JP2009531054A - キナーゼインヒビターを含む培養培地およびその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
(1)GSK3のインヒビター;および
(2)MEKのインヒビター、
を含む培地中で該細胞を維持する工程を含む。
(1)GSK3のインヒビター;
(2)MEKのインヒビター;および
(3)FGFレセプターのアンタゴニスト、
を含む培地中で該細胞を維持する工程を含む。
必要に応じてフィーダー上で、培養物中でES細胞を多能性状態に維持する工程;
少なくとも1回該ES細胞を継代する工程;
該培地から血清または血清抽出物を除去しそして(存在する場合)該フィーダーを除去して、該培地がフィーダー、血清および血清抽出物を含まないようにする工程;および
続いて、GSK3のインヒビター、MEKインヒビターおよび必要に応じてFGFRアンタゴニストの存在下でES細胞を多能性状態に維持する工程。
選択マーカーをコードする構築物でES細胞をトランスフェクトする工程;
該ES細胞をプレートする工程;
MEKインヒビター、GSK3インヒビターおよび必要に応じてFGFRアンタゴニストの存在下で該ES細胞を培養する工程;および
該選択マーカーを発現する細胞を選択する工程、
を含む。
基本培地;
MEKインヒビター;
GSK3インヒビター;および
鉄トランスポーター;
を含み、ここで、該培地は、必要に応じて、血清および血清抽出物を含まない。
(1)胚盤胞を得る工程;
(2)MEKインヒビター、GSK3インヒビターおよび必要に応じてFGFレセプターのアンタゴニストの存在下で該胚盤胞を培養して、内部細胞塊を得る工程;
(3)該内部細胞塊を解離する工程;
(4)該解離した内部細胞塊から1または複数の細胞を単離する工程;および
(5)該単離した1または複数の細胞を、MEKインヒビター、GSK3インヒビターおよび必要に応じてFGFレセプターのアンタゴニストの存在下で培養する工程、
を含む。
必要に応じてフィーダー上で、培養物中でES細胞を多能性状態に維持する工程;
少なくとも1回該ES細胞を継代する工程;
培地から(存在する場合)血清または血清抽出物を除去しそして(存在する場合)該フィーダーを除去して、該培地がフィーダー、血清および血清抽出物を含まないようにする工程;および
続いて、MEKインヒビターおよびFGFレセプターのインヒビターの存在下でES細胞を多能性状態に維持する工程。
選択マーカーをコードする構築物でES細胞をトランスフェクトする工程;
該ES細胞をプレートする工程;
MEKインヒビターおよびFGFレセプターアンタゴニストの存在下で該ES細胞を培養する工程、および
該選択マーカーを発現する細胞を選択する工程、
を含む。
基本培地;
MEKインヒビター;
FGFレセプターのアンタゴニスト;および
鉄トランスポーター、
を含む。
(1)胚盤胞を得る工程;
(2)MEKインヒビターおよびFGFレセプターのアンタゴニストの存在下で該胚盤胞を培養して、内部細胞塊を得る工程;
(3)該内部細胞塊を解離する工程;
(4)該解離した内部細胞塊から1または複数の細胞を単離する工程;および
(5)該単離した1または複数の細胞を、MEKインヒビターおよびFGFレセプターのアンタゴニストの存在下で培養する工程、
を含む。
マウスおよびヒトES細胞を、特に明記のない限りN2B27培地を用いて、そしてGSK−3βインヒビターであるCHIR99021、AR−AO144−18、SB216763およびSB415286、ならびにMEKインヒビターであるPD184352の存在下または不在下で、種々の条件下で増殖させた。
N2 100×ストック溶液。10mlについて:1mlのインスリン(最終濃度2.5mg/ml)を1mlのアポトランスフェリン(最終濃度10mg/ml)、0.67mlのBSA(最終濃度5mg/ml)、33μlのプロゲステロン(最終濃度2μg/ml)、100μlのプトレシン(最終濃度1.6mg/ml)、10μlの亜セレン酸ナトリウム(最終濃度3μM)および7.187mlのDMEM/F12と混合する。4℃で貯蔵し、そして1カ月以内に使用する。
無血清培地中では、MEKインヒビター+GSK−3βインヒビターは、(1)N2B27培地、および(2)完全限定培地(DMEM/F12−N2)の両方で、マウスES細胞の自己再生を維持するのに十分であった(データは示さず)。ES細胞の自己再生は、MEKインヒビター、GSK−3βインヒビターおよびLIFを含む培地中でさらに改善された(データは示さず)。
PD184352(MEKのインヒビター)がES細胞中のNanogのレベルを増加させることが示された(データは示さず)。さらに、PD184352で処理されたNanog−/−ES細胞がES細胞の自己再生の増強を示さなくなることが示された。実際、これらの細胞は分化した(データは示さず)。これにより、PD184352によるES自己再生表現型の増強がNanogによって仲介されることが立証された。
ヒトES細胞を、GSK−3インヒビターであるCHIR99021およびMEKインヒビターであるPD184352を追加した培地で培養した。
マウスES細胞を、GSK−3インヒビターであるCHIR99021およびMEKインヒビターであるPD184352を追加した培地で培養した。
マウスおよびヒトES細胞を、CHIR99021、PD184352およびSU5402を含む培地で増殖させ、該培地は以下のように調製した:
DMEM/F12−N2培地の調製
100mlのDMEM/F12(Gibco 42400-010)に対して、1mlのN2 100×ストック溶液を添加する。DMEM/F12培地中のN2の各構成成分の最終濃度は:
インスリン 25μg/ml
プトレシン 16μg/ml
トランスフェリン 100μg/ml
亜セレン酸ナトリウム 30nM
プロゲステロン 6ng/ml
BSA 50μg/ml
である。
100mlのNeurobasal培地(Gibco 21103-049)に対して、2mlのB27(Gibco 17504-044)および1〜2M L−グルタミン(TC保存 1:100)を添加する。
DMEM/F12−N2培地をNeurobasal/B27培地と1:1の比で混合する。この培地を、すべての化合物の希釈および細胞の増殖に用いた。
マウスES細胞を、FGFレセプターのインヒビターおよびMEKインヒビターの存在下で培養した。選択的薬理学的インヒビターSU5402およびPD184352を、それぞれFGFレセプターチロシンキナーゼの阻害およびMEK1/2を経たErk1/2の活性化の阻害のために用いた。発明者らは、どちらのインヒビターの添加も、BMP4を供給することなく、LIFを含むN2B27培地中で強固にES細胞を増殖させるに十分であることを見出した(データは示さず)。未分化の培養物は、これらの条件において、多能性マーカーOct4、NanogおよびRex1の発現を保持しながら継続的に継代され得る。LIF+BMPで維持された培養物中よりもId遺伝子の発現がはるかに低いにも関わらず、神経への運命づけは生じていない。
発明者らは、2i培地中におけるES細胞の増殖の減少は、pErkの下流のRskによる阻害的リン酸化の解放の結果生じるグリコーゲン合成酵素キナーゼ3(GSK−3)活性の増加によるものであり得ると結論づけた。CHIR99021は、GSK−3の十分に特徴づけられた高選択性小分子インヒビターであり、これはGSK−3活性を完全にブロックする濃度でサイクリン依存性キナーゼ(CDK)と交差反応しない。発明者らは、血清存在下の培養物に添加した場合、CHIR99021(3μM)は、LIFの存在下であっても、実際に分化を促進することを見出した。無血清のN2B27培地中では、分化応答は減少し、そしていくつかのコロニーは、数日間、形態的に未分化であるように見える。しかし、継代した後、未分化細胞は生き残らない。同様の結果が、広く用いられる他の2つのGSK−3インヒビターであるSB216763およびSB415286でも、(どちらもES細胞にいくぶん有毒のようであったが)得られた。
培養処方物が十分にES細胞の自己再生を持続させるかに関する厳密な試験は、個々の細胞による未分化コロニーの形成である。単一細胞の堆積の後、N2B27+3i中のコロニー形成率は25%(98/384)であり、LIF+BMP(11%、23/192)よりも高い(データは示さず)。これらのコロニーはOct4−GFPを発現し、そして未分化ES細胞として継代可能である。したがって、MEKインヒビター、FGFレセプターのインヒビターおよびGSK3インヒビターを含む培地は、単一細胞に由来する未分化ES細胞コロニーの形成を持続させることが可能である。
発明者らは、3iが、胚から直接新たなES細胞を誘導する十分な能力を有したのか、あるいは確立した系の適応を反映したのかを検討した。許容的な129系統からの胚盤胞を、ゼラチンコートされたプラスチック上のN2B27+3i中に直接プレートし、5日間培養した。続く内部細胞塊の解離および再プレートの後、12個の胚のうち7個からES細胞コロニーが得られた。これらのうち3個を増殖させ、胚盤胞に注入した。すべてにおいて、キメリズムおよび生殖系列遺伝が高い比率で得られた(表2)。続いて、発明者らは、C57BL/6および非許容的なCBAおよびMF1系統から複数のES細胞を誘導し、3iが胚盤葉上層細胞からES細胞への移行を容易にすることを示した。発明者らは、3iが、発生能を選択または損失させることなく、外因性のLIFおよびBMP/血清の要求からES細胞を解放すると結論付ける。
Claims (71)
- MEKインヒビターおよびGSK3インヒビターを含む、培養培地。
- FGFレセプターのアンタゴニストをさらに含む、請求項1に記載の培養培地。
- 前記MEKインヒビターが、MEK1インヒビターである、請求項1または2に記載の培養培地。
- 前記MEKインヒビターが、PD184352およびPD98059から選択される、前記いずれかの請求項に記載の培養培地。
- 前記GSK3インヒビターが、GSK−3βのインヒビターである、前記いずれかの請求項に記載の培養培地。
- 前記GSK3インヒビターが、cdc2および/またはerk2よりもGSK3に対して選択性である、前記いずれかの請求項に記載の培養培地。
- 前記GSK3インヒビターが、cdc2よりもGSK3に対して少なくとも100倍選択性である、請求項6に記載の培養培地。
- 前記GSK3インヒビターが、cdc2よりもGSK3に対して少なくとも200倍選択性である、請求項6に記載の培養培地。
- 前記GSK3インヒビターが、CHIR99021である、前記いずれかの請求項に記載の培養培地。
- gp130アゴニストをさらに含む、前記いずれかの請求項に記載の培養培地。
- 前記gp130アゴニストが、LIF、CNTF、カルジオトロフィン、オンコスタチンM、IL−6+sIL−6レセプターまたはハイパーIL−6である、請求項10に記載の培養培地。
- 前記gp130アゴニストが、(a)LIF、(b)sIL−6RおよびIL−6、または(c)ハイパーIL−6である、請求項10に記載の培養培地。
- 前記FGFレセプターアンタゴニストが、FGFR1のアンタゴニストである、請求項2から12のいずれかに記載の培養培地。
- SU5402を含む、請求項13に記載の培養培地。
- PD173074を含む、請求項13に記載の培養培地。
- アポトーシスのインヒビターを含む、前記いずれかの請求項に記載の培養培地。
- N2培地および/またはB27培地を含む、前記いずれかの請求項に記載の培養培地。
- PD184352、CHIR99021およびSU5402を含む、前記いずれかの請求項に記載の培養培地。
- 前記いずれかの請求項に記載の、ヒトES培養培地。
- 請求項1から18のいずれかに記載の、マウスES細胞培養培地。
