JP2009250763A - イムノクロマトグラフ装置 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】前記イムノクロマトグラフ装置は、液体展開材料7、イムノクロマトグラフ展開膜、ならびに液体吸引材料がこの順序で連結されたイムノクロマトグラフ用ストリップと、1つの展開液収容室11及び1つの展開液導入部4を有するハウジング1とを含み、液体展開材料の展開液吸液用端部7aが、全てのイムノクロマトグラフ用ストリップに関して、展開液収容室内に配置され、展開液吸液用端部の全てと接触する展開液分配材料13が、展開液収容室内に配置されている。
【選択図】図5
Description
図9及び図10に示すイムノクロマトグラフ装置100は、ハウジング(ハウジング上蓋101a及びハウジング基板101b)、ハウジング内に収納された、吸収性材料からなるイムノクロマトグラフ展開膜109、並びに前記イムノクロマトグラフ展開膜上でのクロマトグラフ展開の流れ方向を決定する手段としての液体展開材料107(上流側)及び液体吸引材料108(下流側)を含む。
また、イムノクロマトグラフ装置100は、試料を装置に導入するための試料供給手段102、イムノクロマトグラフ展開膜上の捕獲ゾーン195を観察することのできる判定窓103、展開液供給手段としての導入部104、及び展開液収容室111を含む。前記展開液収容室111は、最適量の展開液を収容することができる容量を有しているが、供給ミス等で最適量以上の追加液量が供給された場合の増分を吸収できるように、液体収容予備容器112が設けられている。
液体展開材料、試料受容領域および捕獲領域を有する展開膜、ならびに液体吸引材料が、展開方向に沿ってこの順序で連結されたイムノクロマトグラフ用ストリップ2つ又はそれ以上と;
展開液収容室1つと、前記展開液収容室に展開液を供給可能な展開液導入部1つとを有し、前記イムノクロマトグラフ用ストリップを、それぞれが接触することなく、間隔を設けて内部に収納可能なハウジングと;
を含むイムノクロマトグラフ装置であって、
前記液体展開材料における前記展開膜と連結する端部とは反対側の展開液吸液用端部が、全てのイムノクロマトグラフ用ストリップに関して、前記展開液収容室内に配置され;
前記展開液吸液用端部の全てと接触する展開液分配材料が、前記展開液収容室内に配置されている
ことを特徴とする、イムノクロマトグラフ装置により解決することができる。
本発明のイムノクロマトグラフ装置は、従来公知のイムノクロマトグラフ装置の改良発明であって、複数のイムノクロマトグラフ用ストリップを備えていること、並びに、特定形状の展開液導入部、展開液収容室、及び展開液分配材料から主として構成される展開液分配手段を備えていることを除いて、従来公知のイムノクロマトグラフ装置と同様の構成からなることができる。
各イムノクロマトグラフ用ストリップ6は、吸収性材料からなるイムノクロマトグラフ展開膜9、並びに前記イムノクロマトグラフ展開膜上でのクロマトグラフ展開の流れ方向を決定する手段としての液体展開材料7(上流側)及び液体吸引材料8(下流側)を含む。
ハウジング上蓋1aには、試料をイムノクロマトグラフ展開膜上の試料受容ゾーン19に供給するための試料供給手段2、イムノクロマトグラフ展開膜上の捕獲ゾーン20を観察することのできる判定窓3、各々のイムノクロマトグラフテストストリップの上流側に展開液を供給できる展開液導入部4、蒸散窓5が設けられている。
本発明のイムノクロマトグラフ装置における展開液分配手段は、例えば、図1〜図5に示すように、
(a)展開液添加用の上方開口部4aと、底部に設けた排出口4bとを有する展開液導入部4を1つと、
(b)展開液を収容する展開液収容室11を1つと、
(c)排出口4bと液体展開材料7の展開液の供給を均一・安定にさせるため、展開液分配材料13
を備える。なお、本発明において、展開液収容室とは、展開液を収容可能であるだけでなく、展開液分配材料が配置されていることが必要であり、例えば、図2又は図5に示す液体収容予備室12は、展開液分配材料が配置されていないため、本発明における展開液収容室に該当しない。
なお、前記展開液には、緩衝液を含む各種試薬類(例えば、シグナル発生成分、シグナル増強成分、非特異反応抑制成分など)を添加した混合物も含まれる。
本発明における前記展開液導入部の形状(側面から見た形状)は、特に限定するものではないが、例えば、角錐形(例えば、四角錐、三角錐、多角錐)、半球形、円錐形、円筒形、又は角柱形(例えば、四角柱、三角柱、多角柱)を挙げることができ、展開液の導入部の判別し易さと供給し易さの点で、角錐形が特に好ましい。
また、底部排出口の形状及び位置や大きさは、上方開口部と同様にテストストリップ数の増減と次の展開液流路の形状及び位置や大きさと一致するように決定することができる。
(1)酵素法イムノクロマトグラフ用ストリップの作製
図3に示すイムノクロマトグラフテストストリップを、以下のような方法で作製した。
ニトロセルロース膜(HF240:日本ミリポア社製、縦57mm×横40cm)に、ダニアレルゲン(グリア社製)を、縦方向の液体吸引材料8が貼り付けられる端(下流側)から約15mmの場所に1μL/cmの条件で線状に塗布した。
そのまま、室温下で1時間静置乾燥後、シリカゲルデシケーター内に保存し、室温下で一夜乾燥させ、ダニアレルゲン固定化膜とした。
ガラスパッド(A/B:日本ポール社製)を縦30mm×横40cmのサイズに切断し、吸収パッドとした。
ガラスパッド(AP25:日本ミリポア社製)を縦20mm×横40cmのサイズに切断し、5−ブロモ−4クロロ−3−インドリルホスフェート(5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate;BCIP)基質溶液(シグマ社製)を、縦方向のダニアレルゲン固定化膜9が貼り付けられる端(下流側)から約4mmの場所に2μL/cmの条件で線状に塗布した。そのまま、室温下で1時間静置乾燥後、シリカゲルデシケーター内に保存し、室温下で一夜乾燥させ、展開パッドとした。
粘着シート(日本ミリポア製)を縦84mm×横40cmのサイズに切断し、まず、その粘着シート51にダニアレルゲン固定化膜を貼り付け、その上に、縦方向に約8mmの重なりを持たせて、吸収パッド、展開パッドをそれぞれ貼り付けた。次いで、横4mm幅で切断し、イムノクロマトテストストリップとした。
図1〜図4に示すイムノクロマトグラフ装置10を、以下のような方法で作製した。
ガラス−PVA(Type A/E:日本ポール製)、セルロース−ガラス(LF1:ワットマン社製)、レーヨン(8−S:Schleicher & Schuell製)を、それぞれ、28mm×11mmのサイズに切断し、展開液供給パッドとした。厚さは全て0.3mmである。
テストストリップを3本収納可能なハウジングに、テストストリップ3本を収納させ、更に、展開液収納容器11の底側に、上記で作製した展開液供給パッド1枚を収納させ、3本のテストストリップの端は、展開液供給パッドに全て接するように置いた。比較例として、展開液供給パッドを収納しない反応カセットを作製した。
2%トリトンX−100、0.15mol/L NaCl、0.1mol/L HEPES緩衝液(pH8)溶液に、アルカリホスファターゼ標識抗ヒトIgE抗体溶液(DPC社製)を添加し、酵素標識抗体反応液を作製した。
0.1mol/L CHES緩衝液(pH10)、5mmol/L塩化マグネシウム溶液を作製した。
上記で作製した反応カセットを用いて、ヒト血清30μL[陽性検体(2+)あるいは陰性検体(−)]と酵素標識抗体反応液100μLとを混合し、反応カセットの試薬供給手段2の丸穴(全3箇所)のそれぞれに、それら混合液を30μLずつ添加し、その後速やかに展開液を下記の各条件に従って、四角形状の展開液導入部4の箇所に添加し、室温で、静置状態で反応させ、40分後の判定窓3に現れる線状発色度を判定した。ヒト血清中にダニアレルゲンに反応する抗体が含まれている場合には、青色の発色を示す。もっとも強い発色度を3+、次に中程度の発色度を2+、弱い発色度を+、発色が認められないものを−とした。また、発色が線上に認められないもの(ゆがんでいるもの)やバックグラウンドの上昇や非特異発色発生等が認められたものをエラーと判定した。+以上の発色を示す場合、陽性検体と判定される。
ヒト血清は、ユニキャップ特異IgE法(ファディア社製)によって、陽性検体[クラス2(2+)]あるいは陰性検体[クラス0(−)]と判定されたものを使用した。
(1)水平状態でサンプル及び展開液を添加し、その後15度の傾斜をつけて静置させた場合(水平→傾斜)、(2)15度の傾斜のある状態でサンプル及び展開液を添加し、その傾斜のまま静置させた場合(傾斜→傾斜)、(3)15度の傾斜のある状態でサンプル及び展開液を添加し、その後水平状態で静置させた場合(傾斜→水平)、(4)水平状態でサンプル及び展開液を添加し、そのまま静置させた場合(水平→水平)の4つの条件において、3種類の展開液供給パッド(ガラス−PVA、セルロース−ガラス、レーヨン)と展開液供給パッドが無い条件での、発色度の検討を行った。なお、傾斜は、展開方向に向かってハウジングの左側を支点とし、ハウジングの右側を持ち上げた状態に維持することにより、所定の傾斜角度を達成した。
検討に使用する展開液量は、使用する展開液供給パッドの展開液の最大保持量に、1つのイムノクロマトグラフテストストリップの展開液の保持量は200μLであることから、3つのイムノクロマトグラフテストストリップの総量600μLを加えた量を使用した。具体的には、ガラス−PVA(最大保持量=200μL)の場合は800μL、セルロース−ガラス(最大保持量=80μL)の場合は680μL、レーヨン(最大保持量=140μL)の場合は740μL、パッドなしの場合は600μLを使用した。また、展開液滴下位置として、傾斜をつけた中心点から一番右の点(すなわち、最高位点)について検討した。さらに、三回の実験を繰り返した。
結果を表1[陽性検体(2+)]及び表2[陰性検体(−)]に示す。
1・・・ハウジング ;1a・・・ハウジング上蓋 ;1b・・・ハウジング基板 ;
2・・・試料供給手段 ;3・・・判定窓 ;4・・・展開液導入部;
5・・・蒸散窓;6・・・イムノクロマトグラフ用ストリップ;
7・・・液体展開材料;8・・・液体吸引材料;
9・・・イムノクロマトグラフ展開膜;
11・・・展開液収容室 ;12・・・液体収容予備室;13・・・展開液分配材料;
19・・・試料受容ゾーン;20・・・捕獲ゾーン。
Claims (1)
- 液体展開材料、試料受容領域および捕獲領域を有する展開膜、ならびに液体吸引材料が、展開方向に沿ってこの順序で連結されたイムノクロマトグラフ用ストリップ2つ又はそれ以上と;
展開液収容室1つと、前記展開液収容室に展開液を供給可能な展開液導入部1つとを有し、前記イムノクロマトグラフ用ストリップを、それぞれが接触することなく、間隔を設けて内部に収納可能なハウジングと;
を含むイムノクロマトグラフ装置であって、
前記液体展開材料における前記展開膜と連結する端部とは反対側の展開液吸液用端部が、全てのイムノクロマトグラフ用ストリップに関して、前記展開液収容室内に配置され;
前記展開液吸液用端部の全てと接触する展開液分配材料が、前記展開液収容室内に配置されている
ことを特徴とする、イムノクロマトグラフ装置。
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