JP2010261961A - グリコアルブミンの迅速検査 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】検査ストリップは固相支持体(1)を含み、該支持体にはグリコアルブミンに対する抗体がバンド(2)として固定されている。サンプル適用パッド(3)は抗グリコアルブミン抗体でコーティングされた微粒子を含有する複合パッド(4)に接触する。対照パッド(5)は過剰の未反応微粒子に結合するように取り付けられている。液溜めパッド(6)は過剰のサンプル液を吸収するために末端に取り付けられている。測定デバイスは反射率分光器または蛍光光度計のいずれでもよい。グリコアルブミンレベルは血液中に存在する全アルブミンの割合として表される。一定期間実施された検査の結果は機器のメモリーに蓄積され、個別の患者のグルコアルブミンレベルが経時的にモニターできるように数値形式またはグラフ形式で提供される。
【選択図】図2
Description
近年のグリコアルブミン検査を実施する方法論は、実施するには複雑であり、高価な機器を必要とする上に、一般に実験室で実施されるものでもある。医者の診療室でも、または患者にも利用可能な簡易なポイント・オブ・ケア・アッセイを開発できれば有利であり、そのような検査法の開発が熱心に研究されている。
本発明は、ポイント・オブ・ケア・アッセイおよび医療用デバイスを用いて糖尿病患者の血液中グリコアルブミンレベルをモニタリングするための方法および医療用デバイスに関する。具体的には、本発明は側方流動免疫クロマトグラフィーを使用して、単一サンプル中のグリコアルブミンおよび全アルブミンの両方を測定するものである。
本発明の一つの実施形態では、アルブミンに対する第1および第2抗体は独立してモノクローナルまたはポリクローナル抗体である。ポリクローナル抗アルブミン抗体は、全抗血清、IgG分画または精製された抗体でよい。
本発明の更に別の実施形態では、第1または第2のいずれかの検査ストリップの微粒子は着色されるか、または蛍光性化合物で標識化されてよい。
本発明の更に別の実施形態では、測定デバイスは1またはそれ以上の検査結果を前記測定デバイスの液晶ディスプレー上に数値形式またはグラフ形式で表示させる。更に、検査結果は外部コンピューターまたはプリンターに転送可能である。
グリコアルブミンを測定するための検査ストリップを図1および図2に示す。検査ストリップは、硝酸セルロース膜(しかしながらこれに限定されるものではない)などの固相支持体(1)からなり、該固相支持体にはグリコアルブミンに対する抗体がバンド(2)として固定されている。サンプル適用パッド(3)は、抗グリコアルブミン抗体でコーティングされた微粒子を含有する複合パッド(4)と接触する。過剰な未反応微粒子(5)と結合させるために対照バンドが取り付けられており、過剰なサンプル液を吸収するために膜の末端に液溜めパッド(6)が取り付けられている。検査ストリップはサンプルウェルおよび検査結果の可視化と測定のためのウィンドウ区画を有する剛直なカセット内に収容される。
全アルブミンを測定する検査ストリップを図1および図2に示す。前記ストリップは、硝酸セルロース膜(しかしながらこれに限定されるものではない)などの固相基材(1)からなり、該固相基質にはアルブミンに対する抗体がバンド(7)として固定されている。サンプル適用パッド(3)は抗アルブミン抗体でコーティングされた微粒子を含有する複合パッド(8)と接触する。対照バンド(9)は過剰の未反応微粒子を結合させるために取り付けられ、液溜めパッド(6)は、過剰のサンプル液を吸収するために膜の末端に取り付けられている。検査ストリップはサンプルウェルおよび検査結果の可視化と測定のためのウィンドウ区画を有する剛直なカセット内に収容される。
本発明の一つの実施形態では、測定機器は、グリコアルブミン検査ストリップ上のグリコアルブミン検査バンドおよび全アルブミン検査ストリップ上の全アルブミン検査バンドの強度を測定し、読み取られた強度から結果を計算するように具体的に設計された反射率分光計である。機器は二組の検出器を有し、一組の検出器はグリコアルブミン測定用であり、もう一組の検出器は全アルブミン測定用である。結果は、その後、グリコアルブミンおよび全アルブミンの標準試料の測定から得られたデータから導出された数学的アルゴリズムに従って計算される。結果は全アルブミンに対するグリコアルブミンの割合として表される。