- 多能性細胞のための培養培地の製造におけるMEKインヒビターおよびGSK3インヒビターの使用。
- 多能性細胞のための培養培地の製造におけるMEKインヒビター、GSK3インヒビターおよびFGFレセプターのアンタゴニストの使用。
- 前記培地が、マウスES細胞の培養のためである、請求項21または22に記載の使用。
- 前記培地が、ヒトES細胞の培養のためである、請求項21または22に記載の使用。
- 前記培地が、ラット多能性細胞の培養のためである、請求項21または22に記載の使用。
- 自己再生を促進するための多能性細胞の培養方法であって、請求項1から18のいずれかに記載の培地中で該細胞を維持する工程を含む、方法。
- 前記培地が、血清を含まないおよび血清抽出物を含まない、請求項26に記載の方法。
- 前記細胞が、マウス細胞である、請求項26または27に記載の方法。
- 前記細胞が、ヒト細胞である、請求項26または27に記載の方法。
- 前記細胞が、ラット細胞である、請求項26または27に記載の方法。
- ES細胞の培養方法であって、以下の工程:
必要に応じてフィーダー上で、培養物中でES細胞を多能性状態に維持する工程;
少なくとも1回該ES細胞を継代する工程;
培地から(存在する場合)血清または血清抽出物を除去しそして(存在する場合)該フィーダーを除去し、該培地がフィーダー、血清および血清抽出物を含まないようにする工程;および
続いて、MEKインヒビターおよびGSK3インヒビターの存在下でES細胞を多能性状態に維持する工程、
を含む、方法。 - 前記細胞が、MEKインヒビター、GSKインヒビターおよびgp130下流シグナリング経路のアクチベーターの存在下で多能性状態に維持される、請求項31に記載の培養方法。
- 前記細胞が、MEKインヒビター、GSKインヒビターおよびFGFレセプターアンタゴニストの存在下で多能性状態に維持される、請求項31に記載の方法。
- 前記細胞が、マウス細胞である、請求項31から33のいずれかに記載の方法。
- 前記細胞が、ヒト細胞である、請求項31から33のいずれかに記載の方法。
- ES細胞のトランスフェクトされた集団を得る方法であって、
選択マーカーをコードする構築物でES細胞をトランスフェクトする工程;
該ES細胞をプレートする工程;
MEKインヒビターおよびGSK3インヒビターの存在下で該ES細胞を培養する工程;および
該選択マーカーを発現する細胞を選択する工程、
を含む、方法。 - 前記ES細胞が、MEKインヒビター、GSKインヒビターおよびgp130下流シグナリング経路のアクチベーターの存在下で培養される、請求項36に記載の方法。
- 前記ES細胞が、MEKインヒビター、GSKインヒビターおよびFGFレセプターアンタゴニストの存在下で培養される、請求項36に記載の方法。
- 前記細胞が、マウス細胞である、請求項36から38のいずれかに記載の方法。
- 前記細胞が、ヒト細胞である、請求項36から38のいずれかに記載の方法。
- 血清および血清抽出物を含まず、そして
基本培地;
MEKインヒビター;
GSK3インヒビター;および
鉄トランスポーター、
を含む、細胞培養培地。 - gp130下流シグナリング経路のアクチベーターをさらに含む、請求項41に記載の培養培地。
- FGFレセプターのアンタゴニストをさらに含む、請求項41または42に記載の培養培地。
- インスリン、アルブミンおよびトランスフェリンをさらに含む、請求項41から43のいずれかに記載の培養培地。
- アポトーシスのインヒビターをさらに含む、請求項41から44のいずれかに記載の培養培地。
- 胚盤胞から多能性細胞を誘導する方法であって、
(1)胚盤胞を得る工程;
(2)MEKインヒビターおよびGSK3インヒビターの存在下で該胚盤胞を培養して、内部細胞塊を得る工程;
(3)該内部細胞塊を解離する工程;
(4)該解離した内部細胞塊から1または複数の細胞を単離する工程;および
(5)該単離した1または複数の細胞を、MEKインヒビターおよびGSK3インヒビターの存在下で培養する工程、
を含む、方法。 - 前記単離した1または複数の細胞が、gp130下流シグナリングのアクチベーター、MEKインヒビターおよびGSK3インヒビターの存在下で培養される、請求項46に記載の方法。
- 前記単離した1または複数の細胞が、FGFレセプターのアンタゴニスト、MEKインヒビターおよびGSK3インヒビターの存在下で培養される、請求項46に記載の方法。
- 前記胚盤胞をLIF中で、2〜4日の期間に亘って培養する工程を含む、請求項46から48のいずれかに記載の方法。
- 第1の容器および第2の容器を含むキットであって、該第1の容器がGSK3インヒビターを含み、そして該第2の容器がMEKインヒビターを含む、キット。
- FGFレセプターのアンタゴニストを含む第3の容器をさらに含む、請求項50に記載のキット。
- 前記GSK3インヒビター、前記MEKインヒビターおよび前記FGFRアンタゴニストが、請求項3から9または13から15に定義される通りである、請求項37に記載のキット。
- gp130下流シグナリングのアクチベーターを含むさらなる容器を含む、請求項50から52のいずれかに記載のキット。
- 前記gp130アゴニストが、(a)LIF、(b)sIL−6RおよびIL−6、または(c)ハイパーIL−6である、請求項53に記載のキット。
- 多能性幹細胞の自己再生の促進におけるMEKインヒビターおよびGSK3インヒビターの使用。
- 多能性幹細胞の自己再生の促進におけるMEKインヒビター、GSK3インヒビターおよびFGFレセプターのアンタゴニストの使用。
- 幹細胞集団を増殖させる方法であって、MEKインヒビターおよびGSK3インヒビターの存在下で幹細胞を培養する工程を含む、方法。
- 幹細胞集団を増殖させる方法であって、MEKインヒビター、GSK3インヒビターおよびFGFレセプターのアンタゴニストの存在下で幹細胞を培養する工程を含む、方法。
- Nanogを発現している多能性幹細胞の自己再生の促進におけるMEKインヒビターおよびGSK3インヒビターの使用。
- Nanogを発現している多能性幹細胞の自己再生の促進におけるMEKインヒビター、GSK3インヒビターおよびFGFレセプターのアンタゴニストの使用。
- MEKインヒビターおよびFGFレセプターのアンタゴニストを含む、培養培地。
- 多能性細胞のための培養培地の製造におけるMEKインヒビターおよびFGFレセプターのアンタゴニストの使用。
- 自己再生を促進するための多能性細胞の培養方法であって、MEKインヒビターおよびFGFレセプターのアンタゴニストを含む培地中で該細胞を維持する工程を含む、方法。
- ES細胞の培養方法であって、以下の工程:
必要に応じてフィーダー上で、培養物中でES細胞を多能性状態に維持する工程;
少なくとも1回該ES細胞を継代する工程;
培地から(存在する場合)血清または血清抽出物を除去しそして(存在する場合)該フィーダーを除去し、該培地がフィーダー、血清および血清抽出物を含まないようにする工程;および
続いて、MEKインヒビターおよびFGFレセプターのインヒビターの存在下でES細胞を多能性状態に維持する工程、
を含む、方法。 - ES細胞のトランスフェクトされた集団を得る方法であって、
選択マーカーをコードする構築物でES細胞をトランスフェクトする工程;
該ES細胞をプレートする工程;
MEKインヒビターおよびFGFレセプターアンタゴニストの存在下で該ES細胞を培養する工程;および
該選択マーカーを発現する細胞を選択する工程、
を含む、方法。 - 血清および血清抽出物を含まず、そして
基本培地;
MEKインヒビター;
FGFレセプターのアンタゴニスト;および
鉄トランスポーター、
を含む、細胞培養培地。 - 胚盤胞から多能性細胞を誘導する方法であって、
(1)胚盤胞を得る工程;
(2)MEKインヒビターおよびFGFレセプターのアンタゴニストの存在下で該胚盤胞を培養して、内部細胞塊を得る工程;
(3)該内部細胞塊を解離する工程;
(4)該解離した内部細胞塊から1または複数の細胞を単離する工程;および
(5)該単離した1または複数の細胞を、MEKインヒビターおよびFGFレセプターのアンタゴニストの存在下で培養する工程、
を含む、方法。 - 第1の容器および第2の容器を含むキットであって、該第1の容器がMEKインヒビターを含み、そして該第2の容器がFGFレセプターのアンタゴニストを含み、
該キットが、本明細書に記載される他の容器および/または構成成分もまた含み得る、キット。 - 多能性幹細胞の自己再生の促進におけるMEKインヒビターおよびFGFレセプターのアンタゴニストの使用。
- Nanogを発現している多能性幹細胞の自己再生の促進におけるMEKインヒビターおよびFGFレセプターのアンタゴニストの使用。
- 幹細胞集団を増殖させる方法であって、MEKインヒビターおよびFGFレセプターのアンタゴニストの存在下で幹細胞を培養する工程を含む、方法。
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Cited By (6)
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JPWO2011125948A1 (ja) * | 2010-04-02 | 2013-07-11 | 独立行政法人理化学研究所 | Es細胞の製造方法 |
KR20150141987A (ko) * | 2013-04-16 | 2015-12-21 | 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 랫트 게놈의 표적화된 변형 |
JP2016507250A (ja) * | 2013-02-20 | 2016-03-10 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドRegeneron Pharmaceuticals, Inc. | ラットの遺伝子組換え |
JP2016127849A (ja) * | 2010-06-13 | 2016-07-14 | インスティチュート・オブ・バイオフィジックス,チャイニーズ・アカデミー・オブ・サイエンシズ | 幹細胞から心筋細胞を調製するための方法および組成物ならびにその使用 |
JP2016537971A (ja) * | 2013-10-25 | 2016-12-08 | エイジェンシー・フォー・サイエンス,テクノロジー・アンド・リサーチ | 多能性幹細胞の培養 |
US11339371B2 (en) | 2012-07-23 | 2022-05-24 | Institute Of Biophysics, Chinese Academy Of Sciences | Method for inducing pluripotent stem cells to differentiate into ventricular myocytes in vitro |
Families Citing this family (42)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB0615327D0 (en) * | 2006-03-30 | 2006-09-13 | Univ Edinburgh | Culture medium containing kinase inhibitors and uses thereof |
EP3078738B1 (en) | 2007-08-31 | 2020-05-20 | Whitehead Institute for Biomedical Research | Wnt pathway stimulation in reprogramming somatic cells |
EP2250252A2 (en) * | 2008-02-11 | 2010-11-17 | Cambridge Enterprise Limited | Improved reprogramming of mammalian cells, and the cells obtained |
CA2718904C (en) | 2008-03-17 | 2017-01-03 | The Scripps Research Institute | Combined chemical and genetic approaches for generation of induced pluripotent stem cells |
GB2460552B (en) * | 2008-06-05 | 2011-09-07 | Iti Scotland Ltd | Stem cell culture media and methods |
US8278105B2 (en) * | 2008-09-09 | 2012-10-02 | University Of Southern California | Induction, propagation and isolation of liver progenitor cells |
CN104130976A (zh) * | 2008-12-17 | 2014-11-05 | 斯克里普斯研究所 | 干细胞的产生和保持 |
WO2010096496A2 (en) | 2009-02-17 | 2010-08-26 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Methods of neural conversion of human embryonic stem cells |
US20110088107A1 (en) * | 2009-04-24 | 2011-04-14 | Yaqub Hanna | Compositions and methods for deriving or culturing pluripotent cells |
CA3091210C (en) | 2009-10-16 | 2023-04-04 | The Scripps Research Institute | Induction of pluripotent cells |
JP5898086B2 (ja) * | 2009-11-04 | 2016-04-06 | セルラー ダイナミクス インターナショナル, インコーポレイテッド | 化学物質を用いるエピソームリプログラミング |
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WO2011081222A1 (ja) * | 2009-12-29 | 2011-07-07 | 武田薬品工業株式会社 | 膵ホルモン産生細胞の製造法 |
CN105176930B (zh) | 2010-03-31 | 2021-05-04 | 斯克里普斯研究所 | 重编程细胞 |
EP3578988A1 (en) * | 2010-05-25 | 2019-12-11 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Method of nociceptor differentiantion of human embryonic stem cells and uses thereof |
WO2011159726A2 (en) | 2010-06-14 | 2011-12-22 | The Scripps Research Institute | Reprogramming of cells to a new fate |
EP2582794B2 (en) | 2010-06-15 | 2024-04-24 | FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. | Generation of induced pluripotent stem cells from small volumes of peripheral blood |
WO2012087965A2 (en) | 2010-12-22 | 2012-06-28 | Fate Therapauetics, Inc. | Cell culture platform for single cell sorting and enhanced reprogramming of ipscs |
EP2732029B1 (en) | 2011-07-11 | 2019-01-16 | FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. | Methods for cell reprogramming and genome engineering |
PT2773748T (pt) | 2011-11-04 | 2020-03-26 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Neurónios dopaminérgicos (da) do mesencéfalo para enxerto |
WO2013109142A1 (en) | 2012-01-16 | 2013-07-25 | Stichting Het Nederlands Kanker Instituut | Combined pdk and mapk/erk pathway inhibition in neoplasia |
WO2013145331A1 (ja) * | 2012-03-27 | 2013-10-03 | 株式会社トランスジェニック | ヒト化マウス |
US10920192B2 (en) | 2013-04-23 | 2021-02-16 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Isolated naive pluripotent stem cells and methods of generating same |
WO2014176606A1 (en) | 2013-04-26 | 2014-10-30 | Memorial Sloan-Kettering Center Center | Cortical interneurons and other neuronal cells produced by the directed differentiation of pluripotent and multipotent cells |
SG11201510238TA (en) | 2013-06-14 | 2016-01-28 | Univ Queensland | Renal progenitor cells |
EP3046557A1 (en) | 2013-09-20 | 2016-07-27 | Stichting Het Nederlands Kanker Instituut | Rock in combination with mapk-pathway |
WO2015041534A1 (en) | 2013-09-20 | 2015-03-26 | Stichting Het Nederlands Kanker Instituut | P90rsk in combination with raf/erk/mek |
RU2685914C1 (ru) | 2013-12-11 | 2019-04-23 | Регенерон Фармасьютикалс, Инк. | Способы и композиции для направленной модификации генома |
PT3114214T (pt) | 2014-03-04 | 2024-01-03 | Fate Therapeutics Inc | Métodos de reprogramação melhorados e plataformas de cultura celular |
WO2015147047A1 (ja) * | 2014-03-26 | 2015-10-01 | 国立大学法人京都大学 | 多能性幹細胞培養用培地 |
WO2015156674A2 (en) | 2014-04-10 | 2015-10-15 | Stichting Het Nederlands Kanker Instituut | Method for treating cancer |
WO2015178770A1 (en) | 2014-05-19 | 2015-11-26 | Stichting Het Nederlands Kanker Instituut | Compositions for cancer treatment |
US11920164B2 (en) | 2014-07-30 | 2024-03-05 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Media for culturing naive human pluripotent stem cells |
CN107075472A (zh) | 2014-08-22 | 2017-08-18 | 剑桥企业有限公司 | 重置多能干细胞 |
WO2016055519A1 (en) * | 2014-10-07 | 2016-04-14 | Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin | Endogenous retrovirus transcription as a marker for primate naïve pluripotent stem cells |
US10428310B2 (en) * | 2014-10-15 | 2019-10-01 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for generating or maintaining pluripotent cells |
CN105002134B (zh) * | 2015-07-24 | 2018-08-17 | 北京大学 | 制备多潜能干细胞的组合物、方法、试剂盒及其用途 |
US11441126B2 (en) | 2015-10-16 | 2022-09-13 | Fate Therapeutics, Inc. | Platform for the induction and maintenance of ground state pluripotency |
AU2016343682A1 (en) | 2015-10-30 | 2018-06-14 | The Regents Of The University Of California | Methods of generating T-cells from stem cells and immunotherapeutic methods using the T-cells |
JP2019537729A (ja) | 2016-09-28 | 2019-12-26 | オルガノボ インコーポレイテッド | アッセイにおける人工腎臓組織の使用 |
MX2020005668A (es) | 2017-11-30 | 2020-11-24 | Univ Kyoto | Metodo de cultivo de celulas. |
WO2020262531A1 (ja) * | 2019-06-26 | 2020-12-30 | 国立研究開発法人理化学研究所 | 原始内胚葉幹細胞誘導剤 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005039486A2 (en) * | 2003-08-28 | 2005-05-06 | Irm Llc | Compounds and compositions as protein kinase inhibitors |
WO2005094830A1 (en) * | 2004-03-30 | 2005-10-13 | Pfizer Products Inc. | Combinations of signal transduction inhibitors |
Family Cites Families (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB9308271D0 (en) | 1993-04-21 | 1993-06-02 | Univ Edinburgh | Method of isolating and/or enriching and/or selectively propagating pluripotential animal cells and animals for use in said method |
AU7677894A (en) | 1993-08-30 | 1995-03-22 | Northwestern University | Rat pluripotent embryonic stem cells and method of obtaining and using same |
US6271436B1 (en) | 1996-10-11 | 2001-08-07 | The Texas A & M University System | Cells and methods for the generation of transgenic pigs |
US6214795B1 (en) * | 1996-11-12 | 2001-04-10 | Praecis Pharmaceuticals, Inc. | Peptide compounds useful for modulating FGF receptor activity |
WO1999027076A1 (en) | 1997-11-25 | 1999-06-03 | Arc Genomic Research | Pluripotent embryonic stem cells and methods of obtaining them |
GB9819912D0 (en) * | 1998-09-11 | 1998-11-04 | Univ Edinburgh | Propagation and/or derivation of embryonic stem cells |
US7455983B2 (en) * | 2000-01-11 | 2008-11-25 | Geron Corporation | Medium for growing human embryonic stem cells |
US20020045260A1 (en) * | 2000-10-17 | 2002-04-18 | Shih-Chieh Hung | Method of isolating mesenchymal stem cells |
DE60301953T2 (de) | 2002-03-05 | 2006-07-27 | Artemis Pharmaceuticals Gmbh | Durch inzucht erzeugte von embryonalen stammzellen abgeleitete mäuse |
GB0210539D0 (en) | 2002-05-08 | 2002-06-19 | Univ Edinburgh | Control of es cell self renewal and lineage specification, and medium therefor |
JP4862119B2 (ja) | 2004-03-04 | 2012-01-25 | 大日本住友製薬株式会社 | ラット胚性幹細胞 |
WO2005110438A2 (en) * | 2004-04-15 | 2005-11-24 | Massachusetts Institute Of Technology | Methods and products related to the intracellular delivery of polysaccharides |
WO2006026473A2 (en) | 2004-08-25 | 2006-03-09 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | METHODS AND COMPOSITIONS UTILIZING MYC AND GSK3ß TO MANIPULATE THE PLURIPOTENCY OF EMBRYONIC STEM CELLS |
CA2610598A1 (en) | 2005-06-10 | 2006-12-21 | Irm Llc | Compounds that maintain pluripotency of embryonic stem cells |
DE602006009965D1 (de) | 2005-11-28 | 2009-12-03 | Choongwae Pharma Corp | Serumfreie expansion von zellen in kultur |
GB0615327D0 (en) | 2006-03-30 | 2006-09-13 | Univ Edinburgh | Culture medium containing kinase inhibitors and uses thereof |
JP2009537520A (ja) * | 2006-05-15 | 2009-10-29 | アイアールエム・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー | Fgf受容体キナーゼ阻害剤のための組成物および方法 |
-
2007
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-
2008
- 2008-08-17 IL IL193495A patent/IL193495A0/en unknown
-
2009
- 2009-10-20 US US12/581,981 patent/US20100041137A1/en not_active Abandoned
-
2013
- 2013-01-24 JP JP2013011454A patent/JP5728036B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005039486A2 (en) * | 2003-08-28 | 2005-05-06 | Irm Llc | Compounds and compositions as protein kinase inhibitors |
WO2005094830A1 (en) * | 2004-03-30 | 2005-10-13 | Pfizer Products Inc. | Combinations of signal transduction inhibitors |
Non-Patent Citations (8)
Title |
---|
JPN6012037326; J.Biol.Chem. Vol.275, No.25, 2000, p.19192-19197 * |
JPN6013048615; 蛋白質核酸酵素 Vol.49, No.6, 2004, p.704-709 * |
JPN6013048616; BMC Molecular Biology Vol.5:15, 2004 * |
JPN6013048617; Diabetes Vol.52, 2003, p.588-595 * |
JPN6013048618; J.Biol.Chem. Vol.277, No.34, 2002, p.30998-31004 * |
JPN6013048621; 蛋白質核酸酵素 Vol.50, No.6, 2005, p.546-550 * |
JPN6013048623; 細胞工学 Vol.23, No.11, 2004, p.1260-1263 * |
JPN6014023224; Dev. Biol. Vol.210, No.1, 1999, p.30-43 * |
Cited By (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPWO2011125948A1 (ja) * | 2010-04-02 | 2013-07-11 | 独立行政法人理化学研究所 | Es細胞の製造方法 |
JP2016063841A (ja) * | 2010-04-02 | 2016-04-28 | 国立研究開発法人理化学研究所 | Es細胞の製造方法 |
JP2016127849A (ja) * | 2010-06-13 | 2016-07-14 | インスティチュート・オブ・バイオフィジックス,チャイニーズ・アカデミー・オブ・サイエンシズ | 幹細胞から心筋細胞を調製するための方法および組成物ならびにその使用 |
US10590386B2 (en) | 2010-06-13 | 2020-03-17 | Insitute Of Biophysics, Chinese Academy Of Sciences | Methods and compositions for preparing cardiomyocytes from stem cells and uses thereof |
US11339371B2 (en) | 2012-07-23 | 2022-05-24 | Institute Of Biophysics, Chinese Academy Of Sciences | Method for inducing pluripotent stem cells to differentiate into ventricular myocytes in vitro |
JP2016507250A (ja) * | 2013-02-20 | 2016-03-10 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドRegeneron Pharmaceuticals, Inc. | ラットの遺伝子組換え |
KR20150141987A (ko) * | 2013-04-16 | 2015-12-21 | 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 랫트 게놈의 표적화된 변형 |
JP2016515401A (ja) * | 2013-04-16 | 2016-05-30 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドRegeneron Pharmaceuticals, Inc. | ラットゲノムの標的改変 |
KR102186281B1 (ko) * | 2013-04-16 | 2020-12-03 | 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 랫트 게놈의 표적화된 변형 |
JP2016537971A (ja) * | 2013-10-25 | 2016-12-08 | エイジェンシー・フォー・サイエンス,テクノロジー・アンド・リサーチ | 多能性幹細胞の培養 |
Also Published As
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---|---|
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