンアンタゴニストを含む。提供される組成物および使用方法に有用な特定のオレキシンアンタゴニストは、限定されるものではないが、ＳＢ−３３４８６７−Ａを含む。

また、抗肥満剤は、限定されるものではないが、別々に言及または投与されるハイブリッド成分で有り得るＰＹＹ３−３６（例えば、バッテルハム（Ｂａｔｔｅｒｈａｍ）ら（２００３） Ｎａｔｕｒｅ ４１８：６５０−６５４）、ＮＰＹ３−３６およびＮアセチル ［Ｌｅｕ（２８，３１）］ ＮＰＹ ２４−３６（ホワイト−スミス（Ｗｈｉｔｅ−Ｓｍｉｔｈ）ら（１９９９） Ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅｓ ３３：５２６−５３３，ＴＡＳＰ−Ｖ（Ｍａｌｉｓら（１９９９） Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１２６：９８９−９９６）、シクロ−（２８／３２）−Ａｃ−［Ｌｙｓ２８−Ｇｌｕ３２］−（２５−３６）−ｐＮＰＹ（カブレル（Ｃａｂｒｅｌｅ）ら（２０００） Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｓｃｉ．６：９７−１２２のごとき他のＹ２アゴニストのごとき化合物を含めた神経ペプチドＹ２（ＮＰＹ２）アゴニストを含む。また、提供された抗肥満剤は、限定されるものではないが、膵臓ペプチド（ＰＰ）（例えば、バッテルハム（Ｂａｔｔｅｒｈａｍ）ら（２００３） Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．８８：３９８９−３９９２）および１２２９Ｕ９１（ラポシンホ（Ｒａｐｏｓｉｎｈｏ）ら （２０００）Ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ ７１：２−７）のごとき他のＹ４アゴニストのごとき化合物を含めた神経ペプチドＹ４（ＮＰＹ４）を含む。ＮＰＹ２アゴニストおよびＮＰＹ４アゴニスト、誘導体、調製物、処方、医薬組成物、用量および投与経路は、例えば、米国特許公開番号２００２／０１４１９８５およびＰＣＴ出願公開番号ＷＯ２００５／０７７０９４に従前に記載されている。

また、抗肥満剤は、限定されるものではないが、ＰＣＴ出願番号ＷＯ０２／１５９０５に記載されたもの、Ｏ−［３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパノール］バルバメート（Ｋｉｅｃ−Ｋｏｎｏｎｏｗｉｃｚら（２０００） Ｐｈａｒｍａｚｉｅ ５５：３４９−３５５）、ピペリジン含有ヒスタミンＨ３受容体アンタゴニスト（Ｌａｚｅｗｓｋａら（２００１） Ｐｈａｒｍａｚｉｅ ５６：９２７−９３２）、ベンゾフェノン誘導体および関連化合物（Ｓａｓｓｅら（２００１） Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍ．（Ｗｅｉｎｈｅｉｍ） ３３４：４５−５２）、置換Ｎ−フェニルカルバメート（Ｒｅｉｄｅｍｅｉｓｔｅｒら（２０００） Ｐｈａｒｍａｚｉｅ ５５：８３−８６）およびプロシキファン誘導体（Ｓａｓｓｅ ら（２０００） Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４３：３３３５−３３４３）を含めたヒスタミン３（Ｈ３）アンタゴニスト／インバースアゴニズトを含む。提供される組成物および使用の方法に有用な特定のＨ３アンタゴニスト／インバースアゴニストは、限定されるものではないが、チオペラミド、３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロピル Ｎ−（４−ペンテニル）カルバメート、クロベンプロピト、ヨードフェンプロピト、イモプロキシファンおよびＧＴ２３９４（Ｇｌｉａｔｅｃｈ）を含む。

また、抗肥満剤は、コレシストキニン（ＣＣＫ）およびＣＣＫアゴニストを含む。使用のコレシストキニン−Ａ（ＣＣＫ−Ａ）アゴニストは、限定されるものではないが、米国特許第５，７３９，１０６号に記載されたものを含む。特定のＣＣＫ−Ａアゴニストは、限定されるものではないが、ＡＲ−Ｒ １５８４９、ＧＩ １８１７７１、ＪＭＶ−１８０、Ａ−７１３７８、Ａ−７１６２３およびＳＲ１４６１３１を含む。

また、抗肥満剤は、ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ０１／８７３３５およびＷＯ０２／０８２５０に記載されたもののごときグレリンアンタゴニストを含む。また、グレリンアンタゴニストは、ＧＨＳ（成長ホルモン分泌促進物質受容体）アンタゴニストとして知られている。従って、提供される組成物および方法は、グレリンアンタゴニストの代えて使用ＧＨＳアンタゴニストを考える。

抗肥満剤は、オベスタチンならびにオベスタチン類似体およびアゴニストを含む。オベスタチンは、グレリンが誘導される同一前駆体、プレプログレリンから誘導されるペプチドである。例えば、ザング（Ｚｈａｎｇ）ら（２００５） Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１０：９９６−９９９；ノグエイラス（Ｎｏｇｕｅｉｒａｓ）ら（２００５） Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１０：９８５−９８６；パン（Ｐａｎ）ら（２００６） Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ２７：９１１−９１６参照。グレリンの活性とは対照的に、オベスタチンは、食物摂取、胃排出活性、空腸運動性および体重増加を減少することにより、食欲不振ホルモンとして作用するようである。使用のオベスタチンペプチドは、限定されるものではないが、ザング（Ｚｈａｎｇ）ら（２００５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１０：９９６−９９９に記載されたものを含む。

そして、アミリノミメティックス、例えば、プラムリンチド、アミリン−ｓＣＴ−アミリン、インクレチン、例えば、エキセンディン−４およびＰＹＹ類似体は、ＧＩＰハイブリッドと抗肥満剤としても投与できる抗肥満剤である。例えば、ＧＩＰ−レプチンハイブリッドは、エキセンディン−４、ＰＹＹ類似体および／またはアミリンアナログと共に投与し得る。

このように、特定の実施形態において、本発明のハイブリッドは、栄養利用性を低減することにより軽減され得る病態または障害の処置または予防に有用であり、前記対象に治療的または予防的に有効量の本発明の化合物を投与することを含んでなる。かかる病態および障害としては、摂食障害、インスリン抵抗性、肥満、異常食後高血糖、Ｉ型、ＩＩ型、および妊娠糖尿病を含む、任意の種類の糖尿病、代謝症候群、ダンピング症候群、高血圧症、異常脂質血症、心血管疾患、高脂血症、睡眠時無呼吸、癌、肺高血圧症、胆嚢炎、および変形性関節症が挙げられるが、これらには限定はされない。一実施形態においてかかるハイブリッドは、エキセンディン、ＧＬＰ１、アミリンおよび／またはｓＣＴ部分を含む。

心血管病態または疾患の非限定的な例は、高血圧症、心筋虚血、および心筋再灌流である。本発明の化合物はまた、脳卒中、癌（例えば、子宮内膜癌、乳癌、前立腺癌、および結腸癌）、胆嚢疾患、睡眠時無呼吸、受胎能低減、および変形性関節症を含む肥満に付随する他の病態の処置または予防にも有用であり得る（リズニキ（Ｌｙｚｎｉｃｋｉ）ら、Ａｍ．Ｆａｍ．Ｐｈｙｓ．６３：２１８５頁、２００１年）。他の実施形態において、本発明の化合物は、審美的理由から体組成を変成するため、人の肉体的能力を亢進するため、または低脂肪肉源を生産するため使用されてもよい。ハイブリッドは、筋量の有意な減少なしに脂肪を減少させることにより体組成を変えるために有用であり、そうして除脂肪体重を維持しながら望ましい体脂肪の消失を生み出す。一実施形態においてかかるハイブリッドは、エキセンディン、ＧＬＰ１、アミリンおよび／またはｓＣＴ部分を含む。

本発明の別の態様において、肥満を処置または予防する方法が提供され、ここで該方法は、治療的または予防的に有効量のハイブリッドポリペプチドをそれらを必要とする対象に投与することを含んでなる。例示的実施形態において、対象は肥満または過体重対象である。「肥満」は一般的にボディマス指標が３０超として定義されるが、本開示の目的上、ボディマス指標が３０未満の者を含め、体重を減少させることを必要とする、もしくは希望する任意の対象が「肥満」の範囲に含まれる。インスリン抵抗性、グルコース不耐性である、または任意の型の真性糖尿病（例えば、１型、２または妊娠糖尿病）を有する対象が本ハイブリッドから利益を得ることができる。一実施形態においてかかるＧＩＰハイブリッドは、エキセンディン、ＰＹＹ、ＧＬＰ１、アミリンおよび／またはｓＣＴ部分を含む。

本発明の他の態様において、食物摂取量を低減する、栄養利用性を低減する、体重減少を引き起こす、体組成に影響を及ぼす、および体エネルギー含量を変える、またはエネルギー消費を増加させる、真性糖尿病を処置する、および脂質プロファイルを改善する（ＬＤＬコレステロールおよびトリグリセリドレベルを低減することおよび／またはＨＤＬコレステロールレベルを変化させることを含む）方法が提供され、ここで該方法は対象に有効量の本発明のハイブリッドポリペプチドを投与することを含んでなる。例示的実施形態において、本発明の方法は、それを必要とする対象において栄養利用性を低減することにより軽減され得る病態または障害を処置または予防するために使用され、前記対象に治療的または予防的に有効量の本発明のハイブリッドポリペプチドを投与することを含んでなる。かかる病態および障害としては、高血圧症、異常脂質血症、心血管疾患、摂食障害、インスリン抵抗性、肥満、および任意の型の真性糖尿病が挙げられるが、これらには限定はされない。一実施形態においてかかるハイブリッドは、エキセンディン、ＰＹＹ、ＧＬＰ１、アミリンおよび／またはｓＣＴ部分を含む。

一実施形態においては、ＰＰＦまたはＰＹＹファミリーメンバーはＧＩＰハイブリッド成分を含んでなるとともに、理論により限定されることを意図せず、かかる末梢投与されたＧＩＰハイブリッドポリペプチドの食物摂取量の低減、胃排出の遅延、栄養利用性の低減、および体重減少の誘因における効果は、ＰＰファミリー内のものにおける、またはそれと同様の、１つまたは複数の固有の受容体クラスとの相互作用により測定されると考えられる。より詳細には、ＰＹＹ選好（またはＹ７）受容体と同様の受容体が関与していると見られる。

本発明に有用な追加的なアッセイとしては、ＧＩＰハイブリッド化合物、特に、エキセンディン、ＰＰＦ、ＰＹＹ、ＧＬＰ１、アミリンおよび／またはｓＣＴ部分を含むものの、体組成に対する効果を測定できるものが挙げられる。例示的アッセイは代謝性疾患についての食餌誘発性肥満（ＤＩＯ）マウスモデルの利用に関するものであり得る。処置期間に先立ち、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄性マウスに高脂肪食（＃Ｄ１２３３１、脂肪からのカロリー５８％；リサーチ・ダイエッツ社（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔｓ，Ｉｎｃ．，）を６週間、４週齢で開始して摂食させ得る。試験中、マウスはその高脂肪食を食べ続けることができる。試験全体を通じ、水が適宜提供され得る。同年齢の非肥満マウスの一群に、代謝パラメータをＤＩＯ群と比較する目的で、低脂肪食（＃Ｄ１２３２９、脂肪からのカロリー１１％）を摂食させ得る。

ＤＩＯマウスは皮下（ＳＣ）肩甲骨内浸透圧ポンプを埋め込まれ、媒体（水中５０％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ））または本発明の化合物のいずれかを送達し得る。この群のポンプは任意の量、例えば、本発明の化合物の１０００μｇ／ｋｇ／日を７〜２８日間送達するよう設定され得る。体重および食物摂取量が、一定の間隔にわたり試験の全期間を通じ計測され得る。呼吸商（ＲＱ、ＣＯ_２産生÷Ｏ_２消費として定義される）および代謝率が動物全体の間接熱量測定法（オキシマックス（Ｏｘｙｍａｘ）、コロンバス・インストルメンツ（Ｃｏｌｕｍｂｕｓ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）、コロンバス、オハイオ州）を使用して測定され得る。マウスはイソフルラン過量投与により安楽死させ得るとともに、脂肪症の指標（両側性副睾丸脂肪パッド重量）が計測され得る。その上、精巣上体重量の測定に先立ち、各マウスについて体組成（除脂肪量、脂肪量）が、二重エネルギーＸ線吸収測定法（ＤＥＸＡ）機器を使用して製造者の指示により（ルナ・ピクシマス（Ｌｕｎａｒ Ｐｉｘｉｍｕｓ）、ＧＥイメージング・システム（ＧＥ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ））分析され得る。本発明の方法においては、ＧＩＰハイブリッド、特に、本明細書に記載されるアッセイの１つ（好ましくは、食物摂取量、胃排出、膵分泌、体重減少または体組成アッセイ）において同一のアッセイにおける成分ペプチドホルモンの効力より高い効力を有するエキセンディン、ＰＰＦ、ＰＹＹ、ＧＬＰ１、アミリンおよび／またはｓＣＴ部分を含んでなるものが同定され得る。

それを必要とする対象における、食物摂取量、体重減少の低減、または肥満の処置の結果としての高血圧症の寛解に加え、本発明の化合物は低血圧を処置するために使用され得る。

別の一般的態様において、本発明のハイブリッドはグレリンの分泌を阻害するために使用されてもよい。従って、本発明の化合物が、プラダーウィリ症候群、全ての型の糖尿病およびその合併症、肥満、過食症、高脂血症、または栄養過剰に付随する他の障害などの、グレリン関連障害を処置または予防するためにこの機序を利用してもよい。一実施形態においてかかるハイブリッドは、エキセンディン、ＧＬＰ１、アミリンおよび／またはｓＣＴ部分を含む。

本発明の化合物はまた、膵臓島または細胞におけるグルコース応答性の増強、誘発、亢進または回復にも有用であり得る。これらの作用は、上記および米国特許出願公開第２００４／０２２８８４６号明細書に記載されるものなどの代謝障害に付随する病態の処置または予防に有用であり得る。かかる活性の測定用アッセイは当該技術分野において周知である。例えば、米国特許出願公開第２００４／０２２８８４６号明細書（全体として参照により援用される）において、膵島単離および培養ならびに胎児膵島成熟の測定のためのアッセイが記載される。米国特許出願公開第２００４／０２２８８４６号明細書の例においては、膵ポリペプチド（ＰＰ）、神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）、神経ペプチドＫ（ＮＰＫ）、ＰＹＹ、セクレチン、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−Ｉ）およびボンベシンを含む腸由来ホルモンペプチドがシグマ（Ｓｉｇｍａ）から購入された。コラゲナーゼＸＩ型はシグマ（Ｓｉｇｍａ）から入手された。ＲＰＭＩ１６４０培地およびウシ胎仔血清はギブコ（Ｇｉｂｃｏ）から入手された。抗インスリン抗体（［^１２５Ｉ］−ＲＩＡキット）を含むラジオイムノアッセイキットはセントルイスのリンコ（Ｌｉｎｃｏ）から購入された。

分娩後ラット膵島がＰ−０２年齢ラットから採取された。成体ラット膵島が６−８週齢ラットから採取された。胎仔ラット膵島が次のとおり採取された。妊娠雌性ラットが妊娠Ｅ２１日で屠殺された。胎仔が子宮から取り除かれた。１０〜１４個の膵臓が各同腹仔から切開され、かつハンクス緩衝液中で２回洗浄された。膵臓は貯蔵され、６ｍｌの１ｍｇ／ｍｌコラゲナーゼ（ＸＩ型、シグマ（Ｓｉｇｍａ））中に懸濁され、かつ３７℃で８〜１０分間、一定の振盪を伴いインキュベートされた。消化が氷冷ハンクス緩衝液の１０容量を添加することにより停止された後、ハンクス緩衝液での３回の洗浄が続いた。次に膵島はフィコール勾配により精製され、かつ１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）／ＲＰＭＩ培地中で、１μＭのＩＢＭＸの添加を伴い、または伴わず、培養された。５日間の終わりに、２０個の膵島が各管に厳選され、かつ静的インスリン放出についてアッセイされた。概して、膵島は最初にＫＲＰ緩衝液で洗浄され、次に１ｍｌの３ｍＭ（低）グルコース含有ＫＲＰ緩衝液で３０分間、３７℃で、一定の振盪を伴いインキュベートされた。上清を収集後、次に膵島は１７ｍＭ（高）グルコースで１時間、３７℃でインキュベートされた。低または高グルコース刺激から放出されたインスリンが［^１２５Ｉ］−ＲＩＡキットを使用してラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によりアッセイされた。Ｅ２１胎仔膵島が５日間、２００ｎｇ／ｍｌのＰＹＹ、ＰＰ、ＣＣＫ、ＮＰＫ、ＮＰＹ、セクレチン、ＧＬＰ−Ｉまたはボンベシンの存在下で培養された。

例示的生体内アッセイもまた、齧歯類標準餌ピューリナ（Ｐｕｒｉｎａ）５００８を摂食させる全てのｆａ／ｆａ雄において自発的に糖尿病を発現する近交系（＞Ｆ３０世代）ラットモデルである、ズッカー糖尿病肥満（ＺＤＦ）雄性ラットを使用して提供される。ＺＤＦｆａ−ｆａ雄において、高血糖は約７週齢で発症し始めるとともにグルコースレベル（摂食）は典型的に、１０〜１１週齢までに５００ｍｇ／ＤＬに達する。インスリンレベル（摂食）は糖尿病進行中は高い。しかしながら、１９週齢までにインスリンは非肥満対照同腹仔のおおよそのレベルまで下落する。肥満ラットのトリグリセリドおよびコレステロールレベルは通常、非肥満ラットのそれより高い。アッセイにおいて、各群６匹のラットを伴う、７週齢ＺＤＦラットの３群が１４日間ＡＬＺＡポンプによる注入処置を受けた：１）媒体対照、２）および３）２種の異なる用量を伴うＰＹＹ、それぞれ、１００ｐｍｏｌ／ｋｇ／時間および５００ｐｍｏｌ／ｋｇ／時間。７日目および１４日目の注入前および注入後に４種の計測値がとられた：１）血漿グルコースレベル、２）血漿インスリンレベル、および３）血漿トリグリセリド（ＴＧ）レベル、ならびに経口グルコース耐性（ＯＧＴＴ）テスト。従って、これらのアッセイが、所望の活性についてテストするため、本発明の化合物を伴い使用され得る。

ハイブリッドはまた、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、ＡＬＳ、脳卒中、ＡＤＤ、および神経精神症候群を含むが、これらには限定はされない、ニューロン欠損または機能障害に付随する神経学的および神経系障害の治療的および予防的処置に、および哺乳動物における学習、記憶および認知を亢進または促進するためにも有用である。この点において特に有用であるのは、エキセンディンまたはＧＬＰ１活性部分を含む、より具体的には少なくともＮ末端７−１５アミノ酸またはその類似体、例えばＨＳＥＧＴＦＴＳＤ（配列番号９４）を含んでなる、ＧＩＰハイブリッドである。

ハイブリッドポリペプチドについて企図される他の使用としては、アルツハイマー病の発病を処置、予防、または遅延するため中枢神経系中のアルミニウム（Ａｌ）濃度を低減する方法が挙げられる（全体として参照により援用される、米国特許第６，７３４，１６６号明細書を参照）。Ａｌに対する効果の測定用アッセイは当該技術分野において周知であるとともに二倍体およびＴｓマウスを使用する米国特許第６，７３４，１６６号明細書に見出され得る。これらのマウスは個々にＮａｌｇｅｎｅ（登録商標）の商標メタボリックケージまたはポリプロピレンケージ中で飼育され、かつ実験前にケージに適応するよう３日が与えられた。マウスは、一切の食物が提供されない安楽死前１６時間を除き、実験中は食物（ＬａｂＤｉｅｔ（登録商標）ＮＩＨラット・アンド・マウス／オート（Ｒａｔ ａｎｄ Ｍｏｕｓｔ／Ａｕｔｏ）６Ｆ５Ｋ５２、セントルイス、ミズーリ州）および水を自由に入手できた。マウスは毎日、活性化合物または生理食塩水のいずれかの皮下注射を与えられた。マウスは１３日目の終わりに一実験のため、および３日目に別の実験のため屠殺され、かつ試料が採取された。マウス脳試料は清浄なテフロンライナー中で計量され、かつ低微量元素級硝酸中のマイクロ波分解による分析用に調製された。次に試料はＡｌ含有量について誘導結合プラズマ質量分析法を使用して分析された（ヌタール（Ｎｕｔｔａｌｌ）ら、Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５、３、２６４−２７１頁（１９９５年））。分析中の全ての組織の取り扱いは、バックグラウンド汚染を最小化するためＨＥＰＡ空気ろ過装置を利用して清浄な室内環境で行なわれた。

本発明のハイブリッドは、高血圧性および糖尿病性腎症を含む腎症、ならびにインスリン抵抗性および代謝症候群に付随する腎症の予防および処置に有用である。ハイブリッドはこれらの目的を、他の中でもとりわけ、高血圧症、内皮機能、腎機能、および糸球体硬化症の悪化を改善または予防することにより達成する。一実施形態において、本発明は、高血圧性および糖尿病性腎症を含む腎症、またはインスリン抵抗性に関する腎症を予防または処置する方法を提供し、本発明の化合物を投与することを含んでなる。ハイブリッドは、低減した血管拡張能を有する、または糸球体硬化症または糸球体の流動性における任意の他の低減を有する患者における内皮機能の改善にさらなる使用が見出される。内皮機能におけるかかる改善は、高血圧症を低減すること、および糸球体の毛細管の機能を改善することの双方に役立つ。追加的な実施形態において、本発明の分子は、腎症からＥＳＲＤへの進行を予防するため、タンパク尿症および／または糸球体硬化症を予防する、その進行を緩徐化する、それを処置する、または寛解するため、有用である。

ハイブリッドは不整脈に罹患するリスクを低減する、不整脈を予防する、または処置するために有用である。ハイブリッドは、心虚血、心虚血−再灌流、およびうっ血性心不全の患者において抗不整脈効果を提供できる。例えば、インクレチンＧＬＰ−Ｉは、これらの障害を伴う患者における心傷害を低減するとともに回復を亢進することが所見されている。ＧＬＰ−Ｉを含め、インクレチンはグルコース依存性インスリン分泌刺激ホルモンである。ＧＬＰ−Ｉおよびエキセンディンは、危険な低血糖症を誘発することなしに効果的に末梢グルコース取り込みを亢進する。それらはまた、そのインスリン分泌刺激作用に依存せず、グルカゴン分泌も強く抑制するとともに、それにより血漿遊離脂肪酸（ＦＦＡ）レベルをインスリンで達成され得るものを実質的に上回って強力に低減する。高レベルのＦＦＡは心筋虚血の間の主要な毒性機序に関与するとされている。別の実施形態においてハイブリッドは不整脈の予防および処置に有用であり、確実に再灌流および虚血に付随する傷害を低減するとともに、患者の回復を亢進する。いまださらなる実施形態において急性脳卒中または出血後のハイブリッド処置、好ましくは静脈内投与は、重症低血糖症または他の有害副作用のリスクを伴わず、インスリン分泌の最適化、脳の同化作用の増加、グルカゴンの抑制によるインスリン有効性の亢進、および正常血糖または軽度低血糖の維持のための手段を提供する。一実施形態においてかかるＧＩＰハイブリッドは、ＧＬＰ１またはエキセンディン部分を含む。

いまださらなる実施形態において、インスリン抵抗性の降下能またはインスリン感受性の増加能を有するハイブリッドは多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）を処置するために有用である。本発明のハイブリッドの投与は、ＰＣＯＳ罹患対象におけるインスリン抵抗性を処置または予防できる。さらに別の実施形態においてハイブリッドはＰＣＯＳ罹患対象における２型糖尿病の発病を予防する。さらにハイブリッドは、ＰＣＯＳ罹患対象における規則的な月経、排卵、または受胎能を回復できる。一実施形態においてかかるＧＩＰハイブリッドは、ＧＬＰ１受容体を結合および活性化するためのＧＬＰ１またはエキセンディン部分を含む。

ホルモン成分モジュールの選択により本発明の化合物は、ある部分はその抗分泌性および抗運動性特性に関する、広い範囲の生物学的活性を呈することができる。化合物は、上皮細胞との直接的相互作用により、または、おそらくは、腸分泌を刺激するホルモンまたは神経伝達物質の分泌を阻害することにより、胃腸分泌を抑制し得る。抗分泌特性としては胃および／または膵分泌の阻害が挙げられるとともに、胃炎、膵炎、バレット食道、および胃食道逆流症を含む疾患および障害、ならびに胸やけ、胃／腸内容物の口または肺への逆流に伴う胸やけ、嚥下困難、咳嗽、間欠性喘鳴および声帯炎症（ＧＥＲＤに付随する病態）、食道糜爛、食道潰瘍、食道狭窄、バレット異形成（正常食道上皮の異常上皮との置換）、バレット食道腺癌、および肺吸引を含むそれらに付随する病態の処置または予防に有用であり得る。別の実施形態においてアミリンおよび／またはｓＣＴ部分を含むＧＩＰハイブリッドは、バレット食道、胃食道逆流症（ＧＥＲＤ）および本明細書に開示されるとおりのそれらに付随する病態などの、これらの疾患および病態の処置または予防に有用であり得る。かかるハイブリッドは、胃酸の阻害、胆汁酸の阻害、および膵酵素の阻害などの、特に有効な抗分泌特性を有する。その上、かかるハイブリッドは胃保護効果を有することができ、これにより特に、腸疾患ならびにバレット食道、および／またはＧＥＲＤの、および本明細書に記載されるとおりの病態に関連または付随する病態の処置または予防において有用となる。

本発明の化合物は、過剰な腸の電解質および水分分泌ならびに吸収低下に付随するあらゆる胃腸障害（例えば、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ Ｉｎｃｏ、ニューヨーク、第１２版を参照）、例えば、感染性下痢、炎症性下痢、短腸症候群、または外科手技、例えば、回腸造瘻術後に典型的に起こる下痢の処置において有用である。感染性下痢の例としては、限定なしに、急性ウイルス性下痢、急性細菌性下痢（例えば、サルモネラ、カンピロバクター、およびクロストリジウムまたは原虫感染に起因するもの）、または旅行者下痢症（例えば、ノーウォークウイルスまたはロタウイルス）が挙げられる。炎症性下痢の例としては、限定なしに、吸収不良症候群、熱帯性スプルー、慢性膵炎、クローン病、下痢、および過敏性腸症候群が挙げられる。本発明のペプチドが、例えば、手術後またはコレラによる、胃腸障害に関わる、救急の、または生命を脅かす状態を処置するために使用され得ることもまた発見されている。

本発明の化合物はまた、腸損傷に付随する症状（例えば、下痢）を単に処置するのとは対照的な、胃腸を含む腸の損傷の処置または予防にも有用であり得る。腸に対するかかる損傷は、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、腸萎縮症、腸粘膜喪失、および／または腸粘膜機能の喪失であり得るか、もしくはその結果であり得る（全体として参照により本明細書に援用される、国際公開第０３／１０５７６３号パンフレットを参照）。かかる活性用アッセイは、国際公開第０３／１０５７６３号パンフレットに記載されるとおり、２５０〜３００グラムの範囲をとり、１２：１２の明暗サイクルで飼育されるとともに、齧歯類標準食（テクラド（Ｔｅｋｌａｄ）ＬＭ４８５、マディソン、ウィスコンシン州）および水分を適宜入手できる、１１週齢雄性ＨＳＤラットを含む。動物は実験前２４時間は絶食させた。慢性結腸炎症の単純かつ再現可能なラットモデルは、モリス・ＧＰ（Ｍｏｒｒｉｓ ＧＰ）ら、「Ｈａｐｔｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｕｌｃｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔ ｃｏｌｏｎ」、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．１９８９；９６：７９５−８０３頁、によって以前に記載されている。これは相対的に長い炎症および潰瘍の持続時間を示すことから、特異的に制御された様式で結腸炎症性疾患の病態生理学を試験するとともに、潜在的にヒトにおける炎症性腸疾患に適用可能な新しい処置を評価する機会を与える。

ラットは３％のイソフルオランで麻酔をかけられ、かつ３７℃に設定された調節加温パッド上に置かれた。経管栄養針が７ｃｍ結腸内に直腸挿入された。５０％エタノール（ｖ／ｖ）中に溶解されるハプテントリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）が、結腸の管腔内に経管栄養針を通じて用量３０ｍｇ／ｋｇで総量０．４〜０．６ｍＬを、マツェリン（Ｍａｚｅｌｉｎ）ら、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｖａｇａｌ ａｆｆｅｒｅｎｔｓ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｌｙ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｏｌｉｔｉｓ ｉｎ ｒａｔｓ」 Ｊｕｔｏｎ Ｎｅｒｖ Ｓｙｓｔ．７３：３８−４５頁（１９９８年）に記載されるとおり、送達された。対照群は生理食塩水（ＮａＣｌ０．９％）を結腸内に投与された。結腸炎の誘発後４日目、結腸が麻酔下ラットから切除され、次にラットを断頭術により安楽死させた。切除された結腸および脾臓の重量が計測され、かつ該結腸は全体の形態損傷をスコア化するため撮影された。炎症が充血した領域および腸壁肥厚として確定された。

別の態様において、ＧＩＰハイブリッドは、膵炎、膵癌、および胃炎の処置または予防、特に視鏡的逆行性胆道膵管造影（ＥＲＣＰ）を受けた患者における膵炎の処置および予防において、有用であり得る。ＧＩＰハイブリッドアゴニストを含むアミリンおよび／またはｓＣＴは、ソマトスタチンと併用される時、驚くほどの治療効果を有し得る。従って、特定の実施形態において、膵炎を処置または予防する方法は、対象に、かかるハイブリッドを投与するステップおよびソマトスタチンならびにソマトスタチンアゴニストを投与することを含んでなる。本発明のハイブリッドポリペプチドはまた、バレット食道腺癌または膵腫瘍を処置または予防する（例えば、膵腫瘍の増殖を阻害する）ためにも使用され得る。本発明の方法は腫瘍細胞の増殖を低減するステップを含む。本発明に従い処置され得る良性膵腫瘍細胞としては、漿液性嚢胞腺腫、小嚢胞腫瘍、および固形嚢胞性腫瘍が挙げられる。本方法はまた、膵管、腺房、または膵島から生じる癌腫などの悪性膵腫瘍細胞の増殖を低減するにも有効である。この点で特に有用なＧＩＰハイブリッドは、ＰＹＹまたはＰＰＦファミリーのホルモンモジュール成分を含んでなるものである。米国特許第５，５７４，０１０号明細書（全体として参照により援用される）は抗増殖特性のテスト用例示的アッセイを提供する。例えば、’０１０特許は、ＰＡＮＣ−１およびＭｉａＰａＣａ−２が、米国菌株保存機関（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）、ＡＴＣＣ（ロックビル、メリーランド州）などの供給者から市販される２個のヒト膵腺癌細胞系であることを提供する。２個の腫瘍細胞は、１０％のウシ胎仔血清、２９．２ｍｇ／Ｌのグルタミン、２５μｇのゲンタマイシン、５ｍｌのペニシリン、ストレプトマイシン、およびファンギゾン溶液（ＪＲＨバイオサイエンス（Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、レネクサ、カンザス州）を補充されたＲＰＭＩ−１６４０培地中セ氏３７度で、ＮＡＰＣＯウォータジャケット仕様の５％ＣＯ_２インキュベーター内で成長させた。全ての細胞系が０．２５％のトリプシン（クロネティクス（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ）、サンディエゴ、カリフォルニア州）で１週間に１〜２回、腫瘍細胞のコンフルエント単層が得られた時に解離された。細胞は、７分間５００ｇにおいて冷却遠心機中セ氏４度でペレット状にされ、かつトリプシン無添加ＲＰＭＩ１６４０培地中で再懸濁された。生存細胞がトリパンブルーを伴う血球計スライド上で計数された。

１０，０００、２０，０００、４０，０００および８０，０００個の各種細胞が各ウェルにつき培地総量２００μｌで９６ウェルマイクロ培養プレート（コスター（Ｃｏｓｔａｒ）、ケンブリッジ、マサチューセッツ州）に添加された。細胞はＰＹＹまたはテストペプチドの添加前２４時間に接着できるようにされた。新鮮培地がペプチドの添加前に交換された。膵腫瘍細胞のＰＹＹまたはテスト化合物を伴うインビトロインキュベーションが６時間および３６時間の長さで続行された。ＰＹＹが各ウェル（Ｎ＝１４）につき用量２５０ｐｍｏｌ、２５ｐｍｏｌ、および２．５ｐｍｏｌで細胞に添加された。テスト化合物が各ウェルにつき用量４００ｐｍｏｌ、４０ｐｍｏｌ、および４ｐｍｏｌで細胞培養物に添加された。対照ウェルは２μｌの０．９％生理食塩水を与えられ、用量および接着された腫瘍細胞上の物理的妨害を模倣した。各９６ウェルプレートは１８対照ウェルを含有し、実験中各プレート内での比較を可能にした。９６ウェルプレートは、異なる濃度のＰＹＹおよびテスト化合物を伴いＰＡＮＣ−１およびＭｉａＰａＣａ−２細胞の双方において６回繰り返された。

インキュベーション期間の終わりに、臭化３−（４，５−ジメチルチアゾリル−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム、ＭＴｒ臭化テトラゾリウム（シグマ（Ｓｉｇｍａ）、セントルイス、ミズーリ州）が新鮮培地に０．５ｍｇ／ｍｌで添加された。培地は交換され、および腫瘍細胞が４時間ＭＴＴ臭化テトラゾリウムを伴い３７℃でインキュベートされた。インキュベーションの終わりに、培地は吸引された。ホルマゾン結晶沈殿物が２００μｌのジメチルスルホキシド（シグマ（Ｓｉｇｍａ）、セントルイス、ミズーリ州）中に溶解された。可溶化ホルマゾンの定量化がＥＬＩＳＡリーダー（モレキュラー・デバイス（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）、メンロパーク、カリフォルニア州）上の５００ｎｍ波長での吸収示数を得ることにより実施された。ＭＴＴアッセイはミトコンドリアＮＡＤＨ依存性脱水素酵素活性を計測するとともに、インビトロでの腫瘍細胞の化学療法反応性の定量化において最高の感度および信頼性を有する方法とされている。（アレイ，Ｍ．Ｃ．（Ａｌｌｅｙ，Ｍ．Ｃ．）ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、４８：５８９−６０１頁、１９８８年；カーマイケル，Ｊ．（Ｃａｒｍｉｃｈａｅｌ，Ｊ．）ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、４７：９３６−９４２頁、１９８７年；マクヘール，Ａ．Ｐ．（ＭｃＨａｌｅ，Ａ．Ｐ．）ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ、４１：３１５−３２１頁、１９８８年；およびサクストン，Ｒ．Ｅ．（Ｓａｘｔｏｎ，Ｒ．Ｅ．）ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｓｅｒ Ｍｅｄ．ａｎｄ Ｓｕｒｇ．、１０（５）：３３１−３３６頁、１９９２年）。５５０ｎｍでの吸収示数の分析が、同一テスト条件のウェルを群化するとともに一元配置分散分析によって対照と様々なペプチド濃度処置との間に生じる差を検証することにより解析された。

例示的生体内アッセイもまた提供される。ヒト膵管腺癌ＭｉａＰａｃａ−２が、ペプチドＹＹおよびテスト化合物による生体内成長阻害について調べられた。７０，０００〜１００，０００個のヒトＭｉａＰａＣａ−２細胞が４８匹の雄性胸腺欠損マウスに同所移植された。１週間後、動物は、２００ｐｍｏｌ／ｋｇ／時間で微小浸透圧ポンプを通じ４週間、ＰＹＹまたはテスト化合物のいずれかで処置された。対培養物は生理食塩水を与えられた。屠殺に際し、腫瘍サイズおよび質量の双方が計測された。対照マウスは、組織学分野により立証されるとおり、有意なヒト癌成長を膵内に有した。９週間目、対照マウスの９０％が実質的な転移性疾患を有した。腫瘍はテスト処置マウスにおいて６０．５％、およびＰＹＹ処置マウスにおいて２７％減少した。

別の一般的態様において、ハイブリッドは、骨吸収の減少、血漿カルシウムの減少、および／または鎮痛効果の誘発に、特に骨減少症および骨粗鬆症などの骨障害を処置するために、有用である。さらに別の実施形態において、ハイブリッドは疼痛および有痛性ニューロパシーを処置するために有用である。一実施形態においてかかるハイブリッドは、エキセンディン、ＧＬＰ１、アミリンおよび／またはｓＣＴ部分を含む。例えば、本発明のＧＩＰ−ｓＣＴまたはＧＩＰ−アミリン／ｓＣＴハイブリッド化合物は、骨喪失および骨吸収の減少、もしくは軟骨代謝回転の低減（軟骨保護）などの、サケカルシトニンまたはアミリン／ｓＣＴ／アミリンキメラの選択可能な特性、および血漿グルコースの降下（本明細書に記載されるとおりの抗異化態様に随伴する）および／または骨吸収の阻害または骨密度の維持または増加などの、ＧＩＰの特性を有し得る。選択可能な特性を備えるＧＩＰハイブリッドは骨粗鬆症または軟骨代謝高回転の病態の処置を、特に、糖尿病または救命救急管理中の対象などの、血糖コントロールからも利益を得られる人々において、亢進できる。

ＧＩＰ化合物、特にＧＩＰ類似体、場合により異種Ｃ末端テールなどのペプチドエンハンサーをさらに含んでなる長期間半減期ＧＩＰハイブリッド（例えばＤＰＰ−ＩＶ切断抵抗性（Ｄ−Ａｌａ２、Ｎ−アセチルまたはＮ−ピログルタミル類似体などの）、および有益な心血管作用を提供することで知られる他のホルモンモジュールを含んでなるＧＩＰハイブリッドが、心血管疾患および関連病態を処置するために有用である。本明細書において実証されるとおりＧＩＰ化合物は心収縮力（ｄＰ／ｄｔ）を増加させ、血圧を低下させ（例えば急性血管拡張により）、収縮期圧を低下させ、拡張期圧を低下させるとともに、心細胞に対する有益な直接作用を提供できる。ＧＩＰ化合物はまた、代謝作用、例えばグルコース降下、インスリン分泌、β細胞増殖を介して、心機能も改善する。同様に心血管系に対し提供される直接作用により、ＧＩＰ化合物は驚くべきことに治療上さらにより有益である。

従って、本明細書に提供されるのは、治療的に有効量のＧＩＰ化合物を、かかる処置を必要とする患者に、単独または心血管への利益を提供する別の薬剤を伴ってのいずれかで投与することにより、心血管疾患および病態を処置、予防または軽減する方法である。本明細書全体を通じ考察される他の病態と同様、ＧＩＰ化合物は、別の薬剤と同時に、連続的にまたは交互に投与され得る。

従って、一実施形態において心血管疾患または病態は、高血圧症（第１期、第２期および第３期高血圧症、拡張期または収縮期を含む）、肺高血圧症、うっ血性心不全、心不全、一回拍出量低減、心筋症（拡張型、肥大型または拘束型）、心収縮力低下、心血管病態に付随する肺うっ血、肺および全身性水腫、心拍出量低下、異常左室機能、拡張期血圧異常、心収縮力低減に付随する腎不全、心血管リスク増加（例えば正常拡張期圧に伴う収縮期圧上昇に付随する、正常収縮期圧に伴う拡張期圧上昇に付随する、拡張期および収縮期圧上昇に付随する、平均動脈圧上昇に付随する）および非虚血性または虚血性心組織変性（心筋梗塞由来など）である。一実施形態においてこれらの疾患および病態に付随する死亡率または罹患率のいずれかまたは双方が低減される。

処置を必要とする患者としては、糖尿病である（例えば糖尿病性心筋症に罹患している）、肥満、集中治療を受けている、手術を受けている、またはそれらの組み合わせにある者、もしくはその他の正常な者が挙げられる。患者はかかる疾患または病態を有するリスクを有しているか、もしくはその恐れがある。例えば、さらなる心不全を予防する必要がある心筋梗塞後患者が本明細書の方法から利益を得られる。

疾患または病態、例えば、心血管疾患または病態の予防は、疾患または病態の開始を予防するステップ、その開始を遅延するステップ、その進行または進展を予防するステップ、その進行または進展を緩徐するステップ、その進行または進展を遅延するステップ、およびその進行を進行期からより進行していない段階に逆進させるステップを含む。

一実施形態において本方法はかかる疾患または病態の発病を処置または遅延するステップを提供する。例えば、収縮性傷害は一回拍出量を低下させ得ることで、次にはうっ血性心不全を誘起し得る。それゆえ一実施形態において心不全を処置するステップは、心収縮力低下、異常拡張期コンプライアンス、一回拍出量低減、高血圧、肺うっ血、および心拍出量低下を、限定なしに含む、心不全が根底にある病態の任意の１つまたは複数を処置するステップを参照する。

一実施形態において、変力反応を誘発する、血圧を低減する、拡張期圧を低減する、拡張期圧を低減する、血管拡張を増加させるための方法、または上記の任意の組み合わせが、グルコース降下、インスリン分泌、またはβ細胞増殖などの、ＧＩＰに随伴する有益な代謝作用を伴い、または伴わず提供され、かかる所望の有益な作用を提供するための治療的に有効量のＧＩＰ化合物の投与することを含んでなる。これらの方法は、かかる利益を必要とする患者において、心収縮力増加、血圧低下、拡張期圧低下、拡張期圧低下、血管拡張増加、または上記の組み合わせにより軽減され得る病態または障害の処置に有用である。

変力化合物は変力効果を誘発する化合物であり（例えば、心臓の収縮力を増加させる）、例えば、うっ血性心不全の処置に有用であるとして認知されている。うっ血性心不全は、先進工業国における最も一般的な死因および身体障害の１つであり、約５０％の５年死亡率を有する（「Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」、第９版 ＭｃＧｒａｗ Ｈｉｌｌ、ニューヨーク、８０９−８３８頁）。米国心臓協会（ＡＨＡ：Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）により確立されるとおりの基準、テストおよび指針が、本明細書中で考察される心血管疾患および病態の診断に好適である。

ＧＩＰ化合物は、実質的な血圧の同時上昇を伴わない、所望の陽性変力効果を示す。心不全または心血管疾患もしくは病態を患う対象におけるかかる血圧変化は心機能のさらなる悪化を引き起こし得る。実際に本明細書において実証されるとおり、ＧＩＰ化合物は血圧または血圧変化率を低下させるよう機能し得る。

利用可能な変力薬に伴う問題は、変力性で、作用の急速な発現を伴い、作用の長期持続時間で（速成耐性の不在下での、持続的効果を含む）、毒性（治療量に対する毒の高割合）が低く、悪心効果が不在または低く、および簡便な（非静脈内）投与経路である治療の必要性、および望ましさを説明する。ＧＩＰ化合物はこれらの利益を提供できる。

本発明のＧＩＰ化合物、特にエキセンディンテール（例えば化合物Ｇ）などのペプチドエンハンサーを備えるＤＰＰ−ＩＶ耐性ＧＩＰ類似体を含んでなるＧＩＰハイブリッドのさらに有益な作用は、食欲減退効果の欠落または低減および悪心効果の不在または比較的僅かな悪心効果から生じ、これは全体を通じて考察される患者集団に重要であり得る。

同様に提供されるのは、集中治療室（ＩＣＵ）への入院が確実であるほど重症であるとともに抗または非異化治療からの利益が所見される者として例示される、危篤状態の患者を処置する方法であり、かかる処置を必要とする患者に治療的に有効量のＧＩＰ類似体またはハイブリッドを、単独で、または別の有益な薬剤とともに投与することを含んでなる。理論に限定されることなく、本方法は、これらの患者に利益をもたらすことが意図され、ここでＧＩＰアゴニスト類似体およびハイブリッドの効果は、インスリン／グルコース注入に付随する危険および複雑性なしに、および報告によれば一部のグルカゴン様ペプチド−１アゴニストの仕様に付随する副作用なしに、インスリン分泌を刺激するとともに集中的なインスリン治療（ＧＩＫ治療；グルコース−インスリン−カリウム）に付随する利益をもたらす。さらに、ＧＩＰは、食物の消化に応答したグルコースレベルの単純な間接的調節に加え、患者の代謝状態に好都合に影響を与え得ることが今日観察されている。従ってＧＩＰ化合物は危篤状態の患者において生じる死亡率および罹患率を低減するために有用である。

本明細書において実証されるとおりＧＩＰ化合物はグルコース降下、インスリン分泌および／またはβ細胞増殖などの有益な代謝効果を提供する。ＧＩＰ化合物はまた、心収縮力（ｄＰ／ｄｔ）を増加させること、血圧を低減させること（例えば急性血管拡張により）、および収縮期圧を低下させること、拡張期圧を低下させること、および心細胞に対し有益な直接作用を提供することにより、心機能も改善する。多くの危篤状態の患者は心血管疾患または病態を有するか、もしくはそのリスクがあるか、もしくはそれにより複雑化することから、これらの心血管作用は追加的な利益を提供できる。同様に心血管系に対し直接作用を提供することにより、ＧＩＰ化合物には、驚くことに、付加的な治療価値を有する。

従って、本明細書に提供されるのは、治療的に有効量のＧＩＰ化合物を、単独または所望の利益を提供する別の薬剤を伴ってのいずれかで、かかる処置を必要とする危篤状態の患者に投与することにより、救命救急の病態および疾患を処置、予防または軽減する方法である。本明細書全体を通じて考察される他の病態と同様、ＧＩＰ化合物は、別の薬剤と同時に、連続的にまたは交互に投与され得る。

「集中治療室」とは危篤状態の患者が処置される病院の一部であり得るとともに、当然ながら公式に「集中治療室」という名前を有しなくともよい。ＩＣＵもまた、療養所、診療所、例えば、私立診療所、または同様のものを、同一または同様の活動がそこで実施されているのであれば、含む。

用語「危篤状態の患者」とは、疾患または傷害により単一または複数の生命を脅かす急性臓器系不全を持続している、もしくはそれを持続する危険性のある患者、手術されているとともに合併症を併発している場合の患者、および重要臓器を先週中に手術されたか、もしくは先週中に大手術を受けた患者であり得る。危篤状態の患者とは、重要臓器の補助が必要で（人工呼吸または透析等を伴い機械的に、または変力物質または昇圧剤などを伴い薬理学的のいずれかで）、それなしには生存できないであろう患者であり得る。語句「救命救急」、「集中治療」および「危篤状態」は互換的に使用される。危篤状態の患者とは一般的に不安定な代謝状態にある者である。この不安定な代謝状態、例えば異化状態は、基質代謝における変化の結果であり得、一部の栄養の相対的欠乏症および／または脂肪および筋肉の双方の酸化増加（例えば消耗）、望ましくないタンパク分解加速、高血糖ならびに高濃度の血清トリグリセリドおよび他の脂質を導き得る。危篤状態の患者の非限定的な例は、心臓手術、脳手術、胸部手術、腹部手術、血管手術、または移植術を必要とする患者、もしくは脳外傷、呼吸不全、重症疾患多発ニューロパシー、多発外傷または重度火傷を負う患者、または人工呼吸されている患者である。

従って、一実施形態において救命救急疾患または病態は、医学的、外科的（例えば外傷）または冠動脈の医療として分類されるとともに、さらに敗血症および呼吸器の医療として分類され得る。特に興味深いのは、敗血症性ショックまたは心筋梗塞などの、ＧＩＫ治療が正当であろうものの分類である。

異化変化（例えば、体重の減少）は危篤状態の患者にとって有害危険因子である。ＩＣＵへのほとんどの入院が何らかの形態でカロリーを送達する静脈ラインを受けるにもかかわらず、ＩＣＵにおける栄養補給についてのカナダの試験は、典型的には、１日の所要量の５８％のみが供給され、かつ２６％のみが非経口栄養を受け取ったことを報告した。それゆえ体重減少などの異化効果の予防または軽減を必要とする危篤状態の患者が本明細書に提供されるとおりの治療的に有効量のＧＩＰ化合物を投与され、異化作用を予防または軽減する方法が提供される。処置を必要とする危篤状態の患者としては、非糖尿病患者（糖尿病または前糖尿病を有するとしては診断されない）、糖尿病者、前糖尿病者、および／または肥満者である患者が挙げられる。患者は、示される疾患または病態を有し得る、もしくは有する危険性があり得る。

ＧＩＰ化合物の使用により、ＧＩＫ様の利益を誘起する際にＧＬＰ−Ｉに付随するリスクを最小化または回避できる。胃排出の緩徐化は、例えば、その動態を変えることによって、経口薬の送達を複雑化し得るとともに、栄養の取り込みを減少させ得る；例えば、ＧＬＰ−Ｉアゴニスト、アミリンアゴニスト、ＣＣＫアゴニスト、およびセクレチンアゴニストは、胃排出を緩徐化する。本明細書に示されるとおり、治療の範囲内で、ＧＩＰ化合物の用量は胃排出を緩徐しないか、または弱い効果のみを示すとともに、任意のイベントにおいてＧＬＰ１およびエキセンディン４よりはるかに少ない。典型的にかかる効果が選択的アミリンアンタゴニスト、例えばプラムリンチドで阻止されたことは、該効果がアミリンのβ細胞分泌増大の間接的結果であったことを示し、アミリンはこれまで同定された胃排出の最も強力な内在性インヒビターである。ＧＩＰ投与はこのように胃排出の直接的阻害には付随しない。重要なことには、ＧＩＰそれ自体はマウスにおいて急性的に食物摂取量を阻害しないことが本明細書に示されている。同様にＧＩＰは食餌誘発性肥満マウスにおける体重減少を引き起こさない。ＧＩＰ類似体ハイブリッド０６０１ＧＩＰ３７９４も然りである。さらにＧＩＰが、体重および肥満の減少に付随するＧＬＰ−Ｉアゴニストに比べ脂肪節約効果を発揮することが報告された。この脂肪節約効果はおそらく脂肪細胞中の抗脂肪分解効果、またはリポタンパク質リパーゼの促進、インスリンシグナル伝達の増幅、および／または脂肪酸の脂肪細胞脂質への取り込み増加などの効果に起因する。興味深いことに、０６０１ＧＩＰ３７９４は、体重の同時減少なしに体タンパク質の増加を伴い体脂肪割合に軽微な減少を提供したことから、体組成が影響を受けたことを示している。体のエネルギー量の減少が救命救急における悪い予後を予測する一方、体のエネルギー量の貯蔵が有益な予後を促進することは十分に認知されている。体組成の改善を伴う、または伴わない、食欲不振誘発効果低下の不在、悪心減少の不在および／または体重減少の不在または低減は、危篤状態の患者など、異化効果を被る患者において有利である。ＧＩＰ受容体ｍＲＮＡは心組織中で検出されているにもかかわらず、心内でのホルモン結合は今日まで検出されていない。しかしながら、本明細書に示されるとおりＧＩＰは心筋細胞に結合するとともにそれを活性化し、かつ生体内で陽性変力効果を示す。腎不全、特に急性腎不全の処置に関しては、ループ利尿薬および浸透圧利尿薬の使用などによって尿量を達成するアプローチにより尿流量を亢進する試みにもかかわらず乏尿であり続ける患者においては、心収縮力を増加させる変力薬による介入が一般的に試みられている。それゆえ考察されるとおりＧＩＰ化合物は、易感染性心筋、および腎不全などの特定の他の病態を伴う、もしくはその危険性がある患者において、そのインスリン分泌作用とは無関係に、さらなる利益を提供する。さらに本方法は、心筋の保持を提供する治療的に有効量のＧＩＰ化合物を、それを必要とする患者に投与するステップを含み、さもなければ異化状態において萎縮する傾向がある。

従って、一実施形態において救命救急患者は、重病、敗血症、外傷後、手術後、ショック後、昏睡患者、ストレス誘発性高血糖（例えば血管イベント後）、脳卒中、心筋梗塞、急性腸間膜虚血、呼吸困難、人工呼吸器依存、腎不全、うっ血性心不全、水腫、冬眠心筋、心筋症（虚血性、糖尿病性）、ＢＮＰ低下、駆出機能障害、高血圧症、ポリニューロパシー、虚血／再灌流傷害（例えば血栓溶解療法後、心臓手術後）、器官床の組織保護、心筋梗塞（死亡率、機能、総体症状）、急性冠症候群（安定／不安定狭心症、非Ｑ波梗塞、ＥＣＧ陽性）、伝導または律動の障害、乳頭機能障害、および／または肺水腫に付随する異化変化の疾患または病態を有する。例えば、一実施形態において本方法は、手術前または手術後異化変化を含む、かかる疾患または病態を減弱する、寛解させる、または低減するステップを含んでなり、それらのＧＩＰ化合物を必要とする患者に投与することを含んでなる。ＧＩＰ化合物は治療上の利益、例えばＡＰＡＣＨＥスコアの低減、死亡率の低減、入院日数の低減、再入院の必要性の低減、入院費用の低減として例えば計測される利益を提供するよう設計される。

一実施形態においては、血流感染、敗血症または敗血症性ショックの発症を予防する、または減少させるための、救命救急に付随する罹患率を低減するための、救命救急に付随する死亡率（例えば院内死亡率）を低減するための、遷延性炎症の発症を予防する、または減少させるための、急性腎不全および／または腎代償療法の発生を予防する、または減少させるための、救命救急ポリニューロパシーの発症を予防する、または減少させるための、抗生物質の使用を低減するための、細胞の免疫介在性破壊の発症を予防する、または減少させるための、炎症および／または炎症反応マーカーにおける障害の可能性を低減するための、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）の発症を予防する、または減少させるための、赤血球輸血量を低減するための、ストレス誘発性高血糖を低減するための、胆汁うっ滞から保護するための、侵襲的処置の必要性を低減するための、神経内膜水腫の発症を予防する、または減少させるための、透析または血液ろ過を減少させるための、重要臓器系補助の必要性を低減または除去するための、通常の経腸経路を通じて少なくとも約３分の１のカロリー必要量を可能にするための、多臓器不全のリスクまたは可能性を低減するための、敗血症または敗血症性ショックに付随する多臓器不全のリスクまたは可能性を低減するための、機械的換気補助の使用を低減するための、腎機能パラメータ障害の可能性を低減するための、高ビリルビン血症の可能性を低減するための、または、本明細書に記載される他の救命救急病態の１つまたは複数の発症を処置、予防または軽減もしくは低減するための、それを必要とする危篤状態の患者の処置方法であり、治療的に有効量のＧＩＰ化合物を投与することを含んでなる。さらなる実施形態において投与は、正常血糖、血糖降下、インスリン分泌、本明細書中で考察されるとおりの心血管上の利益、異化効果の低減、またはそれらの任意の組み合わせを実現する。

救命救急患者としては、呼吸困難に罹患する者を挙げることができ、ここで患者は肺機能障害の結果として呼吸に困難を有する。患者は、酸素補給で調節し得る、もしくはし得るとは限らない、異なる程度の低酸素血症を呈し得る。呼吸困難が、肺炎、胃内容吸引、肺挫傷、脂肪塞栓症、溺水、吸入傷害、高地浮腫および再灌流性肺水腫などからの直接的肺傷害による、または敗血症、ショックおよび頻回輸血に伴う重症外傷、心肺バイパス、薬物過量投与、および急性膵炎からの間接的肺傷害による肺機能障害患者において起こり得る。危篤状態の患者は慢性低酸素血症に付随する肺障害を有し得るが、これは結果として肺高血圧症と呼ばれる肺循環内圧の上昇をもたらし得る。危篤状態の患者は肺性心を有し得るが、これは肺動脈および心臓の右室における遷延性高血圧により引き起こされる心臓の右側の不全である。危篤状態の患者は急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）または慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を有し得るが、これとしては、同様に呼吸困難を引き起こす、肺気腫および慢性気管支炎が挙げられる。

別の実施形態において救命救急患者はインスリン抵抗性などのグルコース代謝障害を伴う、だが顕性糖尿病ではない者、ならびに何らかの理由で消化管を通じ栄養を受け入れることができない患者である。かかる患者としては、手術患者、昏睡患者、ショック状態の患者、胃腸疾患患者、消化ホルモン疾患患者、および同様の者が挙げられる。特に、肥満患者、アテローム硬化症患者、血管疾患患者、妊娠糖尿病患者、肝硬変などの肝疾患患者、末端肥大症患者、コルチゾール処置またはクッシング病などのグルコルチコイド過剰患者、外傷、事故および手術などの後に起こるであろうものなどの対抗制御的ホルモン活性化患者、高トリグリセリド血症患者および慢性膵炎患者は、患者が低血糖または高血糖にかかることなく、望ましくない異化変化を低減しながら、および／また心血管上の利益を提供しながら、本発明に従い容易かつ好適に栄養を与えられ得る。

一実施形態において、単独での、または他の薬剤を伴うＧＩＰ化合物の投与は、危篤状態の患者（集中治療を必要とする）における罹患率もしくは死亡率または彼らがＩＣＵに滞在する時間を低減する。罹患率の低減とは、危篤状態の患者が追加的な疾病、病態、または症状を発症するであろう可能性を低減する、または追加的な疾病、病態、または症状の重症度を低減することを意味する。例えば罹患率低減は菌血症もしくは敗血症または多臓器不全に付随する合併症の発症率を低下させることにより実現され得る。

これらの指標は異常血糖者に限定される必要はないとともに、正常血糖が実現されることも必要としない。いずれもインスリン分泌性機序、またはインスリン分泌増加への応答能を有する人に制限されない。ＧＩＰ耐性が２型糖尿病において報告されているにもかかわらず、ＧＩＰのインスリン分泌刺激効果に対する耐性は、異常血糖に誘発される急性ストレスを伴う者を含め、危篤状態の患者の特徴であるとは予期されていない。インスリン分泌の正常グルコース依存性刺激は危篤状態の患者の大部分で起こるであろうとともに、ＧＩＰに対し耐性を示すそれらの患者において有効性は、より高用量のＧＩＰまたは本明細書に開示されるＧＩＰ類似体およびハイブリッドの使用に伴い達成され得る。

このように一実施形態において、インスリン分泌刺激反応を誘発する、抗または非異化効果を提供する（例えば異化効果を低減する）、もしくは本明細書中で考察される心血管上の利益の任意の１つを提供する方法、または上記の任意の組み合わせが提供され、かかる所望の有益な作用を提供するため治療的に有効量のＧＩＰ化合物の投与を含んでなる。これらの方法は、好ましくは異化効果の低減と併せて、かかる利益を必要とする危篤状態の患者において、かかる効果により軽減され得る救命救急病態または障害の処置に有用である。

ＧＩＰ化合物としては、ＧＩＰならびにＧＩＰ類似体およびハイブリッド、特に本明細書に記載されるとおりの新規ＧＩＰ類似体、長期間半減期ＧＩＰハイブリッド（例えばＤＰＰ−ＩＶ切断抵抗性（Ｄ−Ａｌａ２、Ｎ−アセチルまたはＮ−ピログルタミル類似体など）が挙げられ、場合により非相同Ｃ末端テールなどのペプチドエンハンサー、および救急または集中治療を受けている患者に有益な利益を提供することで知られる少なくとも１個のホルモンモジュールを含んでなるＧＩＰハイブリッドをさらに含んでなる。例えば、特に有用な本発明のＧＩＰ化合物は、エキセンディンテール（例えば化合物Ｇ）などのペプチドエンハンサーを備えるＤＰＰ−ＩＶ耐性ＧＩＰ類似体を含んでなるＧＩＰハイブリッド、またはＧＩＰ類似体およびアミリンファミリーまたはサケカルシトニンホルモンモジュールを含んでなるＧＩＰハイブリッドであり、これらは望ましいグルコース降下、インスリン分泌刺激および／または心血管上の利益を維持する間のそれらの食欲減退効果の欠如または低減により追加的に有益である。

一実施形態においてＧＩＰ化合物の投与は非経口栄養に付随する問題を低減する。非常に頻繁に、健常な代謝の人に対してさえも、高血糖を誘起することなく所望の量のグルコースを注入することができない。これは救命救急患者において悪化し得る。ＧＩＰ化合物の存在下での非経口栄養状態の間のインスリン分泌は、血漿グルコースの増加がＧＩＰ化合物なしより少なくなるよう制御され得る。それゆえその他より多量のグルコースが２４時間にわたり送達され得る。非経口栄養患者に見られるカロリー不足はこのようにより一層充足され得る。従って、提供されるのは、非食事性栄養向けの方法であって、非経口経路により非経口栄養を必要とする患者に、炭水化物、アミノ酸、脂質、遊離脂肪酸、モノまたはジグリセリド、グリセロールおよびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される栄養上有効量の１つまたは複数の栄養；およびＧＩＰ化合物を投与するステップを含んでなり、ここで栄養の投与は患者において血液１デシリットル当たり約８０〜１８０ｍｇのグルコースの血糖レベルを生じさせるとともに、投与速度は患者１人１日当たり約１０００ｇまでのグルコースまたはその同等物が送達されるよう計算される。さらなる実施形態において患者は通常の経腸経路を通じカロリー必要量の少なくとも約３分の１を、通常の経腸経路を通じカロリー必要量の少なくとも約半分を、または通常の経腸経路を通じカロリー必要量の少なくとも約３分の２を受け取る。栄養源が炭水化物である時、炭水化物源は１リットル当たり約２重量％〜約５０重量％のグルコースまたはリットル当たりのその同等の濃度で存在し得る。さらなる実施形態において栄養代謝の亢進は、グルコース代謝障害患者、手術患者、昏睡患者、ショック状態の患者、胃腸疾患患者、消化ホルモン疾患患者、肥満患者、アテローム硬化症患者、血管疾患患者、妊娠糖尿病患者、肝疾患患者、肝硬変患者、グルコルチコイド過剰患者、クッシング病患者、外傷または疾患後に起こる対抗制御的ホルモン活性化患者、高トリグリセリド血症患者、または慢性膵炎患者における、非経口経路の、栄養上有効量の１つまたは複数の栄養またはそれらの任意の組み合わせおよび１つまたは複数のインスリン分泌刺激ペプチドを介して達成される。いまださらなる実施形態において非食事性経路を介して亢進された非経口栄養を必要とする患者は救命救急患者である。

救命救急使用および非経口栄養亢進使用向け一実施形態において、ＧＩＰ化合物は持続静脈内注入により投与され２００ｍｇ／ｄｌ未満の、または８０〜１５０ｍｇ／ｄｌの範囲の、または８０〜１１０ｍｇ／ｄｌの範囲の血糖レベルを実現する。例えば、ＧＩＰ化合物は血漿グルコースを１デシリットル当たり約１６０〜１８０ミリグラムの「腎閾値」未満に維持するため投与され得る。高血糖を患っていない患者もまた、ＧＩＰ化合物により提供される追加的抗異化および心血管上の利益を考慮して処置され得る。

本明細書中で考察されるとおり、様々な経路による急性および慢性の双方の投与が救命救急使用向けおよび非経口栄養の亢進用に企図される。救命救急使用向け一実施形態において、ＧＩＰ化合物は約０．１〜１００ｐｍｏｌ／ｋｇ／分の間、約０．１〜５０ｐｍｏｌ／ｋｇ／分の間、約０．５〜３０ｐｍｏｌ／ｋｇ／分の間、約０．１〜１０ｐｍｏｌ／ｋｇ／分の間、約０．５〜５ｐｍｏｌ／ｋｇ／分の間、または約１．０〜３．０ｐｍｏｌ／ｋｇ／分の間の速度で持続的に注入される。本明細書において考察されるとおり、ＧＩＰ化合物はまた、例えばミクロスフェアまたはゲルマトリクスを含んでなる除放性製剤を介しても提供され得、および／または、経皮下、経鼻、静脈内または他の経路を介し、個別的または付加的投薬量を介しても投与され得る。ＧＩＰ化合物は、手術などの救命救急の開始の前、最中および／または後に投与され得る。

ＧＩＰ、ＧＩＰ類似体、新規ＧＩＰ類似体またはＧＩＰハイブリッド、またはそれらの誘導体の治療的有効量は、患者の性別、体重および年齢、血糖の調節不能の重症度、血糖を調節できない根本原因、グルコースまたは別の炭水化物源が同時に投与されるかどうか、投与経路および生体利用能、体内持続性、製剤および効力を限定なしに含む、因子の数に依存するであろう。所望の臨床結果を実現するべくＧＩＰ化合物の投与の用量および速度を設定することは通常の医師の技術範囲内である。

ポリペプチド産生および精製
本明細書に記載されるポリペプチドは、当該技術分野において知られた標準的組換え技術または化学的ペプチド合成技術を使用して、例えば、自動または半自動ペプチド合成機、またはその双方を使用して調製されてもよい。

本発明のポリペプチドは溶液中または固体支持体上で従来技術に従い合成され得る。かかる方法は、例えば、本明細書、およびそれらの全体が参照により本明細書に援用される、米国特許第６，６１０，８２４号明細書および米国特許第５，６８６，４１１号明細書および米国特許出願第４５４，５３３号明細書（１９９９年１２月６日出願）に記載される。様々な自動合成機が市販されているとともに既知のプロトコルに従い使用され得る。例えば、スチュワートおよびヤング（Ｓｔｅｗａｒｔ ａｎｄ Ｙｏｕｎｇ）、「Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、第２版、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（１９８４年）；タム（Ｔａｍ）ら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０５：６４４２頁（１９８３年）；メリフィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３２：３４１−７頁（１９８６年）；およびバラニーおよびメリフィールド（Ｂａｒａｎｙ ａｎｄ Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）、「Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、グロスおよびメイエンホファー（Ｇｒｏｓｓ ａｎｄ Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ）編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク、１−２８４頁（１９７９年）を参照されたい。固相ペプチド合成は自動ペプチド合成機（例えば、モデル４３０Ａ、アプライド・バイオシステムズ社（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．）、フォスター・シティ、カリフォルニア州）で、ＮＭＰ／ＨＯＢｔ（オプション１）システムおよびｔＢｏｃまたはＦｍｏｃ化学反応を使用して（「Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｕｓｅｒ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ＡＢＩ ４３０Ａ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ」、バージョン１．３Ｂ １９８８年７月１日、第６節、４９−７０頁、アプライド・バイオシステムズ社（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）、フォスター・シティ、カリフォルニア州を参照）、キャッピングを伴い実行されてもよい。ペプチドはまた、アドバンスド・ケムテック・シンセサイザー（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｃｈｅｍ Ｔｅｃｈ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ）（モデルＭＰＳ３５０、ルーイビル、ケンタッキー州）を使用して構築されてもよい。ペプチドはＲＰ−ＨＰＬＣ（調製用および分析用）により、例えば、ウォーターズ・デルタ・プレップ（Ｗａｔｅｒｓ Ｄｅｌｔａ Ｐｒｅｐ）３０００システムおよびＣ４、Ｃ８、またはＣ１８調製カラム（１０μ、２．２×２５ｃｍ；バイダック（Ｖｙｄａｃ）、ヘスペリア、カリフォルニア州）を使用して精製されてもよい。ポリペプチドは「ネイティブ化学ライゲーション」などのコンバージェント法、およびその変化形により合成され得、ここで然るべき直交性反応末端を備える２個以上のペプチド断片が未変性アミド結合形成に連結される。新しく形成されたペプチドはさらに長いポリペプチドを作るべくさらに連結され得る。個々の出発ペプチドは所望のとおり誘導体化され得るか、もしくはライゲーションステップの後に誘導体化され得る。

ペプチド類似体が、パイオニア（Ｐｉｏｎｅｅｒ）連続フローペプチド合成機（アプライド・バイオシステムズ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ））でＰＡＬ−ＰＥＧ−ＰＳ樹脂（アプライド・バイオシステムズ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ））を使用して０．２ｍｍｏｌ／ｇ（０．２５ｍｍｏｌｅスケール）の負荷で合成された。Ｆｍｏｃアミノ酸（４．０ｅｑ、１．０ｍｍｏｌ）残基が４．０ｅｑのＨＢＴＵ、４．０ｅｑのＨＯＢＴ、８．０ｅｑのＤＩＥＡを使用して活性化され、および１時間樹脂に結合させた。Ｆｍｏｃ基はジメチルホルムアミド中の２０％（ｖ／ｖ）ピペリジンを伴う処置により取り除かれた。ペプチドの固体支持体からの最終的な脱保護および切断が試薬Ｂ（９３％ＴＦＡ、３％フェノール、３％水および１％トリイソプロピルシラン）を伴う樹脂の２〜３時間の処置により実施された。切断されたペプチドはｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルを使用して沈殿させ、遠心分離によりペレット状にし、および凍結乾燥させた。ペレットは水中（１０〜１５ｍＬ）に再溶解され、Ｃ−１８カラムおよび０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリル／水勾配を使用する逆相ＨＰＬＣを介してろ過および精製された。精製された産物は凍結乾燥されるとともにＥＳＩ−ＬＣ／ＭＳおよび分析用ＨＰＬＣにより解析され、純粋であること（＞９８％）が実証された。大部分の結果は全て、計算値と一致した。

あるいは、ペプチドは、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ（登録商標）ペプチド合成機（プロテイン・テクノロジーズ社（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）、ウォバーン、マサチューセッツ州）でリンク（Ｒｉｎｋ）アミド樹脂（ノババイオケム（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）、サンディエゴ、カリフォルニア州）を使用して０．０５０〜０．１００ｍｍｏｌで０．４３〜０．４９ｍｍｏｌ／ｇの負荷で構築された。Ｆｍｏｃアミノ酸（アプライド・バイオシステムズ社（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）５．０ｅｑ、０．２５０〜．５００ｍｍｏｌ）残基が１−メチル−２−ピロリジノン中に０．１０Ｍの濃度で溶解された。全ての他の試薬（ＨＢＴＵ、ＨＯＢＴおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）が０．５５Ｍのジメチルホルムアミド溶液として調製された。次にＦｍｏｃ保護アミノ酸が、ＨＢＴＵ（２．０ｅｑ、０．１００〜０．２００ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（１．８ｅｑ、０．０９０〜０．１８ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２．４ｅｑ、０．１２０〜０．２４０ｍｍｏｌ）を使用して、２時間、樹脂結合アミノ酸に結合された。最後のアミノ酸結合後、ペプチドはジメチルホルムアミド中の２０％（ｖ／ｖ）ピペリジンを使用して１時間脱保護された。ペプチド配列が完了すると、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ（登録商標）ペプチド合成機がプログラムされ樹脂を切断する。ペプチドの樹脂からのトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）切断が、９３％ＴＦＡ、３％フェノール、３％水および１％トリイソプロピルシランからなる試薬混合物を使用して実行された。切断されたペプチドはｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルを使用して調製され、遠心分離によりペレット状にして凍結乾燥させた。ペレットは酢酸中に溶解され、凍結乾燥させた後水中に溶解され、１８カラムおよび０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリル／水勾配を使用する逆相ＨＰＬＣを介してろ過および精製された。分析用ＨＰＬＣが使用されてペプチドの純度が評価され、および特性がＬＣ／ＭＳおよびＭＡＬＤＩ−ＭＳにより確認された。

活性タンパク質は容易に合成され得るとともに、次に反応性ペプチドを同定するべく設計されるスクリーニングアッセイにおいて選別され得る。

本発明の類似体およびハイブリッドポリペプチドはあるいは当該技術分野において知られた組換え技術により産生されてもよい。例えば、サムブルック（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）ら、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ（１９８９年）を参照されたい。組換え技術により産生されるこれらのＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドはポリヌクレオチドから発現させてもよい。当業者は、かかるＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドをコードする、ＤＮＡおよびＲＮＡを含むポリヌクレオチドが、コドン利用の縮重を考慮に入れ、例えばＧＩＰ、ＧＬＰ１、アミリンといった野生型ｃＤＮＡから得られてもよく、または所望のとおり操作されてもよいことは理解するであろう。これらのポリヌクレオチド配列は微生物宿主中でｍＲＮＡの転写および翻訳を促進するコドンを組み込んでもよい。かかる工業的配列は当該技術分野において知られた方法に従い容易に構築され得る。例えば、国際公開第８３／０４０５３号パンフレットを参照されたい。上記のポリヌクレオチドはまた、場合によりＮ末端メチオニル残基をコードし得る。本発明に有用な非ペプチド化合物は当該技術分野において知られた方法により調製されてもよい。例えば、リン酸含有アミノ酸およびかかるアミノ酸を含むペプチドが当該技術分野において知られた方法を使用して調製されてもよい。例えば、バートレットおよびランデン（Ｂａｒｔｌｅｔｔ ａｎｄ Ｌａｎｄｅｎ）、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１４：３５６−７７頁（１９８６年）を参照されたい。

様々な発現ベクター／宿主系が利用されＧＩＰポリペプチドコード配列を含有および発現してもよい。これらとしては、組換えバクテリオファージ、プラスミドまたはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換される細菌などの微生物；酵母発現ベクターで形質転換される酵母；ウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系；ウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）で形質転換されるか、もしくは細菌発現ベクター（例えば、ＴｉまたはｐＢＲ３２２プラスミド）で形質転換される植物細胞系；または動物細胞系が挙げられるが、これらには限定はされない。組換えタンパク質産生に有用である哺乳動物細胞としては、ＶＥＲＯ細胞、ＨｅＬａ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞系、ＣＯＳ細胞（ＣＯＳ−７など）、ＷＩ３８、ＢＨＫ、ＨｅｐＧ２、３Ｔ３、ＲＩＮ、ＭＤＣＫ、Ａ５４９、ＰＣ１２、Ｋ５６２および２９３細胞が挙げられるが、これらには限定はされない。タンパク質の組換え発現用例示的プロトコルは本明細書に記載される。

かかるごとく、本発明によって提供されるポリヌクレオチド配列は、新しくかつ有用なウイルスおよびプラスミドＤＮＡベクター、新しくかつ有用な形質転換および形質移入原核および真核宿主細胞（培養液中で成長した細菌、酵母、および哺乳動物細胞を含む）、および本ＧＩＰポリペプチドの発現能を有するかかる宿主細胞の新しくかつ有用な成長培養用方法を生成するのに有用である。本明細書のＧＩＰ類似体またはハイブリッドをコードするポリヌクレオチド配列は、ＧＩＰまたは他のハイブリッドの成分ペプチドホルモンの産生不足が軽減されるであろう、またはかかるレベルの上昇の必要性に合致するであろう場合の例において、遺伝子治療に有用であり得る。

本発明はまた本ＧＩＰポリペプチドの組換えＤＮＡ産生方法も提供する。提供されるのは、ＧＩＰポリペプチドをかかるＧＩＰポリペプチドをコードする核酸を含む宿主細胞から産生する方法であって、（ａ）かかるＤＮＡ分子の発現を促進する条件下でかかるＧＩＰポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む前記宿主細胞を培養するステップ；および（ｂ）かかるＧＩＰポリペプチドを採取するステップを含んでなる。

宿主細胞は原核生物または真核生物であってもよいとともに、細菌、哺乳動物細胞（チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、サル細胞、ベビーハムスター腎細胞、癌細胞または他の細胞など）、酵母細胞、および昆虫細胞が挙げられる。

組換えタンパク質の発現用哺乳動物宿主系もまた、当該技術分野において周知である。宿主細胞株は、発現タンパク質をプロセシングする、またはタンパク質活性を提供するのに有用であろう特定の翻訳後修飾を生じさせる特定の能力から選択されてもよい。ポリペプチドのかかる修飾としては、アセチル化、カルボキシ化、グリコシル化、リン酸化、脂質化およびアシル化が挙げられるが、限定はされない。翻訳後プロセシングは、「プレプロ」をタンパク質から切断するが、正確な挿入、折り畳みおよび／または機能に重要である。ＣＨＯ、ＨｅＬａ、ＭＤＣＫ、２９３、ＷＩ３８、および同様のものなどの異なる宿主細胞は、かかる翻訳後活性の特異的細胞機構および特徴的機序を有するとともに、正確な修飾および外来タンパク質導入のプロセシングを確実にするべく選択されてもよい。

あるいは、酵母系が用いられて本発明のＧＩＰポリペプチドを生成してもよい。ＧＩＰポリペプチドｃＤＮＡのコード領域はＰＣＲにより増幅される。酵母プレ−プロ−αリーダー配列をコードするＤＮＡは酵母ゲノムＤＮＡからＰＣＲ反応においてα接合因子遺伝子のヌクレオチド１−２０を含む１つのプライマーおよびこの遺伝子のヌクレオチド２５５−２３５と相補的な別のプライマーを使用して増幅される（クルヤンおよびヘルスコヴィッツ（Ｋｕｒｊａｎ ａｎｄ Ｈｅｒｓｋｏｗｉｔｚ）、Ｃｅｌｌ、３０：９３３−４３頁（１９８２年））。プレ−プロ−αリーダーコード配列およびＧＩＰポリペプチドコード配列断片が酵母アルコール脱水素酵素（ＡＤＨ２）プロモーターを含むプラスミドに連結されることで、プロモーターは成熟ＧＩＰポリペプチドに融合するプレ−プロ−α因子からなる融合タンパク質の発現を指図する。ローズおよびブローチ（Ｒｏｓｅ ａｎｄ Ｂｒｏａｃｈ）、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．１８５：２３４−７９頁、ゴーデル（Ｇｏｅｄｄｅｌ）編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、サンディエゴ、カリフォルニア州（１９９０年）により教示されるとおり、ベクターは、クローニング部位の下流のＡＤＨ２転写ターミネーター、酵母「２−ミクロン」複製起点、酵母ｌｅｕ−２ｄ遺伝子、酵母ＲＥＰ１およびＲＥＰ２遺伝子、大腸菌β−ラクタマーゼ遺伝子、および大腸菌複製起点をさらに含む。β−ラクタマーゼおよびｌｅｕ−２ｄ遺伝子は、それぞれ細菌および酵母における選択を提供する。ｌｅｕ−２ｄ遺伝子はまた酵母中のプラスミドのコピー数増加も促進してより高レベルの発現を誘発する。ＲＥＰ１およびＲＥＰ２遺伝子はプラスミドコピー数の調節に関わるタンパク質をコードする。

前の段落に記載されるＤＮＡコンストラクトは既知の方法、例えば、リチウム酢酸処置を使用して酵母細胞に形質転換される（スチームズ（Ｓｔｅａｍｓ）ら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．１８５：２８０−９７頁（１９９０年））。ＡＤＨ２プロモーターは成長培地中のグルコースの消耗に際し誘導される（プライス（Ｐｒｉｃｅ）ら、Ｇｅｎｅ ５５：２８７頁（１９８７年））。プレ−プロ−α配列は融合タンパク質の細胞からの分泌に効果を及ぼす。付随して、酵母ＫＥＸ２タンパク質はプレ−プロ配列を成熟ＧＩＰポリペプチドから切断する（ビッター（Ｂｉｔｔｅｒ）ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：５３３０−４頁（１９８４年））。

本発明のＧＩＰポリペプチドはまた、市販の発現系、例えば、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ）発現系（インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、サンディエゴ、カリフォルニア州）を使用して、製造者の指示に従い、酵母中で組換え発現されてもよい。この系もまたプレ−プロ−α配列に依存して分泌を指図するが、インサートの転写はメタノールによる誘導に際しアルコールオキシダーゼ（ＡＯＸ１）プロモーターにより駆動される。分泌されたＧＩＰポリペプチドは、例えば、ＧＩＰポリペプチドを細菌および哺乳動物細胞上清から精製するために使用される方法により酵母成長培地から精製される。

あるいは、ＧＩＰポリペプチドをコードするｃＤＮＡはバキュロウイルス発現ベクターｐＶＬ１３９３（ファーミンジェン（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）、サンディエゴ、カリフォルニア州）にクローニングされる。このＧＩＰ化合物コーディングベクターは次に、製造者の指示（ファーミンジェン（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ））に従い使用され、スポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞をｓＦ９タンパク質フリー培地中で感染させるとともに組換えタンパク質を産生する。タンパク質はヘパリン−セファロースカラム（ファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ピスカタウエイ、ニュージャージー州）および連続分子サイジングカラム（アミコン（Ａｍｉｃｏｎ）、ビバリー、マサチューセッツ州）を使用して培地から精製されるとともに濃縮され、かつＰＢＳ中で再懸濁される。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析により単一のバンドが示されるとともにタンパク質サイズを確認し、およびプロトン（Ｐｒｏｔｏｎ）２０９０ペプチドシーケンサーでのエドマン法によりそのＮ末端配列を確認する。

例えば、予測される成熟ＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドをコードするＤＮＡ配列は所望のプロモーターおよび、場合により、リーダー配列を含むプラスミドにクローニングされてもよい（例えば、ベッター（Ｂｅｔｔｅｒ）ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１−３頁（１９８８年）を参照）。このコンストラクトの配列は自動化されたシーケンシングにより確認されてもよい。プラスミドは次に、大腸菌、株ＭＣ１０６１に、細菌のＣａＣｌ_２インキュベーションおよび熱ショック処置を用いる標準的手順を使用して形質転換される（サムブルック（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）ら、上記）。形質転換細菌はカルベニシリンが補給されたＬＢ培地中で成長させるとともに、発現タンパク質の産生が好適な培地中での成長により誘発される。存在するのであれば、リーダー配列は成熟ＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドの分泌に影響を及ぼすであろうとともに、分泌中に切断されるであろう。分泌された組換えタンパク質は細菌培地から本明細書に記載される方法により精製される。

あるいは、本発明のＧＩＰポリペプチドは昆虫系で発現させてもよい。タンパク質発現用昆虫系は当該技術分野において周知である。１つのかかる系において、オートグラファカリフォルニア核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）がスポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞中またはトリコプルシア（Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ）幼虫において外来遺伝子を発現するベクターとして使用される。ＧＩＰポリペプチドコード配列はポリヘドリン遺伝子などのウイルスの非必須領域にクローニングされるとともに、ポリヘドリンプロモーターの制御下に配置される。ＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドの挿入が成功すると、ポリヘドリン遺伝子は不活性になるであろうとともにコートタンパク質のコートが欠如した組換えウイルスを産生するであろう。組換えウイルスは次に、ＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドが発現するＳ．フルギペルダ（ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞またはトリコプルシア（Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ）幼虫を感染させるため使用される（スミス（Ｓｍｉｔｈ）ら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．４６：５８４頁（１９８３年）；エンゲルハルト（Ｅｎｇｅｌｈａｒｄ）ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：３２２４−７頁（１９９４年））。

別の例において、ＧＩＰポリペプチドをコードするＤＮＡ配列はＰＣＲにより増幅されてもよいとともに然るべきベクター、例えば、ｐＧＥＸ−３Ｘ（ファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ピスカタウエイ、ニュージャージー州）にクローニングされてもよい。ｐＧＥＸベクターは、該ベクターによりコードされる、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）を含んでなる融合タンパク質、およびベクターのクローニング部位に挿入されるＤＮＡ断片によりコードされるタンパク質を産生するべく設計される。ＰＣＲ用プライマーは、例えば、然るべき切断部位を含むよう生成されてもよい。組換え融合タンパク質は次に、融合タンパク質のＧＳＴ部分から切断されてもよい。ｐＧＥＸ−３Ｘ／ＧＩＰ類似体ポリペプチドコンストラクトは大腸菌ＸＬ−１ブルー細胞（ストラタジーン（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、ラ・ホーヤ、カリフォルニア州）に形質転換されるとともに、個々の形質転換体は単離され、および３７℃でＬＢ培地（カルベニシリンを補給された）中、波長６００ｎｍの光学密度０．４で成長させ、後に４時間、０．５ｍＭイソプロピルβ−Ｄ−チオガラクトピラノシド（シグマ・ケミカル社（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．）、セントルイス、ミズーリ州）の存在下でさらなるインキュベーションが続く。個々の形質転換体由来のプラスミドＤＮＡは精製されるとともに自動シーケンサーを使用して部分的に配列決定され、適切な方向で遺伝子インサートをコードする、所望のＧＩＰポリペプチドの存在が確認される。

融合タンパク質は、細菌中で不溶性封入体として産生されると予測されるが、次のとおり精製されてもよい。細胞が遠心分離により収集される；０．１５ＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのトリス、ｐＨ８、１ｍＭのＥＤＴＡ中で洗浄される；および０．１ｍｇ／ｍｌのリゾチーム（シグマ・ケミカル社（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．））で１５分間、室温で処理される。ライセートは超音波処理により清澄化されるとともに、細胞デブリは遠心分離により１０分間、１２，０００ｘｇでペレット状にされる。融合タンパク質含有ペレットは５０ｍＭのトリス、ｐＨ８、および１０ｍＭのＥＤＴＡ中で再懸濁され、５０％のグリセロール上に層状に重ねられ、および３０分間６０００ｘｇで遠心分離される。ペレットはＭｇ^＋＋およびＣａ^＋＋のない標準リン酸緩衝食塩水溶液（ＰＢＳ）中で再懸濁される。融合タンパク質は変性ＳＤＳポリアクリルアミドゲル中で再懸濁されたペレットを分画することによりさらに精製される（サムブルック（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）ら、上記）。ゲルはタンパク質を可視化するため０．４ＭのＫＣｌ中に浸漬され、切除されるとともにＳＤＳ無しゲル泳動緩衝液中で電気溶出される。ＧＳＴ／ＧＩＰポリペプチド融合タンパク質が細菌中で可溶タンパク質として産生される場合、ＧＳＴ精製モジュール（ファルマシア・バイオテック（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ））を使用して精製されてもよい。

融合タンパク質は消化に供されＧＳＴを成熟ＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドから切断してもよい。消化反応（２０〜４０μｇの融合タンパク質、２０〜３０単位のヒトトロンビン（０．５ｍｌのＰＢＳ中４０００Ｕ／ｍｇ（シグマ（Ｓｉｇｍａ））は１６〜４８時間、室温でインキュベートされるとともに変性ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上に載せられ、反応産物を断片化する。ゲルは０．４ＭのＫＣｌ中に浸漬され、タンパク質バンドを可視化する。ＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドの期待分子量に対応するタンパク質バンドの特性が、自動シーケンサー（アプライド・バイオシステムズ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）モデル４７３Ａ、フォスター・シティ、カリフォルニア州）を使用する部分アミノ酸配列解析により確認され得る。

本発明のＧＩＰポリペプチドの組換え発現の特に例示的な方法において、２９３細胞はＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチドｃＤＮＡを含むプラスミドをｐＣＭＶベクター（５’ＣＭＶプロモーター、３’ＨＧＨポリＡ配列）およびｐＳＶ２ネオ（新耐性遺伝子を含む）中にリン酸カルシウム法により同時形質移入されてもよい。一実施態様において、ベクターは形質移入前にＳｅａｌで直線化されるべきである。同様に、組み込まれる新遺伝子を備える同様のｐＣＭＶベクターを使用する代替のコンストラクトが使用され得る。安定な細胞系は０．５ｍｇ／ｍＬのＧ４１８（ネオマイシン様抗生物質）を含む成長培地の希釈を１０〜１４日間制限することにより単一の細胞クローンより選択される。細胞系はＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチド発現についてＥＬＩＳＡまたはウエスタンブロットによりスクリーニングされるとともに、高発現細胞系は大規模な成長に展開される。

形質転換細胞は長期間、高収量タンパク質産生に使用されることが好ましいとともに、かかるものとして安定な発現が望ましい。かかる細胞が選択可能なマーカーを所望の発現カセットとともに含有するベクターで形質転換されると、細胞は選択培地に移される前に富栄養培地中で１〜２日間成長することが可能となり得る。選択可能なマーカーは選択に対する耐性を供与するよう設計されるとともに、その存在により導入配列を成功裏に発現する細胞の成長および回収が可能となる。安定に形質転換された細胞の耐性凝集物は細胞に適切な組織培養技術を使用して増殖され得る。

多くの選択系が組換えタンパク質産生用に形質転換された細胞を回収するため使用されてもよい。かかる選択系としては、ｔｋ−、ｈｇｐｒｔ−またはａｐｒｔ−細胞中の、それぞれ、ＨＳＶチミジンキナーゼ、ヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼおよびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子が挙げられるが、限定はされない。また、抗代謝産物耐性が、メトトレキサートに対する耐性を付与するｄｈｆｒ、ミコフェノール酸に対する耐性を付与するｇｐｔ、アミノグリコシドに対する耐性を付与するｎｅｏ、また、クロルスルフロンに対する耐性を付与するＧ４１８、および、ハイグロマイシンに対する耐性を付与するｈｙｇｒｏの選択の根拠として使用され得る。有用であり得る追加的な選択可能遺伝子としては、細胞がトリプトファンの代わりにインドールを利用することを可能にするｔｒｐＢ、またはヒスチジンの代わりにヒスチノールを利用することを可能にするｈｉｓＤが挙げられる。形質転換体の同定の可視指標を与えるマーカーとしては、アントシアニン、β−グルクロニダーゼおよびその基質、ＧＵＳ、およびルシフェラーゼおよびその基質、ルシフェリンが挙げられる。

本発明のＧＩＰポリペプチドの多くは自動ペプチド合成および組換え技術の双方の組み合わせを使用して産生されてもよい。例えば、本発明のＧＩＰポリペプチドはペグ化による欠失、置換、および挿入を含む修飾の組み合わせを含んでもよい。かかるＧＩＰポリペプチドは段階的に産生されてもよい。第１の段階において、欠失、置換、挿入、およびそれらの任意の組み合わせの修飾を含む中間体ＧＩＰポリペプチドが、記載されるとおりの組換え技術により産生されてもよい。次に本明細書に記載されるとおりの任意選択の精製段階の後、中間体ＧＩＰポリペプチドは然るべきペグ化試薬（例えば、ネクター・トランスフォーミング・セラピュティクス製（ＮｅＫｔａｒ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、サンカルロス、カリフォルニア州）での化学的修飾を通じペグ化され、所望のＧＩＰポリペプチドを産生してもよい。当業者は上述の手順が、欠失、置換、挿入、誘導体化、および当該技術分野において知られた修飾の他の手段より選択される修飾の組み合わせを含むＧＩＰポリペプチドに適用するべく生成されてもよいとともに本発明により意図されることは理解するであろう。

本発明により生成されるＧＩＰポリペプチドを精製することが望ましくあり得る。ペプチド精製技術は当業者に周知である。これらの技術は、あるレベルで、細胞環境の未精製分画からポリペプチドおよび非ポリペプチド分画に関する。ポリペプチドを他のタンパク質から分離すると、当該ポリペプチドはクロマトグラフィーおよび電気泳動技術を使用してさらに精製され、部分的または完全な精製（または均質性のための精製）を実現してもよい。特に純粋ペプチドの調製に好適な分析方法は、イオン交換クロマトグラフィー、排除クロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動法、および等電点電気泳動法である。ペプチドを精製する特に有効な方法は、逆相ＨＰＬＣに続き、液体クロマトグラフィー／質量分析（ＬＣ／ＭＳ）およびマトリックス支援レーザー脱離イオン化法（ＭＡＬＤＩ）質量分析による精製された産物のキャラクタリゼーションである。追加的な純度の確認はアミノ酸分析を判定することにより得られる。

本発明の特定の態様は、精製に、および詳細な実施形態においては、コードされたタンパク質またはペプチドの、実質的な精製に関する。本明細書において使用されるとき用語「精製されたペプチド」は、他の成分から単離可能な組成物を参照することが意図され、ここでペプチドはその天然に得られる状態と比べ任意の程度まで精製される。それゆえ精製されたペプチドはまた、自然発生し得る環境が存在しないペプチドも参照する。

一般に、「精製された」は、分画が様々な他の成分の除去に供されるとともに、その組成物がその発現される生物学的活性を実質的に保持するペプチド組成を参照するであろう。用語「実質的に精製された」が使用される場合、この表記は、ペプチドが組成物中の約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％またはそれ以上のペプチドを構成するなど、組成物中で主成分を形成する組成物を参照するであろう。

ペプチド精製における使用に好適な様々な技術は当業者に周知であろう。これらとしては、例えば、硫酸アンモニウム、ＰＥＧ、抗体、および同様のものを伴う沈殿；熱変性に続く、遠心分離；イオン交換、ゲルろ過、逆相、ヒドロキシルアパタイトおよび親和性クロマトグラフィーなどのクロマトグラフィー法；等電点電気泳動法；ゲル電気泳動法；およびかかるならびに他の技術の組み合わせが挙げられる。一般的に当該技術分野において周知であるとおり、様々な精製ステップを行う順番は変更され得ること、または特定のステップは省略され得るとともに、それでもなお結果として実質的に精製されたタンパク質またはペプチドの調製に好適な方法をもたらすことが考えられる。

ペプチドが常にその最も精製された状態で提供されるための一般的な要件はない。実際に、実質的により低度に精製された産物が特定の実施形態において有用性を有するであろうことが企図される。部分的精製が、より少ない精製ステップを組み合わせで使用することにより、または同一の一般的精製スキームの異なる形態を利用することにより、達成されてもよい。例えば、ＨＰＬＣ機器を利用して実施されるカチオン交換カラムクロマトグラフィーが、一般的に結果として低圧クロマトグラフィー装置を利用する同一の技術より大きな「倍数」の精製をもたらすであろうことは理解される。より低度の相対的精製を呈する方法がタンパク質産物の総回収率、または発現タンパク質の活性の維持において、利点を有し得る。

場合によりかかるＧＩＰポリペプチドは本方法において得られる他の成分から精製および単離してもよい。ポリペプチドの精製方法は米国特許第５，８４９，８８３号明細書に見出される。これらの文献は、Ｇ−ＣＳＦ組成物の単離および精製用の具体的な例示的方法を記載し、これは本発明のＧＩＰポリペプチドを単離および精製するにおいて有用であり得る。これらの特許の開示を所与として、当業者がＧＩＰポリペプチドを所与の原料から精製するため使用され得る多数の精製技術を十分に承知していることは明らかである。

同様に、イオン交換および免疫親和性クロマトグラフィーの組み合わせが用いられて本発明の精製されたＧＩＰポリペプチド組成物を産生してもよいことが企図される。

医薬組成物
本発明はまた、治療的または予防的に有効量の少なくとも１個の本発明のＧＩＰポリペプチド、またはその薬学的に許容される塩を、ＧＩＰポリペプチドの送達に有用な薬学的に許容される希釈剤、保存剤、可溶化剤、乳化剤、アジュバントおよび／または担体と共に含んでなる医薬組成物にも関する。かかる組成物は、様々な緩衝剤内容物の希釈剤（例えば、酢酸、クエン酸、酒石酸、リン酸、トリス−ＨＣｌ）、ｐＨおよびイオン強度；界面活性剤および可溶化剤などの添加剤（例えば、ソルビタンモノオレエート、レシチン、プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）、トゥイーン（Ｔｗｅｅｎ）２０＆８０、ポリソルベート（Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）２０＆８０、プロピレングリコール、エタノール、ＰＥＧ−４０、ドデシル硫酸ナトリウム）、抗酸化剤（例えば、モノチオグリエルコール、アスコルビン酸、アセチルシステイン、亜硫酸塩（亜硫酸水素塩およびメタ重亜硫酸塩）、保存剤（例えば、フェノール、メタ−クレゾール、ベンジルアルコール、パラベン（メチル、プロピル、ブチル）、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、チメルソール、フェニル水銀塩、（酢酸塩、ホウ酸塩、硝酸塩）、および等張化剤／膨張性薬剤（グリセリン、塩化ナトリウム、マンニトール、スクロース、トレハロース、デキストロース）；ポリ乳酸、ポリグリコール酸等の高分子化合物の微粒子製剤への材料の取り込みを、またはリポソームを伴って、含んでもよい。かかる組成物は本ＧＩＰ類似体ポリペプチドの物理的状態、安定性、生体内放出速度、および生体内クリアランス速度に影響するであろう、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」１４３５−７１２頁、第１８版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、イーストン、ペンシルベニア州（１９９０年）を参照されたい。

場合によりＧＩＰまたは新規ＧＩＰ類似体は第２の活性薬剤と調合される（または補助治療においてそれとともに投与される、またはそれと共有結合されるか、もしくは融合される）ことができる。かかる薬剤はＧＩＰ効果を補足または亢進するであろう活性を含んでなることができる。一実施形態においてかかる薬剤はグルコース降下または抗糖尿病活性を有する。別の実施形態において薬剤は胃排出を阻害または低減する。他の実施形態において薬剤は、骨密度増加、食物摂取量低減、または同様のものなどの、任意の他の望ましい活性を含んでなることができる。

一般に、本ＧＩＰ類似体およびハイブリッドポリペプチドは、ＧＩＰおよび／または個々の成分ポリペプチド（ハイブリッドの場合）がそれらの薬理学的特性の観点において有用であるのと同様に有用であろう。一般的に、ＧＩＰポリペプチドは代謝病態および障害の処置または予防のため末梢投与される。特に、本発明の化合物は、グルコース降下薬、インスリン分泌刺激薬、胃分泌の低減または阻害、効果的な体重減少、栄養利用性低減、食物摂取量低減、食欲抑制、救命救急（集中）治療適用における死亡率および罹患率の改善、記憶改善および他の神経学的利益の提供、骨密度の増加または維持、効果的な心血管上の利益、心保護の提供、および本明細書中で考察されるとおりの効果的な他の治療上の利益としての活性を保有する。別の実施形態において、例示的使用は、糖尿病または糖尿病関連病態および障害、肥満、および心血管疾患ならびに病態の処置のためかかるハイブリッドポリペプチドを投与することである。本ＧＩＰポリペプチドは、注射用製剤、経口投与、経鼻投与、経肺投与、局所投与、または当業者が認知するであろうとおりの他の種類の投与を含め、末梢投与用に調合されてもよい。より詳細には、本発明に従う医薬組成物の投与は、標的組織がその経路を介して利用可能である限り、任意の一般的経路を介してもよい。例示的実施形態において、医薬組成物は任意の従来の末梢法により、例えば、静脈内、皮内、筋肉内、皮下、乳房内、腹腔内、髄腔内、球後、肺内（例えば、時限放出）により；経口、舌下、経鼻、頬側、気管内、経肛門、経腟、経粘膜、経肺または経皮送達により、坐薬により、または特定の部位での外科的移植により、対象に導入されてもよい。一実施形態において投与は非経口（静脈内、皮内、腹腔内、筋肉内および皮下を含む）である。

処置はある期間にわたり単一の用量または複数の用量からなってもよい。本発明の組成物の制御された連続的放出もまた企図される。

補足的活性成分もまた組成物中に組み込まれ得る。医師による使用向けに、化合物は、ＧＩＰまたは新規ＧＩＰ類似体のある量を含む投薬量単位形態で、別の治療薬、例えば、グルコース降下薬、胃排出調節薬、脂質降下薬、または食物摂取阻害薬を伴い、または伴わず、提供されるであろう。例えば血糖のコントロールまたは胃排出のコントロールおよび胃排出が有益に緩徐または調節される病態における使用向けＧＩＰまたは新規ＧＩＰ類似体の治療有効量は、食後血糖レベルを減少させる量であり、好ましくは約８または９ｍＭ以下まで、もしくは血糖レベルが所望どおり低減されるような量である。糖尿病またはグルコース不耐性患者において、血漿グルコースレベルは正常人より高い。かかる人において、食後血糖レベルの有益な低減または「平滑化」が得られてもよい。当業者により認識されるであろうとおり、治療薬の有効量は、患者の健康状態、得られるべき血糖レベルもしくは胃排出の阻害レベル、または所望の食物摂取量低減レベル、および他の因子を含め、多くの因子に伴い変化するであろう。ある場合において、ＧＩＰポリペプチドおよび少なくとも１個の他の活性薬剤、例えば、エキセンディンまたはＧＬＰ１またはそれらのアゴニスト、アミリン、アミリンアゴニスト類似体、ＣＣＫまたはＣＣＫアゴニスト、もしくはレプチンまたはレプチンアゴニストまたは小分子カンナビノイドＣＢ１受容体アンタゴニスト、β−ヒドロキシステロイド脱水素酵素−１インヒビター、シブトラミンおよび糖尿病または肥満の処置用に市販される他の薬物などの、別の食物摂取量低減、血漿グルコース降下または血漿脂質改変薬剤を、単一の組成物または投与用溶液と共に、提供することが簡便であるだろう。全体を通じて考察されているとおり、ＧＩＰポリペプチドは少なくとも１個の他のかかる活性薬剤を含んでなるＧＩＰハイブリッドであってもよい。他の場合において、追加的薬剤を前記ＧＩＰポリペプチドと別個に投与することがより有利であり得る。

一実施形態においてＧＩＰポリペプチドは、アミリンもしくはアミリン類似体アゴニスト、サケカルシトニン、コレシストキニン（ＣＣＫ）またはＣＣＫアゴニスト、レプチン（ＯＢタンパク質）またはレプチンアゴニスト、エキセンディンまたはエキセンディン類似体アゴニスト、またはＧＬＰ−ＩもしくはＧＬＰ−Ｉ類似体アゴニストを含んでなる他の化合物および組成物を含むが、限定はされない、長期間または短期間の作用を呈して血糖を降下させる、胃排出を低減または阻害する、胃分泌を低減または阻害する、または栄養利用性を低減する１つまたは複数の他の化合物および組成物と、別個に、または共に投与されてもよい。好適なアミリンアゴニストとしては、例えば、［^{２５，２８，２９}プロ−］ヒトアミリン（「プラムリンチド」としても知られるとともに、米国特許第５，６８６，５１１号明細書および米国特許第５，９９８，３６７号明細書に記載される）が挙げられる。使用されるＣＣＫは好ましくはＣＣＫオクタペプチド（ＣＣＫ−８）、より好ましくはその硫酸化型である。レプチンは、例えば、（ペリモンテール（Ｐｅｌｌｅｙｍｏｕｎｔｅｒ）ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６９：５４０−３頁（１９９５年）；ハラス（Ｈａｌａａｓ）ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６９：５４３−６頁（１９９５年）；カンプフィールド（Ｃａｍｐｆｉｅｌｄ）ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６９：５４６−９頁（１９９５年））において考察される。好適なエキセンディンとしてはエキセンディン−３およびエキセンディン−４が挙げられるとともに、エキセンディンアゴニスト化合物としては、例えば、ＰＣＴ国際公開第９９／０７４０４号パンフレット、国際公開第９９／２５７２７号パンフレット、および国際公開第９９／２５７２８号パンフレットに記載されるものが挙げられる。好適な薬剤としてはまた、様々な抗糖尿病薬、例えばメトホルミン、スルホニル尿素、ＴＺＤも挙げられる。別の実施形態においてＧＩＰ類似体またはハイブリッド、例えば０６０１ＧＩＰ３７９４の、インクレチン模倣物、例えば、エクセナチドまたはリラグルチドを伴う併用療法が提供される。さらなる実施形態において準治療量のインクレチン模倣物が使用され、これはＧＩＰ化合物と併用される時、治療上の利益を提供する。

従って、一実施形態において、特に糖尿病者またはグルコース不耐性者などのグルコースレベル上昇に付随する病態を被る患者、より詳細には血漿グルコースレベルが正常人より高い２型糖尿病患者において、かかる個人におけるＧＩＰ治療は、ＧＩＰまたは新規ＧＩＰ類似体の投与の前またはそれと同時の食後血糖レベルの有益な低減または「平滑化」により利益をもたらすであろう。

２型糖尿病患者におけるグルコースレベル調節に効果的であることが示されているＧＬＰ−Ｉ、ＧＬＰ−Ｉ類似体およびエクセナチドなどの模倣物とは対照的に、ＧＩＰのインスリン分泌刺激効果は正常人と比較して糖尿病対象において有意に低減される。理論によって制約されないながら、ＧＩＰのインクレチン効果は持続性高血糖の間減弱される一方、ＧＩＰまたはその類似体は、糖尿病患者おいてグルコースコントロールが改善されると、これらの個人において健常対象におけるその作用と同様の効力を伴い作用するであろうことが考えられる。このように本発明に従えばＧＩＰ非感受性はそれを必要とする患者において、然るべき薬剤または手段によるグルコース降下または食後血糖レベルの低減もしくは「平滑化」を、グルコース降下を可能にする、またはさらに遷延させるであろうＧＩＰまたは新規ＧＩＰ類似体の投与の前またはそれと同時に、実現することにより低減され得る。一実施形態において薬剤または手段はＧＩＰ投与の少なくとも１日前に提供される。別の実施形態において薬剤または手段はＧＩＰ投与前に提供されるとともに十分なグルコース降下が観察される。

本明細書において述べられるとおり好適な薬剤としては、エクセナチド、メトホルミン、スルホニル尿素、またはそれらの組み合わせが挙げられる。主なグルコースコントロールのエンドポイントは当該技術分野において医師に周知の手段により計測され得る。１つの方法は単純に血糖レベルを食後に測定することである。もう１つは、当該技術分野において周知のとおりＨｂＡ１ｃレベルを計測することである。

特に好適な標的集団は、グルコース降下薬（エクセナチドなど）での処置中に正常グルコース濃度を達成できない患者である。ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）と呼ばれるある型のヘモグロビンが、グルコースがヘモグロビンに付着すると形成される。これは血糖レベルが高い時のみ起こる。ヘモグロビンＡ１ｃレベルは、例えば２〜３ヶ月にわたる、対象の過去の平均血糖値を計測するため使用され得る。非糖尿病者の正常ＨｂＡ１ｃ値はおよそ４．０〜６．２パーセントである。米国糖尿病協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）は、糖尿病からの合併症を最小化するため、糖尿病者についてこれが７パーセント未満であるべきことを推奨している。エクセナチドなどのグルコース降下治療にもかかわらず、かなりの数の患者がいまだＨｂ１Ａｃ上昇を伴ったままであり得る。結果的に、一実施形態においてＨｂＡ１ｃレベルが（グルコース降下薬での処置にもかかわらず）正常値、少なくとも７パーセント、少なくとも８パーセント、少なくとも９パーセントまたは少なくとも１０パーセントを上回ったままのかかる対象は、本発明のＧＩＰ治療および新規補助治療処置に好適な対象である。さらに別の実施形態においてＨｂ１Ａｃレベルは正常より高いが、６．５％以下、７％以下、７．５％以下、８．０％以下、８．５％以下、９．０％以下、９．５％以下、または１０％以下である。さらに別の実施形態において、Ｈｂ１Ａｃレベルの低減は単剤治療で正常レベルまで低減されないながら、好ましくは、本発明の新規補助治療ＧＩＰ投与または適用前に、処置前レベルから少なくとも１０パーセント、少なくとも２０パーセント、少なくとも３０、４０、５０、６０、７０、８０または少なくとも９０パーセント低減される。かかる患者においては、処置患者、例えば糖尿病患者における高血糖の低減（例えば、エクセナチドによるとき）がＧＩＰ非感受性を低減するよう患者を整えることから、ＧＩＰを伴う補助治療が本発明に従い指示される。２型糖尿病患者における慢性高血糖病態がＧＩＰのインスリン分泌刺激反応を減弱させる一方、エクセナチド処置の結果から生じる血糖コントロール改善は、例えば、膵β細胞のＧＩＰ刺激に対する応答性を回復するであろう。それゆえエクセナチド（または他のグルコース降下薬または、グルコースを降下させる、または胃排出を低減または阻害する薬剤または方法）を備える薬理学的用量のＧＩＰまたは新規ＧＩＰ類似体のＧＩＰ治療または新規補助治療（例えば同時投与、ＧＩＰファイブリッド、ＧＩＰ融合タンパク質）は糖尿病患者またはグルコース上昇に付随する病態を患う患者においてＧＩＰ感受性を実現するとともに所望の正常血糖を導くであろう。ＧＩＰにはＧＬＰ１の胃排出効果が欠如していることから、悪心が回避されてもよく、ひいてはＧＬＰ１より高用量のＧＩＰ投薬レジメンの使用が容認される。さらに別の実施形態において、ＧＩＰ治療または新規補助治療はＨｂ１Ａｃレベルを少なくとも正常レベル、または少なくとも１０パーセント、少なくとも２０パーセント、少なくとも３０、４０、５０、６０、７０、８０または少なくとも９０パーセントまで、処置前（ＧＩＰ治療前または新規補助治療前）レベルから低減するであろう。

いまださらなる実施形態において、ＧＩＰ治療または新規補助治療は少なくとも相加的に、および好ましくは相乗的に作用して、用量、投薬、総量、頻度または本明細書に述べられるとおりの別の薬剤に付随する処置の程度を低減できる。例えば、かかるＧＩＰまたは新規補助治療は結果として、総量、用量、投薬の頻度、または他の薬剤に付随する処置の長さにおける、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０または９０％の低減をもたらすことができる。薬剤は、エキセンディン−４などのグルコース降下薬、または糖尿病または本発明の方法および組成物から利益を得る他の病態用の任意の他の薬剤であり得る。

本発明のＧＩＰポリペプチドは、遊離塩基、または、界面活性剤（例えば、ソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（トゥイーン（Ｔｗｅｅｎ）２０）、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（トゥイーン（Ｔｗｅｅｎ）８０）、レシチン、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン共重合体（プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ））、ヒドロキシプロピルセルロース、）または錯体生成剤（例えば、ヒドロキシプロピル−ｂ−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−ｂ−シクロデキストリン（カプチソール（Ｃａｐｔｉｓｏｌ））、ポリビニルピロリドン）と好適に混合される水中の薬理学的に許容される塩の溶液としての投与用に調製されてもよい。薬剤的に許容される塩としては酸付加塩（タンパク質の遊離アミノ基で形成される）が挙げられるとともにこれは、例えば、塩酸またはリン酸などの有機酸、または酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸、および同様の酸などの有機酸で形成される。遊離カルボキシ基で形成される塩もまた、無機塩基、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、または水酸化第二鉄など、およびイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカインおよび同様のものなどの有機塩基に由来し得る。かかる生成物は当業者に周知の手順により容易に調製される。分散液もまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびそれらの混合物中および油中で調製され得る。通常の貯蔵および使用条件下で、これらの調剤は微生物の成長を予防するための保存剤を含む。

一実施形態において、本発明の医薬組成物は、例えば、注射または注入を介する、非経口投与に好適となるよう調合される。一実施態様において、ＧＩＰポリペプチドは水性担体中、例えば、約３．０〜約８．０のｐＨ、好ましくは約３．５〜約７．４、約３．５〜約６．０、約３．５〜約５．０または約３．７〜約４．７のｐＨの緩衝溶液中に懸濁される。有用な緩衝液としては、酢酸ナトリウム／酢酸、乳酸ナトリウム／乳酸、アスコルビン酸、クエン酸ナトリウム−クエン酸、重炭酸ナトリウム／炭酸、コハク酸ナトリウム／コハク酸、ヒスチジン、安息香酸ナトリウム／安息香酸、およびナトリウムリン酸、およびトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンが挙げられる。持続製剤または徐放性調剤「デポー」の形態が使用されることで、治療的に有効量の調剤が経皮注射または送達後血流中に何時間または何日にもわたり送達されてもよい。

注射可能な使用に好適な医薬組成物としては、滅菌水溶液または分散液および滅菌された注射可能な溶液または分散液の即時調製用滅菌粉末が挙げられる。全ての場合において、形態は無菌であるべきであるとともに容易に注射可能な程度まで流体であるべきである。製造および貯蔵の条件下において安定であることもまた本発明のＧＩＰポリペプチドにとって望ましいとともに、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対し保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、ソルビトール、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール、および同様のもの）、ジメチルアセトアミド、クレモルフォール（ｃｒｅｍｏｒｐｈｏｒ）ＥＬ、それらの好適な混合物、および油（例えば、大豆、ゴマ、ヒマシ、綿実、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、グリコフロール、トウモロコシ）を含む、溶媒または分散液培地であり得る。適正な流動性が、例えば、レシチンなどのコーティングの使用により、分散液の場合に必要とされる粒径の維持により、および界面活性剤の使用により維持され得る。微生物の作用の予防は、様々な抗細菌性抗真菌薬、例えば、メタクレゾール、ベンジルアルコール、パラベン（メチル、プロピル、ブチル）、クロロブタノール、フェノール、フェニル水銀塩（酢酸、ホウ酸、硝酸）、ソルビン酸、チメロサール、および同様のものによりもたらされ得る。多くの場合において、等張化剤（例えば、糖類、塩化ナトリウム）を含むことが好ましいであろう。注射可能な組成物の持続的吸収は組成物における吸収を遅延する薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）の使用によりもたらされ得る。

注射可能な滅菌溶液は、必要に応じて、活性化合物を必要とされる量で然るべき溶媒中に上記に列挙される様々な他の成分を伴い取り込むことにより調製されてもよく、ろ過滅菌が続く。一般に、分散液は様々な滅菌された活性成分を塩基性分散培地および上記に列挙されるものからの必要とされる他の成分を含有する滅菌媒体中に取り込むことにより調製される。注射可能な滅菌溶液用滅菌粉末の場合において、調製の例示的方法は、活性成分の粉末に加え任意の追加的な所望の成分を予め滅菌ろ過されたそれらの溶液から産出する真空乾燥および凍結乾燥技術である。

一般に、治療的または予防的に有効量の本ＧＩＰポリペプチドは、年齢、体重、およびレシピエントの疾患または代謝性病態もしくは障害の状態または重症度により決定されるであろう。例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」６９７−７７３頁を参照されたい。ワンおよびハンソン（Ｗａｎｇ ａｎｄ Ｈａｎｓｏｎ）、「Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ Ｓｔａｂｉｌｉｚｅｒｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｒｅｐｏｒｔ Ｎｏ．１０、補遺４２：２Ｓ（１９８８年）もまた参照されたい。典型的には、約０．００１μｇ／ｋｇ体重／日〜約１０００μｇ／ｋｇ体重／日の間の投薬量が使用されてもよいが、それ以上またはそれ以下が、技術のある医師が認めるであろうとおり、使用されてもよい。投薬は、製剤に応じて、１日１、２、３、４回またはそれ以上、または週に１回、月に１回、または３ヶ月に１回など、より少ない頻度であってもよいとともに、本明細書に記載されるとおりの他の組成物と併せてもよい。本発明は本明細書に引用される投薬量に限定されないことは留意されるべきである。

然るべき投薬量は関連する用量反応データと併せて確立された代謝性病態または障害レベルの測定用アッセイの使用を通じ確定されてもよい。最終的な投薬量レジメンは、薬物の作用を調整する因子、例えば、薬物の特異的活性、損傷の重症度および患者の応答性、年齢、病態、体重、性別および患者の食事、任意の感染の重症度、投与時間および他の臨床的因子を考慮して、主治医により決定されるであろう。試験が行われるとき、特異的疾患および病態用の然るべき投薬量レベルおよび処置の持続時間に関して、さらなる情報が現れるであろう。

有効量は典型的には、約０．５〜３０μｇ〜約５ｍｇ／日、好ましくは約１０〜３０μｇ〜約２ｍｇ／日およびより好ましくは約５〜１００μｇ〜約１ｍｇ／日、最も好ましくは約５μｇ〜約５００μｇ／日の範囲で、５０ｋｇの患者に対し、単一または分割用量および／または２、３、４回またはそれ以上の投与の、制御された連続的放出で投与されるであろう。一実施形態においてＧＩＰ化合物は、１日当たり約０．５μｇ〜約５ｍｇの用量を単一もしくは分割用量または制御された連続的放出で、または１用量当たり約０．０１μｇ／ｋｇ〜約５００μｇ／ｋｇで、より好ましくは約０．０５μｇ／ｋｇ〜約２５０μｇ／ｋｇ、最も好ましくは約５０μｇ／ｋｇ未満で、末梢投与される。

従って、例示的用量は１日に与えられるべき薬物の総量および１日に投与される投与回数から算出され得る。例えば、例示的用量は、約０．１２５μｇ／用量（０．５μｇの１日４回投与）〜約２ｍｇ／用量（２ｍｇの１日１回投与）の範囲であり得る。他の投薬量は約０．０１〜約１００μｇ／ｋｇ／用量の間であり得る。投与されるべき正確な用量は当業者により決定されてもよいとともに、特定の化合物の効力、ならびに年齢、体重および個人の病態に依存する。投与は、治療上の利益、例えば栄養利用性の抑制、食物摂取量、体重減少またはコントロール、血糖または血漿脂質の降下または調節、が所望である時はいつでも、例えば、症状の第１の徴候において、または肥満、真性糖尿病、またはインスリン抵抗性症候群の診断直後に、開始されるべきである。一実施形態においてＧＩＰ化合物は予防的に投与される。投与は任意の経路、例えば、注射、好ましくは皮下または筋肉内、経口、経鼻、経皮等によってもよい。特定の経路、例えば経口投与用投薬量は、低下する生体利用能を補うべく、例えば、約５〜１００倍だけ増量されてもよい。

一般に、ＧＩＰ化合物は、患者への投与のため、安定で安全な医薬組成物中に調合されてもよい。本発明の方法における使用に企図される医薬製剤は、およそ０．０１〜２０％（ｗ／ｖ）、好ましくは０．０５〜１０％のＧＩＰ化合物を含んでなってもよい。ＧＩＰ化合物は、約３．０〜約７．０の最終組成物のｐＨを可能とする、酢酸、リン酸、クエン酸またはグルタミン酸緩衝液中であってもよく、炭水化物または多価アルコールを等張性調整剤として、および場合により、ｍ−クレゾール、ベンジルアルコール、メチル、エチル、プロピルおよびブチルパラベンおよびフェノールからなる群より選択されるおよそ０．００５〜５．０％（ｗ／ｖ）の保存剤を含む。かかる保存剤は一般的に、調合されたペプチドが複数回使用の産物に含まれるのであれば、含まれる。本発明の詳細な実施形態において、本発明の医薬製剤は、例えば、本実施形態において、約０．０１％〜約９８％ｗ／ｗの間、または約１〜約９８％ｗ／ｗの間、または好ましくは８０％〜９０％ｗ／ｗの間、または好ましくは約０．０１％〜約５０％ｗ／ｗの間、またはより好ましくは約１０％〜約２５％ｗ／ｗの間のＧＩＰ化合物の濃度の範囲を含んでもよい。注射に十分な量の水が、溶液の所望の濃度を得るため使用されてもよい。本明細書に記載される医薬製剤は凍結乾燥されてもよい。例示的製剤は、ｐＨ４．２、浸透圧調整剤として９．３％スクロースを含む１０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝溶液中の１ｍｇ／ｍＬのＧＩＰ化合物であり得る。

一実施形態において、医薬製剤が非経口投与される場合、組成物は、０．１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日、好ましくは１μｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲をとるＧＩＰポリペプチドの用量を送達するような製剤である。例示的な１日の量は、下限が２、５、１０、２０、４０、６０または８０から上限が８０、１００、１５０、２００、または２５０までの範囲内にあってもよい。非経口投与は初期ボーラスに続く薬物製品の治療上の循環レベルを維持するための連続注入を伴い実行されてもよい。当業者は有効投薬量および投与レジメンを、優れた医療実践および個々の患者の臨床病態により決定されるとおり、容易に最適化するであろう。

一実施態様において、ヒトの処置のためのＧＩＰ化合物、ＧＩＰ類似体、誘導体またはハイブリッドのいずれの用量も、本明細書に示した用量のごとき同様の効果を導くためにマウスに用いた用量より約５〜約５０倍低いもので有り得る。さらなる実施態様において、ヒトについての用量は、マウスに用いたものより１０〜３０倍低いもの、または例えば、約３〜１０ｎｍｏｌ／ｋｇ／日で有り得る。別の実施態様において、ヒトにおける用量は、約０．１〜２０μｇ／ｋｇ／日で有り得、０．５〜１０μｇ／ｋｇ／日で有り得、１〜２μｇ／ｋｇ／日で有り得る。これらの量は、１日当たり単回または複数回の投薬あるいは徐放性送達のいずれかで達成し得る。例えば、週１回摂取ならば徐放性組成物は、本明細書に言及された因子に依存して、および熟練した実践者に知られたＧＩＰ化合物の約０．１〜１．０ミリグラムにて提供できる。月１回または２か月に１回投薬は、結果的に調節されるであろう。万一、患者のコンプライアンスを危うくするであろう吐き気が生じた場合、段階的に上昇させた用量計画が用いられ、実質的な吐き気を導かない低用量から開始して、治療に有効な用量が達成されるまで用量を増加させる。

投薬の頻度は薬剤および投与経路の薬物動態学的パラメータに依存するであろう。最適な医薬製剤は、投与経路および所望の投薬量に応じて当業者により決定されるであろう。例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、上記、１４３５−１７１２頁を参照されたい。かかる製剤は投与される薬剤の物理的状態、安定性、生体内放出速度および生体内クリアランス速度に影響し得る。投与経路に応じて、好適な用量は、体重、体表面積または器官サイズに従い計算されてもよい。然るべき処置用量を決定するために必要な計算のさらなる要件は日常的に当業者により不当な実験なしに、特に本明細書に開示される投薬量情報およびアッセイ、ならびに動物またはヒト臨床治験で観察される薬物動態学的データに照らして、行われている。

一実施形態において本発明の製剤は、本発明の活性成分（または本明細書に述べられる補助治療における使用に関する複数の活性成分）の送達能を少なくとも１時間の時間にわたり有する、液体、固体または半固体デポー、徐放性、または連続的放出製剤である。放出は２４時間から４ヶ月の期間にわたり起こることができる。かかる徐放性または長時間放出製剤は、ある実施形態において、活性成分を、遅溶解性ペプチド結晶（例えば、米国特許第６，３８０，３５７号明細書に開示されるなど）などの緩徐な溶解形態または製剤に、マトリクスに、または、例えば、腸内コーティングまたは遅溶解性コーティング（例えば、活性成分のコーティングされた顆粒）などのコーティングに含んでなることができる。徐放性マトリクスは一般的に生分解性ポリマー、非生分解性ポリマー、ワックス、脂肪質等であるとともに、当該技術分野において周知である（例えば、米国特許第６，３６８，６３０号明細書および関連特許、米国特許第６，３７９，７０４号明細書および関連特許を参照）。加えて、非経口制御放出送達は、高分子マイクロカプセル、マトリクス、溶液、インプラントおよびデバイスを形成するとともにそれらを非経口的にまたは外科的手段により投与することにより実現され得る。これらの投薬形態は典型的には、ポリマーマトリクスまたはデバイスへのペプチドの一部の封入によってより低い生体利用能を有するであろう（例えば、米国特許第６，３７９，７０４号明細書、米国特許第６，３７９，７０３号明細書、および米国特許第６，２９６，８４２号明細書を参照）。

一実施態様において、持続送達のためのＧＩＰ化合物、いずれかのＧＩＰ類似体、誘導体またはハイブリッドはマイクロカプセル化される。適当なポリマーマトリックスおよび賦形剤処方、ならびにそれらの調製方法は、例えば、２００５年１２月８日に公開されたＵＳ２００５２７１７０２に提供されている。そのマトリックスは、注射用微粒子として処方し得るか、または埋込み可能なデバイスとして設計し得る。生物学的に活性なＧＩＰ化合物の徐放性のためのかかる組成物は、その上、生物学的適合性ポリマー、ＧＩＰ化合物および糖を含む、好ましくはそれらから実質的になる。糖は、製造、貯蔵および使用中にペプチドを安定化できる。徐放性組成物は、徐放性組成物の合計重量の約０．１％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗのＧＩＰ化合物を含むことができる。ＧＩＰポリペプチドは、徐放性組成物の合計重量の約０．５％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗで存在できる。一実施態様において、ＧＩＰ化合物は、約２％〜５％で存在するであろう。一実施態様において、最初のバーストを最小化し、徐放性期間を増加させるために、徐放性組成物は低多孔度を有することができる。かかる実施態様において、徐放性組成物は、約０．１ｍＬ／ｇまたはそれ未満の合計ポア体積を有する。加えて、合計ポア体積は、０．０〜０．１ｍＬ／ｇおよび０．０１〜０．１ｍＬ／ｇ未満で有り得る。例えば、一実施態様において、合計ポア体積は、水銀侵入ポロシメトリー（ｍｅｒｃｕｒｙ ｉｎｔｒｕｓｉｏｎ ｐｏｒｏｓｉｍｅｔｒｙ）を用いて決定された約０．１ｍＬ／ｇまたはそれ未満である。糖は、徐放性組成物の合計重量の約０．０１％ｗ／ｗ〜約１０％ｗ／ｗで存在できる。一実施態様において、糖は、徐放性組成物の合計重量の約０．１％ｗ／ｗ〜約５％ｗ／ｗで存在する。別の実施態様において、薬物および賦形剤（群）の合計の組み合わせたパーセント重量は、約２〜約８％である。糖は、単糖類、二糖類、糖アルコールまたはその組合せから選択される。一実施態様において、糖は、スクロース、マンニトール、トレハロースおよびその組合せから選択される。いずれかの生物学的適合性の、生物分解性のポリマーを用い得るが、ポリマーは、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸 ｃｏ−グリコール酸）、ポリカプロラクトン、ポリカルボネート、ポリエステルアミド、ポリ無水物、ポリ（アミノ酸）、ポリオルトエステル、ポリシアノアクリレート、ポリ（ｐ ジオキサノン）、ポリ（シュウ酸アルキレン）、生物分解性ポリウレタン、そのブレンドおよびその共重合体よりなる群から選択できる。特に注目する一実施態様において、ポリマーは、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）を含み、さらに、５０：５０ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）であることができ、さらに、約０．３および０．５ｄＬ／ｇの間の固有粘度を有することができる。別の実施態様において、初期の放出を低下させ、望ましいＣｍａｘ−対−Ｃａｖｅ比を持つより長い持続性を提供するように機能する徐放性組成物が本明細書に記載された低多孔度を有する場合、追加の賦形剤が存在できる。かかる剤は、好ましくは、放出速度に対してほとんどまたは全く実質的な効果を有さない。かかる賦形剤は、製造、貯蔵または放出中の剤安定性を提供または増強するものを含む。適当な安定剤は、例えば、炭水化物、アミノ酸、脂肪酸および界面活性剤を含み、それは当業者に知られている。さらに、安定剤は、メチオニン、ビタミンＣ、ビタミンＥおよびマレイン酸のごとき「抗酸化剤」を含む。抗酸化剤は、安定化された水性処方の一部分として存在でき、そのポリマー相に添加できる。さらに、ｐＨ緩衝液を添加できる。緩衝液は、弱酸およびその酸の関連する塩、または弱塩基およびその塩基の塩のいずれかを含有する溶液である。緩衝液は、所望のｐＨを維持して、製造、貯蔵または放出のいずれかの工程中の処方を安定化できる。例えば、緩衝液は、一塩基性リン酸塩もしくは二塩基性リン酸塩またはその組合せあるいは重炭酸アンモニウムのごとき揮発性緩衝液であることができる。他の緩衝液は、限定されるものではないが、酢酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩および、グリシン、アルギニンおよびヒスチジンのごときアミノ酸を含む。緩衝液は、合計重量の約０％〜約１０％、または約１０、１５、２０、２５または３０ｍＭ未満で処方中に存在できる。

本明細書中で考察されるとおり当業者は、処置のための、特にグルコース上昇に付随する病態のための、およびさらには補助治療において使用される時の、本発明のＧＩＰまたは新規ＧＩＰ類似体の頻度、タイミングおよび用量を容易に決定できる。例えば目的の薬剤のグルコース降下効果時間の経過にわたる用量反応関係が最初に決定され、続いて他の薬剤によって選択される用量に関連する追加されるＧＩＰまたは新規ＧＩＰ類似体との用量反応関係が決定され得る。一例において２型糖尿病患者は、一晩絶食後の、無作為化された、プラセボ、および様々な量の薬剤の皮下注射に続き、処置および評価される。注射は標準化Ｓｕｓｔａｃａｌ（登録商標）食（７ｋｃａｌ／ｋｇ）の摂取の直前に与えられ、続く３００分間に頻繁な間隔で血漿グルコース試料の採取が続く。血糖反応は５時間の血漿グルコース濃度中の時間加重平均（±ＳＥ）変化として定量化され得る。グルコース降下効果についてのＥＤ_５０が決定されるとともに、食後血漿グルコース濃度を降下させる薬剤の然るべき用量が選択される。続いて、同様の試験において、この投薬量が患者に投与される一方、様々な用量のＧＩＰまたは新規ＧＩＰ類似体を投与することで、グルコース降下をさらに降下または遷延させるべく第１の薬剤と併せて作用するであろうＧＩＰの然るべき用量を決定する。

さらに、所望であれば、第１の薬剤がいつ、またはどのくらいの期間投与されたかに関連するＧＩＰ用量の投与のタイミングが調べられることで最適な投薬レジメンが同定される。例えば、ある用量のエクセナチドが１日目に与えられ、ＧＩＰの投与が２日目に、好ましくはエクセナチドのみの結果から生じるグルコース降下反応が観察されたうえで、続き得る。別の実施形態において、ＧＩＰ投薬を伴う代替的な薬剤投薬が提供される。薬剤はＧＩＰ投与と交互に１期間おきに投与されてもよい。期間は、１、２、３、４、５、６、または７日間、１、２、３、または４週間、または１、２、３、４、５または６ヶ月であり得る。期間は、薬剤投与後２日目のＧＩＰ投与およびＧＩＰ処置後７日目の薬剤投与など、変動し得る。持続放出製剤または方法が各場合において期間を延長するであろう。さらに、ＧＩＰまたは新規ＧＩＰ類似体はβ細胞新生治療または膵島またはβ細胞移植術を伴う（またはその休止後の）補助治療に提供され得、ここでβ細胞は数を増加させ、ひいては処置後のグルコース降下を提供する。結果的に、一実施形態においてかかる処置は、完全に正常血糖を作り出すわけではないが、とはいえ患者にグルコースレベルの十分な降下を提供し、これがＧＩＰに対する耐性を減弱することでさらに、またはより正常なグルコースレベルが食後に実現される。

一実施形態においてＧＩＰ投与の開始前少なくとも２４時間に薬剤は投与されるであろう、または本方法は適用されるであろう。より具体的には介在期間は、２４、３６、４８、６０または７２時間から４、５、６、７日間またはそれ以上まで、２、３、４、５、６週間またはそれ以上まで、または上記範囲内の時間または分単位の任意の特定の介在時間であり得る。あるいは、血糖レベルが、当該技術分野において知られた方法を使用して、薬剤の投与中および／または投与後に、グルコース降下薬の効果を計測するため当該技術分野において周知であろうとおり定期的または食後にモニタされ得る。ＧＩＰの投与は次に、その時またはそれ以降ＧＩＰまたは新規ＧＩＰ類似体が投与され得る、ＧＩＰに対する耐性の低減の指標となるある反応レベル、例えば血糖レベルを対象が示す時のいずれかに実施され得る。

本明細書中で考察されるとおり、ＧＩＰまたは新規ＧＩＰ類似体を伴う補助治療の別の実施形態において、治療は、十二指腸（または他のより遠位の栄養感知ＧＩＰ−セクレチン部位）までの栄養を緩徐化し、結果として薬剤または本方法の不在下と比較してグルコースレベルの降下をもたらす薬剤または本方法を含んでなる。さらに別の実施形態において補助治療は胃排出を遅延する薬剤または本方法を含んでなる。本明細書に記載されるなどの（例えば、グアーおよび食物繊維）、粘稠性減速剤に加え、薬剤は胃排出の薬理的減速剤を含むとともに、それにとって胃の緩徐化が生理的イベントである腸ホルモンを含む。かかる薬剤としては、アミリン（例えばプラムリンチド）のアゴニスト、ＧＬＰ１およびエキセンディン（例えばエクセナチド、ＮＮ２２１１、ＺＰ−１０、リラグルチド）のアゴニスト、ＣＣＫのアゴニスト、ＰＹＹのアゴニスト、セクレチンのアゴニスト、ＧＲＰのアゴニスト、ニューロメジンのアゴニスト、およびウロコルチンのアゴニストが挙げられる。さらなる実施形態としては、直接的または間接的に生理学的胃減速剤のアゴニストシグナル伝達を促進する薬剤がある。かかる薬剤としては、内在性胃減速剤の分泌促進物質、および、ジペプチジルジペプチダーゼインヒビターを含め、その分解酵素のインヒビター、または、特に腎臓における、そのクリアランスの他のインヒビターが挙げられる。他の実施形態としては、ＧＩＰ分泌細胞での栄養刺激の出現を遅延させる治療方針がある。例としては、消化分泌液（例えば胃酸、膵酵素、胆汁）の阻害またはかかる分泌液の消化効果の阻害（例えば酸中和、酵素阻害、胆汁酸隔離）を通じた消化機能の調節が挙げられる。消化分泌の阻害は、これを直接的に実現する薬剤（例えばソマトスタチン、アミリン、カルシトニン、ＰＹＹ）を介して、または内在性分泌促進経路を妨げる薬剤（例えば管腔ＣＣＫ放出因子）により、起こり得る。一実施形態において補助治療はより緩徐な胃排出およびより少ない栄養取り込みを実現する、例えばＧＩＰ分泌細胞での栄養の流動を低減する方法を含んでなる。１つのかかる実施形態としては、胃バイパス手術、例えばルー・アン・Ｙ（Ｒｏｕｘ−Ｅｎ−Ｙ）胃バイパス手術ラップバンド、または栄養の流れを十二指腸から物理的に迂回させる物理的デバイスがある。

さらに他の実施形態において補助治療は、胃減速剤の分泌を刺激する、またはその分解を緩徐する方法を含んでなる。既述のとおり、グアーガム摂取、例えば１食当たり１０グラムのグアーガム粉末は一例である。別の薬剤としては、キサンタムゴムがある。他の栄養吸収の減速剤としては、食物繊維、例えば高繊維食において提供されるとおりのもの、ならびにパンおよびブラン中の粗繊維などが挙げられる。別の薬剤は、アカルボースなどのグルコシダーゼインヒビターであり、これはグルコース（およびフルクトース）が腸刷子縁ジサッカリダーゼにおいてスクロースから生成される速度を緩徐する。さらに別の薬剤はミグリトールで、別のグルコシダーゼインヒビターである。

さらに別の実施形態において胃排出はペプチドまたはペプチドアゴニストを投与することにより実現または媒介される。ラットに基づけば、次のペプチドの用量が胃排出を緩徐するべく決定されているとともに、本発明の補助治療用薬剤として全般的に好適である：アミリン（例えば、６０〜６００μｇ／日のプラムリンチド用量）；ＧＬＰ１またはエキセンディンアゴニスト（例えば、１０〜５０μｇ／日のエクセナチド用量範囲）；ＣＣＫおよびアゴニスト（参照により本明細書に援用される、ヤング（Ｙｏｕｎｇ）ら「Ｄｏｓｅ−ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｌｏｗｉｎｇ ｏｆ ｇａｓｔｒｉｃ ｅｍｐｔｙｉｎｇ ｉｎ ａ ｒｏｄｅｎｔ ｍｏｄｅｌ ｂｙ ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ（７−３６）ＮＨ２、アミリン，コレシストキニン，ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｏｆ ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｕｐｔａｋｅ」、Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ４５１−３頁（１９９６年）を参照）。他の薬剤としては、セクレチンおよびアゴニスト、ＣＧＲＰおよびアゴニスト、ニューロメジンアゴニスト、ウロコルチンアゴニスト、ＧＲＰおよびボンベシンアゴニスト、ならびにＰＹＹおよびアゴニストが挙げられる。

本明細書の実施形態において、用量を決定する方法は緩徐の所望程度に基づくことができ、これは容易に決定され得る。例えば、プラムリンチドの治療量（３０、６０、９０μｇ；コング（Ｋｏｎｇ）ら「Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｓｉｎｇｌｅ ｄｏｓｅｓ ｏｆ プラムリンチド ｏｎ ｇａｓｔｒｉｃ ｅｍｐｔｙｉｎｇ ｏｆ ｔｗｏ ｍｅａｌｓ ｉｎ ｍｅｎ ｗｉｔｈ ＩＤＤＭ」、Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ．４１５７７−５８３頁（１９９８年）を参照）は胃の半分の排出時間をおよそ２倍にした。従って、一実施形態において補助治療は胃の半分の排出時間を約２００％だけ増加させる薬剤または本方法を含んでなるが、他の実施形態において胃排出のｔ１／２は、約２５％、５０％、７５％、１００％、２００％、３００％超および４００％またはそれ以上までも、増加し得る。

例として、胃排出の緩徐化エクセナチドのＥＤ５０は約０．０５μｇ／ｋｇ（例えば、現行で使用されるおよその臨床用量）で報告されている（コルターマン（Ｋｏｌｔｅｒｍａｎ）ら「Ｄｏｓｅ−ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｆｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｕｃａｇｏｎ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ａｎｄ ｇａｓｔｒｉｃ ｅｍｐｔｙｉｎｇ ｂｙ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｅｘｅｎｄｉｎ−４（ＡＣ２９９３）ｉｎ ｓｕｂｊｅｃｔｓ ｗｉｔｈ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ」、Ｄｉａｂｅｔｅｓ ４９（補遺１）Ａ１１４ 抄録４６０頁（２０００年）を参照）。ＧＩＰまたは新規ＧＩＰ類似体を伴う補助治療においてかかる緩徐化は増大した利益を対象に提供するであろう。結果的に、一実施形態において薬学的に許容される用量で同等な胃排出の緩徐化を提供する薬剤または本方法が好適な薬剤または方法である。全体を通じ考察されるとおり、補助治療の他の実施形態は哺乳動物アミリン、（２５，２８，２９）プロリン−ヒトアミリン類似体（プラムリンチド）、およびサケカルシトニンを含んでなり、これらはなかで最も強力である。追加的に好適なペプチドおよびそれらのＥＣ５０（ＥＣ（５０）ｎｍｏｌ／ｋｇ＿ｓｅｍ（μｇでのＥＣ（５０））：プラムリンチド、０．０９＿０．０８ｌｏｇ（０．０７μｇ）；ヒトアミリン、０．１９＿０．１１ｌｏｇ（０．１５μｇ）；ラットアミリン、０．２３＿０．０８ｌｏｇ（０．１８μｇ）；サケカルシトニン、０．２８＿０．０７ｌｏｇ（０．１９μｇ）；ラットカルシトニン、０．９４＿０．１８ｌｏｇ（０．６４μｇ）；ラットＣＧＲＰ、２．１３＿０．２９ｌｏｇ（１．６２μｇ）；ＧＬＰ−Ｉ（７−３６）ＮＨ２、２．７６＿０．１２ｌｏｇ（１．８２μｇ）；セクレチン、３．０９＿０．２０ｌｏｇ（１．８７μｇ）；ＣＣＫ−８、１２．８＿０．２０ｌｏｇ（２．９３μｇ）；ガストリン放出ペプチド、４９．９＿０．０５ｌｏｇ（２８．５μｇ）（ゲデュラン（Ｇｅｄｕｌｉｎ）ら「Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ２１ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｇａｓｔｒｉｃ ｅｍｐｔｙｉｎｇ ｉｎ ｃｏｎｓｃｉｏｕｓ ｒａｔｓ」、Ｄｉｇ．Ｄｉｓ．Ｗｅｅｋ．Ａ７４２（抄録２９６７頁）（１９９６年）；この試験は覚醒ラットにおける用量反応試験（ｎ＝約１８ラット／ペプチド、ラット体重約２００ｇ）での２１個のペプチドの胃排出を調節する効力および効果を報告した。ペプチドが非カロリー性色素標識メチルセルロースゲルを伴う経管栄養前５分に皮下注射された。動物は２０分後に屠殺されたとともに胃の色素含有量が分光学的に計測され、排出が評価された。１０ペプチドのみが１００μｇ／ラットまでの用量で完全に胃排出を阻害することが所見された。用量１００μｇで弱活性または不活性のいずれかであることが所見されたペプチドは、血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）、胃抑制ペプチド（ＧＩＰ）、膵ポリペプチド、神経ペプチドＹ、グルカゴン、インスリン（血漿グルコースが一定に維持された場合）、ガストリン、ソマトスタチン、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド（ＰＡＣＡＰ３８）、アドレノメデュリンおよび脱アミド化プラムリンチドであった。本発明の他の実施形態において薬剤は、抗体または抗体断片アゴニストもしくは小分子アゴニストなどの、本明細書に述べられる任意のペプチドのアゴニストを含んでなる。

全体を通じ記載されるとおり、かかる薬剤（またはそれらの組み合わせ）は、別個に、またはＧＩＰと共にのいずれかで投与され得るか、もしくはＧＩＰを備えるキメラ分子、例えば、化学的に連結された融合体または組換え融合体のいずれかを含んでなることができる。全体を通じ記載されるとおり（例えば、本明細書に述べられる回数および期間を参照）、別個に投与される時、ＧＩＰは、薬剤または本方法の投与後の指定の時点で、または薬剤もしくは本方法の事前の投与により所望の効果、対象のＧＩＰ耐性の低減に付随するかかる効果が得られた時またはその直後に、投与され得る。

本発明の医薬組成物および処置方法はヒト医学および獣医学の分野において有用であってもよいことは理解されるであろう。このように処置されるべき被験体は哺乳動物、好ましくはヒトまたは他の動物であってもよい。獣医療目的では、被験体としては、例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマおよびヤギを含む家畜、イヌおよびネコなどのコンパニオンアニマル、外来および／または動物園の動物、マウス、ラット、ウサギ、モルモットおよびハムスターを含む実験動物、およびニワトリ、シチメンチョウ、アヒルおよびガチョウなどの家禽が挙げられる。

加えて、本発明は本発明のＧＩＰ類似体またはハイブリッドポリペプチド、医薬応用として前記本発明のＧＩＰ化合物ポリペプチドを調製するために好適な成分、および医薬応用としてＧＩＰ化合物ポリペプチドおよび成分を使用するための指示書を含んでなるキットを企図する。

以下の処方方法は、ＧＩＰ化合物ならびに他の適当な薬物化合物で用いることができる。一般的には、医薬適用につきスクリーニングならびに医薬適用のためにペプチドまたは蛋白質候補物を処方しつつ、製剤科学者は、溶解性および物理的安定性および／または化学的安定性が同一ｐＨ範囲内に多少あるものであり、臨床使用のための十分に長い有効期間を処方および有するのを容易にする化合物を探求している。しかしながら、異なるｐＨ範囲での溶解性および安定性の最大を有する化合物は、処方チャレンジを与える。これらの薬物候補物の溶解性および安定性が異なるｐＨ範囲で生じるために、一般的な実践は、ペプチドが最も安定する溶解性を増強するために賦形剤をスクリーニングすることである。しかしながら、多くの場合、溶解性は溶解性エンハンサーによりわずかだけ増加したが、ペプチド／蛋白質の化学的安定性を危うくした。溶解性および物理的／化学的安定性が異なる範囲のｐＨにある例示的な生理活性ＧＩＰ化合物は、ＡＣ１６３７９４、ＡＣ１６４３２６． ＡＣ１６４８５０、ＡＣ１６４１９０、ＡＣ１６４８４７、ＡＣ１６４９５７、ＡＣ１６４９４７およびＡＣ１６４９４８を含む。例えば、この方法についての候補物である薬物化合物は、約ｐＨ６で至適な物理的／化学的安定性、等電点（例えば、ｐＩ〜５）付近での不安定性および化学的安定性を有し得るが、処方についての所望のｐＨ、例えば、ｐＨ４付近での所望の溶解性を欠く。対照的に、特性が同一ｐＨ範囲を共有する例示的化合物は、ＡＣ１６４２３３、ＡＣ１６４８１５、ＡＣ１６４８１６、ＡＣ１６４８５３、ＡＣ１６４８５４およびＡＣ１６４８５５を含む。

ペプチドの溶解性および安定性が異なるｐＨ範囲で生じかねないために、一般的な実践は、ペプチドが最も安定する溶解性を増強するために賦形剤をスクリーニングすることである。しかしながら、多くの場合、溶解性は溶解性エンハンサーによりわずかだけ増加するが、ペプチド／蛋白質の化学的安定性を危うくする。しかしながら、本発明は、その問題に対する異なるアプローチに基づいている。方法は、薬物が最大に溶解し、至適に溶解するｐＨ範囲でまたは十分および所望の濃度にて薬物を可溶性にすることを伴う。長期の物理的または化学的な安定性（典型的には１〜７日またはそれを超える日数の４０℃で、加速安定性試験により決定される）は、薬物が、引き続いての加工工程までおよび中にただ十分に安定であればよいので、この工程での関心事ではない。長期安定性とは、薬物が輸送中および治療使用に先立ち貯蔵される時間およびかかる条件下を意味する。濃縮された薬物溶液（第１の溶液）をバルク溶液として用いて、商業用バイアル等に充填し得る。次いで、薬物溶液を乾燥させて、水相を除去する。これは、典型的には、治療使用のためにバイアル形態または容器においてなされる。使用の直前または使用に際して、その乾燥物質を再構成させ、投与のために用いる。一実施態様において、薬物溶液ｐＨは、まず最適化されて、所望の薬物濃度（溶解度、ｍｇ／ｍＬ）（すなわち、第１の溶液）を達成する。第２には、第１の溶液を処理して、凍結乾燥によるごとく水相を除去する。乾燥した物質は安定な貯蔵形態を提供する。第３には、治療使用に先立ちまたは際して、凍結乾燥した物質を溶解された薬物が使用期間中安定である適当な投薬濃度であるように、緩衝された溶液で再構成される。

広範囲の様々な緩衝液を種々のｐＨで用いて、注目する薬物化合物に関して製剤化学者に知られているように、蛋白質が最大、最適または所望の溶解性を有する第１の溶液を提供できる。一実施態様において、緩衝液は酢酸塩のごとく揮発性である。別の実施態様において、緩衝液は揮発性ではないが、使用に先立ち再構成に際して最終処方において化合物の安定性にかなりには影響しない。まだ別の実施態様において、緩衝液は、再構成に際して最終処方を含みその処方に寄与する。

さらなる実施態様において、注目する薬物に関して製剤化学者により知られた浸透圧調節剤および／または分散／凍結保護物質を用いることができる。ペプチドおよびポリペプチド化合物について、これらの賦形剤は、マンニトール、スクロース、トレハロースまたはグリセロールを含むことができる。これらの化合物を、溶解性が有害に影響されないならば、第１の溶液中に含めることができるか、あるいは再構成媒体または希釈剤中に含むことができる。

当該方法を用いて、これらの化合物が最適に安定であるｐＨ範囲において低い固有溶解性を有する生物分子（例えば、ペプチドまたは蛋白質）を含有する薬物生成物を処方できる。これらの化合物が最適に安定であるｐＨ範囲において低い固有溶解性を有しかねない適当な生物学的に活性な剤の他の例は、ＧＬＰ−１ペプチドおよび類似体、免疫グロブリン、抗体、サイトカイン（例えば、リンホカイン、モノカイン、ケモカイン）、血液凝固因子、造血性因子、インターロイキン（ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６）、インターフェロン（β−ＩＦＮ、α−ＩＦＮおよびγ−ＩＦＮ）、エリスロポエチン、ヌクレアーゼ、腫瘍壊死因子、コロニー刺激因子（例えば、ＧＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＣＳＦ）、インスリン、酵素（例えば、スーパーオキシドジスムターゼ、組織プラスミノーゲンアクチベーター）、腫瘍抑制因子、血液蛋白質、ホルモンおよびホルモンアナログ（例えば、成長ホルモン、副腎皮質刺激ホルモンおよび黄体ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ））、ワクチン（例えば、腫瘍、細菌およびウイルス抗原）；ソマトスタチン；抗原；血液凝固因子；成長因子（例えば、神経成長因子、インスリン様成長因子）；蛋白質インヒビター、蛋白質アンタゴニストおよび蛋白質アゴニスト；アンチセンス分子のごとき核酸；オリゴヌクレオチド；およびリボザイムを含む。これらの化合物が最適に安定であるｐＨ範囲において低い固有溶解性を有する限りは、方法における使用に適当な低分子量剤。

以下は、例示的な溶液および処方を表す例であり、それは本明細書に示したＧＩＰ類似体と共に用いることができる。一実施態様、処方１において、第１の溶液は、約ｐＨ８．５（範囲：±０．５）にて約５．０７％マンニトールを含む１０ｍＭトリス緩衝液（範囲：１０〜５０ｍＭ）中で約２ｍｇ／ｍＬの薬物（例えば、約０．５〜５ｍｇ／ｍＬの溶解度範囲を有するＡＣ１６３７９４、ＡＣ１６４８５０またはＡＣ１６４２８８）である。水相は、例えば、凍結乾燥により除去される。使用に先立ち、物質をｐＨを７（範囲：±０．５）に持っていくために（酸性）希釈剤で再構成する。別の実施態様、処方２において、第１の溶液は、約ｐＨ８．５（範囲：±０．５）にて約５．０７％マンニトールを含む１０ｍＭグリシルグリシン緩衝液（範囲：１０〜５０ｍＭ）中で約２ｍｇ／ｍＬの薬物（例えば、ＡＣ１６３７９４、ＡＣ１６４８５０またはＡＣ１６４２８８（範囲：約０．５〜５ｍｇ／ｍＬ）である。水相は、例えば、凍結乾燥により除去される。使用に先立ち、物質はｐＨを７（範囲：±０．５）に持っていくために（酸性）希釈剤で再構成する。別の実施態様、処方３において、第１の溶液は、約ｐＨ８．５（範囲：±０．５）にて約５．０７％マンニトールを含む１０ｍＭグリシン（範囲：１０〜５０ｍＭ）中で約２ｍｇ／ｍＬの薬物（例えば、ＡＣ１６３７９４、ＡＣ１６４８５０またはＡＣ１６４２８８（範囲：約０．５〜５ｍｇ／ｍＬ）である。水相は、例えば、凍結乾燥により除去される。使用に先立ち、物質はｐＨを７（範囲：±０．５）に持っていくために（酸性）希釈剤で再構成する。別の実施態様、処方４において、第１の溶液は、約ｐＨ８．５（範囲：±０．５）にて約５．０７％マンニトールを含む１０ｍＭエタノールアミン緩衝液（範囲：１０〜５０ｍＭ）中で約２ｍｇ／ｍＬの薬物（例えば、ＡＣ１６３７９４、ＡＣ１６４８５０またはＡＣ１６４２８８（範囲：約０．５〜５ｍｇ／ｍＬ）である。水相は、例えば、凍結乾燥により除去される。使用に先立ち、物質はｐＨを７（範囲：±０．５）に持っていくために（酸性）希釈剤で再構成する。別の実施態様、処方５において、第１の溶液は、約ｐＨ８．０（範囲：−１．０）にて約５．０７％マンニトールを含む１０ｍＭリン酸緩衝液（範囲：１０〜５０ｍＭ）中で約２ｍｇ／ｍＬの薬物（例えば、ＡＣ１６３７９４、ＡＣ１６４８５０またはＡＣ１６４２８８（範囲：約０．５〜５ｍｇ／ｍＬ）である。水相は、例えば、凍結乾燥により除去される。使用に先立ち、物質はｐＨを７（範囲：±０．５）に持っていくために（酸性）希釈剤で再構成する。

本願は共有所有される以下を出典明示してそれらの全てを本明細書の一部とみなす：２００５年２月１１日に出願され、ＷＯ２００５／０７７０７２として公開されたＰＣＴ／ＵＳ０５／０４１７８；２００５年２月１１日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２００５／００４３５１；２００５年２月１１日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２００５／００４６３１；２００５年１２月１５日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２００５／０４５４７１；米国特許出願第１１／０５５，０９３号；２００５年８月１０日に出願された米国特許出願第１１／２０１６６４号；および２００５年８月１７日に出願されたＵＳＳＮ ２０６，９０３。本願は、本発明に関連し有益な化合物および使用を教示する。また、ここに出典明示して本明細書の一部とみなすのは、出願人の同時係属出願のＬｅｖｙ らのＰＣＴ／ＵＳ２００６／００５０２０である。本明細書に開示された各実施態様に対する代替的な実施態様では、但し、ＰＣＴ／ＵＳ２００６／００５０２０に開示された特定のＧＩＰペプチド、類似体および誘導体が特に排除される。本明細書に開示された各実施態様に対する代替的な実施態様では、但し、ＰＣＴ／ＵＳ２００６／００５０２０に開示された特定のＧＩＰハイブリッドが特に排除される。本明細書に開示された各実施態様に対するまだ別の代替的な実施態様では、ＰＣＴ／ＵＳ２００６／００５０２０に特に言及されていない新規のＧＩＰハイブリッドを生成するために組み合わせた場合、またはＰＣＴ／ＵＳ２００６／００５０２０に特に言及されない使用および処置方法のために組み合わせた場合を除いて、但し、ＰＣＴ／ＵＳ２００６／００５０２０に開示された特定のＧＩＰペプチド、類似体および誘導体が特に排除される。

追加的参考文献
１．フェフマン・ＨＣ（Ｆｅｈｍａｎｎ ＨＣ）、ゴーク・Ｂ（Ｇｏｋｅ Ｂ）、ゴーク・Ｒ（Ｇｏｋｅ Ｒ）、トラウトマン・ＭＥ（Ｔｒａｕｔｍａｎｎ ＭＥ）、アーノルド・Ｒ（Ａｒｎｏｌｄ Ｒ）、「Ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ−１（７−３６） ａｍｉｄｅ ａｎｄ ｇｌｕｃｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｓｕｌｉｎ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ｏｎ ｔｈｅ ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｒａｔ ｐａｎｃｒｅａｓ 」、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．１９８９年 ２５２：１０９−１２頁。

２．ナウク・ＭＡ（Ｎａｕｃｋ ＭＡ）、バルテルス・Ｅ（Ｂａｒｔｅｌｓ Ｅ）、オルスコフ・Ｃ（Ｏｒｓｋｏｖ Ｃ）、エベルト・Ｒ（Ｅｂｅｒｔ Ｒ）、クロイツフェルト・Ｗ（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ Ｗ）、「Ａｄｄｉｔｉｖｅ ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｈｕｍａｎ ｇａｓｔｒｉｃ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ−１−（７−３６） ａｍｉｄｅ ｉｎｆｕｓｅｄ ａｔ ｎｅａｒ−ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ ｈｏｒｍｏｎｅ ａｎｄ ｇｌｕｃｏｓｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ」、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ．１９９３年 ７６：９１２−７頁。

３．ヴィルスボル・Ｔ（Ｖｉｌｓｂｏｌｌ Ｔ）、クラルプ・Ｔ（Ｋｒａｒｕｐ Ｔ）、マズバッド・Ｓ（Ｍａｄｓｂａｄ Ｓ）、ホルスト・ＪＪ（Ｈｏｌｓｔ ＪＪ）、「Ｂｏｔｈ ＧＬＰ−Ｉ ａｎｄ ＧＩＰ ａｒｅ ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ ａｔ ｂａｓａｌ ａｎｄ ｐｏｓｔｐｒａｎｄｉａｌ ｇｌｕｃｏｓｅ ｌｅｖｅｌｓ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅ ｎｅａｒｌｙ ｅｑｕａｌｌｙ ｔｏ ｔｈｅ ｉｎｃｒｅｔｉｎ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａ ｍｅａｌ ｉｎ ｈｅａｌｔｈｙ ｓｕｂｊｅｃｔｓ」、Ｒｅｇｕｌ Ｐｅｐｔ．２００３年；１１４：１１５−２１頁。

４．ジョーンズ・ＩＲ（Ｊｏｎｅｓ ＩＲ）、オウエンズ・ＤＲ（Ｏｗｅｎｓ ＤＲ）、ムーディ・ＡＪ（Ｍｏｏｄｙ ＡＪ）、ルチオ・ＳＤ（Ｌｕｚｉｏ ＳＤ）、モリス・Ｔ（Ｍｏｒｒｉｓ Ｔ）、ヘイズ・ＴＭ（Ｈａｙｅｓ ＴＭ）、「Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｇｌｕｃｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎｆｕｓｅｄ ａｔ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｓｕｂｊｅｃｔｓ ａｎｄ ｔｙｐｅ ２（ｎｏｎ−ｉｎｓｕｌｉｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ） ｄｉａｂｅｔｉｃ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｏｎ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ａｎｄ ｂｅｔａ−ｃｅｌｌ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ」、Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ．１９８７年 ３０：７０７−１２頁。

５．ナウク・ＭＡ（Ｎａｕｃｋ ＭＡ）、ヘイムサット・ＭＭ（Ｈｅｉｍｅｓａａｔ ＭＭ）、オルスコフ・Ｃ（Ｏｒｓｋｏｖ Ｃ）、ホルスト・ＪＪ（Ｈｏｌｓｔ ＪＪ）、エベルト・Ｒ（Ｅｂｅｒｔ Ｒ）、クロイツフェルト・Ｗ（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ Ｗ）、「Ｐｒｅｓｅｒｖｅｄ ｉｎｃｒｅｔｉｎ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ １ ［７−３６ ａｍｉｄｅ］ ｂｕｔ ｎｏｔ ｏｆ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｈｕｍａｎ ｇａｓｔｒｉｃ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｔｙｐｅ−２ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ」、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１９９３年 ９１：３０１−７頁。

６．エラヒ・Ｄ（Ｅｌａｈｉ Ｄ）、マクアルーン−ダイク・Ｍ（ＭｃＡｌｏｏｎ−Ｄｙｋｅ Ｍ）、フクナガ・ＮＫ（Ｆｕｋａｇａｗａ ＮＫ）、メネイリー・ＧＳ（Ｍｅｎｅｉｌｌｙ ＧＳ）、スクラテール・ＡＬ（Ｓｃｌａｔｅｒ ＡＬ）、マイナケール・ＫＬ（Ｍｉｎａｋｅｒ ＫＬ）、ハベネール・ＪＦ（Ｈａｂｅｎｅｒ ＪＦ）、アンデルセン・ＤＫ（Ａｎｄｅｒｓｅｎ ＤＫ）、「Ｔｈｅ ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｇｌｕｃｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ（ＧＩＰ） ａｎｄ ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ−１（７−３７） ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ａｎｄ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｓｕｂｊｅｃｔｓ」、Ｒｅｇｕｌ Ｐｅｐｔ．１９９４年４月 １４；５１（１）：６３−７４頁。

７．ホルスト・ＪＪ（Ｈｏｌｓｔ ＪＪ）、グロマダ・Ｊ（Ｇｒｏｍａｄａ Ｊ）、ナウク・ＭＡ（Ｎａｕｃｋ ＭＡ）、「Ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ＮＩＤＤＭ ｉｎｖｏｌｖｅｓ ａ ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＧＩＰ ｒｅｃｅｐｔｏｒ 」、Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ．１９９７年 ４０：９８４−６頁。

８．リン・ＦＣ（Ｌｙｎｎ ＦＣ）、パミール・Ｎ（Ｐａｍｉｒ Ｎ）、ング・ＥＨ（Ｎｇ ＥＨ）、マキントッシュ・ＣＨ（Ｍｃｉｎｔｏｓｈ ＣＨ）、キーファー・ＴＪ（Ｋｉｅｆｆｅｒ ＴＪ）、ペダーソン・ＲＡ（Ｐｅｄｅｒｓｏｎ ＲＡ）、「Ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ ｇｌｕｃｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｆａｔｔｙ Ｚｕｃｋｅｒ ｒａｔｓ」、Ｄｉａｂｅｔｅｓ．２００１年 ５０：１００４−１１頁。

９．マイヤー・ＪＪ（Ｍｅｉｅｒ ＪＪ）、フッキング・Ｋ（Ｈｕｃｋｉｎｇ Ｋ）、ホルスト・ＪＪ（Ｈｏｌｓｔ ＪＪ）、ディーコン・ＣＦ（Ｄｅａｃｏｎ ＣＦ）、シュミーゲル・ＷＨ（Ｓｃｈｍｉｅｇｅｌ ＷＨ）、ナウク・ＭＡ（Ｎａｕｃｋ ＭＡ）、「Ｒｅｄｕｃｅｄ ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｇａｓｔｒｉｃ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎ ｆｉｒｓｔ−ｄｅｇｒｅｅ ｒｅｌａｔｉｖｅｓ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ」、Ｄｉａｂｅｔｅｓ．２００１年 ５０：２４９７−５０４頁。

１０．マイヤー・ＪＪ（Ｍｅｉｅｒ ＪＪ）、ガルウィッツ・Ｂ（Ｇａｌｌｗｉｔｚ Ｂ）、カスク・Ｂ（Ｋａｓｋ Ｂ）、ディーコン・ＣＦ（Ｄｅａｃｏｎ ＣＦ）、ホルスト・ＪＪ（Ｈｏｌｓｔ ＪＪ）、シュミット・ＷＥ（Ｓｃｈｍｉｄｔ ＷＥ）、ナウク・ＭＡ（Ｎａｕｃｋ ＭＡ）、「Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｓｕｌｉｎ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｂｙ ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｂｏｌｕｓ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｉｎｆｕｓｉｏｎ ｏｆ ｇａｓｔｒｉｃ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ ａｎｄ ｈｅａｌｔｈｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｕｂｊｅｃｔｓ」、Ｄｉａｂｅｔｅｓ．２００４年 ５３ 補遺３：Ｓ２２０−４頁。

１１．ヴィルスボル・Ｔ（Ｖｉｌｓｂｏｌｌ Ｔ）、クノップ・ＦＫ（Ｋｎｏｐ ＦＫ）、クラルプ・Ｔ（Ｋｒａｒｕｐ Ｔ）、ヨハンセン・Ａ（Ｊｏｈａｎｓｅｎ Ａ）、マズバッド・Ｓ（Ｍａｄｓｂａｄ Ｓ）、ラルセン・Ｓ（Ｌａｒｓｅｎ Ｓ）、ハンセン・Ｔ（Ｈａｎｓｅｎ Ｔ）、ペダーセン・Ｏ（Ｐｅｄｅｒｓｅｎ Ｏ）、ホルスト・ＪＪ（Ｈｏｌｓｔ ＪＪ）、「Ｔｈｅ ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｉｎｖｏｌｖｅｓ ａ ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｌａｔｅ−ｐｈａｓｅ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｇｌｕｃｏｓｅ ｂｙ ｇｌｕｃｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ−ｒｅｇａｒｄｌｅｓｓ ｏｆ ｅｔｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ」、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ．２００３年 ８８：４８９７−９０３頁。

１２．ヴィルスボル・Ｔ（Ｖｉｌｓｂｏｌｌ Ｔ）、クラルプ・Ｔ（Ｋｒａｒｕｐ Ｔ）、マズバッド・Ｓ（Ｍａｄｓｂａｄ Ｓ）、ホルスト・ＪＪ（Ｈｏｌｓｔ ＪＪ）、「Ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｌａｔｅ ｐｈａｓｅ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｇｌｕｃｏｓｅ ｂｙ ＧＩＰ ｉｎ ｏｂｅｓｅ Ｔｙｐｅ ＩＩ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｐａｔｉｅｎｔｓ」、Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ．２００２年 ４５：１１１１−９頁。

１３．ヤング・ＡＡ（Ｙｏｕｎｇ ＡＡ）、ゲデュラン・ＢＲ（Ｇｅｄｕｌｉｎ ＢＲ）、リンク・ＴＪ（Ｒｉｎｋ ＴＪ）、「Ｄｏｓｅ−ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｌｏｗｉｎｇ ｏｆ ｇａｓｔｒｉｃ ｅｍｐｔｙｉｎｇ ｉｎ ａ ｒｏｄｅｎｔ ｍｏｄｅｌ ｂｙ ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ（７−３６） ＮＨ２，アミリン，コレシストキニン，ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｏｆ ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｕｐｔａｋｅ」、Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．１９９６年 ４５：１−３頁。

１４．マイヤー・ＪＪ（Ｍｅｉｅｒ ＪＪ）、ゴッツェ・Ｏ（Ｇｏｅｔｚｅ Ｏ）、アンスティップ・Ｊ（Ａｎｓｔｉｐｐ Ｊ）、ハーゲマン・Ｄ（Ｈａｇｅｍａｎｎ Ｄ）、ホルスト・ＪＪ（Ｈｏｌｓｔ ＪＪ）、シュミット・ＷＥ（Ｓｃｈｍｉｄｔ ＷＥ）、ガルウィッツ・Ｂ（Ｇａｌｌｗｉｔｚ Ｂ）、ナウク・ＭＡ（Ｎａｕｃｋ ＭＡ）、「Ｇａｓｔｒｉｃ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ｄｏｅｓ ｎｏｔ ｉｎｈｉｂｉｔ ｇａｓｔｒｉｃ ｅｍｐｔｙｉｎｇ ｉｎ ｈｕｍａｎｓ」、Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ．２００４年 ２８６：Ｅ６２１−５頁。

１５．キーファー・ＴＪ（Ｋｉｅｆｆｅｒ ＴＪ）、「Ｇａｓｔｒｏ−ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｈｏｒｍｏｎｅｓ ＧＩＰ ａｎｄ ＧＬＰ−Ｉ」、Ａｎｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ ２００４年 ６５：１３−２１頁。

１６．ジョーンズ・ＩＲ（Ｊｏｎｅｓ ＩＲ）、オウエンズ・ＤＲ（Ｏｗｅｎｓ ＤＲ）、ムーディ・ＡＪ（Ｍｏｏｄｙ ＡＪ）、ルチオ・ＳＤ（Ｌｕｚｉｏ ＳＤ）、モリス・Ｔ（Ｍｏｒｒｉｓ Ｔ）、ヘイズ・ＴＭ（Ｈａｙｅｓ ＴＭ）、「Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｇｌｕｃｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎｆｕｓｅｄ ａｔ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｓｕｂｊｅｃｔｓ ａｎｄ ｔｙｐｅ ２（ｎｏｎ−ｉｎｓｕｌｉｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ） ｄｉａｂｅｔｉｃ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｏｎ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ａｎｄ Ｂ−ｃｅｌｌ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ」、Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ．１９８７年 ３０：７０７−１２。

１７．ナウク・ＭＡ（Ｎａｕｃｋ ＭＡ）、ヘイムサット・ＭＭ（Ｈｅｉｍｅｓａａｔ ＭＭ）、オルスコフ・Ｃ（Ｏｒｓｋｏｖ Ｃ）、ホルスト・ＪＪ（Ｈｏｌｓｔ ＪＪ）、エベルト・Ｒ（Ｅｂｅｒｔ Ｒ）、クロイツフェルト・Ｗ（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ Ｗ）、「Ｐｒｅｓｅｒｖｅｄ ｉｎｃｒｅｔｉｎ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ １ ［７−３６ ａｍｉｄｅ］ ｂｕｔ ｎｏｔ ｏｆ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｈｕｍａｎ ｇａｓｔｒｉｃ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｔｙｐｅ−２ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ」、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１９９３年 ９１：３０１−７頁。

１８．エラヒ・Ｄ（Ｅｌａｈｉ Ｄ）、マクアルーン−ダイク・Ｍ（ＭｃＡｌｏｏｎ−Ｄｙｋｅ Ｍ）、フクナガ・ＮＫ（Ｆｕｋａｇａｗａ ＮＫ）、メネイリー・ＧＳ（Ｍｅｎｅｉｌｌｙ ＧＳ）、スクラテール・ＡＬ（Ｓｃｌａｔｅｒ ＡＬ）、マイナケール・ＫＬ（Ｍｉｎａｋｅｒ ＫＬ）、ハベネール・ＪＦ（Ｈａｂｅｎｅｒ ＪＦ）、アンデルセン・ＤＫ（Ａｎｄｅｒｓｅｎ ＤＫ）、「Ｔｈｅ ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｇｌｕｃｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ（ＧＩＰ） ａｎｄ ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ−１（７−３７） ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ａｎｄ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｓｕｂｊｅｃｔｓ」、Ｒｅｇｕｌ Ｐｅｐｔ．１９９４年４月 １４；５１（１）：６３−７４頁。

１９．ホルスト・ＪＪ（Ｈｏｌｓｔ ＪＪ）、グロマダ・Ｊ（Ｇｒｏｍａｄａ Ｊ）、ナウク・ＭＡ（Ｎａｕｃｋ ＭＡ）、「Ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ＮＩＤＤＭ ｉｎｖｏｌｖｅｓ ａ ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＧＩＰ ｒｅｃｅｐｔｏｒ」、Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ．１９９７年 ４０：９８４−６。

２０．ヤング・ＡＡ（Ｙｏｕｎｇ ＡＡ）、ゲデュラン・ＢＲ（Ｇｅｄｕｌｉｎ ＢＲ）、リンク・ＴＪ（Ｒｉｎｋ ＴＪ）、「Ｄｏｓｅ−ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｌｏｗｉｎｇ ｏｆ ｇａｓｔｒｉｃ ｅｍｐｔｙｉｎｇ ｉｎ ａ ｒｏｄｅｎｔ ｍｏｄｅｌ ｂｙ ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ（７−３６） ＮＨ２，Ａｍｙｌｉｎ， ｃｈｏｌｅｃｙｓｔｏｋｉｎｉｎ，ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｏｆ ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｕｐｔａｋｅ」、Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．１９９６年 ４５：１−３頁。

２１．キーファー・ＴＪ（Ｋｉｅｆｆｅｒ ＴＪ）、「Ｇａｓｔｒｏ−ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｈｏｒｍｏｎｅｓ ＧＩＰ ａｎｄ ＧＬＰ−Ｉ」、Ａｎｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ ２００４年 ６５：１３−２１。

２２．ディーコン・ＣＦ（Ｄｅａｃｏｎ ＣＦ）、ナウク・ＭＡ（Ｎａｕｃｋ ＭＡ）、トフト−ニールセン・Ｍ（Ｔｏｆｔ−Ｎｉｅｌｓｅｎ Ｍ）、プリダル・Ｌ（Ｐｒｉｄａｌ Ｌ）、ウィルムス・Ｂ（Ｗｉｌｌｍｓ Ｂ）、ホルスト・ＪＪ（Ｈｏｌｓｔ ＪＪ）、「Ｂｏｔｈ ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙ ａｎｄ ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓｌｙ ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ １ ａｒｅ ｒａｐｉｄｌｙ ｄｅｇｒａｄｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ＮＨ２−ｔｅｒｍｉｎｕｓ ｉｎ ｔｙｐｅ ＩＩ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｐａｔｉｅｎｔｓ ａｎｄ ｉｎ ｈｅａｌｔｈｙ ｓｕｂｊｅｃｔｓ」、Ｄｉａｂｅｔｅｓ １９９５年 ４４：１１２６−１１３１頁。

２３．ディーコン・ＣＦ（Ｄｅａｃｏｎ ＣＦ）、ヨハンセン・ＡＨ（Ｊｏｈｎｓｅｎ ＡＨ）、ホルスト・ＪＪ（Ｈｏｌｓｔ ＪＪ）、「Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ−ｐｅｐｔｉｄｅ−１ ｂｙ ｈｕｍａｎ ｐｌａｓｍａ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｙｉｅｌｄｓ ａｎ Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌｌｙ ｔｒｕｎｃａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ ｔｈａｔ ｉｓ ａ ｍａｊｏｒ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ ｉｎ ｖｉｖｏ」、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．１９９５年 ８０：９５２−９５７頁。

２４．キーファー・ＴＪ（Ｋｉｅｆｆｅｒ ＴＪ）、マキントッシュ・ＣＨ（ＭｃＩｎｔｏｓｈ ＣＨ）、ペダーソン・ＲＡ（Ｐｅｄｅｒｓｏｎ ＲＡ）、「Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｕｃｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ ｔｒｕｎｃａｔｅｄ ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ １ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｂｙ ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ ｐｅｐｔｉｄａｓｅ ＩＶ」、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．１９９５年８月；１３６（８）：３５８５−９６頁。

２５．プラムボエック・Ａ（Ｐｌａｍｂｏｅｃｋ Ａ）、ホルスト・ＪＪ（Ｈｏｌｓｔ ＪＪ）、カー・ＲＤ（Ｃａｒｒ ＲＤ）、ディーコン・ＣＦ（Ｄｅａｃｏｎ ＣＦ）、「Ｎｅｕｔｒａｌ ｅｎｄｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ ２４．１１ ａｎｄ ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ ｐｅｐｔｉｄａｓｅ ＩＶ ａｒｅ ｂｏｔｈ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ−１ ｉｎ ｖｉｖｏ」、Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ．２００３年；５２４：３０３−１２頁。

２６．フープ−ソドマン・Ｋ（Ｈｕｐｅ−Ｓｏｄｍａｎｎ Ｋ）、マクグレゴール・ＧＰ（ＭｃＧｒｅｇｏｒ ＧＰ）、ブライデンバーグ・Ｒ（Ｂｒｉｄｅｎｂａｕｇｈ Ｒ）、ゴーク・Ｒ（Ｇｏｋｅ Ｒ）、ゴーク・Ｂ（Ｇｏｋｅ Ｂ）、トーレ・Ｈ（Ｔｈｏｌｅ Ｈ）、ツィンメルマン・Ｂ（Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ Ｂ）、フォイクト・Ｋ（Ｖｏｉｇｔ Ｋ）、「Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｂｙ ｈｕｍａｎ ｎｅｕｔｒａｌ ｅｎｄｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ ２４．１１ ｏｆ ＧＬＰ−Ｉ（７−３６） ａｍｉｄｅ ａｎｄ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｅｎｚｙｍｅ ｆｏｒ ｏｔｈｅｒ ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、Ｒｅｇｕｌ Ｐｅｐｔ．１９９５年８月 ２２；５８（３）：１４９−５６頁。

２７．ゴールト・ＶＡ（Ｇｈａｕｌｔ ＶＡ）、フラット・ＰＲ（Ｆｌａｔｔ ＰＲ）、ハリオット・Ｐ（Ｈａｒｒｉｏｔｔ Ｐ）、ムーニー・ＭＨ（Ｍｏｏｎｅｙ ＭＨ）、ベイリー・ＣＪ（Ｂａｉｌｅｙ ＣＪ）、オハルト・ＦＰ（Ｏ’Ｈａｒｔｅ ＦＰ）、「Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｇｌｙ２− ａｎｄ Ｓｅｒ２−ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ａｎａｌｏｇｕｅｓ ｏｆ ｇｌｕｃｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｈｉｃ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ」、Ｊ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２００３年１月；１７６（１）：１３３−４１頁。

２８．ハインク・ＳＡ（Ｈｉｎｋｅ ＳＡ）、ゲリング・ＲＷ（Ｇｅｌｌｉｎｇ ＲＷ）、ペダーソン・ＲＡ（Ｐｅｄｅｒｓｏｎ ＲＡ）、マンハルト・Ｓ（Ｍａｎｈａｒｔ Ｓ）、ニアン・Ｃ（Ｎｉａｎ Ｃ）、デムス・ＨＵ（Ｄｅｍｕｔｈ ＨＵ）、マキントッシュ・ＣＨ（ＭｃＩｎｔｏｓｈ ＣＨ）、「Ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ ｐｅｐｔｉｄａｓｅ ＩＶ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ［Ｄ−Ａｌａ（２）］ｇｌｕｃｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ（ＧＩＰ） ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ａｎｄ ｏｂｅｓｅ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒａｔｓ」、Ｄｉａｂｅｔｅｓ．２００２年３月；５１（３）：６５２−６１頁。

２９．フドソン・ＦＭ（Ｈｕｄｓｏｎ ＦＭ）、アンデルセン・ＮＨ（Ａｎｄｅｒｓｅｎ ＮＨ）、「エクセナチド：ＮＭＲ／ＣＤ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅｄｉｕｍ ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ ｏｆ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ ｓｔａｔｅ」、Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ．２００４年 ７６：２９８−３０８頁。

３０．アンデルセン・ＮＨ（Ａｎｄｅｒｓｅｎ ＮＨ）、ブロドスキー・Ｙ（Ｂｒｏｄｓｋｙ Ｙ）、ネイディフ・ＪＷ（Ｎｅｉｄｉｇｈ ＪＷ）、プリケット・ＫＳ（Ｐｒｉｃｋｅｔｔ ＫＳ）、「Ｍｅｄｉｕｍ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｅｘｅｎｄｉｎ−４ ａｎｄ ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ−ｐｅｐｔｉｄｅ−１」、Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．２００２年 １０：７９−８５頁。

３１．ネイディフ・ＪＷ（Ｎｅｉｄｉｇｈ ＪＷ）、フェザンメイエール・ＲＭ（Ｆｅｓｉｎｍｅｙｅｒ ＲＭ）、プリケット・ＫＳ（Ｐｒｉｃｋｅｔｔ ＫＳ）、アンデルセン・ＮＨ（Ａｎｄｅｒｓｅｎ ＮＨ）、「Ｅｘｅｎｄｉｎ−４ ａｎｄ ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ−ｐｅｐｔｉｄｅ−１：ＮＭＲ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｉｃｅｌｌｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｓｔａｔｅｓ」、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２００１年 ４０：１３１８８−２００頁。

３２．タム・Ａ（Ｔｈｕｍ Ａ）、フープ−ソドマン・Ｋ（Ｈｕｐｅ−Ｓｏｄｍａｎｎ Ｋ）、ゴーク・Ｒ（Ｇｏｋｅ Ｒ）、フォイクト・Ｋ（Ｖｏｉｇｔ Ｋ）、ゴーク・Ｂ（Ｇｏｋｅ Ｂ）、マクグレゴール・ＧＰ（ＭｃＧｒｅｇｏｒ ＧＰ）、「Ｅｎｄｏｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ ｂｙ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｅｐｔｉｄａｓｅｓ ｒｅｖｅａｌ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ−１ ａｎａｌｏｇｓ，ｅｘｅｎｄｉｎｓ−３ ａｎｄ −４」、Ｅｘｐ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｄｉａｂｅｔｅｓ．２００２年 １１０：１１３−８頁。

３３．フェフマン・ＨＣ（Ｆｅｈｍａｎｎ ＨＣ）、ゴーク・Ｂ（Ｇｏｋｅ Ｂ）、「Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＧＩＰ（１−３０） ａｎｄ ＧＩＰ（１−４２） ａｓ ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｓ ｏｆ ｐｒｏｉｎｓｕｌｉｎ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ」、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ．１９９５年 １６：１１４９−５２頁。

本出願の全体を通して様々な文献が参照される。これらの文献の全体としての開示は、本発明の関連する技術動向を完全に記載するため、本明細書によって参照により本出願に援用される。

本発明の理解を補助するため、以下の実施例が挙げられる。本発明に関する実験は、当然ながら、以上で既知となった、またはこれ以降展開される、本発明および本発明のかかる変形例を具体的に限定するものとして解釈されるべきではなく、当業者の範囲内であろうそれらは本明細書に記載されるとともに以下に主張されるとおりの本発明の範囲内にあると考えられる。

実施例は、本ＧＩＰポリペプチドの調製、およびインビトロおよび／または生体内での本発明のそれらのＧＩＰポリペプチドのテストを説明する。

実施例１．ＧＩＰポリペプチドの調製
本発明のペプチドは、シンフォニー（Ｓｙｍｐｈｏｎｙ）ペプチド合成機（プロテイン・テクノロジーズ社（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃ．）において、リンク（Ｒｉｎｋ）アミド樹脂（ノババイオケム（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ））を使用して、０．０５０〜０．１００ｍｍｏｌでの０．４３〜０．４９ｍｍｏｌ／ｇの負荷または予め負荷されたワング樹脂（Ｗａｎｇ Ｒｅｓｉｎ）（Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ワング（Ｗａｎｇ）樹脂）０．６３ｍｍｏｌ／ｇ（ノババイオケム（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ））を伴い構築されてもよい。Ｆｍｏｃアミノ酸（５．０ｅｑ、０．２５０〜．５００ｍｍｏｌ）残基が１−メチル−２−ピロリジノン中に０．１０Ｍの濃度で溶解される。他の全ての試薬（ＨＢＴＵ、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）が０．５５Ｍのジメチルホルムアミド溶液として調製される。Ｆｍｏｃ保護アミノ酸が次に、ＨＢＴＵ（２．０ｅｑ、０．１００〜０．２００ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（１．８ｅｑ、０．０９０〜０．１８ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２．４ｅｑ、０．１２０〜０．２４０ｍｍｏｌ）を使用して２時間、樹脂結合アミノ酸と結合される。最後のアミノ酸結合に続き、ペプチドが、ジメチルホルムアミド中の２０％（ｖ／ｖ）ピペリジンを使用して１時間、脱保護される。ペプチド配列が完了すると、シンフォニー（Ｓｙｍｐｈｏｎｙ）ペプチド合成機は樹脂を切断するようプログラムされる。ペプチドの樹脂からのトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）切断は９３％ＴＦＡ、３％フェノール、３％水および１％トリイソプロピルシランを使用して１時間実行される。切断されたペプチドはｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルを使用して沈殿させ、遠心分離によりペレット状にするとともに凍結乾燥させる。ペレットは水（１０〜１５ｍＬ）中に再溶解され、ろ過されるとともに逆相ＨＰＬＣを介しＣ１８カラムおよび０．１％ＴＦＡを含有するアセトニトリル／水勾配を使用して精製される。結果としてもたらされるペプチドは逆相ＨＰＬＣにより均質になるまで精製されるとともに純度がＬＣＭＳにより確認される。

本発明のペプチドを脂肪酸（例えば、オクタン酸およびステアリン酸）でＮ−キャッピングする一般的な手順は次のとおりである：リンクアミド樹脂上のペプチド（０．１ｍｍｏｌ）がＮＭＰ（５ｍＬ）中に懸濁される。個別のバイアル中で、ＨＢＴＵ（０．３ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．３ｍｍｏｌ）がＤＭＦ（５ｍＬ）中に溶解された後、ＤＩＥＡ（０．６ｍｍｏｌ）の添加が続く。この溶液は樹脂に添加されるとともにこの懸濁液は２時間振盪される。溶液はろ過されるとともにＮＭＰ（５ｍＬ×４）およびＣＨ_２Ｃｌ_２（２０ｍＬ）で完全に洗浄され、乾燥されるとともにＴＦＡ切断に１時間供される。切断および精製後の所望のペプチドの収量は約４０ｍｇである。

ＰＥＧ修飾が溶液中のリジンの遊離ε−アミノ基または精製されたペプチドの末端アミノ基において、市販の活性化されたＰＥＧエステルを使用して実行されてもよい。結果としてもたらされるペグ化誘導体は逆相ＨＰＬＣにより均質になるまで精製されるとともに純度がＬＣ／ＭＳおよびＭＡＬＤＩ−ＭＳにより確認される。

実施例２．結合アッセイ
本発明のＧＩＰポリペプチドは、様々な受容体、例えばＧＩＰＲ、ＧＬＰ−ＩＲ、アミリン受容体においてテストされてもよく、結合アッセイは一般的に当業者に周知の結合アッセイ法を使用する。かかるアッセイとしては、本明細書に記載されるものが挙げられる。

ＧＩＰ受容体結合アッセイ：ヒトＧＩＰ受容体に対する親和性を有するＧＩＰ類似体ペプチドを同定するために、以下のアッセイを高処理能力様式で行った。細胞膜をヒトＧＩＰ受容体（ＨＥＫ−ＧＩＰＲ）を安定に発現しているＨＥＫ細胞系の密集培養物から調製し、スナップ凍結し、使用まで−８０℃にて貯蔵した。アッセイ時に、膜を氷上で解凍し、氷冷結合緩衝液(20mM HEPES pH 7.4、0.5% BSA、5 mM MgCl2、1 mM CaCl2、170μMホスホラミドン、1.5 mMベスタチン-HCLおよび70 mMバシトラシン)中で０．０２ｍｇ／ｍＬまで希釈した。異種性結合アッセイを膜とアッセイ緩衝液中で希釈した３０ｐＭ １２５Ｉ−ＧＩＰおよび１０ｎＭの個々の未標識ＧＩＰ類似体とを組み合わせることにより開始した。反応は、一定振盪での室温での９０’の平衡まで進めるのを可能とされた。次いで、結合を放射性リガンドの結合および非結合性画分を分離する９６ウェルガラスフィルタープレートを介する急速ろ過により終了させた。各類似体についての放射性リガンドの置換を、ヒトＧＩＰ（１００％）により最大置換およびいずれの競合リガンドの不存在下での非特異的結合（０％）に対して計算した。５０％を超える合計リガンドを置換する類似体ペプチドは、「陽性」テスト群に分離し、増加した濃度の未標識類似体（１０ｐＭ〜１μＭ最終濃度）で前記の様式を用いて正確なＩＣ５０判定について再テストした。１０ｎＭ未満のＩＣ５０値を有するために５０％を超える合計リガンドを置換する類似体ペプチドをスコアした。

アミリン結合アッセイ：本発明のある例示的化合物のアミリン受容体への結合の評価はラット脳から調製される側坐核膜において次のとおり実行されてもよい。（２００〜２５０）グラムの雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（登録商標）ラットが断頭術により屠殺される。脳が取り出されるとともに冷リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に定置される。腹側表面から、切断が吻側から視床下部に向かって行われ、嗅索により外側に結合されるとともに４５°の角度でそれらの管から内側に伸長される。この前脳基底組織は、側坐核を含むとともに領域Ｓを取り囲み、計量されるとともに氷冷２０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液（２０ｍＭのＨＥＰＥＳ酸、２３℃でＮａＯＨによりｐＨ７．４に調節される）中で均質化される。膜は、新鮮な緩衝液中で遠心分離により１５分間、４８，０００ｘｇで、３回洗浄される。最終的な膜ペレットは０．２ｍＭのフッ化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ）を含有する２０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液中に再懸濁される。

^１２５Ｉ−アミリン結合を計測するため（ボーモン・Ｋ（Ｂｅａｕｍｏｎｔ Ｋ）ら、Ｃａｎ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９５年７月；７３（７）：１０２５−９頁を参照）、４ｍｇの原湿重量の組織からの膜が、１２〜１６ｐＭで^１２５Ｉ−アミリンを伴い、０．５ｍｇ／ｍｌのバシトラシン、０．５ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン、および０．２ｍＭのＰＭＳＦを含有する２０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液中でインキュベートされる。溶液は６０分間、２℃でインキュベートされる。インキュベーションは、放射性標識ペプチドの非特異的結合を低減するため０．３％のポリエチレンイミン中に４時間予浸されるＧＦ／Ｂガラス繊維フィルター（ワットマン社（Ｗｈａｔｍａｎ Ｉｎｃ．）、クリフトン、ニュージャージー州）を通すろ過により終結される。フィルターはろ過直前に５ｍｌの冷ＰＢＳで、およびろ過直後に１５ｍｌの冷ＰＢＳで洗浄される。フィルターが取り出されるとともにガンマカウンタにおいて７７％の計数効率で放射性が評価される。競合曲線が１０^−１２〜１０^−６Ｍの非標識テスト化合物の存在下で結合を計測することにより生成されるとともに４パラメータのロジスティック方程式を使用する非線形回帰（インプロット（Ｉｎｐｌｏｔ）プログラム；グラフＰＡＤ・ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰＡＤ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）、サンディエゴ）により分析される。

ＣＧＲＰ受容体結合アッセイ：本発明の化合物のＣＧＲＰ受容体への結合の評価は、ＣＧＲＰ受容体を発現することで知られるＳＫ−Ｎ−ＭＣ細胞から調製される膜を使用することを除き、本質的にアミリンについて記載されるとおりである（マフ，Ｒ（Ｍｕｆｆ，Ｒ）ら、Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９９２年：６５７、１０６−１６頁）。結合アッセイは、１３，５００ｃｐｍ １２５Ｉ−ｈＣＧＲＰ／ウェルまたは２１．７ｐＭ／ウェル（アマシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ））を使用することを除き、アミリンについて記載されるとおり実施される。

アドレノメデュリン結合アッセイ：アドレノメデュリン受容体への結合が、アドレノメデュリン受容体を含むＨＵＶＥＣ（カトウ・Ｊ（Ｋａｔｏ Ｊ）ら、Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９５年、２８９：３８３−５頁）を使用して、ウェル当たりの最適細胞数２５〜３０，０００を使用するサイクリックＡＭＰ用パーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）アッセイを使用して調査される。ｃＡＭＰレベルの上昇はＨＵＶＥＣについてはＣＨＯ細胞と比較して大きくない。かかるごとく、ＣＨＯ細胞は所望であればアドレノメデュリン受容体を発現しないことから、これが陰性対照として選ばれてもよい。

カルシトニン受容体結合アッセイ：カルシトニン受容体への結合がＣＨＯ細胞またはＴ４７Ｄ細胞を使用して調査されてもよく、これらもまた、当該技術分野において知られるように、カルシトニン受容体を発現する（マフ・Ｒ．（Ｍｕｆｆ Ｒ．）ら、Ａｎｎ Ｎ Ｙ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．１９９２、６５７：１０６−１６頁およびケストナー・Ｒ．Ｅ．（Ｋｕｅｓｔｎｅｒ Ｒ．Ｅ．）ら、Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９４年、４６：２４６−５５頁）。

レプチン結合アッセイ：２つのインビトロバイオアッセイがレプチン結合および受容体活性化を評価するため日常的に使用される（例えば、ホワイト（Ｗｈｉｔｅ）ら、１９９７年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９４：１０６５７−１０６６２頁を参照）。アルカリホスファターゼ（「ＡＰ」）−レプチン（「ＯＢ」）融合タンパク質（「ＡＰ−ＯＢ」）が使用され、組換えマウスレプチン（陽性対照）またはペプチドの不在下または存在下で、長距離（シグナル伝達）型のマウスＯＢ受容体（「ＯＢ−ＲＬ」）を形質移入されるＣＯＳ−７細胞により、レプチン結合の阻害を計測してもよい。シグナル伝達アッセイは、ＡＰレポーターおよびＯＢ−ＲＬコンストラクトを同時導入されるＧＴ１−７細胞中で行われてもよい。マウスレプチンまたはペプチドの刺激に応答して分泌されたアルカリホスファターゼ（「ＳＥＡＰ」）活性が化学発光により計測されてもよい。

Ｙ１受容体結合アッセイ：膜は神経ペプチドＹ１受容体を内在的に発現するＳＫ−Ｎ−ＭＣ細胞のコンフルエント培養物から調製される。膜は、６０ｐＭの［１２５Ｉ］−ヒトペプチドＹＹ（２２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ、パーキンエルマー・ライフ・サイエンス（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ））を伴い、および非標識テスト化合物を伴い、６０分間、外界温度で９６ウェルポリスチレンプレートにおいてインキュベートされる。次にウェル内容物が９６ウェルガラス繊維プレート上にパーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）プレートハーベスターを使用して回収される。乾燥させたガラス繊維プレートがシンチラントと併用されるとともにパーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）シンチレーションカウンタで計数される。

Ｙ２受容体結合アッセイ：膜は神経ペプチドＹ２受容体を内在的に発現するＳＫ−Ｎ−ＢＥ細胞のコンフルエント培養物から調製される。膜は、３０ｐＭの［１２５Ｉ］−ヒトペプチドＹＹ（２２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ、パーキンエルマー・ライフ・サイエンス（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ））を伴い、および非標識テスト化合物を伴い、６０分間、外界温度で９６ウェルポリスチレンプレートにおいて、インキュベートされる。次にウェル内容物が９６ウェルガラス繊維プレート上にパーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）プレートハーベスターを使用して回収される。乾燥させたガラス繊維プレートがシンチラントと併用されるとともにパーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）シンチレーションカウンタで計数される。

Ｙ４受容体結合アッセイ：ＣＨＯ−Ｋ１細胞は神経ペプチドＹ４遺伝子をコードするｃＤＮＡを一時的に形質移入されるとともに、次に４８時間後、膜がコンフルエント細胞培養物から調製される。膜は、１８ｐＭの［１２５Ｉ］−ヒト膵ポリペプチド（２２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ、パーキンエルマー・ライフ・サイエンス（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ））を伴い、および非標識テスト化合物を伴い、６０分間、外界温度で９６ウェルポリスチレンプレートにおいて、インキュベートされる。次にウェル内容物が９６ウェルガラス繊維プレート上にパーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）プレートハーベスターを使用して回収される。乾燥させたガラス繊維プレートがシンチラントと併用されるとともにパーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）シンチレーションカウンタで計数される。

Ｙ５受容体結合アッセイ：ＣＨＯ−Ｋ１細胞は神経ペプチドＹ５遺伝子をコードするｃＤＮＡを一時的に形質移入されるとともに、次に４８時間後、膜がコンフルエント細胞培養物から調製される。膜は、４４ｐＭの［１２５Ｉ］−ヒトペプチドＹＹ（２２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ、パーキンエルマー・ライフ・サイエンス（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ））を伴い、および非標識テスト化合物を伴い、６０分間、外界温度で９６ウェルポリスチレンプレートにおいてインキュベートされる。次にウェル内容物が９６ウェルガラス繊維プレート上にパーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）プレートハーベスターを使用して回収される。乾燥させたガラス繊維プレートがシンチラントと併用されるとともにパーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）シンチレーションカウンタで計数される。

ＧＬＰ−Ｉ受容体結合アッセイ：受容体源がＲＩＮｍ５Ｆ細胞膜であるとともに、リガンドが［１２５Ｉ］ＧＬＰ−Ｉである結合置換アッセイを使用して、ＧＬＰ−Ｉ受容体結合活性および親和性が計測されてもよい。均質化されたＲＪＮｍ５Ｆ細胞膜は、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液中、４０，０００ｃｐｍ［１２５Ｉ］ＧＬＰ−Ｉトレーサー、および異なる濃度のテスト化合物を伴い、２時間、２３℃、一定の混合でインキュベートされる。反応混合物は、０．３％ＰＥＩ溶液に予浸されるとともに氷冷リン酸緩衝食塩水ですすがれるガラスフィルターパッドを通してろ過される。結合数はシンチレーションカウンタを使用して測定される。結合親和性は、グラフパッド・プリズム（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ）・ソフトウェア（グラフＰＡＤ・ソフトウェア社（ＧｒａｐｈＰＡＤ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．）、サンディエゴ、カリフォルニア州）を使用して計算される。

実施例３：マウス食物摂取量アッセイ
本発明のＧＩＰハイブリッドポリペプチドは、マウス食物摂取量アッセイにおいて食欲抑制について、および食餌誘発性肥満（ＤＩＯ）マウスにおける体重増加に対するその効果についてテストされる。スクリーニングのための実験プロトコルが本明細書に記載される。

雌性ＮＩＨ／スイスマウス（８〜２４週齢）が０６００の照明での１２：１２時間の明暗サイクル下で集団飼育される。水および標準ペレット状マウス固形飼料は、注記される事項を除き、適宜入手可能である。動物は実験１日前のおよそ１５００時間から始め絶食させる。実験の朝、動物は実験群に分けられる。典型的な試験においては、マウス３匹／ケージでｎ＝４ケージである。

時間＝０分、全ての動物は媒体または化合物の腹腔内注射を、典型的には約１０ｎｍｏｌ／ｋｇ〜７５ｎｍｏｌ／ｋｇの範囲をとる量で与えられるとともに、直ちに予め計量された量（１０〜１５ｇ）の標準固形飼料を与えられる。食物は、典型的には３０、６０、および１２０分で、取り除かれるとともに計量され、消費された食物の量を測定する（モルリー（Ｍｏｒｌｅｙ）、フルード（Ｆｌｏｏｄ）ら、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６７：Ｒ１７８−Ｒ１８４頁、１９９４年）。食物摂取量が、例えば、３０、６０、１２０、１８０および／または２４０分の時点で残っている食物の重量を、最初に時間＝０で提供された食物の重量から減じることにより計算される。有意な処置効果がＡＮＯＶＡ（ｐ＜０．０５）により同定される。有意な差が存在する場合、ダネット検定を使用して（プリズム（Ｐｒｉｓｍ）バージョン２．０１、グラフＰＡＤ・ソフトウェア社（ＧｒａｐｈＰＡＤ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．）、サンディエゴ、カリフォルニア州）テスト平均値が対照平均値と比較される。

食物摂取量アッセイにおける活性およびＧＩＰとともに本明細書のハイブリッドの合成に使用される親分子の配列としては、以下のものが挙げられる：

実施例４：被肥満Ｃ５７Ｂ１／６（食餌誘発性肥満、またはＤＩＯ）マウスにおける体重増加
雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウス（試験開始時４週齢）に高脂肪（ＨＦ、食餌性キロカロリーの５８％が脂肪）または低脂肪（ＬＦ、食餌性キロカロリーの１１％が脂肪）固形飼料を摂食させる。固形飼料で４週間後、各マウスは既定用量のハイブリッドポリペプチドを連続的に２週間皮下送達する浸透圧ポンプ（アルゼット（Ａｌｚｅｔ）＃２００２）を移植される。体重および食物摂取量が毎週計測される（サーウィット（Ｓｕｒｗｉｔ）ら、「Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ−Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ」，４４：６４５−５１頁、１９９５年）。テスト化合物の効果は、処置群当たり少なくとも１４マウスの％体重変化（すなわち、開始体重からの％変化）の平均＋／−ｓｄとして表される（ｐ＜０．０５ ＡＮＯＶＡ、ダネット検定、プリズム（Ｐｒｉｓｍ）バージョン２．０１、グラフＰＡＤ・ソフトウェア社（ＧｒａｐｈＰＡＤ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．）、サンディエゴ、カリフォルニア州）。

実施例５．ＧＩＰ化合物およびハイブリッドのさらなるテスト
有機共溶媒を含む水性培地中のエキセンディン−４の円偏光二色性（ＣＤ）およびＮＭＲ試験は、配列、ＬＦＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号：１８３）（残基２１−３９）を含むＣ末端セグメントがＰｒｏ３７のＰｈｅ２２との、およびＰｒｏ３８のＴｒｐ２５との相互作用の結果もたらされる固有の疎水性Ｔｒｐケージクラスターを形成することを明らかにする（１４〜１６）。興味深いことに、生体膜環境を模倣するミセル状態の、ドデシルホスホコリン（ＤＰＣ）を含む水中でのＴｒｐケージ形成の証拠はない。ＮＭＲスペクトルデータは８個のＣ末端残基の急速な部分運動を示し、これはおそらくはＴｒｐ残基のスホコリン頭部基とのエネルギー的に好ましい会合によりＴｒｐケージが不安定化されるためである。このＴｒｐケージクラスターモチーフはペプチドにより示されるタンパク質様三次構造の第１の例であるとともに、生体内分子中でプロテアーゼ感受性部位を遮蔽することによってより大きな代謝的安定性を供与することに関与し得るであろう（１７）。

このように、一実施態様において、ＧＩＰ類似体またはハイブリッドは、これらのペプチドがエキセンディンテール配列を切断ＧＩＰペプチドのＧＩＰ−（１−３０）およびＧＩＰ−（１−２６）のＣ末端に付加することによりエキセンディン−４について報告されるＴｒｐケージ構造を想定し得るという前提を伴い設計された。加えて、ＴｙｒおよびＡｌａ残基の、ＧＩＰのＮ末端での置換もまたＤＰＰ−ＩＶペプチダーゼ分解に対する耐性を付与するべく行われた。これらの代謝的に安定なＧＩＰ類似体またはハイブリッドは、単剤治療として、またはエキセンディン−４（または他のＧＬＰ−Ｉアゴニスト）または、メトホルミン、スルホニル尿素、チアゾリジンジオン、プラムリンチドおよび２型糖尿病の処置用インスリンなどの抗糖尿病薬を伴う補助的治療として、使用され得る。

類似体はＮＩＨスイスまたは糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスにおけるＧＩＰ受容体結合および急性グルコース降下アッセイによりスクリーニングされ得るとともに、スクリーニングされた。図２〜４を参照されたい。インビトロＧＬＰ−Ｉおよびグルカゴン受容体結合カウンタースクリーニングが実行され、受容体特異性が評価された。これらのＧＩＰ類似体またはハイブリッドの酵素的安定性もまた、腎刷子縁膜抽出物、ＲＩＮｍ５Ｆ細胞由来刷子縁膜および精製された中性エンドペプチダーゼ２４．１１を伴うペプチドのインキュベーションによりテストされ、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる切断産物の分析が続く（データは示さず）。

類似体は、それらの抗糖尿病効果、特に、インスリン分泌増強（インシュリン分泌効果）およびグルコース降下作用を評価するためさらに特徴付けでき、特徴付けられた。例えば、正常マウスにおいて、化合物Ｇは、完全長ＧＩＰより有意に効果的であることが所見された（図３Ａおよび３Ｂ）。図４に見られるとおり、化合物Ｇが糖尿病マウスモデルにおいてグルコースを降下させる、明白かつ長時間作用の効果を示す一方、１０倍の高容量でのＧＩＰの作用は中程度であるとともに時間に伴い減退する。化合物Ｇのグルコース降下プロファイルもまたエキセンディン−４（化合物Ｋ）のものと異なり、これはより急速な作用の開始を有する。

実施例６．ＧＩＰ類似体およびハイブリッドのグルコース降下効果の増強
新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッドの生体内でのグルコース降下効果が測定された。図８Ａおよび８ｂはかかる一試験の結果を提供する。点は平均値±ｓｅｍを表す。ペプチドがベースライン試料直後のｔ＝０で２時間絶食させたＮＩＨ／スイスマウスに腹腔内注射された。試料がｔ＝６０、１２０、１８０および２４０分に採取された。血糖がＯｎｅＴｏｕｃｈ（登録商標）Ｕｌｔｒａ（登録商標）（ライフスキャン社（ＬｉｆｅＳｃａｎ，Ｉｎｃ．）、ジョンソン・エンド・ジョンソン社（Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｃｏｍｐａｎｙ）、ミルピタス、カリフォルニア州）で計測された。＊ｐ＜０．０５、対媒体対照；ＡＮＯＶＡ、ダネット検定。

テストされたのは以下であった：化合物番号Ａ、ヒトＧＩＰ酸性型：ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱ−ＯＨ（配列番号２）；
化合物番号Ｉ、Ｄ−Ａｌａ２ＧＩＰ酸性型：
Ｙ（Ｄ−Ａｌａ）ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡ］ＶｎＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱ−ＯＨ（配列番号４７９）；および化合物番号Ｇ、Ｄ−Ａｌａ２ＧＩＰ（１−３０）−ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１）アミド型：
Ｙ（Ｄ−Ａｌａ）ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１８６）。

データは、本明細書の新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッドにおけるＤ−アラニン置換位置２位が生体内グルコース降下能力を改善することを実証している。完全長へのＤ−Ａｌａの付加でさえ未修飾ＧＩＰと比較してグルコース降下を改善する：改善された活性は最初の１時間において見られるが、時間に伴い減退する。対照的に、プロテアーゼ耐性Ｎ末端およびＴｒｐケージＣ末端シールドの双方が存在する時、明らかに優れた、かつ驚くべきプロファイルが観察される。例えば、双方の側面を含んでなる類似体（化合物Ｇを参照）のプロファイルは、ピークがｔ＝１２０分であるとともに未変性ＧＩＰまたはそのＤ−Ａｌａ２版より持続的な活性を徐々に増加させる。

図９は新規ＧＩＰ類似体またはハイブリッドのグルコース降下効果、特にＴｒｐケージの効果を示す。点は平均値±ｓｅｍを表す。ペプチドがベースライン試料直後のｔ＝０で２時間絶食させたＮＩＨ／スイスマウスに腹腔内注射された。試料がｔ＝６０、１２０、１８０および２４０分に採取された。血糖がＯｎｅＴｏｕｃｈ（登録商標）Ｕｌｔｒａ（登録商標）（ライフスキャン社（ＬｉｆｅＳｃａｎ，Ｉｎｃ．）、ジョンソン・エンド・ジョンソン社（Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｃｏｍｐａｎｙ）、ミルピタス、カリフォルニア州）で計測された。＊ｐ＜０．０５、対媒体対照；ＡＮＯＶＡ、ダネット検定。

テストされたのは以下であった：化合物番号Ｈ、（Ｄ−Ａｌａ２）ＧＩＰ（１−３０）アミド型：Ｙ（Ｄ−Ａｌａ）ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ−ＮＨ２（配列番号１）；および化合物番号Ｇ、（Ｄ−Ａｌａ２）ＧＩＰ（１−３０）−ＰＳＳＧＡＰＰＰＳアミド型：Ｙ（Ｄ−Ａｌａ）ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１８６）。

データは、Ｃ末端Ｔｒｐケージ配列の存在が、特に切断ＧＩＰ類似体またはハイブリッドにおいて、有意かつ驚くべき利益をＧＩＰ活性に提供することを実証している。

様々な類似体およびハイブリッドの生体内グルコース降下効果が測定されたとともに、図１０Ａおよび１０Ｂに示された。この例において、Ａｃ修飾およびＰｒｏ３置換はグルコース降下能力を有意には亢進しなかった。点は平均値±ｓｅｍを表す。ペプチドがベースライン試料直後のｔ＝０で２時間絶食させたＮＩＨ／スイスマウスに腹腔内注射された。試料がｔ＝６０、１２０、１８０および２４０分に採取された。血糖がＯｎｅＴｏｕｃｈ（登録商標）Ｕｌｔｒａ（登録商標）（ライフスキャン社（ＬｉｆｅＳｃａｎ，Ｉｎｃ．）、ジョンソン・エンド・ジョンソン社（Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｃｏｍｐａｎｙ）、ミルピタス、カリフォルニア州）で計測された。＊ｐ＜０．０５、対媒体対照；ＡＮＯＶＡ、ダネット検定。

テストされたのは以下であった：
化合物Ａ、ヒトＧＩＰ酸性型：ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱ（配列番号２）
化合物Ｂ：（ＡｃＹ）（Ｄ−Ａｌａ）ＧＩＰ（１−３０）−ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１）アミド型：
Ａｃ−Ｙ（ＤＡｌａ）ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号４５５）；
化合物Ｃ：（Ａｃ−Ｙ）ＧＩＰ酸性型：
ＡＣＹ−ＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２９０）；
化合物Ｄ、Ｐｒｏ３ＧＩＰ（１−３０）−ＰＳＳＧＡＰＰＰＳアミド：ＹＡＰＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号２４５）；
化合物Ｅ、Ｐｒｏ３ＧＩＰ（１−４２）酸性型：ＹＡＰＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱ（配列番号２９１）；
化合物Ｆ、Ｐｒｏ３ＧＩＰ（１−３０）アミド：
ＹＡＰＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ−ＮＨ２（配列番号２９２）；および
化合物Ｇ、（Ｄ−Ａｌａ２）ＧＩＰ（１−３０）−ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１）アミド（０６０１ＧＩＰ３７９４とも称される）：
Ｙ（Ｄ−Ａｌａ）ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１８６）。

静脈内グルコース負荷に応答しての様々なＧＩＰ類似体ハイブリッドのインスリン分泌効果を比較するため、ＧＩＰ類似体ハイブリッドが静脈内グルコース負荷試験（ＩＶＧＴＴアッセイ）において１００ｐｍｏｌ／ｋｇ／分の注入用量でラットにおいてテストされた。有意な生体内グルコース降下を示すＧＩＰ化合物が選択された。例えば、未変性ＧＩＰは基礎グルコース降下において全くまたはほとんど活性を示さないが、（０％および−１０％のＯＧＴＴ反応での基礎グルコース降下（最大減少％））、類似体０６０１ＧＩＰ４０４２および類似体ハイブリッド０６０１ＧＩＰ３７９４および０６０１ＧＩＰ４１７８は、それぞれ、極めて一時的に−１１％、−２０％を示したとともに、基礎グルコース降下について開始を−２０％遅延し、およびＯＧＴＴアッセイにおいては「ＮＤ」（不検出）、−２１％および−２０％減少であった。０６０１ＧＩＰ４１７８で開始が遅延されたことは、それがそこから緩徐に放出される血漿タンパク質と結合するという見解と一致する。

ＧＩＰ化合物およびハイブリッドの作用期間をＩＶＧＴＴアッセイにおいて決定した。その典型的なＩＶＧＴＴアッセイにおいて、テスト試料は、ＩＶ注射により投与した。試料のＩＶ注射は、ｔ＝−３０分にて開始し、ｔ＝９０まで続けた。ＩＶグルコースは、ｔ＝０にて与えた。ＩＶＧＴＴアッセイを用いて作用期間を決定するために、試料をグルコースの投与に先立ち示した１時点にて単回注射としてＳＣ注射した（例えば、ｔ＝−２４０、−１２０、−６０または−３０）。ＩＶグルコースは、ｔ＝０にて与えた。インスリンレベルは、ＡＵＣとして０〜３０分間にて決定した。ラットＩＶＧＴＴ作用期間アッセイ系における例示的活性を以下に示す

ＧＩＰ、０６０１ＧＩＰ３７９４および０６０１ＧＩＰ４０４２（ｄＡｌａ２−ＧＩＰ（１−４２）酸性型）は、規模においてエクセナチドおよびＧＬＰ−Ｉの効果と同様に、インスリン分泌刺激反応の静脈内グルコース負荷（ＩＶＧＴＴアッセイ）に対する有意な亢進を生じた（データは示さず）。０６０１ＧＩＰ４１７８（オクチルグリシン−ＧＩＰ（１−３０）−エキセンディン−４−（３１−３９））は、おそらく血漿タンパク質とのオクチルグリシン基を介してのその会合による、インスリン分泌刺激反応の減少を示したが、これはさらに遷延さえされる作用の持続時間という代償的な利益を提供するであろう。ＧＩＰ、０６０１ＧＩＰ３７９４および０６０１ＧＩＰ４１７８はグルコース負荷前のインスリンレベルにおいて有意な上昇を生じた。３個全ての類似体がグルコース負荷に応答したグルコース移動範囲の有意な低下を生じた（データは示さず）。記載されるとおり、摂食させた、イソフルラン麻酔下ＨＳＤ雄性ラットがインキュベートされたうえ、大腿動脈および静脈を介しカニューレ処置されたとともに１時間安定化させられた。安定化後、生理食塩水、ＧＩＰ、またはＧＩＰ類似体ハイブリッドの静脈内注入が開始された（ｔ＝−３０）。ｔ＝０で、５．７ｍｍｏｌ／ｋｇのＤ−グルコースの静脈内ボーラスが２分間にわたり投与された。グルコース計測およびインスリン濃度用試料がグルコース注入の前後（０〜９０分）の様々な時点で採取された。

ＩＶＧＴＴアッセイにおいて活性であろう追加的なＧＩＰハイブリッドとしては以下のものが挙げられる：
０６０１ＧＩＰ４２５２［ｄＡｌａ２］ＧＩＰ−（１−３０）−［オクチルグリシン３４］エキセンディン−４（３１−３９）；
０６０１ＧＩＰ４２８５［ｄＡｌａ２、Ｌｅｕ１４、Ａｌａ１８、ｇｌｕ２１］ＧＩＰ−（１−３０）−エキセンディン−４（３１−３９）；
０６０１ＧＩＰ４２３３［ｄＡｌａ２］ＧＩＰ−（１−３０）−ｆＧＬＰ−ｌｖ２−（３１−３７）；および
０６０１ＧＩＰ４１７９［ｄＡｌａ２、Ｌｅｕ１４、β−Ａｌａ３１、β−Ａｌａ３２］ＧＩＰ−（１−３２）−エキセンディン−４（３１−３９）。

また、マウス島細胞を用いてインスリン分泌増強アッセイを行った。島細胞を以下の通り単離した。マウス島を従前に記載された技術で単離した（Ｇｏｔｏｈ Ｍ， Ｍａｋｉ Ｔ， Ｋｉｙｏｉｚｕｍｉ Ｔ， Ｓａｔｏｍｉ Ｓ， Ｍｏｎａｃｏ ＡＰ（１９８５）。マウス膵臓島の単離についての改良方法。Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ４０（４）：４３７−４３８）。略言すれば、０．３５ ｍｇ／ｍｌ Ｌｉｂｅｒａｓｅ ＲＩ（Ｒｏｃｈｅ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を膵管に注射し、膵臓を３７℃にて１８分間消化した。島を９００ｇにて２０分間Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ−１０７７（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ， Ｉｎｃ．）不連続密度勾配遠心を用いてない外分泌組織から分離した。インスリン分泌実験の前に、島を５％ ＣＯ２を含む３７℃の１０％ウシ胎仔血清、１０ ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、１００ Ｕ／ｍｌペニシリンおよび１００ ｍｇ／ｍｌストレプトマイシンを補足したＲＰＭＩ−１６４０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で２日間培養した。インスリン分泌試験管内アッセイを以下の通り行った。グルコース−およびペプチド誘導インスリン分泌をわずかな修飾を含む従前に記載された方法により行った（Ｔａｔａｒｋｉｅｗｉｃｚ ｋ， Ｇａｒｃｉａ Ｍ， Ｏｍｅｒ Ａ， Ｖａｎ Ｓｃｈｉｌｆｇａａｒｄｅ Ｒ， Ｗｅｉｒ ＧＣ， Ｄｅ Ｖｏｓ Ｐ（２００１） Ｃ−ｐｅｐｔｉｄｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ａｆｔｅｒ ｍｅａｌ ｃｈａｌｌｅｎｇｅ ｉｎ ｍｉｃｅ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ ｒａｔ ｉｓｌｅｔｓ．Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ ４４（５）：６４６−５３）。刺激前に、島を、０．５％ ＢＳＡを補足し、１．６７ｍＭグルコースを含有するＲＰＭＩ−１６４０で３回洗浄し、プレインキュベートした。１時間のプレインキュベーション後に、島を再度３回洗浄して、残余のインスリンを除去し、島は刺激培地を含有する培養インサート（Ｍｉｌｌｉｃｅｌｌ−ＰＣＦ， Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で２４ウェルプレートに分注した。静置培養を３７℃にて１時間三連にてウェル当たり約１０個の島で行った。刺激培地は、１、１０、１００ｎＭの用量のＧＩＰ類似体を含む１６．７ｍＭグルコースを含有した。インスリン分泌実験の終わりにて、島を含むインサートを除去し、培地を採取し、インスリンＥＬＩＳＡアッセイ（Ｃｒｙｓｔａｌ Ｃｈｅｍ， Ｉｎｃ．）のために−２０℃にて凍結した。酸エタノールを残った島からのインスリンの一晩抽出のために適用した。ウェル当たりの合計島インスリン含量を用いて、インスリン遊離結果を正規化した。

実施例７．ペプチド安定性およびプロテアーゼ耐性
プロテアーゼに対する耐性がフープ−ソドマン（Ｈｕｐｅ−Ｓｏｄｍａｎｎ）らのプロトコル（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ １８（５）：６２５−６３２頁（１９９７年））に従い細胞系ＲＩＮｍＦ５を使用して測定された。この十分に分化した細胞系は一般的に膵β細胞モデルとして受け入れられている。指示されたＧＩＰ化合物（３０μＭ）がＲＩＮｍ５Ｆ細胞膜抽出物を伴い３７℃でインキュベートされ、かつ親ペプチドの年齢パーセントに比例するペプチドの分解が異なる間隔で６時間、ＬＣ−ＭＳを使用してモニタされた。データ（図１１を参照）はＣ末端にＴｒｐケージシールド（例えば、エキセンディン−４テール））を備える［ＤＡｌａ２］−ＧＩＰ（１−３０）−ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＧＩＰハイブリッド（化合物Ｇ（０６０１ＧＩＰ３７９４とも命名される）がシールドまたは完全長ＧＩＰ（１−４２）のないその親分子ＧＩＰ（１−３０）より安定であることを示す。従ってＴｒｐケージシールドの付加は、ケージの不在または、未変性ＧＩＰ−Ｃ末端配列などの代替の非ケージ形成配列と比較して驚くべきことに優れたプロテアーゼ耐性を提供する。さらにデータは、ＧＩＰ（１−３０）切断が外来配列をそのＣ末端で適応させることができるとともに、特に、Ｔｒｐケージシールド配列を適応させることができることを示す。

類似体もまたヒト血漿中での安定性についてテストした。略言すると、テスト化合物を水（または必要に応じて非常に高い希釈度のＤＭＳＯ）に溶解し、ヒト血漿またはヒト刷子縁膜（ｈＫＢＢＭ）調製物に添加し、３７℃で時点（０、１、２、３、４、および５時間）にてインキュベートし、メタノール（１：４比）で抽出し、および上清がＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより分析した。典型的には、ＧＩＰ試料を１ｍｇ／ｍＬ濃度での水中のペプチドのストック溶液から調製した。血漿安定性試料を最終濃度の２０μｇ／ｍＬまでストック溶液でヒト血漿プールをスパイクすることにより調製した。ｈＫＢＢＭ試料を５μＬの腎臓膜蛋白質（１０ｍｇ／ｍＬにて）を６５０μＬのＰＢＳに添加し、次いで、最終濃度の２０μｇ／ｍＬまでそのペプチドのストック溶液をスパイクすることにより調製した。３７℃にて異なる時点（０、１、２、３、４、５時間）でのインキュベーション後、２５μＬの各試料をＢｉｏＴｅｋＴＭ ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＴＭ液体ハンドラーを用いて１％ギ酸の水溶液で１：４に希釈した。５０μＬのこの希釈試料をＳｙｍｂｉｏｓｉｓ ＰｈａｒｍａＴＭ ｓｙｓｔｅｍに注入し、オンライン固相抽出を行った。２ミクロンフィルターをプレカラムとして用いて、分析用（ＰＬＲＰＳ，１Ｘ２０ ｍｍ）カラムの目詰まりを防止した。ＨＰＬＣポンプ、ＲｅｌｉａｎｃｅＴＭオートサンプラーおよびオンライン固相抽出（ＳＰＥ）は、質量分析（ＡｎａｌｙｓｔＴＭ）ソフトウェアでドライバーにより制御された統合システム（Ｓｙｍｂｉｏｓｉｓ ＰｈａｒｍａＴＭ，Ｓｐａｒｋ Ｈｏｌｌａｎｄ， Ｉｎｃ．のパーツであった。Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ＡＰＩ ４０００ＴＭ Ｑｔｒａｐ質量分析計は、ＭＲＭ検出を提供した。０．０５％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）および０．００５％ヘプタフルオロ酪酸（ＨＦＢＡ）の双方を含む、水よりなる溶媒Ａおよびアセトニトリルよりなる溶媒Ｂを組み合わせた９５：５ から５：９５までのＨＰＬＣ勾配。合計分析時間は、試料当たり約３．６分であった。ＳＰＥカートリッジ（Ｈｙｓｐｈｅｒｅ ＧＰ樹脂，２．０Ｘ４ｍｍ，１０−１５μｍ）を試料抽出に用いた。洗浄後、試料を分析的解析のためにメタノールで抽出した。ペプチドについての統合したピーク面積を用いて、以下のパラメーターを生成した：１）すべてのペプチドについての０時点に対するすべての時点についての正規化された面積カウント；２）すべてのペプチドについての計算された曲線下面積（ＡＵＣ）、および３）１００％の値を与える（陽性対照）エキセンディン−４についてのＡＵＣに対する正規化されたすべてのＡＵＣ。

ヒト血漿安定性アッセイにおいて、「安定」がヒト血漿に対する５時間の処置で約９０％超残留としてスコア化され、「中程度安定」が２時間で約７５％超残留および５時間で約９０％未満残留としてスコア化され、かつ「不安定」が２時間で約７５％未満残留としてスコア化された。不安定類似体およびハイブリッドは一般的に、本明細書に提示される方法には不適であろう。例示的化合物がテストされた。安定としてスコア化された化合物は、０６０１ＧＩＰ３７９４、０６０１ＧＩＰ４１５０および０６０１ＧＩＰ４２３３であった。中程度安定としてスコア化された化合物は、０６０１ＧＩＰ４１４９、０６０１ＧＩＰ４１５２、０６０１ＧＩＰ４１５３、０６０１ＧＩＰ４１７６、０６０１ＧＩＰ４１７７、０６０１ＧＩＰ４２１５、０６０１ＧＩＰ４２８４、および０６０１ＧＩＰ４２８９であった。不安定としてスコア化された化合物は、０６０１ＧＩＰ１５４０、０６０１ＧＩＰ４１４７、０６０１ＧＩＰ４２９２、０６０１ＧＩＰ４２９３、および０６０１ＧＩＰ４２９４であった。オクチルグリシンを含有するＧＩＰ化合物０６０１ＧＩＰ４１７８は不安定としてスコア化されたが、これはＤＰＰ−ＩＶ耐性であるとともに、血漿タンパク質に結合してその抽出および検出を複雑化する；それにもかかわらず、これは本明細書の方法の目的では安定化合物であると考えられる。ＧＩＰ類似体ハイブリッド０６０１ＧＩＰ３７９４およびＣ末端カエルＧＬＰ−１「テール」を有するＧＩＰ化合物はエキセンディン−４より驚くべきことに少なくとも安定またはより安定である。

実施例８．さらなる例示的ＧＩＰ／アミリン−ｓＣＴハイブリッド
アミド型の、さらなる例示的ＧＩＰハイブリッドが調製された。（本明細書において使用されるとき、小文字の単一アミノ酸コードは「Ｄ」アミノ酸を示す。例えば、ＹａＥは位置２位のＤ−アラニンを示す）

化合物が本明細書に記載されるとおり受容体結合についてテストされた：

ハイブリッドは効果的かつ選択的に関連受容体に結合し、かつそれを活性化した。

化合物もまた本明細書に記載されるとおり食物摂取阻害、血糖降下アッセイおよび経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）においてアッセイされた。食物摂取アッセイ（図１３Ａ、１４、１５および１６Ａ〜１６Ｂ）において点はｎ＝４ケージ（マウス３匹／ケージ）の平均値＋／−ｓｄを表す。ペプチドがｔ＝０で腹腔内注射された。食物が注射直後に導入され、かつｔ＝３０、６０、１２０、および１８０分での消費量が計測された。＊ｐ＜０．０５、対媒体対照；ＡＮＯＶＡ、ダネット検定。

図１３Ｂにおいて棒は平均値＋／−ｓｄを表す。ペプチドがｔ＝−５分で４時間絶食させたＮＩＨ／スイス雌性マウスに腹腔内注射された。経管栄養（１．５ｇ／ｋｇ）がｔ＝０で与えられた。試料がｔ＝３０分で採取された。＊ｐ＜０．０５、対媒体対照；ＡＮＯＶＡ、ダネット検定。図１７において点は平均値＋／−ｓｅｍを表す。ペプチドがベースライン試料直後のｔ＝）で２時間絶食させたＮＩＨ／スイスマウスに腹腔内注射された。試料がｔ＝６０、１２０および１８０分に採取された。血糖がＯＮＥＴＯＵＣＨ ＵＬＴＲＡ（ライフスキャン社（ＬｉｆｅＳｃａｎ，Ｉｎｃ．）、ミルピタス、カリフォルニア州）で計測された。＊ｐ＜０．０５、対媒体対照；ＡＮＯＶＡ、ダネット検定。図２３Ａおよび２３Ｂに示されるとおりＧＩＰ−アミリン／ｓＣＴ／アミリンハイブリッドは胃排出を緩徐するとともに細胞内カルシウムを低減するが、これはアミリンファミリーホルモンモジュールの特質である。このようにこれらのＧＩＰハイブリッド化合物はＧＩＰ類似体のインスリン分泌刺激作用（および他の作用）を胃排出効果またはアミリン模倣物の有益なカルシウム調節効果（例えば骨密度維持に関する）と組み合わせる。これらのＧＩＰハイブリッドの各々についての一実施形態においてＧｌｙリンカー、例えばＧｌｙＧｌｙＧｌｙが使用される。アミリン−ｓＣＴ−アミリンキメラは、媒体に比較して低い血液グルコースではなかったが、アミリン−ｓＣＴ−アミリンキメラを含むＧＩＰハイブリッドは、血液グルコースを有効に低下させた。この活性を持つＧＩＰおよびアミリンファミリーモジュールの例示的化合物は、０６０１ＧＩＰ４０９０および０６０１ＧＩＰ４０９１を含む。親化合物に比較して、これらの化合物は、以下の特性を示した：

ＧＩＰハイブリッドは、所望の受容体を結合および活性させ、ならびにＧＩＰハイブリッドの選択された特性と一致する生体内特定を示す。これをさらに以下に示す。カラムＲＢＡ１は、「ＧＩＰ ＲＢＡ（ＲＩＮ）または（％阻害 １０ｎＭ、ＧＩＰ−ＬＦ）」を示し；カラムＡ１は、「インスリンプレＩＶＧＴＴにおけるＡＵＣ変化」；カラムＡ２は、「インスリンポストＩＶＧＴＴにおけるＡＵＣ変化」；カラムＢ１は、「基礎グルコース低下 ８ｎｍｏｌ／Ｋｇ」；カラムＩＶ１は、「０６０１ＧＩＰ３７９に比較し蛋白質ＩＶＧＴＴ活性」；カラムＣ１は、「ＧＬＰ／ＧＩＰ／ＣＴ ＣＹＣＬＡＳＥ（ＲＩＮ）Ｖ．２活性」を示す。

実施例９．ＧＩＰ化合物の心筋細胞に対する直接作用
サイクリックＡＭＰ（アデノシン３’，５’−環状モノリン酸）はＧタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）シグナル伝達経路における重要な第２のメッセンジャーである。リガンドの受容体への結合がＧタンパク質活性化を導き、これが次には、ｃＡＭＰの細胞内レベルの調節を担う酵素である、アデニリルシクラーゼを調節する。ｃＡＭＰレベルの計測値は受容体機能の指標として広く使用される。心筋細胞ＧｓおよびＧｉ共役受容体の活性化がｃＡＭＰ産生の尺度として測定された。

細胞単離。新生仔心筋細胞が市販の系を使用して単離された。セルトロン単離キット（Ｃｅｌｌｕｔｒｏｎ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｋｉｔ）（ｎｃ−６０３１）（セルトロン（Ｃｅｌｌｕｔｒｏｎ）、ニュージャージー州）およびプロトコルが細胞単離に使用された。スプラグドーリー（Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ）新生仔ラット（１〜２日齢）が断頭され、拍動心が消化緩衝液（セルトロン（Ｃｅｌｌｕｔｒｏｎ）Ｄ１緩衝液）中に解体され細胞を解離した。１５個のラット心には、６ｍｌの緩衝液（セルトロン（Ｃｅｌｌｕｔｒｏｎ）Ｄ２緩衝液）での８個の消化物で十分である。再懸濁された細胞が緩衝液中（セルトロン（Ｃｅｌｌｕｔｒｏｎ）Ｄ３緩衝液）で、最適な分散液を可能にするとともに凝集塊を壊すためのピペット操作の必要性を最小化するのに十分な時間、インキュベートされた。第１の２個の消化物から遊離された細胞は、それらの有意な部分が赤血球細胞であることから、廃棄された。再懸濁された細胞がろ過され、および線維芽細胞を除去するためＮＳ培養液（セルトロン（Ｃｅｌｌｕｔｒｏｎ）、ニュージャージー州）中、インキュベーター内のプラスチック上で１時間予備播種することが可能であった。予備播種の１時間後、浮遊細胞が除去されるとともにフラスコがＮＳ培養液でリンスされる。浮遊細胞およびリンス培養液中の細胞が混合および計数された。残存赤血球細胞は、心筋細胞のものより小さく、計数されなかった。

細胞播種。実験０日目、細胞が単離され、ＮＳ培養液中に８，０００／３８４ウェル、５０，０００／９６ウェルまたは５００，０００／１２ウェルで２４時間、播種された。１日目、ＮＳ培養液が新鮮ＮＳ培養液と交換された。推奨されたＮＷ（セルトロン（Ｃｅｌｌｕｔｒｏｎ）、ニュージャージー州）培養液が典型のごとく十分な細胞増殖または形態を補助しなかったことが観察された。

ｃＡＭＰアッセイ。ＧＩＰ化合物が、単離され、培養された心筋細胞に対するｃＡＭＰ誘発についてテストされた。テスト化合物誘発性ｃＡＭＰレベルが市販のシスビオ（ＣｉｓＢｉｏ）（ベッドフォード マサチューセッツ州）ＨＲＴＦ（登録商標）（均一時間分解蛍光）ｃＡＭＰ動的アッセイを使用してＧｓ／Ｇｉ３８４−ウェル接着フォーマットにおいて、基本的には製造者により記載されるとおり、測定された（ガブリエル（Ｇａｂｒｉｅｌ）ら、「Ｈｉｇｈ ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ｆｏｒ ｄｉｒｅｃｔ ｃｙｃｌｉｃ ＡＭＰ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ」、Ａｓｓａｙ ＆ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．２：２９１−３０３頁（２００３年）およびセニ（Ｃｅｎｎｉ）ら、「ＨＴＲＦ（登録商標）ｃｙｃｌｉｃ ＡＭＰ ａｓｓａｙ：ｎｅｗ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｃｅｌｌ−ｂａｓｅｄ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｂｅｔｔｅｒ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｉ ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ」、Ｓｍａｒｔ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ、ＩＩＲ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ、チューリッヒ（スイス）（２００３年）もまた参照）。用量反応が測定された。

Ｇｓアッセイのための陽性対照は１０μＭのフォルスコリンであり、および陰性対照は緩衝液であった。Ｇｉアッセイのための陽性対照は緩衝液であり、および陰性対照は１０μＭのフォルスコリンであった。テスト化合物が細胞を伴い３０分間、セ氏３７度で刺激緩衝液（（２００ｍｌ中に、１９８．３ｍｌの１×ＨＢＳＳ、１ｍｌの１ＭのＨｅｐｅｓ、ｐＨ７．４まで１ＭのＮａＯＨで滴定される６７０μｌの３０％ＢＳＡを含有する）中でインキュベートされた。産生されたｃＡＭＰを計測するため、細胞が溶解され、およびｃＡＭＰが製造者プロトコルに従いアッセイされた。例示的結果が図１８Ａ（ＧＩＰ：ヒトＧＩＰ（１−４２）酸性型）および１８Ｂ（ＧＩＰハイブリッド化合物Ｇ）に示される。Ｙ軸は６２０ｎＭでとられる計測値によって除される６６５ｎＭでとられる時間分解蛍光計測値の比である。本実験においてＥＣ５０はＧＩＰハイブリッドについて１１．７ｎＭおよびＧＩＰについて９．１ｎＭであった。ＧＬＰ−Ｉおよびエキセンディン−４は非常に低度から非有意の活性を示した（データは示さず）。さらに、３つの個々の心筋細胞Ｇｓ共役受容体活性化実験から、ＥＣ５０（ｎＭ）はＧＩＰについて１５．６、ウロコルチンについて０．７およびＧＩＰハイブリッド化合物Ｇについて２９．８であった。ウロコルチンは陽性対照として使用される既知の心筋細胞Ｇｓ共役受容体アクチベーターである。ＧＩＰおよびＧＩＰハイブリッドは典型的には、５０％より大きい受容体活性化反応を示した。ウスディン（Ｕｓｄｉｎ）ら（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １３３：２８６１−２８７０頁（１９９３年））は心臓、特に主要な血管の内皮の標識と一致する心内皮を含む、様々なラット組織におけるＲＮＡに対するラットＧＩＰ受容体のクローニングおよびそのインサイツハイブリダイゼーションを報告した。結果はＧＩＰ化合物が心臓に対し直接作用を提供できることを示す。

実施例１０．ＧＩＰ化合物の投与後の遠隔測定による覚醒ラットにおける循環系効果の計測
２２．８±０．８℃で１２：１２時間明暗サイクルにおいて飼育された雄性ハーラン・スプラグドーリー（Ｈａｒｌａｎ Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ）ラットが使用され、循環系に対するテスト化合物の効果を遠隔測定の使用を通じて試験した。実験は明サイクル中に実施された。遠隔測定により動脈圧、心拍数および動脈ｄｐ／ｄｔを示すリアルタイム血行動態の読み取りが、覚醒の、非麻酔下の、無拘束ラットに埋め込まれた無線送信機を介して可能となる。本実施例において、ラットは、媒体、８０ｎｍｏｌ／ｋｇのＧＩＰ（ヒトＧＩＰ（１−４２）酸性型）、または８０ｎｍｏｌ／ｋｇの０６０１ＧＩＰ３７９４のいずれかを遠隔静脈内投薬により注射された。遠隔静脈内投薬は血管内留置アクセスポートを通じて実現された（アクセス・テクノロジーズ（Ａｃｃｅｓｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）（スコーキー、イリノイ州））。ポートは肩甲骨の間の皮膚直下にある筋肉に固定される。カテーテルは頸静脈中に定置する。データは注射後６０分まで収集された。

図１９Ａ〜Ｅに示されるとおりＧＩＰハイブリッドの心拍数増加に対する効果はＧＩＰ（ヒトＧＩＰ（１−４２）酸性型）（図１９Ｂ）と比べて一過性であったが、ＧＩＰハイブリッドが平均動脈圧を低下させた一方でＧＩＰは効果を有さなかった（図１９Ａ）とともに、双方の化合物が同様にｄＰ／ｄｔを増加させた（図１９Ｃ）。図１９Ｄおよび１９ＥはＧＩＰハイブリッドが媒体またはＧＩＰのいずれと比較しても持続的な収縮期および拡張期圧降下を提供することを実証する。ハイブリッド０６０１ＧＩＰ４０９１は、ＧＩＰおよびアミリン−ｓＣＴ−アミリンキメラ化合物１０のものと同様のこれらの心血管系パラメーターに対する有利な効果を有した。

データからは、ＧＩＰがインタクトラットにおいて動脈圧を上昇することなしに陽性変力効果を示すことが確認され得る。ＧＩＰはまた、変時（心拍数上昇）効果も示す。ＧＩＰハイブリッドは、ＧＩＰと比較して、心促進を引き起こすこと、および動脈圧の低下を誘起することなく、変力効果の遷延を示す（本明細書では動脈圧（ｄＰ／ｄｔ）の上昇のピーク速度として示される）。従って、ＧＩＰハイブリッドは、心仕事量の増加に付随しない血管拡張および灌流上の利益を示すことができる。加えて、収縮期圧または拡張期圧のいずれかの、また双方を含め、持続性降下は、高血圧症ならびに心欠陥関連罹患率および死亡率イベントの低減に結びつく、認知された有益な心血管作用である。

実施例１１．ＧＩＰの体重減少に対する効果の欠如
ＧＩＰ（１−４２）およびＧＩＰ−ＤＰＰ−ＩＶ耐性類似体／エキセンディンテールハイブリッド（０６０１ＧＩＰ３７９４）の効果が、本明細書に記載されるとおりＤＩＯマウスにおける食物摂取量および体重減少に対する効果についてテストされた。図２０Ａに示されるとおり、ＧＩＰはマウスにおける食物摂取を急性的には阻害しなかったことが観察された。比較して、１０分の１の用量でのラットアミリンは、対照と比べ、３０分以内に有意な減少を引き起こした。より遅い時点で（６０、１２０分）食物摂取量を減少させるＧＩＰの傾向はアミリン分泌のその刺激による間接効果であった可能性がある。点はｎ＝４ケージ（マウス３匹／ケージ）の平均値±ｓｄを表す。ペプチドがｔ＝０で腹腔内注射された。食物が注射直後に導入され、消費量がｔ＝３０、６０、および１２０分で計測された。＊ｐ＜０．０５、対媒体対照；ＡＮＯＶＡ、ダネット検定。同様にエキセンディンテールを含んでなるＤＰＰ−ＩＶ耐性ＧＩＰ類似体ハイブリッドである、化合物０６０１ＧＩＰ３７９４は、３０分で媒体対照摂取との差異がない（図２０Ｂ）ことに反映されるとおり食物摂取を急性的には阻害しなかった。ＧＩＰと同様、より遅い時点で（６０、１２０分）食物摂取量を減少させるこの化合物の傾向はアミリン分泌のその刺激に起因する可能性がある。点はｎ＝４ケージ（マウス３匹／ケージ）の平均値±ｓｄを表す。ペプチドがｔ＝０で腹腔内注射された。食物が注射直後に導入され、消費量がｔ＝３０、６０、および１２０分で計測された。＊ｐ＜０．０５、対媒体対照；ＡＮＯＶＡ、ダネット検定。ＧＩＰおよびＧＩＰアゴニストとは対照的に、エクセナチドおよびＧＬＰ１アゴニストは、アミリン分泌を刺激するその効果と無関係に、食物摂取を直接的および急性的に阻害する。食物摂取量の低減は第１の時点で出現する（図２０Ｃ）。同様に、ＧＬＰ−Ｉおよびエクセナチドの胃排出および食後グルコースプロファイルに対する効果が１型糖尿病対象において報告されており、効果はｂ細胞およびアミリンの存在に依存しないことを示している。

図２１に示されるとおり、ＧＩＰは食餌誘発性肥満マウスにおいて体重減少を引き起こさなかった。体重が高脂肪食の摂食により増加したマウス（ＨＦ生理食塩水群）において、小型浸透圧ポンプを介して２週間注入されたＧＩＰは体重変化に対し効果を有さなかった。対照的に、３０倍低速で注入されたエクセナチドは、低脂肪食を摂食させたマウス（ＬＦ群）において観察される体重変化まで低減した。＊ｐ＜０．０５；ＡＮＯＶＡ、対ＨＦ生理食塩水。これはＧＩＰの抗または非異化効果を実証する。対照的に、本明細書においてはアミリン／ｓＣＴ／アミリンキメラなどの、第２のホルモンモジュールの然るべき選択を有するＧＩＰハイブリッドが食物摂取量の低減および体重減少を引き起こさなかったことが観察された。また、さらに、エキセンディンファミリーモジュールを含有するＧＩＰハイブリッドの結果、体重損失を生じる。エキセンディン−ＧＩＰハイブリッド０６０１ＧＩＰ４５２６ ［ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮ（β−Ａ）（β−Ａ）Ｋ（＃Ｃ）−ＮＨ２］（配列番号４８４） ［ＹａＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ（β−Ａ）（β−Ａ）Ｋ＃］（配列番号４８３）（ここに、この２つの分子はＣ末端からＣ末端へ連結した）は、第７日まで持続した体重の低下を示した。また、このハイブリッドは、マウスモデルにおいて食物摂取を低下させた。このハイブリッドは、ＧＩＰおよびＧＬＰ−１受容体の双方に結合し、それらを活性化した。

実施例１２．溶解性および物理学的安定性
本明細書に記載された修飾を含むＧＩＰ類似体は、ヒトＧＩＰまたは０６０１ＧＩＰ３７９のごとき親ＧＩＰに比較して、優れた生理活性、作用期間および／または物理学的な安定性を保持しつつ、医薬処方、貯蔵および投与に対し、少なくともいくつかのｐＨにて驚くべきことに良好な溶解性（少なくとも約１ｍｇ／ｍｌまたは少なくとも約２．５ｍｇ／ｍｌまたはさらに少なくとも約５ｍｇ／ｍｌ）を有する。以下の方法を用いて、種々のｐＨにて溶解性ならびに物理学的および化学的な安定性を比較できる。以下の例示的なｐＨおよび緩衝液を用いることができる：３０ｍＭクエン酸塩中のｐＨ３．０、３０ｍＭ酢酸塩中のｐＨ４．０、３０ｍＭ酢酸塩中のｐＨ５．０、３０ｍＭヒスチジン中のｐＨ６．０、３０ｍＭヒスチジン中のｐＨ７．０、３０ｍＭリン酸塩中のｐＨ８．０および３０ｍＭホウ酸塩中のｐＨ９．０。２００ｍｌの緩衝液をテストペプチドを含むバイアルに添加して、１０ｍｇ／ｍｌまたは５ｍｇ／ｍｌ溶液を達成する。約３０秒間のボルテックス後、溶液の出現をＦｉｂｅｒ−Ｌｉｔｅ下で観察する。緩衝液をその溶液の合計容積が１０００ｍｌに達するまで、２００ｍｌアリコートで添加し続ける。溶液の外観は、各２００ｍｌの緩衝液を添加した後記録する。ペプチド濃度に対する外観は、透明、わずかにかすんだ、かすんだ、濁ったとして記録した。一実施態様において、ＧＩＰ類似体は、ｐＨ４〜８またはｐＨ５〜８での少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ濃度にて、およびさらにｐＨ４〜８またはｐＨ５〜７での少なくとも５ｍｇ／ｍｌにて透明溶液を達成した。

あるｐＨでの安定性を評価するために、前記の溶液を２ｍｌＳｃｈｏｔｔバイアルにろ過し、等しく３個のバイアルに分ける。各バイアルの栓をして、堅固に密閉した。第１のバイアルを７日間５℃にて、第２のバイアルを３日間４０℃にて、第３のバイアルを７日間４０℃にてインキュベートする。インキュベーション後に、すべての試料の外観をＦｉｂｅｒ−Ｌｉｔｅ下で記録する。そのペプチド溶液が濁りるかまたは沈殿するならば、その溶液をＨＰＬＣ分析（Ｖｙｄａｃ Ｃ１８カラムを用いる逆相ＨＰＬＣ法）に先立ちろ過して、溶液中に残っている無傷のペプチドの量を決定する。あるいは、生理活性を測定できる。安定性は、計算［（テスト日の％ペプチド-５℃のＴ０での％ペプチド）／５℃のＴ０での％ペプチド］×１００を用いてパーセント効力損失として記録する。図２７は、０６０１ＧＩＰ５０８２の例示的ｐＨ−対−溶解性プロフィールおよびｐＨ−対−安定性プロフィールを示す。

本発明は例示的実施例および実施形態に関して記載しているが、当業者には変形および変更が想起されるであろうことが理解される。それゆえ、付属する特許請求の範囲は、主張されるとおりの本発明の範囲内にある全てのかかる同等な変形を網羅することが意図される。

Claims (99)

1. 少なくとも１種のホルモン活性を呈するＧＩＰ類似体、誘導体またはハイブリッドポリペプチドであるＧＩＰ化合物であって、前記ポリペプチドが少なくとも１個の追加的な生理活性ペプチドホルモンモジュールに共有結合される第１の生理活性ペプチドホルモンモジュールを含んでなり；
   前記生理活性ペプチドホルモンモジュールが、成分ペプチドホルモン、前記成分ペプチドホルモンの少なくとも１種のホルモン活性を呈する成分ペプチドホルモンの断片、前記成分ペプチドホルモンの少なくとも１種のホルモン活性を呈する成分ペプチドホルモンの類似体および誘導体、前記成分ペプチドホルモンの少なくとも１種のホルモン活性を呈する成分ペプチドホルモンの類似体および誘導体の断片、およびペプチドエンハンサーからなる群より独立して選択され；
   前記第１の生理活性ペプチドホルモンモジュールの前記成分ペプチドホルモンが、ＤＰＰ−ＩＶに対する耐性につき改変されたＧＩＰであり；
   前記少なくとも１個の追加的な生理活性ペプチドホルモンモジュールの前記成分ペプチドホルモンが、アミリン、アドレノメデュリン（ＡＤＭ）、カルシトニン（ＣＴ）、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）、インテルメジン、コレシストキニン（「ＣＣＫ」）、レプチン、ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−Ｉ）、グルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ−２）、オキシントモジュリン（ＯＸＭ）、カテスタイン、ナトリウム利尿ペプチド、ウロコルチンファミリーペプチド、ニューロメジンファミリーペプチド、エキセンディン−３、およびエキセンディン−４からなる群より独立して選択され；
   前記ペプチドエンハンサーが、所望の化学的安定性、立体構造的安定性、代謝的安定性、生体利用能、器官／組織ターゲティング、受容体相互作用、プロテアーゼ阻害、血漿タンパク質結合、または他の薬物動態学的特徴を前記ＧＩＰ化合物に対し供与する成分ペプチドホルモンの構造モチーフ、および所望の化学的安定性、立体構造的安定性、代謝的安定性、生体利用能、器官／組織ターゲティング、受容体相互作用、プロテアーゼ阻害、血漿タンパク質結合、またはＧＩＰ化合物ポリペプチドに他の薬物動態学的特徴を前記ＧＩＰ化合物に対し供与する成分ペプチドホルモンの類似体または誘導体の構造モチーフからなる群より独立して選択され；および
   前記生理活性ペプチドホルモンモジュールの少なくとも１個が成分ペプチドホルモンの少なくとも１種のホルモン活性を呈するＧＩＰ化合物。
2. 前記ペプチドエンハンサーが、アミリン（３２−３７）、アミリン（３３−３７）、アミリン（３４−３７）、アミリン（３５−３７）、アミリン（３６−３７）、アミリン（３７）、ＡＤＭ（４７−５２）、ＡＤＭ（４８−５２）、ＡＤＭ（４９−５２）、ＡＤＭ（５０−５２）、ＡＤＭ（５１−５２）、ＡＤＭ（５２）、ＣＴ（２７−３２）、ＣＴ（２７−３２）、ＣＴ（２８−３２）、ＣＴ（２９−３２）、ＣＴ（３０−３２）、ＣＴ（３１−３２）、ＣＴ（３２）、ＣＧＲＰ（３２−３７）、ＣＧＲＰ（３３−３７）、ＣＧＲＰ（３４−３７）、ＣＧＲＰ（３５−３７）、ＣＧＲＰ（３６−３７）、ＣＧＲＰ（３７）、インテルメジン（４２−４７）、インテルメジン（４３−４７）、インテルメジン（４４−４７）、インテルメジン（４５−４７）、インテルメジン（４６−４７）、インテルメジン（４７）、ＰＹＹ（２５−３６）、ＰＹＹ（２６−３６）、ＰＹＹ（２７−３６）、ＰＹＹ（２８−３６）、ＰＹＹ（２９−３６）、ＰＹＹ（３０−３６）、ＰＹＹ（３１−３６）、ＰＹＹ（３２−３６）、ＰＹＹ（２５−３５）、ＰＹＹ（２６−３５）、ＰＹＹ（２７−３５）、ＰＹＹ（２８−３５）、ＰＹＹ（２９−３５）、ＰＹＹ（３０−３５）、ＰＹＹ（３１−３５）、ＰＹＹ（３２−３５）、カエルＧＬＰ−１（２９−３７）、カエルＧＬＰ−１（３０−３７）、カエルＧＬＰ−２（２４−３１）、エキセンディン−４（３１−３９）、エキセンディン−４（３２−３９）、エキセンディン−４（３３−３９）、エキセンディン−４（３４−３９）、エキセンディン−４（３５−３９）、エキセンディン−４（３６−３９）、エキセンディン−４（３７−３９）、エキセンディン−４（３８−３９）、エキセンディン−４（３９）、およびそれらの類似体からなる群より独立して選択される、請求項１に記載のＧＩＰ化合物。
3. 前記第１の生理活性ペプチドホルモンモジュールの少なくとも１個または前記少なくとも１個の追加的な生理活性ペプチドホルモンモジュールが成分ペプチドホルモンまたは前記成分ペプチドホルモンの少なくとも１種のホルモン活性を呈する成分ペプチドホルモンの断片である、請求項１または２記載のＧＩＰ化合物。
4. 前記第１の生理活性ペプチドホルモンモジュールの少なくとも１個または前記少なくとも１個の追加的な生理活性ペプチドホルモンモジュールが、少なくとも１種のホルモン活性を呈する成分ペプチドホルモンの類似体もしくは誘導体または前記成分ペプチドホルモンの少なくとも１種のホルモン活性を呈する成分ペプチドホルモンの類似体または誘導体の断片である、請求項１〜３のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
5. 前記第１の生理活性ペプチドホルモンモジュールの少なくとも１個または前記少なくとも１個の追加的な生理活性ペプチドホルモンモジュールがペプチドエンハンサーである、請求項１〜４のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
6. 前記少なくとも１個の追加的な生理活性ペプチドホルモンモジュールの前記成分ペプチドホルモンが、アミリン、カルシトニン、ＣＣＫ、ＰＹＹ、およびエキセンディン−４からなる群より独立して選択される、請求項１〜５のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
7. 少なくとも１種のホルモン活性を呈する前記少なくとも１個の生理活性ペプチドホルモンモジュールが、前記ＧＩＰ化合物ポリペプチドのＮ末端部分に位置する、請求項１〜６のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
8. 前記ＧＩＰ化合物のＮ末端部分に位置する少なくとも１種のホルモン活性を呈する前記少なくとも１個の生理活性ペプチドホルモンモジュールが、Ｃ末端からＮ末端方向に構成される、請求項１〜７のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
9. 前記ＧＩＰ化合物のＮ末端側終端がアミド化される、請求項１〜８のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
10. 少なくとも１種のホルモン活性を呈する前記少なくとも１個の生理活性ペプチドホルモンモジュールが、前記ＧＩＰ化合物のＣ末端部分に位置する、請求項１〜９のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
11. 前記ＧＩＰ化合物のＣ末端側終端がアミド化またはアシル化される、請求項１〜１０のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
12. １個の生理活性ペプチドホルモンモジュールのＣ末端側終端が、別の生理活性ペプチドホルモンモジュールのＮ末端側終端に直接付着されて共有結合を形成する、請求項１〜１１のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
13. 前記生理活性ペプチドホルモンモジュールが、アルキル；ジカルボン酸；ＰＥＧ；アミノ酸；ポリアミノ酸；二官能性リンカー；アミノカプロイル（Ａｃａ）；Ｇｌｙ；β−アラニル；８−アミノ−３，６−ジオキサオクタノイル；Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＧｌｙおよびＧｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ（ＧＫＲ）からなる群より独立して選択される１つまたは複数の連結基を使用して共有結合される、請求項１〜１２のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
14. 前記少なくとも１個の追加的な生理活性ペプチドホルモンモジュールが、ＧＬＰ１、少なくとも１種のホルモン活性を呈するＧＬＰ１の断片、少なくとも１種のホルモン活性を呈するＧＬＰ１類似体または誘導体、または少なくとも１種のホルモン活性を呈するＧＬＰ１類似体の断片、エキセンディン−４、少なくとも１種のホルモン活性を呈するエキセンディン−４の断片、少なくとも１種のホルモン活性を呈するエキセンディン−４類似体または誘導体、または少なくとも１種のホルモン活性を呈するエキセンディン−４類似体の断片、アミリン、少なくとも１種のホルモン活性を呈するアミリンの断片、少なくとも１種のホルモン活性を呈するアミリン類似体または誘導体、または少なくとも１種のホルモン活性を呈するアミリン類似体の断片、ＣＣＫ、少なくとも１種のホルモン活性を呈するＣＣＫの断片、少なくとも１種のホルモン活性を呈するＣＣＫ類似体または誘導体、少なくとも１種のホルモン活性を呈するＣＣＫ類似体の断片、ＣＴ、少なくとも１種のホルモン活性を呈するＣＴの断片、少なくとも１種のホルモン活性を呈するＣＴ類似体または誘導体、少なくとも１種のホルモン活性を呈するＣＴ類似体の断片、ペプチドエンハンサー、およびそれらの組み合わせからなる群より独立して選択される、請求項１〜１３のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
15. 配列Ｙ（Ｄ−Ａｌａ）ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳを有する、請求項１〜１４のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
16. 前記Ｄ−Ａｌａを位置２位に、および非相同Ｃ末端ペプチドエンハンサーを保持するとともに配列Ｙ（Ｄ−Ａｌａ）ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＰＳＳＧＡＰＰＰＳと少なくとも６５％の同一性を有する、請求項１〜１５のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
17. 前記ハイブリッドが式Ｄ−Ｌ−Ｃ−Ｓ（式中、ＤがジペプチジルペプチダーゼＩＶ耐性ＧＩＰ−Ｎ末端領域を含んでなり、Ｌがリンカーを含んでなり、ＣがＧＩＰ−Ｃ末端領域を含んでなり、およびＳがシールド領域を含んでなり；および式中Ｌが任意選択で存在するとともにＤまたはＣの少なくとも１個が存在し、および式中Ｃが存在するとＣ−ＳがＴｒｐケージモチーフを含んでなる、またはＣが不在であるとＬ−ＳがＴｒｐケージまたはエキセンディンテールモチーフをさらに含んでなる）を含んでなるポリペプチドを含んでなるとともに、前記ポリペプチドがＧＩＰ受容体結合および／または活性化活性を有する、請求項１〜１６のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
18. エキセンディンおよびＧＩＰ類似体のハイブリッドである請求項１〜１７のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
19. エキセンディンがエキセンディン−４またはその活性断片である請求項１〜１８のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
20. エキセンディンが、エキセンディン−４（１−３０）、エキセンディン−４（１−２９）、エキセンディン−４（１−２８）またはエキセンディン−４（１−２７）である請求項１〜１９のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
21. ＧＩＰ類似体が、ＤＰＰ-ＩＶ耐性を提供する位置１、２または３のいずれかでの修飾または置換を含む請求項１〜２０のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
22. ＧＩＰ類似体が、ＧＩＰ（１−２８）、ＧＩＰ（１−３０）、ＧＩＰ（１−３１）を含む請求項１〜２１のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
23. ＧＩＰ類似体が、異種Ｃ末端テール配列を含む請求項１〜２２のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
24. テール配列が、エキセンディンまたはＧＬＰ−１から誘導される請求項１〜２３のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
25. テール配列が、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ、ＰＳＳＧＡＰＰＮＳ、ＰＳＳＧＱＰＰＱＳＫ、ＰＳＳＧＡＰＰＱＳＫ、ＰＳＳＧＡＰＰＫＳＫ、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ、ＰＳＳＧＡＰＰＫＳ、ＰＳＳＧＡＲＰＰＳ、ＰＳＳＧＡＫＰＰＳ、ＰＳＳＧＡＰＫＰＳ、ＰＳＳＧＡＰＤＰＳまたはＰＫＧＫＩＲＹＳのいずれかから選択される請求項１〜２４のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
26. テール配列が、ＰＳＳＧＱＰＰＱＳＫ、ＰＳＳＧＡＰＰＱＳＫ、ＰＳＳＧＡＰＰＫＳＫ、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ、ＰＳＳＧＡＰＰＫＳ、ＰＳＳＧＡＲＰＰＳ、ＰＳＳＧＡＫＰＰＳ、ＰＳＳＧＡＰＫＰＳ、ＰＳＳＧＡＰＤＰＳまたはＰＫＧＫＩＲＹＳのいずれかから選択される請求項１〜２５のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
27. ＧＩＰ部分または類似体が、０６０１ＧＩＰ３７９４、０６０１ＧＩＰ４８５０、０６０１ＧＩＰ５０７５、０６０１ＧＩＰ５０７６、０６０１ＧＩＰ５０８０、０６０１ＧＩＰ５０８１、０６０１ＧＩＰ５０８２、０６０１ＧＩＰ５０７０、０６０１ＧＩＰ５０７１、０６０１ＧＩＰ５０７２、０６０１ＧＩＰ５０７３または０６０１ＧＩＰ４９０４のいずれかのアミノ酸１−３０を含む請求項１〜２６のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
28. ＧＩＰ部分または類似体が、０６０１ＧＩＰ５０７５、０６０１ＧＩＰ５０７６、０６０１ＧＩＰ５０８０、０６０１ＧＩＰ５０８１、０６０１ＧＩＰ５０８２、０６０１ＧＩＰ５０７０、０６０１ＧＩＰ５０７１、０６０１ＧＩＰ５０７２、０６０１ＧＩＰ５０７３または０６０１ＧＩＰ４９０４のいずれかのアミノ酸１−３０を含む請求項１〜２７のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
29. ＧＩＰ部分または類似体が、０６０１ＧＩＰ３７９４に比較して、０６０１ＧＩＰ５０７５、０６０１ＧＩＰ５０７６、０６０１ＧＩＰ５０８０、０６０１ＧＩＰ５０８１、０６０１ＧＩＰ５０８２、０６０１ＧＩＰ５０７０、０６０１ＧＩＰ５０７１、０６０１ＧＩＰ５０７２、０６０１ＧＩＰ５０７３または０６０１ＧＩＰ４９０４のいずれかのアミノ酸１−３０における２個以下、３個以下、４個以下または５個以下のアミノ酸置換を含む請求項１〜２８のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
30. ０６０１ＧＩＰ３７９４、０６０１ＧＩＰ４８５０、０６０１ＧＩＰ５０７５、０６０１ＧＩＰ５０７６、０６０１ＧＩＰ５０８０、０６０１ＧＩＰ５０８１、０６０１ＧＩＰ５０８２、０６０１ＧＩＰ５０７０、０６０１ＧＩＰ５０７１、０６０１ＧＩＰ５０７２、０６０１ＧＩＰ５０７３または０６０１ＧＩＰ４９０４のアミノ酸配列を含む請求項１〜２９のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
31. ０６０１ＧＩＰ５０７５、０６０１ＧＩＰ５０７６、０６０１ＧＩＰ５０８０、０６０１ＧＩＰ５０８１、０６０１ＧＩＰ５０８２、０６０１ＧＩＰ５０７０、０６０１ＧＩＰ５０７１、０６０１ＧＩＰ５０７２、０６０１ＧＩＰ５０７３または０６０１ＧＩＰ４９０４のアミノ酸配列を含む請求項１〜３０のいずれか１記載のＧＩＰ化合物、あるいは０６０１ＧＩＰ５０７５、０６０１ＧＩＰ５０８０、０６０１ＧＩＰ５０８１、０６０１ＧＩＰ５０８２、０６０１ＧＩＰ５０７２または０６０１ＧＩＰ４９０４のアミノ酸配列を含む請求項１〜３０のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
32. エキセンディンおよびＧＩＰ類似体が、Ｃ末端からＣ末端に連結している請求項１〜３１のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
33. エキセンディンおよびＧＩＰ類似体が、リジンのεアミノ基への結合により連結している請求項１〜３２のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
34. エキセンディンおよびＧＩＰ類似体が、システインのスルフヒドリルへの結合により連結している請求項１〜３３のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
35. エキセンディン−ＧＩＰハイブリッドが、化合物０６０１ＧＩＰ４５２６を含む請求項１〜３４のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
36. ＧＩＰ化合物が、ＰＣＴ／ＵＳ２００６／００５０２０に開示されたＧＩＰ化合物ではない請求項１〜３５のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
37. カエルＧＬＰ−１テール領域の類似体を含むＤＰＰ−ＩＶ耐性Ｎ末端およびＣ末端テール領域を含む請求項１〜３６のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
38. カエルＧＬＰ−１テール領域を含むＤＰＰ−ＩＶ耐性Ｎ末端およびＣ末端テール領域を含み、カエルＧＬＰ−１テールがＰＣＴ／ＵＳ２００６／００５０２０に開示された配列ではない請求項１〜３７のいずれか１記載のＧＩＰ化合物。
39. 本明細書に開示されたＤＰＰ−ＩＶ耐性Ｎ末端を含み、ＧＩＰ類似体、誘導体またはハイブリッドがＰＣＴ／ＵＳ２００６／００５０２０に開示された配列ではない請求項１〜３８のいずれか１記載のＧＩＰ類似体、誘導体またはハイブリッド。
40. そのＧＩＰ領域が、親ＧＩＰ化合物の全長にわたり請求項１〜３９のいずれかのＧＩＰ化合物の５個以下、４個以下、３個以下、２個以下または１個以下の置換、修飾および／または誘導体化を有するＧＩＰ類似体またはハイブリッド化合物。
41. そのＧＩＰ領域が、親ＧＩＰ化合物の全長にわたり請求項１〜４０のいずれかのＧＩＰ類似体またはハイブリッドに少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の配列同一性を有するＧＩＰ類似体またはハイブリッド化合物。
42. それを必要とする患者において糖尿病、前糖尿病または高血糖を治療または予防するための方法であって、前記患者に治療的に有効量の請求項１〜４１のいずれかのＧＩＰ化合物を投与することを特徴とする方法。
43. それを必要とする患者において心血管疾患または病態を治療または予防するための方法であって、前記患者に治療的に有効量の請求項１〜４１のいずれかのＧＩＰ化合物を投与することを特徴とする方法。
44. 前記患者が、心収縮力増加、血圧低下、急性血管拡張、収縮期圧低下、拡張期圧低下、血漿グルコース降下、インスリン分泌、胃排出の緩徐化、β細胞増殖、体重減少、体重維持、異化効果低減またはそれらの任意の組み合わせを必要とするとともにそれにより利益を得ることを特徴とする請求項４２〜４３のいずれか１記載の方法。
45. 前記ＧＩＰ化合物が前記患者に、心収縮力増加、血圧低下、急性血管拡張、収縮期圧低下、拡張期圧低下、血漿グルコース降下、インスリン分泌、胃排出の緩徐化、異化効果低減またはそれらの任意の組み合わせを提供することを特徴とする請求項４２〜４４のいずれか１記載の方法。
46. 前記ＧＩＰ化合物が心細胞に対し直接的に作用することを特徴とする請求項４２〜４５のいずれか１記載の方法。
47. 前記心血管疾患または病態が、高血圧症（第１期、第２期および第３期高血圧症、拡張期または収縮期を含む）、肺高血圧症、うっ血性心不全、心不全、一回拍出量低減、心筋症（拡張型、肥大型または拘束型）、心収縮力低下、心血管病態に付随する肺うっ血、肺および全身性水腫、心拍出量低下、異常左室機能、拡張期血圧異常、心収縮力低減に付随する腎不全、心血管リスク増加、心筋梗塞、および非虚血性または虚血性心組織変性であることを特徴とする請求項４２〜４６のいずれか１記載の方法。
48. 前記心血管リスク増加が、正常拡張期圧に伴う収縮期圧上昇に付随する、正常収縮期圧に伴う拡張期圧上昇に付随する、拡張期および収縮期圧上昇に付随する、平均動脈圧上昇に付随する、またはそれらの任意の組み合わせであることを特徴とする請求項４２〜４７のいずれか１記載の方法。
49. 前記ＧＩＰ化合物が、正常拡張期圧に伴う収縮期圧上昇の低減の、正常収縮期圧に伴う拡張期圧上昇の低減の、拡張期および収縮期圧上昇を低減することによる、平均動脈圧上昇を低減することによる、またはそれらの任意の組み合わせの利益を提供することを特徴とする請求項４２〜４８のいずれか１記載の方法。
50. 前記治療または予防が、疾患または病態の開始の予防、その開始の遅延、その進行または進展の予防、その進行または進展の緩徐、その進行または進展の遅延、およびその進行を進行期からより進行していない段階への逆進より選択されることを特徴とする請求項４２〜４９のいずれか１記載の方法。
51. 前記ＧＩＰ化合物がアミリンファミリーホルモンモジュールを含むことを特徴とする請求項４２〜５０のいずれか１記載の方法。
52. 前記ＧＩＰ化合物がアミリン／ｓＣＴ／アミリンキメラを含んでなるアミリンファミリーホルモンモジュールを含むことを特徴とする請求項４２〜５１のいずれか１記載の方法。
53. 前記ＧＩＰ化合物がＤＰＰ−ＩＶ耐性ＧＩＰ類似体を含むことを特徴とする請求項４２〜５３のいずれか１記載の方法。
54. 前記ＧＩＰ化合物がＤＰＰ−ＩＶ耐性ＧＩＰ類似体およびアミリン／ｓＣＴ／アミリンキメラを含んでなるアミリンファミリーホルモンモジュールを含んでなり、場合によりリンカーで連結されることを特徴とする請求項４２〜５３のいずれか１記載の方法。
55. 請求項１〜４１のいずれかの抗肥満ＧＩＰハイブリッド化合物をかかる処置を必要とする対象に投与することを含むことを特徴とする肥満を処置する方法。
56. 対象が、少なくとも１０％だけ体重を低下させることを特徴とする請求項４２〜５５のいずれか１記載の方法。
57. 対象が、体脂肪量を低下させることを特徴とする請求項４２〜５６のいずれか１記載の方法。
58. ＧＩＰ化合物の少なくとも１つの成分が、食物摂取または体重調節に関与する前脳における構造に作用することを特徴とする請求項４２〜５７のいずれか１記載の方法。
59. ＧＩＰ化合物の少なくとも１つの成分が、食物摂取または体重調節に関与する後脳における構造に作用することを特徴とする請求項４２〜５８のいずれか１記載の方法。
60. ＧＩＰ化合物が、食物摂取または体重調節に関与する前脳における構造に作用する少なくとも１つの成分ならびに食物摂取または体重調節に関与する後脳における構造に作用する少なくとも１つの成分を含むことを特徴とする請求項４２〜５９のいずれか１記載の方法。
61. ＮＰＹ１受容体アンタゴニスト、ＮＰＹ５受容体アンタゴニスト、ＮＰＹ２受容体アゴニスト、ＮＰＹ４受容体アゴニスト、レプチン、レプチン誘導体、レプチンアゴニスト、ＣＮＴＦ、ＣＮＴＦアゴニスト／モジュレーター、ＣＮＴＦ誘導体、ＭＣＨ１Ｒアンタゴニスト、ＭＣＨ２Ｒアンタゴニスト、メラノコルチン４アゴニスト、ＭＣ４受容体アゴニスト、カンナビノイド受容体（ＣＢ−１）アンタゴニスト／インバースアゴニスト、グレリンアンタゴニスト、５ＨＴ２ｃアゴニスト、セロトニン再取込みインヒビター、セロトニン輸送インヒビター、エキセンディン、エキセンディン誘導体、エキセンディンアゴニスト、ＧＬＰ−１、ＧＬＰ−１類似体、ＧＬＰ−１アゴニスト、ＤＰＰ−ＩＶインヒビター、オピオイドアンタゴニスト、オレキシンアンタゴニスト、代謝型グルタミン酸サブタイプ５受容体アンタゴニスト、ヒスタミン３アンタゴニスト／インバースアゴニスト、トピラマート、ＣＣＫ、ＣＣＫ類似体、ＣＣＫアゴニスト、アミリン、アミリン類似体およびアミリンアゴニストよりなる群から選択される抗肥満剤の投与をさらに含むことを特徴とする請求項４２〜６０のいずれか１記載の方法。
62. 投与される抗肥満剤が、フェンテルミン、リモナバン、シブトラミンまたはプラムリンチドであることを特徴とする請求項４２〜６１のいずれか１記載の方法。
63. 投与される抗肥満剤が、ＡＤＭ、ＡＤＭ類似体、ＡＤＭアゴニスト、レプチン、レプチン誘導体もしくはレプチンアゴニスト、またはＰＰＦキメラもしくはその誘導体であることを特徴とする請求項４２〜６２のいずれか１記載の方法。
64. ＧＩＰ化合物が、食物摂取または体重調節に関与する前脳構造に作用して、抗肥満剤が、食物摂取または体重調節に関与する後脳構造に作用する、あるいはＧＩＰ化合物が、食物摂取または体重調節に関与する後脳構造に作用して、抗肥満剤が、食物摂取または体重調節に関与する前脳構造に作用することを特徴とする請求項４２〜６３のいずれか１記載の方法。
65. ＧＩＰ化合物が、アミリンファミリーホルモンモジュールを含むことを特徴とする請求項４２〜６４のいずれか１記載の方法。
66. ＧＩＰ化合物が、アミリン／ｓＣＴ／アミリンキメラを含むアミリンファミリーホルモンモジュールを含むことを特徴とする請求項４２〜６５のいずれか１記載の方法。
67. ＧＩＰ化合物が、ＤＰＰ−ＩＶ耐性ＧＩＰ類似体を含むことを特徴とする請求項４２〜６６のいずれか１記載の方法。
68. ＧＩＰ化合物が、ＤＰＰ−ＩＶ耐性ＧＩＰ類似体およびアミリン／ｓＣＴ／アミリンキメラを含むアミリンファミリーホルモンモジュールを含むことを特徴とする請求項４２〜６７のいずれか１記載の方法。
69. 救命救急管理中の患者を処置する方法であって、それを必要とする前記患者に治療的に有効量の請求項１〜４１のいずれかのＧＩＰ化合物を投与することを含むことを特徴とする方法。
70. 患者が、血液グルコースレベルの制御を必要とすることを特徴とする請求項６９記載の方法。
71. ＧＩＰ化合物の投与が、血液グルコースレベルを約６０ｍｇ／ｄＬおよび約１３０ｍｇ／ｄＬの間の範囲内に維持することを特徴とする請求項６９または７０記載の方法。
72. 前記患者が非糖尿病であることを特徴とする請求項６９〜７１のいずれか１記載の方法。
73. 前記救命救急が、重病、敗血症、外傷後、手術後、ショック後、昏睡患者、ストレス誘発性高血糖、脳卒中、心筋梗塞、急性腸間膜虚血、呼吸困難、人工呼吸器依存、腎不全、うっ血性心不全、水腫、冬眠心筋、心筋症、ＢＮＰ低下、駆出機能障害、高血圧症、ポリニューロパシー、虚血／再灌流傷害、器官床の組織保護、心筋梗塞、急性冠症候群、伝導または律動の障害、乳頭機能障害、および／または肺水腫に付随する異化変化の疾患または病態のためのものであることを特徴とする請求項６９〜７２のいずれか１記載の方法。
74. 前記患者が手術を受術中であることを特徴とする請求項６９〜７３のいずれか１記載の方法。
75. 前記ＧＩＰがＡＰＡＣＨＥスコア低減、死亡率低減、入院日数低減、再入院の必要性低減、入院費用低減またはそれらの任意の組み合わせを提供することを特徴とする請求項６９〜７４のいずれか１記載の方法。
76. 処置を必要とする前記危篤状態の患者が非糖尿病、糖尿病、前糖尿病、および／または肥満であることを特徴とする請求項６９〜７５のいずれか１記載の方法。
77. 前記ＧＩＰ化合物がアミリンファミリーホルモンモジュールを含むことを特徴とする請求項６９〜７６のいずれか１記載の方法。
78. 前記ＧＩＰ化合物がアミリン／ｓＣＴ／アミリンキメラを含んでなるアミリンファミリーホルモンモジュールを含むことを特徴とする請求項６９〜７７のいずれか１記載の方法。
79. 前記ＧＩＰ化合物がＤＰＰ−ＩＶ耐性ＧＩＰ類似体を含むことを特徴とする請求項６９〜７８のいずれか１記載の方法。
80. 前記ＧＩＰ化合物がＤＰＰ−ＩＶ耐性ＧＩＰ類似体およびアミリン／ｓＣＴ／アミリンキメラを含んでなるアミリンファミリーホルモンモジュールを含んでなり、場合によりリンカーで連結されることを特徴とする請求項６９〜７９のいずれか１記載の方法。
81. 患者が、Ｉ型糖尿病を有することを特徴とする請求項４２〜８０のいずれか１記載の方法。
82. 患者が、ＩＩ型糖尿病を有することを特徴とする請求項４２〜８０のいずれか１記載の方法。
83. 患者が、非糖尿病であることを特徴とする請求項４２〜８０のいずれか１記載の方法。
84. 患者が、肥満であることを特徴とする請求項４２〜８３のいずれか１記載の方法。
85. 患者が、肥満でないことを特徴とする請求項４２〜８３のいずれか１記載の方法。
86. 抗糖尿病剤を投与することを含むことを特徴とする請求項４２〜８４のいずれか１記載の方法。
87. 第２の剤が、エキセンディンまたはＧＬＰ−１受容体アゴニストであることを特徴とする請求項８６記載の方法。
88. エキセンディンがエクセナチドであることを特徴とする請求項８７記載の方法。
89. ＧＬＰ−１受容体アゴニストが、ＧＬＰ−１類似体または誘導体であることを特徴とする請求項８７記載の方法。
90. 抗肥満剤を投与することをさらに含むことを特徴とする請求項４２〜８９のいずれか１記載の方法。
91. 抗肥満剤が、ＰＹＹ類似体またはアミリノミメティックであることを特徴とする請求項９０記載の方法。
92. アミリノミメティックが、プラムリンチドまたはアミリン−ｓＣＴ−アミリンキメラＡＣ２３０７であることを特徴とする請求項９１記載の方法。
93. ＧＩＰ化合物が、ｐＨ６の３０ｍＭヒスチジン緩衝液中で少なくとも約２．０ｍｇ／ｍｌの溶解度を有することを特徴とする請求項４２〜９２のいずれか１記載の方法。
94. ＧＩＰ化合物が、ｐＨ６の３０ｍＭヒスチジン緩衝液中で少なくとも約５．０ｍｇ／ｍｌの溶解度を有することを特徴とする請求項４２〜９３のいずれか１記載の方法。
95. ＧＩＰ化合物が、４０℃にて少なくとも７日間、ｐＨ６の３０ｍＭヒスチジン緩衝液中で少なくとも約８０％活性を保持することを特徴とする請求項４２〜９４のいずれか１記載の方法。
96. ＧＩＰ化合物が、４０℃にて少なくとも７日間、ｐＨ６の３０ｍＭヒスチジン緩衝液中で少なくとも約９０％活性を保持することを特徴とする請求項４２〜９５のいずれか１記載の方法。
97. ＧＩＰ化合物が、０６０１ＧＩＰ５０７５、０６０１ＧＩＰ５０７６、０６０１ＧＩＰ５０８０、０６０１ＧＩＰ５０８１、０６０１ＧＩＰ５０８２、０６０１ＧＩＰ５０７０、０６０１ＧＩＰ５０７１、０６０１ＧＩＰ５０７２、０６０１ＧＩＰ５０７３または０６０１ＧＩＰ４９０４のアミノ酸配列を含むことを特徴とする請求項４２〜９６のいずれか１記載の方法。
98. ＧＩＰ化合物が０６０１ＧＩＰ５０７５、０６０１ＧＩＰ５０８０、０６０１ＧＩＰ５０８１、０６０１ＧＩＰ５０８２、０６０１ＧＩＰ５０７２または０６０１ＧＩＰ４９０４のアミノ酸配列を含むことを特徴とする請求項４２〜９７のいずれか１記載の方法。
99. ＧＩＰ化合物が、ＰＣＴ／ＵＳ２００６／００５０２０に開示されたＧＩＰ化合物ではないことを特徴とする請求項４２〜９８のいずれか１記載の方法。

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