グリコアルブミン検査
指に針を刺して得られるような血液サンプルをサンプルウェルに入れ、サンプル適用パッドに吸収させる。サンプル適用パッドは多孔性セルロース材料からなるが、ガラス繊維などの他の織物状または多孔性材料を使用してもよい。サンプル適用パッドは赤血球は通過できないが、血漿は通過することができる多孔度を有する。あるいは、適用パッドは、赤血球と結合して赤血球が適用膜を通過することを阻む、レクチンなどの結合剤で処理することができる。
全アルブミン検査
指に針を刺して得られるような血液サンプルをサンプルウェルに入れ、サンプル適用パッドに吸収させる。サンプル適用パッドは多孔性セルロース材料からなるが、ガラス繊維などの他の織物状または多孔性材料を使用してもよい。サンプル適用パッドは、赤血球は通過できないが、血漿は通過することができる多孔度を有する。あるいは、適用パッドは、赤血球と結合して赤血球が適用膜を通過することを阻む、レクチンなどの結合剤で処理することができる。
微粒子をコーティングするための方法は標準的な実験室的工程にしたがって実施され、該方法は当業者の間では周知である。
測定機器
図4aに示された測定機器は反射率分光計であり、以下の構成要素からなる:グリコアルブミン検査ストリップ上のグリコアルブミンバンドに固定された微粒子の反射率を読み取るように較正された検出器(10);グリコアルブミン検査ストリップ上の対照バンドに固定された微粒子の反射率を読み取るように較正された検出器(11);全アルブミン検査ストリップ上の全アルブミンバンドに固定された微粒子の反射率を読み取るように較正された検出器(12);全アルブミン検査ストリップ上の対照バンドに固定された微粒子の反射率を読み取るように較正された検出器(13);検出器からデータを収集し、結果を計算するコンピューターチップおよび電子回路(14)。
該機器は外観およびデザインの点で慣用の手持ち式グルコメーターに類似する。そのような変形は見かけ上のものにすぎず、本発明の範囲内にあると考える。
[1]血液サンプル中のグリコアルブミンを測定する免疫クロマトグラフィーシステムであって、グリコアルブミンを測定する第1の検査ストリップおよび全アルブミンを測定する第2の検査ストリップ、並びに前記サンプル中の全アルブミンに対するグリコアルブミンの割合として結果を読み取り、計算し、表示する測定デバイスを含む、前記免疫クロマトグラフィーシステム;
[2]前記第1検査ストリップが、グリコアルブミンに対する第1の抗体によりコーティングされた微粒子および膜ストリップに共有結合する固定化剤を含むことを特徴とする、[1]に記載の免疫クロマトグラフィーシステム;
[3]前記固定化剤がグリコアルブミンに対する第2の抗体またはフェニルボロン酸であることを特徴とする、[2]に記載の免疫クロマトグラフィーシステム;
[4]グリコアルブミンに対する前記第1抗体および第2抗体が独立してモノクローナルまたはポリクローナル抗体であることを特徴とする、[2]に記載の免疫クロマトグラフィーシステム;
[5]使用されるポリクローナル抗グリコアルブミン抗体が全抗血清、免疫グロブリン分画または精製された抗体でよいことを特徴とする、[4]に記載の免疫クロマトグラフィーシステム;
[6]前記微粒子が金コロイド粒子、ラテックス粒子、ポリスチレン粒子、アクリル粒子、およびその他の固相微粒子からなる群から選択されることを特徴とする、[2]に記載の免疫クロマトグラフィーシステム;
[7]前記微粒子のサイズが直径約5nmから50nmであることを特徴とする、[6]に記載の免疫クロマトグラフィーシステム;
[8]前記第2ストリップがアルブミンに対する第1の抗体でコーティングされた微粒子および膜ストリップに共有結合したアルブミンに対する第2抗体を含むことを特徴とする、[1]に記載の免疫クロマトグラフィーシステム;
[9]アルブミンに対する前記第1抗体および第2抗体が独立してモノクローナルまたはポリクローナル抗体であることを特徴とする、[8]に記載の免疫クロマトグラフィーシステム;
[10]使用される前記抗アルブミン抗体が全抗血清、免疫グロブリン分画、または精製された抗体でよいことを特徴とする、[9]に記載の免疫クロマトグラフィーシステム;
[11]前記微粒子が金コロイド粒子、ラテックス粒子、ポリスチレン粒子、アクリル粒子、その他固相微粒子からなる群から選択されることを特徴とする、[8]に記載の免疫グロブリンシステム;
[12]前記微粒子のサイズが直径約5nmから50nmであることを特徴とする、[8]に記載の免疫クロマトグラフィーシステム;
[13]前記微粒子のサイズが直径10nm、20nm、30nmおよび40nmの粒子サイズから選択されることを特徴とする、[6]または[12]のいずれかに記載の免疫クロマトグラフィーシステム;
[14]前記微粒子が着色され、または蛍光性化合物によって標識化されていてもよいことを特徴とする、[6]または[12]のいずれかに記載の免疫クロマトグラフィーシステム;
[15]前記微粒子が着色されていることを特徴とする、[14]に記載の免疫クロマトグラフィーシステム;
[16]前記微粒子が蛍光性化合物によって標識化されていることを特徴とする、[14]に記載の免疫クロマトグラフィーシステム;
[17]前記第1および第2検査ストリップが平行に、または互いに向かい合わせで、または互いに角度をもたせて配置させてよいことを特徴とする、[1]に記載の免疫クロマトグラフィーシステム;
[18]前記第1および第2検査ストリップが剛直なカセットに収容されていることを特徴とする、[1]に記載の免疫クロマトグラフィーシステム;
[19]前記測定デバイスが、グリコアルブミンの検査結果を測定する反射率検出器、グリコアルブミンの対照バンドを測定する反射率検出器、全アルブミンの検査結果を測定する反射率検出器、全アルブミンの対照バンドを測定する反射率検出器、測定と計算のための内部コンピューターチップ、液晶ディスプレー、外部コンピューターおよび/またはプリンターにデータを転送するための外部ポート、電池および/または外部電源、および検査カセット挿入用の開口を備えた剛直な外部ケース、を含む反射率分光計であることを特徴とする、[1]に記載の免疫クロマトグラフィーシステム;
[20]前記測定デバイスが、グリコアルブミンの検査結果を測定する反射率検出器、グリコアルブミンの対照バンドを測定する反射率検出器、全アルブミンの検査結果を測定する反射率検出器、全アルブミンの対照バンドを測定する反射率検出器、測定と計算のための内部コンピューターチップ、液晶ディスプレー、外部コンピューターおよび/またはプリンターにデータを転送するための外部ポート、電池および/または外部電源、および検査カセット挿入用の開口を備えた剛直な外部ケース、を含む蛍光光度計であることを特徴とする、[1]に記載の免疫クロマトグラフィーシステム;
[21]1またはそれ以上の検査結果を蓄積できる内部メモリーチップを更に含むことを特徴とする、[19]または[20]に記載の測定デバイス;
[22]1またはそれ以上の検査結果を前記測定デバイスの液晶ディスプレー上に数値形式またはグラフ形式で表示させることを特徴とする、[21]に記載の測定デバイス;
[23]1またそれ以上の検査結果が外部コンピューターまたはプリンターに転送されることを特徴とする、[22]に記載の測定デバイス;
[24]免疫クロマトグラフィーシステムの検査カセットのサンプルウェルに一滴の血液を滴下すること、前記血液をサンプル適用パッドに移して、血漿を第1検査ストリップの第1複合パッドに通過させること、前記血漿を前記第1複合パッド中の抗グリコアルブミン抗体でコーティングされた微粒子に結合させること、血漿に結合し、抗グリコアルブミン抗体でコーティングされた微粒子を、前記複合パッドに通して、膜に結合した抗グリコアルブミン抗体の固定バンドまで移動させること、前記微粒子を前記膜結合抗グリコアルブミン抗体に結合させて、可視的なバンドを生じさせること、前記免疫クロマトグラフィーシステムの検査カセットを測定デバイスに挿入すること、および、グリコアルブミンのレベルの数値結果を提供すること、を含む、ポイント・オブ・ケア・アッセイを用いたグリコアルブミンのモニタリングのための方法;
[25][24]に記載のポイント・オブ・ケア・アッセイを用いたグリコアルブミンのモニタリングのための方法であって、さらに、免疫クロマトグラフィーシステムの検査カセットのサンプルウェルに一滴の血液を滴下すること、前記血液をサンプル適用パッドに移して、血漿を第1検査ストリップの第1複合パッドに通過させること、前記血漿を前記第1複合パッド中の抗グリコアルブミン抗体でコーティングされた微粒子に結合させること、血漿に結合した、抗グリコアルブミン抗体でコーティングされた微粒子を前記複合パッドに通して、膜に結合した抗グリコアルブミン抗体の固定バンドまで移動させること、前記微粒子を前記膜結合抗グリコアルブミン抗体に結合させて、可視的なバンドを生じさせること、前記免疫クロマトグラフィーシステムの検査カセットを測定デバイスに挿入すること、および、グリコアルブミンのレベルの数値結果を提供すること、を含む、前記方法;
[26]ポイント・オブ・ケア・アッセイを用いたグリコアルブミンのモニター方法であって、前記グリコアルブミンレベルおよび前記全アルブミンレベルを用いてグリコアルブミンの割合を測定することを特徴とする、前記方法。
Claims (26)
- 血液サンプル中のグリコアルブミンを測定する免疫クロマトグラフィーシステムであって、
グリコアルブミンを測定する第1の検査ストリップおよび全アルブミンを測定する第2の検査ストリップ、並びに
前記サンプル中の全アルブミンに対するグリコアルブミンの割合として結果を読み取り、計算し、表示する測定デバイス
を含む、前記免疫クロマトグラフィーシステム。 - 前記第1検査ストリップが、グリコアルブミンに対する第1の抗体によりコーティングされた微粒子および膜ストリップに共有結合する固定化剤を含むことを特徴とする、請求項1に記載の免疫クロマトグラフィーシステム。
- 前記固定化剤がグリコアルブミンに対する第2の抗体またはフェニルボロン酸であることを特徴とする、請求項2に記載の免疫クロマトグラフィーシステム。
- グリコアルブミンに対する前記第1抗体および第2抗体が独立してモノクローナルまたはポリクローナル抗体であることを特徴とする、請求項2に記載の免疫クロマトグラフィーシステム。
- 使用されるポリクローナル抗グリコアルブミン抗体が全抗血清、免疫グロブリン分画または精製された抗体でよいことを特徴とする、請求項4に記載の免疫クロマトグラフィーシステム。
- 前記微粒子が金コロイド粒子、ラテックス粒子、ポリスチレン粒子、アクリル粒子、およびその他の固相微粒子からなる群から選択されることを特徴とする、請求項2に記載の免疫クロマトグラフィーシステム。
- 前記微粒子のサイズが直径約5nmから50nmであることを特徴とする、請求項6に記載の免疫クロマトグラフィーシステム。
- 前記第2ストリップがアルブミンに対する第1の抗体でコーティングされた微粒子および膜ストリップに共有結合したアルブミンに対する第2抗体を含むことを特徴とする、請求項1に記載の免疫クロマトグラフィーシステム。
- アルブミンに対する前記第1抗体および第2抗体が独立してモノクローナルまたはポリクローナル抗体であることを特徴とする、請求項8に記載の免疫クロマトグラフィーシステム。
- 使用される前記抗アルブミン抗体が全抗血清、免疫グロブリン分画、または精製された抗体でよいことを特徴とする、請求項9に記載の免疫クロマトグラフィーシステム。
- 前記微粒子が金コロイド粒子、ラテックス粒子、ポリスチレン粒子、アクリル粒子、その他固相微粒子からなる群から選択されることを特徴とする、請求項8に記載の免疫グロブリンシステム。
- 前記微粒子のサイズが直径約5nmから50nmであることを特徴とする、請求項8に記載の免疫クロマトグラフィーシステム。
- 前記微粒子のサイズが直径10nm、20nm、30nmおよび40nmの粒子サイズから選択されることを特徴とする、請求項6または12のいずれかに記載の免疫クロマトグラフィーシステム。
- 前記微粒子が着色され、または蛍光性化合物によって標識化されていてもよいことを特徴とする、請求項6または12のいずれかに記載の免疫クロマトグラフィーシステム。
- 前記微粒子が着色されていることを特徴とする、請求項14に記載の免疫クロマトグラフィーシステム。
- 前記微粒子が蛍光性化合物によって標識化されていることを特徴とする、請求項14に記載の免疫クロマトグラフィーシステム。
- 前記第1および第2検査ストリップが平行に、または互いに向かい合わせで、または互いに角度をもたせて配置させてよいことを特徴とする、請求項1に記載の免疫クロマトグラフィーシステム。
- 前記第1および第2検査ストリップが剛直なカセットに収容されていることを特徴とする、請求項1に記載の免疫クロマトグラフィーシステム。
- 前記測定デバイスが、
グリコアルブミンの検査結果を測定する反射率検出器、
グリコアルブミンの対照バンドを測定する反射率検出器、
全アルブミンの検査結果を測定する反射率検出器、
全アルブミンの対照バンドを測定する反射率検出器、
測定と計算のための内部コンピューターチップ、
液晶ディスプレー、
外部コンピューターおよび/またはプリンターにデータを転送するための外部ポート、
電池および/または外部電源、および
検査カセット挿入用の開口を備えた剛直な外部ケース
を含む反射率分光計であることを特徴とする、請求項1に記載の免疫クロマトグラフィーシステム。 - 前記測定デバイスが、
グリコアルブミンの検査結果を測定する反射率検出器、
グリコアルブミンの対照バンドを測定する反射率検出器、
全アルブミンの検査結果を測定する反射率検出器、
全アルブミンの対照バンドを測定する反射率検出器、
測定と計算のための内部コンピューターチップ、
液晶ディスプレー、
外部コンピューターおよび/またはプリンターにデータを転送するための外部ポート、
電池および/または外部電源、および
検査カセット挿入用の開口を備えた剛直な外部ケース
を含む蛍光光度計であることを特徴とする、請求項1に記載の免疫クロマトグラフィーシステム。 - 1またはそれ以上の検査結果を蓄積できる内部メモリーチップを更に含むことを特徴とする、請求項19または20に記載の測定デバイス。
- 1またはそれ以上の検査結果を前記測定デバイスの液晶ディスプレー上に数値形式またはグラフ形式で表示させることを特徴とする、請求項21に記載の測定デバイス。
- 1またそれ以上の検査結果が外部コンピューターまたはプリンターに転送されることを特徴とする、請求項22に記載の測定デバイス。
- 免疫クロマトグラフィーシステムの検査カセットのサンプルウェルに一滴の血液を滴下すること、
前記血液をサンプル適用パッドに移して、血漿を第1検査ストリップの第1複合パッドに通過させること、
前記血漿を前記第1複合パッド中の抗グリコアルブミン抗体でコーティングされた微粒子に結合させること、
血漿に結合し、抗グリコアルブミン抗体でコーティングされた微粒子を、前記複合パッドに通して、膜に結合した抗グリコアルブミン抗体の固定バンドまで移動させること、
前記微粒子を前記膜結合抗グリコアルブミン抗体に結合させて、可視的なバンドを生じさせること、
前記免疫クロマトグラフィーシステムの検査カセットを測定デバイスに挿入すること、
および、グリコアルブミンのレベルの数値結果を提供すること
を含む、ポイント・オブ・ケア・アッセイを用いたグリコアルブミンのモニタリングのための方法。 - 請求項24に記載のポイント・オブ・ケア・アッセイを用いたグリコアルブミンのモニタリングのための方法であって、さらに、
免疫クロマトグラフィーシステムの検査カセットのサンプルウェルに一滴の血液を滴下すること、
前記血液をサンプル適用パッドに移して、血漿を第1検査ストリップの第1複合パッドに通過させること、
前記血漿を前記第1複合パッド中の抗グリコアルブミン抗体でコーティングされた微粒子に結合させること、
血漿に結合した、抗グリコアルブミン抗体でコーティングされた微粒子を前記複合パッドに通して、膜に結合した抗グリコアルブミン抗体の固定バンドまで移動させること、
前記微粒子を前記膜結合抗グリコアルブミン抗体に結合させて、可視的なバンドを生じさせること、
前記免疫クロマトグラフィーシステムの検査カセットを測定デバイスに挿入すること、
および、グリコアルブミンのレベルの数値結果を提供すること
を含む、前記方法。 - ポイント・オブ・ケア・アッセイを用いたグリコアルブミンのモニター方法であって、前記グリコアルブミンレベルおよび前記全アルブミンレベルを用いてグリコアルブミンの割合を測定することを特徴とする、前記方法。
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