JP2009519317A - カチオン性オリゴヌクレオチド、同ヌクレオチドの自動調製法およびそれらの使用 - Google Patents
カチオン性オリゴヌクレオチド、同ヌクレオチドの自動調製法およびそれらの使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2009519317A JP2009519317A JP2008545144A JP2008545144A JP2009519317A JP 2009519317 A JP2009519317 A JP 2009519317A JP 2008545144 A JP2008545144 A JP 2008545144A JP 2008545144 A JP2008545144 A JP 2008545144A JP 2009519317 A JP2009519317 A JP 2009519317A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- oligonucleotide
- oligocation
- prot
- sequence
- lower alkylene
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 title claims abstract description 89
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 title claims abstract description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 15
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 34
- PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N spermine Chemical group NCCCNCCCCNCCCN PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 72
- 229940063675 spermine Drugs 0.000 claims abstract description 32
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 claims abstract description 21
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 claims abstract description 20
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N putrescine Chemical group NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N spermidine Chemical group NCCCCNCCCN ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 239000005700 Putrescine Substances 0.000 claims abstract description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 229940063673 spermidine Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims abstract description 5
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims abstract description 5
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 claims abstract description 5
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims abstract description 5
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims abstract description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims abstract description 5
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims abstract description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract 3
- SKWCZPYWFRTSDD-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(azaniumyl)propanoate;chloride Chemical compound Cl.NCC(N)C(O)=O SKWCZPYWFRTSDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 32
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 30
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 13
- -1 pyrrolidino, piperidino Chemical group 0.000 claims description 13
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 9
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 9
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 9
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 8
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 8
- 150000002009 diols Chemical class 0.000 claims description 7
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 claims description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 5
- 125000004573 morpholin-4-yl group Chemical group N1(CCOCC1)* 0.000 claims description 4
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 claims description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 238000012856 packing Methods 0.000 claims description 3
- 238000000018 DNA microarray Methods 0.000 claims description 2
- 150000001414 amino alcohols Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 2
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 claims description 2
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 claims description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 claims 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 abstract description 8
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 abstract description 8
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 2
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine Chemical compound ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 abstract 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 11
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 11
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 10
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 10
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 10
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 10
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 10
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 9
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 125000002103 4,4'-dimethoxytriphenylmethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)(C1=C([H])C([H])=C(OC([H])([H])[H])C([H])=C1[H])C1=C([H])C([H])=C(OC([H])([H])[H])C([H])=C1[H] 0.000 description 8
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 8
- 238000011160 research Methods 0.000 description 8
- QAEDZJGFFMLHHQ-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic anhydride Chemical compound FC(F)(F)C(=O)OC(=O)C(F)(F)F QAEDZJGFFMLHHQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 7
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 7
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 6
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 101100297345 Caenorhabditis elegans pgl-2 gene Proteins 0.000 description 5
- 101100297347 Caenorhabditis elegans pgl-3 gene Proteins 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 5
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- KXDAEFPNCMNJSK-UHFFFAOYSA-N Benzamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CC=C1 KXDAEFPNCMNJSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 4
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 4
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 4
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 4
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 4
- PECYZEOJVXMISF-UHFFFAOYSA-N 3-aminoalanine Chemical compound [NH3+]CC(N)C([O-])=O PECYZEOJVXMISF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SXIFAEWFOJETOA-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxy-butyl Chemical group [CH2]CCCO SXIFAEWFOJETOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 3
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 3
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 125000004044 trifluoroacetyl group Chemical group FC(C(=O)*)(F)F 0.000 description 3
- JBWYRBLDOOOJEU-UHFFFAOYSA-N 1-[chloro-(4-methoxyphenyl)-phenylmethyl]-4-methoxybenzene Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C(Cl)(C=1C=CC(OC)=CC=1)C1=CC=CC=C1 JBWYRBLDOOOJEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KMEMIMRPZGDOMG-UHFFFAOYSA-N 2-cyanoethoxyphosphonamidous acid Chemical compound NP(O)OCCC#N KMEMIMRPZGDOMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 2
- 208000002109 Argyria Diseases 0.000 description 2
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical group NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 2
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N Pentane Chemical compound CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910004298 SiO 2 Inorganic materials 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 2
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 229910003460 diamond Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 2
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 238000001254 matrix assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 2
- 235000011837 pasties Nutrition 0.000 description 2
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 2
- XKJCHHZQLQNZHY-UHFFFAOYSA-N phthalimide Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NC(=O)C2=C1 XKJCHHZQLQNZHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- ILMRJRBKQSSXGY-UHFFFAOYSA-N tert-butyl(dimethyl)silicon Chemical compound C[Si](C)C(C)(C)C ILMRJRBKQSSXGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PGAPATLGJSQQBU-UHFFFAOYSA-M thallium(i) bromide Chemical compound [Tl]Br PGAPATLGJSQQBU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(2-ethylhexyl) sulfosuccinate Chemical compound CCCCC(CC)COC(=O)CC(S(O)(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 0 CCC(C)(*)CCCC[N+](CCC[N+](CC=CCCCCCC*CCCCO[P@@](O)(OC(C)(C)C)=O)[O-])[O-] Chemical compound CCC(C)(*)CCCC[N+](CCC[N+](CC=CCCCCCC*CCCCO[P@@](O)(OC(C)(C)C)=O)[O-])[O-] 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- MGPYJVWEJNTXLC-UHFFFAOYSA-N [6-[6-[2-cyanoethoxy-[di(propan-2-yl)amino]phosphanyl]oxyhexylcarbamoyl]-6'-(2,2-dimethylpropanoyloxy)-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-3'-yl] 2,2-dimethylpropanoate Chemical compound C12=CC=C(OC(=O)C(C)(C)C)C=C2OC2=CC(OC(=O)C(C)(C)C)=CC=C2C11OC(=O)C2=CC=C(C(=O)NCCCCCCOP(N(C(C)C)C(C)C)OCCC#N)C=C21 MGPYJVWEJNTXLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- XMQFTWRPUQYINF-UHFFFAOYSA-N bensulfuron-methyl Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1CS(=O)(=O)NC(=O)NC1=NC(OC)=CC(OC)=N1 XMQFTWRPUQYINF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- CLNQLMBYYQGUIL-UHFFFAOYSA-N chloro-[(4-cyano-2-methylbutan-2-yl)-propan-2-ylamino]oxyphosphinous acid Chemical compound OP(Cl)ON(C(C)C)C(C)(C)CCC#N CLNQLMBYYQGUIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010549 co-Evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008045 co-localization Effects 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 239000013058 crude material Substances 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000007730 finishing process Methods 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QEWYKACRFQMRMB-UHFFFAOYSA-N fluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)CF QEWYKACRFQMRMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000000215 hyperchromic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000002892 organic cations Chemical class 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- NFHFRUOZVGFOOS-UHFFFAOYSA-N palladium;triphenylphosphane Chemical compound [Pd].C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 NFHFRUOZVGFOOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 108010011110 polyarginine Proteins 0.000 description 1
- 231100000683 possible toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 239000012312 sodium hydride Substances 0.000 description 1
- 229910000104 sodium hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- INGJYKISFRSCQV-UHFFFAOYSA-N tert-butyl-(4-iodobutoxy)-dimethylsilane Chemical compound CC(C)(C)[Si](C)(C)OCCCCI INGJYKISFRSCQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 150000005671 trienes Chemical class 0.000 description 1
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 230000002747 voluntary effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
- C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
- C07F9/22—Amides of acids of phosphorus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
- A61K48/0025—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid
- A61K48/0041—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid the non-active part being polymeric
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/88—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation using microencapsulation, e.g. using amphiphile liposome vesicle
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Description
Aiは、i mer(i個)のオリゴヌクレオチド残基であり、i=5〜50であり、ヌクレオチドAは、天然または非天然に生じた核酸塩基および/またはペンタフラノシル基および/または生来のホスホジエステル結合を有するオリゴマーであり、
Bjは、j merの有機オリゴカチオン部分であり、j=1〜50であり、Bは、
・ -HPO3-R1-(X-R2 n)n1-X-R3-O-(ここで、R1、R2 nおよびR3は、同一または異なって、低級アルキレンであり、Xは、NHまたはNC(NH2)2であり、nは1〜5であり、n1は2〜20である)、
・ -HPO3-R4-CH(R5X1)-R6-O-(ここで、R4は低級アルキレンであり、R5およびR6は、同一または異なって、低級アルキレンであり、X1は、プトレッシン、スペルミジンまたはスペルミン残基である)、
・ -HPO3-R7-(aa)n2-R8-O-(ここで、R7は低級アルキレンであり、R8は低級アルキレン、セリン、天然アミノアルコールであり、(aa)n2は、カチオン性側鎖を有する天然アミノ酸(例えば、アルギニン、リシン、オルニチン、ヒスチジン、ジアミノプロピオン酸)を含むペプチドであり、n2=2〜20である)
を含む基から選択される。
(3’A5)i−[PO3 −−(CH2)4−NH2 +−(CH2)3−NH2 +−(CH2)4−NH2 +−(CH2)3−NH2 +−(CH2)4−O]jH
式中、A、iおよびjは、上記定義の通りである。
− 活性化されかつ保護されたオリゴカチオンBを含むバイアルを、上記規定のようなオリゴヌクレオチドAのバイアルに加えて、またはその逆のようにしてオリゴヌクレオチド合成機に詰める工程と、
− 所望の長さが得られた時に合成を停止させる工程と、
− 固体担体からオリゴマーを開裂させる工程と、
− 保護基を除去する工程と
を包含する方法に従って段階的に合成される。
・P(OR9)(N(R10)2)-O-R1-(X-R2 n)n1-X-R3-O-Prot(ここで、R1、R2、R3、nおよびn1は、上記定義の通りであり、Xは、適切に保護されたNHまたはNC(NH2)2であり、R9は−CH2CH2CNまたは低級アルキルであり、R10が低級アルキルであるかまたは−N(R10)2がピロリジノ、ピペリジノまたはモルホリノ基であり、Protは、オリゴヌクレオチド合成において用いられる保護基、例えば、DMT、MMTである);
・P(OR9)(N(R10)2)-O-R4-CH(R5X1)-R6-O-Prot(ここで、R4、R5、R6は低級アルキレンであり、X1は適切に保護されたプトレッシン、スペルミジンまたはスペルミンであり、R9およびR10は上記の定義通りである);
・P(OR9)(N(R10)2)-O-R7-(aa)n2 -R8-O-Prot(ここで、R7、R8、R9、R10、n2およびProtは、上記定義の通りであり、(aa)n2は、適切に保護されたカチオン性側鎖を有する天然アミノ酸(例えば、アルギニン、リシン、オルニチン、ヒスチジン、ジアミノプロピオン酸)を含むペプチドであり、n2=2〜20である)。
・P(OR9)(N(R10)2)-O-R1-(X-R2 n)n1-XR3-O-Prot(ここで、R1、R2、R3、nおよびn1は上記に定義された通りであり、Xは適切に保護されたNHまたはNC(NH2)2であり、R9は−CH2CH2CNまたは低級アルキルであり、R10は低級アルキルであるかまたは−N(R10)2はピロリジノ、ピペリジノまたはモルホリノ基であり、Protは、オリゴヌクレオチド合成において用いられる保護基、例えばDMT、MMTである);
・P(OR9)(N(R10)2)-O-R4-CH(R5X1)-R6-O-Prot(ここで、R4、R5、R6は低級アルキレンであり、X1は適切に保護されたプトレッシン、スペルミジンまたはスペルミンであり、R9およびR10は上記に定義された通りである);
・P(OR9)(N(R10)2)-O-R7-(aa)n2 -R8-O-Prot(ここで、R7、R8、R9、R10、n2およびProtは上記に定義された通りであり、(aa)n2は、適切に保護されたカチオン性側鎖を有する天然アミノ酸、例えば、アルギニン、リシン、オルニチン、ヒスチジン、ジアミノプロピオン酸を含むペプチドであり、n2=2〜20である)。
テトラキス(メシチルスルホニル)スペルミン2は、スペルミンから調製されるものであり、このものはビスアルキル化されて3を得た。酢酸条件中での3の完全な脱保護の後、粗ビス(C4−OH)スペルミン・テトラヒドロブロミド4は、ピリジン中の無水トリフルオロ酢酸によって完全に保護され、次いで、5の2つの末端エステル基は、中性条件下に加水分解されてジオール体6を得た。1モル当量のDMTCl試薬を用いる統計的方法で5のモノトリチル化が行われ、43%の収率で7を得た。未反応のジオール体6およびビス・トリチル化合物8が回収され、中程度の酸条件(ジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸)下、再平衡に達しさせられ、7を得た。7のホスファイト化により、所望のホスホロアミダイト1を得た。
N1,N12−ビス(4−ヒドロキシブチル)スペルミン・テトラヒドロブロミド(4):酢酸中の臭化水素(33重量%溶液,80mL,1.4mol)が、3(9.87g,7.57mmol)およびフェノール(29.0g,0.31mol,40当量)のCH2Cl2溶液(80mL)に滴下された。反応混合物は、室温で終夜攪拌された。氷浴により冷却した際に、冷水(100mL)が、攪拌しながら加えられた。有機層が分けられ、水(20mL)により3回抽出された。水層が合わせられ、このものは、CH2Cl2(30mL)により5回洗浄され、乾燥するまで溶媒留去させられた。得られた湿気を有する固体残渣は、エーテル中に懸濁させられ、スパーテルにより粉砕され、上澄みエーテル層は廃棄された。これらの操作は、固体懸濁液が得られるまで繰り返された(5回)。溶媒留去および真空乾燥の後、化合物4が固体として得られた(5.32g)。この粗物質は、さらなる精製なしで用いられた:1H NMR (300 MHz, D2O): δ = 1.75-2.10 (m, 12 H), 2.27 (m, 4 H), 3.15-3.35 (m, 16 H), 3.76 (t, J = 12.2 Hz, 4 H). 13C NMR (75 MHz, D2O): δ = 22.9, 23.2, 23.4, 29.0, 45.0, 45.2, 47.7, 48.3, 61.5. MS-ESI (MeOH): m/z = 347.39 [M + H]+.
N1,N12−ビス(4−(トリフルオロアセトキシ)ブチル)−N1,N4,N9,N12−テトラキス(トリフルオロアセチル)スペルミン(5)(4からTFA2O/NEt3により):4(5.3g,7.6mmol)のCH2Cl2懸濁液(50mL)に、トリエチルアミン(11.5g,114mmol、15当量)が、一度に加えられた。混合物は、氷浴で冷却され、無水トリフルオロ酢酸(19.1g、90.9mmol,12当量)がN2下に攪拌しながら滴下された。混合物は、室温で3.5時間にわたって攪拌された。氷浴による冷却後、得られた溶液は、冷水(20mL)により3回洗浄され、MgSO4で乾燥させられ、次いで、溶媒留去されて、油状残渣(11.7g)を得、この油状残渣は、この反応の二次生成物として(TFA)2C=CH−NEt2を含有する(参照;Schreber, S. L., Tetrahedron Lett. 1980, 21, 1027)。これは、2回の連続するフラッシュ・クロマトグラフィー(溶離液1:1−60:40 AcOEt:シクロヘキサン、次いで、5〜10%Et2O/CH2Cl2)によって除去され、5(5.59g,81%)を油状物として得た:TLC(AcOEt/シクロヘキサン 1:1);Rf = 0.25. IR (KRS-5): 2955, 1789, 1690, 1467, 1352, 1197, 1147, 759, 731, 692 cm-1. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ = 1.52-2.06 (m, 16 H), 3.33-3.49 (m, 16 H), 3.38 (m, 4 H). 13C NMR (75 MHz, CDCl3): このスペクトルは、4つのアミド基の回転異性体によって複雑化されている。高強度の共鳴シグナルのみが以下のように記載される:δ = 23.3, 23.9, 24.1, 24.8, 25.3, 25.6, 26.0, 26.55, 26.61, 44.4, 44.8, 45.7, 46.1, 46.4, 47.3, 48.0, 56.6, 67.3, 67.5, 116.6 (q, J = 288 Hz), 156.9, 157.4, 157.8, 158.6.
N1,N12−ビス(4−ヒドロキシブチル)−N1,N4,N9,N12−テトラキス(トリフルオロアセチル)スペルミン(6):5(5.39g,5.84mmol)のMeOH溶液(50mL)に、NaHCO3(0.1g,固体)が一度に加えられ、得られた懸濁液は、2時間にわたって室温で攪拌された。溶媒留去の後、油状残渣は、CH2Cl2に溶解させられ(若干繊維質のNaHCO3)の懸濁液を与える)、5〜10% MeOH/CH2Cl2により溶離するフラッシュ・クロマトグラフィーによって精製され、3.61g(85%)の6を油状物として得た:TLC(MeOH5%/CH2Cl2):Rf=0.14(MeOH10%/CH2Cl2):Rf=0.45.1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ= 1.51-2.02 (m, 18 H), 3.33-3.51 (m, 16 H), 3.68 (m, 4 H). MS-ESI (MeOH): m/z = 753.33 [M + Na]+. C26H38F12N4O6・H2O (Mw = 748.60) 計算値 C 41.72, H 5.39, N 7.48, F 30.45; 実測値C 41.97, H 5.26, N 7.37, F 30.14.
4からの6の調製(TFA2O/ピリジン、次いでNaHCO3による):4(15.3g,22.8mmol)のCH2Cl2(100mL)およびピリジン(44mL,0.54mmol)の懸濁液に、無水トリフルオロ酢酸(46mL,0.33mol)が、氷浴で冷却しながらおよびN2下に攪拌しながら滴下された。混合物は、室温で3時間にわたって攪拌された。過剰の無水トリフルオロ酢酸が、氷浴で冷却しながら冷水(100mL)を添加することによって分解され、次いで、得られた溶液は、CH2Cl2により抽出された(4回100mL+50mL+25mL×2)。抽出物を合わせ、このものは、冷水により洗浄され(50mL×3)、MgSO4で乾燥させられ、次いで、溶媒が留去されて、粗生成物5を油状物として得た(19.4g,92%)。この油状物は、MeOH(100mL)に溶解させられた。NaHCO3(固体,0.1g)が加えられ、懸濁液は、終夜攪拌された。溶媒を留去した後、残渣は、フラッシュ・クロマトグラフィーによって、溶離液として5〜7% MeOH:CH2Cl2を用いて精製され、10.1g(61%)の6を油状物として得た。
ジオール体(6)およびビス−DMT誘導体(8)からの化合物(7):6(1.4g,1.9mmol)および8(2.5g,1.9mmol)のCH2Cl2溶液に、トリフルオロ酢酸(50μL,0.6mmol)が加えられ、室温で30分間にわたり攪拌された。溶液は、Na2CO3の1M溶液により3回洗浄され、MgSO4で乾燥させられ、溶媒留去された。残渣は、フラッシュ・クロマトグラフィー(カラム径:50mm,SiO2の高さ:15cm)によって、5%AcOEt/CH2Cl2(750mL)、33%AcOEt/CH2Cl2(500mL)、7%MeOH/CH2Cl2(500mL)および10%MeOH/CH2Cl2(500mL)を連続的に用いて分離され、8(1.1g)、7(1.2g)および6(1.3g)を得た。
(実施例2:下記式を有するデカマー・オリゴヌクレオチドの合成、精製および特徴付け)
スペルミンホスホロアミダイトのカップリングの収率は上記カップリング条件において90〜96%であった。
ε=(15.4NA+11.5NG+7.4NC+8.7NT)×0.9×103
精製されたオリゴヌクレオチドのHPLC分析は図2に与えられる:線形勾配(NaCl(10分超で100〜350mM)/NaOH25mM(pH12.4))を有する陰イオン交換カラム(Dionex PA-100g×250mm):a)N10S1、b)N10S2、c)N10S3、d)N10S4、e)N10S5、f)N10S6。
pH7における電界中のそれらの遊走が、ポリアクリルアミドゲルの電気泳動によって研究され、銀鏡染色によって明らかにされた。10μLのローディングバッファー(10mM HEPES pH7.4、150mM NaCl、グリセロール)中の化合物(0.5nmol)が、非変性ポリアクリルアミドゲル(TAE pH7中15%)上に充填された。電気泳動は、5V/cmで17時間にわたり4℃で実行された。銀染色は、Rabilloud et al, Electrophoresis, 1987,9, 288-291に従って行われた。結果は、図3に与えられる。スペルミンを有しないオリゴヌクレオチドN10(レーン1)は、アノードに向かって迅速に移動し、ポリアミン含有オリゴヌクレオチドが明らかにされる条件下にかすかな銀染色のみを示した。
オリゴヌクレオチドC10(ここで、Cは、Nに相補的なヌクレオチドである)(50pmolまたは500pmol)が、蛍光N10・C10 *二本鎖体溶液(HEPES 10mM pH7.4,NaCl 150mM中50pmol)に加えられた。混合物は、4時間37℃、20℃または10℃でインキュベートされ、非変性ポリアクリルアミドゲル(TAE pH7中15%)上に充填された。電気泳動は、4℃で17時間にわたって5V/cmで行われた。C10 *蛍光は、Typhoon 8600 Imagerを用いてゲルを走査することによって検出された。図4において与えられる結果によって示されるように、N10のN10・C10との自発的交換は、10℃において顕著ではない。
天然の二本鎖体N10・C10へのN10Snの鎖の置換能が生理塩条件において試験された。
二本鎖核酸の安定性は、それらの融点、すなわち、相補鎖が協同的にバラバラになる温度を測定することによって比較された。N10Sn・C10の溶液の光学密度(optical density:O.D.)対温度Tが、260nmで記録された。
オリゴヌクレオチド−スペルミン接合体の単一の塩基対のミスマッチの識別が試験された。C10=5’GTGGCATCGC3’の配列の前後関係の範囲内で、文献データは、最もストリージェントな試験であるので中央に位置するAからGへの転換を推奨した。
オリゴヌクレオチドは、1%トリエチルアミンを含有する50%(v/v)アセトニトリル水溶液に、5×10−5Mの最終濃度で溶解させられた。100mLの分割量が、Applied Biosystems Mariner 5155質量分析計のイオン源に5mL/分の流速で導入された。結果は図8に与えられる(挿入:デコンボリューションスペクトル(deconvoluted spectra)):a)N10S1、b)N10S2、c)N10S3、d)N10S4、e)N10S5、f)N10S6。中性およびカチオン性オリゴマーN10S3−6のイオン化は、より困難になり、受け入れ可能なシグナル−ノイズ比を得るために複数のスペクトルを蓄積することが必要であった。
オリゴヌクレオチドは、500μLの脱イオン水に溶解させられた。サンプルおよびHPAマトリクスが、プレート上で一緒に混合された。一旦結晶化されてから、サンプルは、BRUKER Ultraflex MS装置により分析された。結果は図10Aに与えられる:N12S2F 計算値5460、実測値5459(上部)および図10B:N12S11F 計算値:9135 実測値:9125(下部)。
MEM培地を含有する10%(v/v)ウシ胎仔血清において生育されたヒーラ細胞が、50−60×103細胞/ウェルで、4−ウェル有孔ボロシリカートLab-Tek皿に、実験の1日前に塗布された。完全培地は、0.5mLの無血清MEM培地と置換された。5’−カチオン性フルオレセイン接合オリゴヌクレオチドF−S18N19(ここで、N19はTCGAAGTACTCAGCGTAAGである)製剤が滅菌PBSにおいて調製された。それは、2μMの最終濃度まで細胞に加えられた。4時間後に、培地は、1mLの新鮮な血清含有培地と置換された。第1の画像は、FITCフィルタを備えたZeiss axiovert 25蛍光顕微鏡により撮られた(図14A、左)。全ての細胞は蛍光性になり、いくつかの蛍光は細胞内の液胞に位置し、最も重要なことには、細胞質および核の全体にわたっても広がっていた。24時間後に培地は1mLのフェノールレッド不含有のMEM培地により置換された。ヨウ化プロピジウム(水中1mM)が10μMの最終濃度まで加えられた。10分後に、第2の画像が撮られ、これは、大部分のプロピジウムがない健康な細胞であって、依然として蛍光性であったものを示す(図14B、右)。F−N19オリゴヌクレオチドにより類似の条件でインキュベートされたコントロール細胞は、非蛍光性を示した。
Claims (19)
- 自動ホスホロアミダイト化学を介して合成され得る、オリゴヌクレオチド部分Aiおよびオリゴカチオン部分Bjを有するオリゴヌクレオチド−オリゴカチオン分子AiBjHであって、
Aiは、i merのオリゴヌクレオチド残基並びにそれらの化学改変体または置換体であり、ここで、i=5〜50であり、天然のまたは非天然に発生する核酸塩基および/またはペンタフラノシル基および/または生来のホスホジエステル結合を有し;
Bjは、j merの有機オリゴカチオン部分であり、j=1〜50であり、ここで、Bは、
・ -HPO3-R1-(X-R2)n1-X-R3-O-(ここで、R1、R2およびR3は、同一または異なって、低級アルキレンであり、XはNHまたはNC(NH2)2であり、n1=2〜20である)、
・ -HPO3-R4-CH(R5X1)-R6-O-(ここで、R4は低級アルキレンであり、R5およびR6は、同一または異なって、低級アルキレンであり、X1はプトレッシン、スペルミジンまたはスペルミン残基である)、
・ -HPO3-R7-(aa)n2-R8-O-(ここで、R7は低級アルキレンであり、R8は低級アルキレン、セリン、天然アミノ酸の還元によって得られるアミノアルコールであり、(aa)n2は、カチオン性側鎖を有する天然アミノ酸を含むペプチドであり、n2=2〜20である)
を含む群から選択される
オリゴヌクレオチド−オリゴカチオン分子AiBjH。 - オリゴヌクレオチドは、デオキシリボ、リボ、ロック(LNA)ヌクレオチド並びにそれらの化学改変体または置換体を含む群において選択される、請求項1に記載の分子。
- 改変体または置換体は、ホスホロチオアート、2’−フルオロ、2’−O−アルキルである、請求項2に記載の分子。
- マーカー基は、蛍光剤である、請求項1〜3のいずれか1つに記載の分子。
- アミノ酸は、アルギニン、リシン、オルニチン、ヒスチジン、ジアミノプロピオン酸である、請求項1〜4のいずれか1つに記載の分子。
- 3’A5’−B配列を有する、請求項1〜5のいずれか1つに記載の分子。
- B−3’A5’配列を有する、請求項1〜5のいずれか1つに記載の分子。
- B−3’A5’−Bまたは3’A5’−B−3’A5’配列並びにそれらの組合せを有する、請求項1〜5のいずれか1つに記載の分子。
- ホスホロアミダイトルートを介する、オリゴヌクレオチド合成機による段階的な合成を用いることによって、請求項1〜8のいずれか1つに記載のオリゴヌクレオチド−オリゴカチオン分子を得る方法であって、
活性化されかつ保護されたオリゴヌクレオチドBを含むバイアルをオリゴヌクレオチド合成機に、オリゴヌクレオチドAのバイアルに加えて詰めるか、またはこれと逆順に詰める工程と、
所望長さが得られた時に合成を停止させる工程と、
固体支持体からオリゴマーを開裂させる工程と、
保護基を除去する工程と
を包含する、方法。 - ホスホロアミダイト試薬は、
・ P(OR9)(N(R10)2)-O-R1-(X-R2)n1-X-R3-O-Prot(ここで、R1、R2、R3およびn1は、上記に定義した通りであり、Xは適切に保護されたNHまたはNC(NH2)2であり、R9は−CH2CH2CNまたは低級アルキルであり、R10は低級アルキルであるかまたは−N(R10)2はピロリジノ、ピペリジノまたはモルホリノ基であり、Protはオリゴヌクレオチド合成において用いられる保護基、例えば、DMT、MMTである);
・ P(OR9)(N(R10)2)-O-R4-CH(R5X1)-R6-O-Prot(ここで、R4、R5、R6は低級アルキレンであり、X1は適切に保護されたプトレッシン、スペルミジンまたはスペルミンであり、R9およびR10は上記に定義された通りである);および
・ P(OR9)(N(R10)2)-O-R7-(aa)n2 -R8-O-Prot(ここで、R7、R8、R9、R10、n2、(aa)n2およびProtは、上記に定義された通りである)
を含む群から選択される、請求項9に記載の方法。 - オリゴヌクレオチド配列の段階的合成の次にオリゴカチオン部分の段階的合成が行われて、配列(3’A5’−B)を有する化合物が得られる、請求項9または10に記載の方法。
- オリゴカチオン部分の段階的合成の次にオリゴヌクレオチド配列の段階的合成が行われて、(B−3’A5’)配列の化合物が得られる、請求項9または10に記載の方法。
- 混合配列の合成を包含する、請求項9または10に記載の方法。
- 両端部においてキャッピングされたオリゴヌクレオチド配列(B−3’A5’−B)またはカチオンを割り込ませたオリゴヌクレオチド配列(3’A5’−B−3’A5’)の合成を包含する、請求項13に記載の方法。
- ポリアミンのアミノ基を保護し、次いで、α,ω−ビスヒドロキシアルキル化によって、オリゴヌクレオチドの合成により化学反応を起こさないジオールに導くことによって活性化されかつ保護されたオリゴカチオンBが得られる、請求項9〜14のいずれか1つに記載の方法。
- 式:P(OR9)(N(R10)2)-O-R1-(X-R2)n1-X-R3-O-Prot(ここで、R1、R2、R3およびn1は上記の定義の通りであり、Xは適切に保護されたNHまたはNC(NH2)2であり、R9は−CH2CH2CNまたは低級アルキルであり、R10は低級であるかまたは−N(R10)2はピロリジノ、ピペリジノまたはモルホリノ基であり、Protは、オリゴヌクレオチド合成において用いられる保護基、例えばDMT、MMTである);
P(OR9)(N(R10)2)-O-R4-CH(R5X1)-R6-O-Prot(ここで、R4、R5、R6は低級アルキレンであり、X1は適切に保護されたプトレッシン、スペルミジンまたはスペルミンであり、R9およびR10は上記に定義された通りである);または、
P(OR9)(N(R10)2)-O-R7-(aa)n2 -R8-O-Prot(ここで、R7、R8、R9、R10およびProtは上記に定義された通りである)
の、中間化合物としてのホスホロアミダイト試薬。 - 請求項1〜8のいずれか1つに記載のオリゴヌクレオチド−オリゴカチオン分子の使用を包含する、生物学および診断における使用方法。
- PCR、リアルタイムPCR、ジェノタイピング、in situハイブリダイゼーションおよびDNAチップ製造における使用のための、請求項17に記載の方法。
- 請求項1〜8のいずれか1つに記載のオリゴヌクレオチド−オリゴカチオン分子の有効量を、製薬的に許容される担体と関連して含む医薬組成物。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US75034605P | 2005-12-15 | 2005-12-15 | |
US60/750346 | 2005-12-15 | ||
PCT/IB2006/004085 WO2007069092A2 (en) | 2005-12-15 | 2006-12-14 | Cationic oligonucleotides, automated methods for preparing same and their uses |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2009519317A true JP2009519317A (ja) | 2009-05-14 |
JP5346585B2 JP5346585B2 (ja) | 2013-11-20 |
Family
ID=38163300
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2008545144A Active JP5346585B2 (ja) | 2005-12-15 | 2006-12-14 | カチオン性オリゴヌクレオチド、同ヌクレオチドの自動調製法およびそれらの使用 |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US9090648B2 (ja) |
EP (1) | EP1973927B1 (ja) |
JP (1) | JP5346585B2 (ja) |
KR (1) | KR101388320B1 (ja) |
CN (1) | CN101370817B (ja) |
AU (1) | AU2006325054B2 (ja) |
BR (1) | BRPI0619932A2 (ja) |
CA (1) | CA2633065C (ja) |
ES (1) | ES2435420T3 (ja) |
HK (1) | HK1127360A1 (ja) |
IL (1) | IL192158A0 (ja) |
NZ (1) | NZ569138A (ja) |
RU (1) | RU2451022C2 (ja) |
WO (1) | WO2007069092A2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2022512795A (ja) * | 2018-10-22 | 2022-02-07 | バイオニア コーポレーション | オクタミン又はオクタミン誘導体が結合したプローブ及びその用途 |
Families Citing this family (35)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NZ569138A (en) | 2005-12-15 | 2012-06-29 | Centre Nat Rech Scient | Cationic oligonucleotides automated methods for preparing same and their uses |
EP2075342A1 (en) * | 2007-12-27 | 2009-07-01 | PolyPlus Transfection | Method for hybridizing nucleic acids |
FR2926818B1 (fr) * | 2008-01-30 | 2012-04-06 | Centre Nat Rech Scient | siRNA CATIONIQUES, SYNTHESE ET UTILISATION POUR L'ARN INTERFERENCE |
US8583380B2 (en) | 2008-09-05 | 2013-11-12 | Aueon, Inc. | Methods for stratifying and annotating cancer drug treatment options |
RU2573915C2 (ru) | 2009-09-16 | 2016-01-27 | Дженентек, Инк. | Содержащие суперспираль и/или привязку белковые комплексы и их применение |
CN102140459B (zh) * | 2010-01-29 | 2013-04-03 | 苏州瑞博生物技术有限公司 | 一种小干扰核酸和药物组合物及其制药应用 |
CN102140461B (zh) * | 2010-01-29 | 2012-12-05 | 苏州瑞博生物技术有限公司 | 小干扰核酸和药物组合物及其制药应用 |
CN102140458B (zh) * | 2010-01-29 | 2013-05-22 | 苏州瑞博生物技术有限公司 | 小干扰核酸和药物组合物及其制药应用 |
EP2542678B1 (en) | 2010-03-04 | 2017-04-12 | InteRNA Technologies B.V. | A MiRNA MOLECULE DEFINED BY ITS SOURCE AND ITS THERAPEUTIC USES IN CANCER ASSOCIATED WITH EMT |
TW201138821A (en) | 2010-03-26 | 2011-11-16 | Roche Glycart Ag | Bispecific antibodies |
NZ704322A (en) | 2010-07-06 | 2016-07-29 | Interna Technologies Bv | Mirna and its diagnostic and therapeutic uses in diseases or conditions associated with melanoma, or in diseases or conditions associated with activated braf pathway |
CA2817448C (en) | 2010-12-23 | 2019-01-22 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Binding agent |
JP5766296B2 (ja) | 2010-12-23 | 2015-08-19 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | ポリペプチド−ポリヌクレオチド複合体、およびエフェクター成分の標的化された送達におけるその使用 |
WO2012085064A1 (en) | 2010-12-23 | 2012-06-28 | Roche Diagnostics Gmbh | Detection of a posttranslationally modified polypeptide by a bi-valent binding agent |
EP2474617A1 (en) | 2011-01-11 | 2012-07-11 | InteRNA Technologies BV | Mir for treating neo-angiogenesis |
WO2012157723A1 (ja) | 2011-05-17 | 2012-11-22 | 味の素株式会社 | オリゴヌクレオチドの製造方法 |
ES2886147T3 (es) | 2011-12-22 | 2021-12-16 | Interna Tech B V | MiARN para el tratamiento del cáncer de cabeza y de cuello |
MX2014009565A (es) | 2012-02-10 | 2014-11-10 | Genentech Inc | Anticuerpos monocatenarios y otros heteromultimeros. |
MX2014014804A (es) | 2012-06-27 | 2015-02-12 | Hoffmann La Roche | Metodo para la elaboracion de conjugados de la region fc de anticuerpos que comprenden por lo menos una entidad de union que se une especificamente a un objetivo y usos del mismo. |
MX354862B (es) | 2012-06-27 | 2018-03-23 | Hoffmann La Roche | Método para la producción de entidades dirigidas altamente selectivas hechas a la medida y biespecíficas que contienen dos entidades de unión diferentes. |
US10201556B2 (en) | 2012-11-06 | 2019-02-12 | Interna Technologies B.V. | Combination for use in treating diseases or conditions associated with melanoma, or treating diseases or conditions associated with activated B-raf pathway |
ES2810298T3 (es) | 2013-06-28 | 2021-03-08 | Ethris Gmbh | Composiciones para introducir ARN en células |
US9410172B2 (en) | 2013-09-16 | 2016-08-09 | General Electric Company | Isothermal amplification using oligocation-conjugated primer sequences |
AU2014384269A1 (en) | 2014-02-26 | 2016-09-08 | Ethris Gmbh | Compositions for gastrointestinal administration of RNA |
RU2553349C1 (ru) * | 2014-05-07 | 2015-06-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор") | Олигодезоксирибонуклеотидный ингибитор днк-метилтрансферазы 1 человека |
WO2016087416A1 (en) | 2014-12-03 | 2016-06-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Multispecific antibodies |
EP3034539A1 (en) | 2014-12-19 | 2016-06-22 | Ethris GmbH | Compositions for introducing nucleic acid into cells |
DE102017123919A1 (de) | 2017-10-13 | 2019-04-18 | Gna Biosolutions Gmbh | Verfahren und Vorrichtung zur Lyse von Mikroorganismen |
EP3704250A1 (en) | 2017-11-03 | 2020-09-09 | InteRNA Technologies B.V. | Mirna molecule, equivalent, antagomir, or source thereof for treating and/or diagnosing a condition and/or a disease associated with neuronal deficiency or for neuronal (re)generation |
WO2019155094A1 (en) | 2018-02-12 | 2019-08-15 | Interna Technologies B.V. | Anticancer microrna and lipid formulations thereof |
ES2960939T3 (es) | 2018-04-25 | 2024-03-07 | Ethris Gmbh | Agentes crioprotectores para formulaciones particuladas |
KR20230152014A (ko) | 2021-02-26 | 2023-11-02 | 에트리스 게엠베하 | 에어로졸 형성을 위한 제형 및 핵산 전달을 위한 에어로졸 |
WO2024042236A1 (en) | 2022-08-26 | 2024-02-29 | Ethris Gmbh | Stable lipid or lipidoid nanoparticle suspensions |
EP4327829A1 (en) | 2022-08-26 | 2024-02-28 | Ethris GmbH | Stabilization of lipid or lipidoid nanoparticle suspensions |
WO2024134525A1 (en) | 2022-12-22 | 2024-06-27 | Fondazione Telethon Ets | Lsd1 inhibitor and prmt6 inhibitor for use in the treatment of a disease associated with gain-of-function of androgen receptor (ar) and/or with overexpression of an ar coactivator |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003520200A (ja) * | 1999-08-19 | 2003-07-02 | アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド | 2’−o−アセトアミド修飾モノマーおよびオリゴマー |
JP2003526692A (ja) * | 1997-08-01 | 2003-09-09 | サプラテック ファーマ インコーポレーテッド | ポリヌクレオチド組成物 |
WO2005100447A1 (ja) * | 2004-04-16 | 2005-10-27 | Japan Science And Technology Agency | Peg−機能性核酸コンジュケート |
Family Cites Families (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5656611A (en) * | 1994-11-18 | 1997-08-12 | Supratek Pharma Inc. | Polynucleotide compositions |
US6071890A (en) * | 1994-12-09 | 2000-06-06 | Genzyme Corporation | Organ-specific targeting of cationic amphiphile/DNA complexes for gene therapy |
EP1013770A1 (en) * | 1998-12-23 | 2000-06-28 | Université Louis Pasteur de Strasbourg | Non-viral transfection vector |
DE10207177A1 (de) * | 2002-02-19 | 2003-09-04 | Novosom Ag | Fakultativ kationische Lipide |
US20040019008A1 (en) * | 2002-05-28 | 2004-01-29 | Lewis David L. | Compositions and processes using siRNA, amphipathic compounds and polycations |
JP2004137143A (ja) | 2002-08-21 | 2004-05-13 | Fuji Photo Film Co Ltd | 有機変性層状珪酸塩及びその組成物 |
WO2004048545A2 (en) * | 2002-11-26 | 2004-06-10 | University Of Massachusetts | DELIVERY OF siRNAs______________________________________________ |
RU2236467C1 (ru) * | 2003-04-14 | 2004-09-20 | Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН | Способ получения днк-чипов |
EP1638610B1 (en) | 2003-06-18 | 2015-03-18 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Sphingoid polyalkylamine conjugates for vaccination |
JP5059411B2 (ja) * | 2003-12-19 | 2012-10-24 | ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス,インコーポレーテッド | 短鎖干渉rnaの細胞トランスフェクティング処方物、関連する組成物および作製方法ならびに使用 |
AU2005304816A1 (en) | 2004-11-04 | 2006-05-18 | Raul Andino | Syntheses of polyamine conjugates of small interfering RNAs (si-RNAs) and conjugates formed thereby |
WO2006060182A2 (en) * | 2004-11-17 | 2006-06-08 | University Of Maryland, Baltimore | HIGHLY BRANCHED HK PEPTIDES AS EFFECTIVE CARRIERS OF siRNA |
NZ569138A (en) | 2005-12-15 | 2012-06-29 | Centre Nat Rech Scient | Cationic oligonucleotides automated methods for preparing same and their uses |
EP1844772A1 (en) * | 2006-04-06 | 2007-10-17 | Polyplus-Transfection SA | Compositions for transfection of oligonucleotides active for gene silencing and their biological and therapeutical applications |
JP2009534342A (ja) * | 2006-04-20 | 2009-09-24 | サイレンス・セラピューティクス・アーゲー | 血管内皮に特異的に送達するためのリポプレックス処方剤 |
FR2926818B1 (fr) * | 2008-01-30 | 2012-04-06 | Centre Nat Rech Scient | siRNA CATIONIQUES, SYNTHESE ET UTILISATION POUR L'ARN INTERFERENCE |
-
2006
- 2006-12-14 NZ NZ569138A patent/NZ569138A/en unknown
- 2006-12-14 JP JP2008545144A patent/JP5346585B2/ja active Active
- 2006-12-14 AU AU2006325054A patent/AU2006325054B2/en active Active
- 2006-12-14 BR BRPI0619932-1A patent/BRPI0619932A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2006-12-14 US US12/086,599 patent/US9090648B2/en active Active
- 2006-12-14 CN CN2006800510864A patent/CN101370817B/zh active Active
- 2006-12-14 ES ES06847298T patent/ES2435420T3/es active Active
- 2006-12-14 WO PCT/IB2006/004085 patent/WO2007069092A2/en active Application Filing
- 2006-12-14 RU RU2008128853/04A patent/RU2451022C2/ru active
- 2006-12-14 EP EP06847298.4A patent/EP1973927B1/en active Active
- 2006-12-14 CA CA2633065A patent/CA2633065C/en active Active
- 2006-12-14 KR KR1020087017193A patent/KR101388320B1/ko active IP Right Grant
-
2008
- 2008-06-15 IL IL192158A patent/IL192158A0/en active IP Right Grant
-
2009
- 2009-07-16 HK HK09106495.8A patent/HK1127360A1/xx unknown
-
2015
- 2015-06-22 US US14/745,871 patent/US9676798B2/en active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003526692A (ja) * | 1997-08-01 | 2003-09-09 | サプラテック ファーマ インコーポレーテッド | ポリヌクレオチド組成物 |
JP2003520200A (ja) * | 1999-08-19 | 2003-07-02 | アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド | 2’−o−アセトアミド修飾モノマーおよびオリゴマー |
WO2005100447A1 (ja) * | 2004-04-16 | 2005-10-27 | Japan Science And Technology Agency | Peg−機能性核酸コンジュケート |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
JPN6012053616; Chen CP et al: Bioconjugate Chem Vol.14, 2003, p.532-8 * |
JPN6012053619; Sund C et al: Tetrahedron Vol.52, No.37, 1996, p.12275-90 * |
JPN6012053621; Tung CH et al: Nucleic Acids Res Vol.21, No.23, 1993, p.5489-94 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2022512795A (ja) * | 2018-10-22 | 2022-02-07 | バイオニア コーポレーション | オクタミン又はオクタミン誘導体が結合したプローブ及びその用途 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN101370817B (zh) | 2012-08-08 |
WO2007069092A3 (en) | 2008-04-17 |
BRPI0619932A2 (pt) | 2011-10-25 |
IL192158A0 (en) | 2009-02-11 |
WO2007069092B1 (en) | 2008-06-19 |
US20090069262A1 (en) | 2009-03-12 |
JP5346585B2 (ja) | 2013-11-20 |
RU2451022C2 (ru) | 2012-05-20 |
CA2633065C (en) | 2016-10-18 |
ES2435420T3 (es) | 2013-12-19 |
KR20080087001A (ko) | 2008-09-29 |
EP1973927A2 (en) | 2008-10-01 |
CN101370817A (zh) | 2009-02-18 |
EP1973927B1 (en) | 2013-08-14 |
RU2008128853A (ru) | 2010-01-20 |
KR101388320B1 (ko) | 2014-04-22 |
AU2006325054B2 (en) | 2013-05-02 |
NZ569138A (en) | 2012-06-29 |
AU2006325054A1 (en) | 2007-06-21 |
US9090648B2 (en) | 2015-07-28 |
CA2633065A1 (en) | 2007-06-21 |
US20160280728A1 (en) | 2016-09-29 |
US9676798B2 (en) | 2017-06-13 |
HK1127360A1 (en) | 2009-09-25 |
WO2007069092A2 (en) | 2007-06-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5346585B2 (ja) | カチオン性オリゴヌクレオチド、同ヌクレオチドの自動調製法およびそれらの使用 | |
JP2022525541A (ja) | オリゴヌクレオチド調製に有用な技術 | |
EP3359523A2 (en) | Oligonucleotide compositions and methods thereof | |
US12030911B2 (en) | Synthesis and biological activity of phosphoramidimidate and phosphoramidate DNA | |
CN116655715B (zh) | 一种GalNAc衍生物、缀合物、组合物以及它们的用途 | |
JP6704196B2 (ja) | オリゴヌクレオチド | |
DE69725440T2 (de) | 2-substituierte nukleosid- und oligonukleotid- derivate | |
JP2003531827A (ja) | オリゴヌクレオチドの精製 | |
WO2002079216A1 (en) | Labeled oligonucleotides, methods for making same, and compounds useful therefor | |
WO2009130328A1 (en) | Process for the manufacture of oligonucleotides | |
WO2003055852A2 (de) | Multifunktionales reagenz zur synthese von thiolmodifizierten oligomeren | |
Biscans et al. | Synthesis, binding, nuclease resistance and cellular uptake properties of 2′-O-acetalester-modified oligonucleotides containing cationic groups | |
Ferrer et al. | Preparation of Oligonucleotides Containing 5-Bromouracil and 5-Methylcytidine. | |
Putta et al. | Synthesis, purification, and characterization of immune-modulatory oligodeoxynucleotides that act as agonists of Toll-like receptor 9 | |
JP6429264B2 (ja) | ボラノホスフェート化合物、及び核酸オリゴマー | |
Globisch et al. | Stability of Hoogsteen‐Type Triplexes–Electrostatic Attraction between Duplex Backbone and Triplex‐Forming Oligonucleotide (TFO) Using an Intercalating Conjugate | |
WO2020086970A1 (en) | Detection method for natural and modified small nucleic acids | |
JP2005027569A (ja) | 新規dnaコンジュゲート及びそれを有効成分とするアンチセンス剤 | |
Schmidt | Solution-and solid-phase synthesis of monofunctionally trans-Pt (II) modified oligonucleotides and oligonucleotide analogues and their potential application in antigene and antisense strategy | |
AU2002254493A1 (en) | Labeled oligonucleotides, methods for making same, and compounds useful therefor |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20091001 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20121016 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20130116 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20130123 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130215 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20130723 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20130819 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5346585 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |