JP2008508260A - エナミネラルa活性水の製造方法及びこれを利用した骨粗鬆症の予防及び改善用組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
(1)イカ骨及び紅藻類を洗浄した後、粉砕する段階と;
(2)粉砕物を加熱焼成して無機質ミネラルを製造する段階と;
(3)無機質ミネラルを室温に冷却した後、微細粉末化する段階と;
(4)微細粉末を水にイオン溶液化する段階と;
(5)微細粉末を沈殿させてフィルタリングすることによってアルカリ性水溶液を得る段階とを含む。
綺麗に洗浄して乾燥させたイカ骨と紅藻類をそれぞれ粉碎して粉末に製造した後、1100℃で1時間加熱焼成する。焼成されたイカ骨と紅藻類を室温に完全に冷却させた後、粉砕機を利用して微細な粉末に製造した。前記紅藻類は、海苔、テングサ、オゴノリ、ウミゾウメン、ウシケノリ、ムカデノリ、スギノリ、イギス及び紅藻緑末を同一量で混合して使用した。
雌ラットに卵巣摘出術によって誘導した骨粗鬆症モデル動物に対し、全試験期間にわたって1週に1回の体重を測定することによって体重の変化を観察し、さらに、動物の一般症状を観察した。その結果を図2及び図3に示した。卵巣摘出後の全試験グループにおいて体重の増加が観察されたが、賦形剤対照群と比較して、試験物質であるミネラル活性水を0.5%、5%及び10%濃度で投与した投与群では、統計学的に有意性のある体重変化は観測されず、動物の一般症状の観察においても、全試験期間に通じて何ら異常症状は観察されなかった。
実験的に雌ラットに卵巣摘出術を行なって誘導された骨粗鬆症モデル動物において、period killingで屠殺された動物に対して、骨粗鬆症の血清指標として用いられるエストラジオール(estradiol)、オステオカルシン(osteocalcin)、カルシウム(calcium)、リン(phosphorus)、アルカリフォスファターゼ(alkaline phosphatase)の濃度を観察することによって試験物質の効能を検査した。血液試料を遠心分離(3000g、15分)を行って血清を分離した後、エストラジオール(estradiol)とオステオカルシン(osteocalcin)は、放射線免疫測定法(radioimmunoassay)(Bayer、USA)で測定し、カルシウム(calcium)は、OCPC End point(Bayer、USA)法で測定し、さらに、リンの濃度は、市販しているキット(Bio System S.A.、Buenos Aires Argentina)を用いてリンモリブデン酸塩(phosphomolybdate complex)が形成されることを分光光度法で測定した。血清総アルカリフォスファターゼ(serum total alkaline phosphatase)の活性は、Coloric metric assay(Bayer、Germany)法で測定した。各成分について図4乃至図8に示した。
図4に示されているように、全試験期間にわたって試験物質であるミネラル活性水の0.5%、5%及び10%濃度の投与群において、賦形剤対照群と比較して、統計学的に有意性のある血清カルシウムの濃度変化は観察されなかった。ミネラル活性水の投与は、血中カルシウムの濃度には何ら影響を与えない物質と判断される。
図5に示されているように、全試験期間にわたって試験物質であるミネラル活性水の0.5%、5%及び10%濃度の投与群において、賦形剤対照群と比較して、統計学的に有意性のある血清リンの濃度変化は観察されなかった。ミネラル活性水の投与は、血中リンの濃度には何ら影響を与えない物質と判断される。
図6に示されているように、試験物質であるミネラル活性水の0.5%、5%及び10%濃度の投与群において、賦形剤対照群と比較して、試験物質の投与後12週目に、5%と10%の投与群で統計学的に有意性(p<0.05)のある血清(estradiol)濃度の増加が観察された。このように上昇した血中エストラジオールは、天然成分の試験物質から来由したものと判断され、卵巣摘出術によりホルモン欠乏に誘導された骨粗鬆症のモデル動物に対して骨吸収が発生するのを予防すると判断される。
図7に示されているように、試験物質であるミネラル活性水の濃度0.5%、5%及び10%の投与群において、賦形剤対照群と比較して、試験物質の投与後12週目に、5%(p<0.05)と10%(p<0.001)の投与群で統計学的に有意性のある血清オステオカルシン濃度の減少が観察された。4週目と8週目にも、賦形剤対照群と比較してミネラル活性水の投与群において血清オステオカルシンの濃度が低い傾向が観察された。骨形成の指標であるオステオカルシンに対し、ミネラル活性水は初期には大きな影響を与えないが、長期間にわたった試験物質の投与がオステオカルシン濃度を低くすることで、骨形成を本来の水準に減少させると判断される。
図8に示されているように、全試験期間にわたって試験物質であるミネラル活性水の濃度0.5%、5%及び10%の投与群において、賦形剤対照群と比較して統計学的に有意性のある血清アルカリフォスファターゼ濃度の変化は観察されなかった。
骨粗鬆症は、骨のコラーゲン(collagen)の減少によってtype I collagen crosslinking moleculeであるピリジノリン(PYD)が循環血液と尿に遊離される。このような骨の特異表示因子であるPYDを測定することによって骨粗鬆症の進行を観察することができる。PYDの測定において、従来のHPLCや免疫学的な分析法(immunoassay)による尿に遊離されたPYDの測定方法は、感度と特異性が低いという短所を有するが、本実験では、血清中のPYDをELISA(enzyme-linked immunoassay)方法を採用し、尿中で測定するよりも40倍低い濃度のPYDまで測定することにより、初期骨粗鬆症の診断に有効な血清学的指標として利用した。その結果を図9に示す。
実験的に誘導された骨粗鬆症モデル動物の大腿骨を組織病理学的に観察するために、period killingで屠殺したそれぞれの動物から大腿骨を摘出し、ギ酸(formic acid)を利用した脱灰工程と、10%の中性ホルマリンを利用した組織固定工程によって作製された組織標本に対する骨粗鬆症の進行に伴う大腿骨のコラーゲンの変化を観察するために、コラーゲンに対する特殊な染色であるアザン染色(Azan staining)を行ない、骨粗鬆症の指標となる海綿骨組織(trabecular bone)の面積をイメージ分析(image analysis)プログラム(Visus image analysis、Foresthill Products、Foresthill、CA)を利用して分析し、ヘマトキシリンエオジン染色(hematoxylin-eosin staining)を行なって骨吸収に関連する細胞である破骨細胞の数を確認した。
組織中のコラーゲンに対する特殊染色であるアザン染色を行ない、卵巣摘出を行なった後、試験物質であるミネラル活性水の骨コラーゲンに及ぼす影響を観察した。図10及び図11に示されているように、卵巣摘出術により賦形剤対照群では、ホルモン欠乏のため骨粗鬆症が進み、骨コラーゲンの量が減少し、試験期間の経過に伴って次第に海綿骨組織の面積が減少することが観察された。卵巣摘出後4週間の試験物質の投与群では、統計学的に有意性のある変化が観察されなかったが、賦形剤対照群と比較して試験物質を0.5%、5%及び10%の濃度で投与したグループでは、骨コラーゲンの形成の指標となる海綿骨組織の面積がやや高い傾向を示すことが観察された。試験物質投与してから8週後には、全試験グループにおいて、4週と比較して、骨コラーゲンが減少したことが観察されたが、8週グループとの比較では、5%(p<0.05)と10%(p<0.001)投与グループにおいて、賦形剤対照群と比較して統計学的に有意性のある海綿骨組織面積の増加が観察された。一方、12週投与群では、4週及び8週投与群と比較して、賦形剤対照群と0.5%濃度の試験物質供給群では骨コラーゲンの量が減少したことが観察されており、12週グループでは8週グループと同様に、5%(p<0.01)と10%(p<0.01)濃度の試験物質投与群では、海綿骨組織面積の有意性のある増加が観察された。
骨吸収の指標として用いられる細胞である破骨細胞数の変化を観察した結果は図12乃至図15に示されており、全試験期間を通じて統計学的に有意性のある変化が観察された。卵巣摘出を行なった後、4週間試験物質としてミネラル活性水を投与し、大腿骨の骨幹(diaphysis)部分の破骨細胞数の変化を観察した結果、10%濃度の試験物質投与群では統計学的に有意性(p<0.01)のある減少が観察されており、8週間投与してから観察した結果、全濃度の試験物質投与群において、賦形剤対照群と比較したところ、有意性のある破骨細胞の減少が観察された。一方、12週投与群では、対照群の場合、破骨細胞の数が8週と同様のレベルで高くなっているのに対し、試験物質投与群では、全濃度の試験物質投与群において、破骨細胞の数が賦形剤対照群と比較して有意な減少(p<0.01)が観察された。
試験物質であるミネラル活性水の骨に及ぼす影響のみならず、長期間飲み水として供給することによって実質臓器に及ぼす影響を観察した結果、肺、心臓、肝臓、脾臓、膵臓、腎臓、副腎、甲状腺に対して賦形剤対照群と比較して、何ら影響を与えないことが分かった。これを図16に示した。
Claims (11)
- (1)イカ骨及び紅藻類の中から選択されたいずれか1つ以上を洗浄した後、粉砕する段階と;
(2)粉砕物を加熱焼成して無機質ミネラルを製造する段階と;
(3)無機質ミネラルを室温に冷却した後、微細粉末化する段階と;
(4)微細粉末を水にイオン溶液化する段階と;
(5)微細粉末を沈殿させてフィルタリングすることによって、アルカリ性水溶液を得る段階と;を含むことを特徴とするエナ活性ミネラルA活性水の製造方法。 - 前記無機質ミネラルの製造段階は、1000℃〜2000℃で加熱焼成することを特徴とする請求項1に記載のエナ活性ミネラルA活性水の製造方法。
- 前記イオン溶液化は、80℃〜100℃で揚水機ポンプを使って、10気圧以上の圧力で落差を利用して砕けるような方法で行うことを特徴とする請求項1に記載のエナ活性ミネラルA活性水の製造方法。
- 前記イオン溶液化は、1時間以上続けて行うことを特徴とする請求項3に記載のエナ活性ミネラルA活性水の製造方法。
- 前記5)段階における沈殿は、15時間〜35時間沈殿させてからフィルタリングすることを特徴とする請求項1に記載のエナ活性ミネラルA活性水の製造方法。
- 請求項1乃至請求項5のいずれか一項により製造されることを特徴とするエナ活性ミネラルA活性水。
- エナ活性ミネラルA活性水は、骨粗鬆症の予防効果を有することを特徴とする請求項6に記載のミネラル活性水。
- (1)イカ骨及び紅藻類の中から選択されたいずれか1つ以上を洗浄した後粉砕する段階と;
(2)粉砕物を1000℃〜2000℃で加熱焼成して無機質ミネラルを製造する段階と;
(3)無機質ミネラルを室温に冷却した後、微細粉末化する段階と;
(4)微細粉末を80℃〜100℃の水に投入した後、揚水機ポンプを使って10気圧以上の圧力で落差を利用して砕けるような方法でイオン溶液化する段階と、
(5)微細粉末を沈殿させてフィルタリングすることによってアルカリ性水溶液を得る段階と;を含むことを特徴とするエナ活性ミネラルA活性水の製造方法。 - イオン溶液化は、1時間以上続けることを特徴とする請求項8に記載のエナ活性ミネラルA活性水の製造方法。
- 前記段階5)における沈殿は、15時間〜35時間沈殿させてからフィルタリングすることを特徴とする請求項9に記載のエナ活性ミネラルA活性水の製造方法。
- 請求項8乃至請求項11のいずれか一項により製造される骨粗鬆症の予防効果を有することを特徴とするエナ活性ミネラルA活性水。
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