JP2009513143A - Pdx1発現背側及び腹側前腸内胚葉 - Google Patents
Pdx1発現背側及び腹側前腸内胚葉 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2009513143A JP2009513143A JP2008538095A JP2008538095A JP2009513143A JP 2009513143 A JP2009513143 A JP 2009513143A JP 2008538095 A JP2008538095 A JP 2008538095A JP 2008538095 A JP2008538095 A JP 2008538095A JP 2009513143 A JP2009513143 A JP 2009513143A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- pdx1
- endoderm cells
- foregut endoderm
- positive
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 210000002438 upper gastrointestinal tract Anatomy 0.000 title claims abstract description 638
- 101710183548 Pyridoxal 5'-phosphate synthase subunit PdxS Proteins 0.000 title abstract 9
- 102100035459 Pyruvate dehydrogenase protein X component, mitochondrial Human genes 0.000 title abstract 9
- 210000001900 endoderm Anatomy 0.000 title description 165
- 210000004039 endoderm cell Anatomy 0.000 claims abstract description 882
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 817
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 439
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims abstract description 282
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 266
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 50
- 210000001654 germ layer Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 108700011804 pancreatic and duodenal homeobox 1 Proteins 0.000 claims description 616
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 262
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 247
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims description 226
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 79
- 102000000802 Galectin 3 Human genes 0.000 claims description 71
- 108010001517 Galectin 3 Proteins 0.000 claims description 71
- SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N all-trans-retinoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N 0.000 claims description 63
- 229930002330 retinoic acid Natural products 0.000 claims description 63
- 229960001727 tretinoin Drugs 0.000 claims description 63
- 102100023635 Alpha-fetoprotein Human genes 0.000 claims description 59
- 102100029756 Cadherin-6 Human genes 0.000 claims description 56
- 101000794604 Homo sapiens Cadherin-6 Proteins 0.000 claims description 56
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 55
- 102100035991 Alpha-2-antiplasmin Human genes 0.000 claims description 54
- 101000783712 Homo sapiens Alpha-2-antiplasmin Proteins 0.000 claims description 54
- 101000642523 Homo sapiens Transcription factor SOX-7 Proteins 0.000 claims description 50
- 102100036730 Transcription factor SOX-7 Human genes 0.000 claims description 50
- 101000979321 Homo sapiens Neurofilament medium polypeptide Proteins 0.000 claims description 47
- 102100023055 Neurofilament medium polypeptide Human genes 0.000 claims description 47
- 101000976653 Homo sapiens Zinc finger protein ZIC 1 Proteins 0.000 claims description 46
- 101710123134 Ice-binding protein Proteins 0.000 claims description 46
- 101710082837 Ice-structuring protein Proteins 0.000 claims description 46
- 101710107540 Type-2 ice-structuring protein Proteins 0.000 claims description 46
- 102100023497 Zinc finger protein ZIC 1 Human genes 0.000 claims description 46
- 101000652332 Homo sapiens Transcription factor SOX-1 Proteins 0.000 claims description 44
- 102100030248 Transcription factor SOX-1 Human genes 0.000 claims description 44
- 150000004492 retinoid derivatives Chemical class 0.000 claims description 40
- 102000017695 GABRA2 Human genes 0.000 claims description 36
- 102100030669 Glutamate receptor 3 Human genes 0.000 claims description 36
- 101000893333 Homo sapiens Gamma-aminobutyric acid receptor subunit alpha-2 Proteins 0.000 claims description 36
- 101001010434 Homo sapiens Glutamate receptor 3 Proteins 0.000 claims description 36
- 101000599048 Homo sapiens Interleukin-6 receptor subunit alpha Proteins 0.000 claims description 36
- 101000944277 Homo sapiens Inward rectifier potassium channel 2 Proteins 0.000 claims description 36
- 102100037792 Interleukin-6 receptor subunit alpha Human genes 0.000 claims description 36
- 102100033114 Inward rectifier potassium channel 2 Human genes 0.000 claims description 36
- 102100028412 Fibroblast growth factor 10 Human genes 0.000 claims description 35
- 102100039558 Galectin-3 Human genes 0.000 claims description 34
- 101000608757 Homo sapiens Galectin-3 Proteins 0.000 claims description 34
- 108091006525 SLC27A2 Proteins 0.000 claims description 34
- 102100023048 Very long-chain acyl-CoA synthetase Human genes 0.000 claims description 34
- 101100518189 Homo sapiens PDHX gene Proteins 0.000 claims description 33
- 101100519290 Homo sapiens PDX1 gene Proteins 0.000 claims description 33
- 108090001047 Fibroblast growth factor 10 Proteins 0.000 claims description 31
- 210000002894 multi-fate stem cell Anatomy 0.000 claims description 31
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 claims description 30
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 claims description 29
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 claims description 29
- 102100035990 Adenosine receptor A2a Human genes 0.000 claims description 26
- 101000783751 Homo sapiens Adenosine receptor A2a Proteins 0.000 claims description 26
- 101000868279 Homo sapiens Leukocyte surface antigen CD47 Proteins 0.000 claims description 26
- 102100032913 Leukocyte surface antigen CD47 Human genes 0.000 claims description 26
- 101000866286 Homo sapiens Excitatory amino acid transporter 1 Proteins 0.000 claims description 25
- 102000012977 SLC1A3 Human genes 0.000 claims description 25
- 108010004696 Xenotropic and Polytropic Retrovirus Receptor Proteins 0.000 claims description 25
- 102100036974 Xenotropic and polytropic retrovirus receptor 1 Human genes 0.000 claims description 25
- 108010023082 activin A Proteins 0.000 claims description 25
- 102100024747 Band 4.1-like protein 1 Human genes 0.000 claims description 24
- 101000876511 Homo sapiens General transcription and DNA repair factor IIH helicase subunit XPD Proteins 0.000 claims description 24
- 101000616778 Homo sapiens Myelin-associated glycoprotein Proteins 0.000 claims description 24
- 101000944000 Homo sapiens Potassium channel subfamily T member 2 Proteins 0.000 claims description 24
- 101000684730 Homo sapiens Secreted frizzled-related protein 5 Proteins 0.000 claims description 24
- 102100027871 Monocarboxylate transporter 8 Human genes 0.000 claims description 24
- 102100033524 Potassium channel subfamily T member 2 Human genes 0.000 claims description 24
- 108091006599 SLC16A2 Proteins 0.000 claims description 24
- 108091006552 SLC30A4 Proteins 0.000 claims description 24
- 102100023744 Secreted frizzled-related protein 5 Human genes 0.000 claims description 24
- 102100026641 Zinc transporter 4 Human genes 0.000 claims description 24
- 108010041998 erythrocyte membrane protein band 4.1-like 1 Proteins 0.000 claims description 24
- 102100021425 Monocarboxylate transporter 10 Human genes 0.000 claims description 22
- 108091006608 SLC16A10 Proteins 0.000 claims description 22
- 101000835986 Homo sapiens SLIT and NTRK-like protein 4 Proteins 0.000 claims description 21
- 102100025502 SLIT and NTRK-like protein 4 Human genes 0.000 claims description 21
- 102100021160 Dual specificity protein phosphatase 9 Human genes 0.000 claims description 20
- 101000968556 Homo sapiens Dual specificity protein phosphatase 9 Proteins 0.000 claims description 20
- 101000711846 Homo sapiens Transcription factor SOX-9 Proteins 0.000 claims description 20
- 102100034204 Transcription factor SOX-9 Human genes 0.000 claims description 20
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 20
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 20
- 230000009278 visceral effect Effects 0.000 claims description 20
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 19
- 210000003969 blast cell Anatomy 0.000 claims description 18
- WDHRPWOAMDJICD-FOAQWNCLSA-N n-[2-[(3'r,3'as,6's,6as,6bs,7'ar,9r,11as,11br)-3',6',10,11b-tetramethyl-3-oxospiro[1,2,4,6,6a,6b,7,8,11,11a-decahydrobenzo[a]fluorene-9,2'-3,3a,5,6,7,7a-hexahydrofuro[3,2-b]pyridine]-4'-yl]ethyl]-6-(3-phenylpropanoylamino)hexanamide Chemical compound C([C@@H](C)C[C@@H]1[C@@H]2[C@H]([C@]3(C(=C4C[C@@H]5[C@@]6(C)CCC(=O)CC6=CC[C@H]5[C@@H]4CC3)C)O1)C)N2CCNC(=O)CCCCCNC(=O)CCC1=CC=CC=C1 WDHRPWOAMDJICD-FOAQWNCLSA-N 0.000 claims description 17
- 102100026860 CYFIP-related Rac1 interactor A Human genes 0.000 claims description 16
- 102100036367 Dual 3',5'-cyclic-AMP and -GMP phosphodiesterase 11A Human genes 0.000 claims description 16
- 102100030309 Homeobox protein Hox-A1 Human genes 0.000 claims description 16
- 101000912003 Homo sapiens CYFIP-related Rac1 interactor A Proteins 0.000 claims description 16
- 101001072029 Homo sapiens Dual 3',5'-cyclic-AMP and -GMP phosphodiesterase 11A Proteins 0.000 claims description 16
- 101001083156 Homo sapiens Homeobox protein Hox-A1 Proteins 0.000 claims description 16
- 101000804792 Homo sapiens Protein Wnt-5a Proteins 0.000 claims description 16
- 102000043366 Wnt-5a Human genes 0.000 claims description 16
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 claims description 15
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 claims description 15
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 claims description 15
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 15
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 15
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 15
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims description 15
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 14
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 13
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 claims description 11
- 238000003365 immunocytochemistry Methods 0.000 claims description 11
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 claims description 11
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 11
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 10
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 10
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 claims description 9
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 claims description 9
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 claims description 9
- -1 SLITK4 Proteins 0.000 claims description 8
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 3
- 102100021831 Myelin-associated glycoprotein Human genes 0.000 claims 14
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims 1
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 claims 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 72
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 71
- 101000652324 Homo sapiens Transcription factor SOX-17 Proteins 0.000 description 56
- 102100030243 Transcription factor SOX-17 Human genes 0.000 description 56
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 49
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 47
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 25
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 24
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 20
- 102100030307 Homeobox protein Hox-A13 Human genes 0.000 description 19
- 102100022599 Homeobox protein Hox-C6 Human genes 0.000 description 19
- 101001083162 Homo sapiens Homeobox protein Hox-A13 Proteins 0.000 description 19
- 101001045154 Homo sapiens Homeobox protein Hox-C6 Proteins 0.000 description 19
- 102100031650 C-X-C chemokine receptor type 4 Human genes 0.000 description 18
- 101000922348 Homo sapiens C-X-C chemokine receptor type 4 Proteins 0.000 description 18
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 15
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 15
- 241000289669 Erinaceus europaeus Species 0.000 description 14
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 13
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 13
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 13
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 13
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 13
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 13
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 12
- 102100029283 Hepatocyte nuclear factor 3-alpha Human genes 0.000 description 11
- 101001062353 Homo sapiens Hepatocyte nuclear factor 3-alpha Proteins 0.000 description 11
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 11
- 238000011161 development Methods 0.000 description 11
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 11
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 11
- 102100035184 General transcription and DNA repair factor IIH helicase subunit XPD Human genes 0.000 description 10
- 102100021669 Stromal cell-derived factor 1 Human genes 0.000 description 10
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 10
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 10
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 10
- 239000012583 B-27 Supplement Substances 0.000 description 9
- 101710088580 Stromal cell-derived factor 1 Proteins 0.000 description 9
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 9
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 9
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 9
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 8
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 8
- 102100028072 Fibroblast growth factor 4 Human genes 0.000 description 7
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 7
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 7
- 101150111723 PDX1 gene Proteins 0.000 description 7
- 108010023079 activin B Proteins 0.000 description 7
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 7
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 7
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 7
- 102100041030 Pancreas/duodenum homeobox protein 1 Human genes 0.000 description 6
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 6
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 6
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 6
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 6
- 210000003716 mesoderm Anatomy 0.000 description 6
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 5
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 5
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 5
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 5
- 108090000381 Fibroblast growth factor 4 Proteins 0.000 description 5
- 108010079274 Thrombomodulin Proteins 0.000 description 5
- 102100026966 Thrombomodulin Human genes 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 5
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 5
- 210000003981 ectoderm Anatomy 0.000 description 5
- 230000007045 gastrulation Effects 0.000 description 5
- 210000002149 gonad Anatomy 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 5
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 5
- 108010059616 Activins Proteins 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 102100035308 Fibroblast growth factor 17 Human genes 0.000 description 4
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 4
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 4
- 102100028071 Fibroblast growth factor 7 Human genes 0.000 description 4
- 229940121827 Hedgehog pathway inhibitor Drugs 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 101000917237 Homo sapiens Fibroblast growth factor 10 Proteins 0.000 description 4
- 101000878124 Homo sapiens Fibroblast growth factor 17 Proteins 0.000 description 4
- 101001060261 Homo sapiens Fibroblast growth factor 7 Proteins 0.000 description 4
- 102100026818 Inhibin beta E chain Human genes 0.000 description 4
- CLEXYFLHGFJONT-DNMILWOZSA-N Jervine Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H](C(=O)C2=C3C)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@@]13O[C@@H]2C[C@H](C)CN[C@H]2[C@H]1C CLEXYFLHGFJONT-DNMILWOZSA-N 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 4
- 239000000488 activin Substances 0.000 description 4
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 210000003890 endocrine cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 4
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 4
- 210000001704 mesoblast Anatomy 0.000 description 4
- 230000001936 parietal effect Effects 0.000 description 4
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 4
- 108010061299 CXCR4 Receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000012000 CXCR4 Receptors Human genes 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 3
- 108090000386 Fibroblast Growth Factor 1 Proteins 0.000 description 3
- 102100028075 Fibroblast growth factor 6 Human genes 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 101710144033 Pancreas/duodenum homeobox protein 1 Proteins 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 230000002183 duodenal effect Effects 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 3
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 210000000472 morula Anatomy 0.000 description 3
- 210000001020 neural plate Anatomy 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 102100022716 Atypical chemokine receptor 3 Human genes 0.000 description 2
- 102100033611 CB1 cannabinoid receptor-interacting protein 1 Human genes 0.000 description 2
- 102100031168 CCN family member 2 Human genes 0.000 description 2
- 101150066398 CXCR4 gene Proteins 0.000 description 2
- 102100038520 Calcitonin receptor Human genes 0.000 description 2
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102100029295 Charged multivesicular body protein 3 Human genes 0.000 description 2
- 102000009410 Chemokine receptor Human genes 0.000 description 2
- 108050000299 Chemokine receptor Proteins 0.000 description 2
- 108010039419 Connective Tissue Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100032450 Endothelial differentiation-related factor 1 Human genes 0.000 description 2
- 101710182961 Endothelial differentiation-related factor 1 Proteins 0.000 description 2
- 102000003971 Fibroblast Growth Factor 1 Human genes 0.000 description 2
- 102100028413 Fibroblast growth factor 11 Human genes 0.000 description 2
- 102100028417 Fibroblast growth factor 12 Human genes 0.000 description 2
- 102100035292 Fibroblast growth factor 14 Human genes 0.000 description 2
- 108050002072 Fibroblast growth factor 16 Proteins 0.000 description 2
- 102100035307 Fibroblast growth factor 16 Human genes 0.000 description 2
- 102100035323 Fibroblast growth factor 18 Human genes 0.000 description 2
- 102100031734 Fibroblast growth factor 19 Human genes 0.000 description 2
- 102100031361 Fibroblast growth factor 20 Human genes 0.000 description 2
- 108090000376 Fibroblast growth factor 21 Proteins 0.000 description 2
- 102000003973 Fibroblast growth factor 21 Human genes 0.000 description 2
- 102100024804 Fibroblast growth factor 22 Human genes 0.000 description 2
- 102100024802 Fibroblast growth factor 23 Human genes 0.000 description 2
- 102100028043 Fibroblast growth factor 3 Human genes 0.000 description 2
- 102100028073 Fibroblast growth factor 5 Human genes 0.000 description 2
- 102000003972 Fibroblast growth factor 7 Human genes 0.000 description 2
- 108090000385 Fibroblast growth factor 7 Proteins 0.000 description 2
- 102100037680 Fibroblast growth factor 8 Human genes 0.000 description 2
- 102100037665 Fibroblast growth factor 9 Human genes 0.000 description 2
- 102100027570 Forkhead box protein Q1 Human genes 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100024208 Homeobox protein MIXL1 Human genes 0.000 description 2
- 102100038146 Homeobox protein goosecoid Human genes 0.000 description 2
- 101000678890 Homo sapiens Atypical chemokine receptor 3 Proteins 0.000 description 2
- 101000945426 Homo sapiens CB1 cannabinoid receptor-interacting protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000741435 Homo sapiens Calcitonin receptor Proteins 0.000 description 2
- 101000989626 Homo sapiens Charged multivesicular body protein 3 Proteins 0.000 description 2
- 101000942084 Homo sapiens Cysteine-rich protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000917236 Homo sapiens Fibroblast growth factor 11 Proteins 0.000 description 2
- 101000917234 Homo sapiens Fibroblast growth factor 12 Proteins 0.000 description 2
- 101000878181 Homo sapiens Fibroblast growth factor 14 Proteins 0.000 description 2
- 101000878128 Homo sapiens Fibroblast growth factor 18 Proteins 0.000 description 2
- 101000846394 Homo sapiens Fibroblast growth factor 19 Proteins 0.000 description 2
- 101000846532 Homo sapiens Fibroblast growth factor 20 Proteins 0.000 description 2
- 101001051971 Homo sapiens Fibroblast growth factor 22 Proteins 0.000 description 2
- 101001051973 Homo sapiens Fibroblast growth factor 23 Proteins 0.000 description 2
- 101001060280 Homo sapiens Fibroblast growth factor 3 Proteins 0.000 description 2
- 101001060274 Homo sapiens Fibroblast growth factor 4 Proteins 0.000 description 2
- 101001060267 Homo sapiens Fibroblast growth factor 5 Proteins 0.000 description 2
- 101001060265 Homo sapiens Fibroblast growth factor 6 Proteins 0.000 description 2
- 101001027382 Homo sapiens Fibroblast growth factor 8 Proteins 0.000 description 2
- 101001027380 Homo sapiens Fibroblast growth factor 9 Proteins 0.000 description 2
- 101000861406 Homo sapiens Forkhead box protein Q1 Proteins 0.000 description 2
- 101001052462 Homo sapiens Homeobox protein MIXL1 Proteins 0.000 description 2
- 101001032602 Homo sapiens Homeobox protein goosecoid Proteins 0.000 description 2
- 101000612089 Homo sapiens Pancreas/duodenum homeobox protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 101100310647 Homo sapiens SOX17 gene Proteins 0.000 description 2
- 101000819074 Homo sapiens Transcription factor GATA-4 Proteins 0.000 description 2
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 2
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 2
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 2
- 102000003815 Interleukin-11 Human genes 0.000 description 2
- 108090000177 Interleukin-11 Proteins 0.000 description 2
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 2
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 2
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 description 2
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 2
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 102000000646 Interleukin-3 Human genes 0.000 description 2
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 2
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 102100039897 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 2
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 2
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- 102100021592 Interleukin-7 Human genes 0.000 description 2
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 2
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 2
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 2
- 102100026871 Interleukin-9 Human genes 0.000 description 2
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 description 2
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 101100390675 Mus musculus Fgf15 gene Proteins 0.000 description 2
- 102100035423 POU domain, class 5, transcription factor 1 Human genes 0.000 description 2
- 101710126211 POU domain, class 5, transcription factor 1 Proteins 0.000 description 2
- 108010038512 Platelet-Derived Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000010780 Platelet-Derived Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 101150007417 SOX17 gene Proteins 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 102100021380 Transcription factor GATA-4 Human genes 0.000 description 2
- 102000046299 Transforming Growth Factor beta1 Human genes 0.000 description 2
- 101800002279 Transforming growth factor beta-1 Proteins 0.000 description 2
- 101150045640 VWF gene Proteins 0.000 description 2
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 2
- 108010073925 Vascular Endothelial Growth Factor B Proteins 0.000 description 2
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- 102100039037 Vascular endothelial growth factor A Human genes 0.000 description 2
- 102100038217 Vascular endothelial growth factor B Human genes 0.000 description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 2
- 230000017455 cell-cell adhesion Effects 0.000 description 2
- 230000025611 cell-substrate adhesion Effects 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 2
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 2
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 description 2
- 102000003684 fibroblast growth factor 13 Human genes 0.000 description 2
- 108090000047 fibroblast growth factor 13 Proteins 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 210000000232 gallbladder Anatomy 0.000 description 2
- 229940076144 interleukin-10 Drugs 0.000 description 2
- 229940074383 interleukin-11 Drugs 0.000 description 2
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 2
- 229940076264 interleukin-3 Drugs 0.000 description 2
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 2
- 229940100602 interleukin-5 Drugs 0.000 description 2
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 2
- 229940096397 interleukin-8 Drugs 0.000 description 2
- XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N interleukin-8 Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](NC(C)=O)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N 0.000 description 2
- 229940118526 interleukin-9 Drugs 0.000 description 2
- CLEXYFLHGFJONT-UHFFFAOYSA-N jervine Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C(C(=O)C2=C3C)C1C2CCC13OC2CC(C)CNC2C1C CLEXYFLHGFJONT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 210000001577 neostriatum Anatomy 0.000 description 2
- 210000004923 pancreatic tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 210000001811 primitive streak Anatomy 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 description 2
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 102100038778 Amphiregulin Human genes 0.000 description 1
- 108010033760 Amphiregulin Proteins 0.000 description 1
- 206010002961 Aplasia Diseases 0.000 description 1
- 108010081589 Becaplermin Proteins 0.000 description 1
- 108010049931 Bone Morphogenetic Protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 108010049974 Bone Morphogenetic Protein 6 Proteins 0.000 description 1
- 108010049870 Bone Morphogenetic Protein 7 Proteins 0.000 description 1
- 108010007726 Bone Morphogenetic Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007350 Bone Morphogenetic Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102100024506 Bone morphogenetic protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100022525 Bone morphogenetic protein 6 Human genes 0.000 description 1
- 102100022544 Bone morphogenetic protein 7 Human genes 0.000 description 1
- 102000004219 Brain-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 1
- 108090000715 Brain-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 1
- 102100031092 C-C motif chemokine 3 Human genes 0.000 description 1
- 101710155856 C-C motif chemokine 3 Proteins 0.000 description 1
- 102100032367 C-C motif chemokine 5 Human genes 0.000 description 1
- 108010055166 Chemokine CCL5 Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 1
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 1
- 102100031706 Fibroblast growth factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000382 Fibroblast growth factor 6 Proteins 0.000 description 1
- 108010014612 Follistatin Proteins 0.000 description 1
- 102000016970 Follistatin Human genes 0.000 description 1
- 101150066002 GFP gene Proteins 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 101150016059 HOXA13 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150025110 HOXC6 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100028993 Hippocalcin-like protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 101000838883 Homo sapiens Hippocalcin-like protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000590830 Homo sapiens Monocarboxylate transporter 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000655246 Homo sapiens Neutral amino acid transporter A Proteins 0.000 description 1
- 101000617130 Homo sapiens Stromal cell-derived factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000049772 Interleukin-16 Human genes 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 101710163560 Lamina-associated polypeptide 2, isoform alpha Proteins 0.000 description 1
- 101710189385 Lamina-associated polypeptide 2, isoforms beta/gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000004058 Leukemia inhibitory factor Human genes 0.000 description 1
- 108090000581 Leukemia inhibitory factor Proteins 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 108010048043 Macrophage Migration-Inhibitory Factors Proteins 0.000 description 1
- 102100037791 Macrophage migration inhibitory factor Human genes 0.000 description 1
- 102100034068 Monocarboxylate transporter 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100025273 Monocarboxylate transporter 5 Human genes 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 102400000470 Neuromedin-U-25 Human genes 0.000 description 1
- 101800002021 Neuromedin-U-25 Proteins 0.000 description 1
- 101100519293 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) pdx-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 108091006600 SLC16A4 Proteins 0.000 description 1
- 102000012978 SLC1A4 Human genes 0.000 description 1
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 1
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 1
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 1
- 108010048349 Steroidogenic Factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000046283 TNF-Related Apoptosis-Inducing Ligand Human genes 0.000 description 1
- 102000036693 Thrombopoietin Human genes 0.000 description 1
- 108010041111 Thrombopoietin Proteins 0.000 description 1
- 102400000159 Thymopoietin Human genes 0.000 description 1
- 239000000898 Thymopoietin Substances 0.000 description 1
- AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N Thyrolar Chemical class IC1=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC=C(O)C(I)=C1 AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N Vitamin D3 Natural products C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C/C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N 0.000 description 1
- 102000013814 Wnt Human genes 0.000 description 1
- 108050003627 Wnt Proteins 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 229930002945 all-trans-retinaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 1
- 210000000013 bile duct Anatomy 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 229940112869 bone morphogenetic protein Drugs 0.000 description 1
- 229940077737 brain-derived neurotrophic factor Drugs 0.000 description 1
- 230000026287 bud dilation involved in lung branching Effects 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000002975 chemoattractant Substances 0.000 description 1
- 210000001953 common bile duct Anatomy 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 1
- 231100001129 embryonic lethality Toxicity 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000003158 enteroendocrine cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 210000002907 exocrine cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940100994 interleukin-7 Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 201000001251 maturity-onset diabetes of the young type 4 Diseases 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 102000045246 noggin Human genes 0.000 description 1
- 108700007229 noggin Proteins 0.000 description 1
- 210000003458 notochord Anatomy 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000002642 osteogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009996 pancreatic endocrine effect Effects 0.000 description 1
- 230000000849 parathyroid Effects 0.000 description 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 1
- 229930015704 phenylpropanoid Natural products 0.000 description 1
- 125000001474 phenylpropanoid group Chemical group 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 1
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 1
- NCYCYZXNIZJOKI-OVSJKPMPSA-N retinal group Chemical group C\C(=C/C=O)\C=C\C=C(\C=C\C1=C(CCCC1(C)C)C)/C NCYCYZXNIZJOKI-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 1
- 229960003471 retinol Drugs 0.000 description 1
- 235000020944 retinol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011607 retinol Substances 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010374 somatic cell nuclear transfer Methods 0.000 description 1
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 1
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 1
- 210000002325 somatostatin-secreting cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000002992 thymic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000005495 thyroid hormone Substances 0.000 description 1
- 229940036555 thyroid hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 229940099456 transforming growth factor beta 1 Drugs 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- NCYCYZXNIZJOKI-UHFFFAOYSA-N vitamin A aldehyde Natural products O=CC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C NCYCYZXNIZJOKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000005282 vitamin D3 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011647 vitamin D3 Substances 0.000 description 1
- QYSXJUFSXHHAJI-YRZJJWOYSA-N vitamin D3 Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-YRZJJWOYSA-N 0.000 description 1
- 229940021056 vitamin d3 Drugs 0.000 description 1
- 210000001325 yolk sac Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0603—Embryonic cells ; Embryoid bodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0603—Embryonic cells ; Embryoid bodies
- C12N5/0606—Pluripotent embryonic cells, e.g. embryonic stem cells [ES]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0676—Pancreatic cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0676—Pancreatic cells
- C12N5/0678—Stem cells; Progenitor cells; Precursor cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0679—Cells of the gastro-intestinal tract
- C12N5/068—Stem cells; Progenitors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/38—Vitamins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/117—Keratinocyte growth factors (KGF-1, i.e. FGF-7; KGF-2, i.e. FGF-12)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/119—Other fibroblast growth factors, e.g. FGF-4, FGF-8, FGF-10
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/155—Bone morphogenic proteins [BMP]; Osteogenins; Osteogenic factor; Bone inducing factor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/16—Activin; Inhibin; Mullerian inhibiting substance
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/30—Hormones
- C12N2501/38—Hormones with nuclear receptors
- C12N2501/385—Hormones with nuclear receptors of the family of the retinoic acid recptor, e.g. RAR, RXR; Peroxisome proliferator-activated receptor [PPAR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/40—Regulators of development
- C12N2501/405—Cell cycle regulated proteins, e.g. cyclins, cyclin-dependant kinases
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/40—Regulators of development
- C12N2501/41—Hedgehog proteins; Cyclopamine (inhibitor)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/40—Regulators of development
- C12N2501/415—Wnt; Frizzeled
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/13—Coculture with; Conditioned medium produced by connective tissue cells; generic mesenchyme cells, e.g. so-called "embryonic fibroblasts"
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
- C12N2506/02—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from embryonic cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
本出願は、米国特許仮出願第60/730,917号(表題「PDX1発現背側及び腹側前腸内胚葉(PDX1-EXPRESSING DORSAL AND VENTRAL FOREGUT ENDODERM)」、2005年10月27日提出)(この記載内容は参照により本明細書中で完全に援用される)の本出願であり、そしてそれに対する優先権を主張する。
率的に膵島/β−細胞株に向けることが有益である。
細胞表面分子のようなPDX1陰性前腸内胚葉細胞の細胞表面に発現される分子と結合する抗体、リガンド又は他の分子を用いることにより、細胞集団中の他の細胞から分離される。本発明の他の実施の形態は、PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞を富化、単離、及び/又は精製する方法に関する。このような実施の形態では、PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞は、表3から選択される細胞表面分子、或いは表4から選択される細胞表面分子のようなPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞の細胞表面上で発現される分子と結合する抗体、リガンド又は他の分子を用いることにより、細胞集団中の他の細胞から分離される。本発明のさらに他の実施の形態は、PDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞を富化、単離、及び/又は精製する方法に関する。このような実施の形態では、PDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞は、表3から選択される細胞表面分子のようなPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞の細胞表面で発現される分子と結合する抗体、リガンド又は他の分子を用いることにより、細胞集団中の他の細胞から分離される。
1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞の分化を促進し得る。本発明のさらなる実施の形態は、ヒト細胞を含む細胞集団中のヒトPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞の分化を促進し得る分化因子を同定する方法に関する。この方法は、ヒトPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞を含む細胞集団を得る工程、細胞集団に候補分化因子を供給する工程、第1の時点での細胞集団中の表3から選択されるマーカーのようなマーカーの発現を確定する工程、そして第2の時点での細胞集団中の同一マーカーの発現を確定する工程を包含する。このような実施の形態では、第2の時点は第1の時点の後であり、そして第2の時点は候補分化因子を細胞集団に供給した後である。第2の時点での細胞集団中のマーカーの発現が第1の時点での細胞集団中のマーカーの発現と比較して増大又は低減される場合には、候補分化因子はヒトPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞の分化を促進し得る。
る、段落1の細胞培養物。
ある、段落18の細胞培養物。
い、段落33の細胞集団。
るマーカーの発現より大きい、段落49の方法。
方法。
PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞へのPDX1陰性胚体内胚葉細胞の分化を促進するのに十分な量でレチノイドを当該細胞集団に供給すること(当該PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞は背側膵芽の細胞に分化し得る複能性細胞である)、そしてPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間を与えることをさらに包含し、当該PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間が当該細胞集団中のPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞の存在を検出することにより確定される、段落98の方法。
してPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間を与えることをさらに包含し、当該PDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間が当該細胞集団中のPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞の存在を検出することにより確定される、段落109の方法。
。
て起こる工程、そして当該第2の時点での当該細胞集団中のマーカーの発現が当該第1の時点での当該細胞集団中のマーカーの発現と比較した場合に増大又は低減されるかを判定する工程であって、当該細胞集団中の当該マーカーの発現の増大又は低減は当該候補分化因子がヒトPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞の分化を促進し得ることを示す工程を包含する方法。
原腸形成と呼ばれる初期ヒト発達におけるきわめて重大な段階は、受精後2〜3週間で起こる。原腸形成は、3つの一次胚葉が最初に特定化され、そして器官形成されるのがこの時期であるため、非常に有意である(Lu他、2001;Schoenwolf and Smith, 2000)。外胚葉は、身体の外被及び全神経系の終局的形成に関与するが、一方、心臓、血液、骨、骨格筋及び他の結合組織は中胚葉に由来する。胚体内胚葉は、食道、胃並びに小腸及び大腸を含む全腸管、並びに腸管に由来する器官、例えば肺、肝臓、胸腺、上皮小体及び甲状腺、胆嚢及び膵臓の形成に関与する胚葉として定義される(Grapin-Botton and Melton, 2000;Kimelman and Griffin, 2000;Tremblay他、2000;Wells and Melton, 1999;Wells and Melton, 2000)。非常に重要な区別は、胚体内胚葉と原始内胚葉と呼ばれる細胞の完全に別個の系統との間でなされるべきである。原始内胚葉は主として、胚体外組織、主に胎盤卵黄嚢の壁側内胚葉部分及び臓側内胚葉部分、並びにライヘルト膜の細胞外マトリックス物質の形成に関与する。
造)を通して移動する細胞に由来する。移動が起こると、胚体内胚葉はまず最前腸管に存在し、そして腸管の後端の形成に伴って終わる。
PDX1(STF−1、IDX−1、IPF−1、IUF−1及びGSFとも呼ばれる)は、膵臓及び吻側十二指腸の発生のために必要とされる転写因子である。PDX1は、後前腸内胚葉から生じる膵臓性内胚葉中で最初に発現され、そしてマウスではE8.5から出発して、外分泌細胞及び内分泌細胞の両方を生じる。その後、PDX1はベータ細胞及びいくつかのデルタ細胞に制限されるようになる。この発現パターンは、成人で保持される。PDX1は、発生の早期に十二指腸製内胚葉で(形成中の膵臓に隣接する)、次に十二指腸性腸細胞並びに腸内分泌細胞、洞性胃で、並びに総胆管、胆嚢管及び胆管でも発現される。発現のこの領域も、膵臓発現が主に吻側十二指腸に制限されるようになる時点で、限定されるようになる。
J.他, Nature, 606-609, 1994;Offield, MF,他, Devel. 983-995, 1996;Stoffers, D.A.他 Nature Genetics, 106-110, 1997)。PDX1は、インスリン及びソマトスタチン膵臓内分泌細胞の最終的分化中にも必要とされ、そしてヒトにおける単一対立遺伝子の機能的崩壊はMODY4型(青年の成人発症型糖尿病)及び後期開始II型糖尿病の重症膵臓機能不全に関連する(Stoffers D.A.他, Nature Genetics 138-139, 1997)。
的には前腸の後部分の背側由来の組織まで発生しない。
本発明の実施形態は、PDX1陰性内胚葉細胞の産生のための新規の確立したプロセスであって、PDX1陰性内胚葉細胞が腸管の前腸/中腸領域(PDX1陰性前腸/中腸内胚葉)由来の細胞、組織又は器官に分化し得る複能性細胞であるプロセスに関する。本明細書中で用いる場合、「複能性」又は「複能性細胞」とは、限定数の他の特定細胞型を生じ得るが、3つの一次胚細胞株(内胚葉、外胚葉及び中胚葉)すべてを生じ得るわけではない細胞型を指す。本明細書中で用いる場合、「前腸/中腸」は、腸管の前部分の細胞並びに腸管の中央部分の細胞(前腸/中腸接合部の細胞を含む)を指す。
本発明の実施形態は、PDX1陰性内胚葉細胞の産生のための新規の確立したプロセスであって、PDX1陽性内胚葉細胞が腸管の前腸/中腸領域(PDX1陽性前腸/中腸内胚葉)由来の細胞、組織又は器官に分化し得る複能性細胞であるプロセスに関する。本発明の他の実施形態は、PDX1陽性内胚葉細胞の産生のための新規の確立したプロセスであって、PDX1陽性内胚葉細胞が腸管の前腸/中腸領域(PDX1陽性前腸/中腸内胚葉)由来の細胞、組織又は器官に分化し得る複能性細胞であるプロセスに関する。本明細書中で用いる場合、「複能性」又は「複能性細胞」とは、限定数の他の特定細胞型を生じ得るが、3つの一次胚細胞株(内胚葉、外胚葉及び中胚葉)すべてを生じ得るわけではない細胞型を指す。本明細書中で用いる場合、「前腸/中腸」は、腸管の前部分の細胞並びに腸管の中央部分の細胞(前腸/中腸接合部の細胞を含む)を指す。いくつかの実施形態は、PDX1陽性内胚葉細胞は背側前腸内胚葉細胞である。他の実施形態では、PDX1
陽性内胚葉細胞は腹側前腸内胚葉細胞である。
又は精製により達成され得る。代替的方法として、PDX1発現の検出を可能にするために、PDX1陽性前腸内胚葉細胞、例えば背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞は、レポーター遺伝子、例えば緑色蛍光タンパク質(GFP)で標識され得る。このような蛍光標識細胞は次に、蛍光励起細胞選別器(FACS)により精製され得る。本発明のさらなる態様は、PDX1陽性前腸内胚葉細胞を含む細胞培養物及び富化細胞集団に、並びにPDX1陽性前腸内胚葉へのそしてそれからの分化に有用な因子を同定するための方法に関する。本発明の付加的態様は、背側PDX1陽性前腸内胚葉細胞を含む細胞培養物及び富化細胞集団に、並びに背側PDX1陽性前腸内胚葉へのそしてそれからの分化に有用な因子を同定するための方法に関する。本発明のさらなる他の態様は、腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞を含む細胞培養物及び富化細胞集団に、並びに腹側PDX1陽性前腸内胚葉へのそしてそれからの分化に有用な因子を同定するための方法に関する。
集団は、PDX1胚体内胚葉細胞又は細胞集団よりも約2桁以上大きいレベルでPDX1、SOX17、HOXA13及びHOXC6から成る群から選択されるマーカーの1つ又は複数を発現する。さらに他の実施形態では、産生される背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞又は細胞集団は、PDX1陰性胚体内胚葉細胞又は細胞集団よりおよそ2桁又は3桁以上大きいレベルで、表3から選択される1つ又は複数のマーカーを発現する。さらなる実施形態では、産生される背側PDX1陽性前腸内胚葉細胞又は細胞集団は、PDX1陰性胚体内胚葉細胞又は細胞集団よりおよそ2桁又は3桁以上大きいレベルで、表4から選択される1つ又は複数のマーカーを発現する。
PDX1陽性前腸内胚葉細胞を含む細胞培養物及び/又は細胞集団は、PDX1陰性胚体内胚葉(「胚体内胚葉」とも呼ばれる)を先ず産生することにより、多能性細胞から産生される。胚体内胚葉を含む細胞培養物及び富化細胞集団を産生するように多能性細胞を分化させるプロセスは、以下に簡潔に、また米国特許第11/021,618号(表題「胚体内胚葉(DEFINITIVE ENDODERM)」、2004年12月23日出願)(その開示は参照により本明細書に完全に援用される)に詳細に記載されている。これらのプロセスのいくつかでは、出発材料として使用される多能性細胞は、幹細胞である。或る特定のプロセスでは、胚体内胚葉細胞を含む胚体内胚葉細胞培養物及び富化細胞集団は、胚性幹細胞から産生される。本明細書中で用いる場合、「胚性」とは、単一接合体で始まり、発生した配偶子細胞以外には多能性又は全能性細胞を含まない多細胞構造で終わる生物体の一連の発生段階を指す。配偶子融合により得られる胚のほかに、「胚性」という用語は、体細胞核移入により得られる胚を指す。胚体内胚葉細胞を派生させる好ましい方法は、胚体内胚葉産生のための出発材料として、ヒト胚性幹細胞を利用することである。このような多能性細胞は、桑実胚に由来する細胞、胚の内部細胞塊又は胚の生殖腺隆起に由来する細胞であり得る。ヒト胚性幹細胞は、当該技術分野で既知の方法を使用して、実質的な分化無しで多能性状態で培養物中で維持されることができる。このような方法は、例えば米国特許第5,453,357号、同第5,670,372号、同第5,690,926号、同第5,843,780号、同第6,200,806号及び同第6,251,671号に(その開示は参照により本明細書に完全に援用される)記載されている。
れかの培養物中に保持され得る。いくつかの胚性幹細胞保持手法では、血清代替物が用いられる。他の場合には、無血清培養技法、例えば米国特許出願第2003/0190748号(その開示は参照により本明細書に完全に援用される)に記載される技法が用いられる。
胚体内胚葉へのhESC培養の進行は、胚体内胚葉に特徴的なマーカーの発現を確定することによりモニタリングされ得る。いくつかのプロセスでは、或る特定のマーカーの発現は、マーカーの存在又は非存在を検出することにより確定される。代替的には或る特定
のマーカーの発現は、マーカーが細胞培養物又は細胞集団の細胞中に存在するレベルを測定することにより確定され得る。このようなプロセスでは、マーカー発現の測定は、定性的又は定量的であり得る。マーカー遺伝子により産生されるマーカーの発現を定量する一方法は、定量的PCR(Q−PCR)の使用による。Q−PCRを実施する方法は、当該技術分野で既知である。マーカー遺伝子発現を定量するために、当該技術分野で既知である他の方法も用いられ得る。例えばマーカー遺伝子産物の発現は、対象のマーカー遺伝子産物に特異的な抗体を用いることにより検出され得る。或る特定のプロセスでは、胚体内胚葉に特徴的なマーカー遺伝子の発現並びにhESC及び他の細胞型に特徴的なマーカー遺伝子の有意な発現の欠如が確定される。
の他のマーカーを発現するが、これらに限定されない。胚体内胚葉細胞は、SOX7マーカー遺伝子のレベルよりも高いレベルでCXCR4マーカー遺伝子を発現するため、CXCR4及びSOX7の両方の発現がモニタリングされ得る。他のプロセスでは、CXCR4マーカー遺伝子及びOCT4マーカー遺伝子の両方の発現がモニタリングされる。さらに、胚体内胚葉細胞は、AFP、SPARC又はトロンボモジュリン(TM)マーカー遺伝子のレベルよりも高いレベルでCXCR4マーカー遺伝子を発現するため、これらの遺伝子の発現もまたモニタリングされ得る。
上述のプロセスのいずれかにより産生される胚体内胚葉細胞は、このような細胞に特異的である親和性タグを使用することにより、富化、単離及び/又は精製することができる。胚体内胚葉細胞に特異的な親和性タグの例は、胚体内胚葉細胞の細胞表面上に存在するが、本明細書中に記載する方法により産生される細胞培養物中に見出されるであろう他の細胞型上に実質的に存在するマーカー分子(例えば、ポリペプチド)に特異的である抗体、リガンド又は他の結合剤である。いくつかのプロセスでは、CXCR4に結合する抗体は、胚体内胚葉細胞の富化、単離又は精製用の親和性タグとして使用される。他のプロセスでは、ケモカインSDF−1又はSDF−1に基づく他の分子もまた、親和性タグとして使用され得る。このような分子としては、SDF−1フラグメント、SDF−1融合体又はSDF−1擬似体が挙げられるが、これらに限定されない。
上記の方法により産生される細胞組成物としては、胚体内胚葉を含む細胞培養物、並びに胚体内胚葉に富んだ細胞集団が挙げられる。例えば、培養物中の細胞の少なくとも約50〜80%が胚体内胚葉細胞である胚体内胚葉細胞を含む細胞培養物が産生され得る。分化プロセスの効率は、或る特定のパラメーター、例えば細胞増殖条件、増殖因子濃度及び培養工程の時機(これらに限定されない)を修正することにより調整され得るため、本明細書中に記載される分化手法は、胚体内胚葉への多能性細胞の約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、又は約95%より多い転換を生じ得る。胚体内胚葉細胞の単離が用いられるプロセスでは、例えばCXCR4受容体と結合する親和性試薬を用いることにより、実質的に純粋な胚体内胚葉細胞集団が回収され得る。
胚体内胚葉細胞は、これらの細胞のさらなる分化により膵臓分化に向けて特殊化されて、PDX1陰性前腸内胚葉細胞を産生し得る。本明細書中に記載される分化プロセスのいくつかでは、胚体内胚葉細胞を含む細胞培養物並びに富化又は精製された細胞集団は、PDX1陰性前腸内胚葉細胞を含む細胞培養物及び/又は富化細胞集団へのさらなる分化のために用いられ得る。
ト多能性細胞の分化後、約1日間、約2日、約3日、約4日、約5日、約6日、約7日、約8日、約9日、約10日又は10日超の間、低減されるか又は排除され得る。
ロセスでは、TGFβスーパーファミリー増殖因子シグナル伝達は、胚体内胚葉へのヒト多能性細胞の大部分の分化後(例えば、以下の実施例に記載されるように3日、4又は5日間の分化プロトコール後)、約2日間低減されるか又は排除される。ほぼ同時に、胚体内胚葉細胞の細胞培養物又は細胞集団に、50ng/mlのFGF−10及び0.2μMのKAAD−シクロパミンを供給する。
CA)から入手可能である。十分な容量の成長培地へこのストック溶液を十分量添加することにより、所望の量のB27を補充した培地が生じる。例えば、成長培地90mlへ50倍B27ストック溶液10mlを添加することにより、5倍B27を補充した成長培地が生じる。培地中のB27サプリメントの濃度は、約0.1倍、約0.2倍、約0.3倍、約0.4倍、約0.5倍、約0.6倍、約0.7倍、約0.8倍、約0.9倍、約1倍、約1.1倍、約1.2倍、約1.3倍、約1.4倍、約1.5倍、約1.6倍、約1.7倍、約1.8倍、約1.9倍、約2倍、約2.5倍、約3倍、約3.5倍、約4倍、約4.5倍、約5倍、約6倍、約7倍、約8倍、約9倍、約10倍、約11倍、約12倍、約13倍、約14倍、約15倍、約16倍、約17倍、約18倍、約19倍、約20倍及び約20倍以上であり得る。
も約1.1μM、少なくとも約1.2μM、少なくとも約1.3μM、少なくとも約1.4μM、少なくとも約1.5μM、少なくとも約1.6μM、少なくとも約1.7μM、少なくとも約1.8μM、少なくとも約1.9μM、少なくとも約2μM、少なくとも約2.1μM、少なくとも約2.2μM、少なくとも約2.3μM、少なくとも約2.4μM、少なくとも約2.5μM、少なくとも約2.6μM、少なくとも約2.7μM、少なくとも約2.8μM、少なくとも約2.9μM、少なくとも約3μM、少なくとも約3.5μM、少なくとも約4μM、少なくとも約4.5μM、少なくとも約5μM、少なくとも約10μM、少なくとも約20μM、少なくとも約30μM、少なくとも約40μM又は少なくとも約50μMの濃度で存在するように、細胞培養物の細胞へ供給される。このような実施形態では、レチノイドは、約1日、約2日、約3日、約4日、約5日、約6日、約7日、約8日、約9日、約10日又は約10日超で細胞に供給され、その後胚体内胚葉細胞培養物でのTGFβスーパーファミリー増殖因子シグナル伝達が低滅又は除かれる。好ましい実施形態では、約0.05μM RA〜約2μM RAが、約2〜3日、PDX−1陰性前腸内胚葉細胞培養物に供給され、その後TGFβスーパーファミリー増殖因子シグナル伝達が低滅又は除去される。
HNF1b及び/又はFOXA1の発現、並びにPDX1の発現の欠如は、Q−PCR及び/又は免疫細胞化学のような上記の方法を用いて検出され及び/又は定量されて、PDX1陰性前腸内胚葉へのPDX1陰性胚体内胚葉の分化をモニタリングする。上記のマーカーのほかに、本発明のいくつかの実施形態では、SOX17の発現も確定される。
本発明のいくつかの実施形態は、PDX1陰性前腸内胚葉細胞を含む細胞培養物又は細胞集団のような細胞組成物に関し、ここでPDX1陰性前腸内胚葉細胞は、腸管の前部分に由来する細胞、組織又は器官へ分化することができる多分化能細胞である。或る特定の実施形態によれば、PDX1陰性前腸内胚葉は哺乳類細胞であり、好ましい実施形態では、そのような細胞はヒト細胞である。
胞は、培養物において総細胞の約90%未満、約85%未満、約80%未満、約75%未満、約70%未満、約65%未満、約60%未満、約55%未満、約50%未満、約45%未満、約40%未満、約35%未満、約30%未満、約25%未満、約20%未満、約15%未満、約12%未満、約10%未満、約8%未満、約6%未満、約5%未満、約4%未満、約3%未満、約2%未満又は約1%未満を構成する。
前腸内胚葉細胞、約10個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約1個のPDX1陰性前腸内胚葉細胞、約5個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約1個のPDX1陰性前腸内胚葉細胞、約4個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約1個のPDX1陰性前腸内胚葉細胞、約2個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約1個のPDX1陰性前腸内胚葉細胞、約1個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約1個のPDX1陰性前腸内胚葉細胞、約1個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約2個のPDX1陰性前腸内胚葉細胞、約1個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約4個のPDX1陰性前腸内胚葉細胞、約1個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約5個のPDX1陰性前腸内胚葉細胞、約1個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約10個のPDX1陰性前腸内胚葉細胞、約1個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約20個のPDX1陰性前腸内胚葉細胞、約1個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約50個のPDX1陰性前腸内胚葉細胞、約1個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約100個のPDX1陰性前腸内胚葉細胞、約1個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約1000個のPDX1陰性前腸内胚葉細胞、約1個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約10,000個のPDX1陰性前腸内胚葉細胞、1個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約100,000個のPDX1陰性前腸内胚葉細胞及び約1個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約1,000,000個のPDX1陰性前腸内胚葉細胞を含む組成物が意図される。
されよう。いくつかの実施形態では、SOX17、HNF1b及び/又はFOXA1から成る群から選択される1つ又は複数のマーカーの発現は、少なくとも約5%のヒト細胞において、少なくとも約10%のヒト細胞において、少なくとも約15%のヒト細胞において、少なくとも約20%のヒト細胞において、少なくとも約25%のヒト細胞において、少なくとも約30%のヒト細胞において、少なくとも約35%のヒト細胞において、少なくとも約40%のヒト細胞において、少なくとも約45%のヒト細胞において、少なくとも約50%のヒト細胞において、少なくとも約55%のヒト細胞において、少なくとも約60%のヒト細胞において、少なくとも約65%のヒト細胞において、少なくとも約70%のヒト細胞において、少なくとも約75%のヒト細胞のヒト細胞において、少なくとも約80%のヒト細胞において、少なくとも約85%のヒト細胞において、少なくとも約90%のヒト細胞において、少なくとも約95%のヒト細胞において、或いは少なくとも約98%のヒト細胞において、PDX1マーカーの発現よりも多い。いくつかの実施形態では、細胞培養物又は細胞集団中のヒト細胞のパーセント(ここで、SOX17、HNF1b及び/又はFOXA1から成る群から選択される1つ又は複数のマーカーの発現は、PDX1マーカーの発現よりも多い)は、フィーダー細胞を考慮せずに算出される。
本明細書中に記載されるPDX1陽性前腸内胚葉細胞を含むPDX1陽性前腸内胚葉細胞培養物及び細胞集団は、上記のような多能性細胞から生じるPDX1陰性胚体内胚葉細胞から産生される。好ましい方法は、出発物質としてヒト胚性幹細胞を利用する。一実施形態では、hESCは先ずPDX1陰性胚体内胚葉細胞に転換され、これは次に、PDX1陽性前腸内胚葉細胞に転換される。しかしながら、PDX1陽性前腸内胚葉の産生のための出発物質は、多能性細胞分化方法を用いて産生される胚体内胚葉細胞に限定されないと理解されたい。むしろ、任意のPDX1陰性胚体内胚葉細胞が、それらの起源と関係なく、本明細書中に記載される方法に用いられ得る。
間又は5日である必要はないと当業者は理解する。
馴化培地が細胞培養物中に存在する。これらの分化因子は、RA及び/又はその他に中−前腸分化因子、例えばFGF−4及びFGF−10(これらに限定されない)と組合せて用いられ得る。例えばいくつかの実施形態では、アクチビンA及び/又はアクチビンBは、少なくとも約5ng/ml、少なくとも約10ng/ml、少なくとも約25ng/ml、少なくとも約50ng/ml、少なくとも約75ng/ml、少なくとも約100ng/ml、少なくとも約200ng/ml、少なくとも約300ng/ml、少なくとも約400ng/ml、少なくとも約500ng/ml、又は少なくとも約1000ng/mlの濃度で細胞培養物中に存在し得る。本発明のさらなる実施形態では、馴化培地は、全培地の少なくとも約1%、少なくとも約5%、少なくとも約10%、少なくとも約20%、少なくとも約30%、少なくとも約40%、少なくとも約50%、少なくとも約60%、少なくとも約70%、少なくとも約80%、少なくとも約90%、少なくとも約100%の濃度で細胞培養物中に存在する。いくつかの実施形態では、アクチビンA、アクチビンB及び馴化培地がRAとともに細胞培地に供給される。好ましい実施形態では、PDX1陰性胚体内胚葉細胞は、約1μMのRA、約25ng/mlのアクチビンA並びに分化hESCにより約24時間状態調節された低血清RPMI培地を含む培養中でPDX1陽性前腸内胚葉細胞に分化されるが、この場合、分化hESCは約100ng/mlのアクチビンAを含む低血清RPMI中で約5日間分化されている。別の好ましい実施形態では、アクチビンB及び/又はFGF−10はさらにまた、それぞれ25ng/ml及び50ng/mlで培養中に存在する。
とで、所望量のB27を添加した培地が作られる。例えば、50倍B27ストック溶液10mlを成長培地90mlに加えることで、5倍B27を添加した成長培地が作られる。培地中のB27サプリメントの濃度は、約0.1倍、約0.2倍、約0.3倍、約0.4倍、約0.5倍、約0.6倍、約0.7倍、約0.8倍、約0.9倍、約1倍、約1.1倍、約1.2倍、約1.3倍、約1.4倍、約1.5倍、約1.6倍、約1.7倍、約1.8倍、約1.9倍、約2倍、約2.5倍、約3倍、約3.5倍、約4倍、約4.5倍、約5倍、約6倍、約7倍、約8倍、約9倍、約10倍、約11倍、約12倍、約13倍、約14倍、約15倍、約16倍、約17倍、約18倍、約19倍、約20倍及び約20倍超であり得る。
本明細書中に記載される背側PDX1陽性前腸内胚葉細胞を含む背側PDX1陽性前腸内胚葉細胞培養物及び細胞集団は、上記のような多能性細胞から生じるPDX1陰性胚体内胚葉から産生される。さらに、上記のように、好ましい方法は出発材料としてヒト胚性幹細胞を利用する。一実施形態では、hESCは先ずPDX1陰性胚体内胚葉細胞に転換され、これは次に、背側PDX1陽性前腸内胚葉細胞に転換される。しかしながら、背側PDX1陽性前腸内胚葉細胞の産生のための出発材料は、多能性細胞分化方法を用いて産生される胚体内胚葉細胞に限定されないと理解される。むしろ、任意のPDX1陰性胚体内胚葉細胞は、それらの起源にかかわらず、本明細書中に記載される方法に用いられ得る。
%、少なくとも21%、少なくとも22%、少なくとも23%、少なくとも24%、少なくとも25%、少なくとも26%、少なくとも27%、少なくとも28%、少なくとも29%、少なくとも30%、少なくとも31%、少なくとも32%、少なくとも33%、少なくとも34%、少なくとも35%、少なくとも36%、少なくとも37%、少なくとも38%、少なくとも39%、少なくとも40%、少なくとも41%、少なくとも42%、少なくとも43%、少なくとも44%、少なくとも45%、少なくとも46%、少なくとも47%、少なくとも48%、少なくとも49%、少なくとも50%、少なくとも51%、少なくとも52%、少なくとも53%、少なくとも54%、少なくとも55%、少なくとも56%、少なくとも57%、少なくとも58%、少なくとも59%、少なくとも60%、少なくとも61%、少なくとも62%、少なくとも63%、少なくとも64%、少なくとも65%、少なくとも66%、少なくとも67%、少なくとも68%、少なくとも69%、少なくとも70%、少なくとも71%、少なくとも72%、少なくとも73%、少なくとも74%又は少なくとも75%の細胞培養物又は細胞集団を意味する。
ら除去される。例えば上記の分化因子は、それらの添加後、約1日、約2日、約3日、約4日、約5日、約6日、約7日、約8日、約9日又は約10日以内に除去され得る。
本明細書中に記載される腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞を含む腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞培養物及び細胞集団は、上記のような多能性細胞から生じるPDX1陰性胚体内胚葉から産生される。さらに、上記のように、好ましい方法は出発材料としてヒト胚性幹細胞を利用する。一実施形態では、hESCは先ずPDX1陰性胚体内胚葉細胞に転換され、これは次に、腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞に転換される。しかしながら、腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞の産生のための出発材料は、多能性細胞分化方法を用いて産生される胚体内胚葉細胞に限定されないと理解される。むしろ、任意のPDX1陰性胚体内胚葉細胞は、それらの起源にかかわらず、本明細書中に記載される方法に用いられ得る。
%、少なくとも65%、少なくとも66%、少なくとも67%、少なくとも68%、少なくとも69%、少なくとも70%、少なくとも71%、少なくとも72%、少なくとも73%、少なくとも74%又は少なくとも75%の細胞培養物又は細胞集団を意味する。
/v)未満、約9%(v/v)未満、約10%(v/v)未満、約15%(v/v)未満又は約20%(v/v)未満であり得る。いくつかの実施形態では、腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞は血清を用いずに増殖される。他の実施形態では、腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞は血清代替品で増殖される。
多能性細胞からの胚体内胚葉細胞の分化に関するのと同様に、PDX1陰性、SOX17陽性胚体内胚葉からPDX1陽性前腸内胚葉細胞への分化の進行は、これらの細胞型に特徴的なマーカーの発現を確定することによりモニタリングされ得る。このようなモニタリングは、種々の条件下での、例えば1つ又は複数の分化因子濃度及び環境条件下での所望量のPDX1陽性前腸内胚葉の産生のために十分である時間の量を確定させ得る。好ましい実施形態では、所望量のPDX1陽性前腸内胚葉の産生のために十分である時間の量は、PDX1の発現を検出することにより確定される。本発明のいくつかの実施形態では、或る特定のマーカーの発現は、マーカーの存在又は非存在を検出することにより確定される。代替的には、或る特定のマーカーの発現は、マーカーが細胞培養物又は細胞集団の細胞中に存在するレベルを測定することにより確定され得る。このような実施形態では、マーカー発現の測定は、定性的又は定量的であり得る。上記のように、マーカー遺伝子により産生される発現マーカーを定量する好ましい方法は、Q−PCRの使用による。特定の実施形態では、Q−PCRは、PDX1陽性前腸内胚葉に特徴的なマーカー遺伝子の発現を、並びに他の細胞型に特徴的なマーカー遺伝子の発現の欠如を定量することにより、PDX1陽性前腸内胚葉細胞へのPDX1陰性、SOX17陽性胚体内胚葉培養の細胞の進行をモニタリングするために用いられる。当該技術分野で既知である他の方法も、マーカー遺伝子発現を定量するために用いられ得る。例えばマーカー遺伝子産物の発現は、対象となる当該マーカー遺伝子産物に特異的な抗体を用いることにより検出され得る。本発明のいくつかの実施形態では、PDX1陽性前腸内胚葉に特徴的なマーカー遺伝子の発現並びにPDX1陰性胚体内胚葉、hESC及び他の細胞型に特徴的なマーカー遺伝子の有意の発現の欠如が確定される。
以下の実施例中の表3及び/又は表4に記載される1つ又は複数のマーカーの発現は、背側PDX1陽性内胚葉へのPDX1陰性胚体内胚葉の分化をモニタリングするために、上記の方法、例えばQ−PCR及び/又は免疫細胞化学を用いて検出及び/又は定量され得る。背側偏向及び腹側偏向PDX1陽性前腸内胚葉細胞の両方に関連したマーカーは、表3に記載されている。これらのマーカーのうち、CDH6、GABRA2、GRIA3、IL6R、KCNJ2、LGALS3、LGALS3/GALIG、SERPINF2及びSLC27A2から成る群から選択されるマーカーは、細胞表面マーカーである。背側PDX1陽性前腸内胚葉の産生をモニタリングするための表3に列挙されるいくつかの好ましいマーカーは、SERPINF2、DUSP9、CDH6及びSOX9から成る群から選択される。背側偏向前腸内胚葉に関連したマーカーは、表4に記載されている。表4マーカーの各々は、他のPDX1陽性細胞と比較して、背側PDX1陽性前腸内胚葉細胞中で選択的に、特異的に又は独自的に発現される。これらのマーカーのうち、ADORA2A、CD47、EPB41L1、MAG、SFRP5、SLC16A10、SLC16A2、SLC1A3、SLC30A4、SLICK、SLITRK4及びXPR1から成る群から選択されるマーカーは、細胞表面マーカーである。背側PDX1陽性前腸内胚葉の産生をモニタリングするための表4に列挙されるいくつかの好ましいマーカーは、HOXA1、PDE11A、FAM49A及びWNT5Aから成る群から選択される。
胚葉、壁側内胚葉及び/又は神経細胞を実質的に含有しない。
前節に記載されたように、背側偏向及び腹側偏向PDX1陽性前腸内胚葉細胞に関連したマーカーは、表3に記載されている。このようなものとして、表3に記載されるマーカーのうちの1つ又は複数の発現は、上記の方法、例えばQ−PCR及び/又は免疫細胞化学を用いて検出及び/又は定量されて、腹側PDX1陽性内胚葉へのPDX1陰性胚体内胚葉の分化をモニタリングし得る。表3に記載されるマーカーのうち、CDH6、GABRA2、GRIA3、IL6R、KCNJ2、LGALS3、LGALS3/GALIG、SERPINF2及びSLC27A2から成る群から選択されるマーカーは、細胞表面マーカーである。腹側PDX1陽性前腸内胚葉の産生をモニタリングするための表3に列挙されるいくつかの好ましいマーカーは、SERPINF2、DUSP9、CDH6及びSOX9から成る群から選択される。さらに、表4に記載されるマーカーは、背側偏向前腸内胚葉中で選択的に、特異的に又は独自的に発現されるため、これらのマーカーのうちの1つ又は複数の、背側PDX1陽性前腸内胚葉中での発現と比較した場合の、発現の欠如又は発現低減を検出することは、腹側PDX1陽性前腸内胚葉へのPDX1陰性胚体内胚葉の分化をモニタリングするために有用でもある。表4マーカーのうち、ADORA2A、CD47、EPB41L1、MAG、SFRP5、SLC16A10、SLC16A2、SLC1A3、SLC30A4、SLICK、SLITRK4及びXPR1から成る群から選択されるマーカーは、細胞表面マーカーである。背側PDX1陽性前腸内胚葉の産生をモニタリングするための表4に列挙されるいくつかの好ましいマーカーは、HOXA1、PDE11A、FAM49A及びWNT5Aから成る群から選択される。このようなものとして、表3から選択される1つ又は複数のマーカーを発現するPDX1陽性細胞中のこれらのマーカーの非存在又は微量の発現は、腹側PDX1陽性ということを示す。
上記のプロセスのいずれかにより産生されるPDX1陽性前腸内胚葉細胞、例えば背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞は、このような細胞に特異的である親和性タグを用いることにより、富化され、単離され、及び/又は精製され得る。背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞に特異的な親和性タグの例は、背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞の細胞表面に存在するが、本明細書中に記載される方法により産生される細胞培養物中に見出される他の細胞型上には実質的に存在しないマーカー分子(例えばポリペプチド)に特異的な抗体、リガンド又は他の結合作因である。いくつかのプロセスでは、CDH6、GABRA2、GRIA3、IL6R、KCNJ2、LGALS3、LGALS3/GALIG、SERPINF2、SLC27A2、ADORA2A、
CD47、EPB41L1、MAG、SFRP5、SLC16A10、SLC16A2、SLC1A3、SLC30A4、SLICK、SLITRK4及びXPR1から成る群から選択される細胞表面マーカーと結合する抗体が、背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞の富化、単離又は精製のための親和性タグとして用いられる。
本発明の付加的態様に関して、背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞は、富化され、単離され、及び/又は精製され得る。本発明のいくつかの実施形態では、背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞に関して富化される細胞集団は、細胞培養物からこのような細胞を単離することにより産生される。
PDX1陰性細胞はそうではないため、これら2つの細胞型は分離され得る。いくつかの実施形態では、蛍光標識背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞及び非標識PDX1陰性細胞の混合物を含む細胞懸濁液は、FACSを用いて選別される。背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞は、PDX1陰性細胞から別々に回収され、それによりこのような細胞型の単離を生じる。所望により、単離細胞組成物は、背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞に特異的である同一の又は異なるマーカーを用いる付加的回数の選別により、さらに精製され得る。
本発明のいくつかの実施形態は、背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞を含む細胞組成物、例えば細胞培養物又は細胞集団であって、背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞が背側膵芽及び/又は腹側膵芽のような腸管の前部分に由来する細胞、組織又は器官に分化し得る複能性細胞である細胞組成物に関する。或る特定の実施形態によれば、背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞は哺乳類の細胞であり、好ましい実施形態では、このような細胞はヒト細胞である。
約3%未満、約2%未満、又は約1%未満含まれる。さらに別の実施形態では、中胚葉細胞は、培養物中で全細胞の約90%未満、約85%未満、約80%未満、約75%未満、約70%未満、約65%未満、約60%未満、約55%未満、約50%未満、約45%未満、約40%未満、約35%未満、約30%未満、約25%未満、約20%未満、約15%未満、約12%未満、約10%未満、約8%未満、約6%未満、約5%未満、約4%未満、約3%未満、約2%未満、又は約1%未満含まれる。
側PDX1陽性前腸内胚葉細胞、約1000個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約1個の背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞、約500個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約1個の背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞、約100個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約1個の背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞、約10個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約1個の背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞、約5個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約1個の背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞、約4個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約1個の背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞、約2個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約1個の背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞、約1個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約1個の背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞、約1個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約2個の背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞、約1個の多能性細胞に対して少なくとも約4個の背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞、約1個の多能性細胞に対して少なくとも約5個の背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞、約1個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約10個の背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞、約1個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約20個の背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞、約1個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約50個の背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞、約1個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約100個の背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞、約1個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約1000個の背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞、約1個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約10,000個の背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞、約1個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約100,000個の背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞、約1個のPDX1陰性胚体内胚葉細胞に対して少なくとも約1,000,000個の背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞を含む組成物が意図される。
くとも約70%で、ヒト細胞の少なくとも約75%で、ヒト細胞の少なくとも約80%で、ヒト細胞の少なくとも約85%で、ヒト細胞の少なくとも約90%で、ヒト細胞の少なくとも約95%で、又はヒト細胞の少なくとも約98%で、AFP、SOX7、SOX1、ZIC1及び/又はNFMマーカーの発現よりも大きい。いくつかの実施形態では、表4から選択される1つ又は複数のマーカーの発現がAFP、SOX7、SOX1、ZIC1及び/又はNFMマーカーの発現よりも大きい細胞培養物又は集団中のヒト細胞のパーセンテージは、フィーダー細胞を考慮せずに算定される。
OX7、SOX1、ZIC1及び/又はNFMマーカーの発現より大きい組成物に関する。他の実施形態では、SOX17、HOXA13及びHOXC6から成る群から選択される1つ又は複数のマーカーの発現、及び表3又は表4から選択される1つ又は複数のマーカーの発現は、内胚葉細胞の少なくとも約5%、内胚葉細胞の少なくとも約10%、内胚葉細胞の少なくとも約15%、内胚葉細胞の少なくとも約20%、内胚葉細胞の少なくとも約25%、内胚葉細胞の少なくとも約30%、内胚葉細胞の少なくとも約35%、内胚葉細胞の少なくとも約40%、内胚葉細胞の少なくとも約45%、内胚葉細胞の少なくとも約50%、内胚葉細胞の少なくとも約55%、内胚葉細胞の少なくとも約60%、内胚葉細胞の少なくとも約65%、内胚葉細胞の少なくとも約70%、内胚葉細胞の少なくとも約75%、内胚葉細胞の少なくとも約80%、内胚葉細胞の少なくとも約85%、内胚葉細胞の少なくとも約90%、内胚葉細胞の少なくとも約95%、又は内胚葉細胞の少なくとも約98%でAFP、SOX7、SOX1、ZIC1及び/又はNFMマーカーの発現より大きい。
本発明のいくつかの態様は、SOX17陽性胚体内胚葉細胞を含む細胞培養物又は細胞集団中でのPDX1遺伝子産物の発現を増大する方法に関する。このような実施形態では、SOX17陽性胚体内胚葉細胞は、PDX1遺伝子産物の発現を増大するために十分である量で分化因子と接触される。分化因子と接触されるSOX17陽性胚体内胚葉細胞は、PDX1陰性又はPDX1陽性のいずれかであり得る。いくつかの実施形態では、分化因子はレチノイドである。或る特定の実施形態では、SOX17陽性胚体内胚葉細胞は、約0.01μM〜約50μMの範囲の濃度でレチノイドと接触される。好ましい実施形態では、レチノイドはRAである。
本発明の付加的態様は、PDX1陽性前腸内胚葉細胞へのPDX1陰性胚体内胚葉細胞の分化を促進し得る1つ又は複数の分化因子を同定する方法に関する。このような方法では、PDX1陰性胚体内胚葉細胞を含む細胞培養物又は細胞集団が得られ、そして細胞培養物又は細胞集団中でのPDX1の発現が確定される。PDX1の発現を確定した後、細胞培養物又は細胞集団の細胞は、候補分化因子と接触される。いくつかの実施形態では、PDX1の発現は、細胞と候補分化因子との接触時、又は接触直後に、確定される。PDX1発現は次に、細胞と候補分化因子との接触後の1つ又は複数の時点で確定される。候補分化因子との接触前のPDX1発現と比較して、PDX1の発現が候補分化因子との接触後に増大された場合、候補分化因子は、PDX1陽性前腸内胚葉細胞へのPDX1陰性胚体内胚葉細胞の分化を促進し得ると同定される。
数の発現は、細胞と候補分化因子との接触の前というよりむしろ、細胞培養物又は細胞集団の細胞と候補分化因子との接触時又は接触直後に確定され得ると理解される。このような実施形態では、細胞と候補分化因子との接触時又は接触直後の1つ又は複数のPDX1、HOXA13及びHOXC6の発現は、細胞と候補分化因子との接触後の1つ又は複数の時点での1つ又は複数のPDX1、HOXA13及びHOXC6の発現と比較される。
本明細書中に記載される或る特定のスクリーニング方法は、背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞の分化を促進し得る少なくとも1つの分化因子を同定するための方法に関する。これらの方法のいくつかの実施形態では、背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞、例えばヒト背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞を含む細胞集団が得られる。次に細胞集団は、候補分化因子を供給される。候補分化因子を供給される前又はそれとほぼ同時である第1の時点で、マーカーの発現が確定される。代替的には
、マーカーの発現は、候補分化因子の供給後に確定され得る。第1の時点の後、そして細胞集団に候補分化因子を供給する工程の後である第2の時点で、同一マーカーの発現が再び確定される。候補分化因子が背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞の分化を促進し得るか否かは、第1の時点でのマーカーの発現を第2の時点でのマーカーの発現と比較することにより確定される。第2の時点でのマーカーの発現が、第1の時点でのマーカーの発現と比較して増大されるか又は低減された場合には、候補分化因子は、背側及び/又は腹側PDX1陽性前腸内胚葉細胞の分化を促進し得る。好ましい実施形態では、マーカーの発現は、Q−PCRにより確定される。
げられる。
つ又は複数の増殖因子を含む。
、第一及び第2の時点の両方で確定される。このような実施形態では、複数の同一マーカーの発現が、第1の時点及び第2の時点の両方で確定される。いくつかの実施形態では、その各々が第1の時点の後であり、そしてその各々が候補分化因子を細胞集団に供給した後である複数の時点で、マーカー発現が確定される。或る特定の実施形態では、マーカー発現はQ−PCRにより確定される。他の実施形態では、マーカー発現は免疫細胞化学により確定される。
時点で低減する実施形態では、低減量は、少なくとも約2倍、少なくとも約5倍、少なくとも約10倍、少なくとも約20倍、少なくとも約30倍、少なくとも約40倍、少なくとも約50倍、少なくとも約60倍、少なくとも約70倍、少なくとも約80倍、少なくとも約90倍、少なくとも約100倍、又は少なくとも約100倍超である。いくつかの実施形態では、低減量は2倍未満である。
ヒトES細胞
内胚葉発達についての研究のために、本発明者等は、多能性であり、そして正常核型を保持しながら培養中に外見上無限に分裂し得るヒト胚性幹細胞を用いた。単離のために免疫学的又は機械的方法を用いて、5日齢胚内部細胞塊からES細胞を得た。特にヒト胚性幹細胞株hESCyt−25を、患者によるインフォームドコンセント後に、体外受精周期からの過剰凍結胚から得た。解凍の直後に、ES培地(DMEM、20%FBS、非必須アミノ酸、β−メルカプトエタノール、ITSサプリメント)中のマウス胚線維芽細胞(MEF)上に孵化胚盤胞を平板培養した。胚が培養皿に接着し、そして約2週間後、未分化hESCの領域を、MEFとともに新たな皿に移した。機械的に切断し、ディスパーゼで手短に消化し、その後、細胞クラスターを機械的に取り出して、洗浄し、再度平板培養することにより移動を成し遂げた。誘導以来、hESCyt−25を、100回にわたって逐次継代した。胚体内胚葉の産生のための出発物質として、hESCyt−25ヒト胚性幹細胞株を用いた。
hESCyt−25特性化
ヒト胚性幹細胞株hESCyt−25は、培養中に18ヶ月にわたって、正常な形態特性、核型特性、増殖特性及び自己再生特性を保持した。この細胞株は、OCT4、SSEA−4及びTRA−1−60抗原(これらはすべて、未分化hESCに特有である)に対
する強免疫反応性を示し、そしてアルカリ性ホスファターゼ活性、並びに他の確立されたhESC株と同一の形態を示す。さらにヒト幹細胞株hESCyt−25は、懸濁液中で培養される場合、胚様体(EB)も容易に形成する。その多能性の実証として、hESCyT−25は、3つの主要胚葉を表わす種々の細胞型に分化する。ZIC1に関するQ−PCR、並びにネスチン及びより成熟したニューロンマーカーに関する免疫細胞化学(ICC)により、外胚葉産生を実証した。β−IIIチューブリンに関する免疫細胞化学染色を、初期ニューロンに特徴的な伸長細胞のクラスター中で観察した。予め、レチノイン酸で懸濁液中のEBを処理して、臓側内胚葉(VE)、胚体外系統への多能性幹細胞の分化を誘導した。処理された細胞は、高レベルのα−フェトプロテイン(AFP)及びSOX7(VEの2つのマーカー)を54時間の処理により発現した。単層中で分化された細胞は、免疫細胞化学染色により実証されるように、散在性パッチ中でAFPを発現した。以下で記載するように、hESCyT−25細胞株は、AFP発現の非存在下でのSOX17に関する実時間定量的ポリメラーゼ連鎖反応(Q−PCR)及び免疫細胞化学により立証されるように、胚体内胚葉も形成し得た。中胚葉への分化を実証するために、分化中のEBを、いくつかの時点でのブラキュリ遺伝子発現に関して分析した。ブラキュリ発現は、実験経過中に漸進的に増大した。上記に鑑みて、三胚葉を表わす細胞を形成する能力により示されるように、hESCyT−25株は多能性である。
SOX17抗体の産生
hESC培養物における胚体内胚葉の同定に対する主要な妨害は、適切なツールの欠如である。したがって、本発明者等は、ヒトSOX17タンパク質に対する抗体の産生に着手した。
腺炎を引き起こし、且つ自然受容体を認識するモノクローナル抗体の産生を可能にする(Genetic immunization against the human thyrotropin receptor causes thyroiditis and allows production of monoclonal antibodies recognizing the native receptor), J. Immunol. 160: 1458-1465、Kilpatrick他(1998) 遺伝子銃送達されるDNAベースの免疫化は、Flt−3受容体に対するマウスモノクローナル抗体の迅速な産生を媒介する(Gene gun delivered DNA-based immunizations mediate rapid production of murine monoclonal antibodies to the Flt-3 receptor), Hybridoma 17: 569-576、Schmolke他(1998) DNA免疫化により産生されるE2特異的モノクローナル抗体によるヒト血清におけるG型肝炎ウイルス粒子の同定(Identification of hepatitis G virus particles in human serum by E2-specific monoclonal antibodides generated by DNA immunization), J. Virol. 72: 4541-4545、Krasemann他(1999) 異例の核酸ベースの免疫化戦略を用いたタンパク質に対するモノクローナル抗体の生成(Generation of monoclonal antibodides against proteins with an unconventional nucleic acid-based immunization strategy), J. Biotechnol. 73: 119-129、及びUlivieri他(1996) DNA免疫化によるヘリコバクター・ピロリ細胞空胞化毒素の規定部分に対するモノクローナル抗体の生成(Generation of a monoclonal antibody to a defined portion of the Heliobacter pylori vacuolating cytotoxin by DNA immunization), J. Biotechnol. 51: 191-194(その開示は参照により本明細書に完全に援用される)に見出すことができる。
バンドを生じた。ヒトSOX7又はEGFPトランスフェクト細胞のいずれかから作製される抽出物に対してもSOX17抗体の反応性は見られなかった。さらに、SOX17抗体は、hSOX17発現構築物でトランスフェクトしたヒト線維芽細胞の核を明らかに標識したが、EGFPのみでトランスフェクトした細胞は標識しなかった。したがって、SOX17抗体は、ICCによる特異性を示す。
胚体内胚葉のマーカーとしてのSOX17抗体の確証
部分的に分化させたhESCをSOX17及びAFP抗体で同時標識して、SOX17抗体がヒトSOX17タンパク質に特異的であり、さらに胚体内胚葉をマークすることを実証した。SOX17、SOX7(これは、SOX遺伝子ファミリーサブグループFの密接に関連する成員である(図3))及びAFPはそれぞれ、臓側内胚葉で発現されることが実証されている。しかしながら、AFP及びSOX7は、ICCにより検出可能なレベルでは、胚体内胚葉細胞では発現されず、したがってそれらは、真正(bonifide)の胚体内胚葉細胞に関する陰性マーカーとして用いることができる。SOX17抗体は、細胞の別個の分類として存在するか、或いはAFP陽性細胞と混合される細胞の集団を標識することが示された。特に、図5Aは、少数のSOX17細胞がAFPで同時標識されることを示すが、SOX17+細胞の区域においてAFP+細胞がほとんど存在しないか、或いは全く存在しない領域も見られた(図5B)。同様に、壁側内胚葉は、SOX17を発現することが報告されているため、壁側マーカーSPARC及び/又はトロンボモジュリン(TM)と共にSOX17による抗体の同時標識を使用して、壁側内胚葉であるSOX17+細胞を同定することができる。図6A〜図6Cに示されるように、トロンボモジュリン及びSOX17同時標識された壁側内胚葉細胞は、hES細胞の無作為分化により産生された。
17で標識された(図10A〜図10F)。アクチビン処理の5日後にはAFPで標識された細胞はほとんど存在しなかったか、或いは全く存在しなかった。
Q−PCR遺伝子発現アッセイ
以下の実験では、リアルタイム定量的RT−PCR(Q−PCR)が、hESC分化に対する様々な処理の影響をスクリーニングするのに使用される主要なアッセイであった。特に、遺伝子発現のリアルタイム測定は、Q−PCRにより多数の時点で多数のマーカー遺伝子に関して分析した。細胞集団の全体的な動態のより良好な理解を得るために、所望の細胞型並びに望ましくない細胞型のマーカー遺伝子の特徴を評価した。Q−PCR分析の長所として、ゲノム配列が容易に入手可能である場合、その極度の感度及び必要なマーカーを開発することが比較的容易であることが挙げられる。さらに、Q−PCRの極めて高い感度により、相当大きな集団内での比較的少数の細胞からの遺伝子発現の検出が可能となる。さらに、非常に低レベルの遺伝子発現を検出する能力は、集団内の「分化の偏り」に関する指標を提供する。これらの細胞の表現型の顕在的な分化に先立つ特定の分化経路に対する偏りは、免疫細胞化学的技法を使用して認知することはできない。このため、Q−PCRは、分化処理の成功をスクリーニングするための少なくとも補完的であり且つ免疫組織化学的技法よりも潜在的に相当優れている分析の方法を提供する。さらに、Q−PCRは、半ハイスループットスケール(semi-high throughput scale)の分析にて定量的方式で分化プロトコルの成功を評価するメカニズムを提供する。
胚体内胚葉へのヒトES細胞の定方向分化
ヒトES細胞培養物は、それらの未分化状態を能動的に維持しない条件下で培養される場合に、無作為に分化する。この不均一分化は、壁側内胚葉及び臓側内胚葉の両方から構成される胚体外内胚葉細胞(AFP、SPARC及びSOX7発現)並びにZIC1及びネスチン(外胚葉)及びブラキュリ(中胚葉)発現によりマークされるような初期外胚葉誘導体及び中胚葉誘導体の産生をもたらす。胚体内胚葉細胞出現は、ES細胞培養物における特異的抗体マーカーの欠如に関して検査又は特定されていない。それ自体で、また初期状態で、ES細胞培養物における初期胚体内胚葉産生は、十分研究されていない。胚体内胚葉細胞に関する満足のいく抗体試薬が入手不可能であったため、特性化の大部分が、外胚葉及び胚体外内胚葉に焦点を当ててきた。概して、無作為に分化されたES細胞培養
物においてSOX17hi胚体内胚葉細胞と比較して、有意により多数の胚体外細胞型及び神経外胚葉細胞型が存在する。
ことにより、併用アクチビン処理の4日目までに、未分化hESCを上回る37倍の誘導がもたらされた。最後に、アクチビンA及びアクチビンBと共に、ノーダル/アクチビン由来のTGFβファミリーの第3の成員、並びにBMPサブグループであるBMP4を添加することにより、未分化hESCの誘導の57倍に誘導を増大させた(図19)。アクチビン及びBMPによるSOX17誘導を、因子無しの培地対照と比較した場合、5倍、10倍及び15倍の誘導が4日目の時点で生じた。アクチビンA、アクチビンB及びBMPによる三重処理の5日目までに、SOX17は、hESCの70倍より高く誘導された。これらのデータは、ノーダル/アクチビン TGFβファミリー成員のより高い用量及びより長い処理時間がSOX17の増大された発現をもたらすことを示している。
ケモカイン受容体4(CXCR4)発現は、胚体内胚葉に関するマーカーと相関し、中胚葉、外胚葉又は臓側内胚葉に関するマーカーとは相関しない
上述したように、hESCは、TGFβファミリー、より具体的にはアクチビン/ノーダルサブファミリーのサイトカインの適用により、胚体内胚葉の胚葉へ分化するように誘導することができる。さらに、本発明者等は、分化培養培地におけるウシ胎児血清(FBS)の比率が、hESCからの胚体内胚葉分化の効率に影響を及ぼすことを示している。この影響は、培地においてアクチビンAの所定濃度で、より高いレベルのFBSが胚体内胚葉への最大限の分化を阻害するようなものである。外因性アクチビンAの非存在下では、胚体内胚葉系統へのhESCの分化は、非常に非効率であり、FBS濃度は、hESCの分化プロセスに対して相当穏やかに影響する。
示唆する。
胚体内胚葉に関して富化する分化条件は、CXCR4陽性細胞の比率を増大させる
アクチビンAの用量はまた、胚体内胚葉をhESCから得ることができる効率に影響を及ぼす。本実施例は、アクチビンAの用量を増大させることにより培養物におけるCXCR4+細胞の比率が増大することを実証する。
CXCR4陽性細胞の単離は、胚体内胚葉遺伝子発現に関して富化し、また中胚葉、外胚
葉及び臓側内胚葉のマーカーを発現する細胞を激減させる
上記実施例8で同定されるCXCR4+細胞及びCXCR4-細胞を回収して、相対遺伝子発現に関して分析し、母集団の遺伝子発現を同時に確定した。
CXCR4を使用した細胞集団中の胚体内胚葉細胞の定量
本明細書中ですでに確定されるような、及び2003年12月23日に出願された「胚体内胚葉(DEFINITIVE ENDODERM)」と題する米国仮特許出願第60/532,004号で確定されるような細胞培養物又は細胞集団中に存在する胚体内胚葉細胞の比率の定量を確認するために、CXCR4及び胚体内胚葉の他のマーカーを発現する細胞をFACSにより分析した。
胚体内胚葉細胞のさらなるマーカー
以下の実験では、精製胚体内胚葉及びヒト胚性幹細胞集団からRNAを単離した。続いて、遺伝子発現は、各精製集団由来のRNAの遺伝子チップ分析により分析した。Q−PCRも実施して、胚体内胚葉に関するマーカーとして、胚体内胚葉では発現されるが、胚性幹細胞では発現されない遺伝子の潜在性をさらに研究した。
レチノイン酸及びFGF−10は、胚体内胚葉培養物において特異的にPDX1を誘導する
以下の実験は、RA及びFGF−10が胚体内胚葉細胞においてPDX1の発現を誘導することを実証する。
子の発現をQ−PCRにより定量した。
FGF−10は、RA単独を上回るPDX1発現のさらなる増大を提供する
本実施例は、RA及びFGF−10の組合せが、RA単独よりも大いにPDX1発現を誘導することを示す。
レチノイン酸用量は、in vitroで前方−後方(A−P)位置に影響を及ぼす
RAの用量がin vitro細胞培養物のA−P位置に影響を及ぼすかどうかを判定するために、以下の実験を実施した。
(0.2μM)は、中腸内胚葉マーカー(CDX1、HOXC6)を誘導した(図38C及び図41Eを参照)のに対して、RAの最小用量(0.04μM)は、後腸内胚葉マーカー(HOXA13)を優先的に誘導した(図38Dを参照)。RA用量は、神経(SOX1)又はニューロン(NFM)マーカーのいずれかの相対発現に対して実質的に影響しなかった(図38F及び図38Gを参照)。本実施例は、in vitroでモルフォゲンとしての、特に分化hESCの内胚葉誘導体のモルフォゲンとしてのRAの使用を示す。
B27サプリメントの使用は、PDX1の発現を増強する
胚体内胚葉におけるPDX1発現は、多数の因子の使用及び細胞増殖/分化状態により影響を与え得る。以下の実験では、本発明者等はB27サプリメントの使用が胚体内胚葉細胞においてPDX1の発現を増強することを示す。
PDX1の誘導を増強するためのアクチビンBの使用
本実施例は、アクチビンBの使用が、in vitro細胞培養物においてPDX1陽性細胞へのPDX1陰性細胞の分化を増強することを示す。
の存在下での10〜50ng/ml(a10、a25及びa50)の範囲の用量でのアクチビンBの添加が、50ng/mlでアクチビンAのみを施した培養物を少なくとも2倍PDX1発現を増大させたことを示す。アクチビンBの添加の結果としてのPDX1の増大は、発達におけるこの時点で肝臓並びに膵臓に関するマーカーであるHNF6発現の増大を伴わなかった(図40Bを参照)。この結果は、膵臓へ分化している細胞の比率が肝臓に比べて増大していることを示唆する。
PDX1の誘導を増強するための血清用量の使用
胚体内胚葉細胞におけるPDX1の発現は、分化プロセス全体にわたって細胞培養物中に存在する血清の量により影響を受ける。以下の実験は、PDX1陰性胚体内胚葉へのhESCの分化中の培養物における血清のレベルが、PDX1陽性内胚葉へのこれらの細胞のさらなる分化中のPDX1の発現に影響することを示す。
PDX1の誘導を増強するための条件培地の使用
また、胚体内胚葉細胞におけるPDX1の発現に影響を与える他の因子及び成長条件を研究した。以下の実験は、PDX1陽性内胚葉細胞へのPDX1陰性胚体内胚葉細胞の分化に対する条件培地の影響を示す。
P4因子は、上述したものと同じFBS投与レジメン(0.2%、0.5%、2%)下で100ng/mlで供給された。これらの3つの異なる分化パラダイムは、PDX1誘導培地が条件付けられ得るヒト細胞の3つの非常に異なる集団を生じる。増殖因子を添加しない3%FBS(NF)は、大部分が胚体外内胚葉細胞、外胚葉細胞及び中胚葉細胞で構成される不均一集団を生じる。アクチビンA処理培養物(A100)は、大部分の胚体内胚葉をもたらし、BMP4処理培養物(B100)は、主として栄養外胚葉及び幾らかの胚体外内胚葉をもたらす。
PDX1へ結合する抗体の確証
PDX1へ結合する抗体は、細胞集団中のPDX1発現の誘導をモニタリングするための有用なツールである。本実施例は、PDX1に対するウサギポリクローナル抗体及びIgY抗体を使用して、このタンパク質の存在を検出することができることを示す。
α−PDX1)抗体をウェスタンブロット分析により確証した。この分析で、MDX12ヒト線維芽細胞又はPDX1発現ベクターで予め24時間トランスフェクトしたMDX12細胞由来の総細胞溶解産物50μgへのIgY α−PDX1抗体の結合を比較した。細胞溶解産物は、SDS−PAGEにより分離して、エレクトロブロッティングにより膜へ転写して、その後IgY α−PDX1一次抗血清で、それに続いてアルカリホスファターゼ結合ウサギ抗IgY(Rb α−IgY)二次抗体でプロービングした。一次抗体及び二次抗体の種々の希釈は、細長い膜(strips of the membrane)を分離するために以下の組合せで適用した:A(500倍一次希釈、10,000倍二次希釈)、B(2,000倍、10,000倍)、C(500倍、40,000倍)、D(2,000倍、40,000倍)、E(8,000倍、40,000倍)。
トした線維芽細胞及びトランスフェクトしていない線維芽細胞の両方においてPDX1よりもわずかに高い分子量でのさらなるバンドの検出を特徴とした。
ヒト膵臓組織の免疫組織化学
本実施例は、PDX1に対する特異性を有する抗体を使用して、免疫組織化学によりヒトPDX1陽性細胞を同定することができることを示す。
レチノイン酸処理細胞からのPDX1の免疫沈降
RAの存在下で分化させた胚体内胚葉細胞におけるPDX1発現、及びRAを用いて分化させなかった胚体内胚葉細胞におけるPDX1の欠如をさらに確認するために、ウサギ抗PDX1(Rb α−PDX1)抗体を使用して、RA分化させた胚体内胚葉細胞及び未分化の胚体内胚葉細胞の両方からPDX1を免疫沈降させた。免疫沈降させたRAは、IgY α−PDX1抗体を使用してウェスタンブロット分析により検出した。
グにより膜へ転写し、その後IgY α−PDX1一次抗体、これに続いて標識Rb α−IgY二次抗体でプロービングした。
PDX1プロモーター−EGFPトランスジェニックhESC系の生成
細胞単離に関してPDX1マーカーを使用するために、本発明者等は、PDX1陽性前腸内胚葉細胞を発現可能なレポーター遺伝子で遺伝的にタグ付けした。本実施例は、PDX1調節領域の制御下でレポーター遺伝子を含有するレポーターカセットを含むベクターの構築について記載する。本実施例はまた、このベクターでトランスフェクトした細胞(例えば、ヒト胚性幹細胞)、並びにそのゲノムに組み込まれたこのレポーターカセットを有する細胞の調製について記載する。
PDX1陽性前腸内胚葉の単離
以下の実施例は、PDX1プロモーター/EGFPカセットを含むhESCがPDX1陽性内胚葉細胞へ分化され、これに続いて蛍光活性化細胞選別器(FACS)により単離され得ることを実証する。
FACS Diva上でRNA溶解緩衝液又はPBSへ直接選別した。単一の生細胞のサンプルが、EGFPに関してゲーティングすることなく採取され(Live)、単一の
生細胞は、EGFP陽性(GFP)及びGFP陰性(Neg)集団へゲーティングされた。一実験では、EGFP陽性分画は、蛍光強度に従って2つの同様のサイズの集団に分離された(Hi及びLo)。
PDX1陽性背側前腸内胚葉及びPDX1陽性腹側前腸内胚葉の産生
本実施例は、PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉の産生、並びにPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉の産生を記載する。
る))中で、BMP4/FGF10添加を実行した。背側分化手法に関して、100ng/mlのアクチビンA中で5日間、胚体内胚葉を産生し、次に、B27サプリメントを含有するCMRL培地(1:200)中の2μMのレチノイン酸(RA)及び25ng/mlのアクチビンAに曝露した。
PDX1陽性腹側前腸内胚葉細胞の産生は胚体内胚葉形成によっている
本実施例は、種々の量の胚体内胚葉細胞を含む培養物からのPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉の産生を記載する。胚体内胚葉を有しない培養物は、PDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉の極めて少ない産生を示す。胚体内胚葉細胞の初期量が増大するように、腹側偏向前腸内胚葉の産生も増大する。
理はともに、高レベルのPDX1及びアルブミン遺伝子発現により示されるような強固な腹側内胚葉分化を示した(図51C及び図51D)。前内胚葉はより後の内胚葉に分化する能力を依然として有するが、一方、後内胚葉細胞はより前方性の運命(anterior fates)を獲得する能力を失っているため、PDX1及びアルブミン発現のレベルはほとんどの前内胚葉において最大であった。これらのデータは、腹側PDX1発現前腸内胚葉及び肝臓の産生が胚体内胚葉の効率的産生によっているということを強く示した。
BMP4はPDX1陽性腹側前腸内胚葉に必要でない
本実施例は、BMP4の非存在下でのPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉の産生を記載する。
〔実施例27〕
PDX1陽性背側前腸内胚葉及びPDX1陽性腹側前腸内胚葉の同定のためのマーカー
Analysis(Durham, NC)によるAffymetrixのU133プラス2.0高密度オリゴヌクレオチドアレイを用いて、遺伝子発現プロファイルを確定した。手動検査による、並びに階層的クラスター分析によるこれら7つの条件/時点全体の遺伝子発現のパターンを評価した。腹側分化パラダイム及び背側分化パラダイムの両方で発現される新規の遺伝子を見出
すためにPDX1発現(背側及び腹側)の一過性パターンを整合させる遺伝子発現のパターンを調べた。
PDX1陰性前腸内胚葉の産生
本実施例は、PDX1陰性前腸内胚葉の産生を記載する。
215, 343-357.
onstam, D. B. (2002). Extra-embryonic proteases regulate Nodal signalling during
gastrulation. Nat Cell Biol 4, 981-985.
and maintenance of the primitive streak in the mouse. Development 120, 1919-1928.
Dev 6, 432-438.
necessary and sufficient for early endoderm formation in zebrafish. Genes Dev 15, 1493- 1505.
lation: axis formation in the mouse embryo. Curr Opin Genet Dev 11, 384-392.
and Zic2 mutant mice: implications as models for human neurological disorders. Behav Genet 31, 317-324.
Embryonic stem cell lines from human blastocysts: somatic differentiation in vitro. Nat Biotechnol 18, 399-404.
in brain and somites is affected by BMP and hedgehog signalling. Mech Dev 55, 147-159.
tl Acad Sci U S A 95, 13726-13731.
L., Kneteman, N. M., and Rajotte, R. V. (2000). Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes niellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen. N Engl J Med 343, 230-238.
diabetes? Insulin independence should be dominant force in islet transplantation. Bmj 322, 861.
M. (1997). Upstream and downstream from Brachyury, a gene required for vertebrate mesoderm formation. Cold Spring Harb Symp Quant Biol 62, 337-346.
Berta, P. (2001). SOX7 transcription factor: sequence, chromosomal localisation, expression, transactivation and interference with Wnt signalling. Nucleic Acids Res 29, 4274- 4283.
Isolation and characterization of a mouse SRY-related cDNA, mSox7. Biochim Biophys Acta 1445, 225-231.
Bioessays 23, 788-794.
PCR data by geometric averaging of multiple internal control genes. Genome Biol
3, RESEARCH0034.
Of America SP, 2155-2159.
novel TGF-beta-like gene expressed in the mouse node during gastrulation. Nature 361, 543-547.
Claims (171)
- ヒト細胞を含む細胞培養物であって、該ヒト細胞のうちの少なくとも約26%がCDH6、GABRA2、GRIA3、IL6R、KCNJ2、LGALS3、LGALS3/GALIG、SERPINF2、SLC27A2、SERPINF2、DUSP9、CDH6及びSOX9から成る群から選択される少なくとも1つのマーカーを発現する膵臓−十二指腸ホメオボックス因子−1(PDX1)陽性背側偏向前腸内胚葉細胞であり、該PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が背側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である細胞培養物。
- 前記マーカーがSERPINF2、DUSP9、CDH6及びSOX9から成る群から選択される、請求項1に記載の細胞培養物。
- 前記マーカーがCDH6、GABRA2、GRIA3、IL6R、KCNJ2、LGALS3、LGALS3/GALIG、SERPINF2及びSLC27A2から成る群から選択される細胞表面マーカーである、請求項1に記載の細胞培養物。
- 前記PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞がADORA2A、CD47、EPB41L1、MAG、SFRP5、SLC16A10、SLC16A2、SLC1A3、SLC30A4、SLICK、SLITRK4、XPR1、HOXA1、PDE11A、FAM49A及びWNT5Aから成る群から選択される少なくとも1つのマーカーを発現する、請求項1に記載の細胞培養物。
- 前記マーカーがHOXA1、PDE11A、FAM49A及びWNT5Aから成る群から選択される、請求項4に記載の細胞培養物。
- 前記マーカーがADORA2A、CD47、EPB41L1、MAG、SFRP5、SLC16A10、SLC16A2、SLC1A3、SLC30A4、SLICK、SLITRK4及びXPR1から成る群から選択される細胞表面マーカーである、請求項4に記載の細胞培養物。
- 前記ヒト細胞の少なくとも30%がPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項1に記載の細胞培養物。
- 前記ヒト細胞の少なくとも40%がPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項1に記載の細胞培養物。
- 前記ヒト細胞の少なくとも50%がPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項1に記載の細胞培養物。
- 前記ヒト細胞の少なくとも60%がPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項1に記載の細胞培養物。
- 前記ヒト細胞の少なくとも75%がPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項1に記載の細胞培養物。
- ヒトフィーダー細胞が前記培養物中に存在し、そして該ヒトフィーダー細胞以外のヒト細胞の少なくとも約2%がPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項1に記載の細胞培養物。
- PDX1の発現が前記PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞中のα−フェトプロテイン(AFP)、SOX7、SOX1、ZIC1及びNFMから成る群から選択されるマーカーの発現より大きい、請求項1に記載の細胞培養物。
- 前記細胞培養物が臓側内胚葉細胞、壁側内胚葉細胞及び神経細胞から成る群から選択される細胞を実質的に含有しない、請求項1に記載の細胞培養物。
- レチノイドをさらに含む、請求項1に記載の細胞培養物。
- 前記レチノイドがレチノイン酸(RA)である、請求項15に記載の細胞培養物。
- B27をさらに含む、請求項16に記載の細胞培養物。
- ヒト細胞を含む細胞培養物であって、該ヒト細胞のうちの少なくとも約2%がCDH6、GABRA2、GRIA3、IL6R、KCNJ2、LGALS3、LGALS3/GALIG、SERPINF2、SLC27A2、SERPINF2、DUSP9、CDH6及びSOX9から成る群から選択される少なくとも1つのマーカーを発現する膵臓−十二指腸ホメオボックス因子−1(PDX1)陽性腹側偏向(ventrally-biased)前腸内胚葉細胞であり、該PDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が腹側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である、細胞培養物。
- 前記マーカーがSERPINF2、DUSP9、CDH6及びSOX9から成る群から選択される、請求項18に記載の細胞培養物。
- 前記マーカーがCDH6、GABRA2、GRIA3、IL6R、KCNJ2、LGALS3、LGALS3/GALIG、SERPINF2及びSLC27A2から成る群から選択される細胞表面マーカーである、請求項18に記載の細胞培養物。
- 前記PDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞がADORA2A、CD47、EPB41L1、MAG、SFRP5、SLC16A10、SLC16A2、SLC1A3、SLC30A4、SLICK、SLITRK4、XPR1、HOXA1、PDE11A、FAM49A及びWNT5Aから成る群から選択される1つ又は複数のマーカーを実質的に発現しない、請求項18に記載の細胞培養物。
- 前記ヒト細胞の少なくとも5%がPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項18に記載の細胞培養物。
- 前記ヒト細胞の少なくとも10%がPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項18に記載の細胞培養物。
- 前記ヒト細胞の少なくとも25%がPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項18に記載の細胞培養物。
- 前記ヒト細胞の少なくとも50%がPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項18に記載の細胞培養物。
- 前記ヒト細胞の少なくとも75%がPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項18に記載の細胞培養物。
- ヒトフィーダー細胞が前記培養物中に存在し、そして該ヒトフィーダー細胞以外のヒト
細胞の少なくとも約2%がPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項18に記載の細胞培養物。 - PDX1の発現が前記PDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞中のα−フェトプロテイン(AFP)、SOX7、SOX1、ZIC1及びNFMから成る群から選択されるマーカーの発現より大きい、請求項18に記載の細胞培養物。
- 前記細胞培養物が臓側内胚葉細胞、壁側内胚葉細胞及び神経細胞から成る群から選択される細胞を実質的に含有しない、請求項18に記載の細胞培養物。
- レチノイドをさらに含む、請求項18に記載の細胞培養物。
- 前記レチノイドがレチノイン酸(RA)である、請求項30に記載の細胞培養物。
- B27をさらに含む、請求項31に記載の細胞培養物。
- 細胞を含む細胞集団であって、該細胞のうちの少なくとも約90%がCDH6、GABRA2、GRIA3、IL6R、KCNJ2、LGALS3、LGALS3/GALIG、SERPINF2、SLC27A2、SERPINF2、DUSP9、CDH6及びSOX9から成る群から選択される少なくとも1つのマーカーを発現するヒトPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞であり、該PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が背側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である細胞集団。
- 前記マーカーがSERPINF2、DUSP9、CDH6及びSOX9から成る群から選択される、請求項33に記載の細胞集団。
- 前記マーカーがCDH6、GABRA2、GRIA3、IL6R、KCNJ2、LGALS3、LGALS3/GALIG、SERPINF2及びSLC27A2から成る群から選択される細胞表面マーカーである、請求項33に記載の細胞集団。
- 前記PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞がADORA2A、CD47、EPB41L1、MAG、SFRP5、SLC16A10、SLC16A2、SLC1A3、SLC30A4、SLICK、SLITRK4、XPR1、HOXA1、PDE11A、FAM49A及びWNT5Aから成る群から選択される少なくとも1つのマーカーを発現する、請求項33に記載の細胞集団。
- 前記マーカーがHOXA1、PDE11A、FAM49A及びWNT5Aから成る群から選択される、請求項36に記載の細胞集団。
- 前記マーカーがADORA2A、CD47、EPB41L1、MAG、SFRP5、SLC16A10、SLC16A2、SLC1A3、SLC30A4、SLICK、SLITRK4及びXPR1から成る群から選択される細胞表面マーカーである、請求項36に記載の細胞集団。
- 前記細胞の少なくとも約95%がPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項33に記載の細胞集団。
- 前記細胞の少なくとも約98%がPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項33に記載の細胞集団。
- PDX1の発現が前記PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞中のAFP、SOX7、SOX1、ZIC1及びNFMから成る群から選択されるマーカーの発現より大きい、請求項33に記載の細胞集団。
- 細胞を含む細胞集団であって、該細胞のうちの少なくとも約90%がCDH6、GABRA2、GRIA3、IL6R、KCNJ2、LGALS3、LGALS3/GALIG、SERPINF2、SLC27A2、SERPINF2、DUSP9、CDH6及びSOX9から成る群から選択される少なくとも1つのマーカーを発現するヒトPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞であり、該PDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が腹側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である細胞集団。
- 前記マーカーがSERPINF2、DUSP9、CDH6及びSOX9から成る群から選択される、請求項42に記載の細胞集団。
- 前記マーカーがCDH6、GABRA2、GRIA3、IL6R、KCNJ2、LGALS3、LGALS3/GALIG、SERPINF2及びSLC27A2から成る群から選択される細胞表面マーカーである、請求項42に記載の細胞集団。
- 前記PDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞がADORA2A、CD47、EPB41L1、MAG、SFRP5、SLC16A10、SLC16A2、SLC1A3、SLC30A4、SLICK、SLITRK4、XPR1、HOXA1、PDE11A、FAM49A及びWNT5Aから成る群から選択される1つ又は複数のマーカーを実質的に発現しない、請求項42に記載の細胞集団。
- 前記細胞の少なくとも約95%がPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項42に記載の細胞集団。
- 前記細胞の少なくとも約98%がPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項42に記載の細胞集団。
- PDX1の発現が前記PDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞中のAFP、SOX7、SOX1、ZIC1及びNFMから成る群から選択されるマーカーの発現より大きい、請求項42に記載の細胞集団。
- PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞を産生する方法であって、以下の:
PDX1陰性胚体内胚葉細胞を含む細胞集団を得る工程;そして
CDH6、GABRA2、GRIA3、IL6R、KCNJ2、LGALS3、LGALS3/GALIG、SERPINF2、SLC27A2、SERPINF2、DUSP9、CDH6及びSOX9から成る群から選択される少なくとも1つのマーカーを発現するPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞への前記PDX1陰性胚体内胚葉細胞集団の少なくとも約26%の分化を促進するのに十分な量でレチノイドを前記細胞集団に供給する工程であって、該PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が背側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である工程
を包含する方法。 - 前記PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞がADORA2A、CD47、EPB41L1、MAG、SFRP5、SLC16A10、SLC16A2、SLC1A3、SLC30A4、SLICK、SLITRK4、XPR1、HOXA1、PDE11A、FAM49A及びWNT5Aから成る群から選択される少なくとも1つのマーカーも発現する、請求項49に記載の方法。
- PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間を与える工程をさらに包含し、該PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間が、前記細胞集団中の背側偏向前腸内胚葉細胞中のADORA2A、CD47、EPB41L1、MAG、SFRP5、SLC16A10、SLC16A2、SLC1A3、SLC30A4、SLICK、SLITRK4、XPR1、HOXA1、PDE11A、FAM49A及びWNT5Aから成る群から選択されるマーカーの存在を検出することにより確定される、請求項50に記載の方法。
- CDH6、GABRA2、GRIA3、IL6R、KCNJ2、LGALS3、LGALS3/GALIG、SERPINF2、SLC27A2、SERPINF2、DUSP9、CDH6及びSOX9から成る群から選択される前記マーカー、或いはADORA2A、CD47、EPB41L1、MAG、SFRP5、SLC16A10、SLC16A2、SLC1A3、SLC30A4、SLICK、SLITRK4、XPR1、HOXA1、PDE11A、FAM49A及びWNT5Aから成る群から選択される前記マーカーの発現が定量的ポリメラーゼ連鎖反応(Q−PCR)により確定される、請求項50に記載の方法。
- CDH6、GABRA2、GRIA3、IL6R、KCNJ2、LGALS3、LGALS3/GALIG、SERPINF2、SLC27A2、SERPINF2、DUSP9、CDH6及びSOX9から成る群から選択される前記マーカー、或いはADORA2A、CD47、EPB41L1、MAG、SFRP5、SLC16A10、SLC16A2、SLC1A3、SLC30A4、SLICK、SLITRK4、XPR1、HOXA1、PDE11A、FAM49A及びWNT5Aから成る群から選択される、前記マーカーの発現が免疫細胞化学により確定される、請求項50に記載の方法。
- PDX1の発現が前記PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞中のα−フェトプロテイン(AFP)、SOX7、SOX1、ZIC1及びNFMから成る群から選択されるマーカーの発現より大きい、請求項49に記載の方法。
- 前記レチノイドがRAである、請求項49に記載の方法。
- RAが約0.5μM〜約50μMの範囲の濃度で供給される、請求項55に記載の方法。
- RAが約1μM〜約20μMの範囲の濃度で供給される、請求項56に記載の方法。
- RAが約2μMの濃度で供給される、請求項57に記載の方法。
- 前記培養物が約5日齢である場合にRAが供給される、請求項55に記載の方法。
- 前記培養物にB27を供給することをさらに包含する、請求項49に記載の方法。
- 前記B27が総培地の約0.1%〜約20%の範囲の濃度で供給される、請求項60に記載の方法。
- B27が総培地の約0.5%〜約2%の範囲の濃度で供給される、請求項61に記載の方法。
- B27が総培地の約0.5%の濃度で供給される、請求項62に記載の方法。
- B27が前記レチノイドとほぼ同時に供給される、請求項60に記載の方法。
- 前記培養物にアクチビンAを供給することをさらに包含する、請求項49に記載の方法。
- アクチビンAが約10ng/ml〜約200ng/mlの範囲の濃度で供給される、請求項65に記載の方法。
- アクチビンAが約20ng/ml〜約100ng/mlの範囲の濃度で供給される、請求項66に記載の方法。
- アクチビンAが約25ng/mlの濃度で供給される、請求項67に記載の方法。
- 前記PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞がCMRL培地中で増殖される、請求項49に記載の方法。
- 前記CMRL培地が約2μMのRA、約25ng/mlのアクチビンA及び総培地の約0.5%のB27を含む、請求項69に記載の方法。
- 前記PDX1陰性胚体内胚葉細胞を含む細胞集団を得る工程が、多能性(pluripotent)ヒト細胞を含む細胞集団を得ること、胚体内胚葉細胞への該多能性細胞の分化を促進するのに十分な量でTGFβスーパーファミリーの少なくとも1つの増殖因子を該細胞集団に供給すること、そして胚体内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間を与えることを包含し、該胚体内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間が該細胞集団中の胚体内胚葉細胞の存在を検出することにより確定される、請求項49に記載の方法。
- 請求項49に記載の方法により産生されるPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞。
- PDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞を産生する方法であって、以下の:
PDX1陰性胚体内胚葉細胞を含む細胞集団を得る工程;そして
CDH6、GABRA2、GRIA3、IL6R、KCNJ2、LGALS3、LGALS3/GALIG、SERPINF2、SLC27A2、SERPINF2、DUSP9、CDH6及びSOX9から成る群から選択される少なくとも1つのマーカーを発現するPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞への前記PDX1陰性胚体内胚葉細胞集団の少なくとも一部の分化を促進するのに十分な量でFGF−10を前記細胞集団に供給する工程であって、該PDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が腹側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である工程
を包含する方法。 - 前記細胞集団がRAの非存在下で分化される、請求項73に記載の方法。
- 前記PDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞がADORA2A、CD47、EPB41L1、MAG、SFRP5、SLC16A10、SLC16A2、SLC1A3、SLC30A4、SLICK、SLITRK4、XPR1、HOXA1、PDE11A、FAM49A及びWNT5Aから成る群から選択される1つ又は複数のマーカーを発現しない、請求項73に記載の方法。
- PDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間を与える工程をさらに包含し、該PDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間が、前記
細胞集団中の腹側偏向前腸内胚葉細胞中のCDH6、GABRA2、GRIA3、IL6R、KCNJ2、LGALS3、LGALS3/GALIG、SERPINF2、SLC27A2、SERPINF2、DUSP9、CDH6及びSOX9から成る群から選択されるマーカーの存在を検出することにより確定される、請求項75に記載の方法。 - CDH6、GABRA2、GRIA3、IL6R、KCNJ2、LGALS3、LGALS3/GALIG、SERPINF2、SLC27A2、SERPINF2、DUSP9、CDH6及びSOX9から成る群から選択される前記マーカーの発現が定量的ポリメラーゼ連鎖反応(Q−PCR)により確定される、請求項76に記載の方法。
- CDH6、GABRA2、GRIA3、IL6R、KCNJ2、LGALS3、LGALS3/GALIG、SERPINF2、SLC27A2、SERPINF2、DUSP9、CDH6及びSOX9から成る群から選択される前記マーカーの発現が免疫細胞化学により確定される、請求項76に記載の方法。
- PDX1の発現が前記PDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞中のα−フェトプロテイン(AFP)、SOX7、SOX1、ZIC1及びNFMから成る群から選択されるマーカーの発現より大きい、請求項73に記載の方法。
- FGF−10が約5ng/ml〜約500ng/mlの範囲の濃度で供給される、請求項73に記載の方法。
- FGF−10が約10ng/ml〜約100ng/mlの範囲の濃度で供給される、請求項80に記載の方法。
- FGF−10が約50ng/mlの濃度で供給される、請求項81に記載の方法。
- 前記培養物が約3日齢である場合にFGF−10が供給される、請求項73に記載の方法。
- 前記培養物にB27を供給することをさらに包含する、請求項73に記載の方法。
- 前記B27が総培地の約0.1%〜約20%の範囲の濃度で供給される、請求項84に記載の方法。
- B27が総培地の約0.5%〜約2%の範囲の濃度で供給される、請求項85に記載の方法。
- B27が総培地の約0.5%の濃度で供給される、請求項86に記載の方法。
- B27が前記FGF−10とほぼ同時に供給される、請求項84に記載の方法。
- 前記培養物にKAAD−シクロパミンを供給することをさらに包含する、請求項73に記載の方法。
- KAAD−シクロパミンが約0.1μM〜約50μMの濃度で供給される、請求項89に記載の方法。
- KAAD−シクロパミンが約0.5μM〜約10μMの範囲の濃度で供給される、請求項90に記載の方法。
- KAAD−シクロパミンが約0.5μMの濃度で供給される、請求項91に記載の方法。
- 前記PDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞がCMRL培地中で増殖される、請求項73に記載の方法。
- 前記CMRL培地が約50ng/mlのFGF−10、約0.5μMのKAAD−シクロパミン及び総培地の約0.5%のB27を含む、請求項93に記載の方法。
- 前記CMRL培地がRAを欠く、請求項94に記載の方法。
- 前記PDX1陰性胚体内胚葉細胞を含む細胞集団を得る工程が、多能性ヒト細胞を含む細胞集団を得ること、胚体内胚葉細胞への該多能性細胞の分化を促進するのに十分な量でTGFβスーパーファミリーの少なくとも1つの増殖因子を該細胞集団に供給すること、そして胚体内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間を与えることを包含し、該胚体内胚葉細胞が生成するのに十分な時間が該細胞集団中の胚体内胚葉細胞の存在を検出することにより確定される、請求項73に記載の方法。
- 請求項73に記載の方法により産生されるPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞。
- PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞に富んだ細胞集団を産生する方法であって、以下の:
PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞を産生するようにPDX1陰性胚体内胚葉細胞集団中の細胞を分化させる工程であって、該PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が背側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である工程
前記PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞中で発現されるが前記細胞集団中に存在する他の細胞型中では実質的に発現されないマーカーと結合する試薬を該細胞集団に供給する工程;そして
前記細胞集団中に存在する前記他の細胞型から、前記試薬と結合された前記PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞を分離し、それによりPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞に富んだ細胞集団を産生する工程
を包含する方法。 - 前記マーカーがADORA2A、CD47、EPB41L1、MAG、SFRP5、SLC16A10、SLC16A2、SLC1A3、SLC30A4、SLICK、SLITRK4及びXPR1から成る群から選択される、請求項98に記載の方法。
- 前記マーカーがCDH6、GABRA2、GRIA3、IL6R、KCNJ2、LGALS3、LGALS3/GALIG、SERPINF2及びSLC27A2から成る群から選択される、請求項98に記載の方法。
- 前記分化させる工程がPDX1陰性胚体内胚葉細胞を含む細胞集団を得ること、背側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞であるPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞へのPDX1陰性胚体内胚葉細胞の分化を促進するのに十分な量でレチノイドを該細胞集団に供給すること、そしてPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間を与えることをさらに包含し、該PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間が該細胞集団中のPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞の存在を検出することにより確定される、請求項98に記載の方法。
- 前記供給する工程がB27を供給することをさらに包含する、請求項101に記載の方法。
- 検出することがADORA2A、CD47、EPB41L1、MAG、SFRP5、SLC16A10、SLC16A2、SLC1A3、SLC30A4、SLICK、SLITRK4、XPR1、HOXA1、PDE11A、FAM49A及びWNT5Aから成る群から選択される少なくとも1つのマーカーの発現を検出することを包含する、請求項101に記載の方法。
- 前記細胞の少なくとも約95%がPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項98に記載の方法。
- 前記細胞の少なくとも約98%がPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項98に記載の方法。
- 前記試薬が抗体である、請求項98に記載の方法。
- 前記抗体がADORA2A、CD47、EPB41L1、MAG、SFRP5、SLC16A10、SLC16A2、SLC1A3、SLC30A4、SLICK、SLITRK4、XPR1、CDH6、GABRA2、GRIA3、IL6R、KCNJ2、LGALS3、LGALS3/GALIG、SERPINF2及びSLC27A2から成る群から選択される細胞表面ポリペプチドに対する親和性を有する、請求項106に記載の方法。
- 請求項98に記載の方法により産生されるPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞の富化集団。
- PDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞に富んだ細胞集団を産生する方法であって、以下の:
PDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞を産生するようにPDX1陰性胚体内胚葉細胞の集団中の細胞を分化させる工程であって、該PDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が腹側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である工程
前記PDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞中で発現されるが、前記細胞集団中に存在する他の細胞型中では実質的に発現されないマーカーと結合する試薬を該細胞集団に供給する工程;そして
前記細胞集団中に存在する前記他の細胞型から前記試薬と結合された前記PDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞を分離し、それによりPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞に富んだ細胞集団を産生する工程
を包含する方法。 - 前記マーカーがCDH6、GABRA2、GRIA3、IL6R、KCNJ2、LGALS3、LGALS3/GALIG、SERPINF2及びSLC27A2から成る群から選択される、請求項109に記載の方法。
- 前記分化させる工程がPDX1陰性胚体内胚葉細胞を含む細胞集団を得ること、腹側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞であるPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞へのPDX1陰性胚体内胚葉細胞の分化を促進するのに十分な量でFGF−10を該細胞集団に供給すること、そしてPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間を与えることをさらに包含し、該PDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間が該細胞集団中のPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞の存在を検出す
ることにより確定される、請求項109に記載の方法。 - 前記供給する工程がB27を供給することをさらに包含する、請求項111に記載の方法。
- 検出することがCDH6、GABRA2、GRIA3、IL6R、KCNJ2、LGALS3、LGALS3/GALIG、SERPINF2、SLC27A2、SERPINF2、DUSP9、CDH6及びSOX9から成る群から選択される少なくとも1つのマーカーの発現を検出することを包含する、請求項111に記載の方法。
- 前記細胞の少なくとも約95%がPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項109に記載の方法。
- 前記細胞の少なくとも約98%がPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項109に記載の方法。
- 前記試薬が抗体である、請求項109に記載の方法。
- 前記抗体がCDH6、GABRA2、GRIA3、IL6R、KCNJ2、LGALS3、LGALS3/GALIG、SERPINF2及びSLC27A2から成る群から選択される細胞表面ポリペプチドに対する親和性を有する、請求項116に記載の方法。
- 請求項109に記載の方法により産生されるPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞の富化集団。
- PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞に富んだ細胞集団を産生する方法であって、以下の:
多能性細胞の集団を得る工程であって、該多能性細胞集団の少なくとも1つの細胞がADORA2A、CD47、EPB41L1、MAG、SFRP5、SLC16A10、SLC16A2、SLC1A3、SLC30A4、SLICK、SLITRK4、XPR1、HOXA1、PDE11A、FAM49A及びWNT5Aから成る群から選択されるマーカー遺伝子のいずれか1つのプロモーターの制御下にある核酸の少なくとも1つのコピーを含み、該核酸は蛍光タンパク質をコードする配列又はその生物学的活性断片を含む工程;
PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞を産生するように前記多能性細胞を分化させる工程であって、該PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞は背側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である工程;そして
前記細胞集団中に存在する他の細胞型から前記PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞を分離する工程
を包含する方法。 - 前記富化細胞集団が少なくとも約95%のPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞を含む、請求項119に記載の方法。
- 前記富化細胞集団が少なくとも約98%のPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞を含む、請求項119に記載の方法。
- 前記分化させる工程がPDX1陰性胚体内胚葉細胞への前記多能性細胞の分化を促進するのに十分な量でTGFβスーパーファミリーの少なくとも1つの増殖因子を前記多能性細胞集団に供給すること、そしてPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞へのPDX1陰性
胚体内胚葉細胞の分化を促進するのに十分な量でレチノイドを該PDX1陰性胚体内胚葉細胞に供給することをさらに包含する、請求項119に記載の方法。 - 前記レチノイドがRAである、請求項122に記載の方法。
- 前記供給する工程がB27を供給することをさらに包含する、請求項123に記載の方法。
- 前記蛍光タンパク質が緑色蛍光タンパク質(GFP)である、請求項119に記載の方法。
- 前記PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が蛍光活性化細胞選別器(FACS)により前記細胞集団中に存在する他の細胞型から分離される、請求項119に記載の方法。
- 請求項119に記載の方法により産生されるPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞の富化集団。
- PDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞に富んだ細胞集団を産生する方法であって、以下の:
多能性細胞の集団を得る工程であって、該多能性細胞集団の少なくとも1つの細胞はCDH6、GABRA2、GRIA3、IL6R、KCNJ2、LGALS3、LGALS3/GALIG、SERPINF2、SLC27A2、SERPINF2、DUSP9、CDH6及びSOX9から成る群から選択されるマーカー遺伝子のいずれか1つのプロモーターの制御下にある核酸の少なくとも1つのコピーを含み、該核酸は蛍光タンパク質をコードする配列又はその生物学的活性断片を含む工程;
PDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞を産生するように前記多能性細胞を分化させる工程であって、該PDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞は腹側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である工程;そして
非腹側偏向前腸内胚葉細胞から前記PDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞を分離する工程
を包含する方法。 - 前記富化細胞集団が少なくとも約95%のPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞を含む、請求項128に記載の方法。
- 前記富化細胞集団が少なくとも約98%のPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞を含む、請求項128に記載の方法。
- 前記分化させる工程がPDX1陰性胚体内胚葉細胞への前記多能性細胞の分化を促進するために十分な量でTGFβスーパーファミリーの少なくとも1つの増殖因子を前記多能性細胞集団に供給すること、そしてPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞へのPDX1陰性胚体内胚葉細胞の分化を促進するのに十分な量でFGF−10を該PDX1陰性胚体内胚葉細胞に供給することをさらに包含する、請求項128に記載の方法。
- 前記供給する工程がB27を供給することをさらに包含する、請求項128に記載の方法。
- 前記蛍光タンパク質が緑色蛍光タンパク質(GFP)である、請求項128に記載の方法。
- 前記PDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が蛍光活性化細胞選別器(FACS)により前記細胞集団中に存在する他の細胞型から分離される、請求項128に記載の方法。
- 請求項128に記載の方法により産生されるPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞の富化集団。
- ヒト細胞を含む細胞集団中のヒトPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞の分化を促進することができる分化因子を同定する方法であって、以下の:
ヒトPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞を含む細胞集団を得る工程;
前記細胞集団に候補分化因子を供給する工程;
第1の時点での前記細胞集団中のマーカーの発現を決定する工程;
第2の時点での前記細胞集団中の同一マーカーの発現を確定する工程であって、該第2の時点は前記第1の時点の次に起こり、そして該第2の時点は前記候補分化因子を該細胞集団に供給することの後である工程;そして
前記第2の時点での前記細胞集団中のマーカーの発現が前記第1の時点での前記細胞集団中のマーカーの発現と比較した場合に増大又は低減されるかを判定する工程であって、該細胞集団中の該マーカーの発現の増大又は低減は候補分化因子が前記ヒトPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞の分化を促進することができることを示す工程
を包含する方法。 - 前記マーカーがADORA2A、CD47、EPB41L1、MAG、SFRP5、SLC16A10、SLC16A2、SLC1A3、SLC30A4、SLICK、SLITRK4、XPR1、HOXA1、PDE11A、FAM49A及びWNT5Aから成る群から選択される、請求項136に記載の方法。
- 前記ヒトPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が前記細胞集団中のヒト細胞の少なくとも約10%を含む、請求項136に記載の方法。
- ヒトフィーダー細胞が前記細胞集団中に存在し、そして該フィーダー細胞以外のヒト細胞の少なくとも約10%がPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項136に記載の方法。
- 前記ヒトPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が前記細胞集団中のヒト細胞の少なくとも約90%を含む、請求項136に記載の方法。
- 前記ヒトフィーダー細胞が前記細胞集団中に存在し、そして前記フィーダー細胞以外のヒト細胞の少なくとも約90%がPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項136に記載の方法。
- 前記ヒトPDX1陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が背側膵芽の細胞に分化することができる、請求項136に記載の方法。
- 前記ヒト胚体内胚葉細胞が前記候補分化因子に応答して膵臓前駆体細胞に分化する、請求項136に記載の方法。
- 前記第1の時点が、前記候補分化因子を前記細胞集団に供給することより前である、請求項136に記載の方法。
- 前記第1の時点が、前記候補分化因子を前記細胞集団に供給するのとほぼ同時である、請求項136に記載の方法。
- 前記第1の時点が、前記候補分化因子を前記細胞集団に供給することの後である、請求項136に記載の方法。
- 前記マーカーの発現が増大される、請求項136に記載の方法。
- 前記マーカーの発現が減少される、請求項136に記載の方法。
- 前記マーカーの発現が、定量的ポリメラーゼ連鎖反応(Q−PCR)により確定される、請求項136に記載の方法。
- 前記マーカーの発現が、免疫細胞化学により確定される、請求項136に記載の方法。
- 前記分化因子が小分子を含む、請求項136に記載の方法。
- 前記分化因子がポリペプチドを含む、請求項136に記載の方法。
- 前記分化因子が増殖因子を含む、請求項136に記載の方法。
- ヒト細胞を含む細胞集団中のヒトPDX1陽性腹側偏向の前腸内胚葉細胞の分化を促進することができる分化因子を同定する方法であって、
ヒトPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞を含む細胞集団を得る工程;
候補分化因子を前記細胞集団に供給する工程;
第1の時点で前記細胞集団中のマーカーの発現を確定する工程;
第2の時点で前記細胞集団中の同一マーカーの発現を確定する工程であって、該第2の時点が前記第1の時点の後であり、且つ該第2の時点が該細胞集団に前記候補分化因子を供給することの後である、工程;そして
前記第2の時点での前記細胞集団中の前記マーカーの発現が、前記第1の時点での該細胞集団中の該マーカーの発現と比較して増大又は低減されているかを判定する工程であって、該細胞集団中の該マーカーの発現の増大又は低減は、前記候補分化因子が、前記ヒトPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞の分化を促進することができることを示す方法。 - 前記マーカーがCDH6、GABRA2、GRIA3、IL6R、KCNJ2、LGALS3、LGALS3/GALIG、SERPINF2、SLC27A2、SERPINF2、DUSP9、CDH6及びSOX9から成る群から選択される、請求項154に記載の方法。
- 前記ヒトPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が前記細胞集団中のヒト細胞の少なくとも約10%を含む、請求項154に記載の方法。
- ヒトフィーダー細胞が前記細胞集団中に存在し、そして該フィーダー細胞以外のヒト細胞の少なくとも約10%がPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項154に記載の方法。
- 前記ヒトPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が前記細胞集団中のヒト細胞の少なくとも約90%を含む、請求項154に記載の方法。
- 前記ヒトフィーダー細胞が前記細胞集団中に存在し、そして該フィーダー細胞以外のヒト細胞の少なくとも約90%がPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項154に記載の方法。
- 前記ヒトPDX1陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が腹側膵芽の細胞に分化することができる、請求項154に記載の方法。
- 前記ヒト胚体内胚葉細胞が、前記候補分化因子に応答して、膵臓前駆体細胞に分化する、請求項154に記載の方法。
- 前記第1の時点が、前記候補分化因子を前記細胞集団に供給することより前である、請求項154に記載の方法。
- 前記第1の時点が、前記候補分化因子を前記細胞集団に供給するのとほぼ同時である、請求項154に記載の方法。
- 前記第1の時点が、前記候補分化因子を前記細胞集団に供給することの後である、請求項154に記載の方法。
- 前記マーカーの発現が増大される、請求項154に記載の方法。
- 前記マーカーの発現が低減される、請求項154に記載の方法。
- 前記マーカーの発現が、定量的ポリメラーゼ連鎖反応(Q−PCR)により確定される、請求項154に記載の方法。
- 前記マーカーの発現が、免疫細胞化学により確定される、請求項154に記載の方法。
- 前記分化因子が小分子を含む、請求項154に記載の方法。
- 前記分化因子がポリペプチドを含む、請求項154に記載の方法。
- 前記分化因子が増殖因子を含む、請求項154に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US73091705P | 2005-10-27 | 2005-10-27 | |
US60/730,917 | 2005-10-27 | ||
PCT/US2006/042413 WO2007051038A2 (en) | 2005-10-27 | 2006-10-27 | Pdx1-expressing dorsal and ventral foregut endoderm |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2013141267A Division JP5968270B2 (ja) | 2005-10-27 | 2013-07-05 | Pdx1発現背側及び腹側前腸内胚葉 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2009513143A true JP2009513143A (ja) | 2009-04-02 |
JP2009513143A5 JP2009513143A5 (ja) | 2009-08-13 |
JP5404047B2 JP5404047B2 (ja) | 2014-01-29 |
Family
ID=37769419
Family Applications (5)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2008538095A Active JP5404047B2 (ja) | 2005-10-27 | 2006-10-27 | Pdx1発現背側及び腹側前腸内胚葉 |
JP2013141267A Active JP5968270B2 (ja) | 2005-10-27 | 2013-07-05 | Pdx1発現背側及び腹側前腸内胚葉 |
JP2015091898A Active JP6077046B2 (ja) | 2005-10-27 | 2015-04-28 | Pdx1発現背側及び腹側前腸内胚葉 |
JP2016229718A Active JP6366115B2 (ja) | 2005-10-27 | 2016-11-28 | Pdx1発現背側及び腹側前腸内胚葉 |
JP2018097236A Active JP6595041B2 (ja) | 2005-10-27 | 2018-05-21 | Pdx1発現背側及び腹側前腸内胚葉 |
Family Applications After (4)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2013141267A Active JP5968270B2 (ja) | 2005-10-27 | 2013-07-05 | Pdx1発現背側及び腹側前腸内胚葉 |
JP2015091898A Active JP6077046B2 (ja) | 2005-10-27 | 2015-04-28 | Pdx1発現背側及び腹側前腸内胚葉 |
JP2016229718A Active JP6366115B2 (ja) | 2005-10-27 | 2016-11-28 | Pdx1発現背側及び腹側前腸内胚葉 |
JP2018097236A Active JP6595041B2 (ja) | 2005-10-27 | 2018-05-21 | Pdx1発現背側及び腹側前腸内胚葉 |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (6) | US20070122905A1 (ja) |
EP (3) | EP1957636B1 (ja) |
JP (5) | JP5404047B2 (ja) |
CN (1) | CN101351547A (ja) |
AU (1) | AU2006305879B2 (ja) |
CA (2) | CA2869687C (ja) |
DK (2) | DK1957636T3 (ja) |
ES (2) | ES2687233T3 (ja) |
PL (1) | PL1957636T3 (ja) |
WO (1) | WO2007051038A2 (ja) |
Cited By (23)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2012533629A (ja) * | 2009-07-20 | 2012-12-27 | ヤンセン バイオテツク,インコーポレーテツド | ヒト胚性幹細胞の分化 |
JP2016093192A (ja) * | 2009-05-29 | 2016-05-26 | ノヴォ ノルディスク アー/エス | hPS細胞由来の胚体内胚葉からの特定の内胚葉の派生 |
US9752125B2 (en) | 2010-05-12 | 2017-09-05 | Janssen Biotech, Inc. | Differentiation of human embryonic stem cells |
US9752126B2 (en) | 2008-10-31 | 2017-09-05 | Janssen Biotech, Inc. | Differentiation of human pluripotent stem cells |
US9951314B2 (en) | 2010-08-31 | 2018-04-24 | Janssen Biotech, Inc. | Differentiation of human embryonic stem cells |
US9969981B2 (en) | 2010-03-01 | 2018-05-15 | Janssen Biotech, Inc. | Methods for purifying cells derived from pluripotent stem cells |
US9969973B2 (en) | 2008-11-20 | 2018-05-15 | Janssen Biotech, Inc. | Methods and compositions for cell attachment and cultivation on planar substrates |
US9969982B2 (en) | 2007-11-27 | 2018-05-15 | Lifescan, Inc. | Differentiation of human embryonic stem cells |
US9969972B2 (en) | 2008-11-20 | 2018-05-15 | Janssen Biotech, Inc. | Pluripotent stem cell culture on micro-carriers |
US10006006B2 (en) | 2014-05-16 | 2018-06-26 | Janssen Biotech, Inc. | Use of small molecules to enhance MAFA expression in pancreatic endocrine cells |
US10066210B2 (en) | 2012-06-08 | 2018-09-04 | Janssen Biotech, Inc. | Differentiation of human embryonic stem cells into pancreatic endocrine cells |
US10066203B2 (en) | 2008-02-21 | 2018-09-04 | Janssen Biotech Inc. | Methods, surface modified plates and compositions for cell attachment, cultivation and detachment |
US10138465B2 (en) | 2012-12-31 | 2018-11-27 | Janssen Biotech, Inc. | Differentiation of human embryonic stem cells into pancreatic endocrine cells using HB9 regulators |
US10233421B2 (en) | 2008-06-30 | 2019-03-19 | Janssen Biotech, Inc. | Differentiation of pluripotent stem cells |
US10316293B2 (en) | 2007-07-01 | 2019-06-11 | Janssen Biotech, Inc. | Methods for producing single pluripotent stem cells and differentiation thereof |
US10344264B2 (en) | 2012-12-31 | 2019-07-09 | Janssen Biotech, Inc. | Culturing of human embryonic stem cells at the air-liquid interface for differentiation into pancreatic endocrine cells |
US10358628B2 (en) | 2011-12-22 | 2019-07-23 | Janssen Biotech, Inc. | Differentiation of human embryonic stem cells into single hormonal insulin positive cells |
US10370644B2 (en) | 2012-12-31 | 2019-08-06 | Janssen Biotech, Inc. | Method for making human pluripotent suspension cultures and cells derived therefrom |
US10377989B2 (en) | 2012-12-31 | 2019-08-13 | Janssen Biotech, Inc. | Methods for suspension cultures of human pluripotent stem cells |
US10420803B2 (en) | 2016-04-14 | 2019-09-24 | Janssen Biotech, Inc. | Differentiation of pluripotent stem cells to intestinal midgut endoderm cells |
US10456424B2 (en) | 2007-07-31 | 2019-10-29 | Janssen Biotech, Inc. | Pancreatic endocrine cells and methods thereof |
JPWO2018139600A1 (ja) * | 2017-01-27 | 2019-11-21 | 株式会社カネカ | 内胚葉系細胞集団、及び多能性細胞から三胚葉のいずれかの細胞集団を製造する方法 |
US10704025B2 (en) | 2009-12-23 | 2020-07-07 | Janssen Biotech, Inc. | Use of noggin, an ALK5 inhibitor and a protein kinase c activator to produce endocrine cells |
Families Citing this family (67)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2002319780A1 (en) * | 2001-08-06 | 2003-02-24 | Bresagen, Ltd. | Alternative compositions and methods for the culture of stem cells |
US20050266554A1 (en) * | 2004-04-27 | 2005-12-01 | D Amour Kevin A | PDX1 expressing endoderm |
US7541185B2 (en) * | 2003-12-23 | 2009-06-02 | Cythera, Inc. | Methods for identifying factors for differentiating definitive endoderm |
US8647873B2 (en) | 2004-04-27 | 2014-02-11 | Viacyte, Inc. | PDX1 expressing endoderm |
WO2005063971A2 (en) | 2003-12-23 | 2005-07-14 | Cythera, Inc | Definitive endoderm |
US20090010900A1 (en) * | 2004-07-07 | 2009-01-08 | The University Of North Carlolina At Chapel Hill | Embryonic Stem Cell Derivatives, and Methods of Making and Using the Same |
MX2007001772A (es) * | 2004-08-13 | 2007-07-11 | Univ Georgia Res Found | Composiciones y metodos para auto-renovacion y diferenciacion de celulas troncales embrionicas humanas. |
US8017395B2 (en) | 2004-12-17 | 2011-09-13 | Lifescan, Inc. | Seeding cells on porous supports |
SI1888123T1 (sl) | 2005-06-08 | 2013-04-30 | Janssen Biotech, Inc. | Celična terapija za okularno degeneracijo |
EP1957636B1 (en) | 2005-10-27 | 2018-07-04 | Viacyte, Inc. | Pdx1-expressing dorsal and ventral foregut endoderm |
CA2643478C (en) | 2006-02-23 | 2019-06-18 | Novocell, Inc. | Compositions and methods useful for culturing differentiable cells |
US11254916B2 (en) | 2006-03-02 | 2022-02-22 | Viacyte, Inc. | Methods of making and using PDX1-positive pancreatic endoderm cells |
JP6110048B2 (ja) | 2006-03-02 | 2017-04-05 | ヴィアサイト,インコーポレイテッド | 内分泌前駆細胞、膵臓ホルモン発現細胞及びそれらの製造方法 |
US7695965B2 (en) | 2006-03-02 | 2010-04-13 | Cythera, Inc. | Methods of producing pancreatic hormones |
US8741643B2 (en) | 2006-04-28 | 2014-06-03 | Lifescan, Inc. | Differentiation of pluripotent stem cells to definitive endoderm lineage |
WO2008013664A2 (en) | 2006-07-26 | 2008-01-31 | Cythera, Inc. | Methods of producing pancreatic hormones |
US20100255580A1 (en) * | 2007-07-18 | 2010-10-07 | Lifesccan, Inc. | Differentiation of Human Embryonic Stem Cells |
WO2009027654A1 (en) * | 2007-08-24 | 2009-03-05 | University Court Of The University Of Edinburgh | Regionalised endoderm cells and uses thereof |
US8338170B2 (en) | 2008-04-21 | 2012-12-25 | Viacyte, Inc. | Methods for purifying endoderm and pancreatic endoderm cells derived from human embryonic stem cells |
US8623648B2 (en) | 2008-04-24 | 2014-01-07 | Janssen Biotech, Inc. | Treatment of pluripotent cells |
US20090298178A1 (en) * | 2008-06-03 | 2009-12-03 | D Amour Kevin Allen | Growth factors for production of definitive endoderm |
JP2012507289A (ja) | 2008-10-31 | 2012-03-29 | ヤンセン バイオテツク,インコーポレーテツド | ヒト胚性幹細胞の膵内分泌系への分化 |
US8895300B2 (en) | 2008-11-04 | 2014-11-25 | Viacyte, Inc. | Scalable primate pluripotent stem cell aggregate suspension culture and differentiation thereof |
ES2743204T3 (es) | 2008-11-04 | 2020-02-18 | Viacyte Inc | Composiciones de suspensión de agregados de células madre y métodos para su diferenciación |
US8008075B2 (en) * | 2008-11-04 | 2011-08-30 | Viacyte, Inc. | Stem cell aggregate suspension compositions and methods of differentiation thereof |
CA2743641C (en) | 2008-11-14 | 2024-03-26 | Viacyte, Inc. | Encapsulation of pancreatic cells derived from human pluripotent stem cells |
EP3904505A1 (en) * | 2009-04-22 | 2021-11-03 | Viacyte, Inc. | Cell compositions derived from dedifferentiated reprogrammed cells |
US9109245B2 (en) | 2009-04-22 | 2015-08-18 | Viacyte, Inc. | Cell compositions derived from dedifferentiated reprogrammed cells |
ES2693088T3 (es) * | 2009-07-20 | 2018-12-07 | Janssen Biotech, Inc. | Diferenciación de células madre embriónicas humanas |
WO2011011349A2 (en) * | 2009-07-20 | 2011-01-27 | Centocor Ortho Biotech Inc. | Differentiation of human embryonic stem cells |
RU2586506C2 (ru) | 2009-12-23 | 2016-06-10 | Янссен Байотек, Инк. | Дифференцировка человеческих эмбриональных стволовых клеток |
US9719068B2 (en) | 2010-05-06 | 2017-08-01 | Children's Hospital Medical Center | Methods and systems for converting precursor cells into intestinal tissues through directed differentiation |
RU2599420C2 (ru) | 2010-08-31 | 2016-10-10 | Янссен Байотек, Инк. | Дифференцирование плюрипотентных стволовых клеток |
ES2658146T3 (es) | 2010-08-31 | 2018-03-08 | Janssen Biotech, Inc. | Diferenciación de células madre embrionarias humanas |
US9433557B2 (en) | 2011-02-21 | 2016-09-06 | Viacyte, Inc. | Loading system for an encapsulation device |
WO2013134378A1 (en) | 2012-03-07 | 2013-09-12 | Janssen Biotech, Inc. | Defined media for expansion and maintenance of pluripotent stem cells |
EP2857500B1 (en) | 2012-05-25 | 2018-01-31 | Saitama Medical University | Method for producing pancreatic hormone-producing cell, pancreatic hormone-producing cell, and differentiation/induction promoter |
AU2013248265B2 (en) | 2012-11-08 | 2018-11-01 | Viacyte, Inc. | Scalable primate pluripotent stem cell aggregate suspension culture and differentiation thereof |
US8859286B2 (en) | 2013-03-14 | 2014-10-14 | Viacyte, Inc. | In vitro differentiation of pluripotent stem cells to pancreatic endoderm cells (PEC) and endocrine cells |
US10266807B2 (en) | 2013-04-03 | 2019-04-23 | FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. | Methods and compositions for culturing endoderm progenitor cells in suspension |
WO2014189127A1 (ja) | 2013-05-24 | 2014-11-27 | 学校法人埼玉医科大学 | 新規ペプチド及びその用途 |
CA2915091A1 (en) | 2013-06-11 | 2014-12-18 | President And Fellows Of Harvard College | Sc-.beta. cells and compositions and methods for generating the same |
EP2896688A1 (en) * | 2014-01-20 | 2015-07-22 | Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS) | A method of producing beta pancreatic cells from progenitor cells through the use of hydrogen peroxide |
US11051900B2 (en) | 2014-04-16 | 2021-07-06 | Viacyte, Inc. | Tools and instruments for use with implantable encapsulation devices |
CA2949834A1 (en) | 2014-05-28 | 2015-12-03 | James Macormack Wells | Methods and systems for converting precursor cells into gastric tissues through directed differentiation |
SG11201701844YA (en) * | 2014-10-08 | 2017-04-27 | Agency Science Tech & Res | Methods of differentiating stem cells into liver cell lineages |
JP6804438B2 (ja) | 2014-10-17 | 2020-12-23 | チルドレンズ ホスピタル メディカル センター | 多能性幹細胞を使用するヒト小腸のin vivoモデル、並びにそれを作製、及び使用する方法 |
WO2016100909A1 (en) | 2014-12-18 | 2016-06-23 | President And Fellows Of Harvard College | METHODS FOR GENERATING STEM CELL-DERIVED β CELLS AND USES THEREOF |
WO2016100898A1 (en) | 2014-12-18 | 2016-06-23 | President And Fellows Of Harvard College | Serum-free in vitro directed differentiation protocol for generating stem cell-derived b cells and uses thereof |
CN107614678B (zh) | 2014-12-18 | 2021-04-30 | 哈佛学院校长同事会 | 干细胞来源的β细胞的产生方法及其使用方法 |
KR20230050478A (ko) * | 2014-12-19 | 2023-04-14 | 얀센 바이오테크 인코포레이티드 | 만능성 줄기 세포의 현탁 배양 |
CA3016641A1 (en) | 2016-05-05 | 2017-11-09 | Children's Hospital Medical Center | Methods for the in vitro manufacture of gastric fundus tissue and compositions related to same |
CN110062764A (zh) | 2016-12-05 | 2019-07-26 | 儿童医院医学中心 | 结肠类器官及其制备和使用方法 |
AU2018285539A1 (en) | 2017-06-14 | 2020-02-06 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Devices and methods for delivering therapeutics |
US10391156B2 (en) | 2017-07-12 | 2019-08-27 | Viacyte, Inc. | University donor cells and related methods |
WO2019099725A1 (en) | 2017-11-15 | 2019-05-23 | Semma Therapeutics, Inc. | Islet cell manufacturing compositions and methods of use |
AU2019320072A1 (en) | 2018-08-10 | 2021-02-25 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Stem cell derived islet differentiation |
US20200080107A1 (en) | 2018-09-07 | 2020-03-12 | Crispr Therapeutics Ag | Universal donor cells |
US20220220447A1 (en) * | 2019-05-22 | 2022-07-14 | The Cleveland Clinic Foundation | Generating dorsal foregut, and anterior domain, endoderm cells |
US20220234006A1 (en) | 2019-05-31 | 2022-07-28 | W. L. Gore & Associates, Inc. | A biocompatible membrane composite |
CA3139585C (en) | 2019-05-31 | 2024-01-23 | W. L. Gore & Associates, Inc. | A biocompatible membrane composite |
WO2020243668A1 (en) | 2019-05-31 | 2020-12-03 | W. L. Gore & Associates, Inc. | Cell encapsulation devices with controlled oxygen diffusion distances |
CN114173837A (zh) | 2019-05-31 | 2022-03-11 | W.L.戈尔及同仁股份有限公司 | 生物相容性膜复合材料 |
JP2022547053A (ja) | 2019-09-05 | 2022-11-10 | クリスパー セラピューティクス アクチェンゲゼルシャフト | ユニバーサルドナー細胞 |
EP4025690A1 (en) | 2019-09-05 | 2022-07-13 | CRISPR Therapeutics AG | Universal donor cells |
US11850303B2 (en) | 2020-10-27 | 2023-12-26 | Uqora, Inc. | Gel and a suppository and methods to provide the gel and suppository |
KR20230146008A (ko) | 2020-12-31 | 2023-10-18 | 크리스퍼 테라퓨틱스 아게 | 범용 공여자 세포 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005086860A2 (en) * | 2004-03-09 | 2005-09-22 | Gang Xu | Methods for generating insulin-producing cells |
WO2005097977A2 (en) * | 2004-04-01 | 2005-10-20 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Differentiation of stem cells to endoderm and pancreatic lineage |
Family Cites Families (78)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US2161804A (en) | 1935-11-09 | 1939-06-13 | Baldwin Southwark Corp | Hydraulic press |
US4873702A (en) | 1988-10-20 | 1989-10-10 | Chiu Ran Fun | Method and apparatus for DC restoration in digital receivers |
US6165993A (en) | 1992-03-23 | 2000-12-26 | University Of Massachusetts Medical Center | DNA vaccines against rotavirus infections |
US5690926A (en) | 1992-10-08 | 1997-11-25 | Vanderbilt University | Pluripotential embryonic cells and methods of making same |
US5453357A (en) | 1992-10-08 | 1995-09-26 | Vanderbilt University | Pluripotential embryonic stem cells and methods of making same |
US7153684B1 (en) * | 1992-10-08 | 2006-12-26 | Vanderbilt University | Pluripotential embryonic stem cells and methods of making same |
US5593972A (en) | 1993-01-26 | 1997-01-14 | The Wistar Institute | Genetic immunization |
US6015671A (en) * | 1995-06-07 | 2000-01-18 | Indiana University Foundation | Myocardial grafts and cellular compositions |
US5874301A (en) * | 1994-11-21 | 1999-02-23 | National Jewish Center For Immunology And Respiratory Medicine | Embryonic cell populations and methods to isolate such populations |
US5843780A (en) * | 1995-01-20 | 1998-12-01 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Primate embryonic stem cells |
US5748681A (en) | 1995-10-27 | 1998-05-05 | Lucent Technologies Inc | Offset correction for a homodyne radio |
JP2001517927A (ja) | 1996-02-28 | 2001-10-09 | バンダービルト ユニバーシティ | 胚幹細胞を作製する組成物および方法 |
US5877207A (en) * | 1996-03-11 | 1999-03-02 | Allergan Sales, Inc. | Synthesis and use of retinoid compounds having negative hormone and/or antagonist activities |
US5964261A (en) * | 1996-05-29 | 1999-10-12 | Baxter International Inc. | Implantation assembly |
EP0986635A4 (en) | 1997-01-10 | 2001-11-07 | Life Technologies Inc | SERUM SUBSTITUTE FOR EMBRYONIC STEM CELLS |
US5798644A (en) | 1997-02-20 | 1998-08-25 | At&T Corp | Method and apparatus for locating buried conveyances using locating & confirmation signals with an array of sensors |
US5793230A (en) | 1997-02-26 | 1998-08-11 | Sandia Corporation | Sensor readout detector circuit |
US6331406B1 (en) * | 1997-03-31 | 2001-12-18 | The John Hopkins University School Of Medicine | Human enbryonic germ cell and methods of use |
US6090622A (en) * | 1997-03-31 | 2000-07-18 | The Johns Hopkins School Of Medicine | Human embryonic pluripotent germ cells |
US6261281B1 (en) | 1997-04-03 | 2001-07-17 | Electrofect As | Method for genetic immunization and introduction of molecules into skeletal muscle and immune cells |
KR100615117B1 (ko) | 1997-09-15 | 2006-08-22 | 제네틱 이뮤너티, 엘엘씨. | 피부의 항원제시 세포에 유전자를 전달하는 방법 |
CA2307807C (en) | 1997-10-23 | 2008-09-02 | Andrea G. Bodnar | Methods and materials for the growth of primate-derived primordial stem cells in feeder-free culture |
US20030008919A1 (en) * | 1999-06-03 | 2003-01-09 | Jean-Baptiste Roullet | Use of retinoids to treat high blood pressure and other cardiovascular disease |
US6921811B2 (en) * | 1998-09-22 | 2005-07-26 | Biosurface Engineering Technologies, Inc. | Bioactive coating composition and methods |
US6667176B1 (en) | 2000-01-11 | 2003-12-23 | Geron Corporation | cDNA libraries reflecting gene expression during growth and differentiation of human pluripotent stem cells |
DE19852800C1 (de) | 1998-11-16 | 2000-04-13 | Univ Albert Ludwigs Freiburg | Verfahren zur Herstellung von Antikörpern gegen ein Polypeptid, von dem die kodierende Nukleinsäure bekannt ist |
US6326201B1 (en) | 1999-02-10 | 2001-12-04 | Curis, Inc. | Pancreatic progenitor cells, methods and uses related thereto |
US6872389B1 (en) * | 1999-07-08 | 2005-03-29 | Rhode Island Hospital | Liver stem cell |
US7005252B1 (en) | 2000-03-09 | 2006-02-28 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Serum free cultivation of primate embryonic stem cells |
US7256042B2 (en) * | 2000-04-27 | 2007-08-14 | Geron Corporation | Process for making hepatocytes from pluripotent stem cells |
US6458589B1 (en) * | 2000-04-27 | 2002-10-01 | Geron Corporation | Hepatocyte lineage cells derived from pluripotent stem cells |
AU8617301A (en) | 2000-08-01 | 2002-02-13 | Yissum Res Dev Co | Directed differentiation of embryonic cells |
AU2002226075A1 (en) | 2000-10-23 | 2002-05-06 | University Of Kansas | Cadherin peptides for drug delivery and inhibition of tumor metastasis/invasion |
WO2002059278A2 (en) | 2001-01-24 | 2002-08-01 | The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Department Of Health & Human Services | Differentiation of stem cells to pancreatic endocrine cells |
WO2002101385A1 (en) * | 2001-06-13 | 2002-12-19 | Massachusetts Institute Of Technology | In vivo bioreactors |
EP1298201A1 (en) | 2001-09-27 | 2003-04-02 | Cardion AG | Process for the production of cells exhibiting an islet-beta-cell-like state |
EP1444345A4 (en) * | 2001-10-18 | 2004-12-08 | Ixion Biotechnology Inc | TRANSFORMATION OF STEM CELLS AND LIVER PROGENITORS INTO FUNCTIONAL CELLS OF PANCREAS |
JP2005510232A (ja) | 2001-11-26 | 2005-04-21 | アドバンスド セル テクノロジー、インク. | 再プログラムされたヒト体細胞核ならびに自系および同系なヒト幹細胞の製造および使用方法 |
US7157278B2 (en) * | 2001-12-04 | 2007-01-02 | Organogenesis, Inc. | Cultured cells from pancreatic islets |
EP2264146A1 (en) * | 2001-12-07 | 2010-12-22 | Geron Corporation | Islet cells from human embryonic stem cells |
US20030138949A1 (en) * | 2001-12-12 | 2003-07-24 | Anil Bhushan | Methods for the regeneration of pancreatic islets and expansion of pancreatic endocrine cells |
CA2684022C (en) * | 2002-05-17 | 2014-09-23 | Mount Sinai School Of Medicine Of New York University | Mesoderm and definitive endoderm cell populations |
US20060003446A1 (en) * | 2002-05-17 | 2006-01-05 | Gordon Keller | Mesoderm and definitive endoderm cell populations |
CA2487858A1 (en) | 2002-05-28 | 2003-12-04 | Novocell, Inc. | Methods, compositions, and growth and differentiation factors for insulin-producing cells |
CA2487094A1 (en) * | 2002-05-28 | 2003-12-11 | Becton, Dickinson And Company | Methods for in vitro expansion and transdifferentiation of human pancreatic acinar cells into insulin-producing cells |
US20060040385A1 (en) * | 2002-12-05 | 2006-02-23 | Technion Research & Development Foundation Ltd. | Cultured human pancreatic islets, and uses thereof |
FR2849043B1 (fr) * | 2002-12-24 | 2005-07-08 | Gemac | Procede de fabrication d'un vecteur de molecules actives applicable dans le domaine de la diffusion de principes actifs et vecteur obtenu |
EP1594954A4 (en) * | 2003-02-07 | 2010-01-27 | Wisconsin Alumni Res Found | GENETIC MODIFICATIONS DIRECTED FROM HUMAN STEM CELLS |
US20070154981A1 (en) | 2003-02-14 | 2007-07-05 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Insulin-producing cells derived from stem cells |
US20030224411A1 (en) * | 2003-03-13 | 2003-12-04 | Stanton Lawrence W. | Genes that are up- or down-regulated during differentiation of human embryonic stem cells |
US20040229350A1 (en) | 2003-05-12 | 2004-11-18 | Nikolai Strelchenko | Morula derived embryonic stem cells |
WO2004104184A1 (ja) | 2003-05-20 | 2004-12-02 | Riken | 内胚葉系幹細胞の調製 |
WO2005017131A2 (en) | 2003-08-14 | 2005-02-24 | THE GOUVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA as represented by THE SECRETARY OF THE DEPARTMENT F HEALTH AND HUMAN SERVICES | Methods for the differentiation of human stem cells |
WO2005033294A2 (en) | 2003-09-30 | 2005-04-14 | Regents Of The University Of California | Methods for maintaining hepatocytes in culture and for differentiating embryonic stem cells along a hepatocyte lineage |
US7625753B2 (en) * | 2003-12-23 | 2009-12-01 | Cythera, Inc. | Expansion of definitive endoderm cells |
WO2005063971A2 (en) * | 2003-12-23 | 2005-07-14 | Cythera, Inc | Definitive endoderm |
US7541185B2 (en) * | 2003-12-23 | 2009-06-02 | Cythera, Inc. | Methods for identifying factors for differentiating definitive endoderm |
US7985585B2 (en) * | 2004-07-09 | 2011-07-26 | Viacyte, Inc. | Preprimitive streak and mesendoderm cells |
US20050266554A1 (en) * | 2004-04-27 | 2005-12-01 | D Amour Kevin A | PDX1 expressing endoderm |
WO2006017134A2 (en) | 2004-07-09 | 2006-02-16 | Cythera, Inc. | Preprimitive streak and mesendoderm cells |
US8586357B2 (en) * | 2003-12-23 | 2013-11-19 | Viacyte, Inc. | Markers of definitive endoderm |
WO2005097980A2 (en) | 2004-03-26 | 2005-10-20 | Geron Corporation | New protocols for making hepatocytes from embryonic stem cells |
CN103103158B (zh) * | 2004-04-27 | 2016-08-03 | 韦尔赛特公司 | 细胞培养基 |
JP5687816B2 (ja) * | 2004-07-09 | 2015-03-25 | ヴィアサイト,インコーポレイテッド | 胚体内胚葉を分化させるための因子を同定する方法 |
MX2007001772A (es) * | 2004-08-13 | 2007-07-11 | Univ Georgia Res Found | Composiciones y metodos para auto-renovacion y diferenciacion de celulas troncales embrionicas humanas. |
US20070298016A1 (en) | 2004-09-29 | 2007-12-27 | Nico Heins | Methods For The Generation Of Hepatocyte-Like Cells From Human Blastocyst-Derived Stem (Hbs) |
AU2006210955A1 (en) | 2005-01-31 | 2006-08-10 | Es Cell International Pte Ltd. | Directed differentiation of embryonic stem cells and uses thereof |
CN100425694C (zh) | 2005-04-15 | 2008-10-15 | 北京大学 | 诱导胚胎干细胞向胰腺细胞分化的方法 |
WO2007002210A2 (en) | 2005-06-20 | 2007-01-04 | Bresagen, Inc. | Embryonic stem cell culture compositions and methods of use thereof |
US7732202B2 (en) * | 2005-10-21 | 2010-06-08 | International Stem Cell Corporation | Oxygen tension for the parthenogenic activation of human oocytes for the production of human embryonic stem cells |
EP1957636B1 (en) | 2005-10-27 | 2018-07-04 | Viacyte, Inc. | Pdx1-expressing dorsal and ventral foregut endoderm |
GB0602063D0 (en) | 2006-02-02 | 2006-03-15 | Univ Manchester | Cell Culture |
US7695965B2 (en) * | 2006-03-02 | 2010-04-13 | Cythera, Inc. | Methods of producing pancreatic hormones |
JP6110048B2 (ja) * | 2006-03-02 | 2017-04-05 | ヴィアサイト,インコーポレイテッド | 内分泌前駆細胞、膵臓ホルモン発現細胞及びそれらの製造方法 |
WO2008013664A2 (en) * | 2006-07-26 | 2008-01-31 | Cythera, Inc. | Methods of producing pancreatic hormones |
US20080241250A1 (en) * | 2006-11-08 | 2008-10-02 | Emans Pieter J | In vivo bioreactors and methods of making and using same |
US7695963B2 (en) * | 2007-09-24 | 2010-04-13 | Cythera, Inc. | Methods for increasing definitive endoderm production |
US11586805B2 (en) | 2021-07-26 | 2023-02-21 | Atlassian Pty Ltd. | Machine-learning-based natural language processing techniques for low-latency document summarization |
-
2006
- 2006-10-27 EP EP06827129.5A patent/EP1957636B1/en active Active
- 2006-10-27 ES ES06827129.5T patent/ES2687233T3/es active Active
- 2006-10-27 EP EP19179403.1A patent/EP3584311A1/en active Pending
- 2006-10-27 JP JP2008538095A patent/JP5404047B2/ja active Active
- 2006-10-27 CN CNA2006800497075A patent/CN101351547A/zh active Pending
- 2006-10-27 EP EP13171221.8A patent/EP2674485B1/en active Active
- 2006-10-27 CA CA2869687A patent/CA2869687C/en active Active
- 2006-10-27 ES ES13171221T patent/ES2743202T3/es active Active
- 2006-10-27 US US11/588,693 patent/US20070122905A1/en not_active Abandoned
- 2006-10-27 WO PCT/US2006/042413 patent/WO2007051038A2/en active Application Filing
- 2006-10-27 DK DK06827129.5T patent/DK1957636T3/en active
- 2006-10-27 AU AU2006305879A patent/AU2006305879B2/en active Active
- 2006-10-27 PL PL06827129T patent/PL1957636T3/pl unknown
- 2006-10-27 CA CA2627645A patent/CA2627645C/en active Active
- 2006-10-27 DK DK13171221.8T patent/DK2674485T3/da active
-
2010
- 2010-03-22 US US12/729,084 patent/US20100233755A1/en not_active Abandoned
-
2013
- 2013-07-05 JP JP2013141267A patent/JP5968270B2/ja active Active
- 2013-08-09 US US13/962,978 patent/US9499795B2/en active Active
-
2015
- 2015-04-28 JP JP2015091898A patent/JP6077046B2/ja active Active
-
2016
- 2016-10-11 US US15/290,850 patent/US20170022474A1/en not_active Abandoned
- 2016-11-28 JP JP2016229718A patent/JP6366115B2/ja active Active
-
2018
- 2018-05-21 JP JP2018097236A patent/JP6595041B2/ja active Active
- 2018-11-26 US US16/200,493 patent/US11427805B2/en active Active
-
2022
- 2022-07-25 US US17/814,791 patent/US20230040286A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005086860A2 (en) * | 2004-03-09 | 2005-09-22 | Gang Xu | Methods for generating insulin-producing cells |
WO2005097977A2 (en) * | 2004-04-01 | 2005-10-20 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Differentiation of stem cells to endoderm and pancreatic lineage |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
JPN6011062131; Int J Dev Biol. 2003 Sep;47(6):459-62. * |
Cited By (34)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10316293B2 (en) | 2007-07-01 | 2019-06-11 | Janssen Biotech, Inc. | Methods for producing single pluripotent stem cells and differentiation thereof |
US10456424B2 (en) | 2007-07-31 | 2019-10-29 | Janssen Biotech, Inc. | Pancreatic endocrine cells and methods thereof |
US9969982B2 (en) | 2007-11-27 | 2018-05-15 | Lifescan, Inc. | Differentiation of human embryonic stem cells |
US11001802B2 (en) | 2008-02-21 | 2021-05-11 | Nunc A/S | Surface of a vessel with polystyrene, nitrogen, oxygen and a static sessile contact angle for attachment and cultivation of cells |
US10066203B2 (en) | 2008-02-21 | 2018-09-04 | Janssen Biotech Inc. | Methods, surface modified plates and compositions for cell attachment, cultivation and detachment |
US10233421B2 (en) | 2008-06-30 | 2019-03-19 | Janssen Biotech, Inc. | Differentiation of pluripotent stem cells |
US10351820B2 (en) | 2008-06-30 | 2019-07-16 | Janssen Biotech, Inc. | Methods for making definitive endoderm using at least GDF-8 |
US9752126B2 (en) | 2008-10-31 | 2017-09-05 | Janssen Biotech, Inc. | Differentiation of human pluripotent stem cells |
US9969973B2 (en) | 2008-11-20 | 2018-05-15 | Janssen Biotech, Inc. | Methods and compositions for cell attachment and cultivation on planar substrates |
US9969972B2 (en) | 2008-11-20 | 2018-05-15 | Janssen Biotech, Inc. | Pluripotent stem cell culture on micro-carriers |
JP2016093192A (ja) * | 2009-05-29 | 2016-05-26 | ノヴォ ノルディスク アー/エス | hPS細胞由来の胚体内胚葉からの特定の内胚葉の派生 |
JP2012533629A (ja) * | 2009-07-20 | 2012-12-27 | ヤンセン バイオテツク,インコーポレーテツド | ヒト胚性幹細胞の分化 |
US10076544B2 (en) | 2009-07-20 | 2018-09-18 | Janssen Biotech, Inc. | Differentiation of human embryonic stem cells |
US10471104B2 (en) | 2009-07-20 | 2019-11-12 | Janssen Biotech, Inc. | Lowering blood glucose |
US10704025B2 (en) | 2009-12-23 | 2020-07-07 | Janssen Biotech, Inc. | Use of noggin, an ALK5 inhibitor and a protein kinase c activator to produce endocrine cells |
US9969981B2 (en) | 2010-03-01 | 2018-05-15 | Janssen Biotech, Inc. | Methods for purifying cells derived from pluripotent stem cells |
US10329534B2 (en) | 2010-03-01 | 2019-06-25 | Janssen Biotech, Inc. | Methods for purifying cells derived from pluripotent stem cells |
US9752125B2 (en) | 2010-05-12 | 2017-09-05 | Janssen Biotech, Inc. | Differentiation of human embryonic stem cells |
US9951314B2 (en) | 2010-08-31 | 2018-04-24 | Janssen Biotech, Inc. | Differentiation of human embryonic stem cells |
US11377640B2 (en) | 2011-12-22 | 2022-07-05 | Janssen Biotech, Inc. | Differentiation of human embryonic stem cells into single hormonal insulin positive cells |
US10358628B2 (en) | 2011-12-22 | 2019-07-23 | Janssen Biotech, Inc. | Differentiation of human embryonic stem cells into single hormonal insulin positive cells |
US10066210B2 (en) | 2012-06-08 | 2018-09-04 | Janssen Biotech, Inc. | Differentiation of human embryonic stem cells into pancreatic endocrine cells |
US10208288B2 (en) | 2012-06-08 | 2019-02-19 | Janssen Biotech, Inc. | Differentiation of human embryonic stem cells into pancreatic endocrine cells |
US10377989B2 (en) | 2012-12-31 | 2019-08-13 | Janssen Biotech, Inc. | Methods for suspension cultures of human pluripotent stem cells |
US10370644B2 (en) | 2012-12-31 | 2019-08-06 | Janssen Biotech, Inc. | Method for making human pluripotent suspension cultures and cells derived therefrom |
US10138465B2 (en) | 2012-12-31 | 2018-11-27 | Janssen Biotech, Inc. | Differentiation of human embryonic stem cells into pancreatic endocrine cells using HB9 regulators |
US10947511B2 (en) | 2012-12-31 | 2021-03-16 | Janssen Biotech, Inc. | Differentiation of human embryonic stem cells into pancreatic endocrine cells using thyroid hormone and/or alk5, an inhibitor of tgf-beta type 1 receptor |
US10344264B2 (en) | 2012-12-31 | 2019-07-09 | Janssen Biotech, Inc. | Culturing of human embryonic stem cells at the air-liquid interface for differentiation into pancreatic endocrine cells |
US10870832B2 (en) | 2014-05-16 | 2020-12-22 | Janssen Biotech, Inc. | Use of small molecules to enhance MAFA expression in pancreatic endocrine cells |
US10006006B2 (en) | 2014-05-16 | 2018-06-26 | Janssen Biotech, Inc. | Use of small molecules to enhance MAFA expression in pancreatic endocrine cells |
US10420803B2 (en) | 2016-04-14 | 2019-09-24 | Janssen Biotech, Inc. | Differentiation of pluripotent stem cells to intestinal midgut endoderm cells |
JPWO2018139600A1 (ja) * | 2017-01-27 | 2019-11-21 | 株式会社カネカ | 内胚葉系細胞集団、及び多能性細胞から三胚葉のいずれかの細胞集団を製造する方法 |
JP7107504B2 (ja) | 2017-01-27 | 2022-07-27 | 株式会社カネカ | 内胚葉系細胞集団、及び多能性細胞から三胚葉のいずれかの細胞集団を製造する方法 |
US11746331B2 (en) | 2017-01-27 | 2023-09-05 | Kaneka Corporation | Endodermal cell population, and method for producing cell population of any of three germ layers from pluripotent cell |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6595041B2 (ja) | Pdx1発現背側及び腹側前腸内胚葉 | |
US8216836B2 (en) | Methods for identifying factors for differentiating definitive endoderm | |
EP1786896B1 (en) | Methods for identifying factors for differentiating definitive endoderm | |
NZ553098A (en) | Methods for identifying factors for differentiating definitive endoderm | |
AU2016235001B2 (en) | Methods for identifying factors for differentiating definitive endoderm | |
AU2015221494B2 (en) | Pdx1- expressing dorsal and ventral foregut endoderm | |
AU2013205842B2 (en) | Methods for identifying factors for differentiating definitive endoderm | |
AU2012202481B2 (en) | PDX1-expressing dorsal and ventral foregut endoderm |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090629 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20090629 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20111129 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20120124 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20120131 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120529 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20120530 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20130305 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130705 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20130705 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20130806 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20130828 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20131022 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20131029 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5404047 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |