JP2008508871A - ポリペプチドのc末端修飾 - Google Patents
ポリペプチドのc末端修飾 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2008508871A JP2008508871A JP2007524304A JP2007524304A JP2008508871A JP 2008508871 A JP2008508871 A JP 2008508871A JP 2007524304 A JP2007524304 A JP 2007524304A JP 2007524304 A JP2007524304 A JP 2007524304A JP 2008508871 A JP2008508871 A JP 2008508871A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- peptide
- xaa
- trypsin
- amino acid
- mutant
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6427—Chymotrypsins (3.4.21.1; 3.4.21.2); Trypsin (3.4.21.4)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Description
Pn _P3 _P2 _P1 _P1`_P2`_P3`_Pn`
Sn _S3 _S2 _S1 _S1`_S2`_S3`_Sn`
トリプシンバリアント作製の一般的手順:
1. トリプシンまたはトリプシノーゲンをコードするDNAを含む適当なベクター、例えばpSTベクター(図1参照)を用いるトリプシンまたはトリプシノーゲン内への所望の突然変異の導入。大腸菌ベクターpSTは、もともと、L. Hedstromから構築され、ADH/GAPDH-プロモーターおよびトリプシノーゲンをコードする配列と融合させたα-因子リーダー配列を含有する酵母シャトルベクターを表す; Hedstrom, Lら, Science 255 (1992) 1249-1253を参照のこと。
2. 構築されたベクターの、例えば大腸菌内での形質転換。
3. それぞれ適当な発現ベクター、例えば酵母ベクターpYT (図1参照)を用いた、修飾トリプシン配列およびトリプシノーゲン配列のサブクローニング。所望の突然変異をこの発現ベクターに直接導入した場合、この工程は必要でない。
4. 大腸菌または酵母での修飾トリプシンまたはトリプシノーゲンの発現。
5. 適当な分離法、例えばカチオン交換クロマトグラフィーを用いる、修飾トリプシンまたはトリプシノーゲンの単離。
6. トリプシノーゲンが発現された場合は、単離されたチモーゲンは、エンテロキナーゼによる限定的なタンパク質分解によって活性化する必要がある。
7. 適当な精製法、例えばアフィニティクロマトグラフィーまたはアニオン交換クロマトグラフィーを適用する活性化されたトリプシンの最終精製。
8. 透析
[理論的pI: 5.41/Mw (平均質量): 23843.00/Mw (モノアイソトピック質量): 23827.59]
固相ペプチド合成によるペプチドの調製
別途指定する場合を除き、本出願において記載するペプチドは、バッチペプチド合成装置、例えばApplied BiosystemsのA433で、フルオレニルメチルオキシカルボニル-(Fmoc)-固相ペプチド合成により合成した。この方法では、各場合において、表2に示すアミノ酸誘導体4.0当量を使用した。
トリプシンバリアント Tn K60E、E151H、N143H、D189Kによって触媒される、Arg-NH2によるAla-Ala-Tyr-Arg-His-Ala-Glyのアミノ基転移
ペプチドAla-Ala-Tyr-Arg-His-Ala-Glyを、実施例2に記載のようにFmoc-化学を用いた従来の固相ペプチド合成および予め加えたWang-樹脂によって合成した。それぞれのアミノ酸構成ブロックは市販されており、種々の供給業者から購入した。Arg-NH2は、Bachem (スイス)の市販品であった。
トリプシンバリアントTn K60E、E151H、N143H、D189Kの特異性に対するZn2+イオンの影響
ペプチド基質Bz-Ala-Ala-Tyr-Arg-His-Ala-Ala-Gly、Bz-Ala-Ala-Tyr-Arg-His-Ala-Gly、Bz-Ala-Ala-Tyr-Arg-His-Asp-Ala-Gly、Bz-Ala-Ala-Tyr-Arg-Arg-Ala-Gly、およびBz-Ala-Ala-Tyr-Asp-His-Ala-Glyを、Fmoc-化学を用いた従来の固相ペプチド合成および予め加えたWang-樹脂によって合成した。それぞれのアミノ酸構成ブロックは市販されており、種々の供給業者から購入した。
トリプシンバリアント Tn K60E、E151H、N143H、D189Kにより触媒される反応速度に対する認識配列の影響
配列番号: 3〜19のNα-ベンゾイル化ペプチドを、Fmoc-化学を用いた従来の固相ペプチド合成および予め加えたWang-樹脂により合成した。それぞれのアミノ酸構成ブロックは市販されており、種々の供給業者から購入した。
トリプシンバリアント Tn K60E、E151H、N143H、D189Kによって触媒されるArg-His-Ala-Lys(6-CF)-OHによるBz-Ala-Ala-Tyr-Arg-His-Ala-Glyのアミノ基転移
Bz-Ala-Ala-Tyr-Arg-His-Ala-Glyは、Fmoc-化学を用いた従来の固相ペプチド合成および予め加えたWang-樹脂により合成した。それぞれのアミノ酸構成ブロックは市販されており、種々の供給業者から購入した。Arg-His-Ala-Lys(6-CF)-OH を、フラグメント縮合(fragment condensation)によって合成した。保護されたトリペプチドBoc-Arg(Boc)2-His(Trt)-Ala-OHを、従来の固相ペプチド合成を用いてクロロトリチル-樹脂上で合成した。塩化メチレン/酢酸/トリフルオロ酢酸 (v/v/v 8/1/1)を含む40 mlのカクテルで2回、ペプチドを樹脂から切断した。粗製物を、逆相HPLCにより精製した。他のフラグメントFmoc-Lys(6-カルボキシ-フルオレセイン)の合成を、3 mlのジオキシンおよび3 mlのDMF中、0.6 mmol Fmoc-Lys*HCl、0,655 mMol 6-カルボキシフルオレセイン (Molecular Probesから購入)から行なった。ピペリジンおよび逆相HPLCにより精製した粗製物を用いてFmoc-基を切断した。次いで、保護されたトリペプチドを、DMF中1当量のHBTU (Iris Biotech)および3当量のジイソプロピルエチルアミンで活性化した。1当量のLys(6-カルボキシ-フルオレセイン)を添加し、混合物を室温で2時間攪拌した。次いで、脱保護カクテル(18 mlのトリフルオロ酢酸、0.5 mlの水および0.5 mlのエタンジチオール)を用いて脱保護を行なった。ペプチドを、ジイソプロピルエーテルを用いて沈殿させ、RP-HPLCにより精製し、良好な収率で得た。
トリプシンバリアント Tn K60E、E151H、N143H、D189Kによって触媒されるArg-His-Gly-PEGによるAKTAAALHIL VKEEKLALDL LEQIKNGADF GKLAKKHSIC PSGKRGGDLG EFRQGQMVPA FDKVVFSCPV LEPTGPLHTQ FGYHIIKVLY RHのアミノ基転移
Arg-His-Gly-PEGを、Boc-Arg(Boc)2-His(Trt)-Gly-OHのフラグメント縮合およびNektar/Shearwaterから購入したアミノ-PEG (20kD)により合成した。保護されたトリペプチドの合成およびフラグメントの活性化については実施例6を参照のこと。ここでは、0.5当量のアミノ-PEG (20 kD)を、求核試薬として用いた。脱保護後(カクテルについては実施例6を参照)、RP-HPLCを用いてすべての低分子不純物を分離した。
Claims (9)
- K60位およびD189位の両方にアミノ酸置換、ならびにN143位またはE151位にヒスチジンによる少なくとももう1つ以上のアミノ酸置換を含む突然変異トリプシン。
- K60がEまたはDで置換されている、請求項1記載の突然変異トリプシン。
- D189がK、HまたはRで置換されている、請求項1記載の突然変異トリプシン。
- 標的ペプチド、および切断部位Xaa1-Xaa2-His(式中、Xaa1はL、YまたはFであり、Xaa2はRまたはKである)を含む制限部位ペプチドを含み、前記制限部位ペプチドが前記標的ペプチドのC末端のアミノ酸Xaa1で標的ペプチドと重複する、請求項1〜3いずれか記載のトリプシン突然変異体の基質としてのポリペプチドの使用。
- (a) 標的ペプチド、および切断部位Xaa1 _Xaa2 _His(式中、Xaa1はL、Y、またはFであり、Xaa2はRまたはKである)を含む制限部位ペプチドを含み、前記制限部位ペプチドが前記標的ペプチドのC末端のアミノ酸Xaa1で標的ペプチドと重複するポリペプチドを提供する工程、
(b) 前記ペプチドを、Xaa1後の内部タンパク質分解性切断およびエンドプロテアーゼ標的ペプチドペプチド-アシル-中間体の形成を可能にする条件下で、請求項1〜3いずれか記載のトリプシン突然変異体と接触させる工程、
(c) 適切な求核試薬を添加する工程、および
(d) 求核性攻撃および標的ペプチドのC末端への前記求核試薬の結合時、エンドプロテアーゼ標的ペプチドアシル-中間体から突然変異トリプシンを放出する工程
を含む、C末端がアシル基転移した標的ペプチドの作製方法。 - 前記求核試薬が、第1級アミン、イミン、第2級アミン、チオールおよびヒドロキシル基からなる群より選択される、請求項5記載の方法。
- 修飾を含む前記求核試薬が、アミノ酸アミド、ペプチド、ペプチドアミド、標識、標識されたアミノ酸アミド、標識されたペプチド、標識されたペプチドアミド、およびポリエチレングリコールからなる群より選択される、請求項5記載の方法。
- 前記修飾がポリエチレングリコールである、請求項7記載の方法。
- 請求項1〜3いずれか記載の突然変異トリプシンをコードするヌクレオチド配列。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP04019237 | 2004-08-13 | ||
PCT/EP2005/008809 WO2006015879A1 (en) | 2004-08-13 | 2005-08-12 | C-terminal modification of polypeptides |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2008508871A true JP2008508871A (ja) | 2008-03-27 |
JP2008508871A5 JP2008508871A5 (ja) | 2010-06-03 |
JP4538501B2 JP4538501B2 (ja) | 2010-09-08 |
Family
ID=34926160
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007524304A Active JP4538501B2 (ja) | 2004-08-13 | 2005-08-12 | ポリペプチドのc末端修飾 |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20080064079A1 (ja) |
EP (1) | EP1778839B1 (ja) |
JP (1) | JP4538501B2 (ja) |
CN (1) | CN101010425B (ja) |
AT (1) | ATE400647T1 (ja) |
CA (1) | CA2569707C (ja) |
DE (1) | DE602005008071D1 (ja) |
ES (1) | ES2309785T3 (ja) |
HK (1) | HK1110888A1 (ja) |
WO (1) | WO2006015879A1 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2013518922A (ja) * | 2010-02-11 | 2013-05-23 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | Igf−iポリ(エチレングリコール)コンジュゲート |
JP2022514951A (ja) * | 2018-12-19 | 2022-02-16 | バイオファーマ トランスレーションズインスティテュート デッサウ フォルシュングス ゲーエムベーハー | 酵素特性が改善したトリプシン変異体 |
Families Citing this family (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE102005046113A1 (de) | 2005-09-27 | 2007-03-29 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Verfahren zur Amidierung von Polypetiden mit C-terminalen basischen Aminosäuren unter Verwendung spezifischer Endoproteasen |
DE102006031962A1 (de) | 2006-07-11 | 2008-01-17 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Amidiertes Insulin Glargin |
DE102006031955A1 (de) | 2006-07-11 | 2008-01-17 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Verfahren zur Herstellung von Insulinanaloga mit dibasischem B-Kettenende |
KR101939557B1 (ko) | 2008-10-17 | 2019-01-17 | 사노피-아벤티스 도이칠란트 게엠베하 | 인슐린과 glp-1 효능제의 병용물 |
US20120093840A1 (en) | 2009-04-06 | 2012-04-19 | Novo Nordisk A/S | Targeted delivery of factor viii proteins to platelets |
PT3345593T (pt) | 2009-11-13 | 2023-11-27 | Sanofi Aventis Deutschland | Composição farmacêutica compreendendo despro36exendina- 4(1-39)-lys6-nh2 e metionina |
CN107308442B (zh) | 2009-11-13 | 2022-10-18 | 赛诺菲-安万特德国有限公司 | 包含glp-1激动剂、胰岛素和甲硫氨酸的药物组合物 |
LT2611458T (lt) | 2010-08-30 | 2016-12-27 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Ave0010 panaudojimas gaminant vaistą, skirtą 2 tipo cukrinio diabeto gydymui |
US9821032B2 (en) | 2011-05-13 | 2017-11-21 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Pharmaceutical combination for improving glycemic control as add-on therapy to basal insulin |
MX370264B (es) | 2011-08-29 | 2019-12-09 | Sanofi Aventis Deutschland | Combinacion farmaceutica para uso en el control glucemico en pacientes con diabetes de tipo 2. |
AR087744A1 (es) | 2011-09-01 | 2014-04-16 | Sanofi Aventis Deutschland | Composicion farmaceutica para uso en el tratamiento de una enfermedad neurodegenerativa |
SI3229828T1 (sl) | 2014-12-12 | 2023-06-30 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Formulacija s fiksnim razmerjem inzulin glargin/liksisenatid |
TWI748945B (zh) | 2015-03-13 | 2021-12-11 | 德商賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 | 第2型糖尿病病患治療 |
TW201705975A (zh) | 2015-03-18 | 2017-02-16 | 賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 | 第2型糖尿病病患之治療 |
US10738338B2 (en) | 2016-10-18 | 2020-08-11 | The Research Foundation for the State University | Method and composition for biocatalytic protein-oligonucleotide conjugation and protein-oligonucleotide conjugate |
EP3650541A1 (en) | 2018-11-08 | 2020-05-13 | BioPharma Translationsinstitut Dessau Forschungs GmbH | Trypsin mutant for c- and n-terminal modification of polypeptides |
CA3164136A1 (en) | 2019-12-10 | 2021-06-17 | Sanofi | A method of forming a conjugate of a sulfonamide and a polypeptide |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH09504438A (ja) * | 1993-10-28 | 1997-05-06 | カールスベアウ・アクチェ・セルスカブ | 改変したアシル基転移活性を有する特製プロテアーゼ |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SE9001705D0 (sv) * | 1990-05-11 | 1990-05-11 | Medscand Ab | Saett foer diagnostik av virusbaerande tumoerer genom immunoassay |
US5580751A (en) * | 1990-09-14 | 1996-12-03 | Carlsberg A/S | Process for the preparation of C-terminally amidated peptides |
AU6171594A (en) | 1993-02-04 | 1994-08-29 | Genentech Inc. | Serine protease variants having peptide ligase activity |
NZ291154A (en) | 1994-07-25 | 1997-11-24 | Boehringer Mannheim Gmbh | Di- or trivalent rare earth or transition metal complexes having three ligands, each of which has at least two nitrogen-containing heterocycles and complexed through nitrogen, and at least one reactive group bound to the ligard(s) |
US5985627A (en) | 1997-02-28 | 1999-11-16 | Carlsberg Laboratory | Modified carboxypeptidase |
DE10049673A1 (de) * | 2000-10-07 | 2002-04-25 | Univ Leipzig | Verfahren zur Herstellung von Peptiden, Peptidmimetika und Proteinen |
CN1354253A (zh) * | 2001-12-24 | 2002-06-19 | 南京医科大学 | 淡色库蚊胰蛋白酶基因 |
-
2005
- 2005-08-12 CA CA2569707A patent/CA2569707C/en active Active
- 2005-08-12 CN CN2005800273012A patent/CN101010425B/zh active Active
- 2005-08-12 ES ES05774367T patent/ES2309785T3/es active Active
- 2005-08-12 WO PCT/EP2005/008809 patent/WO2006015879A1/en active IP Right Grant
- 2005-08-12 DE DE602005008071T patent/DE602005008071D1/de active Active
- 2005-08-12 AT AT05774367T patent/ATE400647T1/de active
- 2005-08-12 JP JP2007524304A patent/JP4538501B2/ja active Active
- 2005-08-12 EP EP05774367A patent/EP1778839B1/en active Active
-
2007
- 2007-02-09 US US11/704,561 patent/US20080064079A1/en not_active Abandoned
-
2008
- 2008-01-25 HK HK08101041.9A patent/HK1110888A1/xx unknown
-
2013
- 2013-01-14 US US13/741,206 patent/US8927230B2/en active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH09504438A (ja) * | 1993-10-28 | 1997-05-06 | カールスベアウ・アクチェ・セルスカブ | 改変したアシル基転移活性を有する特製プロテアーゼ |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
JPN5007012827, BONGERS J, INTERNATIONAL JOURNAL OF PEPTIDE AND PROTEIN RESEARCH, 199209, V40 N3−4, P268−273 * |
JPN5007012829, GOEPFERT A, DIE NAHRUNG, 199906, V43 N3, P211−212 * |
JPN5007012830, STENNICKE H R, ANALYTICAL BIOCHEMISTRY, 19970515, V248 N1, P141−148 * |
JPN6009064839, Biochemistry.,1995,34(7),p.2172−80 * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2013518922A (ja) * | 2010-02-11 | 2013-05-23 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | Igf−iポリ(エチレングリコール)コンジュゲート |
JP2015145402A (ja) * | 2010-02-11 | 2015-08-13 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | Igf−iポリ(エチレングリコール)コンジュゲート |
JP2022514951A (ja) * | 2018-12-19 | 2022-02-16 | バイオファーマ トランスレーションズインスティテュート デッサウ フォルシュングス ゲーエムベーハー | 酵素特性が改善したトリプシン変異体 |
JP7360742B2 (ja) | 2018-12-19 | 2023-10-13 | バイオファーマ トランスレーションズインスティテュート デッサウ フォルシュングス ゲーエムベーハー | 酵素特性が改善したトリプシン変異体およびその使用ならびに基質の直交二重修飾のための方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20080064079A1 (en) | 2008-03-13 |
ATE400647T1 (de) | 2008-07-15 |
CN101010425B (zh) | 2010-05-26 |
HK1110888A1 (en) | 2008-07-25 |
CA2569707C (en) | 2013-09-24 |
JP4538501B2 (ja) | 2010-09-08 |
US8927230B2 (en) | 2015-01-06 |
EP1778839B1 (en) | 2008-07-09 |
ES2309785T3 (es) | 2008-12-16 |
US20130177940A1 (en) | 2013-07-11 |
CN101010425A (zh) | 2007-08-01 |
WO2006015879A1 (en) | 2006-02-16 |
EP1778839A1 (en) | 2007-05-02 |
CA2569707A1 (en) | 2006-02-16 |
DE602005008071D1 (de) | 2008-08-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4538501B2 (ja) | ポリペプチドのc末端修飾 | |
EP1874933B1 (en) | Production of recombinant proteins by autoproteolytic cleavage of a fusion protein | |
AU2008221532B2 (en) | Cleavage of fusion proteins using Granzyme B protease | |
EP2794875B1 (en) | Modified enterokinase light chain | |
US20050202040A1 (en) | Methods for large scale productions of recombinant DNA-derived tPA or K2S molecules | |
EP3650541A1 (en) | Trypsin mutant for c- and n-terminal modification of polypeptides | |
EP2935577B1 (en) | Method for producing a recombinant protein of interest | |
CA2301698A1 (en) | Zymogenic protease precursors that can be autocatalytically activated and their use | |
CN103998606A (zh) | 修饰的肠激酶轻链 | |
čeřovský et al. | Enzymatic semisynthesis of dicarba analogs of calcitonin | |
JP2002529101A (ja) | ペプチドの酵素的アミド化 | |
Chiron et al. | Pseudomonas exotoxin exhibits increased sensitivity to furin when sequences at the cleavage site are mutated to resemble the arginine‐rich loop of diphtheria toxin | |
AU2011253661B2 (en) | Production of recombinant proteins by autoproteolytic cleavage of a fusion protein | |
JP3892397B2 (ja) | ペプチド、ペプチド模倣物およびタンパク質を合成するための方法 | |
CA2741214A1 (en) | Process for preparing inclusion body-forming protein | |
US20030207402A1 (en) | Autocatalytically activatable zymogenic precursors of proteases and their use | |
Kubitzki et al. | Application of immobilized bovine enterokinase in repetitive fusion protein cleavage for the production of mucin 1 | |
CA2370113A1 (en) | Method of removing n-terminal alanine residues from polypeptides with aeromonas aminopeptidase | |
US6794159B1 (en) | Method of removing n-terminal alanine residues from polypeptides with aeromonas aminopeptidase | |
JP2004509973A (ja) | ペプチドおよびタンパク質の選択的修飾方法 | |
CN113227369A (zh) | 具有改善的酶学特性的胰蛋白酶变体 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20091211 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20100310 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20100317 |
|
A524 | Written submission of copy of amendment under article 19 pct |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A524 Effective date: 20100412 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20100528 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20100621 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130625 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4538501 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
R360 | Written notification for declining of transfer of rights |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R360 |
|
R371 | Transfer withdrawn |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R371 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |