TWI847981B - 類升糖素肽1 (glp-1)融合肽偶合環狀酪酪肽接合物及其用途 - Google Patents

類升糖素肽1 (glp-1)融合肽偶合環狀酪酪肽接合物及其用途 Download PDF

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Abstract

本發明包含接合物，該接合物包含偶合至環狀PYY肽之類升糖素肽1(GLP-1)融合肽。本發明亦關於醫藥組成物及使用該醫藥組成物之方法。該新穎之接合物用於預防、治療或改善在本文中揭示之疾病及病症。

Description

類升糖素肽1(GLP-1)融合肽偶合環狀酪酪肽接合物及其用途
本發明大致上關於新穎的類升糖素肽-1(GLP-1)融合肽偶合環狀酪酪肽(peptide tyrosine tyrosine,PYY)接合物，其係神經肽Y2受體及GLP-1受體之調節劑。本發明亦關於醫藥組成物及使用該醫藥組成物之方法。新穎的GLP-1融合肽偶合環狀PYY接合物可用於預防、治療或改善疾病及病症，諸如肥胖、第2型糖尿病、代謝症候群、胰島素抗性、及異常血脂症等其他者。
〔電子提交序列表之參照〕
本申請案含有序列表，該序列表已以ASCII格式序列表經由EFS-Web電子提交，檔案名稱為「PRD3465 Sequence Listing」，創建日期2019年4月2日，檔案大小409kb。經EFS-Web提交之序列表係本說明書之一部分，其全文以引用方式併入本文中。若在本文中描述之關於SEQ ID NO：225至262結構之資訊與經由EFS-Web以檔案名稱「PRD3465 Sequence Listing」電子提交之序列表之間有任何不一致，以本文中之資訊為主。
神經肽Y(NPY)受體係由一群密切相關稱為「NPY家族」的肽促效劑活化，NPY家族對於各受體亞型具有不同親和性。NPY、酪酪肽(PYY)及胰多肽(PP)的長度皆為36個胺基酸，係NPY受體家族之促效劑。NPY係一種神經傳導物，與正腎上腺素及腎上腺素一起合成、共儲存及釋放。NPY係含量最豐富且廣泛分布於人類及齧齒動物中樞神經系統(CNS)的肽之一，表現於與進食及壓力有關之 腦部區域。在周邊神經系統中，含有NPY之神經元大多為交感神經性。PYY主要由腸內分泌細胞合成及釋放。NPY及PYY受到內皮絲胺酸蛋白酶(二-肽基肽酶IV(DPP-IV))切割產生NPY3-36 及PYY3-36 ，其等係NPY受體家族Y2及Y5亞型之選擇性配體。PP主要見於胰島細胞，但與儲存胰島素、升糖素或體抑素之胰島細胞不同。
到目前為止已識別出五種不同的NPY受體，理解其中四種與人類生理學相關。受體Y1、Y2及Y5優先結合NPY及PYY，然而Y4受體優先結合PP。Y2及Y5受體亦受到NPY3-36 及PYY3-36 的有效活化。一般來說，NPY配體家族對於各種NPY受體異構體具有可變選擇性，先前報告PYY3-36 對於Y2異構體具有中至強度選擇性。這些受體之各者經由百日咳毒素敏感性Gαi之偶合以抑制腺苷酸環化酶。
PYY係由內分泌L-細胞回應於食物而分泌，特別是在脂肪攝入之後。PYY1-36 主要存在於空腹狀態，PYY3-36 則為人類餐後可見的主要形式，血漿濃度與攝取的卡路里數呈現負相關。已證明PYY3-36 可減少人類、猴、大鼠、兔、及小鼠的攝食(Batterham et al.,Nature 418(6898)：650-4(2002)；Batterham et al.,N Engl J Med 349(10)：941-8(2003)；Challis et al.,Biochem Biophys Res Commun 311(4)：915-9(2003))。PYY3-36 的厭食效果一般相信是由Y2所媒介，此係基於優先結合此受體及Y2缺損小鼠喪失進食效果(Batterham et al.,Nature 418(6898)：650-4(2002))。弓狀核注射PYY3-36 減少大鼠及小鼠的攝食(Batterham et al.,Nature 418(6898)：650-4(2002))，建議下視丘Y2受體之參與可媒介這些效應。對進食之急性效應亦顯示轉移成對ob/ob小鼠、DIO小鼠及Zucker fa/fa小鼠體重的劑量依賴性效應(Pittner et al.,Int J Obes Relat Metab Disord 28(8)：963-71(2004))。此外，PYY3-36 亦顯示改善DIO齧齒動物中胰島素媒介之葡萄糖清除及胰島素敏感性(Vrang et al.,Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 291(2)：R367-75(2006))。減重手術導致增加的循環PYY免疫 反應性(le Roux et al.,Ann Surg 243(1)：108-14(2006))，其似乎在術後體重減輕上發揮作用。
鑒於其在控制食慾及攝食上之作用以及其在哺乳動物胃腸道中的抗分泌及促吸收效應，PYY3-36 可能有效治療肥胖及相關病況以及一些胃腸病症。然而，PYY3-36 本身作為治療劑的治療效用受限於其快速代謝及所導致之短循環半衰期(Torang et al.,Am.J.Physiol.Regul.Integr.Comp.Physiol.310：R866-R874(2016))。
腸促胰液素(incretin)荷爾蒙GLP-1及其受體(GLP1R)活化在人類葡萄糖代謝及能量平衡上具有各種有利效應，包括刺激葡萄糖依賴性胰島素分泌(Kreymann et al.,Lancet 2：1300-1304(1987))以及抑制升糖素分泌(Gutniak et al.,N Engl J Med 326：1316-1322(1992))、胃排空(Wettergren et al.Digestive Diseases Sciences 38：665-673(1993))、及攝食(Flint et al.,JCI 101：515-520(1998))。GLP1R促效劑亦顯示顯著降低第2型糖尿病患者的心血管及微細血管結果(Marso et al.,N Engl J Med 375(4)：311-322(2016))及腎疾病(Mann et al.,N Engl J Med 377(9)：839-848(2017)的風險。GLP-1的特徵在於短半衰期，這使得GLP-1不適合作為潛在的治療劑使用。循環半衰期受限於來自二肽基肽酶IV(Zhu,L.et al.,JBC 278：22418-22423(2003))及中性肽鏈內切酶(Hupe-Sodmann et al.,Regul Pept 58(3)：149-156(1995))的蛋白分解風險以及腎過濾(Ruiz-Grande et al.,Can J Physiol Pharmacol 68(12)：1568-1573(1990))兩者。
因此，分別獲得具有相對於PYY3-36 及/或GLP-1改善的代謝穩定性及藥物動力學特性的PYY類似物或其衍生物及/或GLP-1類似物或其衍生物係為所欲。該等具有延長體內半衰期之衍生物將提供較長作用期間之Y2及/或GLP-1受體調節，使彼等適合作為需要該調節之對象的治療劑。
前述討論僅針對所屬技術領域所面臨之問題本質提供較佳理解，且不應以任何方式被視為對先前技術之承認，且本文中所引 用之任一參考文獻亦不應被視為承認該等參考文獻構成本申請案之「先前技術」。
在一通常態樣中，本發明關於新穎的類升糖素肽-1(GLP-1)融合偶合環狀酪酪肽(PYY)接合物，其係神經肽Y2受體及GLP-1受體之調節劑。
在本文中提供接合物，其包含偶合至環狀PYY肽之類升糖素肽1(GLP-1)融合肽，其中該GLP-1融合肽包含GLP-1或GLP-1變體肽、第一連接肽、鉸鏈-Fc區肽、及第二連接肽，其中該第一連接子係可選地不存在。
在某些實施例中，該環狀PYY肽係以式I 或其衍生物或醫藥上可接受之鹽表示：
Figure 108114084-A0202-12-0004-1
 其中p係0或1；m係0、1、2、3、4、或5；n係1、2、3、或4；q係0或1；惟q只有在Z30 不存在時係1；橋係-Ph-CH2 -S-、-三唑基-、-NHC(O)CH2 S-、-SCH2 C(O)NH-、-(OCH2 CH2 )2 NHC(O)CH2 S、-NHC(O)-、或-CH2 S-；Z4 係K、A、E、S、或R；Z7 係A或K； Z9 係G或K；Z11 係D或K；Z22 係A或K；Z23 係S或K；Z26 係A或H；Z30 係L、W、或不存在；惟Z30 只有在q係1時不存在； Z34 係
Figure 108114084-A0202-12-0005-2
或
Figure 108114084-A0202-12-0005-3
； Z35 係
Figure 108114084-A0202-12-0005-4
、
Figure 108114084-A0202-12-0005-5
、
Figure 108114084-A0202-12-0005-6
、或
Figure 108114084-A0202-12-0005-7
；其中該衍生物係經一或多個選自由醯胺化、醯化、及聚乙二醇化所組成之群組之過程修飾的式I 之化合物。
在某些實施例中，該環狀PYY肽係以式I 或其衍生物或醫藥上可接受之鹽表示，其中：p係0或1；m係0、1、2、3、4、或5；n係1、2、3、或4；q係0或1；惟q只有在Z30 不存在時係1；橋係-Ph-CH2 -S-、-三唑基-、-NHC(O)CH2 S-、-SCH2 C(O)NH2 -、-(OCH2 CH2 )2 NHC(O)CH2 S、-NHC(O)-、或-CH2 S-；Z4 係K、A、E、S、或R；Z7 係A或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：
Figure 108114084-A0202-12-0006-8
，其中i係0至24之整數，且X=Br、I或Cl、-C(O)CH2 Br、-C(O)CH2 I、或-C(O)CH2 Cl；Z9 係G或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：
Figure 108114084-A0202-12-0006-9
，其中i係0至24之整數，且X=Br、I或Cl、-C(O)CH2 Br、-C(O)CH2 I、或-C(O)CH2 Cl；Z11 係D或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：
Figure 108114084-A0202-12-0006-10
，其中i係0至24之整數，且X=Br、I或Cl、-C(O)CH2 Br、-C(O)CH2 I、或-C(O)CH2 Cl；Z22 係A或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：
Figure 108114084-A0202-12-0006-11
，其中i係0至24之整數，且X=Br、I或Cl、-C(O)CH2 Br、-C(O)CH2 I、或-C(O)CH2 Cl；Z23 係S或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：
Figure 108114084-A0202-12-0006-12
，其中i係0至24之整數，且X=Br、I或Cl、-C(O)CH2 Br、-C(O)CH2 I、或-C(O)CH2 Cl； Z26 係A或H；Z30 係L； Z34 係
Figure 108114084-A0202-12-0007-13
或
Figure 108114084-A0202-12-0007-14
；且 Z35 係
Figure 108114084-A0202-12-0007-15
、
Figure 108114084-A0202-12-0007-16
、
Figure 108114084-A0202-12-0007-17
、或
Figure 108114084-A0202-12-0007-18
。
在某些實施例中，該環狀PYY肽係以式I 或其衍生物或醫藥上可接受之鹽表示，其中：p係0或1；m係0、1、2、3、或5；n係1、2、或4；q係0或1；惟q只有在Z30 不存在時可能係1；橋係-Ph-CH2 -S-、-三唑基-、-NHC(O)CH2 S-、-(OCH2 CH2 )2 NHC(O)CH2 S、-NHC(O)-、或-CH2 S-；Z4 係K、A、E、S、或R；Z7 係A或K，其中該K之胺基側鏈係經下列取代：-C(O)CH2 Br，Z9 係G或K，其中該K之胺基側鏈係經下列取代：-C(O)CH2 Br，Z11 係D或K，其中該K之胺基側鏈係經下列取代：-C(O)CH2 Br，Z22 係A或K，其中該K之胺基側鏈係經下列取代：-C(O)CH2 Br，Z23 係S或K，其中該K之胺基側鏈係經下列取代：-C(O)CH2 Br， Z26 係A或H，Z30 係L， Z34 係
Figure 108114084-A0202-12-0008-19
或
Figure 108114084-A0202-12-0008-21
； Z35 係
Figure 108114084-A0202-12-0008-22
、
Figure 108114084-A0202-12-0008-23
、
Figure 108114084-A0202-12-0008-24
、或
Figure 108114084-A0202-12-0008-25
。
在某些實施例中，該環狀PYY肽係選自由SEQ ID NO：1至54所組成之群組、或其醫藥上可接受之鹽。在某些實施例中，該環狀PYY肽係選自SEQ ID NO：24、25、27、28、29、30、33、或34。
在某些實施例中，該GLP-1融合肽在該環狀PYY肽的離胺酸殘基處共價連結至該環狀PYY肽。在某些實施例中，在式I 中之Z7 、Z9 、Z11 、Z22 及Z23 中僅一者係離胺酸，且該離胺酸係共價連結至該GLP-1融合肽之該第二連接肽中的半胱胺酸殘基。
在某些實施例中，GLP-1融合肽的GLP-1肽包含選自由SEQ ID NO：56至59所組成之群組的胺基酸序列。在某些實施例中，GLP-1融合肽的第一連接肽包含選自由SEQ ID NO：60至83所組成之群組的胺基酸序列。在某些實施例中，GLP-1融合肽的鉸鏈-Fc區肽包含選自由SEQ ID NO：84至90所組成之群組的胺基酸序列。在某些實施例中，GLP-1融合肽的第二連接肽包含選自由SEQ ID NO：91至112所組成之群組的胺基酸序列。在某些實施例中，該第二連接肽包含SEQ ID NO：93、94、95、106或111之胺基酸序列。
亦提供包含偶合至環狀PYY肽之類升糖素肽1(GLP-1)融合肽之接合物，其中該GLP-1融合肽包含選自由SEQ ID NO：113至224及267至274所組成之群組的胺基酸序列，且其中該環狀PYY 肽包含選自SEQ ID NO：24、25、27、28、29、30、33、或34之胺基酸序列。在某些實施例中，該GLP-1融合肽包含SEQ ID NO：113或SEQ ID NO：136之胺基酸序列。在某些實施例中，SEQ ID NO：113或SEQ ID NO：136之胺基酸殘基287至289之間的半胱胺酸殘基係直接或經由化學連接子共價連結至該環狀PYY肽之殘基7、9、11、22或23處的離胺酸殘基，該半胱胺酸殘基較佳是SEQ ID NO：113或SEQ ID NO：136之半胱胺酸殘基288，該離胺酸殘基較佳是該環狀PYY肽的離胺酸殘基11。
亦提供包含偶合至環狀PYY肽之類升糖素肽1(GLP-1)融合肽之接合物，其中該接合物包含選自由SEQ ID NO：225至262所組成之群組之序列或其醫藥上可接受之鹽。
亦提供製造本發明之接合物之方法。該方法包含使導入該環狀PYY肽之側鏈上的親電子劑與GLP-1融合肽之該第二連接肽(例如羧基端連接肽)的半胱胺酸殘基之巰基反應，藉以在該環狀PYY肽與該GLP-1融合肽之間建立共價鍵結，該環狀PYY肽之側鏈較佳是該環狀PYY肽之離胺酸殘基的側鏈，該親電子劑較佳是溴乙醯胺或順丁烯二醯亞胺。
亦提供醫藥組成物，其包含本發明之接合物及醫藥上可接受之載劑。
亦提供用於治療或預防有需要之對象的疾病或病症之方法，其中該疾病或病症係肥胖、第I型或第II型糖尿病、代謝症候群、胰島素抗性、葡萄糖耐受不良、高血糖症、高胰島素血症、高三酸甘油酯血症、因先天性高胰島素血症(CHI)所致之低血糖症、異常血脂症、動脈粥樣硬化、糖尿病腎病變、及其他心血管風險因子(諸如高血壓及與未管理膽固醇及/或脂質水準有關之心血管風險因子)、骨質疏鬆症、發炎、非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)、腎疾病、及/或濕疹。該等方法包含向該有需要之對象投予有效量的本發明之醫藥組成物。
亦提供減少有需要之對象的攝食之方法。該等方法包含向該有需要之對象投予有效量的本發明之醫藥組成物。
亦提供調節有需要之對象的Y2受體活性或GLP-1受體活性之方法。該等方法包含向該有需要之對象投予有效量的本發明之醫藥組成物。
在某些實施例中，該醫藥組成物係經由注射投予。
亦提供包含本發明之化合物之套組，較佳地進一步包含利拉魯肽及用於注射之裝置。
亦提供製造本發明之醫藥組成物之方法。該等方法包含組合該接合物與醫藥上可接受之載劑以獲得該醫藥組成物。
本發明之進一步態樣、特色、及優點將藉由閱讀下列本發明之實施方式及申請專利範圍更佳地理解。
前述發明內容以及下文中本申請案之較佳實施例的實施方式在結合附圖閱讀時可更有利理解。然而應理解的是，本申請案並不受限於圖式中所示確切實施例。
〔圖1A至圖1B 〕顯示GLP-1融合肽部分的離體人類血漿穩定性。圖1A的圖顯示GLP-1融合肽GF32(SEQ ID NO 144)(▲)、GF36(148)(△)、GF33(145)(▼)、GF39(151)(▽)、GF34(146)(⊙)、GF35(147)(●)、GF37(149)(○)、GF40(152)(◇)、及度拉魯肽對照組(◆)在37℃下在人類血漿中培養7天的離體人類血漿穩定性。圖1B的圖顯示GF40(SEQ ID NOs：152)(▲)及GF34(SEQ ID NO：146)(●)、及彼等之對應GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物SEQ ID NO：248(△)及SEQ ID NO：262(○)、及另一種GLP-1融合肽GF41(SEQ ID NO：153)(▼)連同度拉魯肽對照組(◇)在37℃下在人類血漿中離體培養7天的離體人類血漿穩定性。
〔圖2A至圖2B 〕顯示DIO小鼠之攝食及體重減輕。圖2A及圖2B顯示經度拉魯肽、化合物1(GF1(SEQ ID NO：113))(0.3nmol/kg)、及化合物2(SEQ ID NO：225)(0.3nmol/kg)治療的DIO小鼠之攝食(圖2A)及體重減輕百分 比(圖2B)的圖。小鼠係藉由皮下注射媒劑(白色圓形)、度拉魯肽(白色正方形)、化合物1(黑色正方形)、或化合物2(黑色圓形)給藥，並記錄體重及攝食3天。
〔圖3A至圖3B 〕顯示DIO小鼠之攝食及體重減輕。圖3A及圖3B顯示經度拉魯肽、化合物3(GF24(SEQ ID NO：136))(0.3nmol/kg)、及化合物4(SEQ ID NO：229)(0.3nmol/kg)治療的DIO小鼠之攝食(圖3A)及體重減輕百分比(圖3B)的圖。小鼠係藉由皮下注射媒劑(白色圓形)、度拉魯肽(白色正方形)、化合物3(黑色正方形)、或化合物4(黑色圓形)給藥，並記錄體重及攝食3天。
〔圖4A至圖4B 〕顯示DIO小鼠之IPGTT。圖4A顯示經0.3nmol/kg及1.0nmol/kg之度拉魯肽、化合物4(SEQ ID NO：229)及化合物2(SEQ ID NO：225)治療的DIO小鼠之葡萄糖水準對時間之圖。圖4B顯示經0.3nmol/kg及1.0nmol/kg之度拉魯肽、化合物4(SEQ ID NO：229)、及化合物2(SEQ ID NO：225)治療的DIO小鼠之淨AUC相對於基線之圖。小鼠係藉由皮下注射媒劑(黑色圓形)、度拉魯肽(白色/黑色正方形)、化合物4(白色/黑色三角形)、或化合物2(白色/黑色圓形，虛線)給藥。所有化合物以0.3或1.0nmol/kg給藥。在18小時禁食後，給予小鼠1g/kg右旋糖進行腹膜內葡萄糖耐受性試驗(IGPTT)。
〔圖5A至圖5B 〕顯示DIO小鼠之攝食及體重減輕。圖5A及圖5B顯示經度拉魯肽、GF41(SEQ ID NO：153)(0.3nmol/kg)、及GF40(SEQ ID NO：152)(0.3nmol/kg)治療的DIO小鼠之攝食(圖5A)及體重減輕百分比(圖5B)的圖。小鼠係藉由皮下注射媒劑(白色圓形)、度拉魯肽(白色正方形)、SEQ ID NO：153(黑色正方形)、或SEQ ID NO：152(黑色圓形)給藥，並記錄體重及攝食3天。
〔圖6A至圖6B 〕顯示DIO小鼠之攝食及體重減輕。圖6A及圖6B顯示經度拉魯肽及GF19(SEQ ID NO：131)(0.3nmol/kg)治療的DIO小鼠之攝食(圖6A)及體重減輕百分比(圖6B)的圖。小鼠係藉由皮下注射媒劑(白色圓形)、度拉魯肽(白色正方形)、或SEQ ID NO：131(黑色正方形)給藥，並記錄體重及攝食3天。
〔圖7A至圖7B 〕顯示DIO小鼠之IPGTT。圖7A顯示經0.3nmol/kg之度拉魯肽、化合物4(SEQ ID NO：229)及化合物3(GF24(SEQ ID NO：136))治療的DIO小鼠之葡萄糖水準對時間之圖。圖7B顯示經0.3nmol/kg之度拉魯肽、化合物4(SEQ ID NO：229)、及化合物3(GF24(SEQ ID NO：136))治療的DIO小鼠之淨AUC相對於基線之圖。小鼠係藉由皮下注射媒劑(黑色圓形)、度拉魯肽(白色正方形)、化合物4(白色圓形)、或化合物3(黑色正方形，虛線)給藥。所有化合物以0.3nmol/kg給藥。在18小時禁食後，給予小鼠1g/kg右旋糖進行腹膜內葡萄糖耐受性試驗(IGPTT)。
〔圖8A至圖8B 〕顯示在DIO小鼠中化合物4(SEQ ID NO：229)或度拉魯肽單次劑量後對攝食及體重變化的暴露-反應分析。圖8A及圖8B顯示攝食變化百分比(圖8A)及體重變化百分比(圖8B)的圖。空心正方形代表所觀察到之度拉魯肽的個別數據。實心正方形代表所觀察到之化合物4的個別數據。曲線代表基於度拉魯肽(灰色曲線)及化合物4(黑色曲線)之暴露-反應非線性回歸的最佳擬合曲線。灰色垂直線代表在所有分析研究中0.3nmol/kg的度拉魯肽平均值(±標準差)第3天HGE濃度：約為0.32(±0.15)nM。
〔圖9A至圖9B 〕顯示化合物4(黑色符號)或度拉魯肽(白色正方形)在重複(4,Q3D)皮下(SC)給藥後針對第9天(給藥前)及第12天(給藥前)過重石蟹獼猴卡路里攝入量之效應的暴露-反應分析。活性GLP-1濃度係藉由配體結合檢定(LBA)(圖9A)及LC-MS/MS HE檢定(圖9B)來測量。曲線代表基於度拉魯肽(灰色曲線)及化合物4(黑色曲線)之暴露-反應非線性回歸的最佳擬合曲線。以0.0074mg/kg給藥之化合物4的數據不包括在暴露-反應分析中，但僅包括在圖表中。每日卡路里攝入量變化%係相對於基線計算，基線定義為第-2至0天的平均。
〔圖10A至圖10B 〕顯示經媒劑、度拉魯肽(0.3nmol/kg)、或SEQ ID NO：140(0.3nmol/kg)治療之DIO小鼠的攝食(FI)克數(圖10A)及體重(BW)變化%(圖10B)。研究前一天，將DIO小鼠稱重，並按體重分組。小鼠係藉由皮下注射(2mL/kg)媒劑(白色圓形)、度拉魯肽(白色正方形)、或SEQ ID NO 140(黑色正方形)給藥，並記錄接著3天的BW及FI。
〔圖11A至圖11B 〕顯示經媒劑、度拉魯肽(0.3nmol/kg)、SEQ ID NO：131(0.3nmol/kg)、或SEQ ID NO：251(0.3nmol/kg)治療之DIO小鼠的攝食(FI)克數(圖11A)及體重(BW)變化%(圖11B)。研究前一天，將DIO小鼠稱重，並按體重分組。小鼠係藉由皮下注射(2mL/kg)媒劑(白色圓形)、度拉魯肽(白色正方形)、SEQ ID NO 131(黑色正方形)、或SEQ ID NO 251(黑色圓形)給藥，並記錄接著3天的BW及FI。
〔圖12 〕顯示比較具有不同長度之第一連接肽(N端連接肽)的GLP-1肽(SEQ ID NO：58)之人類GLP-1R初級篩選檢定的結果之圖。含有最長第一連接肽(SEQ ID NO：67)的SEQ ID NO：171(▼)係最具效力，接著係具有較短第一連接肽之GLP-1融合肽，即具有第一連接肽SEQ ID NO64之SEQ ID NO 169(▲)及具有第一連接肽SEQ ID NO 74之SEQ ID NO：168(■)。在GLP肽與鉸鏈-Fc肽之間不具有中介第一連接肽之SEQ ID NO 167(●)係最不具效力。GLP-1肽(◆)被包括作為檢定對照組。
 〔相關申請案之交互參照〕
本申請案主張PCT申請案PCT/US2018/029284(申請日2018年4月25日)及美國臨時專利申請案62/662,313(申請日2018年4月25日)之優先權。各揭示內容全文以引用方式併入本文中。
各篇公開案、論文、及專利已於先前技術及整份說明書引用或描述；此等參考文獻之各者全文係以引用方式併入本文中。在本說明書中所包括之對於文件、行動、材料、裝置、物品、或其類似者的論述，目的在於提供關於本發明的脈絡。此等論述並非承認，任一或所有此等情事形成了關於任何所揭示或請求之發明的先前技術部分。
除非另有定義，否則本文中所使用之所有技術及科學用語，均與本發明有關技術領域中具有通常知識者所通常了解之意義相同。在其他方面，在本文中所使用的某些用語具有如本說明書所闡述之意義。
必須注意的是，本文及附加之申請專利範圍中所使用之單數形式「一(a/an)」及「該(the)」皆包括複數指稱，除非上下文另有明確說明。
除非以其他方式說明，在本文中描述之任何數值諸如濃度或濃度範圍應理解為在所有情況下皆受到用語「約(about)」之修飾。因此，數值一般包括記載值之±10%。例如，濃度1mg/mL包括0.9mg/mL至1.1mg/mL。同樣地，濃度範圍1%至10%(w/v)包括0.9%(w/v)至11%(w/v)。如本文中所使用，明示使用之數值範圍包括所有可能的子範圍、在該範圍內之所有個別數值，包括在該等範圍內之整數及數值之分數，除非上下文以其他方式清楚指示。
除非以其他方式指示，在一系列元件之前的用語「至少(at least)」應理解為係指該序列中的每一元件。所屬技術領域中具有通常知識者將認可或僅使用例行實驗即可確定本文所述之本發明的特定實施例的許多等效物。該等等效物意欲涵蓋於本發明中。
如本文中所使用，用語「包含(comprises、comprising)」、「包括(includes、including)」、「具有(has、having)」、或「含有(contains、containing)」或彼等之任何其他變體將被理解為隱含包括所述整體或整體之群，但不排除任何其他整體或整體之群，且意欲為非排他性或開放式的。例如，包含表列元件之組成物、混合物、過程、方法、物品、或設備未必局限於僅該些元件，但可包括未明示表列或為該組成物、混合物、過程、方法、物品、或設備所固有之其他元件。再者，除非明示相反說明，「或(or)」係指包括性的「或」而非排他性的「或」。例如，下列任一者皆滿足條件A或B：A為真(或存在)且B為偽(或不存在)、A為偽(或不存在)且B為真(或存在)、及A及B兩者皆為真(或存在)。
亦應理解的是，在本文中使用之用語「約(about)」、「大約(approximately)」、「通常(generally)」、「實質上(substantially)」及類似用語當用於較佳發明之組分的尺寸或特徵時，指示所述尺寸/特徵並非嚴格邊界或參數，且不排除將為所屬技術之技術領域中具有通常 知識者所理解的彼等之功能上相同或類似的微小變異。在最小限度上，包括數值參數之該等指稱將包括使用所屬技術領域中已接受之數學及工業原理(例如，四捨五入、測量或其他系統誤差、製造公差等)不會改變最低有效數位(least significant digit)之變異。
在二或更多個核酸或多肽序列(例如，GLP-1肽、連接肽、鉸鏈-Fc區肽、環狀PYY3-36 肽序列)上下文中之用語「同一(identical)」或「同一性(identity)」百分比，係指將二或更多個序列或子序列比較及對準以達最大對應性時，如使用下列序列比較演算法之一或使用本揭露所屬技術領域中已知方法目視檢查測量，二或更多個序列或子序列相同或具有特定百分比的相同胺基酸殘基或核苷酸。
為進行序列比較，一般將一個序列當作參考序列，並使測試序列與其比較。當使用序列比較演算法時，將測試及參考序列輸入電腦中，指定子序列座標(若有需要)，並指定序列演算法程式參數。序列比較演算法接著基於指定程式參數，計算(多個)測試序列相對於參考序列之序列同一性百分比。
序列比較之最佳比對可藉由例如Smith & Waterman,Adv.Appl.Math.2：482(1981)之局部同一性演算法、Needleman & Wunsch,J.Mol.Biol.48：443(1970)之同一性比對演算法、Pearson & Lipman,Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA 85：2444(1988)之搜尋相似性方法、這些演算法的電腦化實施(Wisconsin Genetics Software Package,Genetics Computer Group,575 Science Dr.,Madison,WI中之GAP、BESTFIT、FASTA、及TFASTA)、或目視檢查(大致參見Current Protocols in Molecular Biology,F.M.Ausubel et al.,eds.,Current Protocols,a joint venture between Greene Publishing Associates,Inc.and John Wiley & Sons,Inc.,(1995 Supplement)(Ausubel))進行。
適合用於判定序列同一性及序列相似性百分比之演算法實例為BLAST及BLAST 2.0演算法，彼等分別描述於Altschul et al.,J.Mol.Biol.215：403-410(1990)及Altschul et al.,Nucleic Acids Res.25：3389-3402(1997)。執行BLAST分析之軟體由美國國家生物技術資訊中心(National Center for Biotechnology Information)供大眾使用。
二個核酸序列或多肽係實質上同一的進一步指示在於第一核酸編碼之多肽及第二核酸編碼之多肽具有如下所述之免疫交叉反應性。因此，例如當二個肽只有保守性取代之差異時，多肽一般係實質上與第二多肽同一。二個核酸序列係實質上同一的另一個指示在於二個分子在嚴謹條件下彼此雜交。
如本文中所使用之「對象(subject)」意指任何動物，較佳是哺乳動物，最佳的是人類。如本文中所使用的用語「哺乳動物(mammal)」，其涵蓋任何哺乳動物。哺乳動物之實例包括(但不限於)牛、馬、羊、豬、貓、狗、小鼠、兔、天竺鼠、猴、人類等，更佳的是人類。
與本發明之方法有關的用語「投予(administering)」，係指一種藉由使用本發明之接合物或化合物或其形式、組成物或藥劑來治療性地或預防性地預防、治療或改善如本文中所述之症候群、病症或疾病的方法。該等方法包括在療程期間的不同時間投予有效量的該接合物、化合物、其形式、組成物或藥劑，或者以組合之形式同時投予有效量的該接合物、其形式、組成物或藥劑。本發明之方法應被理解為包括所有習知的治療性治療方案。
用語「有效量(effective amount)」意指能在組織系統、動物或人類中引發生物或醫學反應之活性接合物、化合物或藥劑的量，該反應為研究者、獸醫師、醫師、或其他臨床醫師所尋求，且包括預防、治療或改善欲治療之症候群、病症、或疾病、或欲治療之症候群、病症、或疾病的症狀。
本文中所使用之用語「組成物(composition)」意欲涵蓋包含特定量之特定成分的產品，以及任何由特定成分以特定量組合所直接或間接形成之產品。
如本文中所使用，用語「偶合(coupled)」係指將二或更多個物件接合或連接在一起。當用於化學或生物化合物時，偶合可指二或更多個化學或生物化合物之間的共價連接。以非限制的實例來說，本發明之類升糖素肽-1(GLP-1)融合肽可與受關注之環狀PYY肽偶合以形成GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物。在某些實施例中，本發明之GLP-1融合肽可與本發明之環狀PYY肽經由至少一個連接子共價偶合。GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物可透過經設計以接合GLP-1融合肽至環狀PYY肽的特定化學反應形成。舉實例而言，GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物可透過接合反應來形成。接合反應可例如包含使親電子基團(例如溴乙醯胺或順丁烯二醯亞胺)與受關注肽(例如GLP-1融合肽)上的半胱胺酸殘基之巰基反應。親電子基團可例如被導入環狀PYY肽之胺基酸殘基的側鏈上。親電子基團與巰基的反應導致形成共價硫醚鍵。
如本文中所使用，用語「肽連接子(peptide linker)」或「連接肽(linker peptide)」係指含有一或多個胺基酸之化學模組，該模組將GLP-1肽連結至鉸鏈-Fc區肽或將鉸鏈-Fc區肽連結至環狀PYY肽，以形成GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物。GLP-1融合肽可例如包含第一連接肽及第二連接肽。
如本文中所使用，用語「化學連接子(chemical linker)」係指不含有任何將環狀PYY肽連結至GLP-1融合肽之胺基酸的化學模組。在某些實施例中，環狀PYY肽包含化學連接子。用於環狀PYY肽之化學連接子可例如包括但不限於烴連接子、聚乙二醇(PEG)連接子、聚丙二醇(PPG)連接子、多醣連接子、聚酯連接子、含有醯基之連接子、由PEG及埋置雜環組成之混成連接子、及烴鏈。化學連接子可例如先共價連接至環狀PYY肽，接著共價連接至GLP-1融合肽，較佳係共價連接至GLP-1融合肽之第二連接肽。
如本文中所使用，用語「接合物(conjugate)」係指肽(例如GLP-1融合肽)共價偶合至另一醫藥活性部份(例如環狀PYY肽)。用語「接合至(conjugated to)」係指本發明之肽直接或經由 連接子間接共價連結至或共價連接至另一醫藥活性部份，較佳是治療肽。舉非限制性實例來說，肽可為本發明之GLP-1融合肽且另一醫藥活性部份可為治療肽，諸如受到關注之環狀PYY肽。
在本文中描述之肽序列係根據通常慣例書寫，其中肽之N端區域寫在左側，且C端區域寫在右側。雖然已知胺基酸具有異構形式，但除非以其他方式明示指示，否則以L型胺基酸表示。
類升糖素肽-1(GLP-1)融合肽
在一通常態樣中，本發明係關於一種類升糖素肽1(GLP-1)融合肽。GLP-1融合肽包含GLP-1或GLP-1變體肽、第一連接肽(例如胺基(N)端連接子)、鉸鏈-Fc區肽、及第二連接肽(例如羧基(C)端連接子)。
類升糖素肽-1或GLP-1變體肽
類升糖素肽1(GLP-1)係一種在小腸合成且回應於攝食而釋放的胰島素促分泌物。其主要以兩種形式分泌：GLP-1-(7-37)及GLP-1-(7-36)NH2 ，兩者皆與胰β細胞上的特定GLP-1受體(GLP-1R)結合且放大葡萄糖刺激的胰島素分泌。
許多GLP-1類似物及衍生物係已知且可在本文中稱為「GLP-1變體(GLP-1 variant)」。這些GLP-1變體肽可包括毒蜥外泌肽(Exendin)，其係在吉拉毒蜥(Gila monster)之毒液中發現之肽。這些毒蜥外泌肽與天然GLP-1具有序列同源性，且可結合GLP-1受體並起始歸因於GLP-1(7-37)之活性的信號轉導級聯反應。
GLP-1及GLP-1變體肽已被顯示為以各種方式作用，其可包括但不限於刺激胰島素釋放、降低升糖素分泌、抑制胃排空、及增強葡萄糖利用。
GLP-1R屬於7種跨膜、異型三聚體G蛋白偶合受體之B類家族且係表現於廣泛範圍的組織中，包括但不限於胰島的α-、β-、及δ-細胞、心臟、腎、胃、小腸、迷走神經的核狀神經結神經元、及中樞神經系統(CNS)的數個區域包括下視丘及腦幹。GLP-1R可偶合至Gαs 、Gαq 、Gαi 、及Gαo (Montrose-Rafizadeh et al.,Endocrinology 140：1132-40(1999)；Hallbrink et al.,Biochim Biophys Acta 1546：79-86(2001))，導致細胞內鈣、腺苷酸環化酶、及磷脂酶C增加及活化PKA、PKC、PI-3K、Epac2、及MAPK信號轉導途徑(Drucker et al.,PNAS 84：3434-8(1987)；Wheeler et al.,Endrocrinology 133：57-62(1993)；及Holz et al.,JBC 270：17749-57(1995))。
在本文中提供包含第一組分之GLP-1融合肽，其中該第一組分係GLP-1或GLP-1變體肽。如本文中所使用，用語「GLP-1肽(GLP-1 peptide)」、「GLP-1變體肽(GLP-1 variant peptide)」、「GLP-1肽變體(GLP-1 peptide variant)」及「GLP-1或GLP-1變體肽(GLP-1 or GLP-1 variant peptide)」可互換使用。GLP-1或GLP-1變體肽可包含表1中提供的序列之一。GLP-1或GLP-1變體肽序列可基於下列標準中之至少一者來選擇：(i)表現產率、(ii)體外穩定性、(iii)體外效力、(iv)在與環狀PYY肽化學接合後保留的體外效力、(v)缺乏絲胺酸木糖化或絲胺酸木糖化之潛力、及(vi)GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物的性質(例如體內穩定性及體內效力(即GLP-1或GLP-1變體肽及環狀PYY肽是否能夠分別具有對GLP-1及Y2受體的促效劑活性))。
構成GLP-1融合肽的第一組分之GLP-1或GLP-1變體肽係意欲涵蓋具有與天然GLP-1足夠同源性及功能性的肽。GLP-1或GLP-1變體肽係設計為能夠結合至胰臟中的β-細胞上的GLP-1受體，導致與天然GLP-1結合胰臟中的β-細胞上的GLP-1受體時相同的傳訊路徑且展現相同或類似的促胰島素活性。
Figure 108114084-A0202-12-0019-26
第一連接肽：胺基端連接子(N端連接子)
在本文中提供包含第二組分之GLP-1融合肽，其中該第二組分係第一連接肽(即胺基端連接肽)。第一連接肽可包含表2中提供的序列之一。第一連接肽序列可基於下列標準中之至少一者來選擇：(i)表現產率、(ii)體外效力、(iii)體外穩定性、(iv)缺乏絲胺酸木糖化或絲胺酸木糖化之潛力、及(v)GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物的性質(例如體內穩定性及體內效力(即GLP-1或GLP-1變體肽及環狀PYY肽是否能夠分別具有對GLP-1及Y2受體的促效劑活性))。
在某些實施例中，GLP-1融合肽不包含第二組分，其中該第二組分係第一連接肽。
Figure 108114084-A0202-12-0020-27
鉸鏈-Fc區肽
在某些實施例中，GLP-1融合肽包含第三組分，其中該第三組分係鉸鏈-Fc區肽。除了FcRn受體再循環以外，鉸鏈-Fc區肽可透過增加分子量及減少腎小球過濾來授予治療肽之較大循環半衰期。在某些實施例中，鉸鏈-Fc區肽可衍生自人類IgG4 Fc區。人類IgG4 Fc區相較於其他IgG亞型具有減少之結合FcγR及補體因子的能力。較佳地，Fc區含有具有消除效應功能之取代的人類IgG4 Fc區。因此，GLP-1融合肽進一步包含具有經修飾的人類IgG4 Fc區的Fc區，該經修飾的人類IgG4 Fc區含有一或多個下列取代：以脯胺酸取代殘基233處之麩胺酸、以丙胺酸或纈胺酸取代殘基234處之苯丙胺酸、及以丙胺酸或麩胺酸取代殘基235處之白胺酸(EU編號，Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed.U.S.Dept.of Health and Human Services,Bethesda,Md.,NIH Publication no.91-3242(1991))。藉由以Ala取代殘基297處(EU編號)之Asn移除IgG4 Fc區中之N-連結的醣化部位係另一種確保消除殘基效應活性之方法。
在某些實施例中，本發明之GLP-1融合肽存在為單體或二聚體。在較佳實施例中，GLP-1融合肽存在為二聚體。在其中GLP-1融合肽存在為二聚體的某些實施例中，該二聚體係同型二聚體，即該二聚體包含具有相同序列的兩個GLP-1融合肽。在其中GLP-1融合肽存在為二聚體的某些實施例中，該二聚體係異型二聚體，即該二聚體包含具有不同序列的兩個GLP-1融合肽。
較佳地，本發明之GLP-1融合肽以藉由雙硫鍵及各種非共價交互作用連接在一起的二聚體形式存在。因此，可用於本發明之抗體之Fc部可為含有取代諸如絲胺酸取代位置228(EU編號)之脯胺酸，以穩定重鏈二聚體形成且防止半-IgG4 Fc鏈形成的取代的人類IgG4 Fc區。在某些實施例中，可包括胺基酸N端至鉸鏈雙硫鍵的天然序列。人類IgG4之x射線晶體結構暗示這些胺基酸可形成造成上 游結構在空間中的方向相反之結構。此類素因(predisposition)在維持上游元件(諸如GLP-1融合肽)的空間分離是有利的。在其他實施例中，可省略天然胺基酸N端至鉸鏈雙硫鍵。
在某些實施例中，混成人類IgG2a鉸鏈融合至人類PAA Fc係用於探索對GLP-1融合肽效力及穩定性的影響。
在另一實施例中，重鏈中之C端Lys殘基係經移除，如同在重組生產單株抗體中常見的情況。
鉸鏈-Fc區肽可包含表3中提供的序列之一。鉸鏈-Fc區肽序列可基於下列標準中之至少一者來選擇：(i)體外穩定性、(ii)體外效力、及(iii)GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物的性質(例如體內穩定性及體內效力(即GLP-1或GLP-1變體肽及環狀PYY肽是否能夠分別具有對GLP-1及Y2受體的促效劑活性))。
Figure 108114084-A0202-12-0022-28
Figure 108114084-A0202-12-0023-29
在本文中亦提供鉸鏈-Fc區平台肽，其中該等鉸鏈-Fc區平台肽包含鉸鏈-Fc區肽及第一連接肽及第二連接肽中之至少一者，該第一連接肽連接至該鉸鏈-Fc區肽之胺基端，該第二連接肽連接至該鉸鏈-Fc區肽之羧基端。鉸鏈-Fc區肽可係例如選自由SEQ ID NO：84至90所組成之群組的胺基酸序列；第一連接肽可係例如選自由SEQ ID NO：60至83所組成之群組的胺基酸序列；且第二連接肽可係例如選自由SEQ ID NO：91至112所組成之群組的胺基酸序列。在某些實施例中，鉸鏈-Fc區肽包含SEQ ID NO：84且第一連接肽包含SEQ ID NO：60。在某些實施例中，鉸鏈-Fc區肽包含SEQ ID NO：84且第二連接肽包含SEQ ID NO：93、94、95、106、或111。在某些實施例中，鉸鏈-Fc區肽包含SEQ ID NO：84；第一連接肽包含SEQ ID NO：60；且第二連接肽包含SEQ ID NO：93、94、95、106、或111。
第二連接肽：羧基端連接子(C端連接子)
在本文中提供包含第四組分之GLP-1融合肽，其中該第四組分係第二連接肽(即羧基端連接肽)。第二連接肽可包含表4中 提供的序列之一。第二連接肽序列可基於下列標準中之至少一者來選擇：(i)表現產率、(ii)體外效力、(iii)體外穩定性、(iv)缺乏絲胺酸木糖化或絲胺酸木糖化之潛力、(v)接合產率、及(vi)GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物的性質(例如體內穩定性及體內效力(即GLP-1或GLP-1變體肽及環狀PYY肽是否能夠分別具有對GLP-1及Y2受體的促效劑活性))。
此外，第二連接肽序列可基於其對環狀PYY肽進行特異性、有效接合之能力來選擇。在此上下文中，特異性係指優先接合第二連接子之C端區域中的經工程改造半胱胺酸殘基而非接合融合蛋白的任何其他部分。對於最大化特異性的策略的實例包括：(i)導入相鄰於經工程改造半胱胺酸殘基的胺基酸，以增加巰基側鏈的親核性並增強其反應性；(ii)在胺基酸序列中包括經工程改造半胱胺酸殘基，其先前在硫醇-親電子劑接合物中顯示增強選擇性；及(iii)併入具有分別靜電吸引陽離子或陰離子雙硫鍵還原劑之陰離子或陽離子側鏈的胺基酸，以用於特異性釋放用於接合的反應性硫醇。對於最大化接合效率的策略的實例包括：(i)在第二連接肽的任何部分導入類似電荷(不論是陰離子或陽離子)，以造成第二連接肽之相互靜電排斥，且因此減少經工程改造半胱胺酸殘基之間的雙硫鍵形成；(ii)併入增強連接子之剛性的胺基酸；(iii)併入增加連接子之可撓性的胺基酸；及(iv)併入具有陰離子或陽離子側鏈之胺基酸，其以靜電造成環狀PYY肽的有效接合。
Figure 108114084-A0202-12-0024-30
Figure 108114084-A0202-12-0025-31
GLP-1融合肽
在本文中提供包含如先前所述之第一、第二、第三、及第四組分的GLP-1融合肽，其中第二組分可為可選地不存在。第一組分係GLP-1或GLP-1變體肽，第二組分係第一連接肽，第三組分係鉸鏈-Fc區肽，且第四組分係第二連接肽。GLP-1融合肽可包含表5中提供的序列之一。GLP-1融合肽序列可基於下列標準中之至少一者來選擇：(i)表現產率、(ii)體外效力、(iii)體外穩定性、(iv)缺乏絲胺酸木糖化、(v)接合產率、及(vi)GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物的性質(例如體內穩定性及體內效力(即GLP-1或GLP-1變體肽及環狀PYY肽是否能夠分別具有對GLP-1受體及Y2受體的促效劑活性))。
Figure 108114084-A0202-12-0025-32
Figure 108114084-A0202-12-0026-33
Figure 108114084-A0202-12-0027-34
Figure 108114084-A0202-12-0028-35
Figure 108114084-A0202-12-0029-36
Figure 108114084-A0202-12-0030-37
Figure 108114084-A0202-12-0031-38
Figure 108114084-A0202-12-0032-39
Figure 108114084-A0202-12-0033-40
Figure 108114084-A0202-12-0034-41
Figure 108114084-A0202-12-0035-42
Figure 108114084-A0202-12-0036-43
Figure 108114084-A0202-12-0037-44
Figure 108114084-A0202-12-0038-45
Figure 108114084-A0202-12-0039-46
Figure 108114084-A0202-12-0040-47
Figure 108114084-A0202-12-0041-48
Figure 108114084-A0202-12-0042-49
Figure 108114084-A0202-12-0043-50
Figure 108114084-A0202-12-0044-51
環狀PYY肽
PYY3-36 係由遠端腸道L細胞分泌之內源性激素，其係Y2受體促效劑，具有抑制攝食之作用。鑒於其在控制食慾及攝食上之作用以及其在哺乳動物胃腸道中的抗分泌及促吸收效應，PYY3-36 可能有效治療肥胖及相關病況以及一些胃腸病症。然而，PYY3-36 本身作為治療劑的治療效用受限於其快速代謝及短循環半衰期。因此，本發明大致上關於經修飾之PYY3-36 接合物，其延長PYY3-36 肽之半衰期且減少肽於體內之代謝。
在本發明之某些實施例中，經修飾的PYY3-36 肽係環狀PYY肽。用語「環狀(cyclic)PYY肽(peptide)」、「環狀PYY3-36 類似物(analog)」及「環狀PYY3-36 肽類似物(peptide analog)」可交換使用。可用於本發明之接合物的環狀PYY肽實例係描述於2017年10月26日提出申請之美國專利申請案第15/794,231號及2017年10月26日提出申請之美國專利申請案第15/794,171號，該二件申請案之全文以引用方式併入本文中。
本文中所使用之用語「NTSC-PYY」意欲描述PYY之N端-至-側鏈環狀類似物。
在本文中描述之肽序列係根據通常慣例書寫，其中肽之N端區域寫在左側，且C端區域寫在右側。雖然已知胺基酸具有異構形式，但除非以其他方式明示指示，否則以L型胺基酸表示。為了方便描述本發明之分子，使用各種胺基酸(包括單字母及三字母代碼二者)及官能性部份之習知及非習知縮寫。這些縮寫係所屬技術領域中具有通常知識者所熟知，但為了清晰列出如下：A=Ala=丙胺酸；R=Arg=精胺酸；N=Asn=天冬醯胺酸；D=Asp=天冬胺酸；βA=βAla=β-丙胺酸；C=Cys=半胱胺酸；hC=hCys=升半胱胺酸；E=Glu=麩胺酸；Q=Gln=麩醯胺酸；G=Gly=甘胺酸；H=His=組胺酸；I=Ile=異白胺酸；L=Leu=白胺酸；K=Lys=離胺酸；Nle=正白胺酸；F=Phe=苯丙胺酸；P=Pro=脯胺酸；S=Ser=絲胺酸；T =Thr=蘇胺酸；W=Trp=色胺酸；Y=Tyr=酪胺酸且V=Val=纈胺酸。
為求方便，用於命名本發明之NTSC-PYY肽的胺基酸殘基編號規則遵循hPYY3-36 之規則。經導入NTSC-PYY肽之相對於在hPYY3-36 對應位置之天然殘基的特定胺基酸代替，係以適當胺基酸代碼後接取代位置來指示。因此，NTSC-PYY肽中之「S4」係指其中絲胺酸代替hPYY3-36 之對應天然lys4殘基之肽。類似地，NTSC-PYY肽中之「hC31」係指其中升半胱胺酸代替hPYY3-36 之對應天然val31殘基之肽。發生在NTSC-PYY肽內之額外胺基酸代替係根據此慣例描述，且將為所屬技術領域中具有通常知識者所認可。
亦為求方便，本發明之NTSC-PYY肽所使用之命名慣例從環中涉及之N端殘基開始，以左至右的方向併入環中涉及之胺基酸殘基連同彼等之間的(多個)鍵聯基。在所有情況中，環之N端胺基酸殘基藉由其α-胺基官能基連結至鍵聯基，其進而連接至NTSC-PYY肽位置31處之胺基酸的側鏈殘基。因此，「環-(I3-m -COPhCH2 -hC31)」係用於描述NTSC-PYY肽之環，其中Ile3之α-胺基官能基係經間甲苯甲酸殘基醯化，其甲基進一步藉由硫醚鍵連結至hCys31殘基之側鏈。類似地，「環-(K4-CO(CH2 )2 NHCOCH2 -hC31)」係用於描述NTSC-PYY肽之環，其中天然Ile3殘基經刪除且其lys4(目前成為N端)之α-胺基官能基經3-乙醯胺基丙醯基醯化，其乙醯胺基亞甲基碳藉由硫醚鍵連接至hCys31殘基之側鏈。
離胺酸殘基可併入hPYY3-36 序列之不同位置，以提供方便的官能性柄(functional handle)以供進一步衍生。離胺酸殘基可經修飾以供間接偶合至GLP-1融合肽。在間接偶合至GLP-1融合肽時，離胺酸殘基可經修飾以包含允許環狀PYY肽偶合至GLP-1融合肽之化學連接子。所屬技術領域中具有通常知識者將認可相關同源物亦可如此被有效採用且經設想於本文中。
用語「K(PEG24-AcBr)」表示離胺醯基殘基，其側鏈ε-胺基經由N-溴乙醯基-75-胺基- 4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73-二十四氧雜七十五酸之1-羧酸官能基醯化。
用語「K(PEG12-AcBr)」表示離胺醯基殘基，其側鏈ε-胺基經由N-溴乙醯基-39-胺基-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37-十二氧雜三十九酸之1-羧酸官能基醯化。
用語「K(PEG6-AcBr)」表示離胺醯基殘基，其側鏈ε-胺基經由N-溴乙醯基-3-[(17-胺基-3,6,9,12,15-五氧雜十七-1-基)氧基]-丙酸之1-羧酸官能基醯化。
用語「K(PEG8-三唑基-CH2 CH2 CO-PEG4-AcBr)」表示離胺醯基殘基，其側鏈ε-胺基經由27-[4-[2-[3-[2-[2-[3-(N-溴乙醯基胺基)丙氧基]乙氧基]乙氧基]丙基胺基羰基]乙基]四唑-1-基]-4,7,10,13,16,19,22,25-八氧雜二十七酸之1-羧酸官能基醯化。
許多本發明之化合物/接合物在序列的C端殘基Y36與其相鄰殘基R35之間併入還原的醯胺鍵。此還原的醯胺鍵結以用語「psi -(R35,Y36)」表示。
各種包含本發明之某些序列的胺基酸殘基含有經甲基化的α-胺基。因此，用語「N-Me-Q34」或「N-Me-R35」分別表示在序列的位置34之α-N-甲基化麩醯胺酸，及在序列的位置35之α-N-甲基化精胺酸。
在序列說明中之用語「N-Me-Q34,psi -(R35,Y36)」係指同時含有在位置34處之α-甲基麩醯胺酸殘基以及在殘基R35與Y36之間的還原醯胺鍵之序列。
類似地，在序列說明中之用語「N-Me-R35,psi -(R35,Y36)」係指同時含有在位置35處之α-甲基精胺酸殘基以及在此殘基與Y36之間的還原醯胺鍵之序列。
環狀PYY肽之實例係提供於表6中。
Figure 108114084-A0202-12-0048-52
Figure 108114084-A0202-12-0049-53
在本文中亦提供與人類PYY3-36 (hPYY3-36 )具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、或99%序列同一性之PYY的N端至側鏈環狀類似物。判定二個類似物之間的序列同一性之方法實例，係將二個肽
Figure 108114084-A0202-12-0049-54
 (SEQ ID NO：1)及hPYY3-36
Figure 108114084-A0202-12-0049-55
(SEQ ID NO：55) 對準。類似物相對於hPYY3-36 之序列同一性係藉由將對準殘基總數減去不同殘基數(即，對準的同一殘基數)除以hPYY3-36 中之殘基總數計算。在此實例中，不同殘基係D11(其經交換成經取代的K11)、隨後V31(經hC31交換)、且最終R35經去羰基化。因此，在該實例中，序列同一性係(34-3)/34×100。
接合物
在另一通常態樣中，本發明關於一種接合物，其包含本發明之GLP-1融合肽以定點方式共價接合至環狀PYY肽，使得GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽具有相較於單獨的GLP-1或GLP-1變體肽或環狀PYY肽延長/增加的半衰期。本發明亦關於醫藥組成物及使用該醫藥組成物之方法。接合物可用於預防、治療、或改善疾病或病症，諸如肥胖、第2型糖尿病、代謝症候群(即X症候群)、胰島素抗性、葡萄糖耐受不良(例如，葡萄糖不耐)、高血糖症、高胰島素血症、高三酸甘油酯血症、因先天性高胰島素血症(CHI)所致之低血糖症、異常血脂症、動脈粥樣硬化、糖尿病腎病變、及其他心血管風險因子(諸如高血壓及與未管理膽固醇及/或脂質水準有關之心血管風險因子)、骨質疏鬆症、發炎、非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)、腎疾病、及濕疹等其他者。
在某些實施例中，本發明之GLP-1融合肽包含至少一個能夠接合至環狀PYY肽的半胱胺酸殘基。在某些實施例中，GLP-1融合肽包含選自由SEQ ID NO：113至224及267至274所組成之群組的胺基酸序列。在某些實施例中，該GLP-1融合包含選自SEQ ID NO：113或136之胺基酸序列。在某些實施例中，至少一個半胱胺酸殘基包含在GLP-1融合肽的第二連接肽中。在某些實施例中，半胱胺酸殘基位於SEQ ID NO：113或SEQ ID NO：136的GLP-1融合肽的殘基287與289之間，較佳是半胱胺酸殘基位在GLP-1融合的殘基288處。在某些實施例中，GLP-1融合肽共價連結至環狀PYY肽之殘基7、9、11、22、或23處的離胺酸殘基，較佳地離胺酸殘基11。在某些實施 例中，GLP-1融合肽係直接共價連結至環狀PYY肽，或經由在該環狀PYY肽上之化學連接子間接共價連結至環狀PYY肽。
在某些實施例中，環狀PYY肽可包含化學連接子。化學連接子可經化學修飾(例如可添加親電子基團至連接子)以允許GLP-1融合肽與環狀PYY化學連接子之接合。化學連接子可例如包括但不限於肽連接子、烴連接子、聚乙二醇(PEG)連接子、聚丙二醇(PPG)連接子、多醣連接子、聚酯連接子、含有醯基之連接子、由PEG及埋置雜環組成之混成連接子、或烴鏈。PEG連接子可例如包含2至24個PEG單元。
接合本發明之GLP-1融合肽與本發明之環狀PYY肽之方法係所屬技術領域中已知。簡言之，本發明之GLP-1融合肽可經還原劑(例如1,3,5-三氮雜-7-磷金剛烷(PTA))還原、純化(例如藉由去鹽層析法)、並與環狀PYY肽接合(例如藉由在允許接合的條件下提供經還原的GLP-1融合肽)。在接合反應期間，環狀PYY肽之親電子脫離基係經取代且在GLP-1融合肽與環狀PYY肽之間形成共價鍵以形成GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物。在接合反應後，接合物可藉由離子交換層析法或疏水性交互作用層析法(HIC)與蛋白質A吸附之最終純化步驟純化。在某些實施例中，本發明之GLP-1融合肽可在還原之前利用HIC方法純化。關於接合方法的更詳細說明，請參見例如實例2。
在本文中提供接合物，其包含偶合至環狀PYY肽之類升糖素肽1(GLP-1)-融合肽，其中該GLP-1融合肽包含GLP-1肽、第一連接肽、鉸鏈-Fc區肽、及第二連接肽，其中該第一連接肽係可選地不存在。
在某些實施例中，該環狀PYY肽係以式I 或其衍生物或醫藥上可接受之鹽表示：
Figure 108114084-A0202-12-0052-56
 其中p係0或1；m係0、1、2、3、4、或5；n係1、2、3、或4；q係0或1；惟q只有在Z30 不存在時係1；橋係-Ph-CH2 -S-、-三唑基-、-NHC(O)CH2 S-、-SCH2 C(O)NH-、-(OCH2 CH2 )2 NHC(O)CH2 S、-NHC(O)-、或-CH2 S-；Z4 係K、A、E、S、或R；Z7 係A或K；Z9 係G或K；Z11 係D或K；Z22 係A或K；Z23 係S或K；Z26 係A或H；Z30 係L、W、不存在，惟Z30 只有在q係1時不存在； Z34 係
Figure 108114084-A0202-12-0052-57
或
Figure 108114084-A0202-12-0052-58
； Z35 係
Figure 108114084-A0202-12-0052-63
、
Figure 108114084-A0202-12-0052-60
、
Figure 108114084-A0202-12-0052-61
、或
Figure 108114084-A0202-12-0052-62
； 其中該衍生物係經一或多個選自由醯胺化、醯化、及聚乙二醇化所組成之群組之過程修飾的式I 之化合物。
在某些實施例中，該環狀PYY肽係以式I 或其衍生物或醫藥上可接受之鹽表示，其中：p係0或1；m係0、1、2、3、4、或5；n係1、2、3、或4；q係0或1；惟q只有在Z30 不存在時係1；橋係-Ph-CH2 -S-、-三唑基-、-NHC(O)CH2 S-、-SCH2 C(O)NH-、-(OCH2 CH2 )2 NHC(O)CH2 S、-NHC(O)-、或-CH2 S-；Z4 係K、A、E、S、或R；Z7 係A或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：
Figure 108114084-A0202-12-0053-65
，其中i係0至24之整數，且X=Br、I或Cl、-C(O)CH2 Br、-C(O)CH2 I、或-C(O)CH2 Cl；Z9 係G或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：
Figure 108114084-A0202-12-0053-66
，其中i係0至24之整數，且X=Br、I或Cl、-C(O)CH2 Br、-C(O)CH2 I、或-C(O)CH2 Cl；Z11 係D或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：
Figure 108114084-A0202-12-0053-67
，其中i係0至24之整數，且X=Br、I或Cl、-C(O)CH2 I、-C(O)CH2 Cl或-C(O)CH2 Br；Z22 係A或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：
Figure 108114084-A0202-12-0054-68
，其中i係0至24之整數，且X=Br、I或Cl、-C(O)CH2 Br、-C(O)CH2 I、或-C(O)CH2 Cl；Z23 係S或K；其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：
Figure 108114084-A0202-12-0054-69
，其中i係0至24之整數，且X=Br、I或Cl、-C(O)CH2 Br、-C(O)CH2 I、或-C(O)CH2 Cl；Z26 係A或H；Z30 係L、W、不存在，惟Z30 只有在q係1時不存在； Z34 係
Figure 108114084-A0202-12-0054-70
或
Figure 108114084-A0202-12-0054-71
； Z35 係
Figure 108114084-A0202-12-0054-72
、
Figure 108114084-A0202-12-0054-73
、
Figure 108114084-A0202-12-0054-74
、或
Figure 108114084-A0202-12-0054-75
；其中X係親電子基團且X親電子基團的Br、Cl、或I係在接合反應中經取代以形成GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物。
在某些實施例中，該環狀PYY肽係以式I 或其衍生物或醫藥上可接受之鹽表示，其中：p係0或1；m係0、1、2、3、或5；n係1、2、或4；q係0或1；惟q只有在Z30 不存在時係1；橋係-Ph-CH2 -S-、-三唑基-、-NHC(O)CH2 S-、-SCH2 C(O)NH-、-(OCH2 CH2 )2 NHC(O)CH2 S、-NHC(O)-、或-CH2 S-； Z4 係K、A、E、S、或R；Z7 係A或K，其中該K之胺基側鏈係經下列取代：
Figure 108114084-A0202-12-0055-76
 Z9 係G或K；Z11 係D或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：
Figure 108114084-A0202-12-0055-77
Figure 108114084-A0202-12-0055-78
、-C(O)CH2 Br，或Z22 係A或K，其中該K之胺基側鏈係經下列取代：
Figure 108114084-A0202-12-0055-79
 Z23 係S或K，其中該K之胺基側鏈係經下列取代：
Figure 108114084-A0202-12-0055-80
 Z26 係A或H；Z30 係L； Z34 係
Figure 108114084-A0202-12-0056-81
或
Figure 108114084-A0202-12-0056-82
； Z35 係
Figure 108114084-A0202-12-0056-83
、
Figure 108114084-A0202-12-0056-84
、
Figure 108114084-A0202-12-0056-85
、或
Figure 108114084-A0202-12-0056-86
；其中Br係在接合反應中經取代以形成GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物。
在某些實施例中，接合物包含接合至環狀PYY肽之GLP-1融合肽，其中環狀PYY肽係選自由SEQ ID NO：1至54所組成之群組。在較佳實施例中，接合物包含接合至環狀PYY肽之GLP-1融合肽，其中環狀PYY肽係選自SEQ ID NO：24、25、27、28、29、30、33、或34。
在某些實施例中，GLP-1融合肽係經由離胺酸殘基上之化學連接子，在環狀PYY肽之離胺酸殘基處共價連結至環狀PYY肽。化學連接子可例如包含選自C(O)CH2、聚乙二醇(PEG)8-三唑基-CH2CH2CO-PEG4、2至24個PEG單位之PEG鏈、含有醯基之連接子、或含有2至10個碳原子之烷基鏈之連接子。
根據本發明之實施例之GLP-1融合肽可使用所屬技術領域中已知之方法在環狀PYY肽的一或多個胺基酸位置處(諸如環狀PYY肽之胺基酸殘基4、7、9、10、11、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、26、30、或31)接合至環狀PYY肽。胺基酸殘基編號遵循hPYY3-36 之編號。在某些實施例中，在式I中之Z7 、Z9 、Z11 、Z22 及Z23 中僅一者係離胺酸，且該離胺酸係共價連結至該GLP-1融合肽之該第二連接肽中的半胱胺酸殘基。在一較佳實施例中，根據本發明之實施例之GLP-1融合肽在環狀PYY肽之殘基11處接合至環狀PYY肽，其中殘基11係離胺酸。在另一較佳實施例中，親電 子劑(諸如溴乙醯胺或順丁烯二醯亞胺)經導入環狀PYY肽之側鏈上(諸如環狀PYY肽之殘基11的離胺酸之胺基側鏈)，且親電子劑與GLP-1融合肽之第二連接肽的半胱胺酸殘基之巰基定點反應，較佳地該GLP-1融合肽之第二連接肽係SEQ ID NO：93、94、95、106、或111，藉以在環狀PYY肽與GLP-1融合肽之間建立共價鍵結。更佳的是，該環狀PYY肽係選自SEQ ID NO：24、25、27、28、29、30、33、或34。在一實施例中，親電子劑係直接導入環狀PYY之側鏈上。在另一實施例中，親電子劑係經由化學連接子間接導入環狀PYY之側鏈上。
在某些實施例中，該GLP-1融合肽之該第二連接肽的該半胱胺酸殘基係藉由使該GLP-1融合肽與過量的氮雜膦還原劑接觸而還原，藉此使還原的該半胱胺酸殘基與該親電子劑反應。該氮雜膦還原劑係1,3,5-三氮雜-7-磷三環[3.3.1.1]癸烷(PTA)或其衍生物。
亦提供醫藥組成物，其包含本發明之接合物且進一步包含醫藥上可接受之載劑。
GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物之非限制性實例提供於表7中。
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半衰期延長部分(half-life extending moiety)
除GLP-1融合肽之外，本發明之接合物可例如經由共價交互作用併入一或多個其他用於延長醫藥活性部份(例如，環狀PYY肽)之半衰期之部份。例示性的其他半衰期延長部份包括但不限於白蛋白、白蛋白變體、白蛋白結合蛋白質及/或結構域、轉鐵蛋白及其片段及類似物。可併入本發明之接合物中的額外半衰期延長部份包括例如聚乙二醇(PEG)分子諸如PEG5000或PEG20,000及類似者、聚離胺酸、辛烷、具有所欲性質之碳水化合物(葡聚糖、纖維素、寡醣或多醣)。這些部份可以直接與蛋白質支架編碼序列融合，且可藉由標準選殖及表現技術產生。替代地，可使用習知的化學偶合方法，將該等部份連接至重組及化學產生的本發明之接合物。
聚乙二醇基(pegyl)部份可例如藉由使用已知方法將半胱胺酸殘基併入分子C端且將聚乙二醇基連接至半胱胺酸來添加至本發明之肽分子。
併入額外部份的本發明之肽分子可藉由幾種習知的檢定法就功能性進行比較。例如，受到關注之治療肽單獨或在根據本發明之接合物中的生物或藥物動力學活性可使用已知體外或體內檢定分析及比較。
醫藥組成物
在另一通常態樣中，本發明係關於一種醫藥組成物，該醫藥組成物包含本發明之接合物及化合物及醫藥上可接受之載劑。如本文中所使用之用語「醫藥組成物(pharmaceutical composition)」意指包含本發明之接合物與醫藥上可接受之載劑之產品。本發明之接合物及化合物及包含彼等之組成物亦可用於製造用於在本文中提及之治療應用的藥劑。
本文中所使用之用語「載劑(carrier)」係指任何賦形劑、稀釋劑、填充料、鹽、緩衝劑、穩定劑、助溶劑、油、脂質、含脂質囊泡、微球、脂質體包封、或其他所屬技術領域中已知用於醫藥配方之材料。將理解載劑、賦形劑或稀釋劑之特徵將取決於特定應用之投予途徑而定。本文中所使用之用語「醫藥上可接受之載劑(pharmaceutically acceptable carrier)」係指不干擾根據本發明之組成物的有效性或根據本發明之組成物的生物活性之非毒性材料。根據鑒於本揭露之具體實施例，任何適合用於接合肽醫藥組成物之醫藥上可接受之載劑皆可用於本發明。
用於本發明中之醫藥上可接受之酸性/陰離子性鹽包括但不限於：乙酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、酒石酸氫鹽、溴化物、依地酸鈣(calcium edetate)、樟腦磺酸鹽(camsylate)、碳酸鹽、氯化物、檸檬酸鹽、二氫氯化物、依地酸鹽(edetate)、乙二磺酸鹽(edisylate)、丙酸酯十二烷硫酸鹽(estolate)、乙磺酸鹽(esylate)、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽(glyceptate)、葡萄糖酸鹽(gluconate)、麩胺酸鹽(glutamate)、羥乙醯胺基苯砷酸鹽(glycollylarsanilate)、己基間苯二酚鹽(hexylresorcinate)、海巴明(hydrabamine)、氫溴酸鹽、氫氯酸鹽、羥基萘甲酸鹽(hydroxynaphthoate)、碘化物、2-羥乙磺酸鹽 (isethionate)、乳酸鹽、乳糖酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、苯乙醇酸鹽、甲磺酸鹽、甲基溴化物、甲基硝酸鹽、甲基硫酸鹽、黏酸鹽(mucate)、萘磺酸鹽(napsylate)、硝酸鹽、巴摩酸鹽(pamoate)、泛酸鹽、磷酸鹽/二磷酸鹽、聚半乳糖醛酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、次乙酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、單寧酸鹽、酒石酸鹽、茶氯酸鹽(teoclate)、甲苯磺酸鹽以及三碘化物。有機或無機酸亦包括但不限於：氫碘酸、過氯酸、硫酸、磷酸、丙酸、乙醇酸、甲磺酸、羥乙基磺酸、草酸、2-萘磺酸、對甲苯磺酸、環己磺醯胺酸、醣酸或三氟乙酸。
醫藥上可接受之鹼性/陽離子性鹽包括且不限於鋁、2-胺基-2-羥甲基-丙烷-1,3-二醇(亦稱為參(羥基甲基)胺基甲烷、托美滇(tromethane)或「TRIS」)、氨、苯札辛(benzathine)、三級丁胺、鈣、氯普魯卡因(chloroprocaine)、膽鹼、環己胺、二乙醇胺、乙二胺、鋰、L-離胺酸、鎂、美古明(meglumine)、N-甲基-D-還原葡糖胺、哌啶、鉀、普魯卡因(procaine)、奎寧、鈉、三乙醇胺、或鋅。
在本發明之一些實施例中，提供包含自約0.001mg/ml至約100mg/ml、自約0.01mg/ml至約50mg/ml、或自約0.1mg/ml至約25mg/ml之量的本發明之接合物的醫藥配方。醫藥配方可具有自約3.0至約10，例如自約3至約7、或自約5至約9之pH。配方可進一步包含至少一種選自緩衝劑系統、(多種)保存劑、(多種)張力劑、(多種)螫合劑、(多種)穩定劑及(多種)界面活性劑之成分。
醫藥活性成分與醫藥上可接受之載劑的調製係所屬技術領域中已知，例如Remington：The Science and Practice of Pharmacy(例如第21版(2005)、及任何之後的版本)。額外成分之非限制性實例包括：緩衝劑、稀釋劑、溶劑、張力調節劑、保存劑、穩定劑、及螯合劑。一或多種醫藥上可接受之載劑可用於調製本發明之醫藥組成物。
在本發明之一實施例中，醫藥組成物係液體配方。液體配方之較佳實例係水溶液配方，即包含水之配方。液體配方可包含溶液、懸浮液、乳液、微乳液、凝膠、及類似者。水溶液配方一般包含 至少50% w/w水、或至少60%、70%、75%、80%、85%、90%、或至少95% w/w的水。
在一實施例中，醫藥組成物可調製成可例如經由注射裝置(例如注射器或輸注泵)注射之注射用劑。例如，注射可經皮下、肌內、腹膜內、或靜脈內傳遞。
在另一實施例中，醫藥組成物係固體配方，例如冷凍乾燥或噴霧乾燥組成物，其可照原樣使用，或在使用前由醫師或患者添加溶劑、及/或稀釋劑至其中。固體劑型可包括錠劑(諸如壓製錠及/或包衣錠)及膠囊(例如硬質或軟質明膠膠囊)。醫藥組成物亦可呈例如囊劑(sachet)、糖衣錠、粉劑、顆粒劑、口含錠(lozenge)、或重構用粉劑之形式。
劑型可為可包含水溶性或分散性載劑之立即釋放劑型，或者可為可包含水不溶性聚合物以調節劑型在胃腸道中之溶解速率的延緩釋放、持續釋放、或修飾釋放劑型。
在其他實施例中，醫藥組成物可經鼻內、頰內、或舌下傳遞。
水溶液配方中之pH可介於pH 3與pH 10之間。在本發明之一實施例中，配方pH係自約7.0至約9.5。在本發明之另一實施例中，配方pH係自約3.0至約7.0。
在本發明之另一實施例中，醫藥組成物包含緩衝劑。緩衝劑之非限制性實例包括：精胺酸、天冬胺酸、二羥乙基甘胺酸(bicine)、檸檬酸、磷酸氫二鈉、反丁烯二酸、甘胺酸、甘胺醯甘胺酸、組胺酸、離胺酸、順丁烯二酸、蘋果酸、乙酸鈉、碳酸鈉、磷酸二氫鈉、磷酸鈉、琥珀酸鹽、酒石酸、三羥甲基甘胺酸(tricine)、及參(羥甲基)-胺基甲烷、及其混合物。緩衝劑可個別地或總體地以自約0.01mg/ml至約50mg/ml，例如自約0.1mg/ml至約20mg/ml之濃度存在。包含這些特定緩衝劑中之每一者的醫藥組成物構成本發明之替代實施例。
在本發明之另一實施例中，醫藥組成物包含保存劑。保存劑之非限制性實例包括：氯化本索寧、苯甲酸、苄醇、溴硝丙二醇(bronopol)、丁基4-羥基苯甲酸酯、氯丁醇、氯甲苯酚、氯己定、氯菲那辛、鄰甲酚、間甲酚、對甲酚、乙基4-羥基苯甲酸酯、咪唑啶基脲(imidurea)、甲基4-羥基苯甲酸酯、苯酚、2-苯氧乙醇、2-苯乙醇、丙基4-羥基苯甲酸酯、去氫乙酸鈉、硫柳汞(thiomerosal)、及其混合物。保存劑可個別地或總體地以自約0.01mg/ml至約50mg/ml，例如自約0.1mg/ml至約20mg/ml之濃度存在。包含這些特定保存劑中之每一者的醫藥組成物構成本發明之替代實施例。
在本發明之另一實施例中，醫藥組成物包含等張劑。等張劑之非限制性實例包括鹽(諸如氯化鈉)、胺基酸(諸如甘胺酸、組胺酸、精胺酸、離胺酸、異白胺酸、天冬胺酸、色胺酸、及蘇胺酸)、醛醣醇(諸如甘油、1,2-丙二醇(丙二醇(propyleneglycol))、1,3-丙二醇、及1,3-丁二醇)、聚乙二醇(例如PEG400)、及其混合物。等張劑之另一實例包括糖。糖之非限制性實例可為單醣、雙醣、或多醣、或水溶性葡聚糖包括例如果糖、葡萄糖、甘露糖、山梨糖、木糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、右旋糖酐、普魯蘭(pullulan)、糊精、環糊精、α及β-HPCD、可溶性澱粉、羥乙基澱粉、及鈉羧甲基纖維素。等張劑的另一實例係糖醇，其中用語「糖醇(sugar alcohol)」定義為具有至少一個-OH基團之C(4-8)烴。糖醇之非限制性實例包括甘露醇、山梨醇、肌醇、半乳糖醇、甜醇(dulcitol)、木糖醇、及阿拉伯糖醇。等張劑可個別地或總體地以自約0.01mg/ml至約50mg/ml，例如自約0.1mg/ml至約20mg/ml之濃度存在。包含這些特定等張劑中之每一者的醫藥組成物構成本發明之替代實施例。
在本發明之另一實施例中，醫藥組成物包含螫合劑。螯合劑之非限制性實例包括檸檬酸、天冬胺酸、伸乙二胺四乙酸(EDTA)之鹽、及其混合物。螯合劑可個別地或總體地以自約0.01mg/ml至約50mg/ml，例如自約0.1mg/ml至約20mg/ml之濃度存在。包含這些特定螯合劑中之每一者的醫藥組成物構成本發明之替代實施例。
在本發明之另一實施例中，醫藥組成物包含穩定劑。穩定劑之非限制性實例包括一或多種聚集抑制劑、一或多種氧化抑制劑、一或多種界面活性劑、及/或一或多種蛋白酶抑制劑。
在本發明之另一實施例中，醫藥組成物包含穩定劑，其中該穩定劑係羧基-/羥基纖維素及其衍生物(諸如HPC、HPC-SL、HPC-L及HPMC)、環糊精、2-甲基硫代乙醇、聚乙二醇(諸如PEG 3350)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯啶酮、鹽(諸如氯化鈉)、含硫物質(諸如單硫代甘油)、或巰乙酸。穩定劑可個別地或總體地以自約0.01mg/ml至約50mg/ml，例如自約0.1mg/ml至約20mg/ml之濃度存在。包含這些特定穩定劑中之每一者的醫藥組成物構成本發明之替代實施例。
在本發明之進一步實施例中，醫藥組成物包含一或多種界面活性劑，較佳地一種界面活性劑、至少一種界面活性劑、或二種不同界面活性劑。用語「界面活性劑(surfactant)」係指任何包含水溶性(親水性)部分及脂溶性(親脂性)部分的分子或離子。界面活性劑可例如選自陰離子界面活性劑、陽離子界面活性劑、非離子界面活性劑、及/或兩性離子界面活性劑。界面活性劑可個別地或總體地以自約0.1mg/ml至約20mg/ml之濃度存在。包含這些特定界面活性劑中之每一者的醫藥組成物構成本發明之替代實施例。
在本發明之一進一步實施例中，醫藥組成物包含一或多種蛋白酶抑制劑，諸如例如EDTA、及/或苯甲脒鹽酸(HCl)。蛋白酶抑制劑可個別地或總體地以自約0.1mg/ml至約20mg/ml之濃度存在。包含這些特定蛋白酶抑制劑中之每一者的醫藥組成物構成本發明之替代實施例。
本發明之醫藥組成物可包含足以降低組成物儲存期間多肽聚集體形成之量的胺基酸鹼。用語「胺基酸鹼(amino acid base)」係指一或多種胺基酸(諸如甲硫胺酸、組胺酸、咪唑、精胺酸、離胺酸、異白胺酸、天冬胺酸、色胺酸、蘇胺酸)、或其類似物。任何胺基酸可以其游離鹼形式或其鹽形式存在。胺基酸鹼之任何立體異構物 (即L、D、或其混合物)皆可存在。胺基酸鹼可個別地或與其他胺基酸鹼組合以自約0.01mg/ml至約50mg/ml，例如自約0.1mg/ml至約20mg/ml之濃度存在。包含這些特定胺基酸鹼中之每一者的醫藥組成物構成本發明之替代實施例。
本發明之接合物之醫藥上可接受之鹽包括習用的無毒性鹽或四級銨鹽，其係形成自無機或有機的酸或鹼。此等酸加成鹽的例子包括乙酸鹽、己二酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、十二烷基硫酸鹽、氫氯酸鹽、氫溴酸鹽、乳酸鹽、順丁烯二酸鹽、甲磺酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、三甲基乙酸鹽(pivalate)、丙酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽以及酒石酸鹽。鹼鹽包括銨鹽、鹼金屬鹽(諸如鈉鹽及鉀鹽)、鹼土金屬鹽(諸如鈣鹽及鎂鹽)、有機鹼之鹽(諸如二環己基胺基鹽)、以及胺基酸(諸如精胺酸)之鹽。此外，鹼性含氮之基團可經例如鹵化烷基之四級化。
本發明之醫藥組成物可藉由任何可達成其預期目的之手段來投予。實例包括透過非經腸(parenteral)、皮下、靜脈、肌肉內、腹膜內、經皮、經頰(buccal)或經眼(ocular)途徑投予。投予可透過經口途徑進行。用於非經腸投予之合適配方包括水溶性形式之活性接合物的水溶液，例如水溶性鹽、酸性溶液、鹼溶液、葡萄糖水溶液、等張碳水化合物溶液以及環糊精包容錯合物。在某些實施例中，本發明之接合物係經週邊投予。
本發明亦包含一種製造醫藥組成物之方法，其包含混合醫藥上可接受之載劑與任何本發明之接合物。此外，本發明包括藉由混合一或多種醫藥上可接受之載劑與任何本發明之接合物所製成之醫藥組成物。
再者，本發明之接合物可具有一或多種多形體或非晶形式，並且意欲將彼等包括於本發明之範疇中。此外，接合物可與例如水(即水合物)或常見的有機溶劑形成溶劑合物。本文中所使用之用語「溶劑合物(solvate)」意指本發明之接合物與一或多個溶劑分子的物理性締合。此物理性締合包含不同程度的離子性或共價性鍵結，包 括氫鍵。在某些情況下可單離該溶劑合物，例如當一或多個溶劑分子係結合於結晶固體之晶格中時。用語「溶劑合物(solvate)」意欲涵括溶液相和可單離之溶劑合物兩者。非限定之合適溶劑合物的實例包括乙醇合物(ethanolate)、甲醇合物(methanolate)及類似者。
本發明意欲將本發明之接合物的多形體及溶劑合物包括在其範疇內。因此，在本發明的治療方法中，用語「投予(administering)」應包含使用本發明之接合物或其多形體或溶劑合物來治療、改善或預防本文中所述之症候群、病症或疾病的手段，該手段儘管未經具體揭露，但明顯將被包括於本發明的範疇中。
在另一實施例中，本發明係關於本發明之接合物用作為藥劑之用途。
本發明的範疇包括本發明之接合物的前藥。一般而言，此等前藥將為接合物的功能性衍生物，其可於體內輕易轉換為所需之接合物。因此，在本發明中的治療方法中，用語「投予(administering)」應包含使用具體揭露之接合物，或者使用可能未具體揭露但在投予至病患後在體內轉換為特定接合物之接合物，來治療所述之各種病症。選擇及製備合適前藥衍生物之習用程序係描述於例如「Design of Prodrugs」,Ed.H.Bundgaard,Elsevier,1985。
此外，所意欲者為在本發明之範疇中，任何元素(尤其是在涉及本發明之接合物而提及時)應包含該元素的所有同位素及同位素混合物，無論是天然存在或合成產生，無論是具有天然豐度或呈同位素富集形式。例如，提及氫時，其範疇包括1 H、2 H(D)、及3 H(T)。同樣地，提及碳及氧時，其範疇分別包括12C、13 C和14 C及16 O和18 O。該等同位素可具放射性或不具放射性。本發明之放射性標示接合物可包含選自3 H、11 C、18 F、122 I、123 I、125 I、131 I、75 Br、76 Br、77 Br及82 Br之群組的放射性同位素。較佳地，放射性同位素係選自3 H、11 C及18 F之群組。
本發明的一些接合物可以阻轉異構物(atropisomer)存在。阻轉異構物係由於相對於單鍵之轉動受阻所產生的立體異構物，其中 旋轉的立體應變障壁高到足以讓構型異構物能夠單離出來。應理解的是所有此類構型異構物及其混合物皆涵括於本發明的範疇中。
本發明之接合物具有至少一個立體中心，彼等可因此以鏡像異構物或非鏡像異構物存在。應理解的是所有此類異構物以及其混合物皆涵括於本發明的範疇中。
若用於製備根據本發明之接合物的方法產生立體異構物之混合物，則這些異構物可藉由習用技術如製備型層析法來分離。接合物可經製備為外消旋形式，或是個別之鏡像異構物可藉由鏡像特定合成(enantiospecific synthesis)或離析法(resolution)來製備。接合物可藉由例如標準技術來離析為其組分鏡像異構物，諸如藉由與具光學活性酸(諸如(-)-二-對甲苯甲醯基-D-酒石酸及/或(+)-二-對甲苯甲醯基-L-酒石酸)進行鹽形成以形成非鏡像異構物對，接著進行分段結晶(fractional crystallization)與游離鹼再生。接合物亦可藉由形成非鏡像異構酯或醯胺，接著使用層析法分離並移除掌性助劑而離析。替代地，接合物可使用掌性管柱經由高效液相層析(HPLC)或SFC來離析。在一些情況中，接合物之旋轉異構體可存在，藉由1H NMR可觀察到其導致1H NMR譜中之複雜多重峰及峰整合。
在任何製備本發明接合物的方法中，對於任何相關分子上的敏感或反應性基團加以保護可為必要及/或所欲的。此可藉由習用保護基來達成，諸如以下文獻所述者：Protective Groups in Organic Chemistry,ed.J.F.W.McOmie,Plenum Press,1973；及T.W.Greene & P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley & Sons,1991，其各者全文以引用方式併入本文中以符合所有目的。保護基可在便利的後續階段中利用該項技術習知的方法去除。
使用方法
本發明係關於一種用於預防、治療或改善有需要之對象之Y2受體媒介之症候群及/或GLP-1受體媒介之症候群、病症或疾病的方法，該方法包含向該有需要之對象投予有效量之本發明之接合物、化合物、或醫藥組成物。
本發明亦提供一種用於預防、治療、延緩發生、或改善有需要之對象之病症、疾病、或病況或該病症、疾病、或病況之任一或多個症狀的方法，該方法包含向該有需要之對象投予有效量之本發明之接合物、化合物、或醫藥組成物。
根據具體實施例，疾病、病症、或病況係選自肥胖、第I或II型糖尿病、代謝症候群(即X症候群)、胰島素抗性、葡萄糖耐受不良(例如，葡萄糖不耐)、高血糖症、高胰島素血症、高三酸甘油酯血症、因先天性高胰島素血症(CHI)所致之低血糖症、異常血脂症、動脈粥樣硬化、糖尿病腎病變、及其他心血管風險因子(諸如高血壓及與未管理膽固醇及/或脂質水準有關之心血管風險因子)、骨質疏鬆症、發炎、非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)、腎疾病、及/或濕疹。
根據具體實施例，治療有效量係指足以達成一、二、三、四、或更多個下列效應之療法之量：(i)減少或改善所欲治療之疾病、病症、或病況或與其相關之症狀的嚴重性；(ii)減少所欲治療之疾病、病症或病況或與其相關之症狀的期間；(iii)預防所欲治療之疾病、病症或病況或與其相關之症狀的進展；(iv)造成所欲治療之疾病、病症或病況或與其相關之症狀的消退；(v)預防所欲治療之疾病、病症或病況或與其相關之症狀的發展或發生；(vi)預防所欲治療之疾病、病症或病況或與其相關之症狀的復發；(vii)減少具有所欲治療之疾病、病症或病況或與其相關之症狀的對象的住院；(viii)減少具有所欲治療之疾病、病症或病況或與其相關之症狀的對象的住院期長度；(ix)增加具有所欲治療之疾病、病症或病況或與其相關之症狀的對象的存活；(xi)抑制或減少對象的所欲治療之疾病、病症或病況或與其相關之症狀；及/或(xii)增強或改善另一療法的(多種)疾病預防或治療效應。
治療有效量或劑量可根據各種因子變化，諸如所欲治療之疾病、病症或病況、投予手段、標靶部位、對象之生理狀態(包括例如年齡、體重、健康)、對象係人類抑或動物、其他投予藥物、及治 療係疾病預防性抑或治療性。治療劑量經最佳地滴定以最佳化安全性及療效。
本文中所使用之用語「治療(treat、treating及treatment)」皆意欲指稱改善或逆轉至少一個與疾病、病症、或病況有關的可測量物理參數，該物理參數未必可在對象中覺察，但可在對象中覺察。用語「治療」亦可指造成疾病、病症、或病況消退、預防疾病、病症、或病況進展、或至少延緩疾病、病症、或病況之進展。在一具體實施例中，「治療」係指減輕一或多個與疾病、病症、或病況相關之症狀、預防一或多個與疾病、病症、或病況相關之症狀的發展或開始、或減少一或多個與疾病、病症、或病況相關之症狀的期間。在一具體實施例中，「治療」係指預防疾病、病症、或病況之復發。在一具體實施例中，「治療」係指增加具有疾病、病症、或病況之對象的存活。在一具體實施例中，「治療」係指排除對象之疾病、病症、或病況。
在一實施例中，本發明提供一種用於預防、治療、延緩發生、或改善有需要之對象之肥胖、或肥胖之任一或多個症狀的方法，該方法包含向該有需要之對象投予有效量之本發明之接合物、化合物、或醫藥組成物。在一些實施例中，對象之體重減少例如介於約0.01%至約0.1%、介於約0.1%至約0.5%、介於約0.5%至約1%、介於約1%至約5%、介於約2%至約3%、介於約5%至約10%、介於約10%至約15%、介於約15%至約20%、介於約20%至約25%、介於約25%至約30%、介於約30%至約35%、介於約35%至約40%、介於約40%至約45%、或介於約45%至約50%，該減少係相對於對象在投予任何本文中所述之本發明之接合物、化合物、醫藥組成物、形式、或藥劑之前的體重，或相較於未接受任何本文中所述之本發明之接合物、化合物、組成物、形式、藥劑、或組合之對照對象。
在一些實施例中，體重減少維持例如約1週、約2週、約3週、約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約9個月、約10個月、約11個月、約1年、約1.5年、約2年、約2.5年、約3年、約3.5年、約4年、 約4.5年、約5年、約6年、約7年、約8年、約9年、約10年、約15年、或約20年。
本發明提供一種預防、治療、延緩發生、或改善有需要之對象之症候群、病症或疾病、或該症候群、病症、或疾病之任一或多個症狀的方法，其中該症候群、病症或疾病係選自：肥胖、第I型或第II型糖尿病、代謝症候群(即X症候群)、胰島素抗性、葡萄糖耐受不良(例如，葡萄糖不耐)、高血糖症、高胰島素血症、高三酸甘油酯血症、因先天性高胰島素血症(CHI)所致之低血糖症、異常血脂症、動脈粥樣硬化、糖尿病腎病變、及其他心血管風險因子(諸如高血壓及與未管理膽固醇及/或脂質水準有關之心血管風險因子)、骨質疏鬆症、發炎、非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)、腎疾病、及濕疹，該方法包含向該有需要之對象投予有效量的本發明之接合物、化合物、或醫藥組成物。
如本文中所使用，代謝症候群係指具有下列任一或多者之對象：高血糖(例如高空腹血糖)、高血壓、異常膽固醇水準(例如低HDL水準)、異常三酸甘油酯水準(例如高三酸甘油酯)、大腰線(即腰圍)、腹部區域脂肪增加、胰島素抗性、葡萄糖不耐、C-反應性蛋白質水準升高(即促發炎狀態)、及血漿纖維蛋白溶酶原活化物抑制劑-1及纖維蛋白原水準增加(即促血栓狀態)。
本發明提供一種減少有需要之對象的攝食之方法，該方法包含向該有需要之對象投予有效量的本發明之接合物、化合物、或醫藥組成物。在一些實施例中，對象之攝食減少例如介於約0.01%至約0.1%、介於約0.1%至約0.5%、介於約0.5%至約1%、介於約1%至約5%、介於約2%至約3%、介於約5%至約10%、介於約10%至約15%、介於約15%至約20%、介於約20%至約25%、介於約25%至約30%、介於約30%至約35%、介於約35%至約40%、介於約40%至約45%、或介於約45%至約50%，該減少係相對於在對象投予任何本文中描述之本發明之接合物、化合物、組成物、形式、藥劑、 或組合之前的攝食，或相較於未接受任何本文中描述之本發明之接合物、化合物、組成物、形式、藥劑、或組合之對照對象。
在一些實施例中，攝食減少維持例如約1週、約2週、約3週、約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約9個月、約10個月、約11個月、約1年、約1.5年、約2年、約2.5年、約3年、約3.5年、約4年、約4.5年、約5年、約6年、約7年、約8年、約9年、約10年、約15年、或約20年。
本發明提供一種減少有需要之對象的糖化血色素(A1C)之方法，該方法包含向該有需要之對象投予有效量的本發明之接合物、化合物、或醫藥組成物。在一些實施例中，對象之A1C減少例如介於約0.001%與約0.01%之間、介於約0.01%與約0.1%之間、介於約0.1%與約0.2%之間、介於約0.2%與約0.3%之間、介於約0.3%與約0.4%之間、介於約0.4%與約0.5%之間、介於約0.5%與約1%之間、介於約1%與約1.5%之間、介於約1.5%與約2%之間、介於約2%與約2.5%之間、介於約2.5%與約3%之間、介於約3%與約4%之間、介於約4%與約5%之間、介於約5%與約6%之間、介於約6%與約7%之間、介於約7%與約8%之間、介於約8%與約9%之間、或介於約9%與約10%之間，該減少係相對於在對象投予任何本文中描述之本發明之接合物、化合物、組成物、形式、藥劑、或組合之前的A1C，或相較於未接受任何本文中描述之本發明之接合物、化合物、組成物、形式、藥劑、或組合之對照對象。
在其他實施例中，提供用於減少有需要之對象的空腹血糖水準之方法，該方法包含向該有需要之對象投予有效量的本發明之接合物、化合物、或醫藥組成物。空腹血糖水準可減少至小於約140至約150mg/dL、小於約140至約130mg/dL、小於約130至約120mg/dL、小於約120至約110mg/dL、小於約110至約100mg/dL、小於約100至約90mg/dL、或小於約90至約80mg/dL，該減少係相對於在對象投予任何本文中描述之本發明之接合物、化合物、組成物、 形式、藥劑、或組合之前的空腹血糖水準，或相較於未接受任何本文中描述之本發明之接合物、化合物、組成物、形式、藥劑、或組合之對照對象。
本發明提供一種調節有需要之對象的Y2受體活性及GLP-1受體活性之方法，該方法包含向該有需要之對象投予有效量的本發明之接合物、化合物、或醫藥組成物。如本文中所使用，「調節(modulating)」係指增加或降低受體活性。
在一些實施例中，有效量的本發明之接合物或化合物或其形式、組成物或藥劑係向有需要之對象投予一天一次、一天二次、一天三次、一天四次、一天五次、一天六次、一天七次、或一天八次。在其他實施例中，有效量的本發明之接合物或化合物或其形式、組成物或藥劑係向有需要之對象投予每二天一次、每週一次、每週二次、每週三次、每週四次、每週五次、每週六次、每月二次、每月三次、或每月四次。
本發明之另一實施例包含一種預防、治療、延緩發生、或改善有需要之對象之疾病、病症或症候群、或任何該疾病、病症、或症候群之一或多個症狀的方法，該方法包含在組合療法中向該有需要之對象投予有效量之本發明之接合物、化合物、或醫藥組成物。在某些實施態樣中，組合療法係第二治療劑。在某些實施態樣中，組合療法係外科療法。
本文中所使用之在向對象投予二或更多種療法上下文中之用語「組合(in combination)」係指使用超過一種療法。
如本文中所使用，組合療法係指向有需要之對象投予有效量的本發明之接合物或化合物或其形式、組成物或藥劑的同時投予一或多種額外治療劑、或一或多種外科療法。在一些實施例中，一或多種額外治療劑或外科療法可在投予有效量的本發明之接合物的同一天投予，且在其他實施例中，一或多種額外治療劑或外科療法可在投予有效量的本發明之接合物或化合物的同一週或同一月投予。
本發明亦考慮以組合療法預防、治療、延緩發生、或改善有需要之對象的任何本文描述之疾病、病症、症候群、或症狀，該組合療法包含向該有需要之對象投予有效量的本發明之接合物、化合物、或醫藥組成物與下列治療劑之任一或多者的組合：二肽基肽酶-4(DPP-4)抑制劑(例如西他列汀(sitagliptin)、沙格列汀(saxagliptin)、利拉利汀(linagliptin)、阿格列汀(alogliptin)等)；GLP-1受體促效劑(例如，短效型GLP-1受體促效劑諸如艾塞那肽(exenatide)及利西拉來(lixisenatide)；中效型GLP-1受體促效劑，諸如利拉魯肽(liraglutide)；長效型GLP-1受體促效劑(諸如艾塞那肽緩釋型、阿必魯肽(albiglutide)、度拉魯肽(dulaglutide))；鈉-葡萄糖共轉運子-2(SGLT-2)抑制劑(例如卡格列淨(canaglifozin)、達格列淨(dapaglifozin)、安帕列淨(empaglifozin)等)；膽酸扣押劑(例如考來維崙(colesevelam)等)；多巴胺受體促效劑(例如溴麥角環肽(bromocriptine)速效型)；雙胍(例如二甲雙胍(metformin)等)；胰島素；調酸素；磺醯脲(例如氯磺丙脲(chlorpropamide)、格列美脲(glimepiride)、格列甲嗪(glipizide)、優降糖(glyburide)、優降糖(glibenclamide)、格列波脲(glibornuride)、格列派特(glisoxepide)、格列吡脲(glyclopyramide)、甲磺氮卓脲(tolazamide)、甲苯磺丁脲(tolbutamide)、乙醯苯磺醯環己脲(acetohexamide)、磺胺丁脲(carbutamide)等)；及四氫噻唑二酮(例如吡格列酮(pioglitazone)、羅格列酮(rosiglitazone)、洛貝格列酮(lobeglitazone)、環格列酮(ciglitazone)、達格列酮(darglitazone)、恩格列酮(englitazone)、萘格列酮(netoglitazone)、利格列酮(rivoglitazone)、曲格列酮(troglitazone)等)。在一些實施例中，(多種)額外治療劑之劑量當與本發明之接合物或化合物組合給予時減少。在一些實施例中，當與本發明之接合物或化合物組合使用時，(多種)額外治療劑可以相較於各者單獨使用時較低之劑量使用。
本發明考慮以組合療法預防、治療、延緩發生、或改善有需要之對象的任何本文描述之疾病、病症、症候群、或症狀，該組 合療法包含向該有需要之對象投予有效量的本發明之接合物、化合物、或醫藥組成物與外科療法之組合。在某些實施例中，外科療法可為減重手術(例如胃繞道手術，諸如Roux-en-Y胃繞道手術；袖狀胃切除術；可調整胃束帶手術；膽胰分流與十二指腸轉位；胃內氣球；胃摺疊術；及其組合)。
在其中一或多種額外治療劑或外科療法係與有效量的本發明之接合物或化合物在同一天投予的實施例中，本發明之接合物或化合物可在額外治療劑或外科療法之前、之後或同時投予。用語「組合」之使用並不限制向對象投予療法之順序。例如，第一療法(例如本文描述之組成物)可在向對象投予第二療法之前(例如5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、12小時、16小時、24小時、48小時、72小時、96小時、1週、2週、3週、4週、5週、6週、8週或12週以前)、之同時或之後(例如5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、12小時、16小時、24小時、48小時、72小時、96小時、1週、2週、3週、4週、5週、6週、8週或12週之後)投予。
實施例
本發明亦提供以下非限制性實施例。
實施例1係一種接合物，其包含偶合至環狀PYY肽之類升糖素肽(GLP-1)-融合肽，其中該GLP-1融合肽包含GLP-1肽、第一連接肽、鉸鏈-Fc區肽、及第二連接肽，其中該第一連接肽係可選地不存在。
實施例2係如實施例1之接合物，其中該環狀PYY肽係以式I 或其衍生物或醫藥上可接受之鹽表示：
Figure 108114084-A0202-12-0073-89
 其中p係0或1；m係0、1、2、3、4、或5；n係1、2、3、或4；q係0或1；惟q只有在Z30 不存在時係1；橋係-Ph-CH2 -S-、-三唑基-、-NHC(O)CH2 S-、-SCH2 C(O)NH-、-(OCH2 CH2 )2 NHC(O)CH2 S、-NHC(O)-、或-CH2 S-；Z4 係K、A、E、S、或R；Z7 係A或K；Z9 係G或K；Z11 係D或K；Z22 係A或K；Z23 係S或K；Z26 係A或H；Z30 係L、W、或不存在，惟Z30 只有在q係1時不存在； Z34 係
Figure 108114084-A0202-12-0074-90
或
Figure 108114084-A0202-12-0074-91
； Z35 係
Figure 108114084-A0202-12-0074-92
、
Figure 108114084-A0202-12-0074-93
、
Figure 108114084-A0202-12-0074-94
、或
Figure 108114084-A0202-12-0074-95
；其中該衍生物係經一或多個選自由醯胺化、醯化、及聚乙二醇化所組成之群組之過程修飾的式I 之化合物。
實施例3係如實施例2之接合物，其中該環狀PYY肽係以式I 或其衍生物或醫藥上可接受之鹽表示，其中： p係0或1；m係0、1、2、3、4、或5；n係1、2、3、或4；q係0或1；惟q只有在Z30 不存在時係1；橋係-Ph-CH2 -S-、-三唑基-、-NHC(O)CH2 S-、-SCH2 C(O)NH2 -、-(OCH2 CH2 )2 NHC(O)CH2 S、-NHC(O)-、或-CH2 S-；Z4 係K、A、E、S、或R；Z7 係A或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：
Figure 108114084-A0202-12-0075-96
，其中i係0至24之整數，且X=Br、I或Cl、-C(O)CH2 Br、-C(O)CH2 I、或-C(O)CH2 Cl；Z9 係G或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：
Figure 108114084-A0202-12-0075-97
，其中i係0至24之整數，且X=Br、I或Cl、-C(O)CH2 Br、-C(O)CH2 I、或-C(O)CH2 Cl；Z11 係D或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：
Figure 108114084-A0202-12-0075-98
，其中i係0至24之整數，且X=Br、I或Cl、-C(O)CH2 Br、-C(O)CH2 I、或-C(O)CH2 Cl；Z22 係A或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：
Figure 108114084-A0202-12-0076-99
，其中i係0至24之整數，且X=Br、I或Cl、-C(O)CH2 Br、-C(O)CH2 I、或-C(O)CH2 Cl；Z23 係S或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：
Figure 108114084-A0202-12-0076-100
，其中i係0至24之整數，且X=Br、I或Cl、-C(O)CH2 Br、-C(O)CH2 I、或-C(O)CH2 Cl；Z26 係A或H；Z30 係L； Z34 係
Figure 108114084-A0202-12-0076-101
或
Figure 108114084-A0202-12-0076-102
；且 Z35 係
Figure 108114084-A0202-12-0076-103
、
Figure 108114084-A0202-12-0076-104
、
Figure 108114084-A0202-12-0076-105
、或
Figure 108114084-A0202-12-0076-106
；其中X係親電子基團且X親電子基團的Br、Cl、或I係在接合反應中經取代以形成GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物。
實施例4係如實施例2之接合物，其中該環狀PYY肽係以式I 或其衍生物或醫藥上可接受之鹽表示，其中：p係0或1；m係0、1、2、3、或5；n係1、2、或4；q係0或1；惟q只有在Z30 不存在時可能係1； 橋係-Ph-CH2 -S-、-三唑基-、-NHC(O)CH2 S-、-SCH2 C(O)NH2 -、-(OCH2 CH2 )2 NHC(O)CH2 S、-NHC(O)-、或-CH2 S-；Z4 係K、A、E、S、或R；Z7 係A或K，其中該K之胺基側鏈係經下列取代：-C(O)CH2 Br，Z9 係G或K，其中該K之胺基側鏈係經下列取代：-C(O)CH2 Br，Z11 係D或K，其中該K之胺基側鏈係經下列取代：-C(O)CH2 Br，Z22 係A或K，其中該K之胺基側鏈係經下列取代：-C(O)CH2 Br，Z23 係S或K，其中該K之胺基側鏈係經下列取代：-C(O)CH2 Br，Z26 係A或H；Z30 係L； Z34 係
Figure 108114084-A0202-12-0077-107
或
Figure 108114084-A0202-12-0077-108
；且 Z35 係
Figure 108114084-A0202-12-0077-109
、
Figure 108114084-A0202-12-0077-110
、
Figure 108114084-A0202-12-0077-111
、或
Figure 108114084-A0202-12-0077-112
；其中Br係在接合反應中經取代以形成GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物。
實施例5係如實施例1或2之接合物，其中該環狀PYY肽係選自由SEQ ID NO：1至54所組成之群組、或其醫藥上可接受之鹽。
實施例6係如實施例5之接合物，其中該環狀PYY肽係選自SEQ ID NO：24、25、27、28、29、30、33、或34、或其醫藥上可接受之鹽。
實施例7係實施例1至6中任一者之接合物，其中該GLP-1融合肽在該環狀PYY肽的離胺酸殘基處共價連結至該環狀PYY肽。
實施例8係如實施例7之接合物，其中該環狀PYY肽包含化學連接子。
實施例9係如實施例8之接合物，其中該化學連接子包含選自由C(O)CH2 、聚乙二醇(PEG)8 -三唑基-CH2 CH2 CO-PEG4 、2至24個PEG單位之PEG鏈、含有醯基之連接子、及含有2至10個碳原子之烷基鏈所組成之群組中之一者。
實施例10係如實施例7至9中任一者之接合物，其中在式I 中之Z7 、Z9 、Z11 、Z22 及Z23 中僅一者係離胺酸，且該離胺酸係共價連結至該GLP-1融合肽之該第二連接肽的半胱胺酸殘基。
實施例11係如實施例10之接合物，其中在式I 中之Z11 係離胺酸。
實施例12係如實施例1至11中任一者之接合物，其中該GLP-1肽包含選自由SEQ ID NO：56至59所組成之群組的胺基酸序列。
實施例13係如實施例12之接合物，其中該GLP-1肽包含SEQ ID NO：57之胺基酸序列。
實施例14係如實施例1至13中任一者之接合物，其中該第一連接肽包含選自由SEQ ID NO：60至83所組成之群組的胺基酸序列。
實施例15係如實施例14之接合物，其中該第一連接肽包含SEQ ID NO：60之胺基酸序列。
實施例16係如實施例1至15中任一者之接合物，其中該鉸鏈-Fc區肽包含選自由SEQ ID NO：84至90所組成之群組的胺基酸序列。
實施例17係如實施例16之接合物，其中該鉸鏈-Fc區肽包含SEQ ID NO：84或SEQ ID NO：85之胺基酸序列。
實施例18係如實施例1至17中任一者之接合物，其中該第二連接肽包含選自由SEQ ID NO：93至112所組成之群組的胺基酸序列。
實施例19係如實施例18之接合物，其中該第二連接肽包含SEQ ID NO：93、94、95、106、或111之胺基酸序列。
實施例20係一種接合物，其包含偶合至環狀PYY肽之類升糖素肽1(GLP-1)融合肽，其中該GLP-1融合肽包含選自由SEQ ID NO：113至224及267至274所組成之群組的胺基酸序列，且其中該環狀PYY肽包含選自SEQ ID NO：24、25、27、28、29、30、33、或34之胺基酸序列。
實施例21係如實施例20之接合物，其中該GLP-1融合肽包含SEQ ID NO：113之胺基酸序列。
實施例22係如實施例20之接合物，其中該GLP-1融合肽包含SEQ ID NO：136之胺基酸序列。
實施例23係如實施例21或22之接合物，其中該GLP-1融合肽之殘基287至289之間的半胱胺酸殘基係共價連結至環狀PYY肽之殘基7、9、11、22、或23處之離胺酸殘基。
實施例24係如實施例23之接合物，其中該半胱胺酸殘基位於該GLP-1融合肽之殘基288處。
實施例25係如實施例20至24中任一者之接合物，其中該離胺酸殘基位於該環狀PYY肽之殘基11處。
實施例26係實施例20至25中任一者之接合物，其中該GLP-1融合肽經由該環狀PYY肽上的化學連接子共價連結至該環狀PYY肽。
實施例27係如實施例26之接合物，其中該化學連接子係選自由C(O)CH2 、聚乙二醇(PEG)8-三唑基-CH2 CH2 CO-PEG4、2至24個PEG單位之PEG鏈、含有醯基之連接子、或含有2至10個碳原子之烷基鏈所組成之群組。
實施例28係一種接合物，其包含偶合至環狀PYY肽之類升糖素肽1(GLP-1)融合肽，其中該接合物包含選自由SEQ ID NO：225至262所組成之群組之序列或其醫藥上可接受之鹽。
實施例29係如實施例1至28中任一者之接合物，其中該GLP-1融合肽係單體。
實施例30係如實施例1至28中任一者之接合物，其中該GLP-1融合肽係二聚體。
實施例31係一種製造如實施例1至30中任一者之接合物之方法，該方法包含使導入該環狀PYY肽之側鏈上的親電子劑與該GLP-1融合肽之該第二連接肽的半胱胺酸殘基之巰基反應，藉以在該環狀PYY肽與該GLP-1融合肽之間建立共價鍵結，該環狀PYY肽之側鏈較佳是該環狀PYY肽之離胺酸殘基的胺基側鏈，該親電子劑較佳是溴乙醯胺或順丁烯二醯亞胺。
實施例32係如實施例31之方法，其中該GLP-1融合肽之該第二連接肽的該半胱胺酸殘基係藉由使該GLP-1融合肽與過量的氮雜膦還原劑接觸而還原，藉此使還原的該半胱胺酸殘基與該親電子劑反應。
實施例33係如實施例32之方法，其中該氮雜膦還原劑係1,3,5-三氮雜-7-磷三環[3.3.1.1]癸烷(PTA)或其衍生物。
實施例34係一種醫藥組成物，其包含如實施例1至30中任一者之接合物及醫藥上可接受之載劑。
實施例35係一種用於治療或預防有需要之對象的肥胖之方法，其包含向該有需要之對象投予有效量的如實施例34之醫藥組成物。
實施例36係如實施例35之方法，其中向有需要之對象投予有效量的醫藥組成物導致體重相較於該對象投予該醫藥組成物之前的體重減少約5%至約10%、約10%至約15%、約15%至約20%、或約20%至約25%。
實施例37係一種用於治療或預防有需要之對象的疾病或病症之方法，其中該疾病或病症係肥胖、第I型或第II型糖尿病、代謝症候群、胰島素抗性、葡萄糖耐受不良、高血糖症、高胰島素血症、高三酸甘油酯血症、因先天性高胰島素血症(CHI)所致之低血糖症、異常血脂症、動脈粥樣硬化、糖尿病腎病變、及其他心血管風險因子(諸如高血壓及與未管理膽固醇及/或脂質水準有關之心血管風險因子)、骨質疏鬆症、發炎、非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)、腎疾病、及/或濕疹，該方法包含向該有需要之對象投予有效量的如實施例34所述之醫藥組成物。
實施例38係如實施例37之方法，其中該疾病或病症係肥胖。
實施例39係如實施例37之方法，其中該疾病或病症係第I型糖尿病。
實施例40係如實施例37之方法，其中該疾病或病症係第II型糖尿病。
實施例41係如實施例37之方法，其中該疾病或病症係代謝症候群。
實施例42係如實施例37之方法，其中該疾病或病症係腎疾病。
實施例43係如實施例37之方法，其中該疾病或病症係非酒精性脂肪肝炎(NASH)。
實施例44係如實施例37之方法，其中該疾病或病症係非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)。
實施例45係一種減少有需要之對象的攝食之方法，該方法包含向該有需要之對象投予有效量的如實施例34之醫藥組成物。
實施例46係如實施例45之方法，其中向有需要之對象投予有效量的醫藥組成物導致攝食相較於該對象投予該醫藥組成物之前的攝食減少約5%至約10%、約10%至約15%、約15%至約20%、約20%至約25%、約25%至約30%、約30%至約35%、約35%至約40%、約40%至約45%、或約45%至約50%。
實施例47係一種調節有需要之對象的Y2受體活性及GLP-1受體活性之方法，該方法包含向該有需要之對象投予有效量的如實施例34之醫藥組成物。
實施例48係如實施例35至47中任一者之方法，其中該醫藥組成物係經由注射投予。
實施例49係如實施例48之方法，其中該注射經皮下、肌內、腹膜內、或靜脈內傳遞。
實施例50係如實施例35至49中任一者之方法，其中該醫藥組成物係與第二治療劑組合投予。
實施例51係如實施例35至50中任一者之方法，其中該醫藥組成物係每天、每週、或每月向有需要之對象投予。
實施例52係如實施例51之方法，其中該醫藥組成物係每天投予一次、二次、三次、四次、五次、或六次。
實施例53係如實施例51之方法，其中該醫藥組成物係每週投予一次、二次、三次、四次、五次、或六次。
實施例54係如實施例51之方法，其中該醫藥組成物係每月投予一次、二次、三次、或四次。
實施例55係一種套組，其包含如實施例1至30中任一者之接合物或如實施例34之醫藥組成物，較佳地該套組進一步包含注射裝置。
實施例56係一種製造包含如實施例1至30中任一者之接合物的醫藥組成物之方法，其包含將該接合物與醫藥上可接受之載劑組合以獲得該醫藥組成物。
實施例57係一種單離的鉸鏈-Fc區平台肽，其中該鉸鏈-Fc區平台肽包含鉸鏈-Fc區肽(其較佳地包含選自於由SEQ ID NO：84至90所組成之群組的胺基酸序列)、第一連接肽(其較佳地包含選自於由SEQ ID NO：60至83所組成之群組的胺基酸序列且該第一連接肽係可選地遺漏)及第二連接肽(其包含選自SEQ ID NO：91至112之胺基酸序列)，其中該第一連接肽係連接至該鉸鏈-Fc區肽之胺基端且該第二連接肽係連接至該鉸鏈-Fc區肽之羧基端。
實施例58係如實施例57之單離的鉸鏈-Fc區平台肽，其中該鉸鏈-Fc區肽包含SEQ ID NO：84之胺基酸序列。
實施例59係如實施例57或58之單離的鉸鏈-Fc區平台肽，其中該第一連接肽包含SEQ ID NO：60之胺基酸序列。
實施例60係如實施例57至59中任一者之單離的鉸鏈-Fc區平台肽，其中該第二連接肽包含SEQ ID NO：93、94、95、106、或111之胺基酸序列。
實施例61係一種接合物，其包含共價連結至該第二連接肽之目標肽的鉸鏈-Fc區平台肽。
實施例62係如實施例61之接合物，其中該目標肽係以式I 或其衍生物或醫藥上可接受之鹽表示之環狀PYY肽：
Figure 108114084-A0202-12-0083-113
 其中p係0或1；m係0、1、2、3、4、或5；n係1、2、3、或4；q係0或1；惟q只有在Z30 不存在時係1； 橋係-Ph-CH2 -S-、-三唑基-、-NHC(O)CH2 S-、-SCH2 C(O)NH-、-(OCH2 CH2 )2 NHC(O)CH2 S、-NHC(O)-、或-CH2 S-；Z4 係K、A、E、S、或R；Z7 係A或K；Z9 係G或K；Z11 係D或K；Z22 係A或K；Z23 係S或K；Z26 係A或H；Z30 係L、W、或不存在，惟Z30 只有在q係1時不存在； Z34 係
Figure 108114084-A0202-12-0084-114
或
Figure 108114084-A0202-12-0084-115
； Z35 係
Figure 108114084-A0202-12-0084-116
、
Figure 108114084-A0202-12-0084-117
、
Figure 108114084-A0202-12-0084-118
、或
Figure 108114084-A0202-12-0084-119
；其中該衍生物係經一或多個選自由醯胺化、醯化、及聚乙二醇化所組成之群組之過程修飾的式I 之化合物。
實施例63係一種製造具有目標肽之鉸鏈-Fc區平台肽之接合物之方法，其包含在該第二連接肽與該目標肽之間建立共價鍵結。
實例
合成
本發明之化合物或接合物可根據所屬領域中具有通常知識者所習知之一般合成方法來合成。下列合成說明係例示性目的，並無意作為本發明之限制。
本發明之NTSC環狀PYY(NTSC-PYY)類似物或衍生物可藉由多種在胺基酸之間形成連續肽鍵結的已知、習知程序合成，且優先藉由固相肽合成(SPPS)進行，大致上如Merrifield(J.Am.Chem.Soc.,85：2149-2154(1963))所述，使用自動化肽合成器、傳統實驗室合成(bench synthesis)、或兩種方式之組合進行。肽合成的習知程序涉及一個胺基酸殘基之游離胺基(彼之其他反應性官能基已經適當保護)與另一胺基酸之游離羧基(彼之反應性官能基亦已經適當保護)之間的縮合。一般利用於肽鍵形成之縮合劑的實例包括二異丙基碳二亞胺(DIC)加或不加1-羥基苯并三唑(HOBT)或乙基氰基(羥基亞胺基)乙酸酯(Oxyma Pure)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基胺鎓六氟磷酸鹽(HBTU)、2-(1H-7-氮苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基胺鎓六氟磷酸鹽(HATU)、2-(6-氯-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基胺鎓六氟磷酸鹽(HCTU)、1-氰基-2-乙氧基-2-側氧基亞乙基胺基氧基-參-吡咯啶-鏻六氟磷酸鹽(PyOxim)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基胺鎓四氟硼酸鹽(TBTU)、溴-參-吡咯啶-鏻六氟磷酸鹽(PyBroP)、及類似物。
自動化肽合成方法可在室溫下(rt)、或在高溫下較佳地通過施用微波加熱進行，如Yu(J.Org.Chem.,57：4781-4784(1992))所述且最近經Palasek改良(J.Pept.Sci.,13：143-148(2007))。
本發明之化合物(C端醯胺)可方便地使用N-α-FMOC(9-茀基甲基氧基羰基)保護胺基酸方法製備，藉以將經適當保護之N-α-FMOC保護胺基酸的羧基端使用合適偶合劑偶合至習知固相樹脂上。合適的習知市售固相樹脂包括Rink醯胺MBHA樹脂、Rink醯胺AM樹脂、Tentagel S RAM樹脂、FMOC-PAL-PEG PS樹脂、SpheriTide Rink醯胺樹脂、ChemMatrix Rink樹脂、Sieber醯胺樹脂、TG Sieber樹脂及類似物。接著可將樹脂結合FMOC-胺基酸藉由暴露至20%於N,N-二甲基甲醯胺(DMF)或1-甲基-2-吡咯啶酮(NMP)中之哌啶進行去保護處理，以選擇性移除FMOC保護基。隨後將額外FMOC保護胺基酸依序偶合及去保護，藉以產生所欲之樹脂結合保護 肽。在某些例子中，肽序列中的另一個胺可能必須利用可承受FMOC去保護條件的正交反應性保護基。保護基如4-甲基三苯甲基(Mtt)或4-甲氧基三苯甲基(Mmt)(兩者皆可藉由1%三氟乙酸(TFA)/二氯甲烷(DCM)處理移除)、或較佳地烯丙基氧基羰基(烯丙氧羰基；可藉由Pd(PPh3 )4 (四(三苯基膦)鈀(0))/PhSiH3 (苯基矽烷)處理移除)、1-(4,4-二甲基-2,6-二側氧基環己-1-亞基)乙基(Dde；可藉由2至3%肼/DMF處理移除)及1-(4,4-二甲基-2,6-二側氧基環己-1-亞基)-3-甲基丁基(ivDde；可藉由2至3%肼/DMF處理移除)可有效用於這類例子中。
在習知肽合成方法中，α胺基酸的反應性側鏈在整個合成中通常以合適保護基保護，以使彼等對偶合及去保護方案無反應。雖然多個用於胺基酸側鏈之保護基係所屬技術領域中已知，在本文中下列保護基係最佳者：用於絲胺酸、蘇胺酸、麩胺酸、天冬胺酸及酪胺酸之三級丁基(t-Bu)；用於天冬醯胺酸、麩醯胺酸、半胱胺酸、升半胱胺酸及組胺酸之三苯甲基(Trt)；用於色胺酸及離胺酸ε-胺基之三級丁基氧基羰基(Boc)；及用於精胺酸之2,2,4,6,7-五甲基二氫苯并呋喃-5-磺醯基(Pbf)。這些保護基在強酸處理諸如高濃度三氟乙酸(TFA)後移除。
在完成SPPS後，使用主要由(TFA)與各種碳陽離子清除劑組合諸如三異丙基矽烷(TIPS)、水、苯酚及大茴香醚組成之切割雞尾酒(cleavage cocktail)，將樹脂結合、側鏈保護肽去保護同時自樹脂切割。接著藉由冷醚沉澱肽/雞尾酒濾液來單離粗固體肽。在Sieber樹脂結合保護肽之特殊案例中，藉由以1至2%於DCM中之TFA重複處理，可有利地自樹脂切割保護肽而不造成側鏈去保護。保護肽經單離後可在溶液相的反應中進一步操作。最後，可將保護肽使用切割雞尾酒另行處理以全面去保護並如上述沉澱。接著將如此獲得之粗製肽以低濃度(約<4mg/mL)溶解於含有機共溶劑諸如乙腈或乙醇之大致水溶液(aq)溶劑系統。將溶液pH升高至>5後，接著將肽進行分子內環化反應以形成對應之本發明之粗製NTSC PYY類似物。如此形 成之NTSC PYY類似物可使用所屬技術領域中通常已知之純化技術純化。在本文中使用之較佳肽純化方法係逆相高效液相層析法(HPLC)。接著經純化肽係藉由液相層析法/質譜法(LC/MS)表徵。
用於製造本發明之環狀PYY肽的一般方案及方法係描述於2017年10月26日申請之美國專利申請案第15/794,231號及2017年10月26日申請之美國專利申請案第15/794,171號。兩申請案之內容特此以引用方式全文併入本文中。
應瞭解本文中所述之下列實例及實施例僅用於說明性之目的，並且根據該等實例及實施例之各式修飾或變化將為所屬領域中具有通常知識者所推知且應被納入本申請案之精神與範圍及隨附之權利要求的範疇內。所有在本文中引用之出版物、專利及專利申請案全文特此以引用方式併入本文中以符合所有目的。
實例1：自暫時轉染的哺乳動物細胞表現及純化類升糖素肽1(GLP-1)融合肽
GLP-1融合肽的DNA建構體係藉由使用不同設計的內切核酸酶限制酶，將合成的基因片段選殖至pCDNA3.1衍生的哺乳動物表現載體來產生。合成的基因片段係經設計以包含編碼融合蛋白之下列組分中之一者或全部的DNA序列(自N端至C端)：GLP-1肽或GLP-1變體肽、第一連接肽、鉸鏈-Fc區肽、及第二連接肽(其含有用於接合至環狀PYY肽之Cys)。
GLP-1融合蛋白係表現於ExpiCHO-STM 細胞(ThermoFisher Scientific；Waltham,MA,Cat # A29127)，此係遵循製造商建議，以融合蛋白表現建構體之純化質體DNA進行細胞暫時轉染。簡言之，將ExpiCHO-STM 細胞維持懸浮於ExpiCHOTM 表現介質(ThermoFisher Scientific,Cat # A29100)中，其係在設定為37℃、8% CO2 及125RPM之震盪培養箱中。將細胞繼代並稀釋至每ml 6.0×106 個細胞，維持98%或更佳之細胞存活性。使用ExpiFectamineTM CHO轉染套組(ThermoFisher Scientific Cat # A29131)進行暫時轉染。每ml待轉染的稀釋細胞使用一微克的質體DNA，且質體DNA係經 稀釋於OptiPROTM SFM錯合介質中。ExpiFectamineTM CHO試劑係以1：3比例(v/v，DNA：試劑)使用，且亦稀釋於OptiPROTM 中。將稀釋的DNA及轉染試劑合併一分鐘，允許DNA/脂質錯合物形成，接著添加至細胞。在整夜培養後，將ExpiCHOTM feed及ExpiFectamineTM CHO增強子添加至細胞。使細胞在37℃下震盪培養五天，之後收集培養上清液。
來自暫時轉染ExpiCHO-STM 細胞之培養上清液係藉由離心澄清(30min,6000rpm)隨後過濾收集(0.2μ PES膜，Corning；Corning,NY)。大規模轉染(5至20公升)首先係使用Pall Centramate切向流過濾系統濃縮10倍。將pH7.2之10x DPBS添加至上清液至1X最終濃度，之後裝載至平衡(DPBS,pH 7.2)HiTrap MabSelect Sure蛋白質A管柱(GE Healthcare；Little Chalfont,United Kingdom)上，相對濃度為每ml樹脂約20mg蛋白質，使用AKTA FPLC層析系統。在裝載後，將管柱用10倍管柱體積之DPBS,pH7.2依序洗滌。在一些情況下，包括用20倍管柱體積之100mM Tris、2.5M NaCl、50mM之辛酸鈉、pH 9及10倍管柱體積之DPBS,pH7.2的額外清洗。將蛋白質用10倍管柱體積之0.1M乙酸鈉(Na)pH 3洗提。將蛋白質流份藉由洗提至含有20%洗提流份體積之2.0M Tris,pH 7之試管中立即中和。將尖峰流份彙集，並將pH用額外的Tris調整至約7(若有需要)。將純化蛋白質過濾(0.2μ)，並在BioTek SynergyTM HTM分光光度計上以在280nm之吸光度判定濃度。利用SDS-PAGE與分析性尺寸篩除HPLC(DionexTM HPLC系統)，評估經純化之蛋白質品質。內毒素水準係利用濁度LAL分析法測量(Pyrotell®-T,Associates of Cape Cod；Falmouth,MA)。
或者，GLP-1融合蛋白係表現於Expi293F細胞(ThermoFisher Scientific,Cat # A14527)，此係遵循製造商建議，以融合蛋白表現建構體之純化質體DNA進行細胞暫時轉染。簡言之，將Expi293F細胞維持懸浮於Expi293TM 表現介質(ThermoFisher Scientific,Cat # A1435101)中，其係在設定為37℃、8% CO2 及125 RPM之震盪培養箱中。將細胞繼代並稀釋至每ml 2.5×106 個細胞，維持95%或更佳之細胞存活性。使用ExpiFectamineTM 293轉染套組(ThermoFisher Scientific Cat # A14525)進行暫時轉染。每ml待轉染的稀釋細胞使用一微克的質體DNA，且質體DNA係經稀釋於OptiMEMTM SFM錯合介質中。ExpiFectamineTM 293試劑係以1：2.6比例(v/v，DNA：試劑)使用，其係稀釋於OptiMEMTM 中並允許在室溫下培養5分鐘。將稀釋的DNA及轉染試劑合併二十分鐘，允許DNA/脂質錯合物形成，接著添加至細胞。在整夜培養後，將Expi293TM feed及ExpiFectamineTM 293增強子添加至細胞。使細胞在37℃下震盪培養四天，之後收集培養上清液。
來自暫時轉染Expi293F細胞之培養上清液係藉由離心澄清(30min,6000rpm)隨後過濾收集(0.2μ PES膜，Corning)。將pH7.2之10x DPBS添加至上清液至1X最終濃度，之後裝載至平衡(DPBS,pH 7.2)HiTrap MabSelect Sure蛋白質A管柱(GE Healthcare)上，相對濃度為每ml樹脂約20mg蛋白質，使用AKTA FPLC層析系統。在裝載後，將管柱用10倍管柱體積之DPBS,pH7.2洗滌。將蛋白質用10倍管柱體積之0.1M Na-乙酸酯pH 3洗提。將蛋白質流份藉由洗提至含有20%洗提流份體積之2.0M Tris,pH 7之試管中立即中和。將尖峰流份彙集，並將pH用額外的Tris調整至約5.5(若有需要)。將純化蛋白質過濾(0.2μ)，並在BioTek SynergyTM HTM分光光度計上以在280nm之吸光度判定濃度。利用SDS-PAGE與分析性尺寸篩除HPLC(DionexTM HPLC系統)，評估經純化之蛋白質品質。利用濁度LAL分析法(Pyrotell®-T,Associates of Cape Cod)，測量內毒素水準。
具有包含胺基酸序列SEQ ID NO：61(其係聚甘胺酸連接子)之第一連接肽的GLP-1融合蛋白以低水準表現且具有低純化產率。因此，在此實驗中，當工程改造GLP-1融合蛋白時使用聚甘胺酸作為第一連接肽係不利的。
具有包含胺基酸序列SEQ ID NO：100之第二連接肽的GLP-1融合蛋白係截短的，且判定為當藉由質譜測定法分析時不具有預期的分子量。因此，在此實驗中，當工程改造GLP-1融合蛋白時使用SEQ ID NO：100的第二連接肽係不利的。
此外，當製備GLP-1融合肽建構體時，將鉸鏈-Fc區肽(即人IgG4)之羧基端離胺酸從最終建構體中刪除，以避免潛在的蛋白分解風險。
實例2：製造GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物
GLP-1融合蛋白的還原
方法A
經純化的GLP-1融合蛋白係具有經工程改造第二連接肽之重組蛋白的混合物，該等經工程改造第二連接肽的各連接子含有至少一個半胱胺酸殘基，該至少一個半胱胺酸殘基經分子內雙硫鍵鍵結至另一半胱胺酸，或鍵結至胞質液或生長介質中之意外的半胱胺酸殘基。向該異質性GLP-1融合蛋白溶液(5至12mg/mL在TrisOAc,pH 5.4至6.4中)添加過量的膦還原試劑1,3,5-三氮雜-7-磷金剛烷(PTA，15至40當量)，接著添加100mM EDTA(最終濃度1至2mM)。將所得反應混合物在室溫下溫和攪拌直到目標半胱胺酸殘基的還原完成(4至16h)。藉由去鹽層析法移除經釋放之半胱胺酸及剩餘的PTA。
方法B
向異質性GLP-1融合蛋白溶液(5至15mg/mL在TrisOAc,pH 5.0至6.5中)添加過量的膦還原試劑三(2-羧基乙基)膦(TCEP，4至25當量)，接著添加100mM EDTA(最終濃度1mM)。將所得反應混合物在室溫下溫和攪拌整夜，接著施加至經TrisOAc(pH 7.0)平衡之去鹽管柱。將完全還原的GLP-1融合蛋白(鉸鏈雙硫鍵斷裂)用去氫抗壞血酸(DHAA,10eq.)處理2小時，之後將還原的GLP-1融合肽氧化以給出第二連接肽上之經工程改造半胱胺酸完全去蓋的全長GLP-1融合肽。
製備GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物
將還原的GLP-1融合肽在TrisOAc(3至10mg/mL，pH 5.5)中之溶液添加至環狀PYY肽(2.6至3.0eq.10至15mg/mL)在去離子水中之溶液中。為了保護反應性硫醇免受金屬催化氧化反應，將100mM EDTA溶液添加至反應混合物中直到EDTA的濃度達1mM。藉由逐滴添加Tris緩衝劑(1M,pH 9.1)將反應溶液之pH提升至pH 8.0至8.2。反應在室溫下進行3至7小時，然後在5℃下進行18小時。LCMS指示接合已完成且GLP-1融合環狀PYY肽接合物形成大於95%。使反應直接經受蛋白質A純化以移除過量的環狀PYY肽或藉由添加5當量的半胱胺酸(以蓋上剩餘的反應性環狀PYY肽)來淬熄。將所得粗製接合物藉由疏水性交互作用層析法(HIC)純化，隨後立即在蛋白質A上吸附。接合物洗提(乙酸鈉，pH 3.5)及後續用Tris緩衝劑中和至pH 7至7.5以得出最終產物。替代地，經HIC純化之接合物若在HIC純化之前已進行過蛋白質A拋光(protein A polishing)，則可藉由PD-10管柱交換至所欲之緩衝劑，無需進一步的蛋白質A拋光。
接合反應亦可在低溫(5℃)下進行，並藉由LCMS(約48hr)監測。
在一些情況下，在GLP-1融合蛋白之第二連接肽中的反應性半胱胺酸係藉由溴乙醯胺加蓋以形成穩定的硫醚鍵。這些經乙醯胺改質之GLP-1融合蛋白係製備如下：向GLP-1融合蛋白溶液(5至12mg/mL在TrisOAc,pH 5.4至6.4中)添加過量的膦還原試劑1,3,5-三氮雜-7-磷金剛烷(PTA，15至20當量)，接著添加100mM EDTA(最終濃度1至2mM)。將所得反應混合物在室溫下溫和攪拌18小時。將15至20當量的溴乙醯胺添加至GLP-1融合肽溶液，並藉由Tris緩衝劑(1M,pH 9.1)將反應混合物之pH值調整至pH 7.5至8.1。在2小時後，將反應混合物藉由疏水性交互作用層析法(HIC)純化，隨後立即進行蛋白質A拋光。
表8提供選定之GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物的單離產率。觀察到當第一連接肽係AP連接子(如在GLP-1融合肽64(GF64)中)且第二連接肽係G4 A連接子(如GLP-1融合肽8(GF8)中)時，GLP-1偶合環狀PYY肽接合物的單離產率不佳。
Figure 108114084-A0202-12-0092-120
實例3：GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物表徵
GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物之分析表徵係使用(i)疏水性交互作用層析法(HIC)、(ii)藉由LC-ESIMS之完整質量測量、(iii)尺寸篩除層析法(SEC)進行。GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物之分析表徵結果及接合方法顯示於表9。
Figure 108114084-A0202-12-0092-121
Figure 108114084-A0202-12-0093-122
實例4：體外檢定
根據套組指令，在使用Lance競爭性cAMP免疫檢定(Perkin Elmer,Waltham,Massachusetts)測量細胞內cAMP之基於細胞之檢定中，篩選接合物的功能活性及體外效力。在檢定中使用穩定表現小鼠或人類GLP-1R或NPY2受體(Y2R)的殖株HEK293細胞。將表現GLP1R的細胞解凍並懸浮於HBSS、5mM HEPES、0.1% BSA、0.5mM IBMX中。將細胞與套組抗cAMP抗體混合，並添加至經HBSS、5mM HEPES、0.1% BSA連續稀釋於384孔白色opti-plate中的接合物。在室溫下培養10分鐘後，添加免疫檢定偵測混合物。在Envision盤讀取儀(激發320nm、發射615nm及665nm)上讀取檢 定盤為TR-FRET檢定，並將數據用於使用Prism統計軟體(GraphPad Software San Diego)計算化合物EC50 值。
為了判定化合物在Y2R受體的活性，將表現Y2R的HEK293細胞培養於補充有10%胎牛血清、1% L-麩醯胺酸、1%丙酮酸鈉、1%青黴素/鏈黴素及600ug/ml G418的DMEM-高葡萄糖介質(Cellgro)中，並接種在384孔盤不含G418的介質中整夜。在檢定當天，將細胞生長介質自細胞移除，並添加在5mM HEPES、500uM IBMX及0.1% BSA於HBSS中之6μl的接合物(2X)。接下來將6μl之含有毛喉素(forskolin)(2X，5uM最終濃度)及LANCE cAMP抗體(1：100)的刺激緩衝液添加至細胞。在室溫下培養25分鐘之後，添加12μl之偵測混合物，並在LANCE cAMP免疫檢定中定量cAMP濃度。
數據分析
來自Envision板讀取儀之數據表現為相對螢光單位(RFU)，計算方式為(615nm/665nm)×10,000。所有樣本皆以三重複測量。各孔內未知的cAMP濃度係自包括在各盤內之已知cAMP濃度之參考標準品內插計算。參數諸如EC50 、Log(EC50 )、HillSlope(nH)、頂部(top)、及底部(bottom)係藉由將cAMP濃度值對對數化合物濃度作圖衍生而來，使用非線性加權最小平方法應用程式進行4-P模型擬合。
Figure 108114084-A0202-12-0094-123
Figure 108114084-A0202-12-0095-124
Figure 108114084-A0202-12-0095-125
Figure 108114084-A0202-12-0096-126
比較SEQ ID NO 135、134、146、及176與SEQ ID NO 238、242、262、253、及241的GLP-1R效力顯示具有毒蜥外泌肽4(1-39)(SEQ ID NO：58)之GLP-1融合肽在與PYY肽接合後失去GLP-1R效力。基於這些結果，在此實驗中使用具有毒蜥外泌肽4(1-39)(SEQ ID NO：58)的GLP-1融合肽係不利的。
人類NPY2R初級篩選檢定：用於體外篩選GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物之NPY2R效力之方法係基於細胞之檢定，其經設計以測量經由人類NPY2R Gi蛋白偶合受體的調節所抑制之毛喉素誘導之腺苷酸環化酶產生的cAMP。毛喉素誘導之cAMP於人類NPY2R轉染CHO-K1細胞(DiscoverX)中的產生係經由PYY類似物及 對照組以劑量依賴性方式活化NPY2R而減少，並在基於FRET之競爭性cAMP免疫檢定中測量。
將細胞自冷凍保存移出並在37℃水浴中解凍，添加至40mL的1xDPBS,pH7.2(Gibco)並過濾通過細胞過濾器。將細胞以450xg離心5分鐘且抽吸上清液。將細胞團塊以0.125×106 個細胞/mL之密度再懸浮於DMEM/高葡萄糖、10% HIFBS、1% Pen/Strep、1% L-麩醯胺酸、1%丙酮酸鈉中。將細胞以40μL/孔分配至經膠原蛋白塗佈之白色384孔盤至最終5000個細胞/孔，並在37℃、5% CO2 下培養16至24小時。將檢定盤中之細胞藉由添加80μL/孔1xDPBS洗滌兩次然後傾析上清液。樣本及對照組的稀釋液係製備於1x HBSS、5mM HEPES、0.002mM毛喉素、0.1% BSA、0.5mM 3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(IBMX)，且將20μL/孔的各樣本添加至指定孔中並在室溫下震盪培養30分鐘。接著將20μL/孔cAMP偵測試劑混合物添加至各檢定盤中，並在室溫下震盪培養2至24小時。在盤讀取儀上讀取盤。所有樣本皆以四重複測量。數據係藉由將原始LANCE cAMP值對對數化合物濃度作圖來分析，使用在R環境內之非線性加權最小平方應用程式進行4-P模型擬合。
人類GLP-1R初級篩選檢定：用於體外篩選GLP-1融合蛋白及GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物之GLP-1R效力之方法係基於細胞之檢定，其經設計以測量經由人類GLP-1R Gs蛋白偶合受體調節之cAMP的產生。在GLP-1融合肽及GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物以濃度依賴性活化GLP-1R之後，在基於TRFRET之競爭性cAMP檢定中測量人類GLP-1R轉染HEK細胞中的cAMP累積。
將人類GLP-1R轉染HEK細胞在檢定當天解凍並以0.5×106 個細胞/ml再懸浮於1X HBSS、5mM HEPES、0.1% BSA、及1mM IBMX中，並將10μl添加至384孔盤之各孔中(5000個細胞/孔)。將樣本稀釋於1X HBSS、5mM HEPES、0.1% BSA中，然後以10μL/孔添加至檢定盤並在室溫下培養30分鐘。將cAMP偵測試劑以 20μL/孔添加。將盤在室溫下培養2小時，接著在盤讀取儀上讀取。所有樣本皆以四重複測量。數據係藉由將原始LANCE cAMP值對對數化合物濃度作圖來分析，使用在R環境內之非線性加權最小平方應用程式進行4-P模型擬合。
實例5：GLP-1融合肽及GLP-1融合肽偶合環狀PYY接合物上之木糖分析
樣本製備：為了製備用於肽圖譜之樣本，各蛋白質分子(1mg/ml)：GLP-1融合肽偶合環狀PYY接合物(SEQ ID NO：244)、GF40(SEQ ID NO：152)、及GF34(SEQ ID NO：146)係經1：4稀釋於8M胍/HCl緩衝液pH 8.0中。在這些樣本中，加入1M DTT等分試樣(Sigma 43816-10ML,BioUltra)以達到最終濃度為25mM；樣本接著在37℃下培養1小時。烷化係使用碘乙醯胺(Sigma,A3221-10VL)或N -甲基順丁烯二醯亞胺(NEM)(Sigma,E3876)執行。添加新鮮製備之1M烷化劑至達到大約50mM，並將樣本在室溫下於黑暗中培養60分鐘。烷化反應接著藉由添加每400ul反應混合物15μl的1M DTT(Sigma 43816-10ML,BioUltra)來淬熄。使用Zeba Spin去鹽管柱(Thermo,cat.# 89833)，根據廠商規程於50mM Tris,1mM CaCl2 ,pH=8.0中將樣本去鹽。在添加1μl的重構於50mM乙酸中之1μg/μL胰蛋白酶(供應冷凍乾燥胰蛋白酶)之後，樣本在37℃下經胰蛋白酶(Promega定序等級，V511A)消化4小時。藉由將0.6μl的100% TFA添加至消化蛋白質的60μL等分試樣來淬熄胰蛋白酶消化。將樣本重懸於微型小瓶中且放入設定在4℃下的自動取樣器進行LC/MS分析。
液相層析法及質譜法：將2μg(約10μl)的消化蛋白質注射至Agilent AdvanceBio Peptide Map Micro Bore Rapid Resolution Column(1×150mm，2.7μm，產品編號：863600-911)，使用Agilent Infinity 1290 UHPLC(Agilent Technologies，產品編號：G1330B、G4226A、G4220A、G4212A)，流速為0.1mL/min。管柱溫度維持於65℃。質譜等級HPLC溶劑(0.1%甲酸及B：100% ACN 於0.1%甲酸中)係購自VWR(產品編號：LC 452-1、LC 441-1)。蛋白分解肽係使用2至40% ACN於0.1% FA中之50分鐘梯度自管柱洗提。將管柱流出物經由加熱電噴灑游離探針(HESI)導入Orbitrap Q-Exactive質譜儀(Thermofisher Scientific)中，使用3.5kV的正噴灑電壓、20(任意單位)的鞘流氣、7(任意單位)的輔助氣、299℃的離子轉移管及100℃的汽化器。數據依賴性獲取係藉由依序解離在全MS掃描中所觀察到之前5個含量最豐富的肽離子來執行。用設定為Orbitrap偵測、70,000解析能力、質量範圍150至2000m/z、自動增益控制(AGC)目標為1.0e6、最大注入時間50毫秒之前驅物掃描來執行質量分析。獲取1個輪廓模式的微掃描譜。前驅物決策標準係單同位素前驅物選擇肽，電荷態：2-7，動態排除：6.0秒及前驅物強度臨限為5e4。前驅物肽係藉由具有送至碰撞室之1.6m/z 之單離視窗的四極柱單離。將標準化碰撞能量28(任意單位)結果用於肽離子的高能量碰撞解離(HCD)。將產物離子轉移至orbitrap進行質量分析，orbitrap設定為17,500解析能力、200-2000m/z 範圍、AGC目標為5e5、最大注入時間100毫秒、獲取1個棒狀模式的微掃描譜。
數據分析：使用Byonic軟體(Ver.2.15.7)(Protein Metrics)進行原始LC-MS/MS數據的資料庫搜尋。使用下列參數進行數據搜尋：前驅物離子質量公差8ppm；產物離子質量公差20ppm(用於HCD譜)；可變修飾包括半胱胺酸的脲基甲基化、或N -甲基順丁烯二醯亞胺(NEM)、半胱胺酸DTT加成物形成、包括若存在的半胱胺酸肽YY(PYY)接合物、天冬醯胺酸的脫醯胺、絲胺酸木糖、及78種來自Byonic聚醣分子庫之哺乳動物O -連結聚醣的絲胺酸及蘇胺酸O -醣化。針對所有搜尋，選擇具有最大兩個遺漏斷裂的完整胰蛋白酶特異性搜尋。蛋白質偽發現率(FDR)設定為1%。蛋白質資料庫含有各蛋白質之胺基酸序列。所有Byonic搜尋結果係在Bylogic軟體中處理(Ver.2.15.296)(Protein Metrics)，將肽用最小Byonic分數15過濾，最大alt運行分數/主要等級分數為0.99，最大前驅物m/z誤差為8ppm及XIC面積窗為2分鐘。藉由考量構成連接子區域的異構體之所 有肽XIC峰面積來記述絲胺酸木糖化水準。然後計算各絲胺酸殘基之木糖化為總XIC峰面積的總和分率。資料庫搜尋亦使用在MaxQuant軟體版本1.6.1(MaxPlank Institute)中之Andromeda搜尋引擎執行，以獲得PTM位點定位機率。對應於完全環化PYY及經胰蛋白酶切割之PYY結構的質量係使用BIOVIA繪圖軟體獲得。數據係記述於表12。
Figure 108114084-A0202-12-0100-654
表12歸納在Bylogic中使用尖峰積分來識別及定量定點木糖化，其中基於尖峰/受關注尖峰(推定修飾，即絲胺酸木糖化)之%XIC係根據下列方程式經標準化至所有導致定點木糖化之物種的總和：修飾之%XIC=(經修飾肽之XIC/Σ肽對應體之XIC)×100探討的所有三種分子係由相同的第一連接肽AS(G4 S)2 連接GLP-1肽及鉸鏈-Fc區肽組成。然而，由於在SEQ ID NO：152(GF40)中發現的GLP-1融合肽與在SEQ ID NO：244及146(GF34)兩者中發現的GLP-1融合肽之差異，在SEQ ID NO：152中之三個絲胺酸殘基的位置與SEQ ID NO：244及146不同，如表12所示。肽分析顯示在SEQ ID NO：244及146中之Ser-41、Ser-46、Ser-51處的三個定點絲胺酸殘基木糖化事件，及在SEQ ID NO：152中之Ser-33處的絲胺酸殘基木糖 化事件。定點木糖化定量的可行性僅為有限，因為大部分經木糖化之肽物種在逆相液相層析期間被共洗提出。例如，在SEQ ID NO：244中，Ser-41係約9%，而Ser-46及Ser-51係約7%。同樣地，SEQ ID NO：146的所有三個位點係以約5%被木糖化。發現SEQ ID NO：152的木糖化發生程度較低約0.1%。
治療蛋白質之G4 S連接子區域已顯示容易受到木糖化作用，其木糖化水準基於連接子長度而異(Wen et al.,“The propensity for xylosylation in(G4 S)n linkers occurs when n>2,”Anal.Chem.85：4805-12(2013)；Sphar et al.,Protein Sci.22：1739-53(2013),Sphar et al.,mAbs 6：904-14(2014))。在所有三個分子中發現的第一連接肽(AS(G4 S)2 連接子)均顯示出在所有或一些絲胺酸殘基的木糖化，且基於這些數據，在此實驗中製備GLP-1融合肽建構體時使用含絲胺酸的第一連接肽係不利的。
實例6：GLP-1融合肽的離體人類血漿穩定性
在設定穩定性樣本當天接受來自4個正常人類供體的含有肝素鈉抗凝劑的新鮮全血。將新鮮全血藉由在3500RPM下離心15分鐘來處理血漿，然後將血漿單離。將來自所有四個供體的血漿合併，通過0.2μ過濾器過濾並溫熱至37℃。將20nM的GLP-1融合肽及GLP-1融合肽偶合環狀PYY接合物雙重促效劑(DA)類似物加入樣本，立即收集時間零樣本並儲存在-80℃下直到分析。將樣本在37℃下培養且在指定時點收集並儲存於-80℃下直到分析。在分析日，將時間零及後續時間點樣本解凍，並在基於功能性細胞之生物檢定中一起分析。
用於偵測及定量生物活性GLP-1融合肽及GLP-1融合肽偶合環狀PYY接合物DA類似物在人類血漿樣本中之水準的方法係基於細胞之生物檢定，其經設計以測量經由人類GLP-1R G蛋白偶合受體調節之cAMP的產生。在GLP-1融合肽及GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物以濃度依賴性活化GLP-1R之後，在基於TRFRET之競爭性cAMP檢定中測量人類GLP-1R轉染HEK細胞中的cAMP累積。將人類GLP-1R轉染HEK細胞在檢定當天解凍並以0.5×106 個細胞/ml再懸浮於1X HBSS、5mM HEPES、0.1% BSA、及1mM IBMX中，並將10μl添加至384孔盤之各孔中(5000個細胞/孔)。將穩定性樣本解凍並稀釋至包含1X HBSS、5mM HEPES、0.1% BSA、5mM EDTA、蛋白酶抑制劑的檢定緩衝液中成為20%血漿，及隨後稀釋液使用具有20%正常人類血漿的檢定緩衝液製成。各化合物之已知濃度的參考標準係使用具有20%正常人類血漿的檢定緩衝液製備。將標準及樣本以10μL/孔添加至各檢定盤中並在室溫下培養30分鐘。將cAMP偵測試劑以20μL/孔添加。將盤在室溫下培養2小時，接著在盤讀取儀上讀取。
所有樣本皆以四重複測量。化合物參考標準曲線(對數對反應(可變斜率))係將濃度轉變為對數、非線性擬合產生，且判定EC10 及EC90 值作為定量檢定上限及下限。從對應的參考標準曲線外推每個化合物之穩定性樣本的濃度。各穩定性樣本之剩餘生物活性百分比係相對於對應的時間零樣本判定，並在168小時的時程內記述為起始血漿濃度%。起始血漿濃度%=[平均穩定性樣本]/[平均時間零]×100。
結果：將GLP-1融合肽SEQ ID NO：144(GF32)、148(GF36)、145(GF33)、151(GF39)、146(GF34)、147(GF35)、149(GF37)、152(GF40)、及度拉魯肽對照在離體人類血漿中在37℃下培養7天，並在體外GLP-1R cAMP功能性檢定中測量功能穩定性(圖1A)。具有GLP-1肽SEQ ID NO：58(毒蜥外泌肽4(1-39))的GLP-1融合蛋白顯示最大穩定性，接著是SEQ ID NO：57((A8G,G22E,R36G)GLP-1(7-37))及度拉魯肽對照，且SEQ ID NO：56((A8S,A30E)GLP-1(7-36))最不穩定。基於這些結果，在此實驗中使用具有GLP-1肽SEQ ID NO：56的Fc融合肽係不利的。
將GLP-1融合肽SEQ ID NO：152(GF40)及146(GF34)、及彼等對應之GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物SEQ ID NO：248及262、及另一個GLP-1融合肽SEQ ID NO：153(GF41)連同度拉魯肽對照在離體人類血漿中在37℃下培養7天。功能穩定性係在 體外GLP-1R cAMP功能性檢定中測量(圖1B)。GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物的穩定性與對應之未接合融合蛋白相當，證明PYY肽之接合不影響GLP-1肽穩定性。GLP-1融合肽SEQ ID NO：146(GF34)及GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物SEQ ID NO：262具有最大穩定性，且SEQ ID NO：152(GF40)、248、及153(GF41)具有與度拉魯肽對照相似的穩定性。
實例7：體內小鼠穩定性檢定
方法
LCMS方法：將血漿樣本使用抗人類Fc抗體進行免疫親和性捕捉處理，隨後進行胰蛋白酶消化，並在三重四極質譜儀上以逆相LC-MS/MS分析進行分析。監測GLP-1之N端上之肽，即HGE(GLPD30的HGEGTFTSDVSSYLEEQAAK(SEQ ID NO：263)及GLPD31的HGEGTFTSDLSK(SEQ ID NO：264))作為含有活性GLP1之分子的代理物。監測位於Fc上之肽，即VVS(VVSVLTVLHQDWLNGK(SEQ ID NO：265))作為總Fc水準之代理物。監測位於環狀PYY肽上之肽，即YYA(YYASLR(SEQ ID NO：266))作為PYY水準之代理物。藉由將參考標準加入血漿中並與測試樣本在相同時間使用相同程序處理，以製備校正標準曲線及品質管制樣本。
結果
完整GLP-1融合肽部分N端在投予小鼠72小時後的血漿暴露水準係在LCMS檢定中測量，並記述為相對於Fc水準的HGE N端GLP-1融合肽部分序列水準的百分比(相對Fc的HGE%)。表13之結果證明SEQ ID NO：62及66之第一連接肽(其包含AP重複)比起SEQ ID NO：60之第一連接肽(其包含G4 A重複)較不穩定。基於這些結果，在此實驗中使用具有包含AP重複之第一連接肽的GLP-1融合肽係不利的。
Figure 108114084-A0202-12-0104-655
DIO小鼠之急性及亞慢性藥效動力學研究
在這些研究中使用的所有齧齒動物根據由Janssen R&D,Spring House,PA的Institutional Animal Care & Use Committee(IACUC)所批准之規程維持。將動物籠飼在12小時開燈/12小時黑暗循環及標準溫度及濕度條件下，且可任意採食食物及水(除非另有註明)。使用個別籠飼的二十週齡雄性DIO(給予60% kcal%高脂肪飲食持續15週)C57BL/6T小鼠(Taconic Laboratory)。將動物根據體重隨機分組。在腹膜內(IP)葡萄糖耐受性試驗(IPGTT)中，給予小鼠媒劑、度拉魯肽(Eli Lilly；購自Myoderm,Norristown,PA)、或化合物1至4(分別為SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：225、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：229)(n=8/組)。二十四小時後(在整夜禁食之後)，IP給予小鼠右旋糖(1g/kg)。在指定時間使用One Touch Ultra血糖計(LifeScan)測量血糖，並且在0及10分鐘測量血漿 胰島素(Meso Scale Discovery)。在急性攝食(FI)及體重減輕(WL)研究中，個別籠飼的DIO小鼠以媒劑、度拉魯肽、或化合物給藥，且測量食物及體重3天(n=8/組)。數據係顯示於圖2A至圖2B、圖3A至圖3B、及圖4A至圖4B。圖2A至圖2B、圖3A至圖3B、及圖4A至圖4B的數據證明，GLP-1融合肽具有所欲的GLP-1R療效，且當與環狀PYY肽SEQ ID NO：27接合時，具有增強的療效。從圖5A至圖5B及圖6A至圖6B的數據，判定GLP-1融合肽的上鉸鏈導致GLP-1R效力。
實例8：石蟹獼猴的體內研究
方法
療效研究
基於在導入期及媒劑治療期間所測量的猴基線(第0天之前3天的平均)攝食(主要-加權80%)及體重(次要-加權20%)，將猴選擇並隨機分配至化合物治療組。研究持續9週，包括2週的馴化/訓練、3週的媒劑治療每3天一次(Q3D)及基線攝食測量、12天的治療(5種劑量，Q3D)及2週的停藥期。動物在大約8 AM(Q3D)以媒劑給藥7次及以一種測試品(以0.5mL/kg給藥體積)給藥5次。各組的劑量如下：度拉魯肽(0.0125mg/kg,n=11)、化合物4(高劑量；0.0148mg/kg，n=11)、化合物4(低劑量；0.0074mg/kg，n=6)。每日測量卡路里攝入量，並測量體重(Q3D)。
暴露-反應分析
使用兩種分析方法來測量化合物4及度拉魯肽在石蟹獼猴體內血漿樣本中的濃度。
藉由使用Meso Scale Discovery(MSD)Sector Imager S600(Meso Scale Diagnostics,Rockville,MD USA)的切合目的電化學發光免疫檢定(ECLIA)方法，執行化合物4及度拉魯肽在石蟹獼猴中的配體結合檢定(LBA)暴露分析。測量化合物4及度拉魯肽兩者之活性GLP-1的格式係描述如下：該分析物係以GLP-1 N端(7-17)特異性mAb(生物素-抗GLP1(7-37、7-36、醯胺、游離NT)mAb)捕捉 並用抗人類Fc特異性mAb(SulfoTag-R10)偵測。在使用5參數對數擬合1/F2標準曲線加權的Watson LIMSTM 軟體(Thermo Fischer Scientific,Waltham,MA USA)中執行原始資料回歸。
化合物4及度拉魯肽在石蟹獼猴中的LC-MS/MS分析亦可藉由由下而上的胰蛋白酶檢定定量分子的個別部分進行。在胰蛋白酶檢定中，分析物藉由使用抗人類Fc抗體進行免疫親和性捕捉而自血漿樣本純化，接著進行胰蛋白酶消化並在SCIEX Triple QuadTM 5500 LC-MS/MS系統(CIEX,Concord,Ontario,Canada)上進行逆相LC-MS/MS分析。使用穩定同位素[13C6,15N4-精胺酸]及[13C6,15N2-離胺酸]標記之人類IgG4(Sigma，目錄編號MSQC7)作為內部標準，並在免疫親和性捕捉步驟開始時添加。監測GLP-1之N端上之肽，即HGE(HGEGTFTSDVSSYLEEQAAK)(SEQ ID NO：263)作為含有活性GLP-1之分子的代理物，因為HGE肽對其活性係必要的。
結果
根據本申請案之實施例之雙重促效劑含有共價連結至環狀PYY肽的GLP-1融合(GF)肽。雙重促效劑包含重組類升糖素肽-1(GLP-1)肽或GLP-1變體肽經由第一連接肽(N端連接肽)融合至鉸鏈-Fc區及經化學接合至包含在重組GLP-1融合(GF)肽的第二連接肽(C端連接肽)內的目標半胱胺酸之環狀PYY肽。雙重促效劑的各組分係基於數個關鍵參數憑經驗選擇，該等參數包括但不限於對各受體之效力、穩定性、轉譯後修飾、接合生產產率、及生物物理特性。
GLP-1肽變體SEQ ID NO：57係選擇為GLP-1肽變體。GLP-1肽-1變體SEQ ID NO：56在體內較不具效力，且在離體人類血漿穩定性研究中較不穩定(圖1A)，因此在此實驗中係不利的。當GLP-1肽變體SEQ ID NO：58與環狀PYY肽接合時意外地失去GLP-1R效力(表11)，見例如SEQ ID NO：135、134、146、及176與SEQ ID NO 238、242、262、253、及241的GLP-1R效力顯示具有毒蜥外泌肽4(1-39)(SEQ ID NO：58)之GLP-1融合肽在與一些PYY肽接合後失去或顯著減少GLP-1R效力。基於這些結果，在此實驗中 使用具有毒蜥外泌肽4(1-39)(SEQ ID NO：58)的GLP-1融合肽係不利的。GLP-1肽變體SEQ ID NO：58額外含有NG脫醯胺易感模體。當甘胺酸是第一連接肽中的第一個胺基酸時，SEQ ID NO：59在GLP-1肽/第一連接肽界面處形成NG脫醯胺易感模體。此外，含有GLP-1肽SEQ ID NO：59之GF28(SEQ ID NO：140)比起度拉魯肽對攝食(FI)及體重(BW)變化%兩者皆較不具效力(分別為圖10A及圖10B)。
SEQ ID NO：60係選擇為第一連接肽(N端連接肽)。含有第一肽連接子SEQ ID NO：61的GLP-1融合蛋白具有低表現及純化產率，且在此用於製造所欲量的GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物之實驗中係不利的。當第二末端肽係G4 A重複時，含有AP重複的第一連接肽具有不良的產率(參見例如實例2及表8)且相較於SEQ ID NO：60在體內較不穩定(參見例如表13)。基於這些結果，在此實驗中使用AP重複連接子係不利的。較短的連接子導致效力減少(參見例如在圖5中之SEQ ID NO：152、在圖10A至圖10B中之SEQ ID NO：140，其比較包含相同GLP-1肽(SEQ ID NO：58)但具有不同長度的第一連接肽之GLP-1融合肽的效力)。因此，基於這些結果，在此實驗中使用較短連接子係不利的。基於絲胺酸殘基易被木糖化之傾向，在此實驗中使用含有絲胺酸之連接子係不利的(參見例如表12)。
GLP-1融合肽GF19(SEQ ID NO：131)(其含有GLP-1變體肽SEQ ID NO：57、第一連接肽SEQ ID NO：60、及鉸鏈-Fc區肽SEQ ID NO：84)顯示出對於攝食(FI)及體重(BW)變化%的效力上與度拉魯肽可相比(分別參見例如圖6A及圖6B)。
GLP-1融合肽GF1(SEQ ID NO：113，化合物1)、GF19(SEQ ID NO：131)及GF24(SEQ ID NO：136，化合物3)皆顯示對於攝食及體重變化%與度拉魯肽可相比之療效(分別參見例如圖2A至圖2B、圖6A至圖6B及圖3A至圖3B)。GF1(SEQ ID NO：113，化合物1)及GF24(SEQ ID NO：136，化合物3)亦顯示對於葡萄糖耐受性與度拉魯肽可相比之療效(圖4A至圖4B及圖7A至圖7B)。
然而，當GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物(SEQ ID NO：251)係藉由將環狀PYY肽(SEQ ID NO：27)接合至GF19(SEQ ID NO：131)的第二連接肽(SEQ ID NO：92)來製造時，對於攝食或體重變化%相較於度拉魯肽並無額外藥理學作用(分別見圖11A及圖11B)。在此實驗中測試額外的第二連接肽但結果係不利的，其原因至少如下：(a)當第一連接肽係AP重複時，SEQ ID NO：95具有低生產產率；(b)SEQ ID NO：100在重組表現期間被截短；(c)不具第二連接肽之鉸鏈Fc區肽(其在鉸鏈Fc區肽之C端處包含用於PYY肽接合之目標半胱胺酸)在蛋白質表現期間被截短，指示需要第二連接肽以產生適於PYY肽接合之完整蛋白質；(d)含有絲胺酸之第二連接肽具有被木糖化之潛力；及(e)較短的第二連接肽之接合較不具效率且純度較低。
雖然具有第二連接肽SEQ ID NO：94之GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物SEQ ID NO：225(化合物2)顯示對於FI及BW變化%相較於度拉魯肽顯著較高效力(分別參見例如圖2A及圖2B)，其高濃度液體配方意外地在4℃下2週儲存期間具有顯著的蛋白質損失。可相比的具有第二連接肽SEQ ID NO：93之GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物SEQ ID NO：229的高濃度液體配方在4℃及40℃下二週儲存期間穩定且維持蛋白質水準(表14)。第二連接肽係這兩個分子之間的唯一差異，因此在此實驗中選擇SEQ ID NO：93作為第二連接肽。
Figure 108114084-A0202-12-0108-130
針對環狀PYY肽功能活性需要數種修飾，以賦予具有延長半衰期之試劑所需的體內穩定性，並使能夠鍵結至GLP-1融合肽同時保留效力。採用合成肽化學製造併入這些修飾的環狀PYY肽，且 將環狀PYY肽化學接合至GLP-1融合肽以產生GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物。
選擇接合至GLP-1融合肽的環狀PYY肽，以探索及比較針對PYY肽效力及穩定性之修飾。PYY肽係經環化以穩定肽主鏈上的多個蛋白分解位點。
選擇接合至GLP-1融合肽的環狀PYY肽，以探索環狀PYY肽之N至C端鍵結的間距及大小，及對效力及穩定性的效應。這些環狀PYY肽之環中的碳數目含有變化，並且用於選擇性連結N端至C端之半胱胺酸及升半胱胺酸之位置不同。參見例如
a)βA2連結至hCys31 SEQ ID NO：25
b)βA2連結至Cys30 SEQ ID NO：28及29
c)G2連結至Cys30 SEQ ID NO：27及30
d)γAba2連結至hCys31 SEQ ID NO：34
比較位置35處經取代的N-Me精胺酸(N-MeR35)(SEQ ID NO：27、28、33、及34)及位置35與36之間經還原的醯胺鍵(psi35,36)(SEQ ID NO：24、25、29、及30)穩定環狀PYY肽位置36處之醯胺化C端酪胺酸及保留效力的能力(見例如美國專利公開號2018/0117170，其全文以引用方式併入本文中)。在某些情況下，N-Me35修飾相較於psi35,36修飾導致減少的效力(參見例如美國專利公開號2018/0117170)，表3，其顯示具有psi35,36修飾之SEQ ID NO：102對於人類Y2受體的效力大約是具有N-Me35修飾之SEQ ID NO：122的12倍)。
未預測的，在含有環狀PYY肽SEQ ID 27之GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物SEQ ID 229中的N-MeR35修飾之效力等於或大於含有環狀PYY肽SEQ ID NO：30之SEQ ID NO：232中的psi35,36修飾(表11)。
根據效力及穩定性連同該等組分之組合導致降低商品成本且易於購買試劑的判定，在此實驗中選擇環狀PYY肽SEQ ID NO：27作為PYY肽。N端上的天然胺基酸甘胺酸連結至靠近C端之位 置30處之半胱胺酸具有與經測試之任何環狀PYY肽在與GLP-1融合肽接合時，該環狀PYY肽所達成最高水準的效力及穩定性可相比的效力及穩定性。選擇位置30處之半胱胺酸而非位置31處之升半胱胺酸，因為環狀PYY肽SEQ ID NO：27具有足夠的效力及穩定性。因此，在此實驗中並不需要較為昂貴且較不易取得的非天然胺基酸。用於穩定位置36處C端醯胺化酪胺酸之N-MeR35，比起昂貴的psi35,36修飾，是較不昂貴且更容易取得的試劑。這消除對於客製化組分的需求並提供相同的穩定性及效力。
此外，判定效力不需要PEG間隔子，且體內PYY穩定性亦意外地不需要PEG間隔子。此係非預期的，因為判定具有PEG間隔子之mAb-環狀PYY肽接合物具有增加的體內穩定性(參見例如美國專利公開號2018/0117170，表4，其顯示投予後48小時收集自小鼠之血液樣本中，剩餘完整化合物相對於總人類mAb水準的量之百分比。含有12xPEG間隔子之化合物1在48小時剩餘90.8%；含有6xPEG間隔子之化合物2在48小時剩餘65.6%；及不含PEG間隔子之化合物3在48小時僅剩餘51%)。此結果消除對於會增加商品製造成本之PEG組分的需求。
SEQ ID NO：229(其含有GLP-1融合肽SEQ ID NO：136且添加二個穩定的環狀PYY肽SEQ ID NO：27)係選擇為在此實驗中的GLP-1融合肽偶合環狀PYY肽接合物。SEQ ID NO：229相對於SEQ ID NO：136(僅GLP1R結合)展現來自Y2R結合對於FI及BW的額外藥效動力學療效(圖3A至圖3B)，然而對於葡萄糖耐受性展現與度拉魯肽及SEQ ID NO：136可相比之GLP1R效力(圖4A至圖4B及圖7A至圖7B)。
在DIO小鼠中比較度拉魯肽及SEQ ID NO：229(化合物4)對於FI及BW的效應。基於可用研究之積分式暴露-反應非線性回歸分析(6個化合物4的研究及7個度拉魯肽的研究；劑量0.03-1.0nmol/kg)，在導致第3天臨床重要的活性GLP-1(HGE)暴露的劑量下(0.3nmol/kg的單一皮下劑量)，化合物4相對於度拉魯肽顯示 額外藥理學作用，該作用經由接合物之環狀PYY肽的Y2R結合，在匹配的活性GLP1(HGE)暴露下減少FI及BW(圖8A至圖8B)。在度拉魯肽0.3nmol/kg(單一SC劑量)的匹配HGE濃度下，基於化合物4(SEQ ID NO：229)之暴露-反應非線性回歸，所計算的FI及BW變化%分別係高於度拉魯肽約2.1及1.5倍。
在過重石蟹獼猴中，基於個別PK及卡路里攝入量之暴露-反應分析(圖9A至圖9B)顯示在臨床重要的度拉魯肽暴露下(在QW SC給藥1.5mg於T2DM病患後在穩定狀態下C最低 及C最高 為1至2nM[Geiser et al.,Clin Pharmacokinet 55(5)：(2016)])，化合物4在匹配的活性GLP-1暴露下相較於度拉魯肽導致約1.7至2倍(95%信賴區間：1.3至3.3，PK基於配體結合檢定[LBA]，圖9A)、或約1.5至1.6倍(95%信賴區間：1.0至2.8，PK基於LC-MS/MS HE，圖9B)的較大的卡路里攝入量百分比減少，顯示來自化合物4之環狀PYY肽的額外藥理學作用。
所屬技術領域中具有通常知識者將領會的是，能夠對以上所述的實施例進行變更而不違背其廣義的發明概念。因此，應了解本發明並未受限於揭示之具體實施例，而是意欲涵蓋如本實施方式所定義之屬於本發明之精神及範疇內的修改。
本文中所引用之全部文件均以引用方式併入本文中。
本發明之例示性GLP-1融合環狀PYY肽接合物包括：
SEQ ID NO：225
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0112-131
SEQ ID NO：226
名稱：GLP-1融合-[環-(βA2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0112-132
SEQ ID NO：227
名稱：GLP-1融合-[環-(βA2-COCH2 -C30),K(Ac)11,psi -(R35,Y36)]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0113-133
SEQ ID NO：228
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-COCH2 -C30),K(Ac)11,psi -(R35,Y36)]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0113-134
SEQ ID NO：229
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0114-135
SEQ ID NO：230
名稱：GLP-1融合-[環-(βA2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0114-136
SEQ ID NO：231
名稱：GLP-1融合-[環-(βA2-COCH2 -C30),K(Ac)11,psi -(R35,Y36)]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0115-137
SEQ ID NO：232
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-COCH2 -C30),K(Ac)11,psi -(R35,Y36)]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0115-138
SEQ ID NO：233
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0116-139
SEQ ID NO：234
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0116-140
SEQ ID NO：235
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0117-141
SEQ ID NO：236
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0117-142
SEQ ID NO：237
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0118-143
SEQ ID NO：238
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0118-144
SEQ ID NO：239
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0119-145
SEQ ID NO：240
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0119-146
SEQ ID NO：241
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0120-147
SEQ ID NO：242
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0120-148
SEQ ID NO：243
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0121-149
SEQ ID NO：244
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-COCH2 -hC31),K(PEG24Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0121-150
SEQ ID NO：245
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0122-151
SEQ ID NO：246
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0122-152
SEQ ID NO：247
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0123-153
SEQ ID NO：248
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0123-154
SEQ ID NO：249
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-E30),S4,K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0124-155
SEQ ID NO：250
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-E30),S4,K(Ac)11,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0124-156
SEQ ID NO：251
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0125-157
SEQ ID NO：252
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0125-158
SEQ ID NO：253
名稱：GLP-1融合-[環-(gAba2-COCH2 -hC30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0126-159
SEQ ID NO：254
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0126-160
SEQ ID NO：255
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0127-161
SEQ ID NO：256
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0127-162
SEQ ID NO：257
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0128-163
SEQ ID NO：258
名稱：GLP-1融合-[環-(βA2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0128-164
SEQ ID NO：259
名稱：GLP-1融合-[環-(βA2-COCH2 -C30),K(Ac)11,psi-(R35,Y36)]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0129-165
SEQ ID NO：260
名稱：GLP-1融合-[環-(βA2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0129-166
SEQ ID NO：261
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36單體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0130-167
SEQ ID NO：262
名稱：GLP-1融合-[環-(G2-COCH2 -C30),K(Ac)11,N-Me-R35]-PYY2-36同型二聚體接合物
結構：
Figure 108114084-A0202-12-0130-168
<110> 比利時商健生藥品公司(Janssen Pharmaceutica N.V.)
<120> 類升糖素肽1(GLP-1)融合肽偶合環狀酪酪肽接合物及其用途
<130> PRD3465
<150> PCT/US2018/029284
<151> 2018-04-25
<150> US 62/662,313
<151> 2018-04-25
<160> 274
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> Ala，其中Ala係具有環狀修飾之β-丙胺酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有PEG12-AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中Cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 1
Figure 108114084-A0305-02-0133-33
Figure 108114084-A0305-02-0134-34
<210> 2
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Ile
<220>
<221> Lys
<222> (9)..(9)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Leu
<222> (29)..(29)
<223> Leu，其中Leu係具有環狀修飾之正白胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 2
Figure 108114084-A0305-02-0134-35
<210> 3
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Ile
<220>
<221> Lys
<222> (9)..(9)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Leu
<222> (29)..(29)
<223> Leu，其中leu係具有環狀修飾之正白胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 3
Figure 108114084-A0305-02-0135-36
<210> 4
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Glu
<222> (30)..(30)
<223> 具有環狀修飾之Glu
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 4
Figure 108114084-A0305-02-0136-37
<210> 5
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> Ala，其中丙胺酸係具有環狀修飾之β-丙胺酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有PEG6-AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 5
Figure 108114084-A0305-02-0136-38
Figure 108114084-A0305-02-0137-39
<210> 6
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> Ala，其中丙胺酸係具有環狀修飾之β-丙胺酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 6
Figure 108114084-A0305-02-0137-40
<210> 7
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Ile
<220>
<221> Lys
<222> (9)..(9)
<223> 具有PEG12-AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 7
Figure 108114084-A0305-02-0138-41
<210> 8
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> Ala，其中丙胺酸係具有環狀修飾之β-丙胺酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有PEG12-AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Gln
<222> (33)..(33)
<223> 具有N-Me化學修飾之Gln
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 8
Figure 108114084-A0305-02-0139-42
<210> 9
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> Ala，其中丙胺酸係具有環狀修飾之β-丙胺酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有PEG12-AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me及psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 9
Figure 108114084-A0305-02-0140-43
<210> 10
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> Ala，其中丙胺酸係具有環狀修飾之β-丙胺酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有PEG12-AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 10
Figure 108114084-A0305-02-0140-45
<210> 11
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Ile
<220>
<221> Lys
<222> (9)..(9)
<223> 具有PEG12-AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 11
Figure 108114084-A0305-02-0141-46
<210> 12
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Lys
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Lys
<220>
<221> Lys
<222> (8)..(8)
<223> 具有PEG12-AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (28)..(28)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (32)..(32)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (33)..(33)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 12
Figure 108114084-A0305-02-0142-47
<210> 13
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Ile
<220>
<221> Lys
<222> (9)..(9)
<223> 具有PEG12-AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Leu
<222> (29)..(29)
<223> Leu，其中leu係具有環狀修飾之正白胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 13
Figure 108114084-A0305-02-0143-48
<210> 14
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Ile
<220>
<221> Lys
<222> (9)..(9)
<223> 具有PEG-8-三唑基-CH2CH2CO-PEG4-AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (34)..(34)
<223> 具有(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 14
Figure 108114084-A0305-02-0143-49
Figure 108114084-A0305-02-0144-50
<210> 15
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> Ala，其中丙胺酸係具有環狀修飾之β-丙胺酸
<220>
<221> Lys
<222> (22)..(22)
<223> 具有PEG12-AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 15
Figure 108114084-A0305-02-0144-51
<210> 16
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> Ala，其中丙胺酸係具有環狀修飾之β-丙胺酸
<220>
<221> Lys
<222> (21)..(21)
<223> 具有PEG12-AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 16
Figure 108114084-A0305-02-0145-52
<210> 17
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> Ala，其中丙胺酸係具有環狀修飾之β-丙胺酸
<220>
<221> Lys
<222> (6)..(6)
<223> 具有PEG12-AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 17
Figure 108114084-A0305-02-0146-54
<210> 18
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 18
Figure 108114084-A0305-02-0147-55
<210> 19
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有PEG12-AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 19
Figure 108114084-A0305-02-0147-56
<210> 20
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> Ala，其中丙胺酸係具有環狀修飾之β-丙胺酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有PEG12-AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 20
Figure 108114084-A0305-02-0148-57
<210> 21
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有PEG12-AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 21
Figure 108114084-A0305-02-0149-58
<210> 22
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> Ala，其中丙胺酸係具有環狀修飾之β-丙胺酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有PEG12-AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 22
Figure 108114084-A0305-02-0149-59
<210> 23
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有PEG12-AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 23
Figure 108114084-A0305-02-0150-60
<210> 24
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Glu
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Glu
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 24
Figure 108114084-A0305-02-0151-61
<210> 25
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> Ala，其中丙胺酸係具有環狀修飾之β-丙胺酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有PEG24-AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 25
Figure 108114084-A0305-02-0152-62
<210> 26
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 26
Figure 108114084-A0305-02-0152-63
Figure 108114084-A0305-02-0153-64
<210> 27
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 27
Figure 108114084-A0305-02-0153-65
<210> 28
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> Ala，其中丙胺酸係具有環狀修飾之β-丙胺酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 28
Figure 108114084-A0305-02-0154-66
<210> 29
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> Ala，其中丙胺酸係具有環狀修飾之β-丙胺酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 29
Figure 108114084-A0305-02-0155-67
<210> 30
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 30
Figure 108114084-A0305-02-0155-68
<210> 31
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> Ala，其中丙胺酸係具有環狀修飾之β-丙胺酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 31
Figure 108114084-A0305-02-0156-69
<210> 32
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> Ala，其中丙胺酸係具有環狀修飾之β-丙胺酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 32
Figure 108114084-A0305-02-0157-70
<210> 33
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Glu
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Glu
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 33
Figure 108114084-A0305-02-0158-71
<210> 34
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Xaa
<222> (1)..(1)
<223> Xaa係具有環狀修飾之γ胺基-丁酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中Cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 34
Figure 108114084-A0305-02-0158-72
<210> 35
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Ile
<220>
<221> Lys
<222> (9)..(9)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (28)..(28)
<223> Cys，其中cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 35
Figure 108114084-A0305-02-0159-73
<210> 36
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Ile
<220>
<221> Lys
<222> (9)..(9)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (28)..(28)
<223> Cys，其中cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 36
Figure 108114084-A0305-02-0160-74
<210> 37
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Ile
<220>
<221> Lys
<222> (9)..(9)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (28)..(28)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 37
Figure 108114084-A0305-02-0160-75
<210> 38
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Ile
<220>
<221> Lys
<222> (9)..(9)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (28)..(28)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 38
Figure 108114084-A0305-02-0161-76
<210> 39
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ile
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Ile
<220>
<221> Lys
<222> (9)..(9)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (28)..(28)
<223> Cys，其中cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (33)..(33)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 39
Figure 108114084-A0305-02-0162-77
<210> 40
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 40
Figure 108114084-A0305-02-0163-78
<210> 41
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 41
Figure 108114084-A0305-02-0163-79
Figure 108114084-A0305-02-0164-80
<210> 42
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Xaa
<222> (1)..(1)
<223> Xaa係具有環狀修飾之γ胺基丁酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 42
Figure 108114084-A0305-02-0164-81
<210> 43
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Xaa
<222> (1)..(1)
<223> Xaa係具有環狀修飾之γ胺基丁酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 43
Figure 108114084-A0305-02-0165-82
<210> 44
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Xaa
<222> (1)..(1)
<223> Xaa係具有環狀修飾之γ胺基丁酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 44
Figure 108114084-A0305-02-0166-83
<210> 45
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Xaa
<222> (1)..(1)
<223> Xaa係具有環狀修飾之γ胺基丁酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> Lys係AcBr化學修飾
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 45
Figure 108114084-A0305-02-0166-84
<210> 46
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Xaa
<222> (1)..(1)
<223> Xaa係具有環狀修飾之γ胺基丁酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 46
Figure 108114084-A0305-02-0167-85
<210> 47
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Xaa
<222> (1)..(1)
<223> Xaa係具有環狀修飾之γ胺基丁酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 47
Figure 108114084-A0305-02-0168-86
<210> 48
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Xaa
<222> (1)..(1)
<223> Xaa係具有環狀修飾之δ-胺基戊酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 48
Figure 108114084-A0305-02-0168-87
Figure 108114084-A0305-02-0169-88
<210> 49
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Xaa
<222> (1)..(1)
<223> Xaa係具有環狀修飾之δ-胺基戊酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 49
Figure 108114084-A0305-02-0169-89
<210> 50
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Xaa
<222> (1)..(1)
<223> Xaa係具有環狀修飾之δ-胺基戊酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 50
Figure 108114084-A0305-02-0170-90
<210> 51
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Xaa
<222> (1)..(1)
<223> Xaa係具有環狀修飾之δ-胺基戊酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 51
Figure 108114084-A0305-02-0171-91
<210> 52
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> Ala，其中Ala係具有環狀修飾之β-丙胺酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 52
Figure 108114084-A0305-02-0171-92
Figure 108114084-A0305-02-0172-93
<210> 53
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> Ala，其中Ala係具有環狀修飾之β-丙胺酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 53
Figure 108114084-A0305-02-0172-94
<210> 54
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 環狀PYY肽化合物
<220>
<221> Xaa
<222> (1)..(1)
<223> Xaa係具有環狀修飾之γ胺基丁酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有AcBr化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 54
Figure 108114084-A0305-02-0173-95
<210> 55
<211> 34
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 55
Figure 108114084-A0305-02-0173-96
<210> 56
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1(7-36)
<400> 56
Figure 108114084-A0305-02-0174-97
<210> 57
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1(7-37)
<400> 57
Figure 108114084-A0305-02-0174-98
<210> 58
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 毒蜥外泌肽4(1-39)
<400> 58
Figure 108114084-A0305-02-0174-99
<210> 59
<211> 28
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 毒蜥外泌肽4(1-28)
<400> 59
Figure 108114084-A0305-02-0175-100
<210> 60
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子1-1
<400> 60
Figure 108114084-A0305-02-0175-101
<210> 61
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子1-2
<400> 61
Figure 108114084-A0305-02-0175-102
<210> 62
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子1-3
<400> 62
Figure 108114084-A0305-02-0175-103
<210> 63
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子1-4
<400> 63
Figure 108114084-A0305-02-0176-104
<210> 64
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子1-5
<400> 64
Figure 108114084-A0305-02-0176-105
<210> 65
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子1-6
<400> 65
Figure 108114084-A0305-02-0176-106
<210> 66
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子1-7
<400> 66
Figure 108114084-A0305-02-0176-107
<210> 67
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子1-8
<400> 67
Figure 108114084-A0305-02-0177-108
<210> 68
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子1-9
<400> 68
Figure 108114084-A0305-02-0177-109
<210> 69
<211> 42
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子1-10
<400> 69
Figure 108114084-A0305-02-0177-110
<210> 70
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子1-11
<400> 70
Figure 108114084-A0305-02-0177-111
Figure 108114084-A0305-02-0178-112
<210> 71
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子1-12
<400> 71
Figure 108114084-A0305-02-0178-113
<210> 72
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子1-13
<400> 72
Figure 108114084-A0305-02-0178-114
<210> 73
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子1-14
<400> 73
Figure 108114084-A0305-02-0178-115
<210> 74
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子1-15
<400> 74
Figure 108114084-A0305-02-0179-116
<210> 75
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子1-16
<400> 75
Figure 108114084-A0305-02-0179-117
<210> 76
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子1-17
<400> 76
Figure 108114084-A0305-02-0179-118
<210> 77
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子1-18
<400> 77
Figure 108114084-A0305-02-0179-119
<210> 78
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子1-19
<400> 78
Figure 108114084-A0305-02-0180-120
<210> 79
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子1-20
<400> 79
Figure 108114084-A0305-02-0180-121
<210> 80
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子1-21
<400> 80
Figure 108114084-A0305-02-0180-122
<210> 81
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子1-22
<400> 81
Figure 108114084-A0305-02-0180-123
<210> 82
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子1-23
<400> 82
Figure 108114084-A0305-02-0181-124
<210> 83
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子1-24
<400> 83
Figure 108114084-A0305-02-0181-125
<210> 84
<211> 228
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鉸鏈-Fc區肽1
<400> 84
Figure 108114084-A0305-02-0181-126
Figure 108114084-A0305-02-0182-127
<210> 85
<211> 224
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鉸鏈-Fc區肽2
<400> 85
Figure 108114084-A0305-02-0182-128
Figure 108114084-A0305-02-0183-129
<210> 86
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鉸鏈-Fc區肽3
<400> 86
Figure 108114084-A0305-02-0183-130
Figure 108114084-A0305-02-0184-131
<210> 87
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鉸鏈-Fc區肽4
<400> 87
Figure 108114084-A0305-02-0184-132
Figure 108114084-A0305-02-0185-133
<210> 88
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鉸鏈-Fc區肽5
<400> 88
Figure 108114084-A0305-02-0186-134
<210> 89
<211> 229
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鉸鏈-Fc區肽6
<400> 89
Figure 108114084-A0305-02-0187-135
Figure 108114084-A0305-02-0188-136
<210> 90
<211> 228
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鉸鏈-Fc區肽7
<400> 90
Figure 108114084-A0305-02-0188-137
Figure 108114084-A0305-02-0189-138
<210> 91
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子2-1
<400> 91
Figure 108114084-A0305-02-0189-139
<210> 92
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子2-2
<400> 92
Figure 108114084-A0305-02-0189-140
<210> 93
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子2-3
<400> 93
Figure 108114084-A0305-02-0189-141
<210> 94
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子2-4
<400> 94
Figure 108114084-A0305-02-0190-142
<210> 95
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子2-5
<400> 95
Figure 108114084-A0305-02-0190-143
<210> 96
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子2-6
<400> 96
Figure 108114084-A0305-02-0190-144
<210> 97
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子2-7
<400> 97
Figure 108114084-A0305-02-0190-145
Figure 108114084-A0305-02-0191-146
<210> 98
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子2-8
<400> 98
Figure 108114084-A0305-02-0191-147
<210> 99
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子2-9
<400> 99
Figure 108114084-A0305-02-0191-148
<210> 100
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子2-10
<400> 100
Figure 108114084-A0305-02-0191-149
<210> 101
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子2-11
<400> 101
Figure 108114084-A0305-02-0191-150
<210> 102
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子2-12
<400> 102
Figure 108114084-A0305-02-0192-151
<210> 103
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子2-13
<400> 103
Figure 108114084-A0305-02-0192-152
<210> 104
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子2-14
<400> 104
Figure 108114084-A0305-02-0192-153
<210> 105
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子2-15
<400> 105
Figure 108114084-A0305-02-0192-154
<210> 106
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子2-16
<400> 106
Figure 108114084-A0305-02-0193-155
<210> 107
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子2-17
<400> 107
Figure 108114084-A0305-02-0193-156
<210> 108
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子2-18
<400> 108
Figure 108114084-A0305-02-0193-157
<210> 109
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子2-19
<400> 109
Figure 108114084-A0305-02-0193-158
<210> 110
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子2-20
<400> 110
Figure 108114084-A0305-02-0194-159
<210> 111
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子2-21
<400> 111
Figure 108114084-A0305-02-0194-160
<210> 112
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子2-22
<400> 112
Figure 108114084-A0305-02-0194-161
<210> 113
<211> 289
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合1
<400> 113
Figure 108114084-A0305-02-0195-162
Figure 108114084-A0305-02-0196-163
<210> 114
<211> 289
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合2
<400> 114
Figure 108114084-A0305-02-0196-164
Figure 108114084-A0305-02-0197-165
<210> 115
<211> 294
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合3
<400> 115
Figure 108114084-A0305-02-0197-166
Figure 108114084-A0305-02-0198-167
Figure 108114084-A0305-02-0199-168
<210> 116
<211> 286
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合4
<400> 116
Figure 108114084-A0305-02-0199-170
Figure 108114084-A0305-02-0200-171
<210> 117
<211> 286
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合5
<400> 117
Figure 108114084-A0305-02-0200-172
Figure 108114084-A0305-02-0201-173
<210> 118
<211> 291
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合6
<400> 118
Figure 108114084-A0305-02-0201-174
Figure 108114084-A0305-02-0202-175
Figure 108114084-A0305-02-0203-176
<210> 119
<211> 291
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合7
<400> 119
Figure 108114084-A0305-02-0203-177
Figure 108114084-A0305-02-0204-178
<210> 120
<211> 292
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合8
<400> 120
Figure 108114084-A0305-02-0204-179
Figure 108114084-A0305-02-0205-180
<210> 121
<211> 292
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合9
<400> 121
Figure 108114084-A0305-02-0206-181
Figure 108114084-A0305-02-0207-182
<210> 122
<211> 297
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合10
<400> 122
Figure 108114084-A0305-02-0207-183
Figure 108114084-A0305-02-0208-184
<210> 123
<211> 289
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合11
<400> 123
Figure 108114084-A0305-02-0208-185
Figure 108114084-A0305-02-0209-186
<210> 124
<211> 289
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合12
<400> 124
Figure 108114084-A0305-02-0210-187
Figure 108114084-A0305-02-0211-188
<210> 125
<211> 294
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合13
<400> 125
Figure 108114084-A0305-02-0211-189
Figure 108114084-A0305-02-0212-190
<210> 126
<211> 294
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合14
<400> 126
Figure 108114084-A0305-02-0212-191
Figure 108114084-A0305-02-0213-192
Figure 108114084-A0305-02-0214-193
<210> 127
<211> 297
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合15
<400> 127
Figure 108114084-A0305-02-0214-194
Figure 108114084-A0305-02-0215-195
<210> 128
<211> 299
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合16
<400> 128
Figure 108114084-A0305-02-0215-196
Figure 108114084-A0305-02-0216-197
<210> 129
<211> 297
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合17
<400> 129
Figure 108114084-A0305-02-0217-198
Figure 108114084-A0305-02-0218-199
<210> 130
<211> 299
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合18
<400> 130
Figure 108114084-A0305-02-0218-200
Figure 108114084-A0305-02-0219-201
<210> 131
<211> 290
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合19
<400> 131
Figure 108114084-A0305-02-0219-202
Figure 108114084-A0305-02-0220-203
Figure 108114084-A0305-02-0221-204
<210> 132
<211> 290
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合20
<400> 132
Figure 108114084-A0305-02-0221-206
Figure 108114084-A0305-02-0222-207
<210> 133
<211> 287
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合21
<400> 133
Figure 108114084-A0305-02-0222-208
Figure 108114084-A0305-02-0223-209
<210> 134
<211> 298
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合22
<400> 134
Figure 108114084-A0305-02-0223-210
Figure 108114084-A0305-02-0224-211
Figure 108114084-A0305-02-0225-212
<210> 135
<211> 298
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合23
<400> 135
Figure 108114084-A0305-02-0225-213
Figure 108114084-A0305-02-0226-214
<210> 136
<211> 292
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合24
<400> 136
Figure 108114084-A0305-02-0226-215
Figure 108114084-A0305-02-0227-216
<210> 137
<211> 292
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合25
<400> 137
Figure 108114084-A0305-02-0228-217
Figure 108114084-A0305-02-0229-218
<210> 138
<211> 297
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合26
<400> 138
Figure 108114084-A0305-02-0229-219
Figure 108114084-A0305-02-0230-220
<210> 139
<211> 297
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合27
<400> 139
Figure 108114084-A0305-02-0230-221
Figure 108114084-A0305-02-0231-222
Figure 108114084-A0305-02-0232-223
<210> 140
<211> 289
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合28
<400> 140
Figure 108114084-A0305-02-0232-224
Figure 108114084-A0305-02-0233-225
<210> 141
<211> 289
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合29
<400> 141
Figure 108114084-A0305-02-0233-226
Figure 108114084-A0305-02-0234-227
<210> 142
<211> 294
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合30
<400> 142
Figure 108114084-A0305-02-0235-228
Figure 108114084-A0305-02-0236-229
<210> 143
<211> 294
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合31
<400> 143
Figure 108114084-A0305-02-0236-230
Figure 108114084-A0305-02-0237-231
<210> 144
<211> 280
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合32
<400> 144
Figure 108114084-A0305-02-0237-232
Figure 108114084-A0305-02-0238-233
<210> 145
<211> 282
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合33
<400> 145
Figure 108114084-A0305-02-0239-234
Figure 108114084-A0305-02-0240-235
<210> 146
<211> 289
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合34
<400> 146
Figure 108114084-A0305-02-0240-236
Figure 108114084-A0305-02-0241-237
<210> 147
<211> 291
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合35
<400> 147
Figure 108114084-A0305-02-0241-238
Figure 108114084-A0305-02-0242-239
Figure 108114084-A0305-02-0243-240
<210> 148
<211> 283
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合36
<400> 148
Figure 108114084-A0305-02-0243-241
Figure 108114084-A0305-02-0244-242
<210> 149
<211> 292
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合37
<400> 149
Figure 108114084-A0305-02-0244-243
Figure 108114084-A0305-02-0245-244
<210> 150
<211> 290
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合38
<400> 150
Figure 108114084-A0305-02-0245-245
Figure 108114084-A0305-02-0246-246
Figure 108114084-A0305-02-0247-247
<210> 151
<211> 292
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合39
<400> 151
Figure 108114084-A0305-02-0247-248
Figure 108114084-A0305-02-0248-249
<210> 152
<211> 281
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合40
<400> 152
Figure 108114084-A0305-02-0248-250
Figure 108114084-A0305-02-0249-251
<210> 153
<211> 291
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合41
<400> 153
Figure 108114084-A0305-02-0250-252
Figure 108114084-A0305-02-0251-253
<210> 154
<211> 289
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合42
<400> 154
Figure 108114084-A0305-02-0251-255
Figure 108114084-A0305-02-0252-256
<210> 155
<211> 291
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合43
<400> 155
Figure 108114084-A0305-02-0252-257
Figure 108114084-A0305-02-0253-258
Figure 108114084-A0305-02-0254-259
<210> 156
<211> 281
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合44
<400> 156
Figure 108114084-A0305-02-0254-260
Figure 108114084-A0305-02-0255-261
<210> 157
<211> 289
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合45
<400> 157
Figure 108114084-A0305-02-0255-262
Figure 108114084-A0305-02-0256-263
<210> 158
<211> 291
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合46
<400> 158
Figure 108114084-A0305-02-0256-264
Figure 108114084-A0305-02-0257-265
Figure 108114084-A0305-02-0258-266
<210> 159
<211> 292
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合47
<400> 159
Figure 108114084-A0305-02-0258-267
Figure 108114084-A0305-02-0259-268
<210> 160
<211> 281
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合48
<400> 160
Figure 108114084-A0305-02-0259-269
Figure 108114084-A0305-02-0260-270
<210> 161
<211> 290
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合49
<400> 161
Figure 108114084-A0305-02-0261-271
Figure 108114084-A0305-02-0262-272
<210> 162
<211> 292
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合50
<400> 162
Figure 108114084-A0305-02-0262-273
Figure 108114084-A0305-02-0263-274
<210> 163
<211> 293
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合51
<400> 163
Figure 108114084-A0305-02-0263-275
Figure 108114084-A0305-02-0264-276
Figure 108114084-A0305-02-0265-277
<210> 164
<211> 282
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合52
<400> 164
Figure 108114084-A0305-02-0265-278
Figure 108114084-A0305-02-0266-279
<210> 165
<211> 283
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合53
<400> 165
Figure 108114084-A0305-02-0266-280
Figure 108114084-A0305-02-0267-282
<210> 166
<211> 293
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合54
<400> 166
Figure 108114084-A0305-02-0267-283
Figure 108114084-A0305-02-0268-284
Figure 108114084-A0305-02-0269-285
<210> 167
<211> 277
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合55
<400> 167
Figure 108114084-A0305-02-0269-286
Figure 108114084-A0305-02-0270-287
<210> 168
<211> 283
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合56
<400> 168
Figure 108114084-A0305-02-0270-288
Figure 108114084-A0305-02-0271-289
<210> 169
<211> 283
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合57
<400> 169
Figure 108114084-A0305-02-0271-290
Figure 108114084-A0305-02-0272-291
Figure 108114084-A0305-02-0273-292
<210> 170
<211> 282
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合58
<400> 170
Figure 108114084-A0305-02-0273-293
Figure 108114084-A0305-02-0274-294
<210> 171
<211> 281
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合59
<400> 171
Figure 108114084-A0305-02-0274-295
Figure 108114084-A0305-02-0275-296
<210> 172
<211> 287
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合60
<400> 172
Figure 108114084-A0305-02-0275-297
Figure 108114084-A0305-02-0276-298
<210> 173
<211> 281
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合61
<400> 173
Figure 108114084-A0305-02-0277-299
Figure 108114084-A0305-02-0278-300
<210> 174
<211> 289
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合62
<400> 174
Figure 108114084-A0305-02-0278-301
Figure 108114084-A0305-02-0279-302
<210> 175
<211> 297
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合63
<400> 175
Figure 108114084-A0305-02-0279-303
Figure 108114084-A0305-02-0280-304
Figure 108114084-A0305-02-0281-305
<210> 176
<211> 305
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合64
<400> 176
Figure 108114084-A0305-02-0281-308
Figure 108114084-A0305-02-0282-307
<210> 177
<211> 294
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合65
<400> 177
Figure 108114084-A0305-02-0282-309
Figure 108114084-A0305-02-0283-310
<210> 178
<211> 300
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合66
<400> 178
Figure 108114084-A0305-02-0284-311
Figure 108114084-A0305-02-0285-312
<210> 179
<211> 289
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合67
<400> 179
Figure 108114084-A0305-02-0285-313
Figure 108114084-A0305-02-0286-314
<210> 180
<211> 290
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合68
<400> 180
Figure 108114084-A0305-02-0286-315
Figure 108114084-A0305-02-0287-316
Figure 108114084-A0305-02-0288-317
<210> 181
<211> 285
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合69
<400> 181
Figure 108114084-A0305-02-0288-318
Figure 108114084-A0305-02-0289-319
<210> 182
<211> 285
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合70
<400> 182
Figure 108114084-A0305-02-0289-320
Figure 108114084-A0305-02-0290-321
<210> 183
<211> 293
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合71
<400> 183
Figure 108114084-A0305-02-0290-322
Figure 108114084-A0305-02-0291-323
Figure 108114084-A0305-02-0292-324
<210> 184
<211> 293
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合72
<400> 184
Figure 108114084-A0305-02-0292-325
Figure 108114084-A0305-02-0293-327
<210> 185
<211> 289
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合73
<400> 185
Figure 108114084-A0305-02-0293-328
Figure 108114084-A0305-02-0294-329
<210> 186
<211> 289
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合74
<400> 186
Figure 108114084-A0305-02-0295-330
Figure 108114084-A0305-02-0296-331
<210> 187
<211> 295
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合75
<400> 187
Figure 108114084-A0305-02-0296-332
Figure 108114084-A0305-02-0297-333
<210> 188
<211> 294
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合76
<400> 188
Figure 108114084-A0305-02-0297-334
Figure 108114084-A0305-02-0298-335
Figure 108114084-A0305-02-0299-336
<210> 189
<211> 294
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合77
<400> 189
Figure 108114084-A0305-02-0299-337
Figure 108114084-A0305-02-0300-338
<210> 190
<211> 294
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合78
<400> 190
Figure 108114084-A0305-02-0300-339
Figure 108114084-A0305-02-0301-340
<210> 191
<211> 311
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合79
<400> 191
Figure 108114084-A0305-02-0302-341
Figure 108114084-A0305-02-0303-342
<210> 192
<211> 285
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合80
<400> 192
Figure 108114084-A0305-02-0303-343
Figure 108114084-A0305-02-0304-344
<210> 193
<211> 291
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合81
<400> 193
Figure 108114084-A0305-02-0304-345
Figure 108114084-A0305-02-0305-346
<210> 194
<211> 292
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合82
<400> 194
Figure 108114084-A0305-02-0306-347
Figure 108114084-A0305-02-0307-348
<210> 195
<211> 292
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合83
<400> 195
Figure 108114084-A0305-02-0307-349
Figure 108114084-A0305-02-0308-350
<210> 196
<211> 291
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合84
<400> 196
Figure 108114084-A0305-02-0308-351
Figure 108114084-A0305-02-0309-352
Figure 108114084-A0305-02-0310-353
<210> 197
<211> 289
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合85
<400> 197
Figure 108114084-A0305-02-0310-354
Figure 108114084-A0305-02-0311-355
<210> 198
<211> 289
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合86
<400> 198
Figure 108114084-A0305-02-0311-356
Figure 108114084-A0305-02-0312-357
<210> 199
<211> 295
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合87
<400> 199
Figure 108114084-A0305-02-0313-358
Figure 108114084-A0305-02-0314-359
<210> 200
<211> 295
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合88
<400> 200
Figure 108114084-A0305-02-0314-360
Figure 108114084-A0305-02-0315-361
<210> 201
<211> 292
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合89
<400> 201
Figure 108114084-A0305-02-0315-362
Figure 108114084-A0305-02-0316-363
Figure 108114084-A0305-02-0317-364
<210> 202
<211> 292
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合90
<400> 202
Figure 108114084-A0305-02-0317-365
Figure 108114084-A0305-02-0318-366
<210> 203
<211> 292
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合91
<400> 203
Figure 108114084-A0305-02-0318-367
Figure 108114084-A0305-02-0319-368
<210> 204
<211> 292
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合92
<400> 204
Figure 108114084-A0305-02-0320-369
Figure 108114084-A0305-02-0321-370
<210> 205
<211> 298
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合93
<400> 205
Figure 108114084-A0305-02-0321-371
Figure 108114084-A0305-02-0322-372
<210> 206
<211> 298
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合94
<400> 206
Figure 108114084-A0305-02-0322-373
Figure 108114084-A0305-02-0323-374
Figure 108114084-A0305-02-0324-375
<210> 207
<211> 298
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合95
<400> 207
Figure 108114084-A0305-02-0324-376
Figure 108114084-A0305-02-0325-377
<210> 208
<211> 297
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合96
<400> 208
Figure 108114084-A0305-02-0325-378
Figure 108114084-A0305-02-0326-379
<210> 209
<211> 297
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合97
<400> 209
Figure 108114084-A0305-02-0326-380
Figure 108114084-A0305-02-0327-381
Figure 108114084-A0305-02-0328-382
<210> 210
<211> 297
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合98
<400> 210
Figure 108114084-A0305-02-0328-383
Figure 108114084-A0305-02-0329-384
<210> 211
<211> 294
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合99
<400> 211
Figure 108114084-A0305-02-0329-385
Figure 108114084-A0305-02-0330-386
<210> 212
<211> 297
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合100
<400> 212
Figure 108114084-A0305-02-0331-387
Figure 108114084-A0305-02-0332-388
<210> 213
<211> 297
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合101
<400> 213
Figure 108114084-A0305-02-0332-389
Figure 108114084-A0305-02-0333-391
<210> 214
<211> 294
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合102
<400> 214
Figure 108114084-A0305-02-0333-392
Figure 108114084-A0305-02-0334-393
Figure 108114084-A0305-02-0335-394
<210> 215
<211> 289
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合103
<400> 215
Figure 108114084-A0305-02-0335-395
Figure 108114084-A0305-02-0336-396
<210> 216
<211> 288
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合104
<400> 216
Figure 108114084-A0305-02-0336-397
Figure 108114084-A0305-02-0337-398
<210> 217
<211> 287
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合105
<400> 217
Figure 108114084-A0305-02-0338-399
Figure 108114084-A0305-02-0339-400
<210> 218
<211> 289
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合106
<400> 218
Figure 108114084-A0305-02-0339-401
Figure 108114084-A0305-02-0340-402
<210> 219
<211> 289
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合107
<400> 219
Figure 108114084-A0305-02-0340-403
Figure 108114084-A0305-02-0341-404
<210> 220
<211> 286
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合108
<400> 220
Figure 108114084-A0305-02-0342-405
Figure 108114084-A0305-02-0343-406
<210> 221
<211> 289
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合109
<400> 221
Figure 108114084-A0305-02-0343-407
Figure 108114084-A0305-02-0344-408
<210> 222
<211> 288
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合110
<400> 222
Figure 108114084-A0305-02-0344-409
Figure 108114084-A0305-02-0345-410
<210> 223
<211> 289
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合111
<400> 223
Figure 108114084-A0305-02-0346-411
Figure 108114084-A0305-02-0347-412
<210> 224
<211> 292
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合112
<400> 224
Figure 108114084-A0305-02-0347-413
Figure 108114084-A0305-02-0348-414
<210> 225
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合1化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 225
Figure 108114084-A0305-02-0349-415
<210> 226
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> Ala，其中丙胺酸係具有環狀修飾之β-丙胺酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合1化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 226
Figure 108114084-A0305-02-0349-416
Figure 108114084-A0305-02-0350-417
<210> 227
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> Ala，其中丙胺酸係具有環狀修飾之β-丙胺酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合1化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 227
Figure 108114084-A0305-02-0350-418
<210> 228
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合1化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 228
Figure 108114084-A0305-02-0351-419
<210> 229
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合24化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 229
Figure 108114084-A0305-02-0352-420
<210> 230
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> Ala，其中丙胺酸係具有環狀修飾之β-丙胺酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合24化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 230
Figure 108114084-A0305-02-0352-421
Figure 108114084-A0305-02-0353-422
<210> 231
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> Ala，其中丙胺酸係具有環狀修飾之β-丙胺酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合24化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 231
Figure 108114084-A0305-02-0353-423
<210> 232
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合24化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 232
Figure 108114084-A0305-02-0354-424
<210> 233
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合70化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 233
Figure 108114084-A0305-02-0355-425
<210> 234
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合11化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 234
Figure 108114084-A0305-02-0355-426
<210> 235
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合28化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 235
Figure 108114084-A0305-02-0356-427
<210> 236
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合67化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 236
Figure 108114084-A0305-02-0357-428
<210> 237
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合27化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 237
Figure 108114084-A0305-02-0357-429
Figure 108114084-A0305-02-0358-430
<210> 238
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合23化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 238
Figure 108114084-A0305-02-0358-431
<210> 239
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合54化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有化學修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 239
Figure 108114084-A0305-02-0359-432
<210> 240
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合63化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 240
Figure 108114084-A0305-02-0359-433
Figure 108114084-A0305-02-0360-434
<210> 241
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合64化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 241
Figure 108114084-A0305-02-0360-435
<210> 242
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合22化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 242
Figure 108114084-A0305-02-0361-436
<210> 243
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合49化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 243
Figure 108114084-A0305-02-0362-437
<210> 244
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> Ala，其中Ala係具有環狀修飾之β-丙胺酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有PEG24 GLP-1融合34化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (30)..(30)
<223> Cys，其中cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 244
Figure 108114084-A0305-02-0362-438
<210> 245
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合35化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 245
Figure 108114084-A0305-02-0363-439
<210> 246
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合65化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 246
Figure 108114084-A0305-02-0364-440
<210> 247
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合45化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 247
Figure 108114084-A0305-02-0364-442
Figure 108114084-A0305-02-0365-484
<210> 248
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合40化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 248
Figure 108114084-A0305-02-0365-444
<210> 249
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合40化學修飾之Lys
<220>
<221> Glu
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Glu
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 249
Figure 108114084-A0305-02-0366-445
<210> 250
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合40化學修飾之Lys
<220>
<221> Glu
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Glu
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 250
Figure 108114084-A0305-02-0367-446
<210> 251
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合19化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 251
Figure 108114084-A0305-02-0367-447
<210> 252
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合8化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 252
Figure 108114084-A0305-02-0368-448
<210> 253
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Xaa
<222> (1)..(1)
<223> Xaa係具有環狀修飾之γ胺基-丁酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合34化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> Cys，其中Cys係具有環狀修飾之升半胱胺酸
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 253
Figure 108114084-A0305-02-0369-449
<210> 254
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合42化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 254
Figure 108114084-A0305-02-0369-450
Figure 108114084-A0305-02-0370-451
<210> 255
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合59化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 255
Figure 108114084-A0305-02-0370-452
<210> 256
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合60化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 256
Figure 108114084-A0305-02-0371-453
<210> 257
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合61化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 257
Figure 108114084-A0305-02-0371-454
Figure 108114084-A0305-02-0372-455
<210> 258
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> Ala，其中Ala係具有環狀修飾之β-丙胺酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合63化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 258
Figure 108114084-A0305-02-0372-456
<210> 259
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> Ala，其中Ala係具有環狀修飾之β-丙胺酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合63化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Arg
<220>
<221> Tyr
<222> (35)..(35)
<223> 具有psi-(R35,Y36)化學修飾之Tyr
<400> 259
Figure 108114084-A0305-02-0373-457
<210> 260
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Ala
<222> (1)..(1)
<223> Ala，其中Ala係具有環狀修飾之β-丙胺酸
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合40化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 260
Figure 108114084-A0305-02-0374-458
<210> 261
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合40化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 261
Figure 108114084-A0305-02-0374-459
<210> 262
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合偶合環狀PYY肽接合物
<220>
<221> Gly
<222> (1)..(1)
<223> 具有環狀修飾之Gly
<220>
<221> Lys
<222> (10)..(10)
<223> 具有GLP-1融合34化學修飾之Lys
<220>
<221> Cys
<222> (29)..(29)
<223> 具有環狀修飾之Cys
<220>
<221> Arg
<222> (34)..(34)
<223> 具有N-Me化學修飾之Arg
<400> 262
Figure 108114084-A0305-02-0375-460
<210> 263
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 用於GLPD30之HGE
<400> 263
Figure 108114084-A0305-02-0375-461
<210> 264
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 用於GLPD31之HGE
<400> 264
Figure 108114084-A0305-02-0376-462
<210> 265
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VVS肽
<400> 265
Figure 108114084-A0305-02-0376-463
<210> 266
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> YYA肽
<400> 266
Figure 108114084-A0305-02-0376-464
<210> 267
<211> 287
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合113
<400> 267
Figure 108114084-A0305-02-0376-465
Figure 108114084-A0305-02-0377-466
<210> 268
<211> 284
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合114
<400> 268
Figure 108114084-A0305-02-0378-467
Figure 108114084-A0305-02-0379-468
<210> 269
<211> 293
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合115
<400> 269
Figure 108114084-A0305-02-0379-469
Figure 108114084-A0305-02-0380-470
<210> 270
<211> 290
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合116
<400> 270
Figure 108114084-A0305-02-0380-471
Figure 108114084-A0305-02-0381-472
Figure 108114084-A0305-02-0382-473
<210> 271
<211> 284
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合117
<400> 271
Figure 108114084-A0305-02-0382-474
Figure 108114084-A0305-02-0383-475
<210> 272
<211> 295
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合118
<400> 272
Figure 108114084-A0305-02-0383-476
Figure 108114084-A0305-02-0384-477
<210> 273
<211> 289
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合119
<400> 273
Figure 108114084-A0305-02-0384-478
Figure 108114084-A0305-02-0385-479
Figure 108114084-A0305-02-0386-480
<210> 274
<211> 300
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1融合120
<400> 274
Figure 108114084-A0305-02-0386-481
Figure 108114084-A0305-02-0387-482

Claims (27)

  1. 一種接合物，其包含偶合至環狀PYY肽之類升糖素肽1(GLP-1)融合肽，其中該GLP-1融合肽包含GLP-1肽、可選之第一連接肽、鉸鏈-Fc區肽、及包含一半胱胺酸殘基之第二連接肽，該半胱胺酸殘基偶合至該環狀PYY肽；其中該環狀PYY肽係以式I或其衍生物或醫藥上可接受之鹽表示：
    Figure 108114084-A0305-02-0388-1
     其中p係0或1；m係0、1、2、3、4或5；n係1、2、3或4；q係0或1；惟q只有在Z30不存在時係1；橋係-Ph-CH2-S-、-三唑基-、-NHC(O)CH2S-、-SCH2C(O)NH-、-(OCH2CH2)2NHC(O)CH2S、-NHC(O)-或-CH2S-；Z4係K、A、E、S或R；Z7係A或K；Z9係G或K；Z11係D或K；Z22係A或K；Z23係S或K；Z26係A或H；Z30係L、W或不存在， 惟Z30只有在q係1時不存在； Z34係
    Figure 108114084-A0305-02-0389-3
    或
    Figure 108114084-A0305-02-0389-5
    ； Z35係
    Figure 108114084-A0305-02-0389-6
    、
    Figure 108114084-A0305-02-0389-9
    、
    Figure 108114084-A0305-02-0389-10
    或
    Figure 108114084-A0305-02-0389-11
    ； 其中該衍生物係經一或多個選自由醯胺化、醯化、及聚乙二醇化所組成之群組之過程修飾的式I之化合物。
  2. 如請求項1所述之接合物，其中該環狀PYY肽係以式I或其衍生物或醫藥上可接受之鹽表示，其中：p係0或1；m係0、1、2、3、4或5；n係1、2、3或4；q係0或1；惟q只有在Z30不存在時係1；橋係-Ph-CH2-S-、-三唑基-、-NHC(O)CH2S-、-SCH2C(O)NH2-、-(OCH2CH2)2NHC(O)CH2S、-NHC(O)-或-CH2S-；Z4係K、A、E、S或R；Z7係A或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：
    Figure 108114084-A0305-02-0389-12
    ，其中i係0至24之整數，且X=Br、I、Cl、 -C(O)CH2Br、-C(O)CH2I或-C(O)CH2Cl；Z9係G或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：
    Figure 108114084-A0305-02-0390-13
    ，其中i係0至24之整數，且X=Br、I、Cl、 -C(O)CH2Br、-C(O)CH2I或-C(O)CH2Cl；Z11係D或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：
    Figure 108114084-A0305-02-0390-14
    ，其中i係0至24之整數，且X=Br、I、Cl、 -C(O)CH2Br、-C(O)CH2I或-C(O)CH2Cl；Z22係A或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：
    Figure 108114084-A0305-02-0390-15
    ，其中i係0至24之整數，且X=Br、I、Cl、 -C(O)CH2Br、-C(O)CH2I或-C(O)CH2Cl；Z23係S或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：
    Figure 108114084-A0305-02-0390-16
    ，其中i係0至24之整數，且X=Br、I、Cl、 -C(O)CH2Br、-C(O)CH2I或-C(O)CH2Cl；Z26係A或H；Z30係L； Z34係
    Figure 108114084-A0305-02-0390-18
    或
    Figure 108114084-A0305-02-0390-19
    ；且 Z35係
    Figure 108114084-A0305-02-0391-20
    、
    Figure 108114084-A0305-02-0391-21
    、
    Figure 108114084-A0305-02-0391-25
    或
    Figure 108114084-A0305-02-0391-23
    。
  3. 如請求項1所述之接合物，其中該環狀PYY肽係以式I或其衍生物或醫藥上可接受之鹽表示，其中：p係0或1；m係0、1、2、3或5；n係1、2或4；q係0或1；惟q只有在Z30不存在時可能係1；橋係-Ph-CH2-S-、-三唑基-、-NHC(O)CH2S-、-(OCH2CH2)2NHC(O)CH2S、-NHC(O)-或-CH2S-；Z4係K、A、E、S或R；Z7係A或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：-C(O)CH2Br，Z9係G或K，其中該K之胺基側鏈係經可選地下列取代：-C(O)CH2Br，Z11係D或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：-C(O)CH2Br，Z22係A或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：-C(O)CH2Br，Z23係S或K，其中該K之胺基側鏈係可選地經下列取代：-C(O)CH2Br，Z26係A或H，Z30係L； Z34係
    Figure 108114084-A0305-02-0391-27
    或
    Figure 108114084-A0305-02-0391-28
    ； Z35係
    Figure 108114084-A0305-02-0392-29
    、
    Figure 108114084-A0305-02-0392-30
    、
    Figure 108114084-A0305-02-0392-31
    或
    Figure 108114084-A0305-02-0392-32
    。
  4. 如請求項1所述之接合物，其中該環狀PYY肽係選自由SEQ ID NO：1至54所組成之群組或其醫藥上可接受之鹽。
  5. 如請求項4所述之接合物，其中該環狀PYY肽係選自SEQ ID NO：24、25、27、28、29、30、33或34，或其醫藥上可接受之鹽。
  6. 如請求項1至5中任一項所述之接合物，其中該GLP-1融合肽在該環狀PYY肽的離胺酸殘基處共價連結至該環狀PYY肽。
  7. 如請求項6所述之接合物，其中在式I中之Z7、Z9、Z11、Z22及Z23中僅一者係離胺酸，且該離胺酸係共價連結至該GLP-1融合肽之該第二連接肽中的半胱胺酸殘基。
  8. 如請求項7所述之接合物，其中在式I中之Z11係離胺酸。
  9. 如請求項1至5中任一項所述之接合物，其中該GLP-1肽包含選自由SEQ ID NO：56至59所組成之群組的胺基酸序列。
  10. 如請求項1至5中任一項所述之接合物，其中該第一連接肽係存在且包含選自由SEQ ID NO：60至83所組成之群組的胺基酸序列。
  11. 如請求項1至5中任一項所述之接合物，其中該鉸鏈-Fc區肽包含選自由SEQ ID NO：84至90所組成之群組的胺基酸序列。
  12. 如請求項1至5中任一項所述之接合物，其中該第二連接肽包含選自由SEQ ID NO：93至112所組成之群組的胺基酸序列。
  13. 如請求項1至5中任一項所述之接合物，其中該第二連接肽包含SEQ ID NO：93、94、95、106或111的胺基酸序列。
  14. 一種接合物，其包含偶合至環狀PYY肽之類升糖素肽1(GLP-1)融合肽，其中該GLP-1融合肽包含選自由SEQ ID NO：113至224及267至274所組成之群組的胺基酸序列，且其中該環狀PYY肽包含選自SEQ ID NO：24、25、27、28、29、30、33或34之胺基酸序列或其醫藥上可接受之鹽。
  15. 如請求項14所述之接合物，其中該GLP-1融合肽之胺基酸殘基287至289之間的半胱胺酸殘基係經由化學連接子共價連結至該環狀PYY肽之殘基7、9、11、22或23處的離胺酸殘基。
  16. 一種接合物，其包含偶合至環狀PYY肽之類升糖素肽1(GLP-1)融合肽，其中該接合物包含選自由SEQ ID NO：225至262所組成之群組之胺基酸序列或其醫藥上可接受之鹽。
  17. 一種製造如請求項1至16中任一項所述之接合物之方法，該方法包含使親電子基與如請求項1至16中任一項所定義之GLP-1融合肽的半胱胺酸殘基之巰基反應，藉以在該環狀PYY肽與該GLP-1融合肽之間建立共價鍵結，其中該親電子基係被導入至如請求項1至16中任一項所定義之式I的環狀PYY肽的胺基酸殘基的側鏈上。
  18. 如請求項17所述之方法，其中該親電子基係溴乙醯胺或順丁烯二醯亞胺，其係被導入至式I的環狀PYY肽的離胺酸殘基的側鏈上。
  19. 如請求項17所述之方法，其中該GLP-1融合肽之該第二連接肽的該半胱胺酸殘基係藉由使該GLP-1融合肽與過量的氮雜膦還原劑接觸而還原，且還原的該半胱胺酸殘基與該親電子劑反應。
  20. 如請求項19所述之方法，其中該氮雜膦還原劑係1,3,5-三氮雜-7-磷三環[3.3.1.1]癸烷(PTA)或其衍生物。
  21. 一種醫藥組成物，其包含如請求項1至16中任一項所述之接合物及醫藥上可接受之載劑。
  22. 一種有效量的如請求項21所述之醫藥組成物於製備治療或預防有需要之對象的疾病或病症之藥物的用途，其中該疾病或病症係肥胖、第I型或第II型糖尿病、代謝症候群、胰島素抗性、葡萄糖耐受不良、高血糖症、高胰島素血症、高三酸甘油酯血症、因先天性高胰島素血症(CHI)所致之低血糖症、異常血脂症、動脈粥樣硬化、糖尿病腎病變、高血壓、未管理膽固醇及/或脂質水準、骨質疏鬆症、發炎、非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)、腎疾病，及/或濕疹。
  23. 一種有效量的如請求項21所述之醫藥組成物於製備減少有需要之對象的攝食之藥物的用途。
  24. 一種有效量的如請求項21所述之醫藥組成物於製備調節有需要之對象的Y2受體活性及/或GLP-1受體活性之藥物的用途。
  25. 如請求項22至24中任一項所述的用途，其中該醫藥組成物係經由注射投予。
  26. 一種套組，其包含如請求項1至16中任一項所述之接合物，進一步包含用於注射之裝置。
  27. 一種製造包含如請求項1至16中任一項所述之接合物的醫藥組成物之方法，其包含將該接合物與醫藥上可接受之載劑組合以獲得該醫藥組成物。
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JOP20190097A1 (ar) * 2016-10-27 2019-04-28 Janssen Pharmaceutica Nv الجلوبولينات المناعية واستخداماتها
CA3241537A1 (en) * 2021-12-31 2023-07-06 Jiangyu YAN Fusion protein of glp-1 and gdf15 and use thereof
WO2024038067A1 (en) 2022-08-18 2024-02-22 Boehringer Ingelheim International Gmbh Combination therapy comprising long acting glp-1/glucagon and npy2 receptor agonists
CN117327200B (zh) * 2023-11-28 2024-02-09 西宝生物科技（上海）股份有限公司 一种调控糖脂代谢和抗衰老的双功能重组蛋白gik及其制备方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006059106A2 (en) * 2004-12-02 2006-06-08 Domantis Limited Bispecific domain antibodies targeting serum albumin and glp-1 or pyy
WO2008021560A2 (en) * 2006-08-17 2008-02-21 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Dpp-iv resistant gip hybrid polypeptides with selectable properties
WO2017075505A2 (en) * 2015-10-28 2017-05-04 Tufts University Novel polypeptides with improved proteolytic stability, and methods of preparing and using same

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BRPI0507594A (pt) * 2004-02-11 2007-07-03 Amylin Pharmaceuticals Inc polipetìdeos hìbridos com propriedades selecionáveis
EA011860B1 (ru) * 2004-03-17 2009-06-30 7ТиЭм ФАРМА А/С Селективные агонисты рецептора y2 для терапевтического воздействия
EP1909823A2 (en) * 2005-07-29 2008-04-16 Amprotein Corporation Chimeric therapeutic agents
EA014647B1 (ru) * 2005-08-11 2010-12-30 Амилин Фармасьютикалз, Инк. Гибридные полипептиды с селектируемыми свойствами
US8299023B2 (en) * 2008-09-17 2012-10-30 Hoffmann-La Roche Inc. Neuropeptide-2 receptor (Y-2R) agonists
CN102666586A (zh) * 2009-09-30 2012-09-12 葛兰素集团有限公司 具有延长的半衰期的药物融合体和缀合物
JOP20190097A1 (ar) 2016-10-27 2019-04-28 Janssen Pharmaceutica Nv الجلوبولينات المناعية واستخداماتها

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006059106A2 (en) * 2004-12-02 2006-06-08 Domantis Limited Bispecific domain antibodies targeting serum albumin and glp-1 or pyy
WO2008021560A2 (en) * 2006-08-17 2008-02-21 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Dpp-iv resistant gip hybrid polypeptides with selectable properties
WO2017075505A2 (en) * 2015-10-28 2017-05-04 Tufts University Novel polypeptides with improved proteolytic stability, and methods of preparing and using same

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
期刊 Natacha Germain et al, "Analogs of pancreatic polypeptide and peptide YY with a locked PP-fold structure are biologically active", Peptides. 2013 Jan;39: 6-10 .doi: 10.1016/j.peptides.2012.10.010. Epub 2012 Nov 2. *

